RU2810788C2

RU2810788C2 - Pharmaceutical compositions suitable for delivery to joint and their use in treatment of joint pain

Info

Publication number: RU2810788C2
Application number: RU2021109952A
Authority: RU
Inventors: Юнь-Лун ЦЭН; Шэуэ-Фан ШИХ; По-Чунь ЧАН; Лу ЧАН
Original assignee: ТиЭлСи БАЙОФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК.; Тайвэн Липосом Ко., Лтд.
Priority date: 2018-09-16
Filing date: 2019-09-16
Publication date: 2023-12-28

Abstract

FIELD: pharmaceutical industry.

SUBSTANCE: group of inventions is intended for the treatment of joint pain. A pharmaceutical composition suitable for delivery of the medicinal product to the joint for the treatment of joint pain, comprising a mixture of lipids with the first phospholipid, the second phospholipid and cholesterol in mol%: 29.5 to 87: 3 to 37.5: 10 to 33, respectively, and an effective amount of a steroid or a pharmaceutically acceptable salt thereof; wherein the first phospholipid is 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphatidylcholine (DOPC), 1-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphatidylcholine (POPC), soy phosphatidylcholine (SPC) or egg phosphatidylcholine ( EPC), and the second phospholipid is polyethylene glycol-distearoylphosphatidylethanolamine (PEG-DSPE) or dioleoylphosphatidylglycerol (DOPG), and the total amount of phospholipids ranges from 90 mcmol to 150 mcmol per 1 ml of the said pharmaceutical composition. Use of a pharmaceutical composition in joint injection for the treatment of joint pain, wherein the pharmaceutical composition has the above formulation. A method of treating joint pain, comprising intra-articularly administering to a subject in need of such treatment an effective amount of a pharmaceutical composition with the above formulation.

EFFECT: use of a group of inventions provides a balance between increased therapeutic efficacy and minimization of the side effects of a therapeutic agent, namely a steroid, with a suitable total amount of phospholipids in the range from 90 mcmol to 150 mcmol per 1 ml of the said pharmaceutical composition.

30 cl, 7 dwg, 7 tbl, 6 ex

Description

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИBACKGROUND OF THE ART

Область техникиField of technology

Настоящее раскрытие относится к фармацевтическим композициям, подходящим для суставной доставки, и способам лечения суставной боли с балансом между повышенной терапевтической эффективностью и минимизированным побочным действием терапевтического агента.The present disclosure relates to pharmaceutical compositions suitable for joint delivery and methods of treating joint pain with a balance between increased therapeutic efficacy and minimized side effects of the therapeutic agent.

Описание уровня техникиDescription of the prior art

Разработана терапия для регулирования суставной боли для уменьшения воспаления и боли в суставах путем локальной доставки терапевтического агента, в частности противовоспалительного средства, в суставную ткань. Показано, что она эффективна при временном облегчении суставной боли, связанной с остеоартритом и другими воспалительными расстройствами.Joint pain management therapies have been developed to reduce inflammation and joint pain by local delivery of a therapeutic agent, particularly an anti-inflammatory agent, to joint tissue. It has been shown to be effective in temporarily relieving joint pain associated with osteoarthritis and other inflammatory disorders.

Хотя общие способы доставки терапевтических агентов в суставную ткань хорошо описаны в литературе, они, как правило, имеют ограниченную эффективность. Различные факторы могут влиять на фармакокинетику и фармакодинамику терапевтического агента в суставе, включая, но без ограничения, химико-физические свойства выбранных терапевтических агентов, действие очищения частиц носителя макрофагами и характеристики платформы доставки.Although common methods for delivering therapeutic agents to joint tissue are well described in the literature, they generally have limited effectiveness. Various factors may influence the pharmacokinetics and pharmacodynamics of a therapeutic agent in the joint, including, but not limited to, the chemophysical properties of the selected therapeutic agents, the scavenging effect of carrier particles by macrophages, and the characteristics of the delivery platform.

Ввиду недостатков, обрисованных выше, существует потребность в улучшенной терапии для лечения суставной боли с пролонгированной терапевтической эффективностью (3-6 месяцев), усиленной терапевтической эффективностью, предпочтительно в сочетании с профилем уменьшенного побочного действия, особенно уменьшением повреждения хряща, повреждения хондроцитов и/или уровня кортизола в плазме. Настоящее изобретение направлено на эту потребность и другие потребности.In view of the disadvantages outlined above, there is a need for an improved therapy for the treatment of joint pain with prolonged therapeutic efficacy (3-6 months), enhanced therapeutic efficacy, preferably in combination with a reduced side effect profile, especially reduction in cartilage damage, chondrocyte damage and/or levels of plasma cortisol. The present invention addresses this need and other needs.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯSUMMARY OF THE INVENTION

Согласно одному воплощению настоящего раскрытия, предоставляется фармацевтическая композиция, подходящая для суставной доставки терапевтического агента, включающаяAccording to one embodiment of the present disclosure, there is provided a pharmaceutical composition suitable for joint delivery of a therapeutic agent, comprising

(а) смесь липидов, включающую один или несколько фосфолипидов, и(a) a mixture of lipids including one or more phospholipids, and

(b) эффективное количество терапевтического агента или его фармацевтически приемлемой соли;(b) an effective amount of a therapeutic agent or a pharmaceutically acceptable salt thereof;

причем общее количество одного или нескольких фосфолипидов в указанной фармацевтической композиции составляет примерно 20 мкмоль – примерно 150 мкмоль на 1 мл (миллилитр) фармацевтической композиции.wherein the total amount of one or more phospholipids in the specified pharmaceutical composition is about 20 µmol - about 150 µmol per 1 ml (milliliter) of the pharmaceutical composition.

Также предоставляются способы лечения суставной боли, включающие суставное введение субъекту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества фармацевтической композиции согласно настоящему раскрытию.Also provided are methods of treating joint pain, comprising jointly administering to a subject in need of such treatment an effective amount of a pharmaceutical composition according to the present disclosure.

Также предоставляется применение фармацевтической композиции для производства суставной инъекции для лечения суставной боли, причем фармацевтическая композиция включаетAlso provided is the use of a pharmaceutical composition for the production of a joint injection for the treatment of joint pain, the pharmaceutical composition comprising

причем общее количество одного или нескольких фосфолипидов на каждую указанную инъекцию составляет примерно 20 мкмоль – равное или меньше примерно 150 мкмоль, и причем эффективность указанной фармацевтической композиции усилена относительно эффективности фармацевтической композиции, имеющей больше примерно 150 мкмоль фосфолипида на каждую суставную инъекцию.wherein the total amount of one or more phospholipids for each said injection is about 20 µmol - equal to or less than about 150 µmol, and wherein the effectiveness of said pharmaceutical composition is enhanced relative to the effectiveness of a pharmaceutical composition having more than about 150 µmol of phospholipid for each joint injection.

Это краткое изложение не предназначено для идентификации ключевых или существенных особенностей заявляемого предмета изобретения. Предмет изобретения следует понимать путем обращения к соответствующим частям всего описания, любому или всем чертежам и каждому пункту формулы изобретения.This summary is not intended to identify key or essential features of the claimed subject matter. The subject matter of the invention should be understood by reference to relevant portions of the entire specification, any or all of the drawings, and each claim.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙBRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

Фиг.1 представляет собой график, показывающий профили высвобождения фармацевтических композиций согласно настоящей заявки с различными количествами фосфолипидов.Figure 1 is a graph showing the release profiles of pharmaceutical compositions according to the present application with different amounts of phospholipids.

Фиг.2 схематично иллюстрирует дизайн исследования.Figure 2 schematically illustrates the study design.

Фиг.3 схематично иллюстрирует планировку исследования.Figure 3 schematically illustrates the study design.

Фиг.4А и фиг.4В показывают оценку VAS, связанную с болью у субъекта, и среднее изменение у субъектов, получающих 6 мг и 12 мг DSP в фармацевтических композициях по настоящему раскрытию.FIG. 4A and FIG. 4B show the subject's pain-related VAS score and the mean change in subjects receiving 6 mg and 12 mg of DSP in the pharmaceutical compositions of the present disclosure.

Фиг.5А – фиг.5D представляют собой графики, показывающие средние изменения оценок WOMAC у субъектов, получающих 6 мг и 12 мг DSP в фармацевтических композициях по настоящему раскрытию.5A through 5D are graphs showing mean changes in WOMAC scores in subjects receiving 6 mg and 12 mg DSP in the pharmaceutical compositions of the present disclosure.

Фиг.6 показывает средние изменения оценок WOMAC у субъектов, получающих 6 мг, 12 мг и 18 мг DSP в фармацевтических композициях по настоящему раскрытию, в неделю 12, а также недели 16, 20 и 24.Figure 6 shows the mean changes in WOMAC scores for subjects receiving 6 mg, 12 mg, and 18 mg of DSP in the pharmaceutical compositions of the present disclosure at week 12, and weeks 16, 20, and 24.

Фиг.7 представляет собой график клинической визуальной оценки артрита (VAS) у субъектов, получающих фармацевтическую композицию по настоящему раскрытию, на животной модели, и испытываемые продукты вводили в день 16; и черная стрелка показывает дату лечения.FIG. 7 is a plot of clinical arthritis visual assessment (VAS) in subjects receiving a pharmaceutical composition of the present disclosure in an animal model, and test products were administered on day 16; FIG. and the black arrow indicates the date of treatment.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ВОПЛОЩЕНИЙDETAILED DESCRIPTION OF EMBODIMENTS

ОпределениеDefinition

При использовании выше и во всем раскрытии следующие далее термины, если не указано иное, следует понимать как имеющие указанные далее значения.As used above and throughout the disclosure, the following terms, unless otherwise specified, are to be understood to have the following meanings.

При использовании в настоящем описании формы в единственном числе («а», «an» и «the») включают ссылку на множественное число, если контекст четко не указывает иное.When used herein, the singular forms (“a,” “an,” and “the”) include a reference to the plural unless the context clearly indicates otherwise.

Все числа в настоящем описании можно понимать как модифицированные термином «примерно». При использовании в настоящем описании термин «примерно» относится к интервалу ±10% от конкретной величины.All numbers herein may be understood as modified by the term “about.” As used herein, the term “about” refers to a range of ±10% of a specific value.

Термин «суставная инъекция», используемый в настоящем описании, охватывает локальную инъекцию в место суставной боли или вблизи него, внутрисуставную инъекцию или периартикулярную инъекцию.The term "articular injection" as used herein includes local injection at or near the site of joint pain, intra-articular injection, or periarticular injection.

Термин «эффективное количество», используемый в настоящем описании, относится к дозе фармацевтической композиции, которая является достаточной для ослабления симптомов и признаков заболевания, вызывающего суставную боль, таких как боль, тугоподвижность и опухание состава, и для ослабления побочного действия, связанного с инъекцией терапевтического агента. Ослабление может составлять 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или любую степень снижения в промежутках.The term "effective amount" as used herein refers to a dose of the pharmaceutical composition that is sufficient to reduce the symptoms and signs of the disease causing joint pain, such as pain, stiffness and swelling of the composition, and to reduce the side effects associated with the injection of the therapeutic agent. The attenuation may be 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, or any degree of reduction in between.

Термины «лечащий», «подвергшийся лечению» или «лечение», используемые в настоящем описании, включают предупреждение (например, профилактику), замедление, остановку или реверсию прогрессирующего структурного повреждения ткани, вызывающего суставную боль. В настоящей заявке лечением называется способ ослабления, облегчения, ингибирования или устранения суставной боли или полного облегчения суставной боли при определении методами, известными в технике. Они включают, но без ограничения, клиническое обследование, визуализацию, анализ сыворотки крови или суставного аспирата (например, на ревматоидные факторы, скорость оседания эритроцитов) – это некоторые из них. Например, раскрытый способ рассматривается как лечение, если имеет место ослабление суставной боли у субъекта на 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100% по сравнению с болью у субъекта до лечения или у контрольных субъектов. Лечение включает однократную суставную инъекцию или несколько суставных инъекций в пределах желательного интервала.The terms “treating,” “treated,” or “treating” as used herein include preventing (eg, prophylaxis), slowing, stopping, or reversing progressive structural tissue damage causing joint pain. As used herein, treatment refers to a method of alleviating, alleviating, inhibiting, or eliminating joint pain, or completely relieving joint pain, as determined by methods known in the art. These include, but are not limited to, clinical examination, imaging, serum or joint aspirate analysis (eg, rheumatoid factors, erythrocyte sedimentation rate) to name a few. For example, a disclosed method is considered a treatment if there is a 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% improvement in the subject's joint pain. 100% compared to pain in the subject before treatment or in control subjects. Treatment involves a single joint injection or multiple joint injections within a desired interval.

Термин «субъект» может относиться к позвоночному, имеющему суставную боль, или к позвоночному, считающемуся нуждающимся в лечении суставной боли. Субъекты включают теплокровных животных, таких как млекопитающие, таких как приматы, и предпочтительнее человек. Приматы, не являющиеся человеком, также являются субъектами. Термин «субъект» включает домашних животных, таких как кошки, собаки и т.д., домашний скот (например, крупный рогатый скот, лошадей, свиней, овец, коз и т.д.) и лабораторных животных (например, мышей, кроликов, крыс, песчанок, морских свинок и т.д.). Таким образом, в настоящем описании рассматриваются медицинские препараты и ветеринарные применения.The term "subject" may refer to a vertebrate having joint pain, or to a vertebrate considered to be in need of treatment for joint pain. Subjects include warm-blooded animals such as mammals such as primates, and preferably humans. Non-human primates are also subjects. The term "subject" includes domestic animals such as cats, dogs, etc., livestock (e.g., cattle, horses, pigs, sheep, goats, etc.) and laboratory animals (e.g., mice, rabbits , rats, gerbils, guinea pigs, etc.). Thus, medicinal products and veterinary applications are contemplated herein.

Термин «суставная боль» относится к нарушению в суставе или состоянию сустава, которое включает воспаление и/или боль в одном или нескольких суставах. Термин «суставная боль» при использовании в настоящем описании охватывает различные типы и подтипы артрита различных этиологий и причин, или известных или неизвестных, включая, но без ограничения, ревматоидный артрит, остеоартрит, инфекционный артрит, псориатический артрит, подагрический артрит и артрит, связанный с красной волчанкой, или болезненность локализованных тканей, пораженных бурситом, теносиновитом, эпикондилитом, синовитом и/или другими расстройствами.The term "joint pain" refers to a joint disorder or joint condition that involves inflammation and/or pain in one or more joints. The term "joint pain" as used herein covers various types and subtypes of arthritis of various etiologies and causes, either known or unknown, including, but not limited to, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, infectious arthritis, psoriatic arthritis, gouty arthritis and arthritis associated with lupus erythematosus, or tenderness of localized tissues affected by bursitis, tenosynovitis, epicondylitis, synovitis and/or other disorders.

«Фармацевтически приемлемые соли» терапевтического агента по настоящему раскрытию являются солями кислого терапевтического агента, образованными с основаниями, а именно, солями присоединения оснований, такими как соли щелочных и щелочноземельных металлов, таких как натрий, литий, калий, кальций, магний, а также 4-аммониевые соли, такие как соли аммония, триметиламмония, диэтиламмония и трис(гидроксиметил)метиламмония. Подобным образом, соли присоединения кислот, таких как минеральные кислоты, органические карбоновые кислоты и органические сульфоновые кислоты, например, хлороводородной кислоты, метансульфоновой кислоты, малеиновой кислоты, также могут образовываться с щелочным терапевтическим агентом."Pharmaceutically acceptable salts" of a therapeutic agent of the present disclosure are salts of an acidic therapeutic agent formed with bases, namely, base addition salts such as alkali and alkaline earth metal salts such as sodium, lithium, potassium, calcium, magnesium, as well as 4 -ammonium salts, such as ammonium, trimethylammonium, diethylammonium and tris(hydroxymethyl)methylammonium salts. Likewise, addition salts of acids such as mineral acids, organic carboxylic acids and organic sulfonic acids, eg hydrochloric acid, methanesulfonic acid, maleic acid, can also be formed with the alkaline therapeutic agent.

Фармацевтическая композицияPharmaceutical composition

В одном аспекте настоящее раскрытие относится к фармацевтической композиции, включающей смесь липидов, включающую один или несколько фосфолипидов, и эффективное количество терапевтического агента или его фармацевтически приемлемой соли, причем общее количество фосфолипидов в каждом мл фармацевтической композиции составляет примерно 20 мкл – примерно 150 мкл на 1 мл.In one aspect, the present disclosure relates to a pharmaceutical composition comprising a lipid mixture comprising one or more phospholipids, and an effective amount of a therapeutic agent or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the total amount of phospholipids in each mL of the pharmaceutical composition is about 20 μL to about 150 μL per 1 ml.

В одном воплощении фармацевтические композиции, описанные в настоящем описании, поддерживают высвобождение терапевтического агента до 3 месяцев, 4 месяцев, 5 месяцев или шести месяцев, двух недель, трех недель, четырех недель, пяти недель, шести недель, семи недель, восьми недель, девяти недель, десяти недель, одиннадцати недель, двенадцати недель, тринадцати недель, четырнадцати недель, пятнадцати недель, шестнадцати недель, семнадцати недель, восемнадцати недель, девятнадцати недель, двадцати недель, двадцати одной недели, двадцати двух недель и двадцати трех недель.In one embodiment, the pharmaceutical compositions described herein support the release of the therapeutic agent for up to 3 months, 4 months, 5 months, or six months, two weeks, three weeks, four weeks, five weeks, six weeks, seven weeks, eight weeks, nine weeks, ten weeks, eleven weeks, twelve weeks, thirteen weeks, fourteen weeks, fifteen weeks, sixteen weeks, seventeen weeks, eighteen weeks, nineteen weeks, twenty weeks, twenty-one weeks, twenty-two weeks and twenty-three weeks.

В другом воплощении эффективность фармацевтической композиции, раскрытой в настоящем описании, является повышенной относительно эффективности фармацевтической композиции, имеющей больше 150 мкмоль фосфолипидов на 1 мл фармацевтической композиции. В еще одном воплощении фармацевтическая композиция, раскрытая в настоящем описании, поддерживает терапевтическую эффективность терапевтического агента и уменьшает побочное действие, связанное с терапевтическим агентом.In another embodiment, the effectiveness of a pharmaceutical composition disclosed herein is increased relative to the effectiveness of a pharmaceutical composition having greater than 150 μmol of phospholipids per ml of pharmaceutical composition. In yet another embodiment, a pharmaceutical composition disclosed herein maintains the therapeutic efficacy of a therapeutic agent and reduces side effects associated with the therapeutic agent.

В одном воплощении общее количество фосфолипидов составляет от примерно 50 мкмоль до меньше примерно 140 мкмоль на 1 мл фармацевтической композиции. В другом воплощении общее количество фосфолипидов составляет от примерно 45 мкмоль до меньше примерно 135 мкмоль на 1 мл фармацевтической композиции. В другом воплощении общее количество фосфолипидов составляет от примерно 50 мкмоль до меньше примерно 120 мкмоль на 1 мл фармацевтической композиции. В другом воплощении общее количество фосфолипидов составляет от примерно 60 мкмоль до меньше примерно 110 мкмоль на 1 мл фармацевтической композиции.In one embodiment, the total amount of phospholipids is from about 50 μmol to less than about 140 μmol per 1 ml of the pharmaceutical composition. In another embodiment, the total amount of phospholipids is from about 45 μmol to less than about 135 μmol per 1 ml of the pharmaceutical composition. In another embodiment, the total amount of phospholipids is from about 50 μmol to less than about 120 μmol per 1 ml of pharmaceutical composition. In another embodiment, the total amount of phospholipids is from about 60 μmol to less than about 110 μmol per 1 ml of pharmaceutical composition.

В одном воплощении фармацевтическая композиция также включает по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент, разбавитель, наполнитель, носитель, среду для активного ингредиента, консервант, криопротектор или их комбинацию.In one embodiment, the pharmaceutical composition also includes at least one pharmaceutically acceptable excipient, diluent, excipient, carrier, active ingredient vehicle, preservative, cryoprotectant, or a combination thereof.

В одном воплощении фармацевтическую композицию по настоящему раскрытию получают смешиванием одного или нескольких фосфолипидов с холестерином или без него и одного или нескольких буферов с образованием липосом, лиофилизацией липосом с одним или несколькими наполнителями с образованием смеси липидов в форме лепешки и восстанавливая лепешку смеси липидов раствором, содержащим терапевтический агент, с образованием водной суспензии.In one embodiment, the pharmaceutical composition of the present disclosure is prepared by mixing one or more phospholipids with or without cholesterol and one or more buffers to form liposomes, lyophilizing the liposomes with one or more excipients to form the lipid mixture in the form of a lozenge, and reconstituting the lipid mixture lozenge with a solution containing therapeutic agent, forming an aqueous suspension.

В другом воплощении фармацевтическую композицию по настоящему раскрытию получают смешиванием одного или нескольких фосфолипидов с холестерином или без него в растворителе, последующим удалением растворителя с образованием смеси липидов в форме порошка или пленки и восстановлением порошка или пленки смеси липидов раствором, содержащим терапевтический агент, с образованием водной суспензии. В другом воплощении фармацевтическую композицию по настоящему раскрытию получают смешиванием одного или нескольких фосфолипидов с холестерином или без него в растворителе с последующим вводом липидного раствора в водный раствор с образованием липосом. Затем липосомы уменьшают в размере фильтрацией через трековые поликарбонатные мембраны. Растворитель удаляют диафильтрацией против буфера с помощью полуавтоматической системы фильтрации в тангенциальном потоке (TFF). Затем диафильтрованный раствор липосом лиофилизуют до формы порошка, и восстанавливают порошок или пленку смеси липидов раствором, содержащим терапевтический агент. с образованием водной суспензии.In another embodiment, the pharmaceutical composition of the present disclosure is prepared by mixing one or more phospholipids with or without cholesterol in a solvent, then removing the solvent to form the lipid mixture in the form of a powder or film, and reconstituting the powder or film of the lipid mixture with a solution containing the therapeutic agent to form an aqueous suspensions. In another embodiment, the pharmaceutical composition of the present disclosure is prepared by mixing one or more phospholipids with or without cholesterol in a solvent and then adding the lipid solution to an aqueous solution to form liposomes. The liposomes are then reduced in size by filtration through tracked polycarbonate membranes. The solvent is removed by diafiltration against the buffer using a semi-automatic tangential flow filtration (TFF) system. The diafiltered liposome solution is then lyophilized to powder form, and the powder or film of the lipid mixture is reconstituted with a solution containing the therapeutic agent. with the formation of an aqueous suspension.

В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция по настоящему раскрытию включает примерно 10% - примерно 50% липидассоциированного терапевтического агента или примерно 50% - примерно 90% неассоциированного терапевтического агента. Термин «неассоциированная форма» относится к молекулам терапевтического агента, выделенным гель-фильтрацией из фракции фосфолипид/холестерин фармацевтической композиции, и обеспечивающим промежуточный высвобожденный компонент. В других воплощениях массовое отношение комбинации фосфолипида и холестерина к терапевтическому агенту составляет примерно 5-80 к 1. В еще одном воплощении массовое отношение комбинации фосфолипида и холестерина к терапевтическому агенту составляет примерно 5-40 к 1. Например, массовое отношение комбинации фосфолипида и холестерина к терапевтическому агенту может составлять примерно 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75 или 80 к 1.In some embodiments, the pharmaceutical composition of the present disclosure includes about 10% to about 50% lipid-associated therapeutic agent or about 50% to about 90% non-associated therapeutic agent. The term "unassociated form" refers to the therapeutic agent molecules isolated by gel filtration from the phospholipid/cholesterol fraction of the pharmaceutical composition and providing the intermediate released component. In other embodiments, the weight ratio of the combination of phospholipid and cholesterol to the therapeutic agent is about 5-80 to 1. In yet another embodiment, the weight ratio of the combination of phospholipid and cholesterol to the therapeutic agent is about 5-40 to 1. For example, the weight ratio of the combination of phospholipid and cholesterol to to the therapeutic agent may be approximately 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, or 80 to 1.

В некоторых воплощениях терапевтический агент фармацевтической композиции по настоящему раскрытию находится в концентрации по меньшей мере или примерно 10 мМ, 11 мМ, 12 мМ, 13 мМ, 14 мМ, 15 мМ, 16 мМ, 17 мМ, 18 мМ, 19 мМ, 20 мМ, 21 мМ, 22 мМ, 23 мМ, 24 мМ, 25 мМ, 26 мМ, 27 мМ, 28 мМ, 29 мМ, 30 мМ, 31 мМ, 32 мМ, 33 мМ, 34 мМ или 35 мМ; и необязательно колеблющейся от примерно 10 мМ до примерно 40 мМ, от примерно 15 мМ до примерно 40 мМ, 20 мМ – примерно 40 мМ, от примерно 15 мМ до примерно 35 мМ, от примерно 15 мМ до примерно 30 мМ, 15 мМ – примерно 25 мМ или от примерно 20 нМ до примерно 25 мМ.In some embodiments, the therapeutic agent of the pharmaceutical composition of the present disclosure is at a concentration of at least or about 10 mM, 11 mM, 12 mM, 13 mM, 14 mM, 15 mM, 16 mM, 17 mM, 18 mM, 19 mM, 20 mM , 21 mM, 22 mM, 23 mM, 24 mM, 25 mM, 26 mM, 27 mM, 28 mM, 29 mM, 30 mM, 31 mM, 32 mM, 33 mM, 34 mM, or 35 mM; and optionally ranging from about 10 mM to about 40 mM, from about 15 mM to about 40 mM, 20 mM to about 40 mM, from about 15 mM to about 35 mM, from about 15 mM to about 30 mM, 15 mM to about 25 mM or from about 20 nM to about 25 mM.

В некоторых воплощениях общее количество фармацевтической композиции для каждого введения колеблется от примерно 0,5 мл до примерно 1,5 мл и необязательно, примерно 1,0 мл.In some embodiments, the total amount of the pharmaceutical composition for each administration ranges from about 0.5 ml to about 1.5 ml, and optionally about 1.0 ml.

Смесь липидовLipid mixture

Термин «смесь липидов» фармацевтической композиции в настоящем описании относится к фосфолипиду или смеси фосфолипидов. Смесь липидов до добавления к фармацевтической композиции может находиться, но без ограничения, в форме пленки, лепешки, гранул или порошков.The term "lipid mixture" of a pharmaceutical composition as used herein refers to a phospholipid or mixture of phospholipids. The lipid mixture may be in the form of a film, lozenge, granules or powders before being added to the pharmaceutical composition.

В одном воплощении фосфолипид или смесь фосфолипидов, с холестерином или без него, предварительно формируют в липосомы перед дальнейшей переработкой в смесь липидов.In one embodiment, the phospholipid or mixture of phospholipids, with or without cholesterol, is preformed into liposomes before further processing into the lipid mixture.

В другом воплощении фосфолипид или смесь фосфолипидов, с холестерином или без него, не формируют предварительно в липосомы перед дальнейшей переработкой в смесь липидов.In another embodiment, the phospholipid or phospholipid mixture, with or without cholesterol, is not preformed into liposomes before further processing into the lipid mixture.

Липосомы имеют наноразмеры и включают липидный монослой или липидный бислой, окружающий внутренний несущий терапевтический агент водный компонент. Неограничивающие примеры липосом включают мелкие униламеллярные везикулы (SUV), крупные униламеллярные везикулы (LUV), мультивезикулярную липосому (MVL) и мультиламеллярные везикулы (MLV).Liposomes are nanosized and comprise a lipid monolayer or lipid bilayer surrounding an internal therapeutic agent-carrying aqueous component. Non-limiting examples of liposomes include small unilamellar vesicles (SUV), large unilamellar vesicles (LUV), multivesicular liposome (MVL), and multilamellar vesicles (MLV).

Смесь липидов можно получить из ряда липидов, способных или образовывать или внедряться в однослойную или двухслойную структуру. Липиды, используемые в настоящем раскрытии, включают один или несколько фосфолипидов, включая, но без ограничения, фосфатидилхолин (PC), фосфатидилглицерин (PG), фосфатидилэтаноламин (РЕ), фосфатидилсерин (PS), фосфатидную кислоту (РА), фосфатидилинозит (PI) или их комбинации. В некоторых воплощениях смесь липидов включает яичный фосфатидилхолин (ЕPC), яичный фосфатидилглицерин (ЕPG), яичный фосфатидилэтаноламин (ЕРЕ), яичный фосфатидилсерин (ЕPS), яичную фосфатидную кислоту (ЕРА), яичный фосфатидилинозит (ЕPI), соевый фосфатидилхолин (SPC), соевый фосфатидилглицерин (SPG), соевый фосфатидилэтаноламин (SРЕ), соевый фосфатидилсерин (SPS), соевую фосфатидную кислоту (SРА), соевый фосфатидилинозит (SPI) или их комбинации. В других воплощениях смесь липидов включает дипальмитоилфосфатидилхолин (DPPC), 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолин (DОPC), димиристоилфосфатидилхолин (DМPC), дипальмитоилфосфатидилглицерин (DPPG), диолеоилфосфатидилглицерин (DOPG), димиристоилфосфатидилглицерин (DМPG), гексадецилфосфохолин (НЕРС), гидрогенизированный соевый фосфатидилхолин (HSPC), дистеароилфосфатидилхолин (DSPC), дистеароилфосфатидилглицерин (DSPG), диолеоилфосфатидилэтаноламин (DOРЕ), пальмитоилстеароилфосфатидилхолин (PSPC), пальмитоилстеароилфосфатидилглицерин (PSPG), моноолеоилфосфатидилэтаноламин (MOPE), 1-пальмитоил-2-олеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолин (РОРС), полиэтиленгликоль-дистеароилфосфатидилэтаноламин (PEG-DSPE), дипальмитоилфосфатидилсерин (DPPS), 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилсерин (DOPS), димиристоилфосфатидилсерин (DМPS), дистеароилфосфатидилсерин (DSPS), дипальмитоилфосфатидную кислоту (DPPA), 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидную кислоту (DОPA), димиристоилфосфатидную кислоту (DМPA), дистеароилфосфатидную кислоту (DSPA), дипальмитоилфосфатидилинозит (DPPI), 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилинозит (DOPI), димиристоилфосфатидилинозит (DМPI), дистеароилфосфатидилинозит (DSPI) или их комбинации.The lipid mixture can be prepared from a variety of lipids capable of either forming or being incorporated into a monolayer or bilayer structure. Lipids used in the present disclosure include one or more phospholipids, including, but not limited to, phosphatidylcholine (PC), phosphatidylglycerol (PG), phosphatidylethanolamine (PE), phosphatidylserine (PS), phosphatidic acid (PA), phosphatidylinositol (PI) or their combinations. In some embodiments, the lipid mixture includes egg phosphatidylcholine (EPC), egg phosphatidylglycerol (EPG), egg phosphatidylethanolamine (EPE), egg phosphatidylserine (EPS), egg phosphatidic acid (EPA), egg phosphatidylinositol (EPI), soy phosphatidylcholine (SPC), soy phosphatidylglycerol (SPG), soy phosphatidylethanolamine (SPE), soy phosphatidylserine (SPS), soy phosphatidic acid (SPA), soy phosphatidylinositol (SPI) or combinations thereof. In other embodiments, the lipid mixture includes dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC), 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphatidylcholine (DOPC), dimyristoylphosphatidylcholine (DMPC), dipalmitoylphosphatidylglycerol (DPPG), dioleoylphosphatidylglycerol (DOPG), dimyristoylphosphatidylglycerol (DMPG), hexadecylphosphocholine ( HEPC), hydrogenated soy phosphatidylcholine (HSPC), distearoylphosphatidylcholine (DSPC), distearoylphosphatidylglycerol (DSPG), dioleoylphosphatidylethanolamine (DORE), palmitoylstearoylphosphatidylcholine (PSPC), palmitoylstearoylphosphatidylglycerol (PSPG), monooleoylphosphatidylethanolamine (MOPE), 1-palmitoyl-2- oleoyl-sn- glycero-3-phosphatidylcholine (POPC), polyethylene glycol-distearoylphosphatidylethanolamine (PEG-DSPE), dipalmitoylphosphatidylserine (DPPS), 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphatidylserine (DOPS), dimyristoylphosphatidylserine (DMPS), distearoylphosphatidylserine (DSPS), dipalmitoylphosphatidic acid (DPPA), 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphatidic acid (DOPA), dimyristoylphosphatidic acid (DMPA), distearoylphosphatidic acid (DSPA), dipalmitoylphosphatidylinositol (DPPI), 1,2-dioleoyl-sn-glycero -3-phosphatidylinositol (DOPI), dimyristoylphosphatidylinositol (DMPI), distearoylphosphatidylinositol (DSPI) or combinations thereof.

В некоторых воплощениях смесь липидов включает первый фосфолипид и второй фосфолипид. В некоторых воплощениях первый фосфолипид выбирают из группы, включающей EPC, EPE, SPC, SPE, DPPC, DOPC, DMPC, HEPC, HSPC, DSPC, DOPE, PSPC, MOPE, POPC; и второй фосфолипид выбирают из группы, включающей PG, PS, PA, PI, EPG, EPS, EPA, EPI, SPG, SPE, SPS, SPA, SPI, DPPG, DOPG, DMPG, DSPG, PSPG, DPPS, DOPS, DMPS, DSPS, DPPA, DOPA, DMPA, DSPA, DPPI, DOPI, DMPI, DSPI и гидрофильный полимер с длинной цепью гибкого нейтрального полимера с высокой степенью гидратации, присоединенный к молекуле фосфолипида. Примеры гидрофильного полимера включают, но без ограничения, полиэтиленгликоль (ПЭГ) с молекулярной массой примерно 2000 – примерно 5000 дальтон, метокси-ПЭГ (mPEG), ганглиозид GM₁, полисиаловую кислоту, полимолочную кислоту (также называемую полилактидом), полигликолевую кислоту (также называемую полигликолидом), сополимер полимолочной и полигликолевой кислоты, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, полиметоксазолин, полиэтилоксазолин, полигидроксиэтилоксазолин, полигидроксипропилоксазолин, полиаспартамид, полигидроксипропилметакриламид, полиметакриламид, полиметилакриламид, полидиметилакриламид, поливинилметиловый эфир, полигидроксиэтилакрилат, дериватизированные целлюлозы, такие как гидроксиметилцеллюлоза или гидроксиэтилцеллюлоза, и синтетические полимеры.In some embodiments, the lipid mixture includes a first phospholipid and a second phospholipid. In some embodiments, the first phospholipid is selected from the group consisting of EPC, EPE, SPC, SPE, DPPC, DOPC, DMPC, HEPC, HSPC, DSPC, DOPE, PSPC, MOPE, POPC; and the second phospholipid is selected from the group consisting of PG, PS, PA, PI, EPG, EPS, EPA, EPI, SPG, SPE, SPS, SPA, SPI, DPPG, DOPG, DMPG, DSPG, PSPG, DPPS, DOPS, DMPS, DSPS, DPPA, DOPA, DMPA, DSPA, DPPI, DOPI, DMPI, DSPI and a long chain hydrophilic polymer of flexible neutral polymer with a high degree of hydration attached to a phospholipid molecule. Examples of hydrophilic polymer include, but are not limited to, polyethylene glycol (PEG) with a molecular weight of about 2000 to about 5000 daltons, methoxy-PEG (mPEG), ganglioside GM ₁ , polysialic acid, polylactic acid (also called polylactide), polyglycolic acid (also called polyglycolide), copolymer of polylactic and polyglycolic acid, polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, polymethoxazoline, polyethyloxazoline, polyhydroxyethyloxazoline, polyhydroxypropyloxazoline, polyaspartamide, polyhydroxypropyl methacrylamide, polymethacrylamide, polymethylacrylamide, polydimethylacrylamide, polyvinyl methyl ether, polyhydroxyethyl acrylate, cellulose derivatives s, such as hydroxymethylcellulose or hydroxyethylcellulose, and synthetic polymers.

В одном воплощении смесь липидов также включает стерол. Стерол, используемый в настоящем раскрытии, особо не ограничивается, но его примеры включают холестерин, фитостерол (ситостерол, стигмастерол, фукостерол, спинастерол, брассикастерол и т.п.), эргостерол, холестанон, холестенон, копростенол, холестерил-2'-гидроксиэтиловый эфир и холестерил-4'-гидроксибутиловый эфир. Стерольный компонент смеси липидов, когда он присутствует, может представлять собой любой из тех стеролов, которые обычно используют в области получения липосом, липидных везикул или липидных частиц. В другом воплощении смесь липидов включает примерно 10% - примерно 33% холестерина, от примерно 15 до менее примерно 30 мол.% холестерина, примерно 18 – примерно 28 мол.% холестерина или примерно 20 – примерно 25 мол.% холестерина.In one embodiment, the lipid mixture also includes a sterol. The sterol used in the present disclosure is not particularly limited, but examples thereof include cholesterol, phytosterol (sitosterol, stigmasterol, fucosterol, spinasterol, brassicasterol, etc.), ergosterol, cholestanone, cholestenone, coprostenol, cholesterol-2'-hydroxyethyl ester and cholesteryl 4'-hydroxybutyl ether. The sterol component of the lipid mixture, when present, may be any of those sterols commonly used in the art of preparing liposomes, lipid vesicles or lipid particles. In another embodiment, the lipid mixture comprises about 10% to about 33% cholesterol, about 15 to less than about 30 mole% cholesterol, about 18 to about 28 mole% cholesterol, or about 20 to about 25 mole% cholesterol.

В одном примере воплощения смесь липидов включает первый фосфолипид, второй фосфолипид и стерол в отношении, в мол.%, 29,5% к 90%:3% к 37,5%:10% к 33%.In one embodiment, the lipid mixture comprises a first phospholipid, a second phospholipid, and a sterol in a mol% ratio of 29.5% to 90%:3% to 37.5%:10% to 33%.

В других воплощениях первый фосфолипид представляет собой DOPC, POPC, SPC или ЕРС, и второй фосфолипид представляет собой PEG-DSPE или DOPG.In other embodiments, the first phospholipid is DOPC, POPC, SPC or EPC, and the second phospholipid is PEG-DSPE or DOPG.

В одном воплощении смесь липидов не включает жирную кислоту или катионный липид (т.е., липид, несущий чистый положительный заряд физиологического рН).In one embodiment, the lipid mixture does not include a fatty acid or a cationic lipid (ie, a lipid bearing a net positive charge at physiological pH).

В некоторых воплощениях смесь липидов также может включать конъюгат липида с антителом или пептидом, который действует как таргетирующая частица, чтобы вследствие этого дать возможность липосомам специфически связываться с клеткой-мишенью, несущей молекулу-мишень. Неограничивающие примеры молекул-мишеней включают, но без ограничения, TNF-α и поверхностный антиген В-клеток, такой как CD20. Также можно использовать другие антигены, такие как CD19, HER-3, GD2, Gp75, белок CS1, мезотелин, еМус, CD22, CD4, CD44, CD45, CD28, CD3, CD123, CD138, CD52, CD56, CD74, CD30, Gp75, CD38, CD33, GD2, VEGF или TGF.In some embodiments, the lipid mixture may also include a lipid-antibody or peptide conjugate that acts as a targeting particle to thereby enable the liposomes to specifically bind to a target cell bearing the target molecule. Non-limiting examples of target molecules include, but are not limited to, TNF-α and B cell surface antigen such as CD20. Other antigens such as CD19, HER-3, GD2, Gp75, CS1 protein, mesothelin, eMyc, CD22, CD4, CD44, CD45, CD28, CD3, CD123, CD138, CD52, CD56, CD74, CD30, Gp75 can also be used , CD38, CD33, GD2, VEGF or TGF.

Липосомы, полученные в настоящем раскрытии, можно генерировать обычными методами, используемыми для получения везикул. Эти методы включают метод инъекции простого эфира (Deamer et al., Acad. Sci. (1978), 308: 250), метод с поверхностно-активными веществами (Brunner et al., Biochim. Biophys. Acta (1976), 455: 322), метод замораживания-оттаивания (Pick et al., Arc. Biochim. Biophys. (1981), 212: 186), метод испарения с обращением фаз (Szoka et al., Biochim. Biophys. Acta (1980), 601: 559, 71), метод обработки ультразвуком (Huang et al., Biochemistry (1969), 8: 344), метод впрыскивания этанола (Kremer et al., Biochemistry (1977), 16: 3932), метод экструзии (Hope et al., Biochim. Biophys. Acta (1985), 812: 55 65), метод с использованием пресса Френча (Barenholz et al., FEBS Lett. (1979), 99:120) и методы, подробно описанные в Szoka F.,Jr., et al., Ann. Rev. Biophys. Biogen., 9: 467 (1980). Все указанные выше способы являются базовыми технологиями для образования везикул, и эти способы включены в настоящее описание в качестве ссылок. После стерилизации предварительно сформированные липосомы помещают асептически в контейнер и затем лиофилизуют с образованием порошка или лепешки. В воплощении, где смесь липидов включает предварительно сформированные липосомы, указанные липосомы получают методом впрыскивания растворителя и последующей лиофилизацией с образованием смеси липидов. Смесь липидов включает один или несколько наполнителей. В одном воплощении смесь липидов также включает один или несколько буферирующих агентов.The liposomes prepared in the present disclosure can be generated by conventional methods used to produce vesicles. These methods include the ether injection method (Deamer et al., Acad. Sci. (1978), 308: 250), the surfactant method (Brunner et al., Biochim. Biophys. Acta (1976), 455: 322 ), freeze-thaw method (Pick et al., Arc. Biochim. Biophys. (1981), 212: 186), reverse phase evaporation method (Szoka et al., Biochim. Biophys. Acta (1980), 601: 559 , 71), sonication method (Huang et al., Biochemistry (1969), 8: 344), ethanol injection method (Kremer et al., Biochemistry (1977), 16: 3932), extrusion method (Hope et al., Biochim. Biophys. Acta (1985), 812: 55-65), the French press method (Barenholz et al., FEBS Lett. (1979), 99:120) and methods described in detail in Szoka F., Jr., et al., Ann. Rev. Biophys. Biogen., 9: 467 (1980). All of the above methods are basic technologies for the formation of vesicles, and these methods are incorporated herein by reference. After sterilization, the preformed liposomes are placed aseptically into a container and then lyophilized to form a powder or pellet. In an embodiment where the lipid mixture includes preformed liposomes, said liposomes are prepared by solvent injection and subsequent lyophilization to form the lipid mixture. The lipid mixture includes one or more excipients. In one embodiment, the lipid mixture also includes one or more buffering agents.

Наполнители включают, но без ограничения, полиолы или сахарные спирты, такие как маннит, глицерин, сорбит, декстроза, сахароза и/или трегалоза; аминокислоты, такие как гистидин, глицин. Одним из предпочтительных наполнителей является маннит.Excipients include, but are not limited to, polyols or sugar alcohols such as mannitol, glycerin, sorbitol, dextrose, sucrose and/or trehalose; amino acids such as histidine, glycine. One preferred excipient is mannitol.

Буферирующие агенты включают, но без ограничения, дигидрат одноосновного фосфата натрия и безводный двухосновный фосфат натрия.Buffering agents include, but are not limited to, sodium phosphate monobasic dihydrate and sodium phosphate dibasic anhydrous.

В одном воплощении, где смесь липидов включает липиды, которые предварительно не формируют в липосомы, смесь липидов можно получить путем растворения в подходящем органическом растворителе, включая, но без ограничения, этанол, метанол, трет-бутиловый спирт, простой эфир и хлороформ, и сушки нагреванием, выпариванием в вакууме, выпариванием в токе азота, лиофилизацией или другими известными способами удаления растворителя.In one embodiment, where the lipid mixture includes lipids that are not preformed into liposomes, the lipid mixture can be prepared by dissolving in a suitable organic solvent, including, but not limited to, ethanol, methanol, t-butyl alcohol, ether, and chloroform, and drying heating, evaporation under vacuum, evaporation under a stream of nitrogen, lyophilization or other known methods for removing the solvent.

Конкретные примеры получения смеси липидов в поддержку настоящего раскрытия будут описаны ниже.Specific examples of preparing a mixture of lipids in support of the present disclosure will be described below.

Терапевтический агентTherapeutic agent

Терапевтический агент может представлять собой стероид, нестероидное протвовоспалителное средство (NSAID), такое как индометацин, болезнь-модифицирующее антиревматическое средство (DMARD) или комбинацию двух или больше вышеуказанных средств, а также комбинацию одного или нескольких вышеуказанных средств с другими ингредиентами или соединениями, не перечисленными в настоящем документе. DMARD включает низкомолекулярные агенты, такие как метотрексат, лефлуномид, сульфасалазин, циклофосфамид, азатиоприн, циклоспорин А, d-пеницилламин, противомалярийные лекарства (например, гидроксихлорохин). DMARD также включает биологические вещества, такие как антагонист фактора некроза опухоли α (TNF-α) (например, этанерцепт, торговое наименование Энбрел, коммерчески доступен от Wyeth Pharmaceuticals, Inc., Collegeville, USA, адалимумаб, торговое наименование HUMIRA, коммерчески доступен от Abbott Laboratories, Abbott Park, Illinois, USA), антагонист рецептора интерлейкина-1, антагонист рецептора интерлейкина-6, анти-CD20 моноклональное антитело, CTLA-4-Ig, пептид RGD и т.п..The therapeutic agent may be a steroid, a non-steroidal anti-inflammatory drug (NSAID) such as indomethacin, a disease-modifying anti-rheumatic drug (DMARD), or a combination of two or more of the foregoing, as well as a combination of one or more of the above with other ingredients or compounds not listed in this document. DMARDs include small molecule agents such as methotrexate, leflunomide, sulfasalazine, cyclophosphamide, azathioprine, cyclosporine A, d-penicillamine, antimalarial drugs (eg, hydroxychloroquine). DMARDs also include biological agents such as a tumor necrosis factor α (TNF-α) antagonist (eg, etanercept, trade name Enbrel, commercially available from Wyeth Pharmaceuticals, Inc., Collegeville, USA; adalimumab, trade name HUMIRA, commercially available from Abbott Laboratories, Abbott Park, Illinois, USA), interleukin-1 receptor antagonist, interleukin-6 receptor antagonist, anti-CD20 monoclonal antibody, CTLA-4-Ig, RGD peptide, etc.

В одном примере воплощения терапевтический агент представляет собой хорошо растворимый в воде стероид, такой как дексаметазона натрия фосфат (DSP), в форме раствора. В другом примере воплощения терапевтический агент представляет собой хорошо растворимый в воде NSAID, такой как приемлемая соль индометацина. В еще одном примере воплощения терапевтический агент представляет собой хорошо растворимый в воде DMARD, такой как приемлемая соль метотрексата или антагонист TNF-α. В еще одном примере воплощения терапевтический агент не связан ковалентно с фосфолипидом или жирной кислотой, такой как пальмитат.In one embodiment, the therapeutic agent is a highly water-soluble steroid, such as dexamethasone sodium phosphate (DSP), in solution form. In another embodiment, the therapeutic agent is a highly water-soluble NSAID, such as a suitable indomethacin salt. In yet another embodiment, the therapeutic agent is a highly water-soluble DMARD, such as a suitable methotrexate salt or a TNF-α antagonist. In yet another embodiment, the therapeutic agent is not covalently linked to a phospholipid or fatty acid, such as palmitate.

Терапевтический агент по настоящему раскрытию можно смешать с ddH₂O или подходящим буфером в виде раствора, содержащего терапевтический агент, для суспендирования смеси липидов и получения фармацевтической композиции согласно настоящему раскрытию. В некоторых воплощениях терапевтический агент не связан ковалентно с липидом, таким как фосфолипид, или жирной кислотой, такой как пальмитат.The therapeutic agent of the present disclosure can be mixed with ddH ₂ O or a suitable buffer in the form of a solution containing the therapeutic agent to suspend the lipid mixture and obtain a pharmaceutical composition according to the present disclosure. In some embodiments, the therapeutic agent is not covalently linked to a lipid, such as a phospholipid, or a fatty acid, such as palmitate.

Терапевтический агент или агенты можно комбинировать с фармацевтически приемлемыми эксципиентами и другими ингредиентами, подходящими для фармацевтических препаратов (которые включают препараты для применения людьми и для животных, и препараты для исследовательских, экспериментальных и родственных применений). В некоторых воплощениях используют цитратный буфер, предпочтительно цитрат натрия. В других воплощениях используют хелатообразователь, предпочтительно ЭДТК.The therapeutic agent or agents may be combined with pharmaceutically acceptable excipients and other ingredients suitable for pharmaceutical preparations (which include preparations for human and animal use, and preparations for investigational, experimental and related uses). In some embodiments, a citrate buffer is used, preferably sodium citrate. In other embodiments, a chelating agent is used, preferably EDTA.

Терапевтический агент в фармацевтической композиции, описанной в настоящем описании, включает терапевтический агент, подходящий для суставной инъекции, или его фармацевтически приемлемую соль. В одном воплощении терапевтический агент подходит для внутрисуставной (IA) инъекции. Внутрисуставная инъекция включает следующие стадии: 1) идентификация и маркировка соответствующего места для инъекции в суставе, который лечат; 2) стерилизация места инъекции с использованием асептического метода и, необязательно, предоставление местной анестезии; 3) введение иглы в место инъекции в области сустава и 4) инъекция лекарственного средства в сустав. В некоторых воплощениях введение иглы необязательно может быть выполнено под ультразвуковым контролем. Аспирируют небольшое количество синовиальной жидкости для того, чтобы убедиться, что кончик иглы находится в суставе.The therapeutic agent in the pharmaceutical composition described herein includes a therapeutic agent suitable for joint injection, or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In one embodiment, the therapeutic agent is suitable for intra-articular (IA) injection. Intra-articular injection involves the following steps: 1) identifying and marking the appropriate injection site in the joint being treated; 2) sterilizing the injection site using an aseptic technique and, optionally, providing local anesthesia; 3) inserting a needle into the injection site in the joint area; and 4) injecting the drug into the joint. In some embodiments, needle insertion may optionally be performed under ultrasound guidance. A small amount of synovial fluid is aspirated to ensure that the needle tip is in the joint.

Стероид, используемый в настоящем раскрытии, включает любые встречающиеся в природе стероидные гормоны, синтетические стероиды и их производные. Примеры стероида включают, но без ограничения, кортизон, гидрокортизон, ацетат гидрокортизона, тиксокортола пивалат, флуоцинолон, преднизолон, метилпреднизолон, триамцинолона ацетонид, триамцинолон, мометазон, амцинонид, будезонид, дезонид, флуоцинонид, флуоцинолона ацетонид, галцинонид, бетаметазон, бетаметазона натрия фосфат, дексаметазон, дексаметазона натрия фосфат (DSP), флуокортолон, гидрокортизона 17 бутират, гидрокортизона 17 валерат, алкометазона дипропионат, бетаметазона валерат, бетаметазона дипропионат, предникарбат, клобетазона 17 бутират, клобетазона 17 пропионат, флуокортолона капроат, флуокортолона пивалат, флупреднидена ацетат, дифлупреднат, лотепреднол, флуорометолон, медризон, римексолон, беклометазон, клопреднол, кортивазол, дезоксикортон, дифлуорокортолон, фуклоролон, флуорокортизон, флуметазон, флунизолид, флуорокортолон, флурандренолон, мепреднизон, метилпреднизолон, параметазон или их смесь. В примере воплощения стероид является растворимым в воде стероидом. Растворимые в воде стероиды включают любые встречающиеся в природе стероидные гормоны, синтетические стероиды и их производные. Растворимые в воде стероиды включают, но без ограничения, кортизон, гидрокортизон, преднизолон, метилпреднизолон, преднизон, DSP, гидрокортизона 17 валерат, флуорокортизон, флудрокортизон, параметазон и плеренон. В одном примере в качестве раствора, содержащего терапевтический агент, можно использовать раствор DSP примерно 2 – примерно 100 мг/мл, примерно 4 – примерно 80 мг/мл, примерно 5 – примерно 60 мг/мл, примерно 6 – примерно 40 мг/мл, примерно 8 – примерно 20 мг/ мл, примерно 10 – примерно 16 мг/мл, как указано выше, для восстановления смеси липидов в форме лепешки, и получить фармацевтическую композицию по настоящему раскрытию. В другом примере воплощения стероид выбирают из стероидов группы В и группы С согласно классификации Coopman Classification (S. Coopman et al., “Identification of cross-reaction patterns in allergic contact dermatitis from topical corticosteroids”, Br. J. Dermatol., Jul: 121(1): 27-34).The steroid used in the present disclosure includes any naturally occurring steroid hormones, synthetic steroids, and derivatives thereof. Examples of the steroid include, but are not limited to, cortisone, hydrocortisone, hydrocortisone acetate, thixocortol pivalate, fluocinolone, prednisolone, methylprednisolone, triamcinolone acetonide, triamcinolone, mometasone, amcinonide, budesonide, desonide, fluocinonide, fluocinolone acetonide, galcinonide, betamethasone, betamethasone azone sodium phosphate, dexamethasone, dexamethasone sodium phosphate (DSP), fluocortolone, hydrocortisone 17 butyrate, hydrocortisone 17 valerate, alkomethasone dipropionate, betamethasone valerate, betamethasone dipropionate, prednicarbate, clobetasone 17 butyrate, clobetasone 17 propionate, fluocortolone caproate, fluocor tolone pivalate, fluprednidene acetate, difluprednate, loteprednol , fluorometholone, medrisone, rimexolone, beclomethasone, cloprednol, cortivazole, deoxycortone, difluorocortolone, fuclorolone, fluorocortisone, flumethasone, flunisolide, fluorocortolone, flurandrenolone, meprednisone, methylprednisolone, paramethasone or a mixture thereof. In an example embodiment, the steroid is a water-soluble steroid. Water-soluble steroids include any naturally occurring steroid hormones, synthetic steroids, and their derivatives. Water-soluble steroids include, but are not limited to, cortisone, hydrocortisone, prednisolone, methylprednisolone, prednisone, DSP, hydrocortisone 17 valerate, fluorocortisone, fludrocortisone, paramethasone and plerenone. In one example, the solution containing the therapeutic agent may be a DSP solution of about 2 to about 100 mg/mL, about 4 to about 80 mg/mL, about 5 to about 60 mg/mL, about 6 to about 40 mg/mL , about 8 - about 20 mg/ml, about 10 - about 16 mg/ml, as above, to reconstitute the lipid mixture in the form of a lozenge, and obtain the pharmaceutical composition of the present disclosure. In another embodiment, the steroid is selected from Group B and Group C steroids according to the Coopman Classification (S. Coopman et al., “Identification of cross-reaction patterns in allergic contact dermatitis from topical corticosteroids,” Br. J. Dermatol., Jul: 121(1): 27-34).

Фармацевтически приемлемые соли терапевтического агента включают нетоксичные соли, образованные с нетоксичными неорганическими или органическими основаниями. Например, нетоксичные соли могут образоваться с неорганическими основаниями, такими как гидроксид щелочного или щелочноземельного металла, например, калия, натрия, лития, кальция или магния; и органическими основаниями, такими как амин, и т.п.Pharmaceutically acceptable salts of a therapeutic agent include non-toxic salts formed with non-toxic inorganic or organic bases. For example, non-toxic salts can be formed with inorganic bases such as alkali or alkaline earth metal hydroxide, for example potassium, sodium, lithium, calcium or magnesium; and organic bases such as amine and the like.

Фармацевтически приемлемые соли терапевтического агента также включают нетоксичные соли, образованные с нетоксичными неорганическими или органическими кислотами. Примерами органических и неорганических кислот являются, например, хлороводородная, серная, фосфорная, уксусная, янтарная, лимонная, молочная, малеиновая, фумаровая, пальмитиновая, холевая, памовая, слизевая, D-глутаминовая, глутаровая, гликолевая, фталевая, винная, лауриновая, стеариновая, салициловая, сорбиновая, бензойная кислоты и подобные соединения.Pharmaceutically acceptable salts of a therapeutic agent also include non-toxic salts formed with non-toxic inorganic or organic acids. Examples of organic and inorganic acids are, for example, hydrochloric, sulfuric, phosphoric, acetic, succinic, citric, lactic, maleic, fumaric, palmitic, cholic, pamic, mucous, D-glutamic, glutaric, glycolic, phthalic, tartaric, lauric, stearic , salicylic, sorbic, benzoic acids and similar compounds.

Терапевтический агент можно вводить в эффективном количестве суставной инъекцией для ослабления симптомов или признаков артрита. В одном воплощении терапевтический агент относится к стероиду, в частности, внутрисуставному кортикостероиду (такому как кортикостероиды, включая, но без ограничения, гидрокортизона ацетат, метилпреднизолона ацетат, дексаметазона натрия ацетат, бетаметазона ацетат, преднизолон, триамицинолона ацетонид, триамицинолона гексацетонид), который может быть введен в дозе, колеблющейся от примерно 0,1 мг до примерно 300 мг, от примерно 0,1 мг до примерно 100 мг, от примерно 0,1 мг до примерно 20 мг, от примерно 0,1 мг до примерно 18 мг, от примерно 1 мг до примерно 300 мг, от примерно 1 мг до примерно 100 мг, от примерно 1 мг до примерно 20 мг, от примерно 1 мг до примерно 18 мг, от примерно 4 мг до примерно 300 мг, от примерно 4 мг до примерно 100 мг, от примерно 4 мг до примерно 20 мг, от примерно 4 мг до примерно 18 мг, от примерно 6 мг до примерно 18 мг, от примерно 6 мг до примерно 16 мг, от примерно 8 мг до примерно 16 мг, от примерно 6 мг до примерно 12 мг, от примерно 6 мг до примерно 16 мг на мл фармацевтической композиции.The therapeutic agent can be administered in an effective amount by joint injection to relieve symptoms or signs of arthritis. In one embodiment, the therapeutic agent refers to a steroid, particularly an intra-articular corticosteroid (such as corticosteroids, including, but not limited to, hydrocortisone acetate, methylprednisolone acetate, dexamethasone sodium acetate, betamethasone acetate, prednisolone, triamycinolone acetonide, triamycinolone hexacetonide), which may be administered at a dose ranging from about 0.1 mg to about 300 mg, from about 0.1 mg to about 100 mg, from about 0.1 mg to about 20 mg, from about 0.1 mg to about 18 mg, from about 1 mg to about 300 mg, about 1 mg to about 100 mg, about 1 mg to about 20 mg, about 1 mg to about 18 mg, about 4 mg to about 300 mg, about 4 mg to about 100 mg, from about 4 mg to about 20 mg, from about 4 mg to about 18 mg, from about 6 mg to about 18 mg, from about 6 mg to about 16 mg, from about 8 mg to about 16 mg, from about 6 mg to about 12 mg, from about 6 mg to about 16 mg per ml of pharmaceutical composition.

Эффективная дозировка терапевтического средства для человека может быть выше рекомендованной или стандартной дозировки, известной в технике; например, см. The Orthopaedic Journal of Sports Medicine, 3(5), 2325967115581163 (DOI: 10.1177/2325967115581163), включенный в настоящее описание в качестве ссылки. Например, в то время как рекомендованная эффективная и переносимая дозировка триамцинолона гексацетонида как терапевтического средства составляет 20 мг, дозировка терапевтического средства в композициях и способах по настоящему изобретению может составлять по меньшей мере 20 мг или выше.An effective dosage of a therapeutic agent for a human may be higher than the recommended or standard dosage known in the art; for example, see The Orthopedic Journal of Sports Medicine, 3(5), 2325967115581163 (DOI: 10.1177/2325967115581163), incorporated herein by reference. For example, while the recommended effective and tolerable dosage of triamcinolone hexacetonide as a therapeutic agent is 20 mg, the dosage of therapeutic agent in the compositions and methods of the present invention may be at least 20 mg or higher.

Дозировка вводимого терапевтического средства также будет зависеть от тяжести состояния, от которого лечат, определенного препарата и других клинических факторов, таких как масса и общее состояние реципиента и тяжесть побочного действия.The dosage of the therapeutic agent administered will also depend on the severity of the condition being treated, the specific drug, and other clinical factors such as the weight and general condition of the recipient and the severity of the side effect.

Применение фармацевтической композицииApplication of a Pharmaceutical Composition

Фармацевтическую композицию можно вводить при лечении одной дозой или лечении несколькими дозами, в течение периода времени, соответствующего состоянию, от которого лечат. Фармацевтическую композицию можно удобно вводить в соответствующие интервалы, например, один раз в неделю, две недели, шесть недель, месяц, два месяца, по меньшей мере 3 месяцев, по меньшей мере 6 месяцев или до тех пор, пока симптомы и признаки состояния (т.е., суставная боль) не будут устранены.The pharmaceutical composition can be administered in a single dose treatment or multiple dose treatment, for a period of time appropriate to the condition being treated. The pharmaceutical composition can be conveniently administered at appropriate intervals, for example, once a week, two weeks, six weeks, a month, two months, at least 3 months, at least 6 months, or until symptoms and signs of the condition (t ie, joint pain) will not be eliminated.

В классах воплощений при лечении несколькими дозами по меньшей мере две суставные инъекции вводят с интервалом дозирования, выбранным из группы, включающей две недели, три недели, четыре недели, пять недель, шесть недель, семь недель, восемь недель, девять недель, десять недель, одиннадцать недель, двенадцать недель, тринадцать недель, четырнадцать недель, пятнадцать недель, шестнадцать недель, семнадцать недель, восемнадцать недель, девятнадцать недель, двадцать недель, двадцать одну неделю, двадцать две недели и двадцать три недели.In multiple dose treatment classes of embodiments, at least two joint injections are administered at a dosing interval selected from the group consisting of two weeks, three weeks, four weeks, five weeks, six weeks, seven weeks, eight weeks, nine weeks, ten weeks, eleven weeks, twelve weeks, thirteen weeks, fourteen weeks, fifteen weeks, sixteen weeks, seventeen weeks, eighteen weeks, nineteen weeks, twenty weeks, twenty-one weeks, twenty-two weeks and twenty-three weeks.

В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию вводят в количестве, колеблющемся от примерно 0,5 мл до примерно 1,5 мл, от примерно 0,6 мл до примерно 1,2 мл, от примерно 0,8 мл до примерно 1,2 мл или примерно 1,0 мл на суставную инъекцию.In some embodiments, the pharmaceutical composition is administered in an amount ranging from about 0.5 ml to about 1.5 ml, from about 0.6 ml to about 1.2 ml, from about 0.8 ml to about 1.2 ml, or about 1.0 ml per joint injection.

Способ лечения суставной болиMethod for treating joint pain

Один аспект раскрытия относится к способу лечения суставной боли у субъекта, включающему введение эффективного количества фармацевтической композиции, описанной в настоящем описании, субъекту, нуждающемуся в этом, в соответствии с чем побочное действие, вызываемое терапевтическим агентом, ослабляется по сравнению с побочным действием у субъекта после введения стандартного препарата или препарата с немедленным высвобождением терапевтического средства, и/или эффективность и скорость высвобождения терапевтического средства из фармацевтической композиции повышается по сравнению с эффективностью и скоростью высвобождения из фармацевтической композиции с более, чем 150 мкмоль фосфолипида на каждый мл фармацевтической композиции. В одном воплощении субъект имеет артрит, такой как остеоартрит, ревматоидный артрит, острый подагрический артрит, псориатический артрит, реактивный артрит, артрит, вызванный синдромом Элерса-Данлоса, гемохроматозом, гепатитом, болезнью Лайма, болезнью Шегрена, тиреоидитом Хасимото, целиакией, нецелиакийной чувствительностью к глютену, воспалительным заболеванием кишечника, пурпурой Геноха-Шенлейна, гипериммуноглобулинемией D с возвратной лихорадкой, саркоидозом, болезнью Уиппла, периодическим синдромом, ассоциированным с TNF-рецептором, грануломатозом с полиангиитом, семейной средиземноморской лихорадкой или системной красной волчанкой.One aspect of the disclosure relates to a method of treating joint pain in a subject, comprising administering an effective amount of a pharmaceutical composition described herein to a subject in need thereof, whereby the side effect caused by the therapeutic agent is attenuated relative to the side effect in the subject after administration of a standard or immediate release formulation of the therapeutic agent, and/or the efficacy and rate of release of the therapeutic agent from the pharmaceutical composition is increased compared to the efficacy and rate of release from the pharmaceutical composition with more than 150 μmol of phospholipid per ml of the pharmaceutical composition. In one embodiment, the subject has arthritis, such as osteoarthritis, rheumatoid arthritis, acute gouty arthritis, psoriatic arthritis, reactive arthritis, arthritis caused by Ehlers-Danlos syndrome, hemochromatosis, hepatitis, Lyme disease, Sjogren's disease, Hashimoto's thyroiditis, celiac disease, non-celiac sensitivity to gluten, inflammatory bowel disease, Henoch-Schönlein purpura, hyperimmunoglobulinemia D with relapsing fever, sarcoidosis, Whipple's disease, TNF receptor-associated periodic syndrome, granulomatosis with polyangiitis, familial Mediterranean fever, or systemic lupus erythematosus.

Эффективность относят к способности терапевтического средства вызывать благоприятную клиническую реакцию при заболевании. Эффективность также относят к ослаблению клинического признака, такого как боль в суставах, болезненность, преходящая утренняя скованность и крепитация при движении сустава, что приводит к неустойчивости и физической нетрудоспособности. В одном воплощении эффективность терапевтического средства определяется показателем WOMAC OA, оценкой VAS или подобным образом. В некоторых воплощениях пролонгированное стационарное высвобождение терапевтического агента из фармацевтической композиции, описанной в настоящем описании, не будет вызывать побочного действия, включая, но без ограничения, повреждение или разрушение суставного хряща, такое как апоптоз хондроцитов, потеря протеогликана, кисты в суставном хряще, повреждение или разрушение суставного хряща. Ослабление побочного действия у субъекта, описанное в настоящем описании, может колебаться от 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100% при сравнении с субъектом, получившим инъекцию терапевтического средства, не включенного в препарат с фармацевтическими композициями, описанными в настоящем описании, т.е., без смеси липидов. Это неожиданно, так как хорошо известно, что воздействие терапевтического агента, такого как триамцинолона ацетат (ТСА), вызывает повреждение или разрушение суставного хряща.Efficacy refers to the ability of a therapeutic agent to produce a favorable clinical response in a disease. Efficacy is also attributed to the reduction of clinical signs such as joint pain, tenderness, transient morning stiffness and crepitus on joint movement, which leads to instability and physical disability. In one embodiment, the effectiveness of the therapeutic agent is determined by the WOMAC OA score, VAS score, or the like. In some embodiments, sustained steady-state release of a therapeutic agent from a pharmaceutical composition described herein will not cause side effects, including, but not limited to, damage or destruction of articular cartilage, such as chondrocyte apoptosis, proteoglycan loss, articular cartilage cysts, damage or destruction of articular cartilage. The reduction in side effects in a subject described herein may range from 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% or 100% when compared with a subject receiving an injection of a therapeutic agent not formulated with the pharmaceutical compositions described herein, i.e., without a mixture of lipids. This is unexpected since it is well known that exposure to a therapeutic agent such as triamcinolone acetate (TCA) causes damage or destruction of articular cartilage.

Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно использовать в комбинации с любым из различных дополнительных химических компонентов, включая, но без ограничения, аналгетики (например, бупивакаин, ропивакаин или лидокаин) или препараты гиалуроновой кислоты (например, Synvise One). В некоторых воплощениях заявленная фармацевтическая композиция и дополнительные химические компоненты включены в единую терапевтическую композицию, и заявленную фармацевтическую композицию и дополнительные химические компоненты вводят одновременно. С другой стороны, заявленная фармацевтическая композиция и дополнительные химические компоненты отделены друг от друга, например, включены в отдельную фармацевтическую композицию, и заявленную фармацевтическую композицию и дополнительные химические компоненты в схеме лечения вводят одновременно или в различное время, одним и тем же путем или различными путями, в виде одной дозы или нескольких доз.The pharmaceutical composition of the present invention can be used in combination with any of various additional chemical components, including, but not limited to, analgesics (eg, bupivacaine, ropivacaine or lidocaine) or hyaluronic acid preparations (eg, Synvise One). In some embodiments, the claimed pharmaceutical composition and additional chemical components are included in a single therapeutic composition, and the claimed pharmaceutical composition and additional chemical components are administered simultaneously. On the other hand, the claimed pharmaceutical composition and the additional chemical components are separated from each other, for example, included in a separate pharmaceutical composition, and the claimed pharmaceutical composition and the additional chemical components in the treatment regimen are administered simultaneously or at different times, by the same route or by different routes , in the form of a single dose or several doses.

Приведенные далее примеры дополнительно поясняют настоящее раскрытие. Эти примеры предназначены только для пояснения настоящего раскрытия и не рассматриваются как ограничивающие.The following examples further illustrate the present disclosure. These examples are intended to illustrate the present disclosure only and are not intended to be limiting.

Пример 1. Получение смеси липидовExample 1. Preparation of a mixture of lipids

Липиды, включая DOPC, DOPG и холестерин, объединяют в соотношении, в мольных процентах, 67,5:7,5:25 и растворяют в 99,9% этаноле при примерно 40°С в колбе с образованием липидного раствора. Для растворения липидов используют настольную ультразвуковую ванну.Lipids, including DOPC, DOPG and cholesterol, are combined in a mole percentage ratio of 67.5:7.5:25 and dissolved in 99.9% ethanol at approximately 40°C in a flask to form a lipid solution. A tabletop ultrasonic bath is used to dissolve lipids.

Раствор липидов добавляют к 1,0 мМ раствору фосфата натрия при 100 мл/мин с помощью перистальтического насоса для образования пролипосомной суспензии. Затем пролипосомную суспензию пропускают 6-10 раз через поликарбонатную мембрану с порами размером 0,2 мкм. Получают липосомную смесь, и липосомы имеют средний размер везикул примерно 120-140 нм (измеренный с помощью Malvern ZetaSizer Nano ZS-90, Malvern Instruments Ltd., Worcestershire, UK).The lipid solution is added to 1.0 mM sodium phosphate solution at 100 ml/min using a peristaltic pump to form a proliposomal suspension. The proliposome suspension is then passed 6-10 times through a polycarbonate membrane with 0.2 μm pore size. A liposome mixture is prepared and the liposomes have an average vesicle size of approximately 120-140 nm (measured using a Malvern ZetaSizer Nano ZS-90, Malvern Instruments Ltd., Worcestershire, UK).

Липосомную смесь диализуют и концентрируют с помощью системы фильтрации в тангециальном потоке с минимодулем ультрафильтрации Millipore Pellicon 2 Mini Ultrafiltration Module Biomax-100C (0,1 м²) (Millipore Corporation, Billerica, MA, USA) и затем стерилизуют с использованием стерильного фильтра 0,2 мкм.The liposome mixture is dialyzed and concentrated using a tangential flow filtration system with a Millipore Pellicon 2 Mini Ultrafiltration Module Biomax-100C (0.1 m ² ) (Millipore Corporation, Billerica, MA, USA) and then sterilized using a sterile filter 0. 2 microns.

Концентрацию липидов в фильтрованной липосомной смеси определяют количественно анализом с фосфором, и фильтрованную липосомную смесь соединяют с маннитом в концентрации 2% маннита и затем снова стерилизуют с использованием стерильного фильтра 0,2 мкм. Затем стерильную липосомную смесь подвергают лиофилизации, и получают смесь липидов в виде лепешки.The lipid concentration of the filtered liposome mixture is quantified by phosphorus assay, and the filtered liposome mixture is combined with mannitol at a concentration of 2% mannitol and then sterilized again using a sterile 0.2 μm filter. The sterile liposome mixture is then lyophilized to produce a lipid mixture in the form of a cake.

Пример 2. Получение фармацевтической композицииExample 2. Preparation of a pharmaceutical composition

Фармацевтическую композицию согласно настоящему раскрытию получают, смешивая смесь липидов, описанную в примере 1, с раствором DSP, который включает 13,2 мг/мл дексаметазона натрия фосфата (DSP) (C₂₂H₂₈FNa₂O₈P; молекулярная масса 516,41 г/л) и 4 мг/мл цитрата натрия, используя впоследствие как фармацевтическую композицию с DSP, в соответствии с чем каждый мл фармацевтической композиции включает примерно 12,0 мг/мл DSP и 90 мкмоль фосфолипида.The pharmaceutical composition according to the present disclosure is prepared by mixing the lipid mixture described in Example 1 with a DSP solution that includes 13.2 mg/ml dexamethasone sodium phosphate (DSP) (C ₂₂ H ₂₈ FNa ₂ O ₈ P; molecular weight 516.41 g/l) and 4 mg/ml sodium citrate, subsequently used as a pharmaceutical composition with DSP, whereby each ml of the pharmaceutical composition includes approximately 12.0 mg/ml DSP and 90 μmol phospholipid.

Пример 3. Регулируемое высвобождение из фармацевтической композицииExample 3: Controlled release from a pharmaceutical composition

Проводят клинические испытания для исследования высвобождения in vitro в фазе II в интервале доз, фармацевтические композиции примера 2 с различными дозами DSP инъецируют в синтетическую синовиальную жидкость человека (hsSF), и в различные моменты времени измеряют количество высвобожденного DSP.In a Phase II dose-ranging in vitro release study, pharmaceutical compositions of Example 2 with various doses of DSP were injected into human synovial fluid (hsSF) and the amount of DSP released was measured at various time points.

Синтетические синовиальные жидкости человека (hsSF)Human synovial fluid (hsSF)

Композиция синтетической синовиальной жидкости человека приводится в таблице 1. Коротко, бычий сывороточный альбумин (BSA) растворяют в 0,9% обычном физиологическом растворе до концентрации 30 мг/мл. К раствору BSA добавляют 1% гиалуроновой кислоты (НА, Mw=1,35x10⁶ Да), и смесь осторожно перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов для того, чтобы убедиться в полном растворении НА. Величина рН раствора 7,3. Синтетические синовиальные жидкости человека содержат 0,2% азида натрия для ингибирования роста бактерий.The composition of synthetic human synovial fluid is given in Table 1. Briefly, bovine serum albumin (BSA) is dissolved in 0.9% normal saline to a concentration of 30 mg/ml. 1% hyaluronic acid (HA, Mw=1.35x10 ⁶ Da) is added to the BSA solution and the mixture is gently stirred at room temperature for 2 hours to ensure complete dissolution of HA. The pH value of the solution is 7.3. Synthetic human synovial fluids contain 0.2% sodium azide to inhibit bacterial growth.

Таблица 1. Синтетическая синовиальная жидкость человека (hsSF)Table 1. Human synovial fluid (hsSF)

МатериалMaterial НА (1,35x10⁶ Да)ON (1.35x10 ⁶ Yes) BSAB.S.A. 0,9% обычный физиол.р-р0.9% regular physiol solution Qty (единица:г)Qty (unit:g) 11 33 9696

Высвобождение DSP из фармацевтических композиций in vitroIn vitro release of DSP from pharmaceutical compositions

Высвобождение DSP из липосом фармацевтической композиции с DSP измеряют путем обнаружения изменений в изменении эффективности захвата в различные временные интервалы. Коротко, различные количества фармацевтической композиции с DSP суспендируют с синтетическими синовиальными жидкостями при заданной температуре (37°С) и перемешивают с помощью стержня для перемешивания при 150 об/мин (таблица 2). Через соответствующие временные интервалы суспензию собирают, и собирают свободный DSP, элюируя суспензию через колонку SPE, следуя процедурам, описанным ниже для измерения интенсивности захвата.The release of DSP from liposomes of the DSP pharmaceutical composition is measured by detecting changes in the change in entrapment efficiency at different time intervals. Briefly, various amounts of the pharmaceutical composition with DSP are suspended with synthetic synovial fluids at a predetermined temperature (37°C) and mixed using a stirring rod at 150 rpm (Table 2). At appropriate time intervals, the suspension is collected, and free DSP is collected by eluting the suspension through an SPE column, following the procedures described below for measuring capture intensity.

Таблица 2table 2

Группа №Group No. Фармацевтическая композиция с DSP (12 мг/мл DSP)Pharmaceutical composition with DSP (12 mg/ml DSP) Синтетичкская синовиальная жидкость (мл)Synthetic synovial fluid (ml) млml Количества DSP (мг)Amounts of DSP (mg) 11 22 2424 77 22 1,51.5 1818 33 11 1212 44 0,670.67 88 55 0,50.5 66

Эффективность захватаCapture efficiency

Интенсивность поглощения эффективности захвата собранных образцов определяют после выделения свободного DSP из липосом с использованием картриджа SPE. Колонку SPE подготавливают для использования, смачивая содержимое 1 мл метанола и затем 1 мл дистиллированной воды. Затем колонку уравновешивают 1 мл обычного физиологического раствора перед загрузкой собранных суспензий. После загрузки суспензий колонку SPE промывают 3 мл дистиллированной воды, и элюируют свободный DSP 2 мл буфера для элюирования (содержащего 2 М NH₄OAc/MeOH/CAN = 2/9/9 (об./об.). Элюированную фракцию, содержащую свободный DSP, контролируют с использованием UV-vis спетрофотометра при 240 нм. Эффективность захвата (%) вычисляют как [1-(Ifree/12)]×100, где 12 представляет собой теоретическую величину (мг/мл) DSP в растворе образца, и Ifree представляет собой концентрацию свободного DSP.The absorption intensity of the entrapment efficiency of the collected samples is determined after the release of free DSP from the liposomes using an SPE cartridge. The SPE column is prepared for use by wetting the contents with 1 ml of methanol and then 1 ml of distilled water. The column is then equilibrated with 1 mL of normal saline before loading the collected suspensions. After loading the suspensions, the SPE column is washed with 3 ml of distilled water, and the free DSP is eluted with 2 ml of elution buffer (containing 2 M NH ₄ OAc/MeOH/CAN = 2/9/9 (v/v). The eluted fraction containing the free DSP is monitored using a UV-vis spectrophotometer at 240 nm. Capture efficiency (%) is calculated as [1-(Ifree/12)]×100, where 12 represents the theoretical value (mg/ml) of DSP in the sample solution, and Ifree represents the concentration of free DSP.

Результаты показывают, что регулирование количества фосфолипидов может регулировать высвобождение DSP (таблица 3 и фиг.1). Без желания привязываться к какой-либо теории, полагают, что относительно высокая доза DSP с высоким количеством липидов в фармацевтической композиции (композиция №5 в таблице 3) вызывает медленное высвобождение небольших количеств DSP в среду сустава, в то время как более низкая доза DSP с меньшим количеством липидов не может продуцировать достаточно устойчивый уровень свободного DSP со временем. В сочетании с наблюдением в клиническом испытании в фазе II с интервалом доз, желательной для регулируемого высвобождения терапевтического агента для применения при лечении суставной боли считается фармацевтическая композиция с подходящим количеством фосфолипидов в фармацевтической композиции. На основании того, что объем синовиальной жидкости обычно колеблется от 1 мл до 70 мл, для достижения желательной эффективной концентрации липидов около 90 мкмоль на 7 мл синовиальной жидкости практическая концентрация фосфолипидов на каждый мл фармацевтической композиции колеблется от 20 мкмоль до 150 мкмоль.The results indicate that regulating the amount of phospholipids can regulate the release of DSP (Table 3 and Figure 1). Without wishing to be bound by any theory, it is believed that the relatively high dose of high lipid DSP in the pharmaceutical composition (Formulation No. 5 in Table 3) causes the slow release of small amounts of DSP into the joint environment, while the lower dose of DSP with fewer lipids cannot produce sufficiently stable levels of free DSP over time. In combination with observation in a phase II clinical trial with a dose interval, a pharmaceutical composition with a suitable amount of phospholipids in the pharmaceutical composition is considered desirable for the controlled release of a therapeutic agent for use in the treatment of joint pain. Based on the fact that the volume of synovial fluid typically ranges from 1 ml to 70 ml, to achieve the desired effective lipid concentration of about 90 µmol per 7 ml of synovial fluid, the practical concentration of phospholipids per ml of the pharmaceutical composition ranges from 20 µmol to 150 µmol.

Таблица 3. Профиль высвобождения in vitro фармацевтической композиции согласно настоящей заявкиTable 3. In vitro release profile of the pharmaceutical composition according to this application

№No. Все фосфолип. (мкмоль)All phospholip. (μmol) Весь DSP (мг)Whole DSP (mg) Концентрация фосфолип. в синтетических синовиальных жидкостях человека (мМ)Phospholipid concentration. in synthetic human synovial fluids (mM) Высвобождение DSP из липосомы (процент)Release of DSP from liposome (percentage) Высвобождение DSP из липосомы (мг/мл)Release of DSP from liposome (mg/ml) День 0Day 0 День 1Day 1 День 3Day 3 День 0Day 0 День 1Day 1 День 3Day 3 55 180,62180.62 2424 20,0720.07 0,0%0.0% 0,0%0.0% -0,7%-0.7% 0,0000.000 0,0000.000 -0,019-0.019 44 135,37135.37 1818 15,9415.94 0,0%0.0% -0,4%-0.4% 1,1%1.1% 0,0000.000 -0,008-0.008 0,0230.023 33 90,3190.31 1212 11,2911.29 0,0%0.0% 3,0%3.0% 4,4%4.4% 0,0000.000 0,0450.045 0,0670.067 22 60,5160.51 88 7,897.89 0,0%0.0% 4,1%4.1% 6,9%6.9% 0,0000.000 0,0430.043 0,0730.073 11 45,1645.16 66 6,026.02 0,0%0.0% 7,1%7.1% 13,5%13.5% 0,0000.000 0,0570.057 0,1080.108

Пример 4. Рандомизированное открытое исследование эффективности и безопасности фармацевтической композиции с дексаметазона натрия фосфатом (DSP) на пациентах с остеоартритом коленных суставовExample 4. Randomized, open-label study of the effectiveness and safety of a pharmaceutical composition with dexamethasone sodium phosphate (DSP) in patients with osteoarthritis of the knee joints

МетодMethod

Проводят 12-недельное рандомизированное открытое, параллельное испытание в фазе I/II с введением однократной дозы в 3 исследовательских пунктах в Тайбэе, Тайвань. Схема дизайна исследования показана на фиг.2. Это исследование перед регистрацией любого субъекта одобрено местным Институциональным наблюдательным советом в каждом исследовательском пункте. Это исследование выполняется в соответствии с принципами руководства для клинических исследований, определенными в U.S. 21 CFR Part 312.20, Хельсинской декларации и Международной конференцией по гармонизации технических требований к фармацевтической продукции для применения человеком (ICH), согласовавшей трехстороннее руководство по надлежащей клинической практике. Протокол исследования зарегистрирован в ClinicalTrial.gov (NCT02803307). От всех пациентов получено письменное согласие на участие в этом испытании.A 12-week, randomized, open-label, parallel, single-dose, phase I/II trial was conducted at 3 study sites in Taipei, Taiwan. A flowchart of the study design is shown in Figure 2 . This study was approved by the local Institutional Review Board at each study site before enrollment of any subject. This study is being conducted in accordance with the principles of clinical research guidelines as defined by the U.S. 21 CFR Part 312.20, the Declaration of Helsinki, and the International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Pharmaceutical Products for Human Use (ICH), which agreed upon tripartite guidance on good clinical practice. The study protocol is registered at ClinicalTrial.gov (NCT02803307). Written consent to participate in this trial was obtained from all patients.

В исследование набирают пациентов в возрасте по меньшей мере 20 лет и имеющих задокументированный диагноз остеоартрит (ОА) коленных суставов в течение по меньшей мере 6 месяцев до скринингового визита. Диагноз ОА основывается на клинических и радиологических критериях American College of Rheumatology for Classification of Idiopathic OA of the knee (Arthritis Rheum., 1986; 29: 1039-49). Кроме того, в исследовании коленных суставов требуются подходящие пациенты, имеющие по меньшей мере 2 степень тяжести в исследуемом колене на основании шкалы оценки Келлгрена-Лоуренса (KL) (Br. J. Ind. Med., 1952; 9: 197-207), связанную с пациентом оценку боли по визуальной аналоговой шкале (VAS) ≥4 вначале и способность понимать протокол исследования и согласие для участия. Пациентов исключают, если они используют системные кортикостероиды в течение 30 дней до начала или аналгетики NSAID или реабилитационную терапию в пределах 7 дней до начала; имеют в истории болезни синдром Рейтера, системную красную волчанку, синдром Шегрена, системный склероз, воспалительный миозит, смешанное заболевание соединительной ткани, палиндромный ревматизм, ревматоидный артрит, псориатический артрит, анкилозирующий спондилит, болезнь Бехчета, артрит, связанный с воспалительным заболеванием кишечника, саркоидоз, васкулит, криоглобулинемию или амилоидоз; или имеют перед введением дозы клинические признаки и симптомы острой инфекции или связанное с инфекцией воспаление в другом колене.The study recruited patients who were at least 20 years of age and had a documented diagnosis of osteoarthritis (OA) of the knee for at least 6 months prior to the screening visit. The diagnosis of OA is based on the clinical and radiological criteria of the American College of Rheumatology for Classification of Idiopathic OA of the knee (Arthritis Rheum., 1986; 29: 1039–49). In addition, the knee study requires eligible patients having at least grade 2 severity in the knee under study based on the Kellgren-Lawrence (KL) grading scale (Br. J. Ind. Med. 1952; 9: 197-207) a patient-related visual analogue scale (VAS) pain score of ≥4 at baseline and the ability to understand the study protocol and consent to participate. Patients were excluded if they used systemic corticosteroids within 30 days before initiation or NSAID analgesics or rehabilitation therapy within 7 days before initiation; have a medical history of Reiter's syndrome, systemic lupus erythematosus, Sjögren's syndrome, systemic sclerosis, inflammatory myositis, mixed connective tissue disease, palindromic rheumatism, rheumatoid arthritis, psoriatic arthritis, ankylosing spondylitis, Behçet's disease, arthritis associated with inflammatory bowel disease, sarcoidosis, vasculitis, cryoglobulinemia or amyloidosis; or have pre-dose clinical signs and symptoms of acute infection or infection-related inflammation in the other knee.

В целом скринируют 46 пациентов с ОА в коленном суставе, из которых 40 пациентов имеют критерии для включения и произвольно распределяются в 2 группы. Скрининговый визит выполняется в пределах 14 дней до начала испытания. Отбирают только 1 колено как исследуемое колено для получения исследуемого лекарственного средства и последующей оценки. Введение исследуемого лекарственного средства прекращают, если происходит основное острое воспаление или инфекция в другом колене. Подходящих субъектов рандомизируют 1:1 для однократной дозы фармацевтической композиции с DSP, полученной способом, описанным в примере 2, при уровнях доз (1) 6 мг DSP с примерно 45 мкмоль фосфолипида (группа А) или (2) 12 мг DSP с примерно 90 мкмоль фосфолипида (группа В). Фармацевтическую композицию с DSP, используемую в этом исследовании, получают способом, описанным в предыдущих примерах, и предоставляют как в быстро(немедленно), так и длительно действующих формах DSP после восстановления. Каждого субъекта оценивают в течение 12 недель после однократной внтурисуставной инъекции.A total of 46 patients with knee OA are screened, of which 40 patients meet inclusion criteria and are randomly assigned to 2 groups. The screening visit is carried out within 14 days before the start of the test. Only 1 knee is selected as the study knee to receive study drug and subsequent evaluation. Study drug administration is stopped if underlying acute inflammation or infection occurs in the other knee. Eligible subjects are randomized 1:1 to a single dose of a pharmaceutical composition with DSP prepared by the method described in Example 2, at dose levels of (1) 6 mg DSP with approximately 45 μmol phospholipid (group A) or (2) 12 mg DSP with approximately 90 µmol of phospholipid (group B). The DSP pharmaceutical composition used in this study is prepared in the manner described in the previous examples and is provided in both fast-acting and long-acting DSP forms after reconstitution. Each subject is assessed for 12 weeks after a single intra-articular injection.

Основной целью этого исследования является оценка безопасности и переносимости доз фармацевтических композиций с DSP двух различных уровней. Оценки безопасности производят по вредным событиям (АЕ), тяжелым АЕ (SAE), жизненным показателям, изменениям при физикальном обследовании, электрокардиографии и клиническим лабораторным тестам. Другой целью исследования является оценка эффективности фармацевтических композиций с DSP путем измерения изменений оценок боли субъектом и врачом (VAS), оценки индекса артрита университетов Western Ontario и MeMaster (WOMAC) и глобальной оценки исследователя ответа на терапию (IGART) исследуемого колена. В недели 0, 1, 4, 8 и 12 оценивают по VAS и WOMAC. В недели 1, 4, 8 и 12 оценивают по IGART. Оценка боли для исследуемого колена ставится с использованием шкалы VAS (колеблющейся от 0 [нет боли/болезненности] до 10 [очень сильная боль/боль при самом легком прикосновении]). Индекс WOMAC включает 3 субшкалы, причем оценка колеблется от 0 до 4 в каждой субшкале: боль (5 пунктов), скованность (2 пункта) и физическая функция (17 пунктов). Реакцию пациента на введение исследуемого лекарственного средства определяет исследователь по оценке IGART с 1 или 5 рейтингами (нет, слабая, ощутимая, сильная и очень сильная), выбранными в каждый из визитов по схеме лечения (исключая начальный).The main objective of this study is to evaluate the safety and dose tolerance of pharmaceutical compositions with two different levels of DSP. Safety assessments are based on adverse events (AEs), severe AEs (SAEs), vital signs, changes on physical examination, electrocardiography, and clinical laboratory tests. Another objective of the study is to evaluate the effectiveness of pharmaceutical compositions with DSP by measuring changes in subject and clinician pain scores (VAS), Western Ontario and MeMaster University Arthritis Index (WOMAC) scores, and Investigator's Global Assessment of Response to Therapy (IGART) of the study knee. Weeks 0, 1, 4, 8 and 12 are assessed by VAS and WOMAC. Weeks 1, 4, 8 and 12 are assessed using IGART. The pain rating for the knee being tested is made using the VAS scale (ranging from 0 [no pain/tenderness] to 10 [very severe pain/pain with the lightest touch]). The WOMAC index includes 3 subscales, with scores ranging from 0 to 4 in each subscale: pain (5 items), stiffness (2 items), and physical function (17 items). The patient's response to study drug administration is determined by the investigator using an IGART score with 1 or 5 ratings (none, mild, palpable, strong, and very strong) selected at each of the treatment visits (excluding the initial visit).

Статистический анализStatistical analysis

Размер выборки для этого испытания не определяется заранее с помощью поддерживающих допущений. Все 40 пациентов с ОА коленного сустава включены в план как зарегистрированные участники в этом испытании. Все статистические допущения являются двусторонними и оцениваются на уровне значимости 0,05. Недостающие данные (в том числе из-за ранних прекращений) не приписываются. Для непрерывных конечных точек (оценка безопасности кортизола в плазме, индекс WOMAC и VAS) предоставляются описательные статистические данные, включая число наблюдений, среднее, медиану, стандартное отклонение, минимум и максимум для необработанных данных, а также изменение от исходного уровня. Также анализируют непрерывные переменные с помощью критерия суммы рангов Вилкоксона для сравнения различия между лечебными группами, и критерий знаковых рангов Вилкоксона используют для сравнения изменения от исходного уровня. Для категориальных конечных точек (IGART, число пациентов, достигающих 30% и 50% или большего снижения от исходного уровня по WOMAC и VAS) используют подсчеты и проценты. Выполняют тест хи-квадрат для сравнения различия между группами, в то время как, когда данные разрежены, применяют точный критерий Фишера. Все статистические анализы проводят с использованием программы SAS^®, версия 9.3 системы SAS для Windows 7. В этом исследовании для анализа безопасности используют популяцию для оценки безопасности, в то время как для анализа эффективности используют intent-to-treat (ITT) популяцию и популяцию по протоколу (РР). Популяцию для оценки безопасности определяют как всех субъектов, кто получал любую дозу фармацевтической композиции с DSP. ITT популяцию определяют как всех субъектов, кто получал по меньшей мере 1 полную дозу фармацевтической композиции с DSP и имеет по меньшей мере 1 оценку эффективности после исходного уровня. Популяцию РР определяют как всех субъектов в ITT популяции, кто не имеет какого-либо существенного отклонения/противоречия от протокола. Все 40 субъектов включены в популяцию для оценки безопасности и ITT популяцию. Тринадцать субъектов, включая 6 субъектов из группы А и 7 субъектов из группы В, включены в РР популяцию. Основные выводы основаны на РР популяции.The sample size for this trial is not predetermined by supporting assumptions. All 40 patients with knee OA are enrolled as enrolled participants in this trial. All statistical assumptions are two-tailed and assessed at the 0.05 significance level. Missing data (including due to early terminations) are not imputed. For continuous endpoints (plasma cortisol safety score, WOMAC index, and VAS), descriptive statistics are provided, including number of observations, mean, median, standard deviation, minimum and maximum for raw data, and change from baseline. Continuous variables were also analyzed using the Wilcoxon rank sum test to compare differences between treatment groups, and the Wilcoxon signed ranks test was used to compare changes from baseline. For categorical endpoints (IGART, number of patients achieving 30% and 50% or greater reduction from baseline on WOMAC and VAS), counts and percentages are used. A chi-square test is performed to compare differences between groups, while when data are sparse, Fisher's exact test is used. All statistical analyzes were performed using SAS ^® , version 9.3 of the SAS System for Windows 7. In this study, the safety analysis population was used for the safety analysis, while the intent-to-treat (ITT) population and the by-product population were used for the effectiveness analysis. protocol (RR). The safety population is defined as all subjects who received any dose of the pharmaceutical composition with DSP. The ITT population is defined as all subjects who received at least 1 full dose of the pharmaceutical composition with DSP and have at least 1 post-baseline efficacy assessment. The PP population is defined as all subjects in the ITT population who do not have any significant deviation/inconsistency from the protocol. All 40 subjects are included in the safety population and the ITT population. Thirteen subjects, including 6 subjects from Group A and 7 subjects from Group B, were included in the RR population. The main conclusions are based on the PP population.

Результатыresults

В настоящем исследовании скринируют в целом 46 субъектов, из которых 6 скрининг не прошли. В исследовании зарегистрированы сорок субъектов, из которых 39 удовлетворяют критериям приемлемости. Зачислен один субъект, у которого ОА коленного сустава диагностирован за меньше, чем 6 месяцев до скринигового визита. Субъектов произвольно распределяют в группу А и группу В по 20 субъектов в каждую, получающих 6 мг DSP с 45 мкмоль фосфолипида в фармацевтической композиции на каждую внутрисуставную инъекцию, и 12 мг DSP с 90 мкмоль фосфолипида в фармацевтической композиции на каждую внутрисуставную инъекцию, соответственно. Краткое изложение расположения субъектов показано на фиг.3, и демографическая информация об исследуемых субъектах представлена в таблице 4.In the present study, a total of 46 subjects were screened, of which 6 were not screened. Forty subjects were enrolled in the study, of which 39 met the eligibility criteria. One subject was enrolled who was diagnosed with knee OA less than 6 months before the screening visit. Subjects were randomly assigned to Group A and Group B of 20 subjects each, receiving 6 mg DSP with 45 μmol phospholipid in a pharmaceutical composition per intra-articular injection, and 12 mg DSP with 90 μmol phospholipid in a pharmaceutical composition per intra-articular injection, respectively. A summary of the location of the subjects is shown in Figure 3, and demographic information about the study subjects is presented in Table 4.

Таблица 4. Суммарные результаты демографии на исходном уровнеTable 4. Summary demographic results at baseline.

Переменная Variable Статус/СтатистикаStatus/Statistics Популяция для оценки безопасностиSafety population Группа А (6 мг) (N=20)Group A (6 mg) (N=20) Группа B (12 мг) (N=20)Group B (12 mg) (N=20) Всего (N=40)Total (N=40) Раса Race Восточная АзияEast Asia 20 (100%)20 (100%) 20 (100%)20 (100%) 40 (100%)40 (100%) Возраст Age NN 2020 2020 4040 Средний (SD)Average (SD) 66,7 (10,04)66.7 (10.04) 68,10 (8,03)68.10 (8.03) 67,40 (9)67.40 (9) Медиана (мин, макс)Median (min, max) 67,5 (49, 89)67.5 (49.89) 69,5 (52, 84)69.5 (52.84) 68,50 (49, 89)68.50 (49.89) Пол Floor Мужчины Men 2 (10%)2 (10%) 6 (30%)6 (30%) 8 (20%)8 (20%) Женщины Women 18 (90%)18 (90%) 14 (70%)14 (70%) 32 (80%)32 (80%) Было ли подтверждение остеоартрита при скрининговом визите?Was osteoarthritis confirmed at the screening visit? Да Yes 20 (100%)20 (100%) 20 (100%)20 (100%) 40 (100%)40 (100%) Нет No 0 (0%)0 (0%) 0 (0%)0 (0%) 0 (0%)0 (0%) Поставлена ли оценка по Келлгрену-Лоуренсу (KL) при скрининговом визите?Was the Kellgren-Lawrence (KL) score given at the screening visit? ДаYes 20 (100%)20 (100%) 20 (100%)20 (100%) 40 (100%)40 (100%) НетNo 0 (0%)0 (0%) 0 (0%)0 (0%) 0 (0%)0 (0%) Оценка KLKL rating Уровень 0: рентгенографических признаков остеоартрита нетLevel 0: No radiographic evidence of osteoarthritis 0 (0%)0 (0%) 0 (0%)0 (0%) 0 (0%)0 (0%) Уровень 1: спорное сужение суставного пространства (JSN) и возможное образование остеофитаLevel 1: Controversial joint space narrowing (JSN) and possible osteophyte formation 0 (0%)0 (0%) 0 (0%)0 (0%) 0 (0%)0 (0%) Уровень 2: определенные остеофиты и возможное JSN на переднезадней весовой рентгенограммеLevel 2: definite osteophytes and possible JSN on anteroposterior weight radiograph 7 (35%)7 (35%) 5 (25%)5 (25%) 12 (30%)12 (30%) Уровень 3: множественные остеофиты, определенное JSN, склероз, возможна костная деформацияLevel 3: multiple osteophytes, defined by JSN, sclerosis, possible bone deformity 10 (50%)10 (50%) 10 (50%)10 (50%) 20 (50%)20 (50%) Уровень 4: крупные остеофиты, заметное JSN, тяжелый склероз и определенная костная деформацияLevel 4: Large osteophytes, prominent JSN, severe sclerosis, and definite bone deformity 3 (15%)3 (15%) 5 (25%)5 (25%) 8 (20%)8 (20%)

Все 40 субъектов являются выходцами из Восточной Азии. Средний возраст составляет 67,4 лет, и 8 человек (20%) мужчины. Субъектов располагают по шкале уровней KL как соответствующих уровню 2 (n=12), уровню 3 (n=20) и уровню 4 (n=8).All 40 subjects are of East Asian origin. The average age is 67.4 years, and 8 people (20%) are male. Subjects are ranked on the KL level scale as being Level 2 (n=12), Level 3 (n=20), and Level 4 (n=8).

В этом исследовании не происходит никаких SAE, важных АЕ или АЕ, ведущих к отмене или смерти. Так как длительное применение кортикостероидов может привести к повышению уровня сахара в крови или даже диабету, измеряют изменение HbA1c. Не наблюдают статистически важного различия в средних изменениях HbA1c от исходного уровня (неделя 0) до недели 12 в группе A или группе B.No SAEs, significant AEs, or AEs leading to withdrawal or death occurred in this study. Since long-term use of corticosteroids can lead to high blood sugar levels or even diabetes, the change in HbA1c is measured. There was no statistically significant difference in mean changes in HbA1c from baseline (week 0) to week 12 in group A or group B.

Временное снижение кортизола является хорошо описанной физиологической реакцией у пациентов, которые получают IA инъекции кортикостероидов. Средние величины кортизола показывают снижение от исходного уровня после инъекции, но остаются в интервале нормы, и никто из субъектов не сообщает о признаках или симптомах недостаточности надпочечников.A transient decrease in cortisol is a well-described physiological response in patients who receive IA corticosteroid injections. Mean cortisol values show a decrease from baseline following injection but remain within the normal range, and none of the subjects reported signs or symptoms of adrenal insufficiency.

В РР популяции средние величины оценок боли субъектом и врачом (VAS) показывают продолжающееся снижение от исходного уровня как в группе А, так и в группе В при каждом плановом визите до окончания исследования в неделю 12 (фиг.4А и фиг.4В). Средние изменения оценки боли субъектом и врачом в группе А от исходного уровня до недель 1, 4, 8 и 12 составляют −2,45, −1,90, −1,80 и −1,95, соответственно. В группе В средние изменения оценки боли субъектом и врачом от исходного уровня до недель 1, 4, 8 и 12 составляют −3,90, −3,23, −3,33 и −3,14, соответственно. Статистическая значимость (p<0,05) достигается только для средних изменений от исходного уровня для каждого запланированного повторного визита в группе B. Средние изменения оценки боли врачом в группе А от исходного уровня до недель 1, 4, 8 и 12 составляют −2,95, −4,33, −3,22 и −4,90, соответственно. В группе B средние изменения оценки боли врачом от исходного уровня до недель 1, 4, 8 и 12 составляют −3,41, −3,03, −3,80 и −4,33, соответственно. Все средние изменения от исходного уровня являются статистически значимыми за исключением среднего изменения от исходного уровня до недели 8 в группе A (−3,22±1,78, p=0,0625). Подобные тренды также наблюдаются в ITT популяции.In the RR population, mean subject and clinician pain ratings (VAS) showed a continued decrease from baseline in both Group A and Group B at each scheduled visit until the end of the study at week 12 (Figure 4A and Figure 4B). The mean changes in subject and clinician pain ratings in Group A from baseline to weeks 1, 4, 8, and 12 were −2.45, −1.90, −1.80, and −1.95, respectively. In Group B, the mean changes in subject and clinician pain ratings from baseline to weeks 1, 4, 8, and 12 were −3.90, −3.23, −3.33, and −3.14, respectively. Statistical significance (p<0.05) was achieved only for the mean changes from baseline for each scheduled follow-up visit in Group B. The mean changes in physician pain ratings in Group A from baseline to weeks 1, 4, 8, and 12 were −2. 95, −4.33, −3.22, and −4.90, respectively. In Group B, the mean changes in physician pain ratings from baseline to weeks 1, 4, 8, and 12 were −3.41, −3.03, −3.80, and −4.33, respectively. All mean changes from baseline are statistically significant except for the mean change from baseline to week 8 in Group A (−3.22±1.78, p=0.0625). Similar trends are also observed in the ITT population.

В группе В по сравнению с группой А наблюдается большее снижение оценок по субшкалам WOMAC боли, скованности и физической функции от исходного уровня до каждого планового визита (фиг. 5A – 5D). Средняя величина общей оценки WOMAC на исходном уровне (неделя 0) в группе А и группе В PP популяции составляет 37,83±19,90 и 43,29±15,16 (среднее±SD), соответственно. Эти величины уменьшаются при каждом визите после однократного введения исследуемого лекарственного средства как в группе А, так и в группе В. Среднее изменение общей оценки WOMAC от исходного уровня до недель 1, 4, 8 и 12 составляет −12,17, −8,33, −9,00 и −10,83, соответственно, в группе A, и −19,00, −22,29, −20,71 и −20,14, соответственно, в группе B. Подобный тренд также наблюдается в ITT популяции.Group B, compared with Group A, showed greater reductions in WOMAC pain, stiffness, and physical function subscale scores from baseline to each routine visit (Figures 5A–5D). The mean WOMAC total score at baseline (week 0) in Group A and Group B PP populations was 37.83±19.90 and 43.29±15.16 (mean±SD), respectively. These values decreased at each visit after a single dose of study drug in both Group A and Group B. The mean change in WOMAC total score from baseline to weeks 1, 4, 8, and 12 was −12.17, −8.33 , −9.00 and −10.83, respectively, in group A, and −19.00, −22.29, −20.71, and −20.14, respectively, in group B. A similar trend is also observed in ITT populations.

Как для ITT популяции, так и РР популяции статистической значимости в рейтинге IGART между группой А и группой В в недели 1, 4, 8 и 12 не наблюдается. В PP популяции (n=13) реакция 33-67% пациентов в группе А и реакция 43-100% пациентов в группе В оценивается исследователем как хорошая от недели 1 до недели 12. В ITT population (n=20) реакция 50-65% пациентов в группе А и реакция 45-60% пациентов в группе B оценивается исследователем как хорошая от недели 1 до недели 12.For both the ITT population and the PP population, there was no statistical significance in the IGART ranking between group A and group B in weeks 1, 4, 8 and 12. In the PP population (n=13), the response of 33-67% of patients in group A and the response of 43-100% of patients in group B is assessed by the investigator as good from week 1 to week 12. In the ITT population (n=20), the response is 50-65 % of patients in group A and 45-60% of patients in group B responded as good from week 1 to week 12 by the investigator.

В текущей фазе испытания I/II внутрисуставная инъекция фармацевтических композиций с DSP хорошо переносится всеми субъектами с коленным ОА. Другие АЕ, упомянутые в этом исследовании, не связаны с лечением, и большинство этих АЕ являются умеренными по тяжести. Никаких SAE, важных АЕ (связанная с инъекцией местная реакция) или АЕ, ведущих или к отмене или смерти, не происходит.In the current phase I/II trial, intra-articular injection of pharmaceutical compositions with DSP was well tolerated by all subjects with knee OA. Other AEs mentioned in this study were not related to treatment, and most of these AEs were moderate in severity. No SAEs, significant AEs (injection-associated local reactions), or AEs leading to either withdrawal or death occur.

Микроскопические исследования на кроликах и собаках фармацевтических композиции с DSP не показывают каких-либо таких данных, как потеря протогликана. Однократное или повторное внутрисуставное введение доз фармацевтических композиций с DSP при исследовании не вызывает какого-либо повреждения хряща или хондротоксичность у животных, хотя имеются сообщения о повреждении хряща при повторных внутрисуставных инъекциях свободного дексаметазона, триамцинолона и других стероидов.Microscopic studies in rabbits and dogs of pharmaceutical formulations with DSP do not show any evidence of loss of protoglycan. Single or repeated intra-articular doses of pharmaceutical compositions containing DSP have not been studied to cause any cartilage damage or chondrotoxicity in animals, although there have been reports of cartilage damage with repeated intra-articular injections of free dexamethasone, triamcinolone and other steroids.

Дексаметазон показывает ослабление боли и улучшения при артрите, сравнимые с кортикостероидом длительного действия триамцинолоном. Это предполагает, что фармацевтическая композиция с DSP с профилем пролонгированного высвобождения вероятно будет усиливать терапевтическую пользу дексаметазона в течение гораздо более длительного времени, чем другие лекарства этого класса.Dexamethasone shows pain relief and improvements in arthritis comparable to the long-acting corticosteroid triamcinolone. This suggests that a pharmaceutical composition with a DSP with a sustained release profile is likely to enhance the therapeutic benefits of dexamethasone for a much longer time than other drugs in its class.

Текущая фаза исследования I/II является первым испытанием введения субъектам с коленным ОА фармацевтической композиции с DSP с фосфолипидом в промежутке от 20 мкмоль до 150 мкмоль на мл или общим количеством 80 мкмоль – 110 мкмоль в виде внутрисуставной инъекции. Исследование показывает благоприятное терапевтическое действие 6 мг – 12 мг фармацевтической композиции с DSP в течение по меньшей мере 12 недель, что показывает ее более длительное действие, чем других кортикостероидов. Тренд пролонгированного смягчения боли, определенного оценкой боли по VAS, и смягчения симптомов, определенного индексом ОА по WOMAC, наблюдают в течение 12 недель после получения однократной дозы фармацевтической композиции с DSP.The current phase I/II study is the first to test administering to subjects with knee OA a pharmaceutical composition with phospholipid DSP ranging from 20 µmol to 150 µmol per ml or a total of 80 µmol to 110 µmol by intra-articular injection. The study shows a beneficial therapeutic effect of 6 mg - 12 mg of the pharmaceutical composition with DSP for at least 12 weeks, which shows its longer lasting effect than other corticosteroids. A trend of prolonged pain relief, as measured by the VAS pain score, and symptom relief, as measured by the WOMAC OA Index, was observed for 12 weeks after receiving a single dose of the DSP pharmaceutical composition.

Пример 5. Сравнительный анализ эффективности фармацевтической композиции с DSP у пациентов с остеоартритом коленного суставаExample 5. Comparative analysis of the effectiveness of a pharmaceutical composition with DSP in patients with osteoarthritis of the knee joint

Многоцентровое двойное слепое плацебо-контролируемое клиническое испытание фазы II для исследования безопасности и эффективности лечения двумя различными уровнями дозы фармацевтической композиции по настоящему раскрытию на пациентах с ОА коленного сустава завершено в августе 2018. В этом клиническом испытании 75 пациентов среднего возраста 63,9 лет с умеренным разрушением колена при ОА и оценками VAS 5-9 рандомизируют в три различные экспериментальные группы, причем каждая получает однократное внутрисуставное введение (а) фармацевтической композиции, включающей 12 мг DSP и 90 мкмоль фосфолипида (обозначенной далее как TLC599 12 мг), (b) фармацевтической композиции, включающей 18 мг DSP и 135 мкмоль фосфолипида (обозначенной далее как TLC599 18 мг), или (c) контроль плацебо (физиологический раствор) (обозначенный далее как плацебо).A multicenter, double-blind, placebo-controlled, phase II clinical trial to investigate the safety and effectiveness of treatment with two different dose levels of the pharmaceutical composition of this disclosure in patients with knee OA was completed in August 2018. This clinical trial included 75 patients with an average age of 63.9 years with moderate OA knee failure and VAS scores of 5-9 are randomized into three different experimental groups, each receiving a single intra-articular injection of (a) a pharmaceutical composition comprising 12 mg DSP and 90 μmol phospholipid (hereinafter referred to as TLC599 12 mg), (b) a pharmaceutical a composition comprising 18 mg DSP and 135 μmol phospholipid (hereinafter referred to as TLC599 18 mg), or (c) a placebo control (saline) (hereinafter referred to as placebo).

Первичной конечной точкой является оценка среднего изменения от исходного уровня оценок боли по WOMAC до недели 12. Другие анализы, такие как изменение от исходного уровня боли по WOMAC, физической функции по WOMAC и оценок VAS до и в различные моменты времени до недели 24, так же, как пропорции клинически надежных респондеров, включают во вторичные конечные точки. Безопасность и эффективность оценивают в день 3, неделю 1 и каждые четыре недели до 24 недель.The primary endpoint is to evaluate the mean change from baseline in WOMAC pain scores to week 12. Other analyses, such as change from baseline in WOMAC pain, WOMAC physical function, and VAS scores before and at various time points through week 24, also , as the proportion of clinically reliable responders, are included in secondary endpoints. Safety and efficacy were assessed at day 3, week 1, and every four weeks until 24 weeks.

С использованием результата измерения боли по WOMAC, TLC599 12 мг показывает статистически значимое улучшение в смягчении боли по сравнению с плацебо от дня 3 до недели 12, соответствуя первичной конечной точке. Кроме того, TLC599 12 мг показывает непрерывное и статистически значимое улучшение в смягчении боли при сравнении с плацебо от дня 3 до недели 16, недели 20 и недели 24, как показано на фиг.6 и в таблице 5, отражающей непрерывную длительность регулирования боли в течение по меньшей мере 24 недель. TLC599 12 мг также показывает статистически значимое улучшение в смягчении боли при сравнении с плацебо в неделю 12, неделю 16, неделю 20 и неделю 24.Using the WOMAC pain outcome measure, TLC599 12 mg showed a statistically significant improvement in pain relief compared with placebo from day 3 to week 12, meeting the primary endpoint. In addition, TLC599 12 mg showed a continuous and statistically significant improvement in pain management when compared with placebo from day 3 to week 16, week 20 and week 24, as shown in Figure 6 and Table 5, reflecting the continuous duration of pain control over at least 24 weeks. TLC599 12 mg also showed a statistically significant improvement in pain relief when compared with placebo at week 12, week 16, week 20 and week 24.

Подобные результаты наблюдают с использованием физической функции по WOMAC как результата измерения. Пациенты, которых лечили TLC599 12 мг, показывают значимо большее улучшение в физической функции по WOMAC, чем плацебо, от дня 3 до недели 12, недели 16, недели 20 и недели 24 (р<0,05)Similar results are observed using the WOMAC physical function as the measurement outcome. Patients treated with TLC599 12 mg showed significantly greater improvement in WOMAC physical function than placebo from day 3 to week 12, week 16, week 20 and week 24 (p<0.05)

Подобные результаты также наблюдают с использованием оценок VAS как результата измерения. TLC599 12 мг показывает статистически значимое улучшение смягчения боли при сравнении с плацебо от дня 3 до недели 12, недели 16, недели 20 и недели 24, снова отражая непрерывную длительность регулирования боли в течение по меньшей мере шести месяцев. TLC599 12 мг также показывает статистически значимое улучшение смягчения боли при сравнении с плацебо в неделю 12, неделю 16, неделю 20 и неделю 24.Similar results are also observed using VAS scores as the outcome measure. TLC599 12 mg shows a statistically significant improvement in pain relief when compared with placebo from day 3 to week 12, week 16, week 20 and week 24, again reflecting a continuous duration of pain control over at least six months. TLC599 12 mg also showed a statistically significant improvement in pain relief when compared with placebo at week 12, week 16, week 20 and week 24.

Временное снижение кортизола является хорошо описанной физиологической реакцией у пациентов, кто получает IA инъекции кортикостероидов. Таким образом, снижение кортизола, заметное в этом исследовании, является ожидаемой фармакодинамической реакцией на IA инъекцию кортикостероида, которая тщательно контролируется. Лабораторные аномальности уровня кортизола в крови приводятся как легкие по интенсивности с 2 исключениями (1 умеренно сниженный кортизол, 1 тяжелая недостаточность глюкокортикоида). Ни одно из этих лабораторных проявлений кортизола не зарегистрировано с сопутствующими признаками или симптомами, которые можно отнести к гипокортизолизму, и все разрешаются без лечения или последствий. Большинство из этих проявлений отмечается вначале в день 3, и это большинство разрешается в следующем плановом визите в неделю 1.A transient decrease in cortisol is a well-described physiological response in patients who receive IA corticosteroid injections. Thus, the decrease in cortisol seen in this study is an expected pharmacodynamic response to IA corticosteroid injection that is carefully monitored. Laboratory abnormalities of blood cortisol levels are reported as mild in intensity with 2 exceptions (1 moderately decreased cortisol, 1 severe glucocorticoid deficiency). None of these laboratory manifestations of cortisol have been reported with associated signs or symptoms that could be attributed to hypocortisolism, and all have resolved without treatment or sequelae. Most of these manifestations are noted initially on day 3, and the majority resolve at the next scheduled visit at week 1.

Количество (приблизительно 40%) свободного дексаметазона в TLC599 12 мг несколько выше типичной дозы высвобождаемого немедленно DSP (4 мг), используемой для IA инъекции.The amount (approximately 40%) of free dexamethasone in TLC599 12 mg is slightly higher than the typical dose of immediate-release DSP (4 mg) used for IA injection.

TEAE, видные в этом исследовании, ожидаемы в исследуемых популяциях. TLC599 вообще безопасна и хорошо переносится. Кроме того, частота общих TEAE, связанных с лекарством AE и связанных с кортизолом AE, с TLC599 12 мг ниже, чем с TLC599 18 мг.The TEAEs prominent in this study are expected in the populations studied. TLC599 is generally safe and well tolerated. Additionally, the incidence of total TEAEs, drug-related AEs and cortisol-related AEs with TLC599 12 mg is lower than with TLC599 18 mg.

В настоящем исследовании при каждом визите проверяют глюкозу в крови натощак. Один пациент в группе TLC599 12 мг оценен с TEAE возрастания глюкозы в крови (с 2 отдельными случаями – 1 слабое и 1 умеренное), и другой пациент в группе TLC599 18 мг оценен с АЕ ухудшения глюкозы натощак (слабое). Возрастание глюкозы в крови (оба события) оценено как не связанное с изучаемым лечением.In the present study, fasting blood glucose is checked at each visit. One patient in the TLC599 12 mg group was assessed with a TEAE of increased blood glucose (with 2 separate events - 1 mild and 1 moderate), and another patient in the TLC599 18 mg group was assessed with an AE of worsening fasting glucose (mild). Increases in blood glucose (both events) were assessed as unrelated to the study treatment.

Примечательно, что эта пациенты не отображают анормальность HbA1c во время испытания. Следовательно, любые возрастания уровня глюкозы в крови являются вероятно временными и умеренными.Notably, these patients did not display HbA1c abnormality during the test. Therefore, any increases in blood glucose levels are likely to be temporary and mild.

Пример 6. Оценка влияния содержания липидов в фармацевтической композиции с DSP на животной модели остеоартритаExample 6. Evaluation of the effect of lipid content in a pharmaceutical composition with DSP in an animal model of osteoarthritis

Для того, чтобы оценить изменения содержания липидов, а также взаимодействие между лекарственным средством и липидами в фармацевтической композиции, подходящей для доставки в сустав in vivo, получают фармацевтические композиции с DSP с большим и небольшим количествами липидов и оценивают на возможное действие, появляющееся в указанных условиях, как описано ниже.In order to evaluate changes in lipid content as well as drug-lipid interactions in a pharmaceutical composition suitable for in vivo joint delivery, pharmaceutical compositions with DSPs with large and small amounts of lipids are prepared and assessed for possible effects occurring under specified conditions. , as described below.

Используют крысиную модель вызванного коллагеном типа II артрита (CIA) для определения влияния содержания липидов в фармацевтической композиции с DSP на терапевтическую активность DSP. В целом артрит вызывают у 30 крыс Lewis коллагеном типа II, эмульгированным в неполном адъюванте Фрейнда (FIA), в день 1 и последующей бустердозой в день 8 интрадермальной инъекцией в хвост. Клинические визуальные оценки (клиническая оценка), показывающие тяжесть артрита, располагают по степеням, используя суставной индекс, колеблющийся от 0 до 4 (см. таблицу 6). Общую оценку для каждой крысы вычисляют, суммируя оценки для обеих задних лап с максимальной возможной оценкой 8, для каждой отдельной крысы. В день 17 заболевание успешно вызывается с общей клинической оценкой артрита 8, испытываемые изделия вводят в обе лапы крыс. Фармацевтические композиции с DSP с различными количествами липидов получают согласно способу, описанному в примере 2, за исключением того, что итоговое содержание липидов в каждой такое, какое указано ниже в таблице 7. Для контрольных групп используют физиологический раствор и раствор 12 мг/мл дексаметазона фосфата в отсутствие липидов [инъекция дексаметазона фосфата (DP)] (несформулированное лекарство).A rat model of collagen type II induced arthritis (CIA) was used to determine the effect of the lipid content of a pharmaceutical composition with DSP on the therapeutic activity of DSP. In total, arthritis was induced in 30 Lewis rats with type II collagen emulsified in Freund's incomplete adjuvant (FIA) on day 1 followed by a boost on day 8 by intradermal tail injection. Clinical imaging scores (clinical score), indicating the severity of arthritis, are graded using a joint index ranging from 0 to 4 (see Table 6). An overall score for each rat is calculated by summing the scores for both hind paws, with a maximum possible score of 8, for each individual rat. On day 17, the disease is successfully induced with an overall clinical arthritis score of 8, the test articles are introduced into both paws of the rats. DSP pharmaceutical compositions with varying amounts of lipids were prepared according to the method described in Example 2, except that the final lipid content of each was as indicated in Table 7 below. For control groups, saline and 12 mg/ml dexamethasone phosphate solution were used. in the absence of lipids [dexamethasone phosphate (DP) injection] (unformulated drug).

Таблица 6. Ступени клинической визуальной оценки артритаTable 6. Stages of clinical visual assessment of arthritis

Оценка тяжестиSeverity rating Описание Description 00 Нет явной эритемы и опухания No obvious erythema or swelling 11 Эритема и легкая припухлость, ограниченная предплюсневым или голеностопным суставомErythema and mild swelling limited to the tarsal or ankle joint 22 Эритема и легкий отек, распространяющийся от лодыжки до предплюсны Erythema and mild swelling extending from the ankle to the tarsus 33 Эритема и умеренный отек, распространяющийся от голеностопного до плюсневых суставовErythema and mild swelling extending from ankle to metatarsal joints 44 Эритема и сильный отек охватывают лодыжку, стопу и пальцы, или анкилоз конечности Erythema and severe swelling involving the ankle, foot, and toes, or ankylosis of the limb

Таблица 7. Составы фармацевтических композиций с DSP с различными содержаниями липидов и используемые контролиTable 7. Formulations of DSP Pharmaceutical Compositions with Various Lipid Contents and Controls Used

Номер группы/Испытываемое изделие на крысиной модели CIAGroup Number/Test Item in CIA Rat Model Содержание фосфолипида мкмоль/мл)Phospholipid content µmol/ml) Концентрация DSP
(мг/мл)DSP concentration
(mg/ml) Дозировка
(мг/лапа)Dosage
(mg/paw) Объем инъекции
(мл/лапа)Injection volume
(ml/paw) 1/Физиолог. раствор1/Physiologist. solution -- -- -- 0,050.05 2/TLC599CQA_L012/TLC599CQA_L01 119119 11,511.5 0,6 мг/лапа
1,2 мг/животное0.6 mg/paw
1.2 mg/animal 0,050.05 3/TLC599CQA_L083/TLC599CQA_L08 6767 12,212.2 0,050.05 4/TLC599CQA_L094/TLC599CQA_L09 9090 11,911.9 0,050.05 6/Инъекция DP 6/DP injection -- 13,213.2 0,040.04

Результаты показывают, что корреляция между содержанием липидов в фармацевтической композиции, подходящей для доставки в сустав, и противоартритной эффективностью основана на клинической оценке (фиг.7).The results show that the correlation between the lipid content of the pharmaceutical composition suitable for delivery to the joint and anti-arthritis efficacy is based on clinical evaluation (Figure 7).

Результаты исследования эффективности in vivo показывают, что независимо от низкого или высокого содержания липида (больше 67 мкмоль фосфолипидов на мл фармацевтической композиции с DSP) в препарате TLC599, продолжительность прологнированной эффективности возрастает по меньшей мере в 2,5 раза по сравнению с несформулированным лекарством. Однако более длительная продолжительность противоартритной эффективности предполагается в интервале содержания липидов (больше 67 мкмоль фосфолипидов на мл фармацевтической композиции с DSP, такое как примерно 70 мкмоль/мл – примерно 120 мкмоль/мл) в фармацевтической композиции с DSP согласно данному примеру в сочетании с приведенным выше примером 3. Соответственно, фармацевтическая композиция согласно настоящему раскрытию действительно обеспечивает пролонгированное высвобождение DSP в присутствии указанного содержания липидов для достижения равновесия между усиленной терапевтической эффективностью и минимизированным побочным действием терапевтического агента, особенно в указанном интервале дозировки.The results of the in vivo efficacy study indicate that regardless of low or high lipid content (greater than 67 μmol phospholipids per ml of pharmaceutical composition with DSP) in the TLC599 formulation, the duration of prolonged effectiveness is increased by at least 2.5 times compared to the unformulated drug. However, a longer duration of anti-arthritic effectiveness is expected in the lipid content range (greater than 67 µmol phospholipids per ml of the DSP pharmaceutical composition, such as about 70 µmol/ml to about 120 µmol/ml) in the DSP pharmaceutical composition according to this example in combination with the above Example 3. Accordingly, the pharmaceutical composition according to the present disclosure does provide sustained release of DSP in the presence of the specified lipid content to achieve a balance between enhanced therapeutic efficacy and minimized side effects of the therapeutic agent, especially in the specified dosage range.

Claims

1. A pharmaceutical composition suitable for joint delivery for the treatment of joint pain, comprising

(a) a mixture of lipids comprising a first phospholipid, a second phospholipid and cholesterol in mol %: 29.5 to 87: 3 to 37.5: 10 to 33, respectively, and

(b) an effective amount of a steroid or a pharmaceutically acceptable salt thereof;

wherein the first phospholipid is 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphatidylcholine (DOPC), 1-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphatidylcholine (POPC), soy phosphatidylcholine (SPC) or egg phosphatidylcholine ( EPC), and the second phospholipid is polyethylene glycol-distearoylphosphatidylethanolamine (PEG-DSPE) or dioleoylphosphatidylglycerol (DOPG), and

the total amount of phospholipids ranges from 90 µmol to 150 µmol per 1 ml of the specified pharmaceutical composition.

2. The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the steroid is an intra-articular corticosteroid.

3. The pharmaceutical composition according to claim 1, in which the steroid or a pharmaceutically acceptable salt thereof is dexamethasone sodium phosphate, dexamethasone, betamethasone, betamethasone sodium phosphate, betamethasone acetate, betamethasone dipropionate, betamethasone valerate, mometasone furonate, triamcinolone acetonide, triamcinolone hexacetonide, triamcinolone diacetate, methylprednisolone sodium succinate, methylprednisolone acetate, prednisolone tebutate, hydrocortisone acetate, alklometasone dipropionate, galcinonide, fluorocortolone, fluocinolone acetonide, or a combination thereof.

4. The pharmaceutical composition according to claim 1, in which the steroid is dexamethasone sodium phosphate.

5. The pharmaceutical composition of claim 4, wherein dexamethasone sodium phosphate is present in an amount ranging from about 6 mg to about 18 mg per ml of the pharmaceutical composition.

6. The pharmaceutical composition of claim 4, wherein dexamethasone sodium phosphate is present in an amount ranging from about 6 mg to about 12 mg per ml of the pharmaceutical composition.

7. The pharmaceutical composition according to claim 4, wherein dexamethasone sodium phosphate is present in an amount of about 12 mg per ml of the pharmaceutical composition.

8. The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the first phospholipid is DOPC and the second phospholipid is DOPG.

9. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-8, in which the amount of phospholipids ranges from about 90 μmol to about 140 μmol per ml of the pharmaceutical composition.

10. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-8, in which the amount of phospholipids ranges from about 90 μmol to about 135 μmol per ml of the pharmaceutical composition.

11. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-8, in which the amount of phospholipids ranges from about 90 μmol to about 120 μmol per ml of the pharmaceutical composition.

12. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-8, in which the amount of phospholipids ranges from about 90 μmol to about 110 μmol per ml of the pharmaceutical composition.

13. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 1-8, in which the amount of phospholipids ranges from about 90 μmol to about 100 μmol per ml of the pharmaceutical composition.

14. Use of a pharmaceutical composition in the production of joint injection for the treatment of joint pain, wherein the pharmaceutical composition includes

(a) a mixture of lipids comprising a first phospholipid, a second phospholipid and cholesterol in mol % from 29.5 to 87: 3 to 37.5: 10 to 33, respectively, and

the total amount of phospholipids ranges from 90 µmol to 150 µmol per joint injection.

15. Use according to claim 14, wherein the steroid is an intra-articular corticosteroid.

16. Use according to claim 14, in which the steroid or a pharmaceutically acceptable salt thereof is dexamethasone sodium phosphate, dexamethasone, betamethasone, betamethasone sodium phosphate, betamethasone acetate, betamethasone dipropionate, betamethasone valerate, mometasone furonate, triamcinolone acetonide, triamcinolone hexacetonide, triamcinolone diacetate , methylprednisolone sodium succinate, methylprednisolone acetate, prednisolone tebutate, hydrocortisone acetate, alklometasone dipropionate, galcinonide, fluorocortolone, fluocinolone acetonide, or a combination thereof.

17. Use according to claim 14, wherein the steroid is dexamethasone sodium phosphate.

18. The use of claim 17, wherein dexamethasone sodium phosphate is present in an amount ranging from about 6 mg to about 18 mg per joint injection.

19. Use according to claim 17, wherein dexamethasone sodium phosphate is present in an amount of about 12 mg per joint injection.

20. Application according to any one of paragraphs. 14-19, in which the first phospholipid is DOPC and the second phospholipid is DOPG.

21. Use according to any one of claims 14 to 19, wherein the amount of phospholipids ranges from about 90 µmol to about 140 µmol per joint injection.

22. Use according to any one of claims 14 to 19, wherein the amount of phospholipids ranges from about 90 µmol to about 135 µmol per joint injection.

23. Use according to any one of claims 14 to 19, wherein the amount of phospholipids ranges from about 90 µmol to about 120 µmol per joint injection.

24. Use according to any one of claims 14 to 19, wherein the amount of phospholipids ranges from about 90 µmol to about 110 µmol per joint injection.

25. Use according to any one of claims 14 to 19, wherein the amount of phospholipids is approximately 90 µmol per joint injection.

26. Use according to any one of claims 14 to 19, wherein the pharmaceutical composition is administered by joint injection once a week, two weeks, six weeks, a month, two months, at least 3 months or at least 6 months until until the joint pain goes away.

27. A method for treating joint pain, comprising

intra-articular administration to a subject in need of such treatment, an effective amount of a pharmaceutical composition according to any one of claims. 1-13.

28. The method of claim 27, wherein the joint pain is pain due to arthritis.

29. The method of claim 28, wherein the arthritis is psoriatic, reactive arthritis or arthritis caused by Ehlers-Danlos syndrome, hemochromatosis, hepatitis, Lyme disease, Sjögren's disease, Hashimoto's thyroiditis, celiac disease, non-celiac gluten sensitivity, inflammatory bowel disease, Henoch-Schönlein purpura, hyperimmunoglobulinemia D with relapsing fever, sarcoidosis, Whipple's disease, TNF receptor-associated periodic syndrome, granulomatosis with polyangiitis, familial Mediterranean fever, or systemic lupus erythematosus.

30. The method of claim 27, wherein the pharmaceutical composition is administered once a week, two weeks, six weeks, a month, two months, at least 3 months, or at least 6 months until the joint pain goes away.