RU2641170C1 - Method for bladder cancer course prediction - Google Patents
Method for bladder cancer course prediction Download PDFInfo
- Publication number
- RU2641170C1 RU2641170C1 RU2017129079A RU2017129079A RU2641170C1 RU 2641170 C1 RU2641170 C1 RU 2641170C1 RU 2017129079 A RU2017129079 A RU 2017129079A RU 2017129079 A RU2017129079 A RU 2017129079A RU 2641170 C1 RU2641170 C1 RU 2641170C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- igg
- ebv
- bladder cancer
- units
- course
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, онкоурологии, диагностики с помощью инвазивных методов и может быть использовано для прогнозирования течения рака мочевого пузыря.The invention relates to the field of medicine, oncology, diagnostics using invasive methods and can be used to predict the course of bladder cancer.
Рак мочевого пузыря (РМП) является одним из наиболее распространенных злокачественных новообразований. В 2010 г. в РФ было выявлено 10731 впервые заболевших. В структуре онкологической заболеваемости на долю РМП приходилось 4,5%. Заболеваемость РМП в 2010 г. составила 5,85 на 100000 населения; по сравнению с 2000 г. она увеличилась на 15,65%. Мужчины заболевали в 4,5 раза чаще, чем женщины. Средний возраст заболевших 67 лет.Bladder cancer (RMP) is one of the most common malignant neoplasms. In 2010, 10731 cases of the first cases were detected in the Russian Federation. In the structure of cancer incidence, RMP accounted for 4.5%. The incidence of RMP in 2010 was 5.85 per 100,000 population; compared with 2000, it increased by 15.65%. Men fell ill 4.5 times more often than women. The average age of patients is 67 years.
Повышенный риск имеют рабочие на производстве и применении красителей, текстильных и резиновых предприятиях, водители грузовиков, рабочие химической и нефтяной промышленности, предприятий, производящих алюминий, парикмахеры. Большинство канцерогенов - ароматические амины и их производные (β-нафтиламин, бензидин, 4-аминобифенил, нитрозоамины). Латентный период от контакта с канцерогеном до появления опухоли может составлять около 20 лет. Одной из причин развития РМП традиционно считают курение: курильщики болеют РМП в 2-3 раза чаще, чем некурящие. Установлена связь между развитием плоскоклеточного РМП и хроническим циститом, вызванным Schistosoma haematobium. Заболевание носит эндемический характер и распространено в Северной Африке.Increased risk are workers in the production and use of dyes, textile and rubber enterprises, truck drivers, workers in the chemical and oil industries, enterprises producing aluminum, and hairdressers. Most carcinogens are aromatic amines and their derivatives (β-naphthylamine, benzidine, 4-aminobiphenyl, nitrosoamines). The latent period from exposure to a carcinogen to the appearance of a tumor can be about 20 years. One of the reasons for the development of RMP is traditionally considered smoking: smokers suffer from RMP 2-3 times more often than non-smokers. A connection was established between the development of squamous RMP and chronic cystitis caused by Schistosoma haematobium. The disease is endemic in nature and is common in North Africa.
В последние годы обсуждается вопрос иных возможных причин высоких темпов прироста заболеваемости раком мочевого пузыря. Большинство исследователей отмечают значимые различия выживаемости больных и частоты рецидивирования внутри групп пациентов даже с одинаковой глубиной инвазии и степенью дифференцировки. Это затрудняет прогнозирование клинического течения болезни и выбор соответствующей тактики лечения (Аль-Шукри С.Х. и соавт, 2000; Матвеев Б.П., 2003). Проведено большое количество исследований, направленных на выявление дополнительных факторов риска прогрессирования и рецидивирования рака мочевого пузыря, однако, мнения специалистов неоднозначные и универсального прогностического критерия обнаружить не удалось. Поэтому данная задача требует соответствующего решения.In recent years, the issue of other possible causes of high growth rates of the incidence of bladder cancer has been discussed. Most researchers note significant differences in patient survival and relapse rates within patient groups, even with the same depth of invasion and degree of differentiation. This makes it difficult to predict the clinical course of the disease and the choice of appropriate treatment tactics (Al-Shukri S.Kh. et al., 2000; Matveev BP, 2003). A large number of studies have been conducted aimed at identifying additional risk factors for the progression and recurrence of bladder cancer, however, the opinions of experts are ambiguous and a universal prognostic criterion could not be found. Therefore, this task requires an appropriate solution.
Известно прогнозирование течения рака мочевого пузыря на основе биологических прогностических факторов (Fontana D. et al. Molecular biology in uro-oncology: clinical application. Prognostic factors in bladder cancer// Arch Ital Urol Androl. 1997 Sep;69(4):253-6). При исследовании поверхностной опухоли мочевого пузыря с использованием моноклонального антитела MIB-1 (Ki-67) была отмечена корреляция между показателем пролиферации (P.I.) и уровнем рецидивирования. В частности, наличие P.I. выше 40% коррелирует с большей частотой рецидивов. Аналогично, экспрессия белка р21 коррелирует с большей частотой рецидива. При поверхностном раке мочевого пузыря показана также корреляция между экспрессией белка р53 и более ранним и частым рецидивированием.Prediction of the course of bladder cancer based on biological prognostic factors is known (Fontana D. et al. Molecular biology in uro-oncology: clinical application. Prognostic factors in bladder cancer // Arch Ital Urol Androl. 1997 Sep; 69 (4): 253- 6). When examining a superficial bladder tumor using monoclonal antibody MIB-1 (Ki-67), a correlation was noted between proliferation rate (P.I.) and recurrence rate. In particular, the presence of P.I. above 40% correlates with a higher relapse rate. Similarly, p21 protein expression correlates with a higher relapse rate. With superficial bladder cancer, a correlation is also shown between the expression of p53 protein and earlier and more frequent recurrence.
Известен способ диагностики и лечения пациентов, страдающих поверхностным раком мочевого пузыря (RU 2284039 С2, 20.02.2006), при котором, помимо определения концентраций канцерогенов: анилина, толуилина, диэтиланилина, дифенила, 1-нафтоламина в моче и нарушения уродинамики, дополнительно оценивают пролиферативную активность уротелия по степени экспрессии Ki-6. Материал, взятый при выполнении мультифокальной биопсии во время проведения трансуретральной резекции опухоли и коррекции шейки мочевого пузыря, визуально не измененной, слизистой мочевого пузыря у пациентов, страдающих переходно-клеточным раком мочевого пузыря, фиксируют в растворе формалина, готовят срезы толщиной 4 мкм и окрашивают Ki-67 с использованием РАР-(пероксидазно-антипероксидазного) метода, с использованием моноклонального антитела Ki-67 Antigen фирмы Dako - клон MIB-1 и проявляющей системы LSAB2 фирмы Dako. Оценку интенсивности окрашивания путем цитофотометрии 50 произвольно выбранных клеток переходно-клеточного эпителия на полученных видеоизображениях окрашенных микропрепаратов проводят с помощью компьютерной микроскопической видеосистемы Quantimet 550 IW фирмы Leica, Англия, для цифрового анализа патоморфологического и цитологического материала и углубленной диагностики с камерой высокого разрешения, позволяющей проводить количественный анализ изображения по реальным цветам или оптическим плотностям с форматом изображения 6000 на 4000 пикселей. Степень экспрессии Ki-67 оценивают в баллах (max-4), учитывая существование прямой зависимости между экспрессией Ki-67 и пролиферативной активностью уротелия (Wu Т. The role of bcl-2 p-53 and Ki-67 index is predicting tumor recurrence for low superficial transitional cell bladder carcinoma. / T. Wu, J.N. Chen, Y. Lee // J. Urol. - 2000. - Vol. 163. - P. 758-760.) В зависимости от степени пролиферативной активности уротелия прогнозируют течение рака мочевого пузыря и, соответственно, определяют дальнейшую тактику лечения. В частности, в случае изменений уродинамики в сторону увеличения объема остаточной мочи с ростом концентрации канцерогенов в послеоперационном периоде (ТУР) сохраняющийся высокий уровень экспрессии Ki-67 после проведенного лечения предлагается рассматривать как неблагоприятный прогноз течения рака мочевого пузыря с необходимостью проведения цистэктомии.A known method for the diagnosis and treatment of patients suffering from superficial bladder cancer (RU 2284039 C2, 02.20.2006), in which, in addition to determining the concentrations of carcinogens: aniline, toluiline, diethylaniline, diphenyl, 1-naphtholamine in the urine and disturbances in urodynamics, proliferative urothelial activity according to the degree of expression of Ki-6. Material taken during multifocal biopsy during transurethral resection of the tumor and correction of the bladder neck, which is not visually changed, of the bladder mucosa in patients suffering from transitional cell carcinoma of the bladder, is fixed in formalin solution, sections are prepared with a thickness of 4 μm and stained with Ki -67 using the PAP- (peroxidase-antiperoxidase) method, using the Dako monoclonal antibody Ki-67 Antigen — clone MIB-1 and the Dako developing LSAB2 system. The staining intensity was estimated by cytophotometry of 50 randomly selected transitional cell epithelial cells on the obtained video images of stained micropreparations using a Quantimet 550 IW computer microscopic video system from Leica, England, for digital analysis of pathomorphological and cytological material and in-depth diagnostics with a high-resolution camera that allows quantitative image analysis by real colors or optical densities with an image format of 6000 by 4000 pixels her. The degree of expression of Ki-67 is scored (max-4), given the direct relationship between the expression of Ki-67 and the proliferative activity of urothelium (Wu T. The role of bcl-2 p-53 and Ki-67 index is predicting tumor recurrence for low superficial transitional cell bladder carcinoma. / T. Wu, JN Chen, Y. Lee // J. Urol. - 2000. - Vol. 163. - P. 758-760.) Depending on the degree of proliferative activity of urothelium, the course of cancer is predicted bladder and, accordingly, determine the further tactics of treatment. In particular, in the case of changes in urodynamics towards an increase in the volume of residual urine with an increase in the concentration of carcinogens in the postoperative period (TUR), the remaining high level of Ki-67 expression after the treatment is proposed to be considered as an unfavorable prognosis of the course of bladder cancer with the need for cystectomy.
Известен способ прогнозирования агрессивного течения уротелиальной карциномы путем исследования иммунологической реакции по отношению к молекулярным подтипам уротелиальной карциномы, с оценкой прогностического эффекта инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TIL) и связанных с опухолью макрофагов (ТАМ) в срезах тканей из мышечно-инвазивных опухолей мочевого пузыря (Sjodahl G. et al. Infiltration of CD3+ and CD68+ cells in bladder cancer is subtype specific and affects the outcome of patients with muscle-invasive tumors// Urol Oncol. 2014 Aug; 32(6):791-7). Тканевые микрочипы с 296 опухолями, охватывающими все патологические стадии и классы, анализировали с использованием антител к CD3, CD8, FOXP3, CD68 и CD163. Случаи были классифицированы по следующим молекулярным подтипам: уробазальная, геномно-неустойчивая и плоскоклеточная карцинома с использованием иммуногистохимии и гистологии. Оценивали регрессию Кокса и анализ Каплана-Мейера в отношении выживаемости без прогрессирования и выживаемостью по конкретным заболеваниям в качестве конечных точек. Молекулярные подтипы уротелиальной карциномы демонстрируют разную степень иммунологических ответов: уробазальный подтип индуцирует слабый ответ, геномно-неустойчивый подтип индуцирует промежуточный ответ, а подсемейство, похожее на плоскоклеточный рак, вызывает сильный отклик. Эти специфичные ответы подтипа не зависят от стадии опухоли и включают как TIL, так и ТАМ. Наличие инфильтрирующих CD3 (+) TIL было значимо связано с хорошим прогнозом в случаях мышечно-инвазивной опухоли (Р<0,01). Эта положительная ассоциация была модулирована присутствием CD68 (+) ТАМ. Значимая связь с прогнозом плохого выживания наблюдалась при высоком соотношении между CD68 и CD3 (Р=7×10-5). Таким образом, молекулярные подтипы уротелиальной карциномы вызывали иммунологические ответы на разных уровнях. Высокое соотношение CD68 / CD3 определяло группу неблагоприятного прогноза среди случаев мышечно-инвазивной уротелиальной карциномы.A known method for predicting the aggressive course of urothelial carcinoma by examining the immunological reaction with respect to the molecular subtypes of urothelial carcinoma, with the assessment of the prognostic effect of tumor infiltrating lymphocytes (TIL) and tumor-associated macrophages (TAM) in sections of tissues from muscle-invasive bladder tumors G . et al. Infiltration of CD3 + and CD68 + cells in bladder cancer is subtype specific and affects the outcome of patients with muscle-invasive tumors // Urol Oncol. 2014 Aug; 32 (6): 791-7). Tissue microarrays with 296 tumors covering all pathological stages and classes were analyzed using antibodies to CD3, CD8, FOXP3, CD68 and CD163. Cases were classified according to the following molecular subtypes: urobasal, genomic unstable, and squamous cell carcinoma using immunohistochemistry and histology. Cox regression and Kaplan-Meyer analysis were evaluated for progression-free survival and disease-specific survival as endpoints. Molecular subtypes of urothelial carcinoma exhibit varying degrees of immunological responses: the urobasal subtype induces a weak response, the genomically unstable subtype induces an intermediate response, and a subfamily similar to squamous cell carcinoma causes a strong response. These specific subtype responses are independent of the stage of the tumor and include both TIL and TAM. The presence of infiltrating CD3 (+) TIL was significantly associated with a good prognosis in cases of muscle-invasive tumors (P <0.01). This positive association was modulated by the presence of CD68 (+) TAM. A significant association with the prognosis of poor survival was observed with a high ratio between CD68 and CD3 (P = 7 × 10 -5 ). Thus, the molecular subtypes of urothelial carcinoma elicited immunological responses at different levels. A high CD68 / CD3 ratio determined a poor prognosis group among cases of muscle-invasive urothelial carcinoma.
Известен также способ прогнозирования течения и степени переходно-клеточной карциномы мочевого пузыря по уровню фактора роста гепатоцитов в сыворотке крови (Gohji K. et al. Independent prognostic value of serum hepatocyte growth factor in bladder cancer// J Clin Oncol. 2000 Aug; 18(16):2963-71). Уровни фактора роста гепатоцитов в сыворотке и тканях пациентов с поверхностным раком и мышечно-инвазивным измеряли с помощью иммуноадсорбентного анализа, с использованием антител к факторам роста гепатоцитов. Уровни фактора роста гепатоцитов в сыворотке и тканях пациентов с мышечно-инвазивным раком были значительно выше, чем у пациентов с поверхностным раком мочевого пузыря (Р<0,0001 и Р=0,0054 соответственно). Степень повышения уровня над нормальным уровнем фактора роста гепатоцитов в сыворотке первых (61,1%) была значительно выше, чем у последних (8,4%, Р<0,0001). Среди пациентов с поверхностным раком мочевого пузыря общая выживаемость пациентов с низким уровнем фактора роста гепатоцитов в сыворотке оказалась значительно выше, чем у пациентов с высокими уровнями (Р=0,005). Среди пациентов с минимально инвазивным раком мочевого пузыря безрецидивная и общая выживаемость пациентов с высоким уровнем фактора роста гепатоцитов в сыворотке была значительно ниже, чем у тех, у которых были низкие уровни (Р<0,001 и Р=0,0028, соответственно). Таким образом, уровень фактора роста гепатоцитов в сыворотке крови может быть предсказателем выживаемости пациента и степени рака мочевого пузыря.There is also known a method for predicting the course and degree of transitional cell carcinoma of the bladder by the level of hepatocyte growth factor in blood serum (Gohji K. et al. Independent prognostic value of serum hepatocyte growth factor in bladder cancer // J Clin Oncol. 2000 Aug; 18 ( 16): 2963-71). Levels of hepatocyte growth factor in serum and tissues of patients with superficial cancer and muscle-invasive were measured using immunoadsorption analysis using antibodies to hepatocyte growth factors. The levels of hepatocyte growth factor in serum and tissues of patients with muscle-invasive cancer were significantly higher than in patients with superficial bladder cancer (P <0.0001 and P = 0.0054, respectively). The degree of increase in the level above the normal level of hepatocyte growth factor in the serum of the former (61.1%) was significantly higher than in the latter (8.4%, P <0.0001). Among patients with superficial bladder cancer, the overall survival of patients with low serum hepatocyte growth factor was significantly higher than in patients with high levels (P = 0.005). Among patients with minimally invasive bladder cancer, the relapse-free and overall survival of patients with high serum hepatocyte growth factor was significantly lower than those with low levels (P <0.001 and P = 0.0028, respectively). Thus, the level of hepatocyte growth factor in serum can be a predictor of patient survival and degree of bladder cancer.
В настоящее время активно обсуждается вопрос об этиологической роли инфекционных агентов, в частности, вирусов, в генезе развития различных злокачественных опухолей, в том числе и рака мочевого пузыря, их влиянии на частоту рецидивирования и развития инвазивных и метастатических форм. Так, считается доказанной этиологическая роль высокоонкогенных типов вируса папилломы человека (ВПЧ) при плоскоклеточном раке шейки матки и верхних дыхательных путей (Тюляндин С.А., 2008). Вместе с тем, появились публикации, указывающие на влияние ВПЧ на возникновение рака мочевого пузыря, однако, данные весьма противоречивы (Мяндина Г.И., Пягай П.Э., Иткес А.В., 2003; Frank G., Zavalishina L., Andreeva Y.Y. 2006; Андреева Ю.Ю., 2008). В литературе также имеются публикации о роли герпес-вирусов в этиологии рака мочевого пузыря как моноинфекции, так и в сочетании с вирусом папилломы человека (ВПЧ), внутриклеточными микроорганизмами (в частности, с хламидийной инфекцией). Однако вновь получены весьма неоднозначные результаты (Мяндина Г.И., Пягай П.Э., Иткес А.В., 2003; Youshya S, Purdie K, Breuer J, Proby С, 2005; Frank G., Zavalishina L., Andreeva Y.Y. 2006; Андреева Ю.Ю., 2008; Abol-Enein H., 2009).Currently, the issue of the etiological role of infectious agents, in particular viruses, is actively discussed in the genesis of the development of various malignant tumors, including bladder cancer, their effect on the recurrence rate and the development of invasive and metastatic forms. So, the etiological role of highly oncogenic types of human papillomavirus (HPV) in squamous cell carcinoma of the cervix and upper respiratory tract is considered proven (Tyulyandin S.A., 2008). At the same time, publications appeared indicating the influence of HPV on the occurrence of bladder cancer, however, the data are very contradictory (Myandina G.I., Pyagay P.E., Itkes A.V., 2003; Frank G., Zavalishina L. , Andreeva YY 2006; Andreeva Yu.Y., 2008). There are also publications in the literature on the role of herpes viruses in the etiology of bladder cancer, both monoinfection and in combination with human papillomavirus (HPV), intracellular microorganisms (in particular, chlamydial infection). However, very mixed results were again obtained (Myandina G.I., Pyagai P.E., Itkes A.V., 2003; Youshya S, Purdie K, Breuer J, Proby C, 2005; Frank G., Zavalishina L., Andreeva YY 2006; Andreeva Yu.Yu., 2008; Abol-Enein H., 2009).
Следует отметить возможную роль вируса простого герпеса 2 типа (ВПГ 2 типа) в качестве кофактора канцерогенеза, инициирующего развитие клеточной дисплазии и поддерживающего ее в состоянии стабилизации. В литературе есть указания на онкомодулирующий эффект цитомегаловируса (ЦМВ) при глиобластомах, опухолях кишечника. Вирус Эпштейн-Барра (ВЭБ) является представителем онкогенных ДНК-содержащих вирусов, и диапазон онкологических заболеваний, ассоциированных с ним, постоянно увеличивается: доказано участие ВЭБ в развитии лимфомы Беркитта, назофарингеальной карциномы, рака желудка.It should be noted the possible role of herpes simplex virus type 2 (HSV type 2) as a cofactor of carcinogenesis, initiating the development of cell dysplasia and supporting it in a state of stabilization. In the literature, there are indications of an oncodulatory effect of cytomegalovirus (CMV) in glioblastomas, intestinal tumors. Epstein-Barra virus (VEB) is a representative of oncogenic DNA-containing viruses, and the range of oncological diseases associated with it is constantly increasing: the participation of VEB in the development of Burkitt's lymphoma, nasopharyngeal carcinoma, and gastric cancer has been proved.
Известна связь частоты рецидивирования и развития инвазивных и метастатических форм рака мочевого пузыря с возрастающими титрами ряда противовирусных антител (Лоран О.Б. с соавт. Роль некоторых вирусов в канцерогенезе рака мочевого пузыря// Ж. "Экспериментальная и клиническая урология", вып. 3, 2015 г.). Так, было проведено обследование и лечение 54 больных (44 мужчин и 10 женщин) в возрасте от 38 до 90 лет (средний возраст 64,6±9,93), поступивших в урологическое отделение в большинстве случаев в экстренном порядке в связи с макрогематурией. Всем пациентам выполнены общий анализ крови, мочи, УЗИ почек, мочевого пузыря, анализ крови на IgG, IgM к герпесу (ВПГ) I и II типа, цитомегаловирусу (ЦМВ), вирусу Эпштейна-Барр (ВЭБ), ПЦР мочи к вышеуказанным вирусам, соскоб из уретры на выявление ВПЧ высокого онкогенного риска. В работе использовали общепринятые методы статистической обработки. Для определения связи между изучаемыми параметрами применяли корреляционный анализ Пирсона (r) или Спирмена (R). Статистически значимыми принимались различия при p<0,05. При этом у 53 больных был диагностирован рак мочевого пузыря, в одном случае выявлена папиллома мочевого пузыря. Стадия опухолевого процесса соответствовала T1N×М0 в 61% случаев (33 больных), T2N×M0 в 22,2% (12 больных), в 14,8% случаях имел место местно-распространенный процесс. Примерно в половине случаев (у 28 больных) выявлено множественное поражение мочевого пузыря, в остальных - единичные опухолевые образования.There is a known relationship between the recurrence rate and the development of invasive and metastatic forms of bladder cancer with increasing titers of a number of antiviral antibodies (Laurent O.B. et al. Role of some viruses in carcinogenesis of bladder cancer // J. "Experimental and Clinical Urology", issue 3 , 2015). Thus, 54 patients (44 men and 10 women) aged 38 to 90 years (average age 64.6 ± 9.93) were examined and treated, who were admitted to the urology department in most cases on an emergency basis due to macrohematuria. All patients underwent a general analysis of blood, urine, ultrasound of the kidneys, bladder, blood test for IgG, IgM for herpes simplex virus (HSV) type I and II, cytomegalovirus (CMV), Epstein-Barr virus (EBV), urine PCR for the above viruses, scraping from the urethra to detect HPV high oncogenic risk. The work used generally accepted methods of statistical processing. To determine the relationship between the studied parameters, Pearson (r) or Spearman (R) correlation analysis was used. Differences at p <0.05 were statistically significant. At the same time, 53 patients were diagnosed with bladder cancer, in one case bladder papilloma was detected. The stage of the tumor process corresponded to T1N × M0 in 61% of cases (33 patients), T2N × M0 in 22.2% (12 patients), and a locally distributed process took place in 14.8% of cases. In about half of the cases (in 28 patients), multiple lesions of the bladder were detected, in the rest - single tumor formations.
Антитела класса иммуноглобулинов М (IgM) к ЦМВ не были выявлены ни у одного пациента. Что касается уровней антител класса IgG к ЦМВ, то у пациентов с высокодифференцированным, первично выявленным, не мышечно-инвазивным уротелиальным раком мочевого пузыря уровень IgG-антител был практически в два раза ниже, чем у больных с низкодифференцированным (p=0,2), рецидивным (p=0,02), местно-распространенным процессом (p=0,0014). Различий между уровнем анти-ЦМВ IgG у пациентов с единичными или множественными опухолями мочевого пузыря не выявлено. Отмечается высокая корреляция между уровнем анти-ЦМВ IgG и стадией процесса, рецидивным характером опухоли и уровнем антител к ранним антигенам ВЭБ. Значимых изменений между уровнем IgG к ВПГ I и II типов и стадией процесса, степенью анаплазии и рецидивным характером опухоли не было выявлено.Antibodies of the class of immunoglobulins M (IgM) to CMV were not detected in any patient. As for the levels of IgG antibodies to CMV, in patients with highly differentiated, primarily detected, non-muscle-invasive urothelial bladder cancer, the level of IgG antibodies was almost two times lower than in patients with low-grade (p = 0.2), recurrent (p = 0.02), locally common process (p = 0.0014). There were no differences between the level of anti-CMV IgG in patients with single or multiple bladder tumors. There is a high correlation between the level of anti-CMV IgG and the stage of the process, the recurrent nature of the tumor and the level of antibodies to early EBV antigens. Significant changes between the level of IgG to HSV type I and II and the stage of the process, the degree of anaplasia and the recurrent nature of the tumor were not detected.
Однако некоторые различия в данном известном исследовании оказались статистически недостоверными из-за небольшого количества больных, включенных в исследование, и неравномерности их распределения по группам.However, some differences in this well-known study turned out to be statistically unreliable due to the small number of patients included in the study and the uneven distribution among the groups.
На фоне ЦМВ может развиваться инфицирование другими видами вирусов или бактериями, т.е. суперинфекция. Доказано, что ЦМВ инфицирует В-клетки, латентно инфицированные ВЭБ, более эффективно, чем ВЭБ-негативные. М. Michaeles и соавт. считают, что ЦМВ может инфицировать опухолевые клетки (не являясь онкогенным вирусом) и модулировать свойства опухоли в сторону появления инвазивных свойств и способности ее к метастазированию, тем самым оказывая онкомодулирующий эффект. Для оказания такого действия необходима длительная персистенция вируса в организме. При этом ЦМВ не способен инициировать подобные изменения в неопухолевых клетках. Высокие титры анти-ЦМВ IgG у больных раком мочевого пузыря, особенно рецидивным, свидетельствуют о длительной персистенции этого вируса и периодической его активации.Against the background of CMV, infection with other types of viruses or bacteria may develop, i.e. superinfection. It has been proven that CMV infects B cells latently infected with EBV more efficiently than EBV negative. M. Michaeles et al. believe that CMV can infect tumor cells (not being an oncogenic virus) and modulate the properties of the tumor towards the appearance of invasive properties and its ability to metastasize, thereby exerting an oncomodulating effect. To provide such an action, a long-term persistence of the virus in the body is necessary. In this case, CMV is not able to initiate such changes in non-tumor cells. High titers of anti-CMV IgG in patients with bladder cancer, especially recurrent, indicate a prolonged persistence of this virus and its periodic activation.
Таким образом, до даты подачи настоящей заявки на изобретение было известно выявление высоких титров анти-ЦМВ IgG у больных раком мочевого пузыря, причем их уровень был значительно выше у больных с рецидивным характером опухоли, высокой степенью анаплазии и высокой стадией процесса. Были определены высокие коррелятивные связи между уровнем анти-ЦМВ IgG и стадией процесса, рецидивным характером опухоли и уровнем ранних антител к ВЭБ.Thus, prior to the filing date of this application for the invention, it was known to identify high titers of anti-CMV IgG in patients with bladder cancer, and their level was significantly higher in patients with recurrent nature of the tumor, a high degree of anaplasia and a high stage of the process. High correlations were found between the level of anti-CMV IgG and the stage of the process, the recurrent nature of the tumor and the level of early antibodies to EBV.
Из публикации Лоран О.Б. с соавт. (Латентная герпес-вирусная инфекция в онкогенезе рака мочевого пузыря, Портал Consilium Medicum: 2015, номер 3, http://con-med.ru/magazines/contemporary/contemporary-03-2015/) также известно статистически достоверное повышение уровня вирусных антител у больных рецидивным, местно-распространенным раком мочевого пузыря высокого потенциала злокачественности; статистически значимые коррелятивные связи между наличием вирусных ДНК ЦМВ и ВЭБ в опухоли, уровнем их антител, стадией процесса и рецидивным характером опухоли.From the publication of Laurent O.B. et al. (Latent herpes virus infection in oncogenesis of bladder cancer, Consilium Medicum Portal: 2015, No. 3, http://con-med.ru/magazines/contemporary/contemporary-03-2015/) also a statistically significant increase in the level of viral antibodies is known in patients with recurrent, locally advanced bladder cancer of high malignancy potential; statistically significant correlations between the presence of CMV and EBV viral DNA in the tumor, the level of their antibodies, the stage of the process and the recurrent nature of the tumor.
Среднее значение иммуноглобулина G (IgG) к капсидному антигену (VCA) в данном исследовании составило 365±269 ед/мл (положительный результат - более 20 ед/мл). При этом уровень антител при первичном поражении и высокодифференцированных опухолях был несколько выше, чем при рецидивных и низкодифференцированных (372±43,81 ед/мл и 388±233,88 ед/мл по сравнению с 344,85±274,87 ед/мл и 377±50,88 ед/мл соответственно, р>0,05). Однако данные были статистически недостоверны из-за небольшой выборки и неравномерного распределения их в группе.The average value of immunoglobulin G (IgG) to the capsid antigen (VCA) in this study was 365 ± 269 units / ml (a positive result was more than 20 units / ml). At the same time, the antibody level in the primary lesion and highly differentiated tumors was slightly higher than in the case of recurrent and low-differentiated tumors (372 ± 43.81 units / ml and 388 ± 233.88 units / ml compared to 344.85 ± 274.87 units / ml and 377 ± 50.88 u / ml, respectively, p> 0.05). However, the data were statistically unreliable due to the small sample and their uneven distribution in the group.
Антитела класса иммуноглобулинов G (IgG) к раннему антигену (early antigen - ЕА) достигают высокого титра на 3-4-й неделе острой ВЭБ инфекции и исчезают через 2-6 месяцев. Они появляются при реактивации и отсутствуют при атипичной форме заболевания. Высокие титры антител к раннему антигену выявляют при хронической ВЭБ инфекции, раковых и аутоиммунных заболеваниях, иммунодефицитных состояниях. IgG-EA более 40 ед/мл (положительный) был выявлен у 5 больных с низкодифференцированными опухолями, в одном случае опухоль была рецидивная, у трех был выявлен мышечно-инвазивный рак (Т2-Т4), в двух случаях в опухоли была выявлена ДНК ВЭБ. При сомнительных результатах (от 20 до 40 ед/мл) у двух больных со стадией T1N0M0 выявлена низкодифференцированная опухоль с безрецидивным периодом около 4 месяцев в одном случае. У двух больных имел место местно-распространенный рак.Antibodies of the class of immunoglobulins G (IgG) to the early antigen (early antigen - EA) reach a high titer at 3-4 weeks of acute EBV infection and disappear after 2-6 months. They appear during reactivation and are absent in the atypical form of the disease. High titers of antibodies to the early antigen are detected in chronic EBV infection, cancer and autoimmune diseases, immunodeficiency states. More than 40 U / ml IgG-EA (positive) was detected in 5 patients with low-grade tumors, in one case the tumor was recurrent, in three cases muscle-invasive cancer (T2-T4) was detected, in two cases EBV DNA was detected in the tumor . With doubtful results (from 20 to 40 units / ml) in two patients with stage T1N0M0, a low-grade tumor with a relapse-free period of about 4 months was detected in one case. Two patients had locally advanced cancer.
Антитела класса иммуноглобулинов G к ядерному антигену ВЭБ (EBNA) (положительный результат более 20 ед/мл) появляются через 1-6 месяцев после первичной инфекции. Затем их титр уменьшается и сохраняется в течение всей жизни. При реактивации ВЭБ инфекции происходит повторное увеличение их титра и возможно развитие различных клинических форм (аутоиммунных процессов, генерализованной инфекции, гемофагоцитарного синдрома и т.д.), в том числе развитие онкологических заболеваний. При этом уровень антител IgG-EBNA у больных с рецидивными опухолями примерно в два раза выше, чем с первичными (р=0,03), то есть реактивация вирусной инфекции у этой категории больных в течение жизни происходит чаще, что, возможно, и обуславливает возникновение рецидива. Аналогична картина и в отношении степени анаплазии и стадии процесса. Так, средний уровень этих антител при низкодифференцированных опухолях по данным упомянутой выше публикации составил 173,3±221,21 ед/мл, при высокодифференцированных - 129±135,05 ед/мл (р>0,05). При стадии Т1 средний уровень антител колебался в пределах 156,88±179,5 ед/мл, тогда как при местно-распространенном раке мочевого пузыря их уровень составил 167,6±267,4 ед/мл (р>0,05). Несмотря на статистическую недостоверность результатов, в данном известном исследовании имела место тенденция к увеличению уровня анти-ВЭБ IgG-EBNA в зависимости от стадии процесса и степени анаплазии.Antibodies of the class of immunoglobulins G to the EBV nuclear antigen (EBNA) (a positive result of more than 20 units / ml) appear 1-6 months after the primary infection. Then their titer decreases and persists throughout life. When reactivating EBV infection, their titer re-increases and various clinical forms (autoimmune processes, generalized infection, hemophagocytic syndrome, etc.) may develop, including the development of cancer. At the same time, the level of IgG-EBNA antibodies in patients with recurrent tumors is approximately two times higher than with primary ones (p = 0.03), that is, reactivation of a viral infection in this category of patients during their life occurs more often, which, probably, causes the occurrence of relapse. The picture is similar with respect to the degree of anaplasia and the stage of the process. Thus, the average level of these antibodies in low-grade tumors according to the above-mentioned publication was 173.3 ± 221.21 u / ml, in highly differentiated tumors - 129 ± 135.05 u / ml (p> 0.05). At stage T1, the average antibody level ranged from 156.88 ± 179.5 units / ml, while in locally advanced bladder cancer their level was 167.6 ± 267.4 units / ml (p> 0.05). Despite the statistical uncertainty of the results, in this well-known study, there was a tendency to increase the level of anti-EBV IgG-EBNA depending on the stage of the process and the degree of anaplasia.
Таким образом, высокий уровень антител к ядерному белку (EBNA) ВЭБ свидетельствует о высокой частоте реактивации вирусной инфекции у этой категории больных, причем у больных с рецидивным течением, высоким потенциалом злокачественности и местно-распространенным процессом реактивация происходит чаще, чем у больных с первичной опухолью низкого потенциала злокачественности и неинвазивным раком мочевого пузыря. У больных с высоко дифференцированными опухолями и изначально местно-распространенным раком изменяется уровень антител к капсидному белку (анти-ВЭБ IgG-VCA). У наиболее тяжелой категории больных с опухолями высокого потенциала злокачественности, распространенным процессом, высокой частотой рецидивирования имело место повышение уровня белков ранней фазы (анти-ВЭБ Ig-EA). Титр различных антител коррелирует с повышенным уровнем антител других вирусов, наличием ВЭБ и других вирусов в опухоли, стадией процесса.Thus, a high level of EBV antibodies to EBV indicates a high frequency of reactivation of a viral infection in this category of patients, and in patients with a relapse, high malignancy potential and a locally advanced process, reactivation occurs more often than in patients with a primary tumor low malignancy potential and non-invasive bladder cancer. In patients with highly differentiated tumors and initially locally advanced cancer, the level of antibodies to the capsid protein (anti-EBV IgG-VCA) changes. In the most severe category of patients with tumors of high malignancy potential, a common process, and high recurrence rate, an increase in the level of early phase proteins (anti-EBV Ig-EA) took place. The titer of various antibodies correlates with an increased level of antibodies of other viruses, the presence of EBV and other viruses in the tumor, and the stage of the process.
Учитывая охарактеризованные выше известные исследования, можно сделать вывод, что высокие титры анти-ЦМВ IgG и ряда других антител у больных раком мочевого пузыря характерны для рецидивного характера опухоли. Также имеет место тенденция к увеличению их уровня в зависимости от стадии процесса и степени анаплазии. Значительное повышение IgG-EA свидетельствовало о неблагоприятном течении заболевания (высокая степень злокачественности, быстрое наступление рецидива, распространенность процесса). Однако приведенные в исследованиях данные не были статистически достоверны.Given the known studies described above, it can be concluded that high titers of anti-CMV IgG and a number of other antibodies in patients with bladder cancer are characteristic of the recurrent nature of the tumor. There is also a tendency to increase their level depending on the stage of the process and the degree of anaplasia. A significant increase in IgG-EA indicated an unfavorable course of the disease (high malignancy, rapid onset of relapse, prevalence of the process). However, the data presented in the studies were not statistically significant.
Приведенная публикация Лоран О.Б. с соавт. может быть выбрана в качестве ближайшего аналога данного изобретения.The cited publication Laurent O.B. et al. may be selected as the closest analogue of the present invention.
При этом задачей заявленного нами способа прогнозирования течения рака мочевого пузыря являлось создание четких количественных критериев достоверного прогнозирования, независимо от его стадии и типа, рецидивирования и инвазивного течения рака мочевого пузыря.At the same time, the objective of our method for predicting the course of bladder cancer was to create clear quantitative criteria for reliable prognosis, regardless of its stage and type, recurrence and invasive course of bladder cancer.
Техническим результатом, достигаемым при решении поставленной задачи изобретения является точность, достоверность прогнозирования, независимо от его стадии и типа, неблагоприятного (рецидивирования и инвазивного течения) и благоприятного течения рака мочевого пузыря, при использовании обычного иммуноферментного анализа на выявление уровней определенных противовирусных антител.The technical result achieved in solving the problem of the invention is the accuracy, reliability of prediction, regardless of its stage and type, unfavorable (recurrence and invasive course) and favorable course of bladder cancer, using a conventional enzyme-linked immunosorbent assay to detect levels of certain antiviral antibodies.
Для достижения данного технического результата способ прогнозирования течения рака мочевого пузыря осуществляют следующим образом.To achieve this technical result, a method for predicting the course of bladder cancer is as follows.
У пациента натощак осуществляют забор крови из локтевой вены и проводят иммуноферментный анализ на выявление уровней антител IgG в сыворотке крови к следующим вирусам: Эпштейна-Барр анти-ВЭБ IgG-EBNA, анти-ВЭБ IgG-VCA, анти-ВЭБ IgG-EA, цитомегаловируса анти-ЦМВ IgG, вирусов простого герпеса 1 и 2 типов анти-ВПГ IgG,An empty stomach patient takes blood from the ulnar vein and conduct an enzyme-linked immunosorbent assay to detect serum IgG antibodies to the following viruses: Epstein-Barr anti-EBV IgG-EBNA, anti-EBV IgG-VCA, anti-EBV IgG-EA, cytomegalovirus anti-CMV IgG, herpes simplex viruses 1 and 2 types of anti-HSV IgG,
и при выявлении любого из следующих значений уровней антител делают вывод о достоверном риске неблагоприятного течения рака мочевого пузыря, независимо от его стадии и типа, в виде раннего рецидивирования и увеличения инвазивного роста:and if any of the following antibody levels are detected, they conclude that there is a significant risk of an unfavorable course of bladder cancer, regardless of its stage and type, in the form of early relapse and an increase in invasive growth:
- анти-ВЭБ IgG-EBNA не менее 275 ед/мл,- anti-EBV IgG-EBNA not less than 275 units / ml,
- анти-ВЭБ IgG-VCA не менее 583 ед/мл,- anti-EBV IgG-VCA at least 583 units / ml,
- анти-ЦМВ IgG не менее 670 ед/мл,- anti-CMV IgG not less than 670 units / ml,
- анти-ВПГ IgG не менее 19,5 ед/мл,- anti-HSV IgG not less than 19.5 units / ml,
при выявлении анти-ВЭБ IgG-EA не более 10,0 ед/мл делают вывод о достоверно благоприятном прогнозе течения рака мочевого пузыря - неинвазивном росте и низком риске рецидивирования опухоли.upon detection of anti-EBV IgG-EA of not more than 10.0 units / ml, a conclusion is made about a reliably favorable prognosis of bladder cancer course - non-invasive growth and low risk of tumor recurrence.
Для поиска критериальных, достоверных значений уровней перечисленных антител нами было проведено обследование 100 больных (72 мужчин и 28 женщин) в возрасте от 38 до 90 лет (средний возраст 65±10) с диагнозом рак мочевого пузыря. В процессе обследования были выполнены: анализ крови на IgG, М к ВПГ 1 и 2 типов, ЦМВ, ВЭБ. Ткань опухоли и моча у пациентов взяты на ПЦР-диагностику наличия вирусов ВПГ 1 и 2 типов, ВПЧ высокого онкогенного риска, ЦМВ, ВЭБ. У больных была произведена оценка воспалительной инфильтрации в опухолевой ткани и подлежащей строме. Полуколичественно от 0 до 3 баллов (отсутствие, слабая, умеренная и выраженная степень) оценивались следующие признаки:To search for criteria-based, reliable values of the levels of these antibodies, we examined 100 patients (72 men and 28 women) aged 38 to 90 years (average age 65 ± 10) with a diagnosis of bladder cancer. During the examination, the following were performed: blood test for IgG, M for HSV types 1 and 2, CMV, VEB. Tumor tissue and urine from patients were taken for PCR diagnostics of the presence of HSV viruses of types 1 and 2, HPV of high oncogenic risk, CMV, and EBV. Patients were evaluated for inflammatory infiltration in the tumor tissue and underlying stroma. Semi-quantitatively from 0 to 3 points (absence, mild, moderate and severe), the following symptoms were evaluated:
1. Лимфоцитарно-плазмоцитарный инфильтрат: а) в опухоли, б) рассеянный в подлежащей строме, в) периваскулярная инфильтрация, г) очаговая гиперплазия лимфоидной ткани в виде лимфоидных фолликулов.1. Lymphocytic-plasmacytic infiltrate: a) in a tumor, b) scattered in the underlying stroma, c) perivascular infiltration, d) focal hyperplasia of lymphoid tissue in the form of lymphoid follicles.
2. Активность воспаления: а) степень лейкоцитарного инфильтрата, б) степень эозинофильной инфильтрации.2. The activity of inflammation: a) the degree of leukocyte infiltrate, b) the degree of eosinophilic infiltration.
3. Цитопатические изменения: а) внутриклеточные включения (койлоцитоз), б) внутриядерные включения.3. Cytopathic changes: a) intracellular inclusions (coilocytosis), b) intranuclear inclusions.
Из более ранних научных публикаций известно, что данные морфологические изменения свидетельствуют о неблагоприятном прогнозе течения рака мочевого пузыря в отношении его рецидивирования и инвазивного роста. Так, в отношении неблагоприятного прогноза течения рака при инфильтративных, лимфоцитарных, активных воспалительных изменениях, см., например: Ayari С. et al. High level of mature tumor-infiltrating dendritic cells predicts progression to muscle invasion in bladder cancer// Hum Pathol. 2013 Aug; 44(8): 1630-7; Nomura S. et al. Plasmacytoid variant of urothelial carcinoma of urinary bladder: a case report// Nihon Hinyokika Gakkai Zasshi. 2013 Jan; 104(1):26-9); Sato K. et al. Plasmacytoid urothelial carcinoma of the urinary bladder: a case report and immunohistochemical study// Pathol Res Pract. 2009; 205(3):189-94; Suzuki T. et al. Intravesical mass consisting of mucosa-associated lymphoid tissue// Int J Urol. 2004 Nov; 11(11):1028-30; Korabecna M. et al. Molecular diagnosis of Epstein-Barr virus in paraffin-embedded tissues of tumors with abundant lymphoid infiltration// Neoplasma. 2003; 50(1):8-12; Kimura M. et al. Carcinoma of the urinary bladder with a lymphomatous appearance// Pathol Int. 2001 Jul; 51(7):555-9; Valli V.E. et al. Pathology of canine bladder and urethral cancer and correlation with tumour progression and survival// J Comp Pathol. 1995 Aug; 113(2):113-30; Flamm J. et al. The value of tumor-associated tissue inflammatory reaction in primary superficial bladder cancer// Urol Res. 1990; 18(2): 113-7; 
В отношении цитопатических включений (койлоцитоз, внутриядерные включения): Hartveit F. et al. Koilocytosis in neoplasia of the urinary bladder// Br J Urol. 1992 Jan; 69(1):46-8; Feuer G.A. et al. Vulvar Paget's disease: the need to exclude an invasive lesion// Gynecol Oncol. 1990 Jul; 38(1):81-9; Hartveit F. et al. One of 8 women with bladder neoplasia may have concomitant gastrointestinal pathology, including cancer// J Urol. 1989 Sep; 142(3):716-8.Regarding cytopathic inclusions (coilocytosis, intranuclear inclusions): Hartveit F. et al. Koilocytosis in neoplasia of the urinary bladder // Br J Urol. 1992 Jan; 69 (1): 46-8; Feuer G.A. et al. Vulvar Paget's disease: the need to exclude an invasive lesion // Gynecol Oncol. 1990 Jul; 38 (1): 81-9; Hartveit F. et al. One of 8 women with bladder neoplasia may have concomitant gastrointestinal pathology, including cancer // J Urol. 1989 Sep; 142 (3): 716-8.
В нашем исследовании были установлены уровни противовирусных антител, при которых выявляются данные морфологические изменения, которые, по вышеупомянутым данным литературы, являются доказанными факторами неблагоприятного прогноза течения опухолевого процесса в мочевом пузыре.In our study, we determined the levels of antiviral antibodies at which these morphological changes are detected, which, according to the above literature data, are proven factors for an unfavorable prognosis of the course of the tumor process in the bladder.
Таким образом, были установлены четкие корреляционные взаимоотношения конкретных уровней противовирусных антител с морфологическими изменениями, позволяющие с большой долей вероятности, достоверно спрогнозировать дальнейшее течение опухолевого процесса в мочевом пузыре.Thus, clear correlation relationships of specific levels of antiviral antibodies with morphological changes were established, which make it possible with a high degree of probability to reliably predict the further course of the tumor process in the bladder.
Данный вывод позволяет производить прогнозирование течения рака мочевого пузыря, не требуя биопсии, определения стадии процесса, типа опухоли, поскольку иммуноферментное исследование противовирусных антител может быть выполнено в любой лаборатории с использованием минимально инвазивного исследования - взятия на анализ венозной крови пациента.This conclusion allows predicting the course of bladder cancer without requiring a biopsy, determining the stage of the process, and the type of tumor, since an enzyme-linked immunosorbent assay for antiviral antibodies can be performed in any laboratory using a minimally invasive study - taking the patient's venous blood for analysis.
При наших исследованиях применялся ROC (Receiver Operator Characteristic) анализ для выявления показателей уровня противовирусных антител в качестве прогностического фактора. Для этого вычисляли параметр - площадь под кривой (AUC) для определения качества модели. Качество модели в зависимости от AUC (площадь под кривой): 0,9-1,0 - отличное; 0,8-0,9 - очень хорошее; 0,7-0,8 - хорошее; 0,6-0,7 - среднее; до 0,6 - неудовлетворительное.In our studies, we used ROC (Receiver Operator Characteristic) analysis to identify indicators of the level of antiviral antibodies as a prognostic factor. To do this, we calculated the parameter - the area under the curve (AUC) to determine the quality of the model. Model quality depending on AUC (area under the curve): 0.9-1.0 - excellent; 0.8-0.9 - very good; 0.7-0.8 - good; 0.6-0.7 - average; up to 0.6 - unsatisfactory.
У пациентов с рецидивным характером опухоли имело место повышение уровня анти-ЦМВ IgG (616,5±501,46 vs 339,06±306,61, р=0.0017) и анти-ВЭБ IgG-EBNA (254,99±222,23 vs 143,54±169,89, р=0.0118). Для прогноза рецидива опухолевого роста на основании показателя анти-ЦМВ IgG получена модель очень хорошего качества, выявлена точка «cutoff» = 670 ед/мл, т.е. прогностическое значение показателя, разделяющее больных с рецидивным характером опухоли от первичного поражения мочевого пузыря (рис. 1). Для больных со стадией процесса Т1 точка разбиения также составила 670 ед/мл. Относительный риск OP(RR)=2,96, 95% д.и. (1,41-6,23).In patients with the recurrent nature of the tumor, there was an increase in the level of anti-CMV IgG (616.5 ± 501.46 vs 339.06 ± 306.61, p = 0.0017) and anti-EBV IgG-EBNA (254.99 ± 222.23 vs 143.54 ± 169.89, p = 0.0118). To predict the recurrence of tumor growth based on the anti-CMV IgG index, a very good quality model was obtained, the cutoff point = 670 units / ml was detected, i.e. prognostic value of the indicator dividing patients with the recurrent nature of the tumor from the primary lesion of the bladder (Fig. 1). For patients with a stage of the T1 process, the breakpoint also amounted to 670 units / ml. Relative risk OP (RR) = 2.96, 95% CI (1.41-6.23).
Учитывая наличие коррелятивных связей между морфологическими изменениями (рис. 2, 3), в частности, лимфоидно-плазмоцитарного звена, цитопатическими изменениями и стадией процесса, а также степенью анаплазии, мы попытались найти точки разбиения уровня противовирусных антител и упомянутых морфологических изменений как показателей неблагоприятного течения опухолевого процесса.Given the presence of correlations between morphological changes (Fig. 2, 3), in particular, the lymphoid-plasmacytic link, cytopathic changes and the stage of the process, as well as the degree of anaplasia, we tried to find the breakdown points of the level of antiviral antibodies and the mentioned morphological changes as indicators of the adverse course tumor process.
Суммируя сводные данные диаграммы 1 (рис. 2), можно сказать, что чем более выражены цитопатические изменения (наличие внутриядерных включений) и изменения лимфоцитарно-плазмоцитарного звена, тем выше стадия процесса. В отношении степени анаплазии (рис. 3) прослеживается та же тенденция: чем выше степень анаплазии, тем более выражены изменения лимфоцитарно-плазмоцитарного звена. Наличие папилломатоза свидетельствует, наоборот, о более благоприятном течении опухолевого процесса, что соответствует данным литературы (Epstein J.I. et al. Biopsy interpretation of the bladder. 2-nd Ed.: Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins, 2004, p. 271; Chow N. et al. Papillary urothelial hyperplasia is a clonal precursor to papillary transitional cell bladder cancer// Int J Cancer 2000; 89:514).Summing up the summary data of diagram 1 (Fig. 2), we can say that the more pronounced cytopathic changes (the presence of intranuclear inclusions) and changes in the lymphocytic-plasmacytic link, the higher the stage of the process. With regard to the degree of anaplasia (Fig. 3), the same tendency is observed: the higher the degree of anaplasia, the more pronounced changes in the lymphocytic-plasmacytic link. The presence of papillomatosis, on the contrary, indicates a more favorable course of the tumor process, which is consistent with the literature (Epstein JI et al. Biopsy interpretation of the bladder. 2-nd Ed .: Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins, 2004, p. 271; Chow N . et al. Papillary urothelial hyperplasia is a clonal precursor to papillary transitional cell bladder cancer // Int J Cancer 2000; 89: 514).
Для прогнозирования наличия лимфоцитов в опухоли (рис. 4) и периваскулярной лимфоидной инфильтрации (рис. 5) на основании показателя анти-ВЭБ IgG-EBNA получена модель хорошего качества, выявлена точка «cutoff» = 61,2 ед/мл для обоих показателей. Следует отметить, однако, что специфичность данных для показателя наличия лимфоцитов в опухоли крайне низка. Таким образом, повышение уровня анти-ВЭБ IgG-EBNA более 61,2 ед/мл свидетельствует о появлении у пациентов, страдающих раком мочевого пузыря, как периваскулярной, инфильтрации, так и лимфоцитов в опухоли, что может свидетельствовать о тенденции к неблагоприятному течению.To predict the presence of lymphocytes in the tumor (Fig. 4) and perivascular lymphoid infiltration (Fig. 5), a good quality model was obtained on the basis of the anti-EBV IgG-EBNA indicator, the cutoff point = 61.2 units / ml for both indicators was revealed. It should be noted, however, that the specificity of the data for the indicator of the presence of lymphocytes in the tumor is extremely low. Thus, an increase in the level of anti-EBV IgG-EBNA by more than 61.2 units / ml indicates the appearance of perivascular, infiltration, and lymphocytes in the tumor in patients with bladder cancer, which may indicate a tendency to an unfavorable course.
Койлоцитоз был выявлен у 44 из 71 пациента (62,0%). Были выявлены умеренные коррелятивные связи между наличием койлоцитоза и уровнем анти-ВПГ IgG (R=0,266, р=0,026). Для прогноза наличия койлоцитоза на основании показателя уровня анти-ВПГ IgG получена модель хорошего качества, выявлена точка «cutoff» = 17,2 ед/мл (рис. 6). Вполне возможно, что именно вирусы простого герпеса выступают в качестве ко-фактора ВПЧ инфекции.Coilocytosis was detected in 44 of 71 patients (62.0%). Moderate correlations were revealed between the presence of coilocytosis and the level of anti-HSV IgG (R = 0.266, p = 0.026). To predict the presence of coilocytosis based on the level of anti-HSV IgG, a good quality model was obtained, the cutoff point = 17.2 u / ml was revealed (Fig. 6). It is possible that herpes simplex viruses act as a co-factor of HPV infection.
Наличие деструктивных изменений клеток коррелирует со стадией заболевания, поэтому на основании показателя анти-ВЭБ IgG-EBNA для прогноза наличия деструкции поверхности опухолевых клеток была получена модель очень хорошего качества, выявлена точка «cutoff» = 180 ед/мл. Таким образом, можно предполагать прогрессию опухолевого роста при повышении уровня анти-ВЭБ IgG-EBNA более 180 ед/мл (рис. 7).The presence of destructive cell changes correlates with the stage of the disease, therefore, based on the anti-EBV IgG-EBNA indicator, a very good quality model was obtained to predict the presence of tumor cell surface destruction, the cutoff point = 180 units / ml was detected. Thus, one can assume the progression of tumor growth with an increase in the level of anti-EBV IgG-EBNA more than 180 units / ml (Fig. 7).
Если рассматривать прогностические точки (точки разбиения) уровня противовирусных антител у больных мышечно-неинвазивным раком мочевого пузыря, то, несмотря на то, что не все данные были статистически достоверными, мы получили модели хорошего и отличного качества с высоким доверительным интервалом. Сводные данные представлены в таблице 1.If we consider the prognostic points (breakdown points) of the level of antiviral antibodies in patients with non-invasive muscle cancer of the bladder, despite the fact that not all data were statistically reliable, we obtained models of good and excellent quality with a high confidence interval. Summary data are presented in table 1.
Для каплевидного (щупальцеобразного) вида инвазии характерны обратные коррелятивные связи со степенью дифференцировки опухоли (R=-0,215, р=0,051). Поэтому данный признак также может свидетельствовать о возможном неблагоприятном дальнейшем развитии рака мочевого пузыря. В отношении каплевидного типа инвазии как признака возможного начала инвазивного роста на основании уровня анти-ВПГ 1 и 2 типов IgG, мы получили модель хорошего качества. Выявлена точка «cutoff» = 19,5 ед/мл, рис. 8.An inverse correlative relationship with the degree of tumor differentiation (R = -0.215, p = 0.051) is characteristic of a drop-shaped (tentacle-like) type of invasion. Therefore, this symptom may also indicate a possible unfavorable further development of bladder cancer. Regarding the drop-shaped type of invasion as a sign of a possible onset of invasive growth based on the level of anti-HSV 1 and 2 types of IgG, we obtained a good quality model. The cutoff point = 19.5 u / ml, Fig. 8.
Таким образом, при наличии общей тенденции соответствия определенных уровней антител определенным морфологическим изменениям в тканях мочевого пузыря - уже имеющимся, либо только развивающимся - для наиболее достоверного прогноза неблагоприятного течения рака мочевого пузыря мы принимаем наиболее высокие из выявленных нами значений уровней анти-ВЭБ IgG-EBNA, анти-ВЭБ IgG-VCA, анти-ЦМВ IgG, анти-ВПГ IgG антител, которые мы и указали в формуле изобретения. При этом следует отметить, что более низкие их значения не исключают неблагоприятного прогноза (просто недостаточно достоверны) и, напротив, не являются свидетельством прогноза благоприятного. Эти значения приведены лишь для демонстрации как таковых определенных и упомянутых здесь четких корреляционных связей между уровнями противовирусных антител и морфологическими изменениями, для которых, в свою очередь, известны корреляции с более благоприятным или менее благоприятным течением рака мочевого пузыря. Наличие таких корреляций и позволяет нам говорить о возможности достоверного прогнозирования течения рака мочевого пузыря по уровням соответствующих антител.Thus, if there is a general tendency for certain levels of antibodies to correspond to certain morphological changes in the tissues of the bladder - already existing, or only developing - for the most reliable prognosis of an unfavorable course of bladder cancer, we accept the highest levels of anti-EBV IgG-EBNA that we have identified , anti-EBV IgG-VCA, anti-CMV IgG, anti-HSV IgG antibodies, which we indicated in the claims. It should be noted that their lower values do not exclude an unfavorable prognosis (they are simply not reliable enough) and, on the contrary, are not evidence of a favorable prognosis. These values are given only to demonstrate, as such, the distinct and mentioned clear correlations between antiviral antibody levels and morphological changes, for which, in turn, correlations with a more favorable or less favorable course of bladder cancer are known. The presence of such correlations allows us to talk about the possibility of reliable prediction of the course of bladder cancer by the levels of the corresponding antibodies.
В качестве клинического примера, подтверждающего достоверность прогнозирования по заявленному способу, приводим следующие данные.As a clinical example, confirming the accuracy of forecasting by the claimed method, we present the following data.
Обследовали, в соответствии с заявленным способом, 112 больных (82 мужчин и 30 женщин) в возрасте от 36 до 85 лет с диагнозом рак мочевого пузыря. Наибольшую группу представлял собой переходноклеточный инвазивный рак (инфильтративная уротелиальная карцинома). В группу с переходноклеточным раком также были включены 8 случаев развития рака на фоне паппиломатоза и/или инвертированной папилломы. Инвазия в мышечный слой (мышечно-инвазивный рак) наблюдалась в 23 случаях, и наибольшее распространение процесса (стадия Т3-4) - в 18 случаях. Для всех опухолей определялась степень дифференцировки (степень анаплазии). Данные распределения по степени анаплазии представлены в таблице 2.We examined, in accordance with the claimed method, 112 patients (82 men and 30 women) aged 36 to 85 years old with a diagnosis of bladder cancer. The largest group was transient invasive cancer (infiltrative urothelial carcinoma). The group with transitional cell carcinoma also included 8 cases of cancer with papillomatosis and / or inverted papilloma. Invasion of the muscle layer (muscle-invasive cancer) was observed in 23 cases, and the most common process (stage T3-4) - in 18 cases. For all tumors, the degree of differentiation (degree of anaplasia) was determined. The distribution data for the degree of anaplasia are presented in table 2.
Более выраженная степень лимфоидной инфильтрации как в подлежащей строме, так и непосредственно в опухоли, имела место у пациентов с наличием ДНК вирусов в опухоли (2 балла - 20,7% vs 45,2%, р=0,025, 3 балла - 44,8% vs 14,3%, р=0,005; 3 балла в опухоли - 34,5% vs 4,8%, р=0,002). Такое усиление иммунологической активности в сочетании с высокими показателями вирусных антител свидетельствовало о хронической вирусной инфекции, локализации ее в стенке мочевого пузыря с возможной индукцией опухолевого процесса и изменения степени анаплазии в сторону более низкодифференцированных форм, т.е. большей злокачественности течения.A more pronounced degree of lymphoid infiltration both in the underlying stroma and directly in the tumor occurred in patients with the presence of DNA viruses in the tumor (2 points - 20.7% vs 45.2%, p = 0.025, 3 points - 44.8 % vs 14.3%, p = 0.005; 3 points in the tumor - 34.5% vs 4.8%, p = 0.002). Such an increase in immunological activity in combination with high rates of viral antibodies testified to a chronic viral infection, its localization in the bladder wall with a possible induction of the tumor process and a change in the degree of anaplasia towards lower differentiated forms, i.e. more malignant course.
Выявлено наличие вирусных ДНК в опухолевой ткани у 34 пациентов (21 мужчины и 13 женщин). Инфицирование ткани ВЭБ имело место в 27 случаях, в 6 случаях - ЦМВ, у 5 больных - ВПЧ высокого онкогенного риска (16, 39, 45, 52, 59), в одном случае выявлен ВПГ 1, 2 типов. ДНК нескольких вирусов из 34 больных выявлено у четверых (ВПЧ+ВЭБ в одном случае, ВЭБ+ЦМВ - у двоих пациентов, ЦМВ+ВЭБ+ВПЧ - у одного больного). В 56% случаев опухоли являлись низкодифференцированными.The presence of viral DNA in the tumor tissue was detected in 34 patients (21 men and 13 women). EBV tissue infection occurred in 27 cases, in 6 cases - CMV, in 5 patients - HPV of high oncogenic risk (16, 39, 45, 52, 59), in one case, HSV 1, 2 types were detected. DNA of several viruses from 34 patients was detected in four (HPV + EBV in one case, EBV + CMV in two patients, CMV + EBV + HPV in one patient). In 56% of cases, tumors were poorly differentiated.
Наиболее часто ДНК ВЭБ была обнаружена у пациентов с низкодифференцированной опухолью.Most often, EBV DNA has been detected in patients with a low-grade tumor.
Койлоцитоз умеренной степени как показатель цитопатических изменений клеток был более выражен у вирус-негативных пациентов (2 балла - 10,3% vs 28,6%, р=0,046), тогда как выраженный койлоцитоз, наоборот, был более характерен для пациентов с выявленной вирусной ДНК в опухоли (27,6% vs 9,5%, р=0,06). По всей видимости, у данной категории больных имеет место суперинфекция, т.е. сочетание ВПЧ и других вирусов, что и приводит к более выраженным цитопатическим изменениям. Нельзя не отметить также высокий уровень герпес-вирусных антител у этой категории больных.Moderate coylocytosis as an indicator of cytopathic changes in cells was more pronounced in virus-negative patients (2 points - 10.3% vs 28.6%, p = 0.046), while pronounced coylocytosis, on the contrary, was more characteristic for patients with detected viral DNA in the tumor (27.6% vs 9.5%, p = 0.06). Apparently, superinfection occurs in this category of patients, i.e. a combination of HPV and other viruses, which leads to more pronounced cytopathic changes. One cannot but note the high level of herpes virus antibodies in this category of patients.
Внутриядерные включения слабой степени выраженности и деструкция поверхности клетки умеренной степени были статистически достоверно выше в группе пациентов с отсутствием вируса в опухоли (10,7% vs 28,6%, р=0,053; 4% vs 22%, р=0,02).Weak intranuclear inclusions and moderate cell surface destruction were statistically significantly higher in the group of patients with no virus in the tumor (10.7% vs 28.6%, p = 0.053; 4% vs 22%, p = 0.02) .
При последующем сравнении морфологических изменений у пациентов с первичной и рецидивной опухолями выявлено большее количество лимфоцитов (62,5% vs 40,8%, р=0.059), очаговой гиперплазии лимфоидной ткани (62,5% vs 36,8%, р=0,025), эозинофилов (62,5% vs 35,5%, р=0,02) у пациентов с рецидивными формами. Тогда как наличие папилломатоза, характеризующегося образованием сосочков, выростов с пролиферацией эпителия на поверхность, (71,4% vs. 33,3%), выраженного койлоцитоза (3 балла - 22% vs 4,8%) было более характерно для первичных форм рака мочевого пузыря.Subsequent comparison of morphological changes in patients with primary and recurrent tumors revealed a greater number of lymphocytes (62.5% vs 40.8%, p = 0.059), focal hyperplasia of lymphoid tissue (62.5% vs 36.8%, p = 0.025 ), eosinophils (62.5% vs 35.5%, p = 0.02) in patients with recurrent forms. Whereas the presence of papillomatosis, characterized by the formation of papillae, outgrowths with proliferation of epithelium to the surface (71.4% vs. 33.3%), pronounced coilocytosis (3 points - 22% vs 4.8%) was more characteristic of primary forms of cancer Bladder.
Выявлены преимущественно умеренные коррелятивные связи между наличием ДНК ЦМВ в опухоли и очаговой гиперплазией лимфоидной ткани в виде фолликулов (R=0,33, р=0,008), периваскуярной инфильтрацией (R=0,206, р=0,085), койлоцитозом (R=0,237, р=0,046), наличием лейкоцитов и эозинофилов (R=0,241, р=0,047 и R=0,22, р=0,068). Тогда как наличие ДНК ВЭБ в опухоли коррелировало с рассеянной лимфоидной инфильтрацией как в подлежащей строме (R=0,326, р=0,006), так и в опухоли (R=0,348, р=0,003) и периваскулярной инфильтрацией (R=0,288, p=0,019).Mostly moderate correlations between the presence of CMV DNA in the tumor and focal hyperplasia of lymphoid tissue in the form of follicles (R = 0.33, p = 0.008), perivascular infiltration (R = 0.206, p = 0.085), and coilocytosis (R = 0.237, p = 0.046), the presence of leukocytes and eosinophils (R = 0.241, p = 0.047 and R = 0.22, p = 0.068). Whereas the presence of EBV DNA in the tumor correlated with diffuse lymphoid infiltration both in the underlying stroma (R = 0.326, p = 0.006) and in the tumor (R = 0.348, p = 0.003) and perivascular infiltration (R = 0.288, p = 0.019 )
Имела место обратная зависимость между уровнем анти-ЦМВ IgG и наличием папилломатоза мочевого пузыря (R=-0,386, р=0,006), и прямая между уровнем анти-ВПГ IgG и койлоцитозом (R=0,26, р=0,026).There was an inverse relationship between the level of anti-CMV IgG and the presence of papillomatosis of the bladder (R = -0.386, p = 0.006), and a direct line between the level of anti-HSV IgG and coilocytosis (R = 0.26, p = 0.026).
Если рассматривать выявленные нами морфологические изменения в зависимости от стадии процесса и степени дифференцировки, видно, что для более распространенного процесса характерно увеличение количества лимфоцитов, лейкоцитов, эозинофилов, деструктивных изменений клеток, а также как очаговой, так и периваскулярной лимфоидной инфильтрации. Тогда как папилломатоз более характерен для начальных стадий рака мочевого пузыря. Практически те же самые изменения мы наблюдаем при низко дифференцированной градации опухоли. Папилломатоз более характерен для высокодифференцированных опухолей мочевого пузыря, т.е. для более благоприятного его течения.If we consider the morphological changes that we have identified, depending on the stage of the process and the degree of differentiation, it can be seen that a more common process is characterized by an increase in the number of lymphocytes, leukocytes, eosinophils, destructive changes in cells, as well as focal and perivascular lymphoid infiltration. While papillomatosis is more characteristic of the initial stages of bladder cancer. Almost the same changes we observe with a low-grade tumor gradation. Papillomatosis is more characteristic of highly differentiated tumors of the bladder, i.e. for a more favorable course.
В катамнезе, на протяжении трех лет были прослежены 98 из 112 больных, для которых прогнозирование течения рака мочевого пузыря по заявленному способу полностью подтвердилось: независимо от типа и стадии опухоли, с которыми больной первично поступал в клинику и проходил соответствующее лечение, рецидивирование леченной опухоли, возникшее не позднее двух лет после лечения, подтвердилось в 92% случаев прогноза, увеличение степени инвазии - в 89%, благоприятный прогноз (отсутствие рецидивов и усиления инвазивного роста) - в 93% случаев прогнозирования, в соответствии с установленными у пациентов уровнями противовирусных антител при их первичном обращении в клинику.In the follow-up history, 98 out of 112 patients were followed up over three years, for which the prognosis of bladder cancer according to the claimed method was fully confirmed: regardless of the type and stage of the tumor, with which the patient first entered the clinic and underwent appropriate treatment, recurrence of the treated tumor, arising no later than two years after treatment, was confirmed in 92% of cases of prognosis, an increase in the degree of invasion - in 89%, a favorable prognosis (no relapse and increased invasive growth) - in 93% of cases predicted Niya, in accordance with the patients levels of anti-viral antibodies at their initial clinic visit.
Таким образом, установленные значения уровней противовирусных антител можно рассматривать как критерии достоверного прогнозирования, соответственно, благоприятного или неблагоприятного течения рака мочевого пузыря, независимо от его стадии и типа.Thus, the established values of the levels of antiviral antibodies can be considered as criteria for reliable prediction, respectively, of a favorable or unfavorable course of bladder cancer, regardless of its stage and type.
Claims (7)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017129079A RU2641170C1 (en) | 2017-08-15 | 2017-08-15 | Method for bladder cancer course prediction |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017129079A RU2641170C1 (en) | 2017-08-15 | 2017-08-15 | Method for bladder cancer course prediction |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2641170C1 true RU2641170C1 (en) | 2018-01-16 |
Family
ID=68235464
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017129079A RU2641170C1 (en) | 2017-08-15 | 2017-08-15 | Method for bladder cancer course prediction |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2641170C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2793510C1 (en) * | 2022-07-25 | 2023-04-04 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for predicting recurrence of non-muscle invasive bladder cancer |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090123054A1 (en) * | 2007-11-13 | 2009-05-14 | Ikonisys, Inc. | Detection of circulating tumor cells in peripheral blood with an automated scanning fluorescence microscope |
| RU2456926C2 (en) * | 2010-07-05 | 2012-07-27 | Шамиль Ханафиевич Ганцев | Method of predicting distant results of urinary bladder cancer treatment |
| RU2468088C1 (en) * | 2011-03-16 | 2012-11-27 | Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН | Method of estimating efficiency of therapy urinary bladder cancer in humans by method of immunofermentative analysis |
| RU2538632C2 (en) * | 2012-11-08 | 2015-01-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт онкологии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НИИ онкологии" СО РАМН) | Method for prediction of clinical outcome of musculo-invasive bladder cancer following combination therapy |
-
2017
- 2017-08-15 RU RU2017129079A patent/RU2641170C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090123054A1 (en) * | 2007-11-13 | 2009-05-14 | Ikonisys, Inc. | Detection of circulating tumor cells in peripheral blood with an automated scanning fluorescence microscope |
| RU2456926C2 (en) * | 2010-07-05 | 2012-07-27 | Шамиль Ханафиевич Ганцев | Method of predicting distant results of urinary bladder cancer treatment |
| RU2468088C1 (en) * | 2011-03-16 | 2012-11-27 | Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН | Method of estimating efficiency of therapy urinary bladder cancer in humans by method of immunofermentative analysis |
| RU2538632C2 (en) * | 2012-11-08 | 2015-01-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт онкологии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НИИ онкологии" СО РАМН) | Method for prediction of clinical outcome of musculo-invasive bladder cancer following combination therapy |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| INOUE К. et al. The prognostic value of angiogenesis and metastasis-related genes for progression oftarnsitional cell carcinoma of the renal pelvis and ureter // Clin. Cancer. Res. 2002. Vol.8. P.1863-1870. * |
| VOLLER A., The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) (theory, technique and applications), Ric Clin Lab, 1978, v.8, no.4, pp.289-298. * |
| VOLLER A., The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) (theory, technique and applications), Ric Clin Lab, 1978, v.8, no.4, pp.289-298. INOUE К. et al. The prognostic value of angiogenesis and metastasis-related genes for progression oftarnsitional cell carcinoma of the renal pelvis and ureter // Clin. Cancer. Res. 2002. Vol.8. P.1863-1870. * |
| ЛОРАН О.Б. и др. Латентная герпес-вирусная инфекция в онкогенезе рака мочевого пузыря, Современная онкология. Том 17, номер 3, 2015, с.96-99. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2793510C1 (en) * | 2022-07-25 | 2023-04-04 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for predicting recurrence of non-muscle invasive bladder cancer |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Damerla et al. | Detection of early human papillomavirus–associated cancers by liquid biopsy | |
| Robinson et al. | HPV specific testing: a requirement for oropharyngeal squamous cell carcinoma patients | |
| Pannone et al. | Evaluation of a combined triple method to detect causative HPV in oral and oropharyngeal squamous cell carcinomas: p16 Immunohistochemistry, Consensus PCR HPV-DNA, and In Situ Hybridization | |
| Wagner et al. | CD 56‐positive lymphocyte infiltration in relation to human papillomavirus association and prognostic significance in oropharyngeal squamous cell carcinoma | |
| Arnheim Dahlström et al. | Prospective seroepidemiologic study of human papillomavirus and other risk factors in cervical cancer | |
| Zielinski et al. | The presence of high‐risk HPV combined with specific p53 and p16INK4a expression patterns points to high‐risk HPV as the main causative agent for adenocarcinoma in situ and adenocarcinoma of the cervix | |
| Sarchianaki et al. | Detection and genotype analysis of human papillomavirus in non-small cell lung cancer patients | |
| Kremer et al. | Clinical regression of high-grade cervical intraepithelial neoplasia is associated with absence of FAM19A4/miR124-2 DNA methylation (CONCERVE study) | |
| Ritta et al. | Cell cycle and viral and immunologic profiles of head and neck squamous cell carcinoma as predictable variables of tumor progression | |
| Fujii et al. | Performance of p16 INK4a/Ki-67 immunocytochemistry for identifying CIN2+ in atypical squamous cells of undetermined significance and low-grade squamous intraepithelial lesion specimens: a Japanese Gynecologic Oncology Group study | |
| Ovestad et al. | Clinical value of fully automated p16/Ki‐67 dual staining in the triage of HPV‐positive women in the Norwegian Cervical Cancer Screening Program | |
| Da Costa et al. | HPV infection and p53 and p16 expression in esophageal cancer: are they prognostic factors? | |
| Kawaguchi et al. | Liquid-based urine cytology as a tool for detection of human papillomavirus, Mycoplasma spp., and Ureaplasma spp. in men | |
| JP2017514142A (en) | Novel methods, bioassays and biomarkers for HPV related symptoms | |
| Brun‐Micaleff et al. | Cervical cancer screening by cytology and human papillomavirus testing during pregnancy in French women with poor adhesion to regular cervical screening | |
| Thuijs et al. | DNA methylation markers for cancer risk prediction of vulvar intraepithelial neoplasia | |
| Jonsson et al. | Chlamydia trachomatis, chlamydial heat shock protein 60 and anti-chlamydial antibodies in women with epithelial ovarian tumors | |
| Jiromaru et al. | p16 overexpression and Rb loss correlate with high‐risk HPV infection in oropharyngeal squamous cell carcinoma | |
| Sancakli Usta et al. | Overexpression of programmed cell death ligand 1 in patients with CIN and its correlation with human papillomavirus infection and CIN persistence | |
| Meyer et al. | HIV positivity but not HPV/p16 status is associated with higher recurrence rate in anal cancer | |
| Poljak et al. | Testing for human papillomaviruses in urine, blood, and oral specimens: an update for the laboratory | |
| Walker et al. | Hepatocyte growth factor and c-Met in cervical intraepithelial neoplasia: overexpression of proteins associated with oncogenic human papillomavirus and human immunodeficiency virus | |
| Grisaru et al. | Pilot study of prevalence of high-risk human papillomavirus genotypes in Israeli Jewish women referred for colposcopic examination | |
| RU2641170C1 (en) | Method for bladder cancer course prediction | |
| Yu et al. | Elevated expression of human papillomavirus-16/18 E6 oncoprotein associates with persistence of viral infection: a 3-year prospective study in China |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190816 |