RU2774031C1 - Method for suppressing the inducing action of high molecular weight hyaluronic acid on breast cancer stem cells - Google Patents
Method for suppressing the inducing action of high molecular weight hyaluronic acid on breast cancer stem cells Download PDFInfo
- Publication number
- RU2774031C1 RU2774031C1 RU2021135492A RU2021135492A RU2774031C1 RU 2774031 C1 RU2774031 C1 RU 2774031C1 RU 2021135492 A RU2021135492 A RU 2021135492A RU 2021135492 A RU2021135492 A RU 2021135492A RU 2774031 C1 RU2774031 C1 RU 2774031C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- molecular weight
- breast cancer
- stem cells
- hyaluronic acid
- Prior art date
Links
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 title claims abstract description 56
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 50
- MAKUBRYLFHZREJ-JWBQXVCJSA-M sodium;(2S,3S,4R,5R,6R)-3-[(2S,3R,5S,6R)-3-acetamido-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,5,6-trihydroxyoxane-2-carboxylate Chemical compound [Na+].CC(=O)N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C([O-])=O)O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O MAKUBRYLFHZREJ-JWBQXVCJSA-M 0.000 title claims abstract description 50
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 30
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 24
- 230000001629 suppression Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 claims abstract description 61
- 101700078950 CD44 Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 102100003735 CD44 Human genes 0.000 claims abstract description 22
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 16
- 210000004881 tumor cells Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 9
- INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N pibenzimol Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=CC=C(N=C(N2)C=3C=C4NC(=NC4=CC=3)C=3C=CC(O)=CC=3)C2=C1 INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 5
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 claims abstract description 4
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 102100000197 CD24 Human genes 0.000 claims description 16
- 108060001249 CD24 Proteins 0.000 claims description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 11
- 230000001603 reducing Effects 0.000 abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 230000032459 dedifferentiation Effects 0.000 abstract description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 25
- ZIUSSTSXXLLKKK-HWUZOJPISA-N Curcumin Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(\C=C\C(\O)=C/C(=O)/C=C/C=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 ZIUSSTSXXLLKKK-HWUZOJPISA-N 0.000 description 14
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 13
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 13
- KQXDHUJYNAXLNZ-XQSDOZFQSA-N Salinomycin Chemical compound O1[C@@H]([C@@H](CC)C(O)=O)CC[C@H](C)[C@@H]1[C@@H](C)[C@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](CC)[C@@H]1[C@@H](C)C[C@@H](C)[C@@]2(C=C[C@@H](O)[C@@]3(O[C@@](C)(CC3)[C@@H]3O[C@@H](C)[C@@](O)(CC)CC3)O2)O1 KQXDHUJYNAXLNZ-XQSDOZFQSA-N 0.000 description 9
- 239000004189 Salinomycin Substances 0.000 description 9
- 102000013127 Vimentin Human genes 0.000 description 9
- 108010065472 Vimentin Proteins 0.000 description 9
- 229960001548 salinomycin Drugs 0.000 description 9
- 235000019378 salinomycin Nutrition 0.000 description 9
- 229940109262 Curcumin Drugs 0.000 description 7
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 7
- 235000012754 curcumin Nutrition 0.000 description 7
- 239000004148 curcumin Substances 0.000 description 7
- 229940099552 Hyaluronan Drugs 0.000 description 6
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N Hyaluronan Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- CPEUVMUXAHMANV-UHFFFAOYSA-N flubendazole Chemical compound C1=C2NC(NC(=O)OC)=NC2=CC=C1C(=O)C1=CC=C(F)C=C1 CPEUVMUXAHMANV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960004500 flubendazole Drugs 0.000 description 5
- 230000004936 stimulating Effects 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- 229960003105 Metformin Drugs 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960000070 antineoplastic Monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 4
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 4
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 4
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N metformin Chemical compound CN(C)C(=N)NC(N)=N XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960000060 monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 4
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 description 4
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 4
- 230000036912 Bioavailability Effects 0.000 description 3
- 229940072221 IMMUNOGLOBULINS Drugs 0.000 description 3
- 102000018358 Immunoglobulins Human genes 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulins Proteins 0.000 description 3
- 102000013814 Wnt Human genes 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor Effects 0.000 description 3
- 230000035514 bioavailability Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 238000003260 fluorescence intensity Methods 0.000 description 3
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001404 mediated Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 1-[(1S,2R,3R,4S,5R,6R)-3-carbamimidamido-6-{[(2R,3R,4R,5S)-3-{[(2S,3S,4S,5R,6S)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-(methylamino)oxan-2-yl]oxy}-4-formyl-4-hydroxy-5-methyloxolan-2-yl]oxy}-2,4,5-trihydroxycyclohexyl]guanidine Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 102100013078 CD47 Human genes 0.000 description 2
- 101700033237 CD47 Proteins 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 241000237858 Gastropoda Species 0.000 description 2
- 208000005017 Glioblastoma Diseases 0.000 description 2
- 240000001340 Gmelina philippensis Species 0.000 description 2
- 206010020843 Hyperthermia Diseases 0.000 description 2
- 206010027476 Metastasis Diseases 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 108060003552 hemocyanin family Proteins 0.000 description 2
- 230000036031 hyperthermia Effects 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000002609 media Substances 0.000 description 2
- 230000000051 modifying Effects 0.000 description 2
- 230000000771 oncological Effects 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 150000004944 pyrrolopyrimidines Chemical class 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reduced Effects 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 108009000409 Autophagy Proteins 0.000 description 1
- JYZIHLWOWKMNNX-UHFFFAOYSA-N Benzimidazole Chemical compound C1=C[CH]C2=NC=NC2=C1 JYZIHLWOWKMNNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940098773 Bovine Serum Albumin Drugs 0.000 description 1
- 108091003117 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 210000000481 Breast Anatomy 0.000 description 1
- 102100002212 CXCR4 Human genes 0.000 description 1
- 101710003734 CXCR4 Proteins 0.000 description 1
- 102000000905 Cadherins Human genes 0.000 description 1
- 108050007957 Cadherins Proteins 0.000 description 1
- 102000007590 Calpain Human genes 0.000 description 1
- 108010032088 Calpain Proteins 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 244000163122 Curcuma domestica Species 0.000 description 1
- 235000003392 Curcuma domestica Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 210000004207 Dermis Anatomy 0.000 description 1
- 210000002744 Extracellular Matrix Anatomy 0.000 description 1
- 108009000344 Head and Neck Squamous Cell Carcinoma Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 210000003041 Ligaments Anatomy 0.000 description 1
- 210000002264 Mammary Glands, Animal Anatomy 0.000 description 1
- 210000004293 Mammary Glands, Human Anatomy 0.000 description 1
- 210000003470 Mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 102100012131 NOTCH1 Human genes 0.000 description 1
- 101710036042 NOTCH1 Proteins 0.000 description 1
- 208000002454 Nasopharyngeal Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001672 Ovary Anatomy 0.000 description 1
- 102100004042 PTK7 Human genes 0.000 description 1
- 101700007351 PTK7 Proteins 0.000 description 1
- 229940049954 Penicillin Drugs 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102100018829 SOX2 Human genes 0.000 description 1
- 101700006931 SOX2 Proteins 0.000 description 1
- 210000003491 Skin Anatomy 0.000 description 1
- 208000000102 Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck Diseases 0.000 description 1
- 229960005322 Streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 208000001072 Type 2 Diabetes Mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000036462 Unbound Effects 0.000 description 1
- 230000004156 Wnt signaling pathway Effects 0.000 description 1
- OETHQSJEHLVLGH-UHFFFAOYSA-N [amino-(diaminomethylideneamino)methylidene]-dimethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CN(C)C(=N)N=C(N)N OETHQSJEHLVLGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000000507 anthelmentic Effects 0.000 description 1
- 239000000921 anthelmintic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000002058 anti-hyperglycaemic Effects 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000006877 autophagy Effects 0.000 description 1
- 150000001556 benzimidazoles Chemical class 0.000 description 1
- 125000003785 benzimidazolyl group Chemical group N1=C(NC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 229960000626 benzylpenicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking Effects 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002113 chemopreventative Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 1
- 235000003373 curcuma longa Nutrition 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000002498 deadly Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing Effects 0.000 description 1
- 230000001809 detectable Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 125000000600 disaccharide group Chemical group 0.000 description 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N edta Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000000459 head and neck squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000002555 ionophore Substances 0.000 description 1
- 230000000236 ionophoric Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 201000011216 nasopharynx carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000016273 neuron death Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000010627 oxidative phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological Effects 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229920003255 poly(phenylsilsesquioxane) Polymers 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000002534 radiation-sensitizing agent Substances 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 235000013599 spices Nutrition 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000037351 starvation Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000381 tumorigenic Effects 0.000 description 1
- 235000013976 turmeric Nutrition 0.000 description 1
Images
Abstract
Description
Изобретение относится к области экспериментальной медицины, в частности онкологии, и может быть использовано для снижения количества опухолевых стволовых клеток (ОСК), индуцированных под действием высокомолекулярной гиалуроновой кислоты (106 Да и более), которая является важным компонентом межклеточной среды нормальных и опухолевых тканей.The invention relates to the field of experimental medicine, in particular oncology, and can be used to reduce the number of tumor stem cells (TSCs) induced by the action of high molecular weight hyaluronic acid (10 6 Da or more), which is an important component of the intercellular environment of normal and tumor tissues.
ОСК, обнаруженные в злокачественных новообразованиях различной локализации и стабильных линиях опухолевых клеток человека и животных, характеризуются более высокой резистентностью к большинству терапевтических воздействий по сравнению с остальными опухолевыми клетками. Несмотря на небольшой размер этой субпопуляции (обычно от 0,1 до 5% от общего числа опухолевых клеток), ОСК играют важную роль в канцерогенезе и определяют эффективность лечения онкологических больных, поскольку способны сохранять жизнеспособность в ходе радио- и химиотерапии, вследствие чего могут являются причиной развития рецидивов и метастазов у части больных после окончания лечения (Krause M., Dubrovska A., Linge A., Baumann M. Cancer stem cells: Radioresistance, prediction of radio-therapy outcome and specific targets for combined treatments// Adv Drug Deliv Rev. 2017. V. 109. P. 63-73; Lytle N.K., Barber A.G., Reya T. Stem cells fate in cancer growth, progression and therapy resistance//Nat Rev Cancer. 2018. V. 18. P. 669-680; Batlle E., Clevers H. Cancer stem cells revisited// Nat Med. 2017. V. 23. P. 1124-1134; Chopra S., Deodhar K., Pai V., Pant S., Rathod N., Goda J.S., Sudhalkar N., Pandey P., Waghmare S., Engineer R. Cancer Stem Cells, CD44, and Outcomes Following Chemoradiation in Locally Advanced Cervical Cancer: Results From a Prospective Study// Int J Radiat Oncol Biol Phys. 2019. V. 103. P. 161-168). В связи с этим снижение количества ОСК является одной из наиболее актуальных проблем онкологии, решение которой основывается на понимании молекулярных особенностей и сигнальных путей регуляции этих клеток.CSCs found in malignant neoplasms of various localizations and stable human and animal tumor cell lines are characterized by a higher resistance to most therapeutic effects compared to other tumor cells. Despite the small size of this subpopulation (usually from 0.1 to 5% of the total number of tumor cells), CSCs play an important role in carcinogenesis and determine the effectiveness of the treatment of cancer patients, since they are able to remain viable during radio- and chemotherapy, as a result of which they can be the cause of relapses and metastases in some patients after the end of treatment (Krause M., Dubrovska A., Linge A., Baumann M. Cancer stem cells: Radioresistance, prediction of radio-therapy outcome and specific targets for combined treatments// Adv Drug Deliv Rev. 2017. V. 109. P. 63-73 Lytle N. K., Barber A. G., Reya T. Stem cells fate in cancer growth, progression and therapy resistance//Nat Rev Cancer. 2018. V. 18. P. 669- 680; Batlle E., Clevers H. Cancer stem cells revisited// Nat Med. 2017. V. 23. P. 1124-1134; Chopra S., Deodhar K., Pai V., Pant S., Rathod N., Goda J.S., Sudhalkar N., Pandey P., Waghmare S., Engineer R. Cancer Stem Cells, CD44, and Outcomes Following Chemorad iation in Locally Advanced Cervical Cancer: Results From a Prospective Study// Int J Radiat Oncol Biol Phys. 2019. V. 103. P. 161-168). In this regard, a decrease in the number of CSCs is one of the most urgent problems of oncology, the solution of which is based on an understanding of the molecular features and signaling pathways of regulation of these cells.
Как известно, существенную роль в формировании пула ОСК и регуляции биологических свойств этих клеток играют различные факторы микроокружения, включая один из основных компонентов внеклеточного матрикса - гиалуроновую кислоту (ГК), которая в организме обычно находится в форме полианиона (гиалуронана). ГК относится к семейству глюкозамингликанов, представляет собой линейный полимер, состоящий из остатков D-глюкуроновой кислоты и D-N-ацетилглюкозамина, соединенных поочередно β-1,4- и β-1,3-гликозидными связями и может содержать до 25000 таких дисахаридных звеньев в составе одной молекулы. Молекулярный вес ГК сильно варьирует у разных видов животных от 103 до 107 Да в зависимости от тканевой принадлежности, физиологических условий и патологического состояния. Физиологическая концентрация ГК, например, в дерме составляет 0,5 мг/мл (Хабаров В.Н. К вопросу о концентрации гиалуроновой кислоты в препаратах для биоревитализации// Эстетическая медицина. 2015. Т. 14. № 1. С.3-6).As is known, various microenvironmental factors play a significant role in the formation of the CSC pool and the regulation of the biological properties of these cells, including one of the main components of the extracellular matrix, hyaluronic acid (HA), which is usually found in the body in the form of a polyanion (hyaluronan). HA belongs to the family of glucosaminoglycans, is a linear polymer consisting of D-glucuronic acid and DN-acetylglucosamine residues connected alternately by β-1,4- and β-1,3-glycosidic bonds and can contain up to 25,000 of these disaccharide units in the composition. one molecule. The molecular weight of HA varies greatly in different animal species from 10 3 to 10 7 Da, depending on tissue affiliation, physiological conditions and pathological conditions. The physiological concentration of HA, for example, in the dermis is 0.5 mg / ml (Khabarov V.N. On the issue of the concentration of hyaluronic acid in preparations for biorevitalization / / Aesthetic Medicine. 2015. V. 14. No. 1. P. 3-6 ).
При раке молочной железы (РМЖ) ГК имеет особое значение, поскольку ОСК этой локализации экспрессируют поверхностный маркер CD44, который является одним из рецепторов ГК, как показано авторами, обнаружившими стволовые клетки РМЖ в 2003 году (Al-Hajj M., Wicha M.S., Benito-Hernandez A., Morrison S.J., Clarke M.F. Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2003. V. 100. No 7. P. 3983-3988). Накапливается все больше данных о важном значении ГК на всех стадиях опухолевого процесса, начиная от его инициации до развития резистентности к противоопухолевой терапии и образования метастазов (Price Z.K., Lokman N.A., Ricciardelli C. Differing Roles of Hyaluronan Molecular Weight on Cancer Cell Behavior and Chemotherapy Resistance// Cancers (Basel). 2018. V.10:482; Karousou E., Misra S., Ghatak S., Dobra K., Götte M., Vigetti D., Passi A., Karamanos N.K., Skandalis S.S. Roles and targeting of the HAS/hyaluronan/CD44 molecular system in cancer// Matrix Biol. 2017. V.59. P. 3-22; Tavianatou A.G., Caon I., Franchi M., Piperigkou Z., Galesso D., Karamanos N.K. Hyaluronan: molecular size-dependent signaling and biological functions in inflammation and cancer// FEBS J. 2019. V. 286. No 15. P.2883-2908; Liu M., Tolg C., Turley E. Dissecting the Dual Nature of Hyaluronan in the Tumor Microenvironment// Front Immunol. 2019. V. 10: 974). В частности, показано, что высокомолекулярная ГК (1-3)х106 Да) способна повышать количество ОСК молочной железы (Замулаева И.А., Абрамова М.Р., Матчук О.Н., Липунов Н.М., Мкртчян Л.С., Крикунова Л.И. Влияние высокомолекулярной гиалуроновой кислоты на размер популяции стволовых клеток рака молочной железы линии MCF-7 //Вопросы Онкологии. 2021. Т. 67. № 2. С. 293-299). Кроме того, в ряде исследований доказано участие экзо- и эндогенной ГК в формировании и поддержании пула ОСК яичников, головы и шеи, глиобластомы и др. с помощью различных молекулярных механизмов, включая индукцию процесса эпителиально-мезенхимального перехода (ЭМП), который приводит к дедифференцировке опухолевых клеток и пополнению пула ОСК (Price Z.K., Lokman N.A., Ricciardelli C. Differing Roles of Hyaluronan Molecular Weight on Cancer Cell Behavior and Chemotherapy Resistance// Cancers (Basel). 2018. V.10:482; Vaidyanath A., Mahmud H.B., Khayrani A.C., Oo A.K., Seno A., Asakura A., Kasaiand T., Seno M. Hyaluronic Acid Mediated Enrichment of CD44 Expressing Glioblastoma Stem Cells in U251MG Xenograft Mouse Model// J Stem Cell Res Ther. 2017. V. 7: 384; Shiina M., Bourguignon L.Y. Selective activation of cancer stem cells by size-specific hyaluronan in head and neck cancer. Int J Cell Biol. 2015. V. 2015: 989070).In breast cancer (BC), HA is of particular importance, since CSCs of this localization express the surface marker CD44, which is one of the GC receptors, as shown by the authors who discovered BC stem cells in 2003 (Al-Hajj M., Wicha MS, Benito - Hernandez A., Morrison SJ, Clarke MF Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 2003. V. 100.
Таким образом, увеличение пула ОСК под влиянием ГК является доказанным фактом, который делает необходимым поиск способов подавления такого влияния, тем более, что ГК с различным молекулярным весом широко используется в клинической практике в составе композиций и препаратов для регенерации биологических тканей (RU 2614722, RU 2667964, RU 2489176), терапии остеоартроза, повреждения связок и др. патологии суставов (RU 2529803), а также для коррекции эстетических и возрастных изменений кожи (RU 2686738, RU 2585893). С практической точки зрения, важно учитывать стимулирующее действие ГК на популяцию ОСК, которое возможно даже при отсутствии признаков онкологического заболевания, например, у лиц после успешно проведенной противоопухолевой терапии, поскольку именно ОСК могут сохраняться при полной клинической регрессии опухоли и, как предполагают, могут являться источником рецидивирования опухолевого процесса спустя долгие годы после лечения. Кроме того, нельзя исключать влияние как эндо-, так и экзогенной ГК на ОСК в опухолевых микроочагах, не выявляемых клинически, но присутствующих в различных органах и тканях человека в возрастающем при старении количестве (Folkman J., Kalluri R. Cancer without disease// Nature. 2004. V. 427. No 6977. P.787). В других изобретениях описаны композиции на основе ГК, которые предложено использовать для профилактики (RU2341271, RU2612821) и лечения онкологических заболеваний, в том числе путем направленной доставки химиопрепаратов в опухолевые клетки (RU2581972, RU2686679, RU2480201, RU2411958, RU2384331, RU2341271, RU2162327, RU2686679, RU2162327). Недостатком перечисленных способов профилактики и лечения с помощью композиций и препаратов ГК является отсутствие данных об их действии на ОСК.Thus, an increase in the TSC pool under the influence of HA is a proven fact, which makes it necessary to find ways to suppress this effect, especially since HA with different molecular weights is widely used in clinical practice as part of compositions and preparations for the regeneration of biological tissues (RU 2614722, RU 2667964, RU 2489176), therapy of osteoarthritis, ligament damage and other joint pathologies (RU 2529803), as well as for the correction of aesthetic and age-related skin changes (RU 2686738, RU 2585893). From a practical point of view, it is important to take into account the stimulating effect of GCs on the CSC population, which is possible even in the absence of signs of oncological disease, for example, in individuals after successful antitumor therapy, since it is CSCs that can persist with complete clinical regression of the tumor and, as suggested, may be source of tumor recurrence many years after treatment. In addition, the influence of both endo- and exogenous HA on CSCs in tumor microfoci that are not clinically detectable, but present in various human organs and tissues in increasing amounts with aging cannot be excluded (Folkman J., Kalluri R. Cancer without disease// Nature 2004 V 427 No 6977 P 787). Other inventions describe compositions based on HA, which are proposed to be used for the prevention (RU2341271, RU2612821) and treatment of oncological diseases, including by targeted delivery of chemotherapy drugs to tumor cells (RU2581972, RU2686679, RU2480201, RU2411958, RU2384331, RU2341271, RU21626 , RU2162327). The disadvantage of these methods of prevention and treatment using compositions and preparations of HA is the lack of data on their effect on CSCs.
Известны многочисленные способы снижения количества ОСК. Известен способ на основе использования полиэфирного ионофорного антибиотика салиномицин, который значимо уменьшает количество ОСК различных злокачественных новообразований, включая РМЖ (Lu Y., Mao J., Yu X. Hou Z., Fan S., Wang H., Li J., Kanq L., Liu P., Liu Q., Li L. Salinomycin exerts anticancer effects on human breast carcinoma MCF-7cancer stem cells via modulation of Hedgehog signaling // Chemico-Biological Interactions. 2015. V. 228. P. 100-107). Существует способ, когда использование салиномицина в качестве радиосенсибилизатора приводит к снижению пула ОСК злокачественных новообразований головы и шеи в условиях in vitro (Zhang Y., Zuo Y., Guan Z., Lu W., Xu Z., Zhang H., Yang Y., Yang M., Zhu H., Chen X. Salinomycin radiosensitizes human nasopharyngeal carcinoma cell line CNE-2 to radiation//Tumour Biol. 2016. V. 37. Nо 1. P. 305-311; Scherzed A., Hackenberg S., Froelich K., Rak K., Ginzkey C., Hagen R., Schendzielorz P., Kleinsasser N. Effects of salinomycin and CGP37157 on head and neck squamous cell carcinoma cell lines in vitro//Mol Med Rep. 2015. V.12. Nо 3. P. 4455-4461). Возможные механизмы действия салиномицина на ОСК связаны с его способностью ингибировать сигнальные пути SOX2, Hedgehog, CXCR4 и др.Numerous methods are known for reducing the amount of CSCs. A known method based on the use of polyester ionophore antibiotic salinomycin, which significantly reduces the number of CSCs of various malignant neoplasms, including breast cancer (Lu Y., Mao J., Yu X. Hou Z., Fan S., Wang H., Li J., Kanq L., Liu P., Liu Q., Li L. Salinomycin exerts anticancer effects on human breast carcinoma MCF-7cancer stem cells via modulation of Hedgehog signaling // Chemico-Biological Interactions 2015. V. 228. P. 100-107 ). There is a method when the use of salinomycin as a radiosensitizer leads to a decrease in the CSC pool of malignant neoplasms of the head and neck in vitro (Zhang Y., Zuo Y., Guan Z., Lu W., Xu Z., Zhang H., Yang Y ., Yang M., Zhu H., Chen X. Salinomycin radiosensitizes human nasopharyngeal carcinoma cell line CNE-2 to radiation//Tumour Biol 2016. V. 37. No. 1. P. 305-311; Scherzed A., Hackenberg S., Froelich K., Rak K., Ginzkey C., Hagen R., Schendzielorz P., Kleinsasser N. Effects of salinomycin and CGP37157 on head and neck squamous cell carcinoma cell lines in vitro//Mol Med Rep. 2015. V.12, No. 3, P. 4455-4461). Possible mechanisms of action of salinomycin on CSCs are associated with its ability to inhibit the signaling pathways SOX2, Hedgehog, CXCR4, etc.
Недостатком салиномицина является его токсичность в отношении клеток нервной системы и других нормальных клеток (Boehmerle W., Endres M. Salinomycin induces calpain and cytochromec-mediated neuronal cell death // Cell Death and Disease. 2011. V. 2. P. 2-10; Jaganmohan R., Jain M.V., Hallbeck A.L., Roberq K., Lotfi K., Los M.J. Glucose starvation-mediated inhibition of salinomycin induced autophagy amplifies cancer cell specific cell death // Oncotarget. 2015. V. 6. No 12. P. 10134-10145).The disadvantage of salinomycin is its toxicity to cells of the nervous system and other normal cells (Boehmerle W., Endres M. Salinomycin induces calpain and cytochromec-mediated neuronal cell death // Cell Death and Disease. 2011. V. 2. P. 2-10 Jaganmohan R., Jain M.V., Hallbeck A.L., Roberq K., Lotfi K., Los M.J. Glucose starvation-mediated inhibition of salinomycin induced autophagy amplifies cancer cell specific cell death // Oncotarget 2015. V. 6.
Известно вещество метформин (1,1 - диметилбигуанид гидрохлорид), которое широко используется в качестве гипогликемического препарата для лечения диабета 2-го типа (Wiernsperger N., Bailey C.J. The antihyperglycaemic effect of metformin: therapeutic and cellular mechanisms // Drugs. 1999. V. 58. No 1. P. 31-39). Доказана его высокая противоопухолевая активность в отношении ОСК молочной железы с иммунофенотипом CD44+СD24-/low. При этом на остальные (не стволовые) опухолевые клетки это вещество оказывало менее выраженное действие (Lee H. Park H.J., Oh E. T., Choi B.H., Williams B., Lee C.K., Somq C.W. Response of Breast Cancer Cells and Cancer Stem Cells to Metformin and Hyperthermia Alone or Combined // PLOS ONE. 2014. V. 9. No 2. P. 1-11).Known substance metformin (1,1 - dimethylbiguanide hydrochloride), which is widely used as a hypoglycemic drug for the treatment of
Ключевым механизмом его действия является способность нарушать окислительное фосфорилирование в митохондриях опухолевых клеток, в том числе ОСК. Недостатком метформина является то, что он наиболее эффективен в отношении ОСК только совместно с гипертермией или радиационным воздействием.The key mechanism of its action is the ability to disrupt oxidative phosphorylation in the mitochondria of tumor cells, including CSCs. The disadvantage of metformin is that it is most effective against CSCs only in combination with hyperthermia or radiation exposure.
Известно вещество куркумин (дифферулоилметан), которое представляет собой полифенол, полученный из азиатской специи куркумы. В многочисленных исследованиях был показан высокий терапевтический потенциал куркумина в качестве средства снижения количества ОСК рака молочной железы (Mukherjee S., Mazumbar M., Manna A., Saha S., Khan P., Bhattacharjee O., Guha D., Adnikary A., Mukhjerjee S., Das T. Curcumin inhibits breast cancer stem cell migration by amplifying the E cadherin/β-cateninnegative feedback loop // Stem Cell Research & Therapy. 2014. No 5. P. 116-134). Куркумин воздействует на ряд сигнальных путей, играющих важную роль в жизнедеятельности ОСК, например, таких как Wnt, Notch-1 и NFκ-B (Gülçür E., Thaqi M., Khaja F., Kuzmis A., Önyüksel H. Curcumin in VIP-targeted sterically stabilized phospholipid nanomicelles: a novel therapeutic approach for breast cancer and breast cancer stem cells // Drug DelivTransl Res. 2013. No 3. P. 1-25). Недостатком этого соединения является его низкая биодоступность, плохая абсорбция и недостаточная стабильность in vivo (Bansal S., Goel M., Aqil F., Vadhanam M., Gupta R. Advanced drug-delivery systems of curcumin for cancer chemoprevention // Cancer Prev. Res. (Phila). 2011. №4. P. 1158-1171; Anand P., Kunnumakkara A., Newman R., Aggarwal B. Bioavailability of Curcumin: Problems and Promises // Molecular Pharmaceutics. 2007. V.4. No 6. P. 807-818).The substance curcumin (differuloylmethane) is known, which is a polyphenol obtained from the Asian spice turmeric. Numerous studies have shown the high therapeutic potential of curcumin as a means of reducing the number of CSCs in breast cancer (Mukherjee S., Mazumbar M., Manna A., Saha S., Khan P., Bhattacharjee O., Guha D., Adnikary A. , Mukhjerjee S., Das T. Curcumin inhibits breast cancer stem cell migration by amplifying the E cadherin/β-cateninnegative feedback loop // Stem Cell Research & Therapy 2014 No 5 pp 116-134). Curcumin affects a number of signaling pathways that play an important role in the life of CSCs, such as Wnt, Notch-1 and NFκ-B (Gülçür E., Thaqi M., Khaja F., Kuzmis A., Önyüksel H. Curcumin in VIP -targeted sterically stabilized phospholipid nanomicelles: a novel therapeutic approach for breast cancer and breast cancer stem cells // Drug DelivTransl Res. 2013. No 3. P. 1-25). The disadvantage of this compound is its low bioavailability, poor absorption and lack of stability in vivo (Bansal S., Goel M., Aqil F., Vadhanam M., Gupta R. Advanced drug-delivery systems of curcumin for cancer chemoprevention // Cancer Prev. Res (Phila) 2011 No 4 pp 1158-1171 Anand P, Kunnumakkara A, Newman R, Aggarwal B Bioavailability of Curcumin: Problems and Promises // Molecular Pharmaceutics 2007 V.4. No 6. P. 807-818).
Известны способы лечения злокачественных новообразований, направленные на снижение количества ОСК с помощью различных механизмов, например, с использованием:Known methods for the treatment of malignant neoplasms, aimed at reducing the number of CSCs using various mechanisms, for example, using:
-замещенных пирролопиримидиновых соединений и композиций на их основе (WO/2016/010886, Zhu D., Boylan J., Xu, S., Riggs J., Shi T., Wurmser A., Mikolon D., Deyanat-Yazdi G. Methods of treating a cancer using substituted pyrrolopyrimidine compounds, compositions thereof);-substituted pyrrolopyrimidine compounds and compositions based on them (WO/2016/010886, Zhu D., Boylan J., Xu, S., Riggs J., Shi T., Wurmser A., Mikolon D., Deyanat-Yazdi G. Methods of treating a cancer using substituted pyrrolopyrimidine compounds, compositions thereof);
-антител к PTK7 и их конъюгатов с цитотоксическим агентом (WO/2012/112943, Foord O., Dylla S. , Stull R., Bankovich A., Lazetic A.L.L., Bernstein J. Novel modulators and methods of use);- antibodies to PTK7 and their conjugates with a cytotoxic agent (WO/2012/112943, Foord O., Dylla S., Stull R., Bankovich A., Lazetic A.L.L., Bernstein J. Novel modulators and methods of use);
- Wnt-связывающего полипептида, ингибирующего Wnt-сигнальный путь, отдельно или в комбинации с другими противоопухолевыми препаратами (WO2011088123, Satyal S. H., Mitra S.S.K., Garni A.L. Wnt antagonists and methods of treating and testing);- a Wnt-binding polypeptide that inhibits the Wnt signaling pathway, alone or in combination with other antitumor drugs (WO2011088123, Satyal S. H., Mitra S.S.K., Garni A.L. Wnt antagonists and methods of treating and testing);
- изменений CD47-сигналинга и индукции дифференцировки ОСК различными средствами (WO/2016/057980, Roberts D.R., Kaur S., Liu C. Methods to eliminate cancer stem cells by targeting CD47).- changes in CD47 signaling and induction of CSC differentiation by various means (WO/2016/057980, Roberts D.R., Kaur S., Liu C. Methods to eliminate cancer stem cells by targeting CD47).
Известен способ снижения количества ОСК с помощью препарата флубендазол. Это соединение является членом семейства бензимидазолов, имеет типичную бензимидазольную часть, но с добавлением атома фтора в основную структуру, чем и отличается от других бензимидазолов. Флубендазол широко используется как эффективное противогельминтное средство. Недавние исследования показали, что флубендазол подавляет пролиферацию опухолевых клеток, а также снижает количество CD44+СD24-/low клеток РМЖ линии MCF-7 на 25% (Hou Z.-J., Luo X., Zang W., Peng F., Cui B., Wu S.-J., Zheng F.-M., Xu J., Xu L.-Z., Long Z.-J., Wang X.-T., Li G.-H., Wan X.-Y., Yang Y.-L., Liu Q. Flubendazole, FDA-approved antihelmintic, targets breast cancer stem-like cells // Oncotarget. 2015. V.6. No.8. P. 6326-6340).A known method of reducing the number of CSCs using the drug flubendazole. This compound is a member of the benzimidazole family, having a typical benzimidazole moiety, but with the addition of a fluorine atom to the main structure, which distinguishes it from other benzimidazoles. Flubendazole is widely used as an effective anthelmintic agent. Recent studies have shown that flubendazole inhibits the proliferation of tumor cells, and also reduces the number of CD44 + CD24 -/low breast cancer cells of the MCF-7 line by 25% (Hou Z.-J., Luo X., Zang W., Peng F., Cui B., Wu S.-J., Zheng F.-M., Xu J., Xu L.-Z., Long Z.-J., Wang X.-T., Li G.-H., Wan X.-Y., Yang Y.-L., Liu Q. Flubendazole, FDA-approved antihelmintic, targets breast cancer stem-like cells // Oncotarget 2015 V.6 No.8 P. 6326-6340 ).
Недостатком способа снижения количества ОСК с помощью флубендазола является низкая биодоступность из-за высокой липофильности соединения.The disadvantage of the method for reducing the amount of CSCs using flubendazole is the low bioavailability due to the high lipophilicity of the compound.
Важно отметить, что для всех вышеперечисленных способов отсутствуют данные об их способности блокировать стимулирующее действие высокомолекулярной ГК на пул ОСК, что является существенным недостатком известных способов уменьшения количества ОСК.It is important to note that for all of the above methods, there is no data on their ability to block the stimulating effect of high-molecular-weight HA on the CSC pool, which is a significant drawback of the known methods for reducing the number of CSCs.
Прототипом предлагаемого технического решения является cпособ снижения количества стволовых клеток рака молочной железы (RU 2702910 C1, Чурюкина К.А., Замулаева И.А., Матчук О.Н., Жузе А.Л., Иванов А.А.). Способ основан на применении ДНК-связывающих лигандов - водонерастворимых димерных бисбензимидазолов (dimeric bisbenzimidazoles - DB). Водонерастворимые димерные бисбензимидазолы являются флуоресцентными химическими соединениями из группы бисбензимидазолов, в которых два бисбензимидазольных блока соединены между собой метиленовым линкером - DB(n), где n- число метиленовых звеньев.The prototype of the proposed technical solution is a method for reducing the number of breast cancer stem cells (RU 2702910 C1, Churyukina K.A., Zamulaeva I.A., Matchuk O.N., Zhuse A.L., Ivanov A.A.). The method is based on the use of DNA-binding ligands - water-insoluble dimeric bisbenzimidazoles (dimeric bisbenzimidazoles - DB). Water-insoluble dimeric bisbenzimidazoles are fluorescent chemical compounds from the group of bisbenzimidazoles, in which two bisbenzimidazole blocks are interconnected by a methylene linker - DB(n), where n is the number of methylene units.
Однако в известном способе отсутствуют данные о влиянии DB(n) на размер пула ОСК при воздействии ГК на опухолевые клетки, включая возможность блокирования стимулирующего эффекта высокомолекулярной ГК в отношении ОСК - критически важной популяции клеток злокачественных новообразований.However, in the known method, there is no data on the effect of DB(n) on the size of the CSC pool when exposed to HA on tumor cells, including the possibility of blocking the stimulating effect of high molecular weight HA on CSC, a critically important population of malignant neoplasm cells.
Технический результат заявляемого изобретения заключается в снижении количества ОСК, индуцированных при воздействии высокомолекулярной ГК 106 Да и более, путем подавления процесса ЭМП.The technical result of the claimed invention is to reduce the number of CSCs induced by exposure to high
Технический результат достигается тем, что так же как в известном способе, на клетки РМЖ in vitro воздействуют с помощью ДНК-связывающих лигандов - водонерастворимых димерных бисбензимидазолов DB(n).The technical result is achieved by the fact that, as in the known method, in vitro breast cancer cells are affected by DNA-binding ligands - water-insoluble dimeric bisbenzimidazoles DB(n).
Особенность заявляемого способа заключается в том, что проводят одновременную инкубацию клеток с водонерастворимым димерным бисбензимидазолом с 7 метиленовыми звеньями в составе линкера DB (7) и гиалуроновой кислотой с молекулярным весом от 1 до 3 кДа при температуре +370С в течение 72 часов, после чего регистрируют снижение количества опухолевых стволовых клеток с иммунофенотипом CD44+СD24-/low.The peculiarity of the proposed method lies in the fact that the cells are simultaneously incubated with water-insoluble dimeric bisbenzimidazole with 7 methylene units as part of the linker DB (7) and hyaluronic acid with a molecular weight of 1 to 3 kDa at a temperature of +37 0 C for 72 hours, after which register a decrease in the number of tumor stem cells with immunophenotype CD44 + CD24 -/low .
Изобретение иллюстрируется подробным описанием, примерами и иллюстрациями, на которых изображено:The invention is illustrated by a detailed description, examples and illustrations, which show:
Фиг. 1 - относительное количество СD44+CD24-/low ОСК линии MCF-7 в контроле, после инкубации клеток с ГК (0,6 мг/мл) или водонерастворимым димерным бисбензимидазолом DB (7) (20 мкМ) или после комбинированного воздействия DB(7) и ГК. Приведены значения р, установленные при сравнении указанных групп по критерию Стьюдента.Fig. 1 - the relative amount of CD44 + CD24 -/low MCF-7 CSCs in control, after incubation of cells with GA (0.6 mg/ml) or water-insoluble dimeric bisbenzimidazole DB (7) (20 μM) or after combined exposure to DB (7 ) and GK. The p values determined by comparing the indicated groups according to the Student's test are given.
Фиг. 2 - абсолютное количество СD44+CD24-/low ОСК линии MCF-7 в контроле, после инкубации клеток с ГК (0,6 мг/мл) или водонерастворимым димерным бисбензимидазолом DB (7) (20 мкМ) или после комбинированного воздействия DB(7) и ГК. Приведены значения р, установленные при сравнении указанных групп по критерию Стьюдента.Fig. 2 - absolute amount of CD44 + CD24 -/low CSCs of the MCF-7 line in control, after incubation of cells with HA (0.6 mg/ml) or water-insoluble dimeric bisbenzimidazole DB (7) (20 μM) or after combined exposure to DB (7 ) and GK. The p values determined by comparing the indicated groups according to the Student's test are given.
Фиг. 3 - интенсивность связывания клеток линии MCF-7 с антителами к виментину в интактном контроле, после одиночного или комбинированного действия DB(7) и ГК. Сплошная горизонтальная линия показывает среднюю интенсивность флуоресценции клеток после обработки контрольными иммуноглобулинами (изотипический контроль неспецифического связывания), пунктирные линии отмечают стандартную ошибку (± SE) средней интенсивности флуоресценции в контроле неспецифического связывания; *p=0,005 при сравнении с интактным контролем, ^p=0,02 при сравнении с контролем неспецифического связывания.Fig. 3 - the intensity of binding of MCF-7 cells with antibodies to vimentin in the intact control, after a single or combined action of DB(7) and HA. The solid horizontal line shows the mean fluorescence intensity of cells after treatment with control immunoglobulins (non-specific binding isotype control), the dotted lines indicate the standard error (± SE) of the mean fluorescence intensity in the non-specific binding control; *p=0.005 when compared with intact control, ^p=0.02 when compared with non-specific binding control.
Способ осуществляют следующим образом.The method is carried out as follows.
Способ включает несколько этапов.The method includes several steps.
I этап - одиночное и комбинированное воздействие DB(7) и ГК на клетки РМЖ.Stage I - single and combined effects of DB(7) and HA on breast cancer cells.
Клетки РМЖ линии MCF-7 человека культивируют в среде DMEM (ПанЭко, Россия), содержащей 10% фетальной сыворотки крупного рогатого скота (Biosera, Франция), пенициллин (50 ед/мл), стрептомицин (50 мкг/мл) и глютамин (292 мг/л), в стандартных условиях при 37°С в СО2-инкубаторе (Shellab, США). Клетки рассевают в пластиковые флаконы с площадью дна 25см2 (Corning, США) по 250 тысяч клеток/флакон в полной питательной среде DMEM. Через 24 ч в часть флаконов добавляют DB(7) в конечной концентрации 20 мкМ, в часть флаконов - высокомолекулярную ГК (106 Да и более) в конечной концентрации 0,6 мг/мл, которая примерно соответствует физиологической норме, в часть флаконов добавляют одновременно DB(7) и ГК в указанных концентрациях и инкубируют в течение 72 ч в стандартных условиях. Таким образом, формируют группы «Контроль», «ГК», «DB(7)», «DB(7)+ГК».Human MCF-7 breast cancer cells are cultivated in DMEM medium (PanEco, Russia) containing 10% fetal bovine serum (Biosera, France), penicillin (50 units/ml), streptomycin (50 μg/ml) and glutamine (292 mg/l), under standard conditions at 37°C in a CO 2 incubator (Shellab, USA). Cells were seeded into 25 cm2 plastic flasks ( Corning, USA) at 250,000 cells/vial in complete DMEM nutrient medium. After 24 hours, DB(7) is added to some vials at a final concentration of 20 μM, high-molecular-weight HA (10 6 Da and more) is added to some vials at a final concentration of 0.6 mg/ml, which approximately corresponds to the physiological norm, simultaneously DB(7) and HA at the indicated concentrations and incubated for 72 hours under standard conditions. Thus, the groups "Control", "GK", "DB(7)", "DB(7)+GK" are formed.
После инкубации с указанными соединениями клетки снимают со дна контрольных и опытных флаконов с помощью смеси версен/трипсин (1:1). С помощью камеры Горяева определяют концентрацию и общее количество клеток в каждом флаконе.After incubation with the indicated compounds, the cells are removed from the bottom of the control and experimental flasks using a mixture of versene/trypsin (1:1). Using the Goryaev camera, the concentration and total number of cells in each vial are determined.
Далее в полученных суспензиях выявляют ОСК (II этап) и оценивают экспрессию виментина на белковом уровне (III этап).Further, CSCs are detected in the resulting suspensions (stage II) and vimentin expression is evaluated at the protein level (stage III).
II этап - выявление и количественная оценка CD44+СD24-/low ОСК.Stage II - detection and quantification of CD44 + CD24 -/low CSC.
Клетки из каждого флакона разводят в соотношении 1 млн клеток на 100 мкл холодного раствора Хэнкса, в который добавляют моноклональные антитела к CD44, меченные флуоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ) (Becton Dickinson - BD, США), и антитела к CD24, меченные фикоэритрином (ФЭ) (BD, США), из расчета по 20 мкл антител на 1 млн клеток. Для контроля неспецифического связывания используют моноклональные антитела соответствующих изотипов к гемоцианину улитки, конъюгированные с теми же флуорохромами, что и антитела к указанным поверхностным маркерам (BD, США). Пробы инкубируют с антителами в течение 30 минут на льду в темноте, затем отмывают в 0,01M фосфатно-солевом буферном растворе, pH 7,2 (PBS, Панэко, Россия), центрифугируют в течение 5 минут при 200xg и к получившемуся осадку добавляют холодный раствор Хэнкса. Пробы ресуспендируют и немедленно анализируют на стандартном проточном цитофлуориметре, оснащенном лазером с длиной волны 488 нм (например, FACSCalibur, Becton Dickinson, США).Cells from each vial are diluted at a ratio of 1 million cells per 100 µl of cold Hanks solution, to which monoclonal antibodies to CD44 labeled with fluorescein isothiocyanate (FITC) (Becton Dickinson - BD, USA) and antibodies to CD24 labeled with phycoerythrin (PE) are added ( BD, USA), based on 20 µl of antibodies per 1 million cells. To control non-specific binding, monoclonal antibodies of the corresponding isotypes to snail hemocyanin conjugated with the same fluorochromes as antibodies to the indicated surface markers (BD, USA) are used. Samples are incubated with antibodies for 30 minutes on ice in the dark, then washed in 0.01M phosphate-buffered saline, pH 7.2 (PBS, Paneko, Russia), centrifuged for 5 minutes at 200xg, and cold Hanks solution. Samples are resuspended and immediately analyzed on a standard flow cytometer equipped with a 488 nm laser (eg FACSCalibur, Becton Dickinson, USA).
В каждом образце анализируют и собирают в файл данные об интенсивности прямого и бокового светорассеяния, флуоресценции ФИТЦа и ФЭ. В ходе обработки файлов выполняют стандартную процедуру выделения региона неповрежденных клеток и удаления дебриса по показателям светорассеяния. Затем оценивают интенсивность флуоресценции ФИТЦа и ФЭ в выделенном регионе неповрежденных клеток. С учетом контроля неспецифического связывания идентифицируют клетки с иммунофенотипом CD44+СD24-/low и определяют их относительное количество (%). Абсолютное количество CD44+СD24-/low клеток вычисляют путем умножения доли этих клеток на общее количество клеток во флаконе, определенное с помощью камеры Горяева.In each sample, data on the intensity of direct and side light scattering, fluorescence of FITC and PE are analyzed and collected in a file. In the course of processing the files, a standard procedure for isolating the region of intact cells and removing debris in terms of light scattering is performed. Then, the intensity of fluorescence of FITC and PE in the selected region of intact cells is assessed. Taking into account the control of non-specific binding, cells with the immunophenotype CD44 + CD24 -/low are identified and their relative number (%) is determined. The absolute number of CD44 + CD24 -/low cells is calculated by multiplying the proportion of these cells by the total number of cells in the vial, determined using a Goryaev camera.
III этап - оценка экспрессии виментина в клетках РМЖ.Stage III - evaluation of vimentin expression in breast cancer cells.
Из каждого флакона отбирают аликвоты по 250 тыс. клеток, фиксируют их в холодном ацетоне и хранят при -20°С. Перед окрашиванием клетки 3-кратно отмывают в PBS c 1% бычьим сывороточным альбумином, после чего инкубируют с моноклональными антителами к виментину, меченными ФЭ (BD, США), в течение 1ч при комнатной температуре в соотношении 5 мкл антител/250 тыс. клеток. Для контроля неспецифического связывания используют моноклональные антитела того же изотипа к гемоцианину улитки, конъюгированные с ФЭ (BD, США). После инкубации клетки отмывают в PBS от несвязавшихся антител и немедленно анализируют с помощью стандартного проточного цитофлуориметра, например, FACSCalibur (BD, США) по показателям интенсивности светорассеяния и флуоресценции ФЭ. Определяют среднюю интенсивность флуоресценции ФЭ в клетках после исключения дебриса по показателям светорассеяния.Aliquots of 250 thousand cells are taken from each vial, fixed in cold acetone and stored at -20°C. Before staining, the cells were washed 3 times in PBS with 1% bovine serum albumin, and then incubated with PE-labeled monoclonal antibodies to vimentin (BD, USA) for 1 h at room temperature at a ratio of 5 μl of antibodies/250,000 cells. To control nonspecific binding, monoclonal antibodies of the same isotype to snail hemocyanin conjugated with PE (BD, USA) are used. After incubation, cells are washed in PBS to remove unbound antibodies and immediately analyzed using a standard flow cytometer, for example, FACSCalibur (BD, USA) in terms of light scattering intensity and PE fluorescence. Determine the average intensity of the fluorescence of the FE in the cells after the exclusion of debris in terms of light scattering.
Изобретение поясняется примерами.The invention is illustrated by examples.
Пример 1. Изменение относительного количества CD44+СD24-/low ОСК после одиночного или комбинированного воздействия DB(7) и ГК с молекулярным весом (1-3)х106Да на клетки РМЖExample 1. Change in the relative amount of CD44 + CD24 -/low CSC after a single or combined effect of DB(7) and HA with a molecular weight of (1-3)x10 6 Da on breast cancer cells
Клетки РМЖ линии MCF-7 культивировали in vitro в присутствии DB(7) в конечной концентрации 20 мкМ и высокомолекулярной ГК (1-3)х106 Да) в конечной концентрации 0,6 мг/мл в течение 72 ч в стандартных условиях. Далее клетки снимали с подложки и в полученных клеточных суспензиях определяли относительное количество (%) клеток с иммунофенотипом CD44+СD24-/low с помощью проточной цитометрии. В результате было подтверждено значительное повышение относительного количества ОСК под влиянием высокомолекулярной ГК по сравнению с контрольным уровнем, а также снижение относительного количества ОСК под влиянием DB(7) по сравнению с контролем, описанное в прототипе (Фиг. 1).MCF-7 breast cancer cells were cultured in vitro in the presence of DB(7) at a final concentration of 20 μM and high-molecular-weight HA (1-3) x 10 6 Da) at a final concentration of 0.6 mg/ml for 72 h under standard conditions. Next, the cells were removed from the substrate and the relative number (%) of cells with the CD44 + CD24 -/low immunophenotype was determined in the resulting cell suspensions using flow cytometry. As a result, a significant increase in the relative amount of CSC under the influence of high molecular weight HA compared with the control level was confirmed, as well as a decrease in the relative amount of CSC under the influence of DB(7) compared with the control described in the prototype (Fig. 1).
Установлено, что соединение DB(7) в комбинации с ГК статистически значимо снижает относительное количество CD44+СD24-/low ОСК в 12,7 раз по сравнению с одиночным воздействием ГК (р=0,0004), т.е. происходит подавление стимулирующего эффекта ГК в отношении пула ОСК. При комбинированном воздействии отмечается тенденция к снижению относительного количества ОСК по сравнению с таковым в контроле: 0,14±0,02% vs 0,29±0,04% в среднем, соответственно (р=0,108).It was found that the DB(7) compound in combination with HA statistically significantly reduced the relative amount of CD44 + CD24 -/low TSC by 12.7 times compared with a single exposure to GA (p=0.0004), i.e. there is a suppression of the stimulating effect of GC in relation to the CSC pool. With combined exposure, there is a tendency to decrease in the relative amount of TSC compared with that in the control: 0.14±0.02% vs 0.29±0.04% on average, respectively (p=0.108).
Пример 2. Изменение абсолютного количества CD44+СD24-/low ОСК после одиночного или комбинированного воздействия DB(7) и ГК с молекулярным весом (1-3)х106Да на клетки РМЖExample 2. Change in the absolute number of CD44 + CD24 -/low TSC after a single or combined effect of DB(7) and HA with a molecular weight of (1-3)x10 6 Da on breast cancer cells
Клетки РМЖ линии MCF-7 культивировали in vitro в присутствии DB(7) в конечной концентрации 20 мкМ и высокомолекулярной ГК (1-3)х106 Да) в конечной концентрации 0,6 мг/мл в течение 72 ч в стандартных условиях. Далее клетки снимали с подложки, определяли их общее количество и рассчитывали абсолютное количество клеток с иммунофенотипом CD44+СD24-/low, идентифицированных с помощью проточной цитометрии. В результате было показано значительное повышение абсолютного количества ОСК под влиянием высокомолекулярной ГК по сравнению с интактным контролем (Фиг. 2). Как и в прототипе, зарегистрировано многократное снижение абсолютного количества ОСК под влиянием DB(7) по сравнению с контролем (р=0,002).MCF-7 breast cancer cells were cultured in vitro in the presence of DB(7) at a final concentration of 20 μM and high-molecular-weight HA (1-3)x106 Yes) at a final concentration of 0.6 mg/ml for 72 hours under standard conditions. Next, the cells were removed from the substrate, their total number was determined, and the absolute number of cells with the CD44 immunophenotype was calculated.+CD24-/low, identified by flow cytometry. The result was showed a significant increase in the absolute amount of CSC under the influence of high molecular weight HA compared with the intact control (Fig. 2). As in the prototype, registered multiple reduction in the absolute number of CSC under the influence of DB(7) compared with control (p=0.002).
Комбинированное использование DB(7) и ГК статистически значимо снижало абсолютное количество CD44+СD24-/low ОСК в 41,3 раза по сравнению с одиночным действием ГК (р=0,0004) и в 8,5 раз по сравнению с интактным контролем (р=0,006). Таким образом, под влиянием DB(7) стимулирующий эффект ГК в отношении пула ОСК нивелировался, и более того, количество ОСК уменьшалось до уровня ниже, чем в контроле.The combined use of DB(7) and GA statistically significantly reduced the absolute number of CD44 + CD24 -/low CSC by 41.3 times compared with the single action of GA (p=0.0004) and by 8.5 times compared with the intact control ( p=0.006). Thus, under the influence of DB(7), the stimulating effect of GC on the CSC pool was leveled, and moreover, the number of CSCs decreased to a level lower than in the control.
Пример 3. Белковая экспрессия виментина как маркера ЭМП в клетках линии MCF-7 РМЖ после одиночного или комбинированного воздействия DB(7) и ГК с молекулярным весом (1-3)×106ДаExample 3. Protein expression of vimentin as an EMT marker in MCF-7 BC cells after single or combined exposure to DB(7) and HA with a molecular weight of (1-3)×10 6 Da
Клетки РМЖ линии MCF-7 культивировали in vitro в присутствии DB(7) в конечной концентрации 20 мкМ и высокомолекулярной ГК (1-3)х106 Да) в конечной концентрации 0,6 мг/мл в течение 72 ч в стандартных условиях. Далее клетки снимали с подложки, фиксировали в ацетоне и окрашивали с помощью флуоресцирующих антител к виментину (одному из основных маркеров ЭМП). С помощью проточной цитометрии оценивали связывание клеток с антителами к виментину в сравнении с контролем неспецифического связывания (контрольными иммуноглобулинами, имеющими тот же изотип и меченными тем же флуорохромом, что антитела к виментину).MCF-7 breast cancer cells were cultured in vitro in the presence of DB(7) at a final concentration of 20 μM and high-molecular-weight HA (1-3) x 10 6 Da) at a final concentration of 0.6 mg/ml for 72 h under standard conditions. Next, the cells were removed from the substrate, fixed in acetone, and stained with fluorescent antibodies to vimentin (one of the main EMT markers). Cell binding to anti-vimentin antibodies was assessed by flow cytometry compared to a non-specific binding control (control immunoglobulins having the same isotype and labeled with the same fluorochrome as anti-vimentin antibodies).
Фиг. 3 показывает, что интактные клетки линии MCF-7 в общей массе не экспрессируют виментин, т.к. средняя интенсивность флуоресценции клеток, обработанных антителами к этому белку, не отличалась от таковой после инкубации с контрольными иммуноглобулинами того же изотипа. Однако после инкубации клеток с высокомолекулярной ГК обнаружено специфическое связывание антител к виментину, что свидетельствует об индукции процесса ЭМП, который является важным механизмом дедифференцировки опухолевых клеток, вследствие чего происходит увеличение пула ОСК под влиянием ГК. Обработка клеток с помощью DB(7) полностью блокировала ЭМП, индуцированный ГК. Таким образом, по крайней мере, одним из механизмов снижения количества ОСК при комбинированном действии DB(7) и ГК является подавление ЭМП, зарегистрированное нами по отсутствию экспрессии виментина.Fig. 3 shows that intact cells of the MCF-7 line do not express vimentin in general, since the average fluorescence intensity of cells treated with antibodies to this protein did not differ from that after incubation with control immunoglobulins of the same isotype. However, after incubation of cells with high molecular weight HA, specific binding of antibodies to vimentin was found, which indicates the induction of the EMT process, which is an important mechanism for the dedifferentiation of tumor cells, resulting in an increase in the CSC pool under the influence of HA. Treatment of cells with DB(7) completely blocked GC-induced EMT. Thus, at least one of the mechanisms for reducing the number of CSCs under the combined action of DB(7) and HA is the suppression of EMT, which we registered by the absence of vimentin expression.
Вместе примеры №1 и №2 показывают высокую эффективность действия DB(7) на популяцию ОСК, индуцируемую высокомолекулярной ГК в клеточной культуре РМЖ. Установлено, что DB (7) многократно уменьшает абсолютное количество CD44+СD24-/low ОСК по сравнению с одиночным действием ГК. При этом DB(7) обладает направленным действием именно на ОСК, снижая их количество в большей степени по сравнению с остальными опухолевыми клетками, как следует из примера 1.Together, examples No. 1 and No. 2 show the high efficiency of the action of DB(7) on the CSC population induced by high molecular weight HA in breast cancer cell culture. It has been established that DB (7) significantly reduces the absolute number of CD44 + CD24 -/low TSCs compared with a single action of HA. At the same time, DB(7) has a targeted effect specifically on CSCs, reducing their number to a greater extent compared to other tumor cells, as follows from example 1.
Пример №3 проясняет механизм снижения количества ОСК, которые индуцируются под влиянием ГК, путем подавления процесса ЭМП.Example No. 3 clarifies the mechanism for reducing the number of CSCs that are induced under the influence of HA by suppressing the EMT process.
В соответствии с концепцией ОСК, все ключевые характеристики злокачественных новообразований, делающие их смертельно опасными заболеваниями, определяются именно ОСК. Ряд факторов опухолевого микроокружения, включая высокомолекулярную ГК, способны повышать количество ОСК, которые являются более химио- и радиорезистентными, чем остальная масса опухолевых клеток.In accordance with the concept of CSC, all the key characteristics of malignant neoplasms that make them deadly diseases are determined by CSC. A number of factors of the tumor microenvironment, including high molecular weight HA, are able to increase the number of CSCs, which are more chemo- and radioresistant than the rest of the mass of tumor cells.
Предлагаемый способ подавления индукции ОСК позволит повысить химио-и радиочувствительность опухоли в целом, что в свою очередь будет способствовать повышению эффективности лечения.The proposed method for suppressing CSC induction will increase the chemo- and radiosensitivity of the tumor as a whole, which in turn will increase the effectiveness of treatment.
Claims (1)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2774031C1 true RU2774031C1 (en) | 2022-06-14 |
Family
ID=
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005063714A1 (en) * | 2003-12-23 | 2005-07-14 | Infinity Pharmaceuticals, Inc | Analogs of benzoquinone-containing ansamycins for the treatment of cancer |
| EP2890720B1 (en) * | 2012-08-30 | 2019-07-17 | The General Hospital Corporation | Compositions and methods for treating cancer |
| RU2702910C2 (en) * | 2018-12-20 | 2019-10-14 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр радиологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ радиологии" Минздрава России) | Method for reducing the number of stem cells of breast cancer |
| WO2020010250A2 (en) * | 2018-07-03 | 2020-01-09 | Elstar Therapeutics, Inc. | Anti-tcr antibody molecules and uses thereof |
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005063714A1 (en) * | 2003-12-23 | 2005-07-14 | Infinity Pharmaceuticals, Inc | Analogs of benzoquinone-containing ansamycins for the treatment of cancer |
| EP2890720B1 (en) * | 2012-08-30 | 2019-07-17 | The General Hospital Corporation | Compositions and methods for treating cancer |
| WO2020010250A2 (en) * | 2018-07-03 | 2020-01-09 | Elstar Therapeutics, Inc. | Anti-tcr antibody molecules and uses thereof |
| RU2702910C2 (en) * | 2018-12-20 | 2019-10-14 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр радиологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ радиологии" Минздрава России) | Method for reducing the number of stem cells of breast cancer |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ЗАМУЛАЕВА И. и др. Влияние высокомолекулярной гиалуроновой кислоты на популяцию стволовых клеток рака молочной железы линии MCF-7. Вопросы Онкологии. 2021, 67(2), стр. 293-299. ТИТОВ К.С. и др. Опухолевые стволовые клетки при раке молочной железы. Роль в патогенезе и подходы к терапии. Злокачественные опухоли. 2016, 2, стр. 22-27. JARIYAL H. et al., Hyaluronic acid induction on breast cancer stem cells unfolds subtype specific variations in stemness and epithelial-to-mesenchymal transition. Int J Biol Macromol. 2020, 160, p. 1078-1089. CHURYUKINA A.L. et al., Effects of dimeric bisbenzimidazoles and ionizing radiation on MCF-7 breast cancer stem cells. Biophysics. 2020, 65, p. 74-81. HE L. et al., Nanomedicine-mediated therapies to target breast cancer stem cells. Front Pharmacol. 2016, 7, p. 313. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Liu et al. | Boosting natural killer cell-based cancer immunotherapy with selenocystine/transforming growth factor-beta inhibitor-encapsulated nanoemulsion | |
| Quagliariello et al. | New treatment of medullary and papillary human thyroid cancer: biological effects of hyaluronic acid hydrogel loaded with quercetin alone or in combination to an inhibitor of aurora kinase | |
| Du et al. | Effects and mechanisms of anti-CD44 monoclonal antibody A3D8 on proliferation and apoptosis of sphere-forming cells with stemness from human ovarian cancer | |
| Ji et al. | Glioma stem cell research for the development of immunotherapy | |
| Farahi et al. | Crocin and Metformin suppress metastatic breast cancer progression via VEGF and MMP9 downregulations: in vitro and in vivo studies | |
| Tu et al. | Rhodiola crenulata induces death and inhibits growth of breast cancer cell lines | |
| Kefayat et al. | Spirulina extract enriched for Braun‐type lipoprotein (Immulina®) for inhibition of 4T1 breast tumors' growth and metastasis | |
| Wang et al. | Fucoxanthin prevents breast cancer metastasis by interrupting circulating tumor cells adhesion and transendothelial migration | |
| Kumar et al. | Immunometabolic reprogramming, another cancer hallmark | |
| RU2774031C1 (en) | Method for suppressing the inducing action of high molecular weight hyaluronic acid on breast cancer stem cells | |
| Li et al. | The roles of epigallocatechin gallate in the tumor microenvironment, metabolic reprogramming, and immunotherapy | |
| Liao et al. | Cardamonin induces immune responses and enhances survival rate in WEHI‐3 cell–generated mouse leukemia in vivo | |
| Yüce et al. | Hyperthermia‐stimulated tonsil‐mesenchymal stromal cells suppress hematological cancer cells through downregulation of IL‐6 | |
| Alraouji et al. | Osteoprotegerin (OPG) mediates the anti-carcinogenic effects of normal breast fibroblasts and targets cancer stem cells through inhibition of the β-catenin pathway | |
| Fırat et al. | Comparative Effects of Boric Acid and Resveratrol on MCF-7 Breast Cancer Cells Metastatic Behaviour | |
| Gao et al. | The combination of lps and melatonin induces m2 macrophage apoptosis to prevent lung cancer | |
| RU2702910C2 (en) | Method for reducing the number of stem cells of breast cancer | |
| Keenan | Identifying the therapeutic potential of novel compounds in the treatment of Glioblastoma Multiforme. | |
| Duran et al. | Is Metformin a New Breakthrough in Bladder Cancer Treatment? | |
| Miao et al. | Ginsenoside Rb prevents the metastasis of hepatocarcinoma by blocking the platelet-tumor cell interaction | |
| Endharti et al. | Research Article Coelomic Fluid of Lumbricus rubellus Synergistically Enhances Cytotoxic Effect of 5-Fluorouracil through Modulation of Focal Adhesion Kinase and p21 in HT-29 Cancer Cell Line | |
| Mona et al. | Cannabidiol and CNR2 Signaling Derives N2-Like Neutrophil Polarization with Impaired Bacterial Killing and Cancer Promoting Properties | |
| Ambrosino et al. | Cytochines and liver failure: modification of TNF-a and IL-6 in patients with acute on chronic liver decompensation treted with molecular adsorbent recycling system (Mars) | |
| Reckers et al. | Homologous medial meniscus transplantation: comparative study of four fixation techniques in rabbits | |
| Maellaro et al. | SENSITIVITY OF HUMAN METASTATIC MELANOMA CELLS TO THE ESTER ANALOG OF RAPAMYCIN, CCI-779 |