RU2652444C1 - Способ применения слизи кожи рыб для активации агрегации тромбоцитов и свертывания крови in vitro - Google Patents

Способ применения слизи кожи рыб для активации агрегации тромбоцитов и свертывания крови in vitro Download PDF

Info

Publication number
RU2652444C1
RU2652444C1 RU2017111942A RU2017111942A RU2652444C1 RU 2652444 C1 RU2652444 C1 RU 2652444C1 RU 2017111942 A RU2017111942 A RU 2017111942A RU 2017111942 A RU2017111942 A RU 2017111942A RU 2652444 C1 RU2652444 C1 RU 2652444C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
mucus
blood
fish skin
hemostasis
platelet aggregation
Prior art date
Application number
RU2017111942A
Other languages
English (en)
Inventor
Любовь Леонидовна Фомина
Денис Игоревич Суров
Анастасия Эдуардовна Вайцель
Дарья Игоревна Березина
Original Assignee
федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Вологодская государственная молочнохозяйственная академия имени Н.В. Верещагина" (ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Вологодская государственная молочнохозяйственная академия имени Н.В. Верещагина" (ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА) filed Critical федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Вологодская государственная молочнохозяйственная академия имени Н.В. Верещагина" (ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА)
Priority to RU2017111942A priority Critical patent/RU2652444C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2652444C1 publication Critical patent/RU2652444C1/ru

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, а именно гематологии. Способ определения пригодности слизи кожи рыб для осуществления гемостаза путем активации агрегации тромбоцитов и свертывания крови IN VITRO включает внесение слизи в плазму крови овец, обогащенную тромбоцитами (ОТП), в нативную кровь и определение времени образования сгустка визуально и путем фотометрии на фотоэлектроколориметре (ФЭК) в опытной и контрольной пробах. При ускорении образования сгустка по сравнению с контролем судят о пригодности слизи кожи рыб для осуществления гемостаза. 2 табл., 1 пр.

Description

Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, а именно гематологии. Известны препараты биологического гемостаза, а именно фибриновая пленка, коллагеновая гемостатическая губка [7, 8], гемостоп, желатиновая губка, ГемоКомпакт, Тахокомб и др., которые активно разрабатываются и внедряются в повседневную практику хирурга [4-6]. Общим недостатком гемостатических средств на основе коллагена является то, что коллаген рассасывается только под действием фермента коллагеназы, которой в организме очень мало, и коллагеновые губки следует удалять из раны после осуществления гемостаза, что приводит к повторной травматизации тканей.
Препараты на основе хитозана активно применяются для остановки кровотечений в медицинской и военной практике [2]. Перевязочные материалы с использованием тромбина и фибриногена лосося удачно останавливали как аортальное, так и поверхностное раневое кровотечение, причем результаты этого исследования показали, что многократное воздействие плазменных белков лосося в течение шести месяцев не давало никаких неблагоприятных эффектов со стороны иммунной системы [3]. Стоит отметить и немаловажные отечественные исследования применения биологического клея на основе плавательного пузыря осетра, богатого коллагеном, на искусственно поврежденной печени белых мышей [1]. Проведенные опыты подтвердили кровоостанавливающий эффект и большую регенераторную способность этого биопрепарата, также не вызывавшего ни аллергической реакции, пи цитотоксических эффектов. Несмотря на все свои плюсы, существенными минусами являются их высокая стоимость и сложность получения компонентов для изготовления вышеуказанных препаратов.
Задача изобретения - оценить пригодность слизи рыб для осуществления гемостаза IN VITRO.
Способ осуществляется следующим образом.
Гемостатическую активность определяют путем внесения 100 мкл слизи кожи рыб в плазму крови овец, обогащенную тромбоцитами с последующей оценкой времени образования сгустка в опытной и контрольной пробах (с индуктором агрегации тромбоцитов млекопитающих - АДФ). При укорочении времени свертывания по сравнению с контролем судят о пригодности препарата для осуществления гемостаза.
Заявляемый способ осуществляется следующим способом.
Для оценки агрегационной активности слизи кожи рыб кровь овцы забирают из яремной вены в пробирки с цитратом натрия 3,8% в соотношении 9:1, центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин для получения обогащенной тромбоцитами плазмы (ОТП). Часть плазмы отбирают, а оставшуюся центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин, получая бедную тромбоцитами плазму (БТП). Для оценки агонистической способности слизи кожи рыб применяют количественный метод, основанный на регистрации изменений светопропускания богатой тромбоцитами плазмы с применением ФЭК по Howard М.А. Определяли суммирующий индекс агрегации тромбоцитов (СИАТ), скорость агрегации (СА) и индекс дезагрегации тромбоцитов (ИДТ) овец со слизью рыб (опытная группа) и индуктором агрегации - АДФ в концентрации 0,1 мг/мл (контрольная группа). АДФ является активатором тромбоцитов. При добавлении его в плазму, богатую тромбоцитами, формируются агрегаты, повышается прозрачность плазмы и, следовательно, увеличивается поток проходящего через кювету света.
Исследуемую ОТП (1,2-1,5 мл) вносят в кювету ФЭК с длиной оптического пути 3 мм и измеряют оптическую плотность при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) против дистиллированной воды.
Переливают плазму из кюветы в пробирку, прогревают при температуре 37°С.
Через 1 мин вносят в пробирку один из активаторов и включают секундомер.
Через 1, 3, 5 и 10 мин инкубации измеряют оптическую плотность исследуемой плазмы.
Определяют оптическую плотность исследуемой БТП.
Определяют суммирующий индекс агрегации тромбоцитов (СИАТ) по формуле
Figure 00000001
где Е - оптическая плотность БТП в единицах оптической плотности;
E1 - оптическая плотность ОТП до агрегации в единицах оптической плотности;
Е2 - оптическая плотность ОТП после агрегации в единицах оптической плотности.
Скорость агрегации (СА) рассчитывают по формуле
Figure 00000002
где E1 - оптическая плотность ОТП до агрегации в единицах оптической плотности;
Е2 - оптическая плотность ОТП после агрегации в единицах оптической плотности;
t - время, за которое произошло максимальное падение оптической плотности, в мин.
Рассчитывают Индекс дезагрегации тромбоцитов (ИДТ):
Figure 00000003
где Е3 - максимальная оптическая плотность ОТП, измеренная через 10 мин после добавления активатора;
Е2 - оптическая плотность ОТП после агрегации в единицах оптической плотности.
Результаты определения индуцированной агрегации тромбоцитов у овец контрольной и опытной групп приведены в табл. 1.
Figure 00000004
* Различия достоверны (р<0,05).
Данные табл. 1 свидетельствуют о влиянии слизи рыб на агрегацию тромбоцитов млекопитающих in vitro. При использовании слизи кожи рыб как агониста тромбоцитов получили достоверно более высокий индекс и скорость агрегации, чем при использовании АДФ, сильнейшего агониста тромбоцитов млекопитающих.
Способ поясняется следующим примером.
На одно предметное стекло наносят автоматическим дозатором каплю нативной крови овцы в объеме 200 мкл, на второе предметное стекло - 100 мкл крови и 100 мкл слизи кожи рыб, каждые 30 сек определяют при осторожном наклоне стекла образование плотного сгустка.
Точность метода оценивалась на основании результатов повторных определений гемостатической активности слизи с одной и той же порцией крови донора (не менее 9 определений).
Результаты повторных определений приведены в табл.2.
Figure 00000005
* Различия достоверны (р<0,05).
Слизь кожи рыб активирует тромбоциты овец и пригодна для осуществления гемостаза IN VITRO.
Литература
1. Ксенофонтов, А.М., Никифоров, П.В., Федоров, А.П. Экспериментальный метод применения биологического клея на основе плавательного пузыря осетра при операциях на печени /A.M. Ксенофонтов, П.В. Никифоров, А.П. Федоров // Здоровье и образование в XXI веке. - 2012. Т.14. - №1. - С. 223-224.
2. В России разработано новое гемостатическое средство//Военно-промышленный курьер [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://vpk-news.ru/news/25817
3. The long term immunological response of swine after two exposures lo a salmon thrombin and fibrinogen hemostatic bandage / S.W. Rothwell, T. Settle, S. Wallace et al // Biologicals. - November 2010. - V. 38, I. 6. - P. 619-628, ISSN 1045-1056,
4. Горский В.А., Шуркалин Б.К., Фаллер А.П. Окончательный гемостаз при вмешательствах на паренхиматозных органах // Анн. хирург. гепатол. - 2007. - Т.12. - №3. - С. 253.
5. Ткачев П.В., Акопян А.А. Возможности гемостаза ложа желчного пузыря при экстренных лапароскопических холецистэктомиях // XXX Итоговая конференция общества молодых ученых. Труды конференции. М.: МГМСУ, 2008. - С. 332-334.
6. Борисов А.Е., Митин С.Е., Шолков СИ. Использование тахокомба в нестандартных ситуациях // Анн. хирург. гепатол. - 2007. - Т. 12. - №3. - С. 48.
7. Заявка на патент РФ 96119573/14, МКИ6 А61L 15/32, опубл. 10.01.99. БИ 1.
8. Патент РФ 2034572, МКИ6 А61L 15/32, опубл. 10.05.95. БИ 13.

Claims (1)

  1. Способ определения пригодности слизи кожи рыб для осуществления гемостаза путем активации агрегации тромбоцитов и свертывания крови IN VITRO путем внесения слизи в плазму крови овец, обогащенную тромбоцитами (ОТП), нативную кровь и определения времени образования сгустка, отличающийся тем, что в качестве испытуемого препарата используют слизь кожи рыб, в качестве биологической жидкости - кровь и плазму, время образования сгустка определяют визуально и путем фотометрии на фотоэлектроколориметре (ФЭК) в опытной и контрольной пробах и при ускорении образования сгустка по сравнению с контролем судят о пригодности слизи кожи рыб для осуществления гемостаза.
RU2017111942A 2017-04-07 2017-04-07 Способ применения слизи кожи рыб для активации агрегации тромбоцитов и свертывания крови in vitro RU2652444C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017111942A RU2652444C1 (ru) 2017-04-07 2017-04-07 Способ применения слизи кожи рыб для активации агрегации тромбоцитов и свертывания крови in vitro

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017111942A RU2652444C1 (ru) 2017-04-07 2017-04-07 Способ применения слизи кожи рыб для активации агрегации тромбоцитов и свертывания крови in vitro

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2652444C1 true RU2652444C1 (ru) 2018-04-26

Family

ID=62045616

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017111942A RU2652444C1 (ru) 2017-04-07 2017-04-07 Способ применения слизи кожи рыб для активации агрегации тромбоцитов и свертывания крови in vitro

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2652444C1 (ru)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2034572C1 (ru) * 1992-11-03 1995-05-10 Малое многопрофильное предприятие "ПОЛИКОМ" Гемостатическая губка
RU2562569C2 (ru) * 2010-04-07 2015-09-10 Бакстер Интернэшнл Инк. Гемостатическая губка

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2034572C1 (ru) * 1992-11-03 1995-05-10 Малое многопрофильное предприятие "ПОЛИКОМ" Гемостатическая губка
RU2562569C2 (ru) * 2010-04-07 2015-09-10 Бакстер Интернэшнл Инк. Гемостатическая губка

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
А.М.Ксенофонтов и др. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ МЕТОД ПРИМЕНЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОГО КЛЕЯ НА ОСНОВЕ ПЛАВАТЕЛЬНОГО ПУЗЫРЯ ОСЕТРА ПРИ ОПЕРАЦИЯХ НА ПЕЧЕНИ / Журнал научных статей "Здоровье и образование в XXI веке" (Серия медицина), 2012, том 14 [1], стр. 223-224. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Millar et al. The inflammatory response to extracorporeal membrane oxygenation (ECMO): a review of the pathophysiology
Seegers Prothrombin
US5185001A (en) Method of preparing autologous plasma fibrin and application apparatus therefor
Hartman et al. Autologous whole plasma fibrin gel: intraoperative procurement
JP4666764B2 (ja) 血漿から安定で、長期型のトロンビンを調製するための装置および方法、並びにこれにより形成されたトロンビン
Deykin Uremic bleeding
Agarwal et al. Association of blood products administration during cardiopulmonary bypass and excessive post-operative bleeding in pediatric cardiac surgery
Jenkins et al. THOR position paper on remote damage control resuscitation: definitions, current practice and knowledge gaps
Hosny et al. Assessment of vascular endothelial growth factor in fresh versus frozen platelet rich plasma
Giraldo et al. Influence of calcium salts and bovine thrombin on growth factor release from equine platelet-rich gel supernatants
RU2652444C1 (ru) Способ применения слизи кожи рыб для активации агрегации тромбоцитов и свертывания крови in vitro
US20090011043A1 (en) Tissue sealant made from whole blood
Ubezio et al. Bio-modulators in platelet-rich plasma: a comparison of the amounts in products from healthy donors and patients produced with three different techniques
Chen et al. The role of a disintegrin and metalloproteinase proteolysis and mechanical damage in nonphysiological shear stress-induced platelet receptor shedding
RU2710367C2 (ru) Способ получения цитокинов из тромбоцитов пуповинной крови как субстрата для разработки лекарственных средств для человека и животных
Doria et al. Topical hemostasis: a valuable adjunct to control bleeding in the operating room, with a special focus on thrombin and fibrin sealants
RU2632771C1 (ru) Способ эндоскопической остановки желудочно-кишечного кровотечения
Stewart et al. Studies in calcium metabolism: The calcium content of corpuscles, plasma, and serum
ES2782723B2 (es) Procedimiento para obtencion y conservacion de factores de crecimiento de alta pureza y sus usos
Klinkmann et al. Extracorporeal immune cell therapy of sepsis: ex vivo results
Witts Disturbances in the coagulation of the blood
Chen et al. The role of ADAM proteolysis and mechanical damage in non-physiological shear stress induced platelet receptor shedding
Strautz et al. Compatibility of ADSOL-stored red cells with intravenous solutions
Badimon et al. Functional behavior of vessels from pigs with von Willebrand disease. Values of platelet deposition are identical to those obtained on normal vessels.
Starr et al. Platelet transfusion for trauma resuscitation

Legal Events

Date Code Title Description
PC41 Official registration of the transfer of exclusive right

Effective date: 20180801

MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20200408