RU2815387C1 - Штамм бактерий Corynebacterium pseudotuberculosis, предназначенный для получения моно- или поливалентных иммуногенных композиций, направленных на специфическую профилактику казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) мелкого рогатого скота - Google Patents
Штамм бактерий Corynebacterium pseudotuberculosis, предназначенный для получения моно- или поливалентных иммуногенных композиций, направленных на специфическую профилактику казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) мелкого рогатого скота Download PDFInfo
- Publication number
- RU2815387C1 RU2815387C1 RU2023132618A RU2023132618A RU2815387C1 RU 2815387 C1 RU2815387 C1 RU 2815387C1 RU 2023132618 A RU2023132618 A RU 2023132618A RU 2023132618 A RU2023132618 A RU 2023132618A RU 2815387 C1 RU2815387 C1 RU 2815387C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pseudotuberculosis
- strain
- caseous lymphadenitis
- mcg
- prevention
- Prior art date
Links
- 241000186225 Corynebacterium pseudotuberculosis Species 0.000 title claims abstract description 56
- 201000003265 lymphadenitis Diseases 0.000 title claims abstract description 44
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 36
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title claims abstract description 33
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims abstract description 28
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 title claims abstract description 19
- 208000025087 Yersinia pseudotuberculosis infectious disease Diseases 0.000 title abstract description 22
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 35
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 25
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 13
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000011160 research Methods 0.000 claims abstract description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 19
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 18
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 16
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 claims description 11
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 10
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 7
- 244000144972 livestock Species 0.000 claims description 6
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 claims description 5
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 claims description 5
- 101710194807 Protective antigen Proteins 0.000 claims description 5
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 5
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 claims description 4
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 4
- JVTIXNMXDLQEJE-UHFFFAOYSA-N 2-decanoyloxypropyl decanoate 2-octanoyloxypropyl octanoate Chemical compound C(CCCCCCC)(=O)OCC(C)OC(CCCCCCC)=O.C(=O)(CCCCCCCCC)OCC(C)OC(=O)CCCCCCCCC JVTIXNMXDLQEJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 49
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 abstract description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 10
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 abstract description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 17
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 12
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 10
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 9
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 7
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 7
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 6
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 5
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 5
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 4
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 4
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 4
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 4
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283898 Ovis Species 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- -1 for example Substances 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000009117 preventive therapy Methods 0.000 description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- SITVSCPRJNYAGV-UHFFFAOYSA-L tellurite Chemical compound [O-][Te]([O-])=O SITVSCPRJNYAGV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 3
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ACTOXUHEUCPTEW-BWHGAVFKSA-N 2-[(4r,5s,6s,7r,9r,10r,11e,13e,16r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-5-[(2s,4r,5s,6s)-4,5-dihydroxy-4,6-dimethyloxan-2-yl]oxy-4-(dimethylamino)-3-hydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-10-[(2s,5s,6r)-5-(dimethylamino)-6-methyloxan-2-yl]oxy-4-hydroxy-5-methoxy-9,16-dimethyl-2-o Chemical compound O([C@H]1/C=C/C=C/C[C@@H](C)OC(=O)C[C@@H](O)[C@@H]([C@H]([C@@H](CC=O)C[C@H]1C)O[C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@](C)(O)C2)[C@@H](C)O1)N(C)C)O)OC)[C@@H]1CC[C@H](N(C)C)[C@@H](C)O1 ACTOXUHEUCPTEW-BWHGAVFKSA-N 0.000 description 2
- GSDSWSVVBLHKDQ-UHFFFAOYSA-N 9-fluoro-3-methyl-10-(4-methylpiperazin-1-yl)-7-oxo-2,3-dihydro-7H-[1,4]oxazino[2,3,4-ij]quinoline-6-carboxylic acid Chemical compound FC1=CC(C(C(C(O)=O)=C2)=O)=C3N2C(C)COC3=C1N1CCN(C)CC1 GSDSWSVVBLHKDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZPBZJONDBGPKJ-UHFFFAOYSA-N Antibiotic SQ 26917 Natural products O=C1N(S(O)(=O)=O)C(C)C1NC(=O)C(=NOC(C)(C)C(O)=O)C1=CSC(N)=N1 WZPBZJONDBGPKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010001478 Bacitracin Proteins 0.000 description 2
- SPFYMRJSYKOXGV-UHFFFAOYSA-N Baytril Chemical compound C1CN(CC)CCN1C(C(=C1)F)=CC2=C1C(=O)C(C(O)=O)=CN2C1CC1 SPFYMRJSYKOXGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 2
- 239000004099 Chlortetracycline Substances 0.000 description 2
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 2
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 2
- IECPWNUMDGFDKC-UHFFFAOYSA-N Fusicsaeure Natural products C12C(O)CC3C(=C(CCC=C(C)C)C(O)=O)C(OC(C)=O)CC3(C)C1(C)CCC1C2(C)CCC(O)C1C IECPWNUMDGFDKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- GSDSWSVVBLHKDQ-JTQLQIEISA-N Levofloxacin Chemical compound C([C@@H](N1C2=C(C(C(C(O)=O)=C1)=O)C=C1F)C)OC2=C1N1CCN(C)CC1 GSDSWSVVBLHKDQ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 2
- OJMMVQQUTAEWLP-UHFFFAOYSA-N Lincomycin Natural products CN1CC(CCC)CC1C(=O)NC(C(C)O)C1C(O)C(O)C(O)C(SC)O1 OJMMVQQUTAEWLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004104 Oleandomycin Substances 0.000 description 2
- RZPAKFUAFGMUPI-UHFFFAOYSA-N Oleandomycin Natural products O1C(C)C(O)C(OC)CC1OC1C(C)C(=O)OC(C)C(C)C(O)C(C)C(=O)C2(OC2)CC(C)C(OC2C(C(CC(C)O2)N(C)C)O)C1C RZPAKFUAFGMUPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004100 Oxytetracycline Substances 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 2
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 2
- 108010093965 Polymyxin B Proteins 0.000 description 2
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 2
- 239000004187 Spiramycin Substances 0.000 description 2
- NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N Sulfisoxazole Chemical compound CC1=NOC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=C1C NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- 101150017997 Tox gene Proteins 0.000 description 2
- 239000004182 Tylosin Substances 0.000 description 2
- 229930194936 Tylosin Natural products 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 2
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 2
- 229960003022 amoxicillin Drugs 0.000 description 2
- LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N amoxicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 229940124350 antibacterial drug Drugs 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 2
- 229960004099 azithromycin Drugs 0.000 description 2
- MQTOSJVFKKJCRP-BICOPXKESA-N azithromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)N(C)C[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 MQTOSJVFKKJCRP-BICOPXKESA-N 0.000 description 2
- WZPBZJONDBGPKJ-VEHQQRBSSA-N aztreonam Chemical compound O=C1N(S([O-])(=O)=O)[C@@H](C)[C@@H]1NC(=O)C(=N/OC(C)(C)C(O)=O)\C1=CSC([NH3+])=N1 WZPBZJONDBGPKJ-VEHQQRBSSA-N 0.000 description 2
- 229960003644 aztreonam Drugs 0.000 description 2
- 229960003071 bacitracin Drugs 0.000 description 2
- 229930184125 bacitracin Natural products 0.000 description 2
- CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N bacitracin A Chemical compound C1SC([C@@H](N)[C@@H](C)CC)=N[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@H](CCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2N=CNC=2)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCCCC1 CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229960003669 carbenicillin Drugs 0.000 description 2
- FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N carbenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)C(C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- QYIYFLOTGYLRGG-GPCCPHFNSA-N cefaclor Chemical compound C1([C@H](C(=O)N[C@@H]2C(N3C(=C(Cl)CS[C@@H]32)C(O)=O)=O)N)=CC=CC=C1 QYIYFLOTGYLRGG-GPCCPHFNSA-N 0.000 description 2
- 229960005361 cefaclor Drugs 0.000 description 2
- 229960000603 cefalotin Drugs 0.000 description 2
- XIURVHNZVLADCM-IUODEOHRSA-N cefalotin Chemical compound N([C@H]1[C@@H]2N(C1=O)C(=C(CS2)COC(=O)C)C(O)=O)C(=O)CC1=CC=CS1 XIURVHNZVLADCM-IUODEOHRSA-N 0.000 description 2
- 229960001139 cefazolin Drugs 0.000 description 2
- MLYYVTUWGNIJIB-BXKDBHETSA-N cefazolin Chemical compound S1C(C)=NN=C1SCC1=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](NC(=O)CN3N=NN=C3)[C@H]2SC1 MLYYVTUWGNIJIB-BXKDBHETSA-N 0.000 description 2
- 229960002100 cefepime Drugs 0.000 description 2
- HVFLCNVBZFFHBT-ZKDACBOMSA-N cefepime Chemical compound S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C([O-])=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC)C=2N=C(N)SC=2)CC=1C[N+]1(C)CCCC1 HVFLCNVBZFFHBT-ZKDACBOMSA-N 0.000 description 2
- 229960002129 cefixime Drugs 0.000 description 2
- OKBVVJOGVLARMR-QSWIMTSFSA-N cefixime Chemical compound S1C(N)=NC(C(=N\OCC(O)=O)\C(=O)N[C@@H]2C(N3C(=C(C=C)CS[C@@H]32)C(O)=O)=O)=C1 OKBVVJOGVLARMR-QSWIMTSFSA-N 0.000 description 2
- 229960004682 cefoperazone Drugs 0.000 description 2
- GCFBRXLSHGKWDP-XCGNWRKASA-N cefoperazone Chemical compound O=C1C(=O)N(CC)CCN1C(=O)N[C@H](C=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2C(C(O)=O)=C(CSC=3N(N=NN=3)C)CS[C@@H]21 GCFBRXLSHGKWDP-XCGNWRKASA-N 0.000 description 2
- 229960004261 cefotaxime Drugs 0.000 description 2
- GPRBEKHLDVQUJE-VINNURBNSA-N cefotaxime Chemical compound N([C@@H]1C(N2C(=C(COC(C)=O)CS[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)/C(=N/OC)C1=CSC(N)=N1 GPRBEKHLDVQUJE-VINNURBNSA-N 0.000 description 2
- DKOQGJHPHLTOJR-WHRDSVKCSA-N cefpirome Chemical compound N([C@@H]1C(N2C(=C(C[N+]=3C=4CCCC=4C=CC=3)CS[C@@H]21)C([O-])=O)=O)C(=O)\C(=N/OC)C1=CSC(N)=N1 DKOQGJHPHLTOJR-WHRDSVKCSA-N 0.000 description 2
- 229960000466 cefpirome Drugs 0.000 description 2
- 229960004755 ceftriaxone Drugs 0.000 description 2
- VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N ceftriaxone Chemical compound S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C(O)=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC)C=2N=C(N)SC=2)CC=1CSC1=NC(=O)C(=O)NN1C VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N 0.000 description 2
- 229940030156 cell vaccine Drugs 0.000 description 2
- 229940106164 cephalexin Drugs 0.000 description 2
- ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N cephalexin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@@H]3N(C2=O)C(=C(CS3)C)C(O)=O)=CC=CC=C1 ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- CYDMQBQPVICBEU-UHFFFAOYSA-N chlorotetracycline Natural products C1=CC(Cl)=C2C(O)(C)C3CC4C(N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)C4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O CYDMQBQPVICBEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004475 chlortetracycline Drugs 0.000 description 2
- 235000019365 chlortetracycline Nutrition 0.000 description 2
- CYDMQBQPVICBEU-XRNKAMNCSA-N chlortetracycline Chemical compound C1=CC(Cl)=C2[C@](O)(C)[C@H]3C[C@H]4[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@@]4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O CYDMQBQPVICBEU-XRNKAMNCSA-N 0.000 description 2
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 description 2
- 229960002626 clarithromycin Drugs 0.000 description 2
- AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N clarithromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@](C)([C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)OC)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N 0.000 description 2
- 229960002227 clindamycin Drugs 0.000 description 2
- KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N clindamycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@H](C)Cl)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- AVAACINZEOAHHE-VFZPANTDSA-N doripenem Chemical compound C=1([C@H](C)[C@@H]2[C@H](C(N2C=1C(O)=O)=O)[C@H](O)C)S[C@@H]1CN[C@H](CNS(N)(=O)=O)C1 AVAACINZEOAHHE-VFZPANTDSA-N 0.000 description 2
- 229960000895 doripenem Drugs 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 229960000740 enrofloxacin Drugs 0.000 description 2
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 229960000308 fosfomycin Drugs 0.000 description 2
- YMDXZJFXQJVXBF-STHAYSLISA-N fosfomycin Chemical compound C[C@@H]1O[C@@H]1P(O)(O)=O YMDXZJFXQJVXBF-STHAYSLISA-N 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 229960004675 fusidic acid Drugs 0.000 description 2
- IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-N fusidic acid Chemical compound O[C@@H]([C@@H]12)C[C@H]3\C(=C(/CCC=C(C)C)C(O)=O)[C@@H](OC(C)=O)C[C@]3(C)[C@@]2(C)CC[C@@H]2[C@]1(C)CC[C@@H](O)[C@H]2C IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-N 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 244000144980 herd Species 0.000 description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 229960003376 levofloxacin Drugs 0.000 description 2
- OJMMVQQUTAEWLP-KIDUDLJLSA-N lincomycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 OJMMVQQUTAEWLP-KIDUDLJLSA-N 0.000 description 2
- 229960005287 lincomycin Drugs 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 206010025226 lymphangitis Diseases 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 230000003458 metachromatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 2
- 229960001180 norfloxacin Drugs 0.000 description 2
- OGJPXUAPXNRGGI-UHFFFAOYSA-N norfloxacin Chemical compound C1=C2N(CC)C=C(C(O)=O)C(=O)C2=CC(F)=C1N1CCNCC1 OGJPXUAPXNRGGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001699 ofloxacin Drugs 0.000 description 2
- 235000019367 oleandomycin Nutrition 0.000 description 2
- 229960002351 oleandomycin Drugs 0.000 description 2
- RZPAKFUAFGMUPI-KGIGTXTPSA-N oleandomycin Chemical compound O1[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@H](C)[C@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@]2(OC2)C[C@H](C)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C RZPAKFUAFGMUPI-KGIGTXTPSA-N 0.000 description 2
- 229960000625 oxytetracycline Drugs 0.000 description 2
- 235000019366 oxytetracycline Nutrition 0.000 description 2
- IWVCMVBTMGNXQD-PXOLEDIWSA-N oxytetracycline Chemical compound C1=CC=C2[C@](O)(C)[C@H]3[C@H](O)[C@H]4[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@@]4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O IWVCMVBTMGNXQD-PXOLEDIWSA-N 0.000 description 2
- LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N p-Hydroxyampicillin Natural products O=C1N2C(C(O)=O)C(C)(C)SC2C1NC(=O)C(N)C1=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004236 pefloxacin Drugs 0.000 description 2
- FHFYDNQZQSQIAI-UHFFFAOYSA-N pefloxacin Chemical compound C1=C2N(CC)C=C(C(O)=O)C(=O)C2=CC(F)=C1N1CCN(C)CC1 FHFYDNQZQSQIAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019371 penicillin G benzathine Nutrition 0.000 description 2
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 229960002292 piperacillin Drugs 0.000 description 2
- IVBHGBMCVLDMKU-GXNBUGAJSA-N piperacillin Chemical compound O=C1C(=O)N(CC)CCN1C(=O)N[C@H](C=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C(O)=O)C(C)(C)S[C@@H]21 IVBHGBMCVLDMKU-GXNBUGAJSA-N 0.000 description 2
- 101150066372 pld gene Proteins 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920000024 polymyxin B Polymers 0.000 description 2
- 229960005266 polymyxin b Drugs 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 230000009862 primary prevention Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N rifampicin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 description 2
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 2
- 230000009863 secondary prevention Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 2
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 2
- 235000019372 spiramycin Nutrition 0.000 description 2
- 229960001294 spiramycin Drugs 0.000 description 2
- 229930191512 spiramycin Natural products 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- SEEPANYCNGTZFQ-UHFFFAOYSA-N sulfadiazine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)NC1=NC=CC=N1 SEEPANYCNGTZFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004306 sulfadiazine Drugs 0.000 description 2
- 229960000654 sulfafurazole Drugs 0.000 description 2
- IWVCMVBTMGNXQD-UHFFFAOYSA-N terramycin dehydrate Natural products C1=CC=C2C(O)(C)C3C(O)C4C(N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C(=O)C4(O)C(O)=C3C(=O)C2=C1O IWVCMVBTMGNXQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 235000019375 tylosin Nutrition 0.000 description 2
- 229960004059 tylosin Drugs 0.000 description 2
- WBPYTXDJUQJLPQ-VMXQISHHSA-N tylosin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)O[C@H]([C@@H]([C@H]1N(C)C)O)O[C@@H]1[C@@H](C)[C@H](O)CC(=O)O[C@@H]([C@H](/C=C(\C)/C=C/C(=O)[C@H](C)C[C@@H]1CC=O)CO[C@H]1[C@@H]([C@H](OC)[C@H](O)[C@@H](C)O1)OC)CC)[C@H]1C[C@@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)O1 WBPYTXDJUQJLPQ-VMXQISHHSA-N 0.000 description 2
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 2
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 description 2
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009278 visceral effect Effects 0.000 description 2
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N Acrylic acid Chemical compound OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 208000035484 Cellulite Diseases 0.000 description 1
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 1
- 102000012286 Chitinases Human genes 0.000 description 1
- 108010022172 Chitinases Proteins 0.000 description 1
- WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N Cichoriin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)c1c(O)cc2c(OC(=O)C=C2)c1 WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 241000606562 Gallibacterium anatis Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000282838 Lama Species 0.000 description 1
- 206010050167 Lymph node abscess Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N N-benzoylglycine Chemical compound OC(=O)CNC(=O)C1=CC=CC=C1 QIAFMBKCNZACKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 206010049752 Peau d'orange Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 239000006159 Sabouraud's agar Substances 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 241001416177 Vicugna pacos Species 0.000 description 1
- 208000035472 Zoonoses Diseases 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-VPENINKCSA-N aldehydo-D-xylose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-VPENINKCSA-N 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000004500 asepsis Methods 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 229960001212 bacterial vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 208000030303 breathing problems Diseases 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 244000144987 brood Species 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229960001631 carbomer Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 108010079058 casein hydrolysate Proteins 0.000 description 1
- 230000036232 cellulite Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000007382 columbia agar Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000006619 dextran medium Substances 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229960001188 diphtheria antitoxin Drugs 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940093496 esculin Drugs 0.000 description 1
- XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N esculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 1
- AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N esculin Natural products OC1OC(COc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O)C(O)C(O)C1O AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 235000020680 filtered tap water Nutrition 0.000 description 1
- 244000144992 flock Species 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000011331 genomic analysis Methods 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 230000000899 immune system response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000000677 immunologic agent Substances 0.000 description 1
- 229940124541 immunological agent Drugs 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000006402 liver broth Substances 0.000 description 1
- 201000003453 lung abscess Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 208000004396 mastitis Diseases 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 201000005737 orchitis Diseases 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 238000011886 postmortem examination Methods 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 208000037920 primary disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000010349 pulsation Effects 0.000 description 1
- 238000003906 pulsed field gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 230000032537 response to toxin Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012770 revaccination Methods 0.000 description 1
- 239000012449 sabouraud dextrose agar Substances 0.000 description 1
- 230000001523 saccharolytic effect Effects 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 1
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 1
- 208000037921 secondary disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000001551 toxigenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
- 206010048282 zoonosis Diseases 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, иммунологии и биотехнологии, в частности к штамму бактерий Corynebacterium pseudotuberculosis B-1422, депонированному во Всероссийской государственной коллекции патогенных и вакцинных штаммов микроорганизмов-возбудителей инфекционных болезней животных (Федеральный научный центр – Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской Академии Наук) под номером B-1422 и предназначенному для получения моно- или поливалентной иммуногенной композиции для профилактики казеозного лимфаденита мелкого рогатого скота. Также раскрыта иммуногенная композиция для профилактики казеозного лимфаденита мелкого рогатого скота и способ профилактики казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) у субъекта. Изобретение обеспечивает производство высокоэффективных иммунобиологических средств, в частности моно- или поливалентных иммуногенных композиций для профилактики казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) мелкого рогатого скота. 4 н. и 6 з.п. ф-лы, 3 табл., 14 пр.
Description
Область техники
Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, иммунологии и биотехнологии и может быть использовано при производстве и контроле инактивированных иммунобиологических средств в виде моно- или поливалентных препаратов, предназначенных для профилактики инфекции мелкого рогатого скота, вызванной Corynebacterium pseudotuberculosis.
Уровень техники
Казеозный лимфаденит или псевдотуберкулез (CLA) – хроническое, высококонтагиозное, зооантропонозное заболевание бактериальной этиологии. Характеризуется образованием абсцессов во внутренних органах и лимфатических узлах, как поверхностных, так и внутренних [Paule, B.J.A., Meyer, R., Mouracosta, L.F., Bahia, R.C., Carminati, R., Regis, L.F., Vale, V.L.C., Freire, S.M., Nascimento, L., Schaer, R., Azevedo, V., 2004. Three phase partitioning as an efficient method for extraction concentration of immunoreactive excreted secreted proteins of Corynebacterium pseudotuberculosis. Protein Expr. Purif. 34, 311–316]. При инфицировании животные теряют живую массу, снижается плодовитость и продуктивность, что приносит значительный экономический ущерб [Al-Gaabary M. H., Osman S. A., Oreiby A. F. Caseous lymphadenitis in sheep and goats: Clinical, epidemiological and preventive studies //Small Ruminant Research. – 2009. – Т. 87. – №. 1-3. – С. 116-121].
Заболевание поражает млекопитающих, в большей степени овец и коз. Также в уровне техники описаны случаи возникновения болезни у крупного рогатого скота, лошадей, буйволов, верблюдов, оленей, лам, альпак. Кроме того, известно, что заболеванию также подвержены люди [Bartolomé J, Roca MJ, Marcote E, Moreno R. Adenitis por Corynebacterium pseudotuberculosis en un pastor [Corynebacterium pseudotuberculosis adenitis in a shepherd]. Med Clin (Barc). 1995 May 13;104(18):699-701. Spanish. PMID: 7769881].
Возбудителем казеозного лимфаденита является Corynebacterium pseudotuberculosis. Это грамположительная плеоморфная палочка, форма которой варьируется от коккоподобной до нитевидной. Размер клеток небольшой – 0,5-0,6 х 1,0-3,0 мкм. Спор и капсул не образует, является факультативным анаэробом.
Существует два биовара: биовар Ovis ассоциирован главным образом с овцами и козами, и биовар Equi, который чаще всего поражает лошадей, вызывая язвенный лимфангит дистальных отделов конечностей, вентральные абсцессы грудной клетки и брюшной полости [Biberstein EL, Knight HD, Jang S. [1971] Two biotypes of Corynebacterium pseudotuberculosis. Vet Rec 89: 691–692; Connor KM., Quire M, Baird G et al. [2000] Characterization of United Kingdom isolates of Corynebacterium pseudotuberculosis using pulsed-field gel electrophoresis. J Clin Microbiol 38: 2633–2637].
Для лечения единичных случаев возможно дренирование или удаление пораженного лимфатического узла, при этом, животное должно находиться на карантине на время лечения. Однако процедура может оказаться неэффективной, поскольку есть вероятность инфицирования внутренних органов или лимфоузлов, к которым доступ будет ограничен. Несмотря на высокую чувствительность возбудителя к антимикробным препаратам, использование антибактериальной терапии также имеет низкую эффективность, что связано с внутриклеточным расположением бактерий в организме. В дополнении к низкой эффективности, применение антибиотиков окажется экономически неоправданным, учитывая характерное для CLA массовое поражение животных в стаде [Baird, G.J., Fontaine, M.C., 2007. Corynebacterium pseudotuberculosis and its role in ovine caseous lymphadenitis. J. Comp. Pathol. 137, 179–210]. Более того, указанные выше подходы не могут принципиально предотвратить и устранить заражение возбудителем.
Ключевым моментом в борьбе с инфекцией является вакцинопрофилактика. Для этого можно использовать различные виды вакцин, которые различаются своей эффективностью. По ряду исследований, живые вакцины, созданные на основе аттенуированных штаммов, оказались малоэффективны при применении их овцам из-за неспособности стимулировать специфические лимфоциты, секретирующие IFN-γ, и слабой индукции IgG [Hodgson AL, Tachedjian M, Corner LA, et al. Protection of sheep against caseous lymphadenitis by use of a single oral dose of live recombinant Corynebacterium pseudotuberculosis. Infect Immun 1994; 62:5275–80; Piontkowski MD, Shivvers DW. Evaluation of a commercially available vaccine against Corynebacterium pseudotuberculosis for use in sheep. J Am Vet Med Assoc 1998; 212:1765–8; Fontaine MC, Baird G, Connor KM, et al. Vaccination confers significant protection of sheep against infection with a virulent United Kingdom strain of Corynebacterium pseudotuberculosis. Vaccine 2006; 24:5986–96]. Таким образом, живые вакцины не имели особого успеха и широкого распространения.
Более значительные результаты имели инактивированные бактериальные вакцины. Исследование, проведенное P.L. Menzies et al. в полевых условиях, показало высокую эффективность от применения цельноклеточной вакцины – у коз и овец наблюдалась значительная защита от развития абсцессов легких, уровень заболеваемости в опытной группе был достоверно ниже, а уровень специфических антител – выше. Хотя вакцина и не может обеспечить абсолютную защиту от заражения, она способствует значительному снижению смертности инфицированных животных [Menzies PI, Muckle CA, Brogden KA, et al. A field trial to evaluate a whole cell vaccine for the prevention of caseous lymphadenitis in sheep and goat flocks. Can J Vet Res 1991; 55:362–6; Eggleton DW, Middleton HD, Doidge CV, et al. Immunisation against ovine caseous lymphadenitis: comparison of Corynebacterium pseudotuberculosis vaccines with and without bacterial cells. Aust Vet J 1991; 68:317–9].
Ввиду развития и распространения резистентности бактерий к антибиотикам и дезинфицирующим средствам, а также отсутствия доступных иммунобиологических средств, борьба с псевдотуберкулезом мелкого рогатого скота часто малоэффективна. Хороший эффект возможно получить при использовании средств специфической профилактики инфекций. На решение этой задачи направленно данное изобретение.
В настоящее время известен ряд штаммов Corynebacterium pseudotuberculosis, предназначенных для получения иммуногенных композиций и профилактики казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) мелкого рогатого скота.
Штаммы C. pseudotuberculosis ВГНКИ N 74 R – ДЕП, ВГНКИ N 146S ДЕП, ВГНКИ N 70 R – ДЕП, ВГНКИ N 209R-ДЕП предложены в качестве референтных и для изготовления диагностических препаратов при казеозном лимфадените овец. Аллерген, приготовленный из представленных штаммов, способен при введении больному животному вызывать воспаление в месте инъекции. У здоровых животных реакция не возникает, таким образом, при использовании заявленных штаммов в составе диагностикумов существует возможность выявлять инфицированных особей в стаде [RU2051964; RU2051965; RU2051966; RU2053295].
Представленные штаммы были заявлены как антигены, входящие в состав диагностикумов, в виду чего их нельзя использовать при создании иммуногенных композиций.
Предложен штамм C. pseudotuberculosis 231 с удаленным геном, кодирующим фосфолипазу (PLD), являющуюся одним из факторов патогенности. В результате блокировки этого гена, вирулентность бактерий заметно снизилась, что позволяет рассматривать его как потенциальный компонент живых вакцин и эффективное транспортное средство для интеграции рекомбинантных антигенов. Созданный таким образом штамм демонстрирует способность активировать иммунный ответ, в то время как клинические проявления заболевания остаются невыраженными. Важно отметить, что удаление гена PLD ограничивает бактериям их потенциал для долгосрочного пребывания в организме, что в свою очередь подтверждает роль фосфолипазы в вирулентности и реакции иммунной системы. Штамм C. pseudotuberculosis 231 представляет интерес как потенциальный источник для разработки новых живых вакцин. Важно отметить, что, хотя иммунный ответ активируется в ответ на бактериальную клетку, он не обнаруживается в ответ на токсины, являющиеся продуктом деятельности гена PLD [Hodgson A. L. et al. Rational attenuation of Corynebacterium pseudotuberculosis: potential cheesy gland vaccine and live delivery vehicle //Infection and immunity. – 1992. – Т. 60. – №. 7. – С. 2900-2905.].
Таким образом, сохраняется необходимость в разработке и создании новых иммуногенных композиций, направленных на специфическую профилактику казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) мелкого рогатого скота.
Раскрытие изобретения
Задачей, на решение которой направлено данное изобретение, является получение нового штамма бактерии Corynebacterium pseudotuberculosis, отвечающего требованиям, предъявляемым к производственным штаммам (по культуральным, ростовым, морфологическим, тинкториальным, биологическим, антигенным, иммуногенным и т. д. свойствам) и пригодного для конструирования и производства высокоэффективных иммунобиологических средств, в частности моно- или поливалентных иммуногенных композиций, направленных на специфическую профилактику казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) мелкого рогатого скота.
Поставленная задача решается путем получения штамма Corynebacterium pseudotuberculosis B-1422, депонированного во Всероссийской государственной коллекции патогенных и вакцинных штаммов микроорганизмов-возбудителей инфекционных болезней животных (Федеральный научный центр – Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской Академии Наук - ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН) под номером B-1422 и предназначенного для получения моно- или поливалентной иммуногенной композиции для профилактики казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) мелкого рогатого скота.
Кроме того, настоящее изобретение включает применение штамма Corynebacterium pseudotuberculosis, депонированного во Всероссийской государственной коллекции патогенных и вакцинных штаммов микроорганизмов-возбудителей инфекционных болезней животных ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН под номером B-1422, для получения иммунобиологического средства, в частности моно- или поливалентной иммуногенной композиции для профилактики казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) мелкого рогатого скота.
Предметом настоящего изобретения также является иммуногенная композиция для профилактики казеозного лимфаденита мелкого рогатого скота, включающая профилактически эффективное количество инактивированного протективного антигена штамма по изобретению, адъювант и, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
В частных вариантах воплощения изобретения вспомогательное вещество представляет собой растворитель, наполнитель. В некоторых вариантах воплощения изобретения растворитель выбирается независимо и представляет собой стерильный физиологический раствор, стерильную воду для инъекций, стерильный фосфатно-буферный раствор и т.д. В некоторых частных вариантах воплощения изобретения вспомогательное вещество представляет собой щелочь, мертиолят натрия.
В частных вариантах воплощения изобретения адъювант выбирается независимо и представляет собой гидроксид алюминия, ПЭГ-6000, карбапол, масляный адъювант. Более конкретно масляный адъювант представляет собой адъювант марки MONTANIDE ISA 206. В некоторых частных вариантах карбапол представляет собой карбапол марки Carbopol 971Р.
Кроме того, предметом настоящего изобретения также является способ профилактики казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) у субъекта, включающий введение композиции по изобретению субъекту.
В частных вариантах воплощения изобретения субъект представляет собой мелкий рогатый скот. Более конкретно мелкий рогатый скот представляет собой овец, коз.
Настоящее изобретение также включает способ получения иммунобиологических средств, в частности моно- или поливалентных иммуногенных композиций для профилактики казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) мелкого рогатого скота, который осуществляют посредством штамма по изобретению.
Настоящее изобретение также включает применение штамма по изобретению для оценки эффективности иммуногенных композиций для профилактики казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) мелкого рогатого скота.
В результате осуществления изобретения достигаются следующие технические результаты:
- получен новый штамм Corynebacterium pseudotuberculosis B-1422, депонированный во Всероссийской государственной коллекции патогенных и вакцинных штаммов микроорганизмов-возбудителей инфекционных болезней животных ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН под номером B-1422 и предназначенный для получения моно- или поливалентной иммуногенной композиции для профилактики казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) мелкого рогатого скота;
- штамм по изобретению отвечает требованиям, предъявляемым к производственным штаммам (по культуральным, ростовым, морфологическим, тинкториальным, биологическим, антигенным, иммуногенным и т. д. свойствам) и пригоден для конструирования и производства высокоэффективных иммунобиологических средств, в частности моно- или поливалентных иммуногенных композиций для профилактики казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) мелкого рогатого скота;
- использование штамма по изобретению при производстве иммунобиологических средств позволит повысить уровень эпизоотического благополучия по казеозному лимфадениту (псевдотуберкулезу) мелкого рогатого скота;
- получена эффективная иммуногенная композиция на основе штамма по изобретению, которая предназначена для профилактики казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) мелкого рогатого скота;
- разработан эффективный способ профилактики казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) у субъекта, включающий введение композиции по изобретению субъекту.
Изобретение также служит средством расширения арсенала моно- или поливалентных иммуногенных композиций, направленных на специфическую профилактику инфекционных болезней мелкого рогатого скота, обладает стабильностью, а также высокой антигенной, иммуногенной и протективной активностью.
Подробное раскрытие изобретения
Определение и термины
Для лучшего понимания настоящего изобретения ниже приведены некоторые термины, использованные в настоящем описании изобретения. Следующие определения применяются в данном документе, если иное не указано явно.
В настоящем описании и в последующей формуле изобретения, если контекстом не предусмотрено иное, слова «иметь», «включать» и «содержать» или их вариации, например такие как «имеет», «имеющий», «включает», «включающий», «содержит» или «содержащий», следует понимать, как включение указанного целого или группы целых, но не исключение любого другого целого или группы целых. Указанные термины не предназначены для того, чтобы их истолковывали как «состоит только из».
Термин «и/или» означает один, несколько или все перечисленные элементы.
Также здесь перечисление числовых диапазонов по конечным точкам включает все числа, входящие в этот диапазон.
Термин «антиген» обозначает любое вещество, которое организм субъекта рассматривает как чужеродное или потенциально опасное и против которого организм может индуцировать (запускать) иммунный ответ. Это могут быть компоненты инфекционного агента, такие как, например, фрагменты белков бактерии, а также инфекционные агенты, сохранившие, хотя бы частично, присущую им структуру.
Под штаммом Corynebacterium pseudotuberculosis B-1422 понимается как штамм Corynebacterium pseudotuberculosis, который депонирован во Всероссийской государственной коллекции патогенных и вакцинных штаммов микроорганизмов-возбудителей инфекционных болезней животных ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН под номером B-1422, так и полученный с использованием депонированного штамма в качестве исходного материала (например, мутант, вариант), и сохраняющий все свойства исходного штамма, т.е. обладающий всеми определяющими штамм Corynebacterium pseudotuberculosis B-1422 (идентифицирующими) характеристиками. В том, числе, по меньшей мере, пригодный для получения моно- или поливалентных иммуногенных композиций, направленных на специфическую профилактику казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) мелкого рогатого скота.
Используемый здесь термин «мутант» или «вариант» по отношению к штамму Corynebacterium pseudotuberculosis B-1422 означает модификацию родительского штамма, в котором целевая биологическая активность является подобной активности, выражаемой родительским штаммом. Мутанты или варианты могут возникать в природе без вмешательства человека. Они могут быть получены также путем обработки одним или множеством способов и химических веществ (составов), известных специалистам в данной отрасли или же гамма-, рентгеновским либо ультрафиолетовым излучением, или любыми другими средствами, хорошо известными специалистам в данной отрасли.
Термин «профилактика», «предотвращение», «превентивная терапия» охватывает устранение факторов риска, а также профилактическое лечение субклинических стадий заболевания у субъекта, направленное на уменьшение вероятности возникновения клинических стадий заболевания. Субъекты для профилактической терапии отбираются на основе факторов, которые, на основании известных данных, влекут увеличение риска возникновения клинических стадий заболевания. К профилактической терапии относится а) первичная профилактика и б) вторичная профилактика. Первичная профилактика определяется как профилактическое лечение у субъектов, клиническая стадия заболевания у которых ещё не наступила. Вторичная профилактика — это предотвращение повторного наступления того же или близкого клинического состояния заболевания.
Термин «уменьшение риска» охватывает терапию, которая снижает частоту возникновения клинической стадии заболевания. Примерами уменьшения риска заболевания является первичная и вторичная профилактика заболевания.
Под «профилактически эффективным количеством» подразумевается такое количество антигена штамма, вводимого или доставляемого субъекту, при котором у субъекта с наибольшей вероятностью проявится желаемая реакция на профилактику. Точное требуемое количество может меняться от субъекта к субъекту в зависимости от вида субъекта, способа введения препарата и т.п.
Термин «инактивированный протективный антиген штамма» в данном документе означает «нежизнеспособные» антигены микроорганизма, при введении которых лабораторным или целевым видам животных, способствуют образованию напряженного иммунного ответа, достаточного для обеспечения профилактического эффекта.
Термин «субъект» охватывает все виды мелкого рогатого скота, предпочтительно овец и коз, которые используют штамм и композицию по изобретению путем введения субъекту другим лицом для профилактики заболевания или медицинского состояния.
Термин «вспомогательное вещество» при использовании в настоящем описании относится к веществам, которые не нарушают биологической активности и свойств бактерий и являются приемлемыми для использования в ветеринарии (безопасность для применения в ветеринарии). Частные варианты вспомогательных веществ включают носители или разбавители (растворители), например, воду.
Термин «LD 50 » - средняя доза вещества, вызывающая гибель половины членов испытуемой группы.
Если не определено отдельно, технические и научные термины в данной заявке имеют стандартные значения, общепринятые в научной и технической литературе.
Осуществление изобретения
Приведенные ниже примеры являются иллюстративными и тем самым не ограничивают рамки настоящего изобретения.
Пример № 1. Штамм микроорганизма Corynebacterium pseudotuberculosis – B-1422.
1. Номер штамма в «Всероссийской государственной коллекции патогенных и вакцинных штаммов микроорганизмов-возбудителей инфекционных болезней животных»: B-1422.
2. Дата депонирования: 13.06.2023 г.
3. Вид микроорганизма: Corynebacterium pseudotuberculosis.
4. Основание для депонирования: для производства и контроля иммунологических лекарственных средств для ветеринарного применения.
5. Патогенность: в соответствии с классификацией микроорганизмов – санитарных правил и норм СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней» бактерия вида Corynebacterium pseudotuberculosis не относится ни к одной из четырех групп патогенности.
6. Дата, источник и место выделения: из абсцесса лимфатического узла овцы в 2022 году. Республика Башкортостан.
7. Где идентифицирована культура: лаборатория диагностики и контроля антибиотикорезистентности возбудителей наиболее клинически значимых инфекционных болезней животных ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН.
8. Методы идентификации: штамм был идентифицирован на основании изучения культуральных, морфологических, ферментативных токсигенных свойств, а также с помощью масспектрального анализа; молекулярно-генетических свойств на наличие гена tox дифтерийного токсина.
9. Морфологические признаки: в мазках, окрашенных по Граму, обнаруживаются неподвижные неспорообразующие грамположительные мелкие палочки неправильной формы 0,5-0,6 на 1,0-3,0 мкм, неравномерно окрашенные, с булавовидными формами и метахроматическими гранулами.
10. Культуральные особенности: на мясопептонном агаре (МПА), кровяном агаре микроорганизм формирует колонии белые, непрозрачные, выпуклые, с матовой поверхностью размером 1,0 мм с узкой зоной гемолиза вокруг колонии спустя 24-48 часов культивирования при температуре +37 °С; на кровяном теллуритовом агаре – формирует серо-черные, непрозрачные, выпуклые, блестящие колонии с шероховатой поверхностью и ровными краями размером 1,0-2,0 мм через 48 часов культивирования при температуре +37 °С. Аэробы.
11. Биохимические свойства: каталаза +, хитиназа +, цистиназа –, уреаза +, фруктоза +, галактоза +, глюкоза +, гликоген +, мальтоза +, манноза +, казеин –, эскулин –, гиппурат –, индол –, оксидаза –, лактоза –, маннит –, рафиноза –, рамноза –, редукция нитратов –, салицин –, сахароза –, крахмал –, трегалоза –, ксилоза –.
12. Серологические свойства: не определялись.
13. Продукция токсинов: токсины не продуцируют; в реакции преципитации в агаре с дифтерийным антитоксином (проба на токсигенность) продукции дифтерийного токсина нет.
14. Продукция антигенов, ферментов: не определялась.
15. Патогенность для лабораторных животных: при заражении мышей массой 18-20 грамм внутрибрюшинным способом в дозе 1 мл3/гол. с концентрацией 3 млрд м.кл. смерть животных наступает в течение 3 дней.
16. Устойчивость к антибактериальным препаратам: азитромицин – 0 мм (15 мкг), азтреонам - 0 мм (30 мкг), амоксиклав - 28 мм (30 мкг), амоксициллин - 26 (25 мкг), ампициллин – 16 мм (10 мкг), бацитрацин - 30 (10 U), бензилпенициллин – 10 мм (10 U), ванкомицин – 0 мм (30 мкг), гентамицин – 13 мм (10 мкг), дорипенем – 0 мм (10мкг), канамицин – 0 мм (30 мкг), карбенициллин – 36 мм (100 мкг), кларитромицин – 30 мм (15 мкг), клиндамицин – 24 мм (2 мкг), левофлоксацин – 24 мм (5 мкг), линкомицин – 23 мм (10 мкг), норфлоксацин – 0 мм (10 мкг), окситетрациклин – 16 мм (30 мкг), олеандомицин - 14 мм (15 мкг), офлоксацин – 26 мм (5 мкг), пефлоксацин – 16 мм (5 мкг), пиперациллин - 0 мм (100 мкг), полимиксин–В – 14 мм (50 U), пристиномицин – 22 мм (15 мкг), рифампицин – 18 мм (15 мкг), спектиномицин – 14 мм (100 мкг), спирамицин - 22 мм (30 мкг), стрептомицин – 14 мм (25 мкг), сульфадиазин – 13 мм (100 мкг), сульфафуразол - 16 мм (300 мкг), тетрациклин – 18 мм (30 мкг), тилозин – 20 мм (15 мкг), фосфомицин – 0 мм (50 мкг), фузидиевая кислота – 20 мм (30 мкг), хлортетрациклин - 20 мм (30 мкг), цефалотин - 0 мм (30 мкг), цефазолин - 0 мм (30 мкг), цефаклор – 22 мм (30 мкг), цефалексин – 26 мм (30 мкг), цефепим – 18 мм (30 мкг), цефотаксим – 0 мм (30 мкг), цефоперазон – 20 мм (75 мкг), цефпиром – 20 мм (30 мкг), цефиксим – 0 мм (5 мкг), цефтриаксон – 28 мм (30 мкг), ципрофлоксацин – 30 мм (30 мкг), энрофлоксацин – 30 мм (10 мкг), эритромицин – 14 мм (15 мкг).
17. Отношение к гомо- и гетерологичным фагам (профаги): не определялось.
18. Генетические характеристики: не выявлен фрагмент гена tox методом ПЦР со специфическими праймерами.
19. Условия культивирования: Corynebacterium pseudotuberculosis B-1422 растет на мясопептонном бульоне (МПБ), сердечно-мозговом бульоне, триптон-соевом бульоне, а также на агаризированных питательных средах: кровяном, кровяном теллуритовом агаре или сывороточно теллуритовом агаре. Оптимум рН 7,0-7,4, температуры 37 °С.
20. Условия хранения: штамм хранят в лиофилизированном виде в ампулах. Объём лиофилизата составляет 1 см3. Температура хранения +4…+8 °С. Срок хранения 5 лет; в 50 % глицерине при температуре хранения - 30-34 °С срок хранения 5 лет.
Пример № 2. Получение бульонной культуры Corynebacterium pseudotuberculosis
Производственные штаммы бактерий, используемые для изготовления иммунобиологических и диагностических средств, чаще всего поддерживаются в лиофилизированном виде, что позволяет гарантировать сохранность и стабильность свойств данных культур. Такой подход позволяет стандартизировать качество производимой продукции, а также гарантирует возможность длительного хранения штаммов без пассажа. Кроме того, лиофилизация используется для гарантийного хранения не только производственных штаммов, но и эпизоотических и коллекционных культур.
Для лиофилизации штамма Corynebacterium pseudotuberculosis предварительно получали свежую бульонную культуру. С этой целью с поверхности агара в чашке Петри, на которых поддерживалась живая нативная культура C. pseudotuberculosis, проводился отсев отдельных колоний в пробирки с сердечно-мозговым бульоном (возможно использование триптон-соевого бульона, Эугоник бульона, бульона Хоттингера и т.д.). Засеянные пробирки с бульоном культивировались при 37–38 °С в течение 24-48 часов. По окончании культивирования, проводился контроль бульонной культуры на типичность роста, морфологические и тинкториальные свойства клеток бактерии, а также отсутствие роста посторонней микрофлоры. Спустя 48-72 часов бульонного культивирования концентрация бактериальных клеток штамма достигает 0,5-0,8 млрд. м.к./см3.
Пример № 3. Приготовление стабилизатора (защитной среды) для лиофилизации штамма Corynebacterium pseudotuberculosis
В качестве защитной среды для штамма могут быть использованы любые стабилизирующие среды и добавки, например, обезжиренное молоко (обрат), стерильная сыворотка крови животных, сахаро-желатиновая среда, декстрановая среда и т.д. по любой известной технологии, в частности:
Приготовление защитной декстрановой среды высушивания.
Состав: гидролизат казеина – 2,0%, декстран – 5,0%, сорбит – 5,0%, сахароза – 3,0%, желатин – 3,0%, К2НРО4 – 0,125%, КН2РО4 – 0,051%, вода бидистиллированная - до 100%.
К 2/3 конечного объема бидистиллированной воды добавляют компоненты в следующем порядке: К2НРО4, КН2РО4, желатин, декстран, сорбит, сахароза, гидролизат казеина. Каждый следующий компонент добавляют только после полного растворения предыдущего.
После растворения всех компонентов доводят объем до необходимого значения бидистиллированной водой, перемешивают, доводят рН до 7,3 при помощи 2Н КОН. Готовый раствор переливают в контейнеры для автоклавирования, автоклавируют среду в течение 30 мин при 121-125 °С. Хранят готовую защитную среду при температуре 4-8 °С.
Пример № 4. Смешивание штамма Corynebacterium pseudotuberculosis со стабилизирующей средой перед лиофилизацией
Для лиофилизации штамма Corynebacterium pseudotuberculosis в бульонную культуру вносят стабилизатор (например, декстриновый стабилизатор) до 30 % от объема, после чего полученную суспензию тщательно перемешивают в течение 3 минут. Готовую суспензию фасуют в ампулы и/или флаконы с соблюдением условий асептики и подвергают замораживанию для последующей лиофилизации.
Пример №5. Лиофилизация и контроль производственного штамма Corynebacterium pseudotuberculosis
Лиофилизацию, а также выходной контроль (контроль внешнего вида, цвета, наличия посторонних примесей; определение наличия вакуума; определение растворимости; определение массовой доли влаги; определение контаминации) проводят любыми известными способами, например описанном в RU2787392 штамм бактерий Gallibacterium anatis, предназначенный для получения моно- и поливалентных иммуногенных композиций, направленных на специфическую профилактику галлибактериоза сельскохозяйственных птиц].
Пример №6. Определение культуральных и морфологических свойств, а также типичности роста C. pseudotuberculosis на питательных средах
Для подтверждения культуральных и морфологических свойств штамма после лиофилизации, проводят отбор ампул от каждой расплодки. Для этого в ампулу вносят 1 мл стерильного физиологического раствора для восстановления первичного объема, после чего полученную суспензию переносят в 9 мл стерильного физиологического раствора. Затем проводят посев методом Дригальского на кровяной агар (основа колумбийский, триптон-соевый агар, сердечно-мозговой агар). Культивирование посевов проводится в течение 24-48 часов при 37 °С. На 24 час культивирования на кровяном агаре штамм C. pseudotuberculosis формирует белые, непрозрачные, выпуклые колонии с матовой поверхностью размером 1,0 мм с узкой зоной гемолиза вокруг. В мазках, окрашенных по Граму, выявляются неподвижные неспорообразующие грамположительные мелкие палочки неправильной формы, неравномерно окрашенные, с булавовидными формами и метахроматическими гранулами.
Оценка типичности роста коринебактерии на бульонных средах проводится путем пересева отдельных суточных колоний с кровяного агара в пробирки с сердечно-мозговым или триптон-соевым бульоном. Культивирование посевов проводится в течение 48 часов при 37 °С. В результате культивирования в пробирках образовалась равномерная взвесь бактериальных клеток. Средняя концентрация суспензии микробных клеток штамма C. pseudotuberculosis B-1422 составляет 0,5-0,8*109 м.к./ см3.
Результаты исследования, отраженные в примере №1, пунктах 9 и 10.
Пример №7. Определение биохимических свойств штамма Corynebacterium pseudotuberculosis B-1422
Для изучения биохимических свойств культуры Corynebacterium pseudotuberculosis используются коммерческие тест системы с сопутствующими расходными материалами и электронной базой для интерпретации полученного результата. Помимо коммерческих биохимических тест-систем могут быть использованы углеводы в дисках для определения сахаролитических свойств. Испытание проводится согласно инструкции производителя диагностикума.
В результате исследования были установлены свойства штамма, отраженные в примере №1, пункте 11.
Пример №8. Определение антибиотикограммы
Определение антибиотикочувствительности штамма проводили диско-диффузным методом (ДДМ) в соответствии с МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам».
В работе были использованы диски со следующими антибиотиками: азитромицин (15 мкг), азтреонам (30 мкг), амоксиклав (30 мкг), амоксициллин (25 мкг), ампициллин (10 мкг), бацитрацин (10 U), бензилпенициллин (10 U), ванкомицин (30 мкг), гентамицин (10 мкг), дорипенем (10мкг), канамицин (30 мкг), карбенициллин (100 мкг), кларитромицин мм (15 мкг), клиндамицин (2 мкг), левофлоксацин (5 мкг), линкомицин (10 мкг), норфлоксацин (10 мкг), окситетрациклин (30 мкг), олеандомицин (15 мкг), офлоксацин (5 мкг), пефлоксацин (5 мкг), пиперациллин (100 мкг), полимиксин–В (50 U), пристиномицин (15 мкг), рифампицин (15 мкг), спектиномицин (100 мкг), спирамицин (30 мкг), стрептомицин (25 мкг), сульфадиазин (100 мкг), сульфафуразол (300 мкг), тетрациклин (30 мкг), тилозин (15 мкг), фосфомицин (50 мкг), фузидиевая кислота (30 мкг), хлортетрациклин (30 мкг), цефалотин (30 мкг), цефазолин (30 мкг), цефаклор (30 мкг), цефалексин (30 мкг), цефепим (30 мкг), цефотаксим (30 мкг), цефоперазон (75 мкг), цефпиром (30 мкг), цефиксим (5 мкг), цефтриаксон (30 мкг), ципрофлоксацин (30 мкг), энрофлоксацин (10 мкг), эритромицин (15 мкг) («Himedia», Индия). Учёт результатов проводился спустя 18-24 часа термостатирования по диаметру зон задержки роста бактерий.
Результаты определения антибиотикограммы представлены в примере №1 пункт №16.
Пример №9. Определение биовара
Штаммы Corynebacterium pseudotuberculosis классифицируются по видовой предрасположенности к хозяину и способностью утилизировать нитраты на два биовара: ovis (серотип I, нитрат-отрицательный) вызывает лимфаденит у мелких жвачных животных, в основном овец и коз; equi (серотип II, нитрат-положительный) приводит к язвенному лимфангиту у лошадей [Bernardes JS, Eberle RJ, Vieira FRJ, Coronado MA. A comparative pan-genomic analysis of 53 C. pseudotuberculosis strains based on functional domains. J Biomol Struct Dyn. 2021 Nov;39(18):6974-6986. doi: 10.1080/07391102.2020.1805017. Epub 2020 Aug 11. PMID: 32779519.] и отечной кожной болезни (OSD) у буйволов [Barakat AA, Selim SA, Atef A, Saber MS, Nafie EK, El-Edeeby AA. Two serotypes of Corynebacterium pseudotuberculosis isolated from different animal species. Rev Sci Tech. 1984 Mar;3(1):151-163. doi: 10.20506/rst.3.1.147. PMID: 32987978; Moussa IM, Ali MS, Hessain AM, Kabli SA, Hemeg HA, Selim SA. Vaccination against Corynebacterium pseudotuberculosis infections controlling caseous lymphadenitis (CLA) and oedematousskin disease. Saudi J Biol Sci. 2016 Nov;23(6):718-723. doi: 10.1016/j.sjbs.2016.06.005. Epub 2016 Jun 17. PMID: 27872567; PMCID: PMC5109496].
Ввиду того, что штамм выделен от овец, а также не утилизирует нитраты (установлено в ходе изучения биохимических свойств), то штамм относится к биовару ovis (серотип I).
Пример №10. Определение патогенности штамма Corynebacterium pseudotuberculosis
Определение патогенности штамма проводили с использованием лабораторных мышей массой 18-20 гр. При проведении исследования лабораторные животные подбирались по принципу аналогов (стандартные параметры массы тела, возраст, состояние здоровья). Животных содержали в помещениях вивария. Параметры микроклимата соответствовали требованиям [СП 2.2.1.3218-14 "Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев)"]. Кормление осуществлялось специальными концентрированными комбикормами. Животные индивидуально маркировались. На карточке клетки указывались номер исследования, руководитель исследования, номер протокола биоэтической комиссии, номер клетки, номера животных и номер группы.
Лабораторные животные содержались в комнате содержания животных барьерного типа с автоматической сменой дневного и ночного периода (08:00-20:00 – «день», 20:00-08:00 – «ночь») и как минимум 12-кратной сменой воздушного объема комнаты в час.
За стандарты содержания животных приняты стандарты, определенные Директивой 2010/63/EU по защите животных, используемых в научных целях. В качестве приемлемых границ параметров микроклимата в комнатах содержания животных приняты границы, определенные руководством The Guide for Care and Use of Laboratory Animals (National Academy Press, Washington D.C., 2011).
Мыши, используемые в опыте, содержались в специализированных клетках М6 - Т4/1 (ООО «Профлаб», Россия). В качестве подстила для содержания мышей был использован коммерческий подстил, представляющий собой древесную стружку мягких нехвойных пород древесины (ООО «Лабораторкорм», Россия).
Пищевой рацион мышей состоял из гранулированного корма, а именно полноценный комбикорм для лабораторных животных (содержание мышей, крыс, хомяков) ПК 120-2_720. Изготовитель: АО «Гатчинский ККЗ» 188302, Ленинградская область. Гатчинский район, д. Малые Колпаны, ул. Западная д. 31.
Животные получали профильтрованную водопроводную воду в стандартных автоклавированных поилках (ООО «Профлаб», Россия).
Для проведения исследования животных (n=5) заражали внутрибрюшинным способом в дозе 1 мл3/гол. с концентрацией 3 млрд м.кл. В результате чего было установлено, что штамм вызывает гибель всех животных в течение 3 суток с момента инфицирования.
Пример №11. Определение вирулентности штамма Corynebacterium pseudotuberculosis
При определении вирулентности культуры коринебактерии, выраженной в значении показателя LD50, использовали белых мышей массой 16–18 гр. в количестве 24 голов. Для исследования готовили ряд десятикратных разведений бактериальной суспензии штамма Corynebacterium pseudotuberculosis на основе физиологического раствора, а именно ~1х109 м.к., ~1х108 м.к., ~1х107 м.к., ~1х106 м.к. Мышей заражали внутрибрюшинно по 1 см3, срок наблюдения составлял 10 суток. Параллельно, для точного определения дозы (концентрации живых клеток) возбудителя в материале, проводили раститровку и высев на чашки Петри с ростообеспечивающими средами (чашечный метод Коха). Статистическую обработку результатов осуществляли в программах BioStat 2009 («AnalystSoft, Inc.», США) и Microsoft Exсel. Расчет LD50 проводили посредством пробит-анализа. Результаты испытаний приведены в таблице №1.
Таблица №1. Результаты определения LD50 производственного штамма Corynebacterium pseudotuberculosis B-1422
Штамм | Инфицирующая доза, м.к. | Количество зараженных животных, гол. n=24 | Погибло, гол. | LD 50 м. к. |
B-1422 | 1,4*109 | 6 | 6 | 3,07*106 |
1,4*108 | 6 | 6 | ||
1,4*107 | 6 | 5 | ||
1,4*106 | 6 | 2 | ||
1,4*105 | 6 | 0 |
Согласно полученным данным, LD50 штамма составляет 3,07*106 м.к.
Сразу после гибели животных, проводили патологоанатомическое вскрытие трупов с последующим бактериологическим исследованием образцов внутренних органов. В ходе исследования из всех проб были выделены культуры заражающего штамма C. pseudotuberculosis. Полученные результаты свидетельствуют, что предлагаемый производственный штамм B-1422 является вирулентным и способен вызывать гибель лабораторных животных, что в дальнейшем будет использовано для контроля иммуногенной активности средств специфической профилактики казеозного лимфаденита.
Пример №12. Изготовление экспериментальной серии инактивированной вакцины против казеозного лимфаденита мелкого рогатого скота
Экспериментальная серия инактивированной вакцины против казеозного лимфаденита мелкого рогатого скота изготовлена на базе ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН, при условиях глубинного культивирования с использованием лабораторного ферментера Biostat®A (Sartorius Group, Германия). Для культивирования штамма коринебактерии использовали сердечно-мозговой бульон и колумбийский агар («HiMedia Laboratories Pvt Ltd», Индия) с добавлением 10% дефибринированной крови барана. Культивирование проводилось в течение 48 часов при температуре 37 °С. Полученную культуру проверяли по показателям: типичности культуральных, морфологических и тинкториальных свойств штамма, отсутствие посторонней микрофлоры, концентрация микробных клеток. Концентрация бактериальных клеток возбудителя 1,3 млрд. м.к./см3. Инактивировали культуру путём добавления 0,3 % формалина к общему объёму бактериальной суспензии. Продолжительность инактивации бактериальных антигенов составляла 3 суток при температуре 21±1 °С. Ввиду того, что бактериальная масса культуры C. pseudotuberculosis содержит плотные включения колоний, то бактериальную массу подвергали ультразвуковой гомогенизации с целью повышения однородности и стабильности бактериальной суспензии. Обработка антигена ультразвуком проводится при температуре 0-2 °С (во льду) в течение 15 минут при следующих условиях: амплитуда 100%, рабочая частота 20 кГц, мощность 70 Вт, пульсация 20%.
После инактивации и гомогенизации бактериальной суспензии были произведены несколько вариантов экспериментального препарата с использованием различных адъювантов и различных концентраций бактериальных клеток (таблица №2).
Таблица №2. Варианты вакцин с использованием протективных антигенов производственного штамма Corynebacterium pseudotuberculosis B-1422.
Конц-ция (м.к./см3) | Адъювант | |||
ГОА | ПЭГ-6000 | Carbopol 971Р | Montanide ISA 206 | |
1,5*109 | Вариант 1.1. | Вариант 2.1. | Вариант 3.1. | Вариант 4.1. |
3,0*109 | Вариант 1.2. | Вариант 2.2. | Вариант 3.2. | Вариант 4.2. |
4,5*109 | Вариант 1.3. | Вариант 2.3. | Вариант 3.3. | Вариант 4.3. |
Варианты 1.1., 1.2., 1.3. были получены с использованием гидроксида алюминия (ГОА) (ФКП «Щелковская биофабрика», Россия). Поскольку данный адъювант является хорошим осадителем, то предварительно полученная бактериальная культура не концентрировалась с использованием лабораторно/промышленного оборудования (центрифуги и/или сепаратора). Осаждение бактериальной массы проводили путем добавления к бактериальной культуре, полученной в ферментере, 3%-ного раствора ГОА в объеме 10%. После осаждения бактериальной массы и ГОА проводили декантирование надосадочной жидкости. Таким образом удается проводить 10-кратное концентрирование. Для доведения концентрации бактериальных клеток в 1 см3, могут быть использованы любые разбавители (стерильный физиологический раствор, стерильная вода для инъекций, стерильный фосфатно-буферный раствор и т.д.). Концентрацию водородных ионов полученных препаратов регулировали с использованием раствора щелочи до значения 7,2-7,6 ед. В качестве консерванта использовался мертиолят натрия (из расчета 1:10000 v/v).
Варианты 2.1., 2.2., 2.3. были получены с использованием полиэтиленгликоля (ПЭГ-6000, ООО «Норкем», Россия) — 10 % к объему вакцины. Поскольку ПЭГ не является хорошим осадителем, то ранее полученную в реакторе бактериальную суспензию концентрировали путем центрифугирования на установке MPW-380R в течение 1 ч при 3 тыс. оборотах при относительном центробежном ускорении RCF – 1861. Таким образом удаляли балластные вещества (остатки питательной среды), а протективный антиген использовали далее для составления серий вакцины. Для доведения концентрации бактериальных клеток в 1 см3, могут быть использованы любые разбавители (стерильный физиологический раствор, стерильная вода для инъекций, стерильный фосфатно-буферный раствор и т.д.). Концентрацию водородных ионов полученных препаратов регулировали с использованием раствора щелочи до значения 7,2-7,6 ед. В качестве консерванта использовался мертиолят натрия (из расчета 1:10000 v/v).
Варианты 3.1., 3.2., 3.3. были получены идентичным выше представленному способом, но вместо ПЭГ-6000 использовали стерильный 2 % гель карбомера (карбопола 971р) (Corel Pharma-Chem, Канада), приготовленный на фосфатно-солевом буфере в объеме 10%.
Варианты 4.1., 4.2., 4.3. были получены на масляном адъюванте Montanide ISA 206 (Seppic, Франция).
В подготовленный реактор-эмульгатор наливается расчетное количество масляного адъюванта марки MONTANIDE ISA 206 (50-70% к объему препарата), проводят процесс стерилизации при давлении 1,0 кг/см2, температуре 120 °С в течение 40 мин. Адъювант охлаждает до 37 °С, из реактора отбираются пробы для контроля стерильности в пробирки с питательными средами мясопептонный агар, мясопептонный бульон, мясопептонный печеночный бульон, агар Сабуро. Эмульгирование с антигеном проводят перемешиванием смеси адъюванта и антигена якорной мешалкой в течение 30 мин, после остановки мешалки включают насос-эмульгатор. Длительность перемешивания зависит от объема серии вакцины от 15 до 30 мин, при постоянно работающей мешалке. При получении эмульсии, проводят процедуру стабилизации, путем подачи захоложенной воды в рубашку реактора и охлаждают от +15 до +10 °С. Время стабилизации эмульсии 12-18 ч, подать вакцину на розлив во флаконы.
Пример № 13. Контроль иммуногенной активности экспериментальных серий вакцины против казеозного лимфаденита мелкого рогатого скота
Исследование иммуногенной активности экспериментальных вакцин (полученных согласно примеру №12) проводили в условиях вивария ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН с использованием белых мышей. Было сформировано 12 опытных групп животных (n=10), и 1 контрольная группа (n=10). Мышей опытной группы иммунизировали внутримышечно двукратно в объеме 0,5 мл с интервалом 14 дней, соответствующим вариантом вакцины. Животным контрольных групп внутримышечно вводился стерильный физиологический раствор в объеме 0,5 мл. Спустя 14 дней после второй вакцинации, животные опытной и контрольной групп были подвергнуты инфицированию штаммом B-1422 в дозе 5Ld50 (1,53*107). Срок наблюдения за животными составлял 10 дней. В результате эксперимента были получены результаты представленные в таблице 3.
Таблица №3. Результаты оценки иммуногенной активности различных вариантов вакцин против казеозного лимфаденита
Результаты оценки иммуногенности вакцин в опытных группах по выживаемости (было/пало, процент смертности) | |||
Вариант 1.1. | Вариант 2.1. | Вариант 3.1. | Вариант 4.1. |
(10/0, 0%) | (10/0, 0%) | (10/0, 0%) | (10/0, 0%) |
Вариант 1.2. | Вариант 2.2. | Вариант 3.2. | Вариант 4.2. |
(10/0, 0%) | (10/0, 0%) | (10/0, 0%) | (10/0, 0%) |
Вариант 1.3. | Вариант 2.3. | Вариант 3.3. | Вариант 4.3. |
(10/0, 0%) | (10/0, 0%) | (10/0, 0%) | (10/0, 0%) |
Результаты оценки заражения животных в контрольной группе (было/пало, процент смертности) | |||
(10/10, 100%) |
Согласно полученным данным, иммуногенная активность всех вариантов вакцин показала 100% защиту от 5-ти кратной летальной дозы при заражении, в то время как смертность животных в контрольной группе составила 100%. Таким образом сделано заключение, что предложенный штамм обладает необходимой иммуногенной активностью на лабораторных животных, при использовании в составе препарата 1,5*109 м.к. протективного антигена.
Пример № 14. Оценка протективной активности иммуногенной композиции (вакцины) по изобретению
Оценку протективной эффективности иммунологических средств (вакцин), изготовленных из штамма Corynebacterium pseudotuberculosis B-1422 по изобретению проводили в условиях неблагополучного по казеозному лимфадениту козоводческому предприятию. На предприятии животные имели типичные для заболевания клинико-морфологические проявления казеозного лимфаденита. Окончательный диагноз был поставлен путем проведения бактериологического исследования секционного (патологического материала) из данного предприятия, в ходе которого были выделены изоляты Corynebacterium pseudotuberculosis из различных органов и паренхиматозных тканей (лимфатических узлов, легких, сердца, селезенки). На основании данных вскрытия павших и вынужденно убитых животных было сделано заключение, что CLA протекает в висцеральной форме. Как раз она характеризуется образованием абсцессов на внутренних органах, таких как легкие, печень, почки, матка, селезенка, внутренние лимфоузлы. Кроме того, в редких случаях могут поражаться суставы, молочная железа, головной и спинной мозг, сердце, а также возможно возникновение орхита, мастита или целлюлита. Висцеральную форму часто сопровождает синдром «худой овцы» - возникает потеря веса, слабость, нарушение дыхания.
До момента начала эксперимента не менее 63,6% взрослого поголовья имело типичные для псевдотуберкулеза клинико-морфологические проявления. На молодняке заболевание не фиксировалось, что в свою очередь объясняется хроническим течением инфекции, которая развивается в более взрослом возрасте. Несмотря на это, при вскрытии павшего и выбракованного молодняка, из паренхиматозных органов и тканей животных также были выделены изоляты Corynebacterium pseudotuberculosis, что в свою очередь позволяло утверждать, что животные уже инфицированы.
В ходе проведения исследования использовался вариант иммуногенной композиции по изобретению (вакцины), включающий 1,5 млрд м.к. протективного антигена штамма по изобретению и гидроксид алюминия.
Для оценки протективной эффективности вакцины, было сформировано две группы животных:
- группа №1 – 38 козлят в возрасте 11-14 дней жизни. Козлят, вакцинировали, начиная с 14-21 дневного возраста. Вакцину вводили внутримышечно в бедренную группу мышц двукратно с интервалом 21-24 дня в дозе 1 мл, дополнительную ревакцинацию проводили в возрасте 3 месяцев однократно в дозе 2 мл. В случае пропуска очередного введения использовали двукратную схему вакцинации в указанной дозе. Вакцинацию проводили с соблюдением общепринятых правил асептики, для инъекции использовали только стерильные материалы и инструменты. Для каждого животного использовали отдельную иглу. Перед применением флаконы с вакциной тщательно взбалтывали.
- группа №2 – 43 козленка в возрасте 11-14 дней жизни. Данная группа иммунизации не подвергалась.
По результатам эксперимента оценивали инцидентность выявления у опытных и контрольных групп животных типичных для псевдотуберкулеза, клинико-морфологических проявлений заболеваний. Поскольку заболевание имеет хроническое течение, то учет проводился на период достижения животными полуторагодовалого возраста (пик заболеваемости, установленный на предприятии).
В результате проведенного исследования установлено, что среди не вакцинированной группы №2 инцидентность клинико-морфологического проявления казеозного лимфаденита составила 72,09%, в то время как среди вакцинированных животных 18,42%. Таким образом, применение иммунологического препарата по изобретению позволило на 53,57% уменьшить количество больных животных.
Стоит отметить, что создание эпизоотологического благополучия предприятия, требует длительного применение эффективных лечебно-профилактических и санитарно-гигиенических мероприятий. Так, создание однородного иммунного статуса среди поголовья, позволяет проводить оздоровительные мероприятия с максимальным эффектом.
Несмотря на то, что изобретение описано со ссылкой на раскрываемые варианты воплощения, для специалистов в данной области должно быть очевидно, что конкретные подробно описанные эксперименты приведены лишь в целях иллюстрирования настоящего изобретения, и их не следует рассматривать как каким-либо образом ограничивающие объем изобретения.
Claims (10)
1. Штамм бактерий Corynebacterium pseudotuberculosis B-1422, депонированный во Всероссийской государственной коллекции патогенных и вакцинных штаммов микроорганизмов-возбудителей инфекционных болезней животных (Федеральный научный центр – Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской Академии Наук) под номером B-1422 и предназначенный для получения моно- или поливалентной иммуногенной композиции для профилактики казеозного лимфаденита мелкого рогатого скота.
2. Применение штамма по п.1 для получения моно- или поливалентной иммуногенной композиции для профилактики казеозного лимфаденита мелкого рогатого скота.
3. Иммуногенная композиция для профилактики казеозного лимфаденита мелкого рогатого скота, включающая профилактически эффективное количество инактивированного протективного антигена штамма по п.1, адъювант и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
4. Композиция по п.3, в которой вспомогательное вещество представляет собой растворитель, наполнитель.
5. Композиция по п.3, в которой адъювант выбирается независимо и представляет собой гидроксид алюминия, ПЭГ-6000, карбапол, масляный адъювант.
6. Композиция по п.5, в которой масляный адъювант представляет собой адъювант марки MONTANIDE ISA 206.
7. Композиция по п.5, в которой карбапол представляет собой карбапол марки Carbopol 971Р.
8. Способ профилактики казеозного лимфаденита у субъекта, включающий введение композиции по п.3 субъекту.
9. Способ по п.8, в котором субъект представляет собой мелкий рогатый скот.
10. Способ по п.9, в котором мелкий рогатый скот представляет собой овец, коз.
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2815387C1 true RU2815387C1 (ru) | 2024-03-14 |
Family
ID=
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2078801A1 (en) * | 1991-09-23 | 1993-03-24 | Ian T. Nisbet | Enzymatically inactive phospholipase d of corynebacterium pseudotuberculosis |
RU2051964C1 (ru) * | 1992-07-10 | 1996-01-10 | Омский государственный ветеринарный институт | Штамм бактерий corynebacterium pseudotuberculosis, используемый в качестве референтного и для изготовления диагностических препаратов при казеозном лимфадените овец |
RU2053295C1 (ru) * | 1992-07-10 | 1996-01-27 | Омский государственный ветеринарный институт | Штамм бактерий corynebacterium pseudotuberculosis, используемый в качестве референтного и для изготовления диагностических препаратов при казеозном димфадените овец |
WO2012080696A1 (en) * | 2010-12-13 | 2012-06-21 | Moredun Research Institute | Vaccine |
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2078801A1 (en) * | 1991-09-23 | 1993-03-24 | Ian T. Nisbet | Enzymatically inactive phospholipase d of corynebacterium pseudotuberculosis |
RU2051964C1 (ru) * | 1992-07-10 | 1996-01-10 | Омский государственный ветеринарный институт | Штамм бактерий corynebacterium pseudotuberculosis, используемый в качестве референтного и для изготовления диагностических препаратов при казеозном лимфадените овец |
RU2053295C1 (ru) * | 1992-07-10 | 1996-01-27 | Омский государственный ветеринарный институт | Штамм бактерий corynebacterium pseudotuberculosis, используемый в качестве референтного и для изготовления диагностических препаратов при казеозном димфадените овец |
WO2012080696A1 (en) * | 2010-12-13 | 2012-06-21 | Moredun Research Institute | Vaccine |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
MOUSSA I.M. et al., Vaccination against Corynebacterium pseudotuberculosis infections controlling caseous lymphadenitis (CLA) and oedematousskin disease, Saudi J Biol Sci., 2016, Volume 23(6), pp. 718-723. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2021506782A (ja) | レンサ球菌感染防御のためのワクチン | |
CA2390613A1 (en) | Vaccines for mycoplasma bovis and methods of use | |
US20180161414A1 (en) | Vaccine comprising lactobacillus strains for treating prostate inflammation and benign prostate hyperplasias | |
EA025766B1 (ru) | Липополисахарид ochrobactrum intermedium и его применение в качестве иммуностимулятора у млекопитающих | |
KR20040031015A (ko) | 마이코플라즈마 보비스 시험감염 모델, 엠. 보비스 투여방법 및 폐렴성 폐 병변 유도 방법 | |
RU2815387C1 (ru) | Штамм бактерий Corynebacterium pseudotuberculosis, предназначенный для получения моно- или поливалентных иммуногенных композиций, направленных на специфическую профилактику казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) мелкого рогатого скота | |
JPH05508407A (ja) | パスツレラ・ムルトシダのトキソイドワクチン | |
JPS62502839A (ja) | 乳腺炎ワクチン | |
WO2008074783A1 (en) | Immune stimulant against fish pathogenic bacteria | |
US20240197851A1 (en) | A vaccine for protection against streptococcus suis serotype 9, sequence type 16 | |
US5198214A (en) | Anti-mastitis polyvalent vaccine, method of administration and method for production thereof | |
EP0135951B1 (en) | Method for production of an anti-mastitis polyvalent vaccine | |
RU2824493C1 (ru) | Штамм бактерии Actinobacillus pleuropneumoniae 8 серотипа, предназначенный для получения моно- и поливалентных иммуногенных композиций, направленных на специфическую профилактику актинобациллезной плевропневмонии свиней | |
CA1252721A (en) | Composition for prevention and treatment of mycoplasmal pneumonia | |
RU2824492C1 (ru) | Контрольно-производственный штамм Actinobacillus rossii, предназначенный для производства и контроля иммунобиологических лекарственных средств ветеринарного применения | |
RU2761379C1 (ru) | Поливалентная инактивированная вакцина против стрептококкозов свиней, способ ее получения и применения | |
RU2818361C1 (ru) | Штамм бактерий Streptococcus dysgalactiae для изготовления биопрепаратов для специфической профилактики мастита коров | |
KR102336245B1 (ko) | 돼지 흉막폐렴균 사균체를 포함한 돼지 흉막폐렴 백신 조성물 | |
US3529056A (en) | Method of producing jowl abscess vaccine | |
KR102616625B1 (ko) | 건락성 림프절염의 예방 또는 치료용 백신 조성물 및 이의 용도 | |
KR102615970B1 (ko) | 소에서 설사병을 유발하는 바이러스에 대한 고도면역혈청, 이를 포함하는 조성물, 이의 제조 방법, 및 이를 이용한 소 바이러스성 설사병의 예방 및 치료 방법 | |
Willson et al. | Comparison of common antibiotic therapies for haemophilus pleuropneumonia in pigs | |
RU2521651C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ, Moraxella bovoculi "СХ-Ч6 N-ДЕП" ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМОВ И ВАКЦИН ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО КЕРАТОКОНЪЮКТИВИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | |
KR20180060583A (ko) | Plga로 캡슐화된 불활성화 균체를 포함하는 백신 조성물 및 이의 제조방법 | |
Ball et al. | Mycoplasma californicum mastitis in ewes as an experimental model for antibiotic treatment |