RU2812787C2 - Пролекарственные композиции на основе гидрогеля поперечно-сшитой гиалуроновой кислоты и способы - Google Patents
Пролекарственные композиции на основе гидрогеля поперечно-сшитой гиалуроновой кислоты и способы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2812787C2 RU2812787C2 RU2019133326A RU2019133326A RU2812787C2 RU 2812787 C2 RU2812787 C2 RU 2812787C2 RU 2019133326 A RU2019133326 A RU 2019133326A RU 2019133326 A RU2019133326 A RU 2019133326A RU 2812787 C2 RU2812787 C2 RU 2812787C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- acid sequence
- antibody
- sequence according
- Prior art date
Links
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 title claims abstract description 237
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 title claims abstract description 221
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 220
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 92
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 title claims abstract description 85
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 title claims abstract description 85
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 62
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 title claims abstract description 52
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 151
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 132
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 106
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims abstract description 59
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 59
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 47
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 46
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 33
- 208000034038 Pathologic Neovascularization Diseases 0.000 claims abstract description 22
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 18
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 claims abstract description 14
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 92
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 75
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 56
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 claims description 52
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 46
- 206010064930 age-related macular degeneration Diseases 0.000 claims description 43
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 claims description 40
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 40
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 37
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 36
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 36
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 32
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 31
- 206010012688 Diabetic retinal oedema Diseases 0.000 claims description 30
- 201000011190 diabetic macular edema Diseases 0.000 claims description 30
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 28
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 27
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 24
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 24
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 23
- 208000001344 Macular Edema Diseases 0.000 claims description 22
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 22
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 claims description 21
- 208000005590 Choroidal Neovascularization Diseases 0.000 claims description 20
- 206010060823 Choroidal neovascularisation Diseases 0.000 claims description 20
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 20
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 206010046851 Uveitis Diseases 0.000 claims description 18
- 208000004644 retinal vein occlusion Diseases 0.000 claims description 18
- 206010055665 Corneal neovascularisation Diseases 0.000 claims description 17
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 claims description 17
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 claims description 17
- 201000000159 corneal neovascularization Diseases 0.000 claims description 17
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 17
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 17
- 201000002563 Histoplasmosis Diseases 0.000 claims description 16
- 208000007135 Retinal Neovascularization Diseases 0.000 claims description 16
- 206010038933 Retinopathy of prematurity Diseases 0.000 claims description 16
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims description 16
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 16
- 208000007014 Retinitis pigmentosa Diseases 0.000 claims description 15
- 206010058202 Cystoid macular oedema Diseases 0.000 claims description 14
- 201000010206 cystoid macular edema Diseases 0.000 claims description 14
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 14
- 125000006376 (C3-C10) cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 13
- 125000006714 (C3-C10) heterocyclyl group Chemical group 0.000 claims description 13
- 208000028506 Familial Exudative Vitreoretinopathies Diseases 0.000 claims description 13
- 201000006902 exudative vitreoretinopathy Diseases 0.000 claims description 13
- 201000001937 osteoporosis-pseudoglioma syndrome Diseases 0.000 claims description 13
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 13
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 claims description 12
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 11
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims description 11
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 claims description 10
- 208000003556 Dry Eye Syndromes Diseases 0.000 claims description 9
- 206010013774 Dry eye Diseases 0.000 claims description 9
- 201000003533 Leber congenital amaurosis Diseases 0.000 claims description 9
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 claims description 9
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 9
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims description 9
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 9
- YBYIRNPNPLQARY-UHFFFAOYSA-N 1H-indene Natural products C1=CC=C2CC=CC2=C1 YBYIRNPNPLQARY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 208000002691 Choroiditis Diseases 0.000 claims description 8
- 208000021089 Coats disease Diseases 0.000 claims description 8
- 206010010719 Conjunctival haemorrhage Diseases 0.000 claims description 8
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 claims description 8
- 206010025415 Macular oedema Diseases 0.000 claims description 8
- 208000025464 Norrie disease Diseases 0.000 claims description 8
- 201000010183 Papilledema Diseases 0.000 claims description 8
- 208000003971 Posterior uveitis Diseases 0.000 claims description 8
- 208000008709 Retinal Telangiectasis Diseases 0.000 claims description 8
- 206010038910 Retinitis Diseases 0.000 claims description 8
- 206010038926 Retinopathy hypertensive Diseases 0.000 claims description 8
- 201000005667 central retinal vein occlusion Diseases 0.000 claims description 8
- 208000001309 degenerative myopia Diseases 0.000 claims description 8
- 230000004340 degenerative myopia Effects 0.000 claims description 8
- 201000001948 hypertensive retinopathy Diseases 0.000 claims description 8
- 125000003454 indenyl group Chemical group C1(C=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 claims description 8
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 claims description 8
- 201000010230 macular retinal edema Diseases 0.000 claims description 8
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- 201000003142 neovascular glaucoma Diseases 0.000 claims description 8
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 8
- 229960003876 ranibizumab Drugs 0.000 claims description 8
- 125000005329 tetralinyl group Chemical group C1(CCCC2=CC=CC=C12)* 0.000 claims description 8
- 208000020564 Eye injury Diseases 0.000 claims description 7
- 206010065630 Iris neovascularisation Diseases 0.000 claims description 7
- 206010033712 Papilloedema Diseases 0.000 claims description 7
- 201000007737 Retinal degeneration Diseases 0.000 claims description 7
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 claims description 7
- 206010043189 Telangiectasia Diseases 0.000 claims description 7
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 claims description 7
- 208000010217 blepharitis Diseases 0.000 claims description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 7
- 230000004258 retinal degeneration Effects 0.000 claims description 7
- 208000009056 telangiectasis Diseases 0.000 claims description 7
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 claims description 7
- 208000022873 Ocular disease Diseases 0.000 claims description 6
- 206010025421 Macule Diseases 0.000 claims description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 4
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 claims description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 3
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 claims description 3
- 239000000430 cytokine receptor antagonist Substances 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 3
- 210000004127 vitreous body Anatomy 0.000 claims description 3
- 208000006542 von Hippel-Lindau disease Diseases 0.000 claims description 3
- 229910001413 alkali metal ion Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910001420 alkaline earth metal ion Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 12
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 abstract description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 482
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 148
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 148
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 148
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 93
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 83
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 81
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 81
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 69
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 53
- -1 R 10a Chemical compound 0.000 description 48
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 38
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 36
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 35
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 34
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 34
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 34
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 33
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 33
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 32
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 29
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 29
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 27
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 26
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 26
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 26
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 25
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 24
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 22
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 20
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 20
- 101000808011 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor A Proteins 0.000 description 19
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 19
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 19
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 19
- 102000058223 human VEGFA Human genes 0.000 description 19
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 18
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 17
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 15
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 14
- 150000007942 carboxylates Chemical group 0.000 description 14
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 14
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 14
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 14
- 125000006413 ring segment Chemical group 0.000 description 14
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid group Chemical group C(CCC(=O)O)(=O)O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 13
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 13
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 13
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 13
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 13
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 12
- 102000009484 Vascular Endothelial Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 12
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 12
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 12
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 12
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 12
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 11
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 11
- 102100034608 Angiopoietin-2 Human genes 0.000 description 10
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 10
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 108010081667 aflibercept Proteins 0.000 description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 10
- 108091008601 sVEGFR Proteins 0.000 description 10
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 10
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000003880 polar aprotic solvent Substances 0.000 description 9
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 9
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 9
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102100022133 Complement C3 Human genes 0.000 description 8
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 101000901154 Homo sapiens Complement C3 Proteins 0.000 description 8
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 8
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 8
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 8
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 8
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 8
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 8
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 8
- 108091008602 mbVEGFR Proteins 0.000 description 8
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 description 8
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 125000006374 C2-C10 alkenyl group Chemical group 0.000 description 7
- 125000003358 C2-C20 alkenyl group Chemical group 0.000 description 7
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 101000924533 Homo sapiens Angiopoietin-2 Proteins 0.000 description 7
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 7
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 7
- 108010038501 Interleukin-6 Receptors Proteins 0.000 description 7
- 102100037792 Interleukin-6 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 7
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 7
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 7
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 7
- 238000007259 addition reaction Methods 0.000 description 7
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 7
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 7
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 7
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 7
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 7
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 7
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 7
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 7
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 7
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 7
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 7
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000008069 Geographic Atrophy Diseases 0.000 description 6
- 101000851018 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 1 Proteins 0.000 description 6
- 101000851007 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 2 Proteins 0.000 description 6
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 6
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 6
- 102000004559 Interleukin-13 Receptors Human genes 0.000 description 6
- 108010017511 Interleukin-13 Receptors Proteins 0.000 description 6
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 6
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 6
- 102100033178 Vascular endothelial growth factor receptor 1 Human genes 0.000 description 6
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 6
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 6
- 238000002022 differential scanning fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 6
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 6
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 6
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 6
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 6
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 6
- 229940071643 prefilled syringe Drugs 0.000 description 6
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 6
- 238000012552 review Methods 0.000 description 6
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 6
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 6
- 125000006649 (C2-C20) alkynyl group Chemical group 0.000 description 5
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 5
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 101000851030 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 3 Proteins 0.000 description 5
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 5
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 5
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 5
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 5
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 5
- 102100033179 Vascular endothelial growth factor receptor 3 Human genes 0.000 description 5
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 5
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 5
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 5
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 5
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 5
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 5
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- DUYSYHSSBDVJSM-KRWOKUGFSA-N sphingosine 1-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCC\C=C\[C@@H](O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O DUYSYHSSBDVJSM-KRWOKUGFSA-N 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- FMCAFXHLMUOIGG-IWFBPKFRSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2r)-2-formamido-3-sulfanylpropanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxy-2,5-dimethylphenyl)propanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound O=CN[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)CC1=CC(C)=C(O)C=C1C FMCAFXHLMUOIGG-IWFBPKFRSA-N 0.000 description 4
- QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[5-[(3aS,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-[1-bis(4-chlorophenoxy)phosphorylbutylamino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CCCC(NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCC1SC[C@@H]2NC(=O)N[C@H]12)C(C)C)P(=O)(Oc1ccc(Cl)cc1)Oc1ccc(Cl)cc1 QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N 0.000 description 4
- UNILWMWFPHPYOR-KXEYIPSPSA-M 1-[6-[2-[3-[3-[3-[2-[2-[3-[[2-[2-[[(2r)-1-[[2-[[(2r)-1-[3-[2-[2-[3-[[2-(2-amino-2-oxoethoxy)acetyl]amino]propoxy]ethoxy]ethoxy]propylamino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-[(2r)-2,3-di(hexadecanoyloxy)propyl]sulfanyl-1-oxopropan-2-yl Chemical compound O=C1C(SCCC(=O)NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)COCC(=O)N[C@@H](CSC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CO)C(=O)NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)COCC(N)=O)CC(=O)N1CCNC(=O)CCCCCN\1C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2CC/1=C/C=C/C=C/C1=[N+](CC)C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C1 UNILWMWFPHPYOR-KXEYIPSPSA-M 0.000 description 4
- KEWSCDNULKOKTG-UHFFFAOYSA-N 4-cyano-4-ethylsulfanylcarbothioylsulfanylpentanoic acid Chemical compound CCSC(=S)SC(C)(C#N)CCC(O)=O KEWSCDNULKOKTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WLCZTRVUXYALDD-IBGZPJMESA-N 7-[[(2s)-2,6-bis(2-methoxyethoxycarbonylamino)hexanoyl]amino]heptoxy-methylphosphinic acid Chemical compound COCCOC(=O)NCCCC[C@H](NC(=O)OCCOC)C(=O)NCCCCCCCOP(C)(O)=O WLCZTRVUXYALDD-IBGZPJMESA-N 0.000 description 4
- 102100038568 Age-related maculopathy susceptibility protein 2 Human genes 0.000 description 4
- 108010009906 Angiopoietins Proteins 0.000 description 4
- 102000009840 Angiopoietins Human genes 0.000 description 4
- 108010052412 Apelin Proteins 0.000 description 4
- 102000018746 Apelin Human genes 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 101800001382 Betacellulin Proteins 0.000 description 4
- 102400001242 Betacellulin Human genes 0.000 description 4
- 125000000882 C2-C6 alkenyl group Chemical group 0.000 description 4
- 125000003601 C2-C6 alkynyl group Chemical group 0.000 description 4
- 108090000835 CX3C Chemokine Receptor 1 Proteins 0.000 description 4
- 102100039196 CX3C chemokine receptor 1 Human genes 0.000 description 4
- 102100037637 Cholesteryl ester transfer protein Human genes 0.000 description 4
- 102100036217 Collagen alpha-1(X) chain Human genes 0.000 description 4
- 108010053085 Complement Factor H Proteins 0.000 description 4
- 102000016550 Complement Factor H Human genes 0.000 description 4
- 102000003706 Complement factor D Human genes 0.000 description 4
- 108090000059 Complement factor D Proteins 0.000 description 4
- 102100035321 Complement factor H-related protein 3 Human genes 0.000 description 4
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 4
- 101100481408 Danio rerio tie2 gene Proteins 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 4
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 4
- 102100031415 Hepatic triacylglycerol lipase Human genes 0.000 description 4
- 101000808726 Homo sapiens Age-related maculopathy susceptibility protein 2 Proteins 0.000 description 4
- 101000880514 Homo sapiens Cholesteryl ester transfer protein Proteins 0.000 description 4
- 101000875027 Homo sapiens Collagen alpha-1(X) chain Proteins 0.000 description 4
- 101000878136 Homo sapiens Complement factor H-related protein 3 Proteins 0.000 description 4
- 101000941289 Homo sapiens Hepatic triacylglycerol lipase Proteins 0.000 description 4
- 101000831496 Homo sapiens Toll-like receptor 3 Proteins 0.000 description 4
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 4
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 4
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- 102100026261 Metalloproteinase inhibitor 3 Human genes 0.000 description 4
- 208000010164 Multifocal Choroiditis Diseases 0.000 description 4
- 101100481410 Mus musculus Tek gene Proteins 0.000 description 4
- 206010029164 Nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 4
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 4
- BDJRBEYXGGNYIS-UHFFFAOYSA-N Nonanedioid acid Natural products OC(=O)CCCCCCCC(O)=O BDJRBEYXGGNYIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 208000005228 Pericardial Effusion Diseases 0.000 description 4
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 4
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N Quinoline Chemical compound N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010038848 Retinal detachment Diseases 0.000 description 4
- 108091007178 TNFRSF10A Proteins 0.000 description 4
- 108010031429 Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-3 Proteins 0.000 description 4
- 102100024324 Toll-like receptor 3 Human genes 0.000 description 4
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 4
- 102100040113 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10A Human genes 0.000 description 4
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 4
- 229960002833 aflibercept Drugs 0.000 description 4
- 125000006242 amine protecting group Chemical group 0.000 description 4
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- BWVPHIKGXQBZPV-QKFDDRBGSA-N apelin Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=2NC=NC=2)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=2NC=NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(O)=O)CCC1 BWVPHIKGXQBZPV-QKFDDRBGSA-N 0.000 description 4
- 239000002585 base Substances 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 4
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 4
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 4
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 4
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 4
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 description 4
- 229940125810 compound 20 Drugs 0.000 description 4
- 229940125846 compound 25 Drugs 0.000 description 4
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 4
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 4
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 4
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 4
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 4
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 description 4
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 4
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 4
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 4
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 4
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 125000003392 indanyl group Chemical group C1(CCC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 4
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 4
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 description 4
- 206010023332 keratitis Diseases 0.000 description 4
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 4
- 125000004170 methylsulfonyl group Chemical group [H]C([H])([H])S(*)(=O)=O 0.000 description 4
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 4
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 4
- 125000006574 non-aromatic ring group Chemical group 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 4
- 230000004264 retinal detachment Effects 0.000 description 4
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 4
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 4
- 238000001370 static light scattering Methods 0.000 description 4
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 4
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 4
- GLGNXYJARSMNGJ-VKTIVEEGSA-N (1s,2s,3r,4r)-3-[[5-chloro-2-[(1-ethyl-6-methoxy-2-oxo-4,5-dihydro-3h-1-benzazepin-7-yl)amino]pyrimidin-4-yl]amino]bicyclo[2.2.1]hept-5-ene-2-carboxamide Chemical compound CCN1C(=O)CCCC2=C(OC)C(NC=3N=C(C(=CN=3)Cl)N[C@H]3[C@H]([C@@]4([H])C[C@@]3(C=C4)[H])C(N)=O)=CC=C21 GLGNXYJARSMNGJ-VKTIVEEGSA-N 0.000 description 3
- GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N (2S,3R)-N-[(2S)-3-(cyclopenten-1-yl)-1-[(2R)-2-methyloxiran-2-yl]-1-oxopropan-2-yl]-3-hydroxy-3-(4-methoxyphenyl)-2-[[(2S)-2-[(2-morpholin-4-ylacetyl)amino]propanoyl]amino]propanamide Chemical compound C1(=CCCC1)C[C@@H](C(=O)[C@@]1(OC1)C)NC([C@H]([C@@H](C1=CC=C(C=C1)OC)O)NC([C@H](C)NC(CN1CCOCC1)=O)=O)=O GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N 0.000 description 3
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 description 3
- ONBQEOIKXPHGMB-VBSBHUPXSA-N 1-[2-[(2s,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-4,6-dihydroxyphenyl]-3-(4-hydroxyphenyl)propan-1-one Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=CC(O)=C1C(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 ONBQEOIKXPHGMB-VBSBHUPXSA-N 0.000 description 3
- QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 3-[(1r)-1-[(2r,6s)-2,6-dimethylmorpholin-4-yl]ethyl]-n-[6-methyl-3-(1h-pyrazol-4-yl)imidazo[1,2-a]pyrazin-8-yl]-1,2-thiazol-5-amine Chemical compound N1([C@H](C)C2=NSC(NC=3C4=NC=C(N4C=C(C)N=3)C3=CNN=C3)=C2)C[C@H](C)O[C@H](C)C1 QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 0.000 description 3
- XXJWYDDUDKYVKI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-fluoro-2-methyl-1H-indol-5-yl)oxy]-6-methoxy-7-[3-(1-pyrrolidinyl)propoxy]quinazoline Chemical compound COC1=CC2=C(OC=3C(=C4C=C(C)NC4=CC=3)F)N=CN=C2C=C1OCCCN1CCCC1 XXJWYDDUDKYVKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010048036 Angiopoietin-2 Proteins 0.000 description 3
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 3
- 108010081589 Becaplermin Proteins 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 3
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 3
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N Furan Chemical compound C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 3
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 3
- 208000006395 Meigs Syndrome Diseases 0.000 description 3
- 206010062207 Mycobacterial infection Diseases 0.000 description 3
- OPFJDXRVMFKJJO-ZHHKINOHSA-N N-{[3-(2-benzamido-4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)-pyrazol-5-yl]carbonyl}-G-dR-G-dD-dD-dD-NH2 Chemical compound S1C(C=2NN=C(C=2)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(N)=O)=C(C)N=C1NC(=O)C1=CC=CC=C1 OPFJDXRVMFKJJO-ZHHKINOHSA-N 0.000 description 3
- 229910004013 NO 2 Inorganic materials 0.000 description 3
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 3
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 3
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 3
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical group [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N TCEP Chemical compound OC(=O)CCP(CCC(O)=O)CCC(O)=O PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000000208 Wet Macular Degeneration Diseases 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 229940077737 brain-derived neurotrophic factor Drugs 0.000 description 3
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 229940125797 compound 12 Drugs 0.000 description 3
- 229940125758 compound 15 Drugs 0.000 description 3
- 229940126142 compound 16 Drugs 0.000 description 3
- 229940126086 compound 21 Drugs 0.000 description 3
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 3
- 238000013267 controlled drug release Methods 0.000 description 3
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 3
- 208000011325 dry age related macular degeneration Diseases 0.000 description 3
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- JAXFJECJQZDFJS-XHEPKHHKSA-N gtpl8555 Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)N[C@H](B1O[C@@]2(C)[C@H]3C[C@H](C3(C)C)C[C@H]2O1)CCC1=CC=C(F)C=C1 JAXFJECJQZDFJS-XHEPKHHKSA-N 0.000 description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 3
- 230000001969 hypertrophic effect Effects 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 208000027531 mycobacterial infectious disease Diseases 0.000 description 3
- GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N octadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCO GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 3
- 229960003407 pegaptanib Drugs 0.000 description 3
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 3
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 3
- UHTHHESEBZOYNR-UHFFFAOYSA-N vandetanib Chemical compound COC1=CC(C(/N=CN2)=N/C=3C(=CC(Br)=CC=3)F)=C2C=C1OCC1CCN(C)CC1 UHTHHESEBZOYNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 3
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N (1s,2s,3s,5r)-1-(carboxymethyl)-3,5-bis[(4-phenoxyphenyl)methyl-propylcarbamoyl]cyclopentane-1,2-dicarboxylic acid Chemical compound O=C([C@@H]1[C@@H]([C@](CC(O)=O)([C@H](C(=O)N(CCC)CC=2C=CC(OC=3C=CC=CC=3)=CC=2)C1)C(O)=O)C(O)=O)N(CCC)CC(C=C1)=CC=C1OC1=CC=CC=C1 SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N 0.000 description 2
- WWTBZEKOSBFBEM-SPWPXUSOSA-N (2s)-2-[[2-benzyl-3-[hydroxy-[(1r)-2-phenyl-1-(phenylmethoxycarbonylamino)ethyl]phosphoryl]propanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)O)C(=O)C(CP(O)(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=CC=C1 WWTBZEKOSBFBEM-SPWPXUSOSA-N 0.000 description 2
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 description 2
- WCDDVEOXEIYWFB-VXORFPGASA-N (2s,3s,4r,5r,6r)-3-[(2s,3r,5s,6r)-3-acetamido-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,5,6-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O WCDDVEOXEIYWFB-VXORFPGASA-N 0.000 description 2
- 125000000008 (C1-C10) alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003837 (C1-C20) alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UWYZHKAOTLEWKK-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline Chemical compound C1=CC=C2CNCCC2=C1 UWYZHKAOTLEWKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LBUJPTNKIBCYBY-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound C1=CC=C2CCCNC2=C1 LBUJPTNKIBCYBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FCEHBMOGCRZNNI-UHFFFAOYSA-N 1-benzothiophene Chemical compound C1=CC=C2SC=CC2=C1 FCEHBMOGCRZNNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QZTKDVCDBIDYMD-UHFFFAOYSA-N 2,2'-[(2-amino-2-oxoethyl)imino]diacetic acid Chemical compound NC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O QZTKDVCDBIDYMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003923 2,5-pyrrolediones Chemical class 0.000 description 2
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AJTVSSFTXWNIRG-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(2-hydroxyethyl)amino]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+](CCO)CCS([O-])(=O)=O AJTVSSFTXWNIRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GPIQOFWTZXXOOV-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-4,6-dimethoxy-1,3,5-triazine Chemical compound COC1=NC(Cl)=NC(OC)=N1 GPIQOFWTZXXOOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LVQFQZZGTZFUNF-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3-[4-(2-hydroxy-3-sulfonatopropyl)piperazine-1,4-diium-1-yl]propane-1-sulfonate Chemical compound OS(=O)(=O)CC(O)CN1CCN(CC(O)CS(O)(=O)=O)CC1 LVQFQZZGTZFUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NUFBIAUZAMHTSP-UHFFFAOYSA-N 3-(n-morpholino)-2-hydroxypropanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CC(O)CN1CCOCC1 NUFBIAUZAMHTSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 UMCMPZBLKLEWAF-BCTGSCMUSA-N 0.000 description 2
- RZQXOGQSPBYUKH-UHFFFAOYSA-N 3-[[1,3-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)propan-2-yl]azaniumyl]-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound OCC(CO)(CO)NCC(O)CS(O)(=O)=O RZQXOGQSPBYUKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XCBLFURAFHFFJF-UHFFFAOYSA-N 3-[bis(2-hydroxyethyl)azaniumyl]-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)CS(O)(=O)=O XCBLFURAFHFFJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- CFKMVGJGLGKFKI-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-m-cresol Chemical compound CC1=CC(O)=CC=C1Cl CFKMVGJGLGKFKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 2
- 206010001257 Adenoviral conjunctivitis Diseases 0.000 description 2
- 208000031104 Arterial Occlusive disease Diseases 0.000 description 2
- 208000022211 Arteriovenous Malformations Diseases 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 2
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N Butylparaben Chemical compound CCCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 2
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 2
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 description 2
- 108010005939 Ciliary Neurotrophic Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100031614 Ciliary neurotrophic factor Human genes 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 108090000056 Complement factor B Proteins 0.000 description 2
- 102000003712 Complement factor B Human genes 0.000 description 2
- 229940126657 Compound 17 Drugs 0.000 description 2
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 2
- 206010011017 Corneal graft rejection Diseases 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 2
- 108700022150 Designed Ankyrin Repeat Proteins Proteins 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000019878 Eales disease Diseases 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 108090000368 Fibroblast growth factor 8 Proteins 0.000 description 2
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- GIZQLVPDAOBAFN-UHFFFAOYSA-N HEPPSO Chemical compound OCCN1CCN(CC(O)CS(O)(=O)=O)CC1 GIZQLVPDAOBAFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000100 Hepatocyte Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100021866 Hepatocyte growth factor Human genes 0.000 description 2
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 101000846416 Homo sapiens Fibroblast growth factor 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000597428 Homo sapiens Nucleoredoxin-like protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 2
- 206010051151 Hyperviscosity syndrome Diseases 0.000 description 2
- WRYCSMQKUKOKBP-UHFFFAOYSA-N Imidazolidine Chemical compound C1CNCN1 WRYCSMQKUKOKBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 2
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 2
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 2
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 2
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 2
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 239000002147 L01XE04 - Sunitinib Substances 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 2
- YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N Morpholine Chemical compound C1COCCN1 YNAVUWVOSKDBBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 2
- 101000597433 Mus musculus Nucleoredoxin-like protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000686934 Mus musculus Prolactin-7D1 Proteins 0.000 description 2
- JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methyl-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound OCC(CO)(CO)NCCS(O)(=O)=O JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100035399 Nucleoredoxin-like protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 208000010191 Osteitis Deformans Diseases 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 102100036220 PC4 and SFRS1-interacting protein Human genes 0.000 description 2
- 208000027868 Paget disease Diseases 0.000 description 2
- 208000004788 Pars Planitis Diseases 0.000 description 2
- 102100035846 Pigment epithelium-derived factor Human genes 0.000 description 2
- GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N Piperazine Chemical compound C1CNCCN1 GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 2
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 2
- 102000004211 Platelet factor 4 Human genes 0.000 description 2
- 108090000778 Platelet factor 4 Proteins 0.000 description 2
- 102100039277 Pleiotrophin Human genes 0.000 description 2
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 2
- ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N Propyl gallate Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010037075 Protozoal infections Diseases 0.000 description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 2
- 206010037649 Pyogenic granuloma Diseases 0.000 description 2
- KYQCOXFCLRTKLS-UHFFFAOYSA-N Pyrazine Chemical compound C1=CN=CC=N1 KYQCOXFCLRTKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N Pyrrole Chemical compound C=1C=CNC=1 KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100372762 Rattus norvegicus Flt1 gene Proteins 0.000 description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 241001303601 Rosacea Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 206010039705 Scleritis Diseases 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920002385 Sodium hyaluronate Polymers 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YTPLMLYBLZKORZ-UHFFFAOYSA-N Thiophene Chemical compound C=1C=CSC=1 YTPLMLYBLZKORZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100031372 Thymidine phosphorylase Human genes 0.000 description 2
- 108700023160 Thymidine phosphorylases Proteins 0.000 description 2
- 201000005485 Toxoplasmosis Diseases 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 2
- 206010064996 Ulcerative keratitis Diseases 0.000 description 2
- 229940123429 VEGFR tyrosine kinase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 108010053099 Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2 Proteins 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 208000010011 Vitamin A Deficiency Diseases 0.000 description 2
- 206010047663 Vitritis Diseases 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 2
- 150000005215 alkyl ethers Chemical class 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 2
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 2
- 208000021328 arterial occlusion Diseases 0.000 description 2
- 230000005744 arteriovenous malformation Effects 0.000 description 2
- XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N asunaprevir Chemical compound O=C([C@@H]1C[C@H](CN1C(=O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(C)(C)C)OC1=NC=C(C2=CC=C(Cl)C=C21)OC)N[C@]1(C(=O)NS(=O)(=O)C2CC2)C[C@H]1C=C XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N 0.000 description 2
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IOJUPLGTWVMSFF-UHFFFAOYSA-N benzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC=NC2=C1 IOJUPLGTWVMSFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 2
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 229960002412 cediranib Drugs 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 2
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 229940126543 compound 14 Drugs 0.000 description 2
- 229940126208 compound 22 Drugs 0.000 description 2
- 229940125961 compound 24 Drugs 0.000 description 2
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 2
- 201000007717 corneal ulcer Diseases 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 238000000113 differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 2
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 208000021373 epidemic keratoconjunctivitis Diseases 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 2
- 229940051306 eylea Drugs 0.000 description 2
- 230000001497 fibrovascular Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000031209 hemophilic arthropathy Diseases 0.000 description 2
- BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N hexadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCO BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 2
- 208000013653 hyalitis Diseases 0.000 description 2
- 229940014041 hyaluronate Drugs 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001144 hymen Anatomy 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 201000001371 inclusion conjunctivitis Diseases 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- AWJUIBRHMBBTKR-UHFFFAOYSA-N isoquinoline Chemical compound C1=NC=CC2=CC=CC=C21 AWJUIBRHMBBTKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035984 keratolysis Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 108010093345 lens epithelium-derived growth factor Proteins 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 229940076783 lucentis Drugs 0.000 description 2
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000027202 mammary Paget disease Diseases 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 2
- 208000001491 myopia Diseases 0.000 description 2
- 230000004379 myopia Effects 0.000 description 2
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000414 obstructive effect Effects 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 2
- 201000001757 phlyctenulosis Diseases 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 108090000102 pigment epithelium-derived factor Proteins 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 2
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 2
- 201000004700 rosacea Diseases 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 2
- 230000037387 scars Effects 0.000 description 2
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 201000006476 shipyard eye Diseases 0.000 description 2
- 208000007056 sickle cell anemia Diseases 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 229940010747 sodium hyaluronate Drugs 0.000 description 2
- RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M sodium octadecanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical group O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RMVRSNDYEFQCLF-UHFFFAOYSA-N thiophenol Chemical compound SC1=CC=CC=C1 RMVRSNDYEFQCLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010044325 trachoma Diseases 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 2
- 229960000241 vandetanib Drugs 0.000 description 2
- 230000004862 vasculogenesis Effects 0.000 description 2
- IWZSHWBGHQBIML-ZGGLMWTQSA-N (3S,8S,10R,13S,14S,17S)-17-isoquinolin-7-yl-N,N,10,13-tetramethyl-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-amine Chemical compound CN(C)[C@H]1CC[C@]2(C)C3CC[C@@]4(C)[C@@H](CC[C@@H]4c4ccc5ccncc5c4)[C@@H]3CC=C2C1 IWZSHWBGHQBIML-ZGGLMWTQSA-N 0.000 description 1
- KCOYQXZDFIIGCY-CZIZESTLSA-N (3e)-4-amino-5-fluoro-3-[5-(4-methylpiperazin-1-yl)-1,3-dihydrobenzimidazol-2-ylidene]quinolin-2-one Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=CC=C(N\C(N2)=C/3C(=C4C(F)=CC=CC4=NC\3=O)N)C2=C1 KCOYQXZDFIIGCY-CZIZESTLSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- ALSTYHKOOCGGFT-KTKRTIGZSA-N (9Z)-octadecen-1-ol Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCO ALSTYHKOOCGGFT-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- NENLYAQPNATJSU-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydroisoquinoline Chemical compound C1NCCC2CCCCC21 NENLYAQPNATJSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- POTIYWUALSJREP-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2CCCCC21 POTIYWUALSJREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UUZJJNBYJDFQHL-UHFFFAOYSA-N 1,2,3-triazolidine Chemical compound C1CNNN1 UUZJJNBYJDFQHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CSNIZNHTOVFARY-UHFFFAOYSA-N 1,2-benzothiazole Chemical compound C1=CC=C2C=NSC2=C1 CSNIZNHTOVFARY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KTZQTRPPVKQPFO-UHFFFAOYSA-N 1,2-benzoxazole Chemical compound C1=CC=C2C=NOC2=C1 KTZQTRPPVKQPFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOEPOEDBBPRAEI-UHFFFAOYSA-N 1,2-dihydroisoquinoline Chemical compound C1=CC=C2CNC=CC2=C1 IOEPOEDBBPRAEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IRFSXVIRXMYULF-UHFFFAOYSA-N 1,2-dihydroquinoline Chemical compound C1=CC=C2C=CCNC2=C1 IRFSXVIRXMYULF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CIISBYKBBMFLEZ-UHFFFAOYSA-N 1,2-oxazolidine Chemical compound C1CNOC1 CIISBYKBBMFLEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZSRXHJVZUBEGW-UHFFFAOYSA-N 1,2-thiazolidine Chemical compound C1CNSC1 CZSRXHJVZUBEGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BCMCBBGGLRIHSE-UHFFFAOYSA-N 1,3-benzoxazole Chemical compound C1=CC=C2OC=NC2=C1 BCMCBBGGLRIHSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OGYGFUAIIOPWQD-UHFFFAOYSA-N 1,3-thiazolidine Chemical compound C1CSCN1 OGYGFUAIIOPWQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FQUYSHZXSKYCSY-UHFFFAOYSA-N 1,4-diazepane Chemical compound C1CNCCNC1 FQUYSHZXSKYCSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CUOSYYRDANYHTL-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioctoxy-1,4-dioxobutane-2-sulfonic acid;sodium Chemical class [Na].CCCCCCCCOC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCCCCCCCC CUOSYYRDANYHTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KPKNTUUIEVXMOH-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxa-8-azaspiro[4.5]decane Chemical compound O1CCOC11CCNCC1 KPKNTUUIEVXMOH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SPMVMDHWKHCIDT-UHFFFAOYSA-N 1-[2-chloro-4-[(6,7-dimethoxy-4-quinolinyl)oxy]phenyl]-3-(5-methyl-3-isoxazolyl)urea Chemical compound C=12C=C(OC)C(OC)=CC2=NC=CC=1OC(C=C1Cl)=CC=C1NC(=O)NC=1C=C(C)ON=1 SPMVMDHWKHCIDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DQFQCHIDRBIESA-UHFFFAOYSA-N 1-benzazepine Chemical compound N1C=CC=CC2=CC=CC=C12 DQFQCHIDRBIESA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-7-azabenzotriazole Chemical compound C1=CN=C2N(O)N=NC2=C1 FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- ZHKJHQBOAJQXQR-UHFFFAOYSA-N 1H-azirine Chemical compound N1C=C1 ZHKJHQBOAJQXQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HYZJCKYKOHLVJF-UHFFFAOYSA-N 1H-benzimidazole Chemical compound C1=CC=C2NC=NC2=C1 HYZJCKYKOHLVJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNGREZUHAYWORS-UHFFFAOYSA-M 2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-pentadecafluorooctanoate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F SNGREZUHAYWORS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UZUFPBIDKMEQEQ-UHFFFAOYSA-M 2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,9-heptadecafluorononanoate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F UZUFPBIDKMEQEQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XBNGYFFABRKICK-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,5,6-pentafluorophenol Chemical class OC1=C(F)C(F)=C(F)C(F)=C1F XBNGYFFABRKICK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- JECYNCQXXKQDJN-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methylhexan-2-yloxymethyl)oxirane Chemical compound CCCCC(C)(C)OCC1CO1 JECYNCQXXKQDJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IMSODMZESSGVBE-UHFFFAOYSA-N 2-Oxazoline Chemical compound C1CN=CO1 IMSODMZESSGVBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IEQAICDLOKRSRL-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-dodecoxyethoxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO IEQAICDLOKRSRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YSUIQYOGTINQIN-UZFYAQMZSA-N 2-amino-9-[(1S,6R,8R,9S,10R,15R,17R,18R)-8-(6-aminopurin-9-yl)-9,18-difluoro-3,12-dihydroxy-3,12-bis(sulfanylidene)-2,4,7,11,13,16-hexaoxa-3lambda5,12lambda5-diphosphatricyclo[13.2.1.06,10]octadecan-17-yl]-1H-purin-6-one Chemical compound NC1=NC2=C(N=CN2[C@@H]2O[C@@H]3COP(S)(=O)O[C@@H]4[C@@H](COP(S)(=O)O[C@@H]2[C@@H]3F)O[C@H]([C@H]4F)N2C=NC3=C2N=CN=C3N)C(=O)N1 YSUIQYOGTINQIN-UZFYAQMZSA-N 0.000 description 1
- CQOQDQWUFQDJMK-SSTWWWIQSA-N 2-methoxy-17beta-estradiol Chemical compound C([C@@H]12)C[C@]3(C)[C@@H](O)CC[C@H]3[C@@H]1CCC1=C2C=C(OC)C(O)=C1 CQOQDQWUFQDJMK-SSTWWWIQSA-N 0.000 description 1
- 125000004493 2-methylbut-1-yl group Chemical group CC(C*)CC 0.000 description 1
- 125000005916 2-methylpentyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- RSEBUVRVKCANEP-UHFFFAOYSA-N 2-pyrroline Chemical compound C1CC=CN1 RSEBUVRVKCANEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MGADZUXDNSDTHW-UHFFFAOYSA-N 2H-pyran Chemical compound C1OC=CC=C1 MGADZUXDNSDTHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHFDRBXTEDBWCZ-ZROIWOOFSA-N 3-[2,4-dimethyl-5-[(z)-(2-oxo-1h-indol-3-ylidene)methyl]-1h-pyrrol-3-yl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=C(C)NC(\C=C/2C3=CC=CC=C3NC\2=O)=C1C NHFDRBXTEDBWCZ-ZROIWOOFSA-N 0.000 description 1
- IXOCGRPBILEGOX-UHFFFAOYSA-N 3-[3-(dodecanoylamino)propyl-dimethylazaniumyl]-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CC(O)CS([O-])(=O)=O IXOCGRPBILEGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005917 3-methylpentyl group Chemical group 0.000 description 1
- AUDYZXNUHIIGRB-UHFFFAOYSA-N 3-thiophen-2-ylpyrrole-2,5-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C=2SC=CC=2)=C1 AUDYZXNUHIIGRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEQPBCSPRXFQQS-UHFFFAOYSA-N 4,5-dihydro-1,2-oxazole Chemical compound C1CC=NO1 WEQPBCSPRXFQQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUUULVAMQJLDSY-UHFFFAOYSA-N 4,5-dihydro-1,2-thiazole Chemical compound C1CC=NS1 GUUULVAMQJLDSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEDKTMOIKOKBSH-UHFFFAOYSA-N 4,5-dihydrothiadiazole Chemical compound C1CN=NS1 WEDKTMOIKOKBSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMTZEAOGFDXDAD-UHFFFAOYSA-M 4-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholin-4-ium;chloride Chemical compound [Cl-].COC1=NC(OC)=NC([N+]2(C)CCOCC2)=N1 BMTZEAOGFDXDAD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFCXANHHBCGMAS-UHFFFAOYSA-N 4-[[4-(4-chloroanilino)furo[2,3-d]pyridazin-7-yl]oxymethyl]-n-methylpyridine-2-carboxamide Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(COC=2C=3OC=CC=3C(NC=3C=CC(Cl)=CC=3)=NN=2)=C1 QFCXANHHBCGMAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DMIUGJLERMOBNT-UHFFFAOYSA-N 4-amino-n-(3-methoxypyrazin-2-yl)benzenesulfonamide;5-[(3,4,5-trimethoxyphenyl)methyl]pyrimidine-2,4-diamine Chemical compound COC1=NC=CN=C1NS(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=C1.COC1=C(OC)C(OC)=CC(CC=2C(=NC(N)=NC=2)N)=C1 DMIUGJLERMOBNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GKEYKDOLBLYGRB-LGMDPLHJSA-N 5-[2-(diethylamino)ethyl]-2-[(z)-(5-fluoro-2-oxo-1h-indol-3-ylidene)methyl]-3-methyl-6,7-dihydro-1h-pyrrolo[3,2-c]pyridin-4-one Chemical compound O=C\1NC2=CC=C(F)C=C2C/1=C/C(N1)=C(C)C2=C1CCN(CCN(CC)CC)C2=O GKEYKDOLBLYGRB-LGMDPLHJSA-N 0.000 description 1
- 229940046305 5-bromo-5-nitro-1,3-dioxane Drugs 0.000 description 1
- WJQDJDVDXAAXSB-UHFFFAOYSA-N 5-sulfanylidenepyrrolidin-2-one Chemical group O=C1CCC(=S)N1 WJQDJDVDXAAXSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGGKXQQCVPAUEA-UHFFFAOYSA-N 8-azabicyclo[3.2.1]octane Chemical compound C1CCC2CCC1N2 DGGKXQQCVPAUEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZKRFOXLVOKTUTA-KQYNXXCUSA-N 9-(5-phosphoribofuranosyl)-6-mercaptopurine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O[C@H]1N1C(NC=NC2=S)=C2N=C1 ZKRFOXLVOKTUTA-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 108010059616 Activins Proteins 0.000 description 1
- WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N Ala-Ala-His Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- YYAVDNKUWLAFCV-ACZMJKKPSA-N Ala-Ser-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O YYAVDNKUWLAFCV-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- 208000003120 Angiofibroma Diseases 0.000 description 1
- 102100022987 Angiogenin Human genes 0.000 description 1
- 102100025665 Angiopoietin-related protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010029748 Angiostat Proteins 0.000 description 1
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 1
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 description 1
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 description 1
- 108700016232 Arg(2)-Sar(4)- dermorphin (1-4) Proteins 0.000 description 1
- PTVGLOCPAVYPFG-CIUDSAMLSA-N Arg-Gln-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PTVGLOCPAVYPFG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 200000000007 Arterial disease Diseases 0.000 description 1
- PTNFNTOBUDWHNZ-GUBZILKMSA-N Asn-Arg-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O PTNFNTOBUDWHNZ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MECFLTFREHAZLH-ACZMJKKPSA-N Asn-Glu-Cys Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N MECFLTFREHAZLH-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- KHCNTVRVAYCPQE-CIUDSAMLSA-N Asn-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KHCNTVRVAYCPQE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 208000037260 Atherosclerotic Plaque Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 1
- 239000007989 BIS-Tris Propane buffer Substances 0.000 description 1
- 108091032955 Bacterial small RNA Proteins 0.000 description 1
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027496 Behcet disease Diseases 0.000 description 1
- 208000009137 Behcet syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 101001069913 Bos taurus Growth-regulated protein homolog beta Proteins 0.000 description 1
- 206010048962 Brain oedema Diseases 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100039398 C-X-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 101100381481 Caenorhabditis elegans baz-2 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100029968 Calreticulin Human genes 0.000 description 1
- 108090000549 Calreticulin Proteins 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 208000014882 Carotid artery disease Diseases 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940123150 Chelating agent Drugs 0.000 description 1
- 208000009043 Chemical Burns Diseases 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 102100031186 Chromogranin-A Human genes 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 108010001463 Collagen Type XVIII Proteins 0.000 description 1
- 102000047200 Collagen Type XVIII Human genes 0.000 description 1
- 102100031162 Collagen alpha-1(XVIII) chain Human genes 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N DMF Natural products CC1=CC=C(C)O1 GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026139 DNA damage-inducible transcript 4 protein Human genes 0.000 description 1
- 102220597351 DNA-directed RNA polymerases I, II, and III subunit RPABC2_N94A_mutation Human genes 0.000 description 1
- JDRSMPFHFNXQRB-CMTNHCDUSA-N Decyl beta-D-threo-hexopyranoside Chemical compound CCCCCCCCCCO[C@@H]1O[C@H](CO)C(O)[C@H](O)C1O JDRSMPFHFNXQRB-CMTNHCDUSA-N 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000007342 Diabetic Nephropathies Diseases 0.000 description 1
- BUDQDWGNQVEFAC-UHFFFAOYSA-N Dihydropyran Chemical compound C1COC=CC1 BUDQDWGNQVEFAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NTURVSFTOYPGON-UHFFFAOYSA-N Dihydroquinazoline Chemical compound C1=CC=C2C=NCNC2=C1 NTURVSFTOYPGON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- WQXNXVUDBPYKBA-UHFFFAOYSA-N Ectoine Natural products CC1=NCCC(C(O)=O)N1 WQXNXVUDBPYKBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009273 Endometriosis Diseases 0.000 description 1
- 108010079505 Endostatins Proteins 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 1
- 241000272190 Falco peregrinus Species 0.000 description 1
- 208000004248 Familial Primary Pulmonary Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000016970 Follistatin Human genes 0.000 description 1
- 108010014612 Follistatin Proteins 0.000 description 1
- 206010017076 Fracture Diseases 0.000 description 1
- 206010017088 Fracture nonunion Diseases 0.000 description 1
- 208000036357 GUCY2D-related recessive retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 101000993347 Gallus gallus Ciliary neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- 102000034615 Glial cell line-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- 108091010837 Glial cell line-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- WQWMZOIPXWSZNE-WDSKDSINSA-N Gln-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O WQWMZOIPXWSZNE-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- YYOBUPFZLKQUAX-FXQIFTODSA-N Glu-Asn-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YYOBUPFZLKQUAX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 1
- 206010018498 Goitre Diseases 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 208000034508 Haemangioma of retina Diseases 0.000 description 1
- 208000032759 Hemolytic-Uremic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010022901 Heparin Lyase Proteins 0.000 description 1
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 description 1
- 101000693093 Homo sapiens Angiopoietin-related protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000912753 Homo sapiens DNA damage-inducible transcript 4 protein Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000669513 Homo sapiens Metalloproteinase inhibitor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000595923 Homo sapiens Placenta growth factor Proteins 0.000 description 1
- 102100030357 Host cell factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108091012469 Host cell factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- IOVUXUSIGXCREV-DKIMLUQUSA-N Ile-Leu-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IOVUXUSIGXCREV-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 102100026818 Inhibin beta E chain Human genes 0.000 description 1
- 102000002746 Inhibins Human genes 0.000 description 1
- 108010004250 Inhibins Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- 102220476699 Interleukin-1 receptor-associated kinase 3_F83A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 239000003798 L01XE11 - Pazopanib Substances 0.000 description 1
- 239000002118 L01XE12 - Vandetanib Substances 0.000 description 1
- 239000002176 L01XE26 - Cabozantinib Substances 0.000 description 1
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 1
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 1
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 206010025412 Macular dystrophy congenital Diseases 0.000 description 1
- 206010066453 Mesangioproliferative glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 102100039364 Metalloproteinase inhibitor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100030335 Midkine Human genes 0.000 description 1
- 108010092801 Midkine Proteins 0.000 description 1
- 102000014962 Monocyte Chemoattractant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010064136 Monocyte Chemoattractant Proteins Proteins 0.000 description 1
- YXOLAZRVSSWPPT-UHFFFAOYSA-N Morin Chemical compound OC1=CC(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 YXOLAZRVSSWPPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 208000010358 Myositis Ossificans Diseases 0.000 description 1
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CXQHYVUVSFXTMY-UHFFFAOYSA-N N1'-[3-fluoro-4-[[6-methoxy-7-[3-(4-morpholinyl)propoxy]-4-quinolinyl]oxy]phenyl]-N1-(4-fluorophenyl)cyclopropane-1,1-dicarboxamide Chemical compound C1=CN=C2C=C(OCCCN3CCOCC3)C(OC)=CC2=C1OC(C(=C1)F)=CC=C1NC(=O)C1(C(=O)NC=2C=CC(F)=CC=2)CC1 CXQHYVUVSFXTMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000238413 Octopus Species 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 102220567115 Ornithine decarboxylase antizyme 1_Y58R_mutation Human genes 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- ZCQWOFVYLHDMMC-UHFFFAOYSA-N Oxazole Chemical compound C1=COC=N1 ZCQWOFVYLHDMMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WYNCHZVNFNFDNH-UHFFFAOYSA-N Oxazolidine Chemical compound C1COCN1 WYNCHZVNFNFDNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000609499 Palicourea Species 0.000 description 1
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 241001111421 Pannus Species 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 206010034277 Pemphigoid Diseases 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- WEMYTDDMDBLPMI-DKIMLUQUSA-N Phe-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N WEMYTDDMDBLPMI-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 1
- KIQUCMUULDXTAZ-HJOGWXRNSA-N Phe-Tyr-Tyr Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(O)=O KIQUCMUULDXTAZ-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 1
- PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N Phenazine Natural products C1=CC=CC2=NC3=CC=CC=C3N=C21 PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100035194 Placenta growth factor Human genes 0.000 description 1
- 102000010752 Plasminogen Inactivators Human genes 0.000 description 1
- 108010077971 Plasminogen Inactivators Proteins 0.000 description 1
- 102100036154 Platelet basic protein Human genes 0.000 description 1
- 101710195957 Platelet basic protein Proteins 0.000 description 1
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005107 Premature Birth Diseases 0.000 description 1
- 206010036590 Premature baby Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 108010012809 Progranulins Proteins 0.000 description 1
- 102000019204 Progranulins Human genes 0.000 description 1
- 102000003946 Prolactin Human genes 0.000 description 1
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 1
- 208000002158 Proliferative Vitreoretinopathy Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000015433 Prostaglandin Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010050183 Prostaglandin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 201000001263 Psoriatic Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 description 1
- 206010064911 Pulmonary arterial hypertension Diseases 0.000 description 1
- WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N Pyrazole Chemical compound C=1C=NNC=1 WTKZEGDFNFYCGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010038886 Retinal oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010038934 Retinopathy proliferative Diseases 0.000 description 1
- 102100037968 Ribonuclease inhibitor Human genes 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- WINXNKPZLFISPD-UHFFFAOYSA-M Saccharin sodium Chemical compound [Na+].C1=CC=C2C(=O)[N-]S(=O)(=O)C2=C1 WINXNKPZLFISPD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- QMCDMHWAKMUGJE-IHRRRGAJSA-N Ser-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QMCDMHWAKMUGJE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- DKGRNFUXVTYRAS-UBHSHLNASA-N Ser-Ser-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O DKGRNFUXVTYRAS-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 206010042033 Stevens-Johnson syndrome Diseases 0.000 description 1
- 231100000168 Stevens-Johnson syndrome Toxicity 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013530 TOR Serine-Threonine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010065917 TOR Serine-Threonine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 241000473945 Theria <moth genus> Species 0.000 description 1
- FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N Thiazole Chemical compound C1=CSC=N1 FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N Thr-Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 206010060872 Transplant failure Diseases 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 1
- KHPLUFDSWGDRHD-SLFFLAALSA-N Tyr-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CC3=CC=C(C=C3)O)N)C(=O)O KHPLUFDSWGDRHD-SLFFLAALSA-N 0.000 description 1
- 206010046798 Uterine leiomyoma Diseases 0.000 description 1
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 description 1
- 244000000188 Vaccinium ovalifolium Species 0.000 description 1
- 102000009524 Vascular Endothelial Growth Factor A Human genes 0.000 description 1
- 108010073925 Vascular Endothelial Growth Factor B Proteins 0.000 description 1
- 102100038217 Vascular endothelial growth factor B Human genes 0.000 description 1
- 206010058990 Venous occlusion Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 208000013058 Weber syndrome Diseases 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LNUFLCYMSVYYNW-ZPJMAFJPSA-N [(2r,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[[(3s,5s,8r,9s,10s,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl]oxy]-4,5-disulfo Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1C[C@@H]2CC[C@H]3[C@@H]4CC[C@@H]([C@]4(CC[C@@H]3[C@@]2(C)CC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H]1O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]1OS(O)(=O)=O LNUFLCYMSVYYNW-ZPJMAFJPSA-N 0.000 description 1
- VRGWBRLULZUWAJ-XFFXIZSCSA-N [(2s)-2-[(1r,3z,5s,8z,12z,15s)-5,17-dihydroxy-4,8,12,15-tetramethyl-16-oxo-18-bicyclo[13.3.0]octadeca-3,8,12,17-tetraenyl]propyl] acetate Chemical compound C1\C=C(C)/CC\C=C(C)/CC[C@H](O)\C(C)=C/C[C@@H]2C([C@@H](COC(C)=O)C)=C(O)C(=O)[C@]21C VRGWBRLULZUWAJ-XFFXIZSCSA-N 0.000 description 1
- KPFBUSLHFFWMAI-HYRPPVSQSA-N [(8r,9s,10r,13s,14s,17r)-17-acetyl-6-formyl-3-methoxy-10,13-dimethyl-1,2,7,8,9,11,12,14,15,16-decahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-yl] acetate Chemical compound C1C[C@@H]2[C@](CCC(OC)=C3)(C)C3=C(C=O)C[C@H]2[C@@H]2CC[C@](OC(C)=O)(C(C)=O)[C@]21C KPFBUSLHFFWMAI-HYRPPVSQSA-N 0.000 description 1
- ZQNTVCDODGLSAP-UHFFFAOYSA-N [Br+].C(CCCCCCCCCCCCCCCCC)[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC Chemical compound [Br+].C(CCCCCCCCCCCCCCCCC)[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC ZQNTVCDODGLSAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010043116 abicipar pegol Proteins 0.000 description 1
- 229950008281 abicipar pegol Drugs 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940119059 actemra Drugs 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000488 activin Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 206010069351 acute lung injury Diseases 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000384 adrenergic alpha-2 receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 150000001345 alkine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000004996 alkyl benzenes Chemical class 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008051 alkyl sulfates Chemical class 0.000 description 1
- 125000002820 allylidene group Chemical group [H]C(=[*])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- BTBJBAZGXNKLQC-UHFFFAOYSA-N ammonium lauryl sulfate Chemical compound [NH4+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O BTBJBAZGXNKLQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940063953 ammonium lauryl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 108010072788 angiogenin Proteins 0.000 description 1
- 210000002159 anterior chamber Anatomy 0.000 description 1
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000009833 antibody interaction Effects 0.000 description 1
- 238000010913 antigen-directed enzyme pro-drug therapy Methods 0.000 description 1
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 description 1
- 229960003982 apatinib Drugs 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 210000001742 aqueous humor Anatomy 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-L aspartate group Chemical group N[C@@H](CC(=O)[O-])C(=O)[O-] CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-L 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000003464 asthenopia Diseases 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 229960003005 axitinib Drugs 0.000 description 1
- RITAVMQDGBJQJZ-FMIVXFBMSA-N axitinib Chemical compound CNC(=O)C1=CC=CC=C1SC1=CC=C(C(\C=C\C=2N=CC=CC=2)=NN2)C2=C1 RITAVMQDGBJQJZ-FMIVXFBMSA-N 0.000 description 1
- XYOVOXDWRFGKEX-UHFFFAOYSA-N azepine Chemical compound N1C=CC=CC=C1 XYOVOXDWRFGKEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HONIICLYMWZJFZ-UHFFFAOYSA-N azetidine Chemical compound C1CNC1 HONIICLYMWZJFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- RFRXIWQYSOIBDI-UHFFFAOYSA-N benzarone Chemical compound CCC=1OC2=CC=CC=C2C=1C(=O)C1=CC=C(O)C=C1 RFRXIWQYSOIBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- MXMZCLLIUQEKSN-UHFFFAOYSA-N benzimidazoline Chemical compound C1=CC=C2NCNC2=C1 MXMZCLLIUQEKSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960004365 benzoic acid Drugs 0.000 description 1
- KGNDCEVUMONOKF-UGPLYTSKSA-N benzyl n-[(2r)-1-[(2s,4r)-2-[[(2s)-6-amino-1-(1,3-benzoxazol-2-yl)-1,1-dihydroxyhexan-2-yl]carbamoyl]-4-[(4-methylphenyl)methoxy]pyrrolidin-1-yl]-1-oxo-4-phenylbutan-2-yl]carbamate Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CO[C@H]1CN(C(=O)[C@@H](CCC=2C=CC=CC=2)NC(=O)OCC=2C=CC=CC=2)[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)(O)C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C1 KGNDCEVUMONOKF-UGPLYTSKSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 description 1
- 125000002618 bicyclic heterocycle group Chemical group 0.000 description 1
- 229940126587 biotherapeutics Drugs 0.000 description 1
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HHKZCCWKTZRCCL-UHFFFAOYSA-N bis-tris propane Chemical compound OCC(CO)(CO)NCCCNC(CO)(CO)CO HHKZCCWKTZRCCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000010504 bond cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 208000006752 brain edema Diseases 0.000 description 1
- 201000007293 brain stem infarction Diseases 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XVBRCOKDZVQYAY-UHFFFAOYSA-N bronidox Chemical compound [O-][N+](=O)C1(Br)COCOC1 XVBRCOKDZVQYAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940067596 butylparaben Drugs 0.000 description 1
- 229960001292 cabozantinib Drugs 0.000 description 1
- ONIQOQHATWINJY-UHFFFAOYSA-N cabozantinib Chemical compound C=12C=C(OC)C(OC)=CC2=NC=CC=1OC(C=C1)=CC=C1NC(=O)C1(C(=O)NC=2C=CC(F)=CC=2)CC1 ONIQOQHATWINJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940082500 cetostearyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 229960000541 cetyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 229960001927 cetylpyridinium chloride Drugs 0.000 description 1
- YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M cetylpyridinium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WOWHHFRSBJGXCM-UHFFFAOYSA-M cetyltrimethylammonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C WOWHHFRSBJGXCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 229960002242 chlorocresol Drugs 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 229950001565 clazakizumab Drugs 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- MRUAUOIMASANKQ-UHFFFAOYSA-N cocamidopropyl betaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CC([O-])=O MRUAUOIMASANKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940073507 cocamidopropyl betaine Drugs 0.000 description 1
- 206010010121 compartment syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 239000004074 complement inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940125833 compound 23 Drugs 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 210000004246 corpus luteum Anatomy 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000006165 cyclic alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 1
- 125000000582 cycloheptyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000596 cyclohexenyl group Chemical group C1(=CCCCC1)* 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000006547 cyclononyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000640 cyclooctyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 229940073499 decyl glucoside Drugs 0.000 description 1
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 1
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 208000033679 diabetic kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- QPMLSUSACCOBDK-UHFFFAOYSA-N diazepane Chemical compound C1CCNNCC1 QPMLSUSACCOBDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- REZZEXDLIUJMMS-UHFFFAOYSA-M dimethyldioctadecylammonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC REZZEXDLIUJMMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019329 dioctyl sodium sulphosuccinate Nutrition 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- SYELZBGXAIXKHU-UHFFFAOYSA-N dodecyldimethylamine N-oxide Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)[O-] SYELZBGXAIXKHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950005778 dovitinib Drugs 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- WQXNXVUDBPYKBA-YFKPBYRVSA-N ectoine Chemical compound CC1=[NH+][C@H](C([O-])=O)CCN1 WQXNXVUDBPYKBA-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 229950002507 elsilimomab Drugs 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 206010014801 endophthalmitis Diseases 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- GWWXPPNRXSNHJF-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-cyano-2-(hydroxyamino)acetate Chemical compound CCOC(=O)C(NO)C#N GWWXPPNRXSNHJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001617 ethyl hydroxybenzoate Drugs 0.000 description 1
- 239000004403 ethyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010228 ethyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 125000000219 ethylidene group Chemical group [H]C(=[*])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N ethylparaben Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 1
- 229940125199 famitinib Drugs 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 229950008692 foretinib Drugs 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- VRGWBRLULZUWAJ-UHFFFAOYSA-N fusaproliferin Natural products C1C=C(C)CCC=C(C)CCC(O)C(C)=CCC2C(C(COC(C)=O)C)=C(O)C(=O)C21C VRGWBRLULZUWAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-L glutamate group Chemical group N[C@@H](CCC(=O)[O-])C(=O)[O-] WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-L 0.000 description 1
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N glycerine monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N glycerol monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940074046 glyceryl laurate Drugs 0.000 description 1
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 201000011066 hemangioma Diseases 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- FHBSGPWHCCIQPG-UHFFFAOYSA-N hydroxy-methyl-oxo-sulfanylidene-$l^{6}-sulfane Chemical compound CS(S)(=O)=O FHBSGPWHCCIQPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001631 hypertensive effect Effects 0.000 description 1
- 229950006359 icrucumab Drugs 0.000 description 1
- MTNDZQHUAFNZQY-UHFFFAOYSA-N imidazoline Chemical compound C1CN=CN1 MTNDZQHUAFNZQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001841 imino group Chemical group [H]N=* 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229910052738 indium Inorganic materials 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940060367 inert ingredients Drugs 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 1
- 239000000893 inhibin Substances 0.000 description 1
- 231100000546 inhibition of ovulation Toxicity 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 229940046732 interleukin inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 102000002467 interleukin receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010093036 interleukin receptors Proteins 0.000 description 1
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000002563 ionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- ZLTPDFXIESTBQG-UHFFFAOYSA-N isothiazole Chemical compound C=1C=NSC=1 ZLTPDFXIESTBQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CTAPFRYPJLPFDF-UHFFFAOYSA-N isoxazole Chemical compound C=1C=NOC=1 CTAPFRYPJLPFDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- LAPRIVJANDLWOK-UHFFFAOYSA-N laureth-5 Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCO LAPRIVJANDLWOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYIDGJJWBIBVIA-UYTYNIKBSA-N lauryl glucoside Chemical compound CCCCCCCCCCCCO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O PYIDGJJWBIBVIA-UYTYNIKBSA-N 0.000 description 1
- 229940048848 lauryl glucoside Drugs 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 201000010260 leiomyoma Diseases 0.000 description 1
- WOSKHXYHFSIKNG-UHFFFAOYSA-N lenvatinib Chemical compound C=12C=C(C(N)=O)C(OC)=CC2=NC=CC=1OC(C=C1Cl)=CC=C1NC(=O)NC1CC1 WOSKHXYHFSIKNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003784 lenvatinib Drugs 0.000 description 1
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 1
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229940092110 macugen Drugs 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 206010027191 meningioma Diseases 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003475 metalloproteinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 125000001434 methanylylidene group Chemical group [H]C#[*] 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N morin Natural products OC1=CC(O)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000007708 morin Nutrition 0.000 description 1
- 230000000921 morphogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229950003968 motesanib Drugs 0.000 description 1
- RAHBGWKEPAQNFF-UHFFFAOYSA-N motesanib Chemical compound C=1C=C2C(C)(C)CNC2=CC=1NC(=O)C1=CC=CN=C1NCC1=CC=NC=C1 RAHBGWKEPAQNFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000569 multi-angle light scattering Methods 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- LBWFXVZLPYTWQI-IPOVEDGCSA-N n-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(z)-(5-fluoro-2-oxo-1h-indol-3-ylidene)methyl]-2,4-dimethyl-1h-pyrrole-3-carboxamide;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.CCN(CC)CCNC(=O)C1=C(C)NC(\C=C/2C3=CC(F)=CC=C3NC\2=O)=C1C LBWFXVZLPYTWQI-IPOVEDGCSA-N 0.000 description 1
- TTZSNFLLYPYKIL-UHFFFAOYSA-N n-[2-(dimethylamino)ethyl]-1-[3-[[4-[(2-methyl-1h-indol-5-yl)oxy]pyrimidin-2-yl]amino]phenyl]methanesulfonamide Chemical compound CN(C)CCNS(=O)(=O)CC1=CC=CC(NC=2N=C(OC=3C=C4C=C(C)NC4=CC=3)C=CN=2)=C1 TTZSNFLLYPYKIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WPEWQEMJFLWMLV-UHFFFAOYSA-N n-[4-(1-cyanocyclopentyl)phenyl]-2-(pyridin-4-ylmethylamino)pyridine-3-carboxamide Chemical compound C=1C=CN=C(NCC=2C=CN=CC=2)C=1C(=O)NC(C=C1)=CC=C1C1(C#N)CCCC1 WPEWQEMJFLWMLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOQYKNQRPGWPLP-UHFFFAOYSA-N n-heptadecyl alcohol Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCO GOQYKNQRPGWPLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001280 n-hexyl group Chemical group C(CCCCC)* 0.000 description 1
- 125000000740 n-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001971 neopentyl group Chemical group [H]C([*])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 208000021971 neovascular inflammatory vitreoretinopathy Diseases 0.000 description 1
- 201000009925 nephrosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 229960004378 nintedanib Drugs 0.000 description 1
- XZXHXSATPCNXJR-ZIADKAODSA-N nintedanib Chemical compound O=C1NC2=CC(C(=O)OC)=CC=C2\C1=C(C=1C=CC=CC=1)\NC(C=C1)=CC=C1N(C)C(=O)CN1CCN(C)CC1 XZXHXSATPCNXJR-ZIADKAODSA-N 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 229940087419 nonoxynol-9 Drugs 0.000 description 1
- 229920004918 nonoxynol-9 Polymers 0.000 description 1
- UMRZSTCPUPJPOJ-KNVOCYPGSA-N norbornane Chemical compound C1C[C@H]2CC[C@@H]1C2 UMRZSTCPUPJPOJ-KNVOCYPGSA-N 0.000 description 1
- JFNLZVQOOSMTJK-KNVOCYPGSA-N norbornene Chemical compound C1[C@@H]2CC[C@H]1C=C2 JFNLZVQOOSMTJK-KNVOCYPGSA-N 0.000 description 1
- YYELLDKEOUKVIQ-UHFFFAOYSA-N octaethyleneglycol monododecyl ether Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO YYELLDKEOUKVIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMGTYJPMKXNQFY-UHFFFAOYSA-N octenidine dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C1=CC(=NCCCCCCCC)C=CN1CCCCCCCCCCN1C=CC(=NCCCCCCCC)C=C1 SMGTYJPMKXNQFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N octyl beta-D-glucopyranoside Chemical compound CCCCCCCCO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 229940055577 oleyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- XMLQWXUVTXCDDL-UHFFFAOYSA-N oleyl alcohol Natural products CCCCCCC=CCCCCCCCCCCO XMLQWXUVTXCDDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 229950010006 olokizumab Drugs 0.000 description 1
- 210000003733 optic disk Anatomy 0.000 description 1
- 229950006354 orantinib Drugs 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- AHHWIHXENZJRFG-UHFFFAOYSA-N oxetane Chemical compound C1COC1 AHHWIHXENZJRFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005702 oxyalkylene group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- CUIHSIWYWATEQL-UHFFFAOYSA-N pazopanib Chemical compound C1=CC2=C(C)N(C)N=C2C=C1N(C)C(N=1)=CC=NC=1NC1=CC=C(C)C(S(N)(=O)=O)=C1 CUIHSIWYWATEQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000639 pazopanib Drugs 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- FWZLYKYJQSQEPN-SKLAJPBESA-N peregrine Chemical compound OC1[C@H]2[C@@H]3C4([C@@H]5C6OC(C)=O)C(OC)CC[C@@]5(C)CN(CC)[C@H]4C6[C@@]2(OC)C[C@H](OC)[C@H]1C3 FWZLYKYJQSQEPN-SKLAJPBESA-N 0.000 description 1
- FWZLYKYJQSQEPN-UHFFFAOYSA-N peregrine Natural products OC1C2C3C4(C5C6OC(C)=O)C(OC)CCC5(C)CN(CC)C4C6C2(OC)CC(OC)C1C3 FWZLYKYJQSQEPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JGTNAGYHADQMCM-UHFFFAOYSA-N perfluorobutanesulfonic acid Chemical class OS(=O)(=O)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F JGTNAGYHADQMCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YFSUTJLHUFNCNZ-UHFFFAOYSA-N perfluorooctane-1-sulfonic acid Chemical class OS(=O)(=O)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F YFSUTJLHUFNCNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008494 pericarditis Diseases 0.000 description 1
- 239000003209 petroleum derivative Substances 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- PDTFCHSETJBPTR-UHFFFAOYSA-N phenylmercuric nitrate Chemical compound [O-][N+](=O)O[Hg]C1=CC=CC=C1 PDTFCHSETJBPTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 108010024226 placental ribonuclease inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 1
- 239000002797 plasminogen activator inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 1
- 229920001987 poloxamine Polymers 0.000 description 1
- 108010054442 polyalanine Proteins 0.000 description 1
- 201000010065 polycystic ovary syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 description 1
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 201000011461 pre-eclampsia Diseases 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 201000008312 primary pulmonary hypertension Diseases 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 1
- 201000007914 proliferative diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 230000006785 proliferative vitreoretinopathy Effects 0.000 description 1
- 229930185346 proliferin Natural products 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000473 propyl gallate Substances 0.000 description 1
- 235000010388 propyl gallate Nutrition 0.000 description 1
- 229940075579 propyl gallate Drugs 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- CPNGPNLZQNNVQM-UHFFFAOYSA-N pteridine Chemical compound N1=CN=CC2=NC=CN=C21 CPNGPNLZQNNVQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- USPWKWBDZOARPV-UHFFFAOYSA-N pyrazolidine Chemical compound C1CNNC1 USPWKWBDZOARPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DNXIASIHZYFFRO-UHFFFAOYSA-N pyrazoline Chemical compound C1CN=NC1 DNXIASIHZYFFRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PBMFSQRYOILNGV-UHFFFAOYSA-N pyridazine Chemical compound C1=CC=NN=C1 PBMFSQRYOILNGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZVJHJDDKYZXRJI-UHFFFAOYSA-N pyrroline Natural products C1CC=NC1 ZVJHJDDKYZXRJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- JWVCLYRUEFBMGU-UHFFFAOYSA-N quinazoline Chemical compound N1=CN=CC2=CC=CC=C21 JWVCLYRUEFBMGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ARIWANIATODDMH-UHFFFAOYSA-N rac-1-monolauroylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO ARIWANIATODDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 229960002633 ramucirumab Drugs 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- FNHKPVJBJVTLMP-UHFFFAOYSA-N regorafenib Chemical compound C1=NC(C(=O)NC)=CC(OC=2C=C(F)C(NC(=O)NC=3C=C(C(Cl)=CC=3)C(F)(F)F)=CC=2)=C1 FNHKPVJBJVTLMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 1
- 201000011195 retinal edema Diseases 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 229950006348 sarilumab Drugs 0.000 description 1
- 108700004121 sarkosyl Proteins 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- WUWDLXZGHZSWQZ-WQLSENKSSA-N semaxanib Chemical compound N1C(C)=CC(C)=C1\C=C/1C2=CC=CC=C2NC\1=O WUWDLXZGHZSWQZ-WQLSENKSSA-N 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 102000034285 signal transducing proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006024 signal transducing proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003323 siltuximab Drugs 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 210000000162 simple eye Anatomy 0.000 description 1
- 229950006094 sirukumab Drugs 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940057950 sodium laureth sulfate Drugs 0.000 description 1
- KSAVQLQVUXSOCR-UHFFFAOYSA-M sodium lauroyl sarcosinate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC([O-])=O KSAVQLQVUXSOCR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940045885 sodium lauroyl sarcosinate Drugs 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- MDSQKJDNWUMBQQ-UHFFFAOYSA-M sodium myreth sulfate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOS([O-])(=O)=O MDSQKJDNWUMBQQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- SXHLENDCVBIJFO-UHFFFAOYSA-M sodium;2-[2-(2-dodecoxyethoxy)ethoxy]ethyl sulfate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOS([O-])(=O)=O SXHLENDCVBIJFO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 125000003003 spiro group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 229940012831 stearyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 229940090374 stivarga Drugs 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- HXJUTPCZVOIRIF-UHFFFAOYSA-N sulfolane Chemical compound O=S1(=O)CCCC1 HXJUTPCZVOIRIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003871 sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N sunitinib Chemical compound CCN(CC)CCNC(=O)C1=C(C)NC(\C=C/2C3=CC(F)=CC=C3NC\2=O)=C1C WINHZLLDWRZWRT-ATVHPVEESA-N 0.000 description 1
- 229960001796 sunitinib Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 229940034785 sutent Drugs 0.000 description 1
- 229940053017 sylvant Drugs 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000008409 synovial inflammation Effects 0.000 description 1
- 201000004595 synovitis Diseases 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003760 tallow Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229950004186 telatinib Drugs 0.000 description 1
- FBWNMEQMRUMQSO-UHFFFAOYSA-N tergitol NP-9 Chemical compound CCCCCCCCCC1=CC=C(OCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO)C=C1 FBWNMEQMRUMQSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005207 tetraalkylammonium group Chemical group 0.000 description 1
- RAOIDOHSFRTOEL-UHFFFAOYSA-N tetrahydrothiophene Chemical compound C1CCSC1 RAOIDOHSFRTOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OULAJFUGPPVRBK-UHFFFAOYSA-N tetratriacontyl alcohol Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCO OULAJFUGPPVRBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003536 tetrazoles Chemical class 0.000 description 1
- ZYXWYDDFNXBTFO-UHFFFAOYSA-N tetrazolidine Chemical compound C1NNNN1 ZYXWYDDFNXBTFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VLLMWSRANPNYQX-UHFFFAOYSA-N thiadiazole Chemical compound C1=CSN=N1.C1=CSN=N1 VLLMWSRANPNYQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RLTPJVKHGBFGQA-UHFFFAOYSA-N thiadiazolidine Chemical compound C1CSNN1 RLTPJVKHGBFGQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CBDKQYKMCICBOF-UHFFFAOYSA-N thiazoline Chemical compound C1CN=CS1 CBDKQYKMCICBOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- VOVUARRWDCVURC-UHFFFAOYSA-N thiirane Chemical compound C1CS1 VOVUARRWDCVURC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JTQAPFZZCXWQNQ-UHFFFAOYSA-N thiirene Chemical compound S1C=C1 JTQAPFZZCXWQNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 1
- 229930192474 thiophene Natural products 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 229960000940 tivozanib Drugs 0.000 description 1
- 229960003989 tocilizumab Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 125000005208 trialkylammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 229950000449 vanucizumab Drugs 0.000 description 1
- 108010060757 vasostatin Proteins 0.000 description 1
- YCOYDOIWSSHVCK-UHFFFAOYSA-N vatalanib Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1NC(C1=CC=CC=C11)=NN=C1CC1=CC=NC=C1 YCOYDOIWSSHVCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 201000007790 vitelliform macular dystrophy Diseases 0.000 description 1
- 229950007269 vobarilizumab Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 229940036061 zaltrap Drugs 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960002760 ziv-aflibercept Drugs 0.000 description 1
Abstract
Группа изобретений относится к пролекарственным композициям на основе гидрогеля. Конъюгат гидрогеля поперечно-сшитой HA с лекарственным средством содержит множество полимеров гиалуроновой кислоты, содержащих множество линейно соединенных звеньев определенной структуры, лекарственное средство представляет собой фрагмент анти-VEGF антитела. Также раскрыты фармацевтическая композиция, применение фармацевтической композиции в качестве лекарственного средства для производства лекарственного средства для лечения нарушения, ассоциированного с патологическим ангиогенезом у субъекта, для снижения или ингибирования ангиогенеза у субъекта с нарушением, ассоциированным с патологическим ангиогенезом, для лечения нарушения, ассоциированного с патологическим ангиогенезом, у субъекта, способ лечения офтальмологического заболевания. Группа изобретений обеспечивает высвобождение лекарственного средства при физиологических условиях. 7 н. и 20 з.п. ф-лы, 15 ил., 8 табл., 8 пр.
Description
Ссылка на родственные заявки
[1] Согласно настоящей заявке испрашивается приоритет в соответствии с предварительной заявкой на выдачу патента США с серийным номером 62/475094, поданной 22 марта 2017 г., раскрытие которой включено в настоящий документ посредством ссылки.
Перечень последовательностей
[2] Настоящая заявка содержит перечень последовательностей, который был представлен посредством EFS-Web и настоящим полностью включен посредством ссылки. Указанная ASCII-копия, созданная 21 марта 2018 г., называется P34128_WO_Sequence Listing.txt и имеет размер 38 048 байт.
Область техники, к которой относится настоящее изобретение
[3] Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, связанным с ними способам получения и способам применения фармацевтических композиций для лечения одного или нескольких офтальмологических состояний.
Предшествующий уровень техники настоящего изобретения
[4] Основной причиной слепоты является неспособность в достаточной степени лечить определенные заболевания глаз. Основным ограничением является отсутствие подходящих вариантов введения лекарственных средств или терапевтических средств в глаз и поддержания этих лекарственных средств или агентов в терапевтически эффективной концентрации в глазах в течение необходимой продолжительности. Системное введение может не являться идеальным решением, потому что часто для достижения эффективных внутриглазных концентраций требуются неприемлемо высокие уровни системных доз при увеличении частоты возникновения неприемлемых побочных эффектов лекарственных средств. Простое закапывание глаз или нанесение на глаз во многих случаях не является приемлемой альтернативой, поскольку лекарственное средство может быстро вымываться под действием слез или истощаться из глаза, переходя в общую циркуляцию. Местная терапия глазными каплями ограничена плохой абсорбцией, необходимостью частого и/или постоянного введения доз в течение периодов времени, составляющих от нескольких дней до нескольких лет, быстрым метаболизмом в водянистой влаге, образованием и движением слезной пленки и другими причинами, которые могут эффективно удалять терапевтические средства задолго до завершения терапии или доставки надлежащей дозы.
[5] Внутриглазные инъекции обладают тем преимуществом, что они могут обеспечить улучшенную биодоступность для целевого участка (например, сетчатки) глаза по сравнению с другими механизмами доставки, такими как местная доставка. Однако они также имеют недостатки и могут представлять различные осложнения. Например, интравитреальные инъекции могут приводить к доставке нежелательно высоких концентраций терапевтического средства в целевой участок или в другой участок, особенно когда терапевтическое средство является относительно растворимым. Кроме того, внутриглазные инъекции крайне неприятны для пациента. Более того, поскольку внутриглазная инъекция сама по себе может вызывать осложнения, такие как эндофтальмит и отслоение сетчатки, очень желательно, чтобы между инъекциями был максимально возможный интервал, сохраняя при этом терапевтические уровни лекарственного средства в глазу.
[6] В дополнение к вышесказанному, терапевтические средства, доставляемые посредством интравитреальных инъекций, могут характеризоваться отсутствием продолжительности действия, поскольку средства часто могут быстро диспергироваться в глазу после инъекции. Такое отсутствие продолжительности особенно нежелательно, поскольку может потребовать большей частоты инъекций. Ранибизумаб и пегаптаниб, например, вводят пациенту посредством внутриглазной инъекции каждые 4 и 6 недель соответственно, что является крайне неприятным для пациента.
[7] Таким образом, широко распространено признание того, что более длительно действующие составы приведут к положительным результатам в области офтальмологии. Они будут полезны для ухода за пациентами и для здоровья глаз за счет обеспечения пролонгированной доставки терапевтических средств в глаз, сводя к минимуму проблемы, связанные с соблюдением пациентом предписанных терапевтических схем лечения.
[8] Экспрессия фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF), сигнального белка, продуцируемого клетками, который стимулирует васкулогенез и ангиогенез, играет важную роль в различных офтальмологических состояниях, таких как определенные формы макулярной дегенерации и ретинопатий.
[9] На рынке представлены различные лекарственные средства для лечения таких офтальмологических состояний, например, ранибизумаб, афлиберцепт и пегаптаниб. Нанесение пациенту происходит путем внутриглазных инъекций каждые 4 и 8 недель.
[10] Ввиду вышесказанного, существует потребность в получении формы введения, которая по меньшей мере частично устраняет эти недостатки.
Краткое раскрытие настоящего изобретения
[11] Настоящее изобретение относится к конъюгатам поперечно-сшитой гиалуроновой кислоты (HA) с лекарственным средством, фармацевтическим композициям и способам применения таких конъюгатов для лечения офтальмологических показаний и способам получения конъюгатов.
[12] Согласно определенным вариантам осуществления настоящее изобретение относится к конъюгату поперечно-сшитой HA с лекарственным средством, содержащему множество полимеров гиалуроновой кислоты 2A и множество полимеров гиалуроновой кислоты 2B, где:
каждый 2A содержит множество линейно соединенных звеньев, причем звенья состоят по существу из следующего:
; и;
каждый 2B содержит множество линейно соединенных звеньев, причем звенья состоят по существу из следующего:
;; и;
где
пунктирная линия без отметки указывает на место прикрепления к соседнему звену на пунктирной линии, помеченной #, или к водороду,
пунктирная линия, помеченная #, указывает на место прикрепления к соседнему звену на пунктирной линии без отметки или к гидроксилу; и
пунктирная линия, помеченная *, указывает на место прикрепления поперечной сшивки между звеном Z3 в 2A и звеном Z4 в 2B, так что по меньшей мере один 2A поперечно-сшит по меньшей мере с одним 2B;
лекарственное средство представляет собой терапевтическое средство;
каждый из Ra1 и Ra2 независимо представляет собой водород; C1-4 алкил; ион щелочного металла, ион аммония, ион щелочноземельного металла или другой подходящий противоион;
L2 представляет собой обратимый линкер пролекарственного средства;
L4 представляет собой необязательно биоразлагаемый спейсер и может являться одинаковым или различным в Z2 и Z4;
2A содержит всего s звеньев, где s составляет от 25 до 2500, где;
количество звеньев Z1 в 2A составляет от приблизительно 0,8s до приблизительно 0,99s, и
количество звеньев Z3 составляет от приблизительно 0,2s до приблизительно 0,01s;
2B содержит всего t звеньев, где t составляет от 25 до 2500, где;
количество звеньев Z1 в 2B составляет от приблизительно 0,75t до приблизительно 0,94t;
объединенное количество звеньев Z2 и Z4 составляет от приблизительно 0,25t до приблизительно 0,06t;
количество звеньев Z2 составляет по меньшей мере 0,01t; и
количество звеньев Z4 составляет по меньшей мере 0,01t.
[13] Согласно определенным вариантам осуществления s составляет от 50 до 2000.
[14] Согласно определенным вариантам осуществления s составляет от 75 до 1500.
[15] Согласно определенным вариантам осуществления s составляет от 75 до 1000.
[16] Согласно определенным вариантам осуществления s составляет от 80 до 500.
[17] Согласно определенным вариантам осуществления s составляет от 100 до 250.
[18] Согласно определенным вариантам осуществления s составляет от 100 до 200.
[19] Согласно определенным вариантам осуществления s составляет от 200 до 800 или от 300 до 600.
[20] Согласно определенным вариантам осуществления t составляет от 50 до 2000.
[21] Согласно определенным вариантам осуществления t составляет от 75 до 1500.
[22] Согласно определенным вариантам осуществления t составляет от 75 до 1000.
[23] Согласно определенным вариантам осуществления t составляет от 80 до 500.
[24] Согласно определенным вариантам осуществления t составляет от 100 до 250.
[25] Согласно определенным вариантам осуществления t составляет от 100 до 200.
[26] Согласно определенным вариантам осуществления t составляет от 200 до 800 или от 300 до 600.
[27] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z1 в 2A составляет от приблизительно 0,91s до приблизительно 0,98s.
[28] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z1 в 2A составляет от приблизительно 0,8s до приблизительно 0,99s.
[29] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z1 в 2A составляет от приблизительно 0,82s до приблизительно 0,99s.
[30] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z1 в 2A составляет от приблизительно 0,84s до приблизительно 0,99s.
[31] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z1 в 2A составляет от приблизительно 0,86s до приблизительно 0,99s.
[32] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z1 в 2A составляет от приблизительно 0,88s до приблизительно 0,99s.
[33] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z1 в 2A составляет от приблизительно 0,9s до приблизительно 0,99s.Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z1 в 2A составляет от приблизительно 0,92s до приблизительно 0,97s.
[34] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z1 в 2A составляет от приблизительно 0,93s до приблизительно 0,96s.
[35] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z1 в 2A составляет от приблизительно 0,94s до приблизительно 0,95s.
[36] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z3 в 2A составляет от приблизительно 0,2s до приблизительно 0,01s.
[37] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z3 в 2A составляет от приблизительно 0,18s до приблизительно 0,01s.
[38] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z3 в 2A составляет от приблизительно 0,16s до приблизительно 0,01s.
[39] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z3 в 2A составляет от приблизительно 0,14s до приблизительно 0,01s. Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z3 в 2A составляет от приблизительно 0,12s до приблизительно 0,01s.
[40] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z3 в 2A составляет от приблизительно 0,10s до приблизительно 0,01s.
[41] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z3 составляет от приблизительно 0,09s до приблизительно 0,02s.
[42] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z3 составляет от приблизительно 0,08s до приблизительно 0,03s.
[43] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z3 составляет от приблизительно 0,07s до приблизительно 0,04s.
[44] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z1 в 2B составляет от приблизительно 0,88s до приблизительно 0,92s.
[45] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z1 в 2B составляет от приблизительно 0,86s до приблизительно 0,94s.
[46] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z1 в 2B составляет от приблизительно 0,89s до приблизительно 0,91s.
[47] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z1 в 2B составляет от приблизительно 0,86s до приблизительно 0,94s.
[48] Согласно определенным вариантам осуществления объединенное количество звеньев Z2 и Z4 в 2B составляет от приблизительно 0,25t до приблизительно 0,05t.
[49] Согласно определенным вариантам осуществления объединенное количество звеньев Z2 и Z4 в 2B составляет от приблизительно 0,23t до приблизительно 0,05t.
[50] Согласно определенным вариантам осуществления объединенное количество звеньев Z2 и Z4 в 2B составляет от приблизительно 0,21t до приблизительно 0,05t.
[51] Согласно определенным вариантам осуществления объединенное количество звеньев Z2 и Z4 в 2B составляет от приблизительно 0,19t до приблизительно 0,05t.
[52] Согласно определенным вариантам осуществления объединенное количество звеньев Z2 и Z4 в 2B составляет от приблизительно 0,17t до приблизительно 0,05t.
[53] Согласно определенным вариантам осуществления объединенное количество звеньев Z2 и Z4 в 2B составляет от приблизительно 0,15t до приблизительно 0,05t.
[54] Согласно определенным вариантам осуществления объединенное количество звеньев Z2 и Z4 в 2B составляет от приблизительно 0,13t до приблизительно 0,05t.
[55] Согласно определенным вариантам осуществления объединенное количество звеньев Z2 и Z4 составляет от приблизительно 0,12t до приблизительно 0,06t.
[56] Согласно определенным вариантам осуществления объединенное количество звеньев Z2 и Z4 составляет от приблизительно 0,11t до приблизительно 0,07t.
[57] Согласно определенным вариантам осуществления объединенное количество звеньев Z2 и Z4 составляет от приблизительно 0,25t до приблизительно 0,06t.
[58] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z2 составляет от 0,02t до 0,12t.
[59] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z2 составляет от 0,04t до 0,10t.
[60] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z2 составляет от 0,06t до 0,08t.
[61] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z2 составляет от 0,07t до 0,08t.
[62] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z2 составляет от 0,075t до 0,08t.
[63] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z2 составляет 0,077t.
[64] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z4 составляет от 0,01t до 0,12t.
[65] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z4 составляет от 0,02t до 0,12t.
[66] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z4 составляет от 0,04t до 0,10t.
[67] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z4 составляет от 0,06t до 0,08t.
[68] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z4 составляет от 0,01t до 0,04t.
[69] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z4 составляет от 0,02t до 0,03t.
[70] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z4 составляет от 0,02t до 0,025t.
[71] Согласно определенным вариантам осуществления количество звеньев Z4 составляет 0,023t.
[72] Согласно определенным вариантам осуществления обратимый линкер пролекарственного средства L2, присоединяющий лекарственное средство к спейсеру L4, характеризуется формулой XIIa
XIIa
где
пунктирная линия указывает на прикрепление к азоту соединения лекарственного средства (не показано) путем образования амидной связи;
X представляет собой C(R4R4a); N(R4); O; C(R4R4a)-C(R5R5a); C(R5R5a)-C(R4R4a); C(R4R4a)-N(R6); N(R6)-C(R4R4a); C(R4R4a)-O; O-C(R4R4a) или C(R7R7a);
X1 представляет собой C или S(O);
X2 представляет собой C(R8R8a) или C(R8R8a)-C(R9R9a);
=X3 представляет собой =O; =S или =N-CN;
R1, R1a, R2, R2a, R4, R4a, R5, R5a, R6, R8, R8a, R9, R9a независимо выбраны из группы, состоящей из H и C1-6 алкила;
R3, R3a независимо выбраны из группы, состоящей из H и C1-6 алкила, при условии, что в случае, когда один из R3, R3a или оба отличаются от H, они соединены с N, к которому они прикреплены через SP3-гибридизированный атом углерода;
R7 представляет собой N(R10R10a) или NR10-(C=O)-R11;
R7a, R10, R10a, R11 представляют собой независимо друг от друга H или C1-10 алкил;
необязательно одна или несколько из пар R1a/R4a, R1a/R5a, R1a/R7a, R4a/R5a, R8a/R9a образуют химическую связь;
необязательно одна или несколько из пар R1/R1a, R2/R2a, R4/R4a, R5/R5a, R8/R8a, R9/R9a соединены вместе с атомом, к которому они прикреплены, с образованием C3-10 циклоалкила или 3-10-членного гетероциклила;
необязательно одна или несколько из пар R1/R4, R1/R5, R1/R6, R1/R7a, R4/R5, R4/R6, R8/R9, R2/R3 соединены вместе с атомами, к которым они прикреплены, с образованием кольца A;
необязательно R3/R3a соединены вместе с атомом азота, к которому они прикреплены, с образованием 3-10-членного гетероцикла;
кольцо A выбрано из группы, состоящей из фенила; нафтила; инденила; инданила; тетралинила; C3-10 циклоалкила; 3-10-членного гетероциклила и 8-11-членного гетеробициклила; и
где группа согласно формуле XIIa замещена L4 при условии, что водород, помеченный звездочкой в формуле (XIIa), не замещен L4 или другим заместителем;
где L4 представляет собой одинарную химическую связь или фрагмент спейсера, как определено в настоящем документе.
[73] Согласно определенным вариантам осуществления обратимый линкер пролекарственного средства L2 характеризуется формулой VIIa:
VIIa
где:
каждая звездочка представляет независимый сайт прикрепления к спейсеру L4.
[74] Согласно определенным вариантам осуществления обратимый линкер пролекарственного средства L2 вместе со спейсером L4 характеризуется формулой VIIc:
VIIc.
где:
крайняя правая волнистая линия представляет место прикрепления к атому азота лекарственного средства; и
крайняя левая волнистая линия представляет место прикрепления к звену Z2 гиалуроновой кислоты 2B.
[75] Согласно определенным вариантам осуществления спейсер L4, соединяющий полимер гиалуроновой кислоты 2A с полимером гиалуроновой кислоты 2B (путем соединения звена Z3 полимера 2A со звеном Z4 полимера 2B), характеризуется формулой:
где:
крайняя правая волнистая линия представляет место прикрепления к звену Z3 на полимере гиалуроновой кислоты 2A; и
крайняя левая волнистая линия представляет место прикрепления к звену Z4 на полимере гиалуроновой кислоты 2B.
[76] Спейсер L4, соединяющий полимер гиалуроновой кислоты 2A с полимером гиалуроновой кислоты 2B, согласно определенным вариантам осуществления может быть перевернут по ориентации так, что крайняя правая волнистая линия в приведенной выше формуле представляет место прикрепления к звену Z4 на полимере гиалуроновой кислоты 2B; а крайняя левая волнистая линия представляет место прикрепления к звену Z3 на полимере гиалуроновой кислоты 2A.
[77] Согласно определенным вариантам осуществления спейсер L4, соединяющий обратимый линкер пролекарственного средства L2 с полимером гиалуроновой кислоты 2B, характеризуется формулой
где:
крайняя правая волнистая линия представляет место прикрепления к L2; и
крайняя левая волнистая линия представляет место прикрепления к звену Z2 на полимере гиалуроновой кислоты 2B;
где:
L1 представляет собой спейсер; и
L3 представляет собой биоразлагаемый спейсер.
[78] Согласно определенным вариантам осуществления звено Z4 представляет собой;
где L1, L3 и Ra2 являются такими, как определено в настоящем документе.
[79] Согласно определенным вариантам осуществления звено Z2 представляет собой;
где L1, L2, L3 и Ra2 являются такими, как определено в настоящем документе.
[80] Согласно определенным вариантам осуществления спейсер L4, соединяющий полимер гиалуроновой кислоты 2A с полимером гиалуроновой кислоты 2B, характеризуется формулой:
где:
крайняя правая волнистая линия представляет место прикрепления к звену Z3 на полимере гиалуроновой кислоты 2B; и
крайняя левая волнистая линия представляет место прикрепления к звену Z4 на полимере гиалуроновой кислоты 2A;
LA представляет собой спейсер;
LB представляет собой спейсер; и
LC представляет собой биоразлагаемый спейсер.
[81] Согласно определенным вариантам осуществления спейсер L4, соединяющий полимер гиалуроновой кислоты 2A с полимером гиалуроновой кислоты 2B, характеризуется формулой:
где:
крайняя правая волнистая линия представляет место прикрепления к звену Z3 на полимере гиалуроновой кислоты 2A; и
крайняя левая волнистая линия представляет место прикрепления к звену Z4 на полимере гиалуроновой кислоты 2B.
[82] Согласно определенным вариантам осуществления спейсер L4, соединяющий обратимый линкер пролекарственного средства L2 с полимером гиалуроновой кислоты 2A, характеризуется формулой
где:
крайняя правая волнистая линия представляет место прикрепления к L2; и
крайняя левая волнистая линия представляет место прикрепления к звену Z2 на полимере гиалуроновой кислоты 2B;
где:
LA представляет собой спейсер;
LB представляет собой спейсер; и
LC представляет собой биоразлагаемый спейсер.
[83] Согласно определенным вариантам осуществления LA представляет собой необязательно замещенный и/или необязательно прерванный C1-10 алкилен.
[84] Согласно определенным вариантам осуществления LA представляет собой неразветвленный C2-4 алкилен.
[85] Согласно определенным вариантам осуществления LB представляет собой неразветвленный -(O)-C1-5 алкилен.
[86] Согласно определенным вариантам осуществления LC представляет собой:
где m составляет от 0 до 10, n составляет от 1 до 4, и o составляет от 1 до 4.
[87] Согласно определенным вариантам осуществления LC представляет собой:
.
[88] Согласно определенным вариантам осуществления спейсер L4, соединяющий обратимый линкер пролекарственного средства L2 с полимером гиалуроновой кислоты 2B, характеризуется формулой
где:
крайняя правая волнистая линия представляет место прикрепления к звену Z3 на полимере гиалуроновой кислоты 2A; и
крайняя левая волнистая линия представляет место прикрепления к звену Z4 на полимере гиалуроновой кислоты 2B.
[89] Согласно определенным вариантам осуществления звено Z4 представляет собой:
где Ra2 является таким, как определено в настоящем документе.
[90] Согласно определенным вариантам осуществления звено Z2 представляет собой
;
где L2, Ra2 и лекарственное средство являются такими, как определено в настоящем документе.
[91] Согласно определенным вариантам осуществления звено Z2 представляет собой
где Ra2 и лекарственное средство являются такими, как определено в настоящем документе.
[92] Согласно определенным вариантам осуществления объединенный обратимый линкер пролекарственного средства L2 вместе со спейсером L4 характеризуется формулой VIId
VIId
где:
крайняя правая волнистая линия представляет место прикрепления к атому азота лекарственного средства; и
крайняя левая волнистая линия представляет место прикрепления к звену Z2 гиалуроновой кислоты 2B.
[93] Согласно определенным вариантам осуществления лекарственное средство представляет собой антитело.
[94] Согласно определенным вариантам осуществления антитело представляет собой антагонист VEGF.
[95] Согласно определенным вариантам осуществления антитело представляет собой фрагмент антитела к VEGF.
[96] Согласно определенным вариантам осуществления фрагмент антитела представляет собой фрагмент антитела Fab.
[97] Согласно определенным вариантам осуществления фрагмент антитела Fab представляет собой ранибизумаб или LUCENTIS®.
[98] Согласно определенным вариантам осуществления антитело содержит следующие шесть гипервариабельных областей (HVR):
(a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1);
(b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GX1TPX2GGX3X4X5YX6DSVX7X8 (SEQ ID NO: 2), где X1 представляет собой Ile или His, X2 представляет собой Ala или Arg, X3 представляет собой Tyr или Lys, X4 представляет собой Thr или Glu, X5 представляет собой Arg, Tyr, Gln или Glu, X6 представляет собой Ala или Glu, X7 представляет собой Lys или Glu, и X8 представляет собой Gly или Glu;
(c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3);
(d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQX1VSTAVA (SEQ ID NO: 4), где X1 представляет собой Asp или Arg;
(e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно X1ASFLYS (SEQ ID NO: 5), где X1 представляет собой Ser или Met; и
(f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно X1QGYGX2PFT (SEQ ID NO: 6), где X1 представляет собой Gln, Asn или Thr, и X2 представляет собой Ala, Asn, Gln или Arg.
[99] Согласно определенным вариантам осуществления антитело содержит следующие шесть HVR:
(a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1);
(b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYTRYADSVKG (SEQ ID NO: 7), GITPAGGYEYYADSVKG (SEQ ID NO: 21) или GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22);
(c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3);
(d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8);
(e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и
(f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10) или QQGYGNPFT (SEQ ID NO: 23).
[100] Согласно определенным вариантам осуществления антитело содержит следующие шесть HVR:
(a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1);
(b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYTRYADSVKG (SEQ ID NO: 7);
(c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3);
(d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8);
(e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и
(f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10).
[101] Согласно определенным вариантам осуществления антитело дополнительно содержит следующие каркасные области (FR) вариабельного домена тяжелой цепи (VH):
(a) FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTIS (SEQ ID NO: 13);
(b) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQAPGKGLEWVA (SEQ ID NO: 14);
(c) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSKNTAYLQMRSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 15); и
(d) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 16).
[102] Согласно определенным вариантам осуществления антитело дополнительно содержит следующие FR вариабельного домена легкой цепи (VL):
(a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 17);
(b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18);
(c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 19); и
(d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20).
[103] Согласно определенным вариантам осуществления антитело содержит следующие шесть HVR:
[104] (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1);
[105] (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22);
[106] (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3);
[107] (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8);
[108] (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и
(f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGNPFT (SEQ ID NO: 23).
[109] Согласно определенным вариантам осуществления антитело дополнительно содержит следующие FR домена VL:
(a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 17);
(b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18);
(c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 24); и
(d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20).
[110] Согласно определенным вариантам осуществления антитело содержит следующие шесть HVR:
(a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1);
(b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22);
(c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3);
(d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8);
(e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и
(f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10).
[111] Согласно определенным вариантам осуществления антитело дополнительно содержит следующие FR домена VL:
(a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 17), DIQMTQSPESLSASVGDEVTITC (SEQ ID NO: 25) или DIQMTQSPSSLSASVGDEVTITC (SEQ ID NO: 26);
(b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18) или WYQQKPGEAPKLLIY (SEQ ID NO: 27);
(c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 19) или GVPSRFSGSGSGTDFTLTIESLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 28); и
(d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20).
[112] Согласно определенным вариантам осуществления антитело дополнительно содержит следующие FR домена VH:
(a) FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EEQLVEEGGGLVQPGESLELSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 29) или EEQLVEEGGGLVQPGESLRLSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 51);
(b) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQEPGEGLEWVA (SEQ ID NO: 30);
(c) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSENTAYLQMNELRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 31); и
(d) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGELVTVSS (SEQ ID NO: 32).
[113] Согласно определенным вариантам осуществления антитело дополнительно содержит следующие FR домена VH:
(e) FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EEQLVEEGGGLVQPGESLELSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 29) или EEQLVEEGGGLVQPGESLRLSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 52);
(f) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQEPGEGLEWVA (SEQ ID NO: 30);
(g) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSENTAYLQMNELRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 31); и
(h) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGELVTVSS (SEQ ID NO: 32).
[114] Согласно определенным вариантам осуществления антитело содержит (a) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичности последовательности по отношению к аминокислотной последовательности согласно SEQ ID NO: 11, 40 или 42; (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 95% идентичности последовательности по отношению к аминокислотной последовательности согласно SEQ ID NO: 12, 41 или 46; или (c) домен VH, как в (a), и домен VL, как в (b).
[115] Согласно определенным вариантам осуществления антитело содержит (a) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO:11, 40 или 42; (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 12, 41 или 46; или (c) домен VH, как в (a), и домен VL, как в (b).
[116] Согласно определенным вариантам осуществления антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO:11, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO:12.
[117] Согласно определенным вариантам осуществления антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO:48, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO:50.
[118] Согласно определенным вариантам осуществления антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO:49, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO:50.
[119] Согласно определенным вариантам осуществления конъюгат антитело с гидрогелем характеризуется офтальмологическим эффективным периодом полужизни, который является увеличенным по отношению к эталонному антителу, которое не является ковалентно прикрепленным к гидрогелю.
[120] Согласно определенным вариантам осуществления офтальмологический эффективный период полужизни является увеличенным по меньшей мере приблизительно 2-кратно по отношению к эталонному антителу.
[121] Согласно определенным вариантам осуществления офтальмологический эффективный период полужизни является увеличенным по меньшей мере приблизительно 5-кратно по отношению к эталонному антителу.
[122] Согласно определенным вариантам осуществления офтальмологический эффективный период полужизни является увеличенным по меньшей мере приблизительно 8-кратно по отношению к эталонному антителу.
[123] Согласно определенным вариантам осуществления офтальмологический эффективный период полужизни является увеличенным по меньшей мере приблизительно 10-кратно по отношению к эталонному антителу.
[124] Согласно определенным вариантам осуществления офтальмологический эффективный период полужизни является увеличенным по меньшей мере приблизительно 12-кратно по отношению к эталонному антителу.
[125] Согласно определенным вариантам осуществления офтальмологический эффективный период полужизни является увеличенным по меньшей мере приблизительно 15-кратно по отношению к эталонному антителу.
[126] Согласно определенным вариантам осуществления офтальмологический эффективный период полужизни является увеличенным по меньшей мере приблизительно 16-кратно по отношению к эталонному антителу.
[127] Согласно определенным вариантам осуществления офтальмологический эффективный период полужизни представляет собой витреальный период полужизни.
[128] Согласно определенным вариантам осуществления эталонное антитело является идентичным антителу конъюгата антитела.
[129] Согласно определенным вариантам осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для применения в качестве лекарственного средства, для применения при производстве лекарственного средства для лечения нарушения, ассоциированного с патологическим ангиогенезом у субъекта, для применения в снижении или ингибировании ангиогенеза у субъекта с нарушением, ассоциированным с патологическим ангиогенезом, и/или для использования при лечении нарушением, ассоциированного с патологическим ангиогенезом у субъекта
[130] Согласно определенным вариантам осуществления фармацевтическая композиция содержит конъюгат гидрогеля и фармацевтически приемлемый носитель, вспомогательное вещество или разбавитель.
[131] Согласно определенным вариантам осуществления фармацевтическая композиция дополнительно содержит второе средство, причем второе средство выбрано из группы, состоящей из антитела, антиангиогенного средства, цитокина, антагониста цитокина, кортикостероида, обезболивающего средства и соединения, которое связывается со второй биологической молекулой.
[132] Согласно определенным вариантам осуществления фармацевтическая композиция дополнительно содержит второе средство, причем второе средство выбрано из группы, состоящей из антитела, антиангиогенного средства, цитокина, антагониста цитокина, кортикостероида, обезболивающего средства и соединения, которое связывается со второй биологической молекулой.
[133] Согласно определенным вариантам осуществления антиангиогенное средство фармацевтической композиции представляет собой антагонист VEGF.
[134] Согласно определенным вариантам осуществления антагонист VEGF фармацевтической композиции представляет собой антитело к VEGF, антитело к рецептору VEGF, слитый белок растворимого рецептора VEGF, аптамер, DARPin® против VEGF или ингибитор тирозинкиназы VEGFR.®
[135] Согласно определенным вариантам осуществления антитело к VEGF фармацевтической композиции представляет собой ранибизумаб (LUCENTIS®), RTH-258 или биспецифическое антитело к VEGF.
[136] Согласно определенным вариантам осуществления биспецифическое антитело к VEGF представляет собой антитело к VEGF/к Ang2.
[137] Согласно определенным вариантам осуществления антитело к VEGF/к Ang2 представляет собой RG-7716.
[138] Согласно определенным вариантам осуществления слитый белок растворимого рецептора VEGF представляет собой афлиберцепт (EYLEA®).
[139] Согласно определенным вариантам осуществления аптамер представляет собой пегаптаниб (MACUGEN®).
[140] Согласно определенным вариантам осуществления DARPin® против VEGF представляет собой абиципар пегол.
[141] Согласно определенным вариантам осуществления ингибитор тирозинкиназы VEGFR выбран из группы, состоящей из следующего: 4-(4-бром-2-фторанилино)-6-метокси-7-(1-метилпиперидин-4-илметокси)хиназолин (ZD6474), 4-(4-фтор-2-метилиндол-5-илокси)-6-метокси-7-(3-пирролидин-1-илпропокси)хиназолин (AZD2171), ваталаниб (PTK787), семаксаниб (SU5416) и SUTENT® (сунитиниб).
[142] Согласно определенным вариантам осуществления вторая биологическая молекула выбрана из группы, состоящей из следующего:IL-1β; IL-6; IL-6R; IL-13; IL-13R; PDGF; ангиопоэтин; ангиопоэтин 2; Tie-2; S1P; интегрины αvβ3, αvβ5 и α5β1; бетацеллюлин; апелин/APJ; эритропоэтин; фактор комплемента D; TNFα; HtrA1; рецептор VEGF; рецептор ST-2 и белок, генетически связанный с риском AMD.
[143] Согласно определенным вариантам осуществления рецептор VEGF представляет собой VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, mbVEGFR или sVEGFR.
[144] Согласно определенным вариантам осуществления белок, генетически связанный с риском AMD, выбран из группы, состоящей из компонентов пути комплемента C2, фактора B, фактора H, CFHR3, C3b, C5, C5a и C3a; HtrA1; ARMS2; TIMP3; HLA; IL-8; CX3CR1; TLR3; TLR4; CETP; LIPC, COL10A1 и TNFRSF10A.
[145] Согласно определенным вариантам осуществления соединение, которое связывается со второй биологической молекулой, представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
[146] Согласно определенным вариантам осуществления антигенсвязывающий фрагмент антитела выбран из группы, состоящей из фрагментов Fab, Fab-C, Fab’-SH, Fv, scFv и (Fab’)2.
[147] Согласно определенным вариантам осуществления нарушение, ассоциированное с патологическим ангиогенезом, представляет собой офтальмологическое нарушение.
[148] Согласно определенным вариантам осуществления офтальмологическое нарушение выбрано из группы, состоящей из следующего: возрастная макулярная дегенерация (AMD), макулярная дегенерация, макулярный отек, диабетический макулярный отек (DME) (включая в себя очаговый, нецентровый DME и диффузный, DME с вовлечением центра макулы), ретинопатия, диабетическая ретинопатия (DR) (включая в себя пролиферативную DR (PDR), непролиферативную DR (NPDR) и высотную DR), другие связанные с ишемией ретинопатии, ретинопатия недоношенных (ROP), окклюзия вен сетчатки (RVO) (включая в себя центральную (CRVO) и разветвленную (BRVO) формы), CNV (включая в себя миопическую CNV), неоваскуляризация роговицы, заболевание, ассоциированное с неоваскуляризацией роговицы, неоваскуляризация сетчатки, заболевание, ассоциированное с ретинальной/хориоидальной неоваскуляризацией, патологическая миопия, болезнь фон Хиппель-Линдау, гистоплазмоз глаза, семейная экссудативная витреоретинопатия (FEVR), болезнь Коутса, болезнь Норри, синдром остеопороза-псевдоглиомы (OPPG), субконъюнктивальное кровоизлияние, рубеоз радужки, неоваскулярные заболевания глаз, неоваскулярная глаукома, пигментный ретинит (RP), гипертоническая ретинопатия, ангиоматозная пролиферация сетчатки, макулярная телеангиэктазия, неоваскуляризация радужки, внутриглазная неоваскуляризация, дегенерация сетчатки, кистозный макулярный отек (CME), васкулит, отек диска зрительного нерва, ретинит, конъюнктивит (включая в себя инфекционный конъюнктивит и неинфекционный (например, аллергический) конъюнктивит), врожденный амавроз Лебера, увеит (включая в себя инфекционный и неинфекционный увеит), хориоидит, глазной гистоплазмоз, блефарит, сухость глаз, травматическое повреждение глаз и болезнь Шегрена.
[149] Согласно определенным вариантам осуществления офтальмологическое нарушение представляет собой AMD, DME, DR или RVO.
[150] Согласно определенным вариантам осуществления офтальмологическое нарушение представляет собой AMD.
[151] Согласно определенным вариантам осуществления AMD представляет собой влажную форму AMD.
[152] Согласно определенным вариантам осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения офтальмологического показания, причем способ предусматривает введение терапевтического количества раствора фармацевтических композиций, описанных в настоящем документе.
[153] Согласно определенным вариантам осуществления введение фармацевтической композиции является внутриглазным.
[154] Согласно определенным вариантам осуществления фармацевтическую композицию вводят с помощью инъекции в стекловидное тело субъекта.
[155] Согласно определенным вариантам осуществления фармацевтическую композицию вводят с помощью инъекции с использованием иглы, характеризующейся калибром 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 или 32.
[156] Согласно определенным вариантам осуществления офтальмологическое показание выбрано из следующего: возрастная макулярная дегенерация (AMD), макулярная дегенерация, макулярный отек, диабетический макулярный отек (DME) (включая в себя очаговый, нецентровый DME и диффузный, DME с вовлечением центра макулы), ретинопатия, диабетическая ретинопатия (DR) (включая в себя пролиферативную DR (PDR), непролиферативную DR (NPDR) и высотную DR), другие связанные с ишемией ретинопатии, ретинопатия недоношенных (ROP), окклюзия вен сетчатки (RVO) (включая в себя центральную (CRVO) и разветвленную (BRVO) формы), CNV (включая в себя миопическую CNV), неоваскуляризация роговицы, заболевание, ассоциированное с неоваскуляризацией роговицы, неоваскуляризация сетчатки, заболевание, ассоциированное с ретинальной/хориоидальной неоваскуляризацией, патологическая миопия, болезнь фон Хиппель-Линдау, гистоплазмоз глаза, семейная экссудативная витреоретинопатия (FEVR), болезнь Коутса, болезнь Норри, синдром остеопороза-псевдоглиомы (OPPG), субконъюнктивальное кровоизлияние, рубеоз радужки, неоваскулярные заболевания глаз, неоваскулярная глаукома, пигментный ретинит (RP), гипертоническая ретинопатия, ангиоматозная пролиферация сетчатки, макулярная телеангиэктазия, неоваскуляризация радужки, внутриглазная неоваскуляризация, дегенерация сетчатки, кистозный макулярный отек (CMЕ), васкулит, отек диска зрительного нерва, ретинит, конъюнктивит (включая в себя инфекционный конъюнктивит и неинфекционный (например, аллергический) конъюнктивит), врожденный амавроз Лебера, увеит (включая в себя инфекционный и неинфекционный увеит), хориоидит, глазной гистоплазмоз, блефарит, сухость глаз, травматическое повреждение глаз и болезнь Шегрена.
[157] Согласно определенным вариантам осуществления настоящее изобретение относится к способу получения конъюгата гидрогеля с лекарственным средством, причем способ предусматривает следующее:
(a) получение первой гиалуроновой кислоты или ее соли щелочного металла или производного, содержащих на себе по меньшей мере три первые реакционноспособные группы;
(b) получение второй гиалуроновой кислоты или ее соли щелочного металла или производного, содержащих на себе по меньшей мере две вторые реакционноспособные группы, где первая и вторая реакционноспособные группы способны реагировать друг с другом с образованием ковалентной связи;
(c) присоединение по меньшей мере одного лекарственного средства к одной из первых реакционноспособных групп; и
(d) поперечное сшивание первой и второй гиалуроновых кислот с помощью реакции первой реакционноспособной группы и второй реакционноспособной группы с образованием поперечно-сшивающего линкера и образованием конъюгата гидрогеля.
[158] Согласно определенным вариантам осуществления лекарственное средство присоединяют к первой гиалуроновой кислоте посредством обратимого линкера пролекарственного средства.
[160] Согласно определенным вариантам осуществления лекарственное средство присоединяют к обратимому линкеру пролекарственного средства и очищают с образованием очищенного конъюгата лекарственного средства с обратимым линкером пролекарственного средства перед присоединением к первой гиалуроновой кислоте, причем конъюгат лекарственного средства с обратимым линкером пролекарственного средства очищают следующим образом:
(a) метят конъюгат лекарственного средства с обратимым линкером пролекарственного средства с помощью метки очистки с образованием смеси меченого конъюгата лекарственного средства с обратимым линкером пролекарственного средства;
(b) очищают меченый моноконъюгат лекарственного средства с обратимым линкером пролекарственного средства от смеси с помощью хроматографического разделения; и
(c) удаляют метку очистки из меченого моноконъюгата лекарственного средства с обратимым линкером пролекарственного средства с образованием очищенного конъюгата лекарственного средства с обратимым линкером пролекарственного средства.
[161] Согласно определенным вариантам осуществления поперечно-сшивающий линкер содержит фрагмент биоразлагаемого спейсера.
[162] Согласно определенным вариантам осуществления поперечно-сшивающий линкер содержит фрагмент сложного эфира азелаиновой кислоты.
Краткое описание графических материалов
[163] Фигура 1 представляет собой конъюгат поперечно-сшитой гиалуроновой кислоты с лекарственным средством согласно настоящему изобретению.
[164] Фигура 2 представляет собой схему реакции в соответствии с одним аспектом настоящего раскрытия для получения функционализированной малеимидом гиалуроновой кислоты (HA) и функционализированной малеимидом гиалуроновой кислоты, содержащей конъюгированное лекарственное средство.
[165] Фигура 3 представляет собой схему реакции в соответствии с одним аспектом настоящего раскрытия для получения гиалуроновой кислоты, функционализированной тиолом с защитной группой, функционализированной тиолом гиалуроновой кислоты и композиции поперечно-сшитой гиалуроновой кислоты и пролекарственного средства.
[166] Фигура 4 представляет собой схему реакции в соответствии с одним аспектом настоящего раскрытия для получения функционализированной малеимидом гиалуроновой кислоты и гиалуроновой кислоты, функционализированной дисульфидом с защитной группой.
[167] Фигура 5 представляет собой схему реакции в соответствии с одним аспектом настоящего раскрытия для получения функционализированной тиолом гиалуроновой кислоты, функционализированной тиолом гиалуроновой кислоты с конъюгированным лекарственным средством и композиции поперечно-сшитой гиалуроновой кислоты и пролекарственного средства.
[168] Фигура 6 представляет собой схему реакции в соответствии с одним аспектом настоящего раскрытия для получения функционализированной амином гиалуроновой кислоты и получения из нее функционализированной малеимидом гиалуроновой кислоты.
[169] Фигура 7 представляет собой схему реакции в соответствии с одним аспектом настоящего раскрытия, на которой показана функционализированная малеимидом гиалуроновая кислота и функционализированная малеимидом гиалуроновая кислота с конъюгированным лекарственным средством.
[170] Фигура 8 представляет собой схему реакции в соответствии с одним аспектом настоящего раскрытия для получения функционализированной амином гиалуроновой кислоты, гиалуроновой кислоты, функционализированной дисульфидом с защитной группой, и функционализированной тиолом гиалуроновой кислоты.
[171] Фигура 9 представляет собой схему реакции в соответствии с одним аспектом настоящего раскрытия для получения композиции поперечно-сшитой гиалуроновой кислоты и пролекарственного средства.
[172] Фигура 10 представляет собой схему реакции в соответствии с одним аспектом настоящего раскрытия для получения композиции поперечно-сшитой гиалуроновой кислоты и пролекарственного средства.
[173] Фигура 11 представляет собой схему реакции в соответствии с одним аспектом настоящего раскрытия для получения композиции поперечно-сшитой гиалуроновой кислоты и пролекарственного средства.
[174] На фигуре 12 показана витреальная фармакокинетика (PK) RabFab после высвобождения из конъюгата поперечно-сшитой HA с RabFab у кроликов NZW (красные точки и линия) по сравнению с этим параметром у свободного RabFab (синие точки и линия).
[175] На фигурах 13A и 13B проиллюстрирована минимальная фрагментация и движение частиц плацебо - гидрогеля поперечно-сшитой HA в глазу NHP.
[176] На фигуре 14 проиллюстрирована переносимость в глазу кролика конъюгата гидрогеля поперечно-сшитой HA с RabFab.
[177] На фигуре 15 проиллюстрирована переносимость в глазу яванского макака конъюгата поперечно-сшитой HA с G6.3.1 AAR.
Подробное раскрытие настоящего изобретения
[178] Согласно некоторым аспектам настоящее раскрытие в целом относится к способам получения пролекарственных композиций на основе гидрогеля, содержащих поперечно-сшитую гиалуроновую кислоту (HA), или ее производное или соль, где система поперечно-сшивающего линкера содержит биоразлагаемый спейсер, где поперечно-сшитая HA содержит лекарственное средство, конъюгированное с линкером, и где линкер способен высвобождать лекарственное средство при физиологических условиях. Согласно некоторым таким аспектам гидрогелевые композиции HA и пролекарственного средства согласно настоящему раскрытия характеризуются формулами 1, 10, 16 и 26, как показано на фигурах 1, 3, 5 и 9 соответственно. В формулах, структурах и схемах реакции в настоящем документе, любую открытую валентность на атоме углерода, азота, кислорода или серы следует понимать как представляющую атом водорода.
[179] Обращаясь к фигуре 1, показано соединение 1 - конъюгат поперечно-сшитой HA с лекарственным средством согласно настоящему изобретению. Соединение 1 можно получить, как описано дополнительно ниже. В соединении 1 фрагмент лекарственного средства соединен с фрагментом HA посредством линкера L2, который представляет собой фрагмент обратимого линкера пролекарственного средства, и спейсера L4, как описано дополнительно в настоящем документе. Фрагмент лекарственного средства может содержать любой терапевтический или биологически активный фрагмент, как также описанно дополнительно в настоящем документе. Фрагменты HA соединены или поперечно-сшиты вместе с помощью спейсера L4, и L2-фрагмент лекарственного средства соединен с фрагментом HA с помощью спейсера L4. Спейсеры L4 могут являться одинаковыми или различными в каждом случае и согласно многим вариантам осуществления могут являться биоразлагаемыми, как описано дополнительно в настоящем документе.
[180] Спейсеры L4 могут варьироваться в соответствии с типом химической реакции, используемой для поперечного сшивания фрагментов HA и прикрепления конъюгата L2-фрагмент лекарственного средства к фрагменту HA. Согласно многим вариантам осуществления в настоящем документе конъюгаты поперечно-сшитой HA с лекарственным средством согласно настоящему изобретению основаны на тиол-малеимидной химии и, таким образом, спейсеры L4 содержат тиосукцинимидные группы, которые являются результатом реакции тиолов и малеимидов. Тем не менее, следует понимать, что различные типы химических реакций можно использовать для поперечного сшивания фрагментов HA и прикрепления конъюгата L2-фрагмент лекарственного средства к фрагменту HA согласно настоящему изобретению, и они также находятся в пределах объема настоящего раскрытия. Например, клик-химию на основе реакции алкинов с азидами, как раскрыта в международных патентных публикациях WO2003101972, WO2011136645, WO2013036748 и WO2013171485, раскрытия которых включены в настоящий документ посредством ссылки, можно использовать для поперечного сшивания фрагментов HA и прикрепления конъюгата L2-фрагмент лекарственного средства к фрагменту HA. Химия поперечного сшивания на основе акрила, химия поперечного сшивания амина и эпоксида и другие химические реакции, образующие связь, также можно использовать согласно настоящему изобретению.
[181] Обращаясь также к фигурам 2 и 3, показан гидрогелевое соединение 10 -конъюгат поперечно-сшитой HA с лекарственным средством (фигура 3) согласно настоящему изобретению. В соединении 10 спейсер L4 соединения 1, который соединяет фрагменты HA вместе, более конкретно показан как
и спейсер L4, соединяющий L2-фрагмент лекарственного средства с фрагментом HA, показан более конкретно как
где L1 и L3 являются такими, как определено в настоящем документе. В общем, соединение 10 можно получить в соответствии со способом, изображенном на фигурах 2 и 3. На первой стадии соединение 2 - первую HA (или ее производное или соль) конъюгируют с соединением 3 - малеимидом с образованием соединения 4, содержащего малеимидные реакционноспособные группы, конъюгированные с HA с помощью спейсера L1.
[182] На второй стадии соединение 5 - конъюгат тиол-L2-лекарственное средство реагирует с малеимидными реакционноспособными группами соединения 4 с образованием соединения 6, содержащего конъюгированные фрагменты конъюгата -S-L2-лекарственное средство. Согласно некоторым аспектам L2 представляет собой фрагмент обратимого линкера пролекарственного средства, как описано дополнительно в другом месте в настоящем документе, который способен к контролируемому высвобождению лекарственного средства при физиологических условиях. Тиоловая группа в соединении 5 может являться частью обратимого линкера пролекарственного средства L2. Согласно некоторым аспектам лекарственное средство представляет собой терапевтическое средство, такое как молекула против VEGF, которая является применимой для лечения заболеваний глаза. Эквиваленты малеимидных групп на соединении 4 превышают эквиваленты соединения 5 - конъюгата лекарственного средства, так что соединение 6 содержит свободные малеимидные группы.
[182] На третьей стадии соединение 2 - вторую HA (или ее производное или соль) конъюгируют с защищенным (показано с помощью защитной группы PG) тиоловым соединением 7 с образованием соединения 8, содержащего защищенные тиоловые группы, конъюгированного с HA с помощью спейсера L3. Согласно некоторым аспектам L3 представляет собой биоразлагаемый спейсер фрагмент.
[184] На четвертой стадии защитные группы соединения 8 удаляют с образованием соединения 9, содержащего тиоловые группы. Согласно определенным вариантам осуществления защитная группа может образовывать дисульфид с тиоловыми группами, так что удаление защитной группы может быть достигнуто с помощью восстанавливающего средства.
[185] На пятой стадии соединение 6 и соединение 9 объединяют и приводят в реакцию с образованием соединения 10 - гидрогеля поперечно-сшитой HA с пролекарственным средством.
[186] Степень функционализации малеимида и тиола, как показано на фигурах, является только иллюстративной, и следует понимать, что не все карбоксилатные группы в соединении 2 - HA подвергаются реакции, и согласно большинству вариантов осуществления большинство карбоксилатных групп не прореагировало. Соединение 4 - функционализированная малеимидом HA на фиг. 2 будет обладать достаточной степенью функционализации, так что часть малеимидных функциональных групп в соединении 4 будет доступна для прикрепления лекарственного средства (как показано в соединении 6), а остальные малеимидные группы доступны для прохождения реакции поперечного сшивания с тиоловыми группами соединения 9, в конечном итоге, обеспечивает получение пролекарственной композиции 10 на основе гидрогеля поперечно-сшитой НА согласно настоящему изобретению. Например, степень функционализации малеимидного соединения 4 может находиться в диапазоне от приблизительно 5% до приблизительно 15%, тогда как степень функционализации тиолового соединения 9 может находиться в диапазоне от приблизительно 1% до приблизительно 7%.
[187] Согласно определенным вариантам осуществления степень функционализации соединения 4 - HA малеимидом может находиться в диапазоне от приблизительно 6% до приблизительно 14%, от приблизительно 7% до приблизительно 13%, от приблизительно 8% до приблизительно 12%, от приблизительно 10% до приблизительно 12% и от приблизительно 9% до приблизительно 11%. Степень функционализации соединения 9 - HA тиолом, как показано на фигуре 3, может, например, варьироваться от приблизительно 1% до приблизительно 7%, от приблизительно 2% до приблизительно 6% и от приблизительно 3% до приблизительно 5%.
[188] Согласно определенным вариантам осуществления степень функционализации малеимидом на соединении 4 - HA, как показано на фигуре 2, может составлять приблизительно 10%, так что приблизительно одна из десяти карбоксилатных групп на соединении 2 - первой HA дериватизирована малеимидом. Другими словами, если соединение 2 - HA содержит x число карбоксилатных групп, то соединение 4 включает в себя 0,1× малеимидных групп. Степень функционализации тиолом на соединении 9 - HA, как показано на фигуре 3, может составлять приблизительно 4%, или для x карбоксилатных групп на соединении 2 - HA, существуют 0,04× тиоловых групп на соединении 9 (и соответственно 0,04× защищенных тиоловых групп на соединении 8).
[189] В соединении 6 приблизительно 77% малеимидов в среднем будут замещены лекарственным средством, при этом оставшиеся приблизительно 23% используют для реакции поперечного сшивания с соединением 9 для получения поперечно-сшитого геля 10. Таким образом, например, 116 кДа HA, которая является на 10% функционализированной малеимидом, будет содержать приблизительно 28 малеимидных групп, из которых приблизительно 22 малеимидных групп будут заняты лекарственным средством.
[190] Обращаясь теперь к фигурам 4 и 5, показано получение соединения 16.
[191] На первой стадии a первой HA соединение 2 (или ее производное или соль) конъюгируют с малеимидом - соединением 3 с образованием соединения 11, содержащего малеимидные реакционноспособные группы, конъюгированные с HA с помощью спейсера L3 .
[192] На второй стадии вторую HA - соединение 2 (или ее производное или соль) конъюгируют с защищенным (PG) дисульфидом - соединением 7 с образованием соединения 12, содержащего защищенные дисульфидные группы, конъюгированные с HA с помощью спейсера L1. Согласно некоторым аспектам L1 представляет собой биоразлагаемый спейсер фрагмент.
[193] На третьей стадии защитные группы соединения 12 удаляют с образованием соединения 13, содержащего тиоловые группы.
[194] На четвертой стадии соединение 14 - конъюгат малеимид-L2-лекарственное средство реагирует с тиоловыми реакционноспособными группами соединения 13 с образованием соединения 15, содержащего фрагменты конъюгированного лекарственного средства. Эквиваленты тиоловых групп превышают эквиваленты соединения 14, так что соединение 15 содержит свободные тиоловые группы. Согласно некоторым аспектам L2 представляет собой фрагмент обратимого линкера пролекарственного средства, который способен к контролируемому высвобождению лекарственного средства при физиологических условиях. Согласно некоторым аспектам лекарственное средство представляет собой молекулу против VEGF.
[195] На стадии 5 соединение 11 и соединение 15 объединяют, так что свободные малеимидные и тиоловые группы на них, соответственно, реагируют с образованием соединения 16 - гидрогеля поперечно-сшитой HA, содержащего пролекарственное средство. В соединении 16 спейсер L4, как показано на фигуре 1, который соединяет фрагменты HA вместе, более конкретно представлен следующим образом:
и спейсер L4, соединяющий L2-фрагмент лекарственного средства с фрагментом HA представлен более конкретно как
где L1 и L3 являются такими, как определено в настоящем документе.
[196] Как описано выше, степень функционализации карбоксилатных групп на HA - соединениях 2, как показано на фигурах, является произвольной и представлена в иллюстративных целях. Функционализированная тиолом HA - соединение 13 (и функционализированное защищенным тиолом соединение 12) будет иметь более высокую степень функционализации, чем функционализированная малеимидом НА - соединение 11. Часть тиоловых функциональных групп в соединении 13 будут использовать для прикрепления лекарственного средства, а оставшиеся тиоловые группы доступны для реакции поперечного сшивания с малеимидными группами соединения 11 для получения пролекарственной композиции 16 на основе гидрогеля поперечно-сшитой HA. Например, степень функционализация тиолом соединения 13 может находиться в диапазоне от приблизительно 5% до приблизительно 15%, при этом степень функционализации малеимидом соединения 11 может находиться в диапазоне от приблизительно 1% до приблизительно 7%. Изменение степени функционализации тиола и малеимида обеспечивает различные плотности поперечных связей и различные степени загрузки лекарственного средства в биоконъюгат согласно настоящему изобретению, как описано выше.
[197] Согласно некоторым аспектам, как показано на фиг. 6 - 9, пролекарственные средства на основе гидрогеля поперечно-сшитой НА можно получить путем (1) получения первой функционализированной амином HA и получение из нее малеимидо-функционализированной HA, (2) получения второй функционализированной амином HA и получение из нее функционализированной тиолом HA, (3) конъюгирования конъюгата лекарственное средство-линкер с малеимидо-функционализированной HA, где часть малеимидо-групп не конъюгирована с конъюгатом лекарственное средство-линкер, и (4) образования пролекарственных средств на основе гидрогеля поперечно-сшитой НА путем реакции малеимидо-групп на первой функционализированной HA с тиоловыми группами на второй функционализированной HA.
[198] На фиг. 6, стадии 1, первое соединение 2 - гиалуронат натрия (или его форма кислоты или его производное) реагирует с H2N-LA-NH2 - соединением 17 с образованием амин-функционализированной HA - соединения 18, где степень функционализации амином HA составляет от приблизительно 5% до приблизительно 15%, от приблизительно 6% до приблизительно 14%, от приблизительно 7% до приблизительно 13%, от приблизительно 8% до приблизительно 12%, от приблизительно 9% до приблизительно 11% или согласно некоторым вариантам осуществления приблизительно 10%; приблизительно 11% или приблизительно 12% Согласно некоторым аспектам LA представляет собой фрагмент спейсера, как определено в настоящем документе.
[199] Как показано на фиг. 6, стадии 2, соединение 18 реагирует с конъюгатом N-гидроксисукцинимид-LB-малеимид - соединением 19 с образованием малеимидо-функционализированной HA - соединения 20, изображенного на фиг. 7. Согласно некоторым аспектам LB представляет собой фрагмент спейсера, который образует активированный сложный эфир с сукцинимидной частью реагента 19
[200] Как показано на фиг. 7, стадии 3, соединение 20 реагирует с соединением 5 - конъюгатом тиола с лекарственным средством с образованием соединения 21 - предшественника пролекарственного средства. L2 представляет собой обратимый линкер пролекарственного средства, как определено в настоящем документе.
[201] Как показано на фиг. 8, стадии 4, второе соединение 2 - гиалуронат натрия (или его форма кислоты или его производное) реагирует с H2H-LA-NH2 - соединением 17 с образованием амин-функционализированной HA (соединением 22), где степень функционализации амином HA может варьироваться от приблизительно 1% до приблизительно 7%, от приблизительно 2% до приблизительно 6%, от приблизительно 3% до приблизительно 5% и согласно определенным вариантам осуществления 4%.
[202] Как дополнительно изображено на фиг. 8, стадии 5, соединение 22 реагирует с соединением 23 - N-гидроксисукцинимид-LC-S-защитная группа (защитная группа показана как "PG") с образованием соединения 24. С соединения 24 затем снимают защитную группу на стадии 6 для удаления защитной группы и образования тиол-функционализированной HA - соединения 25. Согласно некоторым аспектам LC представляет собой фрагмент биоразлагаемого спейсера, который образует активированный сложный эфир с сукцинимидной частью реагента 23. Как показано на фиг. 9, предшественник пролекарственного средства - соединение 21 поперечно-сшито с тиол-функционализированной HA - соединением 25 с образованием пролекарственной композиции на основе гидрогеля поперечно-сшитой HA 26. В соединении 26 спейсер L4, как показано на фигуре 1, который соединяет фрагменты HA вместе, более конкретно представлен следующим образом:
и спейсер L4, соединяющий L2-фрагмент лекарственного средства с фрагментом HA представлен более конкретно как
,
где LA, LB и LC являются такими, как определено в настоящем документе.
[203] Как и в варианте осуществления на фигурах 2-3, описанном выше, согласно варианту осуществления на фигурах 6-9 функционализированная малеимидом HA - соединение 20 на фигуре 7 будет характеризоваться более высокой степенью функционализации, чем функционализированная тиолом HA - соединение 25 на фигуре 8. Часть малеимидных функциональных групп в соединении 20 будут использованы для прикрепления лекарственного средства (как показано в соединении 21) и оставшиеся малеимидные группы доступны для реакции поперечного сшивания с тиоловыми группами соединения 25 с получением пролекарственной композиции на основе гидрогеля поперечно-сшитой HA 26 согласно настоящему изобретению. Диапазоны и значения степени функционализации малеимидных и тиоловых групп, диапазоны и значения плотности поперечного сшивания, а также диапазоны и значения для загрузки лекарственного средства, относящиеся к другому месту данного документа, также применимы к варианту осуществления на фиг. 6-9
Определения
[204] Используемая в настоящем документе гиалуроновая кислота (HA) относится к HA и ее любым производным и солям. Согласно определенным вариантам осуществления HA может характеризоваться формулой:
где каждый Ra1 и Ra2 независимо представляет собой водород, низший алкил или другую образующую сложный эфир группу, противоион металла или аммония (включая в себя моно-, ди-, три- и тетра-алкиламмония) или другой тип противоиона. Согласно определенным вариантам осуществления Ra1 независимо выбран из H, C1-4 алкила и противоиона щелочного металла, и каждый Ra2 независимо выбран из H, C1-4 алкила и противоиона щелочного металла. Согласно некоторым аспектам каждый Ra1 представляет собой Na+, и каждый Ra2 представляет собой H. В некоторых возможных производных HA, как показано выше, каждая из гидроксильных групп может быть независимо замещена C1-4 алкиловыми простыми эфирами (не показано) или C1-4 алкиловыми сложными эфирами (не показано), и атом азота каждой из амидных функциональных групп может быть необязательно замещенным (алкилированным) C1-4 алкилом (также не показано). Среднечисленная молекулярная масса HA составляет приблизительно 10 кДа, приблизительно 25 кДа, приблизительно 50 кДа, приблизительно 75 кДа, приблизительно 100 кДа, приблизительно 125 кДа, приблизительно 150 кДа, приблизительно 175 кДа, приблизительно 200 кДа, приблизительно 225 кДа, приблизительно 250 кДа, приблизительно 275 кДа, приблизительно 300 кДа, приблизительно 325 кДа, приблизительно 350 кДа, приблизительно 375 кДа, приблизительно 400 кДа, приблизительно 425 кДа, приблизительно 450 кДа, приблизительно 475 кДа, приблизительно 500 кДа, приблизительно 550 кДа, приблизительно 600 кДа, приблизительно 650 кДа, приблизительно 700 кДа, и их диапазоны, такие как от приблизительно 10 кДа до приблизительно 1000 кДа, от приблизительно 25 кДа до приблизительно 750 кДа, от приблизительно 50 кДа до приблизительно 250 кДа, от приблизительно 75 кДа до приблизительно 200 кДа, от приблизительно 75 кДа до приблизительно 175 кДа, от приблизительно 100 кДа до приблизительно 150 кДа или от приблизительно 100 кДа до приблизительно 125 кДа.
[205] Термин “обратимый линкер пролекарственного средства” или просто “линкер” относится к фрагменту, который на своем одном конце прикреплен к лекарственному средству, например, нейтрализующему VEGF лекарственному средству, через обратимую связь и на другом конце прикреплен через постоянную связь к носителю, такому как гидрогели согласно настоящему изобретению, тем самым связывая лекарственное средство с носителем. Иллюстративные обратимые линкеры пролекарственного средства, применимые согласно настоящему изобретению, раскрыты в международной патентной публикации WO2009095479, раскрытие которой включено в настоящий документ посредством ссылки. Согласно таким вариантам осуществления обратимый линкер пролекарственного средства представляет собой группу согласно формуле XIIa
, XIIa
где
пунктирная линия указывает на прикрепление к азоту соединения лекарственного средства (не показано) путем образования амидной связи;
X представляет собой C(R4R4a); N(R4); O; C(R4R4a)-C(R5R5a); C(R5R5a)-C(R4R4a); C(R4R4a)-N(R6); N(R6)-C(R4R4a); C(R4R4a)-O; O-C(R4R4a) или C(R7R7a);
X1 представляет собой C или S(O);
X2 представляет собой C(R8R8a) или C(R8R8a)-C(R9R9a);
=X3 представляет собой =O; =S или =N-CN;
R1, R1a, R2, R2a, R4, R4a, R5, R5a, R6, R8, R8a, R9, R9a независимо выбраны из группы, состоящей из H; и C1-6 алкила;
R3, R3a независимо выбраны из группы, состоящей из H; и C1-6 алкила, при условии, что в случае, когда один из R3, R3a или оба отличаются от H, они связаны с N, к которому они прикреплены через SP3-гибридизированный атом углерода;
R7 представляет собой N(R10R10a) или NR10-(C=O)-R11;
R7a, R10, R10a, R11 представляют собой независимо друг от друга H; или C1-10 алкил;
необязательно одна или несколько из пар R1a/R4a, R1a/R5a, R1a/R7a, R4a/R5a, R8a/R9a образуют химическую связь;
необязательно одна или несколько из пар R1/R1a, R2/R2a, R4/R4a, R5/R5a, R8/R8a, R9/R9a соединены вместе с атомом, к которому они прикреплены, с образованием C3-10 циклоалкила или 3 - 10-членного гетероциклила;
необязательно одна или несколько из пар R1/R4, R1/R5, R1/R6, R1/R7a, R4/R5, R4/R6, R8/R9, R2/R3 соединены вместе с атомами, к которым они прикреплены, с образованием кольца A;
необязательно R3/R3a соединены вместе с атомом азота, к которому они прикреплены, с образованием 3 - 10-членного гетероцикла;
A выбран из группы, состоящей из фенила; нафтила; инденила; инданила; тетралинила; C3-10 циклоалкила; 3 - 10-членного гетероциклила; и 8 - 11-членного гетеробициклила; и
где группа согласно формуле XIIa замещена L4 при условии, что водород, помеченный звездочкой в формуле (XIIa), не замещен L4 или другим заместителем;
где L4 представляет собой одинарную химическую связь или фрагмент спейсера, как определено в настоящем документе; и
где C1-10 алкил может являться необязательно прерванным и/или необязательно замещенным, как определено в настоящем документе.
[206] Дополнительные обратимые линкеры пролекарственного средства, применимые согласно другим вариантам осуществления настоящего изобретения, описаны в патентных документах WO05099768A2, WO06136586A2, WO2011/012722A1, WO2011/089214A1, WO2011/089216A1, WO2011/089215A1, WO2013/024053A1, WO2013/160340A1, WO2016/020373A1, WO2016/196124A2, EP1536334B1, WO2009/009712A1, WO2008/034122A1, WO2009/143412A2, WO2011/082368A2, US8618124B2, US8946405B2, US8754190B2, WO2013/036857A1, US7585837B2 и WO2002/089789A1, раскрытия которых включено в настоящий документ посредством ссылки.
[207] Спейсер или фрагмент спейсера согласно многим вариантам осуществления можно выбрать из следующего: T, -C1-10 алкилен, C(O)O-, -O-, C(O)-, C(O)N(Ry1)-, S(O)2N(Ry1)-, S(O)N(Ry1)-, -S(O)2-, -S(O)-, N(Ry1)S(O)2N(Ry1a)-, S-, N(Ry1)-, OC(ORy1)(Ry1a), N(Ry1)C(O)N(Ry1a)-, OC(O)N(Ry1), C1-50 алкил, C2-50 алкенил и C2-50 алкинил; где T, C1-50 алкил, C2-50 алкенил и C2-50 алкинил являются необязательно замещенными одним или несколькими Ry2, которые являются одинаковыми или различными, и где C1-50 алкил, C2-50 алкенил и C2-50 алкинил являются необязательно прерванными одной или несколькими группами, выбранным из группы, состоящей из T, C(O)O-, -O-, C(O)-, C(O)N(Ry3)-, S(O)2N(Ry3)-, S(O)N(Ry3)-, -S(O)2-, -S(O)-, N(Ry3)S(O)2N(Ry3a)-, S-, N(Ry3)-, OC(ORy3)(Ry3a), N(Ry3)C(O)N(Ry3a)- и OC(O)N(Ry3);
где:
Ry1 и Ry1a независимо друг от друга выбраны из группы, состоящей из следующего: H, T, C1-50 алкил, C2-50 алкенил, и C2-50 алкинил; где T, C1-50 алкил, C2-50 алкенил и C2-50 алкинил являются необязательно замещенными одним или несколькими Ry2, которые являются одинаковыми или различными, и где C1-50 алкил, C2-50 алкенил и C2-50 алкинил являются необязательно прерванными одной или несколькими группами, выбранным из группы, состоящей из T, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry4)-, S(O)2N(Ry4)-, -S(O)N(Ry4)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry4)S(O)2N(Ry4a)-, -S-, -N(Ry4)-, OC(ORy4)(Ry4a), N(Ry4)C(O)N(Ry4a)- и OC(O)N(Ry4);
каждый T независимо выбран из группы, состоящей из следующего: фенил, нафтил, инденил, инданил, тетралинил, C3-10 циклоалкил, 3 - 10-членный гетероциклил, 8 - 11-членный гетеробициклил, 8 - 30-членный карбополициклил и 8 - 30-членный гетерополициклил; где каждый T является независимо необязательно замещенным одним или несколькими Ry2, которые являются одинаковыми или различными;
каждый Ry2 независимо выбран из группы, состоящей из следующего: галоген, CN, оксо (=O), COORy5, ORy5, -C(O)Ry5, C(O)N(Ry5Ry5a), S(O)2N(Ry5Ry5a), S(O)N(Ry5Ry5a), S(O)2Ry5, S(O)Ry5, N(Ry5)S(O)2N(Ry5aRy5b), SRy5, N(Ry5Ry5a), NO2, OC(O)Ry5, N(Ry5)C(O)Ry5a, N(Ry5)S(O)2Ry5a, N(Ry5)S(O)Ry5a, N(Ry5)C(O)ORy5a, N(Ry5)C(O)N(Ry5aRy5b), OC(O)N(Ry5Ry5a) и C1-6 алкил; где C1-6 алкил является необязательно замещенным одним или несколькими галогенами, которые являются одинаковыми или различными; и
каждый Ry3, Ry3a, Ry4, Ry4a, Ry5, Ry5a и Ry5b независимо выбран из группы, состоящей из H, и C1-6 алкила, где C1-6 алкил является необязательно замещенным одним или несколькими галогенами, которые являются одинаковыми или различными.
Такой спейсер представляет собой “биоразлагаемый спейсер”, если фрагмент спейсера содержит по меньшей мере одну биоразлагаемую связь.
[208] Согласно определенным вариантам осуществления фрагмент спейсера можно выбрать из следующего: T, C(O)O-, O-, C(O)-, -C(O)N(Ry1)-, S(O)2N(Ry1)-, -S(O)N(Ry1)-, -S(O)2-, -S(O)-, N(Ry1)S(O)2N(Ry1a)-, S-, -N(Ry1)-, OC(ORy1)(Ry1a), N(Ry1)C(O)N(Ry1a)-, -OC(O)N(Ry1), C1-50 алкил, C2-50 алкенил и C2-50 алкинил; где T, C1-20 алкил, C2-20 алкенил и C2-20 алкинил являются необязательно замещенными одним или несколькими Ry2, которые являются одинаковыми или различными, и где C1-20 алкил, C2-20 алкенил и C2-20 алкинил являются необязательно прерванными одной или несколькими группами, выбранным из группы, состоящей из T, C(O)O-, -O-, C(O)-, -C(O)N(Ry3)-, S(O)2N(Ry3)-, -S(O)N(Ry3)-, -S(O)2-, -S(O)-, N(Ry3)S(O)2N(Ry3a)-, S-, -N(Ry3)-, OC(ORy3)(Ry3a), N(Ry3)C(O)N(Ry3a)- и OC(O)N(Ry3);
где:
Ry1 и Ry1a независимо друг от друга выбраны из группы, состоящей из H, T, C1-10 алкила, C2-10 алкенила и C2-10 алкинила; где T, C1-10 алкил, C2-10 алкенил и C2-10 алкинил являются необязательно замещенными одним или несколькими Ry2, которые являются одинаковыми или различными, и где C1-10 алкил, C2-10 алкенил и C2-10 алкинил являются необязательно прерванными одной или несколькими группами, выбранным из группы, состоящей из T, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry4)-, S(O)2N(Ry4)-, -S(O)N(Ry4)-, -S(O)2-, -S(O)-, -N(Ry4)S(O)2N(Ry4a)-, -S-, -N(Ry4)-, OC(ORy4)(Ry4a-, N(Ry4)C(O)N(Ry4a)- и OC(O)N(Ry4);
каждый T независимо выбран из группы, состоящей из следующего: фенил, нафтил, инденил, инданил, тетралинил, C3-10 циклоалкил, 3 - 10-членный гетероциклил, 8 - 11-членный гетеробициклил, 8 - 30-членный карбополициклил и 8 - 30-членный гетерополициклил; где каждый T является независимо необязательно замещенным одним или несколькими Ry2, которые являются одинаковыми или различными;
Ry2 выбран из группы, состоящей из следующего: галоген, CN, оксо (=O), COORy5, ORy5, C(O)Ry5, C(O)N(Ry5Ry5a), S(O)2N(Ry5Ry5a), S(O)N(Ry5Ry5a), S(O)2Ry5, S(O)Ry5, N(Ry5)S(O)2N(Ry5aRy5b), SRy5, N(Ry5Ry5a), NO2, OC(O)Ry5, N(Ry5)C(O)Ry5a, N(Ry5)S(O)2Ry5a, N(Ry5)S(O)Ry5a, N(Ry5)C(O)ORy5a, N(Ry5)C(O)N(Ry5aRy5b), OC(O)N(Ry5Ry5a) и C1-6 алкил; где C1-6 алкил является необязательно замещенным одним или несколькими галогенами, которые являются одинаковыми или различными; и
каждый Ry3, Ry3a, Ry4, Ry4a, Ry5, Ry5a и Ry5b независимо друг от друга выбран из группы, состоящей из H, и C1-6 алкила; где C1-6 алкил является необязательно замещенным одним или несколькими галогенами, которые являются одинаковыми или различными.
[209] Такой спейсер представляет собой “биоразлагаемый спейсер”, если фрагмент спейсера содержит по меньшей мере одну биоразлагаемую связь.
[210] Согласно другим вариантам осуществления фрагмент спейсера можно выбрать из T, C(O)O-, O-, -C(O)-, -C(O)N(Ry1)-, S(O)2N(Ry1)-, S(O)N(Ry1), -S(O)2-, S(O)-, N(Ry1)S(O)2N(Ry1a)-, S-, -N(Ry1)-, OC(ORy1)(Ry1a), N(Ry1)C(O)N(Ry1a)-, OC(O)N(Ry1), C1-50 алкила, C2-50 алкенила и C2-50 алкинила; где T, C1-50 алкил, C2-50 алкенил и C2-50 алкинил являются необязательно замещенными одним или несколькими Ry2, которые являются одинаковыми или различными, и где C1-50 алкил, C2-50 алкенил и C2-50 алкинил являются необязательно прерванными одной или несколькими группами, выбранным из группы, состоящей из T, C(O)O-, -O-, -C(O)-, C(O)N(Ry3)-, S(O)2N(Ry3)-, S(O)N(Ry3)-, -S(O)2-, -S(O)-, N(Ry3)S(O)2N(Ry3a)-, -S-, N(Ry3)-, OC(ORy3)(Ry3a), N(Ry3)C(O)N(Ry3a)- и OC(O)N(Ry3);
где:
Ry1 и Ry1a независимо выбраны из группы, состоящей из H, T, C1-10 алкила, C2-10 алкенила и C2-10 алкинила;
каждый T независимо выбран из группы, состоящей из следующего: фенил, нафтил, инденил, инданил, тетралинил, C3-10 циклоалкил, 3 - 10-членный гетероциклил, 8 - 11-членный гетеробициклил, 8 - 30-членный карбополициклил и 8 - 30-членный гетерополициклил;
каждый Ry2 независимо выбран из группы, состоящей из галогена и C1-6 алкила; и
каждый Ry3, Ry3a, Ry4, Ry4a, Ry5, Ry5a и Ry5b независимо друг от друга выбран из группы, состоящей из H и C1-6 алкила; где C1-6 алкил является необязательно замещенным одним или несколькими галогенами, которые являются одинаковыми или различными.
[211] Такой спейсер представляет собой “биоразлагаемый спейсер”, если фрагмент спейсера содержит по меньшей мере одну биоразлагаемую связь. Согласно дополнительным вариантам осуществления фрагмент спейсера может представлять собой C1-20 алкильную цепь, которая является необязательно прерванной одной или несколькими группами, независимо выбранными из -O-, T и -C(O)N(Ry1)-; и эта C1-20 алкильная цепь является необязательно замещенной одной или несколькими группами, независимо выбранными из OH, T и C(O)N(Ry6Ry6a); где Ry1, Ry6, Ry6a независимо выбраны из группы, состоящей из H и C1-4 алкила, и где T выбран из группы, состоящей из следующего: фенил, нафтил, инденил, инданил, тетралинил, C3-10 циклоалкил, 3 - 10-членного гетероциклил, 8 - 11-членный гетеробициклил, 8 - 30-членный карбополициклил и 8 - 30-членный гетерополициклил.
[212] Такой спейсер представляет собой “биоразлагаемый спейсер”, если фрагмент спейсера содержит по меньшей мере одну биоразлагаемую связь.
[213] Биоразлагаемая связь может представлять собой, например, сложноэфирную или карбонатную связь.
[214] Используемый в настоящем документе термин “метка (TAG)” и “метка очистки” относятся к фрагменту, который при конъюгировании со вторым фрагментом придает (а) физическое и/или химическое свойство/свойства, отсутствующие в указанном втором фрагменте без фрагмента метки и (b) такие различные физические и/или химические свойства позволяют очистить такой конъюгат.
[215] Используемые в настоящем документе термины “защитная группа” или “PG” относятся к фрагменту, который используют для обратимой защиты функциональных групп во время процессов химической реакции, чтобы сделать эти функциональные группы по существу нереакционноспособными в указанных процессах химической реакции.
[216] Используемый в настоящем документе термин “пролекарственное средство” означает конъюгат, в котором лекарственное средство ковалентно и обратимо конъюгировано с фрагментом обратимого линкера, причем фрагмент обратимого линкера пролекарственного средства либо прямо, либо опосредованно через фрагмент спейсера прикреплен к носителю, такому как гидрогель согласно настоящему изобретению. Пролекарственное средство высвобождает лекарственное средство при физиологических условиях (водный буфер, 37,4°C, pH 7,4). Такое высвобожденное лекарственное средство может являться немодифицированным, что означает, что ни один остаток от фрагмента обратимого линкера пролекарственного средства не остается прикрепленным к высвобожденному лекарственному средству.
[217] Используемый в настоящем документе термин "лекарственное средство" относится к любому веществу, которое может воздействовать на любые физические или биохимические свойства биологического организма, включая в себя без ограничения вирусы, бактерии, грибы, растения, животные и люди. В частности, используемые в настоящем документе термины включают в себя любое вещество, предназначенное для диагностики, излечения, смягчения, лечения или предотвращения заболевания у организмов, в частности людей или животных, или для иного улучшения физического или психического благополучия организмов, в частности людей или животных. Согласно некоторым аспектам лекарственное средство представляет собой биологически активный фрагмент, который модулирует активность одного или нескольких белков, выбранных из группы, содержащей основные факторы роста фибробластов (bFGF), кислотные факторы роста фибробластов (aFGF), трансформирующие факторы роста альфа (TGFa), трансформирующие факторы роста бета (TGFβ), тромбоцитарный фактор роста (PDGF), ангиогенин, тромбоцитарный фактор роста эндотелиальных клеток (PD-ECGF), интерлейкин-1 (IL-1), интерлейкин-8 (IL-8), интерлейкин-12, фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), ангиопоэтин-I, Del-I, фоллистатин, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF), фактор роста гепатоцитов (HGF), лептин, мидкин, плацентарный фактор роста, плейотрофин (PTN), програнулин, пролиферин, фактор некроза опухолей-альфа (TNF-альфа), ангиоаррестин, ангиостат - фрагмент плазминогена, антиангиогенный антитромбин III, ингибитор хрящевого происхождения (CDI), фрагмент комплемента CDS9, эндостатин - фрагмент коллагена XVIII, фрагмент фибронектина, GRO-бета, гепариназы, фрагмент гексасахарида гепарина, хорионический гонадотропин человека (hCG), интерферон альфа/бета/гамма, индуцируемый интерфероном белок (IP-IO), фрагмент крингла S плазминогена, ингибиторы металлопротеиназы (TIMP), 2-метоксиэстрадиол, ингибитор плацентарной рибонуклеазы, ингибитор активатора плазминогена, тромбоцитарный фактор 4 (PF4), 16 кДа фрагмент пролактина, связанный с пролиферином белок (PRP), ретиноиды, тетрагидрокортизол-S, тромбоспондин-I (TSP-I), васкулостатин, вазостатин - фрагмент кальретикулина, рецептор простагландина, гормон роста, инсулиноподобный фактор роста-I (IGF-I), сфингозин-1-фосфат, фактор D, RTP801, ингибиторы комплемента, α2-адренергический агонист, mTOR, цилиарный нейротрофический фактор (CNTF), нейротрофический фактор, происходящий из головного мозга (BDNF), нейротрофический фактор, происходящий из глиальных клеток (GDNF), полученный из эпителия хрусталика фактор роста (LEDGF), полученный из палочек фактор жизнеспособности колбочек (RdCVF), фактор, полученный из пигментного эпителия (PEDF), белок, активирующий нейтрофилы, белок - хемоаттрактант моноцитов, воспалительный белок макрофагов, белки с малой индуцируемой секрецией (SIS), тромбоцитарный фактор, основной белок тромбоцитов, активность, стимулирующая рост меланомы, эпидермальный фактор роста, фактор роста нервов, морфогенные белки кости, индуцирующий рост хряща кости фактор, интерлейкины, ингибиторы интерлейкина, рецепторы интерлейкина, гематопоэтические факторы, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор, макрофагальный колониестимулирующий фактор, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор, ингибин и активин. Согласно некоторым аспектам лекарственное средство представляет собой антагонист VEGF. Термин “лекарственное средство” также используют для конъюгированного лекарственного средства, в котором по сравнению со свободным лекарственным средством отсутствует водород.
[218] Используемый в настоящем документе термин “антагонист VEGF” относится к молекуле, способной связываться с VEGF, снижать уровни экспрессии VEGF или нейтрализовать, блокировать, ингибировать, устранять, снижать или препятствовать биологическим активностям VEGF, включая в себя без ограничения связывание VEGF с одним или несколькими рецепторами VEGF, передачу сигналов VEGF и VEGF-опосредованный ангиогенез и выживание или пролиферацию эндотелиальных клеток. Например, молекула, способная нейтрализовать, блокировать, ингибировать, устранять, уменьшать или препятствовать биологическим активностям VEGF, может проявлять свои эффекты путем связывания с одним или несколькими рецепторами VEGF (VEGFR) (например, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, мембраносвязанный рецептор VEGF (mbVEGFR) или растворимый рецептор VEGF (sVEGFR)). В качестве антагонистов VEGF, используемых в способах согласно настоящему изобретению, предусмотрены полипептиды, которые специфически связываются с VEGF, антитела к VEGF и их антигенсвязывающие фрагменты, рецепторные молекулы и производные, которые специфически связываются с VEGF, тем самым изолируют его от связывания с одним или несколькими рецепторами, слитые белки (например, VEGF-Trap (Regeneron)) и VEGF121-гелонин (Peregrine). Антагонисты VEGF также включают в себя антагонистические варианты полипептидов VEGF, олигомеров из антисмысловых нуклеотидов, комплементарных по меньшей мере фрагменту молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид VEGF; малые РНК, комплементарные по меньшей мере фрагменту молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид VEGF; рибозимы, которые нацелены на VEGF; пептидные антитела к VEGF и аптамеры VEGF. Антагонисты VEGF также включают в себя полипептиды, которые связываются с VEGFR, антитела к VEGFR и их антигенсвязывающие фрагменты, и производные, которые связываются с VEGFR, тем самым блокируя, ингибируя, устраняя, уменьшая или препятствуя биологическим активностям VEGF (например, передаче сигналов VEGF), или слитые белки. Антагонисты VEGF также включают в себя непептидные малые молекулы, которые связываются с VEGF или VEGFR и которые способны блокировать, ингибировать, устранять, уменьшать или препятствовать биологическим активностям VEGF. Таким образом, термин “активности VEGF”, в частности, включает в себя опосредованные VEGF биологические активности VEGF. Согласно определенным вариантам осуществления антагонист VEGF снижает или ингибирует по меньшей мере на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или более уровень экспрессии или биологическую активность VEGF. Согласно некоторым вариантам осуществления VEGF, ингибируемый VEGF-специфическим антагонистом, представляет собой VEGF (8-109), VEGF (1-109) или VEGF165.
[219] Используемый в настоящем документе термин “антагонисты VEGF” может включать в себя без ограничения антитела к VEGFR2 и родственные молекулы (например, рамуцирумаб, танибирумаб, афлиберцепт), антитела к VEGFR1 и родственные молекулы (например, икрукумаб, афлиберцепт (VEGF Trap-Eye; EYLEA®) и зив-афлиберцепт (VEGF Trap; ZALTRAP®)), биспецифические антитела к VEGF (например, MP-0250, вануцизумаб (VEGF-ANG2) и биспецифические антитела, раскрытые в US 2001/0236388), биспецифические антитела, включая в себя комбинации двух из анти-VEGF, анти-VEGFR1 и анти-VEGFR2 плеч, антитела к VEGF (например, бевацизумаб, севацизумаб и ранибизумаб) и непептидные низкомолекулярные антагонисты VEGF (например, пазопаниб, акситиниб, вандетаниб, стиварга, кабозантиниб, ленватиниб, нинтеданиб, орантиниб, телатиниб, довитиниб, седираниб, мотезаниб, сульфатиниб, апатиниб, форетиниб, фамитиниб и тивозаниб). Дополнительные антагонисты VEGF описаны ниже.
[220] “Нарушение” представляет собой любое состояние, для которого было бы благоприятно лечение конъюгатами антител, описанными в настоящем документе. Например, млекопитающие, которые страдают или нуждаются в профилактике аномального ангиогенеза (избыточного, несоответствующего или неконтролируемого ангиогенеза) или проницаемости сосудов. Это включает в себя хронические и острые нарушения или заболевания, включая в себя те патологические состояния, которые делают млекопитающее предрасположенным к рассматриваемому нарушению. Неограничивающие примеры нарушений, подлежащих лечению в настоящем документе, включают в себя нарушения, ассоциированные с патологическим ангиогенезом (например, офтальмологические нарушения и нарушения клеточной пролиферации) и нарушения, ассоциированные с нежелательной проницаемостью сосудов.
[221] “Эффективное количество” средства, например, фармацевтического состава, относится к количеству, эффективному, в необходимых дозировках и в течение необходимых периодов времени, для достижения требуемого терапевтического или профилактического результата.
[222] Используемый в настоящем документе термин “лечение” (и его грамматические вариации, такие как “лечить” или “осуществление лечения”) относится к клиническому вмешательству в попытке изменить естественное течение состояния индивидуума, которого лечат, и его можно проводить либо для профилактики, либо во время течения клинической патологии. Желательные эффекты лечения включают в себя без ограничения предотвращение возникновения или рецидива заболевания, ослабление симптомов, уменьшение любых прямых или косвенных патологических последствий заболевания, уменьшение скорости прогрессирования заболевания, улучшение или смягчение болезненного состояния и ремиссию или улучшение прогноза. Согласно некоторым вариантам осуществления конъюгаты антител согласно настоящему изобретению или другие композиции, которые включают в себя конъюгат антител согласно настоящему изобретению (например, фармацевтическую композицию), используют для задержки развития заболевания или для замедления прогрессирования заболевания.
[223] Термин “прерванный” означает, что фрагмент вставлен между двумя атомами углерода или - если вставка находится на одном из концов фрагмента - между углеродом или гетероатомом и атомом водорода, предпочтительно между атомом углерода и водорода. Неограничивающие примеры таких атомов и фрагментов включают в себя -O-, -S-, -N(H)-, -N(замещенный)- -NC(O)- и OC(O)-.
[224] Используемый в настоящем документе термин “C1-4 алкил” отдельно или в комбинации означает алкильный фрагмент с неразветвленной или разветвленной цепью с 1 - 4 атомами углерода. Если он присутствует на конце молекулы, примерами C1-4 алкила с неразветвленной или разветвленной цепью являются метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил и трет-бутил. Когда два фрагмента молекулы связаны C1-4-алкилом, примерами таких C1-4 алкильных групп являются CH2, CH2CH2, CH(CH3), CH2CH2CH2, CH(C2H5), C(CH3)2. Каждый водород на углероде C1-4 алкила может быть необязательно замещен заместителем, как определено выше. Необязательно C1-4 алкил может быть прерван одним или несколькими фрагментами, как определено ниже.
[225] Используемый в настоящем документе термин “C1-6 алкил” отдельно или в комбинации означает алкильный фрагмент с неразветвленной или разветвленной цепью с 1 - 6 атомами углерода. Если он присутствует на конце молекулы, примерами C1-4 алкила с неразветвленной или разветвленной цепью являются метил, этил, n-пропил, изопропил, n-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, 2-метилбутил, 2,2-диметилпропил, н-гексил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, 2,2-диметилбутил, 2,3-диметилбутил и 3,3-диметилпропил. Когда два фрагмента молекулы связаны C1-6 алкильной группой, то примеры таких C1-6 алкильных групп представляют собой -CH2-, -CH2-CH2-, -CH(CH3)-, -CH2-CH2-CH2-, -CH(C2H5)- и C(CH3)2-. Каждый атом водорода на атоме углерода C1-6 может быть необязательно замещен заместителем, как определено выше. Необязательно C1-6 алкил может быть прерван одним или несколькими фрагментами, как определено ниже. Соответственно, “C1-10 алкил”, “C1-20 алкил” или “C1-50 алкил” означает алкильную цепь, характеризующуюся 1 - 10, 1 - 20 или 1 - 50 атомами углерода, соответственно, где каждый атом водорода на углероде C1-10, C1-20 или C1-50 может быть необязательно замещен заместителем, как определено выше. Необязательно C1-10 или C1-50 алкил может быть прерван одним или несколькими фрагментами, как определено ниже.
[226] Используемый в настоящем документе термин "алкилен" относится к бивалентному насыщенному алифатическому радикалу, такому как метилен, этилен, пропилен и тому подобное.
[227] Используемый в настоящем документе термин “C2-6 алкенил” отдельно или в комбинации означает углеводородный фрагмент с неразветвленной или разветвленной цепью, содержащий по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь с 2 - 6 атомами углерода. Если он присутствует на конце молекулы, примерами являются CH=CH2, CH=CHCH3, CH2-CH=CH2, CH=CHCH2-CH3 и -CH=CH-CH=CH2. Когда два фрагмента молекулы связаны C2-6 алкенильной группой, то пример такого C2-6 алкенила представляет собой -CH=CH-. Каждый атом водорода C2-6 алкенильного фрагмента может быть необязательно замещен заместителем, как определено выше. Необязательно C2-6 алкенил может быть прерван одним или несколькими фрагментами, как определено ниже. Соответственно, термин “C2-10 алкенил”, “C2-20 алкенил” или “C2-50 алкенил” отдельно или в комбинации означает углеводородный фрагмент с неразветвленной или разветвленной цепью, содержащий по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь с 2 - 10, 2 - 20 или 2 - 50 атомами углерода. Каждый атом водорода C2-10 алкенильное, C2-20 алкенильной или C2-50 алкенильной группы может быть необязательно замещен заместителем, как определено выше. Необязательно C2-10 алкенил, C2-20 алкенил или C2-50 алкенил может быть прерван одним или несколькими фрагментами, как определено ниже.
[228] Используемый в настоящем документе термин “C2-6 алкинил” отдельно или в комбинации означает углеводородный фрагмент с неразветвленной или разветвленной цепью, содержащий по меньшей мере одну углерод-углеродную тройную связь с 2 - 6 атомами углерода. Если он присутствует на конце молекулы, примерами являются -C≡CH, -CH2-C≡CH, CH2-CH2-C≡CH и CH2-C≡C-CH3. Когда два фрагмента молекулы связаны алкинильной группой, то пример представляет собой -C≡C-. Каждый атом водорода C2-6 алкинильной группы может быть необязательно замещен заместителем, как определено выше. Необязательно может присутствовать одна или несколько двойных связей. Необязательно C2-6 алкинил может быть прерван одним или несколькими фрагментами, как определено ниже. Соответственно, используемый в настоящем документе термин “C2-10 алкинил”, “C2-20 алкинил” и “C2-50 алкинил” отдельно или в комбинации означает углеводородный фрагмент с неразветвленной или разветвленной цепью, содержащий по меньшей мере одну углерод-углеродную тройную связь с 2 - 10, 2 - 20 или 2 - 50 атомами углерода, соответственно. Каждый атом водорода C2-10 алкинильной, C2-20 алкинильной или C2-50 алкинильной группы может быть необязательно замещен заместителем, как определено выше. Необязательно может присутствовать одна или несколько двойных связей. Необязательно C2-10 алкинил, C2-20 алкинил или C2-50 алкинил может быть прерван одним или несколькими фрагментами, как определено ниже.
[229] Как указано выше, C1-4 алкил, C1-6 алкил, C1-10 алкил, C1-20 алкил, C1-50 алкил, C2-6 алкенил, C2-10 алкенил, C2-20 алкенил, C2-50 алкенил, C2-6 алкинил, C2-10 алкинил, C2-20 алкенил или C2-50 алкинил могут быть необязательно прерванными одной или несколькими фрагментами, которые предпочтительно выбраны из группы, состоящей из следующего:
где
пунктирные линии указывают на прикрепление к оставшейся части фрагмента или реагента; и
R и Ra независимо друг от друга выбраны из группы, состоящей из H, метила, этила, пропила, бутила, пентила и гексила.
[230] Используемый в настоящем документе термин "C3-10 циклоалкил" означает циклическую алкильную цепь с 3 - 10 атомами углерода, которая может являться насыщенной или ненасыщенной, например, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогексенил, циклогептил, циклооктил, циклононил или циклодецил. Каждый атом водорода на углероде C3-10 циклоалкила может быть замещен заместителем, как определено выше. Термин "C3-10 циклоалкил" также включает в себя соединенные мостиком бициклы, такие как норборнан или норборнен.
[231] Термин “8-30-членный карбополициклил” или “8-30-членный карбополицикл” означает циклический фрагмент из двух или более колец с 8-30 атомами кольца, где два соседних кольца характеризуются по меньшей мере одним общим атомом кольца и которое может содержать вплоть до максимального числа двойных связей (ароматическое или неароматическое кольцо, которое является полностью, частично насыщенным или ненасыщенным). Предпочтительно 8-30-членный карбополициклил означает циклический фрагмент из двух, трех, четырех или пяти колец, более предпочтительно из двух, трех или четырех колец.
[232] Используемый в настоящем документе термин "3-10-членный гетероциклил" или "3-10-членный гетероцикл" означает кольцо с 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 атомами кольца, которое может содержать вплоть до максимального числа двойных связей (ароматическое или неароматическое кольцо, которое является полностью, частично насыщенным или ненасыщенным), где по меньшей мере от одного атома кольца вплоть до 4 атомов кольца замещены гетероатомом, выбранным из группы, состоящей из серы (включая в себя -S(O)-, -S(O)2-), кислорода и азота (включая в себя =N(O)-) и где кольцо связано с остальной частью молекулы посредством атома углерода или азота. Примеры 3-10-членных гетероциклов включают в себя без ограничения азиридин, оксиран, тииран, азирин, оксирен, тиирен, азетидин, оксетан, тиетан, фуран, тиофен, пиррол, пирролин, имидазол, имидазолин, пиразол, пиразолин, оксазол, оксазолин, изоксазол, изоксазолин, тиазол, тиазолин, изотиазол, изотиазолин, тиадиазол, тиадиазолин, тетрагидрофуран, тетрагидротиофен, пирролидин, имидазолидин, пиразолидин, оксазолидин, изоксазолидин, тиазолидин, изотиазолидин, тиадиазолидин, сульфолан, пиран, дигидропиран, тетрагидропиран, имидазолидин, пиридин, пиридазин, пиразин, пиримидин, пиперазин, пиперидин, морфолин, тетразол, триазол, триазолидин, тетразолидин, диазепан, азепин и гомопиперазин. Каждый атом водорода 3-10-членной гетероциклильной или 3-10-членной гетероциклической группы может быть замещен заместителем, как определено ниже.
[233] Используемый в настоящем документе термин "8-11-членный гетеробициклил" или "8-11-членный гетеробицикл" означает гетероциклический фрагмент из двух колец с 8-11 атомами кольца, где по крайней мере один атом кольца является общим для обоих колец и который может содержать вплоть до максимального числа двойных связей (ароматическое или неароматическое кольцо, которое является полностью, частично насыщенным или ненасыщенным), где по меньшей мере от одного атома кольца до 6 атомов кольца замещены гетероатомом, выбранным из группы, состоящей из серы (включая в себя -S(O)-, -S(O)2-), кислорода и азота (включая в себя =N(O)-) и где кольцо связано с остальной частью молекулы через атом углерода или азота. Примерами 8 - 11-членного гетеробицикла являются индол, индолин, бензофуран, бензотиофен, бензоксазол, бензизоксазол, бензотиазол, бензизотиазол, бензимидазол, бензимидазолин, хинолин, хиназолин, дигидрохиназолин, хинолин, дигидрохинолин, тетрагидрохинолин, декагидрохинолин, изохинолин, декагидроизохинолин, тетрагидроизохинолин, дигидроизохинолин, бензазепин, пурин и птеридин. Термин 8-11-членный гетеробицикл также включает в себя спироструктуры двух колец, таких как 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]декан или мостиковые гетероциклы, такие как 8-аза-бицикло[3.2.1]октан. Каждый атом водорода 8-11-членного гетеробициклила или 8-11-членного гетеробициклического углерода может быть замещен заместителем, как определено ниже.
[234] Аналогично, термин “8-30-членный гетерополициклил” или “8-30-членный гетерополицикл” означает гетероциклический фрагмент из более чем двух колец с 8-30 атомами кольца, предпочтительно из трех, четырех или пяти колец, где два соседних кольца характеризуются по меньшей мере одним общим атомом кольца, и который может содержать вплоть до максимального числа двойных связей (ароматическое или неароматическое кольцо, которое является полностью, частично насыщенным или ненасыщенным), причем по меньшей мере от одного атом кольца имеет вплоть до 10 атомов кольца замещены гетероатомом, выбранным из группы, включающей в себя серу (включая в себя -S(O)-, S(O)2-), кислород и азот (включая в себя =N(O)-), и где кольцо связано с остальной частью молекулы через атом углерода или азота.
[235] Используемый в настоящем документе "галоген" означает фтор, хлор, бром или йод. Как правило, предпочтительно, что галоген представляет собой фтор или хлор.
[236] Используемый в настоящем документе термин "частично ненасыщенный" относится к кольцевому фрагменту, который включает в себя по меньшей мере одну двойную или тройную связь между атомами кольца, но не является ароматическим. Подразумевается, что термин "частично ненасыщенный" охватывает кольца с несколькими сайтами ненасыщенности, но не включает в себя арильные или гетероарильные фрагменты, как определено в настоящем документе.
[237] Термин "биоразлагаемый", используемый в настоящем документе в отношении спейсерного фрагмента или другого химического соединения, означает, что спейсерная группа или химическое соединение способны подвергаться разложению или расщеплению связей в биологических или физиологических условиях. Биоразложение может происходить посредством гидролиза, ферментативного расщепления или другого механизма. Описанные в настоящем документе спейсерные фрагменты, как правило, будут подвергаться разложению в витреальной жидкости в результате реакции расщепления связи, которая происходит с периодом полужизни не более 12 месяцев, согласно некоторым вариантам осуществления с периодом полужизни не более шести месяцев после инъекции в стекловидное тело или воздействия на стекловидное тело. Биоразложение спейсерных фрагментов может происходить на химических связях, прикрепляющих фрагмент спейсера к другим группам, а также на химических связях в спейсерном фрагменте.
[238] Используемый в настоящем документе термин "необязательно замещенный", если не указано иное, означает, что группа может быть замещена одним или несколькими (например, 1, 2, 3 или 4) заместителями, перечисленными для этой группы, в которой указанные заместители могут быть одинаковыми или различными. Согласно некоторым аспектам необязательно замещенная группа содержит 1 заместитель. Согласно другому аспекту необязательно замещенная группа содержит 2 заместителя. Согласно другому аспекту необязательно замещенная группа содержит 3 заместителя.
[239] Термин "прерванный", используемый в настоящем документе в отношении алкила, алкенила, алкинила или алкилена, означает, что один или несколько атомов углерода замещены функциональными группами или гетероатомами, так что алкил, алкенил, алкинил или алкилен являются прерванными. Иллюстративные группы, которые могут прерывать алкил, алкенил, алкинил или алкилен, если иное не указано в настоящем документе, включают в себя T, -C(O)O-; -O-; -C(O)-; -C(O)N(R17)-; -S(O)2N(R17)-; -S(O)N(R17)-; -S(O)2-; -S(O)-; -N(R17)S(O)2N(R17a)-; -S-; -N(R17)-; -OC(O)R17; -N(R17)C(O)-; -N(R17)S(O)2-; -N(R17)S(O)-; -N(R17)C(O)O-; -N(R17)C(O)N(R17a)- и -OC(O)N(R17R17a), где R17 в каждом случае представляет собой независимо H или C1-50 алкил.
[240] Термин “замещенный” означает, что один или несколько атомов -H молекулы замещены другим атомом или группой атомов, которые называются “заместитель” или “заместители”. Подходящие заместители выбраны из группы, состоящей из следующего: галоген; CN; COOR15; OR15; C(O)R15; C(O)N(R15R15a); S(O)2N(R15R15a); S(O)N(R15R15a); S(O)2R15; S(O)R15; N(R15)S(O)2N(R15aR15b); SR15; N(R15R15a); NO2; OC(O)R15; N(R15)C(O)R15a; N(R15)S(O)2R15a; N(R15)S(O)R15a; N(R15)C(O)OR15a; N(R15)C(O)N(R15aR15b); OC(O)N(R15R15a); T; C1-50 алкил; C2-50 алкенил или C2-50 алкинил, где T; C1-50 алкил; C2-50 алкенил; и C2-50 алкинил являются необязательно замещенными одним или несколькими R16, которые являются одинаковыми или различными, и где C1-50 алкил; C2-50 алкенил и C2-50 алкинил являются необязательно прерванными одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из T, -C(O)O-; -O-; -C(O)-; -C(O)N(R17)-; -S(O)2N(R17)-; -S(O)N(R17)-; -S(O)2-; -S(O)-; -N(R17)S(O)2N(R17a)-; -S-; -N(R17)-; -OC(O)R17; -N(R17)C(O)-; -N(R17)S(O)2-; -N(R17)S(O)-; -N(R17)C(O)O-; -N(R17)C(O)N(R17a)- и -OC(O)N(R17R17a). Согласно некоторым таким аспектам R15, R15a, R15b независимо выбраны из группы, состоящей из следующего: H; T; и C1-50 алкил; C2-50 алкенил или C2-50 алкинил, где T; C1-50 алкил; C2-50 алкенил и C2-50 алкинил являются необязательно замещенными одним или несколькими R16, которые являются одинаковыми или различными, и где C1-50 алкил; C2-50 алкенил и C2-50 алкинил являются необязательно прерванными одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из T, -C(O)O-; -O-; -C(O)-; -C(O)N(R17)-; S(O)2N(R17)-; -S(O)N(R17)-; -S(O)2-; -S(O)-; N(R17)S(O)2N(R17a)-; -S-; -N(R17)-; -OC(O)R17; -N(R17)C(O)-; -N(R17)S(O)2-; -N(R17)S(O)-; -N(R17)C(O)O-; N(R17)C(O)N(R17a)- и -OC(O)N(R17R17a). Согласно некоторым таким аспектам T выбран из группы, состоящей из следующего: фенил; нафтил; инденил; инданил; тетралинил; C3-10 циклоалкил; 4-7-членный гетероциклил; или 8-11-членный гетеробициклил, где T является необязательно замещенным одним или несколькими R16, которые являются одинаковыми или различными. Согласно некоторым таким аспектам R16 представляет собой галоген; CN; оксо (=O); COOR18; OR18; C(O)R18; C(O)N(R18R18a); S(O)2N(R18R18a); S(O)N(R18R18a); S(O)2R18; S(O)R18; N(R18)S(O)2N(R18aR18b); SR18; N(R18R18a); NO2; OC(O)R18; N(R18)C(O)R18a; N(R18)S(O)2R18a; N(R18)S(O)R18a; N(R18)C(O)OR18a; N(R18)C(O)N(R18aR18b); OC(O)N(R18R18a); или C1-6 алкил, где C1-6 алкил является необязательно замещенным одним или несколькими галогенами, которые являются одинаковыми или различными. Согласно некоторым таким аспектам R17, R17a, R18, R18a, R18b независимо выбраны из группы, состоящей из H или C1-6 алкила, где C1-6 алкил является необязательно замещенным одним или несколькими галогенами, которые являются одинаковыми или различными.
[241] Используемый в настоящем документе “противоион щелочного металла” относится к Na+, K+ и Li+.
[242] Используемый в настоящем документе термин “гидрогель” означает гидрофильную или амфифильную полимерную сеть, состоящую из гомополимеров или сополимеров, которая является нерастворимой из-за наличия ковалентных химических поперечных связей.
[243] Используемый здесь термин “среднечисленная молекулярная масса” означает обычное среднее арифметическое значение молекулярных масс отдельных полимеров. Специалисту в настоящей области техники понятно, что продукты полимеризации, полученные в результате реакции полимеризации, не все характеризуются одинаковой молекулярной массой, а скорее характеризуются молекулярно-массовым распределением. Следовательно, диапазоны молекулярной массы, молекулярные массы, диапазоны количества мономеров в полимере и количества мономеров в полимере, как используется в настоящем документе, относятся к среднечисленной молекулярной массе и среднечисловому количеству мономеров.
[244] Используемый в настоящем документе термин “фармацевтическая композиция” относится к композиции, содержащей один или несколько активных ингредиентов и один или несколько инертных ингредиентов, а также любой продукт, который прямо или косвенно возникает в результате комбинация, комплексообразования или агрегации любых двух или более ингредиентов, или в результате диссоциации одного или нескольких ингредиентов, или в результате других типов реакций или взаимодействий одного или нескольких ингредиентов.
[245] Используемый в настоящем документе термин "вспомогательное вещество" относится к разбавителю, адъюванту или несущей среде, с которыми вводят терапевтическое средство, т.е. нейтрализующее VEGF пролекарственное средство, такое как антитело к VEGF. Таким фармацевтическим вспомогательным веществом может являться вода; масла и нефтепродукты животного, растительного или синтетического происхождения, включая в себя без ограничения следующее: арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т.п.; крахмал; глюкоза; лактоза; сахароза; маннит; трегалоза; желатин; солод; рис; мука; мел; силикагель; стеарат натрия; моностеарат глицерина; тальк; хлорид натрия; сухое обезжиренное молоко; глицерин; пропилен; гликоль; этиловый спирт; ацетат; сукцинат; трис; карбонат; фосфат; HEPES (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота); MES (2-(N-морфолино)этансульфоновая кислота); Tween®; полоксамеры; полоксамины; CHAPS; Igepal®; аминокислоты, такие как, например, глицин, лизин или гистидин; триглицериды; маннит; лактоза; крахмал; стеарат магния; сахарин натрия; целлюлоза; и карбонат магния. Примеры подходящих фармацевтических вспомогательных веществ описаны в "Remington's Pharmaceutical Sciences", E.W. Martin. Состав должен соответствовать способу введения.
[246] Используемый в настоящем документе термин “фармацевтически приемлемый” означает, что молекула или реагент одобрены регулирующим органом, таким как EMA (Европа) и/или FDA (США), и/или любым другим национальным регулирующим органом, для использования животными, предпочтительно людьми.
[247] “Акцепторная каркасная область человека” для целей настоящего изобретения представляет собой каркасную область, содержащую аминокислотную последовательность каркасной области вариабельного домена легкой цепи (VL) или каркасной области вариабельного домена тяжелой цепи (VH), полученную из каркасной области иммуноглобулина человека или консенсусной каркасной области человека, как определено ниже. Акцепторная каркасная область человека, “полученная из“ каркасной области иммуноглобулина человека или консенсусной каркасной области человека, может содержать такую же аминокислотную последовательность или может содержать изменения аминокислотной последовательности. Согласно некоторым вариантам осуществления число замен аминокислот составляет 10 или менее, 9 или менее, 8 или менее, 7 или менее, 6 или менее, 5 или менее, 4 или менее, 3 или менее или 2 или менее. Согласно некоторым вариантам осуществления акцепторная каркасная область VL человека является идентичной, в отношении последовательности, последовательности каркасной области VL иммуноглобулина человека или последовательности консенсусной каркасной области человека.
[248] “Аффинность” относится к силе совокупности нековалентных взаимодействий между одним сайтом связывания молекулы (например, антитела) и его партнера по связыванию (например, антигена). Если не указано иное, используемый в настоящем документе термин “аффинность связывания” относится к характеристической аффинности связывания, которая отражает взаимодействие 1: 1 между представителями пары связывания (например, антителом и антигеном). Аффинность молекулы X по отношению к своему партнеру Y, как правило, можно представить константой диссоциации (Kd). Аффинность можно измерить общепринятыми способами, известными в настоящей области техники, включая в себя те, которые описаны в настоящем документе. Конкретные иллюстративные и примерные варианты осуществления для измерения аффинности связывания описаны ниже.
[249] Антитело “с созревшей аффинностью” относится к антителу с одним или несколькими изменениями в одной или нескольких гипервариабельных областях (HVR) и/или каркасных областях (FR) по сравнению с исходным антителом, которое не обладает такими изменениями, причем такие изменения приводят в результате к улучшению аффинности антитела к антигену.
[250] Термин “фактор роста сосудистого эндотелия” или “VEGF” относится к относится к белку А фактора роста сосудистого эндотелия, примером которого является SEQ ID NO: 47 (см. также регистрационный номер Swiss Prot P15692, Gene ID (NCBI): 7422). Термин “VEGF” охватывает белок с аминокислотной последовательностью согласно SEQ ID NO: 47, а также его гомологи и изоформы. Термин “VEGF” также охватывает известные изоформы, например изоформы сплайсинга VEGF, например VEGF111, VEGF121, VEGF145, VEGF165, VEGF189 и VEGF206, вместе с встречающимися в природе аллельными и процессированными их формами, включая в себя 110- аминокислотный человеческого фактора роста эндотелиальных клеток, образуемый за счет плазминового расщепления VEGF16п5, как описано в Ferrara Mol. Biol. Cell. 21:687 (2010), Leung et al., Science, 246:1306 (1989), и Houck et al., Mol. Endocrin., 5:1806 (1991). Термин “VEGF” также относится к VEGF из видов, не относящихся к человеку, таких как мышь, крыса или примат. Иногда VEGF из определенного вида обозначается такими терминами, как hVEGF для человеческого VEGF, mVEGF для мышиного VEGF и тому подобное. Термин “VEGF” также используют для обозначения усеченных форм полипептида, содержащих аминокислоты от 8 до 109 или от 1 до 109 фактора роста эндотелиальных клеток человека из 165 аминокислот. Ссылку на любые такие формы VEGF можно идентифицировать в настоящей заявке, например, по обозначению “VEGF109,” “VEGF (8-109),” “VEGF (1-109)” или “VEGF165”. Положения аминокислот для “усеченного” нативного VEGF пронумерованы, как указано в нативной последовательности VEGF. Например, аминокислотное положение 17 (метионин) в усеченном нативном VEGF также представляет собой положение 17 (метионин) в нативном VEGF. Усеченный нативный VEGF обладает аффинностью связывания по отношению к рецепторам KDR и Flt-1, сравнимой с нативным VEGF. Используемый в настоящем документе термин “вариант VEGF” относится к полипептиду VEGF, который включает в себя одну или несколько аминокислотных мутаций в нативной последовательности VEGF. Необязательно, одна или несколько аминокислотных мутаций включают в себя аминокислотную(ые) замену(ы). В целях краткого обозначения вариантов VEGF, описанных в настоящем документе, следует отметить, что числа относятся к положению аминокислотного остатка на аминокислотной последовательности предполагаемого нативного VEGF (предоставлено в Leung с соавт., выше, и Houck с соавт., выше). Если не указано иное, используемый в настоящем документе термин “VEGF” обозначает VEGF-A.
[251] Термины “антитело к VEGF,” “антитело, которое связывается с VEGF” и “антитело, которое специфически связывается с VEGF” относятся к антителу, которое способно связываться с VEGF с достаточной аффинностью, так что антитело является применимым в качестве диагностического и/или терапевтического средства в нацеленном воздействии на VEGF. Согласно одному варианту осуществления степень связывания антитела к VEGF с неродственным белком, не являющимся VEGF, составляет менее чем приблизительно 10% от связывания антитела с VEGF, как измерено, например, с помощью радиоиммуноанализа (RIA). Согласно определенным вариантам осуществления антитело, которое связывается с VEGF, характеризуется константой диссоциации (Kd), составляющей ≤ 1 мкM, ≤ 100 нM, ≤ 10 нM, ≤ 1 нM, ≤ 0,1 нM, ≤ 0,01 нM или ≤ 0,001 нM (например 10-8 M или меньше, например, от 10-8 M до 10-13 M, например, от 10-9 M до 10-13 M). Согласно определенным вариантам осуществления антитело к VEGF связывается с эпитопом VEGF, который является консервативным среди VEGF из разных видов.
[252] Термин “антитело” в настоящем документе используют в самом широком смысле и охватывает различные структуры антител, включая в себя без ограничения моноклональные антитела, поликлональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела) и фрагменты антител, при условии, что они демонстрируют требуемую антигенсвязывающую активность.
[253] “Фрагмент антитела” относится к молекуле, отличной от интактного антитела, которая содержит часть интактного антитела, которая связывает антиген, с которым связывается интактное антитело. Примеры фрагментов антител включают в себя без ограничения Fv, Fab, Fab’, Fab-C, Fab’-SH, F(ab’)2; диатела; линейные антитела; молекулы одноцепочечных антител (например, scFv); и мультиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител. В некоторых случаях примеры фрагментов антител включают в себя без ограничения Fv, Fab, Fab’, Fab’-SH, F(ab’)2; диатела; линейные антитела; молекулы одноцепочечных антител (например, scFv) и мультиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител.
[254] При расщеплении антител папаином образуются два идентичных антигенсвязывающих фрагмента, называемых фрагментами “Fab”, и остаточный фрагмент “Fc”, обозначение которого отражает способность легко кристаллизоваться. Фрагмент Fab состоит из полной легкой (L) цепи вместе с доменом вариабельной области тяжелой (H) цепи (VH) и первым константным доменом одной тяжелой цепи (CH1). Обработка антителом пепсином дает один большой фрагмент F(ab’)2, который примерно соответствует двум связанным дисульфидным мостиком Fab-фрагментам, обладающим двухвалентной антигенсвязывающей активностью, и все еще способен к поперечному сшиванию антигена. Фрагменты Fab’ отличаются от фрагментов Fab наличием нескольких дополнительных остатков на карбоксиконце домена СН1, включая в себя один или несколько цистеинов из шарнирной области антитела. Молекулы Fab-C представляют собой молекулы Fab, которые экспрессируются так, что последовательность усекается на первом цистеине шарнирной области, что дает в результате Fab со свободным цистеином непосредственно после экспрессии (см., например, Shatz et al. Mol. Pharmaceutics 2016; идентификатор PubMed (PMID) 27244474). Например, молекула Fab-C может содержать свободный цистеин в положении Cys227 тяжелой цепи. В других случаях молекула Fab-C может содержать свободный цистеин в положении Cys229 тяжелой цепи. Fab’-SH является в настоящем документе обозначением Fab’, в котором остаток(остатки) цистеина константных доменов несут свободную тиоловую группу. Фрагменты F(ab’)2 антител первоначально были получены в виде пар Fab’-фрагментов, которые содержат между собой шарнирные цистеины. Также известны другие химические сочетания фрагментов антител.
[255] Термин “область Fc” в настоящем документе используют для определения С-концевой области тяжелой цепи иммуноглобулина, которая содержит по меньшей мере часть константной области. Термин включает в себя области Fc с нативной последовательностью и варианты областей Fc. Согласно одному варианту осуществления область Fc тяжелой цепи IgG человека простирается от Cys226 или от Pro230 до карбоксильного конца тяжелой цепи. Тем не менее, C-концевой лизин (Lys447) области Fc может присутствовать или не присутствовать. Если не указано иное, нумерацию аминокислотных остатков в области Fc или константной области осуществляют в соответствии с системой нумерации EU, также называемой индексом EU, как описано в Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5-е изд. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991).
[256] “Fv” состоит из димера одного домена вариабельной области тяжелой цепи и одного домена вариабельной области легкой цепи в тесной нековалентной ассоциации. В результате сворачивания этих двух доменов образуются шесть гипервариабельных петель (по 3 петли из цепи H и из цепи L), которые вносят аминокислотные остатки для связывания антигена и придают антителу специфичность связывания с антигеном. Тем не менее, даже один вариабельный домен (или половина Fv, содержащая только три HVR, специфических в отношении антигена) обладает способностью распознавать и связывать антиген, хотя часто с более низкой аффинностью, чем целый сайт связывания.
[257] “Одноцепочечный Fv”, также сокращенно обозначаемый как “sFv” или “scFv”, представляют собой фрагменты антител, которые содержат домены антител VH и VL, соединенную в одну полипептидную цепь. Предпочтительно, полипептид sFv дополнительно содержит полипептидный линкер между доменами VH и VL, который позволяет sFv образовывать требуемую структуру для связывания антигена. Для обзора sFv см. Pluckthun в The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994).
[258] Термин “диатела” относится к небольшим фрагментам антитела, полученным путем конструирования фрагментов sFv (см. предыдущий абзац) с короткими линкерами (примерно 5-10 остатков) между доменами VH и VL, так что достигается межцепочечное, но не внутрицепочечное спаривание доменов V, в результате чего образуется двухвалентный фрагмент, т.е. фрагмент с двумя антигенсвязывающими сайтами. Биспецифические диатела представляют собой гетеродимеры двух “пересекающихся” фрагментов sFv, в которых домены VH и VL двух антител присутствуют в разных полипептидных цепях. Диатела описаны более полно, например, в EP 404097; WO 93/11161; и Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993).
[259] “Блокирующее” антитело или “антагонистическое” антитело представляет собой антитело, которое ингибирует или снижает биологическую активность антигена, с которым оно связывается. Определенные блокирующие антитела или антагонистические антитела по существу или полностью ингибируют биологическую активность антигена.
[260] “Антитело, которое связывается с тем же эпитопом”, что и эталонное антитело, относится к антителу, которое блокирует связывание эталонного антитела с его антигеном в конкурентном анализе на 50% или более, и наоборот, эталонное антитело блокирует связывание антитело с его антигеном в конкурентном анализе на 50% или более. Иллюстративный конкурентный анализ представлен в настоящем документе.
[261] Термин “химерное” антитело относится к антителу, в котором часть тяжелой и/или легкой цепи получена из определенного источника или вида, тогда как остальная часть тяжелой и/или легкой цепи получена из другого источника или вида.
[262] “Класс” антитела относится к типу константного домена или константной области, которой обладает его тяжелая цепь. Существует пять основных классов антител: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, и некоторые из них могут быть дополнительно разделены на подклассы (изотипы), например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2. Константные домены тяжелой цепи, которые соответствуют различным классам иммуноглобулинов, называются α, δ, ε, γ и μ соответственно.
[263] “Исходное антитело” представляет собой антитело, содержащее аминокислотную последовательность, из которой один или несколько аминокислотных остатков заменены одним или несколькими остатками. Исходное антитело может содержать последовательность нативного или дикого типа. Исходное антитело может содержать ранее существовавшие модификации аминокислотной последовательности (такие как добавления, делеции и/или замены) относительно других нативных форм, форм дикого типа или модифицированных форм антитела. Исходное антитело может быть направлено против представляющего интерес целевого антигена, например, биологически важного полипептида, такого как VEGF. Любое из антител, описанных в настоящем документе (например, антитела к VEGF), может представлять собой исходное антитело.
[264] “Эффекторные функции” относятся к тем биологическим активностям, которые относятся к области Fc антитела, которые варьируются в зависимости от изотипа антитела. Примеры эффекторных функций антител включают в себя: связывание C1q и комплемент-зависимую цитотоксичность (CDC); связывание с Fc-рецептором; антителозависимая клеточная цитотоксичность (ADCC); фагоцитоз; отрицательная регуляция рецепторов клеточной поверхности (например, B-клеточного рецептора); и активация В-клеток.
[265] “Каркас” или “каркасная область” или “FR” относится к остаткам вариабельного домена, отличным от остатков гипервариабельной области (HVR). FR вариабельного домена, как правило, состоит из четырех доменов FR: FR1, FR2, FR3 и FR4.
[266] Термины “полноразмерное антитело”, “интактное антитело” и “полное антитело” используют в настоящем документе взаимозаменяемо для обозначения антитела, характеризующегося структурой, по существу сходной со структурой нативного антитела, или содержащего тяжелые цепи, которые содержат область Fc как определено в настоящем документе.
[267] “Консенсусная каркасная область человека” представляет собой каркасную область, которая представляет наиболее часто встречающиеся аминокислотные остатки при выборе каркасных последовательностей VL или VH иммуноглобулина человека. Как правило, выбор последовательностей VL или VH иммуноглобулина человека происходит из подгруппы последовательностей вариабельных доменов. Как правило, подгруппа последовательностей представляет собой подгруппу, как в Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5 Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3. Согласно одному варианту осуществления для VL подгруппой является подгруппа каппа I, как в Kabat с соавт., выше. Согласно одному варианту осуществления для VH подгруппой является подгруппа III, как в Kabat с соавт., выше.
[268] “Гуманизированные” формы не относящихся к человеку (например, относящихся к грызунам) антител представляют собой химерные антитела, которые содержат минимальную последовательность, полученную из относящегося к человеку антитела. По большей части гуманизированные антитела представляют собой иммуноглобулины человека (реципиентное антитело), в которых остатки из гипервариабельной области реципиента заменены остатками из гипервариабельной области не относящегося к человеку вида (донорное антитело), например, мыши, крысы, кролика или примата, не являющегося человеком, с требуемой специфичностью, аффинностью и способностью антител. В некоторых случаях остатки FR иммуноглобулина человека заменены соответствующими не относящимися к человеку остатками. Кроме того, гуманизированные антитела могут содержать остатки, которые не обнаружены в реципиентном антителе или в донорном антителе. Эти модификации произведены для дополнительного улучшения характеристик антител. В общем, гуманизированное антитело будет содержать по существу все из по меньшей мере одного и, как правило, двух вариабельных доменов, в которых все или по существу все гипервариабельные петли соответствуют таковым у не относящегося к человеку иммуноглобулина, и все или по существу все FR представляют собой FR из последовательности иммуноглобулина человека. Гуманизированное антитело необязательно также будет содержать по меньшей мере часть константной области иммуноглобулина (Fc), как правило часть константной области иммуноглобулина человека. Для получения дополнительной информации см. Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); и Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992).
[269] Термин “вариабельный” относится к тому факту, что определенные сегменты вариабельных доменов сильно различаются по последовательности среди антител. Вариабельный или V-домен опосредует связывание антигена и определяет специфичность конкретного антитела к его конкретному антигену. Тем не менее, изменчивость неравномерно распределена по всему диапазону вариабельных доменов. Вместо этого V-области состоят из относительно инвариантных участков, называемых каркасными областями (FR) из 15-30 аминокислот, разделенных более короткими областями с крайней степенью изменчивости, называемыми “гипервариабельными областями”, каждая из которых составляет 9-12 аминокислот в длину. Термин “гипервариабельная область” или “HVR” при использовании в настоящем документе относится к аминокислотным остаткам антитела, которые отвечают за связывание антигена. Гипервариабельная область, как правило, содержит аминокислотные остатки, например, в области приблизительно остатков 24-34 (L1), 50-56 (L2) и 89-97 (L3) в VL и в области приблизительно остатков 26-35 (H1) 49-65 (Н2) и 95-102 (Н3) в VH (согласно одному варианту осуществления H1 находится в области приблизительно остатков 31-35); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5 Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)) и/или таких остатков из “гипервариабельной петли” (например, остатки 26-32 (L1), 50-52 (L2) и 91-96 (L3) в VL и 26-32 (H1), 53- 55 (H2) и 96-101 (H3) в VH; Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987). Каждый из вариабельных доменов нативных тяжелых и легких цепей содержит четыре FR, в основном принимающих конфигурацию бета-листа, соединенные тремя гипервариабельными областями, которые образуют петли, соединяющие и в некоторых случаях являющиеся частью структуры бета-листа. Гипервариабельные области в каждой цепи удерживаются вместе в непосредственной близости с помощью FR и, вместе с гипервариабельными областями из другой цепи, способствуют образованию антигенсвязывающего сайта антител (см. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5 Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Соответственно последовательности HVR и FR, как правило, появляются в следующей последовательности в VH (или VL): FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4. Константные домены не участвуют непосредственно в связывании антитела с антигеном, но проявляют различные эффекторные функции, такие как участие антитела в антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC).
[270] Термин “нумерация остатков вариабельных доменов согласно Kabat” или “нумерация аминокислотных положений согласно Kabat” и их вариации, относится к системе нумерации, используемой для вариабельных доменов тяжелой цепи или вариабельных доменов легкой цепи подборки антител в Kabat с соавт., выше. Используя эту систему нумерации, фактическая линейная аминокислотная последовательность может содержать меньше или дополнительные аминокислоты, соответствующие укорочению или вставке в FR или HVR вариабельного домена. Например, вариабельный домен тяжелой цепи может включать в себя одну аминокислотную вставку (остаток 52a в соответствии с Kabat) после остатка 52 H2 и вставленные остатки (например, остатки 82a, 82b и 82c и т.д. в соответствии с Kabat) после остатка 82 FR тяжелой цепи. Нумерацию остатков согласно Kabat можно определить для данного антитела путем выравнивания в областях гомологии последовательности антитела со “стандартной” последовательностью, пронумерованной в соответствии с Kabat.
[271] Система нумерации согласно Kabat, как правило, используют для обозначения остатка в вариабельном домене (приблизительно остатки 1-107 легкой цепи и остатки 1-113 тяжелой цепи) (например, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5 Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). “Система нумерации EU” или “индекс EU”, как правило, используют для обозначения остатка в константной области тяжелой цепи иммуноглобулина (например, индекс EU, описанный в Kabat с соавт., выше). “Индекс EU по Kabat” относится к нумерации остатков антитела IgG1 EU человека. Если в настоящем документе не указано иное, ссылки на номера остатков в вариабельном домене антител означают нумерацию остатков с помощью системы нумерации Kabat. Если в настоящем документе не указано иное, ссылки на номера остатков в константном домене антител означают нумерацию остатков в системе нумерации ЕС (например, см. предварительную заявку на выдачу патента США № 60/640323, фигуры в отношении нумерации EU).
[272] Если не указано иное, остатки HVR и другие остатки в вариабельном домене (например, остатки FR) пронумерованы в настоящем документе согласно Kabat с соавт., выше.
[273] Термин “выделенное антитело” при использовании для описания различных антител, раскрытых в настоящем документе, означает антитело, которое было идентифицировано и отделено и/или извлечено из клетки или клеточной культуры, из которой оно было экспрессировано. Загрязняющие компоненты его естественной среды представляют собой материалы, которые, как правило, мешают диагностическому или терапевтическому использованию полипептида и могут включать в себя ферменты, гормоны и другие белковые или небелковые растворенные вещества. Согласно некоторым вариантам осуществления антитело очищают до чистоты более 95% или 99%, что определяют, например, с помощью электрофоретического (например, SDS-PAGE, изоэлектрического фокусирования (IEF), капиллярного электрофореза) или хроматографического (например, с помощью ионообменной или обращенно-фазовой ВЭЖХ). Для обзора способов оценки чистоты антител см., например, Flatman et al., J. Chromatogr. B 848: 79-87 (2007). Согласно предпочтительным вариантам осуществления антитело будет очищено (1) до степени, достаточной для получения по меньшей мере 15 остатков N-концевой или внутренней аминокислотной последовательности с использованием секвенатора с вращающимся стаканом или (2) до гомогенности с помощью SDS-PAGE при невосстанавливающих или восстанавливающих условиях с использованием кумасси синего или, предпочтительно, серебряного красителя. Выделенное антитело включает в себя антитела in situ в рекомбинантных клетках, поскольку по меньшей мере один компонент полипептидной природной среды не будет присутствовать. Как правило, однако, выделенный полипептид будет получен с помощью по меньшей мере одной стадии очистки.
[274] Используемый в настоящем документе термин “моноклональное антитело” относится к антителу, полученному из популяции по существу гомогенных антител, т.е. отдельные антитела, составляющие популяцию, являются идентичными и/или связывают один и тот же эпитоп, за исключением возможных вариантных антител, например, содержащих встречающиеся в природе мутации или возникающие во время производства препарата моноклональных антител, такие варианты, как правило, присутствуют в небольших количествах. В отличие от препаратов поликлональных антител, которые, как правило, включают в себя разные антитела, направленные против разных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело препарата моноклональных антител направлено против одной детерминанты на антигене. Таким образом, термин “моноклональное” указывает на характер антитела, получаемого из по существу гомогенной популяции антител, и его не следует истолковывать как требующее получения антитела каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела, которые должны использоваться в соответствии с настоящим изобретением, можно получить с помощью различных техник, включая в себя без ограничения способ гибридомы, способы рекомбинантной ДНК, способы фагового дисплея и способы с использованием трансгенных животных, содержащих все или часть локусов иммуноглобулина человека, такие способы и другие иллюстративные способы получения моноклональных антител описаны в настоящем документе.
[275] Термин “мультиспецифическое антитело” используют в самом широком смысле, и конкретно он охватывает антитело, содержащее вариабельный домен тяжелой цепи (VH) и вариабельный домен легкой цепи (VL), где звено VH-VL обладает полиэпитопной специфичностью (т.е. способен связываться с двумя разными эпитопами на одной биологической молекуле или с каждым эпитопом на другой биологической молекуле). Такие мультиспецифические антитела включают в себя без ограничения полноразмерные антитела, антитела с двумя или более доменами VL и VH, фрагменты антител, такие как Fab, Fab’, Fab-C. Fv, dsFv, scFv, диатела, биспецифические диатела и триатела, фрагменты антител, которые были связаны ковалентно или нековалентно. “Полиэпитопная специфичность” относится к способности специфически связываться с двумя или более различными эпитопами на одной или разных мишенях. “Двойная специфичность” или “биспецифичность” относится к способности специфически связываться с двумя разными эпитопами на одной или разных мишенях. Тем не менее, в отличие от биспецифических антител, биспецифические антитела содержат два антигенсвязывающих плеча, которые являются идентичными по аминокислотной последовательности, и каждое плечо Fab способно распознавать два антигена. Двойная специфичность позволяет антителам взаимодействовать с высокой аффинностью с двумя различными антигенами в виде одной молекулы Fab или IgG. Согласно одному варианту осуществления мультиспецифическое антитело в форме IgG1 связывается с каждым эпитопом с аффинностью от 5 мкМ до 0,001 пМ, от 3 мкМ до 0,001 пМ, от 1 мкМ до 0,001 пМ, от 0,5 мкМ до 0,001 пМ или от 0,1 мкМ до 0,001 пМ. “Моноспецифический” относится к способности связывать только один эпитоп.
[276] “Нативные антитела” относятся к встречающимся в природе молекулам иммуноглобулина с различной структурой. Например, нативные антитела IgG представляют собой гетеротетрамерные гликопротеины, составляющие приблизительно 150000 Да, состоящие из двух идентичных легких цепей и двух идентичных тяжелых цепей, которые связаны дисульфидной связью. От N- до C-конца каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область (VH), также называемую вариабельным тяжелым доменом или вариабельным доменом тяжелой цепи, за которой следуют три константных домена (CH1, CH2 и CH3). Аналогично, от N- до C-конца каждая легкая цепь содержит вариабельную область (VL), также называемую вариабельным легким доменом или вариабельным доменом легкой цепи, за которой следует константный домен легкой цепи (CL). Легкая цепь антитела может быть отнесена к одному из двух типов, называемых каппа (κ) и лямбда (λ), на основе аминокислотной последовательности ее константного домена.
[277] Что касается связывания антитела с молекулой-мишенью, то термин “специфическое связывание” или “специфически связывается” или “является специфическим в отношении” конкретного полипептида или эпитопа на конкретном полипептиде-мишени означает связывание, которое измеримо отличается от неспецифического взаимодействия. Специфическое связывание можно измерить, например, путем определения связывания молекулы по сравнению со связыванием контрольной молекулы. Например, специфическое связывание можно определить путем конкуренции с контрольной молекулой, которая похожа на мишень, например, с избытком немеченой мишени. В этом случае специфическое связывание определяют, если связывание меченой мишени с зондом конкурентно ингибируется избытком немеченой мишени. Используемый в настоящем документе термин “специфическое связывание” или “специфически связывается с” или является “специфическим в отношении” конкретного полипептида или эпитопа на конкретной полипептидной мишени можно продемонстрировать, например, с помощью молекулы, характеризующейся значением Kd в отношении мишени, составляющим 10-4 М или ниже, альтернативно 10-5 М или ниже, альтернативно 10-6 М или ниже, альтернативно 10-7 М или ниже, альтернативно 10-8 М или ниже, альтернативно 10-9 М или ниже, альтернативно 10-10 М или ниже, альтернативно 10-11 М или ниже, альтернативно 10-12 М или ниже или Kd в диапазоне от 10-4 М до 10-6 М или от 106 М до 1010 М или 107 М до 109 М. Специалисту в настоящей области техники понятно, что значения аффинности и Kd обратно пропорциональны. Высокая аффинность к антигену измеряется низким значением Kd. Согласно одному варианту осуществления термин “специфическое связывание” относится к связыванию, где молекула связывается с конкретным полипептидом или эпитопом на конкретном полипептиде без существенного связывания с любым другим полипептидом или полипептидным эпитопом.
[278] “Идентичность аминокислотной последовательности в процентах (%)” по отношению к эталонной полипептидной последовательности определяют как процентное отношение аминокислотных остатков в последовательности-кандидате, которые идентичны аминокислотным остаткам в эталонной полипептидной последовательности после выравнивания последовательностей и введение пропусков, если необходимо, для достижения максимальной процентной идентичности последовательности и не рассматривая какие-либо консервативные замены как часть идентичности последовательности. Выравнивание в целях определения процента идентичности аминокислотной последовательности может быть достигнуто различными способами, которые известны специалисту в настоящей области техники, например, с использованием общедоступного компьютерного программного обеспечения, такого как программное обеспечение BLAST, BLAST-2, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Специалисты в настоящей области техники могут определить подходящие параметры для выравнивания последовательностей, включая в себя любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей. Однако для целей настоящего описания значения идентичности аминокислотной последовательности в % генерируют с использованием компьютерной программы сравнения последовательностей ALIGN-2. Компьютерная программа для сравнения последовательностей ALIGN-2 создана Genentech, Inc., а исходный код был подан вместе с пользовательской документацией в Бюро по охране авторских прав США, Вашингтон, округ Колумбия, 20559, где она зарегистрирована под регистрационным номером авторского права США № TXU510087. Программа ALIGN-2 является общедоступной от Genentech, Inc., Южный Сан-Франциско, Калифорния, или может быть скомпилирована из исходного кода. Программа ALIGN-2 должна быть скомпилирована для использования в операционной системе UNIX, включая в себя цифровую UNIX V4.0D. Все параметры сравнения последовательностей устанавливаются программой ALIGN-2 и не меняются.
[279] В ситуациях, когда ALIGN-2 используют для сравнения аминокислотных последовательностей идентичности аминокислотной последовательности в % для данной аминокислотной последовательности A по отношению к, с или против данной аминокислотной последовательности B (которая альтернативно может быть сформулирована как данная аминокислотная последовательность A, которая характеризуется или содержит определенный % идентичности аминокислотной последовательности по отношению к, с или против данной аминокислотной последовательности B), рассчитывают следующим образом: в 100 раз превышает долю X/Y, где X - количество аминокислотных остатков, оцененных как идентичные совпадения программой выравнивания последовательностей ALIGN-2 в этой программе выравнивания A и B, и где Y - общее количество аминокислотных остатков в B. Понятно, что если длина аминокислотной последовательности A не равна длине аминокислотной последовательности B, % идентичности аминокислотной последовательности A по отношению к B не будет равен % идентичности аминокислотной последовательности B по отношению к A. Если специально не указано иное, все значения % идентичности аминокислотной последовательности, использованные в настоящем документе, получены, как описано в непосредственно предшествующем абзаце, с использованием компьютерной программы ALIGN-2.
[280] Используемый в настоящем документе термин “введение” означает способ введения дозы соединения (например, конъюгата антитело-гидрогель согласно настоящему изобретению) или композиции (например, фармацевтической композиции, например, фармацевтической композиции, включающей в себя конъюгат антитело-гидрогель согласно настоящему изобретению) субъекту. Композиции, используемые в описанных в настоящем документе способах, можно вводить, например, интравитреально (например, с помощью интравитреальной инъекции), с помощью глазных капель, внутримышечным, местным, субъюнктивальным, интравезикулярным, внутриглазным, внутриорбитальным путем, с помощью инъекции, имплантации, инфузии, непрерывной инфузии, в липидных композициях.
[281] “Ангиогенез” относится к процессу, посредством которого новые кровеносные сосуды образуются из уже существующих кровеносных сосудов. Ангиогенез отличается от васкулогенеза, который представляет собой de novo образование эндотелиальных клеток из мезодермальных клеток-предшественников. Нарушения, ассоциированные с патологическим ангиогенезом, можно лечить композициями и способами согласно настоящему изобретению. Эти нарушения включают в себя как неопухолевые нарушения, так и нарушения клеточной пролиферации. Нарушения клеточной пролиферации включают в себя без ограничения те, которые описаны ниже. Неопухолевые нарушения включают в себя без ограничения офтальмологические состояния (неограничивающие офтальмологические состояния включают в себя, например, следующее: ретинопатия, включая в себя пролиферативную диабетическую ретинопатию, хориоидальную неоваскуляризацию (CNV), возрастную макулярную дегенерацию (AMD), диабетическую и другие связанные с ишемией ретинопатии, диабетический макулярный отек (DME), патологическая миопия, болезнь фон Хиппель-Линдау, гистоплазмоз глаза, окклюзия вен сетчатки (включая в себя центральную (CRVO) и разветвленную (BRVO) формы), неоваскуляризация роговицы, неоваскуляризация сетчатки, ретинопатия недоношенных (ROP), семейная экссудативная витреоретинопатия (FEVR), болезнь Коутса, болезнь Норри, синдром остеопороза-псевдоглиомы (OPPG), субконъюнктивальное кровоизлияние, рубеоз радужки, неоваскулярные заболевания глаз, неоваскулярная глаукома и гипертоническая ретинопатия), аутоиммунные заболевания (например, ревматоидный артрит (RA), псориаз, анкилозирующий спондилит и воспалительное заболевание кишечника (например, болезнь Крона и язвенный колит)), нежелательная или аберрантная гипертрофия, артрит, псориатический артрит, псориатические бляшки, саркоидоз, атеросклероз, атеросклеротические бляшки, артериальный атеросклероз, сосудистый рестеноз, артериовенозные мальформации (АВМ), менингиома, гемангиома, ангиофиброма, гиперплазия щитовидной железы (включая в себя болезнь Грейвса), трансплантация роговицы и других тканей, воспаление легких, острое повреждение легких/ОРДС (острый респираторный дистресс-синдром), сепсис, первичная легочная гипертензия, злокачественные выпоты в легких, отек головного мозга (например, связанный с острым инсультом/закрытой травмой/повреждением черепа), синовиальное воспаление, образование паннуса при РА, оссифицирующий миозит, гипертрофическое образование костей, остеоартрит (ОА), рефрактерный асцит, синдром поликистозных яичников, эндометриоз, заболевания с выходом жидкости из сосудов в другие компартменты тела (панкреатит, синдром длительного сдавливания, ожоги, заболевание кишечника), хроническая бронхиальная астма, миома матки, преждевременные роды, хроническое воспаление, такое как воспалительное заболевание кишечника (IBD) (болезнь Крона и язвенный колит), воспалительные заболевания почек (включая в себя гломерулонефрит, особенно мезангиопролиферативный гломерулонефрит, гемолитический уремический синдром, диабетическая нефропатия и гипертонический нефросклероз), заболевания, возникающие после трансплантации, отторжение почечного аллотрансплантата, воспалительные заболевания, нефротический синдром, нежелательный или аберрантный рост массы ткани (не рак), гемофилическая артропатия, гипертрофические рубцы, угнетение роста волос, синдром Ослера-Вебера, пиогенная гранулема, ретролентальная фиброплазия, склеродермия, трахома, сосудистые спайки, синовит, дерматит, преэклампсия, асцит, перикардиальный выпот (например, связанный с перикардитом) и плевральный выпот. Дополнительные офтальмологические нарушения описаны ниже.
[282] Другие нарушения, которые могут быть связаны с патологическим ангиогенезом, включают в себя следующее: несрастание переломов (переломы, которые не заживают), пиогенная гранулема, трахома, гемофилическая артропатия, сосудистые спайки и гипертрофические рубцы, отторжение трансплантата, сосудисто-волокнистая ткань, розовые угри, синдром приобретенного иммунодефицита, окклюзия артерии, атопический кератит, бактериальные язвы, болезнь Бехчета, обструктивная болезнь сонных артерий, хроническое воспаление, хроническое отслоение сетчатки, хронический увеит, хронический витрит, переутомляемость глаз от контактных линз, отторжение роговичного трансплантата, неоваскуляризация роговичного трансплантата, болезнь Илза, эпидемический кератоконъюнктивит, грибковые язвы, инфекции вируса простого герпеса, инфекции опоясывающего лишая, синдромы повышенной вязкости крови, саркома Капоши, лейкоз, липидная дегенерация, болезнь Лайма, краевой кератолиз, разъедающая язва роговицы, микобактериальные инфекции, кроме проказы, миопия, врождённые ямки в диске зрительного нерва, остеоартрит, болезнь Педжета, парспланит, пемфигоид, фликтенулез, полиартериит, осложнения после воздействия лазером, протозойные инфекции, эластическая псевдоксантома, крыловидная плева, синдром сухого глаза, радиальная кератотомия, ретролентальная фиброплазия, саркоидоз, склерит, серповидноклеточная анемия, синдром Шегрена, болезнь Старгарта, болезнь Стивенса-Джонсона, верхний лимбальный кератит, сифилис, системная волчанка, краевая дегенерация Терьена, токсоплазмоз, травма, окклюзия вен, дефицит витамина А и саркоидоз Вегенера, нежелательный ангиогенез, ассоциированный с диабетом, паразитарные заболевания, ненормальное заживление ран, гипертрофия после операции, повреждение или травма, угнетение роста волос, угнетение овуляции и образования желтого тела, угнетение имплантации и угнетение развития эмбриона в матке.
[283] Используемый в настоящем документе термин “офтальмологическое нарушение” включает в себя любое офтальмологическое нарушение (которое также взаимозаменяемо в настоящем документе называется “офтальмологическое состояние”), ассоциированное с патологическим ангиогенезом. Офтальмологическое нарушение может характеризоваться измененной или нерегулируемой пролиферацией и/или инвазией новых кровеносных сосудов в структуры тканей глаза, такие как сетчатка или роговица. Неограничивающие офтальмологические нарушения включают в себя, например, следующее: AMD (например, влажная AMD, сухая AMD, промежуточная AMD, прогрессирующая AMD и географическая атрофия (GA)), макулярная дегенерация, макулярный отек, DME (например, очаговый, нецентровый DME и диффузный, DME с вовлечением центра макулы), ретинопатия, диабетическая ретинопатия (DR) (например, пролиферативная DR (PDR), непролиферативная DR (NPDR) и высотная DR), другие связанные с ишемией ретинопатии, ROP, окклюзия вен сетчатки (RVO) (например, центральная (CRVO) и разветвленная (BRVO) формы), CNV (например, миопическая CNV), неоваскуляризация роговицы, заболевание, ассоциированное с неоваскуляризацией роговицы, неоваскуляризация сетчатки, заболевание, ассоциированное с ретинальной/хориоидальной неоваскуляризацией, патологическая миопия, болезнь фон Хиппель-Линдау, гистоплазмоз глаза, FEVR, болезнь Коутса, болезнь Норри, OPPG, субконъюнктивальное кровоизлияние, рубеоз радужки, неоваскулярные заболевания глаз, неоваскулярная глаукома, пигментный ретинит (RP), гипертоническая ретинопатия, ангиоматозная пролиферация сетчатки, макулярная телеангиэктазия, неоваскуляризация радужки, внутриглазная неоваскуляризация, дегенерация сетчатки, кистозный макулярный отек (CMЕ), васкулит, отек диска зрительного нерва, ретинит, конъюнктивит (например, инфекционный конъюнктивит и неинфекционный (например, аллергический) конъюнктивит), врожденный амавроз Лебера (также известный как амавроз Лебера, или LCA), увеит (включая в себя инфекционный и неинфекционный увеит), хориоидит (например, многоочаговый хориоидит), глазной гистоплазмоз, блефарит, сухость глаз, травматическое повреждение глаз, болезнь Шегрена и другие офтальмологические заболевания, причем заболевание или нарушение ассоциировано с глазной неоваскуляризацией, транссудацией и/или отеком сетчатки. Дополнительные иллюстративные офтальмологические нарушения включают в себя заболевания, ассоциированные с рубеозом радужки (неоваскуляризация угла передней камеры) и заболевания, вызванные аномальной пролиферацией сосудисто-волокнистой или фиброзной ткани, включая в себя все формы пролиферативной витреоретинопатии.
[284] Иллюстративное заболевание, ассоциированное с неоваскуляризацией роговицы, включает в себя без ограничения следующее: эпидемический кератоконъюнктивит, дефицит витамина А, переутомляемость глаз от контактных линз, атопический кератит, верхний лимбальный кератит, крыловидная плева, синдром сухого глаза, синдром Шегрена, розовые угри, фликтенулез, сифилис, микобактериальные инфекции, липидная дегенерация, химические ожоги, вызванные бактериями язвы, вызванные грибами язвы, инфекции вируса простого герпеса, протозойные инфекции, саркома Капоши, разъедающая язва роговицы, краевая дегенерация Терьена, краевой кератолиз, ревматоидный артрит, системная волчанка, полиартериит, травма, саркоидоз Вегенера, склерит, синдром Стивенса-Джонсона, периферигоидная радиальная кератотомия и отторжение роговичного трансплантата.
[285] Иллюстративное заболевание, ассоциированное с ретинальной/хориоидальной неоваскуляризацией, включает в себя без ограничения следующее: диабетическая ретинопатия, макулярная дегенерация, серповидно-клеточная анемия, саркоидоз, сифилис, эластическая псевдоксантома, болезнь Педжета, окклюзия вен, окклюзия артерий, обструктивная болезнь сонных артерий, хронический увеит/витрит, микобактериальные инфекции, болезнь Лайма, системная красная волчанка, ретинопатия недоношенных, пигментная дистрофия сетчатки, макулярный отек), болезнь Илза, болезнь Бехчета, инфекции, вызывающие ретинит или хориоидит (например, многоочаговый хориоидит), предполагаемый гистоплазмоз глаз, болезнь Беста (желточная дегенерация желтого пятна), миопия, врождённые ямки в диске зрительного нерва, болезнь Старгарта, парспланит, отслоение сетчатки (например, хроническое отслоение сетчатки), синдромы повышенной вязкости крови, токсоплазмоз, травмы и осложнения после воздействия лазера.
[286] Используемый в настоящем документе термин “нарушения, ассоциированные с нежелательной проницаемостью сосудов,” включают в себя, например, отек, ассоциированный с опухолями головного мозга, асцит, ассоциированный со злокачественными новообразованиями, синдром Мейгса, воспаление легких, нефротический синдром, перикардиальный выпот, плевральный выпот или проницаемость, ассоциированную с сердечно-сосудистыми заболеваниями, такими как состояние после инфаркта миокарда и инсультов и т.п.
[287] “Вариант” или “мутант” исходного или эталонного полипептида (например, эталонного антитела или его вариабельного домена(ов)/HVR(нескольких HVR)) представляет собой полипептид, который (1) характеризуется аминокислотной последовательностью, отличающейся от аминокислотной последовательности исходного или эталонного полипептида и (2) был получен из исходного или эталонного полипептида посредством естественного или искусственного (произведенного человеком) мутагенеза. Такие варианты включают в себя, например, делеции и/или вставки и/или замены остатков в аминокислотной последовательности представляющего интерес полипептида, называемые в настоящем документе “изменениями аминокислотных остатков”. Таким образом, вариант HVR относится к HVR, содержащей вариантную последовательность относительно исходной или эталонной полипептидной последовательности (такой как последовательность исходного антитела или антигенсвязывающего фрагмента). В данном контексте изменение аминокислотного остатка относится к аминокислоте, отличной от аминокислоты в соответствующем положении в исходной или эталонной полипептидной последовательности (такой как последовательность эталонного антитела или его фрагмента). Любую комбинацию делеции, вставки и замены можно осуществить для получения конечного вариантного или мутантного конструкта при условии, что конечный конструкт обладает требуемыми функциональными характеристиками. Изменения аминокислот также могут изменять посттрансляционные процессы полипептида, такие как изменение количества или положения сайтов гликозилирования.
[288] Последовательность “дикого типа” (WT) или “эталон” или последовательность белка/полипептида “дикого типа” или “эталона”, такого как HVR или вариабельного домена эталонного антитела, могут являться эталонной последовательностью, из каких вариантные полипептиды получают путем введения мутаций. В общем, последовательность “дикого типа” для данного белка является наиболее распространенной в природе последовательностью. Аналогично, последовательность гена “дикого типа” представляет собой последовательность этого гена, которая чаще всего встречается в природе. Мутации можно вводить в ген “дикого типа” (и, следовательно, в белок, который он кодирует) либо посредством естественных процессов, либо с помощью индуцированных человеком средств. Продуктами таких процессов являются “вариантные” или “мутантные” формы исходного белка или гена “дикого типа”.
[289] Используемый в настоящем документе термин “клиренс” относится к объему вещества (например, антитела к VEGF, конъюгата антител, слитого белка (например, слитого белка Fab) или полимерного состава), который выводиться из компартмента (например, глаза (например, стекловидного тела)) в единицу времени.
[290] Термин “период полужизни” относится к времени, необходимому для концентрации вещества (например, антитела к VEGF, конъюгата антитела, слитого белка (например, слитого белка Fab) или полимерного состава), чтобы уменьшиться наполовину, in vivo (например, в глазу (например, в стекловидном теле)) или in vitro.
[291] Термин “эффективный период полужизни” относится к времени, необходимому для снижения концентрации конъюгата, например, конъюгата гидрогель-линкер-антитело, на половину in vivo (например, в глазу, например, в стекловидном теле) или in vitro. Понятно, что каждый из компонентов конъюгата, например гидрогель, линкер и антитело, может вносить вклад в эффективный период полужизни конъюгата.
Очистка HA
[292] HA можно необязательно очищать перед дериватизацией в соответствии со способами согласно настоящему раскрытию. Согласно некоторым таким аспектам образуется водный раствор, содержащий НА и от приблизительно 0,5 до приблизительно 1 моль/л ацетата натрия. HA осаждают из раствора путем добавления этанола до приблизительно 80% этанола объем./объем. Осажденную НА собирают и промывают с помощью приблизительно 80% объем./объем. этанола, а затем с помощью абсолютного этанола. Процедуру растворения/осаждения/промывки можно повторять по мере необходимости, пока не будет достигнута требуемая чистота.
Получение амин-функционализированной гиалуроновой кислоты
[293] Согласно некоторым аспектам гиалуроновую кислоту подвергают функционализации амином путем реакции реакционной смеси, содержащей HA согласно формуле I, первичного амина (H2N-LA-NH2) и карбоксил-активирующего реагента для реакции присоединения с образованием амин-HA согласно формуле II и частично поперечно-сшитой амин-HA согласно формуле III в соответствии со схемой реакции 1 ниже.
[294] Схема реакции 1
[295] Степень функционализации HA II и III с помощью аминного реагента H2N-LA-NH2, как показано на схеме реакции 1, описана в другом месте настоящего документа.
[296] На схеме реакции 1 каждый Ra1 независимо выбран из H, C1-4 алкила, противоиона щелочного металла, противоиона аммония или противоиона щелочноземельного металла. Каждый Ra2 независимо выбран из H, C1-4 алкила и противоиона щелочного металла. поперечно-сшивающую сложноэфирную связь в формуле III можно впоследствии гидролизовать, как описано дополнительно ниже, с получением дополнительного материала согласно формуле II, и чтобы сделать продукт реакции согласно схеме 1 пригодным для стерилизующей фильтрации.
[297] Согласно некоторым таким аспектам LA представляет собой спейсер. Согласно некоторым другим аспектам LA является необязательно замещенным и/или необязательно прерванным C1-10 алкиленом. Согласно некоторым таким аспектам LA представляет собой неразветвленный C2-4 алкилен или н-пропилен. Согласно другим аспектам LA может содержать оксиалкиленовый олигомер или полимер, такой как полиэтиленгликоль (PEG).
При образовании амида на схеме реакции 1 используют реагент для реакции присоединения, который согласно определенным вариантам осуществления можно выбрать из следующего: 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (EDC), дициклогексилкарбодиимид (DCC), диизопропилкарбодиимид (DIC), 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолинийхлорид (DMTMM) и 2-хлор-4,6-диметокси-1,3,5-триазин) (CDMT). Согласно некоторым конкретным аспектам реагент для реакции присоединения представляет собой EDC.
Согласно некоторым аспектам реакционная смесь может дополнительно содержать дополнительное средство для реакции присоединения. Согласно некоторым таким аспектам дополнительное средство для реакции присоединения можно выбрать из следующего: 1-гидроксибензотриазол (HOBt), 1-гидрокси-7-аза-1H-бензотриазол (HOAt), N-гидроксисукцинимид (HOSu) и этил-2-циано-2-(гидроксимино)ацетат (Oxyma pure®). Согласно некоторым конкретным аспектам дополнительное средство для реакции присоединения представляет собой HOBt. Согласно другим вариантам осуществления реагент для реакции присоединения может представлять собой 1-циано-2-этокси-2-оксоэтилиденаминоокси)диметиламино-морфолино-карбенийгексафторфосфат (COMU). Буфер, характеризующийся pH от приблизительно 5 до приблизительно 6 при концентрации, составляющей от приблизительно 50 мM до 150 мM, как правило, является подходящим для реакционной смеси для образования амин-функционализированной гиалуроновой кислоты. Согласно некоторым таким аспектам буфер представляет собой 2-(N-морфолино)этансульфоновую кислоту (MES).
[298] Реакционная смесь согласно некоторым вариантам осуществления может дополнительно содержать полярный апротонный растворитель для улучшения растворимости веществ, участвующих в реакции. Согласно таким аспектам подходящие отношения буфера к полярному апротонному растворителю составляют приблизительно 1:3 объем./объем., приблизительно 1:2 объем./объем., приблизительно 1:1,5 объем./объем., приблизительно 1:1 объем./объем., приблизительно 1,5:1 объем./объем., приблизительно 2:1 объем./объем., приблизительно 3:1 объем./объем., приблизительно 5:1 объем./объем. или приблизительно 10:1 объем./объем. Согласно некоторым таким аспектам полярный апротонный растворитель можно выбрать из следующего: ацетон, N,N-диметилформамид (DMF), ацетонитрил (ACN), диметилсульфоксид (DMSO) и их комбинации. Согласно одному аспекту растворитель представляет собой ацетонитрил.
[299] Функционализацию амином можно выполнить при температуре, составляющей приблизительно 10°C, приблизительно 15°C, приблизительно 20°C, приблизительно 25°C, приблизительно 30°C, приблизительно 35°C или приблизительно 40°C, в течение времени, подходящего для достижения по существу полного присоединения, такого как приблизительно 2 часа, приблизительно 4 часа, приблизительно 6 часов, приблизительно 8 часов, приблизительно 10 часов, приблизительно 12 часов или дольше.
[300] Согласно любому из различных аспектов настоящего раскрытия эквиваленты карбоксильных групп превышают эквиваленты первичного амина на образованной, функционализированной HA, как описано выше, так что не все карбоксильные группы HA являются функционализированными, как показано на схеме реакции I. Более конкретно, аминные функциональные группы вводят для обеспечения степени функционализации HA (или ее производного или ее соли щелочного металла), составляющей приблизительно 2%, приблизительно 3%, приблизительно 4%, приблизительно 5%, приблизительно 6%, приблизительно 7%, приблизительно 8%, приблизительно 9%, приблизительно 10%, приблизительно 11%, приблизительно 12%, приблизительно 13%, приблизительно 14% или приблизительно 15% и диапазон этих значений, или как описано в другом месте настоящего документа. Концентрация гиалуроната, первичного амина и дополнительного средства для реакции присоединения может поддерживаться постоянной, и указанные концентрации не зависят от требуемой загрузки амином образующейся функционализированной амином гиалуроновой кислоты.
[301] Примеры подходящих концентраций гиалуроната могут находиться в диапазоне, например, от 2 г/л до 16 г/л. Количество эквивалентов аминного реагента и амидных дополнительных средств для реакции присоединения по отношению к эквивалентам карбоксилатных групп на HA I может варьироваться, при необходимости, для обеспечения требуемой степени функционализации. Степень функционализации согласно некоторым вариантам осуществления можно контролировать на основе эквивалентов амидного реагента для реакции присоединения в присутствии избытка аминного реагента.
[302] Как показано на схеме реакции 1, часть НА может быть поперечно-сшита сложноэфирными связями с образованием частично поперечно-сшитой амин-НА. Такая частично поперечно-сшитая НА является растворимой в водных системах, но в большинстве случаев не фильтруется стерильно. поперечно-сшитую НА можно инкубировать в присутствии основания для гидролиза сложноэфирных связей и получения линейной амин-НА. Подходящие основания включают в себя основания щелочных металлов, такие как NaOH, KOH и LiOH. Гидролиз можно проводить при концентрации основания, такой как приблизительно 0,1 M, приблизительно 0,5 M, приблизительно 1 M, приблизительно 1,5 M или приблизительно 2 M, при значении pH, составляющем от приблизительно 12 до приблизительно 14, приблизительно 13 до приблизительно 14, или приблизительно 14, при температуре, составляющей приблизительно 10°C, приблизительно 15°C, приблизительно 20°C, приблизительно 25°C, приблизительно 30°C, приблизительно 35°C или приблизительно 40°C, в течение времени, подходящего для достижения по существу полного гидролиза. например, приблизительно 0,5 часа, приблизительно 1 часа, приблизительно 1,5 часа, приблизительно 2 часов или дольше. Такая гидролизованная амин-НА характеризуется среднечисловой молекулярной массой, по существу такой же, как исходный материал - нативная НА, является растворимой в водных системах и стерильно фильтруется. После гидролиза pH можно довести до значения от приблизительно 6 до приблизительно 8,5, от приблизительно 6,5 до приблизительно 8, или до приблизительно 7,5 с помощью неорганической кислоты или органической кислоты. Согласно некоторым аспектам кислота представляет собой уксусную кислоту.
Получение малеимидо-функционализированной HA
[303] Согласно некоторым аспектам настоящего раскрытия описанный в другом месте в настоящем документе амин-функционализированная HA реагирует с -N-гидроксисукцинимид (NHS)-La-малеимидом или NHS-LC-малеимидом с образованием малеимид-функционализированной HA. Согласно некоторым таким аспектам производное HA согласно формуле II реагирует с NHS-LB-малеимидом или NHS-LC-малеимидом (где NHS представляет собой N-гидроксисукцинимид и находится в форме активированного сложного эфира с LB или LC) с образованием малеимид-функционализированной HA согласно формуле IV в соответствии со схемой реакции 2 ниже.
[304] Схема реакции 2
где Ra1, Ra2 и LA являются такими, как описано в другом месте настоящего документа. Согласно некоторым конкретным аспектам малеимидный спейсер представляет собой LB . Согласно другим аспектам малеимидный спейсер представляет собой LC. Степень функционализации HA II и IV с помощью аминного реагента H2N-LA-NH2 и LB-малеимида или LC-малеимида соответственно, как показано на схеме реакции 2, является произвольной, и следует понимать, что степень функционализации может варьироваться, как это необходимо для различных вариантов осуществления настоящего изобретения, и степень функционализации малеимидом может быть такой, как описано в другом месте настоящего документа. Согласно многим вариантам осуществления большинство или все аминные функциональные группы на HA II реагируют с LB-малеимидом или LC-малеимидом, но согласно определенным вариантам осуществления могут присутствовать остаточные аминные функциональные группы.
[305] Согласно некоторым аспектам LB представляет собой фрагмент спейсера, как описано в настоящем документе. Согласно некоторым аспектам LB представляет собой необязательно замещенный и/или необязательно прерванный C1-10 алкилен. Согласно некоторым аспектам LB представляет собой -C(O)-C1-5 алкилен. Согласно некоторым таким аспектам LB представляет собой неразветвленный -(O)-C2-3 алкилен или представляет собой -C(O)-этилен.
[306] Согласно некоторым аспектам LC представляет собой фрагмент биоразлагаемого спейсера, как описано в настоящем документе. Согласно некоторым аспектам LC может содержать по меньшей мере один сложноэфирный фрагмент, по меньшей мере одну карбонатную связь или их комбинации.
[307] Согласно некоторым аспектам LC характеризуется структурой:
где m выбран из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10 и построенных из них диапазонов, таких как от 1 до 10, от 2 до 8 или от 5 до 8. n выбран из 1, 2, 3 и 4, и построенных из них диапазонов, таких как от 1 до 4 или от 1 до 3. o выбран из 1, 2, 3 и 4, и построенных из них диапазонов, таких как от 1 до 4 или от 1 до 3. Согласно таким вариантам осуществления LС-малеимидный реагент характеризуется структурой:
.
[308] Согласно некоторым аспектам где m равен 7, LC содержит фрагмент, полученный из азелаиновой кислоты, такой как фрагмент сложного эфира азелаиновой кислоты. Согласно одному такому аспекту LC характеризуется структурой:
.
Согласно таким вариантам осуществления LC-малеимидный реагент характеризуется структурой:
[309] pH реакции для событий согласно схеме реакции 2 составляет надлежащим образом от приблизительно 6,5 до приблизительно 9, от приблизительно 7 до приблизительно 8 или приблизительно 7,4. Концентрация буфер, составляющая от приблизительно 50 мM до приблизительно 150 мM, как правило, является подходящей для реакционной смеси для образования малеимид-функционализированной гиалуроновой кислоты. Согласно некоторым таким аспектам буфер выбран из следующего: (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота) (HEPES), малеат, цитрат, BIS-трис, фосфат, N-(2-ацетамидо)иминодиуксусная кислота (ADA), карбонат, пиперазин-N,N′-бис(2-этансульфоновая кислота) (PIPES), 3-морфолино-2-гидроксипропансульфоновая кислота (MOPSO), имидазол, BIS-трис-пропан, N,N-бис(2-гидроксиэтил)-2-аминоэтансульфоновая кислота (BES), (3-(N-морфолино)пропансульфоновая кислота) (MOPS), 2-[(2-гидрокси-1,1-бис(гидроксиметил)этил)амино]этансульфоновая кислота (TES), 3-(бис(2-гидроксиэтил)амино)-2-гидроксипропан-1-сульфоновая кислота (DIPSO), 2-гидрокси-3-[трис(гидроксиметил)метиламино]-1-пропансульфоновая кислота (TAPSO), 4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-(2-гидроксипропансульфоновая кислота) (HEPPSO), дегидрат пиперазин-1,4-бис(2-гидроксипропансульфоновой кислоты) (POPSO), трицин, глицилглицин и трис. Согласно некоторым конкретным аспектам буфер представляет собой HEPES. Реакционная смесь может дополнительно содержать полярный апротонный растворитель для улучшения растворимости участвующих в реакции веществ. Согласно таким аспектам подходящие соотношения буфера к полярному апротонному растворителю составляют приблизительно 1:3 объем./объем., приблизительно 1:2 объем./объем., приблизительно 1:1,5 объем./объем., приблизительно 1:1 объем./объем., приблизительно 1,5:1 объем./объем., приблизительно 2:1 объем./объем., приблизительно 3:1 объем./объем., приблизительно 5:1 объем./объем. или приблизительно 10:1 объем./объем. Согласно некоторым таким аспектам полярный апротонный растворитель можно выбрать из ацетона, DMF, ACN, DMSO и их комбинаций. Согласно одному аспекту растворитель представляет собой ACN. Температура реакция составляет приблизительно 10°C, приблизительно 15°C, приблизительно 20°C, приблизительно 25°C, приблизительно 30°C, приблизительно 35°C или приблизительно 40°C, и время реакции составляет приблизительно 0,5 часа, приблизительно 1 час, приблизительно 1,5 часа, приблизительно 2 часа или больше.
[310] Согласно некоторым аспектам схемы реакции 2 малеимид-функционализированную HA получают путем реакции первичного амина амин-функционализированной HA с реагентом NHS-LB-малеимидом в соответствии со схемой реакции 3 ниже.
[311] Схема реакции 3
[312] Согласно некоторым конкретным аспектам LA представляет собой н-пропилен, и LB представляет собой -C(O)-(CH2)2-. Согласно некоторым аспектам буфер представляет собой HEPES, pH реакции составляет от приблизительно 7 до приблизительно 8 или приблизительно 7,4, буфер содержит ACN в объемном отношении буфера к ACN, составляющем приблизительно 2:1, температура реакции составляет от приблизительно 20°C до приблизительно 30°C, и время реакции составляет от приблизительно 0,5 часов до приблизительно 2 часов.
[313] Согласно некоторым другим аспектам схемы реакции 2 малеимидо-функционализированную HA получают путем реакции первичного амина амин-функционализированной HA с реагентом NHS-LC-малеимидом в соответствии со схемой реакции 4 ниже.
[314] Схема реакции 4
[315] Согласно некоторым конкретным аспектам LA представляет собой н-пропилен, и LC характеризуется структурой
,
где m равен 7, p равен 2, и o равен 2. Согласно некоторым аспектам буфер представляет собой HEPES, pH реакции составляет от приблизительно 8 до приблизительно 9 или приблизительно 7,4, буфер содержит ACN в объемном отношении буфера к ACN, составляющем приблизительно 2:1, температура реакции составляет от приблизительно 20°C до приблизительно 30°C, и время реакции составляет от приблизительно 1 часов до приблизительно 3 часов.
Прямое получение малеимидо-функционализированной HA
[316] Согласно некоторым аспектам, как показано на фиг. 2, малеимидные группы можно напрямую конъюгировать с HA путем реакции реакционной смеси, содержащей HA (или ее производное или соль), малеимидного соединения 2 со структурой и карбоксил-активирующего реагента для реакции присоединения с образованием соединения 4, характеризующегося конъюгированными малеимидными группами.
[317] L1 представляет собой фрагмент спейсера, как описано в настоящем документе. Согласно некоторым аспектам L1 представляет собой C1-12 алкил, C2-10 алкил или C3-8 алкил. L1 может являться необязательно замещенным и/или необязательно прерванным, как описано в другом месте настоящего документа. Например, L1 может необязательно являться прерванным одним или несколькими из амида или амина.
Получение тиол-функционализированной HA
[318] Согласно некоторым аспектам настоящего раскрытия амин-функционализированная HA, описанная в другом месте в настоящем документе, реагирует с реагентом NHS-LB-S-защитная группа или реагентом NHS-LC-S-защитная группа с последующим снятием защитной группы с образованием тиол-функционализированной HA. Согласно некоторым таким аспектам формула II или формула IIa реагирует с реагентом NHS-LB-S-защитная группа или NHS-LC-S-защитная группа с образованием формулы V с последующим снятием защитной группы с образованием тиол-функционализированной HA согласно формуле VI в соответствии со схемой реакции 5 ниже.
[319] Схема реакции 5
где Ra1, Ra2, LA, LB и LC являются такими, как описано в другом месте настоящего документа. Согласно некоторым конкретным аспектам спейсер, соединяющийся с S-PG в соединении V и с -SH в соединении VI согласно схеме 5, представляет собой LC .
[320] Как и на схеме реакции 5 выше, степень функционализации HA V и VI с помощью NHS-LB-S-защитной группы или NHS-LC-S-защитной группы, показанная на схеме реакции 5, является произвольной, и следует понимать, что степень функционализации может варьироваться, при необходимости, для различных вариантов осуществления настоящего изобретения. Степень функционализации защищенным тиолом (и в итоге тиолом) является такой, как описано в другом месте настоящего документа. Согласно многим вариантам осуществления большинство или все аминные функциональные группы на HA II реагируют с NHS-LB-S-защитной группой или NHS-LC-S-защитной группой, но согласно определенным вариантам осуществления могут присутствовать остаточные аминные функциональные группы.
[321] pH реакции конъюгирования согласно схеме реакции 5 надлежащим образом составляет от приблизительно 7,5 до приблизительно 9,5 или от приблизительно 8 до приблизительно 9, например, приблизительно 8,5. Подходящие буферы в концентрации, составляющей от приблизительно 50 мM до приблизительно 150 мМ, описаны в другом месте в настоящем документе. Согласно некоторым аспектам буфер представляет собой HEPES. Реакционная смесь может дополнительно содержать полярный апротонный растворитель, как описано в другом месте настоящего документа, для улучшения растворимости участвующих в реакции веществ. Согласно некоторым аспектам растворитель представляет собой ACN. Соотношение буфера к полярному апротонному растворителю надлежащим образом составляет от приблизительно 1:2 объем./объем. до приблизительно 4:1 или от приблизительно 3:1 до приблизительно 1:1, например, приблизительно 2:1. Температура реакции составляет приблизительно 10°C, приблизительно 15°C, приблизительно 20°C, приблизительно 25°C, приблизительно 30°C, приблизительно 35°C или приблизительно 40°C, и время реакции составляет приблизительно 1 час, приблизительно 2 часа, приблизительно 3 часа, приблизительно 4 часа или больше.
[322] Производное HA согласно формуле V приводят в контакт с восстанавливающим средством для отщепления защитной группы на дисульфидной связи, тем самым образуя LB или LC с тиолом на конце (формула VI). Отщепляемые защитные группы известны в настоящей области техники, и неограничивающие примеры включают в себя пиридил-тиол и фенил-тиол, которые могут являться необязательно замещенными по меньшей мере одним заместителем, независимо выбранным из NO2, Cl, F, CN, CO2H и Br. Согласно одному такому аспекту уходящая группа представляет собой 2-меркаптопиридил. Восстанавливающие средства известны в настоящей области техники и включают в себя соль HCl и (трис(2-карбоксиэтил)фосфина) (TCEP), 2-меркаптоэтанол и дитиотреитол.
Прямое получение тиол-функционализированной HA
[323] Согласно некоторым аспектам, как показано на фиг. 3, защищенные дисульфид группы можно напрямую конъюгировать с HA путем реакции реакционной смеси, содержащей HA (или ее производное или соль), защищенное дисульфидное соединение 6 согласно структуре H2N-L3-S-PG, и карбоксил-активирующий реагент для реакции присоединения, с образованием соединения 8, характеризующегося конъюгированными защищенными дисульфидными группами. Защитную группу можно отщепить, как описано в другом месте настоящего документа, с образованием тиол-функционализированной HA.
Конъюгаты лекарственного средства с линкером
[324] Конъюгаты лекарственного средства с линкером (конъюгаты лекарственное средство-линкер), такие как реагент 5 на фигуре 2, реагент 14 на фигуре 5 и реагент 5 на фигуре 7, используют в получении конъюгатов поперечно-сшитой HA с лекарственным средством согласно настоящему изобретению. Согласно многим вариантам осуществления в конъюгате лекарственное средство-линкер можно использовать обратимый линкер пролекарственного средства L2 согласно формуле II, как описано выше. Согласно некоторым другим аспектам обратимый линкер пролекарственного средства фрагмент L2, используемый в таких моноконъюгатах лекарственного средства, может быть представлен формулой XIIa:
XIIa
где:
пунктирная линия указывает на прикрепление к азоту соединения лекарственного средства (не показано) путем образования амидной связи; и
X, X1, X2, X3, R1, R1a, R2, R2a, R3 и R3a являются такими, как определено выше;
[325] Согласно многим вариантам осуществления обратимый линкер пролекарственного средства L2, для удобства синтеза, можно получить вместе со спейсером L4 или частью спейсера L4.
[326] Согласно некоторым вариантам осуществления фрагмент обратимого линкера пролекарственного средства L2 вместе с частью спейсера L4 могут быть представлены соединением спейсер-линкер с формулой XIIc
XIIc
где крайняя правая волнистая линия представляет место прикрепления к атому азота лекарственного средства посредством амидной связи, и крайняя левая волнистая линия представляет место прикрепления к гидрогелю поперечно-сшитой HA или его предшественнику, как раскрыто в настоящем описании изобретения, посредством сульфидной связи (не показано). Фрагмент спейсера линкера XIIc представляет конкретную комбинацию фрагмента обратимого линкера пролекарственного средства L2 с частью спейсера L4, которые можно в целях удобства синтезировать вместе, как описано ниже, для применения согласно конкретным вариантам осуществления настоящего изобретения.
[327] Согласно некоторым аспектам фрагмент обратимого линкера пролекарственного средства L2 можно выбрать из следующего, где волнистая линия указывает на место прикрепления к азоту лекарственного средства, и где каждый L2 замещен одним фрагментом L4 при условии, что водород, помеченный звездочкой, не является замещенным:
Получение и очистка конъюгатов лекарственное средство-спейсер-линкер
[328] Согласно любому из различных аспектов настоящего раскрытия конъюгат лекарственное средство-линкер с использованием обратимого линкера пролекарственного средства L2 можно получить следующим образом. Как указано выше, согласно многим вариантам осуществления обратимый линкер пролекарственного средства L2 для удобства синтеза можно получить вместе со спейсером L4 или частью спейсера L4. Фрагмент согласно формуле XIIb используют для иллюстративных целей, но специалистам в настоящей области техники понятно, что вариации в представленной ниже процедуре можно использовать для других вариантов осуществления линкера L2 и спейсера L4 согласно настоящему изобретению.
Соединение согласно формуле VIIIa
VIIIa
представляет фрагмент, содержащий обратимый линкер пролекарственного средства L2 с защитной группой амина Pg1, часть спейсера L4 с защитной группой тиола Pg2 на нем и активирующую группу AG. Защитная группа тиола представляет место прикрепления к конъюгатам поперечно-сшитой HA 10, 16 и 26 или частям соответствующего предшественника HA 5, 14 и 19, как показано на фигурах 2 - 9. Активирующая группа AG представляет собой группу, которая заменяется во время реакции группой лекарственного средства, такого как ранибизумаб или другое пептидное терапевтическое средство, содержащее свободную аминогруппу, с образованием амидной связи. Аминогруппа, защищенная группой Pg1, представляет собой каталитическую группу, которая участвует в расщеплении амидной связи, соединяющей лекарственное средство с линкером L2.
[329] Комбинированный линкер L2 и часть соединения - спейсера L4 согласно формуле VIIIa можно использовать для получения соединения согласно формуле VIIIb
VIIIb
путем замещения группы активации AG с образованием амидной связи с лекарственным средством. Лекарственное средство может представлять собой, например, терапевтический белок, антитело или фрагмент антитела, как описано в настоящем документе, содержащим одну или несколько доступных свободных аминогрупп, которые доступны для взаимодействия с линкером с образованием конъюгата лекарственное средство-линкер через амидную связь.
[330] Защитные группы (PG) известны в настоящей области техники. Например, некоторые защитные группы в пределах объема настоящего раскрытия описаны в международной патентной публикации WO 2015/052155, содержание которой полностью включено в настоящий документ посредством ссылки. Специалистам в настоящей области техники понятно, что различные схемы прикрепления и снятия защитной группы, такие как те, которые описаны в "Greene's Protective Groups in Organic Synthesis," 5 изд., 2014, John Wiley& Sons, Inc., также включенной посредством ссылки, можно использовать согласно настоящему изобретению в качестве альтернатив конкретным примерам, показанным в настоящем документе.
[331] Согласно некоторым аспектам защитная группа амина Pg1 представляет собой саморасщепляющуюся защитную группу, которая может содержать один из фрагментов
.
где R18 представляет собой необязательно замещенный и/или необязательно прерванный C1-10 алкил. Согласно некоторым аспектам R18 представляет собой C1-6 амин. Согласно другим аспектам R18 представляет собой C1-6 диамин.
[332] Один пример защитной группы амина Pg1 представляет собой следующее:
где волнистая линия указывает на место прикрепления к аминогруппе на линкере L2.
[333] Один пример защитной группы тиола представляет собой метансульфонил согласно формуле SO2CH3, так что образуется метантиосульфонат MTS.
[334] Активирующие группы также хорошо известны в настоящей области техники. Согласно определенным вариантам осуществления активирующая группа AG может представлять собой N-гидроксисукцинимид (NHS) в форме сложного эфира. Другие такие активированные сложноэфирные группы включают в себя 4-нитрофеноловые и пентафторфеноловые сложные эфиры.
[335] Согласно одному конкретному аспекту фрагмент согласно формуле VIIIa выше может представлять собой соединение сложный эфир N-гидроксисукцинимида (NHS) и метантиосульфоната согласно структуре VIIIc:
VIIIc
Соединение VIIIc представляет соединение VIIIb более конкретно с метансульфонильной группой в качестве Pg2, сложным эфиром N-гидроксисукцинимида (NHS) в качестве AG и представленной выше защитной группой амина в качестве Pg1. Реакция соединения VIIIc с лекарственным средством затем обеспечивает получение соединения конъюгата спейсер-линкер-лекарственное средство согласно формуле VIIId
VIIId.
Бисконъюгат и триконъюгат лекарственное средство-спейсер-линкер (не показано) также могут образовываться согласно некоторым вариантам осуществления вместе с моноконъюгатом VIIId, и моноконъюгат можно выделить из конъюгатов более высокого порядка путем разделения с помощью колонки, как описано в экспериментальных примерах ниже. Незащищенная тиоловая группа моноконъюгата VIIId реагирует с малеимидной группой на фрагменте HA, как описано выше, и незащищенная аминогруппа участвует в каталитическом расщеплении амидной связи, которая связывает лекарственное средство, для обеспечения контролируемого по времени высвобождения лекарственного средства.
[336] Лекарственное средство (например, ранибизумаб или другое терапевтическое средство), которое замещает группу NHS, может быть подходящим образом солюбилизировано в буфере при значении pH, составляющем от приблизительно 6 до приблизительно 9 или от приблизительно 7 до приблизительно 8, например, приблизительно 7,4, при концентрации, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 100 мг/мл, от приблизительно 30 мг/мл до приблизительно 50 мг/мл или приблизительно 40 мг/мл. Согласно некоторым аспектам буфер содержит приблизительно 30 мM фосфата натрия. Линкер - сложный эфир N-гидроксисукцинимида может быть подходящим образом солюбилизирован в полярном апротонном растворителе, таком как DMSO.
[337] Растворы лекарственного средства и линкера - сложного эфира N-гидроксисукцинимида и объединяют при приблизительно 5°C при значении pH, составляющем от приблизительно 7 до приблизительно 8, таком как приблизительно 7,4, и приводят в реакцию в течение вплоть до приблизительно 10 минут, например, приблизительно 5 минут, с образованием раствора конъюгата линкер-лекарственное средство. Соотношение эквивалентов линкера сложного эфира N-гидроксисукцинимида к лекарственному средству составляет приблизительно 1:1, приблизительно 5:1, приблизительно 10:1, приблизительно 15:1 или приблизительно 20:1, например, приблизительно 5:1, приблизительно 10:1 или приблизительно 15:1. Конъюгат линкер-лекарственное средство, как правило, содержит смесь неконъюгированного лекарственного средства, моноконъюгатов лекарственного средства, бисконъюгатов лекарственного средства, триконъюгатов лекарственного средства и конъюгатов более высокого порядка. При необходимости используют большее время реакции и большие количества эквивалентов, а также повышенные температуры реакции.
[338] pH раствора конъюгата лекарственного средства можно довести, как необходимо для применения конкретных защитных групп. Для применения с соединением сложного эфира N-гидроксисукцинимида (NHS) и метантиосульфоната, показанным выше, pH можно довести до приблизительно 4. Согласно некоторым аспектам pH доводят с помощью буфера, характеризующегося значением pH, составляющим от приблизительно 2 до приблизительно 3,5. Согласно некоторым таким аспектам буфер представляет собой янтарную кислоту с pH 3 (например, приблизительно 3 M янтарная кислота). Согласно некоторым аспектам после доведения pH можно провести замену буфера раствора конъюгата линкер-лекарственное средство на буфер со значением рH, составляющим приблизительно 4. Согласно некоторым таким аспектам замену буфера можно провести на приблизительно 5 мM янтарную кислоту, pH 4,0.
[339] Фрагмент метки очистки можно использовать при получении и очистке моноконъюгатов лекарственное средство-линкер согласно настоящему изобретению. На стадии прикрепления метки метку очистки вводят путем замещения метансульфонильной группы так, что метка очистки соединена с конъюгатом посредством дисульфидной связи. Метки очистки, находящиеся в пределах объема настоящего раскрытия, описаны в международной патентной публикации № WO 2015/052155. Согласно некоторым аспектам метка очистки содержит фрагмент согласно формуле IX ниже:
IX
где:
SP представляет собой фрагмент спейсера;
Пунктирная линия указывает на прикрепление к оставшейся части метки или альтернативно на место прикрепления метки к конъюгату лекарственное средство-линкер (посредством, например, образования дисульфидной связи, где 4-меркапто-3-никотиновая кислота представляет собой спейсер);
каждый из R21, R21a, R21b, R22, R22a, R22b, R23, R23a, R23b, R24, R24a и R24b независимо представляет собой H или метил;
каждый s независимо друг от друга равен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8;
каждый t независимо друг от друга равен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8;
каждый u независимо друг от друга равен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8; и
каждый v независимо друг от друга равен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8.
[340] Согласно некоторым аспектам каждый из R21, R21a и R21b представляет собой метил. Согласно некоторым другим аспектам R21 представляет собой H, и R21a и R21b представляют собой метил. Согласно некоторым аспектам каждый из R22, R22a и R22b представляет собой метил. Согласно некоторым другим аспектам R22 представляет собой H, и R22a и R22b представляют собой метил. Согласно некоторым аспектам каждый из R23, R23a и R23b представляет собой метил. Согласно некоторым другим аспектам R23 представляет собой H, и R23a и R23b представляют собой метил. Согласно некоторым аспектам каждый из R24, R24a и R24b представляет собой метил. Согласно некоторым другим аспектам R24 представляет собой H, и R24a и R24b представляют собой метил.
[341] Согласно некоторым аспектам s равен 1, 2, 3, 4, 5 или 6; 2, 3, 4 или 5; 3, 4 или 5; или 4. Согласно некоторым аспектам t равен 1, 2, 3, 4, 5 или 6; 2, 3, 4 или 5; 2, 3 или 4; или 3. Согласно некоторым аспектам u равен 1, 2, 3, 4, 5 или 6; 1, 2, 3 или 4; 1, 2 или 3; или 1. Согласно некоторым аспектам v равен 1, 2, 3, 4, 5 или 6; 1, 2, 3 или 4; 1, 2 или 3; или 1.
[342] Согласно некоторым аспектам каждый из R21, R21a, R21b, R22, R22a, R22b, R23, R23a, R23b, R24, R24a и R24b представляет собой метил; s равен 4, t равен 3, u равен 1, и v равен 1. Согласно некоторым другим аспектам каждый из R21, R22, R23 и R24 представляет собой H; каждый из R21a, R21b, R22a, R22b, R23a, R23b, R24a и R24b представляет собой метил; s равен 4, t равен 3, u равен 1, и v равен 1.
[343] Противоионы для формулы IX в пределах объема настоящего раскрытия включают в себя Cl-, TFA-, HSO4- и SO42-.
[344] Следует понимать, что пунктирная линия в формуле IX указывает на прикрепление к остальной части метки, если соединение согласно формуле IX представляет собой реагент и представляет собой предпочтительно водород, и альтернативно указывает на прикрепление к конъюгату лекарственное средство-линкер после конъюгирования к указанным конъюгатом лекарственное средство-линкер.
[345] Согласно некоторым конкретным аспектам метка очистки характеризуется формулой X:
X,
где пунктирная линия указывает на прикрепление к фрагменту тиола согласно формуле X.
[346] Согласно некоторым конкретным аспектам реагент метки очистки характеризуется формулой Xa:
Xa.
[347] Согласно некоторым конкретным аспектам моноконъюгат метка очистки-спейсер-линкер-лекарственное средство со снятой защитной группой характеризуется формулой VIIIe:
VIIIe
Моноконъюгат метка очистки-спейсер-линкер-лекарственное средство со снятой защитной группой VIIIe представляет конъюгат VIIId вместе с меткой очистки Xa вместо метансульфонильной защитной группы. Моноконъюгат метка очистки-спейсер-линкер-лекарственное средство со снятой защитной группой VIIIe может присутствовать вместе с конъюгатами более высокого порядка (не показано), как описано выше.
Следует понимать, что фрагмент VIIIe и другие соединения, упомянутые в следующих разделах, также содержат части L4. Для удобства и простоты наименования спейсерные части упускают из названий соединений, описанных ниже.
[348] Прикрепление метки и снятие защитной группы амина можно проводить следующим образом. Введение метки очистки проводят путем объединения раствора, содержащего стехиометрический избыток метки очистки, такой как приблизительно в 1,5, 2, 2,5 или 3 или даже больше эквивалентов метки очистки по отношению к конъюгату линкер-лекарственное средство, с раствором конъюгата линкер-лекарственное средство. Концентрация конъюгата линкер-лекарственное средство в его растворе надлежащим образом составляет приблизительно 5 мг/мл, приблизительно 10 мг/мл, приблизительно 15 мг/мл, приблизительно 20 мг/мл, приблизительно 25 мг/мл, приблизительно 30 мг/мл, приблизительно 35 мг/мл или приблизительно 40 мг/мл, например, от приблизительно 10 мг/мл до приблизительно 20 мг/мл или от приблизительно 10 мг/мл до приблизительно 40 мг/мл. Концентрация метки очистки в растворе, используемом для реакции с конъюгатом лекарственное средство-линкер надлежащим образом составляет от приблизительно 0,1 мM до приблизительно 1 мM, от приблизительно 0,2 мM до приблизительно 0,8 мM, от приблизительно 0,3 мM до приблизительно 0,7 мM, от приблизительно 0,4 мM до приблизительно 0,6 мM. Согласно определенным вариантам осуществления концентрация метки очистки составляет приблизительно 0,5 мM. Согласно некоторым аспектам раствор метки очистки представляет собой водный раствор. pH для реакции надлежащим образом составляет от приблизительно 3 до приблизительно 5, от приблизительно 3,5 до приблизительно 4,5 или приблизительно 4. Температура реакции надлежащим образом составляет от приблизительно 10°C до приблизительно 40°C, например, приблизительно 25°C. Время реакции надлежащим образом составляет по меньшей мере 5 минут, или по меньшей мере 10 минут, или по меньшей мере 30 минут, такая как приблизительно 15 минут или приблизительно 35 минут.
[349] Снятие защитной группы можно проводить путем инкубации при pH от приблизительно 7 до приблизительно 8, например, приблизительно 7,4. Согласно некоторым аспектам pH доводят до значения от приблизительно 7 до приблизительно 8 с помощью фосфатного буфера, содержащего N,N,N′-триметилэтилен-1,3-диамин (TriMED). Инкубацию надлежащим образом можно проводить при температуре, составляющей от приблизительно 10°C до приблизительно 40°C, такой как приблизительно 25°C, и в течение времени, составляющего по меньшей мере 8 часов, например, в течение приблизительно 16 часов.
[350] После снятия защитной группы рН раствора конъюгата метка очистки-линкер-лекарственное средство со снятой защитной группой доводят до значения от приблизительно 3,5 до приблизительно 4,5 или приблизительно 4,0 для последующей очистки. Согласно некоторым аспектам регулирование рН можно проводить с помощью буфера, характеризующегося значением pH, составляющим от приблизительно 2,5 до приблизительно 3,5, таким как буфер янтарной кислоты с pH 3,0. Раствор с доведенным рН можно необязательно разбавлять буфером перед последующей очисткой. Согласно некоторым аспектам разбавление можно проводить с помощью буфера янтарной кислоты с рН 4,0, например, с помощью 20 мМ буфера янтарной кислоты.
[351] После снятия защитной группы выделяют моноконъюгатный вид конъюгата метка очистки-линкер-лекарственное средство со снятой защитной группой. Согласно некоторым аспектам моноконъюгат можно выделить с помощью катионообменной хроматографии (CIEC). Согласно некоторым другим аспектам моноконъюгат можно выделить способом эксклюзионной хроматографии. Согласно некоторым другим аспектам моноконъюгат можно выделить с помощью аффинной хроматографии. В аспектах CIEC подходящие смолы известны в настоящей области техники и являются коммерчески доступными, например, от Bio-Rad Laboratories и GE Healthcare, и включают в себя, например, без ограничения AG® 50W, AG® MP-50, Bio-Rex 70, Chelex® 100, AG® 50W, серии Macro-Prep®, серии UNOsphere™, Source 15S, Source 30S и Nuvia™ S. Тот же самый буфер, используемый для разбавления на второй стадии, можно использовать для буферов CIEC. Например, буфер А может представлять собой 20 мМ янтарную кислоту (рН 4,0), а буфер В (для элюирования) может представлять собой 20 мМ янтарную кислоту, 1 М NaCl (рН 4,0). Неконъюгированное лекарственное средство элюируется первым при разделении CIEC, затем следует моноконъюгат лекарственного средства, а затем следуют конъюгаты более высокого порядка (бис- и триконъюгаты) и т.д.
[352] После выделения моноконъюгата метка очистки-линкер-лекарственное средство со снятой защитной группой моноконъюгат можно концентрировать с помощью способов, известных в настоящей области техники, таких как фильтрование тангенциальным потоком (TFF) или центрифугирование через мембрану. Концентрированный моноконъюгат можно необязательно фильтровать. После концентрирования конечная концентрация может надлежащим образом составлять от приблизительно 0,2 мг/мл до приблизительно 20 мг/мл, от приблизительно 0,2 мг/мл до приблизительно 10 мг/мл или приблизительно 5 мг/мл.
[353] Далее метку очистки отщепляют от выделенного и потенциально концентрированного моноконъюгата метка очистки-линкер-лекарственное средство со снятой защитной группой путем расщепления дисульфидной связи в присутствии восстанавливающего средства с образованием смеси, содержащей отщепленную метку очистки и моноконъюгат линкер-лекарственное средство.
[354] Восстанавливающее средство, как правило, представляет собой малую молекулу и его можно выбрать, например, из β-меркаптоэтанола, глутатиона, дитиотреитола (DTT) и TCEP. Согласно некоторым аспектам восстанавливающее средство представляет собой DTT. Отщепление метки очистки надлежащим образом можно провести при значении pH, составляющем от приблизительно 3,5 до приблизительно 5,5, например, приблизительно 4 или приблизительно 4,5. Согласно некоторым аспектам DTT добавляют к раствору моноконъюгата метка очистки-линкер-лекарственное средство до концентрации, составляющей от приблизительно 0,1 мM до приблизительно 20 мM, такой как приблизительно 1 мM при температуре, составляющей меньше чем приблизительно 15°C, такой как от приблизительно 2°C до приблизительно 8°C. Инкубацию надлежащим образом можно проводить в течение по меньшей мере 2 часов, по меньшей мере 4 часов, по меньшей мере 8 часов.
[355] Согласно некоторым аспектам моноконъюгат линкер-лекарственное средство после снятия защитной группы и удаления метки очистки характеризуется формулой VIIIf:
VIIIf
[356] Моноконъюгат линкер-лекарственное средство можно выделить из смеси, содержащей отщепленную метку очистки, с помощью хроматографии, как описано в другом месте настоящего документа. В аспектах CIEC подходящие смолы описаны в другом месте в настоящем документе. Как правило, CIEC для выделения моноконъюгата линкер-лекарственное средство выполняют с помощью буферной системы, характеризующейся значением рН, составляющим от приблизительно 4 до приблизительно 7, например, приблизительно 5,5. Например, буфер А может представлять собой 10 мМ гистидин (рН 5,5), а буфер В (для элюирования) может представлять собой 10 мМ гистидин, 500 мМ NaCl (рН 5,5). Моноконъюгат линкер-лекарственное средство элюируется первым при разделении CIEC, затем следует потенциальный дисульфид-связанный димер и отщепленная метка очистки.
[357] Дополнительный буфер B можно необязательно добавить для доведения осмолярности раствора белка. Выделенный моноконъюгат линкер-лекарственное средство можно необязательно концентрировать до концентрации, превышающей 50 мг/мл или превышающей 60 мг/мл для последующего применения в получении пролекарственных композиций, содержащих поперечно-сшитую HA согласно настоящему раскрытию. Концентрирование можно проводить с помощью TFF или путем центрифугирования через мембрану.
Конъюгирование моноконъюгата лекарственное средство-линкер с малеимидо-функционализированной HA
[358] Обращаясь снова к фигурам 2 и 3 и фигуре 6 - фигуре 9, моноконъюгат линкер-лекарственное средство VIIIf можно использовать в качестве реагента 5 - конъюгата линкер-лекарственное средство. Малеимидо-группы находятся в эквивалентном избытке по отношению к реагенту 5, так что некоторая доля малеимидо-групп является не конъюгированной с моноконъюгатом лекарственное средство-линкер и, следовательно, остается доступной для поперечного сшивания с тиол-функционализированной HA, как описано в другом месте настоящего документа. Согласно некоторым аспектам эквивалентной соотношение малеимидо-функционализированной HA к моноконъюгату лекарственное средство-линкер составляет от 1,1:1 до приблизительно 2:1, например, приблизительно 1,2:1, приблизительно 1,3:1, приблизительно 1,4:1, приблизительно 1,5:1, приблизительно 1,6:1, приблизительно 1,7:1 или приблизительно 1,8:1. Согласно некоторым аспектам реакционная смесь содержит концентрацию моноконъюгата лекарственное средство-линкер, составляющую от приблизительно 25 мг/мл до приблизительно 100 мг/мл (в перерасчете на количество белка), от приблизительно 35 мг/мл до приблизительно 55 мг/мл или приблизительно 55 мг/мл. Конъюгирование выполняют в буферной системе со значением pH, составляющим от приблизительно 4,5 до приблизительно 6,5 или от приблизительно 5 до приблизительно 6, например, приблизительно 5,5. Согласно некоторым аспектам буфер представляет собой 10 мM гистидина, 150 мM NaCl и 0,01% Tween 20. Температура реакции составляет приблизительно °0°C, приблизительно 5°C, 10°C, приблизительно 15°C, приблизительно 20°C, приблизительно 25°C, приблизительно 30°C, приблизительно 35°C, или приблизительно 40°C, и реакционную смесь инкубируют в течение периода времени, подходящего для достижения по существу полного конъюгирования, например, в течение от приблизительно 1 часа до приблизительно 12 часов или дольше, например, в течение приблизительно 2 часов, приблизительно 4 часов или приблизительно 6 часов.
[359] Согласно некоторым аспектам конъюгат лекарственное средство-линкер- функционализированная малеимидом HA характеризуется структурой XII:
XII.
Степень функционализации соединения HA XII может варьироваться, как описано выше, и относительная степень функционализации в структуре XII является исключительно иллюстративной. Согласно некоторым вариантам осуществления от приблизительно 0,5% до приблизительно 6%, от приблизительно 1% до приблизительно 5%, от приблизительно 1,5% до приблизительно 4%, от приблизительно 2% до 3% или от приблизительно 2% до приблизительно 2,5% сайтов карбоксилатных групп на цепи HA соединения XII заняты непрореагировавшим малеимидом (и, таким образом, доступны для последующей реакции поперечного сшивания), тогда как от приблизительно 3% до приблизительно 10%, от приблизительно 5% до приблизительно 9%, от приблизительно 6% до приблизительно 8% или от приблизительно 7% до приблизительно 8% сайтов карбоксилатных групп заняты конъюгатом линкер-лекарственное средство. Согласно определенным вариантам осуществления приблизительно 4% сайтов карбоксилатных групп на цепи НА соединения XII заняты непрореагировавшим малеимидом, и приблизительно 6% сайтов карбоксилатных групп заняты конъюгатом линкер-лекарственное средство. Согласно определенным вариантам осуществления приблизительно 2,3% сайтов карбоксилатных групп на цепи НА соединения XII заняты непрореагировавшим малеимидом, и приблизительно 7,7% сайтов карбоксилатных групп заняты конъюгатом линкер-лекарственное средство. Конъюгат лекарственное средство-линкер связывается с цепью HA посредством реакции тиоловой группы конъюгата лекарственное средство-линкер, реагирующей с малеимидными группами на цепи НА, как описано в настоящем документе. Процент сайтов, занятых непрореагировавшим малеимидом и конъюгатом линкер-лекарственное средство, можно изменять для контроля степени поперечного сшивания и загрузки лекарственного средства в конечном конъюгате гидрогеля.
Получение пролекарственных композиций, содержащих поперечно-сшитую HA
[360] Согласно некоторым аспектам пролекарственные композиции согласно настоящему раскрытию можно получить путем образования реакционной смеси, содержащей раствор конъюгата лекарственное средство-линкер-малеимидо-функционализированная HA, как описано в другом месте настоящего документа, и раствор тиол-функционализированной HA, как описано в другом месте настоящего документа, и инкубации реакционной смеси при pH и в течение периода времени и при температуре, достаточных для достижения поперечного сшивания HA. Реакция, как правило, протекает в соответствии со стадией 7 согласно схеме реакции, изображенной на фиг. 9, где LA, LB, LC, L2 и лекарственное средство являются такими, как описано в другом месте настоящего документа. Согласно некоторым аспектам pH составляет от приблизительно от приблизительно 4,5 до приблизительно 6,5 или от приблизительно 5 до приблизительно 6, например, приблизительно 5,5. Температура реакции составляет приблизительно 0°C, приблизительно 5°C, приблизительно 10°C, приблизительно 15°C, приблизительно 20°C, приблизительно 25°C, приблизительно 30°C, приблизительно 35°C или приблизительно 40°C.
[361] Согласно некоторым аспектам реакционную смесь тщательно перемешивают и вскоре после этого заполняют ею шприцы. Предварительно заполненные шприцы можно затем инкубировать при температуре окружающей среды в течение от приблизительно 8 часов до приблизительно 4 недель для завершения поперечного сшивания и образования пролекарственных композиций поперечно-сшитой НА согласно настоящему раскрытию. Предварительно заполненные шприцы также можно хранить непосредственно при 2-8°C без дальнейшего хранения при температуре окружающей среды. Согласно одному варианту осуществления каждый из отдельных растворов конъюгата лекарственное средство-линкер-малеимидо-функционализированная HA и тиол-функционализированной HA непосредственно вводят в предварительно заполненное шприцевое устройство и смешивают в нем, и поперечное сшивание происходит в предварительном заполненном шприцевом устройстве и его содержимое подвергают реакции поперечного сшивания в нем с образованием пролекарственной композиции поперечно-сшитой НА in situ внутри предварительного заполненного шприцевого устройства. По прошествии подходящего для реакции поперечного сшивания времени (которое может варьироваться в зависимости от температуры и других условий) пролекарственная композиция на основе поперечно-сшитой НА готова для инъекции пациенту без дополнительного смешивания или переноса.
[362] Согласно другим вариантам осуществления можно провести периодическую полимеризацию для проведения реакции поперечного сшивания. Затем полученный гель измельчают, пропуская его через сетку, чтобы сделать его подходящим для введения с помощью шприца, и затем переносят в шприцевое устройство.
[363] Согласно некоторым аспектам пролекарственные композиции согласно настоящему раскрытию характеризуются формулой 10:
где L1, L2, L3, степень функционализации и лекарственное средство являются такими, как определено в другом месте в настоящем документе. Согласно некоторым другим аспектам HA может являться замещенной с помощью Ra1 и/или Ra2, как описано в другом месте настоящего документа.
[364] Согласно некоторым другим аспектам пролекарственные композиции согласно настоящему раскрытию характеризуются формулой 16:
[365] где L1, L2, L3, степень функционализации и лекарственное средство являются такими, как определено в другом месте в настоящем документе. Согласно некоторым другим аспектам HA может являться замещенной с помощью Ra1 и/или Ra2, как описано в другом месте настоящего документа.
[366] Согласно некоторым другим аспектам пролекарственные композиции согласно настоящему раскрытию характеризуются формулой 26:
[367] где LA, LB, LC L2, степень функционализации и лекарственное средство являются такими, как определено в другом месте в настоящем документе. Согласно некоторым другим аспектам HA может являться замещенной с помощью Ra1 и/или Ra2, как описано в другом месте настоящего документа.
Общие способы получения пролекарственных композиций, содержащих поперечно-сшитую HA
[368] Общие способы получения пролекарственных композиций, содержащих поперечно-сшитую HA, изображены на фигурах 10 и 11.
[369] Один способ получения пролекарственных композиций, содержащих поперечно-сшитую HA, изображен на фиг. 10. На стадии 1 амин-HA 1 получают в соответствии со способами получения функционализированной амином HA, как описано в другом месте настоящего документа. На стадии 2 малеимид-HA, характеризующуюся наличием постоянного спейсера, получают из амин-HA 1 в соответствии со способами получения малеимидо-функционализированной HA, как описано в другом месте настоящего документа. На стадии 3 амин-HA 2 получают в соответствии со способами получения функционализированной амином HA, как описано в другом месте настоящего документа. На стадии 4 тиол-HA 2, содержащую разлагаемо-связанную тиоловую группу, получают в соответствии со способом получения функционализированной тиолом HA, как описано в другом месте настоящего документа. На стадии 5 моноконъюгат лекарственное средство-линкер-тиол получают в соответствии со способами, описанными в другом месте в настоящем документе. На стадии 6 моноконъюгат лекарственное средство-линкер-тиол конъюгируют с малеимид-НА, характеризующейся наличием спейсера, как описано в другом месте настоящего документа. На стадии 7 пролекарственные композиции, содержащие поперечно-сшитую НА, получают из конъюгата лекарственное средство-линкер-малеимид-HA и разлагаемой тиол-НА, как описано в другом месте настоящего документа. Стадия 7 может предусматривать стерилизующую фильтрацию конъюгата лекарственное средство-малеимид-HA согласно стадии 6 и разлагаемой тиол-НА согласно стадии 4 непосредственно в предварительно заполненном шприцевом устройстве, в котором проводят поперечное сшивание.
[370] Другой способ получения пролекарственных композиций, содержащих поперечно-сшитую HA, изображен на фиг. 11. На стадии 1 амин-HA 1 получают в соответствии со способами получения амин-функционализированной HA, как описано в другом месте настоящего документа. На стадии 2 малеимид-HA, характеризующуюся наличием спейсера, получают из амин-HA 1 в соответствии со способами получения малеимидо-функционализированной HA, как описано в другом месте настоящего документа. На стадии 3 амин-HA 2 получают в соответствии со способами получения амин-функционализированной HA, как описано в другом месте настоящего документа. На стадии 4 тиол-HA 2, содержащую разлагаемо-связанную тиоловую группу, получают в соответствии со способом получения тиол-функционализированной HA, как описано в другом месте настоящего документа. На стадии 5 моноконъюгат лекарственное средство-линкер-тиол получают в соответствии со способами, описанными в другом месте в настоящем документе. На стадии 6 моноконъюгат лекарственное средство-линкер-тиол, малеимид-HA, характеризующуюся наличием постоянного линкера, и тиол-HA, характеризующуюся наличием разлагаемого линкера, объединяют и конъюгируют с образованием пролекарственных композиций, содержащих поперечно-сшитую HA. Каждый из следующего: малеимид-HA, моноконъюгат лекарственное средство-линкер-тиол и тиол-HA, можно стерильно фильтровать и переносить в предварительно заполненное шприцевое устройство, где их подвергают реакции с образованием конечного пролекарственного средства с поперечно-сшитой HA. Условия реакции для фиг. 11, стадии 6, как правило, соответствуют условиям реакции для условий получения пролекарственных композиций, содержащих поперечно-сшитую HA, из конъюгата лекарственное средство-линкер-малеимид-HA и разлагаемой тиол-HA, как описано в другом месте настоящего документа.
Фармацевтические композиции
[371] Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит один или несколько фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, включая в себя буферные средства, модификаторы изотоничности, консерванты/противомикробные средства, стабилизаторы, антиадсорбционные средства, антиоксиданты, загустители/повышающие вязкость средства и/или другие вспомогательные средства.
[372] Буферные средства можно использовать для поддержания рН композиции в требуемом диапазоне. Неограничивающие примеры буферных средств включают в себя фосфат натрия, бикарбонат, сукцинат, гистидин, цитрат и ацетат, сульфат, нитрат, хлорид и пируват.
[373] Модификаторы изотоничности можно использовать для минимизации боли, которая может быть вызвана повреждением клеток из-за разницы осмотического давления на месте инъекции. Неограничивающие примеры модифицирующих изотоничность средств включают в себя глицерин и хлорид натрия.
[374] Консерванты/противомикробные средства можно использовать для минимизации риска заражения. Неограничивающие примеры консервантов включают в себя м-крезол, фенол, метилпарабен, этилпарабен, пропилпарабен, бутилпарабен, хлорбутанол, бензиловый спирт, фенилмеркуриевый нитрат, тиомерсал, сорбиновую кислоту, сорбат калия, бензойную кислоту, хлоркрезол и хлорид бензалкония.
[375] Стабилизаторы можно использовать для ингибирования разложения гидрогеля и лекарственного средства. Неограничивающие примеры стабилизаторов включают в себя следующее: аминокислоты, такие как аланин, аргинин, аспарагиновая кислота, глицин, гистидин, лизин, пролин; сахара, такие как глюкоза, сахароза, трегалоза; многоатомные спирты, такие как глицерин, маннит, сорбит; соли, такие как фосфат калия, сульфат натрия; хелатирующие средства, такие как EDTA, гексафосфат; лиганды, такие как ионы двухвалентных металлов (цинк, кальций и т.д.); олигомеры или полимеры, такие как циклодекстрины, декстран, дендримеры, PEG или PVP или протамин или HAS; и/или другие соли или органические молекулы, такие как фенольные производные.
[376] Антиадсорбционные средства можно использовать для конкурентного покрытия или адсорбции, например, на поверхности контейнера, такого как шприц, в котором содержится фармацевтическая композиция. Антиабсорбентами могут являться ионные или неионные поверхностно-активные вещества, белки или растворимые полимеры. Неограничивающие примеры поверхностно-активных веществ включают в себя следующее: алкилсульфаты, такие как лаурилсульфат аммония и лаурилсульфат натрия; алкилэфирсульфаты, такие как лауретсульфат натрия и миретсульфат натрия; сульфонаты, такие как диоктилсульфосукцинаты натрия, перфтороктансульфонаты, перфторбутансульфонаты, алкилбензолсульфонаты; фосфаты, такие как алкиларилэфирфосфаты и алкилэфирфосфаты; карбоксилаты, такие как соли жирных кислот (мыла) или стеарат натрия, лауроилсаркозинат натрия, перфторнонаноат, перфтороктаноат; октенидиндигидрохлорид; катионы четвертичного аммония, такие как цетилтриметиламмонийбромид, цетилтриметиламмонийхлорид, цетилпиридинийхлорид, полиэтоксилированный талловый амин, бензалконийхлорид, бензетонийхлорид, 5-бром-5-нитро-1,3-диоксан, диметилдиоктадециламмонийхлорид, диоктадецилдиметиламмонийбромид; цвиттер-ионы, такие как 3-[(3-холамидопропил)диметиламмонио]-1-пропансульфонат, кокамидопропилгидроксисультаин, аминокислоты, иминокислоты, кокамидопропилбетаин, лецитин; жирные спирты, такие как цетиловый спирт, стеариловый спирт, цетостеариловый спирт, олеиловый спирт; алкилэфиры полиоксиэтиленгликоля, такие как монододециловый эфир октаэтиленгликоля, монододециловый эфир пентаэтиленгликоля; алкилэфиры полиоксипропиленгликоля; алкилэфиры глюкозида, такие как децилглюкозид, лаурилглюкозид, октилглюкозид; простые эфиры полиоксиэтиленгликоля и октилфенола, такие как Тритон Х-100; простые эфиры полиоксиэтиленгликоля и алкилфенолов, такие как ноноксинол-9; алкилэфиры глицерина, такие как глицериллаурат; алкиловые сложные эфиры полиоксиэтиленгликоля сорбитана, такие как полисорбаты; алкиловые эфиры сорбитана; кокамид MEA и кокамид DEA; оксид додецилдиметиламина; блок-сополимеры полиэтиленгликоля и полипропиленгликоля, такие как полоксамеры (Pluronic F-68), ПЭГ-додециловый эфир (Brij 35), полисорбаты 20 и 80; другими антиадсорбционными средствами являются декстран, полиэтиленгликоль, ПЭГ-полигистидин, BSA и HSA и желатины.
[377] Неограничивающие примеры антиоксидантов включают в себя аскорбиновую кислоту, эктоин, метионин, глутатион, монотиоглицерин, морин, полиэтиленимин (PEI), пропилгаллат, витамин E, хелатирующие средства, такие как лимонная кислота, EDTA, гексафосфат и тиогликолевая кислота.
[378] Фармацевтические пролекарственные композиции на основе гидрогеля поперечно-сшитой HA могут быть предоставлены в контейнере, содержащем многократные дозы фармацевтической композиции. Такую многодозовую фармацевтическую композицию можно использовать для разных пациентов, нуждающихся в этом, или для одного пациента, причем оставшиеся дозы хранят после применения первой дозы до тех пор, пока это не потребуется. Согласно некоторым таким аспектам контейнер представляет собой предварительно заполненный шприц.
[379] Фармацевтические пролекарственные композиции на основе гидрогеля поперечно-сшитой HA могут быть предоставлены в виде фармацевтической композиции для однократного или многократного введения в предварительно заполненном шприце.
[380] Фармацевтические пролекарственные композиции на основе гидрогеля поперечно-сшитой HA согласно настоящему раскрытию можно надлежащим образом хранить в шприцах при температуре, составляющей меньше чем приблизительно 10°C.
[381] Терапевтические количества фармацевтических пролекарственных композиций на основе гидрогеля поперечно-сшитой HA можно вводить с помощью внутриглазной инъекции. Например, композицию можно вводить с помощью инъекции в стекловидное тело нуждающегося в этом субъекта с использованием иглы с калибром, составляющим 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 или 32.
[382] Согласно некоторым аспектам фармацевтические пролекарственные композиции на основе гидрогеля поперечно-сшитой HA могут быть предоставлены в наборе. Согласно таким аспектам набор может содержать шприц, предварительно заполненный фармацевтической пролекарственной композицией на основе гидрогеля поперечно-сшитой НА, иглу для подкожных инъекций и инструкции по применению.
[383] Настоящее изобретение относится к конъюгатам антител, которые включают в себя антитела (например, антитела к VEGF), ковалентно связанные с композициями на основе гидрогеля поперечно-сшитой HA, как описано в настоящем документе.
Иллюстративные антитела для применения в композициях конъюгата гидрогеля поперечно-сшитой HA согласно настоящему изобретению
[384] Можно использовать любое подходящее антитело (например, антитело к VEGF). Например, антитело может специфически связываться с антигеном, выбранным из группы, состоящей из следующего: VEGF; интерлейкин-1 бета (IL-1β); интерлейкин-6 (IL-6); рецептор интерлейкина-6 (IL-6R); интерлейкин-13 (IL-13); рецептор IL-13 (IL-13R); PDGF (например, PDGF-BB); ангиопоэтин; ангиопоэтин 2 (Ang2); Tie-2; S1P; интегрины αvβ3, αvβ5 и α5β1; бетацеллюлин; апелин/APJ; эритропоэтин; фактор комплемента D; TNFα; HtrA1; рецептор VEGF (например, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, мембраносвязанный рецептор VEGF (mbVEGFR) или растворимый рецептор VEGF (sVEGFR)); рецептор ST-2; и белок, генетически связанный с риском возрастной макулярной дегенерации (AMD) (например, компоненты пути комплемента C2, фактор B, фактор H, CFHR3, C3b, C5, C5a и C3a; HtrA1; ARMS2; TIMP3; HLA; интерлейкин-8 (IL-8); CX3CR1; TLR3; TLR4; CETP; LIPC; COL10A1 и TNFRSF10A). Такие антитела могут являться применимыми, например, для уменьшения ангиогенеза и/или для лечения или задержки прогрессирования нарушения, ассоциированного с патологическим ангиогенезом (например, офтальмологических нарушений или нарушений пролиферации клеток). Иллюстративные неограничивающие антитела к VEGF, которые можно использовать в конъюгатах антител согласно настоящему изобретению, описаны ниже.
[385] В некоторых случаях антитело к VEGF может включать в себя по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из следующего: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GX1TPX2GGX3X4X5YX6DSVX7X8 (SEQ ID NO: 2), где X1 представляет собой Ile или His, X2 представляет собой Ala или Arg, X3 представляет собой Tyr или Lys, X4 представляет собой Thr или Glu, X5 представляет собой Arg, Tyr, Gln или Glu, X6 представляет собой Ala или Glu, X7 представляет собой Lys или Glu, и X8 представляет собой Gly или Glu; (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQX1VSTAVA (SEQ ID NO: 4), где X1 представляет собой Asp или Arg; (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно X1ASFLYS (SEQ ID NO: 5), где X1 представляет собой Ser или Met; и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно X1QGYGX2PFT (SEQ ID NO: 6), где X1 представляет собой Gln, Asn или Thr и X2 представляет собой Ala, Asn, Gln или Arg, или комбинацию одной или нескольких представленных выше HVR и одного или нескольких их вариантов, характеризующихся по меньшей мере приблизительно 80% идентичности последовательности (например, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности) по отношению к любой из SEQ ID NO: 1-6.
[386] Например, антитело к VEGF может включать в себя по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из следующего: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYTRYADSVKG (SEQ ID NO: 7), GITPAGGYEYYADSVKG (SEQ ID NO: 21) или GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10) или QQGYGNPFT (SEQ ID NO: 23), или комбинацию одной или нескольких представленных выше HVR и одного или нескольких их вариантов, характеризующихся по меньшей мере приблизительно 80% идентичности последовательности (например, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности) по отношению к любой из SEQ ID NO: 1, 3, 7-10 или 21-23.
[387] Например, в некоторых случаях антитело к VEGF может включать в себя по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из следующего: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYTRYADSVKG (SEQ ID NO: 7); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10), или комбинацию одной или нескольких представленных выше HVR и одного или нескольких их вариантов, характеризующихся по меньшей мере приблизительно 80% идентичности последовательности (например, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности) по отношению к любой из SEQ ID NO: 1, 3 или 7-10. Согласно конкретному примеру в некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие шесть HVR: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYTRYADSVKG (SEQ ID NO: 7); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10).
[388] В некоторых случаях любое из предыдущих антител к VEGF может включать в себя одну, две, три или четыре из следующих каркасных областей вариабельного домена тяжелой цепи (FR): (a) FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTIS (SEQ ID NO: 13); (b) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQAPGKGLEWVA (SEQ ID NO: 14); (c) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSKNTAYLQMRSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 15); и (d) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 16).
[389] В некоторых случаях любое из предыдущих антител к VEGF может включать в себя одну, две, три или четыре из следующих FR вариабельного домена легкой цепи: (a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 17); (b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18); (c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 19); и (d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20).
[390] Например, в некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие шесть HVR: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYTRYADSVKG (SEQ ID NO: 7); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена тяжелой цепи: (a) FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTIS (SEQ ID NO: 13); (b) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQAPGKGLEWVA (SEQ ID NO: 14); (c) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSKNTAYLQMRSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 15); и (d) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 16). В дополнительных случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена легкой цепи: (a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 17); (b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18); (c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 19); и (d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя (a) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 11 и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 12.
[391] Например, в некоторых случаях антитело к VEGF может включать в себя по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из следующего: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGNPFT (SEQ ID NO: 23), или комбинацию одной или нескольких представленных выше HVR и одного или нескольких их вариантов, характеризующихся по меньшей мере приблизительно 80% идентичности последовательности (например, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности) по отношению к любой из SEQ ID NO: 1, 3, 8, 9, 22 или 23. Согласно конкретному примеру, в некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие шесть HVR: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGNPFT (SEQ ID NO: 23).
[392] В некоторых случаях любое из предыдущих антител к VEGF может включать в себя одну, две, три или четыре из следующих каркасных областей вариабельного домена тяжелой цепи (FR): (a) FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EEQLVEEGGGLVQPGESLELSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 29) или EEQLVEEGGGLVQPGESLRLSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 51); (b) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQEPGEGLEWVA (SEQ ID NO: 30); (c) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSENTAYLQMNELRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 31); и (d) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGELVTVSS (SEQ ID NO: 32).
[393] В некоторых случаях любое из предыдущих антител к VEGF может включать в себя одну, две, три или четыре из следующих FR вариабельного домена легкой цепи: (a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 17); (b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18); (c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 24); и (d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20).
[394] Например, в некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие шесть HVR: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGNPFT (SEQ ID NO: 23). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена тяжелой цепи: (a) FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EEQLVEEGGGLVQPGESLELSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 29); (b) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQEPGEGLEWVA (SEQ ID NO: 30); (c) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSENTAYLQMNELRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 31); и (d) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGELVTVSS (SEQ ID NO: 32). В дополнительных случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена легкой цепи: (a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 17); (b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18); (c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 24); и (d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя (a) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 38.
[395] В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие шесть HVR: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGNPFT (SEQ ID NO: 23). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена тяжелой цепи: (a) FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EEQLVEEGGGLVQPGESLRLSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 51); (b) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQEPGEGLEWVA (SEQ ID NO: 30); (c) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSENTAYLQMNELRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 31); и (d) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGELVTVSS (SEQ ID NO: 32). В дополнительных случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена легкой цепи: (a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 17); (b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18); (c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 24); и (d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя (a) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 51, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 38.
[396] Например, в некоторых случаях антитело к VEGF может включать в себя по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных из следующего: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10), или комбинацию одной или нескольких представленных выше HVR и одного или нескольких их вариантов, характеризующихся по меньшей мере приблизительно 80% идентичности последовательности (например, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности) по отношению к любой из SEQ ID NO: 1, 3, 8-10 или 22. Согласно конкретному примеру, в некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие шесть HVR: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10).
[397] В некоторых случаях любое из предыдущих антител к VEGF может включать в себя одну, две, три или четыре из следующих каркасных областей вариабельного домена тяжелой цепи (FR): (a) FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EEQLVEEGGGLVQPGESLELSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 29) или EEQLVEEGGGLVQPGESLRLSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 51); (b) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQEPGEGLEWVA (SEQ ID NO: 30); (c) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSENTAYLQMNELRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 31); и (d) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGELVTVSS (SEQ ID NO: 32).
[398] В некоторых случаях любое из предыдущих антител к VEGF может включать в себя одну, две, три или четыре из следующих FR вариабельного домена легкой цепи: (a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 17), DIQMTQSPESLSASVGDEVTITC (SEQ ID NO: 25) или DIQMTQSPSSLSASVGDEVTITC (SEQ ID NO: 26); (b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18) или WYQQKPGEAPKLLIY (SEQ ID NO: 27); (c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 19) или GVPSRFSGSGSGTDFTLTIESLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 28); и (d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20).
[399] Например, в некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие шесть HVR: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена тяжелой цепи: (a) FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EEQLVEEGGGLVQPGESLELSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 29); (b) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQEPGEGLEWVA (SEQ ID NO: 30); (c) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSENTAYLQMNELRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 31); и (d) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGELVTVSS (SEQ ID NO: 32). В дополнительных случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена легкой цепи: (a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPESLSASVGDEVTITC (SEQ ID NO: 25); (b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18); (c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 19); и (d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя (a) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 34.
[400] Например, в других случаях антитело к VEGF включает в себя следующие шесть HVR: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена тяжелой цепи: (a) FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EEQLVEEGGGLVQPGESLELSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 29); (b) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQEPGEGLEWVA (SEQ ID NO: 30); (c) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSENTAYLQMNELRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 31); и (d) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGELVTVSS (SEQ ID NO: 32). В дополнительных случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена легкой цепи: (a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDEVTITC (SEQ ID NO: 26); (b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGEAPKLLIY (SEQ ID NO: 27); (c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTIESLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 28); и (d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя (a) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 35.
[401] Например, в других случаях антитело к VEGF включает в себя следующие шесть HVR: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена тяжелой цепи: (a) FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EEQLVEEGGGLVQPGESLRLSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 51); (b) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQEPGEGLEWVA (SEQ ID NO: 30); (c) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSENTAYLQMNELRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 31); и (d) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGELVTVSS (SEQ ID NO: 32). В дополнительных случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена легкой цепи: (a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDEVTITC (SEQ ID NO: 26); (b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGEAPKLLIY (SEQ ID NO: 27); (c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTIESLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 28); и (d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя (a) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 51, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 35.
[402] Например, в других случаях антитело к VEGF включает в себя следующие шесть HVR: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена тяжелой цепи: (a) FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EEQLVEEGGGLVQPGESLELSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 29); (b) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQEPGEGLEWVA (SEQ ID NO: 30); (c) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSENTAYLQMNELRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 31); и (d) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGELVTVSS (SEQ ID NO: 32). В дополнительных случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена легкой цепи: (a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPESLSASVGDEVTITC (SEQ ID NO: 25); (b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGEAPKLLIY (SEQ ID NO: 27); (c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 19); и (d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя (a) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 36.
[403] Например, в дополнительных случаях антитело к VEGF включает в себя следующие шесть HVR: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена тяжелой цепи: (a) FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EEQLVEEGGGLVQPGESLELSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 29); (b) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQEPGEGLEWVA (SEQ ID NO: 30); (c) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSENTAYLQMNELRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 31); и (d) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGELVTVSS (SEQ ID NO: 32). В дополнительных случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена легкой цепи: (a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDEVTITC (SEQ ID NO: 26); (b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18); (c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 19); и (d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя (a) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 37.
[404] В других случаях антитело к VEGF включает в себя следующие шесть HVR: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена тяжелой цепи: (a) FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EEQLVEEGGGLVQPGESLRLSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 51); (b) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQEPGEGLEWVA (SEQ ID NO: 30); (c) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSENTAYLQMNELRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 31); и (d) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGELVTVSS (SEQ ID NO: 32). В дополнительных случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена легкой цепи: (a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDEVTITC (SEQ ID NO: 26); (b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18); (c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 19); и (d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя (a) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 51, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 37.
[405] Например, в других случаях антитело к VEGF включает в себя следующие шесть HVR: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена тяжелой цепи: (a) FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EEQLVEEGGGLVQPGESLELSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 29); (b) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQEPGEGLEWVA (SEQ ID NO: 30); (c) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSENTAYLQMNELRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 31); и (d) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGELVTVSS (SEQ ID NO: 32). В дополнительных случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена легкой цепи: (a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 17); (b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18); (c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 19); и (d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя (a) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 12.
[406] В других случаях антитело к VEGF включает в себя следующие шесть HVR: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена тяжелой цепи: (a) FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EEQLVEEGGGLVQPGESLRLSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 51); (b) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQEPGEGLEWVA (SEQ ID NO: 30); (c) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSENTAYLQMNELRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 31); и (d) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGELVTVSS (SEQ ID NO: 32). В дополнительных случаях антитело к VEGF включает в себя следующие четыре FR вариабельного домена легкой цепи: (a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 17); (b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18); (c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 19); и (d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя (a) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 51, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 12.
[407] В некоторых случаях антитело к VEGF содержит (a) вариабельный домен тяжелой цепи (VH), содержащий аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 90% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности) по отношению к любой из SEQ ID NO: 11, 40 или 42, или последовательность согласно любой из SEQ ID NO: 11, 40 или 42; (b) вариабельный домен легкой цепи (VL), содержащий аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 90% последовательность (например, по меньшей мере 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности) по отношению к любой из SEQ ID NO: 12, 41 или 46, или последовательность согласно любой из SEQ ID NO: 12, 41 или 46; или (c) домен VH, как в (a), и домен VL, как в (b). Например, в некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 11, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 12. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 40, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 12. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 42, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 12. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 42, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 41. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 11, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 46.
[408] В некоторых случаях любое из предыдущих антител к VEGF может включать в себя одну, две, три или четыре из следующих каркасных областей вариабельного домена тяжелой цепи (FR): (a) FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTIS (SEQ ID NO: 13); (b) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQAPGKGLEWVA (SEQ ID NO: 14) или WVRQEPGKGLEWVA (SEQ ID NO: 39); (c) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSKNTAYLQMRSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 15); и (d) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 16).
[409] В некоторых случаях любое из предыдущих антител к VEGF может включать в себя одну, две, три или четыре из следующих FR вариабельного домена легкой цепи: (a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 17) или DIQMTQSPSSLSASVGDRVTIDC (SEQ ID NO: 45); (b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18); (c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 19), GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDSATYYC (SEQ ID NO: 44), или GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYC (SEQ ID NO: 54); и (d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20) или FGQGTKVEVK (SEQ ID NO: 55).
[410] В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 11, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQGYGNPFTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 59).
[411] В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQGYGNPFTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 59).
[412] В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 40, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQGYGNPFTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 59).
[413] В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 42, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQGYGNPFTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 59).
[414] В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 51, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQGYGNPFTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 59).
[415] В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 11, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQGYGAPFTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 60).
[416] В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQGYGAPFTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 60).
[417] В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 40, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQGYGAPFTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 60).
[418] В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 42, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQGYGAPFTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 60).
[419] В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 51, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQGYGAPFTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 60). Например, в некоторых случаях антитело к VEGF содержит (a) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 90% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности) по отношению к последовательности согласно SEQ ID NO: 11, или последовательность согласно SEQ ID NO: 11; (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 90% последовательность (например, по меньшей мере 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности) по отношению к последовательности согласно SEQ ID NO: 11, или последовательность согласно SEQ ID NO: 11; или (c) домен VH, как в (a), и домен VL, как в (b). В некоторых случаях антитело к VEGF может включать в себя (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DYWIH (SEQ ID NO: 1); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно GITPAGGYTRYADSVKG (SEQ ID NO: 7); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO: 3); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно SASFLYS (SEQ ID NO: 9); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие каркасные области тяжелой цепи: (a) FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTIS (SEQ ID NO: 13); (b) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQAPGKGLEWVA (SEQ ID NO: 14); (c) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSKNTAYLQMRSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 15); и (d) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 16). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя следующие каркасные области легкой цепи: (a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 17); (b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18); (c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 19); и (d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20). В некоторых случаях антитело к VEGF включает в себя связывающий домен, содержащий (a) домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 11, и (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 12. В некоторых случаях иллюстративное антитело к VEGF представляет собой N94A.F83A.N82aR.Y58R (также называемое G6.31.AARR).
[420] В некоторых случаях антитело к VEGF содержит (a) VH домен, содержащий аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 90% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности) по отношению к последовательности согласно SEQ ID NO: 33 или 51, или последовательность согласно SEQ ID NO: 33 или 51; (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 90% последовательность (например, по меньшей мере 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности) по отношению к любой из SEQ ID NO: 12, 34, 35, 36, 37 или 38, или последовательность согласно любой из SEQ ID NO: 12, 34, 35, 36, 37 или 38; или (c) домен VH, как в (a), и домен VL, как в (b). Например, в некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 12. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 34. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 35. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 36. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 37. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 38. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 51, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 38. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 51, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 35. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 51, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 37. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 51, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 12.
[421] В некоторых случаях антитело к VEGF содержит (a) VH домен, содержащий аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 90% идентичности последовательности (например, по меньшей мере 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности) по отношению к последовательности SEQ ID NO: 33 или 51, или последовательность согласно SEQ ID NO: 33 или 51; (b) домен VL, содержащий аминокислотную последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 90% последовательность (например, по меньшей мере 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности последовательности) по отношению к любой из SEQ ID NO: 12, 34, 35, 36, 37 или 38, или последовательность согласно любой из SEQ ID NO: 12, 34, 35, 36, 37 или 38; или (c) домен VH, как в (a), и домен VL, как в (b). Например, в некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33 и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 12. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 34. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 35. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 36. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 37. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 33, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 38. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 51, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 38. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 51, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 35. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 51, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 37. В некоторых случаях антитело содержит домен VH, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 51, и домен VL, содержащий аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 12,
[422] В некоторых случаях любое из предыдущих антител к VEGF может включать в себя одну, две, три или четыре из следующих каркасных областей вариабельного домена тяжелой цепи (FR): FR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно EEQLVEEGGGLVQPGESLELSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 29) или EEQLVEEGGGLVQPGESLRLSCAASGFEIS (SEQ ID NO: 52); (b) FR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WVRQEPGEGLEWVA (SEQ ID NO: 30) или WVRQEPGKGLEWVA (SEQ ID NO: 39); (c) FR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно RFTISADTSENTAYLQMNELRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 31); и (d) FR-H4, содержащая аминокислотную последовательность согласно WGQGELVTVSS (SEQ ID NO: 32).
[423] В некоторых случаях любое из предыдущих антител к VEGF может включать в себя одну, две, три или четыре из следующих FR вариабельного домена легкой цепи: (a) FR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC (SEQ ID NO: 17), DIQMTQSPESLSASVGDEVTITC (SEQ ID NO: 25) или DIQMTQSPSSLSASVGDEVTITC (SEQ ID NO: 26); (b) FR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 18) или WYQQKPGEAPKLLIY (SEQ ID NO: 27); (c) FR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 19), GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 24) или GVPSRFSGSGSGTDFTLTIESLQPEDAATYYC (SEQ ID NO: 28); и (d) FR-L4, содержащая аминокислотную последовательность согласно FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 20).
[424] В некоторых случаях настоящее изобретение относится к антителу, содержащему (a) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 48, и/или (b) легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 50. Согласно определенным вариантам осуществления антитело представляет собой G6.31 AARR, экспрессированное в формате Fab.
[425] В некоторых случаях настоящее изобретение относится к антителу, содержащему (a) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 49, и/или (b) легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 50. Согласно определенным вариантам осуществления антитело представляет собой вариантную версию G6.31 AARR, которая не обладает реакционной способностью в отношении антител к IgG человека.
[426] В дополнительном аспекте антитело (например, антитело к VEGF) в соответствии с любым из вышеуказанных вариантов осуществления может включать в себя любой из признаков, по отдельности или в комбинации, как описано в разделах 1-7 ниже.
Раздел 1: Аффинность антитела
[427] Согласно определенным вариантам осуществления антитело, предусмотренное в настоящем документе, характеризуется константой диссоциации (Kd), составляющей ≤ 1 мкM, ≤ 100 нM, ≤ 10 нM, ≤ 1 нM, ≤ 0,1 нM, ≤ 0,01 нM или ≤ 0,001 нM (например, 10-8 M или меньше, например, от 10-8 M до 10-13 M, например, от 10-9 M до 10-13 M). Например, в некоторых случаях антитело, предусмотренное в настоящем документе, связывается с антигеном (например, VEGF человека (hVEGF)) с Kd, составляющей приблизительно 10 нM или ниже. В некоторых случаях антитело, предусмотренное в настоящем документе, связывается с антигеном (например, hVEGF) с Kd, составляющей приблизительно 5 нM или ниже. В некоторых случаях антитело, предусмотренное в настоящем документе, связывается с hVEGF с Kd, составляющей приблизительно 2 нM или ниже. Например, в некоторых случаях антитело связывается с антигеном (например, hVEGF) с Kd от приблизительно 25 пM до приблизительно 2 нM (например, приблизительно 25 пM, приблизительно 50 пM, приблизительно 75 пM, приблизительно 100 пM, приблизительно 125 пM, приблизительно 150 пM, приблизительно 175 пM, приблизительно 200 пM, приблизительно 225 пM, приблизительно 250 пM, приблизительно 275 пM, приблизительно 300 пM, приблизительно 325 пM, приблизительно 350 пM, приблизительно 375 пM, приблизительно 400 пM, приблизительно 425 пM, приблизительно 450 пM, приблизительно 475 пM, приблизительно 500 пM, приблизительно 525 пM, приблизительно 550 пM, приблизительно 575 пM, приблизительно 600 пM, приблизительно 625 пM, приблизительно 650 пM, приблизительно 675 пM, приблизительно 700 пM, приблизительно 725 пM, приблизительно 750 пM, приблизительно 775 пM, приблизительно 800 пM, приблизительно 825 пM, приблизительно 850 пM, приблизительно 875 пM, приблизительно 900 пM, приблизительно 925 пM, приблизительно 950 пM, приблизительно 975 пM, приблизительно 1 нM, приблизительно 1,1 нM, приблизительно 1,2 нM, приблизительно 1,3 нM, приблизительно 1,4 нM, приблизительно 1,5 нM, приблизительно 1,6 нM, приблизительно 1,7 нM, приблизительно 1,8 нM, приблизительно 1,9 нM или приблизительно 2 нM). В некоторых случаях антитело связывается с антигеном (например, hVEGF) с Kd от приблизительно 75 пМ до приблизительно 600 пM (например, приблизительно 75 пM, приблизительно 100 пM, приблизительно 125 пM, приблизительно 150 пM, приблизительно 175 пM, приблизительно 200 пM, приблизительно 225 пM, приблизительно 250 пM, приблизительно 275 пM, приблизительно 300 пM, приблизительно 325 пM, приблизительно 350 пM, приблизительно 375 пM, приблизительно 400 пM, приблизительно 425 пM, приблизительно 450 пM, приблизительно 475 пM, приблизительно 500 пM, приблизительно 525 пM, приблизительно 550 пM, приблизительно 575 пM, приблизительно 600 пM). В некоторых случаях антитело связывается с антигеном (например, hVEGF) с Kd от приблизительно 75 пM до приблизительно 500 пM. В некоторых случаях антитело связывается с антигеном (например, hVEGF) с Kd от приблизительно 75 пM до приблизительно 400 пM. В некоторых случаях антитело связывается с антигеном (например, hVEGF) с Kd от приблизительно 75 пM до приблизительно 300 пM. В некоторых случаях антитело связывается с антигеном (например, hVEGF) с Kd от приблизительно 75 пM до приблизительно 200 пM. В некоторых случаях антитело связывается с антигеном (например, hVEGF) с Kd от приблизительно 75 пM до приблизительно 150 пM. В некоторых случаях антитело связывается с антигеном (например, hVEGF) с Kd от приблизительно 75 пM до приблизительно 125 пM. В некоторых случаях антитело связывается с антигеном (например, hVEGF) с Kd от приблизительно 75 пM до приблизительно 100 пM. В некоторых случаях антитело связывается с антигеном (например, hVEGF) с Kd, составляющей приблизительно 80 пM. В некоторых случаях антитело связывается с антигеном (например, hVEGF) с Kd, составляющей приблизительно 60 пM. В некоторых случаях антитело связывается с антигеном (например, hVEGF) с Kd, составляющей приблизительно 40 пM.
[428] Согласно одному варианту осуществления Kd измеряют с помощью анализа связывания антигена с радиоактивной меткой (RIA). Согласно одному варианту осуществления RIA выполняют с Fab-версией представляющего интерес антитела и его антигена. Например, аффинность связывания раствора Fab к антигену измеряют путем уравновешивания Fab с минимальной концентрацией (125I)-меченного антигена в присутствии серии титрования немеченого антигена, затем захвата связанного антигена планшетом, покрытым антителом к Fab (см., например, Chen et al., J. Mol. Biol. 293: 865-881 (1999)). Чтобы установить условия для анализа, многолуночные планшеты MICROTITER® (Thermo Scientific) покрывают в течение ночи 5 мкг/мл захватывающего антитела к Fab (Cappel Labs) в 50 мМ карбонате натрия (pH 9,6), а затем блокируют с помощью 2% (масс./об.) бычьего сывороточного альбумина (BSA) в фосфатно-солевом буфере (PBS) в течение двух-пяти часов при комнатной температуре (приблизительно 23°C). В неадсорбирующем планшете (Nunc # 269620) 100 пМ или 26 пМ [125I]-антигена смешивают с серийными разведениями представляющего интерес Fab (например, в соответствии с оценкой антитела к VEGF, Fab-12, в Presta et al., Cancer Res. 57: 4593-4599 (1997)). Представляющий интерес Fab затем инкубируют в течение ночи; однако инкубация может продолжаться в течение более длительного периода (например, приблизительно 65 часов), чтобы обеспечить достижение равновесия. После этого смеси переносят в планшет для захвата для инкубации при комнатной температуре (например, в течение одного часа). Затем раствор удаляют и планшет промывают восемь раз 0,1% полисорбатом 20 (TWEEN-20®) в PBS. Когда планшеты высохнут, добавляют 150 мкл на лунку сцинтилляционной жидкости (MICROSCINT-20™; Packard), и планшеты подсчитывают на счетчике гамма-излучения TOPCOUNT™ (Packard) в течение десяти минут. Концентрации каждого Fab, которые дают меньше чем или равное 20% максимального связывания, выбирают для использования в анализах конкурентного связывания.
[429] Согласно другому варианту осуществления Kd измеряют с использованием анализа поверхностного плазмонного резонанса BIACORE®. Например, анализ с использованием BIACORE®-2000 или BIACORE®-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) проводят при 25°C с использованием иммобилизованных чипов антигена CM5 при ~ 10 единицах ответа (RU). Согласно одному варианту осуществления чипы карбоксиметилированного декстранового биосенсора (CM5, BIAcore, Inc.) активируют N-этил-N’-(3-диметиламинопропил)-карбодиимидгидрохлоридом (EDC) и N-гидроксисукцинимидом (NHS) в соответствии с инструкциями поставщика. Антиген разбавляют 10 мМ ацетатом натрия, рН 4,8, до 5 мкг/мл (~ 0,2 мкМ) перед инъекцией со скоростью потока 5 мкл/мин, чтобы получить приблизительно 10 единиц ответа (RU) связанного белка. После инъекции антигена 1 М этаноламин вводят с помощью инъекции для блокирования непрореагировавших групп. Для измерения кинетики в PBS вводят двукратные серийные разведения Fab (от 0,78 нМ до 500 нМ) с 0,05% поверхностно-активного вещества полисорбата 20 (TWEEN-20™) (PBST) при 25°C при скорости потока приблизительно 25 мкл/мин. Скорости ассоциации (kon) и скорости диссоциации (koff) рассчитывают с использованием простой взаимнооднозначной модели связывания Ленгмюра (BIACORE® Evaluation Software, версия 3.2) путем одновременного подбора сенсограмм ассоциации и диссоциации. Равновесную константу диссоциации (Kd) рассчитывают как отношение koff/kon. См., например, Chen et al., J. Mol. Biol. 293: 865-881 (1999). Если скорость ассоциации превышает 106 М-1 с-1 с помощью анализа поверхностного плазмонного резонанса, описанного выше, то скорость ассоциации можно определить с помощью техники флуоресцентного гашения, в которой измеряют увеличение или уменьшение интенсивности флуоресцентного излучения (возбуждение = 295 нм; испускание = 340 нм, полоса пропускания 16 нм) при 25°С 20 нМ антитела к антигену (в форме Fab) в PBS, рН 7,2, в присутствии возрастающих концентраций антигена, как измерено в спектрометре, таком как оборудованный остановкой потока спектрофотометр (Aviv Instruments) или спектрофотометр SLM-AMINCO™ серии 8000 (ThermoSpectronic) с кюветой с мешалкой.
Раздел 2: Стабильность антитела
[430] В некоторых случаях антитело, используемое в конъюгатах антител согласно настоящему изобретению или их композициях, характеризуется усиленной стабильностью, например, по сравнению с антителом к VEGF, например, G6.31 (см., например, патент США № 7758859 и международная патентная публикация № WO 2005/012359, которые полностью включены в настоящий документ посредством ссылки). Стабильность антитела можно определить с использованием любого способа, известного в настоящей области техники, например, следующего: дифференциальная сканирующая флуориметрия (DSF), круговой дихроизм (CD), собственная флуоресценция белка, дифференциальная сканирующая калориметрия, спектроскопия, рассеяние света (например, динамическое рассеяние света (DLS) и статическое рассеяние света (SLS), хроматография с самовзаимодействием (SIC). Антитело к VEGF может характеризоваться, например, повышенной температурой плавления (Tm), температурой агрегации (Tagg) или другими показателями стабильности по сравнению с антителом к VEGF, например, G6.31.
[431] Согласно определенным вариантам осуществления антитело, предусмотренное в настоящем документе, характеризуется значением Tm, которое больше или равно приблизительно 80°C (например, приблизительно 81°C, приблизительно 82°C, приблизительно 83°C, приблизительно 84°C, приблизительно 85°C, приблизительно 86°C, приблизительно 87°C, приблизительно 88°C, приблизительно 89°C, приблизительно 90°C, приблизительно 91°C, приблизительно 92°C или приблизительно 93°C). Например, в некоторых случаях антитело к VEGF характеризуется значением Tm, которое больше или равно приблизительно 83,5°C (например, приблизительно 83,5°C, приблизительно 84°C, приблизительно 85°C, приблизительно 86°C, приблизительно 87°C, приблизительно 88°C, приблизительно 89°C, приблизительно 90°C, приблизительно 91°C, приблизительно 92°C или приблизительно 93°C). В некоторых случаях антитело к VEGF характеризуется значением Tm, которое составляет от приблизительно 82°C до приблизительно 92°C (например, приблизительно 82°C, приблизительно 83°C, приблизительно 84°C, приблизительно 85°C, приблизительно 86°C, приблизительно 87°C, приблизительно 88°C, приблизительно 89°C, приблизительно 90°C, приблизительно 91°C или приблизительно 92°C). В некоторых случаях антитело к VEGF характеризуется значением Tm, которое составляет приблизительно 82°C. В некоторых случаях любое из перечисленных выше значений Tm антитела к VEGF определяют с использованием DSF. Согласно некоторым вариантам осуществления значение Tm антитела к VEGF определяют, как описано, например, в примере 1 международной патентной заявки № PCT/US2016/053454, которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки.
Раздел 3: Фрагменты антител
[432] Согласно определенным вариантам осуществления антитело, предусмотренное в настоящем документе, представляет собой фрагмент антитела. Фрагменты антител включают в себя без ограничения фрагменты Fab, Fab’, Fab-C, Fab’-SH, F(ab’)2, Fv и scFv и другие фрагменты, описанные ниже. Для обзора определенных фрагментов антител см. Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003). Для обзора фрагментов scFv см., например, Pluckthün, в The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994); см. также WO 93/16185; и патенты США №№ 5571894 и 5587458. Для обсуждения фрагментов Fab и F(ab’)2, содержащих остатки эпитопа связывания рецептора реутилизации и характеризующихся увеличенным in vivo периодом полужизни, см. патент США № 5869046.
[433] Диатела представляют собой фрагменты антител с двумя антигенсвязывающими сайтами, которые могут являться бивалентными или биспецифическими. См., например, EP 404,097; WO 1993/01161; Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); и Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993). Триатела и тетратела также описаны в Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003).
[434] Однодоменные антитела представляют собой фрагменты антител, содержащие весь вариабельный домен тяжелой цепи антитела или его часть или весь вариабельный домен легкой цепи антитела или его часть. Согласно определенным вариантам осуществления однодоменное антитело представляет собой однодоменное антитело человека (Domantis, Inc., Waltham, MA; см., например, патент США № 6248516 B1).
[435] Фрагменты антител можно получить с помощью различных техник, включая в себя без ограничения протеолитическое расщепление интактного антитела, а также продукцию рекомбинантными клетками-хозяевами (например, кишечной палочкой или фагом), как описано в настоящем документе.
Раздел 4: Химерные и гуманизированные антитела
[436] Согласно определенным вариантам осуществления антитело, предусмотренное в настоящем документе, представляет собой химерное антитело. Определенные химерные антитела описаны, например, в патенте США № 4816567; и Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984). Согласно одному примеру химерное антитело содержит не относящуюся к человеку вариабельную область (например, вариабельный домен, полученный от мыши, крысы, хомячка, кролика или не являющегося человеком примата, такого как обезьяна) и константный домен человека. Согласно дополнительному примеру химерное антитело представляет собой антитело “с переключенным классом”, в котором класс или подкласс был изменен по сравнению с исходным антителом. Химерные антитела включают в себя их антигенсвязывающие фрагменты.
[437] Согласно определенным вариантам осуществления химерное антитело представляет собой гуманизированное антитело. Как правило, не относящееся к человеку антитело гуманизируют для снижения иммуногенности в отношении организма человека, при этом сохраняя специфичноть и аффинность исходного не относящегося к человеку антитела. Как правило, гуманизированное антитело содержит один или несколько вариабельных доменов, в которых HVR, например, CDR (или их части) происходят из не относящегося к человеку антитела, а FR (или их части) происходят из последовательностей антитела человека. Гуманизированное антитело необязательно будет также содержать по меньшей мере часть константной области человека. Согласно некоторым вариантам осуществления некоторые остатки FR в гуманизированном антителе замещены соответствующими остатками из не относящегося к человеку антитела (например, антитела, из которого происходят остатки HVR), например, для восстановления или улучшения специфичности или аффинности антитела.
[438] Гуманизированные антитела и способы их получения представлены в обзорах, например, в Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008), и дополнительно описаны, например, в Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989); патентах США №№ 5821337, 7527791, 6982321 и 7087409; Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) (где описано получение привитых определяющих специфичность областей (SDR)); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) (где описано “изменение поверхности”); Dall’Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) (где описана “перестановка FR”); и Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) и Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (где описан подход “направленной селекции” к перестановке FR).
[439] Каркасные области человека, которые можно использовать для гуманизации, включают в себя без ограничения: каркасные области, выбранные с использованием способа “максимального соответствия” (см., например, Sims et al., J. Immunol. 151:2296 (1993)); каркасные области, происходящие из консенсусной последовательности антител человека конкретной подгруппы вариабельных областей легкой или тяжелой цепи (см., например, Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); и Presta et al., J. Immunol., 151:2623 (1993)); зрелые (соматически мутированные) каркасные области человека или каркасные области зародышевой линии человека (см., например, Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)); и каркасные области, полученные из скрининга библиотек FR (см., например, Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) и Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)).
Раздел 5: Полученные из библиотек антитела
[440] Антитела согласно настоящему изобретению можно выделить путем скрининга комбинаторных библиотек в отношении антител с требуемой активностью или активностями. Например, в настоящей области техники известны различные способы создания библиотек фагового дисплея и скрининга таких библиотек на наличие антител, обладающих требуемыми характеристиками связывания. Такие способы рассмотрены, например, в Hoogenboom et al., в Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001) и дополнительно описаны, например, в McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, в Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); и Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004).
[441] В некоторых способах с использованием фагового дисплея репертуары генов VH и VL по отдельности клонируют с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) и случайным образом рекомбинируют в фаговых библиотеках, которые затем можно подвергать скринингу в отношении антигенсвязывающего фага, как описано в Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994). Фаг, как правило, содержит фрагменты антител, либо в виде одноцепочечных фрагментов Fv (scFv), либо в виде фрагментов Fab. Библиотеки из иммунизированных источников предоставляют высокоаффинные антитела к иммуногену без необходимости конструирования гибридом. Альтернативно, наивный репертуар можно клонировать (например, от человека) для обеспечения единого источника антител к широкому спектру не собственных, а также собственных антигенов без какой-либо иммунизации, как описано Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993). Наконец, наивные библиотеки также можно создать синтетически путем клонирования неаранжированных V-генных сегментов из стволовых клеток и использования ПЦР-праймеров, содержащих случайную последовательность, для кодирования в высокой степени вариабельных областей CDR3 и для осуществления реаранжировки in vitro, как описано в Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992). Патентные публикации, описывающие фаговые библиотеки антител человека, включают в себя, например: патент США № 5750373 и патентные публикации США №№ 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936 и 2009/0002360.
[442] Антитела или фрагменты антител можно получить из фаговых библиотек, как описано в международной патентной заявке № PCT/US2016/053454.
[443] Антитела или фрагменты антител, выделенные из библиотек антител человека, рассматриваются в настоящем документе как антитела человека или фрагменты антител человека.
Раздел 6: Мультиспецифические антитела
[444] Согласно определенным вариантам осуществления антитело, предусмотренное в настоящем документе, представляет собой мультиспецифическое антитело, например, биспецифическое антитело. Мультиспецифические антитела представляют собой моноклональные антитела, которые характеризуются специфичностями связывания в отношении по меньшей мере двух различных сайтов. Согласно определенным вариантам осуществления одна из специфичностей связывания представляет собой специфичность связывания по отношению к VEGF, а другая - по отношению к любому другому антигену (например, следующему: вторая биологическая молекула, например, интерлейкин-1 бета (IL-1β); интерлейкин-6 (IL-6); рецептор интерлейкина-6 (IL-6R); интерлейкин-13 (IL-13); рецептор IL-13 (IL-13R); PDGF (например, PDGF-BB); ангиопоэтин; ангиопоэтин 2 (Ang2); Tie2; S1P; интегрины αvβ3, αvβ5 и α5β1; бетацеллюлин; апелин/APJ; эритропоэтин; фактор комплемента D; TNFα; HtrA1; рецептор VEGF (например, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, мембраносвязанный рецептор VEGF (mbVEGFR) или растворимый рецептор VEGF (sVEGFR)); рецептор ST-2; и белки, генетически связанные с риском возрастной макулярной дегенерации (AMD), такие как компоненты пути комплемента C2 фактор B, фактор H, CFHR3, C3b, C5, C5a и C3a; HtrA1; ARMS2; TIMP3; HLA; интерлейкин-8 (IL-8); CX3CR1; TLR3; TLR4; CETP; LIPC; COL10A1 и TNFRSF10A. Соответственно, биспецифическое антитело может характеризоваться специфичностью связывания в отношении следующего: VEGF и IL-1β; VEGF и IL-6; VEGF и IL-6R; VEGF и IL-13; VEGF и IL-13R; VEGF и PDGF (например, PDGF-BB); VEGF и ангиопоэтин; VEGF и Ang2; VEGF и Tie2; VEGF и S1P; VEGF и интегрин αvβ3; VEGF и интегрин αvβ5; VEGF и интегрин α5β1; VEGF и бетацеллюлин; VEGF и апелин/APJ; VEGF и эритропоэтин; VEGF и фактор комплемента D; VEGF и TNFα; VEGF и HtrA1; VEGF и рецептор VEGF (например, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, mbVEGFR или sVEGFR); VEGF и рецептор ST-2; VEGF и C2; VEGF и фактор B; VEGF и фактор H; VEGF и CFHR3; VEGF и C3b; VEGF и C5; VEGF и C5a; VEGF и C3a; VEGF и ARMS2; VEGF и TIMP3; VEGF и HLA; VEGF и IL-8; VEGF и CX3CR1; VEGF и TLR3; VEGF и TLR4; VEGF и CETP; VEGF и LIPC; VEGF и COL10A1 или VEGF и TNFRSF10A. Согласно определенным вариантам осуществления биспецифические антитела могут связываться с двумя различными эпитопами VEGF. Биспецифические антитела также можно использовать для локализации цитотоксических средств в клетках, которые экспрессируют VEGF. Биспецифические антитела можно получить в виде полноразмерных антител или фрагментов антител (например, фрагментов Fab, Fab’ или Fab-C).
[445] В некоторых случаях биспецифическое антитело представляет собой биспецифическое антитело к VEGF/к ангиопоэтину 2 (Ang2), раскрытое в заявке на выдачу патента США № US 2014/0017244, которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки. Например, биспецифическое антитело к VEGF/к Ang2 может включать в себя первый связывающий домен, который связывается с VEGF (такой как любое из антител к VEGF, описанных в настоящем документе), и второй связывающий домен, который связывается с Ang2, который включает в себя следующее: (a) HVR-H1, содержащая аминокислотную последовательность согласно GYYMH (SEQ ID NO: 61); (b) HVR-H2, содержащая аминокислотную последовательность согласно WINPNSGGTNYAQKFQG (SEQ ID NO: 62); (c) HVR-H3, содержащая аминокислотную последовательность согласно SPNPYYYDSSGYYYPGAFDI (SEQ ID NO: 63); (d) HVR-L1, содержащая аминокислотную последовательность согласно GGNNIGSKSVH (SEQ ID NO: 64); (e) HVR-L2, содержащая аминокислотную последовательность согласно DDSDRPS (SEQ ID NO: 65); и (f) HVR-L3, содержащая аминокислотную последовательность согласно QVWDSSSDHWV (SEQ ID NO: 66), или комбинацию одной или нескольких представленных выше HVR и одного или нескольких их вариантов, характеризующихся по меньшей мере приблизительно 80% идентичности последовательности (например, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичности) по отношению к любой из SEQ ID NO: 61-66.
[446] В некоторых случаях биспецифическое антитело к VEGF/к Ang2 может включать в себя первый связывающий домен, который связывается с VEGF (такой как любое из антител к VEGF, описанных в настоящем документе) и второй связывающий домен, который связывается с Ang2 В некоторых случаях биспецифическое антитело к VEGF/к Ang2 может включать в себя первый связывающий домен, который связывается с VEGF (такой как любое из антител к VEGF, описанных в настоящем документе) и второй связывающий домен, который специфически связывается с Ang2, где второй связывающий домен представляет собой любой связывающий домен антитела, описанный в международной патентной публикации № WO 2010/069532, которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки, или его вариант.
[447]В других случаях биспецифическое антитело к VEGF/к Ang2 представляет собой любое биспецифическое антитело к VEGF/к Ang2, описанное в международной патентной публикации № WO 2016/073157.
[448] В некоторых случаях биспецифическое антитело представляет собой биспецифическое антитело к VEGF/к IL-6. В некоторых случаях биспецифическое антитело к VEGF/к IL-6 может включать в себя первый связывающий домен, который связывается с VEGF (такой как любое из антител к VEGF, описанных в настоящем документе) и второй связывающий домен, который связывается с IL-6. Второй связывающий домен может представлять собой связывающий домен любого антитела к IL-6, известного в настоящей области техники, например, EBI-031 (Eleven Biotherapeutics; см., например, WO 2016/073890, которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки), силтуксимаб (SYLVANT®), олокизумаб, клазакизумаб, сирукумаб, элсилимомаб, герилимзумаб, OPR-003, MEDI-5117, PF-04236921 или их вариант.
[449] В некоторых случаях биспецифическое антитело представляет собой биспецифическое антитело к VEGF/к IL-6R. В некоторых случаях биспецифическое антитело к VEGF/к IL-6R может включать в себя первый связывающий домен, который связывается с VEGF (такой как любое из антител к VEGF, описанных в настоящем документе) и второй связывающий домен, который связывается с IL-6R. Второй связывающий домен может представлять собой связывающий домен любого антитела к IL-6R, известного в настоящей области техники, например, тоцилизумаб (ACTEMRA®) (см., например, WO 1992/019579, которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки), сарилумаб, вобарилизумаб (ALX-0061), SA-237 или их вариант.
[450] Техники получения мультиспецифических антител включают в себя без ограничения рекомбинантную коэкспрессию двух пар тяжелой цепи-легкой цепи иммуноглобулина с различными специфичностями (см. Milstein And Cuello, Nature 305: 537 (1983)), WO 93/08829 и Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)), и конструирование структуры “выступ-во-впадину” (см., например, патент США № 5731168). Мультиспецифические антитела также можно получить путем конструирования белков с использованием эффекта электростатического взаимодействия для получения Fc-гетеродимерных молекул антител (WO 2009/089004A1); поперечного сшивания двух или более антител или фрагментов (см., например, патент США № 4676980 и Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)); использования лейциновых молний для получения биспецифических антител (см., например, Kostelny et al., J. Immunol., 148(5): 1547-1553 (1992)); использования технологии “диатела” для получения фрагментов биспецифических антител (см., например, Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)); и использования одноцепочечных димеров Fv (sFv) (см., например, Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)); и получения триспецифических антител, как описано, например, в Tutt et al., J. Immunol. 147:60 (1991).
[451] Сконструированные антитела с тремя или более функциональными антигенсвязывающими сайтами, включая в себя антитела-“осьминоги”, также включены в настоящий документ (см., например, US 2006/0025576A1).
[452] Антитело или фрагмент в настоящем документе также включает в себя “Fab двойного действия” или “DAF”, содержащую антигенсвязывающий сайт, который связывается с VEGF, а также другим, отличающимся антигеном (см., например, US 2008/0069820).
Раздел 7: Варианты антител
[453] Согласно определенным вариантам осуществления предусмотрены варианты аминокислотной последовательности (например, варианты антител, включая в себя одну или несколько замен аминокислотных остатков) антител, предусмотренных в настоящем документе. Например, может быть желательно улучшить аффинность связывания и/или другие биологические свойства антитела. Варианты аминокислотной последовательности антитела можно получить путем введения соответствующих модификаций в нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело, или путем пептидного синтеза. Такие модификации включают в себя, например, делеции, и/или вставки, и/или замены остатков в аминокислотных последовательностях антитела. Любую комбинацию делеции, вставки и замены можно осуществить для достижения конечного конструкта, при условии, что конечный конструкт обладает требуемыми характеристиками, например, связыванием антигена.
(a) Варианты замен, вставок и делеций
[454] Согласно определенным вариантам осуществления предусмотрены варианты антител с одной или несколькими аминокислотными заменами. Представляющие интерес сайты для заместительного мутагенеза включают в себя области HVR и FR. Консервативные замены показаны в таблице 1 под заголовком “предпочтительные замены”. Более существенные изменения представлены в таблице 1 под заголовком “иллюстративные замены”, и как дополнительно описано ниже со ссылкой на классы аминокислотных боковых цепей. Аминокислотные замены можно ввести в представляющее интерес антитело и продукты подвергнуть скринингу в отношении требуемой активности, например, сохраненного/улучшенного связывания с антигеном, сниженной иммуногенности или других функциональных признаков, например, стабильности или эффекторной функции.
Таблица 1
Исходный
остаток |
Иллюстративные замены | Предпочтительные замены |
Ala (A) | Val; Leu; Ile | Val |
Arg (R) | Lys; Gln; Asn | Lys |
Asn (N) | Gln; His; Asp, Lys; Arg | Gln |
Asp (D) | Glu; Asn | Glu |
Cys (C) | Ser; Ala | Ser |
Gln (Q) | Asn; Glu | Asn |
Glu (E) | Asp; Gln | Asp |
Gly (G) | Ala | Ala |
His (H) | Asn; Gln; Lys; Arg | Arg |
Ile (I) | Leu; Val; Met; Ala; Phe; норлейцин | Leu |
Leu (L) | норлейцин; Ile; Val; Met; Ala; Phe | Ile |
Lys (K) | Arg; Gln; Asn | Arg |
Met (M) | Leu; Phe; Ile | Leu |
Phe (F) | Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr | Tyr |
Pro (P) | Ala | Ala |
Ser (S) | Thr | Thr |
Thr (T) | Val; Ser | Ser |
Trp (W) | Tyr; Phe | Tyr |
Tyr (Y) | Trp; Phe; Thr; Ser | Phe |
Val (V) | Ile; Leu; Met; Phe; Ala; норлейцин | Leu |
[455] Аминокислоты можно разделить на группы в соответствии с общими свойствами боковых цепей: (1) гидрофобные: норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) нейтральные гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) кислые: Asp, Glu; (4) основные: His, Lys, Arg; (5) остатки, которые влияют на ориентацию цепи: Gly, Pro; (6) ароматические: Trp, Tyr, Phe; Неконсервативные замены повлекут за собой замену представителя одного из этих классов на другой класс.
[456] Один тип заместительного варианта включает в себя замену одного или нескольких остатков гипервариабельной области и/или остатков FR исходного антитела (например, гуманизированного антитела). Как правило, полученный(е) вариант(ы), выбранный(е) для дальнейшего исследования, будет(будут) содержать модификации (например, улучшения) в определенных биологических свойствах (например, повышенная аффинность, повышенная стабильность, повышенная экспрессия, измененный pI и/или пониженная иммуногенность) относительно исходного антитела и/или будет(будут) в значительной степени сохранять определенные биологические свойства исходного антитела. Иллюстративный заместительный вариант представляет собой антитело с созревшей аффинностью, которое можно успешно создать, например, с использованием техник созревания аффинности на основе фагового дисплея, таких как описанные в настоящем документе. Вкратце, один или несколько остатков HVR мутируют, и варианты антител “отображаются” на фаге и их подвергают скринингу в отношении определенной биологической активности (например, аффинности связывания).
[457] Изменения (например, замены) можно произвести в HVR, например, для улучшения сродства антитела. Такие изменения можно произвести в “горячих точках мутагенеза” HVR, т.е. остатках, кодируемых кодонами, которые подвергаются мутации с высокой частотой во время процесса соматического созревания (см., например, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)), и/или в остатках, которые связываются с антигеном, причем полученную вариантную VH или VL испытывают в отношении аффинности связывания. Созревание аффинности путем конструирования и повторного выбора из вторичных библиотек было описано, например, в Hoogenboom et al., в Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., Ed. Human Press, Totowa, NJ, (2001)). Согласно некоторым вариантам осуществления аффинного созревания разнообразие вводят в вариабельные гены, выбранные для созревания любым из множества способов (например, ПЦР с повышенной частотой ошибок, перетасовка цепи или олигонуклеотид-направленный мутагенез). Затем создают вторичную библиотеку. Затем библиотеку подвергают скринингу для выявления любых вариантов антител с требуемой аффинностью. Другой способ введения разнообразия включает в себя HVR-ориентированные подходы, в которых несколько остатков HVR (например, 4-6 остатков за раз) рандомизируют. Остатки HVR, участвующие в связывании антигена, можно конкретно идентифицировать, например, с использованием сканирующего аланином мутагенеза или моделирования. CDR-H3 и CDR-L3, в частности, часто являются мишенями.
[458] Согласно определенным вариантам осуществления замены, вставки или делеции могут происходить в одной или нескольких HVR, при условии, что такие изменения существенно не снижают способность антитела связываться с антигеном. Например, консервативные изменения (например, консервативные замены, как предусмотрено в настоящем документе), которые существенно не снижают аффинность связывания, можно осуществить в HVR. Такие изменения могут, например, находиться вне антигенсвязывающих остатков в HVR. Согласно определенным вариантам осуществления из вариантных последовательностей VH и VL, представленных выше, каждая HVR либо не изменяется, либо содержит не более одной, двух или трех аминокислотных замен.
[459] Согласно определенным вариантам осуществления замены, вставки или делеции могут происходить в одной или нескольких FR, если такие изменения существенно не снижают способность антитела связываться с антигеном. Такие изменения могут, например, улучшать аффинность и/или стабильность антител (например, при оценке по повышенной температуре плавления).
[460] Применимый способ идентификации остатков или областей антитела, которые могут являться мишенью для мутагенеза, называется “сканирующим аланином мутагенезом”, как описано Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085. В этом способе остаток или группа целевых остатков (например, заряженные остатки, такие как Arg, Asp, His, Lys и Glu) идентифицируют и заменяют нейтральной или отрицательно заряженной аминокислотой (например, аланином или полиаланином) для определения того, затрагивается ли взаимодействие антитела с антигеном. Дополнительные замены можно вводить в положениях аминокислот, демонстрирующих функциональную чувствительность к начальным заменам. Альтернативно или дополнительно, кристаллическую структуру комплекса антиген-антитело определяют для идентификации точек контакта между антителом и антигеном. Такие контактные остатки и соседние остатки могут являться мишенями или же их можно исключить в качестве кандидатов для замены. Варианты можно подвергнуть скринингу для определения того, содержат ли они требуемые свойства.
[461] Вставки аминокислотной последовательности включают в себя слияния на амино- и/или карбокси-конце длиной от одного остатка до полипептидов, содержащих сто или более остатков, а также вставки внутри последовательности одного или нескольких аминокислотных остатков. Примеры концевых вставок включают в себя антитело с N-концевым метионильным остатком. Другие варианты со вставками для молекулы антитела включают в себя слияние с N- или C-концом антитела с ферментом (например, для ADEPT) или полипептидом, который увеличивает период полужизни антитела в сыворотке.
(b) Варианты изоэлектрических точек
[462] Настоящее изобретение относится к вариантам антител с измененными изоэлектрическими точками. Например, настоящее изобретение относится к варианты антител с пониженной изоэлектрической точкой (pI), например, по сравнению с антителом к VEGF, например, G6.31. В некоторых случаях поверхностный заряд уменьшается при физиологическом pH. В некоторых случаях антитело к VEGF характеризуется значением pI, равным или ниже чем приблизительно 8 (например, приблизительно 8, приблизительно 7, приблизительно 6, приблизительно 5 или приблизительно 4). В некоторых случаях антитело характеризуется значением pI от приблизительно 4 до приблизительно 8 (например, приблизительно 4, приблизительно 5, приблизительно 6, приблизительно 7 или приблизительно 8). В некоторых случаях антитело к VEGF характеризуется значением pI от приблизительно 5 до приблизительно 7 (например, приблизительно 5, приблизительно 6 или приблизительно 7). В некоторых случаях антитело к VEGF характеризуется значением pI от приблизительно 5 до приблизительно 6 (например, приблизительно 5,1, приблизительно 5,2, приблизительно 5,3, приблизительно 5,4, приблизительно 5,5, приблизительно 5,6, приблизительно 5,7, приблизительно 5,8, приблизительно 5,9 или приблизительно 6).
[463] Антитела согласно настоящему изобретению можно сконструировать так, чтобы они характеризовались пониженным значением pI, например, путем замены аминокислотных остатков дикого типа в данном положении аминокислотой, характеризующейся более низким значением pI. pI аминокислоты можно определить на основе значений pKa амина (-NH2), карбоновой кислоты (-COOH) и боковой цепи аминокислоты, которые известны в настоящей области техники. Согласно некоторым вариантам осуществления экспонированные на поверхности аминокислотные остатки можно заменить для снижения pI антитела. Согласно одному варианту осуществления экспонированные на поверхности аминокислотные остатки можно заменить глутаматом (Е). Согласно одному варианту осуществления экспонированные на поверхности аминокислотные остатки можно заменить аспартатом (D).
Рекомбинантные способы и композиции
[464] Любое из антител (например, антител к VEGF), описанных в настоящем документе, можно получить с использованием рекомбинантных способов и композиций, например, как описано в патенте США № 4816567. Согласно одному варианту осуществления предусмотрена выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело к VEGF, описанное в настоящем документе. Такая нуклеиновая кислота может кодировать аминокислотную последовательность, содержащую VL, и/или аминокислотную последовательность, содержащую VH антитела (например, легкие и/или тяжелые цепи антитела). Согласно дополнительному варианту осуществления предусмотрен один или несколько векторов (например, экспрессионных векторов), содержащих такую нуклеиновую кислоту. Согласно дополнительному варианту осуществления предусмотрена клетка-хозяин, содержащая такую нуклеиновую кислоту. Согласно одному такому варианту осуществления клетка-хозяин содержит следующее (например, была трансформирована следующим): (1) вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует аминокислотную последовательность, содержащую VL антитела, и аминокислотную последовательность, содержащую VH антитела, или (2) первый вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует аминокислотную последовательность, содержащую VL антитела, и второй вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует аминокислотную последовательность, содержащую VH антитела. Согласно одному варианту осуществления клетка-хозяин является эукариотической, например клеткой яичника китайского хомячка (СНО) или лимфоидной клеткой (например, клетка Y0, NS0, Sp20). Согласно одному варианту осуществления предусмотрен способ получения антитела к VEGF, где способ предусматривает культивирование клетки-хозяина, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, как указано выше, в условиях, подходящих для экспрессии антитела, и, при необходимости, извлечение антитела из клетки-хозяина (или среды культивирования клеток-хозяев).
[465] Для рекомбинантной продукции антитела (например, антитела к VEGF) нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, например, как описано выше, выделяют и встраивают в один или несколько векторов для дальнейшего клонирования и/или экспрессии в клетке-хозяине. Такую нуклеиновую кислоту можно легко выделить и секвенировать с использованием общепринятых процедур (например, с использованием олигонуклеотидных зондов, которые способны специфически связываться с генами, кодирующими тяжелые и легкие цепи антитела).
[466] Подходящие клетки-хозяева для клонирования или экспрессии кодирующих антитела векторов включают в себя прокариотические или эукариотические клетки, описанные в настоящем документе. Например, антитела могут продуцироваться в бактериях, в частности, когда гликозилирование и эффекторная функция Fc не являются необходимыми. В отношении экспрессии фрагментов антител и полипептидов в бактериях, см., например, патенты США №№ 5648237, 5789199 и 5840523. См. также Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), стр. 245-254, где описана экспрессия фрагментов антител в E. coli. После экспрессии антитело можно выделить из пасты бактериальных клеток в растворимой фракции и можно дополнительно очистить.
[467] В дополнение к прокариотам эукариотические микроорганизмы, такие как гифомицеты или дрожжи, являются подходящими хозяевами для клонирования или экспрессии для векторов, кодирующих антитела, включая в себя грибы и штаммы дрожжей, пути гликозилирования которых были “гуманизированы”, что приводит к образованию антитела с частичным или полностью человеческим профилем гликозилирования. См. Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004) и Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006).
[468] Подходящие клетки-хозяева для экспрессии гликозилированного антитела также получены из многоклеточных организмов (беспозвоночных и позвоночных). Примеры клеток беспозвоночных включают в себя клетки растений и насекомых. Были идентифицированы многочисленные бакуловирусные штаммы, которые можно использовать вместе с клетками насекомых, особенно для трансфекции клеток Spodoptera frugiperda.
[469] Культуры растительных клеток также можно использовать в качестве хозяев. См., например, патенты США №№ 5959177, 6040498, 6420548, 7125978 и 6417429 (описывающие технологию PLANTIBODIES™ для получения антител в трансгенных растениях).
[470] Клетки позвоночных также можно использовать в качестве хозяев. Например, применимыми могут являться клеточные линии млекопитающих, которые адаптированы для роста в суспензии. Другими примерами применимых линий клеток-хозяев млекопитающих являются линия CV1 почек обезьян, трансформированная SV40 (COS-7); линия клеток почки эмбриона человека (клетки 293 или 293, как описано, например, в Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)); клетки почки новорождённого хомяка (BHK); клетки сертоли мыши (клетки TM4, как описано, например, в Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)); клетки почки обезьяны (CV1); клетки почки африканской зеленой мартышки (VERO-76); клетки карциномы шейки матки человека (HELA); клетки почки собаки (MDCK); клетки печени крысы линии Buffalo (BRL 3A); клетки легкого человека (W138); клетки печени человека (Hep G2); опухоль молочной железы мыши (MMT 060562); клетки TRI, как описано, например, в Mather et al. Annals NY Acad. Sci. 383:44-68 (1982); клетки MRC 5 и клетки FS4. Другие применимые линии клеток-хозяев млекопитающих включают в себя клетки яичника китайского хомячка (CHO), включая в себя клетки DHFR-CHO (Urlaub et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)) и клеточные линии миеломы, такие как Y0, NS0 и Sp2/0. Обзор некоторых линий клеток-хозяев млекопитающих, подходящих для продуцирования антител, см., например, в Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, том 248 (BKC Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), стр. 255-268 (2003).
Анализы
[471] Антитела (например, описанные в настоящем документе антитела к VEGF), а также конъюгаты антител (например, конъюгаты антител, которые включают в себя антитела к VEGF (например, любое антитело к VEGF, предусмотренное в настоящем документе)), можно идентифицировать, подвергнуть скринингу или охарактеризоваться по их физическим/химическим свойствам и/или биологическим активностям с помощью различных анализов, известных в настоящей области техники.
(a) Анализы связывания и другие анализы
[472] Согласно одному аспекту антитело (например, антитело к VEGF) или его конъюгат антитела, испытывают в отношении его антигенсвязывающей активности, например, с помощью известных способов, таких как ELISA, вестерн-блоттинг и т.д.
[473] Согласно другому аспекту конкурентные анализы можно использовать для идентификации антитела, которое конкурирует с антителом, как описано в настоящем документе, или его конъюгатом антитела, за связывание с антигеном (например, VEGF). Согласно определенным вариантам осуществления такое конкурирующее антитело связывается с тем же эпитопом (например, линейным или конформационным эпитопом), который связан антителом, как описано в настоящем документе. Подробные иллюстративные способы картирования эпитопа, с которым связывается антитело, представлены в Morris (1996) “Epitope Mapping Protocols”, в Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ).
[474] В одном из примеров конкурентного анализа иммобилизованный VEGF инкубируют в растворе, содержащем первое меченое антитело, которое связывается с VEGF, и второе немеченое антитело, которое испытывают в отношении его способности конкурировать с первым антителом за связывание с VEGF. Второе антитело может присутствовать в супернатанте гибридомы. В качестве контроля иммобилизованный VEGF инкубируют в растворе, содержащем первое меченое антитело, но не второе немеченое антитело. После инкубации в условиях, разрешающих связывание первого антитела с VEGF, избыток несвязанного антитела удаляют и измеряют количество метки, связанной с иммобилизованным VEGF. Если количество метки, связанной с иммобилизованным VEGF, существенно снижается в испытуемом образце относительно контрольного образца, то это указывает на то, что второе антитело конкурирует с первым антителом за связывание с VEGF. Подобные анализы можно выполнить для других антигенов. См. Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
(b) Анализы активности
[475] Согласно одному аспекту предусмотрены нализы для идентификации антител (например, антител к VEGF), или их конъюгатов антител, характеризующихся биологической активностью. Биологическая активность может включать в себя, например, связывание с антигеном (например, VEGF (например, VEGF в кровотоке)), или его пептидным фрагментом, либо in vivo, in vitro, либо ex vivo. Согласно определенным вариантам осуществления биологическая активность может включать в себя блокирование или нейтрализацию антигена. Например, согласно определенным вариантам осуществления биологическая активность может включать в себя блокирование или нейтрализацию VEGF или предотвращение связывания VEGF с лигандом, например, с рецептором, таким как KDR или Flt-1. Кроме того, предусмотрены антитела или их конъюгаты антител, характеризующиеся такой биологической активностью in vivo и/или in vitro. Согласно определенным вариантам осуществления антитело согласно настоящему изобретению или его конъюгат антитела испытывают в отношении такой биологической активности.
(c) Анализы стабильности
[476] Согласно одному аспекту предусмотрены анализы для определения стабильности (например, термостабильности) антитела (например, антитела к VEGF) или его конъюгата антитела. Например, стабильность антитела или его конъюгата антитела можно определить с использованием любого способа, известного в настоящей области техники, например, дифференциальной сканирующей флуориметрии (DSF), кругового дихроизма (CD), собственной флуоресценции белка, дифференциальной сканирующей калориметрии, спектроскопии, рассеяния света (например, динамического рассеяния света (DLS) и статического рассеяния света (SLS), хроматографии с самовзаимодействием (SIC). Стабильность антитела или его конъюгата антитела можно определить, как описано в настоящем документе, например, с использованием DSF, как описано, например, в примерах 1 и 2 международной патентной заявки № PCT/US2016/053454. В некоторых случаях стабильность конъюгата антитела можно определить с помощью эксклюзионной хроматографии, проводимой совместно с детекторами показателя преломления и многоуглового светорассеяния (SEC-RI-MALS).
Терапевтические способы и композиции
[477] Любые антитела (например, антитела к VEGF) или их конъюгаты антител (например, конъюгаты гидрогеля поперечно-сшитой HA), предусмотренные в настоящем документе, можно использовать в терапевтических способах.
[478] Согласно одному аспекту предусмотрено антитело к VEGF для применения в качестве лекарственного средства. Согласно другому аспекту предусмотрен конъюгат антитела (например, конъюгат гидрогеля поперечно-сшитой HA) для применения в качестве лекарственного средства. Согласно дополнительным аспектам настоящее изобретение относится к антителу к VEGF для применения в лечении нарушения, ассоциированного с патологическим ангиогенезом. Согласно другому аспекту настоящее изобретение относится к конъюгату антитела (например, конъюгату гидрогеля поперечно-сшитой HA) для применения в лечении нарушения, ассоциированного с патологическим ангиогенезом. Согласно некоторым вариантам осуществления нарушение, ассоциированное с патологическим ангиогенезом, представляет собой офтальмологическое нарушение или нарушение клеточной пролиферации. В некоторых случаях офтальмологическое нарушение представляет собой следующее: AMD (например, влажная форма AMD, сухая форма AMD, промежуточная форма AMD, прогрессирующая форма AMD или географическая атрофия (GA)), макулярная дегенерация, макулярный отек, DME (например, очаговый, нецентровый DME или диффузный, DME с вовлечением центра макулы), ретинопатия, диабетическая ретинопатия (DR) (например, пролиферативная DR (PDR), непролиферативная DR (NPDR), или высотная DR), другие связанные с ишемией ретинопатии, ROP, окклюзия вен сетчатки (RVO) (например, центральная (CRVO) и разветвленная (BRVO) формы), CNV (например, миопическая CNV), неоваскуляризация роговицы, заболевание, ассоциированное с неоваскуляризацией роговицы, неоваскуляризация сетчатки, заболевание, ассоциированное с ретинальной/хориоидальной неоваскуляризацией, патологическая миопия, болезнь фон Хиппель-Линдау, гистоплазмоз глаза, FEVR, болезнь Коутса, болезнь Норри, OPPG, субконъюнктивальное кровоизлияние, рубеоз радужки, неоваскулярные заболевания глаз, неоваскулярная глаукома, пигментный ретинит (RP), гипертоническая ретинопатия, ангиоматозная пролиферация сетчатки, макулярная телеангиэктазия, неоваскуляризация радужки, внутриглазная неоваскуляризация, дегенерация сетчатки, кистозный макулярный отек (CMЕ), васкулит, отек диска зрительного нерва, ретинит, конъюнктивит (например, инфекционный конъюнктивит и неинфекционный (например, аллергический) конъюнктивит), врожденный амавроз Лебера, увеит (включая в себя инфекционный и неинфекционный увеит), хориоидит (например, многоочаговый хориоидит), глазной гистоплазмоз, блефарит, сухость глаз, травматическое повреждение глаз или болезнь Шегрена. В некоторых случаях нарушение клеточной пролиферации представляет собой рак. В некоторых случаях рак представляет собой рак молочной железы, рак толстой и прямой кишки, немелкоклеточный рак легких, неходжкинскую лимфому (НХЛ), рак почки, рак предстательной железы, рак печени, рак головы и шеи, меланому, рак яичников, мезотелиому или множественную миелому. Согласно другому аспекту предусмотрено антитело к VEGF для применения в лечении нарушения, ассоциированного с нежелательной проницаемостью сосудов. В некоторых случаях нарушение, ассоциированное с нежелательной проницаемостью сосудов, представляет собой отек, ассоциированный с опухолями головного мозга, асцит, ассоциированный со злокачественными новообразованиями, синдром Мейгса, воспаление легких, нефротический синдром, перикардиальный выпот, плевральный выпот или проницаемость, ассоциированную с сердечно-сосудистыми заболеваниями.
[479] Согласно другому аспекту предусмотрено антитело к VEGF для применения в способе лечения. Согласно другому аспекту предусмотрен конъюгат антитела (например, конъюгат гидрогеля поперечно-сшитой HA) для применения в способе лечения. В определенных случаях настоящее изобретение относится к антителу к VEGF (например, антителу к VEGF) для применения в способе лечения субъекта с нарушением, ассоциированным с патологическим ангиогенезом, предусматривающем введение индивидууму эффективного количества антитела к VEGF. Настоящее изобретение также относится к конъюгату антитела (например, конъюгату гидрогеля поперечно-сшитой HA) для применения в способе лечения субъекта с нарушением, ассоциированным с патологическим ангиогенезом, предусматривающем введение индивидууму эффективного количества конъюгата антитела. В некоторых случаях нарушение, ассоциированное с патологическим ангиогенезом, представляет собой офтальмологическое нарушение. В некоторых случаях офтальмологическое нарушение представляет собой следующее: AMD (например, влажная форма AMD, сухая форма AMD, промежуточная форма AMD, прогрессирующая форма AMD или географическая атрофия (GA)), макулярная дегенерация, макулярный отек, DME (например, очаговый, нецентровый DME или диффузный, DME с вовлечением центра макулы), ретинопатия, диабетическая ретинопатия (DR) (например, пролиферативная DR (PDR), непролиферативная DR (NPDR) или высотная DR), другие связанные с ишемией ретинопатии, ROP, окклюзия вен сетчатки (RVO) (например, центральная (CRVO) и разветвленная (BRVO) формы), CNV (например, миопическая CNV), неоваскуляризация роговицы, заболевание, ассоциированное с неоваскуляризацией роговицы, неоваскуляризация сетчатки, заболевание, ассоциированное с ретинальной/хориоидальной неоваскуляризацией, патологическая миопия, болезнь фон Хиппель-Линдау, гистоплазмоз глаза, FEVR, болезнь Коутса, болезнь Норри, OPPG, субконъюнктивальное кровоизлияние, рубеоз радужки, неоваскулярные заболевания глаз, неоваскулярная глаукома, пигментный ретинит (RP), гипертоническая ретинопатия, ангиоматозная пролиферация сетчатки, макулярная телеангиэктазия, неоваскуляризация радужки, внутриглазная неоваскуляризация, дегенерация сетчатки, кистозный макулярный отек (CMЕ), васкулит, отек диска зрительного нерва, ретинит, конъюнктивит (например, инфекционный конъюнктивит и неинфекционный (например, аллергический) конъюнктивит), врожденный амавроз Лебера, увеит (включая в себя инфекционный и неинфекционный увеит), хориоидит (например, многоочаговый хориоидит), глазной гистоплазмоз, блефарит, сухость глаз, травматическое повреждение глаз или болезнь Шегрена. В некоторых случаях нарушение клеточной пролиферации представляет собой рак. В некоторых случаях рак представляет собой рак молочной железы, рак толстой и прямой кишки, немелкоклеточный рак легких, неходжкинскую лимфому (НХЛ), рак почки, рак предстательной железы, рак печени, рак головы и шеи, меланому, рак яичников, мезотелиому или множественную миелому.
[480] В других случаях настоящее изобретение относится к антителу к VEGF для применения в способе лечения индивидуума с нарушением, ассоциированным с нежелательной проницаемостью сосудов. В других случаях настоящее изобретение относится к конъюгату антитела (например, конъюгату гидрогеля поперечно-сшитой HA) для применения в способе лечения индивидуума с нарушением, ассоциированным с нежелательной проницаемостью сосудов. В некоторых случаях нарушение, ассоциированное с нежелательной проницаемостью сосудов, представляет собой отек, ассоциированный с опухолями головного мозга, асцит, ассоциированный со злокачественными новообразованиями, синдром Мейгса, воспаление легких, нефротический синдром, перикардиальный выпот, плевральный выпот или проницаемость, ассоциированную с сердечно-сосудистыми заболеваниями. Любое из приведенных выше применений может дополнительно предусматривать введение индивидууму эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, например, как описано ниже.
[481] В некоторых случаях настоящее изобретение относится к антителу к VEGF для применения в снижении или ингибировании ангиогенеза у субъекта. Согласно другому аспекту предусмотрен конъюгат антитела (например, конъюгат гидрогеля поперечно-сшитой HA) для применения в снижении или ингибировании ангиогенеза у субъекта. Согласно определенным вариантам осуществления настоящее изобретение относится к антителу к VEGF для применения в способе снижения или ингибирования ангиогенеза у субъекта, предусматривающем введение индивидууму эффективного количества антитела к VEGF для снижения или ингибирования ангиогенеза. Настоящее изобретение также относится к конъюгату антитела (например, конъюгату гидрогеля поперечно-сшитой HA) для применения в способе снижения или ингибирования ангиогенеза у субъекта, предусматривающем введение индивидууму эффективного количества конъюгата антитела. В других случаях настоящее изобретение относится к антителу к VEGF или его конъюгату антитела (например, конъюгату гидрогеля поперечно-сшитой HA) для применения в снижении или ингибировании проницаемости сосудов у субъекта. Согласно определенным вариантам осуществления настоящее изобретение относится к антителу к VEGF или его конъюгату антитела (например, конъюгату гидрогеля поперечно-сшитой HA) для применения в снижении или ингибировании проницаемости сосудов у субъекта, предусматривающего введение индивидууму эффективного количества антитела к VEGF или конъюгата антитела для снижения или ингибирования проницаемости сосудов. “Субъект” в соответствии с любым из перечисленных выше применений может представлять собой человека.
[482] Настоящее изобретение относится к применению антитела к VEGF в производстве или получении лекарственного средства. Настоящее изобретение также относится к применению конъюгата антитела (например, конъюгата гидрогеля поперечно-сшитой HA) в производстве или получении лекарственного средства. Например, в одном случае лекарственное средство предусмотрено для лечения нарушения, ассоциированного с патологическим ангиогенезом. В дополнительном случае лекарственное средство предусмотрено для применения в способе лечения нарушения, ассоциированного с патологическим ангиогенезом, предусматривающем введение субъекту с нарушением, ассоциированным с патологическим ангиогенезом, эффективного количества лекарственного средства. В некоторых случаях нарушение, ассоциированное с патологическим ангиогенезом, представляет собой офтальмологическое нарушение. В некоторых случаях офтальмологическое нарушение представляет собой следующее: AMD (например, влажная форма AMD, сухая форма AMD, промежуточная форма AMD, прогрессирующая форма AMD или географическая атрофия (GA)), макулярная дегенерация, макулярный отек, DME (например, очаговый, нецентровый DME или диффузный, DME с вовлечением центра макулы), ретинопатия, диабетическая ретинопатия (DR) (например, пролиферативная DR (PDR), непролиферативная DR (NPDR), или высотная DR), другие связанные с ишемией ретинопатии, ROP, окклюзия вен сетчатки (RVO) (например, центральная (CRVO) и разветвленная (BRVO) формы), CNV (например, миопическая CNV), неоваскуляризация роговицы, заболевание, ассоциированное с неоваскуляризацией роговицы, неоваскуляризация сетчатки, заболевание, ассоциированное с ретинальной/хориоидальной неоваскуляризацией, патологическая миопия, болезнь фон Хиппель-Линдау, гистоплазмоз глаза, FEVR, болезнь Коутса, болезнь Норри, OPPG, субконъюнктивальное кровоизлияние, рубеоз радужки, неоваскулярные заболевания глаз, неоваскулярная глаукома, пигментный ретинит (RP), гипертоническая ретинопатия, ангиоматозная пролиферация сетчатки, макулярная телеангиэктазия, неоваскуляризация радужки, внутриглазная неоваскуляризация, дегенерация сетчатки, кистозный макулярный отек (CMЕ), васкулит, отек диска зрительного нерва, ретинит, конъюнктивит (например, инфекционный конъюнктивит и неинфекционный (например, аллергический) конъюнктивит), врожденный амавроз Лебера, увеит (включая в себя инфекционный и неинфекционный увеит), хориоидит (например, многоочаговый хориоидит), глазной гистоплазмоз, блефарит, сухость глаз, травматическое повреждение глаз или болезнь Шегрена. В некоторых случаях нарушение клеточной пролиферации представляет собой рак. В некоторых случаях рак представляет собой рак молочной железы, рак толстой и прямой кишки, немелкоклеточный рак легких, неходжкинскую лимфому (НХЛ), рак почки, рак предстательной железы, рак печени, рак головы и шеи, меланому, рак яичников, мезотелиому или множественную миелому. В дополнительном случае лекарственное средство предусмотрено для снижения или ингибирования ангиогенеза у субъекта. В дополнительном случае лекарственное средство предусмотрено для применения в способе снижения или ингибирования ангиогенеза у субъекта, предусматривающем введение субъекту эффективного количества лекарственного средства для снижения или ингибирования ангиогенеза. В любом из представленных выше применений лекарственных средств способ может предусматривать введение индивидууму эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, например, как описано ниже.
[483] В другом случае лекарственное средство предусмотрено для лечения нарушения, ассоциированного с нежелательной проницаемостью сосудов. В некоторых случаях нарушение, ассоциированное с нежелательной проницаемостью сосудов, представляет собой отек, ассоциированный с опухолями головного мозга, асцит, ассоциированный со злокачественными новообразованиями, синдром Мейгса, воспаление легких, нефротический синдром, перикардиальный выпот, плевральный выпот или проницаемость, ассоциированную с сердечно-сосудистыми заболеваниями. В дополнительном случае лекарственное средство предусмотрено для применения в способе лечения нарушения, ассоциированного с нежелательной проницаемостью сосудов, предусматривающем введение субъекту с нарушением, ассоциированным с нежелательной проницаемостью сосудов, эффективного количества лекарственного средства. В другом случае лекарственное средство предусмотрено для снижения или ингибирования проницаемости сосудов у субъекта. В дополнительном случае лекарственное средство предусмотрено для применения в способе снижения или ингибирования проницаемости сосудов у субъекта, предусматривающем введение субъекту эффективного количества лекарственного средства для снижения или ингибирования ангиогенеза. В любом из представленных выше применений лекарственных средств способ может предусматривать введение субъекту эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, например, как описано ниже. “Субъект” в соответствии с любым из представленных выше применений может представлять собой человека.
[484] Настоящее изобретение относится к способу лечения нарушения, ассоциированного с патологическим ангиогенезом. Согласно одному варианту осуществления способ предусматривает введение индивидууму с нарушением, ассоциированным с патологическим ангиогенезом, эффективного количества антитела к VEGF. В другом примере способ предусматривает введение индивидууму с нарушением, ассоциированным с патологическим ангиогенезом, эффективного количества конъюгата антитела (например, конъюгата гидрогеля поперечно-сшитой HA). В некоторых случаях нарушение, ассоциированное с патологическим ангиогенезом, представляет собой офтальмологическое нарушение. В некоторых случаях офтальмологическое нарушение представляет собой следующее: AMD (например, влажная форма AMD, сухая форма AMD, промежуточная форма AMD, прогрессирующая форма AMD или географическая атрофия (GA)), макулярная дегенерация, макулярный отек, DME (например, очаговый, нецентровый DME или диффузный, DME с вовлечением центра макулы), ретинопатия, диабетическая ретинопатия (DR) (например, пролиферативная DR (PDR), непролиферативная DR (NPDR), или высотная DR), другие связанные с ишемией ретинопатии, ROP, окклюзия вен сетчатки (RVO) (например, центральная (CRVO) и разветвленная (BRVO) формы), CNV (например, миопическая CNV), неоваскуляризация роговицы, заболевание, ассоциированное с неоваскуляризацией роговицы, неоваскуляризация сетчатки, заболевание, ассоциированное с ретинальной/хориоидальной неоваскуляризацией, патологическая миопия, болезнь фон Хиппель-Линдау, гистоплазмоз глаза, FEVR, болезнь Коутса, болезнь Норри, OPPG, субконъюнктивальное кровоизлияние, рубеоз радужки, неоваскулярные заболевания глаз, неоваскулярная глаукома, пигментный ретинит (RP), гипертоническая ретинопатия, ангиоматозная пролиферация сетчатки, макулярная телеангиэктазия, неоваскуляризация радужки, внутриглазная неоваскуляризация, дегенерация сетчатки, кистозный макулярный отек (CMЕ), васкулит, отек диска зрительного нерва, ретинит, конъюнктивит (например, инфекционный конъюнктивит и неинфекционный (например, аллергический) конъюнктивит), врожденный амавроз Лебера, увеит (включая в себя инфекционный и неинфекционный увеит), хориоидит (например, многоочаговый хориоидит), глазной гистоплазмоз, блефарит, сухость глаз, травматическое повреждение глаз или болезнь Шегрена. В некоторых случаях нарушение клеточной пролиферации представляет собой рак. В некоторых случаях рак представляет собой рак молочной железы, рак толстой и прямой кишки, немелкоклеточный рак легких, неходжкинскую лимфому (НХЛ), рак почки, рак предстательной железы, рак печени, рак головы и шеи, меланому, рак яичников, мезотелиому или множественную миелому. В дополнительных случаях способ дополнительно предусматривает введение индивидууму эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, как описано ниже. “Субъект” в соответствии с любым из представленных выше способов может представлять собой человека.
[485] Настоящее изобретение относится к способу лечения нарушения, ассоциированного с нежелательной проницаемостью сосудов. Согласно одному варианту осуществления способ предусматривает введение индивидууму с нарушением, ассоциированным с нежелательной проницаемостью сосудов, эффективного количества антитела к VEGF. Согласно другому варианту осуществления способ предусматривает введение индивидууму с нарушением, ассоциированным с нежелательной проницаемостью сосудов, эффективного количества конъюгата антитела (например, конъюгата гидрогеля поперечно-сшитой HA). В некоторых случаях нарушение, ассоциированное с нежелательной проницаемостью сосудов, представляет собой отек, ассоциированный с опухолями головного мозга, асцит, ассоциированный со злокачественными новообразованиями, синдром Мейгса, воспаление легких, нефротический синдром, перикардиальный выпот, плевральный выпот или проницаемость, ассоциированную с сердечно-сосудистыми заболеваниями. В дополнительных случаях способ дополнительно предусматривает введение индивидууму эффективного количества по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства, как описано ниже. “Субъект” в соответствии с любым из представленных выше способов может представлять собой человека.
[486] Подразумевается, что антитело или конъюгат антитела (например, конъюгат гидрогеля поперечно-сшитой HA) согласно настоящему изобретению можно использовать для лечения млекопитающего. Согласно одному варианту осуществления антитело или конъюгат антитела (например, конъюгат гидрогеля поперечно-сшитой HA) вводят млекопитающему, не являющемуся человеком, например, для получения доклинических данных. Иллюстративные являющиеся человеком млекопитающие, подлежащие лечению, включают в себя не относящихся к человеку приматов, собак, кошек, грызунов (например, мышей и крыс) и других млекопитающих, у которых проводятся доклинические исследования. У таких млекопитающих можно создать животные модели заболевания, подлежащего лечению антителом, или их можно использовать для изучения токсичности или фармакокинетики представляющего интерес антитела. Согласно каждому из этих вариантов осуществления исследования с повышением дозы можно выполнять на млекопитающем. Антитело или конъюгат антитела (например, конъюгат гидрогеля поперечно-сшитой HA) можно вводить, например, грызуну-хозяину в модели солидной опухоли. Антитело или конъюгат антитела можно вводить хозяину (например, грызуну, например кролику) для глазных фармакокинетических исследований, например, путем интравитреального введения (например, интравитреальной инъекции).
[487] Согласно дополнительному аспекту настоящее изобретение относится к фармацевтическим составам, содержащим любое из антител (например, антител к VEGF) или конъюгатов антител (например, конъюгатов гидрогеля поперечно-сшитой HA), предусмотренных в настоящем документе, например, для применения в любом из представленных выше терапевтических способов. Согласно одному варианту осуществления фармацевтический состав содержит любое из антител (например, антител к VEGF) или конъюгатов антител (например, конъюгатов гидрогеля поперечно-сшитой HA), предусмотренных в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель. Согласно другому варианту осуществления фармацевтический состав содержит любое из антител (например, антител к VEGF) или конъюгатов антител (например, конъюгатов гидрогеля поперечно-сшитой HA), предусмотренных в настоящем документе, и по меньшей мере одно дополнительный терапевтическое средство, например, как описано ниже. Согласно определенным вариантам осуществления фармацевтический состав содержит одно или несколько дополнительных соединений. Согласно определенным вариантам осуществления дополнительное соединение связывается с второй биологической молекулой, выбранной из группы, состоящей из следующего: IL-1β; IL-6; IL-6R; IL-13; IL-13R; PDGF; ангиопоэтин; Ang2; Tie2; S1P; интегрины αvβ3, αvβ5, и α5β1; бетацеллюлин; апелин/APJ; эритропоэтин; фактор комплемента D; TNFα; HtrA1; рецептор VEGF; рецептор ST-2; и белки, генетически связанные с риском возрастной макулярной дегенерации (AMD), такие как компоненты пути комплемента C2, фактор B, фактор H, CFHR3, C3b, C5, C5a и C3a; HtrA1; ARMS2; TIMP3; HLA; интерлейкин-8 (IL-8); CX3CR1; TLR3; TLR4; CETP; LIPC, COL10A1 и TNFRSF10A. Согласно определенным вариантам осуществления дополнительное соединение представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. Например, в некоторых случаях дополнительное соединение представляет собой биспецифическое антитело (например, биспецифическое антитело к VEGF/к Ang2, такое как RG-7716 или любое биспецифическое антитело к VEGF/к Ang2, раскрытое в международной патентной публикации WO 2010/069532 или WO 2016/073157, или их вариант. Согласно другому примеру, в некоторых случаях дополнительное соединение представляет собой антитело к IL-6, например, EBI-031 (Eleven Biotherapeutics; см., например, WO 2016/073890), силтуксимаб (SYLVANT®), олокизумаб, клазакизумаб, сирукумаб, элсилимомаб, герилимзумаб, OPR-003, MEDI-5117, PF-04236921 или их вариант. Согласно дополнительному примеру, в некоторых случаях дополнительное соединение представляет собой антитело к IL-6R, например, тоцилизумаб (ACTEMRA®) (см., например, WO 1992/019579), сарилумаб, вобарилизумаб (ALX-0061), SA-237 или их вариант.
[488] Антитела (например, антитела к VEGF) или конъюгаты антител (например, конъюгаты гидрогеля поперечно-сшитой HA) можно использовать, либо отдельно, либо в комбинации с другими средствами в терапии. Например, антитело (например, антитело к VEGF) или конъюгат антитела (например, конъюгат гидрогеля поперечно-сшитой HA) можно вводить совместно по меньшей мере с одним дополнительным терапевтическим средством. Согласно определенным вариантам осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой другое антитело, химиотерапевтическое средство, цитотоксическое средство, антиангиогенное средство, иммуносупрессор, пролекарственное средство, цитокин, антагонист цитокина, цитотоксическую лучевую терапию, кортикостероид, противорвотное средство, противораковую вакцину, обезболивающее средство, ингибирующее рост средство или их комбинации.
[489] Например, согласно определенным вариантам осуществления любой из предшествующих способов дополнительно предусматривает введение одного или нескольких дополнительных соединений. Согласно определенным вариантам осуществления антитело (например, антитело к VEGF) или конъюгат антитела (например, конъюгат гидрогеля поперечно-сшитой HA) вводят одновременно с дополнительным(и) соединением(ями). Согласно определенным вариантам осуществления антитело или конъюгат антитела вводят до или после дополнительного(ых) соединения(й). Согласно определенным вариантам осуществления дополнительное соединение связывается со второй биологической молекулой, выбранной из группы, состоящей из следующего: IL-1β; IL-6; IL-6R; IL-13; IL-13R; PDGF; ангиопоэтин; Ang2; Tie2; S1P; интегрины αvβ3, αvβ5 и α5β1; бетацеллюлин; апелин/APJ; эритропоэтин; фактор комплемента D; TNFα; HtrA1; рецептор VEGF; рецептор ST-2; и белки, генетически связанные с риском AMD, такие как компоненты пути комплемента C2, фактор B, фактор H, CFHR3, C3b, C5, C5a и C3a; HtrA1; ARMS2; TIMP3; HLA; интерлейкин-8 (IL-8); CX3CR1; TLR3; TLR4; CETP; LIPC; COL10A1 и TNFRSF10A. Согласно определенным вариантам осуществления дополнительное соединение представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. Согласно определенным вариантам осуществления согласно (или применительно к) любому из вариантов осуществления, представленных выше, офтальмологическое нарушение представляет собой внутриглазное неоваскулярное заболевание, выбранное из группы, состоящей из следующего: пролиферативные ретинопатии, хориоидальная неоваскуляризация (CNV), возрастная макулярная дегенерация (AMD), диабетическая и другие связанные с ишемией ретинопатии, диабетический макулярный отек, патологическая миопия, болезнь фон Хиппель-Линдау, гистоплазмоз глаза, окклюзия вен сетчатки (RVO), включая в себя CRVO и BRVO, неоваскуляризация роговицы, неоваскуляризация сетчатки и ретинопатия недоношенных (ROP). Например, в некоторых случаях дополнительное соединение представляет собой биспецифическое антитело (например, биспецифическое антитело к VEGF/к Ang2, такое как RG-7716 или любое биспецифическое антитело к VEGF/к Ang2, раскрытое в международной патентной публикации WO 2010/069532 или WO 2016/073157, или их вариант. Согласно другому примеру, в некоторых случаях дополнительное соединение представляет собой антитело к IL-6, например, EBI-031 (Eleven Biotherapeutics; см., например, WO 2016/073890), силтуксимаб (SYLVANT®), олокизумаб, клазакизумаб, сирукумаб, элсилимомаб, герилимзумаб, OPR-003, MEDI-5117, PF-04236921, или их вариант. Согласно дополнительному примеру, в некоторых случаях дополнительное соединение представляет собой антитело к IL-6R, например, тоцилизумаб (ACTEMRA®) (см., например, WO 1992/019579), сарилумаб, вобарилизумаб (ALX-0061), SA-237 или их вариант.
[490] В некоторых случаях антитело (например, антитело к VEGF) или конъюгат антитела (например, конъюгат гидрогеля поперечно-сшитой HA) согласно настоящему изобретению можно вводить в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным терапевтическим средством для лечения офтальмологического нарушения, например, офтальмологического нарушения, описанного в настоящем документе (например, AMD (например, влажной AMD), DME, DR или RVO). Иллюстративные дополнительные терапевтические средства для комбинированной терапии для лечения офтальмологических нарушений включают в себя без ограничения следующее: антиангиогенные средства, такие как антагонисты VEGF, включая в себя, например, антитела к VEGF (например, Fab к VEGF LUCENTIS® (ранибизумаб)), слитые белки растворимых рецепторов (например, рекомбинантный слитый белок растворимого рецептора EYLEA® (афлиберцепт, также известный как VEGF Trap Eye; Regeneron/Aventis)), аптамеры (например, пегилированный аптамер к VEGF MACUGEN® (пегаптаниб натрия; NeXstar Pharmaceuticals/OSI Pharmaceuticals)) и ингибиторы тирозинкиназы VEGFR (например, 4-(4-бром-2-фторанилино)-6-метокси-7-(1-метилпиперидин-4-илметокси)хиназолин (ZD6474), 4-(4-фтор-2-метилиндол-5-илокси)-6-метокси-7-(3-пирролидин-1-илпрпокси)хиназолин (AZD2171), ваталаниб (PTK787), семаксаниб (SU5416; SUGEN) и SUTENT® (сунитиниб)); триптофанил-тРНК-синтетаза (TrpRS); скваламин; RETAANE® (анекортав ацетат для депо-суспензии; Alcon, Inc.); пролекарственное средство комбретастатина A4 (CA4P); MIFEPREX® (мифепристон-ru486); субтенон триамцинолон ацетонид; интравитреальный кристаллический триамцинолон ацетонид; ингибиторы матричной металлопротеиназы (например, приномастат (AG3340; Pfizer)); флуоцинолон ацетонид (включая в себя внутриглазной имплантат флуоцинолона; Bausch & Lomb/Control Delivery Systems); линомид; ингибиторы функции интегрина β3; ангиостатин и их комбинации. Эти и другие терапевтические средства, которые можно вводить в комбинации с конъюгатом антитела согласно настоящему изобретению, описаны, например, в заявке на выдачу патента США № US 2014/0017244, которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки.
[491] Дополнительные примеры дополнительных терапевтических средств, которые можно использовать в комбинации с антителом (например, антителом к VEGF) или конъюгатом антитела (например, конъюгатом гидрогеля поперечно-сшитой HA) согласно настоящему изобретению для лечения офтальмологического нарушения (например, AMD, DME, DR или RVO), включают в себя без ограничения следующее: VISUDYNE® (вертепорфин; активируемое светом лекарственное средство, которое, как правило, используют в сочетании с фотодинамической терапией с нетермическим лазером), PKC412, Endovion (NS 3728; NeuroSearch A/S), нейротрофические факторы (например, глиальный нейротрофический фактор (GDNF) и цилиарный нейротрофический фактор (CNTF)), дилтиазем, дорзоламид, PHOTOTROP®, 9-цис-ретиналь, лекарственные средства для глаз (например, фосфолинйодид, эхотиофат или ингибиторы карбоангидразы), веовастат (AE-941; AEterna Laboratories, Inc.), Sirna-027 (AGF-745; Sima Therapeutics, Inc.), нейротрофины (включая в себя, только в качестве примера, NT-4/5, Genentech), Cand5 (Acuity Pharmaceuticals), INS-37217 (Inspire Pharmaceuticals), антагонисты интегрина (включая в себя от Jerini AG и Abbott Laboratories), EG-3306 (Ark Therapeutics Ltd.), BDM-E (BioDiem Ltd.), талидомид (используемый, например, EntreMed, Inc.), кардиотрофин-1 (Genentech), 2-метоксиэстрадиол (Allergan/Oculex), DL-8234 (Toray Industries), NTC-200 (Neurotech), тетратиомолибдат (Университет Мичигана), LYN-002 (Lynkeus Biotech), соединение микроводорослей (Aquasearch/Albany, Mera Pharmaceuticals), D-9120 (Celltech Group plc), ATX-S10 (Hamamatsu Photonics), TGF-бета 2 (Genzyme/Celtrix), ингибиторы тирозинкиназы (например, от Allergan, SUGEN или Pfizer), NX-278-L (NeXstar Pharmaceuticals/Gilead Sciences), Opt-24 (OPTIS France SA), нейропротекторы ганглиозных клеток сетчатки (Cogent Neurosciences), производные N-нитропиразола (Texas A&M University System), KP-102 (Krenitsky Pharmaceuticals), циклоспорин A, терапевтические средства, используемые в фотодинамической терапии (например, VISUDYNE®; PDT, нацеленная на рецепторы, Bristol-Myers Squibb, Co.; порфимер натрия для инъекций с PDT; вертепорфин, QLT Inc.; ростапорфин с PDT, Miravent Medical Technologies; талапорфин натрия с PDT, Nippon Petroleum; и мотексафин лютеция, Pharmacyclics, Inc.), антисмысловые олигонуклеотиды (включая в себя, в качестве примера, продукты, протестированные Novagali Pharma SA и ISIS-13650, Isis Pharmaceuticals) и их комбинации.
[492] Антитело (например, антитело к VEGF) или конъюгат антитела (например, конъюгат гидрогеля поперечно-сшитой HA) согласно настоящему изобретению можно вводить в комбинации с терапией или хирургической процедурой для лечения офтальмологического нарушения (например, AMD, DME, DR или RVO), включая в себя, например, следующее: лазерная фотокоагуляция (например, панретинальная фотокоагуляция (PRP)), лазерная обработка друз, хирургические вмешательства на макулярной зоне, хирургическое перемещение макулярной зоны, имплантация миниатюрных телескопов, ангиография PHI-motion (также известная как микролазерная терапия и лечение питающих сосудов), протонная терапия, микростимуляционная терапия, отслоение сетчатки и операции на стекловидном теле, вдавливание склеры, хирургические вмешательства на субмакулярной зоне, транспупиллярная термотерапия, терапия с помощью фотосистемы I, использование РНК интерференции (PHKi); экстракорпоральный реоферез (также известный как мембранная дифференциальная фильтрация или реотерапия), имплантация микрочипов, терапия стволовыми клетками, генная заместительная терапия, генная терапия рибозимами (включая в себя генную терапию в отношении элементов ответа на гипоксию, Oxford Biomedica; Lentioak, Genetix; генную терапию PDEF, GenVec), трансплантация фоторецепторных/ретинальных клеток (включая в себя трансплантацию эпителиальных клеток сетчатки, Diacrin, Inc.; трансплантат клеток сетчатки, Cell Genesys, Inc.;) и акупунктура и их комбинации.
[493] В некоторых случаях антитело (например, антитело к VEGF) или конъюгат антитела (например, конъюгат гидрогеля поперечно-сшитой HA) согласно настоящему изобретению можно вводить в комбинации с антиангиогенным средством для лечения офтальмологического нарушения (например, AMD, DME, DR или RVO). Любое подходящее антиангиогенное средство можно использовать в комбинации с антителом (например, антителом к VEGF) или конъюгатом антитела согласно настоящему изобретению, включая в себя без ограничения те, которые перечислены в Carmeliet et al. Nature 407:249-257, 2000. Согласно некоторым вариантам осуществления антиангиогенное средство представляет собой следующее: антагонист VEGF, включая в себя без ограничения антитело к VEGF (например, Fab к VEGF LUCENTIS® (ранибизумаб), RTH-258 (ранее ESBA-1008, одноцепочечный фрагмент антитела к VEGF; Novartis) или биспецифическое антитело к VEGF (например, биспецифическое антитело к VEGF/к ангиопоэтину 2, такое как RG-7716; Roche)), рекомбинантный слитый белок растворимого рецептора (например, EYLEA® (афлиберцепт)), вариант VEGF, фрагмент растворимого VEGFR, аптамер, способный блокировать VEGF (например, пегаптаниб) или VEGFR, нейтрализующее антитело к VEGFR, низкомолекулярный ингибитор тирозинкиназ VEGFR, DARPin® против VEGF (например, абиципар пегол), малые интерферирующие РНК, которые ингибируют экспрессию VEGF или VEGFR, ингибитор тирозинкиназы VEGFR (например, 4-(4-бром-2-фторанилино)-6-метокси-7-(1-метилпиперидин-4-илметокси)хиназолин (ZD6474), 4-(4-фтор-2-метилиндол-5-илокси)-6-метокси-7-(3-пирролидин-1-илпропокси)хиназолин (AZD2171), ваталаниб (PTK787), семаксаниб (SU5416; SUGEN) и SUTENT® (сунитиниб)) и их комбинации. В некоторых случаях биспецифическое антитело к VEGF связывается со второй биологической молекулой, включая в себя без ограничения следующее: IL-1β; IL-6; IL-6R; PDGF (например, PDGF-BB); ангиопоэтин; ангиопоэтин 2; Tie2; S1P; интегрины αvβ3, αvβ5 и α5β1; бетацеллюлин; апелин/APJ; эритропоэтин; фактор комплемента D; TNFα; HtrA1; рецептор VEGF (например, VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, mbVEGFR или sVEGFR); рецептор ST-2; и белки, генетически связанные с риском возрастной макулярной дегенерации (AMD), такие как компоненты пути комплемента C2, фактор B, фактор H, CFHR3, C3b, C5, C5a и C3a; HtrA1; ARMS2; TIMP3; HLA; IL-8; CX3CR1; TLR3; TLR4; CETP; LIPC; COL10A1 и TNFRSF10A. Например, в некоторых случаях дополнительное соединение представляет собой биспецифическое антитело (например, биспецифическое антитело к VEGF/к Ang2, такое как RG-7716 или любое биспецифическое антитело к VEGF/к Ang2, раскрытое в международной патентной публикации WO 2010/069532 или WO 2016/073157, или их вариант.
[494] Другие подходящие антиангиогенные средства, которые можно вводить в комбинации с антителом (например, антителом к VEGF) или конъюгатом антитела (например, конъюгатом гидрогеля поперечно-сшитой HA) согласно настоящему изобретению для лечения офтальмологического нарушения (например, AMD, DME, DR или RVO), включают в себя следующее: кортикостероиды, ангиостатические стероиды, анекортав ацетат, ангиостатин, эндостатин, ингибиторы тирозинкиназы, ингибиторы матричной металлопротеиназы (ММР), белок 3, связывающий инсулиноподобный фактор роста (IGFBP3), антагонисты стромального фактора (SDF-1) (например, антитела к SDF-1), фактор, происходящий из пигментного эпителия (PEDF), гамма-секретаза, дельта-подобный лиганд 4, антагонисты интегрина, антагонисты индуцируемого гипоксией фактора (HIF)-1α, антагонисты протеинкиназы CK2, средства, которые ингибируют хоуминг стволовых клеток (например, эндотелиальных клеток-предшественников) в сайт неоваскуляризации (например, антитело к кадгерину сосудистого эндотелия (CD-144) и/или антитело к SDF-1) и их комбинации.
[495] В дополнительном примере, в некоторых случаях антитело (например, антитело к VEGF) или конъюгат антитела (например, конъюгат гидрогеля поперечно-сшитой HA) согласно настоящему изобретению можно вводить в комбинации со средством, которое характеризуется активностью против неоваскуляризации для лечения офтальмологического нарушения (например, AMD, DME, DR или RVO), таким как противовоспалительное лекарственное средство, ингибитор мишени рапамицина в клетках млекопитающих рапамицина (mTOR) (например, рапамицин, AFINITOR® (эверолимус) и TORISEL® (темсиролимус)), циклоспорин, антагонист фактора некроза опухоли (TNF) (например, антитело к TNFα или его антигенсвязывающий фрагмент (например, инфликсимаб, адалимумаб, цертолизумаб пегол и голимумаб) или слитый белок растворимого рецептора (например, этанерцепт), средство против комплемента, нестероидное противовоспалительное средство (NSAID) или их комбинации.
[496] В еще одном дополнительном примере в некоторых случаях антитело (например, антитело к VEGF) или конъюгат антитела (например, конъюгат гидрогеля поперечно-сшитой HA) согласно настоящему изобретению можно вводить в комбинации со средством, которое является нейропротективным и может потенциально уменьшить прогрессирование сухой формы AMD до влажной формы AMD, таким как класс лекарственных средств, называемых “нейростероиды”, которые включают в себя такие лекарственные средства, как дегидроэпиандростерон (DHEA) (торговые марки: PRASTERA™ и FIDELIN®), дегидроэпиандростерон сульфат и прегненолон сульфат.
[497] Любое подходящее терапевтическое средство для AMD можно вводить в виде дополнительного терапевтического средства в комбинации с антителом (например, антителом к VEGF) или конъюгатом антитела (например, конъюгатом гидрогеля поперечно-сшитой HA) согласно настоящему изобретению для лечения офтальмологического нарушения (например, AMD, DME, DR или RVO), включая в себя без ограничения следующее: антагонист VEGF, например, антитело к VEGF (например, LUCENTIS® (ранибизумаб), RTH-258 (ранее ESBA-1008, одноцепочечный фрагмент антитела к VEGF; Novartis), или биспецифическое антитело к VEGF (например, биспецифическое антитело к VEGF/к ангиопоэтину 2, такой как RG-7716; Roche)), слитый белок растворимого рецептора VEGF (например, EYLEA® (афлиберцепт)), DARPin® против VEGF (например, абиципар пегол; Molecular Partners AG/Allergan) или аптамер к VEGF (например, MACUGEN® (пегаптаниб натрия)); антагонист тромбоцитарного фактора роста (PDGF), например, антитело к PDGF, антитело к PDGFR (например, REGN2176-3), пегилированный аптамер к PDGF-BB (например, FOVISTA®; Ophthotech/Novartis), слитый белок растворимого рецептора PDGFR или двойной антагонист PDGF/VEGF (например, низкомолекулярный ингибитор (например, DE-120 (Santen) или X-82 (TyrogeneX)) или биспецифическое антитело к PDGF/антитело к VEGF)); VISUDYNE® (вертепорфин) в комбинации с фотодинамической терапией; антиоксидант; антагонист системы комплемента, например, антагонист фактора комплемента C5 (например, низкомолекулярный ингибитор (например, ARC-1905; Opthotech) или антитело к C5 (например, LFG-316; Novartis), антагонист пропердина (например, антитело к пропердину, например, CLG-561; Alcon) или антагонист фактора комплемента D (например, антитело к фактору комплемента D, например, лампализумаб; Roche)); модификатор цикла превращений родопсина (например, эмиксустат гидрохлорид); скваламин (например, OHR-102; Ohr Pharmaceutical); витаминные и минеральные добавки (например, те, которые описаны в исследовании 1 возрастных глазных заболеваний 1 (AREDS1; цинк и/или антиоксиданты) и исследовании 2 (AREDS2; цинк, антиоксиданты, лютеин, зеаксантин и/или омега-3 жирные кислоты)); клеточная терапия, например, NT-501 (Renexus); PH-05206388 (Pfizer), трансплантация клеток huCNS-SC (StemCells), CNTO-2476 (Janssen), OpRegen (Cell Cure Neurosciences) или трансплантация клеток MA09-hRPE (Ocata Therapeutics); антагонист тканевого фактора (например, hI-con1; Iconic Therapeutics); агонист альфа-адренергических рецепторов (например, бримонидин тартрат); пептидная вакцина (например, S-646240; Shionogi); антагонист бета-амилоида (например, моноклональное антитело к бета-амилоиду, например GSK-933776); антагонист S1P (например, антитело к S1P, например, iSONEP™; Lpath Inc); антагонист ROBO4 (например, антитело к ROBO4, например, DS-7080a; Daiichi Sankyo); лентивирусный вектор, экспрессирующий эндостатин и ангиостатин (например, RetinoStat); и любая их комбинация. В некоторых случаях терапевтические средства в отношении AMD (включая в себя любое из предшествующих терапевтических средств в отношении AMD) можно составить совместно. Например, антитело к PDGFR, REGN2176-3, можно составить совместно с афлиберцептом (EYLEA®). В некоторых случаях такой совместный состав можно вводить в комбинации с антителом согласно настоящему изобретению. В некоторых случаях офтальмологическое нарушение представляет собой AMD (например, влажную форму AMD).
[498] Такие виды комбинированной терапии, отмеченные выше, включают в себя комбинированное введение (при котором два или более терапевтических средств включены в один и тот же состав или отдельные составы) и раздельное введение, и в этом случае введение антитела или конъюгата антитела согласно настоящему изобретению может происходить до, одновременно и/или после введения дополнительного терапевтического средства или средств. Согласно одному варианту осуществления введение антитела или конъюгата антитела и введение дополнительного терапевтического средства происходит в течение приблизительно одного, двух, трех, четырех или пяти месяцев или в течение приблизительно одной, двух или трех недель или в течение приблизительно одного, двух, трех, четырех, пяти или шести дней друг от друга.
Примеры
[499] Следующие сокращения можно использовать в примерах ниже и в другом месте в настоящем документе.
Сокращение | Полное выражение и/или определение |
CIEC | Катионообменная хроматография |
CV | объемы колонки |
BHT | 3,5-ди-трет-бутил-4-гидрокситолуол |
DBU | 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен |
DCC | дициклогексилкарбодиимид |
DCM | дихлорметан |
DIPEA | N,N-диизопропилэтиламин |
DMAP | 4-(диметиламино)-пиридин |
DTT | дитиотреитол |
EDC | 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид |
Fab | антигенсвязывающий фрагмент |
Fmoc-Ado-OH | Fmoc-8-амино-3,6-диоксакаприловая кислота |
HA | гиалуроновая кислота |
HEPES | 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота |
HOBt | гидроксибензотриазол |
HOSu | гидроксисукцинимид |
HPLC | высокоэффективная жидкостная хроматография |
IPC | внутрипроизводственный контроль |
LCMS | жидкостная хроматомасс-спектрометрия |
LPLC | жидкостная хроматография низкого давления |
MES | 2-(N-морфолино)этансульфоновая кислота |
MS | масс-спектрометрия |
MTBE | трет-бутилметиловый эфир |
MTS | метантиосульфонил |
NHS | N-гидроксисукцинимид |
PFP | пентафторфенол |
PTSA | пара-толуолсульфоновая кислота |
PyBOP | бензотриазол-1-ил-окситрипирролидинофосфонийгексафторфосфат |
QC | контроль качества |
Rbz | ранибизумаб |
RP-HPLC | обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография |
RP-LPLC | обращенно-фазовая жидкостная хроматография низкого давления |
SEC | эксклюзионная хроматография |
Su | сукцинимид |
TCEP | трис(2-карбоксиэтил)фосфингидрохлорид |
TFA | трифторуксусная кислота |
TFF | фильтрация в тангенциальном потоке |
TLC | тонкослойная хроматография |
t R | время удерживания |
TransCon | временно конъюгированный |
TriMED | N,N,N’-триметилэтилендиамин |
UPLC | ультраэффективная жидкостная хроматография |
масс.% | процент по массе |
Пример 1A: Синтез саморасщепляющейся защитной группы 4-(((перфторфенокси)карбонилокси)метил)фенил 2-(диметиламино)этил(метил)карбамат a3
Схема 1A
[500] Синтез 4-(((перфторфенокси)карбонилокси)метил)фенил-2-(диметиламино)этил(метил)карбамата a3 проиллюстрирован на схеме 1A
Стадия 1: Получение 4-(гидроксиметил)фенил-2-(диметиламино)этил(метил)карбамата a2
[501] 4-Гидроксибензиловый спирт a1 (1,70 г; 13,69 ммоль; 1,00 экв.) растворяли в THF (20,5 мл) и DIPEA (4,8 мл; 27,39 ммоль; 2,00 экв.) добавляли при перемешивании. 4-Нитрофенилхлорформиат (2,90 г; 14,38 ммоль; 1,05 экв.) в THF (5 мл) добавляли по каплям в течение 25 мин. Реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 20 минут при комнатной температуре. IPC с помощью LCMS подтвердил образование требуемого промежуточного соединения. N,N,N'-триметилэтилендиамин (2,21 мл; 17,12 ммоль; 1,25 экв.) медленно добавляли к раствору и реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 20 мин. IPC с помощью LCMS подтвердил полное превращение карбоната. Реакционную смесь охлаждали на ледяной бане, гасили с помощью TFA (3,17 мл; 41,08 ммоль; 3,00 экв.) и разбавляли водой. Значение pH должно составлять ниже 2, как указано на лакмусовой индикаторной бумаге. Водную фазу отмывали этилацетатом (3×100 мл), после чего pH водной фазы возрастал до приблизительно pH 4,5. Водную фазу лиофилизировали с получением на выходе маслянистого остатка. Остаток испаряли совместно с этилацетатом (3×), растворяли в DCM и высушивали (Na2SO4). После фильтрования растворитель испаряли и маслянистый остаток высушивали в высоком вакууме (2 ч). QC с помощью LCMS выявил чистоту, составляющую 93%. Полученный сырой 4-(гидроксиметил)фенил-2-(диметиламино)этил(метил)карбамат a2 использовали в следующей стадии без очистки.
Стадия 2: Получение 4-(((перфторфенокси)карбонилокси)метил)фенил-2-(диметиламино)этил(метил)карбамата a3
[502] Сырой 4-(гидроксиметил)фенил-2-(диметиламино)этил(метил)карбамат a2 из стадии 1 (11,76 г; макс. 13,69 ммоль; 1,00 экв.; макс. чистота, составляющая 40 масс.%) растворяли в ацетонитриле (24 мл) и раствор охлаждали на ледяной бане. Бис(пентафторфенил)карбонат (10,15 г; 25,75 ммоль; 1,88 экв.), DMAP (315 мг; 2,58 ммоль; 0,19 экв.) и DIPEA (9,0 мл; 51,53 ммоль; 3,76 экв.) добавляли при перемешивании. Оранжевый раствор превращался в зеленый, затем серый. Реакционную смесь перемешивали в течение 15 минут. Образование продукта подтверждали с помощью LCMS. Реакционную смесь охлаждали до -15°C и гасили с помощью смеси воды с 0,1% TFA (12,38 мл) и беспримесного TFA (3,9 мл; 51,48 ммоль; 3,76 экв.). Желтый раствор очищали с помощью RP-LPLC за 4 цикла. Чистые фракции объединяли, замораживали и лиофилизировали с получением на выходе 4-(((перфторфенокси)карбонилокси)метил)фенил-2-(диметиламино)этил(метил)карбамата a3 в виде желтого масла, 4,73 г соли TFA (8,21 ммоль, 60% за 2 стадии).
Пример 1B: Синтез защищенного линкера b5
Схема 1B
[503] Синтез линкера b5 показан на схеме 1B
Стадия 1: Получение амидного соединения b3
[504] Fmoc-N-Me-Asp(tBu)-OH b1 (6,96 г; 16,36 ммоль; 1,00 экв.) растворяли в DMF (139 мл). PyBOP (12,77 г; 24,54 ммоль; 1,50 экв.) и DIPEA (14,25 мл; 81,79 ммоль; 5,00 экв.) добавляли и перемешивали до полного растворения. N-Boc-N-метил-1,3-диаминопропангидрохлорид b2 (4,04 г; 17,99 ммоль; 1,10 экв.) добавляли и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Полное превращение в продукт наблюдали с помощью LCMS. Реакционную смесь разбавляли с помощью 400 мл дихлорметана и отмывали три раза с помощью 400 мл 0,1 н. HCl. Органический слой отмывали трижды с помощью 400 мл насыщенного раствора NaHCO3 и один раз с помощью 200 мл рассола. Органический слой высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Сырой материал растворяли в 14 мл дихлорметана и очищали с помощью нормально-фазовой флэш-хроматографии. Содержащие продукт фракции объединяли и растворитель испаряли. Конечный материал высушивали в высоком вакууме с получением на выходе амидного соединение b3 в виде белой пены. Выход: 8,81 г (14,79 ммоль, 90%).
Стадия 2: Получение амидного соединения b4
[505] Амидное соединение b3 (8,81 г; 14,79 ммоль; 1,00 экв.) растворяли в THF (130 мл). DBU (2,56 мл; 17,15 ммоль; 1,16 экв.) добавляли и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 минут. Хроматограмма LCMS показала полное превращение исходного материала. Кроме того, получали TLC (этилацетат/метанол 9:1, краситель - KMnO4), Rf(Pdt) = 0,48). Растворитель сырой реакционной смеси испаряли. Остаток растворяли в этилацетате до достижения конечного объема, составляющего 20 мл, и раствор очищали с помощью флэш-хроматографии. Содержащие продукт фракции объединяли и растворитель испаряли. Конечный материал высушивали в высоком вакууме в течение ночи с получением на выходе амидного соединения b4 в виде желтоватого масла. Выход: 5,13 г (13,74 ммоль, 87% выхода, 94% чистоты при 215 нм).
Стадия 3: Получение линкерного соединения b5
[506] DIPEA (7,19 мл; 41,21 ммоль; 3,00 экв.) добавляли к раствору карбоновой кислоты c3 из примера 1E (3,42 г; 15,11 ммоль; 1,10 экв.) и PyBOP (7,86 г; 15,11 ммоль; 1,10 экв.) в дихлорметане (35 мл), после чего смесь значительно нагревалась и превращалась из желтоватой в темно-желтую. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 минут, чтобы предварительно активировать кислоту. К раствору активированной кислоты свежеприготовленный раствор амидного соединения b4 (5,13 г; 13,74 ммоль; 1,00 экв.) в дихлорметане (35 мл) добавляли весь сразу, после чего смесь превращалась в светло-коричневую. Раствор для реакции присоединения перемешивали при комнатной температуре в течение 100 мин. IPC с помощью LCMS показал почти полное превращение исходного материала. Реакционную смесь разбавляли с помощью 500 мл этилацетата и отмывали с помощью 0,2 н. HCl (4× 300 мл), рассола (1× 100 мл), насыщ. NaHCO3 (50, 25, 160 мл), 5% лимонной кислоты (1× 100 мл) и рассола (1× 100 мл). Органический слой высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Остаток высушивали в высоком вакууме в течение выходных (13,59 г сырого материала). Остаток растворяли в этилацетате до достижения конечного объема, составляющего приблизительно 22 мл. Сырой материал очищали с помощью флэш-хроматографии. Содержащие продукт фракции (TLC: этилацетат, краситель - KMnO4, Rf(Pdt) = 0,54) объединяли и растворитель испаряли с получением на выходе липкого, коричневого, камедеобразного остатка. Конечный материал высушивали в высоком вакууме в течение ночи с получением на выходе линкерного соединения b5 в виде пены. Выход: 6,61 г (11,36 ммоль, 83% выхода, 96% чистоты).
Пример 1C: Синтез линкера - (S)-4-(3-(((4-((2-(диметиламино)этил)(метил)карбамоилокси)-бензилокси)карбонил)(метил)амино)пропиламино)-3-(N-метил-6-(метилсульфонилтио)гексанамидо)-4-оксомасляной кислоты b7
Схема 1C
[507] Синтез (S)-4-(3-(((4-((2-(диметиламино)этил)(метил)карбамоилокси)бензилокси)карбонил)-(метил)амино)пропиламино)-3-(N-метил-6-(метилсульфонилтио)гексанамидо)-4-оксомасляной кислоты b7 проиллюстрирован на схеме 1C.
Стадия 1: Получение (S)-3-(N-метил-6-(метилсульфонилтио)гексанамидо)-4-(3-(метиламино)пропиламино)-4-оксомасляной кислоты b6
[508] Амидное соединение b5 (3,40 г; 5,84 ммоль; 1,00 экв.) растворяли в дихлорметане (19 мл) и добавляли TFA (19 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 75 минут при комнатной температуре в открытой колбе. IPC с помощью LCMS показал хорошее превращение в продукт. Удаление летучих веществ проводили контролируемым образом (роторный испаритель при 25°C и 12 мбар, затем высокий вакуум при комнатной температуре в течение 60 мин). Полученную сырую (S)-4-(3-(((4-((2-(диметиламино)этил)(метил)карбамоилокси)-бензилокси)карбонил)(метил)амино)пропиламино)-3-(N-метил-6-(метилсульфонилтио)гексанамидо)-4-оксомасляную кислоту b6 немедленно использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 2: Получение (S)-4-(3-(((4-((2-(диметиламино)этил)(метил)карбамоилокси)-бензилокси)карбонил)(метил)амино)пропиламино)-3-(N-метил-6-(метилсульфонилтио)гексанамидо)-4-оксомасляной кислоты b7
[509] Раствор 4-(((перфторфенокси)карбонилокси)метил)фенил 2-(диметиламино)-этил(метил)карбамата a3 из примера 1 (4,38 г; 7,60 ммоль; 1,30 экв.) в ацетонитриле (35,00 мл) охлаждали до 0°C на ледяной бане. Добавляли DIPEA (10,19 мл; 58,44 ммоль; 10,00 экв.) и смесь перемешивали при этой температуре в течение 1 минуты до того, как раствор сырого соединения b6 в ацетонитриле (35,00 мл) добавляли по каплям в течение 10 мин. После полного добавления смесь перемешивали при 0°C в течение дополнительных 5 минут, затем реакционную смесь анализировали помощью LCMS. Наблюдали полное превращение цвиттер-иона b6. Реакцию гасили путем добавления TFA (4,00 мл; 51,92 ммоль; 8,88 экв.) при 0°C. Все летучие вещества удаляли и остаток высушивали при <10 мбар и 40°C в течение 10 минут на роторном испарителе. Сырой остаток растворяли в смеси 6 мл H2O/MeCN/TFA 1:1:0,002 и 12 мл 0,1% TFA. Светло-коричневый раствор очищали с помощью RP-флэш-хроматографии. Раствор хранили на льду до введения пробы. Содержащие продукт фракции объединяли, замораживали и лиофилизировали с получением (S)-4-(3-(((4-((2-(диметиламино) этил)(метил)карбамоилокси)-бензилокси)карбонил)(метил)амино)пропиламино)-3-(N-метил-6-(метилсульфонилтио)гексанамидо)-4-оксомасляной кислоты b7. Выход: 3,25 г в виде соли TFA (68% выхода).
Пример 1D: Синтез NHS-активированного линкера - (S)-2,5-диоксопирролидин-1-ил-4-(3-(((4-((2-(диметиламино)этил)-(метил)карбамоилокси)бензилокси)карбонил)(метил)амино)пропиламино)-3-(N-метил-6-(метилсульфонилтио)гексанамидо)-4-оксобутаноат b8
Схема 1D
[510] Получение (S)-2,5-диоксопирролидин-1-ил-4-(3-(((4-((2-(диметиламино)этил)(метил)-карбамоилокси)бензилокси)карбонил)(метил)амино)пропиламино)-3-(N-метил-6-(метилсульфонилтио)гексанамидо)-4-оксобутаноата b8 показано на схеме 1D
[511] Линкер b7 из примера 1C (2,02 г; 2,47 ммоль; 1,00 экв.) растворяли в дихлорметане (20 мл). Добавляли HOSu (852,72 мг; 7,41 ммоль; 3,00 экв.) и EDC (1,42 г; 7,41 ммоль; 3,00 экв.) и смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота. При растворении добавленных реагентов смесь превращалась в слегка желтую. Через 1 ч IPC с помощью LCMS показал хорошее превращение в продукт. Через 75 мин реакционную смесь разбавляли DCM (75 мл) и отмывали один раз с помощью 75 мл подкисленного рассола (250 мл рассола смешивали с 2,5 мл 1 M HCl и полученный раствор насыщали с помощью дополнительной NaCl). Водный слой (pH приблизительно 6,5) экстрагировали с помощью 50 мл DCM. Комбинированные органические фазы высушивали над Na2SO4 и фильтровали. После добавления TFA (190 мкл; 2,47 ммоль; 1,00 экв.) летучие вещества испаряли. Маслянистый остаток высушивали в высоком вакууме в течение 30 минут с получением на выходе сырого (S)-2,5-диоксопирролидин-1-ил-4-(3-(((4-((2-(диметиламино)этил)(метил)-карбамоилокси)бензилокси)карбонил)(метил)амино)пропиламино)-3-(N-метил-6-(метилсульфонилтио)гексанамидо)-4-оксобутаноата b8 (приблизительно 2,4 г) в виде белой пены. Сырой продукт растворяли в 5 мл безводного ацетонитрила (общий объем ~ 6 мл) и очищали с помощью RP-LPLC. Элюенты для хроматографии охлаждали, затем замораживали и лиофилизировали. Лиофилизированный, сухой материал объединяли с безводным ацетонитрилом (всего приблизительно 20 мл). Растворитель удаляли (роторный испаритель, 40°C) и высушивали в высоком вакууме с получением на выходе 2,05 г (91% выхода) (S)-2,5-диоксопирролидин-1-ил-4-(3-(((4-((2-(диметиламино)этил)(метил)-карбамоилокси)бензилокси)карбонил)(метил)амино)пропиламино)-3-(N-метил-6-(метилсульфонилтио)гексанамидо)-4-оксобутаноата b8 в виде бесцветной пены. Материал растворяли в 22,37 мл безводного DMSO. Прозрачный, бесцветный раствор стерильно фильтровали (стерильные PTFE шприцевые фильтры, Millipore Millex-LG, 25 мм, 0,2 мкм) с получением на выходе приблизительно 23,5 мл прозрачного, бесцветного раствора. Материал хранили в аликвотах в атмосфере аргона при -80°C. С помощью анализа LCMS определяли, что активность NHS составляла 79%.
Пример 1E: Синтез 6-(метилсульфонилтио)гексановой кислоты c3
Схема 1E
[512] Получение 6-(метилсульфонилтио)гексановой кислоты c3 показано на схеме 1E.
[513] 6-бромегксановую кислоту (5,89 г; 30,19 ммоль; 1,00 экв.) и метантиосульфонат натрия (4,05 г; 30,19 ммоль; 1,00 экв.) растворяли в безводном N,N-диметилформамиде (47,10 мл). Реакционную смесь перемешивали при 80°C в течение 3 часов и затем оставляли остывать до комнатной температуры. Анализ LCMS подтвердил образование продукта c3. Реакционную смесь разбавляли с помощью 116 мл воды и отмывали трижды с помощью 233 мл диэтилового эфира. Органическую фазу отмывали рассолом (350 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении до объема, составляющего 40 мл. Полученный раствор осаждали в 2× 1000 мл холодного н-гептана при -18 °C в течение ночи. Супернатант декантировали и осадок растворяли в 80 мл диэтилового эфира (40°C). Полученный раствор осаждали в 2× 1000 мл холодного н-гептана при -18 °C в течение 3 часов. Осадок отфильтровывали и белое твердое вещество высушивали в высоком вакууме в течение ночи с получением 6-(метилсульфонилтио)гексановой кислоты c3. Выход: 5,72 г; 84 %.
Пример 1F. Синтез 1-(2,5-диоксопирролидин-1-ил)-9-(2-(2-(3-(пиридин-2-илдисульфанил)пропанамидо)этокси)этил)-нонандиоата d9
Схема 1F
[514] Получение 1-(2,5-диоксопирролидин-1-ил)-9-(2-(2-(3-(пиридин-2-илдисульфанил)пропанамидо)этокси)этил)-нонандиоата d9 показано на схеме 1F.
Стадия 1: Синтез 9-(бензилокси)-9-оксононановой кислоты d2
[515] Смесь азелаиновой кислоты d1 (103,00 г; 547,23 ммоль; 1,10 экв.), бензилового спирта (51,73 мл; 497,48 ммоль; 1,00 экв.) и моногидрата п-толуолсульфоновой кислоты (1,99 г; 10,45 ммоль; 0,02 экв.) в толуоле (561,82 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 5 ч в аппарате Дина-Старка. Реакционную смесь затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры и хранили в течение 1 ч при этой температуре. Затем твердое вещество отфильтровывали и отмывали с помощью 50 мл толуола. Остаток обрабатывали с помощью приблизительно 800 мл 0,4 M раствора NaOH и pH доводили до pH = 9 с использованием приблизительно 30 мл 4 M NaOH. Водную фазу отделяли, к органической фазе добавляли 100 мл воды и 80 мл 0,4 M NaOH, pH доводили до 9. Комбинированные водные фазы подкисляли с помощью 50 мл 1 M серной кислоты до pH = 5 и экстрагировали дважды с помощью 200 мл MTBE. Комбинированные органические фазы отмывали с помощью 200 мл рассола, высушивали над MgSO4 и растворитель испаряли в вакууме. Сырой продукт (62 г) растворяли в 40 мл гептана и 20 мл THF (общий объем 120 мл) и очищали за два цикла с помощью автоматизированной флэш-хроматографии. Элюент испаряли и остаток получали в виде масла (55,00 г; 39,72 %). Остаток растворяли в 80 мл MTBE и добавляли 2000 мл гептана, нагретого до 30°C. Для кристаллизации раствор хранили при -20°C в течение ночи. Продукт собирали с помощью фильтрования через стеклянный фильтр (размер пор 3 мкм) и отмывали с помощью 500 мл гептана. Белые кристаллы высушивали в течение 4 ч при <1 мбар с получением 9-(бензилокси)-9-оксононановой кислоты d2. Выход:48,02 г; 35%.
Стадия 2: Синтез Boc-защищенного 1-(2-(2-аминоэтокси)этил)-9-бензилнонандиоата d4
[516] DCC (3,32 г; 16,08 ммоль; 1,10 экв.) добавляли к раствору Boc-2-(2-аминоэтокси)этанола d3 (3,00 г; 14,62 ммоль; 1,00 экв.), соединения d2 (4,07 г; 14,62 ммоль; 1,00 экв.) и DMAP (446,41 мг; 3,65 ммоль; 0,25 экв.) в DCM (50,00 мл). Образующуюся суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Белую суспензию фильтровали через фритту 20 мл шприца и осадок на фильтре отмывали с помощью приблизительно 50 мл DCM. Продукт обнаруживали с помощью LCMS. Все летучие вещества удаляли и остаток растворяли в DCM (общий объем 20 мл). Полученную слегка мутную суспензию очищали с помощью флэш-хроматографии. Содержащие продукт фракции объединяли и все летучие вещества испаряли с получением на выходе Boc-защищенного 1-(2-(2-аминоэтокси)этил)-9-бензилнонандиоата d4 в виде бесцветного масла. Выход: 6,11 г; 90 %.
Стадия 3: Синтез Boc-защищенной 9-(2-(2-аминоэтокси)этокси)-9-оксононановой кислоты d5
[517] 10% Pd/C (348,58 мг; 0,33 ммоль; 0,03 экв.) добавляли к раствору Boc-защищенного 1-(2-(2-аминоэтокси)этил)-9-бензилнонандиоата d4 (6,10 г; 13,10 ммоль; 1,00 экв.) в THF (75,00 мл) и воздушный слой в колбе заменяли на азот. Затем колбу помещали в 50°C водяную баню и поток водорода пропускали через черную суспензию с использованием баллона и канюли 20G. Через 5 минут поток водорода останавливали и смесь энергично перемешивали в атмосфере водорода при 50°С до завершения процесса реакции снятия защитной группы. Полученную суспензию фильтровали через целитовую прокладку. Осадок на фильтре отмывали с помощью дополнительного EtOAc (25 мл). Летучие вещества комбинированных фильтратов испаряли и сырой материал растворяли в EtOAc (30 мл). Раствор фильтровали через 0,22 мкм-RC шприцевой фильтр и летучие вещества удаляли с получением на выходе Boc-защищенной 9-(2-(2-аминоэтокси)этокси)-9-оксононановой кислоты d5 в виде слегка желтого масла. Выход: 5,09 г, количественный.
Стадия 4: Синтез 9-(2-(2-аминоэтокси)этокси)-9-оксононановой кислоты d6
[518] TFA (5,00 мл; 64,90 ммоль; 4,79 экв.) добавляли к раствору Boc-защищенной 9-(2-(2-аминоэтокси)этокси)-9-оксононановой кислоты d5 (5,09 г; 13,55 ммоль; 1,00 экв.) в дихлорметане (10,00 мл). Через 40 минут дополнительную аликвоту TFA (5,00 мл; 64,90 ммоль; 4,79 экв.) добавляли к смеси и поток азота пропускали через реакционную смесь. LCMS через 70 мин выявила полное превращение исходного материала. Летучие вещества удаляли и коричневый, маслянистый остаток разбавляли с помощью диэтилового эфира (50 мл), после чего образовывалась двухфазная система. Эмульсию снова освобождали от всех летучих веществ на роторном испарителе и коричневый, маслянистый остаток высушивали в высоком вакууме в течение ночи. Толуол (30 мл) добавляли к остатку и смесь снова освобождали от всех летучих веществ на роторном испарителе (водяная баня при 60°C). Материал высушивали на роторном испарителе при <9 мбар и температурой водяной бани, составляющей 60°C, с получением на выходе 9-(2-(2-аминоэтокси)этокси)-9-оксононановой кислоты d6 в виде коричневого масла. Выход: 6,04 г; 97%.
Стадия 5: Синтез 9-оксо-9-(2-(2-(3-(пиридин-2-илдисульфанил)пропанамидо)этокси)этокси)нонановой кислоты d8
[519] DIPEA (951,90 мкл; 5,46 ммоль; 5,00 экв.) добавляли к раствору 9-(2-(2-аминоэтокси)этокси)-9-оксононановой кислоты d6 (500,00 мг; 1,09 ммоль; 1,00 экв.) и сукцинимидил-3-[[(2-пиридил)тио]тио]пропионата d7 (375,05 мг; 1,20 ммоль; 1,10 экв.) в ацетонитриле (5,00 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 45 мин. Реакцию гасили путем добавления уксусной кислоты (1,00 мл; 17,48 ммоль; 16,02 экв.). Смесь разбавляли с помощью 6,5 мл ацетонитрила и 14,5 мл воды и полученный раствор очищали с помощью препаративной HPLC. Содержащие продукт фракции объединяли, замораживали в жидком азоте и лиофилизировали в течение ночи. Партии продукта объединяли с DCM. Летучие вещества удаляли и маслянистый остаток высушивали в высоком вакууме с получением на выходе 9-оксо-9-(2-(2-(3-(пиридин-2-илдисульфанил)пропанамидо)этокси)-этокси)нонановой кислоты d8 в виде слегка желтого масла; 392,00 мг; 61%.
Стадия 6: Синтез 1-(2,5-диоксопирролидин-1-ил)-9-(2-(2-(3-(пиридин-2-илдисульфанил)-пропанамидо)этокси)этил)-нонандиоата d9
[520] К раствору 9-оксо-9-(2-(2-(3-(пиридин-2-илдисульфанил)пропанамидо)этокси)-этокси)нонановой кислоты d8 (392,00 мг; 0,67 ммоль; 1,00 экв.) в дихлорметане (5,00 мл) последовательно добавляли HOSu (153,81 мг; 1,34 ммоль; 2,00 экв.) и EDC*HCl (256,19 мг; 1,34 ммоль; 2,00 экв.). Суспензию перемешивали при комнатной температуре, после чего твердое содержимое медленно растворяли с течением времени и образовывался светло-желтый прозрачный раствор. Через 80 мин добавляли дополнительный HOSu (50,00 мг; 0,43 ммоль; 0,65 экв.) и EDC*HCl (50,00 мг; 0,26 ммоль; 0,39 экв.). Через 120 мин анализ с помощью LCMS выявил завершение реакции. Летучие вещества удаляли и остаток растворяли в ацетонитриле (5 мл). Добавляли воду (5 мл) и H2O/MeCN/TFA 1:1:0,002 (4 мл). Ацетонитрил добавляли к мутной эмульсии до получения прозрачного раствора. Полученный раствор очищали с помощью препаративной HPLC. Все содержащие продукт фракции хранили на льду до того, как их объединяли, замораживали и лиофилизировали. Партии продукта объединяли с дихлорметаном и все летучие вещества удаляли. Продукт высушивали в высоком вакууме с получением на выходе 1-(2,5-диоксопирролидин-1-ил)9-(2-(2-(3-(пиридин-2-илдисульфанил)пропанамидо)этокси)этил)-нонандиоата d9 в виде бесцветного масла; 455,00 мг; количественный выход.
Пример 1G: Синтез метки очистки N,N'-((10S,22S)-10-(2-(диметиламино)ацетамидо)-16-(4-меркаптоникотиноил)-2-метил-4,11,21-триоксо-2,5,12,16,20-пентаазагексакозан-22,26-диил)бис(2-(диметиламино)ацетамида) e8
Схема 1G
[521] Получение метки очистки N,N'-((10S,22S)-10-(2-(диметиламино)ацетамидо)-16-(4-меркаптоникотиноил)-2-метил-4,11,21-триоксо-2,5,12,16,20-пентаазагексакозан-22,26-диил)бис(2-(диметиламино)ацетамида) e8 показано на схеме 1G.
Стадия 1: Синтез (9H-флуорен-9-ил)метил-бис(3-аминопропил)карбамата e2
[522] Fmoc-OSu (9,77 г; 28,96 ммоль; 1,20 экв.) добавляли к раствору 1,9-бис-Boc-1,5,9-триазанонан e1 (8,00 г; 24,14 ммоль; 1,00 экв.) в THF (80,00 мл). К этой смеси раствор K2CO3 (5,00 г; 36,20 ммоль; 1,50 экв.) в воде (80,00 мл) добавляли по каплям в течение 10 минут при комнатной температуре. Белая эмульсия образовывалась во время добавления. Через 50 мин перемешивания при комнатной температуре реакционную смесь разбавляли этилацетатом (600 мл). Органический слой отмывали с помощью соляной кислоты (0,1 M, 3 × 200 мл), насыщенного раствора NaHCO3 (200 мл) и рассола (100 мл). После высушивания над MgSO4 и фильтрования все летучие вещества удаляли. Сырой остаток высушивали в высоком вакууме в течение 20 минут с получением белой пены. Эту пену растворяли в дихлорметане и очищали с помощью флэш-хроматографии. Содержащие продукт фракции объединяли и концентрировали с получением на выходе промежуточного соединения - 9H-флуорен-9-илметил-N,N-бис[3-(трет-бутоксикарбониламино)пропил]карбамата (не показано на схеме 1G) в виде бесцветного, стеклообразного твердого вещества; 12,81 г; 96%.
[523] Этот промежуточный продукт (12,78 г; 23,08 ммоль; 1,00 экв.) растворяли в TFA (30,00 мл; 389,39 ммоль; 16,87 экв.) при комнатной температуре. После полного растворения желтый раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 35 мин. Продукт осаждали путем добавления по каплям реакционной смеси в диэтиловый эфир (2 мл реакционного раствора в 40 мл диэтилового эфира) в 50 мл пробирках Falcon. Пробирки Falcon центрифугировали при 7000×G и 0°C в течение 3 минут. Эфирный супернатант отбрасывали и остатки растворяли в метаноле (каждая пробирка - 1 мл). Комбинированные метанольные растворы добавляли по каплям к диэтиловому эфиру (200 мл) в 500 мл круглодонной колбе. Все пробирки отмывали метанолом (всего ~150 мл) и отмывочные растворы добавляли к смеси эфир/осадок, после чего образовывался бесцветный, прозрачный раствор. Этот раствор концентрировали и маслянистый остаток высушивали в высоком вакууме в течение ночи с получением (9H-флуорен-9-ил)метил-бис(3-аминопропил)карбамата e2 в виде белой пены: 13,68 г; количественный выход.
Стадия 2: Синтез (9H-флуорен-9-ил)метил-бис(3-((S)-2,6-диаминогексанамидо)пропил)карбамата e3
[524] DIPEA (20,44 мл; 117,20 ммоль; 5,00 экв.) добавляли к раствору соединения e2 (13,63 г; 23,44 ммоль; 1,00 экв.) и Boc-Lys(Boc)-OSu (24,95 г; 56,25 ммоль; 2,40 экв.) в DMF (250,00 мл) и светло-желтую смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 45 мин. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (1200 мл) и органический слой отмывали соляной кислотой (0,1 M, 4 × 500 мл), насыщенным раствором NaHCO3 (3 × 250 мл) и рассолом (200 мл). После высушивания над MgSO4 и фильтрования все летучие вещества удаляли с получением на выходе Boc-защищенного промежуточного соединения (не показано на схеме 1G) в виде белой пены. Сырой остаток растворяли в дихлорметане (30 мл) и очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии. Содержащие продукт фракции объединяли и все летучие вещества удаляли в вакууме. Чистый продукт осаждали из холодных растворов этилацетата. Метанол добавляли для полного растворения продукта. Испарение комбинированных фракций приводило к получению бесцветного масла, которое высушивали в высоком вакууме в течение ночи с получением Boc-защищенного промежуточного соединения: 18,27 г; 77%.
[525] Это промежуточное соединение (18,12 г; 17,94 ммоль; 1,00 экв.) растворяли в TFA (40,00 мл; 519,19 ммоль; 28,95 экв.). Во время растворения выделялось много газа, и смесь нагревалась приблизительно до 45°C и становилась желтой. Прозрачный, вязкий раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь добавляли к диэтиловому эфиру (2 мл реакционного раствора в 40 мл эфира в 50 мл пробирке Falcon). После энергичного встряхивания двухфазная система превращалась в суспензию белого, порошкообразного осадка в кислом диэтиловом эфире. Смесь переносили в пробирки Falcon и все пробирки Falcon центрифугировали при 0°C и 7000×G в течение 3 мин и супернатант отбрасывали. Все осадки отмывали 40 мл диэтилового эфира каждый и центрифугирование повторяли. После того, как снова отбросили супернатанты, все осадки предварительно высушивали на роторном испарителе с образованием сухих порошков. Все аликвоты объединяли и высушивали в высоком вакууме в течение ночи с получением (9H-флуорен-9-ил)метил-бис(3-((S)-2,6-диаминогексанамидо)пропил)карбамата e3: 19,52 г; количественный выход.
Стадия 3: Синтез соединения e5
[526] DIPEA (18,02 мл; 103,29 ммоль; 6,00 экв.) добавляли к суспензии N,N-диметилглицина e4 (8,88 г; 86,08 ммоль; 5,00 экв.) и PyBOP (44,79 г; 86,08 ммоль; 5,00 экв.) в DMF (180,00 мл). Смесь перемешивали в течение 15 минут при комнатной температуре, после чего образовывался прозрачный раствор. Этот раствор добавляли одной порцией к раствору (9H-флуорен-9-ил)метил-бис(3-((S)-2,6-диаминогексанамидо)пропил)карбамата e3 (18,35 г; 17,22 ммоль; 1,00 экв.) и DIPEA (15,01 мл; 86,08 ммоль; 5,00 экв.) в DMF (180,00 мл). Желтую реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 35 мин реакционную смесь гасили путем добавления TFA (22,02 мл; 285,82 ммоль; 16,60 экв.). Раствор концентрировали с получением на выходе желтого масла, которое затем растворяли в метаноле (450 мл) с получением на выходе 600 мл темно-желтого раствора. Этот промежуточный продукт (не показан на схеме 1G) осаждали дважды из диэтилового эфира. После отмывки осадка диэтиловым эфиром продукт - густую суспензию концентрировали и продукт высушивали в вакууме в течение 72 часов: 23,17 г; 96%. Пиперидин (17,50 мл; 0,18 моль; 10,83 экв.) добавляли одной порцией к раствору промежуточного продукта (23,00 г; 0,02 моль; 1,00 экв.) в DMF (69,00 мл) и оранжевый раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 35 мин. Реакционную смесь концентрировали и TFA (200 мл) добавляли к остатку. Густую суспензию фильтровали через фритту PE. Продукт осаждали из диэтилового эфира и после того, как продукт отмывали диэтиловым эфиром, его высушивали в вакууме с получением на выходе соединения e5 в виде грязно-белого порошка: 19,82 г; 93%.
Стадия 4: Синтез N,N'-((10S,22S)-10-(2-(диметиламино)ацетамидо)-2-метил-16-(4-(метилдисульфанил)никотиноил)-4,11,21-триоксо-2,5,12,16,20-пентаазагексакозан-22,26-диил)бис(2-(диметиламино)ацетамида) e7
[527] PyBOP (528,17 мг; 1,01 ммоль; 1,00 экв.) и 4-(метилдисульфанил)никотиновую кислоту e6 (320,00 мг; 1,01 ммоль; 1,00 экв.), полученную путем реакции 4-меркаптоникотиновой кислоты с S-метилметантиолсульфонатом, суспендировали в ацетонитриле (10,00 мл). Добавляли DIPEA (1,59 мл; 9,13 ммоль; 9,00 экв.), после чего образовывался прозрачный, темно-желтый раствор. Через 2 мин при комнатной температуре смесь добавляли к раствору соединения e5 (1 317,49 мг; 1,01 ммоль; 1,00 экв.) в ацетонитриле (10,00 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли TFA (1,59 мл; 20,64 ммоль; 20,33 экв.) и продукт осаждали из диэтилового эфира (140 мл). Осадок отмывали диэтиловым эфиром (100 мл). Осадок растворяли в метаноле (8 мл) и осаждали из диэтилового эфира (140 мл) второй раз. Продукт высушивали в высоком вакууме в течение ночи с получением на выходе N,N'-((10S,22S)-10-(2-(диметиламино)ацетамидо)-2-метил-16-(4-(метилдисульфанил)никотиноил)-4,11,21-триоксо-2,5,12,16,20-пентаазагексакозан-22,26-диил)бис(2-(диметиламино)ацетамида) e7 в виде порошка: 1,231 г; 82%.
Стадия 5: Синтез N,N'-((10S,22S)-10-(2-(диметиламино)ацетамидо)-16-(4-меркаптоникотиноил)-2-метил-4,11,21-триоксо-2,5,12,16,20-пентаазагексакозан-22,26-диил)бис(2-(диметиламино)ацетамида) e8
[528] NaBH4 (220,07 мг; 5,82 ммоль; 7,00 экв.) добавляли четырьмя порциями к раствору N,N'-((10S,22S)-10-(2-(диметиламино)ацетамидо)-2-метил-16-(4-(метилдисульфанил)никотиноил)-4,11,21-триоксо-2,5,12,16,20-пентаазагексакозан-22,26-диил)бис(2-(диметиламино)ацетамида) e7 (1,231 г; 0,83 ммоль; 1,00 экв.) в воде (15,00 мл). После последнего добавления смесь перемешивали в течение 60 минут при комнатной температуре. TFA (1,00 мл; 12,98 ммоль; 15,62 экв.) добавляли к реакционной смеси. Реакционную смесь разбавляли водой до конечного объема, составляющего 25 мл. Раствор очищали с помощью препаративной HPLC. Содержащие продукт фракции объединяли, замораживали и лиофилизировали с получением TFA соли N,N'-((10S,22S)-10-(2-(диметиламино)ацетамидо)-16-(4-меркаптоникотиноил)-2-метил-4,11,21-триоксо-2,5,12,16,20-пентаазагексакозан-22,26-диил)бис(2-(диметиламино)ацетамида) e8; 942,00 мг; 79%.
Пример 2A: Получение функционализированной амином гиалуроновой кислоты (HA)
[529] Аминные функциональные группы вводили на HA. Согласно некоторым аспектам степень функционализации, составляющую вплоть до приблизительно 11%, вводили для последующей функционализированной малеимидом HA и прикрепления лекарственного средства к малеимиду, и вплоть до приблизительно 5% для последующей функционализированной тиолом HA.
.
Схема 2A
[530] Аминная функционализация HA проходит в соответствии со схемой реакции 2A:
[531] 200 мг натриевой соли 116 кДа гиалуроновой кислоты f1 растворяли в 25 мл забуференного раствора (100 мM MES, 0,4 M 1,3-диаминопропана, pH 5,5) при интенсивном перемешивании. Добавляли 3,00 экв. (229,14 мг; 1,50 ммоль) HOBt по отношению к функциональным группам карбоновой кислоты на HA. Добавляли 0,93 экв. (88,92 мг; 0,46 ммоль) EDC⋅HCl, после чего суспензия медленно превращалась в раствор. Раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение ночи и впоследствии образовывалась суспензия. К суспензии добавляли 50,00 экв. (3,39 г; 24,94 ммоль) ацетата натрия с образованием раствора. Модифицированную HA f2 осаждали путем добавления абсолютного этанола, отмывали этанолом и высушивали в высоком вакууме в течение ночи. Осадки растворяли в 16 мл воды с образованием прозрачного раствора. Добавляли 5,40 мл 4 M NaOH и раствор перемешивали при температуре окружающей среды в течение двух часов. Добавляли 1,24 мл уксусной кислоты. Амин-функционализированную HA f3 осаждали путем добавления абсолютного этанола, отмывали с помощью 80 объем./объем.% этанола и абсолютного этанола и высушивали в высоком вакууме с получением белых осадков. 0,93 экв. EDC давали в результате аминную функционализацию, составляющую приблизительно 11% карбоксилатных групп на HA. Для получения амин-функционализированной HA с приблизительно 5% аминной функционализацией использовали 0,40 экв. (38,63 мг; 0,20 ммоль) EDC⋅HCl.
[532] Пример 2B: Получение функционализированной малеимидом HA
[533] Функционализированную малеимидом HA получали путем реакции амин-функционализированной HA f3 со сложным эфиром малеимидопропионовой кислоты NHS f4 в соответствии со следующей схемой реакции:
Схема 2B
[534] 176,1 мг амин-функционализированной HA f3 (0,252 ммоль/г амина) растворяли в 17,6 мл 100 мM буфера HEPES, pH 7,4. Добавляли 150,48 мг (0,57 ммоль; 10,00 экв.) N-гидроксисукцинимидного сложного эфира 3-малеимидопропионовой кислоты f4 в 9,50 мл ацетонитриле. Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение точно 60 минут. 27,1 мл 1 M раствора ацетата натрия, pH 5,5, добавляли к раствору при перемешивании. Абсолютный этанол добавляли для осаждения HA. Полученные осадки последовательно отмывали с помощью 80 объем./объем.% этанола и абсолютного этанола. Осадки объединяли и материал высушивали в высоком вакууме в течение трех часов с последующим хранением при -20 °C. Полученные осадки растворяли в 17,6 мл 1% уксусной кислоты. 17,6 мл 1 M раствора ацетата натрия, pH 5,5, добавляли к раствору. Полученную смесь фильтровали через 0,22 мкм PES шприцевой фильтр диаметром 33 мм и малеимид-функционализированную HA f5 осаждали путем добавления абсолютного EtOH. Осадки последовательно отмывали с помощью 80% объем./объем. этанола и абсолютного этанола. Осадки объединяли и высушивали в высоком вакууме в течение 3 часов с получением 159,50 мг белых осадков. Определение содержания малеимида выполняли с помощью обратного анализа Эллмана путем добавления 2-меркаптоэтанола и обнаружения непрореагировавшего, остаточного 2-меркаптоэтанола. Обнаруживали степень малеимидной функционализации, составляющую приблизительно 10%, по отношению к изначально доступным карбоксилатным группам в нативной HA.
Пример 2C: Получение функционализированной тиолом HA
[535] Функционализированную тиолом HA разрабатывали для обеспечения разложения геля HA после инкубации геля поперечно-сшитой HA при физиологических условиях. В этом примере вводили сложноэфирную связь с использованием азелаиновой кислоты.
Схема 2C
[536] 166,90 мг амин-функционализированной HA f3 (0,104 ммоль/г функциональной аминогруппы) растворяли в 13,9 мл 100 мM буфера HEPES, pH 8,40. Свежеприготовленный раствор 75,3 мг (0,11 ммоль; 5,00 экв.) сложного эфира NHS d9 (см. схему 1F) в 7,5 мл ацетонитрила добавляли к смеси. Смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 120 минут для получения дисульфид-функционализированной HA (не показано). Свежеприготовленный раствор 63,2 мг HCl-соли трис(2-карбоксиэтил)фосфина (TCEP) (0,22 ммоль; 10,00 экв.) в 2,1 мл воды добавляли к реакционной смеси. Раствор перемешивали в течение одного часа при температуре окружающей среды. 22,9 мл 1 M раствора ацетата натрия, pH 5,5, добавляли к реакционной смеси. Полученный раствор распределяли между пробирками Falcon. Для осаждения содержания HA добавляли абсолютный этанол. Пробирки закрывали, встряхивали и центрифугировали. Полученные осадки последовательно промывали с помощью 80 объем./объем.% этанола и абсолютного этанола. Осадки объединяли и высушивали в высоком вакууме в течение трех часов и затем хранили при -20 °C в атмосфере аргона до дальнейшего использования. Осадки растворяли в 16,7 мл 1% уксусной кислоты с энергичным перемешиванием в атмосфере аргона. 16,7 мл 1 M раствор ацетата натрия pH 5,5 добавляли к раствору. Полученную смесь фильтровали через 0,22 мкм PES шприцевой фильтр диаметром 33 мм в пробирки Falcon и осаждали путем добавления абсолютного этанола. Пробирки закрывали, встряхивали и центрифугировали. Осадки последовательно отмывали с помощью 80% объем./объем. этанола и абсолютного этанола. Осадки объединяли и высушивали в высоком вакууме в течение трех часов с получением 150,10 мг тиол-функционализированной HA f6 в виде белых осадков. Определение содержания тиола проводили с помощью анализа Эллмана. Обнаруживали степень тиоловой функционализации, составляющую приблизительно 4%, по отношению к изначально доступным карбоксилатным группам в нативной HA.
Пример 3A: Получение конъюгата линкер-ранибизумаб
Схема 3A
[537] Конъюгирование Rbz с линкером b8 из примера 1D выполняли в соответствии со схемой 3A
[538] Замену буфера и концентрирование можно проводить либо с помощью колонки HiPrep с последующим концентрированием посредством центрифужных фильтров (малый масштаб), либо с использованием системы фильтрования тангенциальным потоком (TFF) (большой масштаб).
[539] 62 мл Rbz в концентрации 40 мг/мл, составленные в 10 мM гистидина, 10 масс.% α,α-D-трегалозы, 0,01% Tween 20, pH 5,5 использовали в этом примере. После замены буфера на 30 мM фосфата, pH 7,4, и концентрирования раствор Rbz фильтровали с использованием 33 мм фильтров Millex GV с размером пор, составляющим 0,22 мкм. Выделяли приблизительно 50 г раствора белка. После определения концентрации образец разбавляли до 40 мг/мл путем добавления фосфатного буфера с получением конечного объема, составляющего 53,1493 г. 2118,5 мг (85%) Rbz извлекали с концентрацией 39,8 мг/мл, и общий объем составлял приблизительно 53 мл объема.
[540] 1990 мг Rbz (50 мл при 39,8 мг/мл) в 30 мM фосфата натрия, pH 7,4, охлаждали на льду. Добавляли 15 экв. (8,0 мл) соединения b8 (пример 1D) (с поправкой на содержание NHS, 100 мM маточного раствора в DMSO) и раствор осторожно встряхивали (без использования мешалки).
[541] Раствор инкубировали в течение 5 минут на льду, сразу после чего следовал сдвиг рН, и производили замену буфера для удаления избыточных молекул линкера из раствора конъюгата Rbz-линкер. Сдвиг буфера выполняли путем добавления 0,12 об. экв. (6 мл) 0,5 М янтарной кислоты, рН 3,0, и раствор осторожно встряхивали. рН раствора смещали в сторону приблизительно рН 4,0. Замену буфера проводили с использованием Äkta P-900, оборудованного колонкой GE HiPrep. Буфер представлял собой 5 мМ янтарную кислоту с pH 4,0, вводимую при скорости потока 8,0 мл/мин, с 13 циклами с объемом вводимой пробы 5 мл на цикл. Собрали 134 мл раствора продукта с концентрацией 14,5 мг/мл (расчет на основе коэффициента экстинкции нативного лекарственного средства).
[542] Образцы до и после конъюгирования анализировали с помощью масс-спектрометрии. Спектр деконволюции MS перед конъюгированием показал единственный пик Rbz при 48381. Спектр после конъюгирования показал пик Rbz при 48382, пик моноконъюгата g1 при 49066, бисконъюгата при 497543 и триконъюгата при 50437. Только основной продукт - моноконъюгат g1 показан на схеме 3А для ясности, и моноконъюгат выделяли из конъюгатов более высоких порядков, как описано ниже.
Пример 3B: Введение метки очистки в конъюгат Rbz-линкер
.
Схема 3B
[543] Введение метки очистки e8 в конъюгат Rbz-линкер g1 выполняли в соответствии со схемой 3B
[544] К раствору 125 мл смеси конъюгата линкера, включая в себя моноконъюгат g1 (и конъюгаты более высокого порядка не показаны) (14,53 мг/мл, 1824 мг белка, 37,7 мкмоль), 2,5 молярных эквивалента метки очистки e8 (схема 1G) в отношении к содержанию белка добавляли при температуре окружающей среды (1886 мкл 50 мМ е8, 94,3 мкмоль, в воде) и раствор осторожно встряхивали с получением моноконъюгата Rbz-линкер с меткой очистки g2 и конъюгатов более высокого порядка (не показаны). Через 35 мин сдвиг рН до рН 7,4 и снятие защиты с амина осуществляли добавлением 0,170 об. экв. (21,4 мл) 0,5 М фосфата, 200 мМ TriMED, pH 7,8 (объем раствора прикрепления метки не принимали во внимание), в течение которого защитная группа отщеплялась с получением моноконъюгата Rbz-линкер с меткой g3 и конъюгатов более высокого порядка (не показаны). Раствор хранили при контролируемой температуре 25°С в течение ночи в термостате.
[545] Приблизительно 148 мл раствора белка удаляли из термостата при 25°С и 0,419 об. экв. (52,4 мл, исходя из начального объема белка 125 мл, фактически добавляли 52,7 мл) 0,5 М янтарной кислоты, pH 3,0, добавляли к раствору g3 и конъюгатов более высокого порядка для получения значения pH, составляющего приблизительно рН 4,0.
Пример 3C: Выделение моноконъюгата Rbz-линкер
[546] Для очистки CIEC раствор белка, содержащий смесь неконъюгированного Rbz и смесь моноконъюгата Rbz-линкер с прикрепленной меткой g3 и конъюгаты более высокого порядка, разбавляли в 3,3 раз с помощью 20 мM янтарной кислоты, pH 4,0, до конечного объема, составляющего приблизительно 660 мл. Колонку GE Healthcare Source 15S (колонка XK26, высота - 5,2 см) использовали со следующими буферами: 20 мM янтарная кислота, pH 4,0 (буфер A); и 20 мM янтарная кислота, 1 M NaCl, pH 4,0 (буфер B). Градиент являлся линейным, 10%-50% B, 32 CV (20 мл/мин - объемная скорость потока). Загрузка составляла приблизительно 300 мг. Смесь конъюгатов анализировали с помощью MS до CIEC и в спектре деконволюции MS указаны: пик m/z 48380 (нативный Rbz), пик 49573 (моноконъюгат g3), пик 50766 (бисконъюгат) и пик 51958 (триконъюгат). Фракция 1 CIEC преимущественно содержала нативный Rbz (пик m/z 48380), фракция 2 CIEC преимущественно содержала моноконъюгат g3 (пик m/z 49573) и фракция 3 CIEC преимущественно содержала бисконъюгат (пик m/z 50766).
[547] После выделения моноконъюгата Rbz-линкер g3 раствор белка концентрировали до приблизительно 5 мг/мл с использованием фильтрования в тангенциальном потоке. Исходный материал содержал приблизительно 450 мл моноконъюгата Rbz-линкер g3 в концентрации приблизительно 0,85 мг мл, составленного в сукцинатном буфере, рН 4,0. Образец фильтровали с использованием одного фильтра Millex GV диаметром 33 мм с размером пор 0,22 мкм. Получали 68 мл раствора моноконъюгата Rbz-линкер в концентрации 4,82 мг/мл.
Пример 3D: Расщепление метки очистки
Схема 3D
[548] Метку очистки e8 удаляли с помощью процедуры, показанной на схеме 3C.
[549] Расщепление метки очистки e8 (снятие метки) осуществляли путем инкубации моноконъюгата Rbz- линкер g3 (68 мл, 4,82 мг/мл) с DTT в течение ночи при 2-8°C с концентрацией DTT, составляющей 1 мM. 25 мM маточного раствора DTT в 20 мM янтарной кислоты, pH 4,0, получали путем растворения 0,0161 г DTT в 4,175 мл сукцинатного буфера. Раствор фильтровали через 13 мм фильтр Millex-GV (размер пор - 0,22 мкм). Раствор моноконъюгата Rbz-линкер и 25 мM маточного раствора DTT охлаждали до 4°C на льду. 2,838 мл 25 мM раствора DTT добавляли к раствору белка с получением конечной концентрации DTT, составляющей 1 мM. Инкубацию проводили в течение ночи при 2-8°C. Удаление метки очистки подвергали мониторингу с помощью MS. Конъюгат Rbz-спейсер-линкер-метка очистки до расщепления характеризовался пиком при 49573, что указывало на моноконъюгат метки очистки g3. Конъюгат Rbz-линкер g4 после расщепления характеризовался пиком при 48709, что указывало на моноконъюгат Rbz-линкер после расщепления метки очистки.
[550] Конъюгат Rbz-линкер g4 очищали с помощью CIEC. 70,9 мл моноконъюгата Rbz-линкер после опосредованного DTT снятия защитной группы разбавляли в 12 раз с помощью 10 мM гистидина, pH 5,5, до конечного объема, составляющего приблизительно 850 мл. Колонка представляла собой колонку GE Healthcare Source 15S XK26 (высотой 5,2 см). Буферная система являлась следующей: 10 мM гистидин, pH 5,5 (буфер A); и 10 мM гистидин, 500 мM NaCl, pH 5,5 (буфер B). Градиент являлся следующим: линейный, 0%-50% B, 25 CV (17,5 мл/мин - объемная скорость потока). Загрузка составляла приблизительно 300 мг.
[551] После стадии CIEC осмолярность раствора белка доводили с помощью дополнительного разбавления с использованием буфера B (10 мM гистидина, 500 мM NaCl, pH 5,5) с получением концентрации NaCl, составляющей приблизительно 150 мM. 63 мл моноконъюгата Rbz-линкер собирали во время цикла CIEC. 15,6 мл 10 мM гистидина, 500 мM NaCl, pH 5,5 добавляли к образцу с получением общего объема, составляющего 78,6 мл моноконъюгата Rbz-спейсер-линкер g4.
Пример 3E: Концентрация конъюгата Rbz-линкер
[552] Для получения конъюгата HA-линкер-Rbz h1 с белковой загрузкой, составляющей 40 мг/мл, моноконъюгат Rbz-линкер g4 концентрировали до выше 60 мг/мл. Две мембраны Amicon Ultra 15 PLCG Ultracel с MWCO (номинальное отсечение по молекулярной массе) 10 кДа использовали для концентрирования раствора белка с помощью центрифугирования при 3000 g. Получали приблизительно 4,5 г раствора моноконъюгата Rbz-линкер g4 с содержанием белка, составляющим 64,6 мг/мл (293,8 мг). Моноконъюгат Rbz- линкер g4 анализировали с помощью MS и обнаружили пик при 48710, указывающий на моноконъюгат Rbz-линкер.
Пример 4A: Конъюгирование конъюгата линкер-Rbz с функционализированной малеимидом HA
Схема 4A
[553] Конъюгирование моноконъюгата Rbz-линкер g4 с функционализированной малеимидом HA f5 проводили, как показано на схеме 4A
[554] Конъюгирование моноконъюгата Rbz-линкер g4 с функционализированной малеимидом HA f5 проводили путем добавления концентрированного раствора моноконъюгата Rbz-линкер g4 до 1,3 экв. малеимид-функционализированной HA f5 по отношению к содержанию тиола, что давало в результате концентрацию белка (Rbz), составляющую 44 мг/мл (на основании содержания тиола) и содержание HA, составляющее приблизительно 0,49%. Образцы моноконъюгата Rbz-линкер (раствор белка, составляющий 64,6 мг/мл, составленный в 10 мM гистидина, 150 мM NaCl, pH 5,5), полученные в соответствии с примером 3C, нагревали до окружающей температуры. Образцы фильтровали через 33 мм фильтр GV Millex с размером пор, составляющим 0,22 мкм. Определяли, что содержание тиола раствора моноконъюгата Rbz-линкер g4 составляло 69,0 мг/мл. 1300 мкл раствора моноконъюгата Rbz-линкер g4 переносили в 5 мл пробирки Эппендорф. Добавляли буфер, содержащий 336 мкл 10 мM гистидина, 150 мM NaCl, 0,01% Tween 20 pH 5,5. Добавляли 68 мкл 10 мM гистидина, 150 мM NaCl, 0,2% Tween 20 pH 5,5. Добавляли 335 мкл раствора HA-малеимид f5 (содержание 116 кДа HA - 30 мг/мл, а содержание малеимида - 0,24 ммоль/г). Полученный раствор тщательно перемешивали и инкубировали в течение 4 часов при температуре окружающей среды. Через 4 часов времени реакции образец, составляющий 25 мкл, отбирали и анализировали посредством SEC. 92% моноконъюгата Rbz-линкер были уже связанными с малеимид-функционализированной HA.
Пример 4B: Тиол-малеимидное поперечное сшивание с образованием гелей поперечно-сшитой НА, содержащих конъюгат линкер-лекарственное средство
[555] Поперечное сшивание выполняли в соответствии со схемой 4B:
Схема 4B
[556] После 2014 мкл конъюгата линкер-Rbz HA h1 инкубировали в течение 4 часов. Добавляли 201 мкл раствора HA-тиола f6 (содержание 27,8 мг/мл 116 кДа HA с содержанием тиола, составляющим 0,098 ммоль/г), что приводило к конечному содержанию белка, составляющему 40 мг/мл (в расчете на содержание тиола), и конечному содержанию НА в полученном растворе, составляющему 7,01 мг/мл. Раствор тщательно перемешивали и набирали в шприц на 2 мл, снабженный тупой канюлей 18 G. Раствор быстро наполняли в восемь 1-мл шприцев с наконечником Люэра с использованием наконечника шприца для заполнения. На шприцах устанавливали завинчивающуюся крышку, и их инкубировали в течение примерно 24 часов в вертикальном положении при температуре окружающей среды. Впоследствии шприцы инкубировали при 5°С в течение трех недель. Реакция поперечного сшивания завершалась в шприцах с получением на выходе конъюгата Rbz на основе геля поперечно-сшитой HA h2.
Пример 4C. Высвобождение Rbz из геля поперечно-сшитой HA, содержащего Rbz
[557] Высвобождение Rbz из геля поперечно-сшитой HA, содержащего Rbz, анализировали in vitro с использованием материала, который получали в соответствии с пример 4B c небольшими поправками. 13-17 мг геля Rbz-HA h2 переносили в стерильную, апирогенную пробирку Эппендорф. Буфер для высвобождения (60 мМ фосфата натрия, 3 мМ EDTA, 0,01% Tween, рН 7,4) добавляли в соответствии с соотношением 975 мкл буфера для 25 мг НА. Пробирки не переворачивали или встряхивали. Все пробирки хранили при контролируемой температуре 37°С в термостате. В разные моменты времени из термостата вынимали пробирку и центрифугировали (9300 об/мин, 3 мин). Супернатант переносили в новую пробирку Эппендорф, и концентрацию белка в супернатанте определяли путем измерения оптической плотности при 280 нм с контрольной длиной волны 338 нм с использованием коэффициента экстинкции Rbz, составляющего 1,9 мл/см⋅мг. Для каждого образца высвобождение в % рассчитывали с использованием перенесенной массы и содержания белка в геле (таблица 4с).
Таблица 4C. Высвобождение ранибизумаба
Время/дни | Высвобождение, % (проведенное в двух параллелях) |
7 | 27,0; 27,0 |
21 | 41,0; 42,5 |
41 | 54,3; 57,7 |
63 | 68,7; 70,9 |
Пример 5A: Получение конъюгата линкер-G6.31 AARR
Схема 5A
[558] Конъюгирование G6.31 AARR с линкером b8 из примера 1D выполняли в соответствии со схемой 5A.
[559] Замену буфера и концентрирование можно проводить либо с помощью колонки HiPrep, с последующим концентрированием с помощью центрифужных фильтров (малый масштаб), либо с использованием системы фильтрования тангенциальным потоком (TFF) (большой масштаб).
[560] 31 мл G6.31 AARR (показанный как "G6.31" на схеме 5A и схемах реакции ниже) в концентрации 40 мг/мл, составленной в 20 мM гистидина, 240 мM сахарозы, 0,01% Tween 20, pH 5,5 использовали в этом примере. После замены буфера на 30 мM фосфат, pH 7,4, и концентрирования приблизительно 23 г раствора белка извлекали и определяли концентрацию. Образец разбавляли до 40 мг/мл путем добавления фосфатного буфера. Получали общий объем 32,0 г раствора белка, содержащего 1277 мг G6.31 в концентрации, составляющей 39,9 мг/мл.
[561] 1277 мг G6.31 AARR (32,0 мл в концентрации 39,9 мг/мл) в 30 мM фосфата натрия, pH 7,4 охлаждали на льду. Добавляли 15 экв. (4,6 мл) соединения b8 (пример 1D) (с поправкой на содержание NHS, 100 мМ маточного раствора в DMSO) и раствор несколько раз переворачивали.
[562] Раствор немедленно инкубировали на льду. Через 5 мин реакцию конъюгирования останавливали, сдвигая pH до приблизительно 4,0. После этого добавляли 0,12 об. экв. (3,8 мл) 0,5 М янтарной кислоты, рН 3,0, и раствор переворачивали несколько раз. Замену буфера на 5 мМ янтарную кислоту, pH 4,0, проводили за 10 циклов при скорости потока 8 мл/мин с использованием Äkta Basic 10, оборудованного колонкой GE HiPrep. 4 мл раствора вводили за один цикл. Всего собрали 93,1 г раствора продукта с концентрацией 12,9 мг/мл.
[563] Образцы до и после конъюгирования анализировали с помощью масс-спектрометрии. Спектр деконволюции MS перед конъюгированием показал единственный пик G6.31 при 47390. Спектр после конъюгирования показал пик AARR G6.31 при 47392, пик моноконъюгата j1 при 48077, бисконъюгата при 48766, триконъюгата при 49452 и тетраконъюгата при 50147. Для ясности на схеме 3А показан только основной продукт - моноконъюгат j1, и моноконъюгат выделяли из конъюгатов более высокого порядка, как описано ниже.
Пример 5B: Введение метки очистки в конъюгат G6.31 AARR-линкер
.
Схема 5B
[564] Введение метки очистки e8 в конъюгат G6.31 AARR-линкер j1 выполняли в соответствии со схемой 5B.
[565] К раствору 93,1 мл смеси конъюгата линкера, включая в себя моноконъюгат j1 (нативный G6.31 AARR и конъюгаты более высокого порядка, не показано) (12,9 мг/мл, 1203 мг белка, 25,4 мкмоль (коэффициент экстинкции и молекулярная масса AARR G6.31 использовали для простоты)), 2,5 молярные эквиваленты метки очистки e8 (схема 1G) по содержанию белка добавляли при температуре окружающей среды (1270 мкл 50 мМ e8 в 20 мМ янтарной кислоты, рН 4,0, 63,5 мкмоль) и раствор осторожно встряхивали для получения моноконъюгат линкера с прикрепленной меткой G6.31 j2 и конъюгатов более высокого порядка (не показаны). Через 50 мин сдвиг рН до рН 7,4 и снятие защитной группы с амина осуществляли путем добавления 0,170 об. экв. (15,8 мл) 0,5 М фосфата, 200 мМ TriMED, рН 7,8 (объем добавленного раствора метки очистки не учитывали). Поскольку после сдвига pH в смеси все еще обнаруживается бисконъюгат с одной меткой, дополнительные 0,2 экв. (100 мкл 50 мМ е8 в 20 мМ янтарной кислоте, рН 4,0, 5 мкмоль) метки очистки е8 (схема 1G) в отношении содержания белка добавляли к смеси. Раствор хранили в термостате при контролируемой температуре 25°С в течение ночи, в течение которой защитная группа линкера моноконъюгата линкера с меткой j2 (и конъюгатов более высокого порядка) отщеплялась с образованием j3.
[566] Приблизительно 110 мл раствора белка удаляли из 25°C термостата и 0,419 об. экв. (39,0 мл в расчете на начальный объем белка 93,1 мл) 0,5 M янтарной кислоты, pH 3,0 добавляли к раствору j3 и конъюгатам более высокого порядка для получения значения pH, составляющего приблизительно pH 4,0.
Пример 5C: Выделение моноконъюгата G6.31 AARR-линкер
[567] Для очистки CIEC (катионообменной хроматографией) раствор белка, содержащий смесь неконъюгированного G6.31 и смесь моноконъюгата G6.31 AARR-линкер с меткой j3 и высших конъюгатов, разбавляли в 3,3 раза 20 мМ янтарной кислотой рН 4,0 до конечного объема, составляющего приблизительно 500 мл. Колонку GE Healthcare Source 15S (колонка HiScale26, высота 9,8 см) использовали со следующими буферами: 20 мМ янтарная кислота, рН 4,0 (буфер А); и 20 мМ янтарная кислота, 1 М NaCl, pH 4,0 (буфер B). Градиент был линейным: 0-50% B в 40 CV или 10-50% B в 32 CV при скорости потока 20 мл/мин. Загрузка составляла приблизительно 600 мг за цикл. Смесь конъюгата анализировали с помощью MS до CIEC и в спектре деконволюции MS, пик при 47395 (нативный G6.31 AARR), пик при 48584 (моноконъюгат j3), пик при 49782 (бисконъюгат), пик при 50986 (триконъюгат) и пик при 52174 (тетраконъюгат). Собирали все пики CIEC. Фракции, содержащие преимущественно моноконъюгат j3, объединяли (534,2 мл; 0,67 мг/мл) и использовали на следующей стадии.
Пример 5D: Расщепление метки очистки
Схема 5D
[568] Метку очистки e8 удаляли с помощью процедуры, показанной на схеме 5D.
[569] Расщепление метки очистки e8 (удаление метки) проводили путем инкубации выделенного моноконъюгата G6.31AARR-линкер с меткой j3 (534,2 мл, 0,67 мг/мл) в присутствии DTT. 25 мМ маточного раствора DTT получали путем растворения 0,1364 г DTT в 35,4 мл 20 мМ янтарной кислоты, рН 4,0. Раствор моноконъюгата G6.31-линкер и 25 мМ маточный раствор DTT охлаждали до 4°С. 22,3 мл 25 мМ маточного раствора DTT добавляли к раствору белка с получением конечной концентрации DTT, составляющей 1 мМ. Полученный раствор хранили в течение ночи при контролируемой температуре 5°С в термостате. Удаление метки очистки подвергали мониторингу с помощью MS. Перед расщеплением обнаружили пик на 48585, указывающий на моноконъюгат с меткой j3. После расщепления обнаружили пик при 47720, что подтверждает удаление метки и образование моноконъюгата G6.31 AARR-линкер j4 .
[570] Моноконъюгат G6.31 AARR- линкер j4 очищали с помощью CIEC. 556,5 мл моноконъюгата G6.31-линкер после опосредованного DTT снятия защитной группы разбавляли в 3 раза с помощью 20 мM янтарная кислоты, pH 4,0, до конечного объема, составляющего приблизительно 1660 мл. Использовали колонку GE Healthcare Source 15S HiScale26 (высотой 9,8 см). Буферная система была следующей: 10 мM гистидин, pH 5,5 (буфер A); 20 мM янтарная кислота, pH 4,0 (A2); и 10 мM гистидин, 500 мM NaCl, pH 5,5 (буфер B). После загрузки колонки колонку отмывали с помощью 2 CV буфера A2 с последующей отмывкой колонки с помощью 2 CV A1. Далее прилагали нелинейный градиент: 0%-50% B, 25 CV (20 мл/мин - объемная скорость потока). Загрузка составляла приблизительно 300 мг.
[571] После стадии CIEC осмолярность раствора белка доводили с помощью дополнительного разбавления с использованием буфера B (10 мM гистидин, 500 мM NaCl, pH 5,5) с получением концентрации NaCl, составляющей приблизительно 150 мM. 130 мл моноконъюгата G6.31-линкер собирали во время цикла CIEC. 28 мл 10 мM гистидина, 500 мM NaCl, pH 5,5 добавляли к образцу с получением общего объема, составляющего 158 мл моноконъюгата G6.31 AARR-линкер j4.
Пример 5E: Концентрирование конъюгата G6.31 AARR-линкер
Для получения HA-линкер-G6.31 AARR k1 (пример 6A ниже) с содержанием белка, составляющим 40 мг/мл, моноконъюгат G6.31 AARR-линкер j4 концентрировали до концентрации выше 60 мг/мл. 4 мембраны Amicon Ultra 15 PLCG Ultracel с MWCO 10 кДа использовали для концентрирования раствора белка путем центрифугирования при 3000 g. Получали приблизительно 3,9 г раствора моноконъюгата G6.31 AARR-линкер j4 с содержанием белка, составляющим 76,5 мг/мл (298 мг). Концентрированный раствор анализировали с помощью MS и обнаруживали пик при 47723, соответствующий моноконъюгату G6.31-линкер j4. Образец разбавляли до 65 мг/мл путем добавления 689 мкл 10 мM гистидина, 150 мM NaCl, pH 5,5.
Пример 6A: Конъюгирование моноконъюгата G6.31 AARR-линкер j4 с функционализированной малеимидом HA
Схема 6A
[572] Конъюгирование моноконъюгата G6.31-линкер j4 с функционализированной малеимидом HA f5 с получением конъюгата линкер-G6.31 AARR-HA k1 проводили, как показано на схеме 6A.
[573] Конъюгирование моноконъюгата G6.31-линкер j4 с функционализированной малеимидом HA f5 (пример 2B) проводили путем добавления концентрированного раствора моноконъюгата G6.31-линкер j4 с 1,3 экв. функционализированной малеимидом HA f5 в отношении содержания тиола, что давало в результате концентрацию белка (G6.31 AARR), составляющую 44 мг/мл (в расчете на содержание тиола), и содержание HA, составляющее приблизительно 0,49%. Образцы моноконъюгата G6.31 AARR-линкер j4 (раствор белка с концентрацией 64,7 мг/мл, составленный в 10 мM гистидине, 150 мM NaCl, pH 5,5), полученные в соответствии с примером 5D, оставляли нагреваться до температуры окружающей среды. Образцы фильтровали через фильтр GV Millex диаметром 33 мм с размером пор, составляющим 0,22 мкм. Определили, что содержание тиола раствора моноконъюгата G6.31-линкер j4 составляет 73,4 мг/мл. 2190 мкл раствора моноконъюгата G6.31-линкер j4 переносили в 50 мл пробирку Falcon. Добавляли 735,5 мкл буфера, содержащего 10 мM гистидина, 150 мM NaCl, 0,01% Tween 20, pH 5,5. Добавляли 115,3 мкл 10 мM гистидина, 150 мM NaCl, 0,2% Tween 20, pH 5,5. Добавляли 612,5 мкл стерильно отфильтрованного (фильтр Millex GP, диаметр - 25 мм, размер пор - 0,22 мкм) раствора HA-малеимид f5 (30 мг/мл - содержание 116 кДа HA с содержанием малеимида, составляющим 0,24 ммоль/г). Полученный раствор тщательно перемешивали и инкубировали в течение 4 часов при температуре окружающей среды. Через 4 часа времени реакции образец в 25 мкл отбирали и анализировали с помощью SEC. 95% моноконъюгата G6.31 AARR-линкер j4 конъюгировали с функционализированной малеимидом HA f5 с получением конъюгата линкер-G6.31 AARR-HA k1.
Пример 6B: Тиол-малеимидное поперечное сшивание с образованием гелей, содержащих линкер-G6.31 AARR-сшитая HA
[574] Сшивание тиол-функционализированной HA f6 и конъюгата линкер-G6.31 AARR-HA k1 с получением гидрогеля, содержащего линкер-G6.31 AARR-сшитая HA k2 проводили в соответствии со схемой 6B:
Схема 6B
[575] После 3628 мкл конъюгата линкер-G6.31-HA k1 инкубировали в течение 4 часов. Добавляли 363 мкл стерильно отфильтрованного (фильтр Millex GP, диаметр 25 мм, размер пор - 0,22 мкм) раствора функционализированной тиолом HA f6 (пример 2C) (28,4 мг/мл - содержание 116 кДа HA с содержанием тиола, составляющим 0,098 ммоль/г), в результате чего конечное содержание белка составляет 40 мг / мл (в расчете на содержание тиола) и конечное содержание HA 7,16 мг/мл в полученном растворе. Раствор тщательно перемешивали и набирали в 5 мл шприц, снабженный тупой канюлей калибра 18 G. Раствор быстро наполняли в восемнадцать 1 мл шприцев с наконечником Люэра с использованием наконечника шприца для заполнения. На шприцах устанавливали завинчивающуюся крышку и их инкубировали в течение примерно 24 часов в вертикальном положении при температуре окружающей среды. Впоследствии шприцы инкубировали при 5°С в течение трех недель. Реакция поперечного сшивания завершалась в шприцах с получением на выходе конъюгата G6.31 на основе геля поперечно-сшитой HA k2.
Пример 6C: Высвобождение G6.31 AARR из геля поперечно-сшитой HA, содержащего G6.31
[576] Высвобождение G6.31 AARR из геля поперечно-сшитой HA, содержащего G6.31 AARR k2 анализировали in vitro с использованием материала из примера 6B. 11-16 мг геля G6.31-HA переносили в стерильную апирогенную пробирку Эппендорф. Буфер для высвобождения (60 мM фосфат натрия, 3 мM EDTA, 0,01% Tween, pH 7,4) добавляли в соответствии с соотношением 975 мкл буфера для 25 мг HA. Пробирки не переворачивали или встряхивали. Все пробирки хранили при контролируемой температуре 37°С в термостате. В разные моменты времени из термостата вынимали пробирку и центрифугировали (9300 об/мин, 3 мин). Супернатант переносили в новую пробирку Эппендорф и концентрацию белка в супернатанте определяли путем измерения оптической плотности при 280 нм с контрольной длиной волны 338 нм с использованием коэффициента экстинкции G6.31, составляющего 1,38 мл/см⋅мг. Для каждого образца высвобождение в % рассчитывали с использованием перенесенной массы и содержания белка в геле (таблица 6C).
Таблица 6C. Высвобождение G6.31
Время/дни | Высвобождение, /% |
7 | 14,67 |
14 | 21,08 |
21 | 27,58 |
33 | 35,79 |
62 | 53,98 |
70 | 58,42 |
125 | 75,87 |
186 | 93,18 |
Пример 7A: Получение геля поперечно-сшитой HA, содержащего RabFab.
[577] Получение конъюгата RabFab-линкер проводили в соответствии с процедурами, описанными в примере 3A, 3B, 3C и 3D. Концентрированиe моноконъюгата RabFab-линкер проводили в соответствии с процедурой, описанной в примере 3E, за исключением того, что конъюгат концентрировали до концентрации, составляющей 46 мг/мл, из-за чего содержание белка в конечном геле составляло приблизительно 30 мг/мл.
[578] Конъюгирование конъюгата RabFab-линкер с функционализированной малеимидом HA проводили в соответствии с процедурой, описанной в примере 4A. 5502 мкл конъюгата RabFab-линкер смешивали с 1804 мкл буфера, содержащего 10 мM гистидин, 150 мM NaCl, 0,01% Tween 20 pH 5,5. Добавляли 289 мкл 10 мM гистидина, 150 мM NaCl, 0,2% Tween 20, pH 5,5. Добавляли 1124 мкл раствора HA-малеимид f5 (30 мг/мл - содержание 116 кДа HA с содержанием малеимида, составляющим 0,24 ммоль/г). Полученный раствор тщательно перемешивали и инкубировали в течение 4 часов при температуре окружающей среды.
[579] Получение геля поперечно-сшитой HA, содержащего RabFab, получали в соответствии с процедурой, описанной в примере 4B. К 8691 мкл конъюгата RabFab-линкер-HA добавляли 869 мкл раствора функционализированной тиолом HA f6 (22,6 мг/мл - содержание 116 кДа HA с содержанием тиола, составляющим 0,096 ммоль/г). Раствор тщательно перемешивали и набирали в шприц на 10 мл, снабженный тупой канюлей 18 G. Раствор быстро наполняли в 48 1 мл шприцев с наконечником Люэра с использованием наконечника шприца для заполнения. На шприцах устанавливали завинчивающуюся крышку и их инкубировали в течение приблизительно 24 часов в вертикальном положении при температуре окружающей среды. Впоследствии шприцы инкубировали при 5°С в течение трех недель. Реакция поперечного сшивания завершалась в шприцах с получением конъюгата RabFab на основе геля поперечно-сшитой HA m1.
Пример 7B: Получение меченного карбоксифлуоресцеином плацебо - геля HA
[580] Препарат амин-функционализированной HA получали в соответствии с процедурой, описанной в примере 2A. Для получения варианта HA с повышенной степенью функционализации амином 1,00 г 116 кДа HA растворяли в 125 мл 100 MES, 0,4 M 1,3-диаминопропанового буфера, pH 5,5, и использовали 1,15 г (7,48 ммоль) HOBt и 444,6 мг (2,32 ммоль) EDC. Далее получали мечение карбоксифлуоресцеином и малеимидом путем растворения 463 мг вышеупомянутой функционализированной амином HA в 46 мл 100 мM буфера HEPES pH 7,4 с последующим добавлением 1,5 мл раствора N-сукцинимидильного сложного эфира 5(6)-карбоксифлуоресцеина (5,28 мг/мл в ацетонитриле). Через один час инкубации при перемешивании при температуре окружающей среды свежеприготовленный раствор 396 мг NHS сложного эфира 3-малеимидопропионовой кислоты в 24 мл ацетонитриле добавляли к раствору. Через один дополнительный час инкубации при перемешивании при температуре окружающей среды обработку реакционной смеси проводили в соответствии с процедурой, описанной в примере 2B.
[581] Получение меченного карбоксифлуоресцеином геля HA проводили в соответствии со следующей процедурой: 140,6 мг меченной карбоксифлуоресцеином малеимидо-функционализированной HA растворяли в 6580 мкл буфера, содержащего 10 мM гистидин, 150 мM NaCl, 0,01% Tween 20, pH 5,5. 82,8 мг тиол-функционализированной HA растворяли в 2946 мкл буфера, содержащего 10 мM гистидин, 150 мM NaCl, 0,01% Tween 20, pH 5,5. 57,6 мг 2-меркаптоэтанола растворяли в 6216 мкл буфера, содержащего 10 мM гистидин, 150 мM NaCl, 0,01% Tween 20, pH 5,5. 500 мкл этого раствора 2-меркаптоэтанол переносили в новый флакон и разбавляли 49,5 мл буфера, содержащего 10 мM гистидин, 150 мM NaCl, 0,01% Tween 20, pH 5,5. 121,5 мг нативной 116 кДа HA растворяли в 8433 мкл разбавленного раствора 2-меркаптоэтанола. 8433 мкл этого раствора переносили в новый флакон и добавляли 2568 мкл раствора малеимид-HA. Полученный раствор кратковременно встряхивали, центрифугировали и инкубировали в течение 2 часов при температуре окружающей среды. 10 мл этого раствора переносили в новый флакон и добавляли 1 мл раствора тиол-HA. Раствор тщательно перемешивали и набирали в шприц на 10 мл, снабженный тупой канюлей 18 калибра. Раствор быстро наполняли в 34 шприца на 1 мл с наконечником Люэра с использованием наконечника шприца для наполнения и применяя объем наполнения, составляющий приблизительно 300 мкл на шприц. На шприцах устанавливали завинчивающуюся крышку, и их инкубировали в течение приблизительно 24 часов в вертикальном положении при температуре окружающей среды. Впоследствии шприцы инкубировали при 5°С в течение трех недель. Реакция поперечного сшивания завершалась в шприцах с получением плацебо - геля поперечно-сшитой, меченной карбоксифлуоресцеином HA m2.
Пример 7C: In Vivo кинетические параметры высвобождения из гелей поперечно-сшитой HA, содержащих RabFab
[582] Гель поперечно-сшитой HA, содержащий RabFab, вводили не использовавшимся ранее в опытах новозеландским белым (NZW) кроликам посредством однократной билатеральной интравитреальной инъекции кроликам с последующим наблюдением, составляющим вплоть до 60 дней. Местный антибиотик (офтальмологическая мазь на основе тобрамицина) наносили на оба глаза дважды в день до лечения, сразу после инъекции и дважды в день после инъекции, за исключением животных, которых отправляли на вскрытие в дни 1 и 2. До введения дозы капли для расширения зрачков (1% тропикамида) наносили на каждый глаз для полного расширения зрачка. Проводили седацию животных изофлураном/газообразным кислородом до и во время процедуры. Алкаин (0,5%) также наносили на каждый глаз перед инъекцией. Конъюнктиву промывали хлоридом бензалкония (Zephiran™), разведенным в стерильной воде, фармакопея США до 1: 10000 (об./об.).
[583] Гель поперечно-сшитой HA, содержащий RabFab, вводили с помощью 30 мкл однократной интравитреальной инъекции (доза 0,3 мг) в оба глаза у всех животных. Дозы назначались сертифицированным ветеринаром-офтальмологом с использованием шприцов с наконечником Люэра объемом 1 мл с иглой 25 калибра х 1/2”. Чтобы имитировать клиническую дозировку, в глаза вводили дозу в нижневисочные квадранты, т.е. на 5 и 7 часов соответственно для левого и правого глаз (при взгляде на животного спереди). Глаза исследовали с помощью биомикроскопии с щелевой лампой и/или непрямой офтальмоскопии сразу после лечения.
[584] Всех животных подвергали обескровливанию путем разреза подмышечных или бедренных артерий после анестезии путем внутривенной инъекции пентобарбитала натрия. Водянистую влагу, стекловидное тело и ткань сетчатки собирали, быстро замораживали в жидком азоте и хранили при -80°С. Определение концентрации в стекловидном теле испытуемого изделия проводили с помощью антигенсвязывающего ELISA. Значения ниже LLOQ не использовали в фармакокинетическом анализе или для графических целей или целей обобщения.
[585] Анализ ELISA проводили с использованием способа целевого покрытия. В этом анализе целевое покрытие фосфорилировали пептидом cMet, конъюгированным с KLH (пептид P-cMet, от Yenzym, Южный Сан-Франциско, Калифорния). Для получения планшетов для анализа лиофилизированный пептид P-cMet восстанавливали с помощью 300 мкл буфера и дополнительно разбавляли до 1:200 в 0,05 М буфере бикарбоната натрия. Разбавленный пептид P-cMet (100 мкл на лунку) добавляли в 96-луночный планшет для микротитрования (Nunc, Thermo Scientific, Rockford, IL) и инкубировали в течение ночи при 2-8°C. После инкубации планшет трижды промывали 400 мкл промывочного буфера (BA029) с последующим блокированием разбавителем для анализа (промывочный буфер, содержащий 0,5% бычьего сывороточного альбумина и 0,05% проклина). Стандартную кривую получали путем разбавления Rabbit Fab (Genentech, Южный Сан-Франциско, Калифорния) до 200 нг/мл и затем серийного разбавления 1:2 в разбавителе для анализа. Контроли разбавляли 1:100 в разбавителе для анализа. Каждый образец разбавляли до количественного диапазона анализа с использованием разбавителя для анализа. Все образцы, контроли и стандарты добавляли в планшет при концентрации, составляющей 100 мкл, и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 часов с аккуратным перемешиванием. После инкубации и промывания в каждую лунку добавляли 100 мкл детектирующего антитела (мышиное антитело к легкой цепи-HRP кролика, SouthernBiotech, Бирмингем, Алабама) после разведения 1/4000 в разбавителе для анализа. Затем планшеты инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре с легким перемешиванием. После дополнительной промывки в каждую лунку добавляли 100 мкл субстрата HRP (3,3',5,5'-тетраметилбензидин, TMB, от Kirkegard & Perry Laboratory, Гейтерсберг, Мэриленд) с последующей 15-минутной инкубацией при комнатной температуре с легким перемешиванием. Реакцию останавливали с помощью 100 мкл 1 М фосфорной кислоты. Планшет считывали при 450 нм для обнаружения и 630 нм в качестве эталонной длины волны (SpectraMax 384-plus; Molecular Devices, Саннивейл, Калифорния). Значения оптической плотности стандартов были наносили на график с использованием программного обеспечения для подбора 4-параметрической логистической кривой (Softmax, Molecular Devices), из которых значения концентрации для контрольных и испытуемых образцов получали путем экстраполяции.
[586] Концентрации в стекловидном теле определяли с помощью антигенсвязывающего анализа ELISA, как описано выше, и наносили на график как функцию времени. На фиг. 12 показан график, на котором обобщенно представлены витреальные концентрации как функция времени после инъекции. Свободный RabFab после введения IVT представлен синим цветом, тогда как свободный RabFab от высвобождения из поперечно-сшитой HA представлен красным. Точки представляют собой индивидуальные наблюдаемые данные, в то время как линии представляют собой модельные прогнозы ожидаемых витреальных концентраций на основе известных параметров PK для свободного Fab в стекловидном теле, высвобождения in vitro обратимого линкера пролекарственного средства, а также pH и температуры стекловидного тела кролика. Эти данные были подвергали некомпартментному анализу для получения фармакокинетических (PK) параметров.
[587] Фармакокинетические параметры определяли некомпартментным анализом с номинальным временем и дозой (Phoenix WinNonlin, Pharsight Corp, Маунтин-Вью, Калифорния). Параметры PK, рассчитанные с использованием некомпартментного анализа, приведены в таблице 2.
Таблица 1: Оценка параметров PK из исследования PK кроликов NZW
Cmax
(мкг/мл) |
AUCall
(день*мкг/мл) |
CL
(мл/день) |
Vss
(мл) |
|
Стекловидное тело | 1030 | 5360 | 0,271 | 0,812 |
Водянистая влага | 4,50 | 148 | 5,16 | 403 |
Сыворотка | 0,147 | 2,32 | 1260 | 19000 |
[588] Фармакокинетика RabFab в стекловидном теле после высвобождения из геля поперечно-сшитой HA и RabFab у новозеландских кроликов согласуется с прогнозами, основанными на высвобождении in vitro. Начальные более высокие концентрации обусловлены дозой раствора, содержащего ~ 3,6% свободного Fab и ~ 4,9% свободного Fab-HA. Период полувыведения из стекловидного тела кролика оценивается в 53 дня.
[589] Конечный период полужизни свободного Fab в стекловидном теле равен периоду полужизни обратимого линкера пролекарственного средства. Это означает, что как только динамика высвобождения лекарственного средства из НА и последующего выведения из стекловидного тела достигнет равновесия, эффективный период полувыведения активного лекарственного средства в стекловидном теле будет в 53/3,2 = 16,5 раз больше по сравнению с тем периодом, который, как правило, наблюдают после инъекции IVT свободного Fab.
Пример 5E: Отсутствие значительной фрагментации или движения частиц в глазу NHP.
[590] Двум яванским макакам вводили двустороннее однократное введение ITV плацебо-геля поперечно-сшитой HA-флуоресцеина (50 мкл/глаз) в нижний височный квадрант. Животных наблюдали в течение 30 дней в отношении клинических наблюдений, изменений массы тела, потребления пищи и глазных офтальмологических наблюдений (IOP, биомикроскопических (щелевая лампа) и фундоскопических исследований. Кроме того, в течение того же периода подвергали мониторингу местоположение и когезивность материала с использованием гониоскопии, визуализации передней камеры глаза, визуализации глазного дна с использованием конфокального сканирующего лазерного офтальмоскопа и флуорометрии с использованием Fluoroton.
[591] На фигуре 13A представлено репрезентативное изображение cSLO, полученное на 15-й день. TA (стрелка) остается в нижней части стекловидного тела и не закрывает центральную ямку (F) или диск зрительного нерва (ON). Фигура 13В представляет собой изображение, полученное при вскрытии с использованием кобальтово-синего света после удаления переднего отрезка глаза и хрусталика. Обратите внимание, что ТА (стрелка) остается когезивным. Как можно видеть, плацебо-гель поперечно-сшитой HA m2 продемонстрировал минимальную фрагментацию и движение через 30 дней.
Пример 7F: Исследование переносимости геля поперечно-сшитой HA, конъюгированного с RabFab, на кролике
[592] Трем новозеландским белым кроликам вводили одностороннее введение ITV геля поперечно-сшитой HA, конъюгированного с RabFab (50 мкл/глаз), в нижний височный квадрант. Животных наблюдали в течение 60 дней в отношении клинических наблюдений, изменений массы тела, потребления пищи и офтальмологических наблюдений (IOP, биомикроскопические (щелевая лампа) и фундоскопические исследования). Образцы сыворотки собирали для ADA и TK. При вскрытии глаза удаляли и обрабатывали в отношении гистопатологии. На фигуре 14 показан гистологический срез. Как можно видеть, гель поперечно-сшитой HA, конюгированный с RabFab, хорошо переносился в двухмесячном исследовании. Не наблюдалось клеточного инфильтрата, воспалительной реакции и реакции на инородное тело (6 глаз).
Пример 7G: Исследование переносимости геля поперечно-сшитой HA, конъюгированного с G6.31 AARR, у яванских макак
[593] Двум яванским макакам вводили двусторонне одну инъекцию ITV геля поперечно-сшитой HA, конъюгированного с Fab к VEGF, G6.31 AARR (50 мкл/глаз; 1,92 мг Fab/глаз) в нижнем височном квадранте. Животных наблюдали в течение 3 месяцев (92 дня) в отношении клинических наблюдений, изменений массы тела, потребления пищи и офтальмологических наблюдений (IOP, биомикроскопические (щелевая лампа) и фундоскопические исследования). Местонахождение и когезивность материала подвергали мониторингу в течение того же периода с использованием гониоскопии и визуализации передней камеры глаза. Образцы сыворотки брали для оценки ADA и TK, а глаза оценивали в отношении гистопатологии через 3 месяца.
[594] Гидрогель оставался когезивным и находился в нижней части стекловидного тела на протяжении всего периода оценки. Не наблюдалось значительного воспаления в течение жизни, несмотря на индукцию ADA у обоих животных к 28-му дню. Отсутствовали какие-либо связанные с испытуемым изделием изменения в клинических наблюдениях, качественном потреблении пищи и массе тела. На фигуре 15 показан самый нижний гистологический срез нижнего сферического сегмента глаза, который содержит испытуемое изделие. Как можно видеть, гель поперечно-сшитой HA, конъюгированный с G6.31 AARR, хорошо переносился в 3-месячном исследовании. Никакого клеточного инфильтрата, воспалительной реакции и реакции на инородное тело не наблюдалось (4 глаза).
[595] По сравнению с гидрогелем в форме частиц на основе ПЭГ, конъюгированным с ранибизумабом, гель поперечно-сшитой HA, конъюгированный с G6.31 AARR, демонстрирует превосходный профиль безопасности. При введении в нижнюю полость стекловидного тела гель поперечно-сшитой HA, конъюгированный с G6.31 AARR, не перемещается и остается ниже зрительной оси и, следовательно, не должен нарушать зрение пациента. И наоборот, гидрогели в форме частиц на основе ПЭГ свободно перемещаются в полости стекловидного тела.
[596] Гель поперечно-сшитой HA, конъюгированный с G6.31 AARR, остается когезивным и не образует значительного количества свободных фрагментов в форме частиц, что ограничивает риск блокады оттока. Фракция гидрогеля в форме частиц на основе ПЭГ наблюдалась в передней камере глаза яванского макака.
Пример 8: Иллюстративные оптимизированные антитела к VEGF для применения в конъюгатах антител согласно настоящему изобретению
[597] Любое из оптимизированных антител к VEGF, описанных в этом примере, можно использовать для получения конъюгатов антител, как описано в примерах 3A-4D выше. Например, можно использовать любое оптимизированное антитело к VEGF, описанное в международной заявке на патент № PCT/US2016/053454. В таблице 3 описаны иллюстративные оптимизированные антитела к VEGF, которые можно использовать, а также аминокислотные последовательности доменов VH и VL для каждого антитела. В таблице 4 описаны аминокислотные последовательности HVR VL для антител к VEGF, описанных в таблице 3. В таблице 5 описаны аминокислотные последовательности HVR VH для антител к VEGF, описанных в таблице 3. Согласно конкретным вариантам осуществления используют антитело к VEGF G6.31 AARR (также называемое в настоящем документе “G6.31.AARR”).
Таблица 3: Аминокислотные последовательности VH и VL для иллюстративных антител к VEGF
Название антитела | Вариантная VH (SEQ ID NO) | Вариантная VL (SEQ ID NO) |
G6.31 WT | G6.31 WT (SEQ ID NO: 42) | G6.31 WT (SEQ ID NO: 38) |
LC-N94A | G6.31 WT (SEQ ID NO: 42) | N94A (SEQ ID NO: 41) |
LC-N94A.LC-F83A | G6.31 WT (SEQ ID NO: 42) | N94A.F83A (SEQ ID NO: 12) |
LC-N94A.LC-F83A. HC-A40E.HC-T57E (G6.31 AAEE) |
A40E.T57E (SEQ ID NO: 40) | N94A.F83A (SEQ ID NO: 12) |
N94A.F83A.N82aR.Y58R (G6.31 AARR) |
N82aR.Y58R (SEQ ID NO:11) | N94A.F83A (SEQ ID NO: 12) |
HCcombo | HCcombo (SEQ ID NO: 33) | G6.31 WT (SEQ ID NO: 38) |
HCLC2 | HCcombo (SEQ ID NO: 33) | LCcombo2 (SEQ ID NO: 35) |
HCLC4 | HCcombo (SEQ ID NO: 33) | LCcombo4 (SEQ ID NO: 37) |
HCLC5 | HCcombo (SEQ ID NO: 33) | N94A.F83A (SEQ ID NO: 12) |
HCLC3 | HCcombo (SEQ ID NO: 33) | LCcombo3 (SEQ ID NO: 36) |
HCLC1 | HCcombo (SEQ ID NO: 33) | LCcombo1 (SEQ ID NO: 34) |
R19HCcombo | R19HCcombo (SEQ ID NO: 51) | G6.31 WT (SEQ ID NO: 38) |
R19HCLC2 | R19HCcombo (SEQ ID NO: 51) | LCcombo2 (SEQ ID NO: 35) |
R19HCLC4 | R19HCcombo (SEQ ID NO: 51) | LCcombo4 (SEQ ID NO: 37) |
R19HCLC5 | R19HCcombo (SEQ ID NO: 51) | N94A.F83A (SEQ ID NO: 12) |
Таблица 4: Последовательности HVR VL для антител из таблицы 3
Название антитела | HVR-L1 | HVR-L2 | HVR-L3 |
G6.31 WT | RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8) |
SASFLYS (SEQ ID NO:9) |
QQGYGNPFT (SEQ ID NO: 23) |
LC-N94A | RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8) |
SASFLYS (SEQ ID NO:9) |
QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10) |
LC-N94A.LC-F83A | RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8) |
SASFLYS (SEQ ID NO:9) |
QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10) |
LC-N94A.LC-F83A. HC-A40E.HC-T57E (G6.31 AAEE) |
RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8) |
SASFLYS (SEQ ID NO:9) |
QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10) |
N94A.F83A.N82aR.Y58R (G6.31 AARR) |
RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8) |
SASFLYS (SEQ ID NO:9) |
QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10) |
HCcombo | RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8) |
SASFLYS (SEQ ID NO:9) |
QQGYGNPFT (SEQ ID NO: 23) |
HCLC2 | RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8) |
SASFLYS (SEQ ID NO:9) |
QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10) |
HCLC4 | RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8) |
SASFLYS (SEQ ID NO:9) |
QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10) |
HCLC5 | RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8) |
SASFLYS (SEQ ID NO:9) |
QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10) |
HCLC3 | RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8) |
SASFLYS (SEQ ID NO:9) |
QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10) |
HCLC1 | RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8) |
SASFLYS (SEQ ID NO:9) |
QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10) |
R19HCcombo | RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8) |
SASFLYS (SEQ ID NO:9) |
QQGYGNPFT (SEQ ID NO: 23) |
R19HCLC2 | RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8) |
SASFLYS (SEQ ID NO:9) |
QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10) |
R19HCLC4 | RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8) |
SASFLYS (SEQ ID NO:9) |
QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10) |
R19HCLC5 | RASQDVSTAVA (SEQ ID NO: 8) |
SASFLYS (SEQ ID NO:9) |
QQGYGAPFT (SEQ ID NO: 10) |
Таблица 5: Последовательности HVR VH для антител из таблицы 3
Название антитела | HVR-H1 | HVR-H2 | HVR-H3 |
G6.31 WT | DYWIH (SEQ ID NO:1) |
GITPAGGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 53) |
FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO:3) |
LC-N94A | DYWIH (SEQ ID NO:1) |
GITPAGGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 53) |
FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO:3) |
LC-N94A.LC-F83A | DYWIH (SEQ ID NO:1) |
GITPAGGYTYYADSVKG (SEQ ID NO: 53) |
FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO:3) |
LC-N94A.LC-F83A. HC-A40E.HC-T57E (G6.31 AAEE) |
DYWIH (SEQ ID NO:1) |
GITPAGGYEYYADSVKG (SEQ ID NO: 21) | FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO:3) |
N94A.F83A.N82aR.Y58R (G6.31 AARR) |
DYWIH (SEQ ID NO:1) |
GITPAGGYTRYADSVKG (SEQ ID NO: 7) | FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO:3) |
HCcombo | DYWIH (SEQ ID NO:1) |
GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22) |
FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO:3) |
HCLC2 | DYWIH (SEQ ID NO:1) |
GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22) |
FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO:3) |
HCLC4 | DYWIH (SEQ ID NO:1) |
GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22) |
FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO:3) |
HCLC5 | DYWIH (SEQ ID NO:1) |
GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22) |
FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO:3) |
HCLC3 | DYWIH (SEQ ID NO:1) |
GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22) |
FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO:3) |
HCLC1 | DYWIH (SEQ ID NO:1) |
GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22) |
FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO:3) |
R19HCcombo | DYWIH (SEQ ID NO:1) |
GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22) |
FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO:3) |
R19HCLC2 | DYWIH (SEQ ID NO:1) |
GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22) |
FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO:3) |
R19HCLC4 | DYWIH (SEQ ID NO:1) |
GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22) |
FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO:3) |
R19HCLC5 | DYWIH (SEQ ID NO:1) |
GITPAGGYEYYADSVEG (SEQ ID NO: 22) |
FVFFLPYAMDY (SEQ ID NO:3) |
Верхнюю шарнирную область тяжелой цепи Fab любого из перечисленных выше антител, например, G6.31 AARR, можно мутировать для удаления реакционной способности по отношению к аутоантителам к шарниру IgG1, о чем сообщалось в литературе. См., Например, Brezski et al., J. Immunol. 181: 3183-3192, 2008 и Brezski et al., mAbs 2: 3, 212-220, 2010. Таким образом, C-концевая аминокислота тяжелой цепи G6.31 AARR может представлять собой T (версия дикого типа (WT)) или L (вариантная версия, которая не обладает реакционной способностью по отношению к Fab к IgG человека). Аминокислотная последовательность полноразмерной тяжелой цепи G6.31 AARR дикого типа представляет собой SEQ ID NO: 48. Аминокислотная последовательность полноразмерной тяжелой цепи вариантной версии, которая не обладает реакционной способностью по отношению к Fab к IgG человека, представляет собой SEQ ID NO 49. Аминокислотная последовательность полноразмерной легкой цепи как для G6.31 AARR, так и для вариантной версии, которая не обладает реакционной способностью по отношению к Fab к IgG человека, представляет собой SEQ ID NO: 50.
[598] В этом письменном описании используют примеры, раскрывающие настоящее изобретение, включая в себя лучший режим, а также позволяющие любому специалисту в настоящей области техники применять настоящее изобретение на практике, включая в себя создание и использование любых устройств или систем и выполнение любых включенных в него способов. Патентуемый объем настоящего изобретения определяется формулой изобретения и может включать в себя другие примеры, которые встречаются специалистам в настоящей области техники. Подразумевается, что такие другие примеры входят в объем формулы изобретения, если они содержат структурные элементы, которые не отличаются от буквальной формулировки формулы изобретения, или если они включают в себя эквивалентные структурные элементы с несущественными отличиями от буквальной формулировки формулы изобретения.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Дженентек, Инк. и Асцендис Фарма А/С
<120> ПРОЛЕКАРСТВЕННЫЕ КОМПОЗИЦИИ НА ОСНОВЕ ГИДРОГЕЛЯ ПОПЕРЕЧНО-СШИТОЙ
ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ И СПОСОБЫ
<130> P34128-WO
<140> PCT/US2018/023857
<141> 2018-03-22
<150> 62/475,094
<151> 2017-03-22
<160> 66
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note=" Синтетический конструкт "
<400> 1
Asp Tyr Trp Ile His
1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<220>
<221> Вариант
<222> (2)..(2)
<223> /replace="His"
<220>
<221> Вариант
<222> (5)..(5)
<223> /replace="Arg"
<220>
<221> Вариант
<222> (8)..(8)
<223> /replace="Lys"
<220>
<221> Вариант
<222> (9)..(9)
<223> /replace="Glu"
<220>
<221> Вариант
<222> (10)..(10)
<223> /replace="Tyr" or "Gln" or "Glu"
<220>
<221> Вариант
<222> (12)..(12)
<223> /replace="Glu"
<220>
<221> Вариант
<222> (16)..(16)
<223> /replace="Glu"
<220>
<221> Вариант
<222> (17)..(17)
<223> /replace="Glu"
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(17)
<223> /note= "Варианты остатков, приведенные в последовательности, не являются
предпочтительными по сравнению с остатками в аннотациях для вариантов
позиций"
<400> 2
Gly Ile Thr Pro Ala Gly Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 3
Phe Val Phe Phe Leu Pro Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note=" Синтетический конструкт"
<220>
<221> Вариант
<222> (5)..(5)
<223> /replace="Arg"
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(11)
<223> /note="Варианты остатков, приведенные в последовательности, не являются
предпочтительными по сравнению с остатками в аннотациях для вариантов
позиций"
<400> 4
Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<220>
<221> Вариант
<222> (1)..(1)
<223> /replace="Met"
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(7)
<223> /note=" Варианты остатков, приведенные в последовательности, не являются
предпочтительными по сравнению с остатками в аннотациях для вариантов
позиций "
<400> 5
Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (1)..(1)
<223> /replace="Asn" or "Thr"
<220>
<221> ВАРИАНТ
<222> (6)..(6)
<223> /replace="Asn" or "Gln" or "Arg"
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> /note=" Варианты остатков, приведенные в последовательности, не являются
предпочтительными по сравнению с остатками в аннотациях для вариантов
позиций "
<400> 6
Gln Gln Gly Tyr Gly Ala Pro Phe Thr
1 5
<210> 7
<211> 17
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 7
Gly Ile Thr Pro Ala Gly Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 8
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 8
Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 9
<211> 7
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 9
Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser
1 5
<210> 10
<211> 9
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 10
Gln Gln Gly Tyr Gly Ala Pro Phe Thr
1 5
<210> 11
<211> 120
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gly Ile Thr Pro Ala Gly Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Arg Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Val Phe Phe Leu Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 12
<211> 107
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 12
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Gly Ala Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 13
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 13
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser
20 25 30
<210> 14
<211> 14
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 14
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 15
<211> 32
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 15
Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Arg Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 16
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 16
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 17
<211> 23
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 17
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 18
<211> 15
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 18
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 19
<211> 32
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 19
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 20
<211> 10
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 20
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 21
<211> 17
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 21
Gly Ile Thr Pro Ala Gly Gly Tyr Glu Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 22
<211> 17
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 22
Gly Ile Thr Pro Ala Gly Gly Tyr Glu Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 23
<211> 9
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 23
Gln Gln Gly Tyr Gly Asn Pro Phe Thr
1 5
<210> 24
<211> 32
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 24
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 25
<211> 23
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 25
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Glu Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Glu Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 26
<211> 23
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 26
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Glu Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 27
<211> 15
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 27
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 28
<211> 32
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 28
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Glu Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 29
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 29
Glu Glu Gln Leu Val Glu Glu Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Glu Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Glu Ile Ser
20 25 30
<210> 30
<211> 14
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 30
Trp Val Arg Gln Glu Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 31
<211> 32
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 31
Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Glu Asn Thr Ala Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Glu Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 32
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 32
Trp Gly Gln Gly Glu Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 33
<211> 120
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 33
Glu Glu Gln Leu Val Glu Glu Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Glu Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Glu Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Glu Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gly Ile Thr Pro Ala Gly Gly Tyr Glu Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Glu Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Glu Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Val Phe Phe Leu Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Glu Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 34
<211> 107
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 34
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Glu Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Glu Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Gly Ala Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 35
<211> 107
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 35
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Glu Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Glu Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Gly Ala Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 36
<211> 107
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 36
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Glu Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Glu Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Gly Ala Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 37
<211> 107
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 37
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Glu Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Gly Ala Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 38
<211> 107
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 38
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Gly Asn Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 39
<211> 14
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 39
Trp Val Arg Gln Glu Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 40
<211> 120
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 40
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Glu Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gly Ile Thr Pro Ala Gly Gly Tyr Glu Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Val Phe Phe Leu Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 41
<211> 107
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 41
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Gly Ala Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 42
<211> 120
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 42
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gly Ile Thr Pro Ala Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Val Phe Phe Leu Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 43
<211> 227
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 43
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gly Ile Thr Pro Ala Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Val Phe Phe Leu Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His
225
<210> 44
<211> 32
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 44
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 45
<211> 23
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 45
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Asp Cys
20
<210> 46
<211> 107
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 46
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Asp Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Gly Ala Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 47
<211> 232
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 47
Met Asn Phe Leu Leu Ser Trp Val His Trp Ser Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
Tyr Leu His His Ala Lys Trp Ser Gln Ala Ala Pro Met Ala Glu Gly
20 25 30
Gly Gly Gln Asn His His Glu Val Val Lys Phe Met Asp Val Tyr Gln
35 40 45
Arg Ser Tyr Cys His Pro Ile Glu Thr Leu Val Asp Ile Phe Gln Glu
50 55 60
Tyr Pro Asp Glu Ile Glu Tyr Ile Phe Lys Pro Ser Cys Val Pro Leu
65 70 75 80
Met Arg Cys Gly Gly Cys Cys Asn Asp Glu Gly Leu Glu Cys Val Pro
85 90 95
Thr Glu Glu Ser Asn Ile Thr Met Gln Ile Met Arg Ile Lys Pro His
100 105 110
Gln Gly Gln His Ile Gly Glu Met Ser Phe Leu Gln His Asn Lys Cys
115 120 125
Glu Cys Arg Pro Lys Lys Asp Arg Ala Arg Gln Glu Lys Lys Ser Val
130 135 140
Arg Gly Lys Gly Lys Gly Gln Lys Arg Lys Arg Lys Lys Ser Arg Tyr
145 150 155 160
Lys Ser Trp Ser Val Tyr Val Gly Ala Arg Cys Cys Leu Met Pro Trp
165 170 175
Ser Leu Pro Gly Pro His Pro Cys Gly Pro Cys Ser Glu Arg Arg Lys
180 185 190
His Leu Phe Val Gln Asp Pro Gln Thr Cys Lys Cys Ser Cys Lys Asn
195 200 205
Thr Asp Ser Arg Cys Lys Ala Arg Gln Leu Glu Leu Asn Glu Arg Thr
210 215 220
Cys Arg Cys Asp Lys Pro Arg Arg
225 230
<210> 48
<211> 228
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 48
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gly Ile Thr Pro Ala Gly Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Arg Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Val Phe Phe Leu Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr
225
<210> 49
<211> 228
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 49
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gly Ile Thr Pro Ala Gly Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Arg Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Val Phe Phe Leu Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Leu
225
<210> 50
<211> 214
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 50
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Gly Ala Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 51
<211> 120
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 51
Glu Glu Gln Leu Val Glu Glu Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Glu Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Glu Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gly Ile Thr Pro Ala Gly Gly Tyr Glu Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Glu Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Glu Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Phe Val Phe Phe Leu Pro Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Glu Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 52
<211> 30
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 52
Glu Glu Gln Leu Val Glu Glu Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Glu Ile Ser
20 25 30
<210> 53
<211> 17
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 53
Gly Ile Thr Pro Ala Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 54
<211> 32
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 54
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 55
<211> 10
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 55
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Val Lys
1 5 10
<210> 56
<211> 34
<212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 56
catcagatgg cgggaagatg aagacagatg gtgc 34
<210> 57
<211> 23
<212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 57
gccatccaga tgacccagtc tcc 23
<210> 58
<211> 19
<212> DNA
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 58
ggctgcacca tctgtcttc 19
<210> 59
<211> 107
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 59
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Gly Asn Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 60
<211> 107
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Синтетический конструкт"
<400> 60
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Gly Ala Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 61
<211> 5
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note="Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид"
<400> 61
Gly Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 62
<211> 17
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note=" Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид "
<400> 62
Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 63
<211> 20
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note=" Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид "
<400> 63
Ser Pro Asn Pro Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Tyr Pro Gly
1 5 10 15
Ala Phe Asp Ile
20
<210> 64
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note=" Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид "
<400> 64
Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His
1 5 10
<210> 65
<211> 7
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note=" Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид "
<400> 65
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser
1 5
<210> 66
<211> 11
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<221> source
<223> /note=" Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид "
<400> 66
Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Trp Val
1 5 10
<---
Claims (87)
1. Конъюгат гидрогеля поперечно-сшитой гиалуроновой кислоты (НА) с лекарственным средством, содержащий множество полимеров гиалуроновой кислоты 2А и множество полимеров гиалуроновой кислоты 2В, где
каждый 2А содержит множество линейно соединенных звеньев, причем звенья включают:
каждый 2В содержит множество линейно соединенных звеньев, причем звенья включают:
где
пунктирная линия без отметки указывает на место прикрепления к соседнему звену на пунктирной линии, помеченной #, или к водороду,
пунктирная линия, помеченная #, указывает на место прикрепления к соседнему звену на пунктирной линии без отметки, или к гидроксилу; и
пунктирная линия, помеченная *, указывает на место прикрепления поперечной сшивки между звеном Z3 2А и звеном Z4 2В, так что по меньшей мере один 2А поперечно сшит по меньшей мере с одним 2В;
лекарственное средство представляет собой фрагмент анти-VEGF антитела;
каждый из Ra1 и Ra2 независимо представляет собой водород; С1-4 алкил; ион щелочного металла, ион аммония или ион щелочноземельного металла;
L2 представляет собой обратимый линкер пролекарственного средства формулы XIIa
где
пунктирная линия указывает на прикрепление к азоту лекарственного средства путем образования амидной связи;
-Х- представляет собой -C(R4R4a)-; -N(R4)-; -О-; -C(R4R4a)-C(R5R5a)-; -C(R5R5a)-C(R4R4a); -C(R4R4a)-N(R6)-; -N(R6)-C(R4R4a)-; -C(R4R4a)-O-; -O-C(R4R4a)-или -C(R7R7a)-;
X1 представляет собой С или S(O);
-X2- представляет собой -C(R8R8a)- или -C(R8R8a)-C(R9R9a)-;
=Х3 представляет собой =O; =S или =N-CN;
-R1, -R1a, -R2, -R2a, -R4, -R4a, -R5, -R5a, -R6, -R8, -R8a, -R9, -R9a независимо выбраны из группы, состоящей из -Н и С1-6 алкила;
-R3, -R3a независимо выбраны из группы, состоящей из -Н и C1-6 алкила, при условии, что в случае, когда один из -R3, -R3a или оба отличаются от -Н, они связаны с N, к которому они прикреплены через sp3-гибридизированный атом углерода;
-R7 представляет собой -N(R10R10a) или-NR10-(C=O)-R11;
-R7a, -R10, -R10a, -R11 представляют собой независимо друг от друга -Н или C1-10 алкил;
необязательно одна или несколько из пар -R1a/-R4a, -R1a/-R5a, -R1a/-R7a, -R4a/-R5a, -R8a/-R9a образуют химическую связь;
необязательно одна или несколько из пар -R1/-R1a, -R2/-R2a, -R4/-R4a, -R5/-R5a, -R8/-R8a, -R9/-R9a соединены вместе с атомом, к которому они прикреплены, с образованием С3-10 циклоалкила или 3-10-членного гетероциклила;
необязательно одна или несколько из пар -R1/-R4, -R1/-R5, -R1/-R6, -R1/-R7a, -R4/-R5, -R4/-R6, -R8/-R9, -R2/-R3 соединены вместе с атомами, к которым они прикреплены, с образованием кольца А;
необязательно R3/R3a соединены вместе с атомом азота, к которому они прикреплены, с образованием 3-10-членного гетероцикла;
кольцо А выбрано из группы, состоящей из фенила; нафтила; инденила; инданила; тетралинила; С3-10 циклоалкила; 3-10-членного гетероциклила и 8-11-членного гетеробициклила; и
где группа согласно формуле XIIa замещена -L4 при условии, что водород, помеченный звездочкой в формуле XIIa, не замещен -L4 или другим заместителем;
L4 представляет собой необязательно биоразлагаемый спейсер;
причем спейсер L4, соединяющий полимер гиалуроновой кислоты 2А с полимером гиалуроновой кислоты 2В, характеризуется формулой:
где
крайняя правая волнистая линия представляет место прикрепления к звену Z4 на полимере гиалуроновой кислоты 2В; и
крайняя левая волнистая линия представляет место прикрепления к звену Z3 на полимере гиалуроновой кислоты 2А;
и спейсер L4, соединяющий обратимый линкер пролекарственного средства L2 с полимером гиалуроновой кислоты 2А, характеризуется формулой:
где
крайняя правая волнистая линия представляет место прикрепления к L2; и
крайняя левая волнистая линия представляет место прикрепления к звену Z2 на полимере гиалуроновой кислоты 2В;
где
LA представляет собой необязательно замещенный и/или необязательно прерванный С1-10 алкилен;
LB представляет собой неразветвленный -C(O)-C1-5 алкилен; и
LC представляет собой
где m составляет от 0 до 10, n составляет от 1 до 4, и о составляет от 1 до 4;
2А содержит всего s звеньев, где s составляет от 75 до 1000, где количество звеньев Z1 в 2А составляет от 0,9s до 0,99s, и количество звеньев Z3 составляет от 0,10s до 0,01s;
2В содержит всего t звеньев, где t составляет от 75 до 1000, где количество звеньев Z1 в 2В составляет от 0,75t до 0,94t;
объединенное количество звеньев Z2 и Z4 составляет от 0,25t до 0,06t;
количество звеньев Z2 составляет от 0,02t до 0,12t; и
количество звеньев Z4 составляет от 0,01t до 0,12t, и где
лекарственное средство только присоединено к полимеру 2В.
2. Конъюгат гидрогеля по п. 1, где
=Х3 представляет собой =O;
-R1 и -R1a представляют собой водород;
-R3 представляет собой метил, и R3a представляет собой водород; и
-Х- представляет собой -C(R7R7a)-; причем R7 представляет собой NR10-(C=O)-R11.
3. Конъюгат гидрогеля по п. 1, в котором обратимый линкер пролекарственного средства L2 вместе со спейсером L4 характеризуется формулой VIIc:
где
крайняя правая волнистая линия представляет место прикрепления к атому азота лекарственного средства; и
крайняя левая волнистая линия представляет место прикрепления к звену Z2 гиалуроновой кислоты 2В.
4. Конъюгат гидрогеля по п. 1, в котором LA представляет собой неразветвленный С2-4 алкилен.
5. Конъюгат гидрогеля по п. 1, в котором LC представляет собой:
6. Конъюгат гидрогеля по п. 1, в котором фрагмент антитела представляет собой фрагмент антитела Fab.
7. Конъюгат гидрогеля по п. 6, в котором фрагмент антитела Fab представляет собой ранибизумаб.
8. Конъюгат гидрогеля по любому из пп. 1-7, причем конъюгат гидрогеля с лекарственным средством характеризуется офтальмологическим эффективным периодом полужизни, который является увеличенным по отношению к немодифицированному фрагменту анти-VEGF антитела.
9. Фармацевтическая композиция, содержащая конъюгат гидрогеля с лекарственным средством по любому из пп. 1-8 и фармацевтически приемлемый носитель, вспомогательное вещество или разбавитель.
10. Фармацевтическая композиция по п. 9, дополнительно содержащая второе средство, причем второе средство выбрано из группы, состоящей из антитела, антиангиогенного средства, цитокина, антагониста цитокина, кортикостероида, обезболивающего средства и соединения, которое связывается со второй биологической молекулой.
11. Применение фармацевтической композиции по п. 9 или 10 в качестве лекарственного средства.
12. Применение фармацевтической композиции по п. 9 или 10 для производства лекарственного средства для лечения нарушения, ассоциированного с патологическим ангиогенезом у субъекта.
13. Применение фармацевтической композиции по п. 9 или 10 для снижения или ингибирования ангиогенеза у субъекта с нарушением, ассоциированным с патологическим ангиогенезом.
14. Применение фармацевтической композиции по п. 9 или 10 для лечения нарушения, ассоциированного с патологическим ангиогенезом, у субъекта.
15. Применение по п. 13 или 14, где нарушение, ассоциированное с патологическим ангиогенезом, представляет собой офтальмологическое нарушение.
16. Применение по п. 15, где офтальмологическое нарушение выбрано из группы, состоящей из возрастной макулярной дегенерации (AMD), макулярной дегенерации, макулярного отека, диабетического макулярного отека (DME) (включая в себя очаговый, нецентровый DME и диффузный, DME с вовлечением центра макулы), ретинопатии, диабетической ретинопатии (DR) (включая в себя пролиферативную DR (PDR), непролиферативную DR (NPDR) и высотную DR), других связанных с ишемией ретинопатии, ретинопатии недоношенных (ROP), окклюзии вен сетчатки (RVO) (включая в себя центральную (CRVO) и разветвленную (BRVO) формы), CNV (включая в себя миопическую CNV), неоваскуляризации роговицы, заболевания, ассоциированного с неоваскуляризацией роговицы, неоваскуляризации сетчатки, заболевания, ассоциированного с ретинальной/хориоидальной неоваскуляризацией, патологической миопии, болезни фон Хиппель-Линдау, гистоплазмоза глаза, семейной экссудативной витреоретинопатии (FEVR), болезни Коутса, болезни Норри, синдрома остеопороза-псевдоглиомы (OPPG), субконъюнктивального кровоизлияния, рубеоза радужки, неоваскулярных заболеваний глаз, неоваскулярной глаукомы, пигментного ретинита (RP), гипертонической ретинопатии, ангиоматозной пролиферации сетчатки, макулярной телеангиэктазии, неоваскуляризации радужки, внутриглазной неоваскуляризации, дегенерации сетчатки, кистозного макулярного отека (СМЕ), васкулита, отека диска зрительного нерва, ретинита, конъюнктивита (включая в себя инфекционный конъюнктивит и неинфекционный конъюнктивит), врожденного амавроза Лебера, увеита (включая в себя инфекционный и неинфекционный увеит), хориоидита, глазного гистоплазмоза, блефарита, сухости глаз, травматического повреждения глаз и болезни Шегрена.
17. Применение по п. 16, где офтальмологическое нарушение представляет собой AMD, DME, DR или RVO.
18. Применение по п. 16 или 17, где офтальмологическое нарушение представляет собой AMD.
19. Применение по любому из пп. 16-18, где AMD представляет собой влажную форму AMD.
20. Способ лечения офтальмологического заболевания, причем способ предусматривает введение терапевтического количества раствора композиции по п. 9 или 10 субъекту, нуждающемуся в таком лечении.
21. Способ по п. 20, при котором введение является внутриглазным.
22. Способ по п. 20, при котором композицию вводят с помощью инъекции в стекловидное тело субъекта.
23. Способ по п. 22, при котором композицию вводят с помощью инъекции с использованием иглы с калибром, составляющим 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 или 32.
24. Способ по п. 20, при котором офтальмологическое заболевание выбрано из группы, состоящей из возрастной макулярной дегенерации (AMD), макулярной дегенерации, макулярного отека, диабетического макулярного отека (DME) (включая в себя очаговый, нецентровый DME и диффузный, DME с вовлечением центра макулы), ретинопатии, диабетической ретинопатии (DR) (включая в себя пролиферативную DR (PDR), непролиферативную DR (NPDR) и высотную DR), других связанных с ишемией ретинопатий, ретинопатии недоношенных (ROP), окклюзии вен сетчатки (RVO) (включая в себя центральную (CRVO) и разветвленную (BRVO) формы), CNV (включая в себя миопическую CNV), неоваскуляризации роговицы, заболевания, ассоциированного с неоваскуляризацией роговицы, неоваскуляризации сетчатки, заболевания, ассоциированного с ретинальной/хориоидальной неоваскуляризацией, патологическая миопия, болезни фон Хиппель-Линдау, гистоплазмоза глаза, семейной экссудативной витреоретинопатии (FEVR), болезни Коутса, болезни Норри, синдрома остеопороза-псевдоглиомы (OPPG), субконъюнктивального кровоизлияния, рубеоза радужки, неоваскулярных заболеваний глаз, неоваскулярной глаукомы, пигментного ретинита (RP), гипертонической ретинопатии, ангиоматозной пролиферации сетчатки, макулярной телеангиэктазии, неоваскуляризации радужки, внутриглазной неоваскуляризации, дегенерации сетчатки, кистозного макулярного отека (СМЕ), васкулита, отека диска зрительного нерва, ретинита, конъюнктивита (включая в себя инфекционный конъюнктивит и неинфекционный конъюнктивит), врожденного амавроза Лебера, увеита (включая в себя инфекционный и неинфекционный увеит), хориоидита, глазного гистоплазмоза, блефарита, сухости глаз, травматического повреждения глаз и болезни Шегрена.
25. Способ по п. 24, при котором офтальмологическое заболевание представляет собой AMD, DME, DR или RVO.
26. Способ по п. 25, при котором офтальмологическое заболевание представляет собой AMD.
27. Способ по п. 26, при котором AMD представляет собой влажную форму AMD.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762475094P | 2017-03-22 | 2017-03-22 | |
US62/475,094 | 2017-03-22 | ||
PCT/US2018/023857 WO2018175788A1 (en) | 2017-03-22 | 2018-03-22 | Hydrogel cross-linked hyaluronic acid prodrug compositions and methods |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2019133326A RU2019133326A (ru) | 2021-04-22 |
RU2019133326A3 RU2019133326A3 (ru) | 2021-10-19 |
RU2812787C2 true RU2812787C2 (ru) | 2024-02-02 |
Family
ID=
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2530649C2 (ru) * | 2009-06-16 | 2014-10-10 | Фидиа Фармачеутичи С.П.А. | Способ синтеза конъюгатов гликозаминогликанов (gag) с биологически активными молекулами, полимерные конъюгаты и их соответствующие применения |
WO2016193371A1 (en) * | 2015-06-05 | 2016-12-08 | Sanofi | Prodrugs comprising an glp-1/glucagon dual agonist linker hyaluronic acid conjugate |
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2530649C2 (ru) * | 2009-06-16 | 2014-10-10 | Фидиа Фармачеутичи С.П.А. | Способ синтеза конъюгатов гликозаминогликанов (gag) с биологически активными молекулами, полимерные конъюгаты и их соответствующие применения |
WO2016193371A1 (en) * | 2015-06-05 | 2016-12-08 | Sanofi | Prodrugs comprising an glp-1/glucagon dual agonist linker hyaluronic acid conjugate |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
SHENDI D. et al. Tunable, bioactive protein conjugated hyaluronic acid hydrogel for neural engineering applications // Journal of materials chemistry, v. 4, N. 6, 2016, p. 2803-2818. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20230414770A1 (en) | Hydrogel cross-linked hyaluronic acid prodrug compositions and methods | |
US11891437B2 (en) | Methods of treating ocular disorders by administering a VEGF-binding antibody covalently linked to a hyaluronic acid polymer | |
US20210115124A1 (en) | Optimized variants of anti-vegf antibodies | |
JP2018531005A6 (ja) | 抗vegf抗体の最適化変異体 | |
RU2812787C2 (ru) | Пролекарственные композиции на основе гидрогеля поперечно-сшитой гиалуроновой кислоты и способы | |
RU2782355C2 (ru) | Оптимизированные композиции антител для лечения заболеваний глаз |