RU2140241C1

RU2140241C1 - Method of treatment of eye burns

Info

Publication number: RU2140241C1
Application number: RU97113443A
Authority: RU
Inventors: Е.В. Ченцова; Г.Т. Сухих; Г.Г. Петриашвили; И.Р. Арутюнова; Г.К. Гречко
Original assignee: МНИИ глазных болезней им.Гельмгольца
Priority date: 1997-07-30
Filing date: 1997-07-30
Publication date: 1999-10-27

Abstract

FIELD: medicine, ophthalmology; applicable in treatment of man eye burns. SUBSTANCE: method includes transportation of embryonal cells of epithelium of man cornea cultivated in vitro in amount of 200,000 cells in 0.2 ml of physiologic salt solution directly into conjunction along boundary of its necrosis. EFFECT: accelerated reparative regeneration of tissues in zone of injury in serious burns of eye.

Description

Изобретение относится к области медицины - офтальмологии и может быть использовано при лечении ожогов глаз у человека. The invention relates to the field of medicine - ophthalmology and can be used in the treatment of eye burns in humans.

Известны способы лечения тяжелых ожогов глаз, где с целью восстановления перилимбального кровообращения и предупреждения развития симблефарона применяли пересадку различных гомотканей: трупной слизистой оболочки (1), трупной конъюктивы глаз (2). Known methods of treating severe burns of the eyes, where in order to restore perilimbal circulation and prevent the development of symblepharon used the transplantation of various homotissues: cadaveric mucous membrane (1), cadaveric eye conjunctiva (2).

Проведенные в Институте глазных болезней и тканевой терапии им. В.П.Филатова исследования убедили, что использование конъюктивы трупных глаз возможно только для покрытия небольших участков, а трансплантация трупной слизистой нередко заканчивается отторжением пересаженного лоскута и бурной воспалительной реакцией со стороны пораженного глаза (3). Conducted at the Institute of eye diseases and tissue therapy. V.P. Filatova's studies convinced that the use of the cadaveric eye conjunctiva is possible only to cover small areas, and cadaveric mucosa transplantation often ends with rejection of the transplanted flap and a violent inflammatory reaction from the affected eye (3).

В настоящее время в офтальмологии широкое применение имеют брефоткани. Currently, in ophthalmology, brefotkani are widely used.

При брефопластике антогонизм между тканями донора и реципиента проявляется в меньшей степени, чем при пересадке от взрослых доноров (4). Это особенно важно в тех случаях, когда со стороны глаза и организма реципиента имеются условия для проявления тканевой несовместимости (напр., после ожогов глаз). With brephoplasty, the antagonism between the tissues of the donor and the recipient is manifested to a lesser extent than with transplantation from adult donors (4). This is especially important in cases where there are conditions for the manifestation of tissue incompatibility on the part of the recipient's eye and body (for example, after eye burns).

Результаты исследований Ю.Е. Батманова, K.C. Егорова, Л.Н. Колесникова (5) показали положительное влияние амниона на течение патологического процесса при ожоговой болезни переднего отрезка глаза (прототип). Research results Yu.E. Batmanova, K.C. Egorova, L.N. Kolesnikova (5) showed a positive effect of amnion on the pathological process during burn disease of the anterior segment of the eye (prototype).

Эмбриональные ткани имеют более низкую степень дифференцировки, обладают слабо выраженными антигенными свойствами, высокой пластичностью и жизнеспособностью и являются полноценным трансплантационным материалом (6). Embryonic tissues have a lower degree of differentiation, have weak antigenic properties, high plasticity and vitality, and are a complete transplant material (6).

Техническим результатом предлагаемого изобретения является ускорение репаративной регенерации тканей в зоне повреждения при тяжелых ожогах глаз за счет использования суспензии эмбриональных клеток эпителия роговицы человека. The technical result of the invention is to accelerate the reparative regeneration of tissues in the area of damage during severe burns of the eyes due to the use of a suspension of embryonic cells of the epithelium of the human cornea.

Технический результат достигается за счет трансплантации культивированных in vitro эмбриональных клеток эпителия роговицы человека путем введения последних непосредственно в конъюнктиву вдоль границы ее некроза. The technical result is achieved by transplantation of cultured in vitro embryonic epithelial cells of the human cornea by introducing the latter directly into the conjunctiva along the border of its necrosis.

Механизм действия эмбриональных клеток, не обладающих антигенной активностью, заключается в стимуляции регенерации сохранившихся при ожоге и малоповрежденных участков конъюнктивы. The mechanism of action of embryonic cells that do not have antigenic activity is to stimulate the regeneration of surviving burns and slightly damaged sections of the conjunctiva.

Источником культуры эпителиальных клеток роговицы служит ткань роговицы 14-22-недельных эмбрионов человека, которые получены при проведении искусственного прерывания беременности по медицинским показаниям. The source of corneal epithelial cell culture is the corneal tissue of 14-22-week-old human embryos, which were obtained by artificial termination of pregnancy for medical reasons.

Аборты проводятся в государственном учреждении - Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии (НЦАГ и П) РАМН строго в соответствии с основами законодательства об охране здоровья граждан - статья N36, приказом МЗ РФ N302 от 28.12.93 г., рекомендациями ВОЗ, принятыми РФ, а также нормами этического Комитета и специально созданной комиссии по госпитализации. Abortions are carried out in a state institution - the Scientific Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology (NICG and P) of the RAMS strictly in accordance with the principles of legislation on the protection of public health - Article N36, Order of the Ministry of Health of the Russian Federation No. 302 of 12/28/93, WHO recommendations adopted by the Russian Federation, as well as the norms of the ethics committee and a specially created commission for hospitalization.

Для получения клеточных культур используются только те эмбрионы человека, сыворотка крови которых, а также сыворотка крови их матерей, дали отрицательный результат при тестировании на сифилис, гепатит (В и С), вирус иммунодефицита человека, цитомегаловирус, вирус простого герпеса и, кроме того, ряда внутриклеточных бактерий (хламидии, микоплазма, уроплазма). To obtain cell cultures, only those human embryos are used whose blood serum, as well as the blood serum of their mothers, tested negative for syphilis, hepatitis (B and C), human immunodeficiency virus, cytomegalovirus, herpes simplex virus and, in addition, a number of intracellular bacteria (chlamydia, mycoplasma, uroplasm).

Получено разрешение на использование клеточных культур в офтальмологии (лицензия комитета здравоохранения Москвы, серия ЦЛМД, N 2803/2799 закрытого, акционерного общества "Институт биологической медицины", решение Московской городской Комиссии по лицензированию медицинской деятельности от 3.07.95). Permission has been obtained for the use of cell cultures in ophthalmology (license of the Moscow Healthcare Committee, series TsLMD, N 2803/2799 of the closed Institute of Biological Medicine Joint-Stock Company, decision of the Moscow City Commission for Licensing of Medical Activities dated July 3, 1995).

Для широкого использования трансплантации культур фетальных клеток эпителия роговицы человека в офтальмологической практике принципиальное значение имеет наличие достаточных запасов заблаговременно заготовленных клеток, обладающих высоким уровнем сохранности. Решить эту проблему можно с помощью метода низкотемпературного консервирования, который позволяет сохранять биоматериал пригодным для трансплантации в течение многих лет (7). For the widespread use of transplantation of cultures of fetal cells of the human corneal epithelium in ophthalmic practice, the availability of sufficient stocks of cells prepared in advance with a high level of safety is of fundamental importance. This problem can be solved using the method of low-temperature conservation, which allows you to keep the biomaterial suitable for transplantation for many years (7).

На момент трансплантации культуры она представляет собой первичную монокультуру эпителиальных (100%) клеток с характерными признаками. Непосредственно перед трансплантацией суспензию клеток тщательно отмывали от культуральной среды, подсчитывали количество жизнеспособных клеток по исключению трепанового синего (как правило 95%) и суспензировали в минимальном объеме физиологического раствора. At the time of transplantation of the culture, it represents the primary monoculture of epithelial (100%) cells with characteristic signs. Immediately before transplantation, the cell suspension was thoroughly washed from the culture medium, the number of viable cells was counted to exclude trepan blue (usually 95%) and suspended in a minimum volume of physiological saline.

Способ лечения ожогов глаз осуществляется следующим образом; производят однократную инъекцию суспензии эпителиальных клеток под конъюнктиву глаза больного со свежим ожогом вдоль границы некроза конъюнктивы и склеры. Для инъекции использовали суспензию клеток с концентрацией 10⁶ клеток/мл. В таком виде суспензия эмбриональных клеток может храниться при 4-25^oC в течение 1-2 часов перед инъекцией. В экспериментах на кроликах на модели ожога глаза были отработаны дозы вводимых эмбриональных клеток. Доза 200.000 клеток в 0,2 мл физиологического раствора является оптимальной для достижения терапевтического результата.A method of treating eye burns is as follows; produce a single injection of a suspension of epithelial cells under the conjunctiva of the patient’s eye with a fresh burn along the border of the conjunctiva and sclera necrosis. A cell suspension of 10 ⁶ cells / ml was used for injection. In this form, a suspension of embryonic cells can be stored at 4-25 ^o C for 1-2 hours before injection. In rabbit experiments on a burn model of the eye, doses of injected embryonic cells were worked out. A dose of 200,000 cells in 0.2 ml of saline is optimal to achieve a therapeutic result.

Предлагаемый способ лечения осуществлен у 11 больных с щелочными ожогами конъюнктивы, склеры и роговицы III-IV ст. с наличием некроза и угрозой перфорации оболочек. У 9 больных получен выраженный положительный эффект: в зоне некроза был полностью восстановлен кровоток и предотвращена угроза перфорации. В 2 случаях наблюдалась слабая положительная динамика, что потребовало повторного введения суспензии эпителиальных клеток роговицы. The proposed method of treatment was carried out in 11 patients with alkaline burns of the conjunctiva, sclera and cornea III-IV art. with the presence of necrosis and the threat of perforation of the membranes. In 9 patients, a pronounced positive effect was obtained: in the necrosis zone, blood flow was completely restored and the threat of perforation was prevented. In 2 cases, weak positive dynamics was observed, which required the repeated administration of a suspension of corneal epithelial cells.

Клинический пример. Clinical example.

Больной С. 6 1970 г. р. И.Б.N2107 поступил в отдел травматологии и реконструктивной хирургии МНИИ ГБ им. Гельмгольца с диагнозом; щелочной ожог конъюнктивы и склеры III ст., роговицы III ст. через 4 дня после травмы. При биомикроскопии был обнаружен некроз конъюнктивы и склеры 3х2 мм в 2 мм от лимбальной зоны, субтотальная эрозия и помутнение роговицы. Больному произведена инъекция суспензий эмбриональных эпителиальных клеток роговицы в концентрации 200.000 клеток в 0,2 мл физ. раствора вдоль границы некроза конъюнктивы. Через 3 дня после инъекции в зоне некроза появились кровеносные сосуды, конъюнктива и склера приобрели розовую окраску, приостановилось дальнейшее расширение зоны некроза. Через 7 дней после лечения кровоток в зоне некроза конъюнктивы и склеры полностью восстановился, признаки воспаления слизистой купировались, отмечалась полная эпителизация роговицы и значительное уменьшение ее отека. Таким образом введение культуры эпителиальных человеческих клеток в зону повреждения способствовало стимуляции жизнедеятельности сохранившихся при ожоге и малоповрежденных участков конъюнктивы, роговицы и других отделов глаза, а также предупреждению перфорации склеры и роговицы у больного с тяжелым щелочным ожогом. Patient S. 6 born in 1970 I.B.N2107 entered the department of traumatology and reconstructive surgery of the Moscow Research Institute of GB named after Helmholtz with a diagnosis; alkaline burn of the conjunctiva and sclera of the III stage, cornea of the III stage 4 days after the injury. Biomicroscopy revealed necrosis of the conjunctiva and sclera 3x2 mm 2 mm from the limbal zone, subtotal erosion and clouding of the cornea. The patient was injected with suspensions of embryonic corneal epithelial cells at a concentration of 200,000 cells in 0.2 ml of physical. solution along the border of the conjunctival necrosis. 3 days after the injection, blood vessels appeared in the necrosis zone, the conjunctiva and sclera turned pink, and the further expansion of the necrosis zone stopped. 7 days after treatment, blood flow in the conjunctiva and sclera necrosis zone was completely restored, signs of mucosal inflammation stopped, complete corneal epithelization and a significant decrease in its edema were noted. Thus, the introduction of a culture of human epithelial cells into the damage zone contributed to the stimulation of the vital functions of the conjunctiva, cornea, and other parts of the eye that survived during the burn, as well as the prevention of perforation of the sclera and cornea in a patient with a severe alkaline burn.

Резюмируя представленные данные можно сказать, что в результате трансплантации эмбриональных клеток эпителия роговицы человека при лечении тяжелых ожогов глаз получено ускорение репаративной регенерации в зоне некроза конъюнктивы и склеры без образования грубых рубцовых изменений. Summarizing the data presented, it can be said that as a result of transplantation of human corneal epithelial cells in the treatment of severe eye burns, accelerated reparative regeneration in the conjunctiva and sclera necrosis zone without the formation of gross cicatricial changes.

Учитывая возможность постоянно располагать запасом донорского материала, поддерживая монослой клеток эпителия в клеточной культуре, а также эффективность и простую методику трансплантации предложенный способ лечения представляется перспективным в лечении ожогов глаз. Given the ability to constantly have a supply of donor material, maintaining a monolayer of epithelial cells in cell culture, as well as the efficiency and simple transplantation technique, the proposed treatment method seems promising in the treatment of eye burns.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ, ПРИНЯТЫЕ ВО ВНИМАНИЕ. SOURCES OF INFORMATION TAKEN ATTENTION.

1. Зенкина Л. В. "Лечение ожогов глаз методом трансплантации трупной слизистой ",- Вести, офтальмол.,1939,2,28. 1. Zenkina L. V. "Treatment of eye burns by transplantation of cadaveric mucosa", - Vesti, ophthalmol., 1939,2,28.

2. Морозова О.Д. "Роговично-конъюктивальная пластика в хирургическом лечении симблефарона и рецидивирующего птеригиума",- Вести, офтальмол., 1971, 2, 24. 2. Morozova O.D. "Corneal conjunctival plastics in the surgical treatment of simblepharon and recurrent pterygium", - Vesti, ophthalmol., 1971, 2, 24.

3. Пучковская Н. А., Шульпина Н.С.,Непомящая В.М." Патогенез и лечение ожогов глаз и их последствий", М., Медицина, 1973, 102- 103. 3. Puchkovskaya N. A., Shulpina N. S., Nepomayuschaya V. M. "Pathogenesis and treatment of eye burns and their consequences", M., Medicine, 1973, 102-103.

4. Беляев В. С. "Использование роговицы плодов и новорожденных для кератопластики в эксперименте и клинике". Автореферат Докт. дис.-М., 1965. 4. Belyaev V. S. "The use of the cornea of fetuses and newborns for keratoplasty in the experiment and clinic." Abstract Doct. dis.-M., 1965.

5. Батманов Ю. E.,Егорова K.C., Колесникова Л.Н. "Применение свежего амниона в лечении заболеваний роговицы",-Вести, офтальмол., 1990,5,17-18. 5. Batmanov Yu. E., Egorova K.C., Kolesnikova L.N. "The use of fresh amnion in the treatment of diseases of the cornea", - Vesti, ophthalmol., 1990,5,17-18.

6. Краснов М. Д. , Беляев В. С. "Руководство по глазной хирургии". "Москва,1988, 106-114. 6. Krasnov M. D., Belyaev V. S. "Guide to eye surgery." "Moscow, 1988, 106-114.

7. W.J.Tze, J.Tal "Successfull banking of pancreatic endocrine cells for transplantation". Metabolism, V. 39, N 7, 1990, p. 719-723. 7. W.J. Tze, J. Tal "Successfull banking of pancreatic endocrine cells for transplantation". Metabolism, V. 39, N 7, 1990, p. 719-723.

Claims

A method for treating eye burns by transplanting homotissues into the lesion area, characterized in that for transplantation, a suspension of embryonic human corneal epithelial cells in an amount of 20,000 cells in 0.2 mm saline is used, which is injected directly into the conjunctiva.