RU2543534C2 - Способ криоконсервирования лейкоцитов с ксеноном - Google Patents
Способ криоконсервирования лейкоцитов с ксеноном Download PDFInfo
- Publication number
- RU2543534C2 RU2543534C2 RU2013108516/13A RU2013108516A RU2543534C2 RU 2543534 C2 RU2543534 C2 RU 2543534C2 RU 2013108516/13 A RU2013108516/13 A RU 2013108516/13A RU 2013108516 A RU2013108516 A RU 2013108516A RU 2543534 C2 RU2543534 C2 RU 2543534C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- inert gas
- xenon
- preservation
- leukocytes
- container
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к физиологии, криобиологии и медицине, а именно к технологии консервирования ядерных клеток крови человека с применением инертного газа. Способ включает насыщение клеток в пластикатном контейнере «Компопласт 300», помещенном в металлический криобароконтейнер, инертным газом ксеноном под давлением 0,6 атм в течение 20 мин в условиях комнатной температуры 21±2°C с последующим удалением избытка газа и извлечением из металлического контейнера, замораживанием биообъекта до -28°C в этиловом спирте и перемещением в электроморозильник на -80°C. Размораживание биообъекта осуществляется в водяной ванне 39±1,5°C в течение 1,5 мин. Осуществление изобретения обеспечивает надежное криоконсервирование лейкоцитов в среде инертного газа и высокий уровень количественной и морфологической сохранности лейкоцитных концентратов крови человека. 1 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к криобиологии и медицине, а именно к технологии консервирования ядерных клеток крови человека с газовым криопротектором.
Известен способ криоконсервации органов и тканей IN SITU, принятый в качестве прототипа. Способ заключается в том, что биологический объект (сердце, почка и др.) охлаждают в воде до 0°C с одновременным насыщением смесью ксенона, криптона, аргона в соотношении 2,5:47,5:50 об.%, затем вытесняют воду указанной смесью газов и при давлении 1,5 атм понижают температуру до -43°C, далее снижают давление газовой среды до нормального и продолжают охлаждение до -196°C [RU (11) 2268590 C1 (51) МПК A01N 1/02 (2006.01)]. Способ позволил добиться надежной криоконсервации сердца животного в составе всего организма. У пересаженного трансплантата, консервированного шесть часов, восстанавливается адекватная сердечная деятельность.
Недостатком прототипа является громоздкая, дорогостоящая жидкоазотная технология замораживания (-196°C) и высокая трудоемкость с привлечением большого числа квалифицированных исполнителей, что существенно снижает доступность предложенного способа. Кроме того, он предполагает замораживание целого организма животного с последующим извлечением конкретного органа и не предполагает эффективную консервацию ядросодержащих клеток организма человека.
Техническим результатом настоящего изобретения является разработка надежного способа криконсервирования лейкоцитов в среде инертного газа, обеспечивающего высокую сохранность ядросодержащих клеток.
Технический результат достигается путем насыщения клеточных взвесей (лейкоцитных концентратов) в пластикатном контейнере «Компопласт 300», помещенном в металлический криобароконтейнер, инертным газом ксеноном под давлением 0,6 атм в течение 20 мин при комнатной температуре с последующим замораживанием до -28°C в этиловом спирте и хранением в электроморозильнике -80°C, при этом размораживание осуществляют в водяной ванне при температуре 39±1,5°C в течение 1,5 мин. После отогрева в водяной ванне количество морфологически сохранных лейкоцитов в разных сериях экспериментов составляет от 95,3% до 97,6%, устойчивой к витальному красителю мембраной обладает от 43,3% до 64,5% клеток.
Практически способ осуществляют следующим образом.
Экспериментальные исследования выполнены на базе лабораторий криофизиологии крови ФГБУН Институт физиологии Коми НЦ УрО РАН и консервирования крови и тканей ФГБУН Кировский НИИ гематологии и переливания крови ФМБА России.
Пример 1.
Лейкоцитные концентраты крови доноров-добровольцев объемом 17±2 мл в пластикатном контейнере «Компопласт 300», помещенном в криобароконтейнер, насыщали инертным газом ксеноном 20 минут при комнатной температуре 21±2°C под давлением 0,3 атм. Замораживание осуществляли по двухступенчатой программе: на первом этапе 15 мин в охлажденной до -28°C спиртовой (96°) ванне, на втором этапе перекладывали в воздушную среду электроморозильника на -80°C, где хранили в течение суток. Далее «Компопласт 300» с биообъектом извлекали из криобароконтейнера, предварительно снизив давление ксенона до атмосферного. Размораживали биообъект 10 мин в 20-литровой водяной ванне при температуре 19,6±2,1°C.
Определяли общее количество размороженных лейкоцитов, их морфологическую сохранность и жизнеспособность по витальному красителю трипановому синему. Полученные данные выражали в процентах, приняв исходный уровень за 100% (табл.1).
При статистической обработке данных вычисляли среднее арифметическое значение±среднее квадратичное отклонение (М±δ). Для выявления статистической значимости различий между группами применяли непараметрический критерий Уилкоксона с использованием компьютерной программы для медико-биологической статистики «BIOSTAT».
Пример 2.
Лейкоцитные концентраты в пластикатном контейнере «Компопласт 300», помещенном в криобароконтейнер, насыщали инертным газом ксеноном 20 минут при комнатной температуре 21±2°C под давлением 0,3 атм. Замораживание осуществляли по двухступенчатой программе: на первом этапе 15 мин в охлажденной до -40°C спиртовой (96°) ванне, на втором этапе перекладывали в воздушную среду электроморозильника на -80°C, где хранили в течение суток. Далее «Компопласт 300» с биообъектом извлекали из криобароконтейнера, предварительно снизив давление ксенона до атмосферного. Размораживали биообъект 10 мин в 20-литровой водяной ванне при температуре 19,6±2,1°C. Полученные данные представлены в табл.1.
Пример 3.
Лейкоцитные концентраты крови доноров-добровольцев в пластикатном контейнере «Компопласт 300», помещенном в криобароконтейнер, насыщали инертным газом ксеноном 20 минут при комнатной температуре 21±2°C под давлением 0,6 атм, с последующим удалением избытка ксенона. Замораживание осуществляли в пластикатном контейнере «Компопласт 300» по двухступенчатой программе: на первом этапе в охлажденной до -28°C спиртовой (96°) ванне в течение 15 мин, на втором этапе перекладывали в воздушную среду электроморозильника на -80°C, где хранили в течение суток. Размораживали биообъект 1,5 мин в 20-литровой водяной ванне при температуре 39±1,5°C. Полученные данные представлены в табл.1.
Таблица 1 | |||
Морфофункциональные показатели лейкоцитов после суточной экспозиции в электроморозильнике -80°C | |||
Вариант использования | Жизнеспособность, % | Морфологическая сохранность, % | Сохранность гранулоцитов, % |
Пример 1 | 43,3±3,1 | 95,3±5,6 | 51,0±14,0 |
Пример 2 | 48,3±16,6 | 95,1±7,0 | 83,6±9,9* |
Пример 3 | 64,5±14,4* | 97,6±2,5 | 86±11* |
* - различие с показателем примера 1 статистически значимо (p<0,05) |
Применение технологии, указанной в Примере 3, обеспечивает более эффективную сохранность ядросодержащих клеток крови человека. Предложенный метод предельно прост в реализации, дает стабильный положительный результат и найдет широкое применение в медицинской практике.
Claims (1)
- Способ криоконсервирования лейкоцитов включает насыщение клеток в пластикатном контейнере «Компопласт 300», помещенном в металлический криобароконтейнер, инертным газом ксеноном под давлением 0,6 атм в течение 20 мин в условиях комнатной температуры 21±2°C с последующим удалением избытка газа и извлечением из металлического контейнера, замораживанием биообъекта до -28°C в этиловом спирте и перемещением в электроморозильник на -80°C, при этом размораживание биообъекта осуществляется в водяной ванне 39±1,5°C в течение 1,5 мин.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013108516/13A RU2543534C2 (ru) | 2013-02-26 | 2013-02-26 | Способ криоконсервирования лейкоцитов с ксеноном |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013108516/13A RU2543534C2 (ru) | 2013-02-26 | 2013-02-26 | Способ криоконсервирования лейкоцитов с ксеноном |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2013108516A RU2013108516A (ru) | 2014-09-10 |
RU2543534C2 true RU2543534C2 (ru) | 2015-03-10 |
Family
ID=51539635
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013108516/13A RU2543534C2 (ru) | 2013-02-26 | 2013-02-26 | Способ криоконсервирования лейкоцитов с ксеноном |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2543534C2 (ru) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2660075C1 (ru) * | 2017-08-11 | 2018-07-05 | Российская Федерация, от имени которой выступает ФОНД ПЕРСПЕКТИВНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ | Способ хранения клеточных культур в суспензии |
RU2668322C1 (ru) * | 2017-08-11 | 2018-09-28 | Российская Федерация, от имени которой выступает ФОНД ПЕРСПЕКТИВНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ | Способ подбора условий для криоконсервации биологических объектов в вязких средах с использованием гидратообразующих газов и устройство для его осуществления |
CN110140716A (zh) * | 2019-07-08 | 2019-08-20 | 方艳秋 | 一种外周血单个核细胞改良冻存液 |
RU2698903C1 (ru) * | 2018-10-11 | 2019-08-30 | Российская Федерация, от имени которой выступает ФОНД ПЕРСПЕКТИВНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ | Способ криоконсервации биологических объектов при одновременной гомогенной нуклеации кристаллов льда и клатрата ксенона |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2290808C2 (ru) * | 2004-12-06 | 2007-01-10 | Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения Российской Академии Наук | Криопротекторный раствор для замораживания лейкоцитов при низкой температуре |
RU2433173C1 (ru) * | 2010-06-01 | 2011-11-10 | Олег Германович Макеев | Способ криоконсервации мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток |
RU2439877C2 (ru) * | 2009-12-21 | 2012-01-20 | Учреждение Российской академии наук Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения РАН | Криопротекторный раствор для консервирования лейкоцитов при умеренно-низкой температуре (-40°c) |
-
2013
- 2013-02-26 RU RU2013108516/13A patent/RU2543534C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2290808C2 (ru) * | 2004-12-06 | 2007-01-10 | Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения Российской Академии Наук | Криопротекторный раствор для замораживания лейкоцитов при низкой температуре |
RU2439877C2 (ru) * | 2009-12-21 | 2012-01-20 | Учреждение Российской академии наук Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения РАН | Криопротекторный раствор для консервирования лейкоцитов при умеренно-низкой температуре (-40°c) |
RU2433173C1 (ru) * | 2010-06-01 | 2011-11-10 | Олег Германович Макеев | Способ криоконсервации мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2660075C1 (ru) * | 2017-08-11 | 2018-07-05 | Российская Федерация, от имени которой выступает ФОНД ПЕРСПЕКТИВНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ | Способ хранения клеточных культур в суспензии |
RU2668322C1 (ru) * | 2017-08-11 | 2018-09-28 | Российская Федерация, от имени которой выступает ФОНД ПЕРСПЕКТИВНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ | Способ подбора условий для криоконсервации биологических объектов в вязких средах с использованием гидратообразующих газов и устройство для его осуществления |
RU2698903C1 (ru) * | 2018-10-11 | 2019-08-30 | Российская Федерация, от имени которой выступает ФОНД ПЕРСПЕКТИВНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ | Способ криоконсервации биологических объектов при одновременной гомогенной нуклеации кристаллов льда и клатрата ксенона |
CN110140716A (zh) * | 2019-07-08 | 2019-08-20 | 方艳秋 | 一种外周血单个核细胞改良冻存液 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2013108516A (ru) | 2014-09-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Yánez-Ortiz et al. | Advances in sperm cryopreservation in farm animals: Cattle, horse, pig and sheep | |
Schlegel et al. | Role of hypothermic machine perfusion in liver transplantation | |
RU2543534C2 (ru) | Способ криоконсервирования лейкоцитов с ксеноном | |
CN103210903B (zh) | 一种用于保存cik细胞的冻存液及其应用 | |
CN105211051B (zh) | 一种培养后的nk细胞的冻存液及其制备方法 | |
CN106665559B (zh) | 一种免疫细胞冻存液及其应用 | |
Ravaioli et al. | Strategies to restore adenosine triphosphate (ATP) level after more than 20 hours of cold ischemia time in human marginal kidney grafts | |
CN111602648B (zh) | 一种免疫细胞无血清冻存液及冻存方法 | |
CN109362708A (zh) | 一种干细胞冷冻剂及其应用 | |
US20180271087A1 (en) | Device for vascularized composite allotransplant preservation and use thereof | |
RU2624214C1 (ru) | Способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток | |
CN109511650B (zh) | 一种可以扩大供肝来源的常温机械灌注液 | |
WO2022241417A1 (en) | Methods and compositions for extending organ and tissue preservation | |
CN105211052A (zh) | 一种培养后的nkt细胞的冻存液及其制备方法 | |
Gojen Singh et al. | Effect of different levels of egg yolk on cryopreservation of Black Bengal buck semen in tris egg yolk citrate fructose glycerol extender | |
Galmeas et al. | A Simplified Method for Cryopreservation of Hematopoietic Stem Cells with-80dGC Mechanical Freezer with Dimethyl Sulfoxide as the Sole Cryoprotectant | |
CN108338160A (zh) | 一种毛囊保存液及其制备方法 | |
RU2009136319A (ru) | Способ восстановления жизнеспособности ишемически поврежденных донорских органов | |
CN111887242A (zh) | 一种常温细胞储运方法及其应用 | |
Longchamp et al. | Role of Machine Perfusion in Liver Transplantation | |
Gulyaev et al. | Will the machine perfusion of the liver increase the number of donor organs suitable for transplantation? | |
Tran et al. | Improving indigenous Vietnamese Black Rabbit frozen sperm quality: the role of glycine and sperm selection methods | |
Korsak et al. | Evaluation of two distinct cryoprotectants for cryopreservation of human red blood cell concentrates | |
US11850313B2 (en) | Method and compositions for protecting tissue | |
RU2720771C1 (ru) | Способ нерегламентированного замораживания клеток-предшественников периферической крови при температуре минус 80оС с раствором Гемжел |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160227 |