RU2555549C2 - ШТАММ Bacillus sp. ДЛЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ БОРЬБЫ С Saprolegnia sp. И ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ - Google Patents
ШТАММ Bacillus sp. ДЛЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ БОРЬБЫ С Saprolegnia sp. И ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ Download PDFInfo
- Publication number
- RU2555549C2 RU2555549C2 RU2013138150/10A RU2013138150A RU2555549C2 RU 2555549 C2 RU2555549 C2 RU 2555549C2 RU 2013138150/10 A RU2013138150/10 A RU 2013138150/10A RU 2013138150 A RU2013138150 A RU 2013138150A RU 2555549 C2 RU2555549 C2 RU 2555549C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- bacillus
- strain
- culture fluid
- saprolegnia
- fish
- Prior art date
Links
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 title claims abstract description 65
- 241001385942 Saprolegnia sp. Species 0.000 title claims abstract description 41
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 claims abstract description 45
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims abstract description 42
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 38
- 230000000529 probiotic Effects 0.000 claims abstract description 35
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 claims abstract description 34
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 claims abstract description 34
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 28
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 7
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000000843 anti-fungal Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 26
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 claims description 19
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 claims description 19
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 13
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 12
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 claims description 10
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 6
- 230000001488 breeding Effects 0.000 claims 1
- 239000000589 Siderophore Substances 0.000 abstract description 39
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 abstract description 34
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 24
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 21
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 17
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 abstract description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 6
- 244000052769 pathogens Species 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 abstract description 4
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 abstract description 4
- 230000036826 Excretion Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 abstract description 2
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 abstract description 2
- 241000233667 Saprolegnia Species 0.000 abstract 1
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 abstract 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 35
- 239000000047 product Substances 0.000 description 27
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 25
- 239000002609 media Substances 0.000 description 24
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 21
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 21
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 19
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 16
- 230000000845 anti-microbial Effects 0.000 description 15
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 14
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 12
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 9
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N nitrous acid Chemical compound ON=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 241000607525 Aeromonas salmonicida Species 0.000 description 8
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- -1 iron ions Chemical class 0.000 description 8
- 229940088598 Enzyme Drugs 0.000 description 7
- 244000053095 fungal pathogens Species 0.000 description 7
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 6
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 6
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 6
- 241000607618 Vibrio harveyi Species 0.000 description 6
- 230000001079 digestive Effects 0.000 description 6
- 230000002255 enzymatic Effects 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 240000008371 Bacillus subtilis Species 0.000 description 5
- 229940075615 Bacillus subtilis Drugs 0.000 description 5
- 229940106157 CELLULASE Drugs 0.000 description 5
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000003042 antagnostic Effects 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 4
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 4
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 4
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 4
- 102000033147 ERVK-25 Human genes 0.000 description 4
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 4
- 108091005771 Peptidases Proteins 0.000 description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 4
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 4
- 229940118696 Vibrio cholerae Drugs 0.000 description 4
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 4
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 4
- 230000002949 hemolytic Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 108090001060 lipase Proteins 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 4
- 239000007218 ym medium Substances 0.000 description 4
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 3
- 241000607471 Edwardsiella tarda Species 0.000 description 3
- 229960001031 Glucose Drugs 0.000 description 3
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 3
- 229940039696 Lactobacillus Drugs 0.000 description 3
- 229940040461 Lipase Drugs 0.000 description 3
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 3
- 241000269908 Platichthys flesus Species 0.000 description 3
- 108020001027 Ribosomal DNA Proteins 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 241000544286 Vibrio anguillarum Species 0.000 description 3
- 241000607265 Vibrio vulnificus Species 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 3
- 239000007621 bhi medium Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 3
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 3
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 3
- 102000004882 lipase Human genes 0.000 description 3
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 3
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival Effects 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N β-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 102100001249 ALB Human genes 0.000 description 2
- 101710027066 ALB Proteins 0.000 description 2
- 240000002290 Acorus calamus Species 0.000 description 2
- 241001328122 Bacillus clausii Species 0.000 description 2
- 241000193749 Bacillus coagulans Species 0.000 description 2
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 description 2
- 206010060945 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 2
- LVDKZNITIUWNER-UHFFFAOYSA-N Bronopol Chemical compound OCC(Br)(CO)[N+]([O-])=O LVDKZNITIUWNER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N Catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 2
- BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N Fructose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)CO BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N 0.000 description 2
- 210000000936 Intestines Anatomy 0.000 description 2
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K Iron(III) chloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N L-Fucose Natural products C[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N Lactose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)O[C@@H]1CO)[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1 GUBGYTABKSRVRQ-UUNJERMWSA-N 0.000 description 2
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 2
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 2
- 241000277275 Oncorhynchus mykiss Species 0.000 description 2
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 description 2
- 241000194056 Streptococcus iniae Species 0.000 description 2
- 244000057717 Streptococcus lactis Species 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 description 2
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 2
- 229940050528 albumin Drugs 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial Effects 0.000 description 2
- 230000000111 anti-oxidant Effects 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 2
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 2
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 2
- 229960003168 bronopol Drugs 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L cacl2 Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000000855 fungicidal Effects 0.000 description 2
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L mgso4 Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic Effects 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N piperazine Chemical compound C1CNCCN1 GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001690 polydopamine Polymers 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 239000006150 trypticase soy agar Substances 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229930003231 vitamins Natural products 0.000 description 2
- XDIYNQZUNSSENW-UUBOPVPUSA-N (2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O XDIYNQZUNSSENW-UUBOPVPUSA-N 0.000 description 1
- VBUYCZFBVCCYFD-JJYYJPOSSA-M 2-dehydro-D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)C([O-])=O VBUYCZFBVCCYFD-JJYYJPOSSA-M 0.000 description 1
- IZSRJDGCGRAUAR-MROZADKFSA-M 5-dehydro-D-gluconate Chemical compound OCC(=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O IZSRJDGCGRAUAR-MROZADKFSA-M 0.000 description 1
- 235000006480 Acorus calamus Nutrition 0.000 description 1
- XHCADAYNFIFUHF-BGNCJLHMSA-N Aesculin Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-BGNCJLHMSA-N 0.000 description 1
- 229940089837 Amygdalin Drugs 0.000 description 1
- XUCIJNAGGSZNQT-IJDPOVSISA-N Amygdalin Natural products O([C@H](C#N)c1ccccc1)[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O1 XUCIJNAGGSZNQT-IJDPOVSISA-N 0.000 description 1
- 229920000945 Amylopectin Polymers 0.000 description 1
- WMGFVAGNIYUEEP-WUYNJSITSA-N Amylopectin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](OC[C@@H]2[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]3[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]3O)CO)O2)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@H]1O WMGFVAGNIYUEEP-WUYNJSITSA-N 0.000 description 1
- 229960000271 Arbutin Drugs 0.000 description 1
- BJRNKVDFDLYUGJ-RMPHRYRLSA-N Arbutin Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C(O)C=C1 BJRNKVDFDLYUGJ-RMPHRYRLSA-N 0.000 description 1
- 241000209134 Arundinaria Species 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 229940075612 Bacillus cereus Drugs 0.000 description 1
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 1
- 229940054340 Bacillus coagulans Drugs 0.000 description 1
- 241000194108 Bacillus licheniformis Species 0.000 description 1
- 241000753557 Bacillus sp. W30 Species 0.000 description 1
- 210000000941 Bile Anatomy 0.000 description 1
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 1
- IWQUODCHSDELBL-ZGYNEYMNSA-N C[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO IWQUODCHSDELBL-ZGYNEYMNSA-N 0.000 description 1
- 235000011996 Calamus deerratus Nutrition 0.000 description 1
- CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L Calcium stearate Chemical compound [Ca+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CJZGTCYPCWQAJB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940041514 Candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 241000238366 Cephalopoda Species 0.000 description 1
- 240000001817 Cereus hexagonus Species 0.000 description 1
- IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L Congo red Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)/N=N/C3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S([O-])(=O)=O)N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-KCDKBNATSA-N D-(+)-Galactose Natural products OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-KCDKBNATSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N D-Mannitol Natural products OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KAZBKCHUSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 229940061607 Dibasic Sodium Phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229940111685 Dibasic potassium phosphate Drugs 0.000 description 1
- NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K Dicalcium phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O NEFBYIFKOOEVPA-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000019739 Dicalciumphosphate Nutrition 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L Dipotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000003743 Erythrocytes Anatomy 0.000 description 1
- 229940093496 Esculin Drugs 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 1
- 241000427940 Fusarium solani Species 0.000 description 1
- 210000001035 Gastrointestinal Tract Anatomy 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 1
- 240000007842 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 229940096919 Glycogen Drugs 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- BYSGBSNPRWKUQH-UJDJLXLFSA-N Glycogen Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O1 BYSGBSNPRWKUQH-UJDJLXLFSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003128 Head Anatomy 0.000 description 1
- 229960000367 Inositol Drugs 0.000 description 1
- 208000007906 Intestinal Disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004347 Intestinal Mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 1
- 229940029339 Inulin Drugs 0.000 description 1
- 240000003613 Ipomoea batatas Species 0.000 description 1
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-OWMBCFKOSA-N L-ribopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-OWMBCFKOSA-N 0.000 description 1
- 241000442132 Lactarius lactarius Species 0.000 description 1
- 210000004185 Liver Anatomy 0.000 description 1
- 229940107698 Malachite green Drugs 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-YOLKTULGSA-N Maltose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@H]1CO)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 GUBGYTABKSRVRQ-YOLKTULGSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- USSIQXCVUWKGNF-UHFFFAOYSA-N Methadone Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(CC(C)N(C)C)(C(=O)CC)C1=CC=CC=C1 USSIQXCVUWKGNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GBDLMECRPIKBSW-OXLAJSKYSA-N OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(=O)CO Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(=O)CO GBDLMECRPIKBSW-OXLAJSKYSA-N 0.000 description 1
- HLNRBHDRGMNBEG-UHFFFAOYSA-N ON=O.ON=O Chemical compound ON=O.ON=O HLNRBHDRGMNBEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 206010037075 Protozoal infection Diseases 0.000 description 1
- 241001646398 Pseudomonas chlororaphis Species 0.000 description 1
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 description 1
- 210000003324 RBC Anatomy 0.000 description 1
- 241000589157 Rhizobiales Species 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N Ribitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N Salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 1
- 210000003491 Skin Anatomy 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 description 1
- 240000008529 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 229940029983 VITAMINS Drugs 0.000 description 1
- 206010047461 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 208000001756 Virus Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 229940088594 Vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229940021016 Vitamin IV solution additives Drugs 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N Xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 Xylitol Drugs 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 238000005276 aerator Methods 0.000 description 1
- 238000009632 agar plate Methods 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WISUUJSJSA-N aldehydo-L-xylose Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WISUUJSJSA-N 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002363 auxin Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogens Species 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000013539 calcium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008116 calcium stearate Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 235000005824 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000004059 degradation Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 description 1
- 230000000249 desinfective Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 229940038472 dicalcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229910000390 dicalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting Effects 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 235000013360 fish flour Nutrition 0.000 description 1
- 235000013332 fish product Nutrition 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 239000008098 formaldehyde solution Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002538 fungal Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 1
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 1
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal Effects 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000000670 limiting Effects 0.000 description 1
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002934 lysing Effects 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- VFCNQNZNPKRXIT-UHFFFAOYSA-N malachite green cation Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)=C1C=CC(=[N+](C)C)C=C1 VFCNQNZNPKRXIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 235000014571 nuts Nutrition 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N oxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000045947 parasites Species 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002335 preservative Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reduced Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory Effects 0.000 description 1
- 238000001223 reverse osmosis Methods 0.000 description 1
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 150000004760 silicates Chemical class 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940045902 sodium stearyl fumarate Drugs 0.000 description 1
- STFSJTPVIIDAQX-LTRPLHCISA-M sodium;(E)-4-octadecoxy-4-oxobut-2-enoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCCOC(=O)\C=C\C([O-])=O STFSJTPVIIDAQX-LTRPLHCISA-M 0.000 description 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 1
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000021307 wheat Nutrition 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
- A01N63/22—Bacillus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/80—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for aquatic animals, e.g. fish, crustaceans or molluscs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
- C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
Abstract
Группа изобретений относится к области биотехнологии и микробиологии. Предложены штамм Bacillus sp. КССМ11143Р, обладающий противогрибковой активностью в отношении Saprolegnia sp., культуральная жидкость, полученная при культивировании штамма, пробиотическая композиция, кормовая добавка, противогрибковое средство и средство для улучшения качества воды, содержащие штамм Bacillus sp. КССМ11143Р или его культуральную жидкость. Также предложены способ культивирования рыбы или ракообразных, способ предотвращения сапролегниоза у животных и способ улучшения качества воды с использованием штамма Bacillus sp. КССМ11143Р или его культуральной жидкости. Штамм Bacillus sp. КССМ11143Р имеет высокий уровень продуктивности сидерофоров с проявлением высокой способности захвата железа, и таким образом ингибирует рост других патогенных бактерий и Saprolegnia sp., способствует увеличению скорости потребления пищи рыбой и скорости увеличения веса, а также снижению уровня экскреции, что приводит к улучшению качества воды. 9 н. и 1 з.п. ф-лы, 4 ил., 11 табл., 15 пр.
Description
Область техники
Изобретение относится: к пробиотикам для биологической борьбы с Saprolegnia sp. и, в частности, к свежевыделенному штамму Bacillus, который ингибирует рост патогенного гриба Saprolegnia sp.и продуцирует сидерофоры; культуральной жидкости, полученной при культивировании штамма, ее концентрату или сухому продукту из нее; пробиотической композиции, кормовой добавке, противомикробному средству, противогрибковому средству или средству для улучшения качества воды, включающим штамм, его культуральную жидкость, ее концентрат или сухой продукт из нее; способу культивирования рыб или ракообразных с применением штамма, его культуральной жидкости, ее концентрата или сухого продукта из нее; способу предотвращения сапролегниоза у животных путем добавления штамма, его культуральной жидкости, ее концентрата или сухого продукта из нее; и способу улучшения качества воды путем обработки штаммом, его культуральной жидкостью, ее концентратом или сухим продуктом из нее.
Уровень техники
В развитых регионах, таких как США, Европа и Япония, много внимания уделялось улучшению режима питания для предотвращения заболеваний у взрослых, так как население мира и уровень жизни людей растут. Соответственно, спрос на рыбные продукты продолжает увеличиваться, что приводит к быстрому росту продукции аквакультуры. Отрасль аквакультуры стала вносить важный вклад в экономику многих стран, а вспышка заболеваний среди культивируемой рыбы приводит к значительным экономическим потерям (Jose Luis Balcazar et al. Veter. Microbio. 114(2006):173-186; Laurent venrschuere et al. Microbio. Mot. BioLRev. Dec. 2000. 655-671).
Возникновение заболеваний на рыбных фермах вызвано инфицированной рыбой или патогенами, которые переносятся из морской окружающей среды вблизи аквакультурных ферм, а также вызвано поставкой зараженного рыбного корма или антисанитарными условиями на рыбных фермах. Инфекционные заболевания рыбы делятся на грибковые, бактериальные и вирусные инфекции. Среди них типичную грибковую инфекцию вызывает Saprolegnia sp. (Diagnosis of Fish Diseases and Treatment Measures, The Ministry of Maritime Affairs and Fisheries, 2001). Saprolegnia sp. повсеместно распространена в пресноводных экосистемах и является главным родом водных плесеней, ответственных за значимые грибковые инфекции пресноводной рыбы. Saprolegnia sp. внедряется в эпидермальные ткани рыбы, обычно начиная с головы или плавников, и может распространяться по всей поверхности туловища, что приводит к возникновению серьезных заболеваний на рыбных хозяйствах. Сообщалось, что Saprolegnia sp. вызывает первичные инфекции, но в большинстве случаев встречается как вторичный патоген после первичного повреждения кожного покрова рыбы, вызванного паразитами, такими как вирусы и бактерии (Производство водных грибов и рыбы в Египте, II-in vivo этап исследований).
Для предотвращения повреждений, вызванных Saprolegnia sp., использовались синтетические фунгициды (например, малахитовый зеленый и т.д.). Однако эти синтетические фунгициды с трудом поддаются биологическому разложению и имеют тенденцию к сохранению в окружающей среде, что вызывает ухудшение качества окружающей среды, а также вызывает умеренные или тяжелые неблагоприятные эффекты, а некоторые грибы развили устойчивость к этим химическим веществам. Таким образом, применение этих химических веществ стало ограниченным, и было произведено много работ для разработки альтернатив для них (Ebele М. et al. African Journal of Biotechnology Vol. 8 (24), 7130-7132, 2009). В одной из таких работ, патенте США №6160023, раскрыты применение бронопола в лечении различных заболеваний водных организмов, включая грибковые инфекции, протозойные инфекции и бактериальный бранхионекроз, и способ дезинфекции контейнеров для рыбы и/или оборудования с использованием бронопола. Подобным образом, в патенте Кореи №0782500 раскрыто терапевтическое средство от грибковой инфекции рыбы, содержащее экстракт аира тростникового (acorus calamus) в качестве активного ингредиента.
При этом с растущим спросом на безвредную для окружающей среды аквакультуру в настоящее время широкое признание получает применение пробиотиков в качестве усиливающего иммунитет средства. Применение пробитиков популяризировал в 1989 г. R. Fuller, и были составлены в виде кормовой добавки из живых микроорганизмов, которая благоприятно влияет на хозяина за счет улучшения его кишечного микробного баланса. Например, в качестве пробиотиков использовались бактерии, такие как Lactobacillus, Enterococcus, Bifidobacterium и Bacillus, дрожжи, такие как Saccharomyces, и грибы, такие как Aspergillus. Пробиотики классифицированы как GRAS (общепризнанные безопасными) и не содержат генов, токсичных для человека и животного, а также из них не образуются патогенные вещества. Пробиотики представляют собой микроорганизмы, которые, как доказано, являются эффективными для улучшения продуктивности сельскохозяйственных животных. Пробиотики характеризуются отсутствием патогенности, беспрепятственной пролиферацией in vitro, быстрым ростом в организме и устойчивостью к кислоте и желчи. В дополнение к этому, их активность не должна ингибироваться кормовыми ингредиентами, их эффекты должны сохраняться при комнатной температуре и для удобства они должны легко смешиваться с кормом.
Пробиотики являются эффективными в отношении конкуренции с патогенными бактериями, которые вызывают кишечные заболевания, в отношении предотвращения их прочной адгезии к кишечному эпителию и в отношении быстрого восстановления кишечной микрофлоры, измененной в результате лечения антибиотиками. Кроме того, пробиотики предотвращают инфекцию, вызываемую патогенными микроорганизмами, и ингибируют их пролиферацию, способствуют пролиферации кишечной микрофлоры за счет поддержания оптимальных условий, продуцируют молочную кислоту или уксусную кислоту, составляющие органические кислоты кишечника, и снижают pH в кишечнике для предотвращения пролиферации вредных патогенных бактерий. Таким образом, скармливание пробиотиков с вышеописанными множественными механизмами действия поддерживает кишечную микрофлору и повышает продуктивность сельскохозяйственных животных. В аквакультуре пробиотики также добавляют в рыбный корм или дополнительно в воду. Недавние исследования были проведены для повышения иммунитета к патогенам и улучшения качества воды с применением пробиотиков при культивировании рыб или креветок (Jiqiu Li et al. Aquaculture 291(2009) 3540). Примерами пробиотиков, используемых для биологической борьбы в аквакультуре, служат полезные бактерии, такие как Lactobacillus, Enterococcus и Bacillus. Bacillus представляет собой грамположительную, палочковидную, образующую эндоспоры бактерию и отличается морфологией среди штаммов, используемых в качестве пробиотиков. Штаммы, такие как Bacillus subtilis (В. subtilis), Bacillus cereus (В. cereus), Bacillus coagulans (B. coagulans), Bacillus clausii (B. clausii), Bacillus megaterium (B. megaterium) и Bacillus licheraformis (B. licheniformis), используются в качестве пробиотиков. Bacillus превосходит в термоустойчивости Lactobacillus, который не образует эндоспоры. Кроме того, Bacillus способен выживать при низком pH желудочного барьера, и таким образом большая часть поглощенных бактерий попадает в тонкий кишечник неповрежденными (Barbosa, Т.М. et al. Appl. Enviroa Microbiol. 71(2005)968-978; Spinosa, M.R. et al. Res. Microbiol. 151(2000):61-368). Сообщалось, что Bacillus используется в качестве биологически активных добавок к пище людей и в качестве активаторов роста животных, а также используется при культивировании рыб или креветок для активации роста и устойчивости к заболеваниям, улучшает качество воды и скорость роста креветок и снижает количество патогенных вибрионов (Dalmin, G. et al. Indian J. Exp. Biol 39(2001) 939-942; Wang, Y.B. etal. Fish. Sci. 71(2005) 1034-1039).
При этом сидерофор представляет собой своего рода антибиотик, продуцируемый микроорганизмами, включая патогенные бактерии, которые конкурируют с другими микроорганизмами за быстрый рост и распространение в конкретной окружающей среде. Сидерофоры связываются с ионами железа (Fe3+) и затем транспортируются в клетки через высокоаффинную систему транспорта железа, и ионы железа (Fe3+) поддерживают рост микроорганизмов. Микроорганизмы продуцируют сидерофоры из-за конкуренции за ионы железа (Fe3+), а высокий уровень продукции сидерофоров ингибирует рост других микроорганизмов. В этом отношении бактерии, продуцирующие сидерофоры, активно исследовались для использования в качестве потенциального средства биологической борьбы. В 1970 г. изучали конкуренцию специфических к железу сидерофоров, продуцируемых Pseudomonas sp., в качестве способа биологической борьбы для ингибирования роста патогенов растений (Sang-Min Woo and Sang-Dal Kim, Kor. J. Microbiol. Biotechnol. Vol. 36(4):326-335(2008)), поскольку сообщалось, что супрессивность почв в сельскохозяйственных областях обусловлена антагонистическим действием микроорганизмов в почве. До настоящего времени сообщалось, что сидерофор представляет собой водорастворимый метаболит с низким молекулярным весом 1 кДа или меньше и высокой аффинностью к ионам железа. В зависимости от функциональных групп, связывающих ион железа, сидерофоры делятся на катехоловые и гидроксаматные, и сидерофоры, и пробиотики продуцирующие таковые, активно исследовались. В одном из исследований в патенте США №6746672 раскрыт способ ингибирования роста Lactococcus lactis (L. lactis) с использованием сидерофоров, продуцируемых бифидобактериями. В патенте Кореи №037043 раскрыт новый антагонистический штамм Pseudomonas fluorescens LS20, продуцирующий сидерофор, способ ингибирования роста патогенной для растений ризобактерии Fusarium solani с использованием Pseudomonas fluorescens LS20 и способ лечения заболеваний, вызванных патогенными для растений грибами, с использованием сидерофоров. В патенте Кореи №0747700 раскрыты продуцирующий сидерофоры Bacillus subtilis и композиция для борьбы с Phytophtora capsici или Fusarium oxysporum, включающая продуцируемые им сидерофоры в качестве активного ингредиента
В большей части родственных патентов упоминалось о применении продуцирующих сидерофоры микроорганизмов для биологической борьбы с патогенными для растений бактериями и грибами и не было сообщения о пробиотике на основе Bacillus, применяемом для ингибирования патогенных для рыб бактерий.
Авторы настоящего изобретения выделили пробиотики из природного источника, в котором пробиотики обладают высокой противомикробной активностью против патогенных бактерий и превосходным уровнем продукции пищеварительных ферментов при культивировании рыб и креветок, и они изучили их морфологические, биохимические и генетические свойства. В результате они обнаружили, что пробиотики представляют собой Bacillus с высокой термоустойчивостью, и Bacillus имеет высокий уровень продукции сидерофоров и ингабирования роста водного гриба Saprolegnia sp.
Раскрытие настоящего изобретения
Техническая задача
Соответственно, авторы настоящего изобретения обнаружили, что свежевыделенный Bacillus sp. ингибирует рост водного гриба Saprolegnia sp., и имеет высокий уровень продукции сидерофоров для конкуренции с патогенными бактериями за захват железа, и таким образом может применяться в качестве пробиотической композиции для культивирования рыб и ракообразных, тем самым осуществляя настоящее изобретение.
Решение технической задачи
Целью настоящего изобретения является обеспечение свежевыделенного штамма Bacillus, который ингибирует рост Saprolegnia sp. и продуцирует сидерофоры.
Другой целью настоящего изобретения является обеспечение культуральной жидкости, полученной при культивировании штамма, ее концентрата или сухого продукта из нее.
Еще одной целью настоящего изобретения является обеспечение пробиотической композиции, включающей штамм, его культуральную жидкость, ее концентрат или сухой продукт из нее.
Еще одной целью настоящего изобретения является обеспечение кормовой добавки, включающей штамм, его культуральную жидкость, ее концентрат или сухой продукт из нее.
Еще одной целью настоящего изобретения является обеспечение способа культивирования рыб или ракообразных с применением штамма, его культуральной жидкости, ее концентрата или сухого продукта из нее.
Еще одной целью настоящего изобретения является обеспечение противомикробного средства или противогрибкового средства, включающего штамм, его культуральную жидкость, ее концентрат или сухой продукт из нее.
Еще одной целью настоящего изобретения является обеспечение способа предотвращения сапролегниоза путем добавления штамма, его культуральной жидкости, ее концентрата или сухого продукта из нее.
Еще одной целью настоящего изобретения является обеспечение средства для улучшения качества воды, включающего штамм, его культуральную жидкость, ее концентрат или сухой продукт из нее.
Еще одной целью настоящего изобретения является обеспечение способа улучшения качества воды путем обработки штаммом, его культуральной жидкостью, ее концентратом или сухим продуктом из нее.
Полезные эффекты настоящего изобретения
Свежевыделенный Bacillus sp. CJP-14 настоящего изобретения оказывает сильное противогрибковое действие на водный гриб Saprolegnia sp., а также продуцирует сидерофоры.
Таким образом, его можно широко применять в различных продуктах, способствующих борьбе с грибковыми инфекциями, включающими инфекцию Saprolegnia sp. и бактериальные инфекции, таких как кормовые добавки для культивирования водных организмов, пробиотические композиции и средства для улучшения качества воды.
Краткое описание графических материалов
Фиг. 1 представляет собой фотографию, на которой показано, что Bacillus sp. CJP-14 настоящего изобретения ингибировал рост водного гриба Saprolegnia sp.
Фиг. 2 представляет собой фотографию, на которой показана противомикробная активность Bacillus sp. CJP-14 настоящего изобретения за счет образования сидерофоров, направленная на патогены рыбы Vibrio harveyi (VHl, VH2, VH3), Vibrio cholerae (VC), Vibrio vulnificus (W) и Aeromonas salmonicida (AS), в среде CAS.
Фиг. 3 представляет собой фотографию, на которой показано наличие гемолиза Bacillus sp. CJP-14 настоящего изобретения; и
Фиг. 4 представляет собой фотографию, на которой показана утилизация азотистой кислоты Bacillus sp. CJP-14 настоящего изобретения.
Наилучший способ осуществления настоящего изобретения
В одном варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает свежевыделенный Bacillus sp. CJP-14 (КССМ11143Р). Штамм способен продуцировать сидерофоры, а также ингибировать рост Saprolegnia sp.
Конкретно, полученные из морской воды образцы собирали на креветочных фермах вокруг острова Канхвадо и культивировали в плотной среде BHI, дополненной 3% хлоридом натрия. Затем колонии наблюдали на предмет образования групп и выделяли штаммы.
Из выделенных штаммов путем первичного скрининга отобрали штаммы, проявившие высокую противобактериальную активность по отношению к типичным патогенным бактериям, поражающим культивируемую рыбу, включающим Aeromonas salmonicida, Vibrio harveyi, Vibrio anguillarum, Edwardsiella tarda, Streptococcus iniae и Vibrio haemolyticus.
Из отобранных путем первичного скрининга штаммов с высокой противобактериальной активностью путем вторичного скрининга отобрали штаммы с высокой активностью пищеварительных ферментов, таких как протеаза, целлюлаза, амилаза и липаза.
Из отобранных путем вторичного скрининга штаммов в конечном итоге отобрали Bacillus sp. CJP-14, оказывающий сильное ингибирующее действие на Saprolegnia sp., который представляет собой патогенный гриб пресноводной рыбы с высоким уровнем продукции сидерофоров для захвата ионов железа (Fe3+), тем самым оказывающий основанное на конкуренции антагонистическое действие на рост других патогенных бактерий.
Bacillus sp. CJP-14 имеет морфологию грамположительной палочковидной бактерии, и в результате анализа последовательности оснований 16s pДНК показано, что она имеет 99% гомологии с Bacillus sp.W30. Если этот результат сравнить с результатом, что по отношению к последовательности оснований 16s pДНК известного продуцирующего сидерофоры Bacillus subtilis АН18 показано, что она имеет 98% гомологии с таковой штамма CICC 10088 Bacillus subtilis (см. патент Кореи №0717700), то можно увидеть, что штамм настоящего изобретения представляет собой новый неизвестный ранее штамм. Помимо этого, штамм настоящего изобретения способен продуцировать сидерофор, а также целлюлазу, протеазу, амилазу и липазу, тогда как Bacillus subtilis АН 18 способен продуцировать целлюлазу и ауксин в дополнение к сидерофорам, это указывает на то, что штамм настоящего изобретения представляет собой новый неизвестный ранее штамм.
Соответственно, авторы настоящего изобретения депонировали свежевыделенный Bacillus sp. CJP-14 в Корейской федерации коллекций культур (Korean Federation of Culture Collection) (в Корейском центре культур микроорганизмов (Korean Culture Center of Microorganisms), 361-221, Yurim B/D 3F, Hongje-l-dong, Seodaemun-gu, Сеул) 14 декабря 2010 г. как "Bacillus sp. CJP-14" (KCCM11143P).
В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает культуральную жидкость, полученную при культивировании свежевыделенного штамма Bacillus sp., ее концентрат или сухой продукт из нее. Конкретно, под культуральной жидкостью настоящего изобретения понимают среду, в которой культивировали свежевыделенный штамм CJP-14 Bacillus sp., и предпочтительно культуральную среду, включающую штамм.
Как используется в данном документе, под культуральной средой понимают среду, включающую питательные вещества, которые требуются для культивирования клеток животных, клеток растений или бактерий, а под культуральной жидкостью понимают жидкую среду, в которую инокулируют штамм и где его культивируют. Культуральной жидкостью может быть среда, включающая штамм или культуральный фильтрат, который получают путем удаления штамма из культуральной жидкости, в которую инокулировали штамм и где его культивируют. Под концентратом культуральной жидкости понимают концентрат, полученный путем концентрирования культуральной жидкости, а сухой продукт из культуральной жидкости означает сухой продукт, полученный путем удаления воды из культуральной жидкости. Концентрат культуральной жидкости может быть получен с использованием любых подходящих способов концентрирования, таких как концентрирование выпариванием, концентрирование вымораживанием, концентрирование при помощи обратного осмоса и/или концентрирование в вакууме.
Способ сушки может включать сушку воздухом, естественную сушку, сушку распылением и сушку вымораживанием, но не ограничивается ими.
Еще в одном варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает пробиотическую композицию, содержащую в качестве активного ингредиента свежевыделенный Bacillus sp. или его культуральную жидкость, ее концентрат или сухой продукт из нее и фармацевтически приемлемый носитель.
Как используется в данном документе, выражение "фармацевтически приемлемый носитель" относится к носителю или разбавителю, который не вызывает значительного раздражения организма и не нивелирует биологическую активность и свойства вводимого соединения. Для составления композиции в виде жидкого препарата можно использовать фармацевтически приемлемый носитель, который является стерильным и биосовместимым, такой как физиологический раствор, стерильная вода, стабилизированный буфером физиологический раствор, раствор альбумина для инфузий, раствор декстрозы, раствор мальтодекстрина, глицерин и смесь одного или нескольких из них. В случае необходимости можно добавлять другие общепринятые добавки, такие как антиоксиданты, буферы, бактериостатические средства и тому подобное. Кроме того, можно дополнительно добавлять в композицию разбавители, диспергирующие вещества, поверхностно-активные вещества, связывающие вещества и смазывающие вещества для приготовления инъекционных составов, таких как водные растворы, суспензии и эмульсии, или пилюль, капсул, гранул или таблеток.
Свежевыделенный Bacillus sp., который включен в качестве активного ингредиента в пробиотики настоящего изобретения, обитает в желудочно-кишечном тракте культивируемой рыбы или ракообразных для ингибирования вредных бактерий и размножения патогенных бактерий. Помимо этого, полезные пищеварительные ферменты, продуцируемые штаммом, способствуют всасыванию и полезности питательных веществ для улучшения коэффициента конверсии корма.
Композиция настоящего изобретения включает от 5×104 КОЕ/мл до 5×1010 КОЕ/мл и предпочтительно от 1×106 КОЕ/мл до 1×109 КОЕ/мл Bacillus CJP-14.
Предпочтительно композицию настоящего изобретения можно получить в виде лекарственных форм для перорального применения, и примеры лекарственных форм для перорального применения могут включать таблетки, пастилки, леденцы, водные или маслянистые суспензии, порошок или гранулы, эмульсии, твердые или мягкие капсулы, сиропы или эликсиры. Для состава, такого как таблетки и капсулы, пригодным является связывающее вещество, такое как лактоза, сахароза, сорбит, маннит, крахмал, амилопектин, целлюлоза или желатин, наполнитель, такой как дикальцийфосфат, разрыхлитель, такой как кукурузный крахмал или крахмал батата, смазывающее вещество, такое как стеарат магния, стеарат кальция, стеарилфумарат натрия или воск на основе полиэтиленгликоля. Для капсул, кроме того, можно использовать жидкий носитель, такой как липид, в дополнение к вышеупомянутым соединениям.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает кормовую добавку, включающую свежевыделенный штамм Bacillus sp. или его культуральную жидкость, ее концентрат или сухой продукт из нее.
Как правило, все виды Bacillus могут образовывать эндоспоры для того, чтобы быть очень устойчивыми к повышенной температуре. Таким образом, свежевыделенный Bacillus sp. CJP-14 можно получить в форме кормовой добавки и затем добавить в корм. В качестве альтернативы свежевыделенный Bacillus sp. CJP-14 можно непосредственно добавлять на протяжении получения корма. Bacillus sp. CJP-14 может находиться в корме настоящего изобретения в форме жидкости или сухого продукта, а предпочтительно в форме сухого порошка. Способ сушки может включать сушку воздухом, естественную сушку, сушку распылением и сушку вымораживанием, но не ограничивается ими. Bacillus sp. CJP-14 настоящего изобретения в порошкообразной форме можно смешивать в соотношении от 0,05% до 10% по весу, а предпочтительно от 0,1% до 1% по весу на основании веса корма. В дополнение к этому, корм для культивирования водных организмов, кроме того, может включать общеизвестные добавки для улучшения сохранности в дополнение к Bacillus sp. CJP-14 настоящего изобретения.
Корма, включающие Bacillus sp. CJP-14 настоящего изобретения, могут включать корма растительного происхождения, такие как зерновые культуры, орехи, побочные продукты пищевой промышленности, водоросли, волокна, масло, крахмалы, муку и побочные продукты переработки зерна, и корма животного происхождения, такие как белки, неорганические вещества, жир, минералы, белки одноклеточных организмов, зоопланктон и рыбную муку, но не ограничиваются ими.
В настоящем изобретении пробиотическая композиция, содержащая Bacillus sp. CJP-14, включает добавки для предотвращения ухудшения качества, такие как связывающие вещества, эмульгаторы и консерванты, и добавки для увеличения полезности, такие как аминокислоты, витамины, ферменты, ароматизаторы, небелковый азот, силикаты, буферные средства, экстракты и олигосахариды, но не ограничивается ими. В дополнение к этому, пробиотическая композиция, содержащая Bacillus sp. CJP-14, кроме того, может включать готовые кормовые смеси, но не ограничивается ими.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ культивирования рыб или ракообразных, включающий этап, на котором обрабатывают рыбу или ракообразных аквакультурных хозяйств с применением свежевыделенного штамма Bacillus, его культуральной жидкости, ее концентрата или сухого продукта из нее.
Как описано выше, свежевыделенный Bacillus sp. CJP-14 настоящего изобретения имеет широкий спектр противомикробной активности, а также оказывает основанное на конкуренции антагонистическое действие для ингибирования роста других патогенных бактерий. Таким образом, штамм применяют для предотвращения заболеваний, вызываемых распространенными патогенными бактериями аквакультуры, таким образом безопасно культивируя рыб или ракообразных.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает противомикробное средство или противогрибковое средство, включающее свежевыделенный штамм Bacillus, его культуральную жидкость, ее концентрат или сухой продукт из нее.
Предполагается, что выражение "предотвращение", использованное в данном документе, охватывает все действия, направленные на ограничение или замедление развития заболевания посредством введения композиции.
Свежевыделенный Bacillus sp. CJP-14 настоящего изобретения обладает противомикробной активностью, направленной против вышеописанных 6 типов патогенных бактерий организмов аквакультуры, и продуцирует сидерофоры с проявлением высокой способности к захвату железа. Таким образом, свежевыделенный Bacillus sp. CJP-14 настоящего изобретения оказывает основанное на конкуренции антагонистическое действие для ингибирования роста других патогенных бактерий. В дополнение к этому, было подтверждено, что свежевыделенный Bacillus sp. CJP-14 способен ингибировать рост патогенного водного гриба Saprolegnia sp. Таким образом, свежевыделенный Bacillus sp. используется дня предотвращения заболеваний, вызываемых вышеописанными патогенными бактериями аквакультуры.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает средство для улучшения качества воды, включающее свежевыделенный Bacillus sp., его культуральную жидкость, ее концентрат или сухой продукт из нее.
Свежевыделенный Bacillus sp. CJP-14 настоящего изобретения можно применять для снижения содержания азотистой кислоты, присутствующей в среде аквакультурных хозяйств.
Для улучшения качества воды свежевыделенный Bacillus sp. CJP-14 настоящего изобретения можно отдельно получить в форме средства для улучшения качества воды или свежевыделенный Bacillus sp. CJP-14, его культуральную жидкость ее концентрат или сухой продукт из нее можно непосредственно распылять. Bacillus sp. CJP-14 может быть в форме жидкости или сухого продукта в составе средства для улучшения качества воды настоящего изобретения, и предпочтительно в форме сухого порошка.
Для средства для улучшения качества воды можно использовать носитель, который является стерильным и биосовместимым, такой как физиологический раствор, стерильная вода, стабилизированный буфером физиологический раствор, раствор альбумина для инфузий, раствор декстрозы, раствор мальтодекстрина, глицерин и смесь одного или нескольких из них. В случае необходимости можно добавлять другие общепринятые добавки, такие как антиоксиданты, буферы, бактериостатические средства и тому подобное. Кроме того, можно дополнительно добавлять в композицию растворители, диспергирующие средства, поверхностно-активные вещества, связывающие вещества и смазывающие вещества для приготовления инъекционных составов, таких как водные растворы, суспензии и эмульсии, или пилюль, капсул, гранул или таблеток.
Если использовать средство для улучшения качества воды, можно улучшить качество воды аквакультурной фермы. Конкретно, средство для улучшения качества воды можно добавлять на аквакультурной ферме до культивирования водных организмов или на протяжении культивирования водных организмов. Предпочтительно его добавляют на аквакультурной ферме до культивирования водных организмов и оставляют на заданный период. Вследствие этого свежевыделенный Bacillus sp. CJP-14 настоящего изобретения в достаточном объеме продуцирует сидерофоры с проявлением высокой способности захвата железа, и таким образом ингибирует рост других патогенных бактерий и Saprolegnia sp. В дополнение к этому, средство для улучшения качества воды добавляют один или несколько раз на протяжении культивирования водных организмов с тем, чтобы предотвратить дополнительный рост Saprolegnia sp.
В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ улучшения качества воды, включающий этап, на котором воду обрабатывают свежевыделенным Bacillus sp., его культуральной жидкостью, ее концентратом или сухим продуктом из нее. Воду улучшенного качества можно использовать на аквакультурной ферме и можно также использовать в качестве питьевой воды для сельскохозяйственных животных или людей. В этом отношении воду, обработанную свежевыделенным Bacillus sp., его культуральной жидкостью, ее концентратом или сухим продуктом из нее, предпочтительно очищают перед использованием, а этап очистки воды осуществляют известным способом.
Способ осуществления настоящего изобретения
Ниже в данном документе настоящее изобретение будет описано более детально со ссылкой на примеры. Однако эти примеры служат исключительно иллюстративным целям; и подразумевается, что настоящее изобретение не ограничено этими примерами.
Пример 1. Выделение Bacillus sp. CJP-14
Пример 1-1. Получение образцов и выделение штамма
Принимая во внимание свойства пробиотиков, которые обладают высокой специфичностью по отношению к окружающей среде и хозяину, авторы настоящего изобретения собирали полученные из морской воды образцы на креветочных фермах, у которых показана низкая степень встречаемости внутренних заболеваний и высокая продуктивность. Собранные образцы подвергали серийному разведению и распределяли по поверхности агара BHI (Difco, США), дополненного 3% хлоридом натрия с последующим культивированием при 37°С в течение 24 часов. Формирование групп штаммов, выделенных из каждого образца, осуществляли путем наблюдения за колониями и отбирали штаммы. Отобранные колонии культивировали три раза в свежей среде для выделения. Выделенные штаммы хранили в среде, содержащей 20% глицерина при -70°С или ниже.
Пример 1-2. Отбор штаммов с высокой противомикробной и противогрибковой активностью
Для первичного отбора штаммов с противомикробной активностью против типичных патогенных бактерий аквакультуры осуществляли тестирование противомикробной активности против 6 типов бактерий, включающих Aeromonas salmonicida, Vibrio harveyi. Vibrio anguillarum, Edwardsiella tarda и Vibrio haemolyticus.
Противомикробную активность против патогенных бактерий оценивали путем анализа чистых зон. 3 мл 0,7% агара (вес/объем) и 150 мкл каждой перемешиваемой культуральной жидкости, полученной от 6 типов патогенных бактерий (ОП 600=2,0), смешивали и наносили на среду BHI для приготовления агара верхнего слоя. 10 мкл культуральной жидкости, полученной от отобранных штаммов, наносили на полученный арат верхнего слоя и культивировали в течение 18 часов при 30°С. Затем наблюдали наличие чистой зоны, окружающей нанесенные штаммы. Из 53 типов отобранных штаммов провели первичный скрининг 20 штаммов, проявляющих противомикробную активность против любого из 6 типов патогенных бактерий аквакультуры (таблица 1).
| Таблица 1 | ||||||||||||||||||
| Противомикробная активность штаммов, прошедших первичный скрининг | ||||||||||||||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | |
| AS | + | - | + | - | - | + | - | - | + | - | + | + | + | + | - | - | - | - |
| SI | + | - | + | - | - | - | + | - | - | - | + | + | + | + | + | - | - | - |
| ET | - | - | - | - | - | + | - | - | - | - | + | + | - | + | - | - | - | - |
| VH | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | + | + | - | + | - | - | - | - |
| VP | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | + | + | - | + | - | - | - | - |
| VA | + | - | + | - | - | + | - | - | - | - | + | - | - | - | - | - | - | - |
| 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | |
| AS | - | - | - | - | + | - | - | + | + | - | - | - | - | + | - | - | + | - |
| SI | - | - | - | - | + | - | - | + | + | - | - | - | - | - | - | + | + | - |
| ET | - | - | - | - | + | - | - | + | + | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
| VH | - | - | - | - | + | - | - | + | - | - | + | - | - | - | - | - | - | - |
| VP | - | - | - | - | - | - | - | + | - | - | + | - | - | - | - | - | - | - |
| VA | - | - | - | - | - | - | - | + | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
| 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | ||
| AS | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | + | + | |
| SI | - | + | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | + | + | |
| ET | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | |
| VH | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | + | - | |
| VP | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | + | - | |
| VA | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | |
| -: отсутствие активности, +: активность. | ||||||||||||||||||
AS: Aeromonas salmonicida;
SI: Streptococcus iniae;
ET: Edwardsiella tarda;
VH: Vibrio harveyi;
VP: Vibrio hemolyticus;
VA: Vibrio anguillarum.
Пример 1-3. Отбор штаммов с высокой ферментативной активностью
Пример 1-3-1. Сбор неочищенного экстракта ферментов
Для отбора штаммов с активностью сложных пищеварительных ферментов культивировали 20 типов штаммов с противомикробной активностью в среде BHI в течение 8, 24 и 48 часов, соответственно, и собирали их культуральную жидкость с последующим центрифугированием при 4°C и 13000 оборотов в минуту в течение 5 минут. Конечный супернатант использовали в качестве неочищенного экстракта ферментов для анализа ферментативной активности, а среды, включающие каждый субстрат для следующих ферментов, использовали для определения уровня расщепления субстрата.
Пример 1-3-2. Протеазная активность
В качестве субстрата приготовили среду YM (Difco, США), дополненную 2% обезжиренным молоком (Sigma, США). 3 мкл собранного неочищенного экстракта фермента добавляли в каждую среду субстрата и затем проводили реакцию при 30°C в течение 2 часов. Ферментативную активность определяли по наличию чистой зоны, окружающей неочищенный экстракт ферментов, которая образуется за счет расщепления субстрата.
Пример 1-3-3. Целлюлазная активность
В качестве субстрата приготовили среду YM, дополненную 1% CMC (карбоксиметилцеллюлоза). 3 мкл собранного неочищенного экстракта фермента добавляли в каждую среду субстрата и затем проводили реакцию при 30°C в течение 2 часов с последующим окрашиванием 0,2% водным раствором конго красного в течение 30 минут и обесцвечиванием водным раствором 1 М NaCl. Ферментативную активность определяли по наличию чистой зоны, окружающей неочищенный экстракт ферментов, которая образуется за счет расщепления субстрата.
Пример 1-3-4. Амилазная активность
В качестве субстрата приготовили среду YM, дополненную 1% растворимым крахмалом. 3 мкл собранного неочищенного экстракта ферментов добавляли в каждую среду субстрата и затем проводили реакцию при 30°C в течение 2 часов с последующим окрашиванием водным раствором, содержащим 0,1% I2 и 2% KI. Ферментативную активность определяли по наличию чистой зоны, окружающей неочищенный экстракт ферментов, которая образуется за счет расщепления субстрата.
Пример 1-3-5. Липазная активность
В качестве субстрата приготовили среду YM, дополненную 1% трикаптилином. 3 мкл собранного неочищенного экстракта фермента добавляли в каждую среду субстрата и затем проводили реакцию при 30°C в течение 2 часов. Затем определяли ферментативную активность по наличию чистой зоны, окружающей неочищенный экстракт ферментов, которая образуется за счет расщепления субстрата.
Из 20 типов штаммов с противомикробной активностью отобрали 6 типов штаммов, продуцирующих 4 вида пищеварительных ферментов, включающих протеазу, целлюлазу, амилазу и липазу, как показано в следующей таблице 2.
| Таблица 2 | ||||||||
| Продуктивность в отношении пищеварительных ферментов штаммов, прошедших вторичный скрининг | ||||||||
| Фермент | Протеаза | Амилаза | Целлюлаза | Липаза | ||||
| Время культивирования | 8 часов | 24 часа | 8 часов | 24 часа | 8 часов | 24 часа | 8 часов | 24 часа |
| 11 | +++ | +++ | + | ++ | +++ | ++ | - | - |
| 12 | +++ | ++ | +++ | ++ | +++ | ++ | - | + |
| 14 | ++ | + | + | ++ | +++ | +++ | - | +++ |
| 23 | +++ | ++ | + | ++ | +++ | ++ | - | - |
| 26 | ++ | +++ | + | +++ | +++ | +++ | - | +++ |
| 52 | +++ | ++ | + | + | +++ | +++ | - | ++ |
| -: отсутствие активности, +: активность, ++: высокая активность, +++: очень высокая активность. | ||||||||
Пример 2. Тестирование in vitro ингибирующего действия на патогенный гриб пресноводной рыбы
Ингибирующее действие на патогенный гриб Saprolegnia sp. у пресноводной рыбы изучали in vitro с использованием 4 кандидатных штаммов с высокой противомикробной и противогрибковой активностью и продуктивностью в отношении сложных ферментов.
Saprolegnia sp. культивировали путем стационарного культивирования на плотной питательной среде PDA (Difco, США) при 30°C в течение 72 часов. Saprolegnia sp., культивируемый на плотной питательной среде, разрезали на части размером 5 мм × 5 мм (ширина × длина), инокулировали в центр свежей плотной питательной среды PDA и культивировали в течение 24 часов. 20 мкл каждого из 4 кандидатных штаммов помещали на стерильные бумажные диски и затем инокулировали на плотную питательную среду, в которой культивировали Saprolegnia sp., с последующим культивированием при 30°C в течение 48 часов. Как показано в таблице 3, наблюдали наличие чистой зоны, окружающей 4 кандидатных штамма (фиг.1).
| Таблица 3 | |
| Ингибирующее действие на рост Saprolegnia sp. | |
| Кандидатный штамм | Наличие чистой зоны |
| CJP11 | ++ |
| CJP12 | + |
| CJP14 | +++ |
| CJP26 | +++ |
| -: отсутствие активности, +: активность, ++: высокая активность, +++: очень высокая активность. | |
Для оценки ингибирующего действия на Saprolegnia sp. в жидкой среде 4 кандидатных штамма культивировали в среде BHI при 37°C, 200 оборотов в минуту в течение 8 часов.
Каждую культуральную жидкость подвергали серийному разведению с плотностью 10 КОЕ, 107 КОЕ, 106 КОЕ, 105 КОЕ и 104 КОЕ, добавляли в каждую лунку 24-луночных планшетов (Falcon, США) и в них добавляли Saprolegnia sp. с плотностью 102 до конечного объема 1 мл. Туда добавляли 0,5 мл жидкой среды PDB (Difco, США), дополненной 0,5 г/л пептоном и 20 г/л дрожжевым экстрактом, с последующим культивированием при 25°C в течение 48 часов. Ингибирование активности грибов оценивали по застыванию, и два кандидатных штамма ингибировали рост Saprolegnia sp., как показано в следующей таблице 4.
| Таблица 4 | |||||
| Ингибирующее действие двух кандидатных штаммов на рост Saprolegnia sp. | |||||
| Тестируемый штамм | 108 | 107 | 106 | 103 | 104 |
| CJP14 | +++ | +++ | ++ | - | - |
| CJP26 | +++ | + | + | - | - |
| +: Положительный; -: Отрицательный. | |||||
Пример 3. Отбор штаммов с высоким уровнем продуктивности в отношении сидерофоров
Для изучения уровня продуктивности в отношении сидерофоров 4 кандидатных штаммов с высокой противомикробной и противогрибковой активностью и продуктивностью в отношении сложных ферментов осуществляли CAS-анализ. Среду CAS приготовили, как указано далее.
| Таблица 5 | |
| Состав среды CAS для оценки продуктивности в отношении сидерофоров | |
| Раствор Fe (1 мМ FeCl3·6H2O в 10 мМ HCl) | 1,5 |
| Раствор CAS (0,121 г CAS в 100 мл дистиллированной воды) | 7,5 |
| HDTMA (0,0219 г HDTMA в 50 мл дистиллированной воды) | 50 |
| Буфер на основе пиперазина с pH 6,5 (4,307 г пиперазина в 30 мл дистиллированной воды) | 30 |
| Дистиллированная вода | 100 (остальная часть) |
Каждый из 4 кандидатных штаммов инокулировали с концентрацией 0,1% в жидкую среду BHI и культивировали при 37°C и 200 оборотов в минуту в течение 18 часов. В дополнение к этому, каждый вид патогенных бактерий Vibrio harveyi. Vibrio cholerae. Vibrio vulnificus и Aeromonas salmonicida инокулировали с концентрацией 0,1% в среду LB, дополненную 2% хлоридом натрия, и культивировали при 30°C, 200 оборотов в минуту в течение 18 часов. Каждый культуральный супернатант фильтровали с использованием 0,45 мкм фильтра и профильтрованный культуральный супернатант использовали для выполнения эксперимента. В агаре CAS делали лунки диаметром 0,5 см, 50 мкл каждого профильтрованного культурального супернатанта инокулировали в лунку и проводили реакцию при 37°C в течение 8 часов. Как показано на фиг.2, наблюдали наличие чистой зоны оранжевого цвета, окружающей лунку, которая образуется после утилизации железа. В конечном итоге отобрали Bacillus sp. CJP-14 с наиболее высоким уровнем продуктивности в отношении сидерофоров среди 4 кандидатных штаммов и вышеописанных 4 типов патогенных бактерий (таблица 6).
| Таблица 6 | |||
| Оценка продуктивности в отношении сидерофоров | |||
| Кандидаты штамм | Продуктивность в отношении | Патогенные бактерии культивируемой рыбы | Продуктивность в отношении |
| сидерофоров | сидерофоров | ||
| CJP11 | ++ | Vibrio harveyi | ++ |
| CJP12 | + | Vibrio cholerae | ++ |
| CJP14 | +++ | Vibrio vulnificus | ++ |
| CJP26 | ++ | Aeromonas salmonicida | + |
| -: отсутствие активности, +: активность, ++: высокая активность, +++: очень высокая активность. | |||
Пример 4. Идентификация отобранных штаммов и их физиологическая и биохимическая характеристика
Пример 4-1. Идентификация штаммов
Из 4 кандидатных штаммов в конечном итоге отобрали, идентифицировали и проанализировали штамм CJP-14, оказывающий сильное ингибирующее действие на Saprolegnia sp. и имеющий высокий уровень продуктивности в отношении сидерофоров. Идентификацию штамма осуществляли физиологическими и биохимическими методами и методами молекулярной систематики. Было обнаружено, что штамм по морфологическому свойству является грамположительной палочковидной бактерией. Анализ последовательности 16s рДНК показал, что штамм имеет 99% гомологии с Bacillus sp., что указывает на новый микроорганизм. Последовательность оснований 16s рДНК выделенного штамма представлена SEQ ID NO.1. Анализ последовательности оснований осуществляли путем амплификации 16s рДНК с использованием готовой смеси для ПНР (Bioneer, Корея) и универсальных праймеров 27F и 492R с указанной ниже последовательностью оснований. Для анализа последовательности оснований амплифицированной ДНК осуществляли амплификацию гена в общем объеме реакционной смеси 20 мкл в общей сложности в течение 30 циклов, состоящих из этапов при 94°C в течение 1 минуты, при 56°C в течение 1 минуты и при 72°C в течение 1 минуты.
27F: 5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3'(SEQ ID NO.2)
92R: 5'-GGYTACCTTGTTACGACTT-3'(SEQ ID NO.3)
Новый микроорганизм настоящего изобретения, который идентифицировали вышеописанным способом, депонировали в Корейской федерации коллекций культур (в Корейском центре культур микроорганизмов, 361-221, Yurim B/D 3F, Hongje-1-dong, Seodaemun-gu, Сеул) 14 декабря 2010 г. как "Bacillus sp. CJP-14" (KCCM11143P).
Пример 4-2. Физиологическая и биохимическая характеристика
Для анализа биохимических свойств штамма Bacillus sp. CJP-14 настоящего изобретения анализировали паттерны ферментации сахаров штамма с использованием системы API 50 СНВ (Корейский центр культур микроорганизмов, Корея) (таблица 7).
| Таблица 7 | |||
| Результат для паттернов ферментации сахаров | |||
| Контроль | - | эскулин | + |
| глицерин | + | салицин | + |
| эритрит | - | целлобиоза | + |
| D-арабиноза | - | мальтоза | + |
| L-арабиноза | + | лактоза | + |
| эибоза | + | мелибиоза | - |
| D-ксилоза | + | сахароза | + |
| L-ксилоза | - | грегалоза | + |
| адонит | - | инулин | - |
| β-метилксилозид | - | мелицитоза | - |
| галактоза | - | D-рафиноза | + |
| D-глюкоза | + | амидон | + |
| D-фруктоза | + | гликоген | + |
| D-манноза | + | ксилит | - |
| L-сорбоза | - | B-генцибиоза | - |
| рамноза | - | D-тураноза | - |
| дульцит | - | D-ликсоза | - |
| инозит | + | D-тагатоза | - |
| маннит | + | D-фукоза | - |
| сорбит | + | L-фукоза | - |
| α-метил-D-маннозид | - | D-арабит | - |
| α-метилглюкозид | + | L-арабит | - |
| N-ацетилглюкозамин | - | глюконат | - |
| амигдалин | + | 2-кетоглюконат | - |
| арбутин | + | 5-кетоглюконат | - |
| +: Положительный; -: Отрицательный. | |||
Пример 5. Безопасность и утилизация
Пример 5-1. β-Гемолиз
β-Гемолиз представляет собой полный лизис эритроцитов, который вызван гидролизом фосфолипида бактериями, продуцирующими фосфолипазу.
Для изучения гемолиза Bacillus sp. CJP-14 приготовили пластинку с кровяным агаром, содержащую TSA (триптический соевый агар) (Difco, США) и 5% крови барана (Kisan Biotech, Корея). После посева штрихом Bacillus sp. CJP-14 на полученную пластинку с кровяным агаром, для изучения гемолиза проводили инкубацию при 37°C в течение 24 часов. Как показано на фиг.3, гемолиз не наблюдали.
Пример 5-2. Утилизация азотистой кислоты
Для изучения уровня утилизации азотистой кислоты штамма настоящего изобретения приготовили среду, содержащую азотистую кислоту, как показано в следующей таблице 8. 0,1% Bacillus sp. CJP-14 инокулировали в приготовленную среду и затем культивировали при 30°C, 200 оборотов в минуту в течение 6 часов, 12 часов и 24 часов. Образец культуральной жидкости собирали через каждый период времени культивирования. Собранные образцы культуральной жидкости центрифугировали при 4°C, 13000 оборотов в минуту в течение 5 минут с получением супернатанта и измеряли содержание азотистой кислоты в полученном супернатанте для количественного определения уровня потребления.
| Таблица 8 | |
| Состав среды для оценки утилизации азотистой кислоты | |
| нитрит (NaNO2) | 0,5 г/л |
| двухосновный фосфат натрия (Na2HPO4) | 13,5 г/л |
| двухосновный фосфат калия (K2HPO4) | 0,7 г/л |
| сульфат магния (MgSO47H2O) | 0,1 г/л |
| хлорид кальция (CaCl2) | 0,18 г/л |
| бикарбонат натрия (NaHCO3) | 0,5 г/л |
| хлорид трехвалентного железа (FeСl3·6H2O) | 0,014 г/л |
| глюкоза (глюкоза) | 0,5 г/л |
Первоначальная концентрация азотистой кислоты в среде составляла приблизительно 10 мг. По мере роста Bacillus sp. CJP-14 с утилизацией азотистой кислоты потребление азотистой кислоты составляло приблизительно 94% после культивирования в течение 30 часов (см. фиг.4).
Вышеописанные результаты демонстрируют, что Bacillus sp. CJP-14 проявляет ингибирующее действие на водный гриб Saprolegnia sp., продуктивность в отношении сидерофоров и противомикробную активность.
Пример 6. Эффективность воздействия на патогенный гриб Saprolegnia sp. пресноводной рыбы
Оценивали in vitro эффективность воздействия Bacillus sp. CJP-14, оказывающего ингибирующее действие на патогенный гриб Saprolegnia sp. пресноводной рыбы и имеющего высокий уровень продуктивности в отношении сидерофоров. Авторы настоящего изобретения инфицировали оплодотворенные икринки радужной форели Saprolegnia sp. в присутствии Bacillus sp. CJP-14 настоящего изобретения, а затем изучали долю икринок на стадии глазка (%).
Конкретно, 500 оплодотворенных икринок радужной форели помещали в лабораторный стакан, содержащий стерилизованную пресную воду, и затем икринки погружали в раствор, включающий Saprolegnia sp. и каждый из составов, описанных в таблице 9, в течение 30 минут один раз в сутки в течение 3 суток, затем определяли долю икринок на стадии глазка (%), как указано далее (таблица 9). Хлорид натрия и формалин использовали в качестве контрольной группы
Доля икринок на стадии глазка (%) = (число икринок на стадии глазка / число использованных оплодотворенных икринок) ×100
| Таблица 9 | |||
| Эффективность воздействия на Saprolegnia sp. Группа обработки |
Концентрация | Число оплодотворенных икринок | Доля икринок на стадии глазка (%) |
| Bacillus sp. CJP14 | 1×109 КОЕ | 300 | 54,7 |
| 1×108 КОЕ | 300 | 53,2 | |
| 1×107 КОЕ | 300 | 40,5 | |
| Хлорид натрия | 10 ppm | 300 | 52,3 |
| Формалин (37% раствор формальдегида) | 120 ppm | 300 | 19,5 |
| Контрольная группа | - | 300 | 0,5 |
Как показано в таблице 9, доля икринок на стадии глазка контрольной группы составляла 0,5%, а доля таковых для хлорида натрия и формалина, используемых в настоящее время в качестве противогрибкового средства, составляли 52,3% и 19,5%, соответственно. Для обработки Bacillus sp. CJP-14 с концентрацией 1×108 КОЕ или выше была показана более высокая эффективность, чем для обработки хлоридом натрия и раствором формалина, это указывает на ингибирующее действие Bacillus sp. CJP-14 настоящего изобретения на патогенный гриб Saprolegnia sp. пресноводной рыбы.
Пример 7. Эффективность пробиотиков
Для изучения того, оказывает ли на практике Bacillus sp. CJP-14 настоящего изобретения пробиотическое действие при добавлении его в корм и кормлении рыбы этим кормом, Bacillus sp. CJP-14 настоящего изобретения смешивали с кормом, и мальков камбалы кормили комбикормом в течение 8 недель с тем, чтобы определить коэффициент увеличения веса, ежедневный коэффициент роста, коэффициент превращения корма, коэффициент эффективности белка и коэффициент выживаемости.
Конкретно, основной корм (контрольная группа) готовили так, чтобы он имел энергосодержание, равное 30% неочищенного белка, как показано в таблице 10. Bacillus sp. CJP-14 штамма настоящего изобретения добавляли в основной корм для приготовления комбикорма, содержащего 5% Bacillus sp. CJP-14, а количество целлюлозы снижали на добавляемое количество пробиотиков для равного энергосодержания.
| Таблица 10 | |
| Состав основного корма | |
| Сырьевые материалы | % |
| Мука из белой рыбы | 36,0 |
| Соевый шрот | 12,0 |
| Кукурузная глютеновая мука | 8,0 |
| Пшеничная мука | 30,4 |
| Жир печени кальмара | 5,0 |
| Соевая мука | 5,0 |
| CMC | 1,0 |
| Целлюлоза | 0,5 |
| Минеральная смесь | 1,0 |
| Витаминная смесь | 1,0 |
Мальки камбалы, использованные в эксперименте, имели первоначальный средний вес 25 г, и 25 рыб разделили с помощью рандомизации в круглом полипропиленовом контейнере емкостью 150 л. Профильтрованную через песчаный фильтр морскую воду использовали в качестве воды для культивирования и скорость потока регулировали до уровня 2-3 л/мин. Контейнер оборудовали аэратором для подачи кислорода и циркуляции воды для культивирования. Фотопериод поддерживали при условии 12L:12D с использованием флуоресцентной лампы. Температуру воды для культивирования поддерживали в пределах естественных температурных условий 21-29°C на протяжении всего периода проведения эксперимента. Рыб кормили до насыщения два раза в сутки. Скорость роста измеряли каждые три недели, и всех рыб подвергали голоданию в течение 24 часов до измерения (см. таблицу 11).
| Таблица 11 | ||
| Эффективность пробиотиков для камбалы | ||
| Контрольная группа | Экспериментальная группа | |
| Конечный средний вес (г) | 50,6±1,7a | 57,4±3,8b |
| Коэффициент увеличения веса (%) | 103,03±5,6a | 130,05±9,3b |
| Ежедневный коэффициент роста (%) | 1,42±0,06a | 1,67±0,08b |
| Коэффициент выживаемости (%) | 77,3±15,1a | 97,3±2,3b |
| Коэффициент превращения корма | 15,9±0,15a | 1,16±0,05b |
| Коэффициент эффективности белка | 1,10±0,1a | 1,40±0,0b |
Как показано в таблице 11, с добавлением Bacillus sp. CJP 14 скорость роста увеличилась приблизительно на 13% по сравнению с контрольной группой, а также увеличился коэффициент превращения корма и коэффициент эффективности белка по сравнению с контрольной группой. Коэффициент выживаемости также увеличился приблизительно на 25% по сравнению с контрольной группой.
Эти результаты демонстрируют, что Bacillus sp. CJP 14 имеет высокий уровень продуктивности в отношении сложных ферментов, что способствует увеличению скорости потребления пищи рыбой и скорости увеличения веса, а также снижению уровня экскреции, что приводит к улучшению качества воды.
Claims (10)
1. Штамм Bacillus sp. КССМ11143Р, обладающий противогрибковой активностью в отношении Saprolegnia sp.
2. Культуральная жидкость Bacillus sp. КССМ11143Р по п. 1, обладающая противогрибковой активностью в отношении Saprolegnia sp.
3. Культуральная жидкость по п. 2, находящаяся в форме концентрата или сухого продукта.
4. Пробиотическая композиция, содержащая в качестве активного ингредиента штамм по п. 1 или культуральную жидкость по п. 2.
5. Кормовая добавка, используемая для аквакультуры рыб или ракообразных, содержащая в качестве активного ингредиента штамм по п. 1 или культуральную жидкость по п. 2.
6. Способ культивирования рыб или ракообразных, включающий этап обработки фермы для разведения рыб или ракообразных штаммом по п. 1 или культуральной жидкостью по п. 2.
7. Противогрибковое средство против водного гриба Saprolegnia sp., содержащее штамм по п. 1 или культуральную жидкость по п. 2.
8. Способ предотвращения заболеваний, вызванных водным грибом Saprolegnia sp., у животных, включающий этап добавления штамма по п. 1 или культуральной жидкости по п. 2.
9. Средство для улучшения качества воды, содержащее штамм по п. 1 или культуральную жидкость по п. 2.
10. Способ улучшения качества воды, включающий этап обработки воды штаммом по п. 1 или культуральной жидкостью по п. 2.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR10-2011-0009792 | 2011-01-31 | ||
| KR1020110009792A KR101230813B1 (ko) | 2011-01-31 | 2011-01-31 | 사프로레그니아 속 미생물에 대한 생물학적 방제용 프로바이오틱스 |
| PCT/KR2012/000758 WO2012105804A2 (en) | 2011-01-31 | 2012-01-31 | Probiotics for biological control against saprolegnia sp. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2013138150A RU2013138150A (ru) | 2015-03-10 |
| RU2555549C2 true RU2555549C2 (ru) | 2015-07-10 |
Family
ID=46603210
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013138150/10A RU2555549C2 (ru) | 2011-01-31 | 2012-01-31 | ШТАММ Bacillus sp. ДЛЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ БОРЬБЫ С Saprolegnia sp. И ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101230813B1 (ru) |
| RU (1) | RU2555549C2 (ru) |
| WO (1) | WO2012105804A2 (ru) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3270706A1 (en) | 2015-03-16 | 2018-01-24 | Ecole Polytechnique Federale de Lausanne (EPFL) | Archaebacteria in bioactive animal feed, method of making the composition and methods employing the composition |
| WO2019132605A1 (ko) * | 2017-12-29 | 2019-07-04 | 씨제이제일제당 (주) | 바실러스 서브틸리스 균주를 유효성분으로 포함하는 급성 췌장염 괴사증 또는 흰반점 증후군의 예방 또는 치료용 사료 조성물 |
| KR102277987B1 (ko) * | 2017-12-29 | 2021-07-16 | 씨제이제일제당 주식회사 | 바실러스 서브틸리스 균주, 바실러스 푸밀러스 균주 및 바실러스 리체니포미스 균주를 유효성분으로 포함하는 급성 췌장염 괴사증 (ahpnd) 또는 흰반점 증후군(wss)의 예방 또는 치료용 사료 조성물 |
| WO2019132600A1 (ko) * | 2017-12-29 | 2019-07-04 | 씨제이제일제당 (주) | 바실러스 서브틸리스 균주, 바실러스 푸밀러스 균주 및 바실러스 리체니포미스 균주를 유효성분으로 포함하는 급성 췌장염 괴사증 또는 흰반점 증후군의 예방 또는 치료용 사료 조성물 |
| KR102113974B1 (ko) * | 2018-11-12 | 2020-05-20 | 경기도 | 아쿠아포닉스 전용 사료 및 그 제조방법 |
| WO2020179999A1 (ko) | 2019-03-07 | 2020-09-10 | 씨제이제일제당(주) | 바실러스 서브틸리스 cjbs303 및 이를 포함하는 조성물 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2081575C1 (ru) * | 1995-07-26 | 1997-06-20 | Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного отделения РАН | Способ профилактики заболевания икры и молоди рыб сапролегнией |
| WO2004002574A1 (de) * | 2002-06-26 | 2004-01-08 | Biopract Gmbh | Verfahren zur prophylaxe und therapie von mykosen bei fischen und wirbellosen und deren entwicklungsstadien |
| WO2006101060A1 (ja) * | 2005-03-22 | 2006-09-28 | Kyushu Medical Co., Ltd. | バチルス・ズブチリスを用いた甲殻類カビ病および魚介類カビ病の予防方法 |
| KR20100045758A (ko) * | 2008-10-24 | 2010-05-04 | 경북대학교 산학협력단 | 장내효소활성, 내산성, 내담즙성이 우수한 신규 락토바실러스 펜토서스 ｐｌ-11 균주와 이를 이용한 어류용프로바이오틱스 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3713508B2 (ja) | 2003-11-26 | 2005-11-09 | 株式会社九州メディカル | バチルス・チューリンジェンシスの培養液を有効成分とする水産魚介類病原カビであるフサリウム菌に対する防除剤 |
-
2011
- 2011-01-31 KR KR1020110009792A patent/KR101230813B1/ko active IP Right Grant
-
2012
- 2012-01-31 RU RU2013138150/10A patent/RU2555549C2/ru active
- 2012-01-31 WO PCT/KR2012/000758 patent/WO2012105804A2/en active Application Filing
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2081575C1 (ru) * | 1995-07-26 | 1997-06-20 | Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного отделения РАН | Способ профилактики заболевания икры и молоди рыб сапролегнией |
| WO2004002574A1 (de) * | 2002-06-26 | 2004-01-08 | Biopract Gmbh | Verfahren zur prophylaxe und therapie von mykosen bei fischen und wirbellosen und deren entwicklungsstadien |
| WO2006101060A1 (ja) * | 2005-03-22 | 2006-09-28 | Kyushu Medical Co., Ltd. | バチルス・ズブチリスを用いた甲殻類カビ病および魚介類カビ病の予防方法 |
| KR20100045758A (ko) * | 2008-10-24 | 2010-05-04 | 경북대학교 산학협력단 | 장내효소활성, 내산성, 내담즙성이 우수한 신규 락토바실러스 펜토서스 ｐｌ-11 균주와 이를 이용한 어류용프로바이오틱스 |
Non-Patent Citations (1)
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2012105804A3 (en) | 2012-12-20 |
| WO2012105804A2 (en) | 2012-08-09 |
| RU2013138150A (ru) | 2015-03-10 |
| KR20120088436A (ko) | 2012-08-08 |
| KR101230813B1 (ko) | 2013-02-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20190201458A1 (en) | Microbial strains and their use in animals | |
| Boonthai et al. | Probiotic bacteria effects on growth and bacterial composition of black tiger shrimp (Penaeus monodon) | |
| KR101242821B1 (ko) | 비브리오 속 미생물에 대한 생물학적 방제용 프로바이오틱스 | |
| Sihag et al. | Probiotics: the new ecofriendly alternative measures of disease control for sustainable aquaculture | |
| Alavandi et al. | Evaluation of Pseudomonas sp. PM 11 and Vibrio fluvialis PM 17 on immune indices of tiger shrimp, Penaeus monodon | |
| RU2555549C2 (ru) | ШТАММ Bacillus sp. ДЛЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ БОРЬБЫ С Saprolegnia sp. И ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ | |
| Vijayabaskar et al. | Isolation of bacteriocin producing lactic acid bacteria from fish gut and probiotic activity against common fresh water fish pathogen Aeromonas hydrophila | |
| Villamil et al. | Pediococcus acidilactici in the culture of turbot (Psetta maxima) larvae: administration pathways | |
| JP5998273B2 (ja) | 新たなバチルス・サブチルス｛ｎｏｖｅｌｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ｝ | |
| Bjornsdottir et al. | Selection of bacteria and the effects of bacterial treatment of Atlantic halibut (Hippoglossus hippoglossus L.) eggs and larvae | |
| Dhanasekaran et al. | Probiotic effect of Lactobacillus isolates against bacterial pathogens in fresh water fish | |
| Yang et al. | Lactic acid bacteria, Enterococcus faecalis Y17 and Pediococcus pentosaceus G11, improved growth performance, and immunity of mud crab (Scylla paramamosain) | |
| Campa-Córdova et al. | Growth, survival, and superoxide dismutase activity in juvenile Crassostrea corteziensis (Hertlein, 1951) treated with probiotics | |
| WO2008023580A1 (fr) | Additif pour alimentation animale | |
| KR101663570B1 (ko) | 평위산 부산물 추출물을 유효성분으로 함유하는 사료첨가제 및 이를 이용한 기능성 사료 | |
| Purivirojkul | Application of probiotic bacteria for controlling pathogenic bacteria in fairy shrimp Branchinella thailandensis culture | |
| US10849942B2 (en) | Treatment of bacterial infections in aquaculture | |
| JP2009159955A (ja) | クルマエビ腸内から分離したプロバイオティクス乳酸菌 | |
| Galindo | Lactobacillus plantarum 44A as a live feed supplement for freshwater fish | |
| CN104726359A (zh) | 一株短小芽孢杆菌bp及其用途 | |
| JP2010051247A (ja) | 病原細菌ならびに真菌に対して抗菌作用を示すバチルス・アミロリケファシエンスを有効成分とする生物的防除剤 | |
| Bhatnagar et al. | Influence of isolated Bacillus coagulans on growth performance and digestive enzyme activities of Catla catla | |
| Dhanasekaran et al. | Probiotic effect of Lactobacillus isolates against bacterial pathogens in Clarias orientalis | |
| KR20180134128A (ko) | 항산화 활성 및 면역 활성을 가지는 꽃송이버섯 발효물 및 그 제조방법 | |
| Mirbakhsh et al. | Screening and evaluation of indigenous bacteria from the Persian Gulf as a probiotic and biocontrol agent against Vibrio harveyi in Litopenaeus vannamei post larvae |