RU2589700C2 - Композиции ротиготина, его производных, или фармацевтически приемлемых солей ротиготина или их производных - Google Patents

Abstract

Группа изобретений относится к медицине и касается фармацевтической микросферной композиции, включающей ротиготин или его фармацевтически приемлемую соль; по крайней мере один полилактид-гликолид (ПЛГлА) с молекулярной массой 5000-100000 Да и полимеризационным соотношением лактид:гликолид от 95:5 до 5:95; и, по меньшей мере, одну жирную кислоту, имеющую 8-24 атомов углерода, где ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляет 20-40%, ПЛГлА составляет 45-79%, и, по меньшей мере, одна жирная кислота составляет 1-15% по весу относительно общего веса композиции. Группа изобретений также касается способа лечения болезни Паркинсона с применением описанных композиций. Группа изобретений обеспечивает состав ротиготина, который существенно уменьшает взрывное высвобождение препарата. 3 н. и 20 з.п.ф-лы, 28 пр., 12 табл., 38 ил.

Description

Настоящее изобретение относится к композиции на основе ротиготина, его производных, или фармацевтически приемлемых солей ротиготина или их производных.

Ввиду метаболизма в печени, оральная биодоступность ротиготина низка (приблизительно 1-5%), таким образом, ротиготин не подходит для перорального приема. В настоящее время на рынке в Германии, Великобритании, Австралии и др. находится первый трансдермальный пластырь для лечения болезни Паркинсона, трансдермальный пластырь под торговой маркой Neupro® разработан фирмой Schwarz Pharma AG. Однако при использовании этого продукта может образовываться кристаллизованный ротиготин. Чтобы решить эту проблему, используют хранение типа «холодовая цепь» и распределение при температуре 2-8°C, и каждый рецепт не должен выписываться более чем на один месяц, чтобы избежать кристаллизации, которая, очевидно, усугубит трудности пациентов при использовании этого медикамента.

Заявка CN 1762495 A раскрывает композицию на основе микросфер, включающую ротиготин и деградируемые полимерные вспомогательные материалы. Ротиготиновая микросферная композиция, раскрытая в заявке CN 1762495 А, может обеспечить эффект долгодействующего высвобождения, но может возникнуть проблема взрывного (немедленного) высвобождения препарата. Как показано на фиг.17 (тест in vivo с относительным содержанием препарата 8%), фиг.12 (тест in vivo с относительным содержанием препарата 20%) и фиг.20 (тест in vivo с относительным содержанием препарата 40%) из заявки CN 1762495 А, когда относительное содержание препарата составляет 20 или 40%, эффект взрывного высвобождения очевиден. Из фиг.20 (тест in vivo с относительным содержанием препарата 40%) и фиг.19 (тест in vitro с относительным содержанием препарата 40%) в заявке CN 1762495 A также видно, что высвобожденное количество ротиготина в течение одних суток в тесте in vitro коррелирует с взрывным высвобождением препарата в тесте in vivo. При том же самом относительном содержании препарата, чем больше высвобожденное количество в тесте in vitro, тем больше препарата немедленно высвобождается in vivo.

Как возрастное дегенеративное заболевание, болезнь Паркинсона прогрессирует с возрастом пациентов. Таким образом, вводимая дозировка также должна постепенно увеличиваться во время лечения. При лечении пациентов с болезнью Паркинсона в прогрессивный период ежесуточная доза препарата должна значительно увеличиваться. Таким образом, при лечении пациентов с болезнью Паркинсона в прогрессивный период микросферами ротиготина, относительное содержание активного компонента не должно быть слишком низким. Иначе, чтобы достигнуть того же самого терапевтического эффекта, как и микросферы, имеющие более высокое относительное содержание препарата, микросферы с более низким относительным содержанием препарата нужно было бы вводить в относительно большем количестве, что может причинять пациентам боль. Однако, если относительное содержание препарата в микросферах при введении пациентам слишком высоко, препарат может претерпеть внезапное высвобождение, что может вызвать его передозировку.

Настоящее изобретение обеспечивает состав (композицию) препарата, такого как ротиготин, его производных или фармацевтически приемлемых солей ротиготина или их производных, которые существенно уменьшают взрывное высвобождение препарата. Состав включает ротиготин, его производные или фармацевтически приемлемые соли ротиготина или их производные; по крайней мере, один полилактид-гликолид (ПЛГлА); и по крайней мере, одну жирную кислоту, причем по крайней мере одна жирная кислота составляет по крайней мере приблизительно 0.5%, например, приблизительно 1-15 вес.% относительно общей массы состава.

В некоторых воплощениях состав находится в форме микросфер. Например, диаметр частицы в форме микросферы может составить приблизительно 1-250 мкм, например, приблизительно 10-200 мкм.

В некоторых воплощениях состав - это ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль.

В некоторых воплощениях ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляют приблизительно 20-40 вес.% относительно общей массы состава. В одном примере ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль могут составить приблизительно 25-5%, приблизительно 25-30%, приблизительно 20-30%, приблизительно 20-25%, приблизительно 25-40%, приблизительно 30-35%, приблизительно 30-40% или приблизительно 35-40 вес.% относительно общей массы состава. В другом примере ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль могут составить приблизительно 21, 22, 23, 24, 25, 26, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 или 40 вес.% относительно общей массы состава.

В некоторых воплощениях по крайней мере один ПЛГлА составляет приблизительно 45-79 вес.% относительно общей массы состава. По крайней мере один ПЛГлА может включить два, три, четыре или пять различных типов полимеров ПЛГлА, которые могут отличаться, например, молекулярной массой и/или полимеризационным соотношением. В одном примере по крайней мере один ПЛГлА составляет приблизительно 47.5-77.5%, приблизительно 50-77.5%, приблизительно 52.5-72.5%, приблизительно 55-72.5%, приблизительно 55-69%, приблизительно 57.5-72.5%, приблизительно 57.5-77.5%, приблизительно 60-72.5%, приблизительно 60-70%, приблизительно 62.5-67.5%, приблизительно 45-50%, приблизительно 47.5-60% или приблизительно 50-60 вес.% относительно общей массы состава. В другом примере по крайней мере один ПЛГлА составляет приблизительно 45%, приблизительно 47.5%, приблизительно 50%, приблизительно 52.5%, приблизительно 55%, приблизительно 57.5%, приблизительно 60%, приблизительно 62.5%, приблизительно 65%, приблизительно 67.5%, приблизительно 70%, приблизительно 72.5%, приблизительно 75%, приблизительно 77.5%, приблизительно 78% или приблизительно 79 вес.% относительно общей массы состава.

В некоторых воплощениях фармацевтически приемлемая соль образована ротиготином и неорганической кислотой или органической кислотой. Неорганическая кислота может быть выбрана из списка: соляная кислота, серная кислота, фосфорная кислота и азотная кислота. Органическая кислота выбирается из списка: лимонная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, уксусная кислота, бензойная кислота, молочная кислота, метансульфоновая кислота, нафталинсульфоновая кислота и толуол-n-сульфоновая кислота. Например, органическая кислота может быть кислой аминокислотой, такой как глютаминовая кислота или аспарагиновая кислота.

В некоторых воплощениях по крайней мере один ПЛГлА имеет молекулярную массу приблизительно 5,000-100,000 Да. Например, по крайней мере один ПЛГлА может иметь молекулярную массу приблизительно 5500-99000 Да, приблизительно 6000-98000 Да, приблизительно 6500-97000 Да, приблизительно 7000-96000 Да, приблизительно 7500-95000 Да, приблизительно 8000-94000 Да, приблизительно 8500-93000 Да, приблизительно 9000-92000 Да, приблизительно 9500-91000 Да, приблизительно 10000-90000 Да, приблизительно 10500-89000 Да, приблизительно 11000-88000 Да, приблизительно 10500-87000 Да, приблизительно 11000-86000 Да, приблизительно 11500-85000 Да, приблизительно 12000-84000 Да, приблизительно 12500-83000 Да, приблизительно 13000-82000 Да, приблизительно 13500-81000 Да, приблизительно 14000-80000 Да, приблизительно 14500-79000 Да, приблизительно 15000-78000 Да, приблизительно 15500-77000 Да, приблизительно 16000-76000 Да, приблизительно 16500-75000 Да, приблизительно 17000-74000 Да, приблизительно 17500-73000 Да, приблизительно 18000-72000 Да, приблизительно 18500-71000 Да, приблизительно 19000-70000 Да, приблизительно 19500-69000 Да, приблизительно 20000-68000 Да, приблизительно 21,000-67000 Да, приблизительно 22000-66000 Да, приблизительно 23000-65000 Да, приблизительно 24,000-64000 Да, приблизительно 25000-63000 Да, приблизительно 26000-62000 Да, приблизительно 27,000-61000 Да, приблизительно 28000-60000 Да, приблизительно 29,000-60000 Да, приблизительно 30,000-5,9000 Да, приблизительно 31,000-5,8000 Да, приблизительно 32,000-5,7000 Да, приблизительно 33,000-5,9000 Да, приблизительно 34,000-5,8000 Да, приблизительно 35,000-5,7000 Да, приблизительно 36,000-5,6000 Да, приблизительно 37,000-5,5000 Да, приблизительно 38,000-5,4000 Да, приблизительно 39,000-5,3000 Да, приблизительно 40,000-5,2000 Да, приблизительно 41,000-5,1000 Да, приблизительно 42,000-5,0000 Да, приблизительно 42000-49000 Да, приблизительно 43000-48000 Да, приблизительно 44000-47000 Да или приблизительно 45000-46000 Да.

В некоторых воплощениях по крайней мере один ПЛГлА имеет полимеризационное соотношение лактида к гликолиду в пределах от приблизительно 95:5 к 5:95. Например, полимеризационное соотношение лактид-гликолид может быть от 90:10 до 10:90, от 85:15 до 15:85, от 80:20 до 20:80, от 75:25 до 25:75, от 70:30 до 30:70, от 65:35 до 35:65, от 60:40 до 40:60 или от 55:45 до 45:55. Для другого примера полимеризационное соотношение лактид-гликолид может быть около 50:50.

В некоторых воплощениях полимеризационное соотношение лактид-гликолид находится в пределах приблизительно от 75:25 до 25:75.

В некоторых воплощениях по крайней мере одна жирная кислота выбрана из ряда жирных кислот, имеющих 8-24 углеродных атома. По крайней мере одна жирная кислота может быть выбрана из списка: стеариновая кислота, пальмитиновая кислота, олеиновая кислота, декановая кислота, октановая кислота и лигноцериновая кислота. Например, по крайней мере одна жирная кислота может быть стеариновой кислотой.

В некоторых воплощениях по крайней мере одна жирная кислота составляет по крайней мере 0.5 вес.% относительно общей массы состава. Например, по крайней мере одна жирная кислота может составлять приблизительно 1-15%, приблизительно 2-15%, приблизительно 3-15%, приблизительно 4-15%, приблизительно 5-15%, приблизительно 6-15%, приблизительно 7-15%, приблизительно 8-15%, приблизительно 9-15%, приблизительно 10-15%, приблизительно 11-15%, приблизительно 12-15%, приблизительно 13-15%, приблизительно 14-15%, приблизительно 1-12.5%, приблизительно 2-12.5%, приблизительно 3-12.5%, приблизительно 4-12.5%, приблизительно 5-12.5%, приблизительно 6-12.5%, приблизительно 7-12.5%, приблизительно 8-12.5%, приблизительно 9-12.5%, приблизительно 10-12.5%, приблизительно 11-12.5%, приблизительно 1-10%, приблизительно 2-10%, приблизительно 3-10%, приблизительно 4-10%, приблизительно 5-10%, приблизительно 6-10%, приблизительно 7-10%, приблизительно 8-10%, приблизительно 9-10%, приблизительно 1-7.5%, приблизительно 2-7.5%, приблизительно 3-7.5%, приблизительно 4-7.5%, приблизительно 5-7.5%, приблизительно 6-7.5%, приблизительно 1-5%, приблизительно 2-5%, приблизительно 3-5%, приблизительно 4-5%, приблизительно 1-3%, приблизительно 2-3%, приблизительно 2-4%, приблизительно 3-4 вес.% относительно общей массы состава. В другом примере по крайней мере одна жирная кислота может составлять приблизительно 1%, приблизительно 1.5%, приблизительно 2%, приблизительно 2.5%, приблизительно 3%, приблизительно 3.5%, приблизительно 4%, приблизительно 4.5%, приблизительно 5%, приблизительно 5.5%, приблизительно 6%, приблизительно 6.5%, приблизительно 7%, приблизительно 7.5%, приблизительно 8%, приблизительно 8.5%, приблизительно 9%, приблизительно 10%, приблизительно 10.5%, приблизительно 11%, приблизительно 11.5%, приблизительно 12%, приблизительно 12.5%, приблизительно 13%, приблизительно 13.5%, приблизительно 14%, приблизительно 14.5% или приблизительно 15%.

В некоторых воплощениях ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляют приблизительно 20-40 вес.% относительно общей массы состава, по крайней мере один ПЛГлА составляет приблизительно 57.5-72.5%, и по крайней мере одна жирная кислота составляет приблизительно 2.5-7.5%.

В некоторых воплощениях ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляют приблизительно 20-40 вес.% относительно общей массы состава, по крайней мере один ПЛГлА составляет приблизительно 57.5-77.5%, и по крайней мере одна жирная кислота составляет приблизительно 2.5%.

В некоторых воплощениях ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляют приблизительно 30 вес.% относительно общей массы состава, по крайней мере один ПЛГлА составляет приблизительно 55.5-69%, и по крайней мере одна жирная кислота составляет приблизительно 1-15%.

В некоторых воплощениях ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляют приблизительно 30 вес.% относительно общей массы состава, по крайней мере один ПЛГлА составляет приблизительно 62.5-67.5%, и по крайней мере одна жирная кислота составляет приблизительно 2.5-7.5%.

В некоторых воплощениях ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляют приблизительно 30%, по крайней мере один ПЛГлА составляет приблизительно 67.5%, и жирная кислота составляет приблизительно 2.5% относительно общей массы состава.

В некоторых воплощениях по крайней мере один ПЛГлА включает первый ПЛГлА и второй ПЛГлА, причем молекулярная масса первого ПЛГлА составляет приблизительно 42000-75000 Да, молекулярная масса второго ПЛГлА - приблизительно 15000-35000 Да, и весовое отношение первого ПЛГлА и второго ПЛГлА равно от 95:5 до 5:95.

В некоторых воплощениях молекулярная масса первого ПЛГлА составляет приблизительно 15000-30000 Да, приблизительно 15000-25000 Да, приблизительно 15000-20000 Да, приблизительно 20000-35000 Да, приблизительно 20000-30000 Да, приблизительно 20000-25000 Да, приблизительно 25000-35000 Да, приблизительно 25000-30000 Да или приблизительно 30000-35000 Да.

В некоторых воплощениях молекулярная масса второго ПЛГлА составляет приблизительно 45000-70000 Да, приблизительно 50000-65000 Да, приблизительно 55000-60000 Да, приблизительно 45000-65000 Да, приблизительно 45000-60000 Да, приблизительно 45000-55000 Да, приблизительно 45000-50000 Да, приблизительно 50000-70000 Да, приблизительно 50000-55000 Да, приблизительно 60000-65000 Да, приблизительно 60000-70000 Да, приблизительно 45000-75000 Да, приблизительно 50000-75000 Да, приблизительно 55000-75000 Да, приблизительно 60000-75000 Да, приблизительно 65000-75000 Да или приблизительно 70000-75000 Да.

В некоторых воплощениях весовое соотношение первого ПЛГлА и второго ПЛГлА может быть от 90:10 до 10:90, от 85:15 до 15:85, от 80:20 до 20:80, от 75:25 до 25:75, от 70:30 до 30:70, от 65:35 до 35:65, от 60:40 до 40:60 или от 55:45 до 45:55.

В некоторых воплощениях первый ПЛГлА выбирается из: ПЛГлА (7525 4 А) и ПЛГлА (7525 5 А), а второй ПЛГлА - это ПЛГлА (5050 2.5 А).

В некоторых воплощениях весовое соотношение первого ПЛГлА и второго ПЛГлА равно примерно 50:50.

В некоторых воплощениях ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляет приблизительно 20-40%, количество первого ПЛГлА и второго ПЛГлА составляет приблизительно 57.5-72.5%, и жирная кислота составляет приблизительно 2.5-7.5% относительно общей массы состава.

В некоторых воплощениях ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляет приблизительно 20-40%, количество первого ПЛГлА и второго ПЛГлА составляет приблизительно 57.5-77.5%, и жирная кислота составляет приблизительно 2.5% относительно общей массы состава.

В некоторых воплощениях ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляет приблизительно 30%, количество первого ПЛГлА и второго ПЛГлА составляет приблизительно 55-69%, и жирная кислота составляет приблизительно 1-15% относительно общей массы состава.

В некоторых воплощениях ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляет приблизительно 30%, количество первого ПЛГлА и второго ПЛГлА составляет приблизительно 62.5-67.5%, и жирная кислота составляет приблизительно 2.5-7.5% относительно общей массы состава.

В некоторых воплощениях ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляет приблизительно 30%, количество первого ПЛГлА и второго ПЛГлА составляет приблизительно 67.5%, и жирная кислота составляет приблизительно 2.5% относительно общей массы состава.

Раскрываемый здесь состав может обеспечить длительное высвобождение вещества, такого как ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль. Например, микросферный препарат, содержащий ротиготин или его фармацевтически приемлемую соль, ПЛГлА и жирную кислоту, может уменьшить эффект малого высвобождения препарата, который может иметь место после того, как микросферный препарат введен на 1-4 сут, и одновременно уменьшить эффект взрывного высвобождения. Микросферы, приготовленные, как раскрыто здесь, также имеют хорошую однородность от партии к партии. Изменение концентрации препарата в крови среди отдельных животных может также быть значительно уменьшено.

Состав, раскрытый в данной заявке, может уменьшить эффект взрывного высвобождения, особенно когда препарат, такой как ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль, составляют более 20 вес.% относительно общей массы состава. Весовой процент вещества, такого как ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль, относительно общей массы состава называется здесь ″относительным содержанием препарата″.

Раскрываемый здесь состав высвобождает препарат устойчиво долгое время без существенного взрывного высвобождения, таким образом, достигая цели длительного высвобождения.

Раскрываемый здесь ПЛГлА также известен как полилактид-гликолид, сополимер лактида/гликолида. Полимеризационное соотношение лактида к гликолиду в пределах полилактида-гликолида может быть любым подходящим соотношением. Например, полимеризационное соотношение лактида к гликолиду может быть от 95:5 до 5:95, или от 75:25 до 25:75.

ПЛГлА может быть представлен следующей структурой:

где n - ноль или положительное целое число, и m - ноль или положительное целое число, но n и m не могут быть нулями одновременно. ПЛГлА в том виде, какой раскрыт здесь, может быть далее химически модифицирован.

Раскрываемые здесь микросферы - матричного типа, содержащие препарат, растворенный и/или гомогенно диспергированный по всей матрице полимера.

Раскрываемые здесь микросферы могут иметь размеры в пределах приблизительно 1-250 мкм, например, приблизительно 10-240 мкм, приблизительно 20-230 мкм, приблизительно 40-210 мкм, приблизительно 50-200 мкм, приблизительно 60-190 мкм, приблизительно 70-180 мкм, приблизительно 80-170 мкм, приблизительно 90-160 мкм, приблизительно 100-150 мкм, приблизительно 110-140 мкм или приблизительно 120-130 мкм. Например, микросферы, раскрываемые здесь, могут быть размером приблизительно 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240 или 250 мкм.

Раскрываемые здесь микросферы могут быть приготовлены любым обычным методом, включая, но не ограничиваясь, методом распыления (спрей), методом испарения растворителя или распылительно-экстракционным методом.

Когда микросферы изготавливают методом испарения растворителя, вещество, такое как ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль, ПЛГлА и жирную кислоту сначала растворяют в органическом растворителе, чтобы приготовить органическую фазу. Непрерывную водную фазу готовят из водорастворимых фармацевтических полимерных вспомогательных материалов. Органическую фазу затем вводят в непрерывную водную фазу через маленькую трубку с образованием смеси, которую превращают в эмульсию при энергичном механическом перемешивании или ультразвуковом перемешивании для образования микросфер. Затем органический растворитель испаряют, и получившиеся микросферы отфильтровывают и высушивают. Если необходимо, микросферы можно также дополнительно обработать, промывая, просеивая, и т.д., согласно обычным методам, высушить в вакууме или лиофилизировать, и, наконец, упаковать.

В вышеупомянутых процессах органический растворитель должен иметь достаточную летучесть, малый остаток и низкую точку кипения. Например, органический растворитель может быть дихлорметаном, хлороформом, этилацетатом, диэтиловым эфиром или любой их комбинацией. Растворимые в воде фармацевтические полимерные вспомогательные материалы, используемые для получения непрерывной водной фазы, могут быть выбраны из списка (неограничивающего): поливиниловый спирт, натрий-карбоксиметилцеллюлоза, поливинилпирролидин, полиметакрилат натрия, полиакрилат натрия и любая их комбинация.

Количества соединений, таких как ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль, полилактид-гликолид и жирная кислота в органическом растворителе особенно не ограничиваются, при условии, что они могут быть растворены (без остатка) в органическом растворителе. Например, полилактид-гликолид и жирная кислота могут составлять приблизительно 1-30% (вес./об.), например, приблизительно 5-25% (вес./об.) или приблизительно 10-20% (вес./об.) в органическом растворителе.

Когда непрерывная водная фаза приготовлена из поливинилового спирта, натрий-карбоксиметилцеллюлозы, поливинилпирролидина, полиметакрилата натрия, полиакрилата натрия или любой их комбинации, нет никаких специальных пределов для концентраций этих полимерных вспомогательных материалов. Например, концентрация этих полимерных вспомогательных материалов может составлять 0.01-12.0% (вес./об.), например, 0.01-10.0% (вес./об.) или 0.1-5% (вес./об.) в водной фазе, исходя из их растворимости в воде.

Когда органическая фаза введена в водную фазу и энергично размешана для образования микросфер, объемное соотношение водной и органической фаз должно быть достаточно большим, чтобы в достаточной степени диспергировать органическую фазу в водной фазе, чтобы образовались микросферы с достаточно малыми размерами и хорошей однородностью. Но если количество водной фазы превосходит необходимое, последующая обработка может быть осложнена, что увеличит стоимость. Например, объемное соотношение органической и водной фаз может быть от 1:4 до 1:100, например, около 1:5, около 1:10, около 1:20, около 1:30, около 1:40, около 1:50, около 1:60, около 1:70, около 1:80, около 1:90 или около 1:100.

Микросферы могут также быть изготовлены методом распылительной сушки. Например, соединение, такое как ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль, ПЛГлА и другие наполнители растворяют в органическом растворителе до образования органического раствора. Органический раствор фильтруют и высушивают обычным методом распылительной сушки с образованием микросфер. Если необходимо, микросферы можно также дополнительно обработать, промывая, просеивая, и т.д., согласно обычному методу, и затем упаковать.

Когда микросферы изготовлены вышеупомянутым методом распылительной сушки, органический растворитель может быть выбран из списка (неограничивающего): дихлорметан, хлороформ, этилацетат, диоксан, диэтиловый эфир, ацетон, тетрагидрофуран, ледяная уксусная кислота и любая их комбинация.

При приготовлении органической фазы нет никаких специальных пределов на количестве ПЛГлА в органическом растворителе, при условии, что ПЛГлА растворяется в данном органическом растворителе (без остатка). Например, концентрация ПЛГлА может составлять приблизительно 1-30% (вес./об.), например, приблизительно 5-25% (вес./об.) или приблизительно 10-20% (вес./об.).

Микросферы могут также быть изготовлены распылительно-экстрационным методом. Когда микросферы готовят распылительно-экстрационным методом, соединение, такое как ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль, ПЛГлА и другие наполнители растворяют в достаточном объеме органического растворителя (в котором соединение, такое как ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль, ПЛГлА и жирная кислота растворяются) для приготовления органического раствора. Затем органический раствор распыляют в воду или органический растворитель B (в котором ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль, ПЛГлА и жирная кислота имеют ограниченную растворимость) и экстрагируют с образованием микросфер. Если необходимо, микросферы можно также дополнительно обработать, промывая, просеивая, и т.д., согласно обычному методу, и затем упаковать.

Органический растворитель A может быть, по крайней мере, одним из списка: дихлорметан, хлороформ, этилацетат, диоксан, диэтиловый эфир, ацетон, тетрагидрофуран, бензол, толуол и ледяная уксусная кислота. Органический растворитель B может быть, по крайней мере, одним выбранным из списка: метанол, этанол, пропанол, изопропиловый спирт, петролейный эфир, алкан и вазелиновое масло.

Нет никаких специальных пределов для количества ПЛГлА в органическом растворителе A, при условии, что ПЛГлА растворяется в органическом растворителе A (без остатка). Например, концентрация ПЛГлА в органическом растворителе A может составлять приблизительно 1-30% (вес./об.), например, приблизительно 5-25% (вес./об.) или приблизительно 10-20% (вес./об.).

Чтобы улучшить однородность размеров образованных микросфер и для удобства обработки, метод распылительной сушки следует предпочесть методу испарения растворителя и распылительно-экстракционному методу. Чтобы снизить начальное высвобождение, однако, метод испарения растворителя может быть предпочтителен.

После приготовления микросферы могут быть подвергнуты сортировке по размерам, очистке, сушке и упакованы согласно предопределенной дозировке (порошковые инъекции). Если размер частиц достаточно однороден, этап сортировки по размерам частиц может быть опущен.

Настоящее изобретение также обеспечивает порошковые инъекции, приготовленные с использованием раскрывыемого здесь состава. Порошковые инъекции могут быть преобразованы в жидкие инъекции in situ перед использованием. Порошковые инъекции могут быть приготовлены непосредственно из состава, например, в форме микросфер, как раскрыто здесь, и однородно смешаны с натрий-карбоксиметилцеллюлозой, вводимой до использования. Порошковые инъекции могут также быть приготовлены смешением состава, например, в форме микросфер, как раскрыто здесь, с соответствующим количеством натрий-карбоксиметилцеллюлозы, маннита, глюкозы и т.д. Чтобы приготовить инъекцию, до использования может быть добавлено необходимое количество очищенной воды.

Настоящее изобретение также обеспечивает способ лечения заболевания, связанного с рецепторами допамина и/или болезнью Паркинсона, включающий введение эффективного количества раскрытого здесь состава нуждающемуся в нем пациенту. Например, метод может включить введение состава, содержащего ротиготин или его фармацевтически приемлемую соль в количестве приблизительно 20-35 вес.% относительно общей массы состава, по крайней мере одну жирную кислоту в количестве приблизительно 2.5-10 вес.% относительно общей массы состава и по крайней мере один ПЛГлА в количестве приблизительно 55-77.5 вес.% относительно общей суммы состава, причем состав находится в форме микросфер. В другом примере способ может включать введение состава, содержащего ротиготин или его фармацевтически приемлемую соль в количестве приблизительно 30 вес.% относительно общей массы состава, по крайней мере одну жирную кислоту в количестве приблизительно 2.5 вес.% относительно общей массы состава и по крайней мере один ПЛГлА, такого, как первый ПЛГлА и второй ПЛГлА, как раскрыто здесь, в количестве приблизительно 67.5 вес.% относительно общей суммы состава, причем состав находится в форме микросфер.

Раскрытый здесь состав можно вводить парентерально нуждающемуся в нем пациенту. Например, состав можно вводить внутримышечной инъекцией, подкожной инъекцией, внутрикожной инъекцией, внутрибрюшинной инъекцией и т.д. Для простоты введения, раскрытый здесь состав можно вводить внутримышечной инъекцией или подкожной инъекцией.

Раскрытый здесь состав можно вводить с промежутками по крайней мере приблизительно две недели, или приблизительно три недели, приблизительно четыре недели, приблизительно пять недель и т.д.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг.1 - диаграмма высвобождения in vitro из микросфер (с теоретическим относительным содержанием препарата 20%), содержащих единственный ПЛГлА, изготовленных в примере 1, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.2 - диаграмма in vitro высвобождения из микросфер (с теоретическим относительным содержанием препарата 25%), содержащих единственный ПЛГлА, изготовленных в примере 2, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.3 - диаграмма in vitro высвобождения из микросфер (с теоретическим относительным содержанием препарата 30%), содержащих единственный ПЛГлА, приготовленных в примере 3, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.4 - диаграмма in vitro высвобождения из микросфер (с теоретическим относительным содержанием препарата 35%), содержащих единственный ПЛГлА, приготовленных в примере 4, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.5 - диаграмма in vitro высвобождения из микросфер (с теоретическим относительным содержанием препарата 40%), содержащих единственный ПЛГлА, приготовленных в примере 5, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.6 показывает концентрационные кривые in vivo микросфер, изготовленных в примерах 3 и 8, где ♦ - кривая in vivo высвобождение-время для микросфер (ПЛГлА 7525 4 А), изготовленных в примере 3, и ▲ - кривая in vivo высвобождение-время для микросфер (содержащих 2.5% стеариновой кислоты и ПЛГлА 7525 4 А), приготовленных в примере 8.

Фиг.7 - диаграмма in vitro высвобождения из микросфер (с теоретическим относительным содержанием препарата 20%), содержащих единственный ПЛГлА и стеариновую кислоту, приготовленных в примере 6, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.8 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер (с теоретическим относительным содержанием препарата 25%), содержащих единственный ПЛГлА и стеариновую кислоту, изготовленных в примере 7, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.9 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер (с теоретическим относительным содержанием препарата 30%), содержащих единственный ПЛГлА и стеариновую кислоту, изготовленных в примере 8, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.10 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер (с теоретическим относительным содержанием препарата 35%), содержащих единственный ПЛГлА и стеариновую кислоту, изготовленных в примере 9, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.11 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер (с теоретическим относительным содержанием препарата 40%), содержащих единственный ПЛГлА и стеариновую кислоту, приготовленных в примере 10, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.12 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер, содержащих 2.5% октановой кислоты (С8), приготовленных в примере 11, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.13 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер, содержащих 2.5% лигноцериновой кислоты (С24), приготовленных в примере 12, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.14 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер, содержащих 0.5% стеариновой кислоты, приготовленных в примере 13, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.15 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер, содержащих 1% стеариновой кислоты, приготовленных в примере 14, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.16 - диаграмма in vitro высвобождения препарата их микросфер, содержащих 5% стеариновой кислоты, приготовленных в примере 15, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.17 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер, содержащих 10% стеариновой кислоты, приготовленных в примере 16, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.18 -диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер, содержащих 15% стеариновой кислоты, приготовленных в примере 17, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.19 - кривая высвобождения in vivo препарата из микросфер, содержащих ПЛГлА 5050 2.5 А.

Фиг.20 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер, содержащих два ПЛГлА с различными молекулярными массами (7525 4 А: 5050 2.5 А=95:5), приготовленных в примере 18, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.21 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер, содержащих два ПЛГлА с различными молекулярными массами (7525 4 А: 5050 2.5 А=50:50), приготовленных в примере 19, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.22 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер, содержащих два ПЛГлА с различными молекулярными массами (7525 4 А: 5050 2.5 А=5:95), приготовленных в примере 20, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.23 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер, содержащих стеариновую кислоту (1%) и два ПЛГлА с различными молекулярными массами (7525 4 А: 5050 2.5 А=50:50), приготовленных в примере 21, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.24 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер, содержащих стеариновую кислоту (2.5%) и два ПЛГлА с различными молекулярными массами (7525 4 А: 5050 2.5 А=50:50), приготовленных в примере 22, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.25 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер, содержащих стеариновую кислоту (7.5%) и два ПЛГлА с различными молекулярными массами (7525 4 А: 5050 2.5 А=50:50), приготовленных в примере 23, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество, ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.26 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер, содержащих стеариновую кислоту (10%) и два ПЛГлА с различными молекулярными массами (7525 4 А: 5050 2.5 А=50:50), приготовленных в примере 24, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.27 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер, содержащих октановую кислоту (2.5%) и два ПЛГлА с различными молекулярными массами (7525 4 А: 5050 2.5 А=50:50), приготовленных в примере 25, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.28 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер, содержащих лигноцериновую кислоту (2.5%) и два ПЛГлА с различными молекулярными массами (7525 4 А: 5050 2.5 А=50:50), приготовленных в примере 26, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.29 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер, содержащих стеариновую кислоту (2.5%) и два ПЛГлА с различными молекулярными массами (7525 4 А: 5050 2.5 А=95:5), приготовленных в примере 27, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.30 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из микросфер, содержащих стеариновую кислоту (2.5%) и два ПЛГлА с различными молекулярными массами (7525 4 А: 5050 2.5 А=5:95), приготовленных в примере 28, где Δ - ежесуточно высвобождаемое количество и ■ - совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество.

Фиг.31 - кривая высвобождения препарата in vivo из микросфер, содержащих стеариновую кислоту (2.5%) и два ПЛГлА с различными молекулярными массами в различных весовых соотношениях, где ♦ - кривая высвобождения in vivo препарата из микросфер (7525 4 А: 5050 2.5 А=50:50) (2.5% стеариновая кислота), ▲ - кривая высвобождения in vivo препарата из микросфер (7525 4 А: 5050 2.5 А=70:30) (2.5% стеариновой кислоты), ─ - кривая высвобождения in vivo препарата из микросфер (7525 4 А: 5050 2.5 А=80:20) (стеариновая кислота на 2.5%), и ■ - кривая высвобождения in vivo препарата из микросфер (7525 4 А: 5050 2.5 А=90:10) (2.5% стеариновой кислоты).

Фиг.32 - диаграмма корреляции in vitro - in vivo для ротиготиновых микросфер, приготовленных в примере 22.

Фиг.33 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из 5 партий микросфер, приготовленных в примере 3.

Фиг.34 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из 5 партий микросфер, приготовленных в примере 8.

Фиг.35 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из 5 партий микросфер, приготовленных в примере 14.

Фиг.36 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из 5 партий микросфер, приготовленных в примере 16.

Фиг.37 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из 5 партий микросфер, приготовленных в примере 11.

Фиг.38 - диаграмма in vitro высвобождения препарата из 5 партий микросфер, приготовленных в примере 12.

ПРИМЕРЫ

Настоящее изобретение далее иллюстрируется следующими (неограничивающими) примерами.

ПРИМЕР 1. Микросферы, содержащие единственный ПЛГлА (с теоретическим относительным содержанием препарата 20%)

0.3104 г ротиготина и 1.2083 г ПЛГлА, 7525 4 А взвешивают и растворяют в 7.5 мл дихлорметана при перемешивании с образованием смеси. Смесь добавляют к 750 мл 0.5% водного растворы ПВА перистальтическим насосом (100 об/мин) с перемешиванием (1200-2000 об/мин) для превращения в эмульсию в течение 2 мин. Затем скорость перемешивания уменьшают и растворитель испаряют за 5 ч. Полученный раствор отфильтровывают на сите 1200 меш (отверстий на дюйм), отделяя микросферы. Микросферы, оставшиеся на сите 1200 меш, промывают очищенной водой 3-5 раз, лиофилизируют и отфильтровывают на сите 100 меш с получением заключительных микросфер.

ПРИМЕР 2. Микросферы, содержащие единственный ПЛГлА (с теоретическим относительным содержанием препарата 25%)

Ротиготиновые микросферы готовят из 0.3752 г ротиготина и 1.1291 г ПЛГлА 7525 4 А согласно методу из ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 3. Микросферы, содержащие единственный ПЛГлА (с теоретическим относительным содержанием препарата 30%)

Ротиготиновые микросферы готовят из 0.4522 г ротиготина и 1.0511 г ПЛГлА 7525 4 А согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 4. Микросферы, содержащие единственный ПЛГлА (с теоретическим относительным содержанием препарата 35%)

Ротиготиновые микросферы готовят из 0.5268 г ротиготина и 0.9790 г ПЛГлА 7525 4 А согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 5. Микросферы, содержащие единственный ПЛГлА (с теоретическим относительным содержанием препарата 40%)

Ротиготиновые микросферы готовят из 0.6043 г ротиготина и 0.9019 г ПЛГлА 7525 4 А согласно методу ПРИМЕРА 1.

Испытательный ПРИМЕР 1

Для микросфер, приготовленных в ПРИМЕРАХ 1-5, были выполнены тесты высвобождения in vitro, моделируя условия in vivo.

Условия испытания: температура: 37±0.5°C, скорость вращения: 50 об/мин

Протокол хроматографических условий и пригодности системы: В качестве наполнителя использовался связанный стеарилом диоксид кремния. Мобильная фаза: 0.3% фосфорная кислота-ацетонитрил (66:34), где 0.3%-ную фосфорную кислоту готовили растворением 3 мл фосфорной кислоты в воде с доведением объема до 1000 мл. Температура колонки 35°C. Длина волны детекции составляла 223 им. Разрешение между пиком ротиготина и другими пиками должна отвечать стандартным требованиям. Теоретическое число тарелок, вычисленное по пику ротиготина, было более 10000.

Метод испытаний: Анализ согласно тесту высвобождения препарата (Китайская Фармакопея 2005, издание II, приложение X D). 3 навески микросфер по 6 мг помещали в кюветы центрифуги с пробкой (10 мл). В каждую кювету добавляли 9 мл среды для высвобождения: фосфатный буфера с 0.2% ДСН. После встряхивания до получения суспензии, каждую кювету помещали в шейкер водяной бани при 37±0.5°C и подвергали вибрации со скоростью 50±3 об/мин. После 3 час, 1 сут, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 и 20 суток соответственно, кюветы извлекали. Кюветы центрифугировали при скорости вращения 3600 об/мин при 5-8°C в течение 10 мин. Затем из каждой кюветы отбирали 6 мл супернатанта и анализировали, и к содержимому кюветы добавляли 6.0 мл среды высвобождения (фосфатного буфера) при той же температуре. После встряхивания до получения суспензии, кюветы помещали обратно в шейкер водной бани и подвергали вибрации. Отобранный раствор анализировали с помощью ВЭЖХ и по внешнему стандартному методу вычисляли совокупное (кумулятивное) высвобожденное количество препарата. Данные по высвобождению in vitro при pH 7.4 приведены в табл.1, кривые высвобождения in vitro показаны на фиг.1-5.

Высвобожденные количества ротиготина через 0.125 сут и 1 сут коррелировали со взрывным высвобождением препарата in vivo. Чем большее количество высвобождено in vitro, тем больше взрывное высвобождение in vivo.

Из табл.1 и фиг.1-5 видно, что если относительное содержание препарата в микросферах увеличить от 20 до 40%, то высвобожденное количество ротиготина через 0.125 сут увеличивалось от 1.33 до 4.97%, совокупное высвобожденное количество ротиготина в течение 1 сут увеличивалось от 5.24 до 20.45%. Таким образом, высвобождение препарата из микросфер в моменты времени 0.125 сут и 1 сут значительно увеличивалось. Из табл.1 видно, что с увеличением относительного содержания препарата взрывное высвобождение ротиготина из микросфер in vivo может увеличиться.

Испытательный ПРИМЕР 2. Тест высвобождения ротиготина in vivo из микросфер

Образец: микросферы, приготовленные в ПРИМЕРЕ 3.

Обработка образца плазмы: 100 мкл внутреннего стандартного раствора (500 нг/мл диазепама), 100 мкл смеси ацетонитрил: вода (75:25) и 100 мкл 1 М Na₂CO₃ смешивали в вихревом смесителе в течение 2 мин. К смеси добавляли 3 мл экстрагента (н-гексан:дихлорметан:изопропанол=2:1:0.1), перемешивали в течение 10 мин в вихревом смесителе и центрифугировали в течение 10 мин (3600 об/мин). Органическую фазу из верхнего слоя помещали в другую пробирку и сушили в потоке сжатого воздуха при 35°C. Остаток растворяли в 100 мл смеси ацетонитрил: вода (1 мМ ацетат аммония) (75:25). 10 мкл раствора брали в качестве типовой инъекции и снимали хроматограмму.

Условия хроматографирования: Мобильная фаза (А): (1 мМ NH₄Ac) вода (В): ацетонитрил; градиент элюента для 0-0.8 мин: В 70~90%, 0.8~3.5 мин: В 90~90%, 3.5~3.6 мин: В 90~70%, 3.6~7.5 мин: В 70~70%; скорость потока: 0.35 мл/мин, температура колонки 35°C; объем образца: 10 мкл.

Условия снятия масс-спектров

Источник ионов: источник ионизированного ионного потока; напряжение ионного распыления: 5500 В; температура: 500°C; GS1:50 фунтов на квадратный дюйм; GS2:50 фунтов на квадратный дюйм; давление газовой завесы (CUR) в источнике: 15 фунтов на квадратный дюйм; давление газа для соударений (CAD): 8 фунтов на квадратный дюйм; режим детекции катиона; режим сканирования: многократный контроль реакции (MRM); DP-напряжение ротиготина и диазепама составляет отдельно 50 B и 88 B; CE составляло отдельно 36 B и 47 B; СХР - оба 10 B; ионная реакция для количественного анализа отдельно 316.2/147.1 (ротиготин) и 256.1/167.1 (диазепам).

Построение рабочей кривой

0.2 мл чистой плазмы добавляли к 100 мкл стандартного раствора ротиготина и 100 мкл внутреннего стандарта (500 нг/мл диазепама), чтобы получить образцы плазмы, соответствующие концентрациям плазмы 0.05, 0.25, 1.00, 2.50, 1.00, 2.50, 5.00 и 12.5 нг/мл соответственно. Образцы плазмы обрабатывали согласно ″методу анализа образца плазмы″, Китайская Фармакопея 2005, издание II, для построения стандартных кривых. Используя концентрацию анализируемого вещества в плазме как ось X и отношения площади пика анализируемого вещества к внутреннему стандартному веществу как ось Y, проводили регрессию на стандартных кривых по взвешенному (W=1/x²) методу наименьших квадратов, получая линейное уравнение регрессии как стандартную кривую.

Метод испытаний

3 здоровым гончим собаки (одна самка и два самца) с массой тела 9-11 кг давали еду и (свободно) питьевую воду. Микросферы с дозой 5.5 мг/кг ротиготина вводили инъекцией через мышцу гончей, и через 0 ч, 1 ч, 3 ч, 6 ч, 24 ч, 48 ч, 96 ч, 144 ч, 192 ч, 240 ч, 288 ч, 336 ч, 384 ч, 432 ч и 480 ч после введения отбирали 3 мл крови через вену передней конечности гончих, помещали в гепаринизированную пробирку, центрифугировали в течение 10 мин при 6000 об/мин, отделяя плазму, и сохраняли при -20°C. Плазму анализировали согласно вышеуказанному аналитическому методу, и на фиг.6 показано высвобождение in vivo. Как видно из табл.1, совокупное высвобожденное количество из микросфер, приготовленных в ПРИМЕРЕ 3, в течение 0.125 сут и 1 сут, составило 2.00 и 9.53% соответственно. Можно заметить по фиг.6, что имело место очевидное взрывное высвобождение из микросфер в теле гончих, затем уровень препарата в крови уменьшался; после 96 ч уровень препарата в крови увеличивался, и после 192 ч уровень препарата в крови возрос до C_max. Уровни препарата в крови после 0.125 сут и 1 сут были выше, чем C_max, что указывает на очевидное взрывное высвобождение из микросфер, приготовленных в ПРИМЕРЕ 3.

ПРИМЕР 6. Микросферы, содержащие единственный ПЛГлА и стеариновую кислоту (с теоретическим относительным содержанием препарата 20%)

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.3104 г ротиготина, 1.1603 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.0370 г стеариновой кислоты согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 7. Микросферы, содержащие единственный ПЛГлА и стеариновую кислоту (с теоретическим относительным содержанием препарата 25%)

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.3712 г ротиготина, 1.0891 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.0379 г стеариновой кислоты согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 8. Микросферы, содержащие единственный ПЛГлА и стеариновую кислоту (с теоретическим относительным содержанием препарата 30%)

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.4522 г ротиготина, 1.0136 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.0371 г стеариновой кислоты согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 9. Микросферы, содержащие единственный ПЛГлА и стеариновую кислоту (с теоретическим относительным содержанием препарата 35%)

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.5258 г ротиготина, 0.9790 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.0374 г стеариновой кислоты согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 10. Микросферы, содержащие единственный ПЛГлА и стеариновую кислоту (с теоретическим относительным содержанием препарата 40%)

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.6083 г ротиготина, 0.8619 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.0367 г стеариновой кислоты согласно методу ПРИМЕРА 1.

Испытательный ПРИМЕР 3

Для микросфер, изготовленных в ПРИМЕРАХ 6-10, были выполнены тесты высвобождения in vitro согласно методу испытательного ПРИМЕРА 1. Данные о высвобождении in vitro приведены в табл.2, на фиг.7-11 показаны кривые высвобождения in vitro.

В присутствии стеариновой кислоты для ротиготиновых микросфер с относительным содержанием препарата 20-40% высвобожденное количество ротиготина через 0.125 сут уменьшалось от 1.33-4.97%) до 0.51-3.58%, и совокупное высвобожденное количество ротиготина в течение 1 сут уменьшалось от 5.24-20.45% до 2.84-10.29%. Это указывает, что добавление стеариновой кислоты может эффективно уменьшать эффект взрывного высвобождения.

Испытательный ПРИМЕР 4. Тест высвобождения in vivo из микросфер ротиготина

Образец: микросферы, приготовленные в ПРИМЕРЕ 8.

Фармакокинетические тесты in vivo выполнались согласно методу испытательного ПРИМЕРА 2. Высвобождение показано на фиг.6, из которого можно заметить, что после добавления стеариновой кислоты эффект взрывного высвобождения уменьшился, однако количество высвобожденного препарата через 1-4 сут было низким.

ПРИМЕР 11. Микросферы, содержащие октановую кислоту и единственный ПЛГлА

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.4520 г ротиготина, 1.0119 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.0371 г октановой кислоты (2.5%) согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 12

Микросферы, содержащие лигноцериновую кислоту и единственный ПЛГлА

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.4489 г ротиготина, 1.0130 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.0373 г лигноцериновой кислоты (2.5%) согласно методу ПРИМЕРА 1.

Испытательный пример 5. Влияние жирных кислот с различным числом углеродных атомов на высвобождение препарата из ротиготиновых микросфер

Для микросфер, приготовленных в ПРИМЕРАХ 11-12, были выполнены тесты высвобождения in vitro согласно методу испытательного ПРИМЕРА 1. Данные о высвобождении in vitro собраны в табл.3, кривые высвобождения in vitro показаны на фиг.12-13.

Данные в табл.3 были сравнены с данными в табл.1 (с относительным содержанием препарата 30%). По сравнению с ротиготиновыми микросферами без жирных кислот, для ротиготиновых микросфер с октановой кислотой (8 углеродных атомов) и лигноцериновой кислотой (24 углеродных атома) высвобожденное количество ротиготина через 0.125 сут уменьшилось от 2.00 до 1.01-1.14%), а совокупное высвобожденное количество ротиготина в течение 1 сут уменьшилось от 9.53 до 2.84-4.02%). Это указывает, что добавление октановой кислоты и лигноцериновой кислоты может эффективно уменьшать эффект взрывного высвобождения. Можно заключить по результатам в табл.2 (стеариновая кислота с 18 углеродными атомами) и табл.3, что все жирные кислоты с 8-24 углеродными атомами могут эффективно уменьшать эффект взрывного высвобождения.

ПРИМЕР 13. Микросферы, содержащие единственный ПЛГлА и 0.5% стеариновой кислоты

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.4528 г ротиготина, 1.0432 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.0078 г стеариновой кислоты (0.5%) согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 14. Микросферы, содержащие единственный ПЛГлА и 1% стеариновой кислоты

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.4528 г ротиготина, 1.0362 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.0158 г стеариновой кислоты (1%) согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 15. Микросферы, содержащие единственный ПЛГлА и 5% стеариновой кислоты

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.4528 г ротиготина, 0.9751 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.0758 г стеариновой кислоты (5%) согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 16. Микросферы, содержащие единственный ПЛГлА и 10% стеариновой кислоты

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.4492 г ротиготина, 0.9028 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.1532 г стеариновой кислоты (10%) согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 17. Микросферы, содержащие единственный ПЛГлА и 15% стеариновой кислоты

Ротиготиновые микросферы готовил из 0.4528 г ротиготина, 0.8261 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.2258 г стеариновой кислоты (15%) согласно методу ПРИМЕРА 1.

Испытательный ПРИМЕР 6

Для микросфер, приготовленных в ПРИМЕРАХ 13-17, были выполнены тесты высвобождения in vitro согласно методу испытательного ПРИМЕРА 1.

Результаты высвобождения in vitro показаны в табл.4 и на фиг.14-18.

Табл.4
Результаты по ротиготиновым микросферам, содержащим различное количество стеариновой кислоты
	0.5% Стеариновая к-та		1% Стеариновая к-та		5% Стеариновая к-та		10% Стеариновая к-та		15% Стеариновая к-та
Время (сут)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобождаемое количество (%)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобождаемое количество (%)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобождаемое количество (%)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобождаемое количество (%)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобожденное количество (%)
0.125	1.91	1.91	1.20	1.20	0.75	0.75	1.16	1.16	1.26	1.26
1	10.96	10.96	5.70	5.70	3.02	3.02	2.25	2.25	1.90	1.90
2	15.39	4.43	12.41	6.72	5.14	2.12	2.89	0.64	2.51	0.60
4	30.08	7.34	25.28	6.43	13.06	3.96	7.52	2.32	3.85	0.67
6	42.41	6.16	35.45	5.09	30.47	8.70	22.02	7.25	5.94	1.04
8	62.09	9.84	59.46	12.00	53.68	11.61	30.15	4.06	10.58	2.32
10	74.55	6.23	76.06	8.30	70.96	8.64	53.79	11.82	23.07	6.24
12	86.67	6.06	89.89	6.91	88.44	8.74	68.48	7.34	45.68	11.30
14	92.35	2.84	93.96	2.04	93.18	2.37	78.77	5.15	67.12	10.72
16	97.43	2.54	96.42	1.23	96.51	1.67	88.89	5.06	79.97	6.42
18			98.73	1.16			90.88	0.99	87.42	3.73
20							92.91	1.02	90.38	1.48

Можно заметить, сравнивая данные в табл.4 с данными в табл.1, что, когда содержание стеариновой кислоты составляло 0.5%, высвобожденное количество ротиготина через 0.125 сут и совокупное высвобожденное количество ротиготина в течение 1 сут составили 1.91 и 10.96% соответственно, и значительно не менялись по сравнению с микросферами без стеариновой кислоты, приготовленными в ПРИМЕРЕ 3. Это указывает, что добавление стеариновой кислоты с содержанием, меньше или равном 0.5%, не может значительно уменьшить эффект взрывного высвобождения. Когда содержание стеариновой кислоты было выше 0.5%, например 1-15%, высвобожденное количество ротиготина через 0.125 сут и совокупное высвобожденное количество ротиготина в течение 1 сут для микросферы, содержащей 1-15% стеариновой кислоты, уменьшалось до 0.75-1.26% и 1.90-5.70% соответственно, таким образом эффективно снижалось взрывное высвобождение препарата. Как показывают данные в табл.4 и на фиг.14-18, с увеличением количества стеариновой кислоты высвобождение препарата замедляется.

Испытательный ПРИМЕР 7. Тест in vivo микросфер, содержащих ПЛГлА 5050 2.5 А

Для микросфер, приготовленных в ПРИМЕРЕ 3 и содержащих ПЛГлА 5050 2.5 А вместо ПЛГлА 7525 4 А, был выполнен тест in vivo согласно методу испытательного ПРИМЕРА 2, при прочих равных или постоянных условиях. Результаты приведены на фиг.19.

Можно заметить из фиг.19, что в более ранний период высвобождения скорость высвобождения из микросфер с ПЛГлА 5050 2.5 А была выше и полный период высвобождения был короче.

ПРИМЕР 18. Микросферы ротиготина, содержащие комбинацию двух ПЛГлА с различными молекулярными массами (95:5)

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.4504 г ротиготина и комбинации 0.9973 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.0521 г ПЛГлА 5050 2.5 А (с весовым соотношением 95:5) согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 19. Микросферы ротиготина, содержащие комбинацию двух ПЛГлА с различными молекулярными массами (50:50)

Ротиготиновые микросферы готовил из 0.4489 г ротиготина и комбинации 0.5261 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.5256 г ПЛГлА 5050 2.5 А (с весовым соотношением 50:50) согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 20. Микросферы ротиготина, содержащие комбинацию двух ПЛГлА с различными молекулярными массами (5:95)

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.4508 г ротиготина и комбинации 0.0519 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.9968 г ПЛГлА 5050 2.5 А (с весовым соотношением 5:95) согласно методу ПРИМЕРА 1.

Испытательный ПРИМЕР 8. Влияние комбинаций полимера с различными весовыми соотношениями на высвобождение препарата из микросфер

Для микросфер, приготовленных в ПРИМЕРАХ 18-20, были выполнены тесты высвобождения in vitro согласно методу испытательного ПРИМЕРА 1. Результаты высвобождения in vitro показаны в табл.5 и на фиг.20-22.

Табл.5
Данные по высвобождению in vitro из микросфер, изготовленных из комбинации двух ПЛГлА с различными молекулярными массами
	ПЛГлА 7525 4 А:ПЛГлА 5050 2.5 А=95:5		ПЛГлА 7525 4 А:ПЛГлА 5050 2.5 А=50:50		ПЛГлА 7525 4 А:ПЛГлА 5050 2.5 А=5:95
Время (сут)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобождаемое количество (%)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобождаемое количество (%)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобожденное количество (%)
0.125	2.22	2.22	2.58	2.58	2.90	2.90
1	9.10	9.10	12.32	12.32	16.12	16.12
2	15.72	6.62	23.86	11.54	29.13	13.02
4	29.36	6.82	45.44	10.79	53.34	12.11
6	52.30	11.47	63.26	8.91	73.25	9.95
8	64.32	6.01	74.28	5.51	89.49	8.12
10	75.29	5.49	82.98	4.35	95.26	2.89
12	86.16	5.44	91.44	4.23	97.31	1.02
14	92.51	3.17	97.26	2.91	99.30	0.99
16	95.96	1.73	99.23	0.99
18	98.29	1.16

Можно заметить по табл.5 и фиг.20-22, что, когда содержание ПЛГлА 5050 2.5 А в микросферах было увеличено от 5 до 95%, высвобожденное количество ротиготина через 1-4 сут увеличилось, совокупное высвобожденное количество ротиготина в течение 1 сут увеличилось от 9.10 до 16.12% и совокупное высвобожденное количество ротиготина через 4 сут увеличилось от 29.36 до 53.34%. Когда весовое соотношение ПЛГлА 7525 4 А к ПЛГлА 5050 2.5 А в микросфере было 50:50, по сравнению с данными ПРИМЕРА 3 в табл.1, высвобожденное количество ротиготина через 1-4 сут увеличилось с устойчивым периодом высвобождения, причем совокупное высвобожденное количество ротиготина в течение 1 сут увеличилось от 9.53 до 12.32% и совокупное высвобожденное количество ротиготина через 4 сут возросло от 22.90 до 45.44%.

ПРИМЕР 21. Микросфера ротиготина, содержащая стеариновую кислоту (1%) и комбинацию двух ПЛГлА с различными молекулярными массами (50:50)

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.4507 г ротиготина, комбинации 0.5170 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.5177 г ПЛГлА 5050 2.5 А (с весовым соотношением 50:50) и 0.0155 г стеариновой кислоты (1%) согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 22. Микросферы, содержащие стеариновую кислоту (2.5%) и комбинацию двух ПЛГлА с различными молекулярными массами (50:50)

Ротиготиновые микросферы готовил из 0.4491 г ротиготина, комбинации 0.5060 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.5055 г ПЛГлА 5050 2.5 А (с весовым соотношением 50:50) и 0.0371 г стеариновой кислоты (2.5%) согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 23. Микросферы, содержащие стеариновую кислоту (7.5%) и комбинацию двух ПЛГлА с различными молекулярными массами (50:50)

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.4510 г ротиготина, комбинации 0.4680 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.4701 г ПЛГлА 5050 2.5 А (с весовым соотношением 50:50) и 0.1119 г стеариновой кислоты (7.5%) согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 24. Микросферы, содержащие стеариновую кислоту (10%) и комбинацию двух ПЛГлА с различными молекулярными массами (50:50)

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.4503 г ротиготина, комбинации 0.4479 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.4501 г ПЛГлА 5050 2.5 А (с весовым соотношением 50:50) и 0.1520 г стеариновой кислоты (10%) согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 25. Микросферы, содержащие октановую кислоту (2.5%) и комбинацию двух ПЛГлА с различными молекулярными массами (50:50)

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.4490 г ротиготина, комбинации 0.5101 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.5091 г ПЛГлА 5050 2.5 А (с весовым соотношением 50:50) и 0.0380 г октановой кислоты (2.5%) согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 26. Микросфера, содержащая лигноцериновую кислоту (2.5%) и комбинацию двух ПЛГлА с различными молекулярными массами (50:50)

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.4520 г ротиготина, комбинации 0.5055 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.5062 г ПЛГлА 5050 2.5 А (с весовым соотношением 50:50) и 0.0379 г лигноцериновой кислоты (2.5%) согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 27. Микросферы, содержащие стеариновую кислоту (2.5%) и комбинацию двух ПЛГлА с различными молекулярными массами (95:5)

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.4507 г ротиготина, комбинации 0.9621 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.0505 г ПЛГлА 5050 2.5 А (с весовым соотношением 95:5) и 0.0369 г стеариновой кислоты (2.5%) согласно методу ПРИМЕРА 1.

ПРИМЕР 28. Микросферы, содержащие стеариновую кислоту (2.5%) и комбинацию двух ПЛГлА с различными молекулярными массами (5:95)

Ротиготиновые микросферы готовили из 0.4514 г ротиготина, комбинации 0.0501 г ПЛГлА 7525 4 А и 0.9610 г ПЛГлА 5050 2.5 А (с весовым соотношением 5:95) и 0.0370 г стеариновой кислоты (2.5%) согласно методу ПРИМЕРА 1.

Испытательный ПРИМЕР 9. Тест in vitro микросфер ротиготина, содержащих стеариновую кислоту в различном количестве и комбинацию ПЛГлА с различными молекулярными массами

Для микросфер, приготовленных в ПРИМЕРАХ 21-24, были выполнены тесты высвобождения in vitro согласно методу испытательного ПРИМЕРА 1. Результаты высвобождения in vitro показаны в табл.6 и на фиг.23-26.

Табл.6
Данные по высвобождению in vitro из микросфер, содержащих стеариновую кислоту в различном количестве и комбинацию двух ПЛГлА с различными молекулярными массами
	7525 4 А: 5050 2.5 А=50:50 (1% стеариновой к-ты)		7525 4 А:5050 2.5 А=50:50 (2.5% стеариновой к-ты)		7525 4 А:5050 2.5 А=50:50 (7.5% стеариновой к-ты)		7525 4 А:5050 2.5 А=50:50 (10% стеариновой к-ты)
Время (сут)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобождаемое количество (%)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобождаемое количество (%)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобождаемое количество (%)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобождаемое количество (%)
0.125	1.96	1.96	1.02	1.02	0.91	0.91	1.13	1.13
1	9.19	9.19	6.32	6.32	5.18	5.18	2.87	2.87
2	22.80	13.61	17.78	11.46	11.46	6.28	5.78	2.91
4	41.53	9.36	39.17	10.69	31.83	10.18	11.24	2.73
6	65.49	11.98	60.00	10.42	53.15	10.66	24.45	6.61
8	77.74	6.12	75.37	7.68	70.41	8.63	50.47	13.01
10	89.90	6.08	85.71	5.17	81.12	5.36	67.76	8.65
12	93.04	1.57	92.61	3.45	88.77	3.83	77.49	4.86
14	97.38	2.17	96.14	1.77	92.85	2.04	84.64	3.58
16	99.56	1.09	99.22	1.54	96.26	1.70	89.79	2.57
18							93.67	1.94
20							95.82	1.08

Можно заметить, сравнивая результаты в табл.6 и на фиг.23-26 с таковыми из ПРИМЕРА 19 в табл.5, что, когда весовое соотношение ПЛГлА 7525 4 А к ПЛГлА 5050 2.5 А было 50:50 и содержание стеариновой кислоты в микросфере составляло 2.5-7.5%, эффект взрывного высвобождения существенно снижался и совокупные кривые высвобождения препарата были намного более линейны.

Испытательный ПРИМЕР 10. Тест in vitro микросфер ротиготина, содержащих жирные кислоты с различными молекулярными массами и комбинацию ПЛГлА с различными молекулярными массами

Для микросфер, приготовленных в ПРИМЕРАХ 22, 25 и 26, были выполнены тесты высвобождения in vitro согласно методу испытательного ПРИМЕРА 1. Результаты высвобождения in vitro показаны в табл.7 и на фиг.24, 27 и 28.

Табл.7
Данные по высвобождению in vitro из микросфер, содержащих жирные кислоты с различными молекулярными массами и комбинацию ПЛГлА с различными молекулярными массами
	7525 4 А:5050 2.5 А=50:50 (2.5% октановой к-ты)		7525 4 А:5050 2.5 А=50:50 (2.5% стеариновой к-ты)		7525 4 А: 5050 2.5 А-50:50 (2.5% лигноцериновой к-ты)
Время (сут)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобождаемое количество (%)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобождаемое количество (%)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобождаемое количество (%)
0.125	0.92	0.92	1.02	1.02	1.13	1.13
1	8.27	8.27	6.32	6.32	7.48	7.48
2	21.86	13.59	17.78	11.46	15.66	8.18
4	37.41	7.77	39.17	10.69	29.35	6.85
6	53.26	7.93	60.00	10.42	48.02	9.33
8	67.35	7.04	75.37	7.68	70.91	11.45
10	82.98	7.81	85.71	5.17	84.08	6.59
12	91.44	4.23	92.61	3.45	91.22	3.57
14	94.26	1.41	96.14	1.77	95.54	2.16
16	97.16	1.45	99.22	1.54	97.49	0.98

Можно заметить, сравнивая результаты в табл.7 и на фиг.24, 27, 28 с таковыми из ПРИМЕРА 19 в табл.5, что, когда октановая кислота, стеариновая кислота и лигноцериновая кислота с содержанием 2.5% соответственно были добавлены к составу, взрывное высвобождение уменьшалось и кривые высвобождения препарата имели тенденцию большей линейности, что указывает, что все жирные кислоты с 8-24 углеродными атомами могут отвечать требованию устойчивого высвобождения препарата.

Испытательный ПРИМЕР 11. Тест in vitro микросфер ротиготина, содержащих стеариновую кислоту (2.5%) и комбинацию ПЛГлА с различными молекулярными массами в различных весовых соотношениях

Для микросфер, приготовленных в ПРИМЕРАХ 22, 27, и 28, были выполнены тесты высвобождения in vitro согласно методу испытательного ПРИМЕРА 1. Результаты высвобождения in vitro показаны в табл.8 и на фиг.24, 29 и 30.

Табл.8
Данные по высвобождению in vitro из микросфер, содержащих стеариновую кислоту и комбинацию ПЛГлА с различными молекулярными массами в различных весовых отношениях
	7525 4 А:5050 2.5 А=50:50(2.5% стеариновой к-ты)		7525 4 А:5050 2.5 А=95:5 (2.5% стеариновой к-ты)		7525 4 А:5050 2.5 А=5:95 (2.5% стеариновой к-ты)
Время (сут)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобождаемое количество (%)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобождаемое количество (%)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобожденное количество (%)
0.125	1.02	1.02	0.96	0.96	1.24	1.24
1	6.32	6.32	5.19	5.19	11.18	11.18
2	17.78	11.46	10.46	5.27	24.13	12.95
4	39.17	10.69	25.47	7.50	50.45	13.16
6	60.00	10.42	44.25	9.39	70.25	9.90
8	75.37	7.68	66.29	11.02	84.49	7.12
10	85.71	5.17	79.25	6.48	93.26	4.39
12	92.61	3.45	88.19	4.47	96.10	1.42
14	96.14	1.77	94.51	3.16	99.28	1.59
16	99.22	1.54	98.80	2.14

Можно заметить из табл.8 и фиг.29 и 30, что, когда содержание стеариновой кислоты составляло 2.5% и весовое соотношение ПЛГлА 7525 4 А к ПЛГлА, 5050 2.5 А было 95:5, количество высвобожденного препарата через 1-4 сут было немного ниже; когда весовое соотношение ПЛГлА, 7525 4 А к ПЛГлА 5050 2.5 А было 5:95, количество высвобожденного препарата через 1-4 сут было немного выше, и на 10-ые сутки совокупное высвобожденное количество достигло 93.26% с коротким периодом высвобождения; и когда весовое соотношение ПЛГлА, 7525 4 А к ПЛГлА 5050 2.5 А было 50:50, высвобождение препарата было более устойчивым и препарат мог быть стабильно высвобожден в течение 14 сут.

Испытательный ПРИМЕР 12. Тест in vivo микросфер, содержащих стеариновую кислоту (2.5%) и комбинацию ПЛГлА 7525 4 А и ПЛГлА 5050 2.5 А в различных весовых соотношениях

Микросферы готовили согласно ПРИМЕРУ 8, но с различными весовыми соотношениями ПЛГлА 7525 4 А к ПЛГлА 5050 2.5 А: 90:10, 80:20, 70:30 и 50:50. Для микросфер были выполнены тесты высвобождения in vivo согласно методу испытательного ПРИМЕРА 2. Результаты показаны па фиг.31.

Можно заметить по данным высвобождения in vivo (фиг.31), что после того как два ПЛГлА с различными весовыми соотношениями были смешаны в различных весовых соотношениях, с увеличением содержания ПЛГлА 5050 2.5 А количество высвобожденного препарата из микросфер через 1-4 сут увеличилось и кривая высвобождения in vivo имела тенденцию быть более устойчивой; когда весовое соотношение ПЛГлА 7525 4 А к ПЛГлА 5050 2.5 А было 50:50, кривая высвобождения in vivo была более устойчивой без существенного эффекта взрывного высвобождения.

Как показывают вышеприведенные результаты, два ПЛГлА с различными весовыми соотношениями были смешаны в различных весовых соотношениях, тем самым эффективно преодолевая дефекты единственного ПЛГлА. То есть ПЛГлА с молекулярной массой 15000-30000 (ПЛГлА 2.5 А) может увеличить количество высвобожденного препарата из микросфер через 1-4 сут, а ПЛГлА с молекулярной массой 42000-75000 (ПЛГлА 4 А) может продлить период высвобождения препарата, таким образом, получаются микросферы с более устойчивым высвобождением препарата in vivo.

Испытательный ПРИМЕР 13. Тест in vitro микросфер, содержащих стеариновую кислоту (2.5%) и комбинацию ПЛГлА 7525 5 А и ПЛГлА 5050 2.5 А в различных весовых соотношениях

Микросферы готовили согласно ПРИМЕРУ 8, но с различными весовыми соотношениями ПЛГлА 7525 5 А к ПЛГлА 5050 2.5 А: 90:10, 80:20 и 70:30. Для микросфер были выполнены тесты высвобождения in vitro согласно методу испытательного ПРИМЕРА 1. Данные по высвобождению in vitro собраны в табл.9.

Табл.9
Данные по высвобождению in vitro из микросфер, содержащих стеариновую кислоту и комбинацию ПЛГлА 7525 5 А и ПЛГлА 5050 2.5 А с различными молекулярными массами
Время (сут)	7525 5 А:5050 2.5 А=90:10 (2.5% стеариновой к-ты)		7525 5 А:5050 2.5 А=80:20 (2.5% стеариновой к-ты)		7525 5 А:5050 2.5 А=70:30 (2.5% стеариновой к-ты)
	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобождаемое количество (%)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобождаемое количество (%)	Кумулятивное высвобожденное количество (%)	Суточное высвобожденное количество (%)
0.125	1.44	1.44	1.53	1.53	1.61	1.61
1	4.28	4.28	6.23	6.23	7.64	7.64
2	8.73	4.45	11.70	5.47	15.74	7.09
4	24.29	7.78	28.96	8.63	30.21	7.74
6	42.41	9.06	43.30	7.17	47.89	8.84
8	63.49	10.54	65.68	11.19	63.17	7.64
10	75.38	5.95	74.35	4.33	72.48	4.66
12	84.65	4.64	80.81	3.23	81.97	4.75
14	90.45	2.90	90.57	4.88	89.30	3.66
16	94.83	2.19	95.78	2.61	92.56	1.63
18	97.87	1.52	98.21	1.22	94.65	1.05
20					95.81	0.58

Из табл.9 видно, что после того как ПЛГлА (7525 5 А) и ПЛГлА (5050 2.5 А) были смешаны в различных весовых соотношениях, характеристики высвобождения препарата из приготовленных микросфер были подобны таковым для микросфер, приготовленных из ПЛГлА (7525 4 А) и ПЛГлА (5050 2.5 А). С увеличением содержания ПЛГлА (5050 2.5 А) в микросферах количество высвобожденного из них препарата через 1-4 сут соответственно увеличивалось. Когда весовое соотношение ПЛГлА 7525 5 А к ПЛГлА 5050 2.5 А варьировалось от 90:10 до 70:30, совокупное высвобожденное количество в течение 1 сут увеличилось от 4.28 до 7.64%, а совокупное высвобожденное количество через 4 сут возросло от 24.29 до 30.21%. Поскольку микросферы содержали 2.5% стеариновой кислоты, высвобождение из микросфер через 0.125 сут и 1 сут было меньшим, что указывает на меньшее взрывное высвобождение in vivo из микросферы.

Испытательный ПРИМЕР 14. Тест корреляции in vitro - in vivo ротиготиновых микросфер

Была построена корреляционная диаграмма с накопленными данными по высвобождению in vitro и данными по высвобождению in vivo из микросфер, приготовленных в ПРИМЕРЕ 22 - фиг.32 (линейное уравнение: y=1.2137x-3.7464, r=0.9943). Можно видеть из фиг.32, что время высвобождения препарата in vitro и процент абсорбции ротиготиновых микросфер in vivo находятся в хорошей корреляции, что указывает, что выбранные условия высвобождения in vitro для оценивания высвобождения in vitro из микросфер могут использоваться для предсказания профиля высвобождения in vivo из микросфер.

Испытательный ПРИМЕР 15. Определение молекулярной массы ПЛГлА

Приборы и реактивы

Хроматограф жидкостной высокой эффективности Agilent 1100 (включая насос, колоночную печь, автоматический пробоотборник, детектор показателя преломления и HP-ChemStation с программным обеспечением GPC); хроматографическая колонка: Styragel®HT3 (7.8×300 мм, 10 мкм, диапазон молекулярных масс: 500-30000), Styragel®6E (7.8×300 мм, 10 мкм, диапазон молекулярных масс: 5000-600000); тетрагидрофуран (хроматографический чистый, SK CHEMICAL, G6EE3H); стандарт молекулярной массы полистирола (Fluka, 1226627); Образец: ПЛГлА 7525 5 А, ПЛГлА 7525 4 А, ПЛГлА 5050 2.5 A (Lakeshore Biomaterials, Inc.)

Молекулярные массы образцов определяли эксклюзионной хроматографией. Поскольку полимер ПЛГлА жирорастворим и не поглощал в УФ-области, образцы проверяли на дифференциальном детекторе показателя преломления, используя тетрагидрофуран как растворитель и мобильную фазу. Поскольку молекулярная масса (M_w) полимера ПЛГлА была приблизительно 50,000, диапазон молекулярных масс выбранной хроматографической колонки включал это значение, и диапазон распределения молекулярной массы исследуемых образцов находился в середине диапазона молекулярной массы выбранной хроматографической колонки. Styragel®HT3 (7.8×300 мм, 10 мкм, диапазон ММ: 500-30,000) and Styragel®6E (7.8×300 мм, 10 мкм, диапазон ММ: 5,000-600,000) были соединены последовательно. Поскольку свойства ПЛГлА подобны таковым для полистирола, выбрали смешанный полистирольный стандарт (диапазон молекулярных масс: 500-2,500,000), включающий диапазон молекулярных масс образцов, полученных из Fluka Chemical Corp.

Метод определения

Подходящее количество образца добавляли к мобильной фазе с получением раствора с концентрацией приблизительно 1 мг/мл и подвергали вибрации, чтобы приготовить раствор для теста. Один набор полистирольного стандарта молекулярной массы (3 бутылки, каждая бутылка включала смешанный стандарт 4 стандартных молекулярных масс) добавляли к мобильной фазе для получения раствора с концентрацией 1.0 мг/мл (контрольный раствор). Тест выполняли на дифференциальном детекторе показателя преломления согласно эксклюзионной хроматографии (Китайская Фармакопея 2005, издание II, приложение VH) с использованием гелевых хроматографических колонок и тетрагидрофурана как мобильной фазы при температуре колонки 30°C, расходе 1.0 мл/мин и температуре датчика 35°C. Необходимое количество ацетонитрила (1:500) растворяли в мобильной фазе. 20 мкл разбавленного раствора было введено в жидкостной хроматограф, и была снята хроматограмма с теоретическим числом пластин не менее 10,000 (вычислено по пику ацетонитрила).

20 мкл каждого из контрольных растворов вводили в жидкостной хроматограф, снимали хроматограмму и вычисляли уравнение регрессии (программное обеспечение GPC). 20 мкл испытательного раствора измеряли согласно тому же самому методу, вычисляли средневесовую молекулярную массу, среднечисловую молекулярную массу и распределение молекулярных масс образца (программное обеспечение GPC). Результаты приведены в табл.10, 11 и 12.

Отчет по тесту ММ ПЛГлА из Lakeshore Biomaterials Inc. приведен в табл.11

Молекулярные массы одного из ПЛГлА приведены в табл.12.

Испытательный ПРИМЕР 16. Однородность от партии к партии

Были приготовлены пять партий ротиготиновых микросфер согласно методу ПРИМЕРА 3, ПРИМЕРА 8, ПРИМЕРА 11, ПРИМЕРА 12, ПРИМЕРА 14 и ПРИМЕРА 16. Для микросфер были выполнены тесты высвобождения in vitro согласно методу испытательного ПРИМЕРА 1. Данные о высвобождении in vitro для этих 5 партий микросфер, приготовленных в Примере 3, приведены в табл.13, а соответствующие кривые высвобождения показаны на фиг.32.

Данные о высвобождении in vitro 5 партий микросфер, приготовленных в примере 8, помещены в табл.14, а соответствующие кривые высвобождения показаны на фиг.33.

Данные о высвобождении in vitro для 5 партий микросфер, приготовленных в Примере 14, показаны в табл.15, а соответствующие кривые высвобождения показаны на фиг.34.

Данные о высвобождении in vitro для 5 партий микросфер, приготовленных в Примере 16, показаны в табл.6, а соответствующие кривые высвобождения показаны на фиг.35.

Данные о высвобождении in vitro для 5 партий микросфер, приготовленных в Примере 11, показаны в табл.17, а соответствующие кривые высвобождения показаны на фиг.36.

Данные о высвобождении in vitro для 5 партий микросфер, приготовленных в Примере 12, показаны в табл.18, а соответствующие кривые высвобождения показаны на фиг.37.

Claims (23)

1. Фармацевтическая микросферная композиция, включающая ротиготин или его фармацевтически приемлемую соль; по крайней мере один полилактид-гликолид (ПЛГлА) с молекулярной массой 5000-100000 Да и полимеризационным соотношением лактид:гликолид от 95:5 до 5:95; и, по меньшей мере, одну жирную кислоту, имеющую 8-24 атомов углерода, где ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляет 20-40%, ПЛГлА составляет 45-79%, и, по меньшей мере, одна жирная кислота составляет 1-15% по весу относительно общего веса композиции.

2. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что фармацевтически приемлемая соль образована с неорганической или органической кислотой.

3. Композиция по п. 2, характеризующаяся тем, что неорганическая кислота выбрана из списка: соляная кислота, серная кислота, фосфорная кислота и азотная кислота.

4. Композиция по п. 2, характеризующаяся тем, что органическая кислота выбрана из списка: лимонная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, уксусная кислота, бензойная кислота, молочная кислота, метансульфоновая кислота, нафталинсульфоновая кислота и толуол-п-сульфоновая кислота.

5. Композиция по п. 2, характеризующаяся тем, что органическая кислота - кислая аминокислота, выбранная из списка: глютаминовая кислота и аспарагиновая кислота.

6. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляет 20-40%, по крайней мере, один ПЛГлА составляет 57.5-72.5% и жирная кислота составляет 2.5-7.5% от общей массы состава.

7. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляет 20-40%, по крайней мере, один ПЛГлА составляет 57.5-77.5% и жирная кислота составляет 2.5% от общей массы состава.

8. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляет 30%, по крайней мере один ПЛГлА 55-69% и жирная кислота составляет 1-15% от общей массы состава.

9. Композиция по п. 8, характеризующаяся тем, что ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляет 30%, по крайней мере, один ПЛГлА составляет 62.5-67.5% и жирная кислота составляет 2.5-7.5% от общей массы состава.

10. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что полимеризационное соотношение лактид/гликолид находится от 75:25 до 25:75.

11. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что, по крайней мере, один ПЛГлА включает первый ПЛГлА и второй ПЛГлА, причем молекулярная масса первого ПЛГлА - 42000-75000 Да, молекулярная масса второго ПЛГлА - 15000-35000 Да, и весовое соотношение первого и второго ПЛГлА - от 95:5 до 5:95.

12. Композиция по п. 11, характеризующаяся тем, что первый ПЛГлА выбран из списка: ПЛГлА (7525 4 А) и ПЛГлА (7525 5 А), а второй ПЛГлА - это ПЛГлА (5050 2.5 А).

13. Композиция по п. 11, характеризующаяся тем, что весовое соотношение первого и второго ПЛГлА примерно 50:50.

14. Композиция по п. 11, характеризующаяся тем, что ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляет 20-40%, количество первого и второго ПЛГлА составляет 57.5-72.5% и жирная кислота составляет 2.5-7.5% от общей массы состава.

15. Композиция по п. 11, характеризующаяся тем, что ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляет 20-40%, количество первого и второго ПЛГлА составляет 57.5-77.5% и жирная кислота составляет 2.5% от общей массы состава.

16. Композиция по п. 11, характеризующаяся тем, что ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляет 30%, количество первого и второго ПЛГлА составляет 55-69% и жирная кислота составляет 1-15% от общей массы состава.

17. Композиция по п. 16, характеризующаяся тем, что ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляет 30%, количество первого и второго ПЛГлА составляет 62.5-67.5% и жирная кислота составляет 2.5-7.5% от общей массы состава.

18. Композиция по п. 17, характеризующаяся тем, что ротиготин или его фармацевтически приемлемая соль составляет 30%, количество первого и второго ПЛГлА составляет 67.5% и жирная кислота составляет 2.5% от общей массы состава.

19. Композиция по п. 17. характеризующаяся тем, что, по меньшей мере, одна жирная кислота выбирается из стеариновой кислоты, пальмитиновой кислоты, олеиновой кислоты, декановой кислоты, октановой кислоты или лигноцериновой кислоты.

20. Композиция по п. 19, характеризующаяся тем, что, по меньшей мере, одна жирная кислота - это стеариновая кислота.

21. Применение композиции по любому из пп.1-20 в качестве средства для лечения заболевания, связанного с рецепторами допамина и/или болезнью Паркинсона.

22. Способ лечения заболевания, связанного с рецепторами допамина и/или болезнью Паркинсона, включающий введение эффективного количества композиции по любому из пп. 1-20 нуждающемуся пациенту.

23. Способ по п. 22, в котором композицию по любому из пп. 1-20 вводят парентерально.

Images