RU2548751C2 - Способ определения концентрации катионов цинка в сыворотке крови с одновременным определением соотношения катионов цинка и меди в той же пробе - Google Patents
Способ определения концентрации катионов цинка в сыворотке крови с одновременным определением соотношения катионов цинка и меди в той же пробе Download PDFInfo
- Publication number
- RU2548751C2 RU2548751C2 RU2013129232/15A RU2013129232A RU2548751C2 RU 2548751 C2 RU2548751 C2 RU 2548751C2 RU 2013129232/15 A RU2013129232/15 A RU 2013129232/15A RU 2013129232 A RU2013129232 A RU 2013129232A RU 2548751 C2 RU2548751 C2 RU 2548751C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- zinc
- blood serum
- copper
- standard
- concentration
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицинской биохимии и представляет собой способ определения концентрации катионов цинка в сыворотке крови с одновременным определением соотношения катионов цинка и катионов меди, включающий использование в качестве основного реагента раствор дитизона в четыреххлористом углероде, инкубацию при комнатной температуре в щелочной среде, удаление органической фазы и колориметрию коллоидных растворов пробы сыворотки крови и стандартного раствора при 535 нм, расчет концентрации катионов цинка, колориметрию коллоидных растворов пробы сыворотки крови и стандартного раствора при при 435 нм и расчет молярного соотношения катионов цинка и меди. Изобретение обеспечивает определение наряду с концентрацией катионов цинка в крови также их соотношения с катионами меди в той же пробе без применения дополнительных реактивов. 4 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к области медицинской биохимии и может быть использовано для клинической диагностики.
По современным представлениям цинк играет важную роль в метаболизме. Это связано с тем, что катионы цинка входят в состав более 150 ферментов, формируют распознающие нуклеотидные последовательности области факторов транскрипции, участвуют в проведении нервных импульсов и модулируют чувствительность нейронов к нейромедиаторам. Катионы цинка необходимы для нормального функционирования эндокринной системы, в частности, поджелудочной и щитовидной железы, защищают мембраны от окислительного повреждения (Mann U. The Role of Minerals and Vitamins in Mental Health. - 2000; Bettger W, O'Dell BA Critical physiological role of zinc in the structure and function of biomembranes. Life Sciences. - 1981. - v.28. - p.1425-1438). В связи с этим определение концентрации цинка в биологических жидкостях, в частности в крови, широко используется в современной медицинской практике, в частности, при диагностике онкологических, кожных заболеваний, нарушений репродуктивных функций, диагностике нарушений обоняния и вкуса и др.
Нормальные значения концентрации цинка в крови взрослого человека колеблются в пределах 10,7-18,4 мкмоль/л (Цинк в педиатрической практике. Учебное пособие. Под ред. Л.А. Щелягиной. М., 2001, 84 с.).
В тоже время по клиническим данным значение имеет не только абсолютное значение концентрации цинка, но и его соотношение с другим незаменимым микроэлементом - медью. По данным литературы в норме отношение молярного содержания цинка к содержанию меди в крови должно составлять 10:1-8:1 (Jacob RA, 1981. Zinc and copper. Clinics in Laboratory Medicine. - v.1. - p.743-750; O. Akinloyei, F.M. Abbiyesuku. The impact of blood and seminal plasma zinc and copper concentrations on spermogram and hormonal changes in infertile Nigerian men. Reproductive Biology. - v.11, N2. - 2011. - p.83-98).
Из существующего уровня техники известен способ колориметрического определения концентрации цинка в водных растворах. Метод основан на образовании окрашенного в красный цвет соединения цинка с дитизоном с дальнейшим извлечением дитизоната цинка в слой четыреххлористого углерода при pH=4,5-1,8 и колориметрированием в области 535 нм (Патент РФ 2125724, опубл. 27.01.1999).
Недостатками данного технического решения применительно к определению цинка в сыворотке крови является необходимость экстракции окрашенного продукта органическим растворителем, что существенно увеличивает время однократного определения концентрации цинка в пробе.
Известен способ определения цинка в водных растворах по реакции родамина С с ионами цинка с образованием окрашенного комплексного соединения, которое экстрагируют диэтиловым эфиром и измеряют светопоглощение образующегося коллоидного водного раствора (Лурье Ю.Ю. Аналитическая химия промышленных сточных вод. М.: Химия, 1984, С.164).
Недостатками способа являются высокая погрешность и длительность определения.
Известен способ определения цинка в водных растворах при его концентрациях, превышающих 0,1 мг/л, атомно-абсорбционной спектрометрией (Лурье Ю.Ю. Аналитическая химия промышленных сточных вод. М.: Химия, 1984, С.22).
Известен способ определения меди в водных растворах атомно-абсорбционной спектрометрией (Лурье Ю.Ю. Аналитическая химия промышленных сточных вод. М.: Химия, 1984, С.23).
Отношение концентраций цинка и меди при определении этим методом может быть получено вычислением полученных численных значений концентраций.
Недостатком способа атомно-абсорбционной спектрометрии является необходимость наличия дорогостоящего прибора, а также длительность и трудоемкость.
Наиболее близким по технической сущности к заявляемому техническому решению является метод количественного определения катионов цинка в сыворотке крови человека, который разработан на основе качественного варианта дитизонового метода определения цинка (Ильина О.С. Изменение содержания цинка в крови человека при сахарном диабете типа I и особенности гипогликемического действия цинкосодержащего комплекса инсулин-хондроитинсульфат. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Уфа, 2012). К 2 мл пробы крови добавляли 0,1 мл 10% NaOH и 0,2 мл раствора 1% раствора дитизона в четыреххлористом углероде. В отрицательном контроле вместо сыворотки крови добавляли 2 мл дистиллированной воды, в положительном контроле - 2 мл 20 мкмоль раствора сульфата цинка (молярная концентрация стандартного раствора сульфата цинка). Пробы фотометрировали при 535 нм.
Расчет концентрации катионов цинка в пробе проводили по формуле: CZn=20 мкмоль × ОП535 Пробы/ОП535 Стандарта,
где ОП535 Пробы - оптическая плотность пробы, измеренная при 535 нм;
ОП535 Стандарта - оптическая плотность стандартного 20 микромолярного раствора сульфата цинка, измеренная при 535 нм.
Недостатком известного технического решения является определение только одного диагностического показателя, описывающего содержание микроэлемента в сыворотке крови.
Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является высокая чувствительность способа, расширение спектра определяемых диагностических показателей из одной пробы, описывающих содержание металлов, в частности при заболеваниях сахарным диабетом, а именно определение наряду с концентрацией катионов цинка в сыворотке крови также соотношения катионов цинка с катионами меди в той же пробе без применения дополнительных реактивов.
Данная задача решается за счет того, что полученные дитизонаты цинка и меди фотометрируют в областях спектра, соответствующих их максимумам поглощения. Реакция проводится в щелочной среде, в которой дитизон присутствует в водорастворимой енольной форме и диффундирует в водную фазу из четыреххлористого углерода. В водной фазе образуются дитизонат цинка, имеющий максимум поглощения 535 нм, и дитизонат меди, имеющий максимум поглощения 435 нм. Органическую фазу удаляют и фотометрируют образующийся коллоидный раствор дитизонатов цинка и меди при 535 нм и 435 нм соответственно с использованием в качестве стандарта растворов, содержащих 20 мкмоль/л сульфата цинка и 2 мкмоль/л сульфата меди.
Предлагаемый метод основан на образовании при щелочном значении pH окрашенного в красный цвет соединения цинка с дитизоном и окрашенного в желто-коричневый цвет соединения меди с дитизоном. Образовавшиеся коллоидные растворы дитизонатов цинка и меди фотометрируют при 535 нм и 435 нм соответственно. Полученные результаты сравнивают с оптической плотностью дитизонатов цинка и меди, образовавшихся в ходе реакции со стандартными растворами, содержащими 20 мкмоль/л сульфата цинка и 2 мкмоль/л сульфата меди.
Концентрацию катионов цинка рассчитывают по формуле:
CZn=Сстанд.*ОП535 Пробы/ОП535 Стандарта,
где Сстанд. - молярная концентрация стандартного раствора сульфата цинка;
ОП535 Пробы - оптическая плотность пробы сыворотки крови, измеренная при 535 нм;
ОП535 Стандарта - оптическая плотность стандартного раствора сульфата цинка, измеренная при 535 нм.
Отношение концентрации катионов цинка к концентрации катионов меди определяют по формуле:
где Сстанд.ZnSО4 - молярная концентрация стандартного раствора сульфата цинка;
Сстанд.CuSО4 - молярная концентрация стандартного раствора сульфата меди;
(ОП535/ОП435) Пробы - отношение оптических плотностей пробы, измеренных при 535 нм и 435 нм;
(ОП535/ОП435) Стандарта - отношение оптических плотностей стандартных растворов сульфата цинка и сульфата меди, измеренных при 535 нм и 435 нм соответственно.
Техническим результатом, обеспечиваемым приведенной совокупностью признаков, является определение концентрации катионов цинка в сыворотке крови с параллельным определением соотношения катионов цинка и меди в той же пробе без применения дополнительных реактивов.
Пример 1
В пробирку с 2 мл сыворотки крови здорового донора добавляют 0,1 мл 10% NOH и 0,2 мл раствора 1% раствора дитизона в четыреххлористом углероде. В отрицательном контроле вместо сыворотки крови добавляют 2 мл физиологического раствора, в положительном контроле - 2 мл раствора, содержащего 20 мкмоль/л раствора сульфата цинка и 2 мкмоль/л сульфата меди (стандартные растворы). Пробы выдерживают при комнатной температуре 30 минут, органическую фазу удаляют. Пробы с коллоидными растворами дитизонатов цинка и меди фотометрируют при 535 и 435 нм.
Полученный результат: ОП535 Пробы = 0,230
ОП535 Стандарта = 0,255
ОП435 Пробы = 0,098
ОП435 Стандарта = 0,112
(ОП535/ОП435)Стандарта = 2,276
(ОП535/ОП435)Пробы = 2,346
Расчет концентрации катионов цинка проводят по формуле:
CZn=20 мкмоль/л * ОП535 Пробы/ОП535 Стандарта = 18,03 мкмоль/л
Отношение концентрации катионов цинка к концентрации катионов меди определяют по формуле:
Получено:
1. Концентрация цинка - 18,03 мкмоль/л;
2. Соотношение катионов цинка и меди - 10,031.
Пример 2
В пробирку с 2 мл сыворотки крови больного инсулинзависимым сахарным диабетом добавляют 0,1 мл 10% NOH и 0,2 мл раствора 1% раствора дитизона в четыреххлористом углероде. В отрицательном контроле вместо сыворотки крови добавляют 2 мл физиологического раствора, в положительном контроле - 2 мл раствора, содержащего 20 мкмоль/л раствора сульфата цинка и 2 мкмоль/л сульфата меди (стандартные растворы). Пробы выдерживают при комнатной температуре 30 минут, органическую фазу удаляют. Пробы фотометрируют при 535 и 435 нм.
Полученный результат:
ОП535 Пробы = 0,343
ОП535 Стандарта = 0,255
ОП435 Пробы = 0,243
ОП435 Стандарта = 0,112
(ОП535/ОП435)Пробы = 1,412
(ОП535/ОП435)Стандарта = 2,276
Расчет концентрации катионов цинка проводят по формуле:
CZn=20 мкмоль * ОП535 Пробы/ОП535 Стандарта = 26,9 мкмоль/л.
Отношение концентрации катионов цинка к концентрации катионов меди определяют по формуле:
Получено:
1. Концентрация катионов цинка - 26,9 мкмоль/л;
2. Соотношение катионов цинка и меди - 6,20.
Пример 3
С использованием приведенной методики обследовано 30 здоровых доноров 25-55 лет. Среднее значение общей концентрации катионов цинка в крови обследованных составило 23,6±1,32 мкмоль/л, среднее значение соотношения концентрации катионов цинка и меди - 9,4±0,6.
Пример 4
С использованием приведенной методики обследовано 30 больных с инсулинзависимым сахарным диабетом 25-55 лет. Среднее значение общей концентрации катионов цинка в крови обследованных составило 34,3±1,26 мкмоль/л, среднее значение соотношения концентрации катионов цинка и меди - 8,4±0,5.
Предлагаемый способ характеризуется высокой чувствительностью, достаточной для определения концентрации солей цинка и меди в диапазоне 1-100 мкмоль, что необходимо при исследовании проб крови.
Claims (1)
- Способ определения концентрации катионов цинка в пробе сыворотки крови с одновременным определением соотношения катионов цинка и катионов меди в той же пробе, включающий использование в качестве основного реагента раствор дитизона в четыреххлористом углероде, инкубацию пробы сыворотки крови и стандартного раствора при комнатной температуре в щелочной среде, удаление органической фазы и колориметрию коллоидных растворов пробы сыворотки крови и стандартного раствора, содержащего дитизонат цинка, при 535 нм, расчет концентрации катионов цинка по формуле: CZn=Cстанд.∗ОП535 Пробы/ОП535 Стандарта, где Сстанд. - молярная концентрация стандартного раствора сульфата цинка; ОП535 Пробы - оптическая плотность пробы сыворотки крови, измеренная при 535 нм; ОП535 Стандарта - оптическая плотность стандартного раствора сульфата цинка, измеренная при 535 нм, отличающийся тем, что колориметрию коллоидных растворов пробы сыворотки крови и стандартного раствора, содержащих дитизонат меди, повторно проводят при 435 нм и расчет соотношения катионов цинка и меди в той же пробе сыворотки крови осуществляют по формуле: CZn/CCu=Сстанд.ZnSO4/Сстанд.CuSO4∗(ОП535/ОП435)Пробы/(ОП535/ОП435)Стандарта, где Сстанд.CuSO4 - молярная концентрация стандартного раствора сульфата меди; (ОП535/ОП435)Пробы - отношение оптических плотностей пробы сыворотки крови, измеренных при 535 нм и 435 нм; (ОП535/ОП435)Стандарта - отношение оптических плотностей стандартных растворов сульфата цинка и сульфата меди, измеренных при 535 нм и 435 нм соответственно.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013129232/15A RU2548751C2 (ru) | 2013-06-25 | 2013-06-25 | Способ определения концентрации катионов цинка в сыворотке крови с одновременным определением соотношения катионов цинка и меди в той же пробе |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013129232/15A RU2548751C2 (ru) | 2013-06-25 | 2013-06-25 | Способ определения концентрации катионов цинка в сыворотке крови с одновременным определением соотношения катионов цинка и меди в той же пробе |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2013129232A RU2013129232A (ru) | 2014-12-27 |
RU2548751C2 true RU2548751C2 (ru) | 2015-04-20 |
Family
ID=53278692
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013129232/15A RU2548751C2 (ru) | 2013-06-25 | 2013-06-25 | Способ определения концентрации катионов цинка в сыворотке крови с одновременным определением соотношения катионов цинка и меди в той же пробе |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2548751C2 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2808414C1 (ru) * | 2023-03-10 | 2023-11-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ определения цинка в биологическом материале |
-
2013
- 2013-06-25 RU RU2013129232/15A patent/RU2548751C2/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Ильина О.С. / Изменение содержания цинка в крови человека при сахарном диабете типа I и особенности гипогликемического действия цинксодержащего комплекса инсулин-хондроитинсульфат / Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук / 2012. Иванчев Г. / Дитизон и его применение / М.: Иностранная литература / 1961, 450 с. Саранчина Н.В. / Аналитические свойства дитизона и диэтилдитиокарбамината, иммобилизованных в полиметакрилатную матрицу / Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук / 2007 * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2819881C1 (ru) * | 2022-12-07 | 2024-05-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Новосибирский государственный аграрный университет" | Способ определения содержания меди в печени свиней |
RU2808414C1 (ru) * | 2023-03-10 | 2023-11-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ определения цинка в биологическом материале |
RU2820062C1 (ru) * | 2023-12-24 | 2024-05-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Новосибирский государственный аграрный университет" | Способ определения содержания цинка в печени свиней |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2013129232A (ru) | 2014-12-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
MOLITCH et al. | Spurious serum creatinine elevations in ketoacidosis | |
Trinder | A rapid method for the determination of sodium in serum | |
KR102080417B1 (ko) | 혈액 검사 키트 및 혈액 분석 방법 | |
CN103760121B (zh) | 一种血液中亚硝酸盐的检测方法 | |
CN103760331B (zh) | 精浆联检试剂盒 | |
Low et al. | Ionic calcium determination in primary hyperparathyroidism | |
EP2628002B1 (en) | Analyte detection method | |
RU2548751C2 (ru) | Способ определения концентрации катионов цинка в сыворотке крови с одновременным определением соотношения катионов цинка и меди в той же пробе | |
CN108593811B (zh) | 一种测定生物体液中百草枯和敌草快含量的方法 | |
Buzanovskii | Determination of calcium in blood | |
NL8004781A (nl) | Werkwijze voor het kwantitatief bepalen van anorganisch fosfaat langs colorimetrische weg in een waterige oplossing. | |
Algeciras-Schimnich et al. | Evaluation of hemoglobin interference in capillary heel-stick samples collected for determination of neonatal bilirubin | |
Zhang | Point Of Care Testing of Ionized Magnesium in Blood with Potentiometric Sensors-Opportunities and Challenges. | |
Serdar et al. | Comparison of relationships between FT4 and log TSH in Access DXI 800 Unicel, Modular E170 and ADVIA Centaur XP Analyzer | |
Tibbling | A routine method for micro determination of mannitol in serum | |
Kynast et al. | Rapid specific determination of amniotic fluid lecithins as a test of fetal lung maturity | |
WO2005024423A2 (en) | A method for qualitative and/or quantitative detection of polyethylene glycols in biological fluids | |
US3511611A (en) | Blood urea nitrogen test | |
RU2339948C1 (ru) | Способ определения суммарного количества альдоз в смешанной слюне | |
Natelson et al. | Estimation of gold in biological materials | |
RU2310205C2 (ru) | Способ полуколичественного определения фосфата в моче | |
Blankenhorn | The bile content of the blood in pernicious anemia | |
RU2821769C1 (ru) | Способ диагностики глиальных опухолей в дооперационном периоде | |
RU2568601C2 (ru) | Способ оценки тяжести общего состояния больного с острым деструктивным панкреатитом и прогнозирования исхода заболевания | |
Gorman | Spurious results in mineral and electrolyte analysis |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RH4A | Copy of patent granted that was duplicated for the russian federation |
Effective date: 20160913 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160626 |