RU2829888C1 - Способ снижения устойчивости клеток глиобластомы к темозоломиду - Google Patents
Способ снижения устойчивости клеток глиобластомы к темозоломиду Download PDFInfo
- Publication number
- RU2829888C1 RU2829888C1 RU2023127314A RU2023127314A RU2829888C1 RU 2829888 C1 RU2829888 C1 RU 2829888C1 RU 2023127314 A RU2023127314 A RU 2023127314A RU 2023127314 A RU2023127314 A RU 2023127314A RU 2829888 C1 RU2829888 C1 RU 2829888C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- insdqualifier
- insdfeature
- insdseq
- temozolomide
- name
- Prior art date
Links
- BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N Temozolomide Chemical compound O=C1N(C)N=NC2=C(C(N)=O)N=CN21 BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 52
- 229960004964 temozolomide Drugs 0.000 title claims abstract description 50
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 title claims abstract description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims abstract description 7
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims abstract 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 230000001629 suppression Effects 0.000 abstract description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 abstract description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 45
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 22
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 22
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 102000004495 STAT3 Transcription Factor Human genes 0.000 description 9
- 108010017324 STAT3 Transcription Factor Proteins 0.000 description 9
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 9
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 9
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 102200082402 rs751610198 Human genes 0.000 description 8
- 108091007767 MALAT1 Proteins 0.000 description 7
- 108091046869 Telomeric non-coding RNA Proteins 0.000 description 7
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 7
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 5
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 5
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 3
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 3
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 3
- 101000699762 Homo sapiens RNA 3'-terminal phosphate cyclase Proteins 0.000 description 3
- 102100029143 RNA 3'-terminal phosphate cyclase Human genes 0.000 description 3
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 3
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 2
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 102000013530 TOR Serine-Threonine Kinases Human genes 0.000 description 2
- 108010065917 TOR Serine-Threonine Kinases Proteins 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 description 2
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 229940124302 mTOR inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 239000003628 mammalian target of rapamycin inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- XQFYGXFPKONEPY-UHFFFAOYSA-N 2,3-diphenylfuran Chemical compound O1C=CC(C=2C=CC=CC=2)=C1C1=CC=CC=C1 XQFYGXFPKONEPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 description 1
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 102100033962 GTP-binding protein RAD Human genes 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 201000010915 Glioblastoma multiforme Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101001132495 Homo sapiens GTP-binding protein RAD Proteins 0.000 description 1
- 101000687905 Homo sapiens Transcription factor SOX-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000711846 Homo sapiens Transcription factor SOX-9 Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 239000012098 Lipofectamine RNAiMAX Substances 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 102100025825 Methylated-DNA-protein-cysteine methyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 1
- 108700005075 Regulator Genes Proteins 0.000 description 1
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 1
- 102100024270 Transcription factor SOX-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100034204 Transcription factor SOX-9 Human genes 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- LFYJSSARVMHQJB-QIXNEVBVSA-N bakuchiol Chemical compound CC(C)=CCC[C@@](C)(C=C)\C=C\C1=CC=C(O)C=C1 LFYJSSARVMHQJB-QIXNEVBVSA-N 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000003560 cancer drug Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 108040008770 methylated-DNA-[protein]-cysteine S-methyltransferase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091062762 miR-21 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091041631 miR-21-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044442 miR-21-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052754 neon Inorganic materials 0.000 description 1
- GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N neon atom Chemical compound [Ne] GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 230000004942 nuclear accumulation Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- HWXVIOGONBBTBY-ONEGZZNKSA-N pacritinib Chemical compound C=1C=C(C=2)NC(N=3)=NC=CC=3C(C=3)=CC=CC=3COC\C=C\COCC=2C=1OCCN1CCCC1 HWXVIOGONBBTBY-ONEGZZNKSA-N 0.000 description 1
- 229950011410 pacritinib Drugs 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000009038 pharmacological inhibition Effects 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 1
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу снижения пролиферации клеток глиобластомы. Указанный способ включает доставку в клетки глиобластомы малых интерферирующих РНК, представленных последовательностями SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2, в комбинации с химиотерапией темозоломидом TMZ. Изобретение обеспечивает подавление пролиферации клеток глиобластомы, что достигается посредством преодоления устойчивости к классическому химиотерапевтическому агенту темозоломиду. 2 з.п. ф-лы, 6 ил., 2 табл., 1 пр.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение обеспечивает повышенную чувствительность клеток глиобластомы к темозоломиду с помощью подавления экспрессии энхансерной РНК. Изобретение также включает последовательность синтетической РНК для РНК-интерференции. Комбинация темозоломида и малой интерферирующей РНК, нацеленной на энхансерную РНК ENSG00000289579, может быть использована в противоопухолевой терапии.
Уровень техники
Глиобластома является наиболее частой и агрессивной опухолью головного мозга. На данный момент стандартный протокол лечения глиобластомы включает в себя прием алкилирующего агента темозоломида в сочетании с лучевой терапией и хирургическим удалением опухоли (Kotecha, R., Odia, Y., Khosla, A.A., & Ahluwalia, M.S. (2023). Key clinical principles in the management of glioblastoma. JCO Oncology Practice, 19(4), 180-189.). Но даже под воздействием такой комплексной терапии прогнозы по выживаемости остаются неутешительными для пациентов: медиана выживаемости составляет менее двух лет, а пятилетняя выживаемость менее 10 процентов (Tan et al. (2020). Management of glioblastoma: State of the art and future directions. CA: a cancer journal for clinicians, 70(4), 299-312). Такой плохой прогноз обусловлен, в частности, резистентностью к химиотерапии, приводящей к рецидивам опухоли после хирургического удаления. Было показано, что около половины опухолей устойчивы к темозоломиду (Lee (2016). Temozolomide resistance in glioblastoma multiforme. Genes & diseases, 3(3), 198-210).
В настоящее время идет активное исследование новых способов борьбы с устойчивостью к темозоломиду. Есть работы, которые показывают, что использование подходов, направленных на уменьшение экспрессии STAT3 методом РНК-интерференции (Kohsaka et al (2012). STAT3 inhibition overcomes temozolomide resistance in glioblastoma by downregulating MGMT expression. Molecular cancer therapeutics, 11(6), 1289-1299), или воздействие непосредственно на белок STAT3 ингибиторами (Chuang et al (2019). Preclinical evidence of STAT3 inhibitor pacritinib overcoming temozolomide resistance via downregulating miR-21-enriched exosomes from M2 glioblastoma-associated macrophages. Journal of Clinical Medicine, 8(7), 959), или ингибирование сигнального пути активации STAT3 (Yeom et al. (2014). RRAD promotes EGFR-mediated STAT3 activation and induces temozolomide resistance of malignant glioblastoma. Molecular cancer therapeutics, 13(12), 3049-3061), увеличивает чувствительность глиобластомы к темозоломиду. Еще одной мишенью, используемой для подавления развития глиобластомы, является белок mTOR. Было показано, что нокдаун и фармакологическое ингибирование рапамицином снижало экспрессию SOX2 и SOX9 и устраняло химиорезистентность (Garros-Regulez et al. (2016). mTOR inhibition decreases SOX2-SOX9 mediated glioma stem cell activity and temozolomide resistance. Expert opinion on therapeutic targets, 20(4), 393-405). Также использовали комбинацию ингибиторов STAT3 и mTOR для усиления эффекта от терапии и минимизации шанса возникновения устойчивой популяции (Miyata et al. (2017). Combination of a STAT3 inhibitor and an mTOR inhibitor against a temozolomide-resistant glioblastoma cell line. Cancer genomics & proteomics, 14(1), 83-91). Стоить отметить, что снижение активности вышеописанные белков воздействует не только на опухолевые, но и на здоровые клетки организма, что особенно сильно отражается на активно делящихся клетках (Chiba (2016). STAT3 inhibitors for cancer therapy-the rationale and remained problems. EC cancer, 1(S1), S1-S8). Поэтому особое значение имеют подходы, воздействующие не на распространенные в большинстве клеток белки, контролирующие клеточный рост и апоптоз, а на гены, регулирующие такие белки. Таким образом, побочные эффекты терапии проявляются только в клетках, которые зависят от экспрессии данных генов-регуляторов.
В последнее время все больший интерес вызывает клиническое применение терапевтических препаратов на основе РНК. Управлением по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств США (FDA) и Европейским агентством по лекарственным средствам (ЕМА) одобрено 11 РНК-терапевтических препаратов, направленных на модификацию генов в печени, мышцах или центральной нервной системе. Все эти препараты представляют собой либо малые интерферирующие РНК (siRNA), либо антисмысловые олигонуклеотиды, вызывающие специфическую регуляцию генов, либо направленные на сплайсинг пре-мРНК (Winkle et al (2021). Noncoding RNA therapeutics - Challenges and potential solutions. Nature reviews Drug discovery, 20(8), 629-651). Вместе с этим появляется все больше данных о роли длинных некодирующих РНК (днРНК) в развитии различных заболеваний, особенно онкологических. Было показано, что днРНК также связаны с лекарственной устойчивостью в раке (Jiang et al. (2020). Long non-coding RNAs as a determinant of cancer drug resistance: Towards the overcoming of chemoresistance via modulation of IncRNAs. Drug Resistance Updates, 50, 100683). Например, днРНК MALAT1 в значительной степени ассоциирована с метастазированием рака. Было также показано, что нокдаун MALAT1 в клетках глиобластомы увеличивал чувствительность к темозоломиду (Cai et al. (2018). Long noncoding RNA MALAT 1 knockdown reverses chemoresistance to temozolomide via promoting micro RNA-101 in glioblastoma. Cancer Medicine, 7(4), 1404-1415). MALAT1 содержит на 3'-конце тройную спиральную структуру, которая защищает эту РНК от деградации экзонуклеазой и способствует ее ядерной аккумуляции. Была обнаружена малая молекула на основе дифенилфурана, которая специфически нацелена на структурный элемент тройной спирали в MALAT1 (Donlic et al. (2018). Discovery of small molecule ligands for MALAT1 by tuning an RNA-binding scaffold. Angewandte Chemie, 130(40), 13426-13431). Однако для проведения клинических исследований еще предстоит выяснить, приводит ли связывание этой молекулы к эффективной дестабилизации MALAT1.
Терапия, нацеленная на днРНК стала предметом исследований только в последнее десятилетие, и до сих пор ни один препарат, нацеленный на днРНК, не вышел в клиническую разработку. В будущем ожидается, что днРНК расширят круг мишеней для РНК-интерференции и методов CRISPR Cas, а тканеспецифичные типы днРНК, например, энхансерные РНК (эРНК), позволят использовать совершенно новые терапевтические подходы. Энхансерные РНК транскрибируются с активных энхансерных областей, а поскольку активность энхансеров часто является тканеспецифичной, то и экспрессия эРНК может отличаться в зависимости от типа клеток. Например, нашей группой была найдена эРНК, которая влияет на клеточный рост и устойчивость к химиотерапии клеток лимфомы Беркитта, в то время как на здоровые CD19 клетки схожего эффекта обнаружено не было (Stasevich et al (2022). Enhancer RNA AL928768.3 from the IGH locus regulates MYC expression and controls the proliferation and chemoresistance of Burkitt lymphoma cells with IGH/MYC translocation. International Journal of Molecular Sciences, 23(9), 4624).
Таким образом, существующие в настоящее время подходы к лечению глиобластомы требуют улучшения. Многочисленные исследования в данной области подтверждают важность и актуальность работ, направленных на увеличение медианы выживаемости пациентов с глиобластомой, в частности, решающих проблему устойчивости к классической терапии темозоломидом.
Предлагаемый способ снижения пролиферации глиобластомы, заключающийся в комбинации темозоломида и подавление экспрессии эРНК с помощью РНК-интерференции, является многообещающим подходом для терапии и может помочь в решении актуальной задачи.
Раскрытие сущности изобретения
Техническим результатом изобретения является подавление пролиферации клеток глиобластомы, достигаемое посредством преодоления устойчивости к классическому химиотерапевтическому агенту темозоломиду.
Технический результат достигается за счет использования комбинации классической химиотерапии темозоломидом и терапии РНК-препаратами (метод РНК-интерференции).
Предлагаемый способ является новым и не описан в патентной и научно-технической литературе.
Краткое описание фигур и таблиц
Фиг. 1. Нокдаун эРНК ENSG00000289579 в клеточной линии глиобластомы DBTRG-05MG. Представлена измеренная методом количественного ПЦР относительная экспрессия эРНК ENSG00000289579 при доставке в клетки малых интерферирующих РНК (siRNA). Темозоломид (TMZ) использовался в концентрации 20 мкг/мл, в качестве растворителя - диметилсульфоксид (DMSO). Представлен результат 6 независимых биологических повторов. Для нормировки использовался ген домашнего хозяйства GAPDH. * р-значение менее 0,05 (критерий Манна-Уитни).
Фиг. 2. Влияние на клеточный рост нокдауна эРНК ENSG00000289579 в клеточной линии глиобластомы DBTRG-05MG. Представлена измеренная с помощью прибора xCELLigence RTCA DP кривая роста клеточной линии DBTRG-05MG при добавлении специфичных малых интерферирующих РНК (siRNA). Темозоломид (TMZ) использовался в концентрации 20 мкг/мл, в качестве растворителя - диметилсульфоксид (DMSO), поскольку темозоломид хранится растворенным в DMSO. Представлен результат 6 независимых биологических повторов.
Фиг. 3. Влияние на клеточный рост нокдауна эРНК ENSG00000289579 в клеточной линии глиобластомы DBTRG-05MG через 96 часов. Представлен измеренный с помощью прибора xCELLigence RTCA DP клеточный индекс клеток DBTRG-05MG при добавлении специфичных малых интерферирующих РНК (siRNA) через 96 часов после начала эксперимента. Темозоломид (TMZ) использовался в концентрации 20 мкг/мл, в качестве растворителя - диметилсульфоксид (DMSO), поскольку темозоломид хранится растворенным в DMSO. Представлен результат 6 независимых биологических повторов. ** р-значение менее 0,01 (критерий Манна-Уитни).
Фиг. 4. Нокдаун эРНК ENSG00000289579 в клеточной линии глиобластомы T98G. Представлена измеренная методом количественного ПЦР относительная экспрессия эРНК ENSG00000289579 в случае доставки в клетки малых интерферирующих РНК (siRNA). Темозоломид (TMZ) использовался в концентрации 20 мкг/мл, в качестве растворителя - диметилсульфоксид (DMSO), поскольку темозоломид хранится растворенным в DMSO. Представлен результат 4 независимых биологических повторов. Для нормировки использовался ген домашнего хозяйства GAPDH. ** р-значение менее 0,01 (критерий Манна-Уитни).
Фиг. 5. Влияние на клеточный рост нокдауна эРНК ENSG00000289579 в клеточной линии глиобластомы T98G. Представлена кривая роста клеточной линии T98G при добавлении специфичных малых интерферирующих РНК (siRNA). Темозоломид (TMZ) использовался в концентрации 20 мкг/мл, в качестве растворителя - диметилсульфоксид (DMSO), поскольку темозоломид хранится растворенным в DMSO. Представлен результат 4 независимых биологических повторов.
Фиг. 6. Влияние на клеточный рост нокдауна эРНК ENSG00000289579 в клеточной линии глиобластомы DBTRG-05MG через 96 часов. Представлен измеренный с помощью прибора xCELLigence RTCA DP клеточный индекс клеток DBTRG-05MG при добавлении специфичных малых интерферирующих РНК (siRNA) через 96 часов. Темозоломид (TMZ) использовался в концентрации 20 мкг/мл, в качестве растворителя - диметилсульфоксид (DMSO), поскольку темозоломид хранится растворенным в DMSO. Представлен результат 4 независимых биологических повторов. * р-значение менее 0,05 (критерий Манна-Уитни).
Табл. 1. Последовательность малых интерферирующих РНК. В последовательностях SEQ ID NO: 1-4 два последних остатка представляют собой дезокситимидин (Т).
Табл. 2. Возможные гены-мишени, с экспрессией мРНК которых коррелирует экспрессия эРНК ENSG00000289579. Представлен список генов мишеней эРНК ENSG00000289579, координаты генов (сборка генома hg38), расстояние до эРНК, коэффициент корреляции эРНК ENSG00000289579 с конкретным геном и отрицательный десятичный логарифм False discovery rate.
Осуществление изобретения
Описанное изобретение направлено на разработку нового подхода в подавлении пролиферации клеток глиобластомы, в частности в преодолении резистентности клеток глиобластомы к темозоломиду.
Предлагаемый подход представляет собой улучшение и исправление широко используемого подхода для лечения глиобластомы. Предлагаемая комбинация двух компонентов, а именно: классической химиотерапии темозоломидом с использованием РНК-интерференции для подавления экспрессии эРНК ENSG00000289579, что обеспечивает значительное снижение пролиферации опухолевых клеток и уход клеток глиобластомы от резистентности к темозоломиду.
Для подавления экспрессии эРНК ENSG00000289579 используется малая интерферирующая РНК, которая содержит смысловую цепь, представленную последовательностью SEQ ID NO: 1 и антисмысловую цепь - SEQ ID NO: 2, поставляемые в виде лиофилизатов (ДНК-Синтез), к каждой последовательности РНК были добавлены 2 нуклеотида dT для стабилизации (Табл. 1). Лиофилизированные олигонуклеотиды растворяют в буфере 10 мМ Tris-HC1, 2,5 мМ MgCl2, 0,1 мМ СаCl2 (рН 7.5) при температуре 25°С или в специальном буфере siRNA Buffer, содержащем хлорид калия и хлорид магния, в концентрации 100-500 пМоль. Далее одинаковое молярное количество смысловой и антисмысловой РНК смешиваются, ставятся в водяную баню при температуре 95°С и затем остужаются не быстрее 1 градуса в минуту. Растворенная малая интерферирующая РНК хранится при -20°С и ниже.
Доставка малой интерферирующей РНК в клетки осуществляется различными способами, например такими как липофекция (Lipofectamine™ RNAiMAX, GenJect™-40 или другой липофекционный агент), электропорация (система трансфекции Neon, Lonza и другие).
Энхансерная РНК ENSG00000289579 имеет ряд потенциальных мишеней, воздействие на которые может приводить к снижению пролиферации клеток глиобластомы (Табл. 2). Список потенциальных генов мишеней эРНК ENSG00000289579 (ENSR00000094395) был получен с помощью базы данных энхансерных РНК в раке eRic (https://hanlab.uth.edu/eRic/).
Далее настоящее изобретение детально проиллюстрировано с использованием конкретного примера, представляющего возможное воплощения изобретения. В то же время изобретение не ограничивается описанными воплощениями, а включает любые альтернативные варианты и модификации, применение которых возможно с учетом сущности изобретения.
Пример 1. Увеличение чувствительности клеточных линий DBTRG-05MG и T98G к темозоломиду с помощью нокдауна эРНК ENSG00000289579 доставкой малых интерферирующих РНК липофекцией
Клеточные линии и трансфекция. Клеточные линии глиобластомы DBTRG-05MG и T98G ведут в среде DMEM с добавлением 10% эмбриональной бычьей сыворотки (Corning), 50 Ед/мл пенициллина и 50 мкг/мл стрептомицина (ПанЭко), 1 × аминокислоты заменимые (ПанЭко), 10 мМ HEPES (ПанЭко). Трансфекцию малых интерферирующих РНК (siRNA) производят с помощью трансфекционного реагента Lipofectamine RNAiMAX (Thermo FS) как указано в протоколе. В качестве контроля используют малые инферирующие РНК с рандомизированной последовательностью, не имеющей мишеней в человеческих клетках, представленных последовательностями SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4 (Табл. 1).
Измерение клеточной пролиферации и химиорезистентности. Для оценки клеточного роста и химиорезистентности сажают 1,5*104 клеток на лунку клеточного анализатора xCelligence. Каждая точка измеряется в двух технических повторах. Через час после посадки клеток добавляют темозоломид (TMZ) в концентрации 20 мкг/мл. В качестве контроля используют диметилсульфоксид (DMSO), поскольку темозоломид был растворен в диметилсульфоксиде. Измерение клеточной пролиферации (клеточного индекса) производят каждые 15 минут в течение 96 часов.
Выделение тотальной РНК и постановка ПЦР в реальном времени. Через 24 часа после начала эксперимента из клеток глиобластомы выделяют тотальную РНК (ExtractRNA, Евроген), затем образцы обрабатывают ДНКазой (Thermo Scientific) для избавления от возможных примесей геномной ДНК и производят синтез первой цепи ДНК с использование обратной транскриптазы MMLV (Евроген) в присутствии рандомных и олигоdТ праймеров в соотношении 1:1 в соответствии с протоколом производителя. Экспрессию эРНК ENSG00000289579 оценивают метод ПЦР в реальном времени с использованием специфичных праймеров SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6. Для нормировки используют ген домашнего хозяйства GAPDH (последовательности SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8).
По базам данных чувствительности разных клеточных линий к химотерапии Genomics of Drug Sensitivity in Cancer (GDSC1, GDSC2) клеточные линии глиобластомы DBTRG-05MG и T98G являются устойчивыми клеточными клетками к темозоломиду.
Был произведен нокдаун в клеточной линии DBTRG-05MG. Было подтверждено, что экспрессия эРНК ENSG00000289579 снижается при добавлении малых интерферирующих РНК (Фиг. 1). Наблюдалось сильное снижение пролиферации в комбинации темозоломида и малых интерферирующих РНК к эРНК ENSG00000289579 (Фиг. 2, 3).
Нокдаун в клеточной линии T98G приводил также к значимому снижению экспрессии эРНК ENSG00000289579 (Фиг. 4). По результатам наблюдалось сильное снижение пролиферации клеточной линии T98G при использовании комбинации темозоломида и малых интерферирующих РНК к эРНК ENSG00000289579 по сравнению с контрольными образцами (Фиг. 5, 6).
--->
<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing
1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">
<ST26SequenceListing originalFreeTextLanguageCode="ru"
dtdVersion="V1_3" fileName="СПОСОБ СНИЖЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ КЛЕТОК
ГЛИОБЛАСТОМЫ К ТЕМОЗОЛОМИДУ.xml" softwareName="WIPO Sequence"
softwareVersion="2.3.0" productionDate="2023-09-23">
<ApplicationIdentification>
<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>
<ApplicationNumberText></ApplicationNumberText>
<FilingDate>2023-09-14</FilingDate>
</ApplicationIdentification>
<ApplicantFileReference>-</ApplicantFileReference>
<ApplicantName languageCode="ru">Федеральное государственное
бюджетное учреждение науки Институт молекулярной биологии им. В.А.
Энгельгардта Российской академии наук (ИМБ РАН)</ApplicantName>
<ApplicantNameLatin>Engelhardt Institute of Molecular Biology,
Russian Academy of Sciences</ApplicantNameLatin>
<InventionTitle languageCode="ru">СПОСОБ СНИЖЕНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ
КЛЕТОК ГЛИОБЛАСТОМЫ К ТЕМОЗОЛОМИДУ</InventionTitle>
<SequenceTotalQuantity>8</SequenceTotalQuantity>
<SequenceData sequenceIDNumber="1">
<INSDSeq>
<INSDSeq_length>23</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>RNA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..23</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>other RNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q7">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>misc_feature</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..23</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier id="q8">
<INSDQualifier_name>standard_name</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>sense RNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>gccagatctcgagtttagacatt</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq>
</SequenceData>
<SequenceData sequenceIDNumber="2">
<INSDSeq>
<INSDSeq_length>23</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>RNA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..23</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>other RNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q10">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>misc_feature</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..23</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier id="q11">
<INSDQualifier_name>standard_name</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>antisense RNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>tgtctaaactcgagatctggctt</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq>
</SequenceData>
<SequenceData sequenceIDNumber="3">
<INSDSeq>
<INSDSeq_length>23</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>RNA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..23</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>other RNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q2">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>misc_feature</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..23</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier id="q12">
<INSDQualifier_name>standard_name</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>direct primer</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>ggtgtaccaacgactcaatgttt</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq>
</SequenceData>
<SequenceData sequenceIDNumber="4">
<INSDSeq>
<INSDSeq_length>23</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>RNA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..23</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>other RNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q4">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>misc_feature</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..23</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier id="q13">
<INSDQualifier_name>standard_name</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>reverse primer</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>acattgagtcgttggtacacctt</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq>
</SequenceData>
<SequenceData sequenceIDNumber="5">
<INSDSeq>
<INSDSeq_length>20</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..20</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q15">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>misc_feature</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..20</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier id="q16">
<INSDQualifier_name>standard_name</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>specific reverse
prime</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>gagagcctcctacccagacc</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq>
</SequenceData>
<SequenceData sequenceIDNumber="6">
<INSDSeq>
<INSDSeq_length>21</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..21</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q18">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>misc_feature</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..21</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier id="q19">
<INSDQualifier_name>standard_name</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>specific reverse
primer</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>ccaagcacacatagctcctca</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq>
</SequenceData>
<SequenceData sequenceIDNumber="7">
<INSDSeq>
<INSDSeq_length>23</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..23</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q21">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>misc_feature</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..23</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier id="q22">
<INSDQualifier_name>standard_name</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>GAPDH direct primer</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>caaggtcatccatgacaactttg</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq>
</SequenceData>
<SequenceData sequenceIDNumber="8">
<INSDSeq>
<INSDSeq_length>20</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..20</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q24">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
<INSDFeature>
<INSDFeature_key>misc_feature</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..20</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals>
<INSDQualifier id="q25">
<INSDQualifier_name>standard_name</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>GAPDH reverse
primer</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier>
</INSDFeature_quals>
</INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>ggccatccacagtcttctgg</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq>
</SequenceData>
</ST26SequenceListing>
<---
Claims (3)
1. Способ снижения пролиферации клеток глиобластомы, включающий доставку в клетки глиобластомы малых интерферирующих РНК, представленных последовательностями SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:2, в комбинации с химиотерапией темозоломидом TMZ.
2. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что с помощью малых интерферирующих РНК SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2 проводят нокдаун эРНК ENSG00000289579.
3. Способ по п. 2, характеризующийся тем, что снижение экспрессии эРНК ENSG00000289579 приводит к увеличению чувствительности клеток глиобластом к темозоломиду.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2829888C1 true RU2829888C1 (ru) | 2024-11-07 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN119932015A (zh) * | 2024-12-20 | 2025-05-06 | 中国科学院生物物理研究所 | 一种lncATRIG抑制剂及其在制备治疗胶质瘤的药物中的应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009151539A1 (en) * | 2008-05-24 | 2009-12-17 | Sirnaomics, Inc. | COMPOSITIONS AND METHODS USING siRNA MOLECULES FOR TREATMENT OF GLIOMAS |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009151539A1 (en) * | 2008-05-24 | 2009-12-17 | Sirnaomics, Inc. | COMPOSITIONS AND METHODS USING siRNA MOLECULES FOR TREATMENT OF GLIOMAS |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| DING, JIE et al. BRCA1 identified as a modulator of temozolomide resistance in P53 wild-type GBM using a high-throughput shRNA-based synthetic lethality screening, American journal of cancer research, 2019, v. 9(11), pp. 2428-2441. SHAN, X. et al. High expression of VAT1 is a prognostic biomarker and predicts malignancy in glioblastoma, Oncology Reports, 2019, 42(4), pp. 1422-1430. Haoyue Xu et al. The nanoprodrug of polytemozolomide combines with MGMT siRNA to enhance the effect of temozolomide in glioma, Drug Delivery, 2023 (published on-line: December 2022), v. 30 (1), pp. 1-13. * |
| ПИНЕВИЧ А.А. и др. Ростовые и молекулярные характеристики клеток глиобластом человека линий a172 и r1, резистентных к действию темозоломида, Цитология, Апрель 2023, т. 65, no 2, c. 131-145. КОВАЛЕНКО Т.Ф. и др. Некодирующие рнк в патогенезе глиальных опухолей, Acta Naturae, (русскоязычная версия), vol. 13, no. 3, 2021, pp. 38-51. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN119932015A (zh) * | 2024-12-20 | 2025-05-06 | 中国科学院生物物理研究所 | 一种lncATRIG抑制剂及其在制备治疗胶质瘤的药物中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chen et al. | Extrachromosomal telomere repeat DNA is linked to ALT development via cGAS-STING DNA sensing pathway | |
| Chen et al. | The isolation of an RNA aptamer targeting to p53 protein with single amino acid mutation | |
| Tang et al. | MicroRNA‐324‐5p regulates stemness, pathogenesis and sensitivity to bortezomib in multiple myeloma cells by targeting hedgehog signaling | |
| Balkhi et al. | miR-29 acts as a decoy in sarcomas to protect the tumor suppressor A20 mRNA from degradation by HuR | |
| Dehner et al. | Wnt signaling inhibits Forkhead box O3a-induced transcription and apoptosis through up-regulation of serum-and glucocorticoid-inducible kinase 1 | |
| Jiang et al. | Expression profiling of TRIM protein family in THP1-derived macrophages following TLR stimulation | |
| Luan et al. | Exosomal miR-106b-5p derived from melanoma cell promotes primary melanocytes epithelial-mesenchymal transition through targeting EphA4 | |
| Huang et al. | miR-340: A multifunctional role in human malignant diseases | |
| Yang et al. | PTBP1 induces ADAR1 p110 isoform expression through IRES-like dependent translation control and influences cell proliferation in gliomas | |
| Birnie et al. | Loss of miR-223 and JNK signaling contribute to elevated stathmin in malignant pleural mesothelioma | |
| CN111575372B (zh) | 长非编码rna letn作为肿瘤标志物及治疗靶点 | |
| Hu et al. | miR-1 inhibits progression of high-risk papillomavirus-associated human cervical cancer by targeting G6PD | |
| JP2015518714A (ja) | 遺伝子発現を調節するための組成物及び方法 | |
| JP2010521439A (ja) | 上皮腫瘍細胞における薬剤耐性のモジュレータ化合物 | |
| Sa et al. | A miR-124/ITGA3 axis contributes to colorectal cancer metastasis by regulating anoikis susceptibility | |
| Krauß et al. | Protein phosphatase 2A and rapamycin regulate the nuclear localization and activity of the transcription factor GLI3 | |
| Shi et al. | The potential roles and mechanisms of non-coding RNAs in cancer anoikis resistance | |
| Yuan et al. | miR‑494 inhibits cell proliferation and metastasis via targeting of CDK6 in osteosarcoma | |
| Algaber et al. | Targeting FHL2-E-cadherin axis by miR-340-5p attenuates colon cancer cell migration and invasion | |
| Jiang et al. | Long non-coding RNA HOXA-AS3 facilitates the malignancy in colorectal cancer by miR-4319/SPNS2 axis | |
| RU2829888C1 (ru) | Способ снижения устойчивости клеток глиобластомы к темозоломиду | |
| JP2007530431A (ja) | 膵臓癌を治療するための組成物および方法 | |
| Park et al. | LNX1 contributes to tumor growth by down‐regulating p53 stability | |
| Zhou et al. | RNAi knockdown of PIK3CA preferentially inhibits invasion of mutant PIK3CA cells | |
| CN103656674B (zh) | 人eIF5B基因的用途及其相关药物 |