SK15112000A3 - Baktéria patriaca do rodu escherichia, ktorá je transformovaná génom kódujúcim pyruvát karboxylázu a produkuje l-amonokyselinu, a spôsob výroby l-aminokyseliny fermentáciou - Google Patents

Baktéria patriaca do rodu escherichia, ktorá je transformovaná génom kódujúcim pyruvát karboxylázu a produkuje l-amonokyselinu, a spôsob výroby l-aminokyseliny fermentáciou Download PDF

Info

Publication number
SK15112000A3
SK15112000A3 SK1511-2000A SK15112000A SK15112000A3 SK 15112000 A3 SK15112000 A3 SK 15112000A3 SK 15112000 A SK15112000 A SK 15112000A SK 15112000 A3 SK15112000 A3 SK 15112000A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
glu
gly
ala
lys
leu
Prior art date
Application number
SK1511-2000A
Other languages
English (en)
Other versions
SK285997B6 (sk
Inventor
Mikhail Markovich Gusyatiner
Yuri Ivanovich Kozlov
Leonid Romanovich Ptitsyn
Irina Borisovna Altman
Elvira Borisovna Voroshilova
Yurgis Antanas Vladovich Iomantas
Tatyana Abramovna Yampolskaya
Original Assignee
Ajinomoto Co., Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ajinomoto Co., Inc. filed Critical Ajinomoto Co., Inc.
Publication of SK15112000A3 publication Critical patent/SK15112000A3/sk
Publication of SK285997B6 publication Critical patent/SK285997B6/sk

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/93Ligases (6)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/06Alanine; Leucine; Isoleucine; Serine; Homoserine
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/08Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/14Glutamic acid; Glutamine
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/185Escherichia
    • C12R2001/19Escherichia coli

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Oblasť techniky
Predložený vynález sa týka spôsobu výroby L-aminokyseliny, konkrétne sa týka spôsobu výroby L-treonínu, kyseliny L-glutámovej, L-homoserínu, L-metionínu, L-arginínu, L-prolínu alebo L-izoleucínu použitím baktérie patriacej do rodu Escherichia.
Doterajší stav techniky
L-aminokyseliny ako napríklad L-treonín a kyselina L-glutámová sa bežne vyrábajú fermentačnými spôsobmi principiálne využívajúcimi koryneformné baktérie, ktoré patria do rodu Brevibacterium, Corynebacterium a Microbacterium, alebo sa využívajú ich mutanty (Amino Acid Fermentation, Gakkai Shuppan Center, str. 195-215, 1986).
Na druhej strane boli opísané techniky využívajúce techniky genetickej rekombinácie na šľachtenie bakteriálnych kmeňov produkujúcich L-aminokyseliny, ktoré patria do rodu Escherichia.
Bol napríklad opísaný spôsob výroby L-lyzínu použitím Escherichia coli, v ktorej boli gény kódujúce dihydrodipikolinát syntetázu a aspartokinázu znecitlivené voči spätnej inhibicii L-lyzínom a L-treonínom, a gény kódujúce diaminopimelát dehydrogenázu (alebo tetrahydrodipikolinát sukcinylázu a sukcinyldiaminopimelát deacylázu) boli zosilnené (WO 95/16042).
Hoci sa produktivita L-aminokyselín značne zlepšila šľachtením týchto vyššie uvedených mikroorganizmov alebo boli zlepšené produkčné spôsoby, je stále želateľné vyvinúť účinnejšie spôsoby výroby L-aminokyselín, aby sa splnil očakávaný značne zvýšený budúci dopyt po aminokyselinách.
-2Pyruvát karboxyláza (pyruvátoxid uhličitý ligáza (vytvárajúca ADP), EC 6.4.1.1) je enzým obsahujúci biotín. Katalyzuje karboxyláciu pyruvátu, čím sa vytvára oxaloacetát. Pyruvát karboxyláza nie je známa v Escherichia coli, ale Bacillus subtilis (Diesterhaft, M.D. a Freese, E., J. Biol. Chem., 248, č. 17, 60626070 (1973) a Corynebacterium glutamicum (Peters-Wfendisch, P.G. a ďalší, Microbiology, 144, 915-927 (1998) majú pyruvát karboxylázu a boli publikované nukleotidové sekvencie génov kódujúcich enzýmy.
Ďalej sú známe Corynebacterium glutamicum, v ktorom je zosilnená aktivita pyruvát karboxylázy, alebo Corynebacterium glutamicum, ktorého gén pyruvát karboxylázy je inaktivovaný (Peters-Wendisch, P.G. a ďalší, Microbiology, 144, 915927 (1998)). Avšak tieto mikroorganizmy boli vytvorené ako experimentálne materiály na štúdium enzýmov nevyhnutných na rast glukózy. Vzťah medzi aktivitou pyruvát karboxylázy a produktivitou L-aminokyselín nebol známy. Nebol známy ani pokus zaviesť gén pre pyruvát karboxylázu do baktérie patriacej do rodu Escherichia.
Cieľom vynálezu je poskytnúť spôsob výroby L-aminokyseliny, konkrétne Ltreonínu, L-lyzínu, kyseliny L-glutámovej, L-homoserínu, L-metionínu, L-arginínu, Lprolínu alebo L-izoleucínu s vysokou účinnosťou.
Výsledkom usilovného výskumu za účelom dosiahnutia vyššie opísaného cieľa bolo zistenie, že zavedenie génu, ktorý kóduje pyruvát karboxylázu (tu označovaný ako pyc gén), do baktérie patriacej do rodu Escherichia môže zlepšiť produktivitu L-aminokyseliny touto baktériou. Tak sa skompletoval predložený vynález.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je baktéria patriaca do rodu Escherichia, ktorá je transformovaná génom kódujúcim pyruvát karboxylázu a produkuje L-aminokyselinu.
Predložený vynález poskytuje aj vyššie opísanú baktériu, v ktorej je gén kódujúci pyruvát karboxylázu odvodený od baktérie patriacej do rodu Bacillus.
-3Predložený vynález ďalej poskytuje vyššie opísanú baktériu, do ktorej je gén kódujúci pyruvát karboxylázu zavedený v malom počte kópií.
Ďalej predložený vynález poskytuje vyššie opísanú baktériu, pričom Laminokyselina je vybraná zo skupiny zahŕňajúcej L-treonín, L-lyzín, kyselinu Lglutámovú, L-homoserín, L-metionín, L-arginín, L-prolín alebo L-izoleucín.
Predložený vynález poskytuje aj spôsob výroby L-aminokyseliny, ktorý zahŕňa kultiváciu vyššie uvedenej baktérie v médiu, produkciu a akumulovanie Laminokyseliny v médiu a izoláciu L-aminokyseliny z média.
Predložený vynález ďalej poskytuje vyššie opísaný spôsob, pričom Laminokyselina je vybraná zo skupiny zahŕňajúcej L-treonín, L-lyzín, kyselinu Lglutámovú, L-homoserín, L-metionín, L-arginín, L-prolín alebo L-izoleucín.
Výraz produktivita L-aminokyseliny znamená, že baktéria produkuje a akumuluje L-aminokyselinu v médiu vo vyššom množstve ako jej zodpovedajúci kmeň divého typu.
V súlade s predloženým vynálezom je možné zlepšiť produktivitu Laminokyseliny, ako L-treonínu, L-lyzínu, kyseliny L-glutámovej, L-homoserínu, Lmetionínu, L-arginínu, L-prolínu alebo L-izoleucínu, v baktérii patriacej do rodu Escherichia. Ďalej môže byť predložený vynález využitý na šľachtenie producentov L-aminokyselín patriacich do rodu Escherichia.
Predložený vynález bude podrobne vysvetlený nižšie.
<1> Baktéria patriaca do rodu Escherichia transformovaná pyc génom
Baktéria patriaca do rodu Escherichia podľa predloženého vynálezu je baktéria transformovaná pyc génom. Príkladom baktérie patriacej do rodu Escherichia je Escherichia coli. Keďže pyc gén použitý podľa predloženého vynálezu nie je nejako konkrétne obmedzený pokiaľ kóduje protein majúci pyruvát karboxylázovú aktivitu, príklady pyc génu zahŕňajú pyc gén odvodený od baktérie patriacej do rodu Bacillus alebo pyc gén odvodený z koryneformných baktérií. Nukleotidová sekvencie pyc génu odvodeného od Bacillus subtilis (Genbank/EMBL/DDBJ č. Z97025, NID g2224758) a od Corynebacterium giutamicum (Peters-Wendisch, P.G. a ďalší, Microbiology, 144, 915-927 (1998)) boli
-4publikované. Preto je možné získať pyc gén PCR (polymerázovou reťazovou reakciou: White, T.J. a ďalší, Trends Genet., 5, 185 (1989)) použitím primérov syntetizovaných podľa nukleotidových sekvencií z chromozomálnej DNA baktérií patriacej do rodu Bacillus, ako napríklad Bacillus subtilis, alebo koryneformných baktérií, ako Corynebacterium glutamicum, ako templátu.
Transformanty Escherichia coli 44/pMW119-pycA, ktoré nesú pMW119-pycA obsahujúci pyc gén z Bacillus subtilis boli uložené v ruskej národnej zbierke priemyselných mikroorganizmov (VKPM), depozit GNIIgenetika; 1, Dorozhny Proezd., 1, 113545, Moskva, Rusko, 30 augusta, 1999, pod registračným číslom VKPM B-7822, a preniesli sa z pôvodného depozitu do medzinárodného depozitu na základe Budapeštianskej dohody 1. septembra 2000.
Transformanty Escherichia coli MG442/pMW119-pycA, ktoré nesú pMW119pycA obsahujúci pyc gén z Bacillus subtilis boli uložené v ruskej národnej zbierke priemyselných mikroorganizmov (VKPM), depozit GNIIgenetika; 1, Dorozhny Proezd., 1, 113545, Moskva, Rusko, 30 augusta, 1999, pod registračným číslom VKPM B-7821, a preniesli sa z pôvodného depozitu do medzinárodného depozitu na základe Budapeštianskej dohody 1. septembra 2000.
Mimochodom, gén kódujúci pyruvát karboxylázu Bacillus subtilis (pycA gén) sa klonoval ako je opísané nižšie, spôsobom podľa predloženého vynálezu.
Najprv sa skonštruoval pycA gén-deficientný kmeň Bacillus subtilis. Potom sa použitím tohto kmeňa ako recipienta, pycA gén klonoval izoláciou DNA fragmentu, ktorý komplementuje citrátovú alebo aspartátovú auxotrofiu kmeňa, z genómovej DNA knižnice divého typu kmeňa Bacillus subtilis. Keďže Bacillus subtilis vytvára oxaloacetát prostredníctvom pyruvát karboxylázy, Bacillus subtilis nemôže rásť na minimálnom médiu, ak mu chýba tento enzým. Avšak rast je možné opraviť pridaním L-aspartátu, L-glutamátu, citrátu alebo sukcinátu. Nukleotidová sekvencia pycA génu je znázornená ako sekv. č. 3 a aminokyselinová sekvencia, ktorá je kódovaná týmto génom, je znázornená ako sekv. č. 4.
PycA gén-deficientný kmeň je možné získať napríklad nižšie opísaným spôsobom. Čiastočný DNA fragment ylaP génu umiestneného na chromozóme hneď za pycA génom sa získa prostredníctvom PCR. Príkladmi primérov pre PCR
-5sú oligonikleotidy so sekv. č. 1 a 2. Potom sa divý typ kmeňa Bacillus subtilis transformuje s plazmidovou DNA obsahujúcou získaný DNA fragment a markerový gén a nasleduje integrácia plazmidovej DNA do ylaP génu na chromozomálnej DNA prostredníctvom homologickej rekombinácie. Ďalej sa skonštruuje chromozomálna DNA knižnica získaného kmeňa použitím reštrikčného enzýmu, ktorý rozoznáva reštrikčné miesto vo vnútri pycA génu, napríklad Pstl. Rekombinantný plazmid obsahujúci markerový gén a čiastočný pycA génový fragment sa môže získať transfomáciou divého typu kmeňa Bacillus subtilis s knižnicou a selekciou klonov exprimujúcich markerový gén. Potom sa divý typ kmeňa Bacillus subtilis transformuje linearizovaným rekombinantným plazmidom a vyberú sa klony exprimujúce markerový gén, aby sa získal pycA gén-deficientný kmeň, v ktorom je plazmidová DNA integrovaná do pycA génu na chromozomálnej DNA kmeňa.
Transformácia baktérie patriacej do rodu Escherichia s pyc génom sa môže uskutočniť zavedením pyc génu do príslušného vektora, ktorý funguje v baktérii patriacej do rodu Escherichia, aby sa skonštruoval rekombinantný vektor, a zavedením tohto rekombinantného vektora do baktérie patriacej do rodu Escherichia.
Príkladom vektora je plazmid, ako pBR322, pMW118, pUC18, pUC19 alebo podobne, fágový vektor, ako λ1059, XBF101, M13mp9 alebo podobne, a transpozón, ako Mu, Tn10 alebo podobne. Avšak podľa predloženého vynálezu je výhodný plazmid s malým množstvom kópií, ako pMW118 a pMW119, pretože transformant nesúci vektor môže byť nestabilný, ak je na zavedenie pycA génu použitý ako vektor plazmid s veľkým počtom kópií.
Zavedenie DNA do baktérie patriacej do rodu Escherichia sa môže uskutočniť napríklad spôsobom podľa D.A. Morrisona (Methods in Enzymology 68, 326 (19979) alebo spôsobom, v ktorom sa recipientné bakteriálne bunky ošetria chloridom vápenatým, aby sa zvýšila permeabilita pre DNA (Mandel, M. a Higa, A.,
J. Mol. Biol., 53, 159 (1970)) a podobne.
Príprava genomickej DNA, konštrukcia genomickej DNA knižnice, hybridizácia, PCR, príprava plazmidovej DNA, štiepenie a ligácia DNA, transformácia a podobne sa uskutočňujú v súlade so spôsobmi, ktoré sú
-6priemernému odborníkovi v oblasti známe. Takéto spôsoby boli opísané v Sambrook, J., Fritsche, E.F., Maniatis, T. v Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1.21 (1989).
Produktivita L-aminokyseliny baktériou patriacou do rodu Escheríchia sa môže zlepšiť poskytnutím alebo zosilnením pyruvát karboxylázovej aktivity baktérie prostredníctvom transformácie baktérie s pyc génom. Je to pravdepodobne preto, že kyselina oxalooctová sa vytvára nie len z kyseliny fosfoenolpyruvátovej, ale aj z kyseliny pyruvátovej. Takže transport glukózovej (alebo sacharózovej) molekuly do bakteriálnej bunky, ktorý je sprostredkovaný systémom kyseliny fosfoenolpyruvátovej, prebieha prostredníctvom spotreby jedenej molekuly kyseliny fosfoenolpyruvátovej, ktorá je sprevádzaná vytvorením jednej molekuly kyseliny pyruvátovej. Hoci vytváranie kyseliny pyruvátovej sa priamo nevyužíva na syntézu L-aminokyseliny v bakteriálnej bunke, je možné zvýšiť produktivitu L-aminokyseliny vytvorením kyseliny oxalooctovej z kyseliny pyruvátovej.
Ako baktéria patriaca do rodu Escheríchia, do ktorej sa má zaviesť pyc gén, sa použije kmeň majúci schopnosť produkovať danú L-aminokyselinu. Alternatívne sa produktivita L-aminokyseliny môže poskytnúť baktérii patriacej do rodu Escheríchia, ktorá je transformovaná pyc génom. Mimochodom, pyc gén Escheríchia coli ešte nie je známy, ak sa však neskôr v E. coli objaví, môže byť použitý.
Nižšie sú opísané príklady baktérií produkujúcich L-aminokyselinu, ktoré patria do rodu Escheríchia.
(1) Baktérie produkujúce L-treonín
Príkladom baktérie produkujúcej L-treonín, ktorá patrí do rodu Escheríchia môže byť kmeň MG442 (uložený v ruskej národnej zbierke priemyselných mikroorganizmov (VKPM) depozit, GNIIgenetika; 1, Dorozhny Proezd., 1, 113545, Moskva, Rusko, pod registračným číslom VKPM B-1628) (USP 4278765; Guayatiner M.M. a ďalší, Genetika (v ruštine), 14, 947-956 (1978)). Kmeň MG442 sa získal ako mutant rezistentný voči L-treonínovému analógu, kyseline 2-amino-3-7hydroxyvalérovej, a je aj izoleucín auxotrofný priepustného typu. Produkuje Ltreonín a L-glutamát ako vedľajší produkt.
Alternatívne môže byť ako L-treonín produkujúci kmeň výhodne použitý transformant MG442, ktorý je transformovaný s pVIC40 (USP 5175107).
(2) Baktérie produkujúce L-lyzín
Príkladom baktérií produkujúcich L-lyzín, ktoré patria do rodu Escherichia, môžu byť rôzne baktérie opísané vo WO95/16042. Konkrétnym príkladom baktérií produkujúcich L-lyzín sú baktérie, v ktorej je zvýšená aspartokinázová aktivita a dihydrodipikolinát reduktázová aktivita, ako napríklad W3110(tyrA)RSFD80+pdapB.
(3) Baktérie produkujúce L-homoserín
Príkladom baktérií produkujúcich L-homoserín, ktoré patria do rodu Escherichia, môže byť kmeň 44 (thrB). Tento kmeň bol odvodený od známeho kmeňa C600 (thrB, leuB) (Appleyard R.K., Genetics, 39, 440-452 (1954)) ako Leu+ revertant. Výhodne je možné použiť transformantový kmeň 44, ktorý je transformovaný plazmidom obsahujúcim thrA gén kódujúci aspartokinázahomoserín dehydrogenázu I.
Kmeň Escherichia coli 44 je uložený v ruskej medzinárodnej zbierke priemyselných mikroorganizmov (VKPM), depozit GNIIgenetika; 1, Dorozhny Proezd., 1, 113545, Moskva, Rusko, od 23. septembra 1980, pod registračným číslom VKPM B-2175, a preniesol sa z pôvodného depozitu do medzinárodného depozitu na základe Budapeštianskej dohody 1. septembra 2000.
(4) Baktérie produkujúce kyselinu L-glutámovú
Príkladom baktérií produkujúcich kyselinu L-glutámovú, ktoré patria do rodu Escherichia, môže byť kmeň, ktorý je rezistentný voči L-valínu, napríklad Escherichia coli kmene B11, K-12 (ATCC10798), B (ATCC11303) a W (ATCC9637).
-8(5) Baktérie produkujúce L-izoleucín
Príkladom baktérií produkujúcich L-izoleucín, ktoré patria do rodu Escherichia, môže byť kmeň TDH6/pVIC40, pMWD5 (Hashiguchi, K. a ďalší, Biosci. Biotechnol. Biochem., 63(4), 672-679 (1999)) alebo AJ12919, ktorý je opísaný v EPO 685 555 A1.
<2> Spôsob produkcie L-aminokyseliny
L-aminokyselinu je možné účinne vyrábať kultiváciou baktérie patriacej do rodu Escherichia, ktorá je transformovaná pycA génom, ako bolo opísané vyššie, a produkuje L-aminokyselinu v príslušnom médiu, prostredníctvom produkcie a akumulovania L-aminokyseliny v médiu a izolácie L-aminokyseliny z média.
Príkladom L-aminokyseliny je výhodne L-treonín, L-lyzín, kyselina Lglutámová, L-homoserín, L-metionín, L-arginín, L-prolín alebo L-izoleucín. Laminokyselinu je možné vyrábať spôsobom podľa predloženého vynálezu buď samostatne, alebo ako zmes viac ako dvoch druhov L-aminokyselín.
V spôsobe podľa predloženého vynálezu sa kultivácia baktérie patriacej do rodu Eschericia, izolácia a purifikácia aminokyseliny z kvapalného média môžu uskutočňovať spôsobom podobným so spôsobmi bežnej metódy na produkciu aminokyseliny fermentáciou použitím baktérie. Médiom použitým na kultiváciu môže byť buď syntetické médium, alebo prirodzené médium, pokiaľ médium obsahuje vhodné množstvá zdroja uhlíka a dusíka a minerálov, a ak je to potrebné aj živín, ktoré použitá baktéria vyžaduje na rast. Zdroj uhlíka môže zahŕňať rôzne uhľovodíky, ako glukózu a sacharózu, a rôzne organické kyseliny. V závislosti na asimilačnej schopnosti použitej baktérie môže byť použitý alkohol zahŕňajúc etanol a glycerol. Ako zdroj dusíka sa používa amoniak, rôzne amónne soli, ako síran amónny, iné dusíkaté zlúčeniny, ako amíny, prirodzený zdroj dusíka, ako peptón, sójový hydrolyzát a poštiepené fermentatívne mikróby. Ako minerály sa používajú fosforečnan draselný, síran horečnatý, chlorid sodný, síran železitý, síran manganatý, uhličitan vápenatý.
Kultivácia sa výhodne uskutočňuje v aeróbnych podmienkach, ako pretrepávaná kultúra, a za prevzdušňovania a miešania kultúry. Teplota kultúry je
-9zvyčajne 20 až 40 °C, výhodne 30 až 38 °C. pH kultúry je zvyčajne medzi 5 a 9, výhodne medzi 6,5 a 7,2. pH kultúry sa môže nastaviť amoniakom, uhličitanom vápenatým, rôznymi kyselinami, rôznymi zásadami a tlmivými roztokmi. Zvyčajne 1 až 3 dni kultivácie vedú k akumulovaniu cieľovej L-aminokyseliny v médiu.
Izolácia a purifikácia L-aminokyseliny sa môže uskutočňovať odstránením pevných častí, ako napríklad buniek, z média po kultivácii centrifigáciou alebo membránovou filtráciou, následne metódami iónovej výmeny, zakoncentrovávania a kryštalizačnou frakčnou metódou a podobne.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obrázok 1 znázorňuje schému konštrukcie Bacillus subtilis pycA::KmR recipientného kmeňa na klonovanie pycA génu.
Obrázok 2 znázorňuje schému klonovania pycA génu z Bacillus subtilis 168.
Obrázok 3 znázorňuje schému konštrukcie plazmidu obsahujúceho pycA gén.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Predložený vynález bude konkrétnejšie vysvetlený nižšie s odvolaním sa na príklady.
Príklad 1
Klonovanie pycA génu z Bacillu subtilis 168 kmeňa <1> Konštrukcia B. subtilis pycA::KmR recipientného kmeňa na klonovanie
Recipientný kmeň B. subtilis sa skonštruoval inzerčnou mutagenézou pycA génu. Fragment pycA génu sa klonoval v dvoch krokoch (pozri obrázky 1 a 2).
V databáze B. subtilis genómového sekvenčného projektu je jeden čítací rámec (ylaP) označený ako pycA gén, ktorý kóduje pyruvát karboxylázu. Oblasť
-10umiestnená hneď za pycA génovým terminátorom sa klonovala PCR amplifikáciou použitím nasledujúceho páru oligonukleotidov:
5’-GATATAAGGGGACTTCAGAG, a 5’-GGCGCTTTATGCGTTTCAATC.
DNA fragmentu s dĺžkou 269 bp sa Klenowovým fragmentom DNA polymerázy I zatupili konce a klonoval sa do Seal miesta pBR322 plazmidu v E. coli kmeni. Výsledný plazmid pBRPYCAH sa poštiepil s Clal a ligoval sa s 1628bp DNA fragmentom nesúcim cat gén, ktorý sa získal poštiepením pC194 s Clal. Potom sa použitím získaného plazmidu pBRPYCA11CmR3 transformoval kmeň Bacillus subtilis 168 trpC2 a selektovali sa CmR-klony. Plazmid pBRPYCA11CmR3 sa nemôže autonómne replikovať v baktérii patriacej do rodu Bacillus, ale môže sa integrovať do chromozómu neďaleko pycA génu prostredníctvom homológie s 269bp DNA fragmentom. Kmeň sa označil ako B. subtilis trpC2 xyz::pBRPYCACmR3. Začlenený fragment niesol pBR322 replikón, ŕeŕgén kódujúci rezistenciu voči tetracyklínu odvodený od pBR322 a CmR marker.
Izolovala sa chromozomálna DNA z B. subtilis trpC2 xyz::pBRPYCACmR3 a použila sa na klonovanie distálnej časti pycA génu. Chromozomálna DNA, ktorá sa poštiepila s Pstl sa ligovala sama so sebou a transformovala sa do kmeňa E. coli TG1. Selektovali sa rekombinanty rezistentné voči tetracyklínu a chloramfenikolu. Z jedného rekombinanta sa izoloval plazmid a označil sa ako pPYC1. Plazmid pPYC1 obsahoval jedno Bglll reštrikčné miesto, ktoré sa nachádzalo v pycA génovom fragmente. Toto miesto bolo použité na inzerciu 1818bp DNA fragmentu obsahujúceho marker kanamycínovej rezistenciu pre B. subtilis. Plazmid pPYC1 sa poštiepil s Bglll a ligoval sa s pUCľKmR, ktorý bol poštiepený s BamHI, čím vznikol plazmid pPYC1::KmR.
Inaktivácia pycA génu v divom type B. subtilis 168 trpC2 sa dosiahla transformáciou tohto kmeňa linearizovaným plazmidom pPYC1::KmR jednokrokovým postupom, následnou seleciou na Luria médiu obsahujúcom kanamycín. KmR marker sa zaviedol do pycA génu na chromozomálnej DNA homologickou rekombináciou prostredníctvom dvojitého crossoveru.
-11 Skonštruovaný kmeň B. subtilis pycA::KmR trpC2 nerástol na Spizizenovom minimálnom médiu (Anagnostopoulos, C a Spizizen, J., J. Bacteriol., 81, 741-746 (1961) s tryptofánom, pokiaľ sa do tohto média nepridal citrát alebo aspartát.
Zloženie Spizizenovho minimálneho média
K2HPO4.3H2O 18,3 g/l
KH2PO4 6,0 g/l (NH4)2SO4 2,0 g/l citran sodný.5H2O 1,2 g/l
MgSO4.7H2O 0,2 g/l glukóza 10,0 g/l pH 7,0
Kmeň B. subtilis trpC2 pycA::KmR recE::TcR sa skonštruoval transdukciou inaktivovanej alely recE génu z kmeňa B. subtilis recE::TcR fágom E40 (obrázok 2). Na klonovanie pycA génu do B. subtilis bolo nevyhnutné inaktivovať rekombináciu v recipientnom kmeni. Skonštruovaný kmeň B. subtilis trpC2 pycA::KmR recE::TcR bol použitý ako recipient na klonovanie pycA génu.
<2> Klonovanie B. subtilis prirodzeného pycA génu komplementáciou
PycA gén sa klonoval z kmeňa B. subtilis 168 trpC2. Chromozomálna DNA pripravená z kmeňa 168 trpC2 sa čiastočne poštiepila s EcoRI a ligovala sa s pCB20 (EmR) (darovaný Dr. Yu Jomantas, pozri Genetic transformation and expression L.O. Butler a ďalší, vyd. Intercept Ltd., PO Box 402, Wimborne, Dorset BH229T2, UK, 1989, str. 269-281), ktorý bol poštiepený s EcoRI. Potom sa trpC2 pycA::KmR recE::TcR recipientný kmeň transformoval s ligačnou zmesou (obr. 2). Asp+, EmR, KmR klony sa selektovali na Spizizenovom minimálnom médiu bez citrátu alebo aspartátu, ale s tryptofánom, erytromycínom a kanamycínom. Plazmid pPYCR3 nachádzajúci sa v jednom zo selektovaných klonov komplementoval pycA mutáciu, mal predpokladanú štruktúru a vykazoval rovnaký Asp+, EmR fenotyp po druhej transformácii.
-12<3> Klonovanie DNA fragmentu nesúceho pycA gén z kmeňa B. subtilis 168 trpC2 do plazmidov pUC18 a pUC19 s vysokým počtom kópií
Plazmid pPYCR3 sa poštiepil s Hindll a Seal a Hindll-Scal fragment (4414 bp) nesúci pycA gén s 5' predchádzajúcou sekvenciou (zahŕňajúcou promótor a ribozóm viažuce miesto) sa klonoval do pUC18, ktorý bol poštiepený so Smal. Tak sa získal plazmid pUC18-pycA (horná časť obrázka 3). Ligačná reakcia sa uskutočňovala nasledovne. Deväťdesiat ng Sma/-poštiepeného pUC18 a 300 ng Hindll-Scal fragmentu (4414 bp), ktorý nesie pycA gén, a ktorý sa purifikoval agarózovou gélovou elektoroforézou, sa ligovalo s 2 jednotkami T4 DNA ligázy (Pharmacia, Švédsko) v 45 μΙ reakčnej zmesi s obsahom 1x One-Phor-AII tlmivého roztoku (Pharmacia, Švédsko) a 1 mM ATP.
E. coli TG1 sa transformoval s pUC18-pycA. Získané transformanty sa analyzovali použitím Kpnl, Xbal, BamHI, Hindlll a EcoRI endonukleáz. Všetky klony niesli pycA gén v opačnej orientácii voči lac promótoru pUC18 plazmidu. Avšak pycA gény klonované v pUC18 plazmide môžu byť exprimované pod kontrolou ich vlastného génového promótora.
Aby sa dostal pycA gén pod kontrolu lac promótora, klonoval sa potom KpnlXbal fragment pUC18-pycA do pUC19, ktorý bol poštiepený s Kpnl-Xbal. Avšak získané klony boli nestabilné a rekombinantný plazmid sa eliminoval počas krátkej doby (6 až 8 hodín) kultivácie.
<4> Klonovanie DNA fragmentu nesúceho pycA gén do nízkokópiového plazmidu pMW119
Kpnl-Xbal fragment pUC18-pycA sa ligoval do nízkokópiového plazmidu pMW119, ktorý bol poštiepený s Kpnl a Xbal (spodná čásť obrázka 3). Ligačná reakcia sa uskutočňovala v 50 μΙ reakčnej zmesi obsahujúcej 60 ng pMW119 poštiepeného s Kpnl-Xbal, 120 ng Kpnl-Xbal fragmentu pUC18-pycA, ktorý bol purifikovaný agarózovou gélovou elektroforézou, 1x One-Phor-AII tlmivého roztoku (Pharmacia, Švédsko), 1mM ATP a 1 jednotky T4 DNA ligázy (Pharmacia, Švédsko).
-13Použitím ligačnej zmesi sa transformoval E. coli TG1. Výsledné transformanty sa analyzovali použitím Sad, Kpnl, Xbal, BamHI, HindlII a EcoRI.
Všetky klony niesli pycA gén pod kontrolou lac promótora plazmidu pMW119 a pod kontrolou ich vlastného promótora. Takto získaný kloň, z ktorého sa získal plazmid pMW119-pycA, sa označil TG1 (pMW119-pycA).
Príklad 2
Produkcia L-treonínu a kyseliny L-glutámovej
E. coli kmeň MG442 sa transformoval s plazmidom pMW119-pycA a selektovalo sa desať Ampr kolónií. Produktivity L-treonínu a kyseliny L-glutámovej kolóniami sa skúmali použitím nasledujúceho fermentačného média.
Zloženie fermentačného média
glukóza (sterilizuje sa oddelene) 60 g/l
(NH4)SO4 15,0 g/l
kh2po4 1,5 g/l
MgSO4.7H2O 1,0 g/l
L-izoleucín 100 mg/l
tiamín 0,1 mg/l
CaCO3 (sterilizuje sa oddelene) 20 g/l
Fermentácia sa uskutočňovala v testovacích skúmavkách (20 x 300 mm) pri 32 °C 72 hodín použitím rotačnej miešačky. Jedno očko každého z 10 klonov sa inokulovalo do testovacej skúmavky obsahujúcej 2,0 ml fermentačného média. Ako kontrola sa použilo 10 jednotlivých kolónií kmeňa MG442 bez plazmidu. Po fermentácii sa merali koncentrácie L-treonínu a kyseliny L-glutámovej naakumulovaných v médiu prostredníctvom chromatografie na tenkej vrstve. Výsledky sú uvedené v tabuľke 1.
- 14Tabuľka 1
Kloň č. MG442 (kontrola) MG442 (pMW119-pycA)
L-thr (g/l) L-glu (g/l) L-thr (g/l) L-glu (g/l)
1 5,5 9,5 7,8 12,3
2 3,2 7,1 9,8 12,3
3 3,6 7,1 9,4 13,3
4 3,4 8,9 9,8 11,8
5 3,3 8,9 9,8 11,8
6 4,8 7,3 9,9 11,8
7 3,3 7,0 10,0 10,7
8 4,7 8,3 10,0 10,4
9 3,2 7,3 9,7 11,2
10 2,6 4,1 10,0 10,7
priemer 3,8 7,4 9,6 11,6
Príklad 3
Produkcia L-homoserínu
E. coli kmeň 44 produkujúci L-homoserín sa transformoval plazmidom pMW442-pycA a selektovalo sa päť ampicilín rezistentných klonov. Produkcia Lhomoserínu sa skúmala tak ako bolo uvedené v príklade 1, ale fermentačné médium bolo doplnené s 0,5 g/l L-treonínu. Ako kontrola sa použilo päť kolónií kmeňa 44 bez plazmidu. Po fermentácii boli priemerné koncentrácie L-homoserínu
4,5 g/l (kmeň 44) a 5,7 g/l (kmeň 44 s plazmidom pMW442-pycA).
Opodstatnene sa očakáva aj účinok pycA génu na produktivitu L-lyzínu, pretože sa potvrdilo, že pycA gén má pozitívny účinok na produktivitu L-treonínu a L-homoserínu, ktoré čiastočne zdieľajú rovnakú biosyntetickú dráhu ako L-lyzín.
-15Zoznam sekvencií <110> Ajinomoto Co., Inc.
<120> Spôsob výroby L-aminokyseliny fermentáciou <130> OP877 <141> 2000-10-14 <150> RU 99121636 <151> 2000-10-14 <160>2 <170> Patentln Ver. 2.0 <210> 1 <211 >20 <212> DNA <213> umelá sekvencia <220>
<223> Opis umelej sekvencie: primer <400> 1 gatataaggg gacttcagag <210>2 <211 >20 <212> DNA <213> umelá sekvencia
-16<220>
<223> Opis umelej sekvencie: primér <400> 2 ggcgctttat gcgtttcaatc 20 <210>3 <211 >3462 <212> DNA <213> Bacillus subtilis <220>
<221>CDS <222> (16)..(3459) <400> 3 aagggggaga aaagt ttg tct cag caa tcg ata caa aaa gta tta gta gca 51 Leu Ser Gin Gin Ser íle Gin Lys Val Leu Val Ala
5 10
aac agg gga gaa att gca atc ega ata ttc cgg gcg tgt acc gag ttg 99
Asn Arg Gly Glu íle Ala íle Arg íle Phe Arg Ala Cys Thr Glu Leu
15 20 25
aat att cgt aca gtt gcg gtc tat tca aaa gaa gat tcc ggt tcc tac 147
Asn íle Arg Thr Val Ala Val Tyr Ser Lys Glu Asp Ser Gly Ser Tyr
30 35 40
cat cgg tac aaa gcg gat gaa gca tac ttg gtc ggt gaa ggg aaa aaa 195
His Arg Tyr Lys Ala Asp Glu Ala Tyr Leu Val Gly Glu Gly Lys Lys
45 50 55 60
ccg att gat get tac ctg gat att gaa ggt atc att gat att gcg aaa 243
Pro íle Asp Ala Tyr Leu Asp íle Glu Gly íle íle Asp íle Ala Lys
65 70 75
aga aac aaa gtc gat gca att cat ccg gga tac ggt ttc tta tct gaa 291
Arg Asn Lys Val Asp Ala íle His Pro Gly Tyr Gly Phe Leu Ser Glu
80 85 90
aat att cat ttt gcg aga ega tgt gaa gaa gaa ggc atc gta ttc ata 339
Asn íle His Phe Ala Arg Arg Cys Glu Glu Glu Gly íle Val Phe lle
95 100 105
ggg cca aaa tcc gag cat ctc gat atg ttt ggt gac aag gta aaa gcg 387
Gly Pro Lys Ser Glu His Leu Asp Met Phe Gly Asp Lys Val Lys Ala
110 115 120
Cgt gag cag gca gaa aaa gcg gga atc ccc gtg att ccg gga age gac 435
Arg Glu Gin Ala Glu Lys Ala Gly íle Pro Val íle Pro Gly Ser Asp
125 130 135 140
ggt cct gcc gaa acg ctt gaa gcc gtc gaa caa ttt gga caa get aac 483
Gly Pro Ala Glu Thr Leu Glu Ala Val Glu Gin Phe Gly Gin Ala Asn
145 150 155
ggt tat ccg atc atc att aaa gcc tcg ctt ggc ggc ggc ggc ege ggt 531
Gly Tyr Pro íle íle íle Lys Ala Ser Leu Gly Gly Gly Gly Arg Gly
160 165 170
atg cgg att gtc aga tet gaa agt gaa gtt aaa gaa gca tat gag cgt 579
Met Arg íle Val Arg Ser Glu Ser Glu Val Lys Glu Ala Tyr Glu Arg
175 180 185
get aaa tca gag gcg aaa gca gcc ttt ggc aat gat gaa gtt tat gta 627
Ala Lys Ser Glu Ala Lys Ala Ala Phe Gly Asn Asp Glu Val Tyr Val
190 195 200
gaa aaa tta att gag aat ccg aaa cat att gag gtt cag gtc att gga 675
Glu Lys Leu íle Glu Asn Pro Lys His íle Glu Val Gin Val íle Gly
205 210 215 220
gac aag cag ggc aat gtc gtc cat ctt ttt gag agg gat tgc tcc gtt 723
Asp Lys Gin Gly Asn Val Val His Leu Phe Glu Arg Asp Cys Ser Val
225 230 235
caa aga ege cat caa aaa gtc att gaa gtg gcg ccg agt gtc tcg ctg 771
Gin Arg Arg His Gin Lys Val íle Glu Val Ala Pro Ser Val Ser Leu
240 245 250
tca cct gaa tta agg gac caa att tgt gag get gca gtt gcg ctt gcc 819
Ser Pro Glu Leu Arg Asp Gin íle Cys Glu Ala Ala Val Ala Leu Ala
255 260 265
aaa aat gta aac tat ata aat gcg ggg acg gtc gaa ttc ctt gtt gca 867
Lys Asn Val Asn Tyr íle Asn Ala Gly Thr Val Glu Phe Leu Val Ala
-18270 275 280
aac aac gag ttc tac ttt att gaa gta aat cct ege gta caa gtt gaa 915
Asn Asn Glu Phe Tyr Phe íle Glu Val Asn Pro Arg Val Gin Val Glu
285 290 295 300
cac acg ata aca gaa atg att act ggt gtc gat att gtt caa act cag 963
His Thr íle Thr Glu Met íle Thr Gly Val Asp íle Val Gin Thr Gin
305 310 315
atc ctt gtt gcc caa ggg cac age ctt cac age aaa aaa gta aat att 1011
íle Leu Val Ala Gin Gly His Ser Leu His Ser Lys Lys Val Asn íle
320 325 330
cct gag caa aag gac att ttt aca atc ggc tat gcc att cag tca cgg 1059
Pro Glu Gin Lys Asp íle Phe Thr íle Gly Tyr Ala íle Gin Ser Arg
335 340 345
gtt acg act gag gat ccg caa aat gat ttc atg cct gat aca gga aaa 1107
Val Thr Thr Glu Asp Pro Gin Asn Asp Phe Met Pro Asp Thr Gly Lys
350 355 360
atc atg get tac ege tca ggc ggc ggt ttt ggt gtc cgt ctt gat acc 1155
íle Met Ala Tyr Arg Ser Gly Gly Gly Phe Gly Val Arg Leu Asp Thr
365 370 375 380
gga aac age ttc cag ggc gcc gtg atc aca cca tac tat gat tca ctt 1203
Gly Asn Ser Phe Gin Gly Ala Val íle Thr Pro Tyr Tyr Asp Ser Leu
385 390 395
ctc gtt aag ctt tca act tgg get tta acg ttt gaa cag gca get gcc 1251
Leu Val Lys Leu Ser Thr Trp Ala Leu Thr Phe Glu Gin Ala Ala Ala
400 405 410
aaa atg gtg ega aac ctt cag gag ttt aga atc aga ggc ata aaa acg 1299
Lys Met Val Arg Asn Leu Gin Glu Phe Arg íle Arg Gly íle Lys Thr
415 420 425
aac att ccg ttc ctt gag aac gtt gca aag cat gag aag ttc ctg aca 1347
Asn íle Pro Phe Leu Glu Asn Val Ala Lys His Glu Lys Phe Leu Thr
430 435 440
ggg caa tat gat aca tet ttc att gat aca acg cct gaa tta ttt aat 1395
Gly Gin Tyr Asp Thr Ser Phe íle Asp Thr Thr Pro Glu Leu Phe Asn
445 450 455 460
ttc cct aaa caa aaa gac ege gga acg aaa atg ctc act tac atc ggc 1443
Phe Pro Lys Gin Lys Asp Arg Gly Thr Lys Met Leu Thr Tyr íle Gly
465 470 475
aat gtg aca gtg aac ggc ttc cct gga atc ggg aaa aaa gaa aaa ccg 1491
Asn Val Thr Val Asn Gly Phe Pro Gly íle Gly Lys Lys Glu Lys Pro
480 485 490
gcg ttt gac aaa ccg tta ggc gta aag gta gac gtt gat cag cag cct 1539
Ala Phe Asp Lys Pro Leu Gly Val Lys Val Asp Val Asp Gin Gin Pro
495 500 505
gcc aga gga aca aag caa att ctc gat gaa aaa ggt gca gaa ggg ctt 1587
Ala Arg Gly Thr Lys Gin íle Leu Asp Glu Lys Gly Ala Glu Gly Leu
510 515 520
gca aat tgg gtt aag gag cag aaa tet gtc ctt tta act gat acg aca 1635
Ala Asn Trp Val Lys Glu Gin Lys Ser Val Leu Leu Thr Asp Thr Thr
525 530 535 540
ttc agg gat gcc cac caa tcg tta ttg gca act aga atc aga tcg cat 1683
Phe Arg Asp Ala His Gin Ser Leu Leu Ala Thr Arg íle Arg Ser His
545 550 555
gat ttg aaa aaa atc gca aat ccg acg get gcg tta tgg cct gaa cta 1731
Asp Leu Lys Lys íle Ala Asn Pro Thr Ala Ala Leu Trp Pro Glu Leu
560 565 570
ttc agt atg gaa atg tgg gga ggc gcg acc ttc gat gta gcc tac ega 1779
Phe Ser Met Glu Met Trp Gly Gly Ala Thr Phe Asp Val Ala Tyr Arg
575 580 585
ttc ctg aaa gaa gat ccg tgg aaa cgt ttg gaa gat ctt ege aaa gaa 1827
Phe Leu Lys Glu Asp Pro Trp Lys Arg Leu Glu Asp Leu Arg Lys Glu
590 595 600
gtg ccg aat acc tta ttc cag atg ttg ctt ege tca tca aat gcg gtc 1875
Val Pro Asn Thr Leu Phe Gin Met Leu Leu Arg Ser Ser Asn Ala Val
605 610 615 620
ggc tat acg aat tat ccg gac aat gtg att aaa gaa ttt gtg aag caa 1923
Gly Tyr Thr Asn Tyr Pro Asp Asn Val íle Lys Glu Phe Val Lys Gin
625 630 635
tca get caa tcc ggt att gat gtg ttt cgt att ttc gac age tta aac 1971
Ser Ala Gin Ser Gly íle Asp Val Phe Arg íle Phe Asp Ser Leu Asn
640 645 650
tgg gta aaa ggg atg acg tta gcc att gat get gtt agg gat acc ggc 2019
Trp Val Lys Gly Met Thr Leu Ala íle Asp Ala Val Arg Asp Thr Gly
655 660 665
aaa gtg gca gaa get gcg att tgt tat acg gga gat atc ctt gac aag 2067
Lys Val Ala Glu Ala Ala íle Cys Tyr Thr Gly Asp íle Leu Asp Lys
670 675 680
aac cgg acg aag tac gac ctt gca tat tat aca tcg atg gcg aag gag 2115
Asn Arg Thr Lys Tyr Asp Leu Ala Tyr Tyr Thr Ser Met Ala Lys Glu
685 690 695 700
ctt gag gcg gcc gga gcc cat att ctc ggg att aaa gat atg gca ggg 2163
Leu Glu Ala Ala Gly Ala His íle Leu Gly íle Lys Asp Met Ala Gly
705 710 715
ctg tta aaa ccg cag get gca tat gag ctc gtt tet gcg ttg aaa gaa 2211
Leu Leu Lys Pro Gin Ala Ala Tyr Glu Leu Val Ser Ala Leu Lys Glu
720 725 730
acg atc gac att ccg gtt cac ctt cat acg cat gat acg agc gga aac 2259
Thr íle Asp íle Pro Val His Leu His Thr His Asp Thr Ser Gly Asn
735 740 745
ggt att tat atg tat gcg aaa get gtt gaa gcc ggc gtt gat atc ata 2307
Gly íle Tyr Met Tyr Ala Lys Ala Val Glu Ala Gly Val Asp íle íle
750 755 760
gac gtg gcg gtc agc tca atg gcg gga tta acg tca cag cct agc gcg 2355
Asp Val Ala Val Ser Ser Met Ala Gly Leu Thr Ser Gin Pro Ser Ala
765 770 775 780
agc gga ttt tat cat gcg atg gaa ggc aac gac ege cgt ccg gaa atg 2403
Ser Gly Phe Tyr His Ala Met Glu Gly Asn Asp Arg Arg Pro Glu Met
785 790 795
aat gtc caa ggc gtt gaa ttg ctg tcc caa tat tgg gag tcg gtg cgt 2451
Asn Val Gin Gly Val Glu Leu Leu Ser Gin Tyr Trp Glu Ser Val Arg
800 805 810
aaa tat tat agt gaa ttt gaa agc gga atg aag tet ccg cat act gaa 2499
Lys Tyr Tyr Ser Glu Phe Glu Ser Gly Met Lys Ser Pro His Thr Glu
-21 815 820 825
att tat gaa cac gaa atg cca ggg ggc caa tac age aac ctg cag cag 2547
íle Tyr Glu His Glu Met Pro Gly Gly Gin Tyr Ser Asn Leu Gin Gin
830 835 840
caa gcc aag gga gta ggc ctt ggc gac ege tgg aac gaa gtc aag gaa 2595
Gin Ala Lys Gly Val Gly Leu Gly Asp Arg Trp Asn Glu Val Lys Glu
845 850 855 860
atg tac aga ege gtg aac gat atg ttc ggt gac atc gtc aag gta acg 2643
Met Tyr Arg Arg Val Asn Asp Met Phe Gly Asp íle Val Lys Val Thr
865 870 875
cct tcc tca aaa gta gtc gga gat atg gca ctc tac atg gtg caa aac 2691
Pro Ser Ser Lys Val Val Gly Asp Met Ala Leu Tyr Met Val Gin Asn
880 885 890
aat ctg act gaa aaa gac gtt tac gaa aaa ggt gaa tet tta gat ttc 2739
Asn Leu Thr Glu Lys Asp Val Tyr Glu Lys Gly Glu Ser Leu Asp Phe
895 900 905
cct gat tet gtc gtg gag ctt ttt aaa gga aat atc ggc cag cct cat 2787
Pro Asp Ser Val Val Glu Leu Phe Lys Gly Asn íle Gly Gin Pro His
910 915 920
ggc gga ttc cca gaa aaa ctg caa aag ctg atc tta aaa ggg cag gag 2835
Gly Gly Phe Pro Glu Lys Leu Gin Lys Leu íle Leu Lys Gly Gin Glu
925 930 935 940
ccg att aca gtc aga ccg ggc gaa ctg ctt gag ccg gtg tca ttt gaa 2883
Pro íle Thr Val Arg Pro Gly Glu Leu Leu Glu Pro Val Ser Phe Glu
945 950 955
gcg atc aaa cag gaa ttt aaa gag cag cat aac ttg gaa att tca gat 2931
Ala íle Lys Gin Glu Phe Lys Glu Gin His Asn Leu Glu íle Ser Asp
960 965 970
cag gat get gtg gca tat gcc ctt tat cct aaa gtc ttc act gat tat 2979
Gin Asp Ala Val Ala Tyr Ala Leu Tyr Pro Lys Val Phe Thr Asp Tyr
975 980 985
gtg aaa acg aca gaa age tat gga gac atc tcg gta tta gat aca ccg 3027
Val Lys Thr Thr Glu Ser Tyr Gly Asp íle Ser Val Leu Asp Thr Pro
990 995
1000
-22aca ttc ttc tac ggt atg aca tta ggt gaa gag ata gaa gtt gaa att 3075
Thr Phe Phe Tyr Gly Met Thr Leu Gly Glu Glu íle Glu Val Glu íle 1005 1010 1015 1020 gag cgc ggc aaa acg ctg atc gtt aag ctg att tca atc ggt gag cct 3123
Glu Arg Gly Lys Thr Leu Ue Val Lys Leu íle Ser íle Gly Glu Pro
1025 1030 1035 cag cct gat gcc acc cgc gtc gtt tat ttc gaa ctc aac ggg cag ccg 3171
Gin Pro Asp Ala Thr Arg Val Val Tyr Phe Glu Leu Asn Gly Gin Pro
1040 1045 1050 cgt gaa gta gtc att aaa gat gaa age att aag tet tcc gtt cag gaa 3219
Arg Glu Val Val íle Lys Asp Glu Ser íle Lys Ser Ser Val Gin Glu
1055 1060 1065 agg ctg aaa gca gac cgg aca aat cca age cac atc gca get tcc atg 3267
Arg Leu Lys Ala Asp Arg Thr Asn Pro Ser His íle Ala Ala Ser Met
1070 1075 1080 cct gga aca gtt att aag gta ttg get gaa gca ggc aca aaa gtc aat 3315
Pro Gly Thr Val íle Lys Val Leu Ala Glu Ala Gly Thr Lys Val Asn
1085 1090 1095 1100
aaa ggt gat cat ttg atg att aat gaa gcg atg aaa atg gaa aca acg 3363
Lys Gly Asp His Leu Met íle Asn Glu Ala Met Lys Met Glu Thr Thr
1105 1110 1115
gtt cag gcg cct ttc tca gga aca atc aag cag gtt cat gtg aaa aat 3411
Val Gin Ala Pro Phe Ser Gly Thr íle Lys Gin Val His Val Lys Asn
1120 1125 1130
ggt gag ccg atc caa acg gga gat ctg ctc ctt gaa att gaa aaa gca 3459
Gly Glu Pro íle Gin Thr Gly Asp Leu Leu Leu Glu íle Glu Lys Ala
1135 1140 1145 taa
3462 <210>4 <211> 1148 <212> PRT <213> Bacillus subtilis
-23<400> 1
Leu Ser Gin Gin Ser íle Gin Lys Val Leu Val Ala Asn Arg Gly Glu
1 5 10 15
íle Ala íle Arg íle Phe Arg Ala Cys Thr Glu Leu Asn íle Arg Thr
20 25 30
Val Ala Val Tyr Ser Lys Glu Asp Ser Gly Ser Tyr His Arg Tyr Lys
35 40 45
Ala Asp Glu Ala Tyr Leu Val Gly Glu Gly Lys Lys Pro íle Asp Ala
50 55 60
Tyr Leu Asp íle Glu Gly íle íle Asp íle Ala Lys Arg Asn Lys Val
65 70 75 80
Asp Ala íle His Pro Gly Tyr Gly Phe Leu Ser Glu Asn íle His Phe
85 90 95
Ala Arg Arg Cys Glu Glu Glu Gly íle Val Phe íle Gly Pro Lys Ser
100 105 110
Glu His Leu Asp Met Phe Gly Asp Lys Val Lys Ala Arg Glu Gin Ala
115 120 125
Glu Lys Ala Gly íle Pro Val íle Pro Gly Ser Asp Gly Pro Ala Glu
130 135 140
Thr Leu Glu Ala Val Glu Gin Phe Gly Gin Ala Asn Gly Tyr Pro íle
145 150 155 160
íle íle Lys Ala Ser Leu Gly Gly Gly Gly Arg Gly Met Arg íle Val
165 170 175
Arg Ser Glu Ser Glu Val Lys Glu Ala Tyr Glu Arg Ala Lys Ser Glu
180 185 190
Ala Lys Ala Ala Phe Gly Asn Asp Glu Val Tyr Val Glu Lys Leu íle
195 200 205
Glu Asn Pro Lys His íle Glu Val Gin Val íle Gly Asp Lys Gin Gly
210 215 220
Asn Val Val His Leu Phe Glu Arg Asp Cys Ser Val Gin Arg Arg His
225 230 235 240
Gin Lys Val íle Glu Val Ala Pro Ser Val Ser Leu Ser Pro Glu Leu
245 250 255
Arg Asp Gin íle Cys Glu Ala Ala Val Ala Leu Ala Lys Asn Val Asn
260 265 270
Tyr íle Asn Ala Gly Thr Val Glu Phe Leu Val Ala Asn Asn Glu Phe
275 280 285
Tyr Phe íle Glu Val Asn Pro Arg Val Gin Val Glu His Thr íle Thr
290 295 300
Glu Met íle Thr Gly Val Asp íle Val Gin Thr Gin íle Leu Val Ala
305 310 315 320
Gin Gly His Ser Leu His Ser Lys Lys Val Asn íle Pro Glu Gin Lys
325 330 335
Asp íle Phe Thr íle Gly Tyr Ala íle Gin Ser Arg Val Thr Thr Glu
340 345 350
Asp Pro Gin Asn Asp Phe Met Pro Asp Thr Gly Lys íle Met Ala Tyr
355 360 365
Arg Ser Gly Gly Gly Phe Gly Val Arg Leu Asp Thr Gly Asn Ser Phe
370 375 380
Gin Gly Ala Val íle Thr Pro Tyr Tyr Asp Ser Leu Leu Val Lys Leu
385 390 395 400
Ser Thr Trp Ala Leu Thr Phe Glu Gin Ala Ala Ala Lys Met Val Arg
405 410 415
Asn Leu Gin Glu Phe Arg íle Arg Gly íle Lys Thr Asn íle Pro Phe
420 425 430
Leu Glu Asn Val Ala Lys His Glu Lys Phe Leu Thr Gly Gin Tyr Asp
435 440 445
Thr Ser Phe íle Asp Thr Thr Pro Glu Leu Phe Asn Phe Pro Lys Gin
450 455 460
Lys Asp Arg Gly Thr Lys Met Leu Thr Tyr íle Gly Asn Val Thr Val
465 470 475 480
Asn Gly Phe Pro Gly íle Gly Lys Lys Glu Lys Pro Ala Phe Asp Lys
485 490 495
Pro Leu Gly Val Lys Val Asp Val Asp Gin Gin Pro Ala Arg Gly Thr
500 505 510
Lys Gin íle Leu Asp Glu Lys Gly Ala Glu Gly Leu Ala Asn Trp Val
515 520 525
Lys Glu Gin Lys Ser Val Leu Leu Thr Asp Thr Thr Phe Arg Asp Ala
-25530 535 540
His Gin Ser Leu Leu Ala Thr Arg íle Arg Ser His Asp Leu Lys Lys
545 550 555 560 íle Ala Asn Pro Thr Ala Ala Leu Trp Pro Glu Leu Phe Ser Met Glu
565 570 575
Met Trp Gly Gly Ala Thr Phe Asp Val Ala Tyr Arg Phe Leu Lys Glu
580 585 590
Asp Pro Trp Lys Arg Leu Glu Asp Leu Arg Lys Glu Val Pro Asn Thr
595 600 605
Leu Phe Gin Met Leu Leu Arg Ser Ser Asn Ala Val Gly Tyr Thr Asn
610 615 620
Tyr Pro Asp Asn Val íle Lys Glu Phe Val Lys Gin Ser Ala Gin Ser
625 630 635 640
Gly íle Asp Val Phe Arg íle Phe Asp Ser Leu Asn Trp Val Lys Gly
645 650 655
Met Thr Leu Ala íle Asp Ala Val Arg Asp Thr Gly Lys Val Ala Glu
660 665 670
Ala Ala íle Cys Tyr Thr Gly Asp íle Leu Asp Lys Asn Arg Thr Lys
675 680 685
Tyr Asp Leu Ala Tyr Tyr Thr Ser Met Ala Lys Glu Leu Glu Ala Ala
690 695 700
Gly Ala His íle Leu Gly íle Lys Asp Met Ala Gly Leu Leu Lys Pro
705 710 715 720
Gin Ala Ala Tyr Glu Leu Val Ser Ala Leu Lys Glu Thr íle Asp íle
725 730 735
Pro Val His Leu His Thr His Asp Thr Ser Gly Asn Gly íle Tyr Met
740 745 750
Tyr Ala Lys Ala Val Glu Ala Gly Val Asp íle íle Asp Val Ala Val
755 760 765
Ser Ser Met Ala Gly Leu Thr Ser Gin Pro Ser Ala Ser Gly Phe Tyr
770 775 780
His Ala Met Glu Gly Asn Asp Arg Arg Pro Glu Met Asn Val Gin Gly 785 790 795 800 Val Glu Leu Leu Ser Gin Tyr Trp Glu Ser Val Arg Lys Tyr Tyr Ser
805 810 815
Glu Phe Glu Ser Gly Met Lys Ser Pro His Thr Glu íle Tyr Glu His
820 825 830
Glu Met Pro Gly Gly Gin Tyr Ser Asn Leu Gin Gin Gin Ala Lys Gly
835 840 845
Val Gly Leu Gly Asp Arg Trp Asn Glu Val Lys Glu Met Tyr Arg Arg
850 855 860
Val Asn Asp Met Phe Gly Asp íle Val Lys Val Thr Pro Ser Ser Lys
865 870 875 880
Val Val Gly Asp Met Ala Leu Tyr Met Val Gin Asn Asn Leu Thr Glu
885 890 895
Lys Asp Val Tyr Glu Lys Gly Glu Ser Leu Asp Phe Pro Asp Ser Val
900 905 910
Val Glu Leu Phe Lys Gly Asn íle Gly Gin Pro His Gly Gly Phe Pro
915 920 925
Glu Lys Leu Gin Lys Leu íle Leu Lys Gly Gin Glu Pro íle Thr Val
930 935 940
Arg Pro Gly Glu Leu Leu Glu Pro Val Ser Phe Glu Ala íle Lys Gin
945 950 955 960
Glu Phe Lys Glu Gin His Asn Leu Glu íle Ser Asp Gin Asp Ala Val
965 970 975
Ala Tyr Ala Leu Tyr Pro Lys Val Phe Thr Asp Tyr Val Lys Thr Thr
980 985 990
Glu Ser Tyr Gly Asp íle Ser Val Leu Asp Thr Pro Thr Phe Phe Tyr 995 1000 1005
Gly Met Thr Leu Gly Glu Glu íle Glu Val Glu íle Glu Arg Gly Lys 1010 1015 1020
Thr Leu íle Val Lys Leu íle Ser íle Gly Glu Pro Gin Pro Asp Ala 025 1030 1035 1040
Thr Arg Val Val Tyr Phe Glu Leu Asn Gly Gin Pro Arg Glu Val Val
1045 1050 1055 íle Lys Asp Glu Ser íle Lys Ser Ser Val Gin Glu Arg Leu Lys Ala
1060 1065 1070
Asp Arg Thr Asn Pro Ser His íle Ala Ala Ser Met Pro Gly Thr Val
-271075 1080 1085 íle Lys Val Leu Ala Glu Ala Gly Thr Lys Val Asn Lys Gly Asp His
1090 1095 1100
Leu Met íle Asn Glu Ala Met Lys Met Glu Thr Thr Val Gin Ala Pro 105 1110 1115 1120
Phe Ser Gly Thr íle Lys Gin Val His Val Lys Asn Gly Glu Pro íle
1125 1130 1135
Gin Thr Gly Asp Leu Leu Leu Glu íle Glu Lys Ala
1140 1145

Claims (6)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Baktéria patriaca do rodu Escherichia, ktorá je transformovaná génom kódujúcim pyruvát karboxylázu a produkuje L-aminokyselinu.
  2. 2. Baktéria podľa nároku 1, pričom gén kódujúci pyruvát karboxylázu je odvodený z baktérie patriacej do rodu Bacillus.
  3. 3. Baktéria podľa nároku 1, pričom gén kódujúci pyruvát karboxylázu je zavedený do baktérie v malom počte kópií.
  4. 4. Baktéria podľa nároku 1, pričom L-aminokyselina je vybraná zo skupiny, ktorá zahŕňa L-treonín, L-lyzín, kyselinu L-glutámovú, L-homoserín, L-metionín, Larginín, L-prolín alebo L-izoleucín.
  5. 5. Spôsob výroby L-aminokyseliny, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa kultiváciu baktérie podľa nároku 1 v médiu, produkciu a akumuláciu L-aminokyseliny v médiu a izoláciu L-aminokyseliny z média.
  6. 6. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že L-aminokyselina je vybraná zo skupiny, ktorá zahŕňa L-treonín, L-lyzín, kyselinu Lglutámovú, L-homoserín, L-metionín, L-arginín, L-prolín alebo L-izoleucín.
SK1511-2000A 1999-10-14 2000-10-11 Baktéria patriaca do rodu Escherichia, ktorá je transformovaná génom kódujúcim pyruvát karboxylázu a produkuje L-aminokyselinu, a spôsob výroby L-aminokyseliny fermentáciou SK285997B6 (sk)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU99121636/13A RU2207376C2 (ru) 1999-10-14 1999-10-14 Способ получения l-аминокислоты методом ферментации, штамм бактерии escherichia coli - продуцент l-аминокислоты (варианты)

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK15112000A3 true SK15112000A3 (sk) 2001-06-11
SK285997B6 SK285997B6 (sk) 2008-01-07

Family

ID=20225848

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1511-2000A SK285997B6 (sk) 1999-10-14 2000-10-11 Baktéria patriaca do rodu Escherichia, ktorá je transformovaná génom kódujúcim pyruvát karboxylázu a produkuje L-aminokyselinu, a spôsob výroby L-aminokyseliny fermentáciou

Country Status (7)

Country Link
EP (1) EP1092776B1 (sk)
JP (1) JP2001136991A (sk)
CN (1) CN1247783C (sk)
BR (1) BR0004832A (sk)
DE (1) DE60011974T2 (sk)
RU (1) RU2207376C2 (sk)
SK (1) SK285997B6 (sk)

Families Citing this family (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2175351C2 (ru) * 1998-12-30 2001-10-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") Фрагмент днк из escherichia coli, определяющий повышенную продукцию l-аминокислот (варианты), и способ получения l-аминокислот
RU2207371C2 (ru) 2000-09-26 2003-06-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Способ получения l-аминокислот семейства l-глутаминовой кислоты, штамм бактерии escherichia coli - продуцент l-аминокислоты (варианты)
JP2006230202A (ja) * 2003-06-23 2006-09-07 Ajinomoto Co Inc L−グルタミン酸の製造法
EP1907559A1 (en) * 2005-07-18 2008-04-09 Basf Se Methionine producing recombinant microorganisms
CN101374953B (zh) * 2006-01-27 2011-09-28 味之素株式会社 用于产生l-氨基酸的方法
EP1979486B1 (en) 2006-01-30 2013-04-17 Ajinomoto Co., Inc. L-amino acid producing bacterium and method of producing l-amino acid
JP2009118740A (ja) 2006-03-03 2009-06-04 Ajinomoto Co Inc L−アミノ酸の製造法
CN1986777B (zh) * 2006-07-11 2010-09-08 湖北大学 活体催化工程菌及利用α-酮酸生产L型非天然疏水性氨基酸的方法
JP2010017082A (ja) 2006-10-10 2010-01-28 Ajinomoto Co Inc L−アミノ酸の製造法
JP2010041920A (ja) 2006-12-19 2010-02-25 Ajinomoto Co Inc L−アミノ酸の製造法
JP2010088301A (ja) 2007-02-01 2010-04-22 Ajinomoto Co Inc L−アミノ酸の製造法
JP2010110216A (ja) 2007-02-20 2010-05-20 Ajinomoto Co Inc L−アミノ酸または核酸の製造方法
RU2395579C2 (ru) 2007-12-21 2010-07-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Escherichia
WO2009031565A1 (ja) * 2007-09-04 2009-03-12 Ajinomoto Co., Inc. アミノ酸生産微生物及びアミノ酸の製造法
JP2010263790A (ja) 2007-09-04 2010-11-25 Ajinomoto Co Inc アミノ酸生産微生物及びアミノ酸の製造法
JP2011067095A (ja) 2008-01-10 2011-04-07 Ajinomoto Co Inc 発酵法による目的物質の製造法
BRPI0906795A2 (pt) 2008-01-23 2015-08-18 Ajinomoto Kk Método para produzir um l-aminoácido
BRPI0918299B1 (pt) 2008-09-08 2018-08-14 Ajinomoto Co., Inc. Método para produzir um l-aminoácido
JP2012029565A (ja) 2008-11-27 2012-02-16 Ajinomoto Co Inc L−アミノ酸の製造法
JPWO2011013707A1 (ja) 2009-07-29 2013-01-10 味の素株式会社 L−アミノ酸の製造法
JP2012223091A (ja) 2009-08-25 2012-11-15 Ajinomoto Co Inc L−アミノ酸の製造法
JP2012223092A (ja) 2009-08-28 2012-11-15 Ajinomoto Co Inc L−アミノ酸の製造法
JP2013013329A (ja) 2009-11-06 2013-01-24 Ajinomoto Co Inc L−アミノ酸の製造法
MY185322A (en) 2013-05-13 2021-05-04 Ajinomoto Kk Method for producing l-amino acid
JP2016165225A (ja) 2013-07-09 2016-09-15 味の素株式会社 有用物質の製造方法
JP2016192903A (ja) 2013-09-17 2016-11-17 味の素株式会社 海藻由来バイオマスからのl−アミノ酸の製造方法
PL3053999T3 (pl) 2013-10-02 2020-03-31 Ajinomoto Co., Inc. Przyrząd do regulowania poziomu amoniaku i sposób regulowania poziomu amoniaku
WO2015060314A1 (ja) 2013-10-21 2015-04-30 味の素株式会社 L-アミノ酸の製造法
WO2015060391A1 (ja) 2013-10-23 2015-04-30 味の素株式会社 目的物質の製造法
JP2015156844A (ja) * 2014-02-25 2015-09-03 花王株式会社 枯草菌変異株及びそれを用いたジピコリン酸の製造方法
CN105505969A (zh) * 2014-09-26 2016-04-20 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种提高l-苏氨酸转化率的方法及其应用
JP6623690B2 (ja) 2015-10-30 2019-12-25 味の素株式会社 グルタミン酸系l−アミノ酸の製造法
CN106148261B (zh) * 2016-07-01 2019-09-03 江南大学 一种提高乙酰氨基葡萄糖产量的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法
JP7066977B2 (ja) 2017-04-03 2022-05-16 味の素株式会社 L-アミノ酸の製造法
KR101947959B1 (ko) * 2018-05-28 2019-02-13 씨제이제일제당 (주) 변이형 호모세린 디하이드로게나제 및 이를 이용한 호모세린 또는 호모세린 유래 l-아미노산의 생산 방법
EP3861109A1 (en) 2018-10-05 2021-08-11 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing target substance by bacterial fermentation
RU2714763C1 (ru) * 2018-11-08 2020-02-19 Генетик Диагностикс Энд Терапи 21 Лтд Генотерапевтический ДНК-вектор для таргетной генной терапии, способ его получения (варианты), штамм для его производства, способ его получения
JPWO2022092018A1 (sk) 2020-10-28 2022-05-05
US20240117393A1 (en) 2022-09-30 2024-04-11 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing l-amino acid

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU875663A1 (ru) * 1978-06-30 1982-09-15 Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Штаммы е.coLI ВНИИГенетика VL 334 @ N6 и ВНИИГенетика VL 334 @ N7-продуценты L-треонина и способ их получени
BR9610016A (pt) * 1995-08-23 1999-07-06 Ajinomoto Kk Microorganismo e processo para a produção do ácido l-glutâmico por fermentação
SK284235B6 (en) * 1997-10-04 2004-11-03 Forschungszentrum Juelich Gmbh Method for microbial production of amino acids of the aspartate and/or glutamate family and agents which can be used in the said method
JP2002511250A (ja) * 1998-04-13 2002-04-16 ザ ユニバーシティ オブ ジョージア リサーチファウンデーション,インコーポレイティド 微生物におけるオキサロ酢酸由来生化学物質の生産増強のためのピルビン酸カルボキシラーゼの過剰発現

Also Published As

Publication number Publication date
JP2001136991A (ja) 2001-05-22
CN1305002A (zh) 2001-07-25
BR0004832A (pt) 2001-05-22
EP1092776B1 (en) 2004-07-07
DE60011974D1 (de) 2004-08-12
RU2207376C2 (ru) 2003-06-27
SK285997B6 (sk) 2008-01-07
CN1247783C (zh) 2006-03-29
DE60011974T2 (de) 2005-03-10
EP1092776A1 (en) 2001-04-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK15112000A3 (sk) Baktéria patriaca do rodu escherichia, ktorá je transformovaná génom kódujúcim pyruvát karboxylázu a produkuje l-amonokyselinu, a spôsob výroby l-aminokyseliny fermentáciou
US6319696B1 (en) Process for producing L-amino acids
KR100924065B1 (ko) L-라이신 생산능이 향상된 코리네박테리아 및 그를 이용한 l-라이신 생산 방법
US7179623B2 (en) Method of producing amino acids using E. coli transformed with sucrose PTS genes
US7618803B2 (en) Method for producing L-amino acid using bacteria belonging to the genus Escherichia
KR100823044B1 (ko) 트레오닌 및 이소류신의 제조방법
US7186531B2 (en) L-threonine producing bacterium belonging to the genus Escherichia and method for producing L-threonine
KR100976072B1 (ko) 에스세리키아속 세균을 사용하는 l-트레오닌의 제조방법
US7229794B2 (en) Microorganism producing L-threonine having inactivated galR gene, method of producing the same and method of producing L-threonine using the microorganism
US20090093030A1 (en) fadR KNOCK-OUT MICROORGANISM AND METHODS FOR PRODUCING L-THREONINE
CN100516230C (zh) L-氨基酸的生产方法
KR101117513B1 (ko) 에스케리치아 속에 속하는 l-트레오닌 생산 세균 및l-트레오닌의 생산 방법
US7256018B2 (en) Microorganism producing L-threonine having inactivated tyrR gene, method of producing the same and method of producing L-threonine using the microorganism
US7074602B2 (en) Method for producing L-threonine
EP1611232B1 (en) tdcBC/pckA GENE-INACTIVATED MICROORGANISM AND METHOD OF PRODUCING L-THREONINE USING THE SAME

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees

Effective date: 20101011