RU1781300C - Method for bacteriological diagnosis of infections ecterotoxemia in animals - Google Patents
Method for bacteriological diagnosis of infections ecterotoxemia in animalsInfo
- Publication number
- RU1781300C RU1781300C SU904917536A SU4917536A RU1781300C RU 1781300 C RU1781300 C RU 1781300C SU 904917536 A SU904917536 A SU 904917536A SU 4917536 A SU4917536 A SU 4917536A RU 1781300 C RU1781300 C RU 1781300C
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- medium
- solution
- chloride
- glucose
- nitrogen
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Использование: ветеринарна микробиологи . Сущность изобретени : способ бактериологической диагностики, инфекционной энтеротоксемии животных заключаетс в посеве исследуемого материала в жидкую питательную среду следующего состава: витаминный препарат экстракта кормовых дрожжей 4,5-5,0 г, глюкоза, 40%-ный раствор 11-13 мл, сульфат натри 1,0-1,2 г, гемин 0,004-0,005 г, натрий хлористый 4,5- 5,0 г, гентамицин 0,0075-0,008 г, эритромицин 0,00004-0,000045 г, ферментативный гидролизат казеина с содержанием аминно- го азота 90-100 мг % до 1 л, в инкубировании посевов, в пересеве на плотную питательную среду, содержащую: витаминный препарат экстракта кормовых дрожжей 4,5-5,0 г. глюкоза, 40%-ный раствор 20,0- 25,0 мл, сульфат натри 1,0-1,2 г, гемин 0,004-0,005 г, натрий хлористый 4,5-5,0 г. трифенилтетразоли хлорид 0,025-0,03 г, агар 13,0-15,0 г, ферментативный гидролизат казеина с содержанием аминного азота 170-190 мг% до 1 л, с последующим инкубированием посевов и учетом результатов по росту микроорганизмов. 6 табл. (Л СUsage: veterinary microbiologists. The inventive method of bacteriological diagnosis, infectious enterotoxemia of animals consists in sowing the test material in a liquid nutrient medium of the following composition: vitamin preparation of feed yeast extract 4.5-5.0 g, glucose, 40% solution of 11-13 ml, sodium sulfate 1.0-1.2 g, hemin 0.004-0.005 g, sodium chloride 4.5-5.0 g, gentamicin 0.0075-0.008 g, erythromycin 0.00004-0.000045 g, enzymatic casein hydrolyzate with amine content - Nitrogen 90-100 mg% to 1 l, in the incubation of crops, in reseeding on a solid nutrient medium, containing for example: vitamin preparation of fodder yeast extract 4.5-5.0 g glucose, 40% solution 20.0-25.0 ml, sodium sulfate 1.0-1.2 g, hemin 0.004-0.005 g, sodium chloride 4.5-5.0 g. triphenyltetrazole chloride 0.025-0.03 g, agar 13.0-15.0 g, casein enzymatic hydrolyzate with amine nitrogen content of 170-190 mg% to 1 l, followed by incubation of crops and taking into account the results of the growth of microorganisms. 6 tab. (L C
Description
Изобретение относитс к ветеринарной микробиологии и может быть использовано дл повышени эффективности своевременной диагностики инфекционной энтеротоксемии животных и организации противоэпизоотических меропри тий.The invention relates to veterinary microbiology and can be used to increase the effectiveness of timely diagnosis of infectious enterotoxemia in animals and the organization of antiepizootic measures.
Известны методы диагностики инфекционной энтеротоксемии животных с выделением возбудител инфекции - Кл. перфрингенс.Known methods for the diagnosis of infectious enterotoxemia of animals with the release of the causative agent of infection - Cl. perfringens.
При этом в качестве питательных сред дл культивировани инфекционного агента использовали среды Китт-Тароцци, глюкоз- но-кров ной МПА и др. Примен емые приIn this case, Kitt-Tarozzi, glucose-blood MPA, etc. were used as nutrient media for the cultivation of the infectious agent.
выделении возбудител питательные среды требуют дл изготовлени м сных продуктов , крови животных, трудоемки в изготовлении , нестандартны по качественному составу и не предусматривают ингибирова- ни посторонней микрофлоры.isolating the pathogen requires nutrient media for the manufacture of meat products, animal blood, labor-consuming to manufacture, non-standard in quality composition and do not provide for inhibition of extraneous microflora.
Известен способ, диагностика по данным которого основана на обнаружении токсина Кл. перфрингенс в исследуемом материале от больных и павших животных с помощью биопробы на белых мышах или выделении культуры возбудител с последующим изучением ее токсигенности. Выполнение этой методики в значительной мереA known method, the diagnosis of which is based on the detection of toxin Cl. perfringens in the test material from sick and dead animals using a bioassay on white mice or isolation of a pathogen culture, followed by a study of its toxigenicity. The implementation of this technique is largely
xi соxi stock
со оwith about
ограничено ее трудоемкостью (многократные пересевы) и применением дорогосто щих питательных сред, не обладающих селективными и дифференцирующими свойствами.It is limited by its laboriousness (multiple transfers) and the use of expensive nutrient media that do not have selective and differentiating properties.
Целью изобретени вл етс разработка способа ускоренного выделени культуры возбудител инфекционной эн- теротоксемии с применением сконструированных питательных сред, обладающих селективными и дифференцирующими свойствами.An object of the invention is to provide a method for accelerating the isolation of an infectious enterotoxemia pathogen culture using engineered culture media having selective and differentiating properties.
Поставленна цель достигаетс тем, что выделение культуры Кл. перфрингенс из исследуемого материала (фекалии, содержи- мое кишечника, корма, объекты внешней среды) осуществл ют путем высева на жидкую питательную среду накоплени на казеиновой основе, содержащую глюкозу, экстракт кормовых дрожжей (ЭКД), гемин, сульфит натри , ингибиторы роста сопутствующей микрофлоры - гентамицин и эритромицин при следующем соотношении компонентов, г/л:The goal is achieved in that the selection of the culture of Cl. Perfringens from the test material (feces, intestinal contents, feed, environmental objects) are carried out by plating casein-based accumulations containing glucose, feed yeast extract (ECD), hemin, sodium sulfite, growth inhibitors of concomitant microflora on a liquid nutrient medium - gentamicin and erythromycin in the following ratio of components, g / l:
Витаминный препаратVitamin preparation
ЭКД4,5-5,0ECD 4.5-5.0
Глюкоза,Glucose,
40%р-р 11-13 мл40% solution 11-13 ml
Сульфит натри 1,0-1,2Sodium sulfite 1.0-1.2
Гемин0,004-0,005 Gemin 0.004-0.005
НатрийSodium
. хлористый4,5-5,0. chloride 4.5-5.0
Гентамицин0,0075-0,008Gentamicin 0.0075-0.008
Эритромицин0,00004-0,000045Erythromycin 0.00004-0.000045
ФерментативныйEnzymatic
гйдролизат казеина (аминный азотcasein hydrolyzate (amine nitrogen
90-100 мг%)До 1л90-100 mg%) Up to 1l
В последующем выделение и дифференциацию чистой культуры Кл. перфрин- гене провод т путем пересева на плотную диагностическую среду, содержащую ЭКД, глюкозу, сульфит натри , гемин, натрий хлористый , 2,3,5-трифенилтетразоли хлорид (ТТХ) и агар при следующем соотношении компонентов, г/л: ВитаминныйSubsequently, the isolation and differentiation of the pure culture of Cl. Perfrin-gene is carried out by reseeding on a solid diagnostic medium containing EKD, glucose, sodium sulfite, hemin, sodium chloride, 2,3,5-triphenyltetrazole chloride (TTX) and agar in the following ratio of components, g / l: Vitamin
препарат ЭКД4,5-5,0drug ECD 4.5-5.0
Глюкоза (40 % р-р)20-25 млGlucose (40% solution) 20-25 ml
Сульфит натри 1-1,2Sodium sulfite 1-1.2
Гемин0,004-0,005Gemin 0.004-0.005
Натрий хлористый4,5-5,0Sodium chloride 4.5-5.0
ТТХ0,025-0,030TTX0.025-0.030
Агар13-15Agar 13-15
ФерментативныйEnzymatic
гйдролизат казеина (аминный азотcasein hydrolyzate (amine nitrogen
170-190 мг%) До 1л Способ осуществл ют следующим образом .170-190 mg%) Up to 1 L The method is carried out as follows.
Основой казеиновых питательных сред дл выделени Кл. перфрингенс вл етс ферментативный гйдролизат казеина средней степени расщеплени (аминный азот 450-500 мг %).The basis of casein culture media for the isolation of Cl. perfringens is an enzymatic casein hydrolyzate of medium cleavage (amine nitrogen 450-500 mg%).
Дл изготовлени ферментативного гидролизата казеина используют казеин пищевой (ОСТ 4970-74 и др.). Дл ускоренного гидролиза казеин в количестве 1 кг измельчают с помощью тканевого измельчител РТ-1 или каким-либо другим способом и заливают 10 л дистиллированной воды. Смесь подщелачивают 20%-ным раствором едкого натзи (ГОСТ 4320-77) до рН 8,0-8,2, подогревают до 80-85°С и при посто нном перемешивании , поддержива температуру и рН в указанных параметрах, довод т казеин до полного растворени . После этого смесь охлаждают до 45-47°С и внос т 1 кг дважды измельченного фарша поджелудочной железы крупного рогатого скота или свиней (ГОСТ 11285-73). 20%-ным раствором едкого натра довод т рН смеси до 8,0-8,2 и консервируют хлороформом (ГОСТ 20015-74) в количестве 1,0-1,5% к общему объему. Гидролиз казеина провод т при 37-42°С в тече- ние 16-20 часов до достижени концентрации аминного азота 450-500 мг%. После этого гидролиз прекращают подкислением лед ной уксусной кислотой (ГОСТ 61-75) до рН 4,5-5,0 и последующим кип чением в течение 10 минут. Далее гйдролизат оставл ют на 2-3 суток при 8-10°С дл отстаивани . По истечении этого срока прозрачный гйдролизат казеина сливают, подщелачивают 20%-ным раствором едкого натри до рН 7,0-7,2, фильтруют через ват- но-марлевый фильтр и стерилизуют при 120°С в течение 30 минут. Стерильный гйдролизат казеина хран т при 8-10°С и используют в работе в течение 5-6 мес цев.Food casein (OST 4970-74 and others) is used to make casein enzymatic hydrolyzate. For accelerated hydrolysis, 1 kg casein is crushed using a RT-1 tissue grinder or some other method and 10 l of distilled water is poured. The mixture is alkalinized with a 20% sodium hydroxide solution (GOST 4320-77) to a pH of 8.0-8.2, heated to 80-85 ° C and, with constant stirring, maintaining the temperature and pH in these parameters, casein is adjusted to complete dissolution. After this, the mixture is cooled to 45-47 ° C and 1 kg of twice minced meat of the pancreas of cattle or pigs is introduced (GOST 11285-73). The mixture is adjusted to pH 8.0-8.2 with a 20% sodium hydroxide solution and canned with chloroform (GOST 20015-74) in an amount of 1.0-1.5% to the total volume. Casein hydrolysis is carried out at 37-42 ° C for 16-20 hours until an amine nitrogen concentration of 450-500 mg% is reached. After this, the hydrolysis is stopped by acidification with glacial acetic acid (GOST 61-75) to pH 4.5-5.0 and subsequent boiling for 10 minutes. Then, the hydrolyzate is left for 2-3 days at 8-10 ° C for settling. After this period, the clear casein hydrolyzate is drained, made basic with a 20% sodium hydroxide solution to pH 7.0-7.2, filtered through a cotton-gauze filter and sterilized at 120 ° C for 30 minutes. Casein sterile hydrolyzate is stored at 8-10 ° C and used for 5-6 months.
Показатели гидролизата казеина: аминный азот 450-500 мг%, пептон 2-3%, триптофан 180-200 мг%.Indicators of casein hydrolyzate: amine nitrogen 450-500 mg%, peptone 2-3%, tryptophan 180-200 mg%.
Изготовление казеиновой среды накоплени .The manufacture of casein storage media.
Дл изготовлени питательной среды накоплени основной гйдролизат казеина (ОГК) развод т дистиллированной водой до концентрации аминного азота 90-100 мг%. Необходимое количество ОГК определ ют по формуле:In order to prepare a growth media, the basic casein hydrolyzate (OGK) is diluted with distilled water to an amine nitrogen concentration of 90-100 mg%. The required amount of OGK is determined by the formula:
..
где X - потребное количество ОГК дл приготовлени питательной среды (л);where X is the required amount of OGK for preparing the nutrient medium (l);
А- требуемое количество аминного азота в питательной среде (мг%);A is the required amount of amine nitrogen in the nutrient medium (mg%);
В - концентрации аминного азота в ОГК (мг%);B — concentration of amine nitrogen in OGK (mg%);
К - количество питательной среды, которое необходимо приготовить (л),K is the amount of culture medium that needs to be prepared (l),
Разведенный до аминного азота 90-100 мг% гидролизат казеина нагревают до кипени , добавл ют сухой экстракт кормовых дрожжей из расчета 5 г/л среды, сульфит натри (ГОСТ 195-77) - 1 г/л, гемин ГГУ6- 09-10-504-7) - 0,005 г/л и хлористый натрий (ГОСТ 4233-77) - 5 г/л. Diluted to amine nitrogen 90-100 mg% casein hydrolyzate is heated to boiling, dry extract of fodder yeast is added at the rate of 5 g / l of medium, sodium sulfite (GOST 195-77) - 1 g / l, hemin GGU-09-10-10- 504-7) - 0.005 g / l and sodium chloride (GOST 4233-77) - 5 g / l.
Раствор гемина в воде готов т отдельно , дл чего навеску препарата в 10 мг предварительно раствор ют в колбе емкостью 50-100 мл в 1 мл стерильного 1-нормально- го раствора едкого натри и добавл ют 19 мл стерильной дистиллированной воды. В питательную среду раствор гемина внос т из расчета 10 мл /л. Простерилизованный доведением до кипени раствор гемина пригоден дл хранени и последующего использовани .A hemin solution in water is prepared separately, for which a 10 mg sample of the preparation is previously dissolved in a flask with a capacity of 50-100 ml in 1 ml of a sterile 1-normal sodium hydroxide solution and 19 ml of sterile distilled water is added. A hemin solution was added to the culture medium at the rate of 10 ml / l. The sterilized boiling solution of hemin is suitable for storage and subsequent use.
После растворени всех компонентов 20%-ным раствором едкого натри устанавливают рН среды 7,6-7,8, кип т т в течение 10 минут, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в колбы по 0,250 или 0,5 л и стерилизуют при 120°С в течение 30 минут.After all components are dissolved with a 20% sodium hydroxide solution, the pH of the medium is adjusted to 7.6-7.8, boiled for 10 minutes, filtered through a cotton-gauze filter, poured into 0.250 or 0.5 L flasks and sterilized with 120 ° C for 30 minutes.
Питательна среда прозрачна, имеет красноватый оттенок и рН 7,4-7,6, концентраци аминного азота 100-110 мг%. Среда при хранении в услови х 4-8°С пригодна дл использовани в работе в течение 3-4 мес цев.The nutrient medium is transparent, has a reddish tint and a pH of 7.4-7.6, and the concentration of amine nitrogen is 100-110 mg%. The medium, when stored under conditions of 4-8 ° C, is suitable for use in work for 3-4 months.
Перед употреблением в питательную среду дл ускорени роста Кл.перфрингенс добавл ют глюкозу (ГОСТ 975-75) в виде 40%-ного стерильного раствора из расчета 12,5 мл (0,5% в пересчете на сухое вещество ) и дл ингибировани посторонней микрофлоры - антибиотики гентамицин из расчета 0,008 г/л (8 мг) и эритромицин - 0,000045 г/л (45 мкг), после чего среду разливают в стерильные пробирки по 10 мл и наслаивают стерильное вазелиновое масло. Готовую среду хран т при 4-8°С и испо.ль- зуют в течение 2 мес цев.Before use, glucose (GOST 975-75) is added to a nutrient medium to accelerate the growth of C. perfringens in the form of a 40% sterile solution at the rate of 12.5 ml (0.5% in terms of dry matter) and to inhibit extraneous microflora - gentamicin antibiotics at the rate of 0.008 g / l (8 mg) and erythromycin - 0.000045 g / l (45 μg), after which the medium is poured into sterile 10 ml tubes and layered sterile vaseline oil. The prepared medium is stored at 4-8 ° C and used for 2 months.
Расчет необходимого количества гента- мицина из потребности 0,008 г/л производитс следующим образом.The calculation of the required amount of gentamicin from the need of 0.008 g / l is carried out as follows.
Гентамицин в ампулах в виде 4%-ного раствора:Gentamicin in ampoules in the form of a 4% solution:
1 мл препарата содержит 0,04 г активного вещества1 ml of the drug contains 0.04 g of active substance
X мл - 0,008 г,X ml - 0.008 g,
Y 0.008 1 п , Х ЖЫ° 2МЛСледовательно , на 1 л питательной среды необходимо вз ть 0,2 мл препарата.Y 0.008 1 p, X W ° 2 ML Consequently, 0.2 ml of the drug must be taken per 1 liter of culture medium.
Гентамицин в порошке во флаконах, где содержитс по 0,08 г (80 мг) активного вещества:Gentamicin powder in vials containing 0.08 g (80 mg) of active substance:
содержимое флакона раствор ют в 2 мл стерильной дистиллированной воды. Следовательно , в 1 мл раствора содержитс также 0,04 г активного вещества. В дальнейшем расчет производитс так, как это описано выше. Водный раствор гентамицина можно использовать в работе в течение 14 дней.the contents of the vial are dissolved in 2 ml of sterile distilled water. Therefore, 0.04 g of active substance is also contained in 1 ml of the solution. Subsequently, the calculation is performed as described above. An aqueous solution of gentamicin can be used in the work for 14 days.
Эритромицин удобно и целесообразно использовать в виде дисков, содержащих по 0,000015 г (15 мкг) активного вещества. Расчет необходимого количества эритромици- на при потребности 0,000045 г/л (45 мкг):Erythromycin is convenient and appropriate to use in the form of disks containing 0.000015 g (15 μg) of active substance. Calculation of the required amount of erythromycin with the need of 0.000045 g / l (45 μg):
1 эритромициновый диск содержит 0,000015 г вещества X0,000045 г1 erythromycin disk contains 0.000015 g of substance X0.000045 g
У 0.000045 1 , А 0,000015At 0.000045 1, A 0.000015
Таким образом, на 1 л питательной среды нужно вз ть элюат 3 дисков или непосредственно внести стерильно 3 диска.Thus, for 1 liter of culture medium, you must take an eluate of 3 disks or directly apply sterile 3 disks.
Если эритромицин (эритромицина ас- корбинат или эритромицина фосфат) в порошке во флаконах, где по 0,05 г препарата, то расчет при той же потребности производитс следующим образом.If erythromycin (erythromycin ascorbate or erythromycin phosphate) is in powder in vials containing 0.05 g of the drug, then the calculation for the same need is as follows.
Содержимое флакона раствор ют в 5 мл стерильной дистиллированной воды. Берут 0,1 мл этого раствора (0,001 г) и перенос т в пробирку с 4,9 мл стерильной дистиллированной воды. Таким образом, в 1 мл раствора в пробирке содержитс 0,0002 г вещества.The contents of the vial are dissolved in 5 ml of sterile distilled water. 0.1 ml of this solution (0.001 g) was taken and transferred into a test tube with 4.9 ml of sterile distilled water. Thus, in 1 ml of solution in a test tube contains 0.0002 g of substance.
В 1 мл содержитс 0,0002 г в X мл - - 0,000045 г1 ml contains 0.0002 g in X ml - - 0.000045 g
40 у 0.000045 0,000240 y 0.000045 0.0002
11
0,225 мл. 0.225 ml.
Следовательно, на 1 л среды нужно добавить из пробирки 0,23 мл раствора эрит- ромицина. (Водный раствор эритромицина дл хранени непригоден).Therefore, per 1 liter of medium, 0.23 ml of an erythromycin solution should be added from a test tube. (An aqueous erythromycin solution is unsuitable for storage).
Конечна структура среды накоплени , г/л:The final structure of the accumulation medium, g / l:
ВитаминныйVitamin
препарат ЭКД4,5-5,0drug ECD 4.5-5.0
Глюкоза, 40%-ныйGlucose, 40%
раствор11-1 Змлsolution 11-1 Zml
Гемин0,004-0,005Gemin 0.004-0.005
Сульфит натри 1-1,2 .Sodium sulfite 1-1.2.
Натрий хлористый4,5-5,0Sodium chloride 4.5-5.0
Гентамицин0,0075-0,008Gentamicin 0.0075-0.008
Эритромицин0,00004-0,000045Erythromycin 0.00004-0.000045
ФерментативныйEnzymatic
гидролизат казеинаcasein hydrolyzate
(аминный азот 90-100мг%)До 1л(amine nitrogen 90-100mg%) Up to 1l
Изготовление плотной диагностической среды.Production of a dense diagnostic environment.
Дл изготовлени плотной диагностической среды основной гидролизат казеина развод т водой до концентрации аминного азота 170-190 мг% по формуле, приведенной ранее. Разведенный гидролизат нагревают до кипени , последовательно из расчета на 1 л среды внос т агара (ГОСТ 16280-70} - 15 г, сульфита натри - 1 г, раствор гемина - 10 мл (о приготовлении раствора гемина см. выше), хлористого натри - 5 г. После растворени всех компонентов и доведени рН среды 20%-ным раствором едкого натри до 7.6-7,8 кип т т в течение 10 минут, фильтруют через ватно- марлевый фильтр и стерилизуют при 120°С в течение 30 мин.In order to make a solid diagnostic medium, the main casein hydrolyzate is diluted with water to an amine nitrogen concentration of 170-190 mg% according to the formula given above. The diluted hydrolyzate is heated to boiling, agar is added sequentially per 1 liter of medium (GOST 16280-70} - 15 g, sodium sulfite - 1 g, hemin solution - 10 ml (for the preparation of hemin solution see above), sodium chloride - 5 g. After dissolving all the components and adjusting the pH of the medium with a 20% sodium hydroxide solution to 7.6-7.8, boil for 10 minutes, filter through a cotton gauze filter and sterilize at 120 ° C for 30 minutes.
Среда имеет красноватый оттенок, рН 7,4-7,6, концентраци аминного азота 190- 210 мг%.The medium has a reddish tint, pH 7.4-7.6, amine nitrogen concentration 190-210 mg%.
Перед разливом в чашки Петри в расплавленный и охлажденный до 50-60°С питательный агар добавл ют стерильно глюкозу из 40%-ного раствора в количестве 25 мл/л (1 % в пересчете на сухое вещество) и раствор трифенилтетразоли хлорида (ТТХ) из расчета 5 мл/л (0,025 г/л в пересчете на сухое вещество).Before pouring into Petri dishes, glucose from a 40% solution in an amount of 25 ml / l (1% in terms of dry matter) and a solution of triphenyltetrazole chloride (TTX) from sterile are added to molten and cooled to 50-60 ° C nutrient agar. calculation of 5 ml / l (0.025 g / l in terms of dry matter).
Раствор ТТХ готов т отдельно, дл чего навеску препарата в 0,05 г раствор ют в 10 мл стерильной дистиллированной воды (или 0,02 г в 4 мл в зависимости от потребности), довод т до кипени . Раствор ТТХ пригоден дл использовани в течение 7-10 дней.A TTX solution was prepared separately, for which a weighed portion of the drug in 0.05 g was dissolved in 10 ml of sterile distilled water (or 0.02 g in 4 ml, depending on need), brought to a boil. The TTX solution is suitable for use within 7-10 days.
Конечный состав плотной диагностической среды представл етс в следующем виде, г/л:The final composition of the dense diagnostic medium is as follows, g / l:
Витаминный препаратVitamin preparation
ЭКД4,5-5,0ECD 4.5-5.0
Глюкоза, 40%-ныйGlucose, 40%
раствор20-25 млsolution 20-25 ml
Гемин0,004-0,005Gemin 0.004-0.005
Сульфит натри 1-1,2Sodium sulfite 1-1.2
Натрий хлористый4,5-5,0Sodium chloride 4.5-5.0
ТТХ, 0,5%-ныйTTX, 0.5%
раствор4-5 млsolution 4-5 ml
Агар 13-15Agar 13-15
ФерментативныйEnzymatic
гидролизат казеинаcasein hydrolyzate
(аминный азот(amine nitrogen
170-190 мг%)До 1л170-190 mg%) Up to 1l
П р и м е р 1. Оценка эффективности различных вариантов конструкций на казеиновой основе дл роста Кл.перфрингенс.EXAMPLE 1. Evaluation of the effectiveness of various casein-based constructs for the growth of C. perfringens.
Посевна культура Кл.перфрингенс представл ла суспензию агаровой 18-20- часовой культуры в концентрации 1 млрд. м.к./мл, которую вносили в пробирки со средами из расчета 1 мл/10 мл. ПосевыInoculum culture C. perfringens represented a suspension of an agar 18-20 hour culture at a concentration of 1 billion cubic meters / ml, which was added to test tubes with media at a rate of 1 ml / 10 ml. Crops
культивировали при 37°С. Рост культуры Кл.перфрингенс оценивали в единицах оптической плотности с помощью ФЭК-М. В результате максимальные показателиcultured at 37 ° C. The culture growth of C. perfringens was evaluated in units of optical density using FEK-M. As a result, maximum performance
роста Кл.перфрингенс были установлены в среде, содержащей глюкозу, ЭКД, гемин и сульфит натри (табл. 1).Growth C. perfringens were established in a medium containing glucose, EKD, hemin and sodium sulfite (Table 1).
П р и м е р 2. Скорость и характер роста микробных клеток Кл.перфрингенс.PRI me R 2. The speed and nature of the growth of microbial cells Kl.perfringens.
0 При сравнительном изучении скорости и характера роста м.к. эталонных штаммов Кл.перфрингенс использовали 17-18-часовые агаровые культуры, которые вначале разводили до 10 ед. по оптическому стан5 дарту мутности, далее из них готовили разведение 10 с последующим пересевом из расчета 0,5 мл/10 мл в опытную и контрольную среды накоплени .0 In a comparative study of the speed and nature of growth m.k. Cl. perfringens reference strains used 17-18-hour agar cultures, which were initially bred to 10 units. according to the optical standard of turbidity, then a 10 dilution was prepared from them followed by reseeding at the rate of 0.5 ml / 10 ml into the experimental and control accumulation media.
Среды оценивали по времени по вле0 ни визуально заметного роста и типичности про влени его (табл. 2). В казеиновой среде визуально заметный рост установлен через 3 часа, в контрольной среде - на 1 час позднее Через 5,5 ч после посева в экспе5 риментальной среде регистрировали интен- сивный рост (сильное помутнение с бурным газообразованием), в контрольной - признаки роста были менее выраженными (слабое помутнение и отсутствие газо0 образовани ).The media were evaluated by time according to the influence of visually noticeable growth and its typical manifestation (Table 2). In casein medium, visually noticeable growth was established after 3 hours, in the control medium - 1 hour later. 5.5 hours after seeding, intensive growth was recorded in the experimental medium (severe turbidity with rapid gas formation), in the control - growth signs were less pronounced (slight turbidity and lack of gas formation).
П р и м е р 3. Чувствительность жидкой казеиновой среды дл микробных клеток Кл.перфрингенс.Example 3. Sensitivity of liquid casein medium for microbial cells. Cl. Perfringens.
Была использована 17-18-часова ага5 рова эталонного штамма культура Кл.перфрингенс типа С 392, которую вначале разводили до 10 ед. по оптическому стандарту мутности, затем готовили ее дес тикратные последовательные разведени отA 17-18-hour agar of the reference culture strain of C. perfringens type C 392 was used, which was initially diluted to 10 units. according to the optical turbidity standard, then ten times serial dilutions from
0 10 до . Из каждого разведени был сделан посев в пробирки со средами из расчета 1 мл/10 мл. Посевы инкубировали при 37°С в микроанаэростатах в течение 20 ч. Эффективность сред оценивали по по вле5 нию роста при соответствующем разведении (табл. 3).0 10 to. From each dilution, inoculation into test tubes with media at the rate of 1 ml / 10 ml was made. Crops were incubated at 37 ° С in microaerostats for 20 h. Media efficiency was assessed by the effect of growth with appropriate dilution (Table 3).
На казеиновой среде регистрировали рост Кл.пеофрингенс при посеве из разведени 10 , в контрольной рост вы вл лс On casein medium, C. peofringens growth was recorded when plating from dilution 10; control growth showed
0 при посеве из разведени 1СГ6.0 when sowing from a 1CG6 dilution.
П р и м е р 4. Чувствительность плотных сред дл Кл.перфрингенс.PRI me R 4. Sensitivity of dense media for C. perfringens.
При этом использовали как 16-18-часовые агаровые, так и 6-часовые бульонныеIn this case, both 16-18-hour agar and 6-hour broth were used
5 культуры Кл.перфрингенс С 392, из разведений которых 10 . , и 10 делали посев по 0,05 мл на чашках Петри с экспериментальной плотной диагностической средой и средой - прототипом (агар Цейсслера). Чашки инкубировали в микроанаэростатах5 cultures Cl. Perfringens C 392, of which 10 dilutions. , and 10 did inoculation of 0.05 ml on Petri dishes with an experimental dense diagnostic medium and a prototype medium (Zeissler agar). Cups were incubated in microaerostats
при 37°С в течение 17-18 ч. Среды оценивали по количеству и размерам колоний (табл.at 37 ° C for 17-18 hours. The environment was evaluated by the number and size of colonies (table.
4).4).
Опытна плотна диагностическа среда , не уступа среде - прототипу по чувствительности , превосходила ее по размерам колоний.Experienced dense diagnostic environment, not inferior to the environment - the prototype in sensitivity, exceeded it in the size of the colonies.
П р и м е р 5. Эффективность схемы выделени Кл.перфрингенс из материала.Example 5. Efficiency of a scheme for isolating Cl. Perfringens from a material.
При выделении культуры Кл.перфрингенс исходным материалом служили фекалии и содержимое тонкого отдела кишечника животных. Навеску фекалий в 0,8-1 г суспендировали в 10 мл физиологического раствора хлористого натри , содержащего 0,05% тиогликол та натри . Взвеси тщательно перемешивали и выдерживали 30-35 минут в услови х комнатной температуры дл оседани грубых частиц, после чего производили обильный посев в экспериментальную казеиновую среду и среду - прототип . Посевы инкубировали в течение 16-17 часов при 37°С. Затем культуры микроско- пировали и производили обильный пересев на плотный диагностический казеиновый агар и агар Цейсслера (прототип) в чашках Петри. Посевы термостатировали в микро- анаэростатах в течение 16-17 ч при 37°С. Оценку роста и дифференцирующих свойств сред производили визуально и с использованием микроскопа МБС-9 при 12- кратном увеличении.When isolating Cl. Perfringens culture, the initial material was feces and the contents of the small intestine of animals. A sample of feces in 0.8-1 g was suspended in 10 ml of physiological sodium chloride solution containing 0.05% sodium thioglycolate. Suspensions were thoroughly mixed and kept for 30-35 minutes at room temperature to sediment coarse particles, after which they were sown abundantly in experimental casein medium and prototype medium. Crops were incubated for 16-17 hours at 37 ° C. Then, the cultures were microscopically scattered and copious plated onto dense diagnostic casein agar and Zeissler agar (prototype) in Petri dishes. Crops were thermostated in microaerostats for 16-17 hours at 37 ° C. The growth and differentiating properties of the media were evaluated visually and using a MBS-9 microscope at a 12-fold increase.
При посеве 22 проб материала в казеиновую среду накоплени было выделено 19 культур Кл.перфрингенс, а в среду Китта-Та- роцци-9 (табл.6).When 22 samples of material were sown, 19 Cl. Perfringens cultures were isolated in the casein accumulation medium, and Kitta-Tarozzi-9 was isolated on Wednesday (Table 6).
П р и м е р 6. Оценка роста и дифференцирующих свойств плотных сред (табл. 5).PRI me R 6. Assessment of the growth and differentiating properties of dense media (table. 5).
При пересеве культур из казеиновой среды накоплени как на плотную казеиновую диагностическую, так и на среду - прототип установлен обильный рост однородных колоний, соответствующих по своей характеристике Кл.перфрингенс. При пересеве из среды Китта-Тароцци в 2 случа х из 3 отмечено незначительное количество колоний Кл.перфрингенс на фоне обильного роста колоний сопутствующей кишечной микрофлоре. Колонии Кл.перфрингенс на опытной плотной диагностической среде резко отличались от колоний других представителей кишечной микрофлоры благодар присущим им на этой среде признакам (форма, размер, цвет, характер поверхности и кра , рельеф, структура , консистенци , включени ).When replanting cultures from a casein accumulation medium both on a dense casein diagnostic and on a prototype medium, abundant growth of homogeneous colonies corresponding to C. perfringens characteristics was established. When replanting from Kitta-Tarozzi medium in 2 cases out of 3, a small number of Cl. Perfringens colonies were noted against the background of the abundant growth of colonies of concomitant intestinal microflora. Colonies of C. perfringens in the experimental dense diagnostic medium sharply differed from the colonies of other representatives of the intestinal microflora due to their inherent attributes in this medium (shape, size, color, surface and edge character, relief, structure, texture, inclusions).
Выделение культуры Кл.перфрингенс.Isolation of Cl. Perfringens culture.
Выделение культуры Кл.перфрингенс из фекалий и содержимого тонкого отдела кишечника .Isolation of Cl. Perfringens culture from feces and contents of the small intestine.
Навеску фекалий 0,8-1 г помещают в физиологический раствор хлористого натри с 0,05% (0,5 г/л) тиогликол та натри (ТУ 6-09-08-837-74) с соблюдением соотно- шени 1:10. Взвесь тщательно перемешивают и выдерживают при комнатной температуре в течение 30-35 минут дл осаждени грубых частиц. После этого из верхнего сло жидкости делают обильный посев (не менее 0,5 мл) в пробирку со средой накоплени . Посевы инкубируют при 36- 37°С в течение 16-17 часов, микроскопиру- ют и при обнаружении крупных полиморфных грамположительных палочек с закругленными концами делают дробный посев на казеиновый диагностический агар в чашках Петри. Чашки с посевами инкубируют в микроанаэростатах при 36-37°С в течение 16-17 часов. Осмотр и отбор коло- ний Кл.перфрингенс производ т под микроскопом МБС-9 (или аналогичным) при 12-кратном увеличении.A sample of feces 0.8-1 g is placed in a physiological solution of sodium chloride with 0.05% (0.5 g / l) sodium thioglycolate (TU 6-09-08-837-74) with a ratio of 1:10 . The suspension is thoroughly mixed and kept at room temperature for 30-35 minutes to precipitate coarse particles. After that, a plentiful inoculation (at least 0.5 ml) is made from the upper liquid layer into a test tube with accumulation medium. Crops are incubated at 36-37 ° C for 16-17 hours, microscopic, and if large polymorphic gram-positive rods with rounded ends are detected, a fractional culture is made on casein diagnostic agar in Petri dishes. Cups with crops are incubated in microaerostats at 36-37 ° C for 16-17 hours. Inspection and selection of Cl. Perfringens colonies is carried out under a microscope MBS-9 (or similar) at 12-fold magnification.
Морфологическа характеристика колоний Кл.перфрингенс: Величина1-2 ммMorphological characteristic of colonies Cl. Perfringens: Size 1-2 mm
Формачаще овальна илиFormally oval or
неправильна wrong
Кра ровные или волнистыеThe edges are flat or wavy.
Поверхность гладка с незначитель- ным блескомThe surface is smooth with a slight sheen.
Рельефвыпуклый, часто до конусовидностиConvex, often conical
Структуранепрозрачна Opaque
Консистенци пастообразна , коло- ни легко снимаетс The consistency is pasty, the peel is easily removed
петлейloop
Цветравномерно коричневый или красновато- коричневыйUnevenly brown or reddish brown
Включени в виде кристаллов красного цвета по всей поверхности колонии, на периферии их может быть меньшеInclusions in the form of red crystals over the entire surface of the colony; on the periphery, there may be less
Выделение Кл.перфрингенс из органов тканей животных.Isolation of Cl. Perfringens from organs of animal tissue.
Кусочки паренхиматозных органов (печень, почки, селезенка) весом 1-1,5 г растирают в услови х стерильности в фарфоровых ступках, добавл ют физиологический раствор хлористого натри в соотношении 1:10. Взвесь тщательно перемешивают , отстаивают в течение 20-30 минут и из верхнего сло производ т обиль- ный посев (не менее 0,5 мл) в пробирку со средой накоплени . Последовательность дальнейшей работы описана выше.Pieces of parenchymal organs (liver, kidneys, spleen) weighing 1-1.5 g are ground in sterile conditions in porcelain mortars, a physiological solution of sodium chloride in a ratio of 1:10 is added. The suspension is thoroughly mixed, sedimented for 20-30 minutes, and from the top layer, plentiful inoculation (at least 0.5 ml) is carried out in a test tube with accumulation medium. The sequence of further work is described above.
Выделение Кл.перфрингенс из перито- неальной жидкости.Isolation of Cl. Perfringens from peritoneal fluid.
Перитонеальную жидкость, вз тую стерильно , в объеме не менее 0,5 мл внос т в пробирку со средой накоплени . Последовательность дальнейшей работы приведена выше.Sterile peritoneal fluid in a volume of not less than 0.5 ml is introduced into a test tube with an accumulation medium. The sequence of further work is given above.
Выделение Кл.перфрингенс из кормов.Isolation of Cl. Perfringens from feed.
Навеску кормов в 4-5 г в колбах емкостью 0,250 или 0,5 л заливают 50 мл физиологического раствора хлористого натри с 0,05 тиогликол та натри , тщательно встр - хивают, выдерживают при комнатной температуре 20-30 минут и из верхнего сло жидкости производ т обильный посев в пробирку со средой накоплени . Дальнейша работа производитс так, как это опи- сано выше. Вместо тиогликол та натри можно использовать сол нокислый цистеин в количестве 0,1 г/л.A portion of feeds of 4-5 g in 0.250 or 0.5 L flasks is poured into 50 ml of physiological sodium chloride solution with 0.05 sodium thioglycolate, shaken thoroughly, kept at room temperature for 20-30 minutes and from the upper liquid layer, make T abundant inoculation into test tube with accumulation medium. Further work is carried out as described above. Instead of sodium thioglycolate, cysteine hydrochloride in an amount of 0.1 g / l can be used.
Таким образом, предлагаемый способ ускоренной бактериологической диагностики инфекционной энтеротоксемии у животных по сравнению с прототипом имеет следующие преимущества: сконструированные питательные среды обладают устойчивыми селективными и дифференцирующими свой- ствами, не требуют дл изготовлени дорогосто щих м сных продуктов, стандартны по качеству, предусматривают использование ингибиторов дл посторонней микрофлоры, исключают многократные пересевы при вы- делении и тем самым повышают производительность труда ветспециалистов.Thus, the proposed method for the accelerated bacteriological diagnosis of infectious enterotoxemia in animals compared with the prototype has the following advantages: the designed nutrient media have stable selective and differentiating properties, do not require expensive meat products for manufacturing, are standard in quality, and use inhibitors for extraneous microflora, exclude repeated reseeding during isolation and thereby increase labor productivity ists.
Технико-экономическа эффективность изобретени заключаетс в повышении эффективности , достоверности и доступности способа диагностики инфекционной энтеротоксемии животных.The technical and economic effectiveness of the invention consists in increasing the efficiency, reliability and availability of a method for diagnosing infectious enterotoxemia in animals.
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU904917536A RU1781300C (en) | 1990-12-13 | 1990-12-13 | Method for bacteriological diagnosis of infections ecterotoxemia in animals |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU904917536A RU1781300C (en) | 1990-12-13 | 1990-12-13 | Method for bacteriological diagnosis of infections ecterotoxemia in animals |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU1781300C true RU1781300C (en) | 1992-12-15 |
Family
ID=21564098
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU904917536A RU1781300C (en) | 1990-12-13 | 1990-12-13 | Method for bacteriological diagnosis of infections ecterotoxemia in animals |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU1781300C (en) |
-
1990
- 1990-12-13 RU SU904917536A patent/RU1781300C/en active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Методические указани по лабораторной диагностике инфекционной энтеротоксемии животных и анаэробной дизентерии гн т, утвержденные ГУВ МСХ СССР, 1984 г. Ветеринарна микробиологи ./ Под ред. Е. В. Козловского, П. А. Емель ненко, М.: Колос, 1982, с. 228. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0826311A1 (en) | Oral composition for animals | |
CN114085789B (en) | Pediococcus pentosaceus MA.WTPQJ01 and application thereof | |
CN113862196B (en) | Bacillus subtilis SD-KC-001 and application thereof | |
RU1781300C (en) | Method for bacteriological diagnosis of infections ecterotoxemia in animals | |
CN113717905B (en) | Strain RD4 and application thereof | |
RU2332459C1 (en) | Nutrient diagnostic medium for abm enterobacteria detection | |
RU2193061C1 (en) | Nutrient medium for tuberculosis mycobacterium culturing (mbt-broth) | |
RU2328526C1 (en) | Method for revealing cattle tuberculosis mycobacteria | |
RU2818361C1 (en) | Strain of bacteria streptococcus dysgalactiae for making biopreparations for specific prevention of mastitis in cows | |
CN115992116B (en) | Multifunctional dairy cow lysozyme and preparation method and application thereof | |
CN111154677B (en) | Lactobacillus acidophilus and application thereof | |
CN118126869B (en) | Bacillus subtilis BS-22 strain and application thereof | |
Ward | Bacterium pyogenes and its relation to suppurative lesions in animals | |
SU1521762A1 (en) | Method of extracting brucellosis exciter of brucella melitensis type from pathologic material | |
RU2644248C2 (en) | Dense nutrient medium for cultivation and growing of tularemic microbe | |
Abdelazim et al. | New Enriched Culture Media for Culturing Streptococcus pyogenes by using Spirulina Powder | |
SU1652345A1 (en) | Nutrient medium for enterococci isolation | |
RU2022008C1 (en) | Method of preparing of base for nutrient media for microorganism growing | |
RU2164940C2 (en) | Method of isolation of microalga axenic cultures | |
RU2678978C2 (en) | Method for production liquid probiotic preparation | |
CN117264842A (en) | Bacillus subtilis AJQ03 separated from eel intestinal tracts and application thereof | |
RU2103367C1 (en) | Solid diagnostic nutrient medium and a method of its preparing | |
RU2642316C1 (en) | Method for production of vaccine against brucellosis of small cattle | |
SU1514783A1 (en) | Method of extracting campilobacteria | |
SU1655982A1 (en) | Method for decontamination of transplanted cell culture from mycoplasma |