RU2355415C2 - Method of treating mucosal lesions of gastrointestinal tract - Google Patents
Method of treating mucosal lesions of gastrointestinal tract Download PDFInfo
- Publication number
- RU2355415C2 RU2355415C2 RU2007125264/14A RU2007125264A RU2355415C2 RU 2355415 C2 RU2355415 C2 RU 2355415C2 RU 2007125264/14 A RU2007125264/14 A RU 2007125264/14A RU 2007125264 A RU2007125264 A RU 2007125264A RU 2355415 C2 RU2355415 C2 RU 2355415C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- interleukin
- preparation
- solution
- gastrointestinal tract
- ulcers
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 title claims description 8
- 230000009854 mucosal lesion Effects 0.000 title 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 claims abstract description 36
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 claims abstract description 36
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 22
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 7
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 claims description 4
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 claims description 4
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 claims description 4
- 108010082786 Interleukin-1alpha Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004125 Interleukin-1alpha Human genes 0.000 claims description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 2
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 claims 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 12
- 230000003902 lesion Effects 0.000 abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 9
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 abstract 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 20
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 14
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 12
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 7
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 6
- 239000002826 coolant Substances 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 4
- 238000010600 3H thymidine incorporation assay Methods 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101001033249 Homo sapiens Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 3
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 2
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 2
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 2
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000003562 morphometric effect Effects 0.000 description 2
- 238000013425 morphometry Methods 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 241001116389 Aloe Species 0.000 description 1
- 238000011749 CBA mouse Methods 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001002634 Homo sapiens Interleukin-1 alpha Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 235000011399 aloe vera Nutrition 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 description 1
- 208000000718 duodenal ulcer Diseases 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPBQJMYROZQQJC-UHFFFAOYSA-N helium neon Chemical compound [He].[Ne] CPBQJMYROZQQJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- XBCXJKGHPABGSD-UHFFFAOYSA-N methyluracil Natural products CN1C=CC(=O)NC1=O XBCXJKGHPABGSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно к способам лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), а именно к лечению повреждений слизистой оболочки (СО) ЖКТ с помощью препаратов интерлейкина-1 (ИЛ-1).The invention relates to medicine, namely to methods for treating diseases of the gastrointestinal tract (GIT), namely to treating injuries of the gastrointestinal mucosa (CO) of the gastrointestinal tract using interleukin-1 (IL-1) preparations.
Как правило, лечение поражений слизистой оболочки (СО) пищеварительного тракта осуществляют путем комплексного воздействия. Для стимуляции процессов регенерации СО в комплекс лечебных мероприятий включают солкосерил, метилурацил, алоэ, витамины, аутогемотерапию. При трудно рубцующихся язвах используют гипербарическую оксигенацию, местное введение лекарственных препаратов в область язвенного дефекта через эндоскоп, применяют гелий-неоновый лазер. При наличии прободения или перфорации язвы желудка или двенадцатиперстной кишки, а также при малигнизации язвы выполняется оперативное вмешательство. Проводят устранение повреждающего влияния кислотно-пептического фактора, нормализацию моторно-эвакуаторной функций желудка и двенадцатиперстной кишки, стимуляцию образования слизи, улучшение кровоснабжения слизистой оболочки и другие (Краткая медицинская энциклопедия. / Под ред. акад. Б.В.Петровского, М., «Советская энциклопедия», 1990, стр.437-439). Недостатками комплексных методов являются трудоемкость, длительные сроки лечения, наличие значительного числа противопоказаний и возможность осложнений.As a rule, the treatment of lesions of the mucous membrane (CO) of the digestive tract is carried out by a complex effect. To stimulate CO regeneration processes, the complex of therapeutic measures includes solcoseryl, methyluracil, aloe, vitamins, autohemotherapy. In cases of scarring ulcers, hyperbaric oxygenation is used, local administration of drugs to the area of the ulcer defect through the endoscope, and a helium-neon laser is used. In the presence of perforation or perforation of a stomach ulcer or duodenal ulcer, as well as with malignancy of the ulcer, surgery is performed. Eliminate the damaging effect of the acid-peptic factor, normalize the motor and evacuation functions of the stomach and duodenum, stimulate the formation of mucus, improve blood supply to the mucous membrane and others (Brief Medical Encyclopedia. / Ed. By Academician B.V. Petrovsky, M., “ Soviet Encyclopedia ”, 1990, pp. 437-439). The disadvantages of complex methods are the complexity, long periods of treatment, the presence of a significant number of contraindications and the possibility of complications.
Одним из перспективных направлений является использование для лечения заболеваний ЖКТ цитокинов, в частности, интерлейкина-1 (ИЛ-1), что позволяет проводить монотерапию. В настоящее время установлено, что препараты ИЛ-1 эффективны для профилактики поражения СО ЖКТ индометацином. Препараты ИЛ-1α и ИЛ-1β вводят интраперитонально за 90 мин до введения повреждающего фактора (Wallace J.L. et al., Gastroenterology, 1992, v.102, p.1176).One of the promising areas is the use of cytokines, in particular, interleukin-1 (IL-1) for the treatment of gastrointestinal diseases, which allows monotherapy. It has now been established that IL-1 preparations are effective for the prevention of gastrointestinal tract damage with indomethacin. The preparations IL-1α and IL-1β are administered intraperitoneally 90 minutes before the introduction of the damaging factor (Wallace J.L. et al., Gastroenterology, 1992, v. 102, p. 1176).
Недостатком данного способа воздействия является ограниченная область применения и технология введения препарата, отработанная только для использования в эксперименте на животных и не предназначенная для лечения людей.The disadvantage of this method of exposure is the limited scope and technology of drug administration, worked out only for use in animal experiments and not intended for the treatment of people.
Наиболее близким к заявляемому изобретению является способ лечения больных с язвой желудка путем внутривенного введения препарата на основе ИЛ-1 бета - Беталейкина (Долгушина А.И., Автореферат канд. дисс., г.Челябинск, 2003). Курс лечения состоит из 3 ежедневных внутривенных капельных инфузий в дозе 5 нг/кг массы тела. После применения ИЛ-1 было показано ускорение заживления язвенных дефектов слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки. Однако данный способ применения ИЛ-1 имеет ряд недостатков, в частности, относительно невысокая эффективность и наличие нежелательных побочных эффектов, таких, как лихорадочная реакция после инфузий и негативная реакция со стороны системного иммунитета.Closest to the claimed invention is a method of treating patients with gastric ulcer by intravenous administration of a drug based on IL-1 beta - Betaleikin (Dolgushina A.I., Abstract of Cand. Diss., Chelyabinsk, 2003). The course of treatment consists of 3 daily intravenous drip infusions at a dose of 5 ng / kg body weight. After the use of IL-1, acceleration of the healing of ulcerative defects of the gastric and duodenal mucosa was shown. However, this method of using IL-1 has several disadvantages, in particular, the relatively low efficiency and the presence of undesirable side effects, such as a febrile reaction after infusion and a negative reaction from systemic immunity.
Технической задачей, стоявшей перед авторами, является разработка более эффективного способа лечения повреждений СО ЖКТ с использованием препаратов ИЛ-1.The technical challenge faced by the authors is to develop a more effective way to treat gastrointestinal tract injuries using IL-1 preparations.
Технический результат достигается введением пациенту перорально препарата ИЛ-1 в виде водного или физиологического раствора, содержащего 5×10-7 -5×10-5 мас.% ИЛ-1 в количестве 25-2500 нг на 1 кг массы в течение 1-5 дней в зависимости от особенностей заболевания.The technical result is achieved by administering to the patient an oral preparation of IL-1 in the form of an aqueous or physiological solution containing 5 × 10 -7 -5 × 10 -5 wt.% IL-1 in an amount of 25-2500 ng per 1 kg of weight for 1-5 days depending on the characteristics of the disease.
Как показали исследования, использование ИЛ-1 значительно усиливает заживление язвенных поражений СОЖ в различных моделях.Studies have shown that the use of IL-1 significantly enhances the healing of ulcerative lesions of the coolant in various models.
В качестве препарата ИЛ-1 могут использоваться рекомбинантный или природный ИЛ-1, а также ИЛ-1 альфа и ИЛ-1 бета, например, препарат «Беталейкин», который представляет собой фармакопейный препарат рекомбинантного человеческого ИЛ-1β. Использование ИЛ-1 в дозе менее 10-7 малоэффективно, применение его в дозе более 10-5 мас.% возможно при использовании в отдельных осложненных патологиях, но, как правило, экономически нецелесообразно. Выбор конкретного интерлейкина-1 и длительность применения определяется, в основном, особенностями заболевания пациента.As the preparation of IL-1, recombinant or natural IL-1, as well as IL-1 alpha and IL-1 beta, for example, Betaleikin, which is a pharmacopoeial preparation of recombinant human IL-1β, can be used. The use of IL-1 in a dose of less than 10 -7 is ineffective, its use in a dose of more than 10 -5 wt.% Is possible when used in certain complicated pathologies, but, as a rule, is not economically feasible. The choice of a specific interleukin-1 and the duration of use is determined mainly by the characteristics of the patient's disease.
Промышленная применимость способа и его эффективность иллюстрируются следующими примерами.The industrial applicability of the method and its effectiveness are illustrated by the following examples.
Пример 1. Получение природного препарата ИЛ-1 проводили путем стимуляции клеток человека. Выделение клеток проводили следующим образом (Boyum A., Scand. J. Clin. Invest., 1968, V.21, S.97, P.77-89). К 10 мл свежей венозной крови, взятой на гепарине (20 МЕ/мл) в стерильную пробирку, добавляли 1 мл 10% раствора желатины, перемешивали и инкубировали при 37°С в течение 30 мин. Затем проводили центрифугирование в градиенте плотности Histopaque ("Sigma"). Для этого 6 мл полученной лейковзвеси наслаивали на 3 мл градиента плотности и центрифугировали в течение 40 минут при 450 g при +4°С. Образовавшееся в интерфазе "кольцо" мононуклеаров снимали пипеткой, полученную клеточную взвесь трижды отмывали 0,9% раствором NaC. Жизнеспособность клеток, которую определяли по методу окрашивания трипановым синим, составляла не менее 95%. Клетки ресуспендировали в концентрации 5×10-6 клеток /мл в среде RPMI 1640 с добавлением 2 мМ глутамина и 80 мкг/мл гентамицина. Для приготовления рабочего раствора продигиозана смешивали 2,4 мл среды RPMI 1640 и 800 мкл 0,005% раствора продигиозана, при этом в 100 мкл полученного раствора содержалось 1,0 мкг продигиозана. В 96-луночный планшет для культивирования клеток ("COSTAR") вносили индуктор по 100 мкл на лунку, затем во все лунки добавляли по 100 мкл разведенных клеток. Культивирование проводили при 37°С в 5% СО2 в течение 24 часов, после чего осторожно отбирали супернатанты.Example 1. Obtaining a natural preparation of IL-1 was carried out by stimulation of human cells. Cell isolation was performed as follows (Boyum A., Scand. J. Clin. Invest., 1968, V.21, S.97, P.77-89). To 10 ml of fresh venous blood taken on heparin (20 IU / ml) in a sterile tube, 1 ml of a 10% gelatin solution was added, mixed and incubated at 37 ° C for 30 min. A density gradient centrifugation Histopaque ("Sigma") was then performed. For this, 6 ml of the obtained leukomes suspension was layered on a 3 ml density gradient and centrifuged for 40 minutes at 450 g at + 4 ° С. The “ring” of mononuclear cells formed in the interphase was pipetted, and the resulting cell suspension was washed three times with 0.9% NaC solution. Cell viability, which was determined by the method of staining with trypan blue, was at least 95%. Cells were resuspended at a concentration of 5 × 10 -6 cells / ml in RPMI 1640 medium supplemented with 2 mM glutamine and 80 μg / ml gentamicin. To prepare a working solution of prodigiosan, 2.4 ml of RPMI 1640 medium and 800 μl of a 0.005% solution of prodigiosan were mixed, while 100 μl of the resulting solution contained 1.0 μg of prodigiosan. An inducer of 100 μl per well was added to a 96-well cell culture plate ("COSTAR"), then 100 μl of diluted cells were added to all wells. Cultivation was carried out at 37 ° C in 5% CO 2 for 24 hours, after which supernatants were carefully selected.
В полученном супернатанте определяли содержание биоактивного ИЛ-1 в тесте пролиферации мышиных тимоцитов по следующей методике. Мышей линии СВА забивали методом цервикальной дислокации. В асептических условиях извлекали у них тимусы, которые затем гомогенизировали в среде Игла с использованием игл различного диаметра. Полученную взвесь тимоцитов ресуспендировали в 1 мл среды Игла и подсчитывали в камере Горяева. Средой Игла, содержащей 4% фетальной сыворотки, доводили концентрацию клеток до 10 млн/мл. В лунки 96-луночного планшета для культивирования вносили исследуемые образцы, раствор конканавалина А и по 100 мкл приготовленной ранее взвеси тимоцитов. Одновременно в этом же планшете ставили необходимые контроли:In the obtained supernatant, the content of bioactive IL-1 was determined in the mouse thymocyte proliferation test according to the following procedure. CBA mice were sacrificed by cervical dislocation. Under aseptic conditions, thymuses were removed from them, which were then homogenized in the Needle medium using needles of various diameters. The resulting thymocyte suspension was resuspended in 1 ml of Eagle’s medium and counted in the Goryaev’s chamber. An Eagle medium containing 4% fetal serum was adjusted to a cell concentration of 10 million / ml. Test wells, concanavalin A solution, and 100 μl of previously prepared thymocyte suspension were added to the wells of a 96-well culture plate. At the same time, the necessary controls were placed in the same tablet:
- контроль клеточной взвеси - к 100 мкл культуральной среды добавляли 100 мкл клеточной взвеси;- control of cell suspension - to 100 μl of culture medium was added 100 μl of cell suspension;
- контроль действия субоптимальной дозы конканавалина А: к 50 мкл культуральной среды добавляли 50 мкл рабочего раствора конканавалина А и 100 мкл взвеси тимоцитов;- control of the action of a suboptimal dose of concanavalin A: 50 μl of a working solution of concanavalin A and 100 μl of a suspension of thymocytes were added to 50 μl of culture medium;
- контроль действия оптимальной дозы конканавалина А: к 100 мкл рабочего раствора конканавалина А добавляли 100 мкл тимоцитарной взвеси.- control of the effect of the optimal dose of concanavalin A: 100 μl of thymocytic suspension was added to 100 μl of the working solution of concanavalin A.
Культивирование осуществляли в течение 72 часов в СО2-инкубаторе. За 18 часов до окончания культивирования во все лунки планшета вносили по 40 мкг 3Н-тимидина в объеме 10 мкл. По окончании культивирования тимоцитарные культуры из всех лунок планшета переносили с помощью харвестера на фильтры, которые затем высушивали. Фильтры помещали в виалы с сцинтилляционной жидкостью и определяли включение 3Н-тимидина тимоцитами каждой культуры, используя для этого сцинтилляционный счетчик (RACKBETA 1217). Данные по каждым трем параллельным культурам усредняли. Для стандартного образца строили график зависимости уровня включения 3Н-тимидина от разведения препарата. Для того чтобы рассчитать активность исследуемого образца, находили среднее значение включения 3Н-тимидина в каждом его разведении и определяли последнее разведение, в котором образец дает усиление пролиферации укладывающееся на график стандарта.Cultivation was carried out for 72 hours in a CO 2 incubator. 18 hours before the end of cultivation, 40 μg of 3H-thymidine in a volume of 10 μl was added to all wells of the plate. At the end of the cultivation, thymocytic cultures from all wells of the plate were transferred using a harvester to filters, which were then dried. Filters were placed in vials with scintillation fluid and 3H-thymidine incorporation by thymocytes of each culture was determined using a scintillation counter (RACKBETA 1217). Data for each three parallel cultures were averaged. For a standard sample, a graph of the dependence of the level of 3H-thymidine incorporation on drug dilution was constructed. In order to calculate the activity of the test sample, the average value of 3H-thymidine incorporation in each dilution was found and the last dilution was determined, in which the sample gives proliferation enhancement that fits the standard chart.
Расчет активности исследуемого образца проводили следующим образом: на графике, построенном для стандартного образца, находили точку, соответствующую минимальному усилению пролиферации, выраженному в импульсах в минуту, которое дает исследуемый образец в каком-либо разведении и которое укладывается на прямую часть графика стандарта, затем, опустив перпендикуляр на ось абсцисс, находили разведение стандарта, вызывающее такое же усиление пролиферации. Таким образом, было получено, что проценты усиления пролиферации стандартного образца и исследуемого образца равны и для расчета активности не являются необходимыми. Содержание ИЛ-1 доводили до нужной концентрации путем разведения в стерильном физиологическом растворе.The calculation of the activity of the test sample was carried out as follows: on the graph constructed for the standard sample, we found the point corresponding to the minimum proliferation gain, expressed in pulses per minute, which gives the test sample in any dilution and which fits on the straight part of the standard graph, then, dropping the perpendicular to the abscissa axis, we found the dilution of the standard, causing the same increase in proliferation. Thus, it was found that the percent increase in proliferation of the standard sample and the test sample are equal and are not necessary for calculating activity. The content of IL-1 was adjusted to the desired concentration by dilution in sterile saline.
В эксперименте использовали самок крыс Wistar весом ок. 150 г. За 24 часа до проведения опыта крыс не кормили, оставляя свободный доступ к воде. Повреждения слизистой вызывали внутрижелудочным введением 1 мл 96° этанола (Wallace J.L., Eur. J. Pharmacol., 1990, v.186, p.279). Через 1 час после поражения внутрижелудочно через зонд вводили 1 мл раствора ИЛ-1 или плацебо в том же объеме. На каждую точку были исследованы по пять животных. Животные были забиты через 3 часа, сутки и трое суток после введения ИЛ-1. Желудки были вынуты, зафиксированы 10% формалином, разрезаны по большой кривизне, приколоты к восковой платформе и сфотографированы цифровой камерой, после чего площадь поражений измеряли с использованием программы Scion Image. Процент поражения высчитывали как отношение пораженных участков к общей площади слизистой желудка. Результаты представлены в таблице 1.In the experiment, female Wistar rats weighing approx. 150 g. 24 hours before the experiment, rats were not fed, leaving free access to water. Mucosal damage was caused by intragastric administration of 1 ml of 96 ° ethanol (Wallace J.L., Eur. J. Pharmacol., 1990, v.186, p.279). 1 hour after the lesion, 1 ml of IL-1 solution or placebo in the same volume was administered intragastrically through a probe. Five animals were examined at each point. Animals were slaughtered 3 hours, one day, and three days after the administration of IL-1. The stomachs were removed, fixed with 10% formalin, cut along a large curvature, pinned to a wax platform and photographed with a digital camera, after which the lesion area was measured using the Scion Image program. The percentage of lesions was calculated as the ratio of the affected areas to the total area of the gastric mucosa. The results are presented in table 1.
Количество наблюдений: n=5 на каждую точку.Number of observations: n = 5 at each point.
Приведенные данные показали, что, начиная со срока 24 часа, применение ИЛ-1 в 1,5-3 раза снижало площадь поражения по сравнению с контрольной группой.The data showed that, starting from a period of 24 hours, the use of IL-1 1.5-3 times reduced the area of damage in comparison with the control group.
Пример 2. В примере для лечения поражений желудка использовали препарат «Беталейкин». Ампулу препарата, содержавшую 1 мкг рекомбинантного человеческого ИЛ-1β, разводили в 1 мл стерильного физиологического раствора и перемешивали пипетированием. Таким образом, получали раствор с концентрацией ИЛ-1β 100 нг/мл. Раствор использовали сразу же после приготовления.Example 2. In the example, for the treatment of lesions of the stomach used the drug "Betaleikin". The ampoule of the preparation containing 1 μg of recombinant human IL-1β was diluted in 1 ml of sterile saline and mixed by pipetting. Thus, a solution with a concentration of IL-1β of 100 ng / ml was obtained. The solution was used immediately after preparation.
В экспериментах использовались самки крыс Wistar массой 150-200 г. У крыс индуцировали язву желудка путем введения в полость желудка уксусной кислоты (Tsukimi Y., et al., Gastroenterology Hepatology, 1994, v.9, p.60). На 3 день после операции происходило формирование язвенного дефекта, что было подтверждено гистологическим исследованием, при этом у каждого животного образовывалось по две язвы. На 4 и 5 дни после операции животным опытных групп вводили через зонд в желудок препарат «Беталейкин» в дозе 100 нг/мл в 1 мл раствора. Животные контрольной группы на те же сроки получали 1 мл физ. раствора. На 8 день эксперимента проводился забор крови из хвостовой вены, после чего животных забивали, вскрывали желудок и измеряли площадь поверхности язв. Подсчет абсолютного количества лейкоцитов проводили в камере Горяева с использованием раствора Тюрка. Статистическую обработку проводили по критерию Стьюдента. Результаты измерения площадей язв представлены в таблице 2.In the experiments, female Wistar rats weighing 150-200 g were used. Gastric ulcer was induced in rats by introducing acetic acid into the gastric cavity (Tsukimi Y., et al., Gastroenterology Hepatology, 1994, v.9, p.60). On the 3rd day after the operation, the formation of a ulcerative defect occurred, which was confirmed by histological examination, with two ulcers forming in each animal. On days 4 and 5 after the operation, the animals of the experimental groups were injected Betaleukin at a dose of 100 ng / ml in 1 ml of solution through a tube into the stomach. Animals of the control group received 1 ml nat. solution. On day 8 of the experiment, blood was taken from the tail vein, after which the animals were sacrificed, the stomach was opened, and the surface area of the ulcers was measured. Calculation of the absolute number of leukocytes was carried out in the Goryaev chamber using a Turk solution. Statistical processing was performed according to student criterion. The results of measuring the area of ulcers are presented in table 2.
Как следует из представленных данных, наблюдалось снижение площадей язв более чем на 36% после лечения препаратом «Беталейкин» по сравнению с контролем.As follows from the data presented, there was a decrease in the area of ulcers by more than 36% after treatment with Betaleikin compared with the control.
Результаты подсчетов абсолютного количества лейкоцитов показали отсутствие достоверных различий между контрольной и опытной группами (Таблица 3). Это позволяет судить об отсутствии значительного системного воздействия препарата при его введении в желудок.The results of calculating the absolute number of leukocytes showed the absence of significant differences between the control and experimental groups (Table 3). This allows us to judge the absence of significant systemic effects of the drug when it is introduced into the stomach.
Пример 3. 10 мкл субстанции ИЛ-1β (в концентрации 2 мг/мл в ФСБ рН 7,2), содержавшей 20 мкг ИЛ-1β, разводили в 980 мкл стерильного 0,9% раствора натрия хлористого (физиологического раствора), и получали, таким образом, раствор с концентрацией ИЛ-1β 20 мкг/мл. Затем 5 мкл полученного раствора вносили в 995 мкл стерильного физиологического раствора и перемешивали пипетированием. Раствор использовали сразу же после приготовления. Язва желудка индуцировалась так же, как описано в примере 2. На 4, 5 и 6 дни после операции животным опытных групп вводили через зонд в желудок рекомбинантный ИЛ-1β в 1 мл 0,9% стерильного физиологического раствора в концентрации 100 нг/мл.Example 3. 10 μl of the substance IL-1β (at a concentration of 2 mg / ml in FSB pH 7.2) containing 20 μg of IL-1β was diluted in 980 μl of sterile 0.9% sodium chloride solution (physiological solution), and received Thus, a solution with a concentration of IL-1β of 20 μg / ml. Then 5 μl of the resulting solution was added to 995 μl of sterile saline and mixed by pipetting. The solution was used immediately after preparation. A gastric ulcer was induced in the same manner as described in Example 2. On days 4, 5, and 6 after the operation, the animals of the experimental groups were injected with a recombinant IL-1β in 1 ml of 0.9% sterile physiological saline at a concentration of 100 ng / ml into the stomach through a tube.
На 8 день эксперимента проводился забор крови из хвостовой вены, после чего животных забивали, вскрывали желудок и язвы иссекали для гистологического исследования. После стандартной гистологической проводки изготавливали срезы толщиной 6 мкм, которые окрашивали гематоксилином-эозином. Препараты фотографировали с помощью микроскопа с цифровой камерой («Leica»), после чего периметр язв измеряли с использованием программы Scion Image. Подсчет абсолютного количества лейкоцитов проводили в камере Горяева с использованием раствора Тюрка. Статистическую обработку проводили по критерию Стьюдента. Результаты морфометрических измерений язв представлены в таблице 4.On the 8th day of the experiment, blood was taken from the tail vein, after which the animals were sacrificed, the stomach was opened and ulcers were excised for histological examination. After standard histological wiring, sections were made with a thickness of 6 μm, which were stained with hematoxylin-eosin. The preparations were photographed using a microscope with a digital camera (“Leica”), after which the perimeter of ulcers was measured using the Scion Image program. Calculation of the absolute number of leukocytes was carried out in the Goryaev chamber using a Turk solution. Statistical processing was performed according to student criterion. The results of morphometric measurements of ulcers are presented in table 4.
По данным гистологического и морфометрического исследований показана четкая тенденция к снижению периметра язвы (в среднем около 30%) у животных, получавших рекомбинантный ИЛ-1β человека.According to histological and morphometric studies, a clear tendency is shown to decrease the perimeter of the ulcer (on average about 30%) in animals treated with recombinant human IL-1β.
Пример 4. Рекомбинантный ИЛ-1α человека разводили в стерильном физиологическом растворе в концентрации 100 нг/мл и перемешивали пипетированием. Раствор использовали сразу же, после приготовления.Example 4. Recombinant human IL-1α was diluted in sterile saline at a concentration of 100 ng / ml and mixed by pipetting. The solution was used immediately after preparation.
Язва желудка индуцировалась так же как описано в примере 2. На 4, 5 и 6 дни после операции животным опытных групп вводили через зонд в желудок приготовленный раствор рек ИЛ-1α в объеме 1 мл. Животные контрольной группы на те же сроки получали 1 мл физ. раствора. На 8 день эксперимента проводился забор крови из хвостовой вены, после чего животных забивали, вскрывали желудок и измеряли площадь поверхности язв. Подсчет абсолютного количества лейкоцитов проводили в камере Горяева с использованием раствора Тюрка. Статистическую обработку проводили по критерию Стьюдента. Результаты измерений площадей язв представлены в таблице 5.A gastric ulcer was induced as described in Example 2. On days 4, 5, and 6 after the operation, the animals of the experimental groups were injected with a prepared solution of IL-1α rivers in a volume of 1 ml through a tube into the stomach. Animals of the control group received 1 ml nat. solution. On the 8th day of the experiment, blood was taken from the tail vein, after which the animals were sacrificed, the stomach was opened, and the surface area of the ulcers was measured. Calculation of the absolute number of leukocytes was carried out in the Goryaev chamber using a Turk solution. Statistical processing was performed according to student criterion. The results of measurements of the area of ulcers are presented in table 5.
По данным таблицы 5 показана четкая тенденция к снижению периметра язвы (в среднем на четверть) у животных, получавших рек. ИЛ-1α.According to table 5 shows a clear tendency to decrease the perimeter of ulcers (on average by a quarter) in animals treated with rivers. IL-1α.
Результаты подсчетов абсолютного количества лейкоцитов показали отсутствие различий между контрольной и опытной группами (Таблица 6). Это также позволяет сказать об отсутствии значительного системного воздействия ИЛ-1 при местном использовании.The results of the calculation of the absolute number of leukocytes showed the absence of differences between the control and experimental groups (table 6). This also allows us to say that there is no significant systemic effect of IL-1 in local use.
В ходе проведенных экспериментов было показано, что при введении в желудок раствора ИЛ-1 оказывает выраженное ранозаживляющее действие, стимулирует местный иммунитет слизистой и не имеет негативных побочных эффектов. Местное использование ИЛ-1 позволяет достичь высоких лечебных концентраций препарата непосредственно в очаге поражения и избежать нежелательного системного действия.During the experiments, it was shown that when the IL-1 solution is introduced into the stomach, it has a pronounced wound healing effect, stimulates the local mucosal immunity and does not have negative side effects. Local use of IL-1 allows you to achieve high therapeutic concentrations of the drug directly in the lesion and to avoid undesirable systemic effects.
Препарат показал эффективность, безвредность и свою перспективность для лечения воспалительных, инфекционных и стрессорных поражений, механических повреждений и ран слизистой оболочки пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки, язв желудка.The drug showed efficacy, harmlessness and its promise for the treatment of inflammatory, infectious and stressful lesions, mechanical damage and wounds of the mucous membrane of the esophagus, stomach and duodenum, stomach ulcers.
Claims (6)
5×10-7-5×10-5 мас.% ИЛ-1.1. A method of treating damage to the mucous membrane of the gastrointestinal tract using interleukin-1 preparations, characterized in that the interleukin-1 preparation is administered orally in the form of an aqueous solution containing
5 × 10 -7 -5 × 10 -5 wt.% IL-1.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007125264/14A RU2355415C2 (en) | 2007-07-04 | 2007-07-04 | Method of treating mucosal lesions of gastrointestinal tract |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007125264/14A RU2355415C2 (en) | 2007-07-04 | 2007-07-04 | Method of treating mucosal lesions of gastrointestinal tract |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2007125264A RU2007125264A (en) | 2009-01-10 |
| RU2355415C2 true RU2355415C2 (en) | 2009-05-20 |
Family
ID=40373943
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007125264/14A RU2355415C2 (en) | 2007-07-04 | 2007-07-04 | Method of treating mucosal lesions of gastrointestinal tract |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2355415C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2577302C2 (en) * | 2009-11-11 | 2016-03-10 | Ямагути Юниверсити | Therapeutic agent for gastrointestinal disease |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2260443C1 (en) * | 2004-10-13 | 2005-09-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации" (ГОУ ВПО Тверская ГМА Минздрава России) | Method for treatment of ulcerous-erosion injure in gastroduodenal region by using immunomodulating agent "superlimf" |
-
2007
- 2007-07-04 RU RU2007125264/14A patent/RU2355415C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2260443C1 (en) * | 2004-10-13 | 2005-09-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации" (ГОУ ВПО Тверская ГМА Минздрава России) | Method for treatment of ulcerous-erosion injure in gastroduodenal region by using immunomodulating agent "superlimf" |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| TAKAHASHI S. et al. Regulation by endogenous interleukin-1 of mRNA expression of healing-related factors in gastric ulcers in rats. J Pharmacol Exp Ther. 1999 Nov; 291(2):634-41, реферат PMID: 10525082. * |
| ДОЛГУШИНА А. И. Оценка клинико-иммунологической эффективности беталейкина при лечении больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки: Автореф. дис. канд. мед. наук: Челябинск, НИИ иммунологии, 2003, с.22. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2577302C2 (en) * | 2009-11-11 | 2016-03-10 | Ямагути Юниверсити | Therapeutic agent for gastrointestinal disease |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2007125264A (en) | 2009-01-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102079794B (en) | Mucoadhesive xyloglucan-containing formulations useful in medical devices and in pharmaceutical formulations | |
| KR102708321B1 (en) | Mussel adhesive protein product and its use for suppressing mucosal inflammation | |
| TW201919633A (en) | a local formulation comprising montelukast and a combination with mussel adhesive protein | |
| TW201920232A (en) | Anti-inflammatory use of peptide | |
| CN109758580A (en) | Treatment preparation and its application of injury to alimentary tract mucous membrane surface are sprayed to suitable for gastroscope | |
| RU2355415C2 (en) | Method of treating mucosal lesions of gastrointestinal tract | |
| CN108904511A (en) | A kind of drug and purposes for treating acute lung injury and acute respiratory distress syndrome | |
| US6992073B2 (en) | Use of N-acetyl-D-glucosamine in the manufacture of a medicament for treating cervical erosion | |
| WO2004103399A1 (en) | Use of ulinastatin for treating severe acute respiratory syndrome and pharmaceutical composition of ulinastatin | |
| CN108125940B (en) | Application of valeric acid in preparation of medicine for preventing and/or treating side effect of tumor radiotherapy | |
| CN116077512A (en) | Application of Manacastine in relieving multi-organ damage caused by chemotherapeutic drug cisplatin | |
| RU2361606C2 (en) | Composition for treatment of damages of gi tract mucosa | |
| RU2217158C1 (en) | Method for preventing and treating gastric ulcers in animals | |
| RU2286781C2 (en) | Method for treatment of endophagus chemical burn in infants | |
| CN113230390A (en) | Composition, vaginal lotion and application of vaginal lotion in gynecological mucosal injury repair | |
| CN113577076B (en) | Application of gelsemine in preparation of medicine for treating acute lung injury | |
| CN118236359B (en) | Application of terbutaline sulfate in preventing and treating intestinal ischemia-reperfusion injury | |
| CN118236380B (en) | Application of bunazosin hydrochloride in preventing and treating ischemia reperfusion injury of intestines | |
| CN118370757B (en) | Application of FEN1 inhibitor in preparation of medicines for treating myocardial infarction | |
| CN113150067B (en) | GSDME inhibitor and application thereof in prevention and treatment of tumor chemotherapy-induced digestive tract injury | |
| CN114984056B (en) | Natural product extract for treating Crohn's disease and application thereof | |
| RU2564907C1 (en) | Method of treating patients with lichen planus | |
| RU2699967C1 (en) | Method for complex treatment of enteral insufficiency in children with severe thermal trauma | |
| RU2744919C1 (en) | Remedy for the treatment of endometritis in cows | |
| RU2359673C2 (en) | Way of treatment of chronic helicobacter pylori-associated gastritis of gastric remnant |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090705 |