RU2686100C1 - Cytotoxic and antiviral activity of 3-acyloxymethyl-3-oxo-1-cyano-2,3-seco-2-nor-triterpenoids - Google Patents
Cytotoxic and antiviral activity of 3-acyloxymethyl-3-oxo-1-cyano-2,3-seco-2-nor-triterpenoids Download PDFInfo
- Publication number
- RU2686100C1 RU2686100C1 RU2018145628A RU2018145628A RU2686100C1 RU 2686100 C1 RU2686100 C1 RU 2686100C1 RU 2018145628 A RU2018145628 A RU 2018145628A RU 2018145628 A RU2018145628 A RU 2018145628A RU 2686100 C1 RU2686100 C1 RU 2686100C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seco
- cyano
- oxo
- triterpenoids
- compound
- Prior art date
Links
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 title description 6
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 title description 2
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 32
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 11
- 230000003253 viricidal effect Effects 0.000 description 10
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 9
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N ethyl (e)-3-[3-amino-2-cyano-1-[(e)-3-ethoxy-3-oxoprop-1-enyl]sulfanyl-3-oxoprop-1-enyl]sulfanylprop-2-enoate Chemical compound CCOC(=O)\C=C\SC(=C(C#N)C(N)=O)S\C=C\C(=O)OCC NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methylphenyl)sulfonylbutane-1,4-dione Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)C(C(=O)C=1C=CC(Cl)=CC=1)CC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 4
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 101100452672 Solanum lycopersicum TIV1 gene Proteins 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- -1 bromomethylene Chemical group 0.000 description 3
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;hexane Chemical compound CCCCCC.CCOC(C)=O OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000012552 review Methods 0.000 description 3
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- QGJZLNKBHJESQX-UHFFFAOYSA-N 3-Epi-Betulin-Saeure Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C(=C)C)C5C4CCC3C21C QGJZLNKBHJESQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CLOUCVRNYSHRCF-UHFFFAOYSA-N 3beta-Hydroxy-20(29)-Lupen-3,27-oic acid Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C(O)=O)CCC5(C)CCC(C(=C)C)C5C4CCC3C21C CLOUCVRNYSHRCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BSYNRYMUTXBXSQ-FOQJRBATSA-N 59096-14-9 Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1[14C](O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-FOQJRBATSA-N 0.000 description 2
- DIZWSDNSTNAYHK-XGWVBXMLSA-N Betulinic acid Natural products CC(=C)[C@@H]1C[C@H]([C@H]2CC[C@]3(C)[C@H](CC[C@@H]4[C@@]5(C)CC[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]5CC[C@@]34C)[C@@H]12)C(=O)O DIZWSDNSTNAYHK-XGWVBXMLSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- JYDNKGUBLIKNAM-UHFFFAOYSA-N Oxyallobutulin Natural products C1CC(=O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(CO)CCC(C(=C)C)C5C4CCC3C21C JYDNKGUBLIKNAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N aciclovir Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N(COCCO)C=N2 MKUXAQIIEYXACX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004150 aciclovir Drugs 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- FVWJYYTZTCVBKE-ROUWMTJPSA-N betulin Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(CO)CC[C@@H](C(=C)C)[C@@H]5[C@H]4CC[C@@H]3[C@]21C FVWJYYTZTCVBKE-ROUWMTJPSA-N 0.000 description 2
- MVIRREHRVZLANQ-UHFFFAOYSA-N betulin Natural products CC(=O)OC1CCC2(C)C(CCC3(C)C2CC=C4C5C(CCC5(CO)CCC34C)C(=C)C)C1(C)C MVIRREHRVZLANQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGJZLNKBHJESQX-FZFNOLFKSA-N betulinic acid Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CC[C@@H](C(=C)C)[C@@H]5[C@H]4CC[C@@H]3[C@]21C QGJZLNKBHJESQX-FZFNOLFKSA-N 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- PZXJOHSZQAEJFE-UHFFFAOYSA-N dihydrobetulinic acid Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C(C)C)C5C4CCC3C21C PZXJOHSZQAEJFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 2
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- MQYXUWHLBZFQQO-UHFFFAOYSA-N nepehinol Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C)CCC(C(=C)C)C5C4CCC3C21C MQYXUWHLBZFQQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 206010023825 Laryngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000340666 Stauntonia obovatifoliola Species 0.000 description 1
- 125000003668 acetyloxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)O[*] 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;ethyl acetate Chemical compound CCOCC.CCOC(C)=O SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 201000005264 laryngeal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- NKMDIWKRKQFYPH-VIUFNMEASA-N lupane Chemical compound C1CCC(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C)CC[C@@H](C(C)C)[C@@H]5[C@H]4CC[C@@H]3[C@]21C NKMDIWKRKQFYPH-VIUFNMEASA-N 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000028 nontoxic concentration Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 150000002966 pentacyclic triterpenoids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N tetramethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)C CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
- C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
- C07J41/0094—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 containing nitrile radicals, including thiocyanide radicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к новым химическим соединениям класса А-секотритерпеноидов лупанового и 18αН-олеананового типа, которые проявляют цитотоксическую и противовирусную активности.The invention relates to new chemical compounds of class A-sekritterpenoidov lupanovogo and 18αH-oleanovogo type, which exhibit cytotoxic and antiviral activity.
Природный тритерпеноид бетулин и его полусинтетических производные - перспективные источники для разработки новых терапевтически активных агентов [
Наиболее близкие аналоги описываемых соединений по структуре - метиловый эфир 3-О-сукцинил-1-циано-2,3-секолуп-20(29)-ен-28-овой кислоты, метиловый эфир 3-O-3',3'-диметилсукцинил-1-циано-2,3-секолуп-20(29)-ен-28-овой кислоты, метиловый эфир 3-O-3',3'-диметилглутарил-1-циано-2,3-секолуп-20(29)-ен-28-овой кислоты, которые обладают способностью подавлять репродукцию ВГП-1 в диапазонах концентраций от МПК до 1/4 МПК со снижением титра вируса, достигающим более 2,2 lg ТЦИД50/мл [И.А. Толмачева, В.В. Гришко, Е.В. Игошева, Е.И. Бореко, В.Ф. Еремин, И.И. Кучеров, О.В. Савинова. Лупановые А-секотритерпеноиды, проявляющие противовирусную активность // Патент РФ №2470003, опубл. 20.12.2012, бюл. №35] и метиловые эфиры 3-метил-3-оксо-1-циано-2,3-секо-2-норлуп-20(29)-ен-30-аль-28-овой и 3-(бромметилен)-3-оксо-1-циано-2,3-секо-2-норлуп-20(29)-ен-30-аль-28-овой кислот, проявляющие цитотоксическую активность в отношении опухолевых клеток линий НЕр-2, НСТ 116, MS, RD ТЕ 32 и А549 [А.В. Конышева, В.О. Небогатиков, И.А. Толмачева, В.В. Гришко, Е.Ю. Рыбалкина, А.Ф. Карамышева. Метиловые эфиры 3-метил-3-оксо-1-циано-2,3-секо-2-норлуп-20(29)-ен-30-аль-28-овой и 3-(бромметилен)-3-оксо-1-циано-2,3-секо-2-норлуп-20(29)-ен-30-аль-28-овой кислот, проявляющие цитотоксическую активность // Патент РФ №2632002, опубликован 2.10.2017, бюл. №28].The closest analogues of the described compounds in structure are methyl 3-O-succinyl-1-cyano-2,3-Secolup-20 (29) -ene-28-oic acid, methyl 3-O-3 ', 3'- dimethylsuccinyl-1-cyano-2,3-secolup-20 (29) -ene-28-oic acid, methyl 3-O-3 ', 3'-dimethylglutaryl-1-cyano-2,3-secolup-20 ( 29) -28-oic acid, which have the ability to suppress the reproduction of AIV-1 in concentration ranges from BMD to 1/4 of BMD with a decrease in virus titer, reaching more than 2.2 lg TCID 50 / ml [I.A. Tolmacheva, V.V. Grishko, E.V. Igosheva, E.I. Boreko, V.F. Eremin, I.I. Kucherov, O.V. Savinov. Lupane A-secotriterpenoids exhibiting antiviral activity // Patent of the Russian Federation No. 2470003, publ. 12/20/2012, bul. No. 35] and methyl esters of 3-methyl-3-oxo-1-cyano-2,3-seco-2-norlup-20 (29) -ene-30-al-28-th and 3- (bromomethylene) -3 -oxo-1-cyano-2,3-seco-2-norlup-20 (29) -en-30-al-28-oic acids, exhibiting cytotoxic activity against tumor cells of the HEp-2, HCT 116, MS lines, RD TE 32 and A549 [A.V. Konysheva, V.O. Nebogatikov, I.A. Tolmacheva, V.V. Grishko, E.Yu. Rybalkina, A.F. Karamysheva. Methyl esters of 3-methyl-3-oxo-1-cyano-2,3-seco-2-norlup-20 (29) -ene-30-al-28-ovoy and 3- (bromomethylene) -3-oxo-1 -cyano-2,3-seco-2-norlup-20 (29) -en-30-al-28-oic acids exhibiting cytotoxic activity // RF patent №2632002, published October 2, 2017, bull. No. 28].
Задача изобретения - синтез новых тритерпеновых производных для расширения спектра противоопухолевых и противовирусных агентов.The objective of the invention is the synthesis of new triterpene derivatives for the expansion of the spectrum of anticancer and antiviral agents.
1. Для решения поставленной задачи синтезированы 3-ацилоксиметил-3-оксо-1-циано-2,3-секо-2-нор-тритерпеноиды общей формулы:1. To solve this problem, 3-acyloxymethyl-3-oxo-1-cyano-2,3-seco-2-nor-triterpenoids of the general formula were synthesized:
2. Соединение по п. 1, где 
3. Соединение по п. 1, где 
4. Соединение по п. 1, где 
Синтезированы соединения общей формулы, где 
и 
Полученные соединения представляют собой бесцветные мелкокристаллические вещества, хорошо растворимые в хлороформе, дихлорметане, четыреххлористом углероде, этиловом спирте, бензоле, толуоле, диметилсульфоксиде, плохо растворимые в гексане и не растворимые в воде.The compounds obtained are colorless crystalline substances, soluble in chloroform, dichloromethane, carbon tetrachloride, ethyl alcohol, benzene, toluene, dimethyl sulfoxide, poorly soluble in hexane and not soluble in water.
Структура соединений I-III подтверждена методами ИК и ЯМР спектроскопии. Спектральные характеристики соединений I-III приведены в таблице. Спектры ЯМР 1Н и 13С ЯМР (δ, м.д.; J, Гц) для растворов соединений I-III в CDCl3 записывали на спектрометре Bruker AVANCE II (Германия) при рабочей частоте прибора 400 и 100 МГц соответственно. В качестве внутреннего стандарта использовали тетраметилсилан. ИК спектры (ν, см-1) регистрировали на ИК-Фурье-спектрометре IFS 66/S Bruker (Германия) в тонкой пленке, полученной испарением раствора вещества в CHCl3 на поверхности стекла NaCl. Пороговое значение температуры в точке плавления определяли на приборе OptiMelt МРА100 (США) со скоростью 1°С в мин. Величину удельного оптического вращения измеряли для растворов соединений в CHCl3 на поляриметре 341 модели Perkin-Elmer (США) при длине волны 589 нм. Качественный контроль реакции проводили методом ТСХ на пластинах «Sorbfil» (Россия). Обнаружение веществ осуществляли обработкой пластин 5% H2SO4 и последующим прогреванием при 95-100°С в течение 2-3 мин. Для колоночной хроматографии использовали силикагель марки «Macherey-nagel» (60-200 μm), в качестве элюента - смесь петролейный эфир-этилацетат в соотношение 7:1. Величины Rf определяли в системе петролейный эфир-этилацетат 1:1.The structure of compounds I-III was confirmed by IR and NMR spectroscopy. The spectral characteristics of compounds I-III are given in the table. NMR spectra of 1 H and 13 C NMR (δ, ppm; J, Hz) for solutions of compounds I-III in CDCl 3 were recorded on a Bruker AVANCE II spectrometer (Germany) with an instrument operating frequency of 400 and 100 MHz, respectively. Tetramethylsilane was used as an internal standard. IR spectra (ν, cm -1 ) were recorded on an IFS 66 / S Bruker IR Fourier spectrometer (Germany) in a thin film obtained by evaporating a solution of a substance in CHCl 3 on the surface of a NaCl glass. The threshold temperature at the melting point was determined on the OptiMelt MPA100 (USA) at a rate of 1 ° C per minute. The value of specific optical rotation was measured for solutions of compounds in CHCl 3 on a polarimeter 341 of the Perkin-Elmer model (USA) at a wavelength of 589 nm. Qualitative control of the reaction was performed by TLC on Sorbfil plates (Russia). The detection of substances was carried out by treating the plates with 5% H 2 SO 4 and subsequent heating at 95-100 ° C for 2-3 minutes. For column chromatography, Macherey-Nagel silica gel (60–200 μm) was used, and a mixture of petroleum ether and ethyl acetate in a ratio of 7: 1 was used as eluent. The R f values were determined in the petroleum ether-ethyl acetate system 1: 1.
В исследованиях in vitro выявлена цитотоксическая активность соединения I в отношении линий опухолевых клеток НСТ 116, MS и RD ТЕ32.In vitro studies revealed the cytotoxic activity of compound I in relation to the HCT 116, MS, and RD TE32 tumor cell lines.
В исследованиях in vitro выявлена цитотоксическая активность соединения II в отношении линий опухолевых клеток НСТ 116 и RD ТЕ32.In vitro studies revealed the cytotoxic activity of compound II with respect to the HCT 116 and RD TE32 tumor cell lines.
Соединение III in vitro проявляет ингибирующую активность в отношении репродукции ВИЧ-1 и вирусов герпеса простого I и II типа и обладает одновременно вирулицидными свойствами.Compound III in vitro exhibits inhibitory activity against the reproduction of HIV-1 and herpes simplex viruses of type I and type II and simultaneously possesses virucidal properties.
Описания заявляемых соединений и их свойств в источниках информации не обнаружено.Descriptions of the claimed compounds and their properties in the sources of information not found.
Сущность предлагаемого решения и возможность его осуществления подтверждается примерами 1-5 и результатами исследований, приведенными в таблицах 1-3.The essence of the proposed solution and the possibility of its implementation is confirmed by examples 1-5 and the research results given in tables 1-3.
Пример 1. Получение метилового эфира 3-(ацетилокси)метил-3-оксо-1-циано-2,3-секо-2-нор-луп-20(29)-ен-30-аль-28-овой кислоты (соединение I). 0.3 г (5.1 ммоль) Метилового эфира 3-бромметил-3-оксо-1-циано-2,3-секо-2-нор-луп-20(29)-ен-30-аль-28-овой кислоты [A.V. Konysheva, V.O. Nebogatikov, I.A. Tolmacheva, M.V. Dmitriev, V.V. Grishko. Synthesis of cytotoxically active derivatives based on alkylated 2,3-seco-triterpenoids // Eur. J. Med. Chem. - 2017. - Vol. 140. - P. 74-83] растворяли в 10 мл абсолютного ацетона, добавляли 0.03 мл (5.1 ммоль) уксусной кислоты, девятикратный избыток триэтиламина и четырехкратный избыток K2CO3. Реакционную смесь кипятили в течение 12 ч. Ход реакции контролировали методом ТСХ. По окончании реакции K2CO3 отделяли фильтрованием, реакционную смесь промывали 10% раствором HCl и затем водой до нейтральной реакции среды. Продукты реакции экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Органический слой сушили над безводным MgSO4, растворитель упаривали, соединение I очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле.Example 1. Preparation of 3- (acetyloxy) methyl-3-oxo-1-cyano-2,3-seco-2-nor-loop-20 (29) -ene-30-al-28-oic acid methyl ester (compound I). 0.3 g (5.1 mmol) of methyl 3-bromomethyl-3-oxo-1-cyano-2,3-seco-2-nor-lup-20 (29) -ene-30-al-28-oic acid [AV Konysheva , VO Nebogatikov, IA Tolmacheva, MV Dmitriev, VV Grishko. Synthesis of cytotoxically active derivatives based on alkylated 2,3-seco-triterpenoids // Eur. J. Med. Chem. - 2017. - Vol. 140. - P. 74-83] was dissolved in 10 ml of absolute acetone, 0.03 ml (5.1 mmol) of acetic acid, nine-fold excess of triethylamine and four-fold excess of K 2 CO 3 were added. The reaction mixture was boiled for 12 hours. The progress of the reaction was monitored by TLC. Upon completion of the reaction, K 2 CO 3 was separated by filtration, the reaction mixture was washed with a 10% HCl solution and then with water until neutral. The reaction products were extracted with ethyl acetate (3 × 50 ml). The organic layer was dried over anhydrous MgSO 4 , the solvent was evaporated, compound I was purified by silica gel column chromatography.
Выход 53%; Rf 0.46; т. пл. 141.1°С (гексан-этилацетат), 
Пример 2. Получение метилового эфира 3-(2'-ацетилоксибензоилокси)метил-3-оксо-1-циано-2,3-секо-2-нор-луп-20(29)-ен-30-аль-28-овой кислоты (соединение II). 0.3 г (5.1 ммоль) Метилового эфира 3-бромметил-3-оксо-1-циано-2,3-секо-2-нор-луп-20(29)-ен-30-аль-28-овой кислоты [A.V. Konysheva, V.O. Nebogatikov, I.A. Tolmacheva, M.V. Dmitriev, V.V. Grishko. Synthesis of cytotoxically active derivatives based on alkylated 2,3-seco-triterpenoids // Eur. J. Med. Chem. - 2017. - Vol. 140. - P. 74-83] растворяли в 10 мл абсолютного ацетона, добавляли 0.09 г (5.4 ммоль) ацетилсалициловой кислоты, девятикратный избыток триэтиламина и четырехкратный избыток K2CO3. Реакционную смесь кипятили в течение 12 ч. Ход реакции контролировали методом ТСХ. По окончании реакции K2CO3 отделяли фильтрованием, реакционную смесь промывали 10% раствором HCl и затем водой до нейтральной реакции среды. Продукты реакции экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Органический слой сушили над безводным MgSO4, растворитель упаривали, соединение II очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле.Example 2. Preparation of 3- (2'-acetyloxybenzoyloxy) methyl-3-oxo-1-cyano-2,3-seco-2-nor-loop-20 (29) -ene-30-al-28-ome methyl ester acids (compound II). 0.3 g (5.1 mmol) of methyl 3-bromomethyl-3-oxo-1-cyano-2,3-seco-2-nor-lup-20 (29) -ene-30-al-28-oic acid [AV Konysheva , VO Nebogatikov, IA Tolmacheva, MV Dmitriev, VV Grishko. Synthesis of cytotoxically active derivatives based on alkylated 2,3-seco-triterpenoids // Eur. J. Med. Chem. - 2017. - Vol. 140. - P. 74-83] was dissolved in 10 ml of absolute acetone, 0.09 g (5.4 mmol) of acetylsalicylic acid, nine-fold excess of triethylamine and four-fold excess of K 2 CO 3 were added. The reaction mixture was boiled for 12 hours. The progress of the reaction was monitored by TLC. Upon completion of the reaction, K 2 CO 3 was separated by filtration, the reaction mixture was washed with a 10% HCl solution and then with water until neutral. The reaction products were extracted with ethyl acetate (3 × 50 ml). The organic layer was dried over anhydrous MgSO 4 , the solvent was evaporated, compound II was purified by silica gel column chromatography.
Бесцветные кристаллы. Выход 55%; Rf 0.46; т. пл. 108.7°С (гексан-этилацетат), 
Пример 3. Получение 3-(2'-ацетилоксибензоилокси)метил-3-оксо-1-циано-19β,28-эпокси-2,3-секо-2-нор-18αH-олеан-3-она (соединение III). 0.3 г (5.4 ммоль) 3-бромметил-1-циано-19β,28-эпокси-2,3-секо-2-нор-18αН-олеан-3-она [А.V. Konysheva, V.O. Nebogatikov, I.A. Tolmacheva, M.V. Dmitriev, V.V. Grishko. Synthesis of cytotoxically active derivatives based on alkylated 2,3-seco-triterpenoids // Eur. J. Med. Chem. - 2017. - Vol. 140. - P. 74-83] растворяли в 10 мл абсолютного ацетона, добавляли 0,10 г (5.4 ммоль) ацетилсалициловой кислоты, девятикратный избыток триэтиламина и четырехкратный избыток K2CO3. Реакционную смесь кипятили в течение 12 ч. Ход реакции контролировали методом ТСХ. По окончании реакции K2CO3 отделяли путем фильтрования, реакционную смесь промывали 10% раствором HCl и затем водой до нейтральной реакции среды. Продукты реакции экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Органический слой сушили над безводным MgSO4, растворитель упаривали, соединение III очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле.Example 3. Preparation of 3- (2'-acetyloxybenzoyloxy) methyl-3-oxo-1-cyano-19β, 28-epoxy-2,3-seco-2-nor-18αH-olean-3-one (compound III). 0.3 g (5.4 mmol) of 3-bromomethyl-1-cyano-19β, 28-epoxy-2,3-seco-2-nor-18αH-olean-3-one [A.V. Konysheva, VO Nebogatikov, IA Tolmacheva, MV Dmitriev, VV Grishko. Synthesis of cytotoxically active derivatives based on alkylated 2,3-seco-triterpenoids // Eur. J. Med. Chem. - 2017. - Vol. 140. - P. 74-83] was dissolved in 10 ml of absolute acetone, 0.10 g (5.4 mmol) of acetylsalicylic acid, nine-fold excess of triethylamine and four-fold excess of K 2 CO 3 were added. The reaction mixture was boiled for 12 hours. The progress of the reaction was monitored by TLC. At the end of the reaction, K 2 CO 3 was separated by filtration, the reaction mixture was washed with 10% HCl solution and then with water until neutral. The reaction products were extracted with ethyl acetate (3 × 50 ml). The organic layer was dried over anhydrous MgSO 4 , the solvent was evaporated, compound III was purified by silica gel column chromatography.
Выход 58%; Rf 0.44; т. пл. 197.6°С (гексан-этилацетат), 
Пример 4. Исследование цитотоксической активности соединений I и II в отношении опухолевых клеток линий НЕр-2 (карцинома гортани), НСТ 116 (колоректальная карцинома), MS (меланома), RD ТЕ32 (рабдомиосаркома), А549 (немелкоклеточная карцинома легкого), MCF-7 (рак молочной железы) и линии неопухолевых клеток HEK293.Example 4. The study of the cytotoxic activity of compounds I and II in relation to tumor cells of the lines HEp-2 (larynx carcinoma), HCT 116 (colorectal carcinoma), MS (melanoma), RD TE32 (rhabdomyosarcoma), A549 (non-small cell lung carcinoma), MCF- 7 (breast cancer) and non-tumor HEK293 cell lines.
Клетки выращивали при температуре 37°С во влажной стерильной атмосфере 5% CO2 в CO2-инкубаторе Isotemp Barnstead (США) в соответствующих средах: для НЕр-2, RD ТЕ 32, А549, MCF-7 и HEK 293 использовали DMEM, для MS и НСТ 116 - RPMI 1640. В культуральные среды добавляли 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 2 мМ L-глутамина и 1% гентамицина. В эксперименте клетки высевали в 96-луночные планшеты в концентрации 1×104 клеток/100 мкл. После 24 ч инкубации к монослою клеток добавляли исследуемые соединения в концентрации от 10-6 до 10-4 М в виде раствора в ДМСО. В качестве контроля использовали лунки с добавлением 0,1% ДМСО. Через 72 ч инкубации в лунки вносили по 20 мкл МТТ (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромид, Alfa Aesar, UK) в концентрации 5 мг/мл, после чего планшеты инкубировали дополнительно 4 ч. Затем среду сливали, кристаллы формазана растворяли в 100 мкл ДМСО. Оптическую плотность растворов измеряли при 544 нм с помощью планшетного спектрофотометра FLUOstar Optima (BMG Labtech, GmbH).Cells were grown at 37 ° C in a humidified sterile atmosphere containing 5% CO 2 in a CO 2 incubator Isotemp Barnstead (USA) in appropriate media: for HEp-2, RD TE 32, A549, MCF-7 and HEK 293 using DMEM, for MS and HCT 116 - RPMI 1640. 10% fetal calf serum, 2 mM L-glutamine and 1% gentamicin were added to the culture media. In the experiment, cells were seeded in 96-well plates at a concentration of 1 × 10 4 cells / 100 μl. After 24 hours of incubation, test compounds were added to the cell monolayer at a concentration of from 10 -6 to 10 -4 M as a solution in DMSO. Wells with the addition of 0.1% DMSO were used as controls. After 72 h of incubation, 20 μl of MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide, Alfa Aesar, UK) were added to the wells at a concentration of 5 mg / ml, after which the plates were further incubated 4 h. Then the medium was decanted, the formazan crystals were dissolved in 100 μl of DMSO. The optical density of the solutions was measured at 544 nm using a FLUOstar Optima plate spectrophotometer (BMG Labtech, GmbH).
В качестве количественных показателей цитотоксичности по кривой «доза - эффект» рассчитывали концентрации тестируемого соединения, которые вызывают гибель 50% клеток в культуре (IC50). Индекс селективности соединений рассчитывали по формуле: ИС=IC50 соединения для клеточной линии HEK 293 / IC50 соединения для линии опухолевых клеток. Результаты представлены в виде среднего значения трех независимых экспериментов. В качестве препарата сравнения использовали доксорубицин.As a quantitative measure of cytotoxicity, the dose-effect curve calculated the concentrations of the test compound that cause the death of 50% of cells in culture (IC 50 ). The selectivity index of the compounds was calculated by the formula: IC = IC 50 compounds for the cell line HEK 293 / IC 50 compounds for the tumor cell line. The results are presented as mean values of three independent experiments. Doxorubicin was used as a reference drug.
Результаты исследования цитотоксической активности соединений I и II представлены в таблице 2.The results of the study of the cytotoxic activity of compounds I and II are presented in table 2.
Пример 5. Исследование противовирусной активности соединения III. Использовали вирусы герпеса простого 1 и 2 типа (ВГП-1 и ВГП-2), вирусингибирующие свойства соединений изучали в экспериментах на культуре клеток рабдомиосаркомы человека (RD). Монослойную культуру клеток, выращенную во флаконах, отмывали от ростовой среды, инфицировали 0,01-0,001 ТЦИД50/клетка вирусов путем нанесения разведения вируссодержащей суспензии в объеме 0,1 мл на 1 ч при 37°С. Затем жидкость удаляли и клетки покрывали средой поддержки (среда DMEM), содержащей различные концентрации исследуемого вещества. После 72 ч инкубации при 37°С регистрировали морфологические изменения монослоя клеток (цитопатический эффект вируса, увеличение ×80). Титр вируса в присутствии исследуемого вещества и в контроле рассчитывали в lg ТЦИД50 (50% тканевая цитопатогенная инфицирующая доза). Критерием противовирусного действия считали наличие различий титра вируса в сравнении с контролем. На основании полученных данных вычисляли концентрации 50 и 90% подавления размножения вируса в присутствии изучаемого вещества (ЕС50 и ЕС90). Отношения максимальная переносимая концентрация (МПК)/ЕС50 и МПК/ЕС90 использовали в качестве величин, свидетельствующих о широте диапазона активных нетоксичных концентраций вещества. МПК определяли как максимальную концентрацию вещества, не оказывающую влияния на морфологию неокрашенной культуры клеток.Example 5. The study of the antiviral activity of compound III. Herpes simplex viruses of types 1 and 2 were used (AIV-1 and AIV-2), the virus-inhibiting properties of the compounds were studied in experiments on human rhabdomyosarcoma (RD) cell culture. A monolayer cell culture grown in vials was washed from the growth medium, infected with 0.01-0.001 TCID 50 / virus cell by applying a dilution of virus-containing suspension in a volume of 0.1 ml for 1 h at 37 ° C. The liquid was then removed and the cells were coated with support medium (DMEM medium) containing various concentrations of the test substance. After 72 hours of incubation at 37 ° C, morphological changes in the cell monolayer were recorded (cytopathic effect of the virus, magnification × 80). The titer of the virus in the presence of the test substance and in the control was calculated in lg TCID 50 (50% tissue cytopathogenic infectious dose). The criterion of antiviral action was considered the presence of differences in virus titer compared with the control. On the basis of the obtained data, the concentrations of 50 and 90% suppression of the reproduction of the virus in the presence of the studied substance were calculated (EC 50 and EC 90 ). The maximum tolerated concentration (IPC) / EC 50 and IPC / EC 90 ratios were used as values indicating the breadth of the range of active non-toxic concentrations of the substance. BMD was defined as the maximum concentration of a substance that does not affect the morphology of an unstained cell culture.
При проведении исследований вирусингибирующей активности в отношении репродукции вируса иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1, штамм ВИЧ-1zmb) использовали перевиваемые суспензионные культуры Т-лимфобластоидных линий клеток человека МТ-4 и CEMss. Для поддержки их жизнедеятельности использовали среду RPMI-1640. Исследование выполняли в 96-луночных панелях. Инфицирование культур клеток проводили 106 lg вируса. Инфицированную культуру клеток инкубировали в атмосфере 5% CO2 при 37°С в течение 72 ч. После завершения инкубации учет результатов осуществляли посредством добавления в лунки панели реагента МТТ (3-(4,5-диметил-тиазол-2)-2,5-дифенол-тетразолиум-бромида) в концентрации 7,5 мкг/мл. После выдерживания при 37°С в течение 3 ч надосадок из лунок удаляли, образовавшийся формазановый продукт растворяли в диметилсульфоксиде, затем проводили измерение интенсивности развившегося окрашивания на спектрофотометре при длине волны 550/630 нм. На основе полученных значений определяли процент жизнеспособных клеток, вычисляли ЕС50 вирусингибирующего действия исследуемого вещества и соотношение МПК/ЕС50, характеризующее широту спектра его нетоксических эффективных концентраций.When conducting research on the virus-inhibitory activity on the reproduction of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1, HIV-1 strain zmb ), transplantable suspension cultures of T-lymphoblastoid human cell lines MT-4 and CEMss were used. To support their livelihoods, RPMI-1640 was used. The study was performed in 96-well panels. Infection of cell cultures was performed 10 6 lg of the virus. The infected cell culture was incubated in an atmosphere of 5% CO 2 at 37 ° C for 72 hours. After the incubation was completed, the results were recorded by adding MTT reagent (3- (4,5-dimethyl-thiazol-2) -2.5) to the wells of the panel. -diphenol-tetrazolium bromide) at a concentration of 7.5 µg / ml. After incubation at 37 ° C for 3 h, the supernatant was removed from the wells, the resulting formazan product was dissolved in dimethyl sulfoxide, then the intensity of the developed staining was measured on a spectrophotometer at a wavelength of 550/630 nm. On the basis of the obtained values, the percentage of viable cells was determined, the EC 50 of the virus inhibitory effect of the analyte and the IPC / EC 50 ratio, characterizing the width of the spectrum of its non-toxic effective concentrations, were calculated.
О вирулицидных свойствах соединения судили по остаточной инфекционности ВГП-1 после контакта. Суспензию исследуемого вещества объединяли с неразведенной суспензией вируса и выдерживали при комнатной температуре в течение заданного времени. После завершения экспозиции готовили последовательные десятикратные разведения смеси на поддерживающей среде и инфицировали ими выращенную монослойную культуру клеток (во флаконах или в лунках планшет). После инкубации регистрировали морфологические изменения монослоя клеток и вычисляли титр вируса. Критерием наличия вирулицидного действия считали различие в титре вируса в сравнении с группой без экспозиции (точка «0»). Вычисляли время достижения 50 и 90% вирулицидного действия (ЕТ50 и ЕТ90 соответственно).The virucidal properties of the compound were judged by the residual infectivity of AIV-1 after contact. The suspension of the test substance was combined with the undiluted suspension of the virus and kept at room temperature for a specified time. After the exposure was completed, serial tenfold dilutions of the mixture were prepared on a supporting medium and they infected a grown monolayer cell culture (in vials or in wells). After incubation, morphological changes in the cell monolayer were recorded and the virus titer was calculated. The criterion of the presence of the virucidal action was considered the difference in the titer of the virus in comparison with the group without exposure (point "0"). Calculate the time to reach 50 and 90% virucidal action (ET 50 and ET 90, respectively).
Исследование вирулицидной активности в отношении ВИЧ-1 проводили в 96-луночных панелях с использованием перевиваемых суспензионных Т-лимфобластоидных линий клеток человека МТ-4 и CEMss, поддерживающей среды RPMI-1640 в последовательности, изложенной выше в примере для вируса герпеса простого. После экспозиции вируссодержащей суспензии с разведениями исследуемого соединения готовили ряд серийных разведений этой смеси и инфицировали ими заранее подготовленные культуры однотипных клеток. Определение процента жизнеспособных клеток проводили с помощью формазанового теста в МТТ-варианте.The study of virucidal activity against HIV-1 was performed in 96-well panels using transplantable suspension T-lymphoblastoid human cell lines MT-4 and CEMss, supporting medium RPMI-1640 in the sequence described above in the herpes simplex virus example above. After exposure of the vaccine-containing suspension with dilutions of the test compound, a series of serial dilutions of this mixture were prepared and infected cultures of similar cells were infected by them. The determination of the percentage of viable cells was performed using the formazan test in the MTT variant.
Полученные данные свидетельствуют о практически одинаковой вирусингибирующей активности соединения III в отношении ВГП-1 и ВГП-2 (таблица 3), несмотря на их неодинаковую чувствительность к действию ацикловира: ВГП-1 чувствителен (ЕС50 ацикловира 2,9 (3,2÷2,7) мкМ); ВГП-2 устойчив (ЕС50 163,0 (174,5÷151,9) мкМ). Ингибирующие свойства в отношении репродукции ВИЧ-1 были слабыми - в пределах концентраций 15,5-154,8 мкМ.The data obtained indicate that the virus inhibitory activity of compound III is practically the same with respect to VGP-1 and VGP-2 (Table 3), despite their unequal sensitivity to the action of acyclovir: VGP-1 is sensitive (EU 50 acyclovir 2.9 (3.2 ÷ 2 , 7) μM); VGP-2 is stable (EC 50 163.0 (174.5 ÷ 151.9) μM). The inhibitory properties with respect to the reproduction of HIV-1 were weak - in the range of 15.5-154.8 μM.
При исследовании вирулицидных свойств соединения III снижение титра ВГП-1 за 60 мин экспозиции достигло 2,18 lg ТЦИД50/мл, значения ЕТ50 и ЕТ90 вирулицидного действия составили 6,4 и 13,7 мин соответственно. Вычисленные значения ЕС50 и ЕС90 вирулицидного действия соединения при 60 мин экспозиции были равны 1,6 и 49,7 мкМ, при 30 мин экспозиции - 264,4 и 587,3 мкМ соответственно. Вирулицидные свойства соединения в отношении ВИЧ-1 были наиболее высокими: показатель жизнеспособности клеток МТ-4 и CEMss при 5-30 мин экспозиции составил ≥60%, ЕТ50=0,03 мин, ЕС50<154,8 мкМ.In the study of the virucidal properties of compound III, the reduction in the titer of VGP-1 over 60 minutes of exposure reached 2.18 lg TCID 50 / ml, the values of ET 50 and ET 90 of virucidal action were 6.4 and 13.7 minutes, respectively. The calculated values of the EC 50 and EC 90 of the virucidal action of the compound at 60 min exposure were 1.6 and 49.7 μM, at 30 min exposure - 264.4 and 587.3 μM, respectively. The virucidal properties of the compound with respect to HIV-1 were the highest: the viability index of the cells MT-4 and CEMss at 5-30 min exposure was ≥60%, ET 50 = 0.03 min, EC 50 <154.8 μM.
Полученные вещества могут быть использованы для разработки противоопухолевых (соединение I, II) и противовирусных (соединение III) средств.The resulting substances can be used to develop antitumor (compound I, II) and antiviral (compound III) means.
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018145628A RU2686100C1 (en) | 2018-12-20 | 2018-12-20 | Cytotoxic and antiviral activity of 3-acyloxymethyl-3-oxo-1-cyano-2,3-seco-2-nor-triterpenoids |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018145628A RU2686100C1 (en) | 2018-12-20 | 2018-12-20 | Cytotoxic and antiviral activity of 3-acyloxymethyl-3-oxo-1-cyano-2,3-seco-2-nor-triterpenoids |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018125078A Division RU2682669C1 (en) | 2018-07-09 | 2018-07-09 | Cytotoxic and anti-viral activity of 3-acyloximethyl-3-oxo-1-cyano-2,3-seco-2-nor-triterpenoides |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2686100C1 true RU2686100C1 (en) | 2019-04-24 |
Family
ID=66314680
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018145628A RU2686100C1 (en) | 2018-12-20 | 2018-12-20 | Cytotoxic and antiviral activity of 3-acyloxymethyl-3-oxo-1-cyano-2,3-seco-2-nor-triterpenoids |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2686100C1 (en) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2410390C1 (en) * | 2009-08-03 | 2011-01-27 | Учреждение Российской академии наук Институт технической химии Уральского отделения РАН | 2,3-seco-derivatives of betulonic acid |
| RU2470003C1 (en) * | 2011-10-07 | 2012-12-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт технической химии Уральского отделения Российской академии наук (ИТХ УрО РАН) | Lupane a-seco-triterpenoids exhibiting antiviral activity |
| RU2537840C1 (en) * | 2013-11-28 | 2015-01-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт технической химии Уральского отделения Российской академии наук | A-seco-triterpenoids with methylketone fragment |
| RU2632002C1 (en) * | 2016-12-28 | 2017-10-02 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Пермский федеральный исследовательский центр Уральского отделения Российской академии наук (ПФИЦ УрО РАН) | Methyl esters 3-methyl-3-oxo-1-cyano-2,3-seco-2-norlup-20(29)-ene-30-al-28 and 3-bromethylene-3-oxo-1-cyano -2,3-seco-2-norlup-20(29)-ene-30-al-28 acids which exhibit cytotoxic activity |
-
2018
- 2018-12-20 RU RU2018145628A patent/RU2686100C1/en active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2410390C1 (en) * | 2009-08-03 | 2011-01-27 | Учреждение Российской академии наук Институт технической химии Уральского отделения РАН | 2,3-seco-derivatives of betulonic acid |
| RU2470003C1 (en) * | 2011-10-07 | 2012-12-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт технической химии Уральского отделения Российской академии наук (ИТХ УрО РАН) | Lupane a-seco-triterpenoids exhibiting antiviral activity |
| RU2537840C1 (en) * | 2013-11-28 | 2015-01-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт технической химии Уральского отделения Российской академии наук | A-seco-triterpenoids with methylketone fragment |
| RU2632002C1 (en) * | 2016-12-28 | 2017-10-02 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Пермский федеральный исследовательский центр Уральского отделения Российской академии наук (ПФИЦ УрО РАН) | Methyl esters 3-methyl-3-oxo-1-cyano-2,3-seco-2-norlup-20(29)-ene-30-al-28 and 3-bromethylene-3-oxo-1-cyano -2,3-seco-2-norlup-20(29)-ene-30-al-28 acids which exhibit cytotoxic activity |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| И. А. Толмачева и др. "Синтез и биологическая активность моно- и диамидов 2,3-секотритерпеновых кислот" БИООРГАНИЧЕСКАЯ ХИМИЯ, т.39, N2, 2013, 212-220 . * |
| Л. В. Аникина и др. "Иммунотропная активность лупановых и олеановых 2,3-секо-тритерпеноидов" БИООРГАНИЧЕСКАЯ ХИМИЯ, т.36, N2, 2010, 259-264. * |
| Л. В. Аникина и др. "Иммунотропная активность лупановых и олеановых 2,3-секо-тритерпеноидов" БИООРГАНИЧЕСКАЯ ХИМИЯ, т.36, N2, 2010, 259-264. И. А. Толмачева и др. "Синтез и биологическая активность моно- и диамидов 2,3-секотритерпеновых кислот" БИООРГАНИЧЕСКАЯ ХИМИЯ, т.39, N2, 2013, 212-220 . * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Spivak et al. | Triphenylphosphonium cations of betulinic acid derivatives: Synthesis and antitumor activity | |
| Urban et al. | Synthesis of A-seco derivatives of betulinic acid with cytotoxic activity | |
| Jia et al. | The synthesis and biological evaluation of novel Danshensu–cysteine analog conjugates as cardiovascular-protective agents | |
| Wu et al. | Synthesis and biological evaluation of podophyllotoxin derivatives as selective antitumor agents | |
| Nicolov et al. | Cocrystal formation of betulinic acid and ascorbic acid: Synthesis, physico-chemical assessment, antioxidant, and antiproliferative activity | |
| TW201004626A (en) | Antioxidant inflammation modulators: C-17 homologated oleanolic acid derivatives | |
| Perković et al. | Novel NSAID 1-acyl-4-cycloalkyl/arylsemicarbazides and 1-acyl-5-benzyloxy/hydroxy carbamoylcarbazides as potential anticancer agents and antioxidants | |
| Kazakova et al. | Synthesis of triterpenoid acylates: Effective reproduction inhibitors of influenza A (H1N1) and papilloma viruses | |
| TW201127850A (en) | Ursolic acid derivative and pharmaceutical composition thereof | |
| Kaur et al. | A comparative study of proapoptotic potential of cyano analogues of boswellic acid and 11-keto-boswellic acid | |
| Kahnt et al. | Platanic acid-derived methyl 20-amino-30-norlupan-28-oates are potent cytotoxic agents acting by apoptosis | |
| WO2010132334A1 (en) | 3,28-disubstituted betulinic acid derivatives as anti-hiv agents | |
| Zhou et al. | Synthesis and biological activity of glycyrrhetinic acid derivatives as antitumor agents | |
| Kokosza et al. | Design, synthesis, antiviral and cytostatic evaluation of novel isoxazolidine nucleotide analogues with a carbamoyl linker | |
| RU2470003C1 (en) | Lupane a-seco-triterpenoids exhibiting antiviral activity | |
| RU2410390C1 (en) | 2,3-seco-derivatives of betulonic acid | |
| Pereslavtseva et al. | Synthesis of A-pentacyclic triterpene α, β-alkenenitriles | |
| Khusnutdinova et al. | The synthesis and selective cytotoxicity of new Mannich bases, derivatives of 19-and 28-alkynyltriterpenoids | |
| Pattnaik et al. | Synthesis of ring-C modified oleanolic acid derivatives and their cytotoxic evaluation | |
| Kazakova et al. | Evaluation of A-azepano-triterpenoids and related derivatives as antimicrobial and antiviral agents | |
| Stankova et al. | Synthesis, antioxidative and antiviral activity of hydroxycinnamic acid amides of thiazole containing amino acid | |
| RU2686100C1 (en) | Cytotoxic and antiviral activity of 3-acyloxymethyl-3-oxo-1-cyano-2,3-seco-2-nor-triterpenoids | |
| Baltina et al. | Synthesis and anti-HIV-1 activity of new conjugates of 18 β-and 18 α-glycyrrhizic acids with aspartic acid esters | |
| RU2682669C1 (en) | Cytotoxic and anti-viral activity of 3-acyloximethyl-3-oxo-1-cyano-2,3-seco-2-nor-triterpenoides | |
| RU2537840C1 (en) | A-seco-triterpenoids with methylketone fragment |