RO129602A2 - Procedeu de bio-funcţionalizare a unui imunosenzor pentru determinarea cantitativă a unui marker cardiac - Google Patents
Procedeu de bio-funcţionalizare a unui imunosenzor pentru determinarea cantitativă a unui marker cardiac Download PDFInfo
- Publication number
- RO129602A2 RO129602A2 ROA201201059A RO201201059A RO129602A2 RO 129602 A2 RO129602 A2 RO 129602A2 RO A201201059 A ROA201201059 A RO A201201059A RO 201201059 A RO201201059 A RO 201201059A RO 129602 A2 RO129602 A2 RO 129602A2
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- bio
- immunosensor
- solution
- electrodes
- hfabp
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 title claims abstract 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 title abstract 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims abstract description 19
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims abstract description 19
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims abstract description 8
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 claims description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000013545 self-assembled monolayer Substances 0.000 claims description 8
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- GWOLZNVIRIHJHB-UHFFFAOYSA-N 11-mercaptoundecanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCS GWOLZNVIRIHJHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- SHLSSLVZXJBVHE-UHFFFAOYSA-N 3-sulfanylpropan-1-ol Chemical compound OCCCS SHLSSLVZXJBVHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000030914 Fatty Acid-Binding Human genes 0.000 claims description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 108091022862 fatty acid binding Proteins 0.000 claims description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims description 2
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 claims description 2
- QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N octafluoropropane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims 3
- GVJXGCIPWAVXJP-UHFFFAOYSA-N 2,5-dioxo-1-oxoniopyrrolidine-3-sulfonate Chemical class ON1C(=O)CC(S(O)(=O)=O)C1=O GVJXGCIPWAVXJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- -1 3-dimethylaminopropyl Chemical group 0.000 claims 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 claims 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 14
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 abstract description 7
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 abstract description 5
- 239000002052 molecular layer Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 6
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 4
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 2
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000001566 impedance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000013307 optical fiber Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000009774 resonance method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analyzing Materials By The Use Of Electric Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la un procedeu pentru determinarea unui marker cardiac, utilizat în domeniul biomedical. Metoda conform invenţiei constă din curăţarea unor electrozi de aur interdigitalizaţi, care sunt funcţionalizaţi chimic, cu formarea unor monostraturi autoasamblate mixte, pentru grefare grupări carboxil, după care grupările carboxil terminal se activează chimic, formând un strat molecular pe suprafaţa de aur, care permite imobilizarea eficientă a anticorpilor monoclonali anti hFABP pe suprafaţa lor, şi determinarea cantitativă a proteinei dintr-o probă biologică de ser uman.
Description
OFICIUL DE STAT PENTRU INVENp Și fi.
Cerere da brevei de invftf.-ti
Invenția se refera la un procedeu pentru determinare cantitativa a proteinei de legare a acizilor grași fracția cardiaca (hFABP) din ser uman (proba lichida) cu ajutorul unui imunosenzor interdigitat cu electrozi de aur. Domeniul de aplicare este cel biomedical si anume laboratoare clinice, cabinet medicale sau camere de urgenta.
Se cunoaște, in literatura de specialitate, un imunosenzor amperometric construit prin imobilizarea unui anticorp primar (anticorp de captura) pe o membrana de nitroceluloza sau pe o membrana de nylon activata. Pentru detecția hFABP din proba s-a utilizat proteina hFABP legata de o enzima, gluco-oxidaza (GOD) sau un anticorp secundar anti hFABP legat cu GOD. In ambele cazuri, s-a determinat activitatea enzimatica a GOD, după adaugarea unei cantitati de glucoza. Aceasta a permis determinarea cantitativa a hFABP in domeniul de liniaritate 100300 ng/mL. Este cunoscut un imunosenzor amperometric cu electrozi de cărbune. Pentru acesta, s-au utilizat un anticorp primar (anticorp de captura) pentru imobilizare pe suprafața electrozilor si un anticorp secundar marcat cu fosfataza alcalina pentru detecția hFABP din proba. Timpul de detecție al hFABP a fost de 20 min., iar liniaritatea curbei de calibrare a fost cuprinsa intre 10 si 350 ng/mL. Sa realizat, de asemenea si un imunosenzor amperometric tot cu electrozi de cărbune, avand același principiu de detecție . Timpul de detecție al hFABP a fost de 50 min., iar liniaritatea curbei de calibrare a fost cuprinsa intre 4 si 250 ng/mL. Dezavantajul acestor imunosenzori consta in faptul ca sunt folosiți in metode indirecte, care necesita un număr mare de reactivi, iar sensibilitatea este redusa.
Se mai cunoaște, un imunosenzor cu detecție optica directa a hFABP. Au fost realizați doi traductori cu fibre optice, proteina hFABP fiind cuantificata prin metoda Rezonanta Plasmonica de Suprafața. Dezavantajul utilizării acestui imunosenzor consta in faptul ca limita de detecție este foarte mare - 200n/mL.
Funcționalizarea bio-chimica a electrozilor de aur este procesul cheie de construcție al imunosenzorului. In funcție de acest proces, suprafața electrozilor este capabila sa retina exclusiv proteina de interes, hFABP, din proba biologica, £2Ο 1 2 - f 1 Ο 59 - 2 1 -12- 2012 cu atat mai mult cu cat, aceasta proba este un amestec complex de alte proteine, electroliti, medicamente.
Pana in prezent, nu s-au găsit in literatura de specialitate imunosenzori interdigitati cu electrozi de aur functionalizati cu monostraturi autoasamblate mixte pe care sa se imobilizeze anticorpi monoclonali anti hFABP pe suprafața lor cu scopul de a determina cantitativ proteina hFABP din proba biologica, serul uman.
Avantajul utilizării aurului ca material de realizare a electrozilor interdigitati, consta in faptul ca prezintă o reactivitate scăzută, aproape nula cu mediul de reacție si poate fi preparat selectiv numai pentru proteina de interes cu scopul de a evita reacții încrucișate cu alti analiti din proba biologica.
Problema tehnica pe care o rezolva procedeul de bio-functionalizare conform invenției consta din aceea că permite determinarea cantitativa, directa, a proteinei hFABP din proba biologica, fara a necesita reactivi suplimentari care sa conțină alte proteine (enzime, anticorpi secundari) si cromofori, cu o mare sensibilitate si specificitate.
Procedeul de bio-functionalizare a electrozilor interdigitati de aur conform invenției, cuprinde următoarele etape:
1. curatarea electrozilor si verificarea gradului de curatare prin metoda spectrometriei de impedanta electrochimica (EIS)
2. functionalizarea chimica a electrozilor de aur cu formare de monostraturi autoasamblate mixte, prin intermediul acidului 11 mercaptoundecanoic (11 MUA) si alcoolului 3 mercaptopropanol (3MPOH), cu grupări reactive terminale carboxil si verificarea formarii monostraturilor autoasamblate prin metoda EIS;
3. activarea grupărilor terminale carboxil cu N-hidroxisuccinimida (NHS) si l-(3-dimetilaminopropil)-N-etilcarbodiimida (EDC) pentru formarea unor NHS esteri;
4. imobilizarea prin legaturi covalente a anticorpului monoclonal anti hFABP cu NHS esterii obținuți anterior;
5. blocarea grupărilor ramase libere cu albumina bovina serica (BSA) si verificarea bio-functionalizarii electrozilor prin metoda EIS.
Electrozii de aur nativ, policristalin, neactivati chimic sau bio-chimic, sunt suprafețe inerte, care practic nu interactioneaza cu compuși chimici sau biochimici.
>‘20 1 2 - 0 1 0 5 9 -2 1 -12- 2012
Prin bio-functionalizarea controlata a electrozilor de aur se obțin suprafețe cu mare specificitate in determinarea cantitativa a unor proteine de interes.
Functionalizarea electrozilor de aur interdigitati cu formare de monostraturi autoasamblate mixte conduce la formarea unui strat molecular pe suprafața de aur care permite imobilizarea eficienta a anticorpului de captura.
Avantajele procedeului de functionalizare chimice cu monostraturi autoasamblate mixte a electrozilor constau in:
aceste straturi sunt foarte stabile si nu se denaturează in timpul determinărilor electrice;
- realizează o buna acoperire a suprafeței de aur;
- raportul stabilit intre numărul de molecule cu catena lunga 11 MUA si numărul de molecule cu catena scurta 3MPOH permite o buna imobilizare din punct de vedere al orientării sterice a anticorpului anti hFABP;
- anticorpul anti hFABP se imobilizează prin legaturi covalente, deci prin legaturi puternice si nu exista pericolul desorbtiei acestuia de pe suprafața in timpul interactiei cu proba.
- bio-electrodul prezintă o înalta specificitate deoarece a fost pregătit in scopul imobilizării unei singure proteine si anume hFABP;
- utilizarea unui anticorp monoclonal specific reduce semnificativ reacțiile încrucișate cu alti analiti;
- avand in vedere ca suportul inițial, aurul, este practic inert chimic si biochimic, interactia cu proba se va face exclusiv cu aria activa, biofunctionalizata, “zgomotul de fond” fiind extrem de scăzut.
Se da, in continuare, un exemplu de realizare a procedeului de biofunctionalizare conform invenției, in legătură cu figurile 1-5, care reprezintă:
- fig.l, imunosenzor: - regiunea interdigitata (1) cu electrozi de aur (4) sau aria activa; - aria activa (2) conectata prin intermediul unor păduri (de aur) la sistemul de citire AGILENT 4263B RCR care permite masurarea valorilor capacitatii electrozilor după interactia cu proba; - aria totala (3) a imunosenzorului, de 7,2 mm ; - electrozi de aur (4) cu o grosime de 10 pm;
- fig.2, schema reacțiilor din cadrul procedurii de bio-functionalizare a electrozilor de aur, cu următoarele etape : 1- curatare suprafețe; 2- formare monostraturi autoasamblate mixte; 3- activarea cu EDC+NHS; 43 <\-2 Ο 1 2. ?' Ο 59 - 2 1 -12· 2ίΙ1ί! Ο λ imobilzarea covalenta a anticorpului anti hFABP; 5- blocare situsuri neocupate cu BSA;
- fig. 3, schema circuitului echivalent EIS; unde, Rs - rezistenta soluției la interfața electrodului de aur, Ret - rezistenta de transfer electronic când in soluție avem proba redox, Cdl - capacitatea dielectrica a stratului format la suprafața electrodului;
- Tabel 1 - Valorile capacitatilor obținute din fitarea datelor de la impedanta, utilizând programul de fitare auto RC Fitting din softul Volta Mașter 4 după etapele de bio-functionalizare;
- fig.4, curba de calibrare - modificarea capacitatii imunosenzorului funcție de logaritmul concentrației de proteina hFABP a celor sase calibratori;
- fig. 5, exemplu de curba de verificare a imunosenzorului cu probe biologice de control, ser uman, cu concentrații de proteina hFABP cunoscute.
Exemplu
Procedeul conform invenției cuprinde următoarele etape:
1. Curatarea suprafețelor electrozilor. Procesul de curatare se realizează astfel: se introduc electrozii in metanol p.a. timp de 10 min., apoi in acetona timp de 10 min., apoi intr-o soluție 50% etanol absolut si apa timp de 10 min., apoi in izpopropanol timp de lOmin., apoi in soluție Pirahna (H2SO4 98%:H2O2 30% = 3:1 v/v) timp de 10 min., după care se spala de 5 ori cu apa deionizata, apoi se spala cu etanol absolut si se usucă la 70°C. Valorile capacitatilor electrozilor după curatare, fitate cu programul Voltalab utilizând metoda EIS sunt prezentate in fig.4.
2. Functionalizarea chimica pentru formarea monostraturilor autoasamblate. Se realizează prin imersia electrozilor intr-o soluție etanolica lOmM ce conține 11 MU A si 3MPOH in raport molar 8:2, timp de 24 ore. In urma acestei funcționalizari se grefează grupări carboxil reactive pe suprafața electrozilor. Acoperirea electrozilor interdigitati cu monostraturi autoasamblate mixte, se verifica prin metoda EIS, fig.4.
3. Activarea grupărilor carboxil se realizează cu un amestec de 20mM NHS si 100 mM EDC, in PBS, timp de 1 ora.
4. Imobilizarea anticorpului de captura. Ca anticorp de captura se utilizează un anticorp monoclonal din șoarece, anti-uman, clona 9F3. Astfel, aria activa a :\’ZD12-.n 1059 --
1 -12- 2012 electrozilor se incubeaza cu o soluție de 8μg/mL anticorp in PBS, timp de 12 ore, la 4°C, apoi se spala cu PBS.
5. Blocarea suprafețelor electrozilor se realizează cu o soluție de BSA 1% in PBS timp de 1 ora la temperatura camerei, după care se spala cu PBS. Verificarea procedurii de bio-functionalizare se face prin metoda EIS, ca in fig.4.
Imunosenzorii se utilizează apoi pentru determinări cantitative ale hFABP din probe.
Etapele realizării curbei de calibrare sunt:
1. se utilizează un set de 6 calibratori de proteina hFABP cu următoarele concentrații: c0= 0 ng/mL, C]= 0,098 ng/mL, C2=l,56 ng/mL, c3=6,25 ng/mL, Ci=12,5 ng/mL, 05=50 ng/mL si C6=100 ng/mL;
2. se pune in contact calibratorul cu aria activa a imunosenzorului, aceasta fiind conectata cu ajutorul unor păduri (de aur) la sistemul de citire AGILENT 4263B RCR;
3. se citește valoarea capacitatii a electrozilor interdigitati de pe suprafața imunosenzorului cu sistemul de citire AGILENT 4263B RCR;
4. după ce se citesc valorile tuturor calibratorilor se calculează curba de calibrare prin exprimare grafica a capacitatii (nF) pentru fiecare calibrator, inclusiv cO (axa y) funcție de logaritmul concentrației fiecărui calibrator (ng/mL) (axa x) utilizând ca soft Microcal Origin 6.0.
Caracteristicile curbei de calibrare sunt prezentate in fig.5.
Verificarea bio-functionalizarii se realizează cu probe de control, ser uman, cu concentrații diferite: c0= 0 ng/mL, C]= 0,098 ng/mL, c2=l,56 ng/mL, c3=6,25 ng/mL, c4=12,5 ng/mL, c5=5O ng/mL si c6=100 ng/mL si implica următoarele etape:
1. se pune in contact serul de control cu aria activa a imunosenzorului, aceasta fiind conectata cu ajutorul unor păduri (de aur) la sistemul de citire AGILENT 4263B RCR;
2. se citește valoarea capacitatii a electrozilor interdigitati de pe suprafața imunosenzorului cu sistemul de citire AGILENT 4263B RCR;
^“2 Ο 1 2 - 0 1 0 5 9 -2 1 -12- 2012
3. după ce se citesc valorile tuturor serurilor de control se exprima grafic capacitatea (nF) pentru fiecare ser de control (axa y), funcție de logaritmul concentrației fiecărui ser de control (ng/mL) (axa x) utilizând ca soft
Microcal Origin 6.0.
Utilizarea unor seruri umane de control, probe reale cu concentrații cunoscute de hFABP arata faptul ca procedeul asigura un grad ridicat de specificitate, asa cum reiese din figura 6.
Utilizarea unor imunosenzori de unica folosința conduce la evitarea contaminării prin folosirea acelorași senzori la mai multe probe.
Claims (1)
- Revendicare1. Procedeu de bio-functionalizare a unui imunosenzor cu electrozi de aur interdigitati, pentru determinarea cantitativa a proteinei de legare a acizilor grași fracția cardiaca , caracterizat prin aceea ca mai intai se curata suprafețele electrozilor prin introducerea succesiva in metanol p.a. timp de 10 min., in acetona timp de 10 min., intr-o soluție 50% etanol absolut si apa, timp de 10 min., in izopropanol, timp de 10 min., in soluție Pirahna , timp de lOmin., după care se spala de 5 ori cu apa deionizata si cu etanol absolut si se usucă la 70°C, in continuare se funcționalizeaza chimic pentru formarea monostraturilor autoasamblate pentru grefare grupări carboxil, cu o soluție etanolica lOmM ce conține acid 11 mercaptoundecanoic si 3mercaptopropanol in raport molar 8:2, timp de 24 ore, se activeaza grupările carboxil cu transformare in sulfo N-hidroxisuccinimid esteri prin imersare intr-un amestec de Nhidroxisuccinimida 20mM si l-(3-dimetilaminopropil)-Netilcarbodiimida 100 mM, in tampon fosfat salin, timp de 1 ora, se imobilizează anticorpul de captura, un anticorp monoclonal din șoarece, anti-uman, clona 9F3, aria activa a electrozilor incubandu-se cu o soluție de anticorp8pg/mL, in tampon fosfat salin, timp de 12 ore, la 4°C,dupa care se spala cu tampon fosfat salin, se blochează cu o soluție de albumina bovina serica 1%, in tampon fosfat salin, timp de 1 ora, la temperatura camerei, apoi se spala din nou cu fosfat tampon salin, si se mai verifica bio-functionalizarea prin metoda spectrometriei de impedanta electrochimică.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA201201059A RO129602A2 (ro) | 2012-12-21 | 2012-12-21 | Procedeu de bio-funcţionalizare a unui imunosenzor pentru determinarea cantitativă a unui marker cardiac |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA201201059A RO129602A2 (ro) | 2012-12-21 | 2012-12-21 | Procedeu de bio-funcţionalizare a unui imunosenzor pentru determinarea cantitativă a unui marker cardiac |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO129602A2 true RO129602A2 (ro) | 2014-06-30 |
Family
ID=51013889
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ROA201201059A RO129602A2 (ro) | 2012-12-21 | 2012-12-21 | Procedeu de bio-funcţionalizare a unui imunosenzor pentru determinarea cantitativă a unui marker cardiac |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RO (1) | RO129602A2 (ro) |
-
2012
- 2012-12-21 RO ROA201201059A patent/RO129602A2/ro unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108254550B (zh) | 检测ck-mb的时间分辨荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法 | |
| Tian et al. | Oriented antibody-assembled metal–organic frameworks for persistent wearable sweat Cortisol detection | |
| Yu et al. | Aptamer-based solution-gated graphene transistors for highly sensitive and real-time detection of thrombin molecules | |
| Gogola et al. | Label-free electrochemical immunosensor for quick detection of anti-hantavirus antibody | |
| WO2014060454A1 (en) | Immunoassay using electrochemical detection | |
| US7658825B2 (en) | Measuring device and measuring method for detecting analytes | |
| Liu et al. | Electrochemical biosensors based on saliva electrolytes for rapid detection and diagnosis | |
| Alba-Patiño et al. | Nanoparticle reservoirs for paper-only immunosensors | |
| CN110988081A (zh) | 诊断结核病的方法 | |
| EP3076177A1 (en) | Immunochromatography-assisted detection method | |
| WO2022049540A1 (en) | An electrochemical biosensor | |
| Arévalo et al. | Electrochemical immunoplatform to assist in the diagnosis and classification of breast cancer through the determination of matrix-metalloproteinase-9 | |
| CN104614530A (zh) | 检测胃蛋白酶原i和ii的试纸条以及检测方法与应用 | |
| KR20190127349A (ko) | 소변 내 바이오마커의 농도를 전기화학적으로 측정하는 방법 | |
| CN117129541A (zh) | 多通道传感贴片和基于该贴片的伤口感染集成检测装置 | |
| CN103018456A (zh) | 降钙素原检测试纸条及其制备方法 | |
| Yang et al. | The preparation of reagentless electrochemical immunosensor based on a nano-gold and chitosan hybrid film for human chorionic gonadotrophin | |
| Jung et al. | Analysis of C-reactive protein on amide-linked N-hydroxysuccinimide− dextran arrays with a spectral surface plasmon resonance biosensor for serodiagnosis | |
| CN105699458A (zh) | 用于NT-proBNP检测的新型免疫传感器及其制备方法 | |
| RU2032908C1 (ru) | Устройство для определения биологически активных соединений в биологических жидкостях и способ изготовления чувствительного элемента | |
| JP6366047B2 (ja) | 抗体抗原反応評価方法 | |
| CN115575645A (zh) | 一种三联免疫荧光定量检测卡及试剂盒 | |
| Gupta et al. | Multilayer label-free non-faradic electrochemical impedance immunosensor for cortisol detection | |
| Wu et al. | An amplified mass piezoelectric immunosensor for Schistosoma japonicum | |
| Agafonova et al. | Quartz crystal microbalance for the cardiac markers/antibodies binding kinetic measurements in the plasma samples |