RU2308957C1 - Method for obtaining a preparation for mesotherapy and preparation obtained due to this method (variants) - Google Patents
Method for obtaining a preparation for mesotherapy and preparation obtained due to this method (variants) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2308957C1 RU2308957C1 RU2006109355/15A RU2006109355A RU2308957C1 RU 2308957 C1 RU2308957 C1 RU 2308957C1 RU 2006109355/15 A RU2006109355/15 A RU 2006109355/15A RU 2006109355 A RU2006109355 A RU 2006109355A RU 2308957 C1 RU2308957 C1 RU 2308957C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- fibroblasts
- umbilical cord
- mesotherapy
- solution
- patient
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины и может использоваться в способах получения препаратов для мезотерапии, применяющихся для коррекции возрастных изменений кожи лица при старении.The invention relates to medicine and can be used in methods for producing mesotherapy preparations used to correct age-related changes in facial skin during aging.
Стремление как можно дольше сохранить привлекательность и внешнюю молодость побуждает людей применять разнообразные косметологические средства, прибегать к помощи косметологов и пластических хирургов. По статистическим данным, каждая шестая женщина старше 40 лет прибегает к услугам косметологов и пластических хирургов. А 60% всех операций в хирургических отделениях Института пластической хирургии и косметологии МЗ и СР РФ направлено на коррекцию возрастных изменений лица.The desire to maintain attractiveness and external youth as long as possible encourages people to use a variety of cosmetic products, to resort to the help of cosmetologists and plastic surgeons. According to statistics, every sixth woman over 40 years old uses the services of cosmetologists and plastic surgeons. And 60% of all operations in the surgical departments of the Institute of Plastic Surgery and Cosmetology of the Ministry of Health and Social Development of the Russian Federation are aimed at correcting age-related changes in the face.
Известно, что возрастной процесс снижения тургора и эластичности кожи связан с уменьшением числа юных и зрелых фибробластов. В молодой коже благодаря значительному числу фибробластов коллагеновые волокна и гликозаминогликановый гель постоянно обновляются. С возрастом обновление межклеточного вещества дермы и синтез коллагена идет все медленнее, накапливаются поврежденные коллагеновые волокна, а количество гликозаминогликанов неуклонно снижается. В результате кожа теряет влагу, истончается ее дермальный слой, что приводит к снижению ее упругости и эластичности - кожа стареет.It is known that the age-related process of reducing turgor and skin elasticity is associated with a decrease in the number of young and mature fibroblasts. In young skin, due to the significant number of fibroblasts, collagen fibers and glycosaminoglycan gel are constantly updated. With age, the renewal of the intercellular substance of the dermis and collagen synthesis proceeds more slowly, damaged collagen fibers accumulate, and the number of glycosaminoglycans is steadily decreasing. As a result, the skin loses moisture, its dermal layer is thinned, which leads to a decrease in its firmness and elasticity - the skin ages.
Все кремы, содержащие коллаген, эластин и гликозаминогликаны, дают временный незначительный эффект, так как эти субстанции редко проникают глубже эпидермиса и только частично сглаживают морщины и складки.All creams containing collagen, elastin and glycosaminoglycans give a temporary insignificant effect, since these substances rarely penetrate deeper than the epidermis and only partially smooth out wrinkles and folds.
В настоящее время разрабатываются различные подходы к коррекции возрастных изменений мягких тканей лица: оперативная косметология - различные варианты фейслифтинга, аппаратная косметология, фотоомоложение, мезотерапия. Последняя является наиболее перспективной, так как путем микроинъекций обеспечивается доставка препарата в более глубокие слои дермы и осуществляется длительное воздействие на ткани-мишени.Currently, various approaches are being developed to correct age-related changes in soft tissues of the face: surgical cosmetology - various facelift options, hardware cosmetology, photorejuvenation, mesotherapy. The latter is the most promising, since by microinjection the drug is delivered to the deeper layers of the dermis and a long-term effect on the target tissue is carried out.
Мезотерапия как метод воздействия известен уже более 150 лет. Но идеи и принципы мезотерапии в современном ее применении сформулировал основатель методики Мишель Пистор в 1952 г. Основа метода мезотерапии - внутрикожные микроинъекции различных препаратов на уровень средней части дермы - мезодермы. Осуществляется либо обкалывание всей проблемной зоны либо отдельного анатомического участка, либо введение препарата в определенные точки. Применяется папульная, туннельная техники.Mesotherapy as a method of exposure has been known for over 150 years. But the ideas and principles of mesotherapy in its modern application were formulated by the founder of the method, Michel Pistor in 1952. The basis of the mesotherapy method is intradermal microinjections of various drugs to the level of the middle part of the dermis - mesoderm. Either chipping of the entire problem area or a separate anatomical site, or the introduction of the drug at certain points is carried out. Papular, tunneling techniques are used.
Однако часто приходится сталкиваться с отсутствием ожидаемого эффекта от введения препарата или использования многокомпонентного коктейля. Длительность эффекта после проведения курса инъекций препаратами коллагена, эластина, гиалуроновой кислоты достигает 2-3-х месяцев. До сих пор не найден препарат, отвечающий всем требованиям эстетической медицины. Одной из попыток решения данной проблемы является применение клеточных технологий или органопрепаратов.However, one often encounters a lack of the expected effect of administering the drug or using a multi-component cocktail. The duration of the effect after a course of injections with collagen, elastin, hyaluronic acid preparations reaches 2-3 months. So far, no drug has been found that meets all the requirements of aesthetic medicine. One of the attempts to solve this problem is the use of cell technology or organ preparations.
В научной литературе известны методы коррекции возрастных изменений кожи с помощью органопрепаратов. Наиболее известным производителем органопрепаратов на фармацевтическом рынке является НПК Вит Орган. Остальные органопрепараты НПК Вит Орган из клеточного содержимого (от стволовых до зрелых клеток телят) широко применяются за рубежом и в России с целью коррекции возрастных изменений. Однако отрицательным моментом использования фетальных органопрепаратов является сенсибилизация человеческого организма чужеродным животным белком, ряд ученых считают, что подобные инъекции вредны - из-за разницы генокода животного и человека.In the scientific literature, methods for correcting age-related skin changes with the help of organics are known. The most famous manufacturer of organic products in the pharmaceutical market is NPK Vit Organ. Other organ preparations NPK Vit Organ from the cellular contents (from stem to mature calf cells) are widely used abroad and in Russia to correct age-related changes. However, the negative point of using fetal organ preparations is the sensitization of the human body by a foreign animal protein, a number of scientists believe that such injections are harmful - due to the difference in the genocode of the animal and human.
Основной принцип омоложения кожи аутологичными фибробластами заключается в простой, эффективной идее: доставить в стареющую кожу эффективные более молодые клетки, которые способны выполнять специализированную функцию по синтезу коллагена и гликозаминогликанов.The basic principle of skin rejuvenation with autologous fibroblasts is a simple, effective idea: to deliver effective younger cells to aging skin that are capable of performing a specialized function in the synthesis of collagen and glycosaminoglycans.
В работе Г.Келлера с соавторами пациентам в возрасте 37-61 года вводили аутологичные фибробласты, выделенные из кожи пациентов, с получением стойкого клинического эффекта. В опытах на животных было доказано отсутствие онкогенных и туморогенных свойств аутологичных фибробластов (Бюллетень экспериментальной биологической медицины 2000 г., 130 (8), стр.203-206). А.А.Згурский и Э.А.Крихели применяли культуру аутогенных фибробластов кожи для коррекции возрастных изменений кожи лица и области шеи пациенткам в возрасте 40-60 лет ("Применение аутогенных фибробластов в косметологии", опубл. в журнале "Эстетическая медицина", т.3 №4, с.336-342, 2004 г.). При наблюдении за пациентками в течение 12 месяцев отмечен стойкий положительный эффект, проявлявшийся в исчезновении мелких и уменьшении крупных морщин, а также в общем улучшении состояния кожи.In the work of G. Keller et al., Patients aged 37-61 years old were injected with autologous fibroblasts isolated from the skin of patients with obtaining a persistent clinical effect. In animal experiments, the absence of oncogenic and tumorigenic properties of autologous fibroblasts was proved (Bulletin of Experimental Biological Medicine 2000, 130 (8), pp. 203-206). A.A. Zgursky and E.A. Krikheli used a culture of autologous skin fibroblasts to correct age-related changes in the skin of the face and neck area for patients aged 40-60 years ("The use of autogenous fibroblasts in cosmetology", published in the journal "Aesthetic Medicine", t.3 No. 4, p.336-342, 2004). When monitoring patients for 12 months, a persistent positive effect was noted, manifested in the disappearance of small wrinkles and a reduction in large wrinkles, as well as in an overall improvement in the condition of the skin.
Наиболее близким является способ получения препарата для мезотерапии, включающий выделение аутологичных фибробластов человека для интрадермального введения их пациенту, запатентованный американской компанией "ISOLAGEN TECHNOLOGIES Inc." (Патент США №5660850, опубл. 26.08.1997, "Use of autologous dermal fibroblasts for the repair of skin and soft tissue defects).The closest is a method of obtaining a drug for mesotherapy, including the allocation of autologous human fibroblasts for intradermal administration to their patient, patented by the American company "ISOLAGEN TECHNOLOGIES Inc." (US Patent No. 5660850, publ. 08/26/1997, "Use of autologous dermal fibroblasts for the repair of skin and soft tissue defects).
Из указанного патента известен также препарат для мезотерапии, включающий аутологичные фибробласты человека для интрадермального введения их пациенту.A preparation for mesotherapy is also known from this patent, including autologous human fibroblasts for intradermal administration to a patient.
Работы были начаты в 1995 году. К 1999 г. были проведены многоцентровые двойные слепые плацебоконтролируемые клинические испытания, доказавшие эффективность и безопасность метода. Эффективность доказывалась значительным уменьшением рельефности кожи (измерялась методом лазерной профилометрии), утолщением дермального слоя, увеличением в нем числа фибробластов и плотности коллагена, а также субъективной оценкой пациентов. По гистологическим показателям эффект остается заметным спустя 3 года после лечения, по другим - до 7 лет. В известном способе аутологичные фибробласты, полученные из кожи доноров, сразу после их получения интрадермально вводятся пациенту.Work began in 1995. By 1999, multicenter, double-blind, placebo-controlled clinical trials were conducted that proved the effectiveness and safety of the method. Efficiency was proved by a significant decrease in skin relief (measured by laser profilometry), thickening of the dermal layer, an increase in the number of fibroblasts and collagen density in it, as well as a subjective assessment of patients. According to histological indicators, the effect remains noticeable 3 years after treatment, in others - up to 7 years. In the known method, autologous fibroblasts obtained from the skin of donors are immediately intradermally administered to the patient immediately after their preparation.
Однако недостатком введения аутологичных фибробластов является невысокий пролиферативный потенциал, особенно у культуры, выделенной из кожи пожилых доноров, с этой точки зрения, для достижения оптимального омолаживающего эффекта необходимо использование "молодых" клеток, которые имеют больший пролиферативный потенциал по сравнению с культурами, полученными от взрослых доноров. Кроме того, при введении аутологичных фибробластов от доноров возможна экспрессия антигенов гистосовместимости.However, the disadvantage of introducing autologous fibroblasts is the low proliferative potential, especially in a culture isolated from the skin of elderly donors, from this point of view, in order to achieve an optimal anti-aging effect, it is necessary to use "young" cells that have a greater proliferative potential compared to cultures obtained from adults donors. In addition, with the introduction of autologous fibroblasts from donors, expression of histocompatibility antigens is possible.
Наилучшие результаты клеточной терапии достигаются при использовании культур эмбриональных фибробластов, однако применение эмбриональных клеток в России запрещено законом о "клонировании" и не используется по этическим мотивам.The best results of cell therapy are achieved using cultures of embryonic fibroblasts, but the use of embryonic cells in Russia is prohibited by the law on "cloning" and is not used for ethical reasons.
Решаемая изобретением задача - улучшение качества получаемого препарата и усиление омолаживающего эффекта.The problem solved by the invention is to improve the quality of the resulting preparation and enhance the anti-aging effect.
Технический результат, который может быть получен при осуществлении заявленного способа, - улучшение качественных показателей получаемых препаратов, таких как стойкость клинического эффекта при мезотерапии, ускорение проявления эффекта эластичности кожи.The technical result that can be obtained by implementing the claimed method is to improve the quality indicators of the preparations obtained, such as the persistence of the clinical effect with mesotherapy, accelerating the manifestation of the effect of skin elasticity.
Технический результат, который может быть получен при изготовлении препарата, - повышение его пролиферативного потенциала и уменьшение экспрессии антигенов гистосовместимости, увеличение объемного капиллярного кровотока кожи, ускорение проявления эффекта эластичности кожи и сокращение курса мезотерапии при применении заявленных препаратов.The technical result that can be obtained in the manufacture of the drug is to increase its proliferative potential and decrease the expression of histocompatibility antigens, increase the volumetric capillary blood flow of the skin, accelerate the manifestation of the effect of skin elasticity and reduce the course of mesotherapy when using the claimed drugs.
Дополнительный технический результат, который может быть достигнут, - увеличение срока хранения препарата до проведения сеанса мезотерапии.An additional technical result that can be achieved is an increase in the shelf life of the drug before a mesotherapy session.
Для решения поставленной задачи с достижением указанного технического результата по первому варианту в известном способе получения препарата для мезотерапии, включающем выделение культуры фибробластов человека для интрадермального введения их пациенту, согласно изобретению выделение аллогенных фибробластов производят из пуповины новорожденного после нормальных родов.To solve the problem with achieving the specified technical result according to the first embodiment, in the known method for producing a preparation for mesotherapy, comprising isolating a human fibroblast culture for intradermal administration to a patient, according to the invention, allogeneic fibroblasts are isolated from the umbilical cord of a newborn after normal delivery.
Возможны дополнительные варианты осуществления способа, в которых целесообразно, чтобы:Additional embodiments of the method are possible, in which it is advisable that:
- выделение аллогенных фибробластов производили из пуповины новорожденного после нормальных родов на 39-40 недели гестации;- the allocation of allogeneic fibroblasts was made from the umbilical cord of a newborn after normal birth at 39-40 weeks of gestation;
- при выделении аллогенных фибробластов из пуповины новорожденного вены канюлировали с обеих сторон и промывали сначала раствором Хенкса, а затем 0,1% раствором коллагеназы 1 типа, приготовленным на среде DMEM, свободной от сыворотки, и инкубируют при 37°С в течение 30 минут, затем осуществляют механическое воздействие на ткани пуповины, собирают отделившиеся клетки, промывая их раствором Хенкса, полученную после механического воздействия и промывания суспензию клеток центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 минут, получая осадок клеток, который ресуспензируют в ростовой среде DMEM, содержащей 10% фетальной сыворотки крупного рогатого скота, 100 ед./мл пенициллина, 100 ед./мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, 10 нг/мл базального фактора роста фибробластов bFGF, ресуспензированный осадок клеток в ростовой среде DMEM переносят в культуральные чашки и культивируют до формирования монослоя, сменяя ростовую среду DMEM 2 раза в неделю, и при достижении монослоя клетки пересевают в соотношении 1:3;- when allocating allogeneic fibroblasts from the umbilical cord of a newborn, the veins were cannulated on both sides and washed first with Hanks solution and then with 0.1%
- перед проведением сеанса мезотерапии монослой переводили в суспензию путем обработки смесью раствора Версена и 0,25% раствора трипсина в соотношении 1:1 в течение 20 мин при 37°С, которую затем трижды промывают физиологическим раствором с рН 7,2, затем суспензию осаждают центрифугированием в течение 5 мин при 1000 об/мин, осадок клеток ресуспензируют в стерильном биологическом растворе NCTF-135, получая аллогенные фибробласты человека для интрадермального введения пациенту в количестве 1-5 млн клеток в 5 мл.- before a mesotherapy session, the monolayer was suspended in a suspension by treatment with a mixture of Versen's solution and 0.25% trypsin solution in a 1: 1 ratio for 20 min at 37 ° C, which was then washed three times with physiological saline with a pH of 7.2, then the suspension was precipitated by centrifugation for 5 min at 1000 rpm, the cell pellet was resuspended in sterile biological solution NCTF-135, obtaining allogeneic human fibroblasts for intradermal administration to the patient in the amount of 1-5 million cells in 5 ml.
Для решения поставленной задачи с достижением указанного технического результата по второму варианту в известном способе получения препарата для мезотерапии, включающем выделение культуры фибробластов человека для интрадермального введения их пациенту, согласно изобретению выделение аллогенных фибробластов производят из пуповины новорожденного после нормальных родов, производят выделение аутологичных фибробластов собственно пациента, которые смешивают с аллогенными фибробластами из пуповины новорожденного.To solve the problem with achieving the specified technical result according to the second embodiment, in the known method for producing a preparation for mesotherapy, comprising isolating a human fibroblast culture for intradermal administration to a patient, according to the invention, allogeneic fibroblasts are isolated from the umbilical cord of a newborn after normal delivery, and autologous fibroblasts of the patient are isolated that are mixed with allogeneic fibroblasts from the umbilical cord of a newborn.
Возможны дополнительные варианты осуществления способа по второму варианту, в котором целесообразно, чтобы:Additional embodiments of the method according to the second embodiment are possible, in which it is advisable that:
- при выделении аллогенных фибробластов из пуповины новорожденного вены канюлировали с обеих сторон и промывали сначала раствором Хенкса, а затем 0,1% раствором коллагеназы 1 типа, приготовленным на среде DMEM, свободной от сыворотки, и инкубируют при 37°С в течение 30 минут, затем осуществляют механическое воздействие на ткани пуповины, собирают отделившиеся клетки, промывая их раствором Хенкса, полученную после механического воздействия и промывания суспензию клеток центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 минут, получая осадок клеток, который ресуспензируют в ростовой среде DMEM, содержащей 10% фетальной сыворотки крупного рогатого скота, 100 ед./мл пенициллина, 100 ед./мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, 10 нг/мл базального фактора роста фибробластов bFGF, ресуспензированный осадок клеток в ростовой среде DMEM переносят в культуральные чашки и культивируют до формирования монослоя, сменяя ростовую среду DMEM 2 раза в неделю, и при достижении монослоя клетки пересевают в соотношении 1:3;- when allocating allogeneic fibroblasts from the umbilical cord of a newborn, the veins were cannulated on both sides and washed first with Hanks solution and then with 0.1%
- перед проведением сеанса мезотерапии монослой переводили в суспензию путем обработки смесью раствора Версена и 0,25% раствора трипсина в соотношении 1:1 в течение 20 мин при 37°С, которую затем трижды промывают физиологическим раствором с рН 7,2, затем суспензию осаждают центрифугированием в течение 5 мин при 1000 об/мин, осадок клеток ресуспензируют в стерильном биологическом растворе NCTF-135, получая аллогенные фибробласты пуповины человека в количестве 1-5 млн клеток в 2,5 мл - первый полуфабрикат;- before a mesotherapy session, the monolayer was suspended in a suspension by treatment with a mixture of Versen's solution and 0.25% trypsin solution in a 1: 1 ratio for 20 min at 37 ° C, which was then washed three times with physiological saline with a pH of 7.2, then the suspension was precipitated by centrifugation for 5 min at 1000 rpm, the cell pellet was resuspended in sterile biological solution NCTF-135, obtaining allogeneic human umbilical cord fibroblasts in the amount of 1-5 million cells in 2.5 ml - the first semi-finished product;
- при выделении аутологичных фибробластов собственно пациента использовали его фрагмент кожи, который промывают раствором Версена с добавлением антибиотиков 100 ед./мл пенициллина, 100 ед./мл стрептомицина, 100 ед./мл амфотерицина в течение 1 часа при комнатной температуре при встряхивании на шейкере, затем фрагмент кожи измельчают, получая гомогенат, к которому добавляют 0,1% раствор коллагеназы 1 типа, приготовленной на среде DMEM, свободной от сыворотки, и инкубируют в нем при 37°С в течение 2 часов, получая суспензию, которую центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 минут, получая осадок клеток, который ресуспензируют в ростовой среде DMEM, содержащей 10% фетальной сыворотки крупного рогатого скота, 100 ед./мл пенициллина, 100 ед./мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, 10 нг/мл базального фактора роста фибробластов bFGF, ресуспензированный осадок клеток в ростовой среде DMEM переносят в культуральные чашки и культивируют до формирования монослоя, сменяя среду 2 раза в неделю, при достижении монослоя клетки пересевают в соотношении 1:3;- when autologous fibroblasts were isolated from the patient himself, his skin fragment was used, which was washed with Versen's solution with the addition of antibiotics 100 units / ml penicillin, 100 units / ml streptomycin, 100 units / ml amphotericin for 1 hour at room temperature with shaking on a shaker , then the skin fragment is crushed to obtain a homogenate, to which a 0.1%
- перед проведением сеанса мезотерапии монослой клеток собственно пациента переводили в суспензию путем обработки смесью раствора Версена и 0,25% раствора трипсина в соотношении 1:1 в течение 20 мин при 37°С, которую затем трижды промывают физиологическим раствором с рН 7,2, затем суспензию осаждают центрифугированием в течение 5 мин при 1000 об/мин, осадок клеток ресуспензируют в стерильном биологическом растворе NCTF-135, получая аутологичные фибробласты человека в количестве 1-5 млн клеток в 2,5 мл - второй полуфабрикат;- before the mesotherapy session, the monolayer of cells of the patient was transferred into suspension by treatment with a mixture of Versen's solution and 0.25% trypsin solution in a 1: 1 ratio for 20 min at 37 ° C, which is then washed three times with physiological saline with a pH of 7.2, then the suspension is precipitated by centrifugation for 5 min at 1000 rpm, the cell pellet is resuspended in sterile biological solution NCTF-135, obtaining autologous human fibroblasts in the amount of 1-5 million cells in 2.5 ml - the second semi-finished product;
- аллогенные фибробласты из пуповины новорожденного - первый полуфабрикат и аутологичные фибробласты собственно пациента - второй полуфабрикат смешивали между собой в соотношении 1:1, получая готовый препарат в количестве 1-5 млн клеток в 5 мл.- allogeneic fibroblasts from the umbilical cord of the newborn - the first semi-finished product and autologous fibroblasts of the patient himself - the second semi-finished product was mixed with each other in the ratio 1: 1, getting the finished drug in the amount of 1-5 million cells in 5 ml.
Соответственно полученный по первому варианту реализации способа известный препарат для мезотерапии, включающий культуру фибробластов человека для интрадермального введения их пациенту, согласно изобретению в нем в качестве культуры фибробластов человека использованы аллогенные фибробласты, полученные из пуповины новорожденного.Accordingly, the known preparation for mesotherapy obtained in the first embodiment of the method, comprising a culture of human fibroblasts for intradermal administration to a patient, according to the invention, allogeneic fibroblasts obtained from the umbilical cord of a newborn are used in it as a culture of human fibroblasts.
Соответственно полученный по второму варианту реализации способа препарат для мезотерапии, включающий культуру фибробластов человека для интрадермального введения их пациенту, согласно изобретению в нем в качестве культуры фибробластов человека использована смесь аллогенных фибробластов, полученных из пуповины новорожденного, и аутологичных фибробластов, полученных из кожи собственно пациента.Accordingly, the preparation for mesotherapy obtained according to the second embodiment of the method, comprising a culture of human fibroblasts for intradermal administration to a patient, according to the invention, a mixture of allogeneic fibroblasts obtained from the umbilical cord of a newborn and autologous fibroblasts obtained from the skin of the patient itself is used as a culture of human fibroblasts.
Указанные преимущества, а также особенности настоящего изобретения поясняются лучшим вариантом его выполнения со ссылками на прилагаемые чертежи.These advantages, as well as features of the present invention are illustrated by the best option for its implementation with reference to the accompanying drawings.
Фиг.1 изображает усредненный для различных пациентов график изменения эластичности кожи до и через 14 дней после сеанса мезотерапии аллогенными фибробластами из пуповины.Figure 1 depicts a graph of changes in skin elasticity averaged for various patients before and 14 days after a mesotherapy session with allogeneic umbilical cord fibroblasts.
Фиг.2 - то же, что фиг.1, после сеанса мезотерапии смесью аллогенных фибробластов из пуповины и аутологичных фибробластов собственно пациента.Figure 2 - the same as figure 1, after a mesotherapy session with a mixture of allogeneic fibroblasts from the umbilical cord and autologous fibroblasts of the patient.
Фиг.3 - фотография лица пациентки до (слева) и после (справа) проведения мезотерапии аллогенными фибробластами из пуповины.Figure 3 is a photograph of the patient's face before (left) and after (right) mesotherapy with allogeneic umbilical cord fibroblasts.
Фиг.4 - фотография лица пациентки до (слева) и после (справа) проведения мезотерапии смесью аллогенных фибробластов, полученных из пуповины новорожденного, и аутологичных фибробластов, полученных из кожи собственно пациента.Figure 4 is a photograph of the patient’s face before (left) and after (right) mesotherapy with a mixture of allogeneic fibroblasts obtained from the umbilical cord of a newborn and autologous fibroblasts obtained from the skin of the patient himself.
Способ получения препарата для мезотерапии реализуется следующим образом.A method of obtaining a drug for mesotherapy is implemented as follows.
Сначала производится тестирование донора (собственно пациента) перед забором биологического материала - кожи.First, a donor (the patient himself) is tested before taking biological material - the skin.
Образцы крови доноров исследуются на наличие маркеров следующих инфекционных агентов:Blood samples of donors are examined for the presence of markers of the following infectious agents:
вирусов гепатита В и С,hepatitis B and C viruses,
вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) 1 и 2 типов,human immunodeficiency virus (HIV)
вируса герпеса простого 1, 2 и 6 типов,herpes
вируса Эпштейна-Барр,Epstein-Barr virus,
цитомегаловируса и Toxoplasma Gondi,cytomegalovirus and Toxoplasma gondi,
сифилиса.syphilis.
При заборе пуповины для получения аллогенных фибробластов дополнительно к вышеперечисленным анализам образцов крови, донорам (матерям) проводится исследование соскоба цервикального канала на наличие маркеров уреоплазмы, хламидии и микоплазмы.When sampling the umbilical cord to obtain allogeneic fibroblasts, in addition to the above analyzes of blood samples, donors (mothers) study the scraping of the cervical canal for the presence of markers of ureoplasma, chlamydia and mycoplasma.
Выявление таких инфекций, как ВИЧ, сифилис, а также острых форм гепатитов В и С, являлось абсолютным противопоказанием для культивирования биологического материала и введения полученных клеток - аутологичных фибробластов реципиенту.The detection of infections such as HIV, syphilis, as well as acute forms of hepatitis B and C, was an absolute contraindication for the cultivation of biological material and the introduction of the obtained cells - autologous fibroblasts to the recipient.
В случае выявления других инфекционных агентов у донора либо при наличии антител к ним решение о культивировании биологического материала и возможности введения клеточного препарата реципиенту принимает врач. В нашем исследовании выявление любых инфекционных агентов или антител к ним являлось абсолютным противопоказанием для культивирования биологического материала.If other infectious agents are detected in the donor or in the presence of antibodies to them, the doctor makes a decision on the cultivation of biological material and the possibility of introducing a cell preparation to the recipient. In our study, the identification of any infectious agents or antibodies to them was an absolute contraindication for the cultivation of biological material.
Получение и культивирование аллогенных фибробластов пуповины осуществляют следующим образом.Obtaining and culturing allogeneic umbilical cord fibroblasts is as follows.
Образцы пуповины человека собирают после нормальных родов на 38-40 недели гестации для получения аллогенных фибробластов после нормальных родов. После перевязки и перерезания пуповину помещают в стерильный контейнер, содержащий раствор Хенкса с добавлением пенициллина 100 мг/мл, стрептомицина 100 мг/мл и амфотерицина 100 мг/мл и на льду перевозят в лабораторию. Пуповину освобождают от остатков крови и тщательно промывают в растворе Версена с добавлением антибиотиков 100 ед./мл пенициллина, 100 ед./мл стрептомицина, 100 ед./мл амфотерицина) в течение 1 часа при комнатной температуре на шейкере. Вены канюлируют с обеих сторон и промывают сначала раствором Хенкса, а затем 0,1% раствором коллагеназы 1 типа, приготовленным на среде DMEM (Dulbecco's modified Eagle medium), свободной от сыворотки, и инкубируют при 37°С в течение 30 минут, затем осуществляют механическое воздействие на ткани пуповины, собирают отделившиеся клетки, промывая их раствором Хенкса. Полученную после механического воздействия и промывания суспензию клеток центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 минут, получая осадок, который ресуспензируют в ростовой среде: DMEM (Dulbecco's modified Eagle medium), содержащей 10% фетальной сыворотки крупного рогатого скота, 100 ед./мл пенициллина, 100 ед./мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, 10 нг/мл базального фактора роста фибробластов bFGF (FGF - Fibroblast Growth Factore) (bFGF - Basic Fibroblast Growth Factore/). Ресуспензированный осадок клеток в ростовой среде переносят в культуральные чашки и культивируют до формирования монослоя, сменяя ростовую среду 2 раза в неделю. При достижении монослоя клетки пересевают в соотношении 1:3.Samples of the human umbilical cord are collected after normal delivery at 38–40 weeks of gestation to obtain allogeneic fibroblasts after normal delivery. After ligation and cutting, the umbilical cord is placed in a sterile container containing Hanks solution with penicillin 100 mg / ml, streptomycin 100 mg / ml and amphotericin 100 mg / ml and transferred to ice in a laboratory. The umbilical cord is freed from blood residues and washed thoroughly in Versen's solution with the addition of antibiotics 100 units / ml penicillin, 100 units / ml streptomycin, 100 units / ml amphotericin) for 1 hour at room temperature on a shaker. Veins cannulated on both sides and washed first with Hanks solution and then with 0.1
Перед проведением сеанса мезотерапии монослой клеток обрабатывают смесью раствора Версена и 0,25% раствора трипсина (1:1) в течение 20 мин при 37°С, получая клеточную суспензию, которую затем трижды промывают физиологическим раствором с рН 7,2. Затем клетки осаждают центрифугированием 5 мин при 1000 об/мин. Осадок клеток ресуспензируют в стерильном биологическом растворе NCTF-135 в количестве 1-5 млн клеток в 5 мл, получая первый вариант готового препарата для мезотерапии.Before a mesotherapy session, the cell monolayer is treated with a mixture of Versen's solution and 0.25% trypsin solution (1: 1) for 20 min at 37 ° C, obtaining a cell suspension, which is then washed three times with physiological saline with a pH of 7.2. Cells are then pelleted by centrifugation for 5 minutes at 1000 rpm. The cell pellet is resuspended in sterile biological solution NCTF-135 in the amount of 1-5 million cells in 5 ml, obtaining the first version of the finished product for mesotherapy.
NCTF-135 'коктейль мгновенной красоты' 2865 Б (Препарат Laboratories FILORGA). Состав: витамины (16), нуклиевые кислоты (5), минералы (4), аминокислоты (23), коэнзимы (коферменты), антиоксиданты, а именно витамины: С, А, К, В2, В5, В7, В9, В12, Е, В1, В3, РР, Вв, В8, Н, В10, аминокислоты: аминомасляная, аспарагиновая, глютаминовая, аланин, аргинин, аспарагин, сирин, цистин, глютамин, гликоль, гидроксипролин, гистидин, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, орнитин, фенилаланин, пролин, таурин, трионин, триптофан, тирозин, валин, коферменты: коэнзим А, НАД, НАДФ, кокарбоксилаза, ФАД, АТФ, антиоксиданты: аскорбиновая кислота, глютатион, нуклеиновые кислоты - дезоксигуанозин, дезоксиаденозин, дезоксицистидин, тимидин, метилцитозин, минералы: кальций, магний, калий, натрий.NCTF-135 'instant beauty cocktail' 2865 B (Drug Laboratories FILORGA). Ingredients: vitamins (16), nucleic acids (5), minerals (4), amino acids (23), coenzymes (coenzymes), antioxidants, namely vitamins: C, A, K, B2, B5, B7, B9, B12, E, B1, B3, PP, Bb, B8, H, B10, amino acids: aminobutyric, asparaginic, glutamic, alanine, arginine, asparagine, syrin, cystine, glutamine, glycol, hydroxyproline, histidine, isoleucine, leucine, lysine, methionine, ornithine, phenylalanine, proline, taurine, trionin, tryptophan, tyrosine, valine, coenzymes: coenzyme A, NAD, NADP, cocarboxylase, FAD, ATP, antioxidants: ascorbic acid, glutathione, nucleic acid you are deoxyguanosine, deoxyadenosine, deoxycystidine, thymidine, methylcytosine, minerals: calcium, magnesium, potassium, sodium.
Готовый препарат хранится до 72 часов после его приготовления при температуре от +4°С до +10°С.The finished product is stored up to 72 hours after its preparation at a temperature of + 4 ° C to + 10 ° C.
Получение аутологичных фибробластов из биологического материала собственно пациента осуществляют следующими образом.Obtaining autologous fibroblasts from biological material of the patient himself is as follows.
С помощью хирургического лезвия одноразового использования берут кусочек кожи 3×3 мм с внутренней поверхности предплечья или с ягодицы. Другой вариант забора первичного материла для выделения аутологичных фибробластов - с помощью одноразовой биопсийной иглы малого диаметра. Фрагмент кожи промывают раствором Версена с добавлением антибиотиков (100 ед./мл пенициллина, 100 ед./мл стрептомицина 100 ед./мл, 100 ед./мл амфотерицина) 1 час при комнатной температуре при встряхивании на шейкере. Затем фрагмент кожи измельчают ножницами. К гомогенату добавляют 0,1% раствор коллагеназы 1 типа, приготовленной на среде DMEM, и инкубируют в нем в течение 2 часов. Затем центрифугируют при 1000 об/мин 5 минут. Осадок клеток ресуспензируют в ростовой среде: DMEM, содержащей 10% фетальной сыворотки крупного рогатого скота, 100 ед./мл пенициллина, 100 ед./мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, 10 нг/мл базального фактора роста фибробластов bFGF. Суспензию клеток в ростовой среде переносят в культуральные чашки. Проводят культивирование до формирования монослоя, сменяя ростовую среду 2 раза в неделю. При достижении монослоя клетки пересевают в соотношении 1:3.Using a disposable surgical blade, a piece of
Перед проведением сеанса мезотерапии монослой клеток обрабатывают смесью раствора Версена и 0,25% раствора трипсина (1:1) в течение 20 мин при 37°С, получая клеточную суспензию, которую затем трижды промывают физиологическим раствором с рН 7,2. Затем клетки осаждают центрифугированием 5 мин при 1000 об/мин. Осадок ресуспензируют в стерильном биологическом растворе NCTF-135 в количестве 1-5 млн клеток в 2,5 мл, получая второй полуфабрикат.Before a mesotherapy session, the cell monolayer is treated with a mixture of Versen's solution and 0.25% trypsin solution (1: 1) for 20 min at 37 ° C, obtaining a cell suspension, which is then washed three times with physiological saline with a pH of 7.2. Cells are then pelleted by centrifugation for 5 minutes at 1000 rpm. The pellet is resuspended in sterile biological solution NCTF-135 in an amount of 1-5 million cells in 2.5 ml, obtaining a second semi-finished product.
Для получения препарата по второму варианту первый полуфабрикат, полученный из пуповины, и второй полуфабрикат, полученный из кожи собственно пациента, смешивают между собой в соотношении 1:1, получая второй вариант готового препарата для мезотерапии.To obtain the preparation according to the second variant, the first semi-finished product obtained from the umbilical cord and the second semi-finished product obtained from the skin of the patient proper are mixed with each other in a ratio of 1: 1, obtaining the second version of the finished preparation for mesotherapy.
Таким образом, при смешивании культур клеток, полученных из пуповины и из кожи собственно пациента, в соотношении, например, 1:1 получают препарат для мезотерапии (коктейль), включающий аутологичные фибробласты человека для интрадермального введения их пациенту, в котором в качестве аутологичных фибробластов человека использована смесь аутологичных фибробластов, полученных из пуповины новорожденного и из кожи собственно пациента.Thus, when mixing cultures of cells obtained from the umbilical cord and from the skin of the patient proper, in a ratio of, for example, 1: 1, a mesotherapy preparation (cocktail) is obtained, including autologous human fibroblasts for intradermal administration to their patient, in which, as autologous human fibroblasts a mixture of autologous fibroblasts obtained from the umbilical cord of the newborn and from the skin of the patient itself was used.
Как показали исследования, полученные препараты можно хранить в отличие от известных аналогов в течение 72 часов при температуре от +4°С до +10°С.As studies have shown, the resulting preparations can be stored, in contrast to known analogues, for 72 hours at a temperature of + 4 ° C to + 10 ° C.
За счет использования в этих препаратах аллогенных фибробластов из пуповины удается повысить их пролиферативный потенциал и уменьшить экспрессию антигенов гистосовместимости, увеличить объемный капиллярный кровоток кожи, ускорить проявления эффекта эластичности кожи. За счет применения во втором препарате аутологичных фибробластов, полученных из кожи собственно пациента, удается дополнительно уменьшить экспрессию антигенов гистосовместимости. Поскольку использование культур эмбриональных фибробластов запрещено, то наиболее оптимальными для получения омолаживающего эффекта являются аллогенные фибробласты, полученные из пуповины. Они относятся к "молодым" клеткам, не онкогенны, имеют ограниченную продолжительность жизни и низкую экспрессию антигенов гистосовместимости.Due to the use of allogeneic umbilical fibroblasts in these preparations, it is possible to increase their proliferative potential and reduce the expression of histocompatibility antigens, increase the volumetric capillary blood flow of the skin, and accelerate the manifestations of the effect of skin elasticity. Due to the use of autologous fibroblasts obtained from the skin of the patient in the second preparation, it is possible to further reduce the expression of histocompatibility antigens. Since the use of cultures of embryonic fibroblasts is prohibited, the most optimal for obtaining a rejuvenating effect are allogeneic fibroblasts obtained from the umbilical cord. They belong to the "young" cells, are not oncogenous, have a limited life span and low expression of histocompatibility antigens.
Полученные препараты проходили следующие испытания.The resulting preparations passed the following tests.
Вирусологические исследования на наличие маркеров вирусов гепатитов В и С, вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) 1 и 2 типов, вируса герпеса простого 1,2 и 6 типов, вируса Эпштена-Барр, цитомегаловируса, Toxoplasma Gondi.Virological studies for the presence of markers of hepatitis B and C viruses, human immunodeficiency virus (HIV)
Бактериологическое исследование на наличие аэробной и анаэробной микрофлоры, а также микроскопических грибов.Bacteriological examination for the presence of aerobic and anaerobic microflora, as well as microscopic fungi.
На каждый препарат выдается паспорт соответствия с указанием результатов обследования культуры, объема препарата, концентрации клеток, а также срока годности препарата. На доклиническом этапе клеточные препараты проходили исследования на острую токсичность и пирогенность на животных.A certificate of conformity is issued for each drug, indicating the results of the culture examination, the volume of the drug, cell concentration, and the shelf life of the drug. At the preclinical stage, cell preparations were tested for acute toxicity and pyrogenicity in animals.
Все операции по подготовке клеточных препаратов для мезотералии проводят в стерильных условиях культурального бокса.All operations for the preparation of cell preparations for mesoteralia are carried out in sterile culture box conditions.
Готовая суспензия вводится с помощью множественных внутрикожных инъекций (методика мезотерапии). Сеанс мезотерапии проводится в процедурном кабинете в положении пациентки лежа или сидя без предварительной анестезии. Введение препарата производится с помощью шприцов объемом от 5,0 до 20,0 мл со специальными иглами для внутридермальных инъекций (27-30G). Препарат вводится в кожу на глубину 2-4 мм маленькими дозами. Объем вводимого раствора в одну инъекцию должен составлять 0,02-0,05 мл. При введении препарата целесообразно использовать технику микропапул или трассирующую технику, так как только при использовании этих методик возможно создать необходимое депо препарата в тканях.The finished suspension is administered using multiple intradermal injections (mesotherapy technique). A mesotherapy session is carried out in the treatment room in the position of the patient lying or sitting without prior anesthesia. The drug is administered using syringes from 5.0 to 20.0 ml in volume with special needles for intradermal injection (27-30G). The drug is injected into the skin to a depth of 2-4 mm in small doses. The volume of the injected solution in one injection should be 0.02-0.05 ml. When administering the drug, it is advisable to use the micropapule technique or tracer technique, since only when using these techniques it is possible to create the necessary depot of the drug in the tissues.
При использовании техники микропапул готовая суспензия вводится интрадермально отдельными уколами с образованием папул. Инъекции проводятся по всей поверхности лица, шеи и декольте на расстоянии 10-15 мм друг от друга. Шприц и игла располагаются по касательной к коже, срез иглы направлен вверх. Давление на поршень осуществляется большим пальцем рабочей руки. Препарат вводится в папиллярный слой дермы на глубину 2-4 мм.Using the micropapule technique, the finished suspension is injected intradermally with separate injections to form papules. Injections are carried out over the entire surface of the face, neck and decollete at a distance of 10-15 mm from each other. The syringe and needle are tangential to the skin, with the needle cut upward. Pressure on the piston is carried out by the thumb of the working hand. The drug is introduced into the papillary dermis to a depth of 2-4 mm.
При использовании трассирующей техники используется контролируемое интрадермальное линейное введение как под морщины, так и в область проблемных зон. Игла длиной 13 мм вводится по касательной к коже, срезом вверх. Препарат вводится на выходе иглы (ретроградно) на глубину 2 мм.When using tracing technique, a controlled intradermal linear injection is used both under wrinkles and in the area of problem areas. A 13 mm long needle is inserted tangentially to the skin, cut up. The drug is injected at the exit of the needle (retrograde) to a depth of 2 mm.
Количество клеток в готовой суспензии - 1-2-5 млн клеток в 5 мл стерильного биологического раствора NCTF-135.The number of cells in the finished suspension is 1-2-5 million cells in 5 ml of sterile biological solution NCTF-135.
Курс мезотерапии с использованием клеточного материала рассчитан на 3 процедуры с интервалом введения 1 месяц. Эффект от введения препарата начинает проявляться через 1-2 недели и постепенно нарастает, достигая стойкого клинического эффекта через 1 месяц от первой инъекции. У пациенток с выраженными инволюционными изменениями и отсутствием стойкого клинического эффекта от 1-й инъекции в течение 1 месяца рекомендуется увеличивать дозу препарата при второй инъекции до 5,0×106 клеток в 5 мл раствора.The course of mesotherapy using cellular material is designed for 3 procedures with an administration interval of 1 month. The effect of the drug administration begins to appear after 1-2 weeks and gradually increases, achieving a stable clinical effect after 1 month from the first injection. In patients with pronounced involutional changes and the absence of a persistent clinical effect from the 1st injection for 1 month, it is recommended to increase the dose during the second injection to 5.0 × 10 6 cells in 5 ml of solution.
Результаты использования препаратов оценены у 98 пациенток с инволюционными изменениями кожи лица.The results of the use of drugs were evaluated in 98 patients with involutional changes in the skin of the face.
Для объективизации оценки таких параметров, как тургор и эластичность, микроциркуляция, плотность и однородность кожи лица до и после проведения мезотерапии аутологичными фибробластами, использовались современные инструментальные методы исследования:To objectify the assessment of such parameters as turgor and elasticity, microcirculation, density and uniformity of the facial skin before and after mesotherapy with autologous fibroblasts, modern instrumental research methods were used:
- эластометрия, ElastometrR ЕМ 25 фирмы "Courage + Khazaka electronic GmbH" (Германия),- elastometry, Elastometr R EM 25 of the company "Courage + Khazaka electronic GmbH" (Germany),
- лазерная доплеровская флоуметрия, одноканальный лазерный доплеровский флоуметр фирмы "Transonic System Inc" (США).- laser Doppler flowmetry, single-channel laser Doppler flowmeter of the company "Transonic System Inc" (USA).
Изменения эластичности кожи пациенток после проведения мезотерапии с использованием аутологичных фибробластов представлены на фиг.1 и 2, где на фиг.1 показан усредненный для различных пациентов график изменения эластичности кожи до и через 14 дней после сеанса мезотерапии аутологичными (аллогенными) фибробластами из пуповины, а на фиг.2 - после сеанса мезотерапии смесью аутологичных фибробластов из пуповины и собственно пациента. Как видно из фиг.1 и 2, показатели эластичности кожи для обоих препаратов практически одинаковы. Эластичность кожи через 14 дней после введения препаратов увеличивалась на 18-27% в разных точках лица, эффект повышения эластичности сохранялся в течение 3-8-12 месяцев после проведения курса клеточной терапии. Дальнейшие исследования стойкости действия в настоящее время не завершены, поскольку исследования этих новых препаратов проводились в течение одного 2005 года.Changes in the skin elasticity of patients after mesotherapy using autologous fibroblasts are presented in Figs. 1 and 2, where Fig. 1 shows a graph of changes in skin elasticity averaged for different patients before and 14 days after a mesotherapy session with autologous (allogeneic) umbilical fibroblasts, and figure 2 - after a mesotherapy session with a mixture of autologous fibroblasts from the umbilical cord and the patient himself. As can be seen from figures 1 and 2, the indicators of skin elasticity for both drugs are almost the same. The skin elasticity 14 days after the administration of drugs increased by 18-27% at different points in the face, the effect of increasing elasticity persisted for 3-8-12 months after the course of cell therapy. Further studies of persistence are not yet complete, as studies of these new drugs were carried out during 2005 alone.
Показатели объемного капиллярного кровотока кожи оценены с помощью лазерной доплеровской флоуметрии в сроки 14 дней и 3 месяца после выполнения мезолифтинга с использованием препаратов и представлены в таблице.Indicators of volumetric capillary blood flow of the skin were evaluated using laser Doppler flowmetry within 14 days and 3 months after mesolifting using drugs and are presented in the table.
↑Mesolifting after 14 days
↑
↑Mesolifting after 6 months
↑
При контрольном осмотре пациенток через 14 дней после сеанса мезотерапии с использованием клеточного материала было отмечено увеличение объемного капиллярного кровотока кожи лица во всех точках исследования (р<0,1). При контрольном осмотре через 6 месяцев сохранялось увеличение объемного капиллярного кровотока по всем точкам (р=0,1). Р - критерий Стьюдента достоверности полученных результатов. В данном случае смысл р<0,1: с вероятностью более 90% отличия достоверны или вероятность недостоверности отличий составляет менее 10%.During the control examination of patients 14 days after the mesotherapy session using cellular material, an increase in the volumetric capillary blood flow of the facial skin was observed at all points of the study (p <0.1). At the control examination after 6 months, an increase in the volumetric capillary blood flow at all points remained (p = 0.1). P - student criterion of the reliability of the results. In this case, the meaning is p <0.1: with a probability of more than 90%, the differences are significant or the probability of unreliability of the differences is less than 10%.
Степень и быстрота наступления клинического эффекта зависели от исходного состояния кожи пациентки. Слабый и кратковременный клинический эффект наблюдался у пациенток, тонус кожи которых был существенно снижен и наблюдалась выраженная деформация овала лица. В этом случае следует увеличивать дозу готовой суспензии до 5,0×106 в 5 мл физиологического раствора при повторной инъекции через 1 месяц. Результаты, полученные методами субъективной и объективной оценки, совпали.The degree and speed of the onset of the clinical effect depended on the initial state of the patient's skin. A weak and short-term clinical effect was observed in patients whose skin tone was significantly reduced and marked deformation of the face oval was observed. In this case, the dose of the finished suspension should be increased to 5.0 × 10 6 in 5 ml of physiological saline upon repeated injection after 1 month. The results obtained by subjective and objective assessment methods coincided.
Пример 1. Пациентка А. 64 лет (фиг.3) с выраженными возрастными изменениями кожи лица. Проведен курс мезотерапии аллогенными фибробластами пуповины в дозе 3,0 млн клеток в 5,0 мл физиологического раствора готовой суспензии.Example 1. Patient A. 64 years old (figure 3) with pronounced age-related changes in the skin of the face. A course of mesotherapy with allogeneic umbilical cord fibroblasts at a dose of 3.0 million cells in 5.0 ml of physiological saline solution was prepared.
После проведения курса мезотерапии отмечено повышение показателей эластичности кожи на 15-21% и улучшение микроциркуляции, исчезли мелкие морщинки в области угла глаза, сгладились носогубные складки, нарастание эффекта было отмечено через 6 и 12 месяцев исследования.After the course of mesotherapy, an increase in skin elasticity by 15-21% and an improvement in microcirculation were noted, small wrinkles in the area of the corner of the eye disappeared, nasolabial folds were smoothed out, an increase in the effect was noted after 6 and 12 months of the study.
Пример 2. Пациентка В. 36 лет (фиг.4) с возрастными изменениями кожи 2 степени, витилиго. Проведен курс мезотерапии смесью аллогенных фибробластов из пуповины новорожденного и аутологичных фибробластов и собственно пациентки в дозе 1,0 млн клеток в 5,0 мл физиологического раствора, через 1 и 3 месяца отмечено повышение эластичности кожи на 28-34%, улучшение микроциркуляции, исчезли пигментации, улучшился цвет лица, исчезли мелкие морщинки в параорбитальной области и области лба, мешки под глазами.Example 2. Patient B. 36 years old (figure 4) with age-related skin changes of 2 degrees, vitiligo. A course of mesotherapy was carried out with a mixture of allogeneic fibroblasts from the umbilical cord of the newborn and autologous fibroblasts and the patient herself at a dose of 1.0 million cells in 5.0 ml of physiological saline, after 1 and 3 months an increase in skin elasticity by 28-34%, improvement in microcirculation, pigmentation disappeared , complexion improved, small wrinkles in the paraorbital region and forehead, bags under the eyes disappeared.
Таким образом, предложенные способы получения препаратов и полученные этими способами препараты для мезотерапии позволяют осуществить коррекцию возрастных изменений кожи лица с использованием только аллогенных фибробластов или с использованием аутологичных или аллогенных фибробластов, санкционируют запускание процессов саморегуляции кожи. По данным объективных инструментальных исследований улучшается структура кожи, восстанавливается ее эластичность, повышается микроциркуляция, что субъективно приводит к улучшению цвета и укреплению овала лица.Thus, the proposed methods for the preparation of drugs and the preparations for mesotherapy obtained by these methods allow the correction of age-related changes in the skin of the face using only allogeneic fibroblasts or using autologous or allogeneic fibroblasts, authorize the start of skin self-regulation processes. According to objective instrumental studies, the structure of the skin improves, its elasticity is restored, microcirculation increases, which subjectively leads to improved color and strengthened facial contours.
Наиболее успешны заявленные способы получения препаратов для мезотерапии и эти препараты промышленно применимы в оперативной косметологии.The most successful claimed methods for producing drugs for mesotherapy and these drugs are industrially applicable in surgical cosmetology.
Claims (5)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006109355/15A RU2308957C1 (en) | 2006-03-24 | 2006-03-24 | Method for obtaining a preparation for mesotherapy and preparation obtained due to this method (variants) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006109355/15A RU2308957C1 (en) | 2006-03-24 | 2006-03-24 | Method for obtaining a preparation for mesotherapy and preparation obtained due to this method (variants) |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2308957C1 true RU2308957C1 (en) | 2007-10-27 |
Family
ID=38955674
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006109355/15A RU2308957C1 (en) | 2006-03-24 | 2006-03-24 | Method for obtaining a preparation for mesotherapy and preparation obtained due to this method (variants) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2308957C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009120111A1 (en) | 2008-03-27 | 2009-10-01 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Лаборатория Клеточных Технологий" | Method for producing fibroplast cells from the newborn's navel-cord |
| RU2524655C2 (en) * | 2008-03-28 | 2014-07-27 | Лабо Дзюверса Ко., Лтд. | Method for treatment of skin aging and scars |
| RU2578804C1 (en) * | 2015-04-27 | 2016-03-27 | Екатерина Евгеньевна Фаустова | Method for rejuvenation patient's body |
-
2006
- 2006-03-24 RU RU2006109355/15A patent/RU2308957C1/en active
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009120111A1 (en) | 2008-03-27 | 2009-10-01 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Лаборатория Клеточных Технологий" | Method for producing fibroplast cells from the newborn's navel-cord |
| EA017967B1 (en) * | 2008-03-27 | 2013-04-30 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Лаборатория Клеточных Технологий" | Method for producing fibroplast cells from the newborn's navel-cord |
| RU2524655C2 (en) * | 2008-03-28 | 2014-07-27 | Лабо Дзюверса Ко., Лтд. | Method for treatment of skin aging and scars |
| RU2578804C1 (en) * | 2015-04-27 | 2016-03-27 | Екатерина Евгеньевна Фаустова | Method for rejuvenation patient's body |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6286689B2 (en) | Cosmetic or skin regeneration promoter using non-human stem cell culture supernatant as raw material, and protein iontophoresis method | |
| KR20070122316A (en) | Soft tissue filler composition for injection and preparation method thereof | |
| US10478526B2 (en) | Skin substitutes and methods for hair follicle neogenesis | |
| CN112336749B (en) | Stem cell exosome microneedle patch for removing freckles and wrinkles and preparation method thereof | |
| CN111110623A (en) | Self-repairing small needle nutrient solution formula | |
| KR20070122315A (en) | Soft tissue filler composition comprising autologous dermal cell and hyaluronic acid | |
| CN102233144A (en) | Method for implementing subcutaneous tissue regeneration by using tissue engineering technology | |
| CN104644522A (en) | Transdermal beautifying combined preparation and kit as well as preparation method of combined preparation | |
| Cervelli et al. | Treatment of stable vitiligo by ReCell system | |
| RU2308957C1 (en) | Method for obtaining a preparation for mesotherapy and preparation obtained due to this method (variants) | |
| WO2015017772A1 (en) | Stem cell-based preparations and methods for dermal and connective tissue reconstruction and rejuvenation | |
| RU2281776C1 (en) | Biotransplant and method for correction of soft tissue defect, method for preparing biotransplant | |
| CN112716976A (en) | Nano composite hydrogel containing umbilical cord mesenchymal stem cells and preparation method and application thereof | |
| WO2018150440A1 (en) | Stem cell conditioned media for clinical and cosmetic applications | |
| RU2380106C1 (en) | Method for correction of age-related skin changes | |
| CN101548988A (en) | Injection for treating skin defects and preparation method thereof | |
| CN113662966B (en) | Activating vesicle-containing hydrogel for promoting hair regeneration and medicinal application thereof | |
| WO2023143519A1 (en) | Cell repair protein extract, and preparation method therefor and use thereof | |
| Svolacchia et al. | A protocol of a new regenerative treatment of chrono-aging and photo-aging with progenitors cells from adipose Micrograft obtained from MilliGraft® Kit | |
| RU2803093C2 (en) | Agent for correction of age changes in the skin | |
| RU2681854C1 (en) | Method for the treatment of nonscarring alopecia | |
| RU2373941C2 (en) | Method for correction of age-specific and pathological human skin changes | |
| RU2659959C1 (en) | Composition of the preparation for correction of skin defects | |
| Muhammed et al. | Surgical treatment of vitiligo | |
| RAZMI et al. | Surgical treatment of vitiligo |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20170306 |
|
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20220225 |