RU2635625C1 - Method for obtaining of peptide immunity stimulator (versions) and baa based thereon - Google Patents
Method for obtaining of peptide immunity stimulator (versions) and baa based thereon Download PDFInfo
- Publication number
- RU2635625C1 RU2635625C1 RU2016130535A RU2016130535A RU2635625C1 RU 2635625 C1 RU2635625 C1 RU 2635625C1 RU 2016130535 A RU2016130535 A RU 2016130535A RU 2016130535 A RU2016130535 A RU 2016130535A RU 2635625 C1 RU2635625 C1 RU 2635625C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- supernatant
- hours
- acetic acid
- peptide
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2121/00—Preparations for use in therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области пищевой и медицинской промышленности, а именно к способу получения иммуностимулятора из нервной ткани морских гидробионтов. Полученный предлагаемыми способами препарат может применяться, как биологически активная добавка, и предназначен для приема внутрь (перорально).The invention relates to the field of food and medical industry, and in particular to a method for producing an immunostimulant from the nervous tissue of marine aquatic organisms. Obtained by the proposed methods, the drug can be used as a dietary supplement, and is intended for oral administration (oral).
Известен способ получения иммуностимулятора из молок лососевых рыб (патент РФ 2091073, A61K 35/60), представляющий собой замораживание сырья, измельчение, экстрагирование 3%-ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, центрифугирование, ультра- и диафильтрацию экстракта в растворе 0,9% хлорида натрия с pH 6,0-6,5 через пористый материал с пределом разделения 5000 Да, стерилизацию и лиофильное высушивание.A known method of obtaining an immunostimulant from salmon milk (patent RF 2091073, A61K 35/60), which is the freezing of raw materials, grinding, extraction with a 3% solution of acetic acid with the addition of zinc chloride, centrifugation, ultra- and diafiltration of the extract in solution 0, 9% sodium chloride with a pH of 6.0-6.5 through a porous material with a separation limit of 5000 Da, sterilization and freeze drying.
Известен способ получения иммуностимулятора из ганглий кальмара и каракатицы (патент РФ 2091072, A61K 35/60), включающий гомогенизацию сырья в воде, подкисленной уксусной кислотой до pH 3,5-4,5 и содержащей 0,1% хлористого цинка, отделение надосадочной жидкости, стерилизующую фильтрацию через мембранные фильтры с размером пор 0,8; 0,45; 0,22 мкм, концентрирование стерильного фильтрата в 5,5 раз на ультрафильтрационной установке через пористый материал с пределом разделения 1000-5000 Да с последующей очисткой в подщелоченной до pH 9-10 воде, повторное концентрирование на том же пористом материале и стерилизацию, лиофильное высушивание.A known method of obtaining an immunostimulant from squid and cuttlefish ganglia (RF patent 2091072, A61K 35/60), including the homogenization of raw materials in water, acidified with acetic acid to a pH of 3.5-4.5 and containing 0.1% zinc chloride, separation of the supernatant sterilizing filtration through membrane filters with a pore size of 0.8; 0.45; 0.22 μm, concentration of the sterile filtrate 5.5 times in an ultrafiltration unit through a porous material with a separation limit of 1000-5000 Yes, followed by purification in alkalized water to pH 9-10, re-concentration on the same porous material and sterilization, freeze drying .
Недостатками этих способов являются:The disadvantages of these methods are:
- применение дорогостоящего ультрафильтрационного оборудования;- the use of expensive ultrafiltration equipment;
- отсутствие технологической операции по отделению веществ с молекулярной массой более 10000-15000 Да, что приводит к присутствию в препарате высокомолекулярных примесей, снижающих активность препарата и проявляющих аллергический эффект.- the absence of a technological operation for the separation of substances with a molecular mass of more than 10,000-15,000 Yes, which leads to the presence of high molecular weight impurities in the preparation that reduce the activity of the drug and exhibit an allergic effect.
Известен способ получения иммуностимулирующего препарата из тимуса (патент РФ 1112606, A61K 38/22), заключающийся в очистке сырья, замораживании, измельчении сырья, экстракции 5-6 объемами 3%-ного раствора уксусной кислоты, содержащей хлористый цинк при соотношении хлористого цинка и уксусной кислоты 1:1000 в течение 48-72 ч, отделении надосадочной жидкости и выделении целевого продукта осаждением пятью объемами ацетона при t=(-3)-(-5)°С, экстракции полученного осадка водой при рН 6-7 и комнатной температуре в течение 1-3 ч.There is a method of obtaining an immunostimulating drug from thymus (RF patent 1112606, A61K 38/22), which consists in cleaning the raw materials, freezing, grinding the raw materials, extraction with 5-6 volumes of a 3% solution of acetic acid containing zinc chloride in the ratio of zinc chloride and acetic acid acid 1: 1000 for 48-72 h, separation of the supernatant and isolation of the target product by precipitation with five volumes of acetone at t = (- 3) - (- 5) ° С, extraction of the obtained precipitate with water at pH 6-7 and room temperature in within 1-3 hours
Известен способ получения иммуностимулятора для повышения функции миндалин (патент РФ 1522485, A61K 35/30), включающий очистку сырья, замораживание, измельчение, экстракцию в 20-25 объемах 3%-ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, фильтрование, обработку надосадочной жидкости ацетоном, отделение осадка, растворение и лиофилизацию целевого продукта, в качестве сырья используют миндалины человека.A known method of producing an immunostimulant to increase the function of the tonsils (RF patent 1522485, A61K 35/30), including purification of raw materials, freezing, grinding, extraction in 20-25 volumes of 3% solution of acetic acid with the addition of zinc chloride, filtering, processing of the supernatant acetone, separation of the precipitate, dissolution and lyophilization of the target product, human tonsils are used as raw materials.
Известен способ получения иммуностимулирующего вещества (авторское свидетельство СССР №1103392), заключающийся в том, что ганглии кальмара или каракатицы (нервную ткань) промывают водой и ацетоном, затем помещают в ацетон и выдерживают в ацетоне при температуре 4-10°С, гомогенизируют в воде, содержащей 0,1%-ного раствора хлористого цинка, подкисляют до рН 3,5-4,5 и выдерживают 24-48 ч, затем отделяют надосадочную жидкость, которую обрабатывают ацетоном при соотношении надосадочной жидкости и ацетона 1:6 по объему, при температуре 3-5°С, отделяют осадок, высушивают его, растворяют в воде с рН 6,0-7,0 и фильтруют.A known method of obtaining an immunostimulating substance (USSR author's certificate No. 1103392), which consists in the fact that the ganglia of squid or cuttlefish (nerve tissue) are washed with water and acetone, then placed in acetone and kept in acetone at a temperature of 4-10 ° C, homogenized in water containing a 0.1% solution of zinc chloride, acidified to pH 3.5-4.5 and incubated for 24-48 hours, then the supernatant is separated, which is treated with acetone at a ratio of supernatant and acetone 1: 6 by volume, at a temperature of 3-5 ° C, the precipitate is separated, dried it, dissolved in water with a pH of 6.0-7.0 and filtered.
Недостатками этих способов являются использование больших объемов дорогостоящего огнеопасного реактива (ацетона), неполное удаление высокомолекулярных белков и введение дополнительной стадии растворения осадка целевого продукта перед его высушиванием, что приводит к снижению выхода.The disadvantages of these methods are the use of large volumes of expensive flammable reagent (acetone), incomplete removal of high molecular weight proteins and the introduction of an additional stage of dissolution of the precipitate of the target product before drying, which leads to a decrease in yield.
Наиболее близким по технической сущности к заявленному способу является способ получения иммуностимулятора из нервной ткани морских гидробионтов (патент РФ 2222337, A61K 35/30, A61K 35/60, A23L 1/333), включающий разморозку замороженного сырья (нервную ткань головоногих моллюсков: кальмаров, каракатиц, осьминогов; мозг морских млекопитающих: белух, кашалотов, китов, моржей, ларги, нерпы, лахтака, акибы; мозг рыб: лососевых, осетровых, сельдевых, тресковых, камбаловых, окуневых), измельчение, экстрагирование 3%-ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, центрифугирование, отделение надосадочной жидкости и выделение целевого продукта путем ультрафильтрации и диафильтрации, которые проводят в две стадии на двух мембранах с различным пределом разделения по молекулярной массе. Иммуностимулятор, полученный по предлагаемому способу, имеет четко ограниченные пределы молекулярной массы 1000 - 10000-15000 Да.The closest in technical essence to the claimed method is a method of obtaining an immunostimulant from the nervous tissue of marine aquatic organisms (RF patent 2222337, A61K 35/30, A61K 35/60, A23L 1/333), including defrosting frozen raw materials (nervous tissue of cephalopods: squid, cuttlefish, octopus; the brain of marine mammals: beluga whales, sperm whales, whales, walruses, larghas, seal, lahtak, akiba; fish brains: salmon, sturgeon, herring, cod, flounder, perch), grinding, extraction with 3% acetic acid solution with chlorine pure zinc, centrifugation, separation of the supernatant and isolation of the target product by ultrafiltration and diafiltration, which are carried out in two stages on two membranes with different separation limits by molecular weight. The immunostimulant obtained by the proposed method has clearly limited molecular weight limits of 1000 - 10000-15000 Yes.
Недостатками прототипа - способа являются:The disadvantages of the prototype of the method are:
- использование дорогостоящего ультрафильтрационного оборудования;- the use of expensive ultrafiltration equipment;
- отсутствие стадии обезжиривания экстракта и как следствие - конечного продукта, что приводит к снижению срока хранения препарата из-за окисления липидов;- the absence of a stage of degreasing the extract and, as a consequence, the final product, which leads to a decrease in the shelf life of the drug due to lipid oxidation;
Известно, что ткани мозга различных животных содержат от 5 (серое вещество) до 17 (белое вещество) процентов липидов, часть которых представлены конъюгатами с белками и пептидами и могут легко попасть в концентрат раствора конечного продукта, полученный путем ступенчатой ультрафильтрации.It is known that brain tissues of various animals contain from 5 (gray matter) to 17 (white matter) percent lipids, some of which are conjugates with proteins and peptides and can easily get into the final product solution concentrate obtained by step ultrafiltration.
Аналоги и прототип по БАД.Analogs and prototype for dietary supplements.
Известно иммуномодулирующее средство Риботаб (патент РФ 2257216, A61K 35/12, A61K 35/55), имеющее в своем составе препарат полипептидной природы, полученный из тимуса животных (тактивин, или тималин, или тимоген) - 0,15-0,3 мас. %, нуклеинат натрия - 6,0-8,0 мас. %, а также крахмал картофельный, молочный сахар, тальк, желатин, поливинилпирролидон и стеариновую кислоту.Known immunomodulatory agent Ribotab (RF patent 2257216, A61K 35/12, A61K 35/55), which contains a preparation of a polypeptide nature, obtained from the thymus of animals (tactivin, or thymalin, or thymogen) - 0.15-0.3 wt. . %, sodium nucleinate - 6.0-8.0 wt. %, as well as potato starch, milk sugar, talc, gelatin, polyvinylpyrrolidone and stearic acid.
Известен лечебно-профилактический продукт для людей и животных с иммуностимулирующим действием (патент РФ 2065707, A23L 1/305, A23L 1/325), содержащий мясо теплокровных животных, рыб, беспозвоночных и/или отходы их переработки - 99,99965-99,99950 мас. %, иммуностимуляторы пептидной природы, преимущественно ганглиин, тималин, тимоген, Т-активин, вилозен, - 0,00035-0,0005 мас. %.Known therapeutic product for humans and animals with immunostimulating action (RF patent 2065707, A23L 1/305, A23L 1/325), containing meat of warm-blooded animals, fish, invertebrates and / or waste from their processing - 99,99965-99,99950 wt. %, immunostimulants of a peptide nature, mainly gangliin, thymalin, thymogen, T-activin, vilosen, 0.00035-0.0005 wt. %
Недостатком данных патентов является использование в качестве сырья тканей сельскохозяйственных животных без термической обработки, что является риском распространения вирусных заболеваний и бешенства прионовой природы.The disadvantage of these patents is the use of agricultural animal tissue as a raw material without heat treatment, which is a risk of the spread of viral diseases and prion rabies.
Известна иммуностимулирующая композиция (патент РФ №2110254, A61K 9/14, A61K 45/06), включающая препараты в следующем соотношении, мг: иммунокорректор (ганглиин или молокин или гепалин) - 0,5-6, парацетамол 200-500, витамин С - 50-100, антигистаминное средство - 0,5-25, глюкозу - 300-500.Known immunostimulating composition (RF patent No. 2110254, A61K 9/14, A61K 45/06), including drugs in the following ratio, mg: immunocorrector (gangliin or milkokin or hepalin) - 0.5-6, paracetamol 200-500, vitamin C - 50-100, antihistamine - 0.5-25, glucose - 300-500.
Наиболее близким техническим решением для продукта является пищевая биологически активная добавка «Тинростим-С» (патент РФ 2105504, A23L 1/305, A23L 1/29, A61K 38/17), содержащая в качестве пептидов ганглиин 0,2-0,4%, полученный из нервной ткани кальмара или каракатицы, аскорбиновую кислоту - 9-11%, остальное - глюкоза.The closest technical solution for the product is the dietary supplement “Tinrostim-S” (RF patent 2105504, A23L 1/305, A23L 1/29, A61K 38/17), containing 0.2-0.4% ganglyin as peptides obtained from the nervous tissue of squid or cuttlefish, ascorbic acid - 9-11%, the rest is glucose.
Недостатком прототипа - продукта является ограниченная сырьевая база, небольшое содержание пептидов.The disadvantage of the prototype - the product is a limited raw material base, a small content of peptides.
Основной задачей, на решение которой направлены заявляемые способ получения иммуностимулятора пептидной природы (варианты) и БАД на его основе, является увеличение выхода конечного продукта, удешевление и упрощение способа его получения, повышение биологической активности добавок, содержащих конечный продукт.The main task to be solved by the claimed method of obtaining an immunostimulant of peptide nature (options) and dietary supplements based on it is to increase the yield of the final product, reduce the cost and simplify the method of its production, increase the biological activity of additives containing the final product.
Единый технический результат, достигаемый при осуществлении заявляемой группы изобретений, состоит в получении БАД с повышенной биологической активностью за счет увеличения содержания в ней пептидов, обладающих иммуностимулирующим действием.A single technical result achieved by the implementation of the claimed group of inventions is to obtain dietary supplements with increased biological activity by increasing the content of peptides with immunostimulating effect in it.
Вариант 1. Указанный технический результат достигается тем, что в известном способе получения иммуностимулятора пептидной природы из нервной ткани морских гидробионтов, включающем размораживание сырья, его измельчение, экстрагирование в 3% уксусной кислоте, получение и отделение надосадочной жидкости, выделение конечного продукта, согласно изобретению, сырье экстрагируют в течение 35-48 ч при перемешивании в течение 15 мин через каждые 1,5 ч, затем смесь подщелачивают бикарбонатом натрия до pH=8,0-8,5, добавляют 0,3% раствор хитозана в 3% растворе уксусной кислоты и выдерживают в течение одного часа, полученную массу центрифугируют на центрифуге 5000 об/мин в течение 20 мин, к полученной надосадочной жидкости добавляют сульфат аммония до 30% концентрации раствора, смесь выдерживают при помешивании в течение двух часов, снова центрифугируют на центрифуге 5000 об/мин в течение 20 мин, надосадочную жидкость диафильтруют на кассетной мембране с пределом разделения 1000 Да, при этом диафильтрацию осуществляют четырежды с добавлением к получаемому концентрату дистиллированной воды в соотношении концентрат : вода 1:2 до получения раствора с конечным веществом от 1000 до 15000 Да, концентрат подвергают лиофильной сушке с последующим ультрафиолетовым облучением и стерильно упаковывают.Option 1. The specified technical result is achieved by the fact that in the known method of obtaining an immunostimulant of a peptide nature from the nervous tissue of marine aquatic organisms, including thawing the raw material, crushing it, extracting it with 3% acetic acid, obtaining and separating the supernatant, isolating the final product, according to the invention, the raw material is extracted for 35-48 hours with stirring for 15 minutes every 1.5 hours, then the mixture is made alkaline with sodium bicarbonate to pH = 8.0-8.5, a 0.3% solution of chitosan in 3% solution is added acetic acid and incubated for one hour, the resulting mass was centrifuged on a 5000 rpm centrifuge for 20 minutes, ammonium sulfate was added to the resulting supernatant to 30% solution concentration, the mixture was kept under stirring for two hours, centrifuged again on a 5000 centrifuge rpm for 20 min, the supernatant is diafiltered on a cassette with a separation limit of 1000 Da, while diafiltration is carried out four times with the addition of distilled water to the resulting concentrate in the ratio Concentrate: water 1: 2 to obtain a solution with a final substance of 1000 to 15000 Da, the concentrate was freeze-dried, followed by ultraviolet irradiation and aseptically packaged.
В качестве сырья используют замороженную нервную ткань морских гидробионтов, а именно: головоногих моллюсков - кальмаров, каракатиц, осьминогов; мозг морских млекопитающих - белух, кашалотов, китов, моржей, ларги, нерпы, лахтака, акибы; мозг рыб - лососевых, осетровых, сельдевых, тресковых, камбаловых, окуневых.The raw material used is the frozen nervous tissue of marine aquatic organisms, namely: cephalopods - squid, cuttlefish, octopus; the brain of marine mammals - beluga whales, sperm whales, whales, walruses, larghas, seal, lahtak, akiba; the brain of fish - salmon, sturgeon, herring, cod, flounder, perch.
Обработка экстракта раствором хитозана до стадии отделения осадка измельченной ткани позволяет удалить липидные примеси и тем самым обеспечить надлежащую хранимоспособность конечного продукта.Processing the extract with a solution of chitosan to the stage of separation of the sediment of the crushed tissue allows you to remove lipid impurities and thereby ensure proper storage capacity of the final product.
Добавление сульфата аммония способствует удалению высокомолекулярных белков из надосадочной жидкости. Ограничение высокомолекулярных веществ в препарате необходимо не только для получения продукта с наибольшей активностью, но и для обеспечения антиаллергического эффекта.The addition of ammonium sulfate helps to remove high molecular weight proteins from the supernatant. The restriction of high molecular weight substances in the preparation is necessary not only to obtain the product with the highest activity, but also to provide an anti-allergic effect.
Применяемый сульфат аммония является веществом нетоксичным, безопасным в пожарном отношении и недорогим.The ammonium sulfate used is a non-toxic substance, fire safe and inexpensive.
Этот способ позволяет сконцентрировать раствор целевого продукта (низкомолекулярных пептидов) до небольшого объема, что облегчает последующую сушку. Очищенный концентрат содержит низкомолекулярные пептиды с молекулярной массой от 1000 до 10000-15000 Да. При применении данного способа получения препарата отделяются все балластные вещества с молекулярной массой более 10000-15000 Да, а при диафильтрации - все примеси менее 1000 Да. Выход иммуностимулятора, полученного этим способом, составляет 85-110 г.This method allows you to concentrate the solution of the target product (low molecular weight peptides) to a small volume, which facilitates subsequent drying. The purified concentrate contains low molecular weight peptides with a molecular weight of from 1000 to 10000-15000 Da. When using this method of preparation, all ballast substances with a molecular weight of more than 10,000-15,000 Da are separated, and during diafiltration, all impurities are less than 1000 Da. The output of the immunostimulant obtained by this method is 85-110 g.
Конечный препарат представляет собой аморфный порошок белого цвета, состоящий в основном из пептидного материала(95%), остальное - неорганические соли.The final preparation is an amorphous white powder, consisting mainly of peptide material (95%), the rest is inorganic salts.
Распределение пептидных компонентов по молекулярной массе, определенное с помощью гель-проникающей хроматографии, показано в таблице 1.The distribution of peptide components by molecular weight, determined using gel permeation chromatography, is shown in table 1.
Как следует из представленных данных, все препараты, полученные по заявленному способу, содержат следовые количества пептидного материала с молекулярной массой более 10 кДа, либо не содержат его совсем.As follows from the data presented, all preparations obtained by the claimed method contain trace amounts of peptide material with a molecular mass of more than 10 kDa, or do not contain it at all.
Сущность изобретения состоит в том, что иммуностимулятор получают следующим образом: сырье размораживают на воздухе до температуры минус 4°С, измельчают на электромясорубке с диаметром пропускающих отверстий 2-3 мм. Измельченное сырье помещают в емкость, заливают 3% уксусной кислотой и экстрагируют в течение 35-48 ч при перемешивании в течение 15 мин через каждые 1,5 ч, затем смесь подщелачивают бикарбонатом натрия до рН=8,0-8,5, добавляют 0,3% раствор хитозана в 3% уксусной кислоте (одна часть раствора хитозана на 20 частей экстракта по объему) и выдерживают в течение одного часа. Полученную массу центрифугируют на центрифуге 5000 об/мин в течение 20 мин, к полученной надосадочной жидкости добавляют сульфат аммония до 30% концентрации раствора, смесь выдерживают при помешивании в течение двух часов, снова центрифугируют на центрифуге 5000 об/мин в течение 20 мин, надосадочную жидкость диафильтруют на кассетной мембране (установка Pellicon фирмы Millipore, Франция или Т66.00.00.000ПС Научно-производственная фирма «Гелла-ТЭКО», РФ, г. Москва) с пределом разделения 1000 Да, при этом диафильтрацию осуществляют четырежды с добавлением к получаемому концентрату дистиллированной воды в соотношении концентрат : вода 1:2 до получения раствора с конечным веществом от 1000 до 15000 Да. Далее концентрат подвергают лиофильной сушке, а затем стерилизуют ультрафиолетом в течение 15 мин и стерильно упаковывают.The essence of the invention lies in the fact that the immunostimulant is obtained as follows: the raw materials are thawed in air to a temperature of minus 4 ° C, ground in an electric meat grinder with a diameter of transmission holes of 2-3 mm. The crushed raw materials are placed in a container, filled with 3% acetic acid and extracted for 35-48 hours with stirring for 15 minutes every 1.5 hours, then the mixture is made alkaline with sodium bicarbonate to pH = 8.0-8.5, 0 , 3% solution of chitosan in 3% acetic acid (one part of a solution of chitosan per 20 parts of extract by volume) and incubated for one hour. The resulting mass is centrifuged in a 5000 rpm centrifuge for 20 minutes, ammonium sulfate is added to the resulting supernatant to 30% solution concentration, the mixture is kept under stirring for two hours, centrifuged again in a 5000 rpm centrifuge for 20 minutes, the supernatant the liquid is diafiltered on a cassette membrane (Pellicon installation from Millipore, France or Т66.00.00.000PS Scientific and Production Company “Gella-TEKO”, Russian Federation, Moscow) with a separation limit of 1000 Yes, while diafiltration is carried out four times with the addition of emomu concentrate with distilled water in a concentrate: water 1: 2 to obtain a solution with a final substance of 1000 to 15000 Da. Next, the concentrate is subjected to freeze drying, and then sterilized with ultraviolet for 15 minutes and sterilely packaged.
Примеры осуществления способа по данному варианту приведены в примерах конкретного выполнения №1, 2.Examples of the method of this option are given in the examples of specific performance No. 1, 2.
Вариант 2. Указанный технический результат достигается тем, что в известном способе получения иммуностимулятора пептидной природы из нервной ткани морских гидробионтов, включающем размораживание сырья, его измельчение, экстрагирование в 3% уксусной кислоте, получение и отделение надосадочной жидкости, выделение конечного продукта, согласно изобретению, сырье экстрагируют в течение 35-48 ч при перемешивании в течение 15 мин через каждые 1,5 ч, затем смесь подщелачивают бикарбонатом натрия до рН=8,0-8,5, добавляют 0,3% раствор хитозана в 3% растворе уксусной кислоты и выдерживают в течение одного часа, добавляют неорганический адсорбент природного происхождения, периодически перемешивая в течение 20 мин, затем отстаивают смесь в течение 4 часов, надосадочную жидкость декантируют и высушивают на вакуумной ротационной или распылительной сушках, в условиях исключающих нагрев выше 30-40°C, сухой продукт облучают ультрафиолетовой лампой и стерильно упаковывают.Option 2. The specified technical result is achieved by the fact that in the known method of obtaining an immunostimulant of a peptide nature from the nervous tissue of marine aquatic organisms, including thawing the raw material, crushing it, extracting it in 3% acetic acid, obtaining and separating the supernatant, isolating the final product, according to the invention, the raw material is extracted for 35-48 hours with stirring for 15 minutes every 1.5 hours, then the mixture is alkalinized with sodium bicarbonate to pH = 8.0-8.5, a 0.3% solution of chitosan in 3% solution is added acetic acid and kept for one hour, an inorganic adsorbent of natural origin is added, stirring periodically for 20 minutes, then the mixture is left to stand for 4 hours, the supernatant is decanted and dried on a vacuum rotary or spray drying, under conditions excluding heating above 30-40 ° C, the dry product is irradiated with an ultraviolet lamp and sterilely packaged.
В качестве сырья используют замороженную нервную ткань морских гидробионтов, а именно: головоногих моллюсков - кальмаров, каракатиц, осьминогов; мозг морских млекопитающих - белух, кашалотов, китов, моржей, ларги, нерпы, лахтака, акибы; мозг рыб - лососевых, осетровых, сельдевых, тресковых, камбаловых, окуневых.The raw material used is the frozen nervous tissue of marine aquatic organisms, namely: cephalopods - squid, cuttlefish, octopus; the brain of marine mammals - beluga whales, sperm whales, whales, walruses, larghas, seal, lahtak, akiba; the brain of fish - salmon, sturgeon, herring, cod, flounder, perch.
Добавление адсорбента в экстракт сразу после раствора хитозана до стадии отделения осадка измельченной ткани обеспечивает удаление высокомолекулярных белков.Adding the adsorbent to the extract immediately after chitosan solution to the stage of separation of the sediment of the crushed tissue ensures the removal of high molecular weight proteins.
В качестве адсорбентов используют сухой фильтроперлит (ГОСТ 30566-98, разрешен к использованию для очистки пищевых продуктов) или 20% суспензию бентонита (ОСТ 18-49-71, для винодельческой промышленности, пищевая добавка Е 558), либо любой пищевой сорбент, адсорбирующий высокомолекулярные белковые фракции.As adsorbents, use dry filterroperlite (GOST 30566-98, approved for use in food cleaning) or a 20% suspension of bentonite (OST 18-49-71, for the wine industry, food additive E 558), or any food sorbent adsorbing high molecular weight protein fractions.
Надосадочную жидкость декантируют без использования центрифугирования или сепарирования, так как используемые адсорбенты хорошо осветляют раствор, не оставляя в нем мелкодисперсных взвесей. Выход иммуностимулятора, полученного данным способом, составляет 45-100 г.The supernatant is decanted without centrifugation or separation, since the adsorbents used brighten the solution well without leaving finely dispersed suspensions in it. The output of the immunostimulant obtained by this method is 45-100 g.
После высушивания в вышеуказанных условиях конечный препарат представляет собой аморфный порошок белого цвета, состоящий из пептидного материала (95%), остальное - неорганические соли. Распределение пептидных компонентов по молекулярной массе, определенное с помощью гель-проникающей хроматографии, показано в таблице 1.After drying under the above conditions, the final preparation is a white amorphous powder consisting of peptide material (95%), the rest is inorganic salts. The distribution of peptide components by molecular weight, determined using gel permeation chromatography, is shown in table 1.
Сущность изобретения состоит в том, что иммуностимулятор получают следующим образом: сырье размораживают на воздухе до температуры минус 4°C, измельчают на электромясорубке с диаметром пропускающих отверстий 2-3 мм. Измельченное сырье помещают в емкость, заливают 3% уксусной кислотой и экстрагируют в течение 40 ч при перемешивании в течение 15 мин через каждые 1,5 ч, затем смесь подщелачивают бикарбонатом натрия до рН=8,0-8,5, добавляют 0,3% раствор хитозана в 3% уксусной кислоте (одна часть раствора хитозана на 20 частей экстракта по объему) и выдерживают в течение одного часа. В смесь добавляют неорганический адсорбент природного происхождения в количестве, зависящем от начального объема экстракта, периодически перемешивая в течение 20 мин, затем отстаивают смесь в течение 4 часов. Надосадочную жидкость декантируют и высушивают на вакуумной ротационной или распылительной сушках, в условиях исключающих нагрев выше 30-40°C, сухой продукт облучают ультрафиолетовой лампой и стерильно упаковывают.The essence of the invention lies in the fact that the immunostimulant is obtained as follows: the raw material is thawed in air to a temperature of minus 4 ° C, grinded in an electric grinder with a diameter of transmission holes of 2-3 mm. The crushed raw materials are placed in a container, filled with 3% acetic acid and extracted for 40 hours with stirring for 15 minutes every 1.5 hours, then the mixture is made alkaline with sodium bicarbonate to pH = 8.0-8.5, 0.3 is added % solution of chitosan in 3% acetic acid (one part of a solution of chitosan per 20 parts of extract by volume) and incubated for one hour. An inorganic adsorbent of natural origin is added to the mixture in an amount depending on the initial volume of the extract, stirring periodically for 20 minutes, then the mixture is left to stand for 4 hours. The supernatant is decanted and dried on a vacuum rotary or spray drying, under conditions excluding heating above 30-40 ° C, the dry product is irradiated with an ultraviolet lamp and sterilely packaged.
Примеры осуществления способа по данному варианту приведены в примерах конкретного выполнения №3, 4, 5, 6.Examples of the method of this option are given in the examples of specific performance No. 3, 4, 5, 6.
Преимущества вышеуказанных способов по сравнению с прототипом:The advantages of the above methods in comparison with the prototype:
1. Применяется раствор хитозана, позволяющий очистить экстракт от липидных примесей;1. A solution of chitosan is used, which allows you to clean the extract from lipid impurities;
2. Для удаления высокомолекулярных белков используют:2. To remove high molecular weight proteins use:
а) высаливание надосадочной жидкости сульфатом аммония после отделения осадка исходного измельченного сырья с последующей диафильтрацией через мембрану с порогом удерживания 1000 Да (вариант 1):a) salting out of the supernatant with ammonium sulfate after separation of the precipitate of the initial ground raw material followed by diafiltration through a membrane with a retention threshold of 1000 Da (option 1):
б) обработку экстракта неорганическими адсорбентами природного происхождения с последующим декантированием надосадочной жидкости (вариант 2).b) treatment of the extract with inorganic adsorbents of natural origin, followed by decantation of the supernatant (option 2).
3. Технологии не требуют многоступенчатой ультрафильтрации и стерилизующей фильтрации;3. Technologies do not require multi-stage ultrafiltration and sterilizing filtration;
4. В варианте 2 не используются центрифуги или сепараторы, что значительно упрощает и удешевляет способ получения иммуностимулятора;4. In option 2, centrifuges or separators are not used, which greatly simplifies and reduces the cost of the method of obtaining an immunostimulant;
5. Способы исключают добавление хлористого цинка.5. The methods exclude the addition of zinc chloride.
6. Получают иммуностимулятор с высокой биологической активностью.6. Receive immunostimulant with high biological activity.
Первый вариант заявляемого способа более длительный, чем второй, но позволяет получить высокий выход конечного продукта, в то время как второй вариант более дешевый и упрощенный с выходом конечного продукта ниже, чем первый вариант.The first option of the proposed method is longer than the second, but allows to obtain a high yield of the final product, while the second option is cheaper and simplified with the yield of the final product lower than the first option.
Указанный технический результат достигается тем, что предлагаемыми вариантами способа получают иммуностимулятор пептидной природы, входящий в состав биологически активной добавки, имеющей две формы выпуска: порошок и таблетки, и содержащей следующие компоненты:The specified technical result is achieved by the fact that the proposed method provides an immunostimulant of a peptide nature, which is part of a biologically active additive having two forms of release: powder and tablets, and containing the following components:
Форма выпуска - порошок (в 1 порошке, %)Release form - powder (in 1 powder,%)
Пептиды - 0,1-0,5,Peptides - 0.1-0.5,
Аскорбиновая кислота - 8-16,Ascorbic acid - 8-16,
D-глюкоза илиD-glucose or
кристаллическая глюкоза - остальное.crystalline glucose - the rest.
Форма выпуска - таблетки (в 1 таблетке, мг)Release form - tablets (in 1 tablet, mg)
Пептиды - 1,0-1,5,Peptides - 1.0-1.5,
Аскорбиновая кислота - 8-10,Ascorbic acid - 8-10,
D-глюкоза илиD-glucose or
кристаллическая глюкоза - 118-125,crystalline glucose - 118-125,
Целлюлоза микрокристаллическая или крахмал картофельный - 68,8,Microcrystalline cellulose or potato starch - 68.8,
Кальция стеарат - 2,0.Calcium stearate - 2.0.
Повышенная биологическая ценность пептида доказана проведением иммунологических исследований иммуностимулятора, сырьем для которого явились оптические ганглии кальмара, полученного по одному из вариантов заявляемых способов. В исследование включали добровольцев из числа студентов 2-го курса ШБМ ДВФУ в возрасте 19-22 лет, не имеющих в анамнезе указаний на гиперчувствительность или аллергические реакции на компоненты препарата, хронические заболевания (сахарный диабет, туберкулез, хронические заболевания печени и почек, онкологические заболевания, ВИЧ, др.), беременность, а также не страдающих острыми инфекционными заболеваниями на момент исследования. Кроме того, в исследование не включали людей, принимавших иммуномодулирующие препараты в течение 4 недель до начала исследования. Проведение исследования было одобрено биоэтическим комитетом ШБМ ДВФУ.The increased biological value of the peptide is proved by immunological studies of an immunostimulant, the raw material for which was optical squid ganglia obtained by one of the variants of the claimed methods. The study included volunteers from the 2nd year of BSM FEFU students aged 19-22 years who do not have a history of hypersensitivity or allergic reactions to the components of the drug, chronic diseases (diabetes mellitus, tuberculosis, chronic liver and kidney diseases, cancer , HIV, etc.), pregnancy, and also not suffering from acute infectious diseases at the time of the study. In addition, the study did not include people taking immunomodulating drugs for 4 weeks before the start of the study. The study was approved by the bioethical committee of the SBM FEFU.
При испытаниях использовались препараты в форме порошка и таблеток.In the tests, preparations in the form of powder and tablets were used.
Добровольцы принимали препараты по одной дозе, содержащей 2 мг иммуностимулятора, в сутки в утренние часы до еды в течение 1 месяца.Volunteers took drugs in a single dose containing 2 mg of an immunostimulant per day in the morning before meals for 1 month.
Иммунофенотипирование лимфоцитов крови проводили на проточном цитофлуориметре Beckman Coulter Epics XL в соответствии со стандартизированной технологией (Хайдуков СВ., Байдун Л.А., Зурочка А.В., Тотолян Арег А. Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови с применением проточных цитофлуориметров-анализаторов // Медицинская иммунология.- 2012.- Т. 14.-№3. - С. 255-268). Для оценки функциональной активности фагоцитирующих клеток крови у добровольцев на фоне применения препаратов использована реакция восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) (Виксман М.Е., Маянский А.Н. Способ оценки функциональной активности нейтрофилов человека по реакции восстановления нитросинего тетразолия: Методические рекомендации - Казань: КазанскийНИИЭМ. - 2011. - 11 с). Для определения фагоцитарной активности нейтрофилов использовали Staphilococcus aureus с подсчетом фагоцитарного индекса (процентное содержание фагоцитирующих нейтрофилов) - ФИ и фагоцитарного числа (среднее число микроорганизмов, поглощенных одним нейтрофилом) - ФЧ.Immunophenotyping of blood lymphocytes was carried out on a Beckman Coulter Epics XL flow cytometer in accordance with standardized technology (Khaidukov SV, Baidun L.A., Zurochka A.V., Totolyan Areg A. Study of the subpopulation of peripheral blood lymphocytes using flow cytofluorimeters / / Medical immunology.- 2012.- T. 14.-No. 3. - S. 255-268). To assess the functional activity of phagocytic blood cells in volunteers during the use of drugs, the nitro blue tetrazolium reduction reaction (NST-test) was used (Vicksman M.E., Mayansky A.N. Method for assessing the functional activity of human neutrophils by the nitro blue tetrazolium reduction reaction: Methodical recommendations - Kazan: Kazan NIIEM. - 2011 .-- 11 s). To determine the phagocytic activity of neutrophils, we used Staphilococcus aureus with the calculation of the phagocytic index (percentage of phagocytic neutrophils) —PH and phagocytic number (average number of microorganisms absorbed by one neutrophil) —F.
Применение препаратов оказало положительное влияние на количественный и качественный состав периферической крови у лиц на фоне стандартного курса приема препаратов с увеличением абсолютного количества лейкоцитов на 10,8-17,3%, лимфоцитов на 18,8%.The use of drugs had a positive effect on the quantitative and qualitative composition of peripheral blood in individuals against the background of the standard course of taking drugs with an increase in the absolute number of leukocytes by 10.8-17.3%, lymphocytes by 18.8%.
Была установлена способность препаратов стимулировать функциональную активность и поглотительную способность фагоцитирующих клеток крови добровольцев с увеличением фагоцитарного индекса на 16,7-25,3%, фагоцитарного числа на 7,14-28,0%, стимулированного НСТ-теста на 7,3-17,9% (Таблица 2).The ability of the drugs to stimulate the functional activity and absorption capacity of the phagocytic blood cells of volunteers was established with an increase in the phagocytic index by 16.7-25.3%, phagocytic number by 7.14-28.0%, and the stimulated HCT test by 7.3-17 9% (table 2).
При динамическом наблюдении субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови у добровольцев после приема препаратов было выявлено достоверное увеличение количества CD3+, CD4+, CD3+HLA-DR+ клеток. Положительная динамика свидетельствует об иммуностимулирующем влиянии препаратов, как в форме порошка, так и в форме таблеток.A dynamic observation of the subpopulation composition of peripheral blood lymphocytes in volunteers after taking the drugs revealed a significant increase in the number of CD3 +, CD4 +, CD3 + HLA-DR + cells. Positive dynamics indicates the immunostimulating effect of drugs, both in powder form and in tablet form.
Приведенные данные свидетельствуют о том, что употребление обоих форм препаратов приводит к достоверному увеличению фагоцитарного индекса на 17-25%, фагоцитарного числа на 7-28%, стимулированного НСТ-теста на 7-18%.The data presented indicate that the use of both forms of drugs leads to a significant increase in the phagocytic index by 17-25%, the phagocytic number by 7-28%, and the stimulated HCT test by 7-18%.
Известная БАД «Тинростим-С», выпускаемая также в порошках, имеет в своем составе небольшое количество пептидов, за счет чего снижается ее биологическая ценность.The well-known dietary supplement Tinrostim-S, also available in powders, has a small number of peptides in its composition, due to which its biological value is reduced.
При сравнительном анализе результатов исследований БАД, полученного по способу-прототипу, было установлено, что включение препарата в комплексную терапию обеспечивает увеличение фагоцитарного индекса на 1-10% (Н.Н. Беседнова, Л.М. Эпштейн «Биологически активная добавка к пище ТИНРОСТИМ» (в помощь практикующему врачу), Владивосток: ТИНРО-Центр, 2003, с. 47), а это несколько ниже, чем установлено для заявляемых форм.In a comparative analysis of the results of studies of dietary supplements obtained by the prototype method, it was found that the inclusion of the drug in complex therapy provides an increase in the phagocytic index by 1-10% (N.N. Besednova, L.M. Epstein “Biologically active food supplement TINROSTIM ”(To help a practitioner), Vladivostok: TINRO-Center, 2003, p. 47), and this is somewhat lower than that established for the claimed forms.
Таким образом, иммуностимулятор, полученный заявляемым способом (варианты), в отличие от прототипа, содержит повышенное содержание пептидов, что позволяет усилить иммуностимулирующее действие у продукта и повысить его эффективность.Thus, the immunostimulant obtained by the claimed method (options), in contrast to the prototype, contains a high content of peptides, which allows you to enhance the immunostimulating effect of the product and increase its effectiveness.
Кроме того, предложена таблетированная форма выпуска, которая удобна для перорального приема.In addition, a tablet form of release is proposed that is convenient for oral administration.
Содержание аскорбиновой кислоты в предлагаемой биологически активной добавке соответствует допустимой суточной норме, но увеличено по сравнению с прототипом, усиливая иммуностимулирующий эффект пептидов.The content of ascorbic acid in the proposed dietary supplement corresponds to the permissible daily norm, but increased compared to the prototype, enhancing the immunostimulating effect of the peptides.
Использовать БАД возможно в качестве профилактического продукта в осенне-весенний период, как вспомогательное средство при лечении простудных и вирусных заболеваний, при вторичных иммунодефицитных состояниях различного генеза.It is possible to use dietary supplements as a prophylactic product in the autumn-spring period, as an adjuvant in the treatment of colds and viral diseases, with secondary immunodeficiency states of various origins.
Изобретение подтверждается примерами конкретного выполнения:The invention is confirmed by examples of specific performance:
Пример 1Example 1
10 кг замороженных ганглий кальмара размораживают до температуры минус 4°C в центре брикета и измельчают на электромясорубке. Экстракцию измельченных ганглий проводят в 50 л 3%-ного раствора уксусной кислоты. Время экстракции составляет 40 ч при периодическом перемешивании в течение 15 мин через каждые 1,5 ч. По завершении этого времени смесь подщелачивают концентрированным раствором бикарбоната натрия до рН=8,5, добавляют 0,5 л 0,3% раствора хитозана в 3% уксусной кислоте и продолжают периодическое перемешивание в течение 1 часа. Экстракционную массу центрифугируют на центрифуге при 5000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость, которая является раствором с целевым веществом, отделяют и добавляют к ней 3,2 кг сульфата аммония, т.е. до достижения 30% концентрации. Периодически перемешивают смесь в течение двух часов, затем центрифугируют на центрифуге при 5000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость подвергают диафильтрации на кассетной мембране с пределом разделения 1000 Да (установка Pellicon фирмы Millipore, Франция). После того как объем концентрата достигнет 3-4 л добавляют к нему 10 л дистиллированной воды и продолжают диафильтрацию. Процедуру с добавлением воды к концентрату повторяют 4 раза. Раствор с целевым веществом от 1000 до 15000 Да (концентрат) направляют на лиофильную сушку, сухой продукт облучают при перемешивании ультрафиолетом в течение 15 минут для стерилизации. Выход иммуностимулятора составил 110 г.10 kg of frozen squid ganglia are thawed to a temperature of minus 4 ° C in the center of the briquette and chopped in an electric grinder. The extraction of crushed ganglion is carried out in 50 l of a 3% solution of acetic acid. The extraction time is 40 hours with periodic stirring for 15 minutes every 1.5 hours. At the end of this time, the mixture is made alkaline with a concentrated solution of sodium bicarbonate to pH = 8.5, 0.5 l of a 0.3% solution of chitosan in 3% is added. acetic acid and continue periodic stirring for 1 hour. The extraction mass is centrifuged in a centrifuge at 5000 rpm for 20 minutes The supernatant, which is a solution with the target substance, is separated and 3.2 kg of ammonium sulfate are added to it, i.e. until reaching 30% concentration. The mixture is periodically stirred for two hours, then centrifuged in a centrifuge at 5000 rpm for 20 minutes. The supernatant was diafiltered on a cassette with a separation limit of 1000 Da (Pellicon installation, Millipore, France). After the volume of the concentrate reaches 3-4 l, add 10 l of distilled water to it and continue diafiltration. The procedure with the addition of water to the concentrate is repeated 4 times. A solution with the target substance from 1000 to 15000 Da (concentrate) is sent for freeze drying, the dry product is irradiated with stirring with ultraviolet light for 15 minutes for sterilization. The output of the immunostimulant was 110 g.
Конечный препарат представляет собой аморфный порошок белого цвета, состоящий в основном из пептидного материала, кроме того содержащий 6% минеральных веществ и 1,5% влаги, нерастворимый в ацетоне и этиловом спирте. Растворимость в воде составляет 20 мг/мл, спектральный максимум поглощения наблюдается при 268±3 нм. Распределение пептидных компонентов по молекулярной массе, определенное с помощью гель-проникающей хроматографии, показано в таблице 1.The final preparation is an amorphous white powder, consisting mainly of peptide material, in addition containing 6% minerals and 1.5% moisture, insoluble in acetone and ethyl alcohol. The solubility in water is 20 mg / ml, the spectral absorption maximum is observed at 268 ± 3 nm. The distribution of peptide components by molecular weight, determined using gel permeation chromatography, is shown in table 1.
Часть полученного препарата была использована для изготовления БАД в виде порошка следующего состава:Part of the obtained preparation was used for the manufacture of dietary supplements in the form of a powder of the following composition:
Пептиды - 0,3%,Peptides - 0.3%
Аскорбиновая кислота - 10%,Ascorbic acid - 10%,
D-глюкоза - остальное.D-glucose is the rest.
Пример 2Example 2
9 кг замороженного мозга кеты размораживают на воздухе до температуры минус 4°С в центре брикета и измельчают. Экстракцию измельченного мозга проводят в 45 литрах 3%-ного раствора уксусной кислоты. Время экстракции составляет 36 ч при периодическом перемешивании в течение 15 мин через каждые 1,5 ч. По завершении этого времени смесь подщелачивают концентрированным раствором бикарбоната натрия до рН=8,5, добавляют 450 мл 0,3% раствора хитозана в 3% уксусной кислоте и продолжают периодическое перемешивание в течение 1 часа. Экстракционную массу разделяют на сепараторе и добавляют к фильтрату 3 кг сульфата аммония, т.е. до достижения 30% концентрации. Периодически перемешивают смесь в течение двух часов, затем фильтруют на нутч-фильтре. Надосадочную жидкость подвергают диафильтрации на установке Т66.00.00.000ПС Научно-производственная фирма «Гелла-ТЭКО», РФ, г. Москва) с керамическим мембранным элементом КУФЭ-1, предел разделения 1000 Да. После того как объем концентрата достигнет 3-4 л добавляют к нему 10 л дистиллированной воды и продолжают диафильтрацию. Процедуру с добавлением воды к концентрату повторяют 4 раза. Раствор с целевым веществом от 1000 до 15000 Да (концентрат) направляют на лиофильную сушку, сухой продукт облучают при перемешивании ультрафиолетом в течение 15 минут для стерилизации. Выход иммуностимулятора составил 87 г. 9 kg of frozen brain chum are thawed in air to a temperature of minus 4 ° C in the center of the briquette and crushed. The extraction of the crushed brain is carried out in 45 liters of a 3% solution of acetic acid. The extraction time is 36 hours with periodic stirring for 15 minutes every 1.5 hours. At the end of this time, the mixture is made alkaline with a concentrated solution of sodium bicarbonate to pH 8.5, 450 ml of a 0.3% solution of chitosan in 3% acetic acid are added. and continue to periodically mix for 1 hour. The extraction mass is separated on a separator and 3 kg of ammonium sulfate, i.e. until reaching 30% concentration. The mixture is stirred periodically for two hours, then filtered on a suction filter. The supernatant is subjected to diafiltration on a T66.00.00.000PS installation. Scientific and Production Company Gella-TEKO, Russia, Moscow) with a ceramic membrane element KUFE-1, separation limit 1000 Da. After the volume of the concentrate reaches 3-4 l, add 10 l of distilled water to it and continue diafiltration. The procedure with the addition of water to the concentrate is repeated 4 times. A solution with the target substance from 1000 to 15000 Da (concentrate) is sent for freeze drying, the dry product is irradiated with stirring with ultraviolet light for 15 minutes for sterilization. The output of the immunostimulant was 87 g.
Конечный препарат представляет собой аморфный порошок белого цвета, состоящий в основном из пептидного материала, кроме того содержащий 7% минеральных веществ и 1,8% влаги, нерастворимый в ацетоне и этиловом спирте. Растворимость в воде составляет 20 мг/мл, спектральный максимум поглощения наблюдается при 268±3 нм. Распределение пептидных компонентов по молекулярной массе, определенное с помощью гель-проникающей хроматографии, показано в таблице 1.The final preparation is an amorphous white powder, consisting mainly of peptide material, in addition containing 7% minerals and 1.8% moisture, insoluble in acetone and ethyl alcohol. The solubility in water is 20 mg / ml, the spectral absorption maximum is observed at 268 ± 3 nm. The distribution of peptide components by molecular weight, determined using gel permeation chromatography, is shown in table 1.
Часть полученного препарата была использована для изготовления БАД в таблетированной форме, одна таблетка которой содержит:Part of the preparation obtained was used for the manufacture of dietary supplements in tablet form, one tablet of which contains:
Пептиды - 1,3 мг,Peptides - 1.3 mg,
Аскорбиновая кислота - 10 мг,Ascorbic acid - 10 mg,
D-глюкоза - 118 мг,D-glucose - 118 mg,
Целлюлоза микрокристаллическая - 68,8 мг,Microcrystalline cellulose - 68.8 mg,
Кальция стеарата - 2 мг.Calcium stearate - 2 mg.
Пример 3Example 3
10 кг замороженного мозга ларги размораживают на воздухе до температуры минус 4°C в центре брикета и измельчают на электромясорубке. Экстракцию измельченного мозга ларги проводят в 50 литрах 3%-ного раствора уксусной кислоты. Время экстракции 48 ч при периодическом перемешивании в течение 15 мин через каждый час. По завершении этого времени смесь подщелачивают концентрированным раствором бикарбоната натрия до рН=8,5, добавляют 0,5 л 0,3% раствора хитозана в 3% уксусной кислоте и продолжают периодическое перемешивание в течение 1 часа. Затем добавляют 1,5 кг сухого фильтроперлита, периодически перемешивают в течение 20 минут, после чего дают смеси отстояться в течение 4 часов. Надосадочную жидкость декантируют и высушивают на вакуумной ротационной сушке, сухой продукт облучают ультрафиолетовой лампой и стерильно упаковывают. Выход препарата составил 90 г. 10 kg of frozen brain larges are thawed in air to a temperature of minus 4 ° C in the center of the briquette and ground in an electric meat grinder. Extraction of the crushed brain of the largha is carried out in 50 liters of a 3% solution of acetic acid. An extraction time of 48 hours with periodic stirring for 15 minutes every hour. At the end of this time, the mixture was alkalinized with a concentrated solution of sodium bicarbonate to pH = 8.5, 0.5 L of a 0.3% solution of chitosan in 3% acetic acid was added and periodic stirring was continued for 1 hour. Then add 1.5 kg of dry filter perlite, periodically mix for 20 minutes, after which the mixture is allowed to stand for 4 hours. The supernatant is decanted and dried on a vacuum rotary dryer, the dry product is irradiated with an ultraviolet lamp and sterilely packaged. The yield of the drug was 90 g.
Конечный препарат представляет собой аморфный порошок белого цвета, состоящий в основном из пептидного материала, кроме того содержащий 3% минеральных веществ и 3,5% влаги, нерастворимый в ацетоне и этиловом спирте. Растворимость в воде составляет 20 мг/мл, спектральный максимум поглощения наблюдается при 268±3 нм. Распределение пептидных компонентов по молекулярной массе, определенное с помощью гель-проникающей хроматографии, показано в таблице 1.The final preparation is an amorphous white powder, consisting mainly of peptide material, in addition containing 3% minerals and 3.5% moisture, insoluble in acetone and ethyl alcohol. The solubility in water is 20 mg / ml, the spectral absorption maximum is observed at 268 ± 3 nm. The distribution of peptide components by molecular weight, determined using gel permeation chromatography, is shown in table 1.
Часть полученного препарата была использована для изготовления БАД в виде порошка следующего состава:Part of the obtained preparation was used for the manufacture of dietary supplements in the form of a powder of the following composition:
Пептиды - 0,4%,Peptides - 0.4%
Аскорбиновая кислота - 12%,Ascorbic acid - 12%,
Кристаллическая глюкоза - остальное.Crystalline glucose is the rest.
Пример 4Example 4
5 кг замороженного мозга горбуши размораживают на воздухе до температуры минус 4°С в центре брикета и измельчают. Экстракцию измельченного мозга проводят в 25 литрах 3%-ного раствора уксусной кислоты. Время экстракции составляет 35 ч при периодическом перемешивании в течение 15 мин через каждые 1,5 ч. По завершении этого времени смесь подщелачивают концентрированным раствором бикарбоната натрия до рН=8,5, добавляют 250 мл 0,3% раствора хитозана в 3% уксусной кислоте и продолжают периодическое перемешивание в течение 1 часа. Затем добавляют 800 г сухого фильтроперлита, периодически перемешивают в течение 20 минут, после чего дают смеси отстояться в течение 4 часов. Надосадочную жидкость декантируют и высушивают на распылительной сушке, сухой продукт облучают ультрафиолетовой лампой и стерильно упаковывают. Выход препарата составил 45 г.5 kg of frozen brain of pink salmon is thawed in air to a temperature of minus 4 ° C in the center of the briquette and crushed. The extraction of the crushed brain is carried out in 25 liters of a 3% solution of acetic acid. The extraction time is 35 hours with periodic stirring for 15 minutes every 1.5 hours. At the end of this time, the mixture is made alkaline with a concentrated sodium bicarbonate solution to pH = 8.5, 250 ml of a 0.3% solution of chitosan in 3% acetic acid are added. and continue to periodically mix for 1 hour. Then add 800 g of dry filtroperlite, periodically mix for 20 minutes, after which the mixture is allowed to stand for 4 hours. The supernatant is decanted and spray dried, the dry product is irradiated with an ultraviolet lamp and packaged sterilely. The yield of the drug was 45 g.
Конечный препарат представляет собой аморфный порошок белого цвета, состоящий в основном из пептидного материала, кроме того содержащий 2,2% минеральных веществ и 3,0% влаги, нерастворимый в ацетоне и этиловом спирте. Растворимость в воде составляет 18 мг/мл, спектральный максимум поглощения наблюдается при 269±3 нм. Распределение пептидных компонентов по молекулярной массе, определенное с помощью гель-проникающей хроматографии, показано в таблице 1.The final preparation is an amorphous white powder, consisting mainly of peptide material, in addition containing 2.2% minerals and 3.0% moisture, insoluble in acetone and ethyl alcohol. The solubility in water is 18 mg / ml, the spectral absorption maximum is observed at 269 ± 3 nm. The distribution of peptide components by molecular weight, determined using gel permeation chromatography, is shown in table 1.
Часть полученного препарата была использована для изготовления БАД в виде порошка следующего состава:Part of the obtained preparation was used for the manufacture of dietary supplements in the form of a powder of the following composition:
Пептиды - 0,2%,Peptides 0.2%
Аскорбиновая кислота - 11%,Ascorbic acid - 11%,
D-глюкоза - остальное.D-glucose is the rest.
Пример 5Example 5
8 кг замороженных оптических ганглиев осьминога размораживают на воздухе до температуры минус 4°C в центре брикета и измельчают. Экстракцию измельченного материала проводят в 40 литрах 3%-ного раствора уксусной кислоты в течение 40 ч при периодическом перемешивании в течение 15 мин через каждые 2 ч. По завершении этого времени смесь подщелачивают концентрированным раствором бикарбоната натрия до рН=8,5, добавляют 400 мл 0,3% раствора хитозана в 3% уксусной кислоте и продолжают периодическое перемешивание в течение 1 часа. Затем добавляют 4,4 л 20% водной суспензии бентонита, периодически перемешивают в течение 20 минут, после чего дают смеси отстояться в течение 4 часов. Прозрачную часть надосадочной жидкости декантируют и высушивают на распылительной сушке, сухой продукт облучают ультрафиолетовой лампой и стерильно упаковывают. Выход препарата составил 76 г.8 kg of frozen optical octopus ganglia are thawed in air to a temperature of minus 4 ° C in the center of the briquette and crushed. Extraction of the crushed material is carried out in 40 liters of a 3% solution of acetic acid for 40 hours with periodic stirring for 15 minutes every 2 hours. At the end of this time, the mixture is made alkaline with a concentrated solution of sodium bicarbonate to pH = 8.5, 400 ml are added. 0.3% solution of chitosan in 3% acetic acid and continue to periodically mix for 1 hour. Then, 4.4 L of a 20% aqueous suspension of bentonite is added, periodically stirred for 20 minutes, after which the mixture is allowed to stand for 4 hours. The transparent part of the supernatant is decanted and spray dried, the dry product is irradiated with an ultraviolet lamp and sterilely packaged. The drug yield was 76 g.
Конечный препарат представляет собой аморфный порошок белого цвета, состоящий в основном из пептидного материала, кроме того содержащий 2,7% минеральных веществ и 4% влаги, нерастворимый в ацетоне и этиловом спирте. Растворимость в воде составляет 18 мг/мл, спектральный максимум поглощения наблюдается при 267±3 нм. Распределение пептидных компонентов по молекулярной массе, определенное с помощью гель-проникающей хроматографии, показано в таблице 1.The final preparation is an amorphous white powder, consisting mainly of peptide material, in addition containing 2.7% minerals and 4% moisture, insoluble in acetone and ethyl alcohol. The solubility in water is 18 mg / ml, the spectral absorption maximum is observed at 267 ± 3 nm. The distribution of peptide components by molecular weight, determined using gel permeation chromatography, is shown in table 1.
Часть полученного препарата была использована для изготовления БАД в таблетированной форме, одна таблетка которой содержит:Part of the preparation obtained was used for the manufacture of dietary supplements in tablet form, one tablet of which contains:
Пептиды - 1,5 мг,Peptides - 1.5 mg,
Аскорбиновая кислота - 9 мг,Ascorbic acid - 9 mg,
D-глюкоза - 125 мг,D-glucose - 125 mg,
Картофельный крахмал -68,8 мг,Potato starch -68.8 mg,
Кальция стеарата - 2 мг.Calcium stearate - 2 mg.
Пример 6Example 6
12 кг замороженных оптических ганглиев кальмара размораживают на воздухе до температуры минус 4°C в центре брикета и измельчают. Экстракцию измельченных ганглиев проводят в 60 литрах 3%-ного раствора уксусной кислоты в течение 40 ч при периодическом перемешивании в течение 15 мин через каждые 2 ч. По завершении этого времени смесь подщелачивают концентрированным раствором бикарбоната натрия до рН=8,5, добавляют 600 мл 0,3% раствора хитозана в 3% уксусной кислоте и продолжают периодическое перемешивание в течение 1 часа. Затем добавляют 7 л 20% водной суспензии бентонита, периодически перемешивают в течение 20 минут, после чего дают смеси отстояться в течение 4 часов. Прозрачную часть надосадочной жидкости декантируют, остальное отделяют на нутч-фильтре, супернатанты объединяют и высушивают на вакуумной ротационной сушке, сухой продукт облучают ультрафиолетовой лампой и стерильно упаковывают. Выход препарата составил 110 г.12 kg of frozen optical squid ganglia are thawed in air to a temperature of minus 4 ° C in the center of the briquette and crushed. The crushed ganglia are extracted in 60 liters of a 3% solution of acetic acid for 40 hours with periodic stirring for 15 minutes every 2 hours. At the end of this time, the mixture is made alkaline with a concentrated solution of sodium bicarbonate to pH = 8.5, 600 ml are added. 0.3% solution of chitosan in 3% acetic acid and continue to periodically mix for 1 hour. Then add 7 l of a 20% aqueous suspension of bentonite, periodically mix for 20 minutes, after which allow the mixture to stand for 4 hours. The transparent part of the supernatant is decanted, the rest is separated on a suction filter, the supernatants are combined and dried on a vacuum rotary dryer, the dry product is irradiated with an ultraviolet lamp and sterilely packaged. The yield of the drug was 110 g.
Конечный препарат представляет собой аморфный порошок белого цвета, состоящий в основном из пептидного материала, кроме того содержащий 3% минеральных веществ и 3% влаги, нерастворимый в ацетоне и этиловом спирте. Растворимость в воде составляет 20 мг/мл, спектральный максимум поглощения наблюдается при 268±3 нм. Распределение пептидных компонентов по молекулярной массе, определенное с помощью гель-проникающей хроматографии, показано в таблице 1.The final preparation is a white amorphous powder, consisting mainly of peptide material, in addition containing 3% minerals and 3% moisture, insoluble in acetone and ethyl alcohol. The solubility in water is 20 mg / ml, the spectral absorption maximum is observed at 268 ± 3 nm. The distribution of peptide components by molecular weight, determined using gel permeation chromatography, is shown in table 1.
Часть полученного препарата была использована для изготовления БАД в таблетированной форме, одна таблетка которой содержит:Part of the preparation obtained was used for the manufacture of dietary supplements in tablet form, one tablet of which contains:
Пептиды - 1,5 мг,Peptides - 1.5 mg,
Аскорбиновая кислота - 10 мг,Ascorbic acid - 10 mg,
D-глюкоза - 120 мг,D-glucose - 120 mg,
Целлюлоза микрокристаллическая - 68,8 мг,Microcrystalline cellulose - 68.8 mg,
Кальция стеарата - 2 мг.Calcium stearate - 2 mg.
Claims (16)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016130535A RU2635625C1 (en) | 2016-07-25 | 2016-07-25 | Method for obtaining of peptide immunity stimulator (versions) and baa based thereon |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016130535A RU2635625C1 (en) | 2016-07-25 | 2016-07-25 | Method for obtaining of peptide immunity stimulator (versions) and baa based thereon |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2635625C1 true RU2635625C1 (en) | 2017-11-14 |
Family
ID=60328570
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016130535A RU2635625C1 (en) | 2016-07-25 | 2016-07-25 | Method for obtaining of peptide immunity stimulator (versions) and baa based thereon |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2635625C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2774831C1 (en) * | 2021-11-01 | 2022-06-23 | Федеральное Государственное бюджетное учреждение "27 Научный центр" Министерства обороны Российской Федерации | Composition for increasing the resistance of the organism to the new coronavirus infection covid-19 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1227736B1 (en) * | 1999-10-20 | 2004-01-07 | Nordur EHF | Protein hydrolysates produced with the use of marine proteases |
| RU2222337C1 (en) * | 2002-07-03 | 2004-01-27 | Федеральное государственное унитарное предприятие Тихоокеанский научно-исследовательский рыбохозяйственный центр | Method for obtaining immunostimulant |
| RU2472517C1 (en) * | 2012-02-01 | 2013-01-20 | Закрытое акционерное общество "Санкт-Петербургский институт фармации" | Method for preparing peptide complex of cod liver |
| RU2563816C1 (en) * | 2014-07-28 | 2015-09-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Биотехнологии" ООО "Биотехнологии" | Method for producing immune stimulant |
-
2016
- 2016-07-25 RU RU2016130535A patent/RU2635625C1/en active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1227736B1 (en) * | 1999-10-20 | 2004-01-07 | Nordur EHF | Protein hydrolysates produced with the use of marine proteases |
| RU2222337C1 (en) * | 2002-07-03 | 2004-01-27 | Федеральное государственное унитарное предприятие Тихоокеанский научно-исследовательский рыбохозяйственный центр | Method for obtaining immunostimulant |
| RU2472517C1 (en) * | 2012-02-01 | 2013-01-20 | Закрытое акционерное общество "Санкт-Петербургский институт фармации" | Method for preparing peptide complex of cod liver |
| RU2563816C1 (en) * | 2014-07-28 | 2015-09-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Биотехнологии" ООО "Биотехнологии" | Method for producing immune stimulant |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2774831C1 (en) * | 2021-11-01 | 2022-06-23 | Федеральное Государственное бюджетное учреждение "27 Научный центр" Министерства обороны Российской Федерации | Composition for increasing the resistance of the organism to the new coronavirus infection covid-19 |
| RU2809011C1 (en) * | 2022-07-08 | 2023-12-05 | Светлана Владимировна Чуйкова | Method of obtaining complex of water-soluble peptides with antioxidant activity |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kumari et al. | Invitro anti-inflammatory and anti-artheritic property of Rhizopora mucronata leaves | |
| JP5154964B2 (en) | Contains royal jelly-degrading enzyme | |
| CN113226474A (en) | Use of plant exosomes for displaying a modulating effect on cells of the immune system | |
| CN114190561A (en) | Microencapsulated royal jelly enzymolysis polypeptide, preparation method thereof and solid powder containing microencapsulated royal jelly enzymolysis polypeptide | |
| RU2635625C1 (en) | Method for obtaining of peptide immunity stimulator (versions) and baa based thereon | |
| EP0395757B1 (en) | Process for extracting physiologically active substance from pine seed shells and antiinfectant prepared mainly from the extract | |
| JP2017519048A (en) | Pharmaceutical composition containing Spirulina maxima extract as an active ingredient for preventing and treating retinal diseases | |
| RU2222337C1 (en) | Method for obtaining immunostimulant | |
| RU2215532C2 (en) | Method for complex processing sea cucumber viscera and preparing biologically active food supplements and biologically active food supplements "tingol-2" and "erogol" | |
| WO2015105905A1 (en) | Treating gingivostomatitis and demodectic mange | |
| US11534469B2 (en) | Method for the stimulation of human immune cells | |
| WO2022035326A1 (en) | Bee product extracts, methods of production and uses thereof | |
| RU2279888C1 (en) | Bee venum allergoid for allergen-specific therapy of patients with allergic response for bee stinging and method for its preparing | |
| RU2266750C2 (en) | Method for preparing biologically active peptide-enriched serum | |
| EP2838543B1 (en) | Immunostimulatory compositions from honey and methods of manufacture | |
| RU2562595C2 (en) | Production of product with biologically active properties from holothurians | |
| Ghaeni et al. | Review for uses and therapeutic effects of spirulina, Spirulina platensis microalgae | |
| RU2563816C1 (en) | Method for producing immune stimulant | |
| RU2281779C2 (en) | Method for preparing natural melanoid antioxidant | |
| KR100974080B1 (en) | Process for preparing the placenta extract by heat treatment | |
| JP2010285357A (en) | Manufacturing method for antioxidative component derived from sake lees | |
| RU2194419C1 (en) | Immunomodulating fodder additive | |
| RU2189825C1 (en) | Immunostimulating preparation and method of its preparing | |
| RU45270U1 (en) | DRY FORM OF BIOLOGICALLY ACTIVE ADDITIVE BASED ON ARTEMIA SALINA | |
| RU2218030C2 (en) | Method of preparing biologically active additive "erosil" from genitals of reindeer, biologically active additive "erosil", method of preparing complex biologically active additive "penisil", and complex biologically active additive "penisil" |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20201202 |