RU2524204C2 - Human oxyntomodulin, its application, medication based thereon and method of applying medication for treatment and prevention of hyperglycemia - Google Patents
Human oxyntomodulin, its application, medication based thereon and method of applying medication for treatment and prevention of hyperglycemia Download PDFInfo
- Publication number
- RU2524204C2 RU2524204C2 RU2009145054/15A RU2009145054A RU2524204C2 RU 2524204 C2 RU2524204 C2 RU 2524204C2 RU 2009145054/15 A RU2009145054/15 A RU 2009145054/15A RU 2009145054 A RU2009145054 A RU 2009145054A RU 2524204 C2 RU2524204 C2 RU 2524204C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- oxyntomodulin
- treatment
- alpha
- hyperglycemia
- sialic acid
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Abstract
Description
Область изобретенияField of Invention
Изобретение относится к медицине и конкретно к препаратам, нормализующим уровень глюкозы в крови при лечении сахарного диабета 2 типа.The invention relates to medicine and specifically to drugs that normalize blood glucose levels in the treatment of type 2 diabetes.
Уровень техникиState of the art
При изучении секреции глюкагоно-подобного пептида-1 (ГЛП-1) у больных сахарным диабетом 2 типа были выявлены существенные нарушения его секреции, что явилось предпосылкой для разработки препаратов-агонистов рецептора ГЛП-1 для лечения сахарного диабета 2 типа. Предполагалось, что терапевтические эффекты агонистов рецептора ГЛП-1 позволят существенно повысить качество лекарственной помощи больным сахарным диабетом 2 типа за счет усиления синтеза и секреции инсулина, подавления апоптоза бета-клеток и стимуляции их регенерации, подавления секреции глюкагона и ангиотропного эффекта (Аметов А.С., 2006)When studying the secretion of glucagon-like peptide-1 (GLP-1) in patients with type 2 diabetes mellitus, significant violations of its secretion were revealed, which was a prerequisite for the development of agonists of the GLP-1 receptor for the treatment of type 2 diabetes mellitus. It was assumed that the therapeutic effects of GLP-1 receptor agonists will significantly improve the quality of drug care for patients with type 2 diabetes mellitus by enhancing the synthesis and secretion of insulin, inhibiting apoptosis of beta cells and stimulating their regeneration, suppressing secretion of glucagon and angiotropic effect (Ametov A.S. ., 2006)
Эксенатид представляет собой олигопептид, содержащий 39 аминокислот, являющийся агонистом рецепторов глюкагоно-подобного пептида 1. Аминокислотная последовательность эксенатида частично соответствует последовательности человеческого ГПП-1, в результате чего он связывается и активирует рецепторы GLP-1 у человека, что приводит к усилению глюкозо-зависимого синтеза и секреции инсулина в бета-клетах поджелудочной железы Эксенатид стимулирует высвобождение инсулина из бета-клеток в присутствии повышенных концентраций глюкозы. Лечебная эффективность препарата связана с его способностью усиливать глюкозозависимую секрецию инсулина из бета-клеток поджелудочной железы при гипергликемических состояниях. При этом секреция инсулина прекращается по мере снижения концентраций глюкозы в крови и приближения ее к норме, тем самым уменьшается потенциальный риск гипогликемии. Секреция инсулина в течение первых 10 минут, известная как "первая фаза инсулинового ответа", специфично отсутствует у пациентов с сахарным диабетом типа 2. Кроме того, утрата первой фазы инсулинового ответа является ранним нарушением функции бета-клеток при сахарном диабете типа 2. Введение эксенатида восстанавливает или значительно усиливает как первую, так и вторую фазу инсулинового ответа у пациентов с сахарным диабетом типа 2. Вследствие этого раннее применение эксенатида позволяет значительно снизить инвалидизацию и смертность, связанную с сосудистыми осложнениями сахарного диабета 2 типа.Exenatide is an oligopeptide containing 39 amino acids that is an agonist of glucagon-like peptide 1 receptors. The amino acid sequence of exenatide partially matches the sequence of human GLP-1, as a result of which it binds and activates GLP-1 receptors in humans, which leads to an increase in glucose-dependent synthesis and secretion of insulin in pancreatic beta cells Exenatide stimulates the release of insulin from beta cells in the presence of elevated glucose concentrations. The therapeutic effectiveness of the drug is associated with its ability to enhance glucose-dependent secretion of insulin from pancreatic beta cells in hyperglycemic conditions. At the same time, insulin secretion ceases as the concentration of glucose in the blood decreases and it approaches normal, thereby reducing the potential risk of hypoglycemia. The insulin secretion during the first 10 minutes, known as the “first phase of the insulin response”, is specifically absent in patients with type 2 diabetes. In addition, the loss of the first phase of the insulin response is an early impairment of beta cell function in type 2 diabetes. Exenatide administration restores or significantly enhances both the first and second phases of the insulin response in patients with type 2 diabetes. As a result, the early use of exenatide can significantly reduce disability and mortality by annuyu with vascular complications of type 2 diabetes.
Оксинтомодулин представляет собой естественный человеческий 37 членный олигопептид содержащий 29 аминокислот идентичных последовательности аминокислот фрагмента глюкагона человека и уникальную С-концевую последовательность из 8 аминокислот. Структура оксинтомодулина и его способность повышать уровень цАМФ в культуре париетальных клеток желудка крыс были впервые описаны в 1981 году и приведена на рисунке 1 (Bataille D., 1981).Oxyntomodulin is a naturally occurring human 37-membered oligopeptide containing 29 amino acids identical to the amino acid sequence of the human glucagon fragment and a unique 8-amino acid C-terminal sequence. The structure of oxyntomodulin and its ability to increase the level of cAMP in the culture of rat gastric parietal cells were first described in 1981 and shown in Figure 1 (Bataille D., 1981).
Ряд исследований продемонстрировал способность оксинтомодулина подавлять индуцированную приемом пищи секрецию желудочного сока у грызунов. Эффект при этом был сравним с действием глюкагоно-подобного пептида-1 и глюкагоно-подобного пептида-2. Оксинтомодулин является слабым агонистом рецептора глюкагона и имитирует эффекты глюкагона в печени и поджелудочной железе. Оксинтомодулин подавляет аппетит при внутримозговом введении грызунам. Аноректогенный эффект оксинтомодулина подавляется эксенатидом. Специфический рецептор оксинтомодулина в настоящее время не идентифицирован. Показано, что многие эффекты оксинтомодулина реализуются путем взаимодействия последнего с рецепторами ГПП-1 и ГПП-2. Парентеральное введение оксинтомодулина подавляет аппетит, но в отличие от ГПП-1 при этом отсутствует эффект подавления эвакуаторной функции желудка. Оксинтомодулин также имитирует действие ГПП-1 на бета клетки поджелудочной железы, включая стимуляцию глюкозо-зависимой секреции инсулина и подавление апоптоза бета-клеток (Jarrousse С., 1986; Schjoldager В., 1988; Dakin С., 2004; А. Maida, 2008).A number of studies have demonstrated the ability of oxyntomodulin to suppress food-induced secretion of gastric juice in rodents. The effect was comparable with the action of glucagon-like peptide-1 and glucagon-like peptide-2. Oxyntomodulin is a weak glucagon receptor agonist and mimics the effects of glucagon in the liver and pancreas. Oxyntomodulin suppresses appetite with intracerebral administration to rodents. The anorectogenic effect of oxyntomodulin is suppressed by exenatide. The specific oxyntomodulin receptor is not currently identified. It has been shown that many effects of oxyntomodulin are realized through the interaction of the latter with GLP-1 and GLP-2 receptors. Parenteral administration of oxyntomodulin suppresses appetite, but unlike GLP-1, there is no effect of suppressing gastric evacuation function. Oxyntomodulin also mimics the effects of GLP-1 on pancreatic beta cells, including stimulation of glucose-dependent insulin secretion and inhibition of beta-cell apoptosis (Jarrousse C., 1986; Schjoldager B., 1988; Dakin C., 2004; A. Maida, 2008 )
Известно применение оксинтомодулина для лечения ожирения (RU 2351359). Оксинтомодулин, в отличие от эксенатида, не подавляет моторную функцию желудка. Все это вместе делает оксинтомодулин перспективным кандидатом для создания лекарственного средства - миметика инкретина. К сожалению, при исследовании на людях оксинтомодулин не оказывал достоверного гипогликемического эффекта (Wynne K., 2005) и был в 500 раз менее активен, чем эксенатид в гипогликемическом тесте у мышей (A. Maida, 2008).The use of oxyntomodulin for the treatment of obesity is known (RU 2351359). Oxyntomodulin, unlike exenatide, does not inhibit the motor function of the stomach. All this together makes oxyntomodulin a promising candidate for the creation of a drug - incretin mimetic. Unfortunately, in a human study, oxyntomodulin did not have a significant hypoglycemic effect (Wynne K., 2005) and was 500 times less active than exenatide in the hypoglycemic test in mice (A. Maida, 2008).
Краткое описание изобретенияSUMMARY OF THE INVENTION
Задачей изобретения является создание химически модифицированной формы оксинтомодулина с высокой гипогликемической активностью для лечения сахарного диабета 2 типа. Эта задача решается тем, что в качестве химической модификации молекулы природного оксинтомодулина используется ковалентное присоединение гомополимерного полисахарида, содержащего 50 звеньев альфа-2,8 сиаловой кислоты.The objective of the invention is to provide a chemically modified form of oxyntomodulin with high hypoglycemic activity for the treatment of type 2 diabetes. This problem is solved in that, as a chemical modification of the molecule of natural oxyntomodulin, a covalent addition of a homopolymer polysaccharide containing 50 units of alpha-2.8 sialic acid is used.
Полисиаловые кислоты (PSA) представляют собой природные неразветвленные полимеры сиаловой кислоты, вырабатываемые определенными штаммами бактерий и в определенных клетках у млекопитающих (Roth., 1993). Их можно получать с различной степенью полимеризации, от n = примерно 80 или более остатков сиаловой кислоты до n=2 путем кислотного гидролиза или расщеплением нейраминидазами, или фракционированием природных вырабатываемых бактериями видов полимера. Состав различных полисиаловых кислот также изменяется таким образом, что существуют гомополимерные формы, такие как, например альфа-2,8-связанная полисиаловая кислота, включающая капсульный полисахарид штамма К1 Е. coli и В-группы менингококков, который также обнаруживают в эмбриональной форме молекулы клеточной адгезии нейрона (N-CAM). Также существуют гетерополимерные формы, такие как чередующаяся альфа-2,8 альфа-2,9 полисиаловая кислота штамма К92 Е. coli и полисахариды C группы N. meningitidis. Сиаловую кислоту также можно обнаружить в чередующихся сополимерах с мономерами, отличающимися от сиаловой кислоты, таких как группа W135 или группа Y N. meningitidis.Polysialic acids (PSA) are naturally occurring unbranched polymers of sialic acid produced by certain strains of bacteria and in certain mammalian cells (Roth., 1993). They can be obtained with different degrees of polymerization, from n = about 80 or more sialic acid residues to n = 2 by acid hydrolysis or by cleavage with neuraminidases, or by fractionation of the natural polymer species produced by bacteria. The composition of various polysialic acids also changes in such a way that homopolymer forms exist, such as, for example, alpha-2,8-linked polysialic acid, including the capsular polysaccharide of E. coli strain K1 and the meningococcal B group, which are also found in the embryonic form of the cell molecule neuron adhesion (N-CAM). Heteropolymer forms also exist, such as alternating alpha-2.8 alpha-2.9 polysialic acid of E. coli strain K92 and group C polysaccharides of N. meningitidis. Sialic acid can also be found in alternating copolymers with monomers other than sialic acid, such as group W135 or group Y N. meningitidis.
Полисиаловые кислоты обладают важным биологическим действием, включая уклонения патогенных бактерий от иммунной системы и системы комплемента. Альфа-2,8-связанная полисиаловая кислота штамма К1 Е. coli также известна как «коломиновая кислота» и ее формы различной длины используют в настоящем изобретении.Polysialic acids have important biological effects, including evading pathogenic bacteria from the immune system and complement system. The alpha-2,8-linked polysialic acid of E. coli strain K1 is also known as “colominic acid” and its various length forms are used in the present invention.
Среди бактериальных полисахаридов альфа-2,8 связанная форма полисиаловой кислоты представляет собой единственную неиммуногенную (не вызывающую ни ответа Т-клеток, ни образования антител у млекопитающих, даже при конъюгации с иммуногенными носителями белками). Более короткие формы полимера (до n=4) обнаруживают в ганглиозидах клеточной поверхности, которые широко распространены в организме и считаются эффективными для сообщения и поддержания иммунологической толерантности по отношению к полисиаловой кислоте.Among the bacterial polysaccharides alpha-2.8, the bound form of polysialic acid is the only non-immunogenic one (that does not cause either T-cell response or antibody formation in mammals, even when conjugated with immunogenic protein carriers). Shorter forms of the polymer (up to n = 4) are found in gangliosides of the cell surface, which are widespread in the body and are considered effective for communicating and maintaining immunological tolerance to polysialic acid.
В последние годы биологические свойства полисиаловых кислот, в особенности биологические свойства альфа-2,8 связанной гомополимерной полисиаловой кислоты, были использованы для модификации фармакокинетических свойств белковых или низкомолекулярных молекул лекарственных веществ [Gregoriadis, 2001; Jain et al., 2003; US-A-5846951, WO-A-0187922].In recent years, the biological properties of polysialic acids, in particular the biological properties of alpha-2.8 linked homopolymer polysialic acid, have been used to modify the pharmacokinetic properties of protein or low molecular weight drug molecules [Gregoriadis, 2001; Jain et al., 2003; US-A-5846951, WO-A-0187922].
Альфа-2,8-связанная полисиаловая кислота (PSA) предлагает привлекательную альтернативу для модификации белков, представляя собой иммунологически невидимый биологически разрушаемый полимер, являющийся естественной частью человеческого организма, и который разрушается тканевыми нейраминидазами до сиаловой кислоты, нетоксичного сахаридаAlpha-2,8-linked polysialic acid (PSA) offers an attractive alternative for protein modification, being an immunologically invisible biodegradable polymer that is a natural part of the human body and that is broken down by tissue neuraminidases to sialic acid, a non-toxic saccharide
Выбор авторов настоящего изобретения основан на результатах исследования, проведенного авторами настоящего изобретения, которые обнаружили, что ковалентное присоединение гомополимерного полисахарида, содержащего 50 звеньев альфа-2,8 сиаловой кислоты к молекуле природного оксинтомодулина существенно воздействует на биологическую активность последнего, а именно существенно усиливает его гипогликемическую активность. Именно это свойство оксинтомодулина человека, ковалентно связанного с гомополимерным полисахаридом, содержащим 50 звеньев альфа-2,8 сиаловой кислоты, позволило решить поставленную задачу.The choice of the authors of the present invention is based on the results of a study conducted by the authors of the present invention, which found that covalent attachment of a homopolymer polysaccharide containing 50 units of alpha-2.8 sialic acid to a molecule of natural oxyntomodulin significantly affects the biological activity of the latter, namely, significantly enhances its hypoglycemic activity. It is this property of human oxyntomodulin that is covalently bonded to a homopolymer polysaccharide containing 50 units of alpha-2.8 sialic acid, which made it possible to solve the problem.
Настоящее изобретение предлагает оксинтомодулин человека, ковалентно связанный с гомополимерным полисахаридом, содержащим 50 звеньев альфа-2,8 сиаловой кислоты.The present invention provides human oxyntomodulin covalently linked to a homopolymer polysaccharide containing 50 units of alpha-2.8 sialic acid.
Далее, согласно настоящему изобретению предлагается лекарственный препарат для лечения или профилактики гипрегликемии у пациента страдающего диабетом 2 го типа, содержащий в качестве активного вещества оксинтомодулин человека, ковалентно связанный с гомополимерным полисахаридом, содержащим 50 звеньев альфа-2,8 сиаловой кислоты и в качестве неактивных компонентов стабилизирующие добавки и наполнители, смешанные с апирогенной водой или другими фармацевтически приемлимыми носителями.Further, the present invention provides a medicament for treating or preventing hyperglycemia in a patient suffering from type 2 diabetes, comprising as an active substance human oxyntomodulin covalently linked to a homopolymer polysaccharide containing 50 units of alpha-2.8 sialic acid and as inactive components stabilizing additives and fillers mixed with pyrogen-free water or other pharmaceutically acceptable carriers.
Далее, согласно настоящему изобретению предложен способ лечения и профилактики гипергликемии у пациента с сахарным диабетом 2 типа, который нуждается в указанном лечении или профилактике, включающий подкожное введение указанному пациенту лекарственного препарата, содержащего в качестве активного вещества оксинтомодулин человека, ковалентно связанный с гомополимерным полисахаридом, содержащим 50 звеньев альфа-2,8 сиаловой кислоты.Further, the present invention provides a method for the treatment and prevention of hyperglycemia in a patient with type 2 diabetes mellitus who needs the indicated treatment or prophylaxis, comprising subcutaneous administration of a drug to the indicated patient containing human oxyntomodulin as an active substance covalently linked to a homopolymer polysaccharide containing 50 units of alpha-2.8 sialic acid.
Далее согласно настоящему изобретению предлагается применение оксинтомодулина человека, ковалентно связанного с гомополимерным полисахаридом, содержащим 50 звеньев альфа-2,8 сиаловой кислоты в качестве активного вещества лекарственного препарата для лечения гипергликемии при сахарном диабете 2 типа.The present invention further provides the use of human oxyntomodulin covalently bound to a homopolymer polysaccharide containing 50 units of alpha-2.8 sialic acid as an active substance of a medicament for the treatment of hyperglycemia in type 2 diabetes.
Подробное описание изобретения и примеры его реализацииDetailed description of the invention and examples of its implementation
Сущность изобретения поясняется двумя примерами получения заявляемого соединения и заявляемого лекарственного средства и таблицей и рисунками, где дано:The invention is illustrated by two examples of the preparation of the claimed compounds and the claimed medicinal product and the table and figures, where it is given:
В таблице 1 результаты оценки гипогликемической активности конъюгата человеческого рекомбинантного оксинтомодулина с гомополимером альфа-2,8 сиаловой кислоты массой 14 кДаIn table 1, the results of evaluating the hypoglycemic activity of the conjugate of human recombinant oxyntomodulin with a homopolymer of alpha-2.8 sialic acid weighing 14 kDa
На фиг.1 аминокислотная последовательность оксинтомодулина человека.1, the amino acid sequence of human oxyntomodulin.
На фиг.2 результаты хроматографического анализа ковалентного конъюгата человеческого рекомбинантного оксинтомодулина с гомополимером альфа-2,8 сиаловой кислоты массой 14 кДа, содержащим 50 звеньев сиаловой кислоты.In Fig.2, the results of chromatographic analysis of the covalent conjugate of human recombinant oxyntomodulin with a homopolymer of alpha-2.8 sialic acid weighing 14 kDa containing 50 units of sialic acid.
На фиг.3 результаты оценки гипогликемической активности конъюгата человеческого рекомбинантного оксинтомодулина с гомополимером альфа-2,8 сиаловой кислоты массой 14 кДа в сравнении с эксенатидом в тесте нагрузки глюкозойIn Fig.3, the results of evaluating the hypoglycemic activity of the conjugate of human recombinant oxyntomodulin with a homopolymer of alpha-2.8 sialic acid weighing 14 kDa in comparison with exenatide in the glucose load test
Заявленное лекарственное средство получают, например, следующим образом.The claimed drug is obtained, for example, as follows.
Пример 1. Получение рекомбинантного оксинтомодулина, ковалентно связанного с гомополимерным полисахаридом, содержащим 50 звеньев альфа-2,8 сиаловой кислотыExample 1. Obtaining recombinant oxyntomodulin covalently linked to a homopolymer polysaccharide containing 50 units of alpha-2.8 sialic acid
Для конструирования экспрессионной плазмиды ген оксинтомодулина и интеина Ssp dnaB из Synechocestis sp синтезировали из перекрывающихся олигонуклеотидов и клонировали в экспрессионную плазмиду pTWIN1 с последующей трансформацией штамма Е. coli ER2566. В результате был создан штамм-продуцент Е. coli ER2566/pER-Oxm в котором при индукции образуется гибридный белок (Int-Oxm), содержащий на N-конце модифицированный интеин DnaB, включающий хитин-связывающий домен, а на С-конце - последовательность оксинтомодулина. Продуцент Е. coli ER2566/pEROxm культивировали при 37°C до оптической плотности культуры 0.6-0.7, затем индуцировали ИПТГ и выращивали 4 ч. при 37°C. После выделения и солюбилизации телец включения индуцировали автокаталитическое расщепление белка на хитиновом сорбенте (V.N. Stepanenko et al., 2007). После завершения реакции расщепления выпавший в осадок ГБ отделяли центрифугированием; очистку оксинтомодулина от остаточного пептида и ГБ, не выпавшего в осадок, производили с помощью установки для тангенциальной ультрафильтрации на мембране VivaFlow 50 10000 MWCO RC для отсечения от нерасщепленного гибридного белка и интеина Оксинтомодулин (молекулярная масса 3 кДа) оставался в фильтрате с максимальной концентрацией 0,05 мг/мл. Фильтрат, содержащий оксинтомодулин, наносили на колонку SP Sepharose High Performance, уравновешенную в аммонийно-ацетатном буфере при pH 4,0. Оксинтомодулин элюировали буфером К (20 мМ Tris pH 10 8 М мочевина 1.7 М NaCl. При этом происходило концентрирование оксинтомодулина в 500 раз по сравнению с объемом нанесения. Окончательную очистку оксинтомодулина проводили с помощью ВЭЖХ на полупрепаративной колонке (250×16) Диасорб-130-С16Т 7 мкм в градиенте 25-65% ацетонитрила с 0,1% ТФУ со скоростью 2,5 мл/мин. Конъюгацию целевого белка проводят при мольном соотношении 14 kDa ПСА (альфа-2,8 полисиаловая кислота) - целевой пептид 2:1 с последовательным поэтапным добавлением ПСА и концентрации NaCNBH3 2,5 мг/мл при 37±2°C при pH 6 и присутствии ацетонитрила в течение 4 ч. Очистку конъюгата осуществляли обращено-фазовой ВЭЖХ на колонке Диасорб-130-С16Т с последующей гель-фильтрацией. Очищенный ковалентный конъюгат человеческого рекомбинантного оксинтомодулина с гомополимером альфа-2,8 сиаловой кислоты содержащим 50 звеньев сиаловой кислоты анализировали с помощью градиентного ПААГ.To construct an expression plasmid, the gene of oxyntomodulin and Ssp dnaB intein from Synechocestis sp was synthesized from overlapping oligonucleotides and cloned into the expression plasmid pTWIN1 followed by transformation of E. coli strain ER2566. As a result, an E. coli producer strain ER2566 / pER-Oxm was created in which, upon induction, a hybrid protein (Int-Oxm) is formed containing a modified DnaB intein at the N-terminus including a chitin-binding domain, and a sequence at the C-terminus oxyntomodulin. The producer E. coli ER2566 / pEROxm was cultured at 37 ° C to an optical density of culture of 0.6-0.7, then IPTG was induced and grown for 4 hours at 37 ° C. After isolation and solubilization of inclusion bodies, autocatalytic cleavage of the protein on a chitin sorbent was induced (VN Stepanenko et al., 2007). After completion of the cleavage reaction, the precipitated GB was separated by centrifugation; Oxyntomodulin was removed from the residual peptide and non-precipitated GB using a VivaFlow 50 10000 MWCO RC tangential ultrafiltration unit to cut off the unsplit fusion protein and intein. Ointment (3 kDa molecular weight) remained in the filtrate with a maximum concentration of 0, 05 mg / ml. The filtrate containing oxyntomodulin was applied to an SP Sepharose High Performance column, equilibrated in ammonium acetate buffer at pH 4.0. Oxyntomodulin was eluted with buffer K (20 mM Tris pH 10 8 M urea 1.7 M NaCl. Oxyntomodulin was concentrated 500 times compared to the volume of application. The final purification of oxyntomodulin was performed by HPLC on a semi-preparative column (250 × 16) Diasorb-130- C16T 7 μm in a gradient of 25-65% acetonitrile with 0.1% TFA at a rate of 2.5 ml / min Conjugation of the target protein is carried out at a molar ratio of 14 kDa PSA (alpha-2.8 polysialic acid) - the target peptide 2: 1 consistent with gradual addition of PSA and NaCNBH 3 concentration of 2.5 mg / mL at 37 ± 2 ° C at pH 6 and in the presence of acetonitrile for 4 h. The conjugate was purified by reverse phase HPLC on a Diasorb-130-C16T column followed by gel filtration Purified covalent conjugate of human recombinant oxyntomodulin with an alpha-2.8 sialic acid homopolymer containing 50 sialic acid units acids were analyzed using gradient PAGE.
Пример 2. Получение рекомбинантного оксинтомодулина, ковалентно связанного с гомополимерным полисахаридом, содержащим 50 звеньев альфа-2,8 сиаловой кислотыExample 2. Obtaining recombinant oxyntomodulin covalently linked to a homopolymer polysaccharide containing 50 units of alpha-2.8 sialic acid
На первой стадии тиольные группы вводили в последовательность человеческого рекомбинантного оксинтомодулина тиолированием амина лизина. Полученный, как описано в примере 1, человеческий рекомбинантный оксинтомодулин, 4 мг, растворяли в 0,25 мл PBS+10 мМ ЭДТА и добавляли 0,498 мг 2-иминотиолана (2-IT или реактива Траута 50 моль-эквивалентов 3,6×10-6 моль) в 0,25 мл того же буфера. Пробирку закрывали фольгой и оставляли для инкубации при перемешивании гибкой мешалкой в течение 1 ч при 3°C. Тиолированный человеческий рекомбинантный оксинтомодулин очищали от свободного 2-IT (реактив Траута) гель-фильтрацией (PD-10) и 0,5 мл фракции анализировали на присутствие белка (ВСА анализ) или тиола (анализ Элмана). Окисленную полисиаловую кислоту с молекулярной массой 25 кДа вводили в реакцию с 5 молярными эквивалентами гидразида N-[в-малеимидпропионовой кислоты] в 0,1 М ацетате натрия в течение 2 часов при 37°C. Полученный гидразон (САМ) осаждали в этаноле, повторно суспендировали в ацетате натрия и повторно осаждали в этаноле, повторно растворяли в воде и подвергали сухой заморозке. К тиолированному человеческому рекомбинантному оксинтомодулину (3,6 мг) в 2 мл PBS/ЭДТА добавляли 22,5 мг САМ (9×10-7 моль, 15 моль-эквивалентов). Пробирку запечатывали и оставляли для инкубации при 37°C в течение 1 ч при мягком перемешивании. Полученный конъюгат затем выделяли последовательно ионообменной и обращено-фазовой хроматографией. Очищенный ковалентный конъюгат человеческого рекомбинантного оксинтомодулина с гомополимером альфа-2,8 сиаловой кислоты содержащим 50 звеньев сиаловой кислоты растворяли в фосфатном буфере (pH 7,0), разливали во флаконы объемом 2 мл, содержащие гликопептид в концентрации 100 мкг/мл и использовали для анализа гипогликемической активности.At the first stage, thiol groups were introduced into the sequence of human recombinant oxyntomodulin by thiolation of the amine lysine. The 4 mg human recombinant oxyntomodulin obtained as described in Example 1 was dissolved in 0.25 ml of PBS + 10 mM EDTA and 0.498 mg of 2-iminothiolane (2-IT or Trout reagent 50 mol equivalents 3.6 × 10 - 6 mol) in 0.25 ml of the same buffer. The tube was closed with foil and left to incubate with stirring with a flexible stirrer for 1 h at 3 ° C. The thiolated human recombinant oxyntomodulin was purified from free 2-IT (Trout reagent) by gel filtration (PD-10) and a 0.5 ml fraction was analyzed for the presence of protein (ICA analysis) or thiol (Elman analysis). An oxidized polysialic acid with a molecular weight of 25 kDa was reacted with 5 molar equivalents of N- [b-maleimidepropionic acid hydrazide] in 0.1 M sodium acetate for 2 hours at 37 ° C. The resulting hydrazone (CAM) was precipitated in ethanol, re-suspended in sodium acetate and re-precipitated in ethanol, re-dissolved in water and subjected to dry freezing. To thiolated human recombinant oxyntomodulin (3.6 mg) in 2 ml of PBS / EDTA was added 22.5 mg of CAM (9 × 10 −7 mol, 15 mol equivalents). The tube was sealed and left to incubate at 37 ° C for 1 h with gentle stirring. The resulting conjugate was then isolated sequentially by ion exchange and reverse phase chromatography. The purified covalent conjugate of human recombinant oxyntomodulin with an alpha-2.8 sialic acid homopolymer containing 50 units of sialic acid was dissolved in phosphate buffer (pH 7.0), poured into 2 ml vials containing glycopeptide at a concentration of 100 μg / ml and used for analysis hypoglycemic activity.
В таблице 1 приведены результаты оценки гипогликемической активности конъюгата человеческого рекомбинантного оксинтомодулина с гомополимером альфа-2,8 сиаловой кислоты массой 14 кДа, свидетельствующие о выраженной гипогликемической активности конъюгата.Table 1 shows the results of the assessment of the hypoglycemic activity of the conjugate of human recombinant oxyntomodulin with a homopolymer of alpha-2.8 sialic acid weighing 14 kDa, indicating a pronounced hypoglycemic activity of the conjugate.
Эксперименты выполнялись на крысах Спрег-Доули массой 230-250 г, мужского пола Для изучения гипогликемического действия препарат вводили крысам натощак однократно подкожно в забуференном физиологическом растворе (pH 7,4) в дозах 5 и 25 мкг/кг. В качестве негативного контроля использовали забуференный физиологический раствор (pH 7,4) (растворитель). В каждой группе использовали 6 животных. Кровь для анализа отбирали из орбитального синуса и определяли уровень глюкозы в сыворотке ортотолуидиновым методомThe experiments were performed on male Sprague-Dawley rats weighing 230-250 g to study the hypoglycemic effect, the drug was administered to rats on an empty stomach once subcutaneously in buffered saline (pH 7.4) at doses of 5 and 25 μg / kg. Buffered saline (pH 7.4) (solvent) was used as a negative control. In each group, 6 animals were used. Blood for analysis was taken from the orbital sinus and serum glucose was determined by the ortotoluidine method
На фиг.1 представлена аминокислотная последовательность оксинтомодулина человека.Figure 1 shows the amino acid sequence of human oxyntomodulin.
На фиг.2 приведены результаты хроматографического анализа ковалентного конъюгата человеческого рекомбинантного оксинтомодулина с гомополимером альфа-2,8 сиаловой кислоты массой 14 кДа, содержащим 50 звеньев сиаловой кислоты, свидетельствующие об образовании истинного конъюгата.Figure 2 shows the results of chromatographic analysis of a covalent conjugate of human recombinant oxyntomodulin with an alpha-2.8 sialic acid homopolymer weighing 14 kDa containing 50 units of sialic acid, indicating the formation of a true conjugate.
I - ковалентный конъюгат человеческого рекомбинантного оксинтомодулина с гомополимером альфа-2,8 сиаловой кислоты содержащим 50 звеньев сиаловой кислотыI - covalent conjugate of human recombinant oxyntomodulin with an alpha-2.8 sialic acid homopolymer containing 50 units of sialic acid
II - стандарты молекулярных масс (кДа),II - molecular weight standards (kDa),
III - рекомбинантный оксинтомодулин человекаIII - recombinant human oxyntomodulin
На фиг.3 приведены результаты оценки гипогликемической активности конъюгата человеческого рекомбинантного оксинтомодулина с гомополимером альфа-2,8 сиаловой кислоты массой 14 кДа в сравнении с эксенатидом в тесте нагрузки глюкозой, свидетельствующие о том, что специфическая гипогликемическая активность конъюгата не уступает таковой эксенатида. При расчете площади под кривой (АУК) полученной из результирующей картины концентраций глюкозы в плазме крови (площадь выше уровня 0 мМ/л глюкозы плазмы крови) выявлено достоверное (P<0,05) снижение АУК в группе животных получавших конъюгат человеческого рекомбинантного оксинтомодулина с гомополимером альфа-2,8 сиаловой кислоты содержащим 50 звеньев сиаловой кислоты дозе 25 мкг/мл (ВСА-метод). В тоже время в группе животных получавших эксенатид в дозе 25 мкг/кг по сравнению с животными контрольной группы не было выявлено достоверных отличий.Figure 3 shows the results of evaluating the hypoglycemic activity of the conjugate of human recombinant oxyntomodulin with an alpha-2.8 sialic acid homopolymer weighing 14 kDa in comparison with exenatide in the glucose load test, indicating that the specific hypoglycemic activity of the conjugate is not inferior to that of exenatide. When calculating the area under the curve (AUC) obtained from the resulting picture of plasma glucose concentrations (area above the level of 0 mM / L plasma glucose), a significant (P <0.05) decrease in AUC was found in the group of animals treated with human recombinant oxyntomodulin conjugate with homopolymer alpha-2.8 sialic acid containing 50 units of sialic acid dose of 25 μg / ml (BCA method). At the same time, in the group of animals treated with exenatide at a dose of 25 μg / kg, no significant differences were found in comparison with animals in the control group.
Эксперименты выполнялись на 32 крысах Спрег-Доули массой 230-250 г, мужского пола. Натощак крысам подкожно вводились испытуемые вещества - ковалентный конъюгат человеческого рекомбинантного оксинтомодулина с гомополимером альфа-2,8 сиаловой кислоты содержащим 50 звеньев сиаловой кислоты (ИБХ-1) и эксенатид, а через час после этого перорально вводилась глюкоза в дозе 3 г/кг (раствор в дистиллированной воде 500 мг/мл). Препараты вводились следующим образом:The experiments were performed on 32 Spreg-Dowley rats weighing 230-250 g, male. On an empty stomach, the test substances were injected subcutaneously to rats - a covalent conjugate of human recombinant oxyntomodulin with an alpha-2.8 sialic acid homopolymer containing 50 units of sialic acid (IBC-1) and exenatide, and an hour later thereafter, glucose was orally administered at a dose of 3 g / kg (solution in distilled
Группа 1 - Физиологический растворGroup 1 - Saline
Группа 2 - ИБХ-1; 5 мкг/кгGroup 2 - IBH-1; 5 mcg / kg
Группа 3 - Эксенатид; 25 мкг/кгGroup 3 - Exenatide; 25 mcg / kg
Группа 4 - ИБХ-1; 25 мкг/кгGroup 4 - IBH-1; 25 mcg / kg
Уровни глюкозы в крови определяли каждые 30 мин на протяжении 3 часов. Каждая группа состояла из 8 животных (n=8).Blood glucose levels were determined every 30 minutes for 3 hours. Each group consisted of 8 animals (n = 8).
Таким образом, приведенные выше материалы позволяют утверждать, что заявляемый конъюгат и лекарственное средство на его основе для лечения гипергликемии является новым. Из опубликованных источников информации заявителям не известно применение оксинтомодулина человека, ковалентно связанного с гомополимерным полисахаридом, содержащим 50 звеньев альфа-2,8 сиаловой кислоты для лечения гипергликемии при сахарном диабете 2 типа.Thus, the above materials suggest that the inventive conjugate and a drug based on it for the treatment of hyperglycemia is new. From published sources of information, applicants are not aware of the use of human oxyntomodulin covalently linked to a homopolymer polysaccharide containing 50 units of alpha-2.8 sialic acid for the treatment of hyperglycemia in type 2 diabetes.
Заявляемый лекарственный препарат промышленно применим, что подтверждено примерами его изготовления и применения, показавшими, что он имеет выраженный гипогликемический эффект, не уступающий таковому эксенатида.The claimed drug is industrially applicable, which is confirmed by examples of its manufacture and use, which showed that it has a pronounced hypoglycemic effect, not inferior to that of exenatide.
Заявляемое применение является неочевидным. Гипогликемическая активность оксинтомодулина человека, ковалентно связанного с гомополимерным полисахаридом, содержащим 50 звеньев альфа-2,8 сиаловой кислоты существенно отличается от таковой природного человеческого оксинтомодулина. Механизмы указанного феномена в настоящий момент исследуются авторами.The claimed application is not obvious. The hypoglycemic activity of human oxyntomodulin covalently linked to a homopolymer polysaccharide containing 50 units of alpha-2.8 sialic acid is significantly different from that of natural human oxyntomodulin. The mechanisms of this phenomenon are currently being investigated by the authors.
Из вышеизложенного следует, что заявленное применение ново, неочевидно и промышленно применимо, т.е. соответствует всем требованиям, предъявляемым к изобретению.From the foregoing, it follows that the claimed application is new, non-obvious and industrially applicable, i.e. meets all the requirements for the invention.
Пример 3. Состав и описание лекарственного препарата, содержащего конъюгат оксинтомодулина и полисиаловой кислоты, согласно изобретению.Example 3. The composition and description of the medicinal product containing the conjugate of oxyntomodulin and polysialic acid, according to the invention.
Одним из примеров лекарственных препаратов, содержащих конъюгат оксинтомодулина и полисиаловой кислоты, согласно изобретению является лекарственный препарат «Окситолонг» (ОАО «Фармсинтез»).One example of a medicine containing an oxyntomodulin-polysialic acid conjugate according to the invention is the drug Oxytolong (OJSC Farmsintez).
Указанный препарат содержит конъюгат оксинтомодулина человека и полисиаловой кислоты, характеризующийся следующей структурной формулой:The specified preparation contains a conjugate of human oxyntomodulin and polysialic acid, characterized by the following structural formula:
Состав препарата «Окситолонг»:The composition of the drug "Oxytolong":
Активное вещество:Active substance:
Вспомогательные вещества:Excipients:
Аметов А.С. Регуляция секреции инсулина в норме и при сахарном диабете 2 типа: роль инкретинов. Русский медицинский журнал. 14.12.2006, том 14, №26.Ametov A.S. Regulation of insulin secretion in normal and type 2 diabetes mellitus: the role of incretins. Russian medical journal. 12/14/2006, Volume 14, No. 26.
Bataille D. et al., Peptides, 1981, V.2, Suppl. 2, P.41-44.Bataille D. et al., Peptides, 1981, V.2, Suppl. 2, P.41-44.
Jarrousse C, Niel H, Audousset-Puech MP, Martinez J, Bataille D., Oxyntomodulin and its C-terminal octapeptide inhibit liquid meal-stimulated acid secretion., Peptides. 1986; 7 Suppl 1:253-6.Jarrousse C, Niel H, Audousset-Puech MP, Martinez J, Bataille D., Oxyntomodulin and its C-terminal octapeptide inhibit liquid meal-stimulated acid secretion., Peptides. 1986; 7 Suppl 1: 253-6.
Schjoldager ВТ, Baldissera FG, Mortensen PE, Holst JJ, Christiansen J. Oxyntomodulin: a potential hormone from the distal gut. Pharmacokinetics and effects on gastric acid and insulin secretion in man Eur J Clin Invest. 1988 Oct; 18(5):499-503.Schjoldager BT, Baldissera FG, Mortensen PE, Holst JJ, Christiansen J. Oxyntomodulin: a potential hormone from the distal gut. Pharmacokinetics and effects on gastric acid and insulin secretion in man Eur J Clin Invest. 1988 Oct; 18 (5): 499-503.
Dakin CL, Small CJ, Batterham RL, Neary NM, Cohen MA, Patterson M, Ghatei MA, Bloom SR., Peripheral Oxyntomodulin reduces food intake and body weight gain in rats. Endocrinology, 2004 Jun; 145(6):2687-95. Epub 2004 Mar 4.Dakin CL, Small CJ, Batterham RL, Neary NM, Cohen MA, Patterson M, Ghatei MA, Bloom SR., Peripheral Oxyntomodulin reduces food intake and body weight gain in rats. Endocrinology, 2004 Jun; 145 (6): 2687-95. Epub 2004 Mar 4.
Wynne K, Park AJ, Small CJ, Meeran K, Ghatei MA, Frost GS, Bloom SR Oxyntomodulin increases energy expenditure in addition to decreasing energy intake in overweight and obese humans: a randomized controlled trial hit J Obes (Lond). 2006 Dec; 30(12): 1729-36. Epub 2006 AprWynne K, Park AJ, Small CJ, Meeran K, Ghatei MA, Frost GS, Bloom SR Oxyntomodulin increases energy expenditure in addition to decreasing energy intake in overweight and obese humans: a randomized controlled trial hit J Obes (Lond). 2006 Dec; 30 (12): 1729-36. Epub 2006 Apr
Adriano Maida, Julie A. Lovshin, Laurie L. Baggio, and Daniel J. Drucker, The glucagon-like peptide-1 receptor agonist oxyntomodulin enhances b-cell function but does not inhibit gastric emptying in mice, Endocrinology July 31, 2008.Adriano Maida, Julie A. Lovshin, Laurie L. Baggio, and Daniel J. Drucker, The glucagon-like peptide-1 receptor agonist oxyntomodulin enhances b-cell function but does not inhibit gastric emptying in mice, Endocrinology July 31, 2008.
V.N. Stepanenko, et a., Recombinant Oxyntomodulin, Russian Journal of Bioorganic Chemistry, 2007, Vol.33, No. 2, pp.227-232.V.N. Stepanenko, et a., Recombinant Oxyntomodulin, Russian Journal of Bioorganic Chemistry, 2007, Vol. 33, No. 2, pp. 227-232.
Roth, J., Rutishauser, U., Troy, F.A. (Eds.), Polysialic acid: from microbes to man, Birkhauser Verlag, Basel, Advances in Life Sciences, 1993.Roth, J., Rutishauser, U., Troy, F.A. (Eds.), Polysialic acid: from microbes to man, Birkhauser Verlag, Basel, Advances in Life Sciences, 1993.
Gregoriadis, G., Drug and vaccine delivery systems, in: PharmaTech, World Markets Research Centre Limited, London (2001) 172-176.Gregoriadis, G., Drug and vaccine delivery systems, in: PharmaTech, World Markets Research Center Limited, London (2001) 172-176.
Jain, S., Hirst, D.H., Laing, P., Gregoriadis, G., Polysialylation: The natural way to improve the stability and pharmacokinetics of protein and peptide drugs, Drug Delivery Systems and Sciences, 4(2) (2004) 3-9Jain, S., Hirst, DH, Laing, P., Gregoriadis, G., Polysialylation: The natural way to improve the stability and pharmacokinetics of protein and peptide drugs, Drug Delivery Systems and Sciences, 4 (2) (2004) 3 -9
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009145054/15A RU2524204C2 (en) | 2009-11-30 | 2009-11-30 | Human oxyntomodulin, its application, medication based thereon and method of applying medication for treatment and prevention of hyperglycemia |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2009145054/15A RU2524204C2 (en) | 2009-11-30 | 2009-11-30 | Human oxyntomodulin, its application, medication based thereon and method of applying medication for treatment and prevention of hyperglycemia |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2009145054A RU2009145054A (en) | 2011-06-10 |
| RU2524204C2 true RU2524204C2 (en) | 2014-07-27 |
Family
ID=44736408
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2009145054/15A RU2524204C2 (en) | 2009-11-30 | 2009-11-30 | Human oxyntomodulin, its application, medication based thereon and method of applying medication for treatment and prevention of hyperglycemia |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2524204C2 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2025684A1 (en) * | 2007-08-15 | 2009-02-18 | Zealand Pharma A/S | Glucagon analogues |
| RU2008100238A (en) * | 2005-06-13 | 2009-07-20 | Импиэриэл Инноувейшнс Лимитид (GB) | COMPOUNDS OF OXYNTHOMODULIN, PHARMACEUTICAL COMPOSITION ON THEIR BASIS, METHODS OF TREATMENT AND PREVENTION OF OBESITY AND ASSOCIATED DISEASES (OPTIONS) AND MEDICINE (OPTIONS) |
-
2009
- 2009-11-30 RU RU2009145054/15A patent/RU2524204C2/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2008100238A (en) * | 2005-06-13 | 2009-07-20 | Импиэриэл Инноувейшнс Лимитид (GB) | COMPOUNDS OF OXYNTHOMODULIN, PHARMACEUTICAL COMPOSITION ON THEIR BASIS, METHODS OF TREATMENT AND PREVENTION OF OBESITY AND ASSOCIATED DISEASES (OPTIONS) AND MEDICINE (OPTIONS) |
| EP2025684A1 (en) * | 2007-08-15 | 2009-02-18 | Zealand Pharma A/S | Glucagon analogues |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Thulesen J., et al., Diabetic intestinal growth adaptation and glucagon-like peptide 2 in the rat: effects of dietary fibre. Gut. 1999 Nov; 45(5):672-8 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2009145054A (en) | 2011-06-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5225074B2 (en) | GLP-1 PEGylated compound | |
| KR102011924B1 (en) | Improved peptide pharmaceuticals for insulin resistance | |
| AU2005207870B2 (en) | The combined use of GLP-1 agonists and gastrin for regulating blood glucose levels | |
| US9480751B2 (en) | Albumin binding probes and drug conjugates thereof | |
| US8716221B2 (en) | Modified exendins and uses thereof | |
| CN104662038A (en) | Glucagon analogues | |
| CN108367053A (en) | The method that metabolic disease is treated or improved using growth and differentiation factor 15 (GDF-15) | |
| CN107108710A (en) | Polypeptides of FGF 21 of modification and application thereof | |
| TW202235101A (en) | Composition for treating diabetes comprising long-acting insulin analogue conjugate and long-acting insulinotropic peptide conjugate | |
| US11773150B2 (en) | Antibody peptide conjugates that have agonist activity at both the glucagon and glucagon-like peptide 1 receptors | |
| US9867869B2 (en) | Insulin derivatives for diabetes treatment | |
| CN105263957A (en) | Therapeutic peptides | |
| WO2001041812A2 (en) | Amphiphilic polymers and polypeptide conjugates comprising same | |
| EP0119650A2 (en) | Galactosyl-insulin conjugates useful in treating diabetics | |
| JP2015057384A (en) | Novel neurturin conjugates for pharmaceutical use | |
| WO2013037267A1 (en) | Variant of liraglutide and conjugate thereof | |
| CN115243725A (en) | FGF-21 conjugate formulations | |
| RU2524204C2 (en) | Human oxyntomodulin, its application, medication based thereon and method of applying medication for treatment and prevention of hyperglycemia | |
| JPH0585942A (en) | Interferon-hyaluronic acid and/or its salt combined material | |
| US20090170775A1 (en) | Vasoactive intestinal polypeptide compositions | |
| US20230063794A1 (en) | Stapled triazole co-agonists of the glucagon and glp-1 receptors | |
| JP2016526533A (en) | Non-aggregated bioconjugate of amylin mimetic compound and polyethylene glycol | |
| KR102177339B1 (en) | Oral Gene Delivery and Uses Thereof | |
| CN114796517A (en) | Structure modification method for increasing transdermal efficacy of exosome | |
| WO2021133642A1 (en) | Stapled lactam co-agonists of the glucagon and glp-1 receptors |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HZ9A | Changing address for correspondence with an applicant | ||
| HZ9A | Changing address for correspondence with an applicant |