RU2378014C2 - Emulsion inactivated associated vaccine against cattle paragrippe-3, rednose and coronoviral infection - Google Patents
Emulsion inactivated associated vaccine against cattle paragrippe-3, rednose and coronoviral infection Download PDFInfo
- Publication number
- RU2378014C2 RU2378014C2 RU2007147614/13A RU2007147614A RU2378014C2 RU 2378014 C2 RU2378014 C2 RU 2378014C2 RU 2007147614/13 A RU2007147614/13 A RU 2007147614/13A RU 2007147614 A RU2007147614 A RU 2007147614A RU 2378014 C2 RU2378014 C2 RU 2378014C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cattle
- strain
- virus
- cell culture
- arriah
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается ассоциированной вакцины для специфической профилактики респираторных и желудочно-кишечных заболеваний крупного рогатого скота (КРС), обусловленных возбудителями парагриппа-3 (ПГ-3), инфекционного ринотрахеита (ИРТ) и коронавирусной инфекции КРС.The invention relates to the field of veterinary virology and biotechnology and relates to an associated vaccine for the specific prophylaxis of respiratory and gastrointestinal diseases of cattle (cattle) caused by pathogens of parainfluenza-3 (PG-3), infectious rhinotracheitis (IRT) and coronavirus infection of cattle.
Указанные вирусы играют ведущую роль в этиологии респираторных и желудочно-кишечных заболеваний КРС, особенно в крупных животноводческих хозяйствах.These viruses play a leading role in the etiology of respiratory and gastrointestinal diseases of cattle, especially in large livestock farms.
ПГ-3 (транспортная лихорадка КРС, параинфлюэнца - 3) - остро протекающее контагиозное вирусное заболевание, главным образом телят, характеризующееся поражением органов дыхания, но наиболее характерной является латентная форма парагриппозной инфекции. ПГ-3 возникает у КРС как в виде моноинфекции, так и в виде смешанных вирусных и вирусно-бактериальных инфекций, которые наносят значительный экономический ущерб из-за гибели и выбраковки животных, снижения продуктивности и нарушения воспроизводства. ПГ-3 распространен повсеместно, практически во всех странах мира.PG-3 (cattle transport fever, parainfluenza-3) is an acute contagious viral disease, mainly calves, characterized by respiratory damage, but the latent form of parainfluenza infection is most characteristic. PG-3 occurs in cattle, both in the form of mono-infection and in the form of mixed viral and viral-bacterial infections, which cause significant economic damage due to the death and culling of animals, reduced productivity and impaired reproduction. PG-3 is ubiquitous, in almost all countries of the world.
ИРТ - остро протекающее вирусное контагиозное заболевание КРС, наносящее значительный экономический ущерб скотоводству.IRT is an acute viral contagious disease of cattle, causing significant economic damage to livestock.
Вирус ИРТ вызывает заболевание КРС различных возрастных групп, проявляющееся пятью формами: поражением верхних дыхательных путей, вагинитами, энцефалитами, конъюнктивитами и артритами. Кроме того, у телят возможна пневмония.IRT virus causes cattle disease of various age groups, manifested in five forms: damage to the upper respiratory tract, vaginitis, encephalitis, conjunctivitis and arthritis. In addition, pneumonia is possible in calves.
Экономический ущерб, наносимый ИРТ, слагается из снижения удоев в период болезни (до 50-60%), значительного увеличения сервис-периода и яловости коров, болевших вагинальной формой, слабого развития больного молодняка и значительным процентом гибели и выбраковки телят. При хронической серозно-гнойной пневмонии погибает до 20% молодняка. Болезнь широко распространена во всем мире.The economic damage caused by ИРТ consists of a decrease in milk yield during the period of illness (up to 50-60%), a significant increase in the service period and the barrenness of cows with a vaginal form, poor development of sick young animals and a significant percentage of death and culling of calves. In chronic serous-purulent pneumonia, up to 20% of young animals die. The disease is widespread throughout the world.
Коронавирусная инфекция у КРС проявляется в виде коронавирусной диареи новорожденных телят, коронавирусной зимней дизентерии взрослого КРС и коронавирусной респираторной инфекции.Coronavirus infection in cattle is manifested in the form of coronavirus diarrhea in newborn calves, coronavirus winter dysentery of adult cattle, and coronavirus respiratory infection.
Чрезвычайно широкое распространение, тенденция вызывать длительную персистенцию, относительная устойчивость к воздействию разнообразных факторов обусловливают энзоотическое течение болезни в хозяйствах с неблагополучными условиями содержания и кормления. Стационарность болезни поддерживается за счет длительной персистенции возбудителя в организме животных-реконвалесцентов.Extremely widespread, the tendency to cause long-term persistence, and relative resistance to various factors determine the enzootic course of the disease in farms with poor living and feeding conditions. The stationarity of the disease is maintained due to the prolonged persistence of the pathogen in the body of animals-convalescents.
Указанные инфекции возникают у КРС как в виде моноинфекций, так и смешанных вирусных и вирусно-бактериальных инфекций.These infections occur in cattle, both in the form of mono-infections and in mixed viral and viral-bacterial infections.
В настоящее время основным средством борьбы с респираторными и желудочно-кишечными болезнями КРС является специфическая профилактика, для которой применяются живые и инактивированные вакцины как в виде моно-, так и ассоциированных препаратов (1, 2, 3).Currently, the main means of combating respiratory and gastrointestinal diseases of cattle is specific prophylaxis, for which live and inactivated vaccines are used in the form of mono- and associated drugs (1, 2, 3).
Преимущество живых вакцин из-за технологичности в производстве и простоты при применении не вызывает сомнений. Однако иммунная реакция у животных при их введении не всегда стабильна и в ряде случаев вызывает осложнения после вакцинации: вакцина может вызвать повышенную реактогенность, иммуносупрессию, а иногда и гибель до 2% животных при вакцинации в зависимости от условий содержания и наличия коинфекций, проблемы воспроизводства, длительную персистенцию и выделение вакцинного вируса во внешнюю среду. По этой причине они не нашли широкого применения.The advantage of live vaccines due to manufacturability and ease of use is beyond doubt. However, the immune response in animals when they are introduced is not always stable and in some cases causes complications after vaccination: the vaccine can cause increased reactogenicity, immunosuppression, and sometimes death of up to 2% of animals during vaccination, depending on the conditions of detention and the presence of co-infections, reproduction problems, prolonged persistence and isolation of the vaccine virus into the environment. For this reason, they are not widely used.
Для специфической профилактики указанных заболеваний широко используют инактивированные вакцины как сорбированные, так и эмульсионные.For specific prophylaxis of these diseases, inactivated vaccines, both sorbed and emulsion, are widely used.
Известна вакцина против ПГ-3 КРС сорбированная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3, полученного в культуре клеток ВНК-21 с инфекционной активностью не менее 6,5 Ig ТЦД50/см3, и в качестве целевой добавки адъювант-сорбент гидроокись алюминия (ГОА) в эффективном соотношении (4).A known vaccine against cattle PG-3 adsorbed inactivated containing avirulent purified antigenic material from the strain VGNKI-4 of the PG-3 virus obtained in the culture of BHK-21 cells with an infectious activity of at least 6.5 Ig TCD 50 / cm 3 , and as the target additive adjuvant-sorbent aluminum hydroxide (GOA) in an effective ratio (4).
Известна вакцина против ИРТ КРС эмульсионная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, полученного в культуре клеток животного происхождения, взятой из группы, состоящей из культуры клеток ВНК-21, из культуры клеток MDBK и из культуры клеток ЗКГ, с инфекционной активностью не менее 6,0 Ig ТЦД50/см3 и активностью в РДП не менее 4,0 log, и в качестве целевой добавки масляный адъювант в соотношении, мас.%:A known vaccine against cattle ИРТ is inactivated emulsion containing avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle ИРТ virus obtained in an animal cell culture taken from the group consisting of BHK-21 cell culture, MDBK cell culture and from a culture of ZKG cells, with an infectious activity of at least 6.0 Ig TCD 50 / cm 3 and activity in the RDP of at least 4.0 log, and as a target additive, an oil adjuvant in the ratio, wt.%:
Известна вакцина против коронавирусной инфекции КРС сорбированная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток животного происхождения, взятой из группы, состоящей из культуры клеток MDBK, из культуры клеток Таурус-1, из культуры клеток КСТ и из культуры клеток Vero, в концентрации вирусных частиц, обеспечивающей протективную иммунную активность антигена в организме животного после введения ему целевого препарата, и в качестве целевой добавки адъювант-сорбент ГОА в эффективном соотношении (6).A known vaccine against coronavirus infection of cattle is adsorbed inactivated, containing as an active substance an avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in animal cell culture, taken from the group consisting of MDBK cell culture, Taurus-1 cell culture, from KST cell culture and from Vero cell culture, in the concentration of viral particles, which provides protective immune activity of the antigen in the animal’s body after administration of the target drug as a target additive adjuvant GOA-sorbent in an effective ratio (6).
Недостатки моновалентных инактивированных вакцин заключаются в том, что они стимулируют образование иммунитета у животных только к одной инфекции, требуют проведения профилактических обработок против каждой инфекции в отдельности, что сказывается на затратах труда, растягивает сроки формирования иммунитета у животных, способствует возникновению стрессовых явлений и осложнений.The disadvantages of monovalent inactivated vaccines are that they stimulate the formation of immunity in animals to only one infection, require prophylactic treatments against each infection separately, which affects labor costs, stretches the formation of immunity in animals, and contributes to the occurrence of stressful phenomena and complications.
Указанные недостатки частично устранены созданием ассоциированных вакцин, содержащих отдельно или в сочетании антигены возбудителей ПГ-3, ИРТ и коронавирусной инфекции КРС различных штаммов.These disadvantages are partially eliminated by the creation of associated vaccines containing separately or in combination antigens of pathogens PG-3, IRT and coronavirus infection of cattle of various strains.
В ряде случаев в состав известных вакцин, особенно предназначенных для защиты телят, включают антигены возбудителей, вызывающих вторичные инфекции.In some cases, the composition of known vaccines, especially designed to protect calves, include antigens of pathogens that cause secondary infections.
Известна ассоциированная вакцина против вирусной диареи - болезни слизистых (ВД-БС), рота- и коронавирусной инфекций и эшерихиоза КРС эмульсионная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штамма VDV-Oregon-С24 V (САРМ V-293) вируса ВД-БС КРС, из штамма ТМ-91 (САРМ V-279) ротавируса КРС, из штамма BCV-9 (САРМ V-280) коронавируса КРС и из штаммов 3935/1 (САРМ 6233), 4804 (САРМ 6234) и 6304 (САРМ 6235) бактерий Е. coli, полученных в чувствительных биологических системах, и в качестве целевой добавки масляный адъювант в эффективных соотношениях (7).An associated vaccine is known for viral diarrhea — mucosal disease (VD-BS), rota- and coronavirus infections, and cattle escherichiosis — inactivated emulsion containing a mixture of avirulent purified antigenic materials from strain VDV-Oregon-C24 V (CAPM V-293) as an active substance. VD-BS virus of cattle, from strain TM-91 (CAPM V-279) of rotavirus cattle, from strain BCV-9 (CAPM V-280) of coronavirus cattle and from strains 3935/1 (CAPM 6233), 4804 (CAPM 6234) and 6304 (CAPM 6235) E. coli bacteria obtained in sensitive biological systems, and oil ad Juvent in effective ratios (7).
Известна ассоциированная вакцина против ИРТ, рота- и коронавирусной инфекций и эшерихиоза КРС эмульсионная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штамма IBR-BK-5-PTOB-8 INRV №3760 вируса ИРТ КРС, из штамма ТМ-91 (САРМ V-279) ротавируса КРС, из штамма BCV-9 (САРМ V-280) коронавируса КРС и из штаммов 3935/1 (САРМ 6234) и 6304 (САРМ 6235) бактерий Е. coli, полученных в чувствительных биологических системах, и в качестве целевой добавки масляный адъювант в эффективных соотношениях (8).Known associated vaccine against IRT, rota- and coronavirus infections and Escherichia cattle inactivated emulsion, containing as an active substance a mixture of avirulent purified antigenic materials from strain IBR-BK-5-PTOB-8 INRV No. 3760 of cattle IRT virus, from strain TM-91 (CAPM V-279) cattle rotavirus, from strain BCV-9 (CAPM V-280) of coronavirus cattle and from strains 3935/1 (CAPM 6234) and 6304 (CAPM 6235) of E. coli bacteria obtained in sensitive biological systems, and as the target additive, an oil adjuvant in effective ratios (8).
Известна ассоциированная вакцина против ПГ-3, рота- и коронавирусной инфекций и эшерихиоза КРС эмульсионная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штамма PI-3/T1/11 V-30 вируса ПГ-3 КРС, из штамма ТМ-91 (САРМ V-279) ротавируса КРС, из штамма BCV-9 (САРМ V-280) коронавируса КРС и из штаммов 3935/1 (САРМ 6233), 4808 (САРМ 6234) и 6304 (САРМ 6235) бактерий Е. coli, полученных в чувствительных биологических системах, и в качестве целевой добавки масляный адъювант в эффективных соотношениях (9).Known vaccine associated PG-3 rotavirus and coronavirus infections and ehsherihioza RNC inactivated emulsion comprising as active ingredient the mixture of purified antigenic material avirulent strain of PI-3 / T 1/11 V-30, PG-3 virus RNC from strain TM-91 (CAPM V-279) cattle rotavirus, from strain BCV-9 (CAPM V-280) cattle coronavirus and from strains 3935/1 (CAPM 6233), 4808 (CAPM 6234) and 6304 (CAPM 6235) E. bacteria coli obtained in sensitive biological systems and, as a target additive, an oil adjuvant in effective ratios (9).
Известна ассоциированная вакцина против рота-, корона-, герпесвирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят сорбированная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штамма «III-1» Bovine rotavirus, из штамма «СМ-1» Bovine coronavirus, из штамма «ТКА-ВИЭВ-В-2» Bovine Herpesvirus и из штаммов бактерий Е. coli, содержащих адгезины K99 и A20, и в качестве целевой добавки адъювант-сорбент ГОА в эффективных соотношениях (10).An associated vaccine against rota-, corona-, herpesvirus and Escherichia diarrhea of newborn calves is known, inactivated adsorbed, containing as an active substance a mixture of avirulent purified antigenic materials from Bovine rotavirus strain III-1, from Bovine coronavirus strain CM-1, from strain TKA-VIEV-V-2 "Bovine Herpesvirus and from strains of bacteria E. coli containing adhesins K 99 and A 20 , and as a target additive adjuvant-sorbent GOA in effective ratios (10).
Известна ассоциированная вакцина против рота- и коронавирусной инфекций, эшерихиоза и клостридиоза КРС эмульсионная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов их штаммов Cody 81-4, 10В223 типа G и В 641 ротавируса КРС, штамма Mebus (АТСС №VR-874) коронавируса КРС, штаммов В41, В43, В44 и В141 бактерий Е. coli и штамма GL 47 (АТСС РТА-3000) бактерий Clostridium perfringens, полученных в чувствительных биологических системах, и в качестве целевой добавки масляный адъювант в эффективных соотношениях (11).An associated vaccine against rota- and coronavirus infections, Escherichiosis and clostridiosis of cattle is known, inactivated emulsion containing a mixture of avirulent purified antigenic materials of their strains Cody 81-4, 10B223 of type G and B 641 of cattle rotavirus, Mebus strain (ATCC No. VR- 874) cattle coronavirus, strains B41, B43, B44 and B141 of E. coli bacteria and strain GL 47 (ATCC PTA-3000) of bacteria Clostridium perfringens obtained in sensitive biological systems, and as the target additive, an oil adjuvant in effective ratios (11) .
Известна ассоциированная вакцина против ИРТ, ПГ-3, вирусной диареи, респираторно-синцитиальной инфекции, рота- и коронавирусных заболеваний телят «КОМБОВАК» сорбированная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из 6 производственных штаммов вирусов: ИРТ, ПГ-3, ВД-БС, респираторно-синцитиальной инфекции, рота- и коронавирусных заболеваний КРС, - полученных в чувствительных биологических системах, и в качестве целевой добавки адъювант-сорбент ГОА в эффективных соотношениях (12).Known associated vaccine against IRT, PG-3, viral diarrhea, respiratory syncytial infection, rota- and coronavirus diseases of calves "COMBOVAC" inactivated adsorbed containing the mixture of avirulent purified antigenic materials from 6 production virus strains as an active substance: IRT, PG- 3, VD-BS, respiratory syncytial infection, rota- and coronavirus diseases of cattle, obtained in sensitive biological systems, and as a target additive adjuvant-sorbent GOA in an effective ratio niyah (12).
Известна ассоциированная вакцина против вирусных пневмогастроэнтеритов КРС и телят сорбированная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штаммов В-25 и ТК-А вируса ИРТ КРС, из штаммов ВД-N и ВД-R вируса ВД-БС КРС, из штаммов В-19 и ПТК-45/86 вируса ПГ-3 КРС, из штаммов К-88 и РП-82 ротавируса КРС, из штаммов КВ-90 и К-22 коронавируса КРС и из штаммов PC-89 и PC-71 возбудителя респираторно-синцитиальной инфекции КРС, полученных в чувствительных биологических системах, и в качестве целевой добавки адъювант-сорбент ГОА в эффективных соотношениях (13).Known associated vaccine against viral pneumogastroenteritis of cattle and calves is inactivated adsorbed, containing as an active substance a mixture of avirulent purified antigenic materials from strains B-25 and TK-A of the IRT virus of cattle, from strains VD-N and VD-R of the virus VD-BS cattle, from strains B-19 and PTK-45/86 of the PG-3 cattle virus, from strains K-88 and RP-82 of cattle rotavirus, from strains KV-90 and K-22 of cattle coronavirus, and from strains PC-89 and PC-71 causative agent of respiratory syncytial infection of cattle obtained in sensitive biological systems, and as targets minutes additive adjuvant sorbent GOA in effective ratios (13).
Известен также способ количественной оценки вируссодержащих суспензий с помощью электронной микроскопии, возникший как результат многолетних опытов по электронно-микроскопическому контролю вирусных препаратов и сопоставлению его данных с показателями биологических тестов, например титром инфекционности вируса (14).There is also a method for the quantitative assessment of virus-containing suspensions using electron microscopy, which arose as a result of many years of experiments on electron-microscopic control of viral preparations and comparison of its data with indicators of biological tests, for example, virus infectivity titer (14).
Авторами данного способа установлена зависимость между титром инфекционности нативных суспензий вируса ящура и количеством физических вирусных частиц, наблюдаемых под электронным микроскопом, что послужило основанием для определения общей концентрации вирусных частиц в единице объема суспензии (степень накопления вирусных частиц в определенном объеме жидкости).The authors of this method established the relationship between the infectivity titer of native FMD virus suspensions and the number of physical virus particles observed under an electron microscope, which served as the basis for determining the total concentration of viral particles per unit volume of the suspension (the degree of accumulation of viral particles in a certain volume of liquid).
Для определения общей концентрации (N) вирусных частиц в единице объема анализируемой суспензии на экране электронного микроскопа площадью S2 подсчитывают число одновременно наблюдаемых частиц n. По известному инструментальному увеличению электронного микроскопа (М) определяют размер участка пленки-подложки S1, соответствующего полезной площади экрана:To determine the total concentration (N) of viral particles per unit volume of the analyzed suspension on the screen of an electron microscope with an area of S 2 count the number of simultaneously observed particles n. The well-known instrumental increase in the electron microscope (M) determines the size of the portion of the substrate film S 1 corresponding to the useful screen area:
При нанесении вирусных препаратов на пленки-подложки концентрация вирусных частиц (n) на данном участке S1 соответствует суммарному количеству адсорбированных частиц и частиц, осажденных на подложку при испарении остаточной жидкости. Следовательно, наблюдаемое одновременно на экране число частиц распределяется в микрообъеме, равном:When applying viral preparations to the substrate films, the concentration of viral particles (n) in this area S 1 corresponds to the total amount of adsorbed particles and particles deposited on the substrate during evaporation of the residual liquid. Therefore, the number of particles observed simultaneously on the screen is distributed in a microvolume equal to:
v=S1·I,v = S 1 · I,
гдеWhere
I - толщина остаточного слоя жидкости на подложке (мм).I is the thickness of the residual liquid layer on the substrate (mm).
В определяемом объеме вируссодержащей суспензии число частиц равно:In the determined volume of the virus-containing suspension, the number of particles is equal to:
, ,
а после замены значений v и S1:and after replacing the values of v and S 1 :
, ,
гдеWhere
V - объем анализируемой суспензии (1 см3);V is the volume of the analyzed suspension (1 cm 3 );
N - среднее арифметическое ряда значений числа частиц, просчитанных с экрана электронного микроскопа или экспонированных фотопластинок.N is the arithmetic average of a series of values of the number of particles calculated from the screen of an electron microscope or exposed photographic plates.
Толщину остаточного слоя (I) на подложке измеряют предварительно охлажденным микрометром после замораживания жидкости на подложке в парах жидкого азота. Она составляет 0.03-0.04 мм и ее принимают как постоянную величину.The thickness of the residual layer (I) on the substrate is measured by a pre-cooled micrometer after freezing the liquid on the substrate in liquid nitrogen vapor. It is 0.03-0.04 mm and it is taken as a constant value.
Электронно-микроскопическое определение концентрации физических вирусных частиц позволяет не только определять количественную характеристику вируса в анализируемых суспензиях, но и одновременно оценивать морфологическое состояние исследуемых вирусных частиц.Electron-microscopic determination of the concentration of physical viral particles allows not only to determine the quantitative characteristic of the virus in the analyzed suspensions, but also to assess the morphological state of the studied viral particles.
Указанный способ оказался универсальным и пригодным для определения количественной характеристики различных вирусов в исследуемых жидкостях.The specified method turned out to be universal and suitable for determining the quantitative characteristics of various viruses in the studied liquids.
Наиболее близкой к предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является ассоциированная вакцина против ПГ-3 и коронавирусной инфекции КРС эмульсионная инактивированная, содержащая в качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штамма PI-3/T1/ 11 V-30 вируса ПГ-3 КРС и из штамма BCV-9 (CAPM V-280) коронавируса КРС, полученных в чувствительных биологических системах, и в качестве целевой добавки масляный адъювант в эффективных соотношениях (9).The closest to the proposed invention, the essential features is associated vaccine PG-3 and coronavirus RNC infection emulsion inactivated, comprising as active ingredient the mixture avirulent purified antigenic material from a strain of PI-3 / T 1/11 V-30 virus GHG-3 Cattle from the BCV-9 strain (CAPM V-280) of cattle coronavirus obtained in sensitive biological systems and, as a target additive, an oil adjuvant in effective ratios (9).
Общим существенным недостатком известных ассоциированных вакцин, в том числе вакцины-прототипа, предназначенных для профилактики массовых инфекционных респираторных и желудочно-кишечных заболеваний КРС различных половозрастных групп, является их недостаточно высокая эффективность вследствие:A common significant drawback of the known associated vaccines, including the prototype vaccine, intended for the prevention of massive infectious respiratory and gastrointestinal diseases of cattle of various age and gender groups, is their insufficiently high efficiency due to:
1) неполноценности (неполноты) антигенного состава входящих в них ингредиентов и сложных взаимодействий антигенов, из которых они изготовлены;1) inferiority (incompleteness) of the antigenic composition of their constituent ingredients and complex interactions of the antigens from which they are made;
2) узости антигенного спектра действия используемых штаммов;2) the narrowness of the antigenic spectrum of action of the strains used;
3) низкой иммуногенной активности препаратов. Причиной указанного недостатка может быть использование для инактивации вирусов формалина, вызывающего деструктивные изменения вирусных белков.3) low immunogenic activity of drugs. The reason for this drawback may be the use of formalin for inactivation of viruses, which causes destructive changes in viral proteins.
Поэтому проблема создания ассоциированной вакцины против основных возбудителей инфекционных респираторных и желудочно-кишечных заболеваний КРС и телят продолжает оставаться актуальной и является основным направлением исследований по их совершенствованию.Therefore, the problem of creating an associated vaccine against the main pathogens of infectious respiratory and gastrointestinal diseases of cattle and calves continues to be relevant and is the main direction of research to improve them.
Задача, на решение которой направлено настоящее изобретение, заключается в получении ассоциированной вакцины против ПГ-3, ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионной инактивированной, создающей эффективную защиту восприимчивых животных различных половозрастных групп против возбудителей ПГ-3, ИРТ и коронавирусной инфекции КРС, циркулирующих на территории Российской Федерации.The problem to which the present invention is directed, is to obtain an associated vaccine against PG-3, IRT and coronavirus infection of cattle emulsion inactivated, which creates effective protection of susceptible animals of various sex and age groups against pathogens PG-3, IRT and coronavirus infection of cattle circulating in the territory Russian Federation.
Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала высокоиммуногенных, безвредных и ареактогенных ассоциированных вакцин против ПГ-3, ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионных инактивированных, способных защитить поголовье КРС различных половозрастных групп от возбудителей ПГ-3, ИРТ и коронавирусной инфекции КРС, циркулирующих на территории России.The technical result from the use of the present invention is to expand the arsenal of highly immunogenic, harmless and areactogenic associated vaccines against PG-3, IRT and coronavirus infection of cattle emulsion inactivated, capable of protecting livestock of various sex and age groups from pathogens PG-3, IRT and coronavirus infection of cattle on Russian territory.
Указанный технический результат достигнут созданием ассоциированной вакцины против ПГ-3, ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионной инактивированной, охарактеризованной следующей совокупностью признаков. Согласно изобретению предлагаемая вакцина содержит в качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штамма «ВГНКИ-4» (авторское наименование) вируса ПГ-3 КРС, из штамма «ВНИИЗЖ» (авторское наименование) вируса ИРТ и из штамма «ВНИИЗЖ» (авторское наименование) коронавируса КРС, полученных в культурах клеток животного происхождения, в количествах, обеспечивающих протективную иммунную активность каждого антигена в организме животного после введения ему целевого препарата, и в качестве целевой добавки масляный адъювант в эффективном соотношении.The specified technical result was achieved by the creation of an associated vaccine against PG-3, IRT and coronavirus infection of cattle with inactivated emulsion, characterized by the following set of features. According to the invention, the vaccine according to the invention contains a mixture of avirulent purified antigenic materials from the strain “VGNKI-4” (copyright name) of the cattle PG-3 virus, from the strain “ARRIAH” (copyright name) of the IRT virus and from the strain “ARRIAH” (author's name) cattle coronavirus obtained in cell cultures of animal origin, in quantities that ensure the protective immune activity of each antigen in the animal’s body after administration of the target drug to it, and as a target additive m slyany adjuvant in an effective ratio.
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые испрашивается правовая охрана:The present invention includes the following set of essential features that provide a technical result in all cases for which legal protection is sought:
1. Ассоциированная вакцина против ПГ-3, ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионная инактивированная.1. Associated vaccine against PG-3, IRT and coronavirus infection of cattle emulsion inactivated.
2. Активное вещество.2. The active substance.
3. В качестве активного вещества смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штамма «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС и из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученных в культурах клеток животного происхождения, в количествах, обеспечивающих протективную иммунную активность каждого антигена в организме животного после введения ему целевого препарата.3. As an active substance, a mixture of avirulent purified antigenic materials from strain VGNKI-4 of the PG-3 cattle virus, from the strain ARRIAH of the IRT virus of cattle and from the strain ARRIAH of cattle coronavirus obtained in animal cell cultures in amounts providing protective immune activity of each antigen in the animal’s body after administration of the target drug to it.
4. Целевая добавка.4. Targeted supplement.
5. В качестве целевой добавки масляный адъювант.5. As a target additive, an oil adjuvant.
Признаками изобретения, характеризующими предлагаемую вакцину и совпадающими с признаками прототипа, в том числе родовое понятие, отражающее назначение, являются:The signs of the invention, characterizing the proposed vaccine and coinciding with the signs of the prototype, including the generic concept, reflecting the purpose, are:
1. Ассоциированная вакцина против ПГ-3, ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионная инактивированная.1. Associated vaccine against PG-3, IRT and coronavirus infection of cattle emulsion inactivated.
2. Активное вещество.2. The active substance.
3. Целевая добавка.3. Targeted supplement.
По сравнению с вакциной-прототипом существенные отличительные признаки предлагаемой вакцины заключаются в том, что в качестве активного вещества она содержит смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штамма «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3, из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ и из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученных в культурах клеток животного происхождения, в количествах, обеспечивающих протективную иммунную активность каждого антигена в организме животного после введения ему целевого препарата.Compared with the prototype vaccine, the essential distinguishing features of the proposed vaccine are that it contains a mixture of avirulent purified antigenic materials from the strain VGNKI-4 of the PG-3 virus, from the strain ARRIAH of the IRT virus and from the strain " ARRIAH "of cattle coronavirus obtained in cell cultures of animal origin, in amounts that provide protective immune activity of each antigen in the animal’s body after administration of the target drug to it.
Предлагаемое изобретение характеризуется другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:The present invention is characterized by other distinctive features expressing specific forms of execution or special conditions for its use:
1. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, полученного в культуре клеток животного происхождения, взятой из группы, состоящей из культуры клеток почек теленка MDBK и из культуры клеток почек сирийского хомячка ВНК-21, в эффективном количестве.1. Avirulent purified antigenic material from VGNKI-4 strain of PG-3 cattle virus obtained in a cell culture of animal origin, taken from the group consisting of MDBK calf kidney cell culture and VNK-21 Syrian hamster kidney cell culture quantity.
2. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, полученного в культуре клеток MDBK с инфекционной активностью не менее 6,5 Ig ТЦД50/см3, в количестве не менее 10,0 мас.%.2. Avirulent purified antigenic material from the VGNKI-4 strain of PG-3 cattle virus obtained in MDBK cell culture with an infectious activity of at least 6.5 Ig TCD 50 / cm 3 , in an amount of at least 10.0 wt.%.
3. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, полученного в культуре клеток ВНК-21 с инфекционной активностью не менее 6,5 Ig ТЦД50/см3, в количестве не менее 10,0 мас.%.3. Avirulent purified antigenic material from the VGNKI-4 strain of PG-3 cattle virus obtained in the BHK-21 cell culture with an infectious activity of at least 6.5 Ig TCD 50 / cm 3 , in an amount of at least 10.0 wt. %
4. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, полученного в культуре клеток животного происхождения, взятой из группы, состоящей из культуры клеток ВНК-21, из культуры клеток MDBK и из культуры клеток гонад 3-дневной козы 3КГ, в эффективном количестве.4. Avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle IRT virus obtained in a cell culture of animal origin, taken from the group consisting of a cell culture of BHK-21, from a cell culture of MDBK and from a gonad cell culture of 3-day goat 3KG, in effective amount.
5. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, полученного в культуре клеток ВНК-21 с инфекционной активностью не менее 6,0 Ig ТЦД50/см3 и активностью в реакции диффузионной преципитации (РДП) не менее 4,0 log2, в количестве не менее 10,0 мас.%.5. Avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle IRT virus obtained in VNK-21 cell culture with an infectious activity of at least 6.0 Ig TCD 50 / cm 3 and activity in the diffusion precipitation reaction (RDP) of at least 4.0 log 2 , in an amount of not less than 10.0 wt.%.
6. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, полученного в культуре клеток MDBK с инфекционной активностью не менее 6,0 Ig ТЦД50/см3 и активностью в РДП не менее 4,0 log2, в количестве не менее 10,0 мас.%.6. Avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle IRT virus obtained in MDBK cell culture with an infectious activity of at least 6.0 Ig TCD 50 / cm 3 and activity in the RDP of at least 4.0 log 2 , in an amount of at least 10.0 wt.%.
7. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, полученного в культуре клеток ЗКГ с инфекционной активностью не менее 6,0 Ig ТЦД50/см3 и активностью в РДП не менее 4,0 log2, в количестве не менее 10,0 мас.%.7. Avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle IRT virus obtained in the culture of cells of the GCC with an infectious activity of at least 6.0 Ig TCD 50 / cm 3 and activity in the RDP of at least 4.0 log 2 , in an amount of not less than 10.0 wt.%.
8. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток животного происхождения, взятой из группы, состоящей из культуры клеток MDBK, из культуры клеток почек теленка Таурус-1, из культуры клеток коронарных сосудов теленка КСТ и из культуры клеток почек обезьяны Vero, в эффективном количестве.8. Avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in a cell culture of animal origin, taken from the group consisting of MDBK cell culture, Taurus-1 calf kidney cell culture, KST calf coronary cell culture, and culture Vero monkey kidney cells in an effective amount.
9. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток MDBK со степенью накопления не менее 108 вирусных частиц/см3 и активностью в реакции гемагглютинации (РГА) не менее 7,0 log2, в количестве не менее 10,0 мас.%.9. Avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in an MDBK cell culture with a degree of accumulation of at least 10 8 virus particles / cm 3 and activity in the hemagglutination reaction (RGA) of at least 7.0 log 2 , not less than 10.0 wt.%.
10. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток Таурус-1 со степенью накопления не менее 109 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 9,0 log2, в количестве не менее 10,0 мас.%.10. Avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in Taurus-1 cell culture with a degree of accumulation of at least 10 9 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 9.0 log 2 , in an amount of at least 10 , 0 wt.%.
11. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток КСТ со степенью накопления не менее 107,5 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 6,0 log2, в количестве не менее 10,0 мас.%.11. Avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in a culture of KST cells with an accumulation degree of at least 10 7.5 virus particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 6.0 log 2 , in an amount of at least 10 , 0 wt.%.
12. Авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток Vero со степенью накопления не менее 107,5 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 6,0 log2, в количестве не менее 10,0 мас.%.12. Avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in Vero cell culture with an accumulation degree of at least 10 7.5 virus particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 6.0 log 2 , in an amount of at least 10 , 0 wt.%.
13. Масляный адъювант в количестве не менее 70,0 мас.%.13. Oil adjuvant in an amount of not less than 70.0 wt.%.
14. Смесь авирулентных очищенных антигенных материалов из штамма «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3, из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ и из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученных в культурах клеток животного происхождения, и масляный адъювант в соотношении, мас.%:14. A mixture of avirulent purified antigenic materials from the strain VGNKI-4 of the PG-3 virus, from the strain ARRIAH of the IRT virus and from the strain ARRIAH of cattle coronavirus obtained in animal cell cultures, and an oil adjuvant in the ratio, wt. %:
Авирулентный очищенный антигенный материал из штаммаAvirulent purified antigenic material from strain
«ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, полученного в культуре клеток"VGNKI-4" virus PG-3 cattle obtained in cell culture
животного происхождения, взятой из группы, состоящей изanimal origin taken from the group consisting of
культуры клеток MDBK и из культуры клеток ВНК-21, с инфекционной активностью не менее 6,5 Iq ТЦД50/см3 - 10,0cell cultures of MDBK and from the cell culture of BHK-21, with an infectious activity of at least 6.5 Iq TCD 50 / cm 3 - 10.0
Авирулентный очищенный антигенный материал из штаммаAvirulent purified antigenic material from strain
«ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, полученного в культуре клетокARRIAH of cattle IRT virus obtained in cell culture
животного происхождения, взятой из группы, состоящей изanimal origin taken from the group consisting of
культуры клеток ВНК-21, из культуры клеток MDBK и изBHK-21 cell culture, from MDBK cell culture and from
культуры клеток ЗКГ, с инфекционной активностью не менее 6,0 Ig ТЦД50/см3 и активностью в РДП не менее 4,0 log2 - 10,0ZKG cell culture, with infectious activity of at least 6.0 Ig TCD 50 / cm 3 and activity in the RDP of at least 4.0 log 2 - 10.0
Авирулентный очищенный антигенный материал из штаммаAvirulent purified antigenic material from strain
«ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клетокARRIAH of cattle coronavirus obtained in cell culture
животного происхождения, взятой из группы, состоящей изanimal origin taken from the group consisting of
культуры клеток MDBK, из культуры клеток Таурус-1,cell culture MDBK, from cell culture Taurus-1,
из культуры клеток КСТ и из культуры клеток Vero,from a culture of CTC cells and from a culture of Vero cells,
в концентрации вирусных частиц, обеспечивающейin the concentration of viral particles, providing
протективную иммунную активность антигена в организме животного после введения ему целевого препарата - 10,0 Масляный адъювант - до 100,0,protective immune activity of the antigen in the animal’s body after administration of the target drug to it - 10.0 Oil adjuvant - up to 100.0,
Входящие в предлагаемую вакцину штаммы вирусов известны и являются производственными при изготовлении моновакцин (15, 16, 17).The virus strains included in the proposed vaccine are known and are industrial in the manufacture of monovaccines (15, 16, 17).
В результате проведенных исследований, авторами установлено, что между антигенами, входящими в состав предлагаемой вакцины, отсутствует конкуренция. Авторами обнаружено также явление синергизма при соединении указанных антигенов в предлагаемой вакцине, что позволило снизить их количественное содержание в препарате при сохранении такой же напряженности и длительности иммунитета у вакцинированных животных, как и при использовании для иммунизации соответствующих монопрепаратов.As a result of studies, the authors found that between the antigens that make up the proposed vaccine, there is no competition. The authors also discovered the phenomenon of synergism when combining these antigens in the proposed vaccine, which allowed to reduce their quantitative content in the drug while maintaining the same tension and duration of immunity in vaccinated animals, as when using the corresponding monopreparations for immunization.
Дополнительный технический результат от использования предлагаемого изобретения достигается за счет того, что для инактивации вируссодержащих материалов используют аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ), что позволяет значительно снизить трудо- и энергозатраты на изготовление вакцины и повысить качество антигенных материалов.An additional technical result from the use of the present invention is achieved due to the fact that for the inactivation of virus-containing materials using aminoethylethyleneimine (AEEI), which can significantly reduce labor and energy costs for the manufacture of vaccines and improve the quality of antigenic materials.
Дополнительный технический результат от использования предлагаемого изобретения в части повышения антигенной и иммуногенной активности целевого продукта достигается также за счет использования в его составе масляного адъюванта марки Montanide ISA-70 производства фирмы «Seppic» (Франция, стандарт ИСО 9001).An additional technical result from the use of the invention in terms of increasing the antigenic and immunogenic activity of the target product is also achieved through the use of Montanide ISA-70 brand oil adjuvant manufactured by Seppic (France, ISO 9001 standard) in its composition.
Вирусный изолят, послуживший источником для получения производственного штамма «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, выделен из легких 2-3-месячных телят с респираторной патологией. Штамм «ВГНКИ-4» адаптирован к культуре клеток почек сирийского хомячка ВНК-21 и к культуре клеток теленка Таурус-1 (5).The viral isolate, which served as the source for the production strain VGNKI-4 of the PG-3 cattle virus, was isolated from the lungs of 2-3-month-old calves with respiratory pathology. The strain “VGNKI-4” is adapted to the cell culture of the kidneys of the Syrian hamster VNK-21 and to the culture of Taurus-1 calf cells (5).
Штамм «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС депонирован 30 сентября 1999 года во Всероссийскую государственную коллекцию штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Федерального государственного учреждения «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ») под регистрационным наименованием «ВГНКИ-4» ДЕП.The strain “VGNKI-4” of the PG-3 cattle virus was deposited on September 30, 1999 with the All-Russian State Collection of microorganism strains used in veterinary medicine and animal husbandry, Federal State Institution “All-Russian State Center for the Quality and Standardization of Medicines for Animals and Feed” (FGU VGNKI ") Under the registration name" VGNKI-4 "DEP.
Штамм «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС характеризуется следующими признаками и свойствами (15).The strain “VGNKI-4” of the cattle PG-3 virus is characterized by the following features and properties (15).
Морфологические признакиMorphological features
Штамм «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС относится к семейству Paramyxoviridae, роду Parainfluenza, подтипу Parainfluenza virus 3 и по своему строению является классическим парамиксовирусом. Внешне вирус почти сферический, но часто встречаются полиморфные формы. Плавучая плотность в сахарозе составляет 1,197 г/см3. Коэффициент седиментации вирионной РНК составляет 42S. Молекулярная масса 4,5×106Д. Размер сферических форм от 80 до 300 нм, но большинство вирионов в среднем от 130 до 140 нм.The strain VGNKI-4 of the cattle PG-3 virus belongs to the family Paramyxoviridae, the genus Parainfluenza, a subtype of Parainfluenza virus 3, and is a classic paramyxovirus in structure. Outwardly, the virus is almost spherical, but polymorphic forms are often found. The floating density in sucrose is 1.197 g / cm 3 . The sedimentation coefficient of virion RNA is 42S. The molecular weight is 4.5 × 10 6 D. The size of the spherical forms is from 80 to 300 nm, but most virions are on average from 130 to 140 nm.
Вирус ПГ-3 КРС штамма «ВГНКИ-4» имеет 7 структурных белков:The virus PG-3 cattle strain "VGNKI-4" has 7 structural proteins:
1. Фосфопротеиды (Р, м.м. 83 кД).1. Phosphoproteins (P, m. 83 kD).
2. ГА-нейраминидазный гликопротеин (HN, м.м. 69 кД).2. HA-neuraminidase glycoprotein (HN, m. 69 kD).
3. Главный нуклеокапсидный протеин (NP, м.м. 66 кД).3. The main nucleocapsid protein (NP, mm 66 kD).
4. Гликопротеин (F, м.м. 55 Д).4. Glycoprotein (F, m.m. 55 D).
5. Матричный белок (М, м.м. 38 Д).5. Matrix protein (M, m. 38 D).
6. Белок L-полимераза (м.м. 180 Д).6. Protein L-polymerase (m. M. 180 D).
7. Клеточный активный белок А (м.м. 43 Д).7. Cellular active protein A (m. M. 43 D).
В двухслойной, содержащей липиды, оболочке (толщина 10-15 нм) размещены 2 различные макромолекулы: гликопротеин гемагглютинин нейраминидаза (HN) и гликопротеин слияния (F). Оба выступают на 8 нм над оболочкой вириона с интервалом 7-8 нм. Гемагглютинин осуществляет прикрепление вириона к рецепторам клетки хозяина, содержащих нейраминовую (сиаловую) кислоту, а нейраминидаза разрушает рецепторы и тем самым помогает элюции вируса в процессе отпочковывания от клетки-хозяина. F-белок отвечает за проникновение вируса в клетку, осуществляя слияние с клеточной мембраной и неся ответственность за гемолиз, который происходит за счет точечного гидролиза молекулы неактивного предшественника F0. Известна зависимость между структурой гликопротеидов и патогенностью вируса. У патогенных штаммов оба поверхностных гликопротеида в клетках ВНК-21 включаются в вирионы только в расщепленной форме. У апатогенных штаммов гликопротеид F включается в вирионы в виде предшественника F0. Вирусы с нерасщепленными гликопротеидами обладают очень низкой биологической активностью, однако, если их обрабатывать трипсином, они проявляют полную биологическую активность. Белок F ответственен за гемолитическую активность и вирусиндуцируемый кариоцитоз. Посттрансляционное расщепление белка предшественника F0 на F1 и F2 осуществляется клеточными ферментами.In a two-layer lipid-containing membrane (thickness 10-15 nm), 2 different macromolecules are located: glyagoprotein hemagglutinin neuraminidase (HN) and fusion glycoprotein (F). Both protrude 8 nm above the shell of the virion with an interval of 7-8 nm. Hemagglutinin attaches the virion to the receptors of the host cell containing neuraminic (sialic) acid, and neuraminidase destroys the receptors and thereby helps the elution of the virus in the process of budding from the host cell. F-protein is responsible for the penetration of the virus into the cell, fusing with the cell membrane and responsible for hemolysis, which occurs due to the point hydrolysis of the inactive precursor molecule F 0 . A known relationship between the structure of glycoproteins and the pathogenicity of the virus. In pathogenic strains, both surface glycoproteins in BHK-21 cells are included in virions only in split form. In apatogenic strains, glycoprotein F is incorporated into virions in the form of a precursor F 0 . Viruses with undigested glycoproteins have very low biological activity, however, if they are treated with trypsin, they exhibit full biological activity. Protein F is responsible for hemolytic activity and virus-induced karyocytosis. Post-translational cleavage of the precursor protein F 0 into F 1 and F 2 is carried out by cellular enzymes.
Антигенные свойстваAntigenic properties
Штамм «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС агглютинирует эритроциты морской свинки, кролика, свиньи, коровы, мыши, овцы, козы, человека и белой мыши. Клетки, инфицированные вирусом ПГ-3 КРС из штамма «ВГНКИ-4», сорбируют эритроциты морской свинки, КРС, овцы, кролика и белой мыши. При вакцинации вирус индуцирует образование специфических антител на 8-14 сутки после ревакцинации, антитела достигают пика к 16-28 дню и сохраняются до одного года. Продолжительность и напряженность поствакцинального иммунитета обеспечивается преимущественно IgG и секреторными IgA, выработка которых стимулируется активным вакцинальным процессом. Привитые телята с титром гуморальных антител от 6,0 до 10,3 log2 устойчивы к заражению вирусом ПГ-3 КРС. Полевые изоляты вируса ПГ-3 КРС имеют близкое антигенное родство с вирусом ПГ-3 КРС штамма «ВГНКИ-4».The strain "VGNKI-4" virus PG-3 cattle agglutinates red blood cells of guinea pigs, rabbits, pigs, cows, mice, sheep, goats, humans and white mice. Cells infected with cattle PG-3 virus from the VGNKI-4 strain sorb red blood cells of guinea pig, cattle, sheep, rabbit and white mouse. During vaccination, the virus induces the formation of specific antibodies on the 8-14th day after revaccination, the antibodies peak at 16-28 days and last up to one year. The duration and intensity of post-vaccination immunity is ensured mainly by IgG and secretory IgA, the production of which is stimulated by an active vaccination process. Vaccinated calves with a titer of humoral antibodies from 6.0 to 10.3 log 2 are resistant to infection with the cattle PG-3 virus. Field isolates of the cattle PG-3 virus have close antigenic affinity with the PG-3 cattle virus of the strain “VGNKI-4”.
Биотехнологические характеристикиBiotechnological characteristics
Штамм «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС предназначен для приготовления живых и инактивированных вакцин против ПГ-3 КРС. Вирус штамма «ВГНКИ-4» ПГ-3 КРС репродуцируется в культурах клеток ПЭК, ПТ, MDBK и ВНК-21 и накапливается в титрах от 6,5 до 8,5 Ig ТЦД50/см3. Штамм «ВГНКИ-4» является стабильным и безвредным.The strain "VGNKI-4" virus PG-3 cattle is intended for the preparation of live and inactivated vaccines against PG-3 cattle. The virus strain "VGNKI-4" PG-3 cattle is reproduced in cell cultures of PEC, PT, MDBK and BHK-21 and accumulates in titers from 6.5 to 8.5 Ig TCD 50 / cm 3 . The strain "VGNKI-4" is stable and harmless.
Устойчивость к внешним факторамResistance to external factors
Вирус ПГ-3 КРС штамма «ВГНКИ-4» быстро разрушается под действием высокой температуры. Возбудитель чувствителен к хлороформу, эфиру, формалину и детергентам.The PG-3 virus of cattle of the strain "VGNKI-4" is rapidly destroyed by high temperature. The causative agent is sensitive to chloroform, ether, formalin and detergents.
Для получения антигенного материала из штамма «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС в качестве чувствительной биологической системы используют преимущественно культуры клеток ВНК-21 или MDBK. Полученный вируссодержащий материал очищают от балластных примесей центрифугированием или любым другим известным методом.To obtain antigenic material from the strain “VGNKI-4” of the PG-3 cattle virus, the cell culture of BHK-21 or MDBK is used as a sensitive biological system. The resulting virus-containing material is purified from ballast impurities by centrifugation or any other known method.
Для инактивации вируса ПГ-3 используют АЭЭИ, который добавляют в очищенную вируссодержащую суспензию до концентрации 0,1%. Инактивацию вируса ведут при 36-37°С и рН 7,0-7,6 в течение 24 часов. По окончании инактивации АЭЭИ нейтрализуют внесением в антигенный материал тиосульфата натрия. Для этого в охлажденную суспензию антигена добавляют 1М раствор тиосульфата натрия из расчета 10% к объему использованного АЭЭИ.For inactivation of the PG-3 virus, AEEI is used, which is added to the purified virus-containing suspension to a concentration of 0.1%. Inactivation of the virus is carried out at 36-37 ° C and a pH of 7.0-7.6 for 24 hours. At the end of inactivation, AEEI is neutralized by adding sodium thiosulfate to the antigenic material. For this, a 1M sodium thiosulfate solution is added to the cooled antigen suspension at the rate of 10% of the volume of the used AEEI.
Для изготовления эмульсионной формы предлагаемой вакцины используют авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3, полученного в культуре клеток MDBK или ВНК-21 с инфекционной активностью не менее 6,5 Ig ТЦД50/см3, в количестве не менее 10,0 мас.%.For the manufacture of the emulsion form of the proposed vaccine, avirulent purified antigenic material is used from the strain VGNKI-4 of the PG-3 virus obtained in a MDBK or BHK-21 cell culture with an infectious activity of at least 6.5 Ig TCD 50 / cm 3 , in an amount not less than 10.0 wt.%.
Вирусный изолят, послуживший источником для получения производственного штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, выделен из патологического материала телят, павших с явлениями ИРТ во время вспышки заболевания в СПК «Миневское» Нижегородской области в 1998 году. Вакцинный штамм «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС адаптирован к культурам клеток ВНК-21, MDBK и ЗКГ.The viral isolate, which served as the source for the production strain “ARRIAH” of the cattle IRT virus, was isolated from the pathological material of calves who died with the symptoms of IRT during the outbreak in the Minevskoye SEC in Nizhny Novgorod Region in 1998. The vaccine strain "ARRIAH" of cattle IRT virus is adapted to the cultures of BHK-21, MDBK and ZKG cells.
Штамм «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС депонирован 12 марта 2001 года во Всероссийскую государственную коллекцию штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Федерального государственного учреждения «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ») под регистрационным наименованием «ВНИИЗЖ-ДЕП».The strain "ARRIAH" of the IRT virus of cattle was deposited on March 12, 2001 in the All-Russian State Collection of microorganism strains used in veterinary medicine and animal husbandry, Federal State Institution "All-Russian State Center for the Quality and Standardization of Medicines for Animals and Feed" (FGU "VGNKI") under registration the name "ARRIAH-DEPT".
Штамм «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС характеризуется следующими признаками и свойствами (16).The strain "ARRIAH" virus IRT cattle is characterized by the following features and properties (16).
Морфологические свойстваMorphological properties
Штамм «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС относится к семейству Herpesviridae, подсемейству Alphaherpesviridae, роду Varicellavirus, группе HPV-1, обладает морфологическими признаками, характерными для данного семейства.The strain “ARRIAH” of the cattle IRT virus belongs to the family Herpesviridae, the subfamily Alphaherpesviridae, the genus Varicellavirus, the HPV-1 group, and has morphological characteristics characteristic of this family.
Штамм «ВНИИЗЖ» включает линейную 2-цепочечную ДНК с молекулярной массой 92-102 кД. Вирионы округлой формы состоят из 4-х структурных компонентов: нуклеоида, капсида диаметром 120-150 нм, окруженного содержащей липиды оболочкой, мембраны (тегумента) и наружной оболочки. Плавучая плотность вирионов в градиенте CsCl составляет 1,27-1,29 г/см3.The strain "ARRIAH" includes a linear 2-strand DNA with a molecular weight of 92-102 kD. Round-shaped virions consist of 4 structural components: a nucleoid, a capsid with a diameter of 120-150 nm, surrounded by a lipid-containing membrane, a membrane (tegument) and an outer membrane. The floating density of virions in the CsCl gradient is 1.27-1.29 g / cm 3 .
Нуклеоид тороидальной формы содержит ДНК и окружен икосаэдрическим капсидом диаметром 100-110 нм, содержащим 162 частично полых капсомера. Капсид окружает ядро вириона, состоящее из ДНК, покрытой белком. Мембрана из глобулярного материала окружает капсид. В составе вириона определено до 32 белков с молекулярной массой до 200 кД.A toroidal nucleoid contains DNA and is surrounded by an icosahedral capsid 100-110 nm in diameter containing 162 partially hollow capsomeres. Capsid surrounds the core of the virion, consisting of DNA coated with protein. A membrane of globular material surrounds the capsid. As part of the virion, up to 32 proteins with a molecular weight of up to 200 kD are determined.
Вирионы имеют сложную четырехуровневую (от центра к периферии) организацию: нуклеоид, капсид, суперкапсидную структуру и оболочку. Наружная оболочка вирионов имеет типичное строение и содержит многочисленные выступы (шипы) длиной около 8 нм. Вирусы формируют характерные внутриядерные включения. При прохождении через внутренний листок ядерной мембраны в эндоплазматический ретикулум вирионы покрываются дополнительной оболочкой, содержащей гликопротеины и липиды.Virions have a complex four-level (from the center to the periphery) organization: nucleoid, capsid, supercapsid structure and membrane. The outer shell of virions has a typical structure and contains numerous protrusions (spikes) with a length of about 8 nm. Viruses form characteristic intranuclear inclusions. When passing through the inner sheet of the nuclear membrane into the endoplasmic reticulum, the virions are covered with an additional membrane containing glycoproteins and lipids.
Антигенные свойстваAntigenic properties
По своим антигенным свойствам штамм «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС относится к группе 1 герпесвирусов КРС. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус обладает гемагглютинирующей активностью (ГА-активностью), реагируя с антителами переболевших или иммунизированных животных в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). При вакцинации лабораторных и естественно-восприимчивых животных вирусный антиген индуцирует образование специфических антител, выявляемых в РНГА в разведении 1:16-1:256.According to its antigenic properties, the strain “ARRIAH” of the cattle IRT virus belongs to group 1 of cattle herpes viruses. The virus is stably neutralized by homologous antiserum. The virus has hemagglutinating activity (GA activity), reacting with antibodies from sick or immunized animals in an indirect hemagglutination reaction (RNGA). When vaccinating laboratory and naturally susceptible animals, the viral antigen induces the formation of specific antibodies detected in RNGA at a dilution of 1: 16-1: 256.
Биотехнологические характеристикиBiotechnological characteristics
Вирус ИРТ КРС штамма «ВНИИЗЖ» репродуцируется в культурах клеток ВНК-21, MDBK и ЗКГ, вызывая цитопатическое действие (ЦПД), и в течение 48-96 часов инкубирования накапливается в титрах от 6,5 до 8,0 Ig ТЦД50/см3. Результаты адаптации вируса ИРТ КРС штамма «ВНИИЗЖ» к указанным культурам клеток представлены в таблицах 1, 2 и 3. Штамм «ВНИИЗЖ» является стабильным и сохраняет свои свойства на протяжении 10 пассажей (срок наблюдения).The virus IRT cattle strain "ARRIAH" is reproduced in cell cultures VNK-21, MDBK and ZKG, causing a cytopathic effect (CPD), and accumulates in titers from 6.5 to 8.0 Ig TCD 50 / cm during 48-96 hours of incubation 3 . The results of adaptation of the RTI virus for cattle of the strain ARRIAH to the indicated cell cultures are presented in tables 1, 2 and 3. The strain ARRIAH is stable and retains its properties for 10 passages (observation period).
Генотаксономическая характеристикаGenotaxonomic characteristic
Выделено и охарактеризовано 9 структурных белков вируса ИРТ штамма «ВНИИЗЖ»: VP 105, VP 90 (гемагглютинин), VP 74, VP 64, VP 54, VP 50, VP 47, VP 40 и VP 31. Гликопротеины g I, g III, g IV участвуют в формировании гуморального и клеточного иммунитета. Наиболее эффективным в этом отношении является g IV. По данным реакции нейтрализации наибольшей иммуногенностью обладают VP 90 и VP 74. Белок, маркированный как VP 8 с м.м. 96 кД, является одним из главных белков герпесвируса-1 КРС. Он участвует в модуляции экспрессии генов класса А, стимулирует пролиферацию Т-клеток и образование антител у телят как после заражения, так и после иммунизации животных очищенным белком. За индукцию вируснейтрализующих антител к герпесвирусу-1 КРС ответственны 4-х оболочечные гликопротеины, главными из которых являются g 70 и g 97, расположенные в шипиках вириона. В структуре g IV вируса ИРТ идентифицированы 3 нейтрализующих домена. Домен 1 содержит 2 перекрывающих эпитопа, домен 2 - один эпитоп. Домен 1 имеет отношение к проникновению вируса в клетки-мишени.Nine structural proteins of the IRT virus strain “ARRIAH” were isolated and characterized: VP 105, VP 90 (hemagglutinin), VP 74, VP 64, VP 54, VP 50, VP 47, VP 40 and VP 31. Glycoproteins g I, g III, g IV are involved in the formation of humoral and cellular immunity. The most effective in this regard is g IV. According to the neutralization reaction, VP 90 and VP 74 have the highest immunogenicity. Protein labeled as VP 8 with m.m. 96 kDa is one of the main proteins of herpes virus-1 cattle. It participates in modulation of the expression of class A genes, stimulates the proliferation of T cells and the formation of antibodies in calves both after infection and after immunization of animals with purified protein. For the induction of virus-neutralizing antibodies to herpesvirus-1 cattle, 4-membered glycoproteins are responsible, the main of which are g 70 and g 97, located in the spines of the virion. In the g IV structure of the IRT virus, 3 neutralizing domains were identified. Domain 1 contains 2 overlapping epitopes, domain 2 contains one epitope. Domain 1 is related to the penetration of the virus into target cells.
Устойчивость к внешним факторамResistance to external factors
Штамм «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС устойчив к воздействию низких температур: при минус 60-70°С вирус выживает 7-9 месяцев, при 56°С вирус инактивируется через 20 минут, при 37°С - через 4-10 суток, при 22°С - через 50 суток, при 4°С активность вируса снижается через 30-40 суток лишь на 1,0 Ig. Раствор формалина 1:500 инактивирует вирус через 24 часа. Ацетон, эфир, хлороформ и этиловый спирт инактивируют его немедленно. В кислой среде вирус быстро теряет свою активность, но длительно (до 9 месяцев) сохраняется при рН 6-9 и в условиях 4°С. Лиофилизация почти не влияет на его активность, однако многократное замораживание и оттаивание снижают вирулентность и иммуногенность вируса.The strain ARRIAH of the cattle IRT virus is resistant to low temperatures: at minus 60-70 ° C the virus survives for 7-9 months, at 56 ° C the virus is inactivated after 20 minutes, at 37 ° C - after 4-10 days, at 22 ° C - after 50 days, at 4 ° C the virus activity decreases after 30-40 days only by 1.0 Ig. A formalin solution of 1: 500 inactivates the virus after 24 hours. Acetone, ether, chloroform and ethyl alcohol inactivate it immediately. In an acidic environment, the virus quickly loses its activity, but persists for a long time (up to 9 months) at pH 6-9 and at 4 ° C. Lyophilization has almost no effect on its activity, however, repeated freezing and thawing reduce the virulence and immunogenicity of the virus.
Дополнительные признаки и свойстваAdditional features and properties
Иммуногенная активность -100%. Патогенность - выражена. Вирулентность - выражена. Контагиозность - выражена. Онкогенность - отсутствует.Immunogenic activity -100%. Pathogenicity - expressed. Virulence - expressed. Contagiousness - expressed. Oncogenicity is absent.
Свободен от контаминации бактериями, микоплазмами и гемагглютинирующими вирусами.Free from contamination by bacteria, mycoplasmas and hemagglutinating viruses.
Для получения антигенного материала из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС в качестве чувствительной биологической системы используют преимущественно монослойные культуры клеток ВНК-21 и MDBK, выращенные в 1,5 дм3 матрасах или вращающихся сосудах объемом 3 дм3. При необходимости для получения антигенного материала из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС можно использовать культуру клеток 3 КГ.To obtain antigenic material from the ARRIAH strain of cattle IRT virus, monolayer cultures of BHK-21 and MDBK cells grown in 1.5 dm 3 mattresses or rotating vessels of 3 dm 3 are used as a sensitive biological system. If necessary, to obtain antigenic material from the strain "ARRIAH" virus IRT cattle, you can use a cell culture of 3 KG.
Полученный вируссодержащий материал освобождают от клеточного детрита и других балластных примесей низкоскоростным центрифугированием и производят контроль вирусного сырья. Производственная серия вируса ИРТ КРС должна иметь инфекционную активность не менее 6,0 Ig ТЦД50/см3 и активность в РДП не менее 4,0 log2.The resulting virus-containing material is freed from cellular detritus and other ballast impurities by low-speed centrifugation and the viral raw material is monitored. The production series of cattle IRT virus should have an infectious activity of at least 6.0 Ig TCD 50 / cm 3 and activity in the RDP of at least 4.0 log 2 .
Для инактивации вируса ИРТ штамма «ВНИИЗЖ» используют АЭЭИ, который вносят в очищенную вируссодержащую суспензию до концентрации 0,1%. Инактивацию вируса проводят при температуре 36-37°С в течение 24 часов при значении рН 7,6-7,8 с периодическим перемешиванием суспензии (каждые 5-6 часов по 3-5 минут). По окончании инактивации АЭЭИ нейтрализуют внесением в антигенный материал тиосульфата натрия. Для этого в охлажденную до 2-8°С суспензию антигена добавляют 1М раствор тиосульфата натрия из расчета 10% к объему использованного АЭЭИ. Для изготовления эмульсионной формы предлагаемой вакцины используют антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС с активностью в РНГА не менее 4,0 log2 в количестве не менее 10,0 мас.%.For inactivation of the IRT virus strain "ARRIAH" use AEEI, which is introduced into the purified virus-containing suspension to a concentration of 0.1%. Inactivation of the virus is carried out at a temperature of 36-37 ° C for 24 hours at a pH of 7.6-7.8 with periodic stirring of the suspension (every 5-6 hours for 3-5 minutes). At the end of inactivation, AEEI is neutralized by adding sodium thiosulfate to the antigenic material. For this, a 1M sodium thiosulfate solution is added to a suspension of antigen cooled to 2-8 ° C at a rate of 10% by volume of the AEEI used. For the manufacture of the emulsion form of the proposed vaccine, antigenic material is used from the ARRIAH strain of cattle IRT virus with activity in the RNGA of at least 4.0 log 2 in an amount of at least 10.0 wt.%.
Вирусный изолят, послуживший источником для получения производственного штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, выделен из фекалий новорожденного теленка с нарушением функции желудочно-кишечного тракта. Производственный штамм «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС адаптирован к культурам клеток MDBK, Таурус-1, КСТ и Vero.The viral isolate, which served as the source for the production strain “ARRIAH” of cattle coronavirus, was isolated from the feces of a newborn calf with impaired gastrointestinal function. The production strain “ARRIAH” of cattle coronavirus is adapted to cell cultures of MDBK, Taurus-1, KST and Vero.
Штамм «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС депонирован 12 марта 2001 года во Всероссийскую государственную коллекцию штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Федерального государственного учреждения «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ») под регистрационным наименованием «ВНИИЗЖ-ДЕП».The strain “ARRIAH” of cattle coronavirus was deposited on March 12, 2001 into the All-Russian State Collection of microorganism strains used in veterinary medicine and animal husbandry, Federal State Institution “All-Russian State Center for the Quality and Standardization of Medicines for Animals and Feed” (FGU “VGNKI”) under the registration name "ARRIAH-DEPT".
Штамм «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС характеризуется следующими признаками и свойствами (17).The strain “ARRIAH” of cattle coronavirus is characterized by the following features and properties (17).
Морфологические признакиMorphological features
Штамм «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС относится к семейству Coronaviridae, роду Coronavirus и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя коронавирусной инфекции КРС: сферический или плеоморфный вирион диаметром 80-100 нм состоит из нуклеокапсида спиральной симметрии и липопротеидной оболочки, на поверхности которой имеются булавовидные выступы длиной 12-24 нм, образующие подобие солнечной короны. Плавучая плотность вирионов в градиенте сахарозы составляет 1,15-1,18 г/см3.The strain “ARRIAH” of cattle coronavirus belongs to the family Coronaviridae, the genus Coronavirus, and has morphological characteristics characteristic of the causative agent of coronavirus infection of cattle: a spherical or pleomorphic virion with a diameter of 80-100 nm consists of a nucleocapsid of helical symmetry and a lipoprotein sheath, the surface of which has buobular protrusions with a length of 12-24 nm, forming the likeness of the solar corona. The floating density of the virions in the sucrose gradient is 1.15-1.18 g / cm 3 .
В составе вирионов обнаружены три структурных белка: пепломерный гликопротеин Е2 (180-200 кД), нуклеокапсидный фосфопротеин N (50-60 кД) и матриксный гликопротеин Е1 (23-30 кД).Three structural proteins were found in the virions: asperomeric glycoprotein E2 (180-200 kD), nucleocapsid phosphoprotein N (50-60 kD) and matrix glycoprotein E1 (23-30 kD).
Антигенные свойстваAntigenic properties
Антиген коронавируса КРС штамма «ВНИИЗЖ» индуцирует в организме морских свинок и кроликов образование вирусспецифических антител, выявляемых в реакции торможения гемагглютинации (РТГА). В сыворотках крови вакцинированных кроликов уровень антител колеблется от 5,4±0,25 до 7,25±0,47 log2 (в среднем 6,32±0,39 log2), а в сыворотках крови иммунизированных морских свинок - от 5,4±0,38 до 8,2±0,8 log2 (в среднем 6,1±0,49 log2).The antigen of cattle coronavirus of the strain "ARRIAH" induces the formation of virus-specific antibodies in the body of guinea pigs and rabbits, which are detected in the inhibition of hemagglutination (RTGA). In the blood serum of vaccinated rabbits, the antibody level ranges from 5.4 ± 0.25 to 7.25 ± 0.47 log 2 (an average of 6.32 ± 0.39 log 2 ), and in the blood serum of immunized guinea pigs - from 5 , 4 ± 0.38 to 8.2 ± 0.8 log 2 (on average 6.1 ± 0.49 log 2 ).
В сыворотках крови проб, отобранных за 10-15 дней до отела, дважды вакцинированных коров выявляются антитела в РТГА в титрах от 7,9±0,35 до 8,9±0,47 log2. Своевременное скармливание такого молозива обеспечивает высокий уровень колостральных антител (до 8,0 log2) в организме новорожденных телят.Antibodies in rtga in titers from 7.9 ± 0.35 to 8.9 ± 0.47 log 2 are detected in blood serum of samples taken 10-15 days before calving, twice vaccinated cows. Timely feeding of such colostrum provides a high level of colostral antibodies (up to 8.0 log 2 ) in the body of newborn calves.
Биотехнологические характеристикиBiotechnological characteristics
Коронавирус КРС штамма «ВНИИЗЖ» репродуцируется в культурах клеток почек теленка (MDBK, Таурус-1), коронарных сосудов теленка (КСТ) и в гетерологичной культуре клеток почек обезьяны (Vero). При 37°С в течение 3-4 суток инкубирования вирус накапливается в количестве до 108 частиц/см3 (данные электронно-микроскопического исследования). Результаты исследований по адаптации коронавируса КРС штамма «ВНИИЗЖ» к культурам клеток MDBK, Таурус-1, Vero и КСТ представлены в таблице 4.The cattle coronavirus of the ARRIAH strain is reproduced in calf kidney cell cultures (MDBK, Taurus-1), calf coronary vessels (CCT) and in a heterologous monkey kidney cell culture (Vero). At 37 ° C for 3-4 days of incubation, the virus accumulates in an amount of up to 10 8 particles / cm 3 (data of electron microscopic studies). The results of studies on the adaptation of cattle coronavirus strain "ARRIAH" to cell cultures MDBK, Taurus-1, Vero and KST are presented in table 4.
Штамм «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС обладает способностью в культуре клеток MDBK репродуцироваться с такой же степенью накопления при 34°С. Срок репродукции при этой температуре увеличивается почти на сутки, однако позволяет получать двойной урожай вируса путем смены поддерживающей среды. «Слив» обладает высокой инфекционной, антигенной и иммуногенной активностью.The strain "ARRIAH" of cattle coronavirus has the ability to reproduce in the MDBK cell culture with the same degree of accumulation at 34 ° C. The reproduction period at this temperature increases by almost a day, but allows you to get a double crop of the virus by changing the supporting environment. "Drain" has a high infectious, antigenic and immunogenic activity.
Устойчивость к внешним факторамResistance to external factors
Штамм «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС проявляет максимальную устойчивость в диапазоне рН 6,0-7,2. Кислая (рН 3,0) и щелочная (рН 11,0) среды оказывают на вирус инактивирующее действие. Возбудитель устойчив к воздействию трипсина. Вирус разрушается жирорастворителями: хлороформом, метиленхлоридом и трипсином Х-100. Инактивированный антиген коронавируса КРС штамма «ВНИИЗЖ» устойчив в процессе хранения при 4°С как в нативном состоянии, так и в составе инактивированных вакцин.The strain "ARRIAH" coronavirus cattle shows maximum stability in the pH range of 6.0-7.2. Acidic (pH 3.0) and alkaline (pH 11.0) media have an inactivating effect on the virus. The causative agent is resistant to trypsin. The virus is destroyed by fat solvents: chloroform, methylene chloride and trypsin X-100. The inactivated cattle coronavirus antigen of the ARRIAH strain is stable during storage at 4 ° C both in the native state and as part of inactivated vaccines.
Дополнительные признаки и свойстваAdditional features and properties
Антигенная активность обладает антигенностью в составе инактивированной вакцины и препарата для гипериммунизации доноров диагностических и лечебных сывороток.Antigenic activity has antigenicity in the composition of an inactivated vaccine and drug for hyperimmunization of donors of diagnostic and therapeutic sera.
Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.Reactogenicity - does not possess reactogenic properties.
Стабильность сохраняет исходные биологические (антигенные) свойства при пассировании в культуре клеток MDBK в течение 30 пассажей (срок наблюдения).Stability preserves the initial biological (antigenic) properties when passaged in an MDBK cell culture for 30 passages (observation period).
Патогенность - выражена.Pathogenicity - expressed.
Вирулентность - выражена.Virulence - expressed.
Контагиозность - выражена.Contagiousness - expressed.
Онкогенность - отсутствует.Oncogenicity is absent.
Штамм «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС свободен от контаминации бактериями, микоплазмами и другими гемагглютинирующими вирусами.The strain "ARRIAH" cattle coronavirus is free from contamination by bacteria, mycoplasmas and other hemagglutinating viruses.
Для получения антигенного материала из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС в качестве чувствительной биологической системы используют преимущественно культуру клеток MDBK.To obtain antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus, a MDBK cell culture is mainly used as a sensitive biological system.
При необходимости для получения антигенного материала из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС можно использовать культуру клеток Таурус-1, КСТ и Vero.If necessary, Taurus-1, KST and Vero cell cultures can be used to obtain antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus.
Полученный вируссодержащий материал очищают от балластных примесей центрифугированием или любым другим известным методом.The resulting virus-containing material is purified from ballast impurities by centrifugation or any other known method.
Для инактивации вируса используют АЭЭИ, который добавляют в очищенную вируссодержащую суспензию до концентрации 0,1%. Инактивацию вируса ведут при 37°С в течение 24 часов. По окончании инактивации АЭЭИ нейтрализуют внесением в суспензию антигена 1М раствора тиосульфата натрия из расчета 10% к объему использованного АЭЭИ.For inactivation of the virus using AAAI, which is added to the purified virus-containing suspension to a concentration of 0.1%. Inactivation of the virus is carried out at 37 ° C for 24 hours. At the end of inactivation, AEEI is neutralized by introducing a 1M sodium thiosulfate solution into the antigen suspension at the rate of 10% of the volume of used AEEI.
Для изготовления предлагаемой вакцины используют в качестве активного вещества авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного преимущественно в культуре клеток MDBK со степенью накопления не менее 108 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 7,0 log2, в количестве не менее 10,0 мас.%.For the manufacture of the proposed vaccine, avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus, obtained mainly in the MDBK cell culture with an accumulation degree of at least 10 8 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 7.0 log 2, is used as an active substance. , in an amount of not less than 10.0 wt.%.
При необходимости предлагаемая ассоциированная вакцина может содержать в качестве активного вещества авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток Таурус-1 со степенью накопления не менее 109 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 9,0 log2, в количестве не менее 10,0 мас.%.If necessary, the proposed associated vaccine may contain as an active substance an avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in Taurus-1 cell culture with a degree of accumulation of at least 10 9 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 9, 0 log 2 , in an amount of not less than 10.0 wt.%.
При необходимости предлагаемая ассоциированная вакцина может содержать в качестве активного вещества авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток КСТ со степенью накопления не менее 107,5 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 6,0 log2, в количестве не менее 10,0 мас.%.If necessary, the proposed associated vaccine may contain as an active substance an avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in a culture of KST cells with a degree of accumulation of at least 10 7.5 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 6, 0 log 2 , in an amount of not less than 10.0 wt.%.
При необходимости предлагаемая ассоциированная вакцина может содержать в качестве активного вещества авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток Vero со степенью накопления не менее 107,5 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 6,0 log2, в количестве не менее 10,0 мас.%.If necessary, the proposed associated vaccine may contain as an active substance an avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in Vero cell culture with an accumulation degree of at least 10 7.5 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 6, 0 log 2 , in an amount of not less than 10.0 wt.%.
Полученный таким образом антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС используют для изготовления эмульсионной формы предлагаемой ассоциированной вакцины против ПГ-3, ИРТ и коронавирусной инфекции КРС.Thus obtained antigenic material from the strain “ARRIAH” of cattle coronavirus is used to manufacture the emulsion form of the proposed associated vaccine against PG-3, IRT and coronavirus infection of cattle.
Для изготовления предлагаемой вакцины полученные антигенные материалы смешивают в соотношении 1:1:1 и смесь тщательно эмульгируют с масляным адъювантом в гомогенизаторе в соотношении, мас.%, 30,0-70,0 соответственно.For the manufacture of the proposed vaccine, the obtained antigenic materials are mixed in a ratio of 1: 1: 1 and the mixture is thoroughly emulsified with an oil adjuvant in a homogenizer in a ratio, wt.%, 30.0-70.0, respectively.
Из масляных адъювантов целесообразно использовать масляный адъювант марки Montanide ISA-70 производства фирмы «Seppic» (Франция, стандарт ИСО 9001).From oil adjuvants it is advisable to use Montanide ISA-70 brand oil adjuvant manufactured by Seppic (France, ISO 9001 standard).
Содержание антигенов в предлагаемой вакцине в указанном выше соотношении являются их эффективным количеством в препарате, обеспечивающим достижение технического результата.The content of antigens in the proposed vaccine in the above ratio is their effective amount in the drug, ensuring the achievement of a technical result.
Использование предлагаемого изобретения расширяет арсенал высокоиммуногенных, безвредных и ареактогенных ассоциированных вакцин против ПГ-3, ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионных инактивированных, способных защитить поголовье КРС различных половозрастных групп от возбудителей ПГ-3, ИРТ и коронавирусной инфекции КРС, циркулирующих на территории России.The use of the present invention expands the arsenal of highly immunogenic, harmless and areactogenic associated vaccines against PG-3, IRT and coronavirus infection of cattle emulsion inactivated, capable of protecting livestock of various sex and age groups from pathogens PG-3, IRT and coronavirus infection of cattle circulating in Russia.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его реализации и использования.The essence of the invention is illustrated by examples of its implementation and use.
Пример 1Example 1
Для приготовления ассоциированной вакцины против ПГ-3, ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионной инактивированной используют производственные штаммы вирусов: штамм «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3, штамм «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ и штамм «ВНИИЗЖ» коронавирусной инфекции КРС.For the preparation of the associated vaccine against PG-3, ИРТ and coronavirus infection of cattle emulsion inactivated, production strains of viruses are used: strain “VGNKI-4” of virus PG-3, strain “ARRIAH” of virus IRT and strain “ARRIAH” of coronavirus cattle infection.
Посевной вирус производственного штамма «ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, полученный в монослойной культуре клеток MDBK или ВНК-21, и хранившийся при минус 20°С, дважды оттаивают-замораживают. Полученной вируссодержащей жидкостью заражают суспензионную культуру клеток ВНК-21. Множественность заражения составляет 0,1-1,0 ТЦД50/клетку. После заражения культуру клеток инкубируют в стеклянных культиваторах объемом 6,5 дм3 и 36,5 дм3 при 37°С в течение 24-32 часов до появления ЦПД более чем на 70-90% клеток. После этого полученную вируссодержащую суспензию однократно замораживают-оттаивают, сливают в емкость и отбирают пробы для контроля стерильности и инфекционной активности материала. Инфекционная активность вируса должна быть не менее 6,5 Ig ТЦД50/см3. Полученный вирус очищают от балластных примесей центрифугированием. Затем вирусную суспензию подвергают инактивации рабочим раствором АЭЭИ. Рабочий раствор АЭЭИ готовят за 30-60 минут до внесения в вирусную суспензию путем разбавления исходного препарата (15-19%-ного водного раствора АЭЭИ) стерильной деминерализованной водой до 6%-ной концентрации. Во избежание изменения рН вирусной суспензии рабочий раствор АЭЭИ предварительно доводят 5М раствором уксусной кислоты до рН 7,8-8,2. Перед внесением инактиванта вируссодержащий материал нагревают до 36-37°С и в него вносят рабочий раствор АЭЭИ до конечной концентрации 0,1%. Инактивацию вируса ведут в течение 24 часов при 36-37°С и рН 7,0-7,6 с периодическим перемешиванием (3-5 минут через 5-6 часов). По окончании инактивации антигенный материал охлаждают до 4-6°С и берут пробу для проверки на остаточную вирулентность. Для нейтрализации остаточного АЭЭИ в суспензию антигена добавляют 1М раствор тиосульфата натрия из расчета 10% к объему использованного АЭЭИ.The inoculum virus of the production strain “VGNKI-4” of the PG-3 cattle virus obtained in a monolayer culture of MDBK or BHK-21 cells and stored at minus 20 ° C is thawed and frozen twice. The resulting virus-containing liquid infects the suspension cell culture of BHK-21. The multiplicity of infection is 0.1-1.0 TCD 50 / cell. After infection, the cell culture is incubated in glass cultivators with a volume of 6.5 dm 3 and 36.5 dm 3 at 37 ° C for 24-32 hours until more than 70-90% of the cells have a CPD. After that, the resulting virus-containing suspension is once frozen, thawed, poured into a container and samples are taken to control the sterility and infectious activity of the material. Infectious activity of the virus should be at least 6.5 Ig TCD 50 / cm 3 . The resulting virus is purified from ballast impurities by centrifugation. Then the viral suspension is subjected to inactivation with a working solution AEEI. AEEI working solution is prepared 30-60 minutes before it is introduced into the viral suspension by diluting the initial preparation (15-19% aqueous AEEI solution) with sterile demineralized water to a 6% concentration. To avoid changing the pH of the viral suspension, the AEI working solution is previously adjusted with a 5M solution of acetic acid to a pH of 7.8–8.2. Before the introduction of the inactivant, the virus-containing material is heated to 36-37 ° C and the AEEI working solution is added to it to a final concentration of 0.1%. Inactivation of the virus is carried out for 24 hours at 36-37 ° C and pH 7.0-7.6 with periodic stirring (3-5 minutes after 5-6 hours). After inactivation, the antigenic material is cooled to 4-6 ° C and a sample is taken to check for residual virulence. To neutralize the residual AEEI, a 1M sodium thiosulfate solution is added to the antigen suspension at the rate of 10% of the volume of used AEEI.
Полученный антиген контролируют на стерильность и антигенную активность. Антигенная активность полученного препарата должна составлять не менее 6,5 Ig ТЦД50/см3. Полученный антигенный материал используют в количестве не менее 10,0 мас.% для изготовления эмульсионной формы предлагаемой вакцины.The resulting antigen is monitored for sterility and antigenic activity. The antigenic activity of the resulting preparation should be at least 6.5 Ig TCD 50 / cm 3 . The resulting antigenic material is used in an amount of not less than 10.0 wt.% For the manufacture of the emulsion form of the proposed vaccine.
Посевным вирусом производственного штамма «ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС заражают монослойную культуру клеток ЗКГ или MDBK, или ВНК-21, выращенных в 1,5 дм3 матрасах или во вращающихся сосудах объемом 3,0 дм3. Доза заражения должна составлять 0,1-0,01 ИЕ/клетку. Инфицированную культуру инкубируют при температуре 37°С в течение 48-96 часов до появления ЦПД вируса более, чем в 50% клеток монослоя. Полученную вируссодержащую суспензию охлаждают до 4°С и, соблюдая условия стерильности, освобождают от клеточного детрита низкоскоростным центрифугированием. Очищенная таким образом суспензия должна иметь вид прозрачной жидкости розового или вишневого цвета. Очищенную суспензию сливают в емкость, из которой отбирают пробу для производственного контроля вирусного сырья. Производственная серия вируса ИРТ КРС должна иметь инфекционную активность не менее 6,0 Ig ТЦД50/см3 и активность в РДП не менее 4,0 Iog2.A seed virus of the production strain “ARRIAH” of the IRT cattle virus infects a monolayer culture of ZKG or MDBK, or BHK-21 cells grown in 1.5 dm 3 mattresses or in rotating vessels with a volume of 3.0 dm 3 . The dose of infection should be 0.1-0.01 IE / cell. The infected culture is incubated at a temperature of 37 ° C for 48-96 hours until the appearance of the virus CPP in more than 50% of the monolayer cells. The resulting virus-containing suspension is cooled to 4 ° C and, subject to sterility conditions, freed from cell detritus by low-speed centrifugation. The suspension thus purified should be in the form of a clear pink or cherry liquid. The purified suspension is poured into a container from which a sample is taken for the production control of viral raw materials. The production series of cattle IRT virus should have an infectious activity of at least 6.0 Ig TCD 50 / cm 3 and activity in the RDP of at least 4.0 Iog 2 .
Инактивацию вируса ИРТ осуществляют с помощью 6%-ного водного раствора АЭЭИ, который вносят в вируссодержащую суспензию до конечной концентрации 0,1-0,2%. В подогретую до 26-28°С суспензию вносят при постоянном перемешивании раствор АЭЭИ. рН суспензии устанавливают в пределах значений 7,6-7,8 добавлением в нее 5М раствора уксусной кислоты или аммиака. Инактивацию вируса проводят при температуре 36-37°С в течение 24 часов с периодическим перемешиванием суспензии (по 3-5 минут через каждые 5-6 часов). По окончании инактивации антигенный материал охлаждают до 2-8°С и отбирают пробы для проверки на остаточную инфекционность в культуре клеток MDBK. Для нейтрализации АЭЭИ в суспензию антигенного материала вносят 1М раствор тиосульфата натрия из расчета 10% к объему использованного АЭЭИ. Полученный антигенный материал используют в количестве не менее 10,0 мас.% для изготовления эмульсионной формы предлагаемой вакцины.The inactivation of the IRT virus is carried out using a 6% aqueous solution of AEEI, which is introduced into the virus-containing suspension to a final concentration of 0.1-0.2%. AEEI solution is added to the suspension heated to 26-28 ° C with constant stirring. The pH of the suspension is adjusted between 7.6 and 7.8 by the addition of a 5M solution of acetic acid or ammonia. Inactivation of the virus is carried out at a temperature of 36-37 ° C for 24 hours with periodic stirring of the suspension (3-5 minutes every 5-6 hours). At the end of inactivation, the antigenic material is cooled to 2-8 ° C and samples are taken to check for residual infectivity in the MDBK cell culture. To neutralize AEEI, a 1M solution of sodium thiosulfate is added to the suspension of antigenic material at the rate of 10% of the volume of used AEEI. The resulting antigenic material is used in an amount of not less than 10.0 wt.% For the manufacture of the emulsion form of the proposed vaccine.
Посевной вирус производственного штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС хранят перед использованием при температуре -20°С. Посевной вирус должен быть свободен от бактериальной и грибковой микрофлоры, специфичным, вызывать агглютинацию эритроцитов мышей, иметь активность в РГА не ниже 1:8 и концентрацию вирусных частиц (по результатам электронной микроскопии) в пределах от 105,0 до 106,5 вирусных частиц/см3 (14). Посевной коронавирус КРС дважды замораживают - оттаивают и используют для заражения культуры клеток MDBK. Перед заражением культуру клеток MDBK с качественным монослоем дважды отмывают от ростовой сыворотки раствором Хенкса, содержащим трипсин (15-20 мкг/см3). Множественность заражения составляет 0,1-1,0 вирусных частиц/клетку. После заражения культуральные сосуды инкубируют при 37°С в течение 1,5-2 часов, периодически покачивая. Затем проводят слив вируссодержащего материала и в него вносят поддерживающую среду, содержащую трипсин (15-20 мкг/см3). Сосуды инкубируют при 34°С или 37°С до появления ЦПД вируса более чем в 90% клеток. После этого культуру дважды замораживают-оттаивают. Полученный вирусный материал очищают от балластных примесей низкоскоростным центрифугированием при 2500-3000 об/мин в течение 30 минут. Инактивацию вируса проводят с помощью АЭЭИ. Для этого в вируссодержащую суспензию вносят 6%-ный рабочий раствор АЭЭИ, подкисленный ледяной уксусной кислотой до значения рН 7,8-8,2. Конечная концентрация АЭЭИ в вируссодержащей суспензии должна быть не менее 0,1%. Инактивацию вируса проводят при температуре 36-37°С в течение 24 часов с периодическим перемешиванием суспензии (по 3-5 минут через каждые 5-6 часов). Остаток АЭЭИ нейтрализуют добавлением 1М раствора тиосульфата натрия из расчета 10% к объему использованного АЭЭИ. Полученный антигенный материал исследуют на стерильность, авирулентность, содержание вирусных частиц в суспензии с помощью электронного микроскопа и активность в РГА. Для изготовления предлагаемой вакцины используют авирулентный очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного преимущественно в культуре клеток MDBK со степенью накопления не менее 108 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 7,0 log2, в количестве не менее 10,0 мас.%.The seed virus of the production strain "ARRIAH" of cattle coronavirus is stored before use at a temperature of -20 ° C. The seed virus should be free of bacterial and fungal microflora, specific, cause agglutination of red blood cells of mice, have an activity in the RGA of not less than 1: 8 and the concentration of viral particles (according to electron microscopy) in the range from 10 5.0 to 10 6.5 viral particles / cm 3 (14). Inoculated cattle coronavirus is frozen twice - thawed and used to infect the MDBK cell culture. Before infection, the MDBK cell culture with a high-quality monolayer is washed twice from the growth serum with a Hanks solution containing trypsin (15-20 μg / cm 3 ). The multiplicity of infection is 0.1-1.0 viral particles / cell. After infection, the culture vessels are incubated at 37 ° C for 1.5-2 hours, periodically shaking. Then, the virus-containing material is drained and a support medium containing trypsin (15-20 μg / cm 3 ) is introduced into it. The vessels are incubated at 34 ° C or 37 ° C until the appearance of the virus CPP in more than 90% of the cells. After this, the culture is twice frozen-thawed. The resulting viral material is purified from ballast impurities by low-speed centrifugation at 2500-3000 rpm for 30 minutes. Inactivation of the virus is carried out using AEEI. For this, a 6% AEI working solution, acidified with glacial acetic acid to a pH of 7.8-8.2, is added to the virus-containing suspension. The final concentration of AEEI in the virus-containing suspension should be at least 0.1%. Inactivation of the virus is carried out at a temperature of 36-37 ° C for 24 hours with periodic stirring of the suspension (3-5 minutes every 5-6 hours). The remainder of the AEEI is neutralized by adding a 1M sodium thiosulfate solution at the rate of 10% of the volume of the used AEEI. The resulting antigenic material is examined for sterility, avirulence, the content of viral particles in suspension using an electron microscope and activity in the RGA. For the manufacture of the proposed vaccine, avirulent purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus, obtained mainly in the MDBK cell culture with an accumulation degree of at least 10 8 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 7.0 log 2 , in the amount of not less than 10.0 wt.%.
При необходимости для изготовления предлагаемой вакцины можно использовать авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток Таурус-1 со степенью накопления не менее 109 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 9,0 log2, в количестве не менее 10,0 мас.%.If necessary, the avirulent and purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in Taurus-1 cell culture with a degree of accumulation of at least 10 9 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 9.0 log can be used to make the proposed vaccine 2 , in an amount of not less than 10.0 wt.%.
При необходимости для изготовления предлагаемой вакцины можно использовать авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток КСТ со степенью накопления не менее 107,5 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 6,0 log2, в количестве не менее 10,0 мас.%.If necessary, for the manufacture of the proposed vaccine, you can use avirulent and purified antigenic material from the strain "ARRIAH" cattle coronavirus, obtained in the culture of KST cells with a degree of accumulation of at least 10 7.5 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 6.0 log 2 , in an amount of not less than 10.0 wt.%.
При необходимости для изготовления предлагаемой вакцины можно использовать авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма «ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клеток Vero со степенью накопления не менее 107,5 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА не менее 6,0 log2, в количестве не менее 10,0 мас.%.If necessary, the avirulent and purified antigenic material from the ARRIAH strain of cattle coronavirus obtained in a Vero cell culture with a degree of accumulation of at least 10 7.5 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of at least 6.0 log can be used to make the proposed vaccine. 2 , in an amount of not less than 10.0 wt.%.
Полученные таким образом антигенные материалы используют для изготовления предлагаемой вакцины. Для этого антигенные материалы смешивают в соотношении 1:1:1 и смесь тщательно эмульгируют с масляным адъювантом в гомогенизаторе в соотношении, мас.%, 30,0-70,0 соответственно.Thus obtained antigenic materials are used for the manufacture of the proposed vaccine. For this, antigenic materials are mixed in a ratio of 1: 1: 1 and the mixture is thoroughly emulsified with an oil adjuvant in a homogenizer in a ratio, wt.%, 30.0-70.0, respectively.
Из масляных адъювантов целесообразно использовать масляный адъювант марки Montanide ISA-70 производства фирмы «Seppic» (Франция, стандарт ИСО 9001).From oil adjuvants it is advisable to use Montanide ISA-70 brand oil adjuvant manufactured by Seppic (France, ISO 9001 standard).
Предлагаемая вакцина имеет оптимальный компонентный состав, мас.%:The proposed vaccine has an optimal component composition, wt.%:
Авирулентный очищенный антигенный материал из штаммаAvirulent purified antigenic material from strain
«ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, полученного в культуре клеток"VGNKI-4" virus PG-3 cattle obtained in cell culture
животного происхождения, взятой из группы, состоящей изanimal origin taken from the group consisting of
культуры клеток MDBK и из культуры клеток ВНК-21, с инфекционной активностью не менее 6,5 Ig ТЦД50/см3 - 10,0cell culture MDBK and from cell culture BHK-21, with infectious activity of at least 6.5 Ig TCD 50 / cm 3 - 10.0
Авирулентный очищенный антигенный материал из штаммаAvirulent purified antigenic material from strain
«ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, полученного в культуре клетокARRIAH of cattle IRT virus obtained in cell culture
животного происхождения, взятой из группы, состоящей изanimal origin taken from the group consisting of
культуры клеток ВНК-21, из культуры клеток MDBK и из культурыVNK-21 cell culture, from MDBK cell culture and from culture
клеток 3КГ, с инфекционной активностью не менее 6,0 lg ТЦД50/см3 и активностью в РДП не менее 4,0 log2 - 10,03KG cells, with infectious activity of at least 6.0 lg TCD 50 / cm 3 and activity in the RDP of at least 4.0 log 2 - 10.0
Авирулентный очищенный антигенный материал из штаммаAvirulent purified antigenic material from strain
«ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клетокARRIAH of cattle coronavirus obtained in cell culture
животного происхождения, взятой из группы, состоящей изanimal origin taken from the group consisting of
культуры клеток MDBK, из культуры клеток Таурус-1, из культурыMDBK cell culture, from Taurus-1 cell culture, from culture
клеток КСТ и из культуры клеток Vero, в концентрации вирусныхKST cells and from Vero cell culture, in viral concentration
частиц, обеспечивающей протективную иммунную активностьparticles providing protective immune activity
антигена в организме животного после введения ему целевого препарата - 10,0antigen in the animal’s body after administration of the target drug to it - 10.0
Масляный адъювант - до 100,0Oil adjuvant - up to 100.0
Содержание антигенных материалов в предлагаемой вакцине в указанных выше пределах является их эффективным количеством в препарате, обеспечивающим достижение технического результата от использования изобретения.The content of antigenic materials in the proposed vaccine within the above ranges is their effective amount in the preparation, ensuring the achievement of a technical result from the use of the invention.
Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого или бело-розового цвета слегка вязкой консистенции. При хранении вакцины допускается незначительное отслоение минерального масла на верхней поверхности эмульсии и водной фазы на дне флакона толщиной не более 1 см.The resulting vaccine is a homogeneous emulsion of white or white-pink color with a slightly viscous consistency. When storing the vaccine, slight exfoliation of mineral oil is allowed on the upper surface of the emulsion and the aqueous phase at the bottom of the vial with a thickness of not more than 1 cm.
Вакцину контролируют на авирулентность и стерильность, а затем фасуют в стерильные флаконы.The vaccine is monitored for avirulence and sterility, and then packaged in sterile vials.
Стерильность вакцины определяют в соответствии с ГОСТом 28085-89. Авирулентность препарата определяют методом трехкратных последовательных пассажей инактивированного антигена в культуре клеток MDBK по отсутствию ЦПД.Sterility of the vaccine is determined in accordance with GOST 28085-89. The virulence of the drug is determined by the method of three consecutive passages of the inactivated antigen in the MDBK cell culture by the absence of CPD.
Для проверки безвредности вакцину вводят внутримышечно в область бедра 10 белым мышам в дозе 0,1 см3. Вакцина считается безвредной, если белые мыши в течение 10 суток остаются клинически здоровыми: без каких-либо патологических изменений. На месте введения препарата допускается местная тканевая реакция.To test the safety, the vaccine is administered intramuscularly in the thigh area to 10 white mice at a dose of 0.1 cm 3 . The vaccine is considered harmless if white mice remain clinically healthy for 10 days: without any pathological changes. At the injection site, a local tissue reaction is allowed.
Вязкость вакцины определяют на вискозиметре ВПЖ-2 и выражают мм2/сек. Предлагаемая вакцина, содержащая в своем составе масляный адъювант марки Montanide ISA-70, образующего тип эмульсии «вода-масло», имеет вязкость 38,3±0,5 мм2/сек.The viscosity of the vaccine is determined on a viscometer VPZH-2 and expressed mm 2 / sec. The proposed vaccine containing in its composition an oil adjuvant of the brand Montanide ISA-70, forming a type of emulsion "water-oil", has a viscosity of 38.3 ± 0.5 mm 2 / sec.
Контроль вакцины на стабильность эмульсии осуществляют посредством центрифугирования при 3000 об/мин в течение 30 минут, а также в процессе хранения при 2-8°С и 37°С с последующей визуальной оценкой однородности эмульсии. Вакцина с масляным адъювантом марки Montanide ISA-70 обладает высокой стабильностью эмульсии при хранении в различных температурных условиях и при центрифугировании.The vaccine is monitored for emulsion stability by centrifugation at 3000 rpm for 30 minutes, as well as during storage at 2-8 ° C and 37 ° C, followed by a visual assessment of the uniformity of the emulsion. The vaccine with the oil adjuvant of the brand Montanide ISA-70 has a high stability of the emulsion during storage under various temperature conditions and during centrifugation.
Для проверки реактогенности препарата предлагаемую вакцину вводят внутримышечно в область бедра 3 кроликам и 5 морским свинкам в дозе 2,0 см3 и 1,0 см3 соответственно. За клиническим состоянием животных ведут наблюдение в течение 14 суток.To test the reactogenicity of the drug, the proposed vaccine is administered intramuscularly in the thigh area to 3 rabbits and 5 guinea pigs at a dose of 2.0 cm 3 and 1.0 cm 3, respectively. The clinical condition of the animals is monitored for 14 days.
После иммунизации у кроликов и морских свинок отмечено незначительное местное повышение температуры тела и образование припухлости диаметром около 1 см в месте введения. Эти признаки полностью исчезают к концу срока наблюдения.After immunization in rabbits and guinea pigs, a slight local increase in body temperature and the formation of swelling with a diameter of about 1 cm at the injection site were noted. These signs completely disappear by the end of the observation period.
Таким образом, предлагаемая вакцина относится к типу слабореактогенных препаратов.Thus, the proposed vaccine belongs to the type of weakly reactogenic drugs.
Антигенную активность проверяют на кроликах. Для этого берут 6 кроликов массой 2,0-2,5 кг. Вакцину вводят 4 кроликам подкожно в область спины по 2,0 см3. Через 14 суток после двукратного введения вакцины с интервалом 20-25 суток у кроликов берут из ушной вены по 2,0-3,0 см3 крови, кровь выдерживают при температуре 37°С, отделяют сыворотку и исследуют на наличие антител к вирусу ПГ-3 и коронавирусу КРС в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), к вирусу ИРТ КРС в реакции нейтрализации (рН) или в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). Невакцинарованных животных (2 головы) обескровливают одновременно с вакцинированными, отделяют сыворотку и ее используют для контроля.Antigenic activity is tested in rabbits. For this, 6 rabbits weighing 2.0-2.5 kg are taken. The vaccine is administered to 4 rabbits subcutaneously in the back region of 2.0 cm 3 . 14 days after the double administration of the vaccine with an interval of 20-25 days, rabbits are taken from the ear vein 2.0-3.0 cm 3 of blood, the blood is kept at a temperature of 37 ° C, the serum is separated and examined for the presence of antibodies to the PG-virus 3 and cattle coronavirus in the hemagglutination inhibition reaction (RTHA), to the cattle IRT virus in the neutralization reaction (pH) or in the indirect hemagglutination reaction (RNGA). Unvaccinated animals (2 heads) are bled simultaneously with vaccinated animals, serum is separated and used for control.
Серию вакцины считают прошедшей контроль на антигенность, если титр вирусспецифических антител к вирусу ПГ-3 и коронавирусу КРС в РТГА не ниже 5,0 log2, а к вирусу ИРТ КРС в рН не ниже 3,0 log2 или в РНГА не ниже 4,0 log2.The vaccine series is considered to have passed antigenicity control if the titer of virus-specific antibodies to PG-3 virus and cattle coronavirus in RTHA is not lower than 5.0 log 2 , and for IRT virus of cattle in pH not lower than 3.0 log 2 or in RNGA not lower than 4 , 0 log 2 .
Ассоциированная вакцина против ПГ-3, ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионная инактивированная предназначена для иммунизации коров и телят в хозяйствах, неблагополучных по данным заболеваниям. Вакцину вводят животным внутримышечно в область средней трети шеи в объеме 2,0 см3 двукратно с интервалом 21-30 дней с последующей ревакцинацией через 6 месяцев.The associated vaccine against PG-3, IRT and coronavirus infection of cattle inactivated emulsion is intended for immunization of cows and calves in farms that are disadvantaged for these diseases. The vaccine is administered to animals intramuscularly in the middle third of the neck in a volume of 2.0 cm 3 twice with an interval of 21-30 days, followed by revaccination after 6 months.
Для поддержания благополучия по данным заболеваниям следует придерживаться следующей схемы вакцинации:To maintain well-being for these diseases, the following vaccination schedule should be followed:
1) телят вакцинируют, начиная с 1-3-дневного возраста двукратно с интервалом 21-30 дней. Ревакцинация через 6 месяцев;1) calves are vaccinated, starting from 1-3 days of age twice with an interval of 21-30 days. Revaccination after 6 months;
2) нетелей и коров вакцинируют двукратно с интервалом 21-30 дней. Ревакцинация через 6 месяцев;2) heifers and cows are vaccinated twice with an interval of 21-30 days. Revaccination after 6 months;
3) телок случного периода вакцинируют двукратно с интервалом 21-30 дней за 1,0-1,5 месяца до первой случки. Ревакцинация через 6 месяцев.3) heifers of a random period are vaccinated twice with an interval of 21-30 days for 1.0-1.5 months before the first mating. Revaccination after 6 months.
Иммунитет у привитых животных формируется через 10-15 суток после повторного введения вакцины и сохраняется не менее 6 месяцев.Immunity in vaccinated animals is formed 10-15 days after the repeated administration of the vaccine and lasts at least 6 months.
Пример 2Example 2
Проведена проверка антигенной активности ассоциированной вакцины против ПГ-3, ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионной инактивированной, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:The antigenic activity of the associated vaccine against PG-3, ИРТ and coronavirus infection of cattle inactivated inactivated, made as described in example 1, and containing, wt.%:
Авирулентный очищенный антигенный материал из штаммаAvirulent purified antigenic material from strain
«ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, полученного в культуре клеток ВНК-21 с инфекционной активностью 7,0 Ig ТЦД50/см3 - 10,0"VGNKI-4" virus PG-3 cattle obtained in a cell culture of BHK-21 with infectious activity of 7.0 Ig TCD 50 / cm 3 - 10.0
Авирулентный очищенный антигенный материал из штаммаAvirulent purified antigenic material from strain
«ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, полученного в культуре клетокARRIAH of cattle IRT virus obtained in cell culture
ВНК-21 с инфекционной активностью 6,5 Ig ТЦД50/см3 и активностью в РДП 4,0 log2 - 10,0VNK-21 with infectious activity of 6.5 Ig TCD 50 / cm 3 and activity in the RDP of 4.0 log 2 - 10.0
Авирулентный очищенный антигенный материал из штаммаAvirulent purified antigenic material from strain
«ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клетокARRIAH of cattle coronavirus obtained in cell culture
MDBK со степенью накопления 108 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА 7,0 log2 - 10,0MDBK with a degree of accumulation of 10 8 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of 7.0 log 2 - 10.0
Масляный адъювант - до 100,0Oil adjuvant - up to 100.0
Антигенную активность полученного препарата определяли на 10 кроликах массой 2,5-3,0 кг. В сыворотках крови вакцинированных кроликов антитела к коронавирусу КРС выявлялись в РТГА на уровне 6,0±0,44 log2, к вирусу ИРТ КРС в РНГА на уровне 6,2±0,12 log2 и вирусу ПГ-3 КРС в РТГА на уровне 6,5±0,3 log2.The antigenic activity of the obtained preparation was determined on 10 rabbits weighing 2.5-3.0 kg. In the blood serum of vaccinated rabbits, antibodies to cattle coronavirus were detected in rtga at a level of 6.0 ± 0.44 log 2 , to a cattle erythrocyte virus virus in rnga at a level of 6.2 ± 0.12 log 2 and to cattle virus PG-3 in rtga at level 6.5 ± 0.3 log 2 .
Вакцина была использована также для иммунизации 15-25-дневных телят в хозяйствах Нижегородской области. В таблице 5 приведены результаты исследования сывороток крови вакцинированного молодняка. Данный препарат индуцировал образование вирусспецифических антител к возбудителям ПГ-3, ИРТ и коронавирусной инфекции КРС в титрах 6,73±0,35 log2, 6,43±0,35 log2 и 6,68±0,44 log2 соответственно. Отмечено увеличение уровня антител на 1,28-1,95 log2 по сравнению с исходным. Количество иммунных животных увеличилось на 17,5-40,0%.The vaccine was also used to immunize 15-25-day-old calves in the farms of the Nizhny Novgorod region. Table 5 shows the results of a study of blood serum of vaccinated young animals. This drug induced the formation of virus-specific antibodies to pathogens PG-3, IRT and coronavirus infection of cattle in titres of 6.73 ± 0.35 log 2 , 6.43 ± 0.35 log 2 and 6.68 ± 0.44 log 2, respectively. An increase in antibody level by 1.28-1.95 log 2 compared with the original. The number of immune animals increased by 17.5-40.0%.
Пример 3Example 3
Проведена проверка антигенной активности ассоциированной вакцины против ПГ-3, ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионной инактивированной, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас %:The antigenic activity of the associated vaccine against PG-3, ИРТ and coronavirus infection of cattle inactivated by inactivation, made as described in example 1, and containing, wt%:
Авирулентный очищенный антигенный материал из штаммаAvirulent purified antigenic material from strain
«ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, полученного в культуре клеток ВНК-21, с инфекционной активностью 7,0 Ig ТЦД50/см3 - 10,0"VGNKI-4" virus PG-3 cattle obtained in the culture of cells of BHK-21, with infectious activity of 7.0 Ig TCD 50 / cm 3 - 10.0
Авирулентный очищенный антигенный материал из штаммаAvirulent purified antigenic material from strain
«ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, полученного в культуре клетокARRIAH of cattle IRT virus obtained in cell culture
ВНК-21 с инфекционной активностью 6,5 Ig ТЦД50/см3 и активностью в РДП 4,0 log2 - 10,0VNK-21 with infectious activity of 6.5 Ig TCD 50 / cm 3 and activity in the RDP of 4.0 log 2 - 10.0
Авирулентный очищенный антигенный материал из штаммаAvirulent purified antigenic material from strain
«ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клетокARRIAH of cattle coronavirus obtained in cell culture
MDBK со степенью накопления 108 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА 7,0 log2 - 10,0MDBK with a degree of accumulation of 10 8 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of 7.0 log 2 - 10.0
Масляный адъювант - до 100,0Oil adjuvant - up to 100.0
Исследования проводились в ЗАО «Друг крестьянина» Лысковского района Нижегородской области на 5 коровах 4-8-летнего возраста и в ЗАО «Имени Лакина» Собинского района Владимирской области на 33 коровах 4-8-летнего возраста. Результаты исследований представлены в таблице 6, которые свидетельствуют о высокой антигенной активности, полученной в соответствии с изобретением вакцины. Средний уровень антител к вирусу ПГ-3 КРС составил 6,9±0,62 log2, к вирусу ИРТ КРС - 5,8±0,95 log2, к коронавирусу КРС - 6,3±0,48 log2, что является достаточным основанием для практического применения предлагаемой вакцины. При смешивании конкуренции антигенов не происходит.The studies were carried out in ZAO “Peasant Friend” of the Lyskovsky District of the Nizhny Novgorod Region on 5 cows of 4-8 years of age and in ZAO “Name Lakin” of the Sobinsky District of the Vladimir Region on 33 cows of 4-8 years of age. The research results are presented in table 6, which indicate a high antigenic activity obtained in accordance with the invention of the vaccine. The average level of antibodies to cattle PG-3 virus was 6.9 ± 0.62 log 2 , to cattle IRT virus - 5.8 ± 0.95 log 2 , to cattle coronavirus 6.3 ± 0.48 log 2 , which is a sufficient basis for the practical use of the proposed vaccine. When mixing competition of antigens does not occur.
Пример 4Example 4
Проведена проверка эффективности ассоциированной вакцины против ПГ-3, ИРТ и коронавируса КРС эмульсионной инактивированной, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:The effectiveness of the associated vaccine against PG-3, ИРТ and cattle coronavirus inactivated emulsion inactivated, made as described in example 1, and containing, wt.%:
Авирулентный очищенный антигенный материал из штаммаAvirulent purified antigenic material from strain
«ВГНКИ-4» вируса ПГ-3 КРС, полученного в культуре клеток ВНК-21 с инфекционной активностью 7,0 Ig ТЦД50/см3 - 10,0"VGNKI-4" virus PG-3 cattle obtained in a cell culture of BHK-21 with infectious activity of 7.0 Ig TCD 50 / cm 3 - 10.0
Авирулентный очищенный антигенный материал из штаммаAvirulent purified antigenic material from strain
«ВНИИЗЖ» вируса ИРТ КРС, полученного в культуре клетокARRIAH of cattle IRT virus obtained in cell culture
ВНК-21 с инфекционной активностью 6,5 Ig ТЦД50/см3 и активностью в РДП 4,0 log2 - 10,0VNK-21 with infectious activity of 6.5 Ig TCD 50 / cm 3 and activity in the RDP of 4.0 log 2 - 10.0
Авирулентный очищенный антигенный материал из штаммаAvirulent purified antigenic material from strain
«ВНИИЗЖ» коронавируса КРС, полученного в культуре клетокARRIAH of cattle coronavirus obtained in cell culture
MDBK со степенью накопления 108 вирусных частиц/см3 и активностью в РГА 7,0 log2 - 10,0MDBK with a degree of accumulation of 10 8 viral particles / cm 3 and activity in the RGA of 7.0 log 2 - 10.0
Масляный адъювант - до 100,0Oil adjuvant - up to 100.0
Предварительно были проведены исследования сыворотки крови молодняка КРС из неблагополучных по респираторным заболеваниям хозяйств.Previously, studies of the blood serum of young cattle from dysfunctional respiratory diseases farms were conducted.
Полученные данные свидетельствуют о том, что антитела к вирусу ПГ-3 выявлены в 52,0% проб сывороток крови, к вирусу ИРТ КРС - в 57,9%, к коронавирусу КРС - в 47,9% и к возбудителю вирусной диареи - в 29,7%.The data obtained indicate that antibodies to the PG-3 virus were detected in 52.0% of blood serum samples, to the cattle IRT virus - to 57.9%, to the cattle coronavirus - to 47.9% and to the causative agent of viral diarrhea - to 29.7%.
Антитела к одному вирусу обнаружены в 11,9% сывороток, к двум - в 31,3%, к трем - в 25,8%, к четырем - в 19,5%.Antibodies to one virus were found in 11.9% of sera, to two - in 31.3%, to three - in 25.8%, to four - in 19.5%.
Полученные данные свидетельствуют о циркуляции в большинстве обследованных хозяйств нескольких возбудителей, что свидетельствует о преобладании ассоциированного течения респираторных заболеваний.The data obtained indicate the circulation of several pathogens in most of the examined households, which indicates the predominance of the associated course of respiratory diseases.
В серии опытов были исследованы сыворотки крови КРС разного возраста. Полученные результаты свидетельствуют о том, что у большинства животных до 30-40 дней выявляются колостральные антитела к указанным возбудителям, а у молодняка старших возрастов - постинфекционные. Данные лабораторных исследований подтверждаются результатами клинического осмотра, которые свидетельствуют о вспышках респираторных заболеваний через 5-10 дней после перегруппировки телят в 30-45-дневном возрасте.In a series of experiments, blood serum of cattle of different ages was studied. The results obtained indicate that in most animals up to 30-40 days colostral antibodies to these pathogens are detected, and in young animals of older ages - post-infection. Laboratory data are confirmed by the results of a clinical examination, which indicate outbreaks of respiratory diseases 5-10 days after rearrangement of calves at 30-45 days of age.
В результате исследований парных проб сывороток крови молодняка КРС получены данные, свидетельствующие об участии коронавируса КРС в этиопатогенезе респираторных заболеваний молодняка КРС. Во вторых пробах было отмечено повышение титров антител к коронавирусу на 1,4-3,6 log2. В этих же пробах не было отмечено повышение титров антител к возбудителям ПГ-3 и ИРТ, либо они увеличились на 0,2-1,5 log2.As a result of studies of paired blood serum samples of young cattle, data were obtained that testify to the participation of cattle coronavirus in the etiopathogenesis of respiratory diseases of young cattle. In the second samples, an increase in titers of antibodies to coronavirus by 1.4-3.6 log 2 was noted. In the same samples, there was no increase in titers of antibodies to PG-3 and IRT pathogens, or they increased by 0.2-1.5 log 2 .
Руководствуясь полученной информацией, был поставлен эпизоотологический эксперимент по выявлению роли коронавируса в респираторной патологии молодняка КРС. Для этого в условиях родильных отделений пяти неблагополучных по респираторным заболеваниям хозяйств были сформированы 10 групп телят 15-25-дневного возраста по 20-30 голов в каждой.Guided by the information received, an epizootological experiment was performed to identify the role of coronavirus in the respiratory pathology of young cattle. For this, in the conditions of maternity wards of five unsafe respiratory diseases households, 10 groups of calves of 15-25 days old with 20-30 heads each were formed.
В каждом хозяйстве телята одной группы были двукратно иммунизированы коммерческой ассоциированной вакциной против ПГ-3 и ИРТ КРС эмульсионной инактивированной, а животные другой группы - предлагаемой ассоциированной вакциной против ПГ-3, ИРТ и коронавирусной инфекции КРС.In each farm, calves of one group were immunized twice with the commercial associated vaccine against PG-3 and RTI of cattle with an emulsion of inactivated emulsion, and animals of the other group were immunized with the proposed associated vaccine against PG-3, IRT and coronavirus infection of cattle.
В результате клинического осмотра, проведенного через 10-20 дней после вакцинации у 10-20% животных, привитых коммерческой ассоциированной вакциной против ПГ-3 и ИРТ эмульсионной инактивированной были отмечены кашель и риниты. В то же время у телят, привитых предлагаемой вакциной, клинических признаков респираторных заболеваний не отмечалось.As a result of a clinical examination conducted 10-20 days after vaccination, cough and rhinitis were noted in 10-20% of the animals vaccinated with the commercial associated vaccine against PG-3 and emulsion inactivated ИРТ. At the same time, in calves vaccinated with the proposed vaccine, clinical signs of respiratory diseases were not observed.
В таблице 7 приведены результаты исследований сывороток крови от КРС, привитого предлагаемой вакциной. Эти данные свидетельствуют об эффективности указанного препарата.Table 7 shows the results of studies of blood serum from cattle vaccinated with the proposed vaccine. These data indicate the effectiveness of this drug.
Таким образом, показана возможность оздоровления стада от респираторных заболеваний вирусной этиологии посредством применения ассоциированной вакцины против ПГ-3, ИРТ и коронавирусной инфекции КРС.Thus, the possibility of improving the herd from respiratory diseases of viral etiology through the use of the associated vaccine against PG-3, IRT and coronavirus infection of cattle has been shown.
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение «Ассоциированная вакцина против ПГ-3, ИРТ и коронавирусной инфекции КРС эмульсионная инактивированная»:Sources of information taken into account when drawing up the description of the invention to the application for the grant of a patent of the Russian Federation for the invention "Associated vaccine against PG-3, IRT and coronavirus infection of cattle emulsion inactivated":
1. Инфекционные болезни животных: Справочник. Под ред. Д.Ф.Осидзе. - М.: Агропромиздат, 1987, 288 с.1. Infectious diseases of animals: a Handbook. Ed. D.F. Ozidze. - M .: Agropromizdat, 1987, 288 p.
2. Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьев Б.В., Фомина Н.В. Вирусные болезни животных. - М.: ВНИИТИБН, 1998, 928 с.2. Syurin V.N., Samuilenko A.Ya., Soloviev B.V., Fomina N.V. Viral diseases of animals. - M.: VNIITIBN, 1998, 928 p.
3. Инфекционная патология животных: В 2 Т. / Под ред. А.Я.Самуйленко, Б.В.Соловьева, Е.А.Непоклонова, Е.С.Воронина. - М.: «Академкнига», 2006. - Т.1. - 911 с.3. Infectious pathology of animals: In 2 T. / Ed. A.Ya. Samuilenko, B.V. Soloviev, E.A. Nepoklonova, E.S. Voronin. - M.: "Academic Book", 2006. - T.1. - 911 p.
4. Пат. РФ №2212896, А61К 39/155, C12N 7/00, 27.09.2003 г.4. Pat. RF №2212896, А61К 39/155, C12N 7/00, 09/27/2003
5. Пат. РФ №2271220, А61К 39/265, C12N 7/00, А61Р 31/12, 10.03.2006 г.5. Pat. RF №2271220, А61К 39/265, C12N 7/00, А61Р 31/12, 03/10/2006
6. Пат. РФ №2301079, А61К 39/215, А61Р 31/12, 20.06.2007 г.6. Pat. RF №2301079, А61К 39/215, А61Р 31/12, 06/20/2007
7. Пат. ЧССР №249880, А61К 39/295, 39/108, 15.03.1988 г.7. Pat. Czechoslovakia No. 249880, A61K 39/295, 39/108, 03/15/1988
8. Пат. ЧССР №250849, А61К 39/295, 39/108, 15.03.1988 г.8. Pat. Czechoslovakia No. 250849, A61K 39/295, 39/108, 03/15/1988
9. Пат. ЧССР №250850, А61К 39/295, 39/108, 15.03.1988 г. (прототип).9. Pat. Czechoslovakia No. 250850, A61K 39/295, 39/108, 03/15/1988 (prototype).
10. Пат. РФ №2145236, А61К 39/295, 39/108, 39/215, 39/245, 39/12, C12N 7/00 (C12N 7/00, C12R 1:93), 10.02.2000 г.10. Pat. RF №2145236, А61К 39/295, 39/108, 39/215, 39/245, 39/12, C12N 7/00 (C12N 7/00, C12R 1:93), 02/10/2000.
11. WO 2002/062 382, A61K 39/15, 39/215, 39/08, 39/108, 15.08.2002 г.11. WO 2002/062 382, A61K 39/15, 39/215, 39/08, 39/108, 08/15/2002.
12. Наставление по применению вакцины инактивированной комбинированной против ИРТ, ПГ-3, вирусной диареи, респираторно-синцитиальной, рота- и коронавирусной болезни телят КОМБОВАК, №13-3-04/0703 от 20.03.2003 г., утвержденное Департаментом ветеринарии МСХ РФ 20.03.2003 г.12. Guidance on the use of the inactivated combined vaccine against ИРТ, ПГ-3, viral diarrhea, respiratory syncytial, rota- and coronavirus disease of calves KOMBOVAK, No. 13-3-04 / 0703 of 03.20.2003, approved by the Department of Veterinary of the Ministry of Agriculture of the Russian Federation March 20, 2003
13. Пат. РФ №2261111, А61К 39/295, 27.09.2005 г.13. Pat. RF №2261111, А61К 39/295, 09/27/2005
14. Пономарев А.П., Молчанова А.И. и Узюмов В.Л. Определение концентрации частиц вируса ящура в суспензиях. - Ветеринария, 1983, №1, 22-24.14. Ponomarev A.P., Molchanova A.I. and Uzyumov V.L. Determination of the concentration of FMD virus particles in suspensions. - Veterinary medicine, 1983, No. 1, 22-24.
15. Пат. РФ №2182494, А61К 39/155, 20.05.2002 г.15. Pat. RF №2182494, А61К 39/155, 05/20/2002
16. Пат. РФ №2221040, C12N 7/00, А61К 39/265 (C12N 7/00, C12R 1:93), 10.01.2004 г.16. Pat. RF №2221040, C12N 7/00, А61К 39/265 (C12N 7/00, C12R 1:93), 01/10/2004
17. Пат. РФ №2268937, C12N 7/00, А61К 39/215, А61Р 31/12, 27.01.2006 г.17. Pat. RF №2268937, C12N 7/00, А61К 39/215, А61Р 31/12, 01/27/2006
18. Миронова Л.А., Преображенская Н.К. и др. Отечественные линии перевиваемых клеток почек теленка - субстрат для биотехнологии. // Биотехнология, 1998, 5, 25-31.18. Mironova L.A., Preobrazhenskaya N.K. et al. Domestic lines of transplantable cells of calf kidneys - a substrate for biotechnology. // Biotechnology, 1998, 5, 25-31.
Claims (15)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2007147614/13A RU2378014C2 (en) | 2007-12-20 | 2007-12-20 | Emulsion inactivated associated vaccine against cattle paragrippe-3, rednose and coronoviral infection |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2007147614/13A RU2378014C2 (en) | 2007-12-20 | 2007-12-20 | Emulsion inactivated associated vaccine against cattle paragrippe-3, rednose and coronoviral infection |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2007147614A RU2007147614A (en) | 2009-06-27 |
RU2378014C2 true RU2378014C2 (en) | 2010-01-10 |
Family
ID=41026696
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2007147614/13A RU2378014C2 (en) | 2007-12-20 | 2007-12-20 | Emulsion inactivated associated vaccine against cattle paragrippe-3, rednose and coronoviral infection |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2378014C2 (en) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2456021C2 (en) * | 2010-02-24 | 2012-07-20 | ФГОУ ВПО "Дагестанская государственная сельскохозяйственная академия" | Method for preparing cattle parainfluenza-3 hyperimmune serum |
RU2504400C1 (en) * | 2012-09-25 | 2014-01-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Inactivated emulsion associated vaccine for cattle parainfluenza-3, infectious rhinotracheitis and viral diarrhoea |
RU2509571C1 (en) * | 2012-07-27 | 2014-03-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Российской академии сельскохозяйственных наук | Method for preparing cattle parainfluenza-3 vaccine |
RU2522780C2 (en) * | 2012-07-27 | 2014-07-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Российской академии сельскохозяйственных наук | Method for preparing infectious bovine rhinotracheitis vaccine |
RU2535006C1 (en) * | 2013-09-30 | 2014-12-10 | Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечернозёмной зоны Российской Федерации Российской академии сельскохозяйственных наук | Method of immunoprophylaxis of mass virus diseases of calves |
-
2007
- 2007-12-20 RU RU2007147614/13A patent/RU2378014C2/en active
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2456021C2 (en) * | 2010-02-24 | 2012-07-20 | ФГОУ ВПО "Дагестанская государственная сельскохозяйственная академия" | Method for preparing cattle parainfluenza-3 hyperimmune serum |
RU2509571C1 (en) * | 2012-07-27 | 2014-03-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Российской академии сельскохозяйственных наук | Method for preparing cattle parainfluenza-3 vaccine |
RU2522780C2 (en) * | 2012-07-27 | 2014-07-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Российской академии сельскохозяйственных наук | Method for preparing infectious bovine rhinotracheitis vaccine |
RU2504400C1 (en) * | 2012-09-25 | 2014-01-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Inactivated emulsion associated vaccine for cattle parainfluenza-3, infectious rhinotracheitis and viral diarrhoea |
RU2535006C1 (en) * | 2013-09-30 | 2014-12-10 | Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечернозёмной зоны Российской Федерации Российской академии сельскохозяйственных наук | Method of immunoprophylaxis of mass virus diseases of calves |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2007147614A (en) | 2009-06-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11103572B2 (en) | Thermal inactivation of rotavirus | |
US8197823B2 (en) | Vaccine for porcine reproductive and respiratory syndrome, a preparion method and use thereof | |
IE53872B1 (en) | Infectious-bronchitis vaccines for poultry, combined infectious-bronchitis vaccines, process for preparing such vaccines, process for preventing infectious bronchitis and infectious-bronchitis virus strain | |
RU2378014C2 (en) | Emulsion inactivated associated vaccine against cattle paragrippe-3, rednose and coronoviral infection | |
RU2451745C2 (en) | A 2045/KYRGYZSTAN/ 2007 STRAIN OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VIRUS Aphtae epizooticae TYPE A FOR ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC PERFORMANCE CONTROL OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VACCINES AND FOR PRODUCTION OF BIOPREPARATIONS FOR DIAGNOSIS AND SPECIFIC PREVENTION OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE TYPE A | |
IE51122B1 (en) | Infectious-bronchitis vaccines for poultry,combined infectious-bronchitis vaccines,process for preparing such vaccines,method for preventing infectious bronchitis,and infectious-bronchitis virus strains | |
RU2378017C2 (en) | Emulsion inactivated associated vaccine against cattle rednose and coronoviral infection | |
RU2665849C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease type o | |
RU2403061C1 (en) | Inactivated combined vaccine against infectious rhinotracheitis, paraflu-3, respiratory syncytial disease, viral diarrhea and pasteurellosis of cattle | |
Van Kirk et al. | Evaluation of low temperature grown influenza A2/Hong Kong virus in volunteers | |
RU2504400C1 (en) | Inactivated emulsion associated vaccine for cattle parainfluenza-3, infectious rhinotracheitis and viral diarrhoea | |
EP0009277B1 (en) | Combined vaccine active against newcastle disease and egg production drop caused by adeno-like viruses, process for preparing it, adeno-like and newcastle disease virus strains | |
RU2395298C1 (en) | Inactivated combined vaccine against cattle infectious rhinotracheitis, parainfluenza-3, virus diarrhoea, respiratory syncytial rota- and coronaviral disease | |
RU2452512C2 (en) | Inactivated emulsion associated vaccine for parvoviral, rheoviral, type i herpes-viral infections and viral diarrhoeia - cattle mucosal disease | |
RU2301079C2 (en) | Inactivated adsorbed vaccine against cattle coronaviral infection | |
NZ199561A (en) | Vaccine against enzootic abortion in ewes | |
RU2395297C1 (en) | Inactivated combined vaccine against cattle infectious rhinotracheitis, virus diarrhoea and leptospirosis | |
RU2268747C1 (en) | Sorbed and inactivated vaccine against cattle infectious rhinotracheitis | |
RU2342157C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against coronaviral infection of cattle | |
RU2395299C1 (en) | Inactivated combined vaccine against cattle infectious rhinotracheitis, virus diarrhoea, rota-, coronavirus disease and leptospirosis | |
RU2515058C1 (en) | Associated inactivated emulsion bovine viral diarrhoea, rotavirus and coronavirus infections vaccine | |
RU2271220C1 (en) | Emulsion inactivated vaccine against infective cattle rinotracheitis | |
RU2268937C1 (en) | Strain "vniizzh" of cattle coronavirus for preparing diagnostic, vaccine and curative preparations | |
RU2221040C1 (en) | Cattle infectious rhinotracheitis virus strain "vniizzh" for preparing vaccine and diagnostic preparations | |
RU2302258C1 (en) | Sorbed inactivated vaccine against cattle rotaviral infection |