RO121387B1 - Producerea acidului gama linolenic printr-o delta6-desaturază - Google Patents
Producerea acidului gama linolenic printr-o delta6-desaturază Download PDFInfo
- Publication number
- RO121387B1 RO121387B1 RO97-01202A RO9701202A RO121387B1 RO 121387 B1 RO121387 B1 RO 121387B1 RO 9701202 A RO9701202 A RO 9701202A RO 121387 B1 RO121387 B1 RO 121387B1
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- desaturase
- plant
- nucleic acid
- gla
- seq
- Prior art date
Links
- 235000020664 gamma-linolenic acid Nutrition 0.000 title claims abstract description 99
- VZCCETWTMQHEPK-QNEBEIHSSA-N gamma-linolenic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC(O)=O VZCCETWTMQHEPK-QNEBEIHSSA-N 0.000 title claims abstract description 92
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 18
- VZCCETWTMQHEPK-UHFFFAOYSA-N gamma-Linolensaeure Natural products CCCCCC=CCC=CCC=CCCCCC(O)=O VZCCETWTMQHEPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 15
- 229960002733 gamolenic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 15
- 108010037138 Linoleoyl-CoA Desaturase Proteins 0.000 title abstract description 9
- 102100034544 Acyl-CoA 6-desaturase Human genes 0.000 title abstract description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 63
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 62
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 62
- DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N alpha-linolenic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 claims abstract description 6
- KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N linolenic acid Natural products CC=CCCC=CCC=CCCCCCCCC(O)=O KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 83
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 59
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 44
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 42
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 42
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 41
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 35
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 claims description 30
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 claims description 30
- 241000192542 Anabaena Species 0.000 claims description 28
- 241000192584 Synechocystis Species 0.000 claims description 24
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 20
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 16
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims description 15
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 15
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 14
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 claims description 11
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 claims description 11
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 claims description 10
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 9
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 claims description 8
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 claims description 8
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 claims description 8
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 claims description 8
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 claims description 7
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 claims description 7
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 7
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 7
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 7
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 claims description 7
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims description 7
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims description 7
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 6
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims description 6
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 claims description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 5
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 claims description 4
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 4
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 4
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 claims description 4
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J sodium diphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 claims description 4
- 229940048086 sodium pyrophosphate Drugs 0.000 claims description 4
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 claims description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 3
- 239000000411 inducer Substances 0.000 claims description 3
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 235000003869 genetically modified organism Nutrition 0.000 claims description 2
- HBZVNWNSRNTWPS-UHFFFAOYSA-N 6-amino-4-hydroxynaphthalene-2-sulfonic acid Chemical compound C1=C(S(O)(=O)=O)C=C(O)C2=CC(N)=CC=C21 HBZVNWNSRNTWPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- LMKYZBGVKHTLTN-NKWVEPMBSA-N D-nopaline Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)N[C@@H](C(O)=O)CCC(O)=O LMKYZBGVKHTLTN-NKWVEPMBSA-N 0.000 claims 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 abstract description 32
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 abstract description 12
- 238000010276 construction Methods 0.000 abstract description 9
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 73
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 61
- 241000282320 Panthera leo Species 0.000 description 60
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 27
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 23
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 22
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 22
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 22
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 21
- 238000001030 gas--liquid chromatography Methods 0.000 description 18
- 235000019387 fatty acid methyl ester Nutrition 0.000 description 16
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 14
- 230000006870 function Effects 0.000 description 13
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 13
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 13
- 241000192707 Synechococcus Species 0.000 description 12
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 11
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 11
- 101710159752 Poly(3-hydroxyalkanoate) polymerase subunit PhaE Proteins 0.000 description 10
- 101710130262 Probable Vpr-like protein Proteins 0.000 description 10
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 9
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 9
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 9
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 8
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 8
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- 101000833492 Homo sapiens Jouberin Proteins 0.000 description 7
- 101000651236 Homo sapiens NCK-interacting protein with SH3 domain Proteins 0.000 description 7
- 102100024407 Jouberin Human genes 0.000 description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 6
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 6
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 description 5
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 5
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 5
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 5
- 241000219194 Arabidopsis Species 0.000 description 4
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 4
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 4
- WEQJQNWXCSUVMA-RYUDHWBXSA-N Phe-Pro Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N1[C@@H](CCC1)C([O-])=O)C1=CC=CC=C1 WEQJQNWXCSUVMA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 4
- 235000010503 Plantago lanceolata Nutrition 0.000 description 4
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 4
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 4
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 3
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710129170 Extensin Proteins 0.000 description 3
- GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 239000013601 cosmid vector Substances 0.000 description 3
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 108010036413 histidylglycine Proteins 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 3
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 3
- LGHXTTIAZFVCCU-SSVNFBSYSA-N (2E,4E,6E,8E)-octadeca-2,4,6,8-tetraenoic acid Chemical compound CCCCCCCCC\C=C\C=C\C=C\C=C\C(O)=O LGHXTTIAZFVCCU-SSVNFBSYSA-N 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- OMSMPWHEGLNQOD-UWVGGRQHSA-N Asn-Phe Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OMSMPWHEGLNQOD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- QIRJQYQOIKBPBZ-IHRRRGAJSA-N Asn-Tyr-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O QIRJQYQOIKBPBZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000004355 Borago officinalis Species 0.000 description 2
- 235000007689 Borago officinalis Nutrition 0.000 description 2
- 241001464430 Cyanobacterium Species 0.000 description 2
- JAHCWGSVNZXHRR-SVSWQMSJSA-N Cys-Thr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CS)N JAHCWGSVNZXHRR-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 2
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 2
- HKTRDWYCAUTRRL-YUMQZZPRSA-N Glu-His Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 HKTRDWYCAUTRRL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- VAXIVIPMCTYSHI-YUMQZZPRSA-N Gly-His-Asp Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)CN VAXIVIPMCTYSHI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- JBCLFWXMTIKCCB-VIFPVBQESA-N Gly-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTUSJASXLGLJSR-OSUNSFLBSA-N Ile-Arg-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N QTUSJASXLGLJSR-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 2
- LLHYWBGDMBGNHA-VGDYDELISA-N Ile-Cys-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N LLHYWBGDMBGNHA-VGDYDELISA-N 0.000 description 2
- KTGFOCFYOZQVRJ-ZKWXMUAHSA-N Ile-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O KTGFOCFYOZQVRJ-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- UCGDDTHMMVWVMV-FSPLSTOPSA-N Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O UCGDDTHMMVWVMV-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 2
- TUYOFUHICRWDGA-CIUDSAMLSA-N Ile-Met Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCSC TUYOFUHICRWDGA-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N L-Met-L-Phe Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NTBFKPBULZGXQL-KKUMJFAQSA-N Lys-Asp-Tyr Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NTBFKPBULZGXQL-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N Phe-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 2
- OQCXTUQTKQFDCX-HTUGSXCWSA-N Thr-Glu-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N)O OQCXTUQTKQFDCX-HTUGSXCWSA-N 0.000 description 2
- WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N Thr-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 2
- PELIQFPESHBTMA-WLTAIBSBSA-N Thr-Tyr-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PELIQFPESHBTMA-WLTAIBSBSA-N 0.000 description 2
- XGZBEGGGAUQBMB-KJEVXHAQSA-N Tyr-Pro-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N)O XGZBEGGGAUQBMB-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 description 2
- -1 amino acid motifs lipid Chemical class 0.000 description 2
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 2
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 description 2
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 238000002169 hydrotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 108010031424 isoleucyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 2
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 108010053037 kyotorphin Proteins 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 108010068488 methionylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 230000031787 nutrient reservoir activity Effects 0.000 description 2
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 2
- 235000020777 polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 2
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 2
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 2
- AXFMEGAFCUULFV-BLFANLJRSA-N (2s)-2-[[(2s)-1-[(2s,3r)-2-amino-3-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]pentanedioic acid Chemical compound CC[C@@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AXFMEGAFCUULFV-BLFANLJRSA-N 0.000 description 1
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 description 1
- 108700002172 Arabidopsis fad3 Proteins 0.000 description 1
- 101100401088 Arabidopsis thaliana MES10 gene Proteins 0.000 description 1
- JSLGXODUIAFWCF-WDSKDSINSA-N Arg-Asn Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JSLGXODUIAFWCF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- PQWTZSNVWSOFFK-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Asn Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)CN=C(N)N PQWTZSNVWSOFFK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- JSHVMZANPXCDTL-GMOBBJLQSA-N Arg-Asp-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JSHVMZANPXCDTL-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 1
- HAVKMRGWNXMCDR-STQMWFEESA-N Arg-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O HAVKMRGWNXMCDR-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- QEHMMRSQJMOYNO-DCAQKATOSA-N Arg-His-Asn Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N QEHMMRSQJMOYNO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- PQBHGSGQZSOLIR-RYUDHWBXSA-N Arg-Phe Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PQBHGSGQZSOLIR-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- XNSKSTRGQIPTSE-ACZMJKKPSA-N Arg-Thr Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O XNSKSTRGQIPTSE-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- NLCDVZJDEXIDDL-BIIVOSGPSA-N Asn-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)C(=O)O NLCDVZJDEXIDDL-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 1
- FFMIYIMKQIMDPK-BQBZGAKWSA-N Asn-His Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 FFMIYIMKQIMDPK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- ODBSSLHUFPJRED-CIUDSAMLSA-N Asn-His-Asn Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N ODBSSLHUFPJRED-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- MQLZLIYPFDIDMZ-HAFWLYHUSA-N Asn-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O MQLZLIYPFDIDMZ-HAFWLYHUSA-N 0.000 description 1
- NYGILGUOUOXGMJ-YUMQZZPRSA-N Asn-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O NYGILGUOUOXGMJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- KAZKWIKPEPABOO-IHRRRGAJSA-N Asn-Met-Tyr Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N KAZKWIKPEPABOO-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- GFGUPLIETCNQGF-DCAQKATOSA-N Asn-Pro-His Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O GFGUPLIETCNQGF-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- SZNGQSBRHFMZLT-IHRRRGAJSA-N Asn-Pro-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SZNGQSBRHFMZLT-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- DAYDURRBMDCCFL-AAEUAGOBSA-N Asn-Trp-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N DAYDURRBMDCCFL-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 1
- CPYHLXSGDBDULY-IHPCNDPISA-N Asn-Trp-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O CPYHLXSGDBDULY-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- UGIBTKGQVWFTGX-BIIVOSGPSA-N Asp-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)O UGIBTKGQVWFTGX-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 1
- AMRANMVXQWXNAH-ZLUOBGJFSA-N Asp-Cys-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O AMRANMVXQWXNAH-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- PDECQIHABNQRHN-GUBZILKMSA-N Asp-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O PDECQIHABNQRHN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N Asp-Ile Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZARXTZFGQZBYFO-JQWIXIFHSA-N Asp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 ZARXTZFGQZBYFO-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 1
- OMPJBNCRMGITSC-UHFFFAOYSA-N Benzoylperoxide Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OOC(=O)C1=CC=CC=C1 OMPJBNCRMGITSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001072256 Boraginaceae Species 0.000 description 1
- 101100015199 Caenorhabditis elegans gly-11 gene Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- AYKQJQVWUYEZNU-IMJSIDKUSA-N Cys-Asn Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O AYKQJQVWUYEZNU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- XZFYRXDAULDNFX-UWVGGRQHSA-N Cys-Phe Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- VTTSANCGJWLPNC-ZPFDUUQYSA-N Glu-Arg-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O VTTSANCGJWLPNC-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- AFODTOLGSZQDSL-PEFMBERDSA-N Glu-Asn-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N AFODTOLGSZQDSL-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- XIKYNVKEUINBGL-IUCAKERBSA-N Glu-His-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(O)=O XIKYNVKEUINBGL-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- SNFUTDLOCQQRQD-ZKWXMUAHSA-N Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SNFUTDLOCQQRQD-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- BKRQSECBKKCCKW-HVTMNAMFSA-N Glu-Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N BKRQSECBKKCCKW-HVTMNAMFSA-N 0.000 description 1
- SXGAGTVDWKQYCX-BQBZGAKWSA-N Glu-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SXGAGTVDWKQYCX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- LLEUXCDZPQOJMY-AAEUAGOBSA-N Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 LLEUXCDZPQOJMY-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 1
- YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N Glu-Tyr Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- MFYLRRCYBBJYPI-JYJNAYRXSA-N Glu-Tyr-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O MFYLRRCYBBJYPI-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- KGVHCTWYMPWEGN-FSPLSTOPSA-N Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN KGVHCTWYMPWEGN-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- ITZOBNKQDZEOCE-NHCYSSNCSA-N Gly-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)CN ITZOBNKQDZEOCE-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- FCKPEGOCSVZPNC-WHOFXGATSA-N Gly-Ile-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 FCKPEGOCSVZPNC-WHOFXGATSA-N 0.000 description 1
- XVYKMNXXJXQKME-XEGUGMAKSA-N Gly-Ile-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XVYKMNXXJXQKME-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 1
- AFWYPMDMDYCKMD-KBPBESRZSA-N Gly-Leu-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 AFWYPMDMDYCKMD-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- CVFOYJJOZYYEPE-KBPBESRZSA-N Gly-Lys-Tyr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O CVFOYJJOZYYEPE-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- PFMUCCYYAAFKTH-YFKPBYRVSA-N Gly-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN PFMUCCYYAAFKTH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- UWQDKRIZSROAKS-FJXKBIBVSA-N Gly-Met-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O UWQDKRIZSROAKS-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 1
- OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 1
- AJHCSUXXECOXOY-NSHDSACASA-N Gly-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- WSLHFAFASQFMSK-SFTDATJTSA-N Gly-Trp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 WSLHFAFASQFMSK-SFTDATJTSA-N 0.000 description 1
- XBGGUPMXALFZOT-VIFPVBQESA-N Gly-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- NGBGZCUWFVVJKC-IRXDYDNUSA-N Gly-Tyr-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 NGBGZCUWFVVJKC-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 1
- PDSUIXMZYNURGI-AVGNSLFASA-N His-Arg-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 PDSUIXMZYNURGI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- SOFSRBYHDINIRG-QTKMDUPCSA-N His-Arg-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N)O SOFSRBYHDINIRG-QTKMDUPCSA-N 0.000 description 1
- VOKCBYNCZVSILJ-KKUMJFAQSA-N His-Asn-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O VOKCBYNCZVSILJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- MDCTVRUPVLZSPG-BQBZGAKWSA-N His-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 MDCTVRUPVLZSPG-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- LYSMQLXUCAKELQ-DCAQKATOSA-N His-Asp-Arg Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N LYSMQLXUCAKELQ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- BDHUXUFYNUOUIT-SRVKXCTJSA-N His-Asp-Lys Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N BDHUXUFYNUOUIT-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- YTKOTXRIWQHSAZ-GUBZILKMSA-N His-Glu-Cys Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N YTKOTXRIWQHSAZ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- LYCVKHSJGDMDLM-LURJTMIESA-N His-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 LYCVKHSJGDMDLM-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- CNHSMSFYVARZLI-YJRXYDGGSA-N His-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CNHSMSFYVARZLI-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- XMAUFHMAAVTODF-STQMWFEESA-N His-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 XMAUFHMAAVTODF-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- IXQGOKWTQPCIQM-YJRXYDGGSA-N His-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O IXQGOKWTQPCIQM-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- YERBCFWVWITTEJ-NAZCDGGXSA-N His-Trp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CC3=CN=CN3)N)O YERBCFWVWITTEJ-NAZCDGGXSA-N 0.000 description 1
- VLDVBZICYBVQHB-IUCAKERBSA-N His-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CN=CN1 VLDVBZICYBVQHB-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- WKXVAXOSIPTXEC-HAFWLYHUSA-N Ile-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O WKXVAXOSIPTXEC-HAFWLYHUSA-N 0.000 description 1
- VNDQNDYEPSXHLU-JUKXBJQTSA-N Ile-His-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N VNDQNDYEPSXHLU-JUKXBJQTSA-N 0.000 description 1
- BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)[C@@H](C)CC BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N 0.000 description 1
- UWBDLNOCIDGPQE-GUBZILKMSA-N Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN UWBDLNOCIDGPQE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- RMNMUUCYTMLWNA-ZPFDUUQYSA-N Ile-Lys-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N RMNMUUCYTMLWNA-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N Ile-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FQYQMFCIJNWDQZ-CYDGBPFRSA-N Ile-Pro-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 FQYQMFCIJNWDQZ-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- WCNWGAUZWWSYDG-SVSWQMSJSA-N Ile-Thr-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N WCNWGAUZWWSYDG-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 1
- MITYXXNZSZLHGG-OBAATPRFSA-N Ile-Trp-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CC3=CC=C(C=C3)O)C(=O)O)N MITYXXNZSZLHGG-OBAATPRFSA-N 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N L-cysteinylglycine Chemical compound SC[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N L-leucine-L-tyrosine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000207740 Lemna minor Species 0.000 description 1
- 235000006439 Lemna minor Nutrition 0.000 description 1
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- LHSGPCFBGJHPCY-STQMWFEESA-N Leu-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LHSGPCFBGJHPCY-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- GAOJCVKPIGHTGO-UWVGGRQHSA-N Lys-Arg-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O GAOJCVKPIGHTGO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- IBQMEXQYZMVIFU-SRVKXCTJSA-N Lys-Asp-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N IBQMEXQYZMVIFU-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- UETQMSASAVBGJY-QWRGUYRKSA-N Lys-Gly-His Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 UETQMSASAVBGJY-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- IZJGPPIGYTVXLB-FQUUOJAGSA-N Lys-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N IZJGPPIGYTVXLB-FQUUOJAGSA-N 0.000 description 1
- NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- DAHQKYYIXPBESV-UWVGGRQHSA-N Lys-Met-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(O)=O DAHQKYYIXPBESV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N Lys-Phe Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- PSVAVKGDUAKZKU-BZSNNMDCSA-N Lys-Tyr-His Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O PSVAVKGDUAKZKU-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- MNNKPHGAPRUKMW-BPUTZDHNSA-N Met-Asp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(O)=O)=CNC2=C1 MNNKPHGAPRUKMW-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- JACAKCWAOHKQBV-UWVGGRQHSA-N Met-Gly-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN JACAKCWAOHKQBV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- LQMHZERGCQJKAH-STQMWFEESA-N Met-Gly-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 LQMHZERGCQJKAH-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- HGCNKOLVKRAVHD-RYUDHWBXSA-N Met-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- DZMGFGQBRYWJOR-YUMQZZPRSA-N Met-Pro Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O DZMGFGQBRYWJOR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- PESQCPHRXOFIPX-RYUDHWBXSA-N Met-Tyr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PESQCPHRXOFIPX-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- 241000235575 Mortierella Species 0.000 description 1
- XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N N-L-cysteinyl-L-phenylalanine Natural products SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PESQCPHRXOFIPX-UHFFFAOYSA-N N-L-methionyl-L-tyrosine Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PESQCPHRXOFIPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000219925 Oenothera Species 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- BXNGIHFNNNSEOS-UWVGGRQHSA-N Phe-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 BXNGIHFNNNSEOS-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- KKYHKZCMETTXEO-AVGNSLFASA-N Phe-Cys-Glu Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N KKYHKZCMETTXEO-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- OYQBFWWQSVIHBN-FHWLQOOXSA-N Phe-Glu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O OYQBFWWQSVIHBN-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 1
- OHUXOEXBXPZKPT-STQMWFEESA-N Phe-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 OHUXOEXBXPZKPT-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- SFKOEHXABNPLRT-KBPBESRZSA-N Phe-His-Gly Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)NCC(O)=O SFKOEHXABNPLRT-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- ONORAGIFHNAADN-LLLHUVSDSA-N Phe-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N ONORAGIFHNAADN-LLLHUVSDSA-N 0.000 description 1
- PYOHODCEOHCZBM-RYUDHWBXSA-N Phe-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 PYOHODCEOHCZBM-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- MGLBSROLWAWCKN-FCLVOEFKSA-N Phe-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MGLBSROLWAWCKN-FCLVOEFKSA-N 0.000 description 1
- RVEVENLSADZUMS-IHRRRGAJSA-N Phe-Pro-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RVEVENLSADZUMS-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- NJONQBYLTANINY-IHPCNDPISA-N Phe-Trp-Asn Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O NJONQBYLTANINY-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N Phe-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- AGTHXWTYCLLYMC-FHWLQOOXSA-N Phe-Tyr-Glu Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 AGTHXWTYCLLYMC-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 1
- MMPBPRXOFJNCCN-ZEWNOJEFSA-N Phe-Tyr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O MMPBPRXOFJNCCN-ZEWNOJEFSA-N 0.000 description 1
- SJRQWEDYTKYHHL-SLFFLAALSA-N Phe-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CC3=CC=CC=C3)N)C(=O)O SJRQWEDYTKYHHL-SLFFLAALSA-N 0.000 description 1
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 1
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 1
- 235000001855 Portulaca oleracea Nutrition 0.000 description 1
- GLEOIKLQBZNKJZ-WDSKDSINSA-N Pro-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 GLEOIKLQBZNKJZ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- ULIWFCCJIOEHMU-BQBZGAKWSA-N Pro-Gly-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 ULIWFCCJIOEHMU-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- HAAQQNHQZBOWFO-LURJTMIESA-N Pro-Gly-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 HAAQQNHQZBOWFO-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- JUJGNDZIKKQMDJ-IHRRRGAJSA-N Pro-His-His Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(O)=O JUJGNDZIKKQMDJ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- RVQDZELMXZRSSI-IUCAKERBSA-N Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 RVQDZELMXZRSSI-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- RTQKBZIRDWZLDF-BZSNNMDCSA-N Pro-Pro-Trp Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)O)CCN1C(=O)[C@@H]1CCCN1 RTQKBZIRDWZLDF-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- OIDKVWTWGDWMHY-RYUDHWBXSA-N Pro-Tyr Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=C(O)C=C1 OIDKVWTWGDWMHY-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- QHSSUIHLAIWXEE-IHRRRGAJSA-N Pro-Tyr-Asn Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O QHSSUIHLAIWXEE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 102000055027 Protein Methyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 108700040121 Protein Methyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 235000001537 Ribes X gardonianum Nutrition 0.000 description 1
- 235000001535 Ribes X utile Nutrition 0.000 description 1
- 235000016919 Ribes petraeum Nutrition 0.000 description 1
- 244000281247 Ribes rubrum Species 0.000 description 1
- 235000002355 Ribes spicatum Nutrition 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 244000300264 Spinacia oleracea Species 0.000 description 1
- 235000009337 Spinacia oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000192581 Synechocystis sp. Species 0.000 description 1
- FQPQPTHMHZKGFM-XQXXSGGOSA-N Thr-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O FQPQPTHMHZKGFM-XQXXSGGOSA-N 0.000 description 1
- IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N Thr-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N 0.000 description 1
- KRPKYGOFYUNIGM-XVSYOHENSA-N Thr-Asp-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)N)O KRPKYGOFYUNIGM-XVSYOHENSA-N 0.000 description 1
- XSTGOZBBXFKGHA-YJRXYDGGSA-N Thr-His-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N)O XSTGOZBBXFKGHA-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- WYLAVUAWOUVUCA-XVSYOHENSA-N Thr-Phe-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WYLAVUAWOUVUCA-XVSYOHENSA-N 0.000 description 1
- QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N Thr-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- NDXSOKGYKCGYKT-VEVYYDQMSA-N Thr-Pro-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NDXSOKGYKCGYKT-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- MYNYCUXMIIWUNW-IEGACIPQSA-N Thr-Trp-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O MYNYCUXMIIWUNW-IEGACIPQSA-N 0.000 description 1
- VMSSYINFMOFLJM-KJEVXHAQSA-N Thr-Tyr-Met Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N)O VMSSYINFMOFLJM-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- LVRFMARKDGGZMX-IZPVPAKOSA-N Thr-Tyr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LVRFMARKDGGZMX-IZPVPAKOSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- LCPVBXOHXMBLFW-JSGCOSHPSA-N Trp-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)=CNC2=C1 LCPVBXOHXMBLFW-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- HQVKQINPFOCIIV-BVSLBCMMSA-N Trp-Arg-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 HQVKQINPFOCIIV-BVSLBCMMSA-N 0.000 description 1
- GRQCSEWEPIHLBI-JQWIXIFHSA-N Trp-Asn Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 GRQCSEWEPIHLBI-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 1
- HYLNRGXEQACDKG-NYVOZVTQSA-N Trp-Asn-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O HYLNRGXEQACDKG-NYVOZVTQSA-N 0.000 description 1
- PWIQCLSQVQBOQV-AAEUAGOBSA-N Trp-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 PWIQCLSQVQBOQV-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 1
- PITVQFJBUFDJDD-XEGUGMAKSA-N Trp-Ile Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O)=CNC2=C1 PITVQFJBUFDJDD-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 1
- KIMOCKLJBXHFIN-YLVFBTJISA-N Trp-Ile-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 KIMOCKLJBXHFIN-YLVFBTJISA-N 0.000 description 1
- IMMPMHKLUUZKAZ-WMZOPIPTSA-N Trp-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 IMMPMHKLUUZKAZ-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- JXNRXNCCROJZFB-RYUDHWBXSA-N Tyr-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 JXNRXNCCROJZFB-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- JFDGVHXRCKEBAU-KKUMJFAQSA-N Tyr-Asp-Lys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O JFDGVHXRCKEBAU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- WPVGRKLNHJJCEN-BZSNNMDCSA-N Tyr-Asp-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WPVGRKLNHJJCEN-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- OHOVFPKXPZODHS-SJWGOKEGSA-N Tyr-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N OHOVFPKXPZODHS-SJWGOKEGSA-N 0.000 description 1
- AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- KYPMKDGKAYQCHO-RYUDHWBXSA-N Tyr-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 KYPMKDGKAYQCHO-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- CGWAPUBOXJWXMS-HOTGVXAUSA-N Tyr-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 CGWAPUBOXJWXMS-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N Tyr-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- GMOLURHJBLOBFW-ONGXEEELSA-N Val-Gly-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N GMOLURHJBLOBFW-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- CPGJELLYDQEDRK-NAKRPEOUSA-N Val-Ile-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CPGJELLYDQEDRK-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- UKEVLVBHRKWECS-LSJOCFKGSA-N Val-Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N UKEVLVBHRKWECS-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- GIAZPLMMQOERPN-YUMQZZPRSA-N Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O GIAZPLMMQOERPN-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- TVGWMCTYUFBXAP-QTKMDUPCSA-N Val-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O TVGWMCTYUFBXAP-QTKMDUPCSA-N 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 108010058966 bacteriophage T7 induced DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000013602 bacteriophage vector Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000035601 cold sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 244000038559 crop plants Species 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 108010011713 delta-15 desaturase Proteins 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 108010091371 endoglucanase 1 Proteins 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 235000004626 essential fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000004129 fatty acid metabolism Effects 0.000 description 1
- 229940013317 fish oils Drugs 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 238000011331 genomic analysis Methods 0.000 description 1
- 108010079547 glutamylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 101150089730 gly-10 gene Proteins 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010050475 glycyl-leucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 1
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010084389 glycyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000007407 health benefit Effects 0.000 description 1
- 108010085325 histidylproline Proteins 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 108010012058 leucyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 229940049918 linoleate Drugs 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 239000007003 mineral medium Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 239000006870 ms-medium Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 108010012581 phenylalanylglutamate Proteins 0.000 description 1
- 108010083476 phenylalanyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 1
- 230000010152 pollination Effects 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 108010079317 prolyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 102220013334 rs368367224 Human genes 0.000 description 1
- 235000021003 saturated fats Nutrition 0.000 description 1
- 230000005562 seed maturation Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 208000033692 susceptibility to 1 coronary heart disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 235000021081 unsaturated fats Nutrition 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
- C12N9/0083—Miscellaneous (1.14.99)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
- C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
- C12N15/8247—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine involving modified lipid metabolism, e.g. seed oil composition
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/6445—Glycerides
- C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y114/00—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14)
- C12Y114/19—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14) with oxidation of a pair of donors resulting in the reduction of molecular oxygen to two molecules of water (1.14.19)
- C12Y114/19003—Linoleoyl-CoA desaturase (1.14.19.3)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Acidul linoleic este convertit în acid gama-linolenic de enzima delta6-desaturază. Prezenta invenţie se referă la acizi nucleici izolaţi, care cuprind gena delta6-desaturază. Mai precis, acidulnucleic cuprinde promotorul, regiunile de codificare ?i regiunile terminale ale genei delta6-desaturază. Prezenta invenţie furnizează construcţii recombinante care cuprind regiunea de codificarea delta6-desaturazei, în combinaţie funcţională cu secvenţe regulatoare heterologe. Acizii nucleici ?i construcţiile recombinante ale prezentei invenţii sunt utile în producerea de GLA în organisme transgenice.
Description
Invenția se referă la producerea acidului gama linolenic printr-o Δδ-desaturază, mai exact invenția se referă la acizi nucleici izolați care codifică Δ6 desaturaza, la vectori de expresie, la celule, la organisme modificate genetic, la procedee de obținere a unor plante modificate genetic, precum și la utilizări ale acizilor nucleici izolați și ale vectorilor de expresie.
Acidul linoleic (18:2) (LA) se transformă în acid gama linolenic (18:3) (GLA) prin enzima Δδ-desaturază. Când această enzimă, sau acidul nucleic care o codifică se transferă în celule producătoare de LA, se produce GLA.
Acizii grași nesaturați cum ar fi acizii linoleic (C18A9·12) și α-linolenic (C18A9·12,15) sunt constituenți esențiali ai hranei și nu pot fi sintetizați de vertebrate deoarece celulele vertebratelor pot introduce legături duble în poziția Δ9 a acizilor grași, dar nu pot introduce duble legături suplimentare între legătura dublă Δ9 și metilul terminal al catenei acidului gras. Deoarece ei sunt precursori ai altor produse, acizii linoleic și α-linolenic sunt acizi grași esențiali și, de obicei, sunt obținuți din surse vegetale. Acidul linoleic poate fi transformat de către mamifere în acid γ-linolenic (GLA, C19 Δ6·9·12), care în schimb, poate fi transformat în acid arahidonic (20:4), un acid gras de importanță critică, deoarece el este un precursor esențial al majorității prostaglandinelor.
Asigurarea acidului linoleic prin regim alimentar, în virtutea că are ca urmare conversia sa la GLA și acid arahidonic, satisface nevoia alimentară de GLA și acid arahidonic. Cu toate acestea, a fost demonstrată o relație între consumul de grăsimi saturate și riscurile asupra sănătății, cum ar fi hipercolesterolemia, ateroscleroza și alte tulburări clinice care se corelează cu susceptibilitate pentru boală coronară, în timp ce consumul de grăsimi nesaturate s-a asociat cu descreșterea concentrației colesterolului sanguin și cu riscul redus de ateroscleroză. Beneficiile terapeutice ale GLA alimentar, pot rezulta din faptul că GLA este un precursor al acidului arahidonic și contribuie astfel, ulterior, la sinteza prostaglandinei. în mod corespunzător, consumul de mai mult GLA nesaturat în locul acidului linoleic are beneficii potențiale asupra sănătății. Totuși, GLA nu este prezent în nicio plantă cultivată în scop comercial.
WO 9306712 descrie un acid nucleic izolat care codifică Δδ-desaturaza bacteriană, în mod specific Δδ-desaturaza de tip Synechocystis.
Acidul linoleic se transformă în GLA prin enzima Δδ-desaturază. Enzima A6-desaturază, care este o enzimă cu mai mult de 350 aminoacizi, are un domeniu de legare membrană și un centru activ pentru desaturarea acizilor grași. Când această enzimă se transferă în celule care produc endogen acid linoleic, dar nu și GLA, se produce GLA.
Problema tehnică pe care încearcă să o rezolve prezenta invenție este de a furniza acizi nucleici și construcții recombinante cu ajutorul cărora să se determine producerea de GLA în organisme transgenice.
Un obiect al prezentei invenții îl reprezintă un acid nucleic izolat care codifică Δ6desaturaza și care este selectat dintre:
a) un acid nucleic care codifică secvența de aminoacizi ID SECV NR: 5 sau un fragment al acestuia;
b) un acid nucleic reprezentat în ID SECV NR:4 sau un fragment al acestuia;
c) un acid nucleic care cuprinde gena Δδ-desaturaza, care hibridizează cu oricare dintre acizii nucleici de la punctele a) sau b) într-o soluție de hibridizare conținînd 6x SSC, 1x soluție Denharts, 0,05% pirofosfat de sodiu și 100 pg/ml ADN denaturat din spermă de somon la o temperatură de hibridizare de 60°C.
Invenția se mai referă la un acid nucleic izolat care codifică secvența de aminoacizi ID SECV NR: 5.
RO 121387 Β1
Un alt obiect al invenției îl reprezintă un vector care cuprinde oricare din acizii nucleici 1 menționați anterior.
Invenția se mai referă la un vector de expresie care cuprinde oricare dintre acizii 3 nucleici izolați menționați anterior legat operațional la un promotor și, opțional, la un semnal terminal capabil să efectueze expresia produsului genei a numitului acid nucleic izolat. 5
Invenția se mai referă și la o celulă care cuprinde oricare dintre vectorii menționați anterior.7
Un alt obiect al invenției îl reprezintă un organism modificat genetic non-uman, care este transformat cu oricare dintre vectorii menționați anterior.9
Invenția are ca obiect și o plantă sau descendent al acesteia regenerat dintr-o celulă de plantă care este transformată genetic cu unul din vectorii menționați anterior.11
Invenția se mai referă la un procedeu de obținere a unei plante având conținut crescut de acid gama linolenic - GLA care cuprinde:13 (a) transformarea unei celule de plantă cu oricare dintre acizii nucleici izolați specificați anterior; și15 (b) regenerarea unei plante având conținut crescut de GLA din numita celulă de plantă.17
Invenția se referă și la un procedeu de obținere a unei plante având conținut crescut de acid gama linolenic - GLA care cuprinde:19 (a) transformarea unei celule de plantă cu oricare dintre vectorii menționați anterior;
și21 (b) regenerarea unei plante având conținut crescut de GLA din numita celulă de plantă.23
Invenția se mai referă la utilizarea oricărui acid nucleic izolat menționat anterior sau a oricăruia dintre vectorii la care s-a făcut referire anterior la prepararea unui agent de indu- 25 cere a producerii acidului gama linolenic - GLA într-un organism deficient sau căruia îi lipsește GLA. 27
De asemenea, invenția se mai referă la utilizarea unuia dintre acizii nucleici izolați care codifică Δβ-desaturaza menționați anterior și a unui acid nucleic izolat care codifică 29 A12-desaturaza la prepararea unui agent de inducere a producerii acidului gama linolenic GLA într-un organism deficient sau căruia îi lipsește GLA și acid linoleic - LA. 31
Un alt obiect al invenției îl reprezintă și utilizarea unuia dintre acizii nucleici izolați precizați anterior sau a oricăruia dintre vectorii la care s-a făcut referire anterior pentru pre- 33 pararea unui agent de inducere a producerii de acid octadecatetraeonic într-un organism deficient sau căruia îi lipsește acidul gama linolenic. 35
Invenția se mai referă și la un procedeu de obținere a unei plante având rezistență îmbunătățită la frig, care cuprinde:37 (a) transformarea unei celule de plantă cu oricare dintre acizii nucleici izolați menționați anterior; și39 (b) regenerarea plantei având rezistență îmbunătățită la frig din celula de plantă transformată.41
De asemenea, invenția se mai referă la utilizarea oricărui acid nucleic izolat la s-a făcut referire anterior drept probă de hibridizare pentru identificarea unui acid nucleic izolat, 43 care codifică Δδ-desaturaza de la alte organisme care produc GLA.
Unele dintre avantajele pe care le introduce prezenta invenție constau în aceea că, 45 prin asigurarea genei care codifică A6-desaturaza, se permite producerea organismelor transgenice care conțin Δβ-desaturază funcțională și care produc GLA. Suplimentar față de 47 permiterea producerii de cantități mari de GLA, prezenta invenție asigură noi surse alimentare de GLA. 49
RO 121387 Β1 în continuare, invenția va fi descrisă în detaliu, cu referire la fig. 1...10, care reprezintă:
- fig. 1 - profilurile hidropatice ale secvențelor de aminoacizi deduse ale Δδ-desaturazei (Diagrama A) și A12-desaturazei (Diagrama B) Synechocystis. Regiunile probabile care înconjoară membrana sunt indicate prin linii compacte. Indicele de hidrofobicitate s-a calculat pentru o dimensiune a ferestrei de 19 resturi de aminoacizi [Kyte și colab. (1982) J. Molec. Biol. 157];
- fig. 2 - profilurile cromatografiei gaz-lichid ale tipului sălbatic (Diagrama A) și transgenic (Diagrama B) de Anabaena-,
- fig. 3 - o diagramă a hărților de cosmid cSy75, cSy13 și cSy7, cu regiuni de suprapunere și subclone. Originile subclonelor Csy75, Csy75-3,5 și Csy7 sunt indicate prin linii diagonale întrerupte. Siturile restrictive care au fost inactivate sunt în paranteze;
- fig. 4 - profilurile cromatografiei gaz-lichid ale tipului sălbatic (Diagrama A) și transgenic (Diagrama B) de tutun;
- fig. 5A - secvența ADN a unui cADN izolat din limba-mielului (Borago officinalis) care codifică A6-desaturaza;
- fig. 5B - secvența proteică a cadrului deschis de citire în cADN-ul izolat din limbamielului care codifică A6-desaturaza. Sunt indicate 3 motive de aminoacizi caracteristice desaturazelor și care sunt, în ordine, lipid box, metal box 1 și metal box 2;
- fig. 6 - dendrogramă care prezintă similaritatea A6-desaturazei din limba-mielului cu alte desaturaze legate de membrane. Secvența de aminoacizi a A6-desaturazei din limbamielului s-a comparat la alte desaturaze cunoscute folosind Gene Works (IntelliGenetics). Valorile numerice s-au corelat cu distanțele filogenetice relative dintre subgrupurile comparate;
-fig. 7 - hartă de restricție a 221 .A6.NOS și 121.A6.NOS. în 221 .A6.NOS, porțiunea rămasă a plasmidului este pBI221 și în 121.A6.NOS, porțiunea rămasă a plasmidului este pBI121;
- fig. 8 - profilurile cromatografiei gaz-lichid a celulelor de morcov transfectate mock (Diagrama A) și a celulelor de morcov transfectate cu 221.A6.NOS (Diagrama B). Sunt indicate pozițiile lui 18:2, 18:3 a și 18:3 y(GLA);
- fig. 9 - profilurile cromatografice gaz lichid ale unei frunze de tutun netransformate (Diagrama A) și ale unei frunze de tutun transformată cu 121 .A6.NOS. Sunt indicate pozițiile 18:2,18:3 a, 18:3 y(GLA) și 18:4;
- fig. 10 - profilurile cromatografiei gaz-lichid pentru o frunză de tutun netransformat (Diagrama A) și pentru o frunză de tutun transformat cu 121 .A6.NOS. Sunt indicate pozițiile 18:2, 18:3a și 18:3y(GLA).
Prezenta invenție furnizează acizi nucleici care cuprind gena A6-desaturază. Mai exact, acizii nucleici cuprind promotorii, regiunile de codificare și regiunile terminale ale genelor care codifică A6-desaturaza. Prezenta invenție se mai referă la construcții recombinante, care cuprind o regiune de codificare pentru A6-desaturază în combinație funcțională cu secvențe regulatoare heterologe. Acizii nucleici și construcțiile recombinante ale prezentei invenții sunt utile în producerea de GLA în organisme transgenice.
Prezenta invenție este orientată spre gene izolate din limba-mielului, care codifică Δ6desaturaza. în mod specific, genele izolate cuprind promotori de A6-desaturază, regiuni de codificare și regiuni terminale.
Prezenta invenție este orientată suplimentar spre vectori de expresie care cuprind promotori de A6-desaturază, regiuni de codificare și regiuni terminale.
RO 121387 Β1
Un alt aspect al acestei invenții este orientat spre vectori de expresie care cuprind 1 o regiune de codificare pentru A6-desaturază din limba-mielului, în combinație funcțională cu regiuni regulatoare heterologe, adică elemente care nu sunt derivate de la gena care 3 codifică A6-desaturaza.
De asemenea, prin prezenta invenție sunt furnizate celule și organisme care cuprind 5 vectorii prezentei invenții și descendenții unor astfel de organisme.
într-un aspect suplimentar al prezentei invenții este descrisă o A6-desaturază 7 bacteriană izolată. De asemenea, este asigurată o A6-desaturază vegetală izolată.
Într-un alt aspect, prezenta invenție furnizează o metodă pentru producerea plantelor, 9 având conținut crescut de acid gama linolenic.
De asemenea, prin prezenta invenție este asigurată o metodă pentru producerea 11 plantelor rezistente la frig.
Prezenta invenție asigură acizi nucleici izolați din limba-mielului care codifică Δ6- 13 desaturaza. Pentru a identifica un acid nucleic care codifică Δβ-desaturaza, se izolează ADN de la un organism care produce GLA. Organismul me poate fi, de exemplu, o celulă animală, 15 anumiți fungi (de exemplu, Mortierella), anumite bacterii (de exemplu, Synechocystis), sau anumite plante (limba-mielului, Oenothera, coacăze). Izolarea ADN-ului genomic se poate 17 realiza printr-o diversitate de metode binecunoscute pentru un specialist cu pregătire obișnuită în domeniu, așa cum s-a exemplificat de către Sambrook și colab. (1989) în 19 Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY. ADN-ul izolat se fragmentează prin metode fizice sau prin digestie enzimatică și se donează într-un vector cores- 21 punzător, de exemplu, un vector bacteriofag sau cosmid, prin orice metodă care se poate alege din diversitatea de metode binecunoscute, care pot fi găsite în referințe, cum ar fi, 23 Sambrook și colab. (1989). Vectori de expresie care conțin ADN-ul prezentei invenții sunt în mod specific prevăzuți aici. ADN-ul care codifică A6-desaturaza, se poate identifica prin 25 analiza câștigului funcției. Vectorul care conține ADN-ul fragmentat se transferă, de exemplu, prin infecție, transconjugare, transfecție, într-un organism gazdă care produce acid linoleic, 27 dar nu și GLA. Așa cum s-a folosit aici, transformare se referă, în general, la încorporarea de ADN străin într-o celulă gazdă. Metode pentru introducerea ADN-ului recombinant într-un 29 organism gazdă sunt cunoscute pentru un specialist cu pregătire obișnuită în domeniu și se pot găsi, de exemplu, în Sambrook și colab. (1989). Producerea de GLA de către aceste 31 organisme (adică, câștigul de funcție) este analizat, de exemplu, prin cromatografie de gaze sau alte metode cunoscute specialistului cu pregătire obișnuită. Organisme care sunt induse 33 să producă GLA, adică, au dobândit funcția prin introducerea vectorului, sunt identificate ca exprimând ADN care codifică A6-desaturaza și ADN-ul respectiv se recuperează de la 35 organisme. ADN-ul recuperat poate fi din nou fragmentat, donat cu vectori de expresie și analizat funcțional prin procedurile de mai sus pentru definirea cu mai multă precizie a ADN- 37 ului care codifică A6-desaturaza.
Ca un exemplu, așa cum s-a descris în WO 93/06712, s-a izolat un ADN randomizat 39 de la cianobacteria Synechocystis, Pasteur Culture Collection (PCC) 6803, American Type Culture Collection (ATCC) 27184, s-a donat într-un vector cosmid și s-a introdus prin 41 transconjugare într-o tulpină de cianobacterie Anabaena deficientă în GLA PCC 7120, ATCC 27893. Formarea de GLA din acid linoleic produs de Anabaena este monitorizată prin 43 cromatografie de gaze și se izolează fragmentul ADN corespunzător.
Se secvențează ADN-ul izolat prin metode binecunoscute specialistului cu pregătire 45 obișnuită în domeniu, cum s-a descris de exemplu, în Sambrook și colab. (1989).
S-au izolat molecule ADN care cuprind gene care codifică A6-desaturaza. Mai precis, 47 un ADN de 3588 kilobaze (kb), care cuprinde o genă care codifică A6-desaturaza s-a izolat de la cianobacteria Synechocystis. Secvența nucleotidică a ADN-ului de 3588 kb a fost 49
RO 121387 Β1 determinată și este prezentată în ID SECV NR: 1. Cadrele deschise de citire care definesc regiuni potențiale de codificare sunt prezente de la nucleotida 317 până la 1507 și de la nucleotida 2002, până la 3081. Pentru a defini nucleotidele responsabile pentru codificarea A6-desatu razei, fragmentul de 3588 kb care conferă activitate Δβ-desaturazei se clivează în 2 subfragmente, fiecare dintre ele conținând numai un cadru deschis de citire. Fragmentul ORF1 conține nucleotidele 1 la 1704, în timp ce fragmentul ORF2 conține nucleotidele 1705 la 3588. Fiecare fragment este subclonat în ambele orientări înainte și înapoi într-un vector de expresie de conjugare (AM542, Wolk și colab. [1984] Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81, 1561), care conține un promotor cianobacterian de carboxilază. Constructele rezultate [adică, ORF1(F), ORF1(R), ORF2(F), și ORF2(R)], sunt conjugate la tipul sălbatic de Anabaena, PCC 7120 prin metode standard (vezi, de exemplu, Wolk și colab. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81,1561). Celulele conjugate de Anabaena sunt identificate sub formă de colonii verzi NeoR pe un fundal brun de celule colorate neconjugate după 2 săptămâni de creștere pe mediu selectiv (mediu mineral standard BG11N+ care conține 30 pg/ml de neomicină conform Rippka și colab. (1979), J. Gen. Microbiol., 111,1). Coloniile verzi sunt selectate și crescute în mediu lichid selectiv (BG11N+ cu 15 pg/ml neomicină). Lipidele sunt extrase prin metode standard (de exemplu, Dahmer și colab. (1989), Journal of American Oii Chemical Society 66, 543) din transconjuganții rezultați care conțin constructele ORF1 și ORF2 orientate înainte și invers. Pentru comparație sunt extrase, de asemenea, lipide din culturi de tip sălbatic de Anabaena și Synechocystis. Esterii metilici ai acidului gras sunt analizați prin cromatografie gaz-lichid (GLC), de exemplu cu un cromatograf gaz-lichid Tracor-560 echipat cu un detector de ionizare în flacără de hidrogen și o coloană capilară. Rezultatele analizei GLC sunt prezentate în tabelul 1.
Tabelul 1
Existenja acizilor grași C18 cianobacteriile de tip sălbatic și transgenice
| SURSĂ | 18:0 | 18:1 | 18:2 | γ18:3 | α18:3 | 18:4 |
| Anabaena (tip sălbatic) | + | + | + | - | + | - |
| Anabaena+ORF1 (F) | + | + | + | - | + | - |
| Anabaena+ORF1 (R) | + | + | + | - | + | - |
| Anabaena+ORF2(F) | + | + | + | + | + | + |
| Anabaena+ORF2(R) | + | + | + | - | + | - |
| Synechocystis (tip sălbatic) | + | + | + | + | - | - |
Așa cum s-a stabilit prin analiză GLC, Anabaena deficientă în GLA capătă funcția de a produce GLA când constructul conținând ORF2 orientat înainte s-a introdus prin transconjugare. Transconjuganții conținând constructe cu ORF2 cu orintare în sens invers față de promotorul carboxilazei, sau ORF1 având oricare din orientări nu determină producerea de GLA. Această analiză demonstrează că singurul cadru de citire (ORF2) din fragmentul de 1884 pb codifică A6-desaturaza. Fragmentul de 1884 pb este prezentat ca ID SECV NR: 3. Acest lucru este dovedit de similaritatea globală a profilurilor hidropatice dintre A6-desaturază și Δ12-desaturază [Wada și colab. (1990) Nature 347], așa cum s-a prezentatîn fig. 1, ca (A) și respectiv (B).
De asemenea, în concordanță cu prezenta invenție, s-a izolat un cADN care cuprinde o genă care codifică A6-desaturaza din limba-mielului (Borago officinalis). Secvența nucleotidică a cADN de 1685 kilobaze (kb) a fost determinată și este prezentată în fig. 5A (ID SECV NR: 4).
RO 121387 Β1
Codonul de start ATG și codonul stop sunt subliniați. Secvența de aminoacizi corespunză- 1 toare cadrului de citire deschis din A6-desaturaza din limba-mielului este prezentată în fig. 5B (ID SECV NR: 5). 3
Acizii nucleici izolați care codifică A6-desaturaza pot fi identificați de la alte organisme care produc GLA prin analiza funcției câștigate menționate anterior, sau prin tehnici de 5 hibridizare a acidului nucleic folosind acidul nucleic izolat care codifică A6-desaturaza din limba-mielului, ca o sondă de hibridizare. Metode de donare atât a ADN-ului genomic, cât 7 și a cADN-ului sunt cunoscute de specialiștii în domeniu și sunt avute în vedere în prezenta invenție. Sonda de hibridizare poate să cuprindă întreaga secvență ADN dezvăluită ca ID 9 SECV NR:1 sau ID SECV NR:4, sau un fragment de restricție sau alt fragment ADN al acesteia, inclusiv o sondă oligonucleotidică. Metode pentru donarea genelor omoloage prin hibri- 11 dizare încrucișată sunt cunoscute de către specialistul în domeniu, și pot fi întâlnite, de exemplu, în Sambrook (1989) și Beltz și colab. (1983) Methods in Enzimology 100, 266. 13 înt-o altă metodă de identificare a unei gene care codifică A6-desaturaza de la un organism care produce GLA, se alcătuiește o bancă de cADN din ARN poli-A+ izolat de la 15 ARN polizomal. în scopul eliminării genelor exprimate hiper-abundent din populația de cADN, cADN-uri sau fragmente ale lor corespunzătoare genelor de cADN hiper-abundente sunt 17 folosite ca sonde de hibridizare pentru banca de cADN. Plăcile nehibridizate sunt excizate și coloniile bacteriene rezultate sunt folosite pentru a inocula culturi lichide și secvențate. De 19 exemplu, ca mijloc de eliminare a altor cADN-uri care codifică proteine depozitate în sămânță dintr-o bancă de cADN obținută de la ARN polizomal din limba-mielului, cADN-urile cores- 21 punzătoare proteinelor depozitate în sămânță exprimate abundent, sunt mai întâi hibridizate la banca de cADN. Banca de ADN scăzută este folosită apoi pentru a genera situsuri de 23 secvențe marcate derivate de la cADN-uri (ETS) și astfel de marcaje sunt folosite pentru a scana o bază de date, cum ar fi GenBank pentru identificarea desaturazelor potențiale. 25
Organismele transgenice care capătă funcția de a produce GLA prin introducerea de
ADN care codifică Δ-desaturaza, câștigă de asemenea funcția de a produce acid octadeca- 27 tetraeonic (18:4Δ6'9·12·15). Acidul octadecatetraeonic este de obicei prezent în uleiuri de pește și în unele specii de plante ale familiei Boraginaceae (Craig și colab. [1964] J. Amer. Oii 29 Chem. Soc. 41,209-211; Gross și colab. [1976] Can. J. Plant Sci. 56, 659-664). în organismele transgenice ale prezentei invenții, acidul octadecatetraeonic rezultă prin desaturarea 31 acidului α-linolenic de către A6-desaturază, sau prin desaturarea GLA de către Δ15desaturază. 33
Cei 359 aminoacizi codificați de ORF2, adică cadrul de citire deschis care codifică
A6-desaturaza din Synechocystis, sunt prezentați ca ID SECV NR: 2. Cadrul de citire 35 deschis care codifică A6-desaturaza din limba-mielului este prezentat în ID SECV NR: 5.
Prezenta invenție are în continuare în vedere alte secvențe nucleotidice care codifică amino- 37 acizii ID SECV NR: 5. Este la îndemâna specialistului în domeniu să identifice astfel de secvențe care rezultă, de exemplu, din degenerarea codului genetic. Mai mult, un specialist 39 obișnuit în domeniu poate să determine, prin analiza funcției câștigate precizate anterior, subfragmente mai mici ale fragmentelor cadrelor deschise de citire care codifică A6-desa- 41 turaze.
Prezenta invenție se referă la orice astfel de fragment polipeptidic al A6-desaturazei 43 și la acizii nucleici care le codifică și care mențin activitatea pentru transformarea LA la GLA.
într-un alt aspect al prezentei invenții, se transferă un vector care conține un acid 45 nucleic al prezentei invenții, sau un fragment mai mic care conține promotorul, secvența codificatoare și regiunea terminală a unei gene A6-desaturază într-un organism, de exemplu, 47 o cianobacterie, în care regiunile promotor și terminale A6-desaturază sunt funcționale. în consecință, prin prezenta invenție, sunt asigurate organisme care produc A6-desaturază 49 recombinantă.
RO 121387 Β1 într-un alt aspect, invenția furnizează o A6-desaturază izolată, care poate fi purificată din organisme recombinante prin metodele standard de purificare a proteinelor. (De exemplu, vezi Ausubel și colab., [1987] Current Protocols in Molecular Biology Green Publishing Associates, New York).
De asemenea, prin prezenta invenție, se asigură vectori care conțin ADN care codifică A6-desaturaza. Pentru specialistul în domeniu va fi evident că se pot construi vectori corespunzători pentru a dirija expresia secvenței care codifică A6-desaturază într-o diversitate de organisme. Sunt preferați în mod deosebit, vectori de expresie replicativi. Vectori de expresie replicativi, așa cum s-au descris aici, sunt molecule ADN sau ARN prelucrate prin inginerie pentru expresia controlată a unei gene dorite, adică gena care codifică A6-desaturaza. De preferință, vectorii sunt plasmide, bacteriofagi, cosmide sau virusuri. De asemenea, în conformitate cu prezenta invenție, sunt prevăzuți vectori navetă, cum s-au descris de exemplu de către Wolk și colab. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1561-1565 și Bustos și colab. (1991) J. Bacteriol. 174, 7525-7533. Sambrook și colab. (1989), Goeddel, ed. (1990) Methods in Enzymology 185 Academic Press, și Perbal (1988) A Practicai Guide to Molecular Cloning, John Wileyand Sons, Inc., furnizează detalii asupra vectorilor în care un acid nucleic codificator al A6-desaturazei se poate introduce și exprima. Astfel de vectori conțin de asemenea, secvențe de acid nucleic care pot efectua expresia acizilor nucleici care codifică A6-desaturază. Elemente de secvență capabile să efectueze expresia unui produs genic includ promotori, elemente de intensificare, secvențe de activare în amonte, semnale de terminare a transcrierii și situri de poliadenilare. Sunt avuți în vedere promotori atât constitutivi, cât și promotori specifici de țesut. Pentru transformarea celulelor vegetale, de interes particular sunt promotorul 35S al virusului mozaicul conopidei (CaMV) și promotori care sunt reglați în timpul maturării seminței plantei. Toți promotorii de acest tip și elementele de reglare a transcrierii, singure sau în combinație, sunt avute în vedere pentru utilizare în prezenții vectori de expresie replicativi și sunt cunoscuți pentru un specialist în domeniu. Promotorul CaMV 35S este descris, de exemplu, de către Restrepo și colab. (1990) Plant Cell 2, 987. De asemenea, sunt avute în vedere secvențe regulatoare prelucrate prin inginerie genetică și mutate.
Specialistul în domeniu poate determina vectori și elemente regulatoare adecvate pentru expresie într-o celulă gazdă particulară. De exemplu, un vector care cuprinde promotorul de la gena care codifică carboxilaza de la Anabaena legat funcțional la regiunea de codificare a A6-desaturazei și în continuare legat funcțional la un semnal terminal de la Synechocystis este corespunzător pentru expresia A6-desaturazei în cianobacterii. în acest context, legat funcțional înseamnă că secvențele promotor și terminator funcționează efectiv pentru a regla transcrierea. Ca un exemplu suplimentar, un vector corespunzător pentru expresia A6-desaturazei în plante transgenice poate să cuprindă o secvență promotor specifică seminței derivată de la heliantinină, napină sau glicinină legată funcțional la un semnal de terminal din sămânță sau un semnal terminal nopalin sintază. Ca un alt exemplu suplimentar, un vector pentru utilizare în expresia A6-desaturazei în plante poate să cuprindă un promotor constitutiv sau un promotor specific de țesut legat funcțional la regiunea codificatoare a A6-desaturazei și în continuare, legat funcțional la un terminator constitutiv sau specific de țesut sau la semnalul terminal nopalin sintază.
în mod deosebit, sunt avute în vedere ca elemente promotor, care dirijează expresia A6-desaturazei conform invenției, elementele regulatoare ale heliantininei dezvăluite în cererea US 682354 a solicitantului, depusă pe 8 aprilie 1991, aflată în curs de rezolvare și încorporată aici printre referințe.
RO 121387 Β1 în scopul acestei invenții intră și modificări ale secvențelor nucleotidice sau elemen- 1 telor regulatoare dezvăluite aici, care mențin funcțiile prevăzute în această invenție. Asemenea modificări includ inserții, substituții și eliminări și substituții specifice care reflectă dege- 3 nerarea codului genetic.
Tehnici standard pentru construcția de astfel de vectori hibrizi sunt binecunoscute 5 celor cu pregătire obișnuită în domeniu și se pot găsi în referințe ca Sambrook și colab. (1989), sau oricare dintre nenumăratele manuale de laborator despre tehnologia ADN-ului 7 recombinant care sunt accesibile pretutindeni. Este accesibilă o diversitate de strategii pentru ligarea fragmentelor de ADN, alegerea cărora depinde de natura terminațiile fragmentelor 9
ADN. în continuare, în conformitate cu prezenta invenție, se are în vedere să se includă în vectorii hibrizi alte elemente de secvență de nucleotide care facilitează donarea, expresia 11 sau prelucrarea, de exemplu, secvențe care codifică peptide semnal, o secvență care codifică KDEL, care este necesară pentru retenția proteinelor în reticulul endoplasmic sau sec- 13 vențe care codifică peptide de tranzit care dirijază A6-desaturaza spre cloroplast. Astfel de secvențe sunt cunoscute pentru un specialist cu pregătire obișnuită în domeniu. O peptidă 15 de tranzit optimizat este descrisă, de exemplu, de către Van den Broeck și colab. (1985) Nature 313,358. Secvențe de semnal procariote și eucariote sunt descrise, de exemplu, de 17 către Michaelis și colab., (1982) Ann. Rev. Microbiol. 36,425.
Un aspect suplimentar al invenției de față asigură organisme, altele decât cianobac- 19 terii sau plante care conțin ADN-ul care codifică A6-desaturaza prezentei invenții. Organismele transgenice avute în vedere în conformitate cu prezenta invenție includ bacterii, ciano- 21 bacterii, fungi, plante și animale. ADN-ul prezentei invenții poate fi introdus în gazdă prin metode cunoscute în domeniu, de exemplu infecție, transfecție, transformare sau transconju- 23 gare. Tehnici pentru transferarea ADN-ului prezentei invenții în astfel de organisme sunt pe larg cunoscute și sunt descrise în referințe ca Sambrook și colab. (1989). 25
Sunt cunoscute diverse metode de transformare a plantelor. Gena A6-desaturază poate fi introdusă în plante printr-o procedură de transformare-regenerare a discului frunzei 27 cum s-a descris de către Horsch și colab. (1985) Science 227, 1229. Alte metode de transformare, cum ar fi cultura de protoplaste (Horsch și colab. (1984) Science 223, 496; 29
DeBlock și colab. (1984) EMBOJ. 2,2143; Barton și colab., (1983) Ce//32,1033), se pot de asemenea folosi și sunt în cuprinsul acestei invenții. într-o variantă preferată, plantele sunt 31 transformate cu vectori derivați de la Agrobacterium. Cu toate acestea, sunt cunoscute și alte metode pentru inserarea genelor A6-desaturază ale prezentei invenții în celule de plantă. 33 Asemenea metode alternative includ abordări biolistice (Klein și colab. (1987) Nature 327, 70), electroporarea, absorbția indusă chimic a ADN-ului și folosirea virusurilor sau polenului 35 ca vectori.
Când este necesar pentru metoda de transformare, genele care codifică Δ6- 37 desaturaza conform prezentei invenții se pot introduce într-un vector de transformare a plantei, de exemplu, vectorul binar descris de către Bevan (1984) Nucleic Acids Res. 12 39
8111. Vectorii de transformare a plantei pot fi derivați prin modificarea sistemului natural de transfer al genelor de la Agrobacterium tumefaciens. Sistemul natural cuprinde plasmide 41 mari Ti (inducătoare de tumori) care conțin un segment mare, cunoscut ca ADN-T, care se transferă la plantele transformate. Alt segment al plasmidului Ti, regiunea vir este responsa- 43 bilă pentru transferul ADN-T-ului. Regiunea ADN-T este mărginită de repetiții terminale. în vectorii binari modificați, genele inducătoare de tumori au fost îndepărtate și funcțiile regiunii 45 vir sunt utilizate pentru transferarea ADN-ului străin mărginit de secvențele ADN-T. De asemenea, regiunea T conține un marker selectabil pentru rezistență la antibiotic și un sit de 47 donare multiplu pentru inserarea secvențelor pentru transfer.
RO 121387 Β1
Astfel de tulpini prelucrate prin inginerie sunt cunoscute ca tulpini A. tumefaciens dezarmate și permit tranformarea eficientă a secvențelor mărginite de regiunea T în genomii nucleari ai plantelor.
Discurile frunzelor cu suprafața sterilizată sunt inoculate cu A. tumefaciens dezarmat, care conține ADN străin, cultivate timp de 2 zile și apoi transferate în mediul conținând antibiotic. Lăstarii transformați sunt selectați după înrădăcinare în mediul care conține antibioticul corespunzător, transferați în sol și regenerați.
într-un alt aspect, prezenta invenție furnizează plante transgenice sau urmași ai acestor plante, care conțin ADN-ul izolat al invenției. Sunt avute în vedere atât plante monocotiledonate, cât și dicotiledonate. Celulele plantei sunt transformate cu ADN-ul izolat care codifică Δδ-desaturaza prin oricare dintre metodele de transformare a plantelor descrise mai sus. Celula de plantă transformată, de obicei, într-o cultură de callus (masă de celule nediferențiate) sau disc de frunză, se regenerează într-o plantă completă transgenică prin metode binecunoscute unui specialist cu pregătire obișnuită în domeniu (de exemplu, Horsch și colab. (1985) Science 227, 1129). într-o realizare preferată, planta transgenică este floarea-soarelui, rapiță, porumb, tutun, arahidă, sau soia. Deoarece urmașii plantelor transformate moștenesc ADN-ul care codifică Δδ-desaturază, semințe sau butași de la plante transformate sunt folosite pentru menținerea liniei plantei transgenice.
Prezenta invenție asigură suplimentar, un procedeu pentru furnizarea plantelor transgenice având un conținut crescut de GLA. Acest procedeu include introducerea ADN-ului care codifică Δδ-desaturaza în celule de plantă cărora le lipsește sau au niveluri scăzute ale GLA, dar conțin LA, și regenerarea plantelor având conținut crescut de GLA din plante transgenice. în mod special, drept organisme transgenice sunt avute în vedere plante de cultură, crescute în scop comercial incluzând, dar fără a se limita la, floarea-soarelui, soia, rapița, porumbul, arahidele și tutunul.
Prezenta invenție asigură în continuare, un procedeu pentru furnizarea organismelor transgenice non-umane, care conțin GLA. Acest procedeu cuprinde introducerea ADN-ului care codifică Δδ-desaturaza într-un organism căruia îi lipsește GLA, sau are niveluri scăzute de GLA, dar conține LA. într-o altă realizare, procedeul cuprinde introducerea unuia sau mai multor vectori de expresie, care cuprind ADN care codifică Δ12-desaturaza și Δβ-desaturaza în organisme care sunt deficiente atât în GLA, cât și în LA. în mod corespunzător, organismele deficiente atât în LA, cât și în GLA, sunt induse să producă LA prin expresia A12-desaturazei și apoi, este generat GLA datorită expresiei Δδ-desaturazei. Vectori de expresie cuprinzând ADN care codifică Δ12-desaturaza, sau Δ12-desaturaza și Δδ-desaturaza pot fi construiți prin metode ale tehnologiei de recombinare, cunoscute pentru un specialist cu pregătire obișnuită în domeniu (Sambrook și colab., 1989) și cunoscând secvența publicată a A12-desaturazei (Wada și colab., [1990] Nature (London) 347, 200-203. Suplimentar, s-a descoperit în conformitate cu prezenta invenție, că nucleotidele 2002-3081 ale ID SECV NR: 1 codifică Δ12-desaturaza cianobacteriană. în consecință, această secvență se poate folosi pentru construcția vectorilor de expresie care constituie subiectul acești invenții. în mod special, sunt avute în vedere ca organisme transgenice, plantele de cultură crescute în scop comercial care includ, dar nu se limitează la, floarea-soarelui, soia, rapița, porumbul, arahidele și tutunul.
Prezenta invenție este îndreptată suplimentar spre o metodă de inducerea a toleranței la frig la plante. Sensibilitatea la frig poate fi datorată fazei de tranziție a lipidelor din membranele celulare. Temperatura fazei de tranziție depinde de gradul de nesaturare al acizilor grași din lipidele membranare și astfel, creșterea gradului de nesaturare, de exemplu, prin introducerea Δδ-desaturazei pentru convertirea LA la GLA, poate induce sau îmbunătăți rezistența la frig.
RO 121387 Β1 în consecință, prezenta metodă cuprinde introducerea ADN-ului care codifică A6-desaturaza1 într-o celulă de plantă și regenerarea unei plante cu rezistență îmbunătățită la frig din celula de plantă menționată transformată. într-o realizare preferată, planta este o plantă de floarea- 3 soarelui, soia, rapiță, porumb, arahide, sau tutun.
Se dau în continuare exemple comparative și exemple care ilustrează invenția.5
Exemplul 1. Tulpini și condiții de cultură
S-au cultivat Synechocystis (PCC 6803, ATCC 27184), Anabaena (PCC 7120, ATCC7
27893) și Synechococcus (PCC 7942, ATCC 33912) în condiții fotoautotrofe la 30°C, în mediu BG11N+ (Rippka și colab. [1979] J. Gen. Microbiol. 111.1-61) sub iluminare de lămpi 9 incandescente (60 pE.m'2.S‘1). S-au selectat cosmide și plasmide și s-au propagat în tulpina de Escherichia coli DH5a pe mediul LB suplimentat cu concentrații standard de antibiotice, 11 așa cum au descris Maniatis și colab. (1982) în Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring, New York. 13
Exemplul 2. Construcția băncii genomice cosmid Synechocystis
S-a digerat parțial ADN-ul genomic total de la Synechocystis (PCC 6803) cu Sau3A 15 și s-a fracționat pe un gradient de sucroză (Ausubel și colab., [1987] Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, New York). Au fost 17 selectate fracțiile care conțin fragmente ADN de 30 la 40 kb și s-au ligat în situl SamHI defosforilat al vectorului cosmid pDUCA7 (Buikema și colab., [1991] J. Bacteriol. 173.1879- 19
1885). ADN-ul ligat s-a împachetat in vitro așa cum s-a descris de către Ausubel și colab., (1987), și fagul împachetat s-a propagat în E. coli DH5a care conține pRL528 care este un 21 plasmid ajutător care codifică Aval și Eco4711 metilaza, așa cum s-a descris de către Buikema și colab., (1991). în total s-au izolat 1152 colonii în mod aleator și s-au menținut 23 individual în 12 plăci de microtitru cu 96 godeuri.
Exemplul 3. Expresia de câștig de funcție a GLA în Anabaena25
Anabaena (PCC 7120), o cianobacterie filamentoasă, este deficientă în GLA, dar conține cantități semnificative de acid linoleic, precursorul pentru GLA (fig. 2; Tabel 2). Banca27 cosmid Synechocystis descrisă în Exemplul 2, s-a conjugat în Anabaena (PCC 7120) pentru a identifica transconjuganții care produc GLA. Celule Anabaena s-au cultivat la faza „mid-log”29 în mediu lichid BG11N+ și s-au resuspendat în același mediu la o concentrație finală de aproximativ 2x106 celule per ml. O cultură în fază „mid-log de E.coli RP4 (Burkardt și colab., 31 [1979] J. Gen. Microbiol 114, 341-348) cultivată în LB, conținând ampicilina, s-a spălat și resuspendat în mediu LB proaspăt. Apoi, Anabaena și RP4 s-au amestecat și dispersat 33 uniform pe plăci cu BG11N+ conținând 5% LB. Banca genomică cosmid a fost replica etalată pe plăci cu LB care conțin 50 pg/ml kanamicină și 17,5 pg/ml cloramfenicol și a fost în 35 continuare aplicată din loc în loc pe plăcile cu BG11N+ care conțin Anabaena și RP4. După 24 h de incubare la 30°C, s-au introdus dedesupt 30 pg/ml neomicină și incubarea la 30°C 37 s-a continuat până când au apărut transconjuganții.
După conjugare s-au izolat transconjuganții individuali și s-au crescut în 2 ml de 39 mediu lichid BG11N+ cu 15 pg/ml neomicină. S-au preparat esteri metilici ai acizilor grași de la culturi de tip sălbatic și s-au depozitat culturi conținând 10 transconjuganți după cum 41 urmează. Culturi cianobacteriene de tip sălbatic și transgenice s-au recoltat prin centrifugare și s-au spălat de 2 ori cu apă distilată. Esterii metilici ai acizilor grași au fost extrași din 43 aceste culturi așa cum s-a descris de către Dahmer et al (1989) J. Amer. Oii. Chem. Soc. 66, 543-548 și s-au analizat prin cromatografie gaz-lichid (GLC) folosind un Tracor-560 echipat 45 cu un detector de ionizare în flacără de hidrogen și coloană capilară (30 m x 0,25 mm legată FSOT Superox II, Alltech Associates Inc., IL). Pentru identificarea acizilor grași s-au folosit 47 timpii de retenție și co-cromatografia standardelor (obținute de la Sigma Chemical Co.).
RO 121387 Β1
Compoziția medie de acid gras s-a determinat ca un raport între suprafața picului pentru fiecare acid gras C18 normalizată la un standard intern.
Profilurile GLC reprezentative sunt prezentate în fig. 2. Sunt prezentați esterii metilici ai acizilor grași C18. Picurile s-au identificat prin compararea timpilor de eluție cu standarde cunoscute ale esterilor metilici ai acizilor grași și s-au confirmat prin cromatografie de gaze cuplată cu spectroscopie de masă. Diagrama A ilustrează analiza GLC a acizilor grași din Anabaena de tip sălbatic. Săgeata indică timpul migrare al GLA. Diagramal B este un profil GLC al acizilor grași ai transconjuganților de Anabaena cu pAM542+1,8F. S-au identificat 2 depozite producătoare de GLA (din cele 25 depozite reprezentând 250 transconjuganți) care au produs GLA. S-au analizat transconjuganți individuali din fiecare depozit GLA pozitiv pentru producerea de GLA; s-au identificat 2 transconjuganți independenți, AS13 și AS75, unul din fiecare depozit, care au exprimat niveluri semificative de GLA și care au conținut cosmidele cSy13 și respectiv cSy75 (fig. 3). Cosmidele se suprapun într-o regiune de aproximativ 7,5 kb lungime. Un fragment Nhel de 3,5 kb al cSy75 s-a reclonat în vectorul pDUCA7 și s-a transferat la Anabaena rezultând în câștigul funcției de a exprima GLA (Tabelul 2).
Două subfragmente NhelIHind III (1,8 și 1,7 kb) ale fragmentului Nhe I de 3,5 kb al cSy75-3,5 s-au subclonat în pBLUESCRIPT (Stratagene) (fig. 3) pentru secvențare. S-au efectuat tehnici standard de biologie moleculară așa cum s-a descris de către Maniatis și colab., (1982) și Ausubel și colab., (1987). Secvențarea dideoxi (Sânger și colab., [1977] Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74, 5463- 5467) a pBS1.8 s-a realizat cu SEQUENASE (United States Biochemical) pe ambele benzi folosind primeri oligonucleotidici specifici sintetizați de Advanced DNA Technologies Laboratory (Biology Departament, Texas A & M University). Analiza secvenței ADN s-a făcut cu software GCG (Madison, Wl) așa cum s-a descris de către Devereux și colab., (1984) Nucleic Acids Res. 12, 387-395.
Ambele subfragmente Nhe\IHind\\\s-au transferatîntr-un vectorde expresie conjugativ, AM542, în ambele orientări înainte și înapoi față de promotorul cianobacterian de carboxilază și s-au introdus în Anabaena prin conjugare. Transconjuganții care conțin fragmentul de 1,8 kb cu orientarea înainte (AM542-1.8F) au produs cantități semnificative de GLA și acid octadecatetraenoic (fig. 2; tabelul 2). Transconjuganți! care conțin alte constructe, sau fragmentul 1,8 kb orientat înapoi, sau fragmentul de 1,7 kb orientat înainte și înapoi, nu produc niveluri detectabile de GLA (Tabel 2).
Fig. 2 compară profilul de acid gras C18 al unui extract de la Anabaena de tip sălbatic (fig. 2A) cu cel de la Anabaena transgenică care conține fragmentul de 1,8 kb al cSy75-3,5 orientat înainte (fig. 2B). Analiza GLC a esterilor metilici de acid gras din AM542-1.8F a prezentat un pic cu un timp de retenție identic cu cel al standardului autentic GLA. Analiza acestui pic prin cromatografie de gaze cuplată cu spectrometrie de masă (GC-MS) a confirmat că a avut același spectru de masă ca cel unei probe GLA de referință 23.
Anabaena transgenică cu niveluri modificate ale acizilor grași polinesaturați a fost similară tipului sălbatic ca rată de creștere și morfologie.
Tabelul 2
Compoziția de acizi grași C18 la cianobacterii de tip sălbatic și transgenice
| Tulpină | Acid gras (%) | |||||
| 18:0 | 18:1 | 18:3 | 18:3a | 18;3(y) | 18:4 | |
| Tip sălbatic | ||||||
| Synechocystis (sp. PCC6803) | 13,6 | 4,5 | 54,5 | - | 27,3 | - |
| Anabaena (sp. PCC7120) | 2,9 | 24,8 | 37,1 | 35,2 | - | - |
| Synechococcus (sp. PCC7942) | 20,6 | 79,4 | - | - | - | - |
RO 121387 Β1
Tabelul 2 (continuare)
| Tulpină | Acid gras (%) | |||||
| 18:0 | 18:1 | 18:3 | 18:3a | 18:3(y) | 18:4 | |
| Transconjuganți de Anabaena | ||||||
| cSy75 | 3,8 | 24,4 | 22,3 | 9,1 | 27,9 | 12,5 |
| cSy75-3.5 | 4,3 | 27,6 | 18,1 | 3,2 | 40,4 | 6,4 |
| PAM542-1.8F | 4,2 | 13,9 | 12,1 | 19,1 | 25,4 | 25,4 |
| PAM542-1.8R | 7,7 | 23,1 | 38,4 | 30,8 | - | - |
| PAM542-1.7F | 2,8 | 27,8 | 36,1 | 33,3 | - | - |
| pAM542-1.7R | 2,8 | 25,4 | 42,3 | 29,6 | - | - |
| Transformanți de Synechococcus | ||||||
| pAM854 | 27,8 | 72,2 | - | - | - | - |
| ΡΑΜ854-Δ12 | 4,0 | 43,2 | 46,0 | - | - | - |
| pAM854- A6 | 18,2 | 81,8 | - | - | - | - |
| pAM854- Δ6& A12 | 42,7 | 25,3 | 19,5 | - | 16,5 | - |
18:0, acid stearic; 18:1, acid oleic; 18:2, acid linoleic; 18:3(a), acid linolenic;
18:3(y), γ-acid linolenic; 18:4, acid octadecatetraenoic 19
Exemplul 4. Transformarea Synechococcus cu gene care codifică Δ6- și A12-desa- 21 turaza
Al treilea cosmid, cSy7, care conține o genă care codifică Δ12-desaturaza, s-a izolat 23 prin screening din banca genomică Synechocystis cu o oligonucleotidă sintetizată din secvența de gene publicată care codifică Δ12-desaturaza Synechocystis (Wada și colab., 25 [1990] Nature (London) 347, 200-203). De la acest cosmid s-a identificat un fragment Aval de 1,7 kb, care conține gena care codifică Δ12-desaturaza și s-a folosit ca o sondă pentru 27 a demonstra că cSyl3 conține nu numai o gena care codifică A6-desaturaza, ci și o genă care codifică Δ12-desaturaza (fig. 3). Analiza genomică Southern blot a arătat în continuare 29 că ambele gene care codifică Δ6- și A12-desaturază sunt unice în genomul Synechocystis, astfel încât ambele gene funcționale implicate în desaturarea acidului gras C18 sunt strâns 31 legate în genomul Synechocystis.
Cianobacteria unicelulară Synechococcus (PCC 7942) este deficientă, atât în acid 33 linoleic, cât și în GLA(3). Genele care codifică Δ12 și A6-desaturaza s-au donat individual și împreună în pAM854 (Bustos și colab., [1991] J. Bacteriol. 174, 7525-7533), un vector 35 navetă care conține secvențele necesare pentru integrarea de ADN străin în genomul Synechococcus (Golden și colab., [1987] Methods in Enzymol. 153,215-231). S-a transfor- 37 mat Synechococcus cu aceste constructe genetice și s-au selectat colonii. S-au extras esterii metilici ai acizilor grași din Synechococcus transgenic și s-au analizat prin GLC. 39
Tabelul 2 prezintă că principalii acizi grași din Synechococcus de tip sălbatic sunt acidul stearic (18:0) și acidul oleic (18:1). Synechococcus transformată cu pAM854-A12 a 41 exprimat acid linoleic (18:2) suplimentar față de principalii acizi grași. Transformanții cu pAM854-A6 și Δ12 au produs, atât linoleat cât și GLA (Tabel 1). Aceste rezultate au arătat 43
RO 121387 Β1 că Synechococcus conținând ambele gene care codifică Δ12- și Δδ-desaturază a dobândit capacitatea de a introduce o a doua dublă legătură în poziția Δ12 și o a treia dublă legătură în poziția Δ6 a acizilor grași C18. Cu toate acestea, nu s-a observat nicio schimbare în compoziția de acid gras în transformantul care conține ρΑΜ854-Δ6, indicând că în absența substratului sintetizat de către A12-desaturază, Δδ-desaturaza este inactivă. Acest experiment confirmă suplimentar că fragmentul Nhe\IHind\\\ de 1,8 kb (fig. 3) conține atât regiunile de codificare, cât și regiunile promotor ale genei care codifică Δδ-desaturaza din Synechocystis. Synechococcus transgenic cu niveluri alterate ale acizilor grași polinesaturați a fost similar tipului sălbatic în rata de creștere și morfologie.
Exemplul 5. Secvența nucleotidică corespunzătoare A6-desaturazei
S-a determinat secvența nucleotidică a fragmentului de 1,8 kb al cSy75-3.5 care include gena funcțională care codifică Δδ-desaturaza. S-a identificat un cadru de citire deschis care codifică o polipeptidă de 359 aminoacizi (fig. 4). Printr-o analiză de hidropatie Kyte-Doolitle (Kyte și colab., [1982] J. Mol. Biol. 157,105-132) s-au identificat 2 regiuni de aminoacizi hidrofobi care ar putea să reprezinte domenii transmembranare (fig. 1 A); mai mult, profilul hidropatie al Δδ-desaturazei este similar celui al genei ce codifică A12-desaturaza (fig. 1B; Wada și colab.) și cu al A9-desaturazelor (Thiede și colab., [1986] J. Biol. Chem. 261,13230-13235). Totuși, similaritatea de secvență dintre Δ6- și A12-desaturazele Synechocystis este mai mică de 40% la nivel nucleotidic și aproximativ 18% la nivelul de aminoacizi.
Exemplul 6. Transferul Δβ-desaturazeicianobacteriene în tutun
Gena care codifică Δδ-desaturaza cianobacteriană s-a mobilizat într-un vector de expresie vegetal și s-a transferat la tutun, folosind tehnici de transfer de gene mediat de Agrobacterium. Pentru a asigura că desaturaza transferată este exprimată corespunzător în frunze și în semințele dezvoltate și că produsul genei care codifică desaturaza este îndreptat spre reticulul endoplasmic sau cloroplast, s-au construit diverse casete de expresie conținând cadrul de citire deschis (ORF) pentru Δ-desaturaza Synechocystis. Componentele acestor casete includ: (i) un promotor 35S sau un promotor specific din sămânță derivat de la gena care codifică heliantinina din floarea-soarelui, pentru a conduce expresia genei Δ6desaturază în toate țesuturile plantei sau respectiv, numai în semințele în dezvoltare, (ii) o peptidă semnal probabilă, fie de la gena extensină de la morcov, fie de la gena heliantinină de la floarea soarelui pentru a ținti Δδ-desaturaza sintetizată de nou în RE, (iii) o secvență semnal de retenție din lumenul RE (KDEL) la COOH-terminal al ORF Δδ-desaturazei, și (iv) o peptidă de tranzit optimizat pentru a ținti Δδ-desaturaza în cloroplast. Promotorul 35S este un derivat al pRTL2 descris de Restrepo și colab., (1990). Secvența peptidei de tranzit optimizat este descrisă de Van de Broeck și colab., (1985). Peptida semnal extensină de la morcov este descrisă de Chen și colab., (1985) EMBO J. 9, 2145.
S-au produs plante de tutun care conțin o genă cianobacteriană himerică care codifică desaturaza, cuprinsă din gena Δδ-desaturază Synechocystis fuzionată cu o secvență de retenție din reticulul endoplasmic (KDEL) și o peptidă semnal din extensină acționată de promotorul 35S CaMV. Amplificările PCR ale ADN-ului genomic de tutun transgenic arată că gena care codifică Δδ-desaturaza s-a încorporat în genomul de tutun. Esterii metilici ai acizilor grași din frunzele acestor plante transgenice de tutun s-au extras și s-au analizat prin gaz-lichid cromatografie (GLC). Acest tutun transgenic a acumulat cantități semnificative de GLA (fig. 4). Fig. 4 prezintă esterii metilici ai acizilor grași așa cum s-au determinat prin GLC. Picurile s-au identificat prin compararea timpilor de eluție cu standarde cunoscute ale esterului metilic de acid gras. în consecință, genele cianobacteriene implicate în metabolismului acidului gras pot fi utilizate pentru a genera plante transgenice având compoziții modificate de acid gras.
RO 121387 Β1
Exemplul 7. Construcția băncii de cADN de limba-mielului 1
S-au izolat polizomi membranari din semințe de limba-mielului 12 zile post polenizare (12 DPP), folosind protocolul stabilit pentru mazăre de Larkins și Davies (1975 Plant Phys. 3 55:749-756). S-a extras ARN din polizomi după cum s-a descris de Mechler (1987 Methods in Enzymology 152: 241-248, Academic Press). 5
S-a izolat ARN poli-A+ din ARN polizomal membranar, folosind perle Oligotex-dT (Qiagen). S-a obținut cADN-ul corespunzător folosind kit-ul de sinteză cADN Stratagene 7 ZAP. Banca cADN s-a construit în vectorul lambda ZAPII (Stratagene), folosind kit-ul vector lambda ZAP II. Banca inițială s-a împachetat în extract de împachetare Gigapack II Gold 9 (Stratagene). Banca s-a folosit pentru a genera situsuri de secvențe marcate derivate de la cADN-uri (EST) și secvențele corespunzătoare marcajelor s-au folosit pentru a scana baza 11 de date GenBank.
Exemplul 8. Protocol de hibridizare 13
Sondele de hibridizare pentru screening-ul băncii de cADN din limba-mielului s-au generat folosind sinteza de ADN inițiată random, așa cum s-a descris de către Ausubel și 15 colab (1994, Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience, N.Y.) și au corespuns cADN-urilor identificate anterior care au exprimat abundent proteina de depozitare în 17 sămânță. Nucleotidele neîncorporate s-au îndepărtat folosind o coloană rotativă G-50 (Boehringer Manheim). Sonda s-a denaturat pentru hibridizare prin fierbere într-o baie de 19 apă timp de 5 min, apoi răcită repede pe gheață. Filtre pentru hibridizare s-au prehibridizat la 60°C 2-4 h, în soluție de prehibridizare (6 x SSC [Maniatis și colab. 1984, Molecular 21 Cloning a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory], 1 x soluție Denhart, 0,05% pirofosfat de sodiu, 100 pg/ml ADN denaturat din spermă de somon). Sonda denatu- 23 rată s-a adăugat la soluția de hibridizare (6 x SSC, 1 x soluție Denhart, 0,05% pirofosfat de sodiu, 100 pg/ml ADN denaturat din spermă de somon) și s-a incubat la 60°C cu agitare 25 peste noapte. Filtrele s-au spălat în 4x, 2x și 1x spălări SET timp de 15 minute fiecare la 60°C. O soluție stoc 20xSET esteNaCI3M, bază Tris 0,4 M, Na2EDTA-2H2O 20 M. Spălarea 27 4xSET a fost 4xSET, PO412,5 mM, pH 6,8 și SDS 0,2%. Spălarea 2xSET a fost 2xSET, PO4,12,5 mM, pH 6,8 și SDS 0,2%. Spălarea 1xSET a fost 1xSET, PO4, 12,5 mM, pH 6,8 29 și SDS 0,2%. Filtrele s-au lăsat să se usuce la aer și apoi s-au expus la film raze X timp de 24 h cu ecrane de intensificare la -80°C. 31
Exemplul 9. Secvențarea randomizatăa cADN-urilor dintr-o bancăpolizomalălegată la membrană (12 DPP) din semințe de limba-mielului 33
Banca de cADN din limba-mielului s-a întins la densitate redusă (500 pfu pe plăci petri de 150 mm). cADN-urile puternic predominante care codfică proteina de depozit în 35 sămânță au fost scăzute prin screening cu cADN-urile corespondente identificate anterior. Plăcile nehibridizate s-au excizat folosind protocolul de excizare și reactivii Stratagene. 37 Coloniile bacteriene rezultate s-au folosit pentru a inocula culturi lichide și au fost secvențate fie manual, fie printr-un secvențator automat ABI. Fiecare cADN s-a secvențat o dată și s-a 39 generat o secvență tag din 200-300 perechi baze. Toate secvențările s-au realizat prin secvențare ciclică (Epicentre). S-au generat peste 300 EST-uri. Fiecare secvență tag s-a corn- 41 parat la baza de date GenBank prin programul de computer BLASTX și s-au identificat un număr de gene ale metabolismului lipidic inclusiv gena care codifica A6-desaturaza. 43
Cercetările bazei de date cu o clonă de cADN desemnată mbp-65, folosind BLASTX cu baza de date GenBank a rezultat într-o potrivire semnificativă cu A6-desaturaza 45 Synechocystis. S-a determinat totuși că această clonă nu a fost pe întreaga lungime cADN. S-a izolat un cADN pe toată lungimea folosind mbp-65 pentru a procesa banca polizomală 47 membranară de la limba-mielului.
RO 121387 Β1
Secvența cADN-ului izolat s-a determinat (fig. 5A, ID SECV NR: 4) și s-a comparat secvența proteinei cadrului de citire deschis (fig. 5B, ID SECV NR:5) la alte desaturaze cunoscute folosind programul de aliniere a proteinei Geneworks (IntelligGenetics) (fig. 2). Această aliniere a arătat că cADN-ul a fost gena care codifică A6-desaturază de la limba-mielului.
Deși similară altor desaturaze vegetale cunoscute, Δθ-desaturaza este distinctă, așa cum s-a arătat în dendrograma prezentată în fig. 6. Mai mult, compararea secvențelor de aminoacizi caracteristice desaturazelor, în special, cele propuse a fi implicate în legarea de metal (metal box 1 și metal box 2), ilustrează diferențele dintre A6-desaturază de limbamielului și alte desaturaze vegetale (Tabel 3).
A6-desaturaza de limba-mielului se distinge de forma cianobacteriană, nu numai prin secvența generală (fig. 6), ci și prin motivele de aminoacizi lipid box, metal box 1 și metal box 2 (Tabel 3). Așa cum indică Tabelul 3, toate cele trei motive sunt noi în secvență. Numai metal box 2 din Δβ-desaturaza de limba-mielului arată o anumită înrudire cu metal box-ul 2 de la A6-desaturaza de Synechocystis.
Suplimentar, Δδ-desaturaza de limba-mielului este de asemenea distinctă de altă genă desaturază de limba-mielului, Δ12-desaturază. P1 -81 este un cADN pe toată lungimea care a fost identificat prin analiză EST și prezintă o mare similaritate cu A12-desaturaza Arabidopsis (Fad 2). O comparație a motivelor de aminoacizi lipid box, metal box 1 și metal box 2 (Tabel 3) la desaturazele Δ6 și Δ12, arată că există puțină omologie în aceste regiuni. Plasarea celor două secvențe în dendrograma din fig. 6 arată cât de departe sunt înrudite aceste două gene.
co
io
CD
m h* co co
CM T“
O oi
| Metal Box 2 | FQIEHH (ID. SECV. NR:20) | HQVTHH (ID. SECV. NR:21) | HVIHH (ID. SECV. NR:22) | HVIHH (ID. SECV. NR:22) | HVIHH (ID. SECV. NR:22) | HVIHH (ID. SECV. NR:22) | HVIHH (ID. SECV. NR:22) | HVAHH (ID. SECV. NR:23) | HVAHH (ID. SECV. NR:23) | HIPHH (ID SECV NR:24) | HIPHH (ID. SECV. NR:24) | HIPHH (ID. SECV. NR:24) | HIPHH (ID.SECV. NR:24) | HVPHH () |
| Metal Box 1 | HNAHH (ID. SECV. NR:12) | HNYLHH (ID. SECV. NR:13) | HRTHH (ID. SECV. NR: 14) | HRTHH (ID. SECV. NR: 14) | HRTHH (ID. SECV. NR: 14) | HRTHH (ID. SECV. NR: 14) | HRTHH (ID. SECV. NR: 14) | HRRHH (ID. SECV. NR:15) | | ' HRRHH (ID. SECV. NR: 15) | HDRHH (ID. SECV. NR:16) | HDRHH (ID. SECV. NR:16) | HDQHH (ID. SECV. NR:17) | HDHHH (ID. SECV. NR:18) | HNHHH (ID.SECV. NR:19) |
| Lipid Box | WIGHDAGH (ID. SECV. NR:6) | NVGHDANH (ID. SECV. NR:7) | VLGHDCGH (ID. SECV. NR:8) | VLGHDCGH (ID. SECV. NR:8) | VLGHDCGH (ID. SECV. Nr:8) | VLGHDCGH (ID. SECV. Nr:8) | VLGHDCGH (ID. SECV. Nr:8) | VIAHECGH (ID. SECV. NR:9) | VIAHECGH (ID. SECV. NR:9) | VIGHDCAH (ID. SECV. NR:10) | VIGHDCAH (ID. SECV. NR:10) | VIGHDCAH (ID. SECV. NR:10) | VVGHDCGH (ID. SECV. NR:11) | VLGHDCGH (ID. SECV. NR:8) |
| Desaturaze | Δ6 limba-mielului | Δ6 Synechocystis | Δ15 Cloroplast arabidopsis | Δ15 orez | Δ15 cloroplast glicină | (Δ15) Arabidopsis fad3 | co Ό 42 CD ,O CO CO s CQ | Δ12 (P1-81)* limba-mielului | CM n 42 .co co Q. O Ό 5 S r- '< | Δ12 Arabidopsis cloroplast | Δ12 plastid glicină | n-6 plastidială din spanac | Δ12 din Synechocystis | Δ12 Anabaena |
P1-81 este un cADN pe toată lungimea, care s-a identificat prin analiză EST și prezintă o mare similaritate față de A12-desaturaza de la Arabidopsis (fad2)
RO 121387 Β1
Exemplul 10. Construcția lui 222.1ă6NOS pentru tranziție și expresie
S-a preparat vectorul pBI221 (Jefferson și colab. 1987 EMBOJ. 6:3901-3907) pentru ligare prin digestie cu BamHI și EcolCR I (Promega) care excizează regiunea de codificare GUS lăsând intacte promotorul 35S și terminatorul NOS. S-a excizat cADN A6-desaturază de limba-mielului din plasmidul Bluescript (Stratagene) prin digestie cu BamHI și Xhol. Capătul Xhol s-a teșit folosind fragmentul Klenow. Acest fragment s-a donat apoi în siturile BamHI/EcolCR I ale pBI221, dând 221.A6NOS (fig. 7). în 221.A6.NOS, porțiunea rămasă (principală) a hărții de restricție ilustrată în fig. 7 este pBI221.
Exemplul 11. Construcția lui 121.Δ6.NOS pentru transformare stabilă
S-a preparat vectorul pBI221 (Jefferson și colab. 1987 EMBOJ. 6:3901-3907) pentru ligare prin digestie cu BamHI și EcolCR I (Promega) care excizează regiunea de codificare GUS lăsând intacte promotorul 35S și terminatorul NOS. S-a excizat cADN A6-desaturază de limba-mielului din plasmidul Bluescript (Stratagene) prin digestie cu BamHI și Xhol. Capătul Xhol s-a teșit folosind fragmentul Klenow. Acest fragment s-a donat apoi în siturile BamHI/EcolCR I ale pBI121, dând 121.1A6NOS (fig. 7). în 121.A6.NOS, porțiunea rămasă (principală) a hărții de restricție ilustrată în fig. 7 este pBI121.
Exemplul 12. Expresie tranzitorie
Toată procedura care implică protoplaste s-a realizat într-o nișă sterilă. S-a digerat 1 ml de suspensie de celule împachetate de morcov în 30 ml soluție de plasmoliză (25 g/l KC1, 3,5 g/l CaCI2-H2O, MES10 mM, pH 5,6 și manitol 2,0 M) cu celulază 1%, pectoliază 0,1% și dreisalază 0,1% peste noapte, la întuneric, la temepratura camerei. Protoplastele eliberate s-au filtrat printr-un filtru cu dimensiunea 150 pm mesh și s-au peletat prin centrifugare (100 x g, 5 minute), apoi s-au spălat de 2 ori în soluție de plasmoliză. Protoplastele s-au numărat folosind un hemocitometru cu cameră dublă. S-a transfectat ADN în protoplaste prin tratament PEG, așa cum s-a descris de Nunberg și Thomas (1993 Methods in Plant MolecularBiology andBiotechnology. B.R. Glick și J.E. Thompson, editori, p. 241-248), folosind 106 protoplaste și 50-70 ug de plasmid ADN (221 .A6.NOS). S-au cultivat protoplaste în 5 ml mediu MS suplimentat cu manitol 0,2 M și 3 pm 2,4-D timp de 48 ore la întuneric, cu agitare.
Exemplul 13. Transformarea stabilă a tutunului
Construcția plasmida 121.A6.NOS s-a folosit pentru a transforma tutunul (Nicotiana Tabacum cv. xanthi) prin intermediul Agrobacterium, conform procedurilor standard (Horsh și colab., 1985, Science 227: 1229-1231; Bogue și colab., 1990 Mol. Gen. Genet. 221: 49-57), cu excepția faptului că transformanții inițiali s-au selectat pe 100 pg/ml kanamicină.
Exemplul 14. Prepararea și analiza esterilor metilici ai acizilor grași (FAME)
S-a înghețat în azot lichid țesut de la protoplaste transfectate și de la plante de tutun transformate și s-a liofilizat peste noapte. S-au preparat FAME după cum s-a descris de Dahmerși colab., (1989 J. Amer. Oii Chem. Soc. 66: 543-548). în unele cazuri, solventul s-a evaporat din nou și FAME s-au resuspendat în acetat de etil și s-au extras o dată cu apă deionizată, pentru a îndepărta orice contaminanți solubili în apă. S-au analizat FAME prin cromatografie de gaze (GC) pe o coloană J&W Scientific DB-wax (30 m lungime, 0,25 mm ID, peliculă de 0,25 pm).
Un exemplu al unei analize tranzitorii se prezintă în fig. 8, care reprezintă 3 transfecții independente colectate împreună. Adăugarea cADN care codifică A6-desaturază din limbamielului, corespunde cu apariția acidului gama linolenic (GLA), care este unul dintre posibilele produse ale A6-desaturazei.
Figurile 9 și 10 ilustrează profiluri GC ale FAME derivați din țesut de frunză și sămânță, respectiv, ale plantelor de tutun de control și transformate. Fig. 9A indică profilul țesutului de frunză de tutun de tip sălbatic (xanthi); fig. 9B dă profilul țesutului de frunză de la o plantă de tutun transformat cu A6-desaturază de la limba-mielului sub controlul
RO 121387 Β1 transcripțional al promotorului 35S CaMV (pB1121A6NOS). Picurile corespund la 18:2,18:3γ 1 (GLA)/ 18:3a și 18:4 (acid octadecanonic). Fig. 10A prezintă profilul GC al semințelor unui tutun de tip sălbatic; fig.lOB prezintă profilul țesutului dintr-o sămânță a unei plante de tutun 3 transformat cu pBI 121A6NOS. Picurile corespund la 18:2, 18:3y(GLA) și 18:3γ.
Distribuția relativă a acizilor grași C18 în semințe de tutun de control și transgenic 5 este prezentată în Tabelul 4.
Tabelul 47
| Acid gras | Xanthi | pBI121A6NOS |
| 18:0 | 4,0% | 2,5% |
| 18:1 | 13% | 13% |
| 18:2 | 82% | 82% |
| 18:3y(GLA) | - | 2,7% |
| 18:3a | 0,82% | 1,4% |
Rezultatele anterioare demonstrează că Gi_A este încorporat în triacilgliceridele frunzelor și semințelor de tutun transgenic, care conțin Δδ-desaturază de limba-mielului. 15 LISTA DE SECVENȚE (1) INFORMAȚIE GENERALĂ:17 (i) SOLICITANT: Rhone-Poulens Agrochimie (ii) TITLUL INVENȚIEI: PRODUCEREA ACIDULUI GAMA LINOLENIC PRINTR-0 19 DELTA 6-DESATURAZĂ (iii) NUMĂR DE SECVENȚE: 2521 (iv) ADRESA PENTRU CORESPONDENȚĂ:
(A) ADRESANT: Scully, Scott, Murphy & Presser23 (B) STRADA: 400 Garden City Piaza (C) ORAȘ: Garden City25 (D) STATE:New York (E) ȚARĂ: Statele Unite27 (F) ZIP: 11530 (v) FORMA CITIBILĂ PE COMPUTER:29 (A) TIP MEDIU: Dischetă (B) COMPUTER: PC IMB compatibil31 (C) SISTEM DE OPERARE: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: Brevet spre eliberare #1,0, Versiune #1,2533 (vi) DATE CURENTE ALE CERERII:
(A) NUMĂR CERERE:35 (B) DATA ÎNREGISTRĂRII: 30-DEC-1994 (C) CLASIFICARE:37 (viii) INFORMAȚIE MANDATAR/AGENT:
(A) NUME: Presser, Leopold39 (B) NUMĂR DE ÎNREGISTRARE: 19 827 (C) NUMĂR REFERINȚĂ/DOSAR: 8383ZYXW41 (ix) INFORMAȚIE TELECOMUNICAȚIE:
(A) TELEFON: (516) 742-434343 (B) TELEFAX: (516) 742-4366 (C) TELEX: 230 901 SANS UR45
RO 121387 Β1 (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR: 1:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 3588 baze perechi (B) TIP: acid nucleic (C) ÎMPLETIRE: ambele (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic) (ix) TRĂSĂTURĂ:
(A) NUME/COD: CDS (B) LOCALIZARE: 2002..3081 (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR: 1:
| GCTAGCCACC | AGTGACGATG | CCTTGAATTT | GGCCATTCTG | ACCCAGGCCC | GTATTCTGAA | 60 |
| TCCCCGCATT | CGCATTGTTA | ATCGTTTGTT | CAACCATGCC | CTGGGTAAAC | GTTTAGACAC | 120 |
| CACCTTGCCA | GACCACGTTA | GTTTGAGTGT | TTCCGCCCTG | GCGGCCCCGA | TTTTTTCCTT | 180 |
| TGO3GCTTTG | GGCAATCAGG | CGATCGGGCA | ATTGCGTTTG | TTTGACCAGA | CTTGGCCCAT | 240 |
| TCAGGAAATT | GTCATTCACC | aagaccatcc | CTGGCTCAAT | ttacccctgg | CGGATTTATG | 300 |
| GGATGATCCG | AGCCGAATGT | TGATCTATTA | CCTACCGGCC | CACAGTGAAA | CGGATSTAGT | 360 |
| AGGCGCAGTO | GTGAATAATT | TAACGTTGCA | ATCTGGGGAC | CATTTAATAG | TGGGACAAAA | 420 |
| ACCCCAACCC | AAGACCAAAC | GGCGATCGCC | TTGGCGCAAA | TTTTCCAAAC | TGATTACCAA | 480 |
| CCTGCGGGAG | TATCAGCGGT | ATGTCCAACA | GGTGATATGG | GTGGTGTTGT | TTTTATTGTT | 54 0 |
| GATGATTTTT | CTGGCCACCT | TCATCTACGT | TTCCATTGAT | CAACATATTG | CCCCAGTGGA | 600 |
| CGCdTTGTAT | TTTTCCGTGG | GCATGATTAC | CGGGGCCGGT | GGCAAGGAAG | AGGTGGCCGA | 660 |
| AAAGTCCCCC | GATATCATCA | AAGTATTCAC | AGTGGTGATG | ATGATCGCCG | GGGCGGGGGT | 720 |
| GATTGGTATT | TGTTATGCCC | TACTGAATGA | TTTCATCCTT | GGCAGTCGCT | TTAGTCAGTT | oao |
| TTTGGATGCG | GCCAAGTTAC | COGATCGCCA | TCACATCATC | ATTTGTGGGC | TGGGGGGAGT | 840 |
| GAGCATGGCC | ATTATTGAAG | AGTTAATTCA | CCAGGGCCAT | GAAATTGTGG | TAATCGAAAA | 900 |
| GGATACAGAT | AATCGTTTCT | tgcatacggc | CCGCTCCCTG | GGGGTGCCCG | TAATTGTGGA | 960 |
| GGATGCCCGC | CTAGAAAGAA | CGTTGGCCTG | CGCCAATATC | AACCGAGCCG | AAGCCATTGT | 1020 |
| GGTGGCCACC | AGCGACGACA | COGTTAACTT | GGAAATTGGC | CTAACTGCCA | AGGCGATCGC | 1080 |
| CCCTAGCCTG | CCAGTGGTGT | TGCGTTGCCA | GGATGCCCAG | TTTAGCCTGT | GCCTGCAGGA | 1140 |
| AGTATTTGAA | TTTGAAACGG | TGCTTTGTCC | GGCGGAATTG | GCCACCTATT | CCTTTGCGGC | 1200 |
| GGCGGCCCTG | GGGGGCAAAA | TTTTGGGCAA | CGGCATGACC | gatgatttgc | TGTGGGTAGC | 1260 |
| cctagccacc | TTAATCACTC | CTAACCATCC | CTTTGCCGAC | CAATTGGTTA | AAATTGCAGC | 1320 |
| CCAAAAGTCT | GATTTCGTTC | CCCTCTATCT | AGAACGGGGT | GGCAAAACCA | TCCATAGCTC | 1380 |
| GGAATTATTG | GGTACCCATC | TCGACTCTGG | AGACGTGTTG | TATTTAACCA | TGCCCGCCAC | 1440 |
| TGCCCTAGAG | CAACTTTGGC | GATCGCCCCG | TGCCACTGCT | GATCCTCTGG | ACTCTTTTTT | 1500 |
RO 121387 Β1
GGTTTAGCAT
GGGGGGATGG
AACTCTTGAC
TCGGCCCAAT
GGTGATCAAG
AAAGAACGCT
1560
TTGTCTATGT ttaGtaTTiT
TAAGTTAACC
AACAGCAGAG
GATAACTTCC
AAAAGAAATT
1620
AAGCTCAAAA
AGTAGCAAAA
TAAGTTTAAT
TCATAACTGA
GTTTTACTQC
TAAACAGCGG
1680 tgcaaaaaag
TCAGATAAAA
TAAAAGCTTC
ACTTCGGTTT
TATATTGTGA
CCATGGTTCC
1740
CAGGCATCTG
CTCTAGGGAG
TTTTTCCGCT
GCCTTTAGAG
AGTATTTTCT
CCAAGTCGGC
1800
TAACTCCCCC
ATTTTTAGGC
AAAATCATAT
ACAGACTATC
CCAATATKSC
CAGAGCTTTG
1960
ATGACTCACT
GTAGAAGGCA
GACTAAAATT
CTAGCAATGG
ACTCCCAGTT
GGAATAAATT
1920
GTGAAACTTt
TTTAGTCTCC
CCCGGCGCTG
GAGTTTTTTT
GCGGTATAAT
GTAGTTAATG
1980
| TTTATCTATT ΤΑΑΑΤΤΤΛΤΑ A ATG Met | CTA ACA GCG GAA | AGA ATT AAA TTT ACC | 2031 | |||||||||||||
| Leu Thr Ala | Glu 5 | Arg | Ile | Lye | Phe Thr 10 | |||||||||||
| 1 | ||||||||||||||||
| CAG | AAA | CGG | GGG | TTT | CGT | CGG | GTA | CTA | AAC | CAA | CGG | GTG | CAT | GCC | TAC | 2079 |
| Gin | Ly· | Arg | Gly | Phe ÎS | Arg | Arg | val | Leu | Asn 20 | Gin | Arg | val | Aep | Ala 25 | Tyr | |
| TTT | GCC | GAG | CAT | GGC | CTG | ACC | CAA | AGG | GAT | AAT | CCC | TCC | ATG | TAT | CTG | 2127 |
| Phe | All. | G1U | Hi· 30 | Gly | Leu | Thr | Gin | Arg 35 | Asp | Asn | Pro | Ser | Met 40 | Tyr | Leu | |
| AAA | ACC | CTG | ATT | ATT | GTG | CTC | TGG | TTG | TTT | TCC | GCT | TGG | GCC | TTT | GTG | 2175 |
| Lys | Thr | Leu 45 | Ile | ile | Val | Leu | Trp 50 | Leu | Phe | Ser | Ala | Trp 55 | Ala | Phe | Val | |
| CTT | ΤΤΓ | GCT | CCA | GTT | ATT | TTT | CCG | GTG | CGC | CTA | CTG | GGT | TGT | ATG | GTT | 2223 |
| Leu | Phe 60 | Ala | Pro | Val | Ile | Phe 65 | Pro | Val | Arg | Leu. | Leu 70 | Gly | Cye | Met | Val | |
| TTG | GCG | ATC | GCC | TTG | GCG | GCC | TTT | TCC | TTC | AAT | GTC | GGC | CAC | GAT | GCC | 2271 |
| Leu 75 | Ala | 11« | Ala | Leu | Ala 80 | Ala | Phe | Ser | Phe | Aan 85 | Val | Gly | Wia | Aap | Ala 90 | |
| AAC | CAC | AAT | GCC | TAT | TCC | TCC | AAT | CCC | CAC | ATC | AAC | CGG | GTT | CTG | GGC | 231» |
| Aen | His | Aen | Ala | Tyr 95 | Ser | Ser | Aan | Pro | Hie 100 | Ile | Aan | Arg | Val | Leu 10S | Gly | |
| ATG | ACC | TAC | GAT | TTT | GTC | GGC | TTA | TCT | AGT | TTT | CTT | TQG | CGC | TAT | CGC | 2367 |
| Mec | Thr | Tyr | Αβρ 110 | Phe | Val | Gly | Leu | Ser 115 | Ser | Phe | Leu | Trp | Arg 120 | Tyr | Arg | |
| CAC | AAC | TAT | TTG | CAC | CAC | ACC | TAC | ACC | AAT | ATT | CTT | GGC | CAT | GAC | GTG | 2415 |
| His | Asn | Tyr 125 | Leu | His | His | Thr | Tyr 130 | Thr | Asn | Ile | Leu | Gly 135 | Hi» | Asp | Val | |
| GAA | ATC | CAT | GGA | GAT | GGC | GCA | GTA | CGT | ATG | AGT | CCT | GAA | CAA | GAA | CAT | 2463 |
| Glu | Ile 140 | His | Gly | Aep | Gly | Ala 145 | Val | Arg | Met | Ser | Pro 150 | Glu | Gin | Glu | His |
RO 121387 Β1
| 1 3 5 | GTT Val 155 TTC Ph« | GGT ATT TAT | CGT TTC Arg Phe 160 | CAG CAA TTT TAT ATT TGG GGT | TTA TAT Leu Tyr | CTT Leu 170 AAT Asn | 2$1L 2559 | ||||||||||
| Gly Ile | Tyr TTT Phe | Gin Gin | Phe Tyr Ile Trp Gly 165 | ||||||||||||||
| GTG Val | CTT Leu ies | ||||||||||||||||
| ATT Ile | CCC Pro | TAT Tyr 175 | TGG Trp | TTT Phe | CTC Leu | TAC Tyr | GAT Aep 180 | GTC TAC CTA | |||||||||
| Val | Tyr | Leu | |||||||||||||||
| AAA | GGC | AAA | TAT | CAC | GAC | CAT | AAA | ATT | CCT | CCT | TTC | CAG | cec | CTA | GAA | 2«07 | |
| 7 | Lye | Gly | Lys | Tyr | His | Αβρ | Hia | Lys | Ile | Pro | Pro | Phe | Gin | Pro | Leu | Glu | |
| 190 | 195 | 200 | |||||||||||||||
| Q | TTA | GCT | AGT | TTG | CTA | GGG | ATT | AAG | CTA | TTA | TGG | ctc | GGC | TAC | GTT | TTC | 2655 |
| Lau | Ala | Sex | Leu | Leu | Gly | Ile | Lys | Leu | Leu | Trp | Leu | □ly | Tyr | Val | Phe | ||
| 205 | 210 | 215 | |||||||||||||||
| 11 | GGC | TTA | CCT | CTG | GCT | CTG | GGC | TTT | TCC | ATT | CCT | GAA | GTA | TTA | ATT | GGT | 2703 |
| Gly | Leu | Pro | Leu | Al* | Leu | Gly | Phe | Ser | Ile | Pro | G1U | VAL | Lau | Ile | Gly | ||
| 220 | 225 | 230 | |||||||||||||||
| 13 | GCT | TCG | GTA | ACC | TAT | ATG | ACC | TAT | GGC | ATC | GTG | GTT | TGC | ACC | ATC | TTT | 2751 |
| Ala | sar | Val | Thr | Tyr | Met | Thr | Tyr | Gly | 11a | Val | Val | Cys | Thr | Ile | Phe | ||
| 235 | 240 | 24 5 | 250 | ||||||||||||||
| 15 | |||||||||||||||||
| ATG | CTG | GCC | CAT | GTG | TTG | GAA | TCA | ACT | GAA | ttt | CTC | ACC | CCC | GAT | GGT | 2799 | |
| MeC | Ij»U | Ala | Hls | Val | Leu | Glu | Ser | Thr | Glu | Phe | Leu | Thr | Pro | Aep | Gly | ||
| 17 | 25S | 260 | 265 | ||||||||||||||
| GAA | TCC | GGT | GCC | ATT | GAT | GAC | GAG | TGG | GCT | ATT | TGC | CAA | ATT | CGT | ACC | 2847 | |
| 19 | Glu | Ser | Gly | Ala | Ile | Aep | Asp | Clu | Trp | Ala | Ile | Cye | Gin | Ile | Arg | Thr | |
| 270 | 275 | 280 | |||||||||||||||
| ACG | oCC | AÂT | TTT | GCC | ACC | AAT | AAT | CCC | 171 | TGG | AAC | TGG | TTT | TCT | GGC | 2895 | |
| 21 | Ttir | Ala | Asn | Phe | Ala | Thr | A*n | Asn | Pro | Phe | Trp | Asn | Trp | Phe | cye | Gly | |
| 2B5 | 290 | 295 | |||||||||||||||
| 23 | GGT | TTA | AAT | CAC | CAA | GTT | ACC | CAC | CAT | CTT | TTC | CCC | AAT | ATT | TOT | CAT | 2943 |
| Gly | Leu | Asn | His | Gin | Val | Ttir | Hi· | H1S | Leu | Phe | Pro | AW | Ile | Cys | His | ||
| 300 | 305 | 310 | |||||||||||||||
| 25 | ATT | CAC | TAT | CCC | CAA | TTG | GAA | AAT | ATT | ATT | AAG | GAT | GTT | TGC | CAA | GAG | 2991 |
| Ile | Hie | Tyr | Pro | Gin | Leu | Glu | Asn | 31· | Ile | Lys | Asp | Val | Cye | Gin | Glu | ||
| 315 | 320 | 325 | 330 | ||||||||||||||
| 27 | '1'1'1' | GGT | GTG | GAA | TAT | AAA | GTT | TAT | CCC | ACC | TTC | AAA | GCG | GCG | ATC | GCC | 3839 |
| Phe | Gly | Val | G1U | Tyr | Lys | Val | Tyr | Pro | Thr | Phe | Lye | Ala | Ala | Ile | Ala | ||
| 335 | 340 | 345 | |||||||||||||||
| 29 | |||||||||||||||||
| TCT | AAC | TAT | CGC | TGG | CTA | GAG | GCC | ATG | GGC | AAA | GCA | TCG | TGACATTGCC | 3088 | |||
| Ser | Asn | Tyr | Arg | Tip | Leu | Glu | Ala | Net | Gly | Lye | Ala | Ser | |||||
| 31 | 350 | 355 | 360 |
ΤΪΏ&3ΑΤΤαΚ AGCAAAATCG CAAAATCCCT CGTAAATCTA TOXTCGĂXGC CTTTCTGTTO 11 «β
CCCGCCGACC AAATCCCCGA TGCTGACCAA AGGTTGATGT TGGCATTGCT CCAAACCCAC 3208
RO 121387 Β1
| TTTCAfiGGGG | TrCATTGGCC GCMTTTCAA GCTGACCTAG GAGGCAAAGA TTGGGTGATT | 326Θ |
| 7TGCTCAAAT | CCGCTGGGAT ÂTTGAAAGGC TTCACCACCT TTGGTHCTA CCCTGCTCAA | 3326 |
| TGGGAAJ3GAC | AAACCGTCAO ΑλΤΤΟΤίΤΑΤ TCTCGTGAGA CCATCACCCA COCATCCATG | 338B |
| TGffrcTAACC | caoccctggc caaggcttgg accaaggcca tccaaattct ccacgaggct | 3446 |
| AGGCCAGAAA | AATTATATTG CCTCCTGATT TCTTCCGGCT ATCCCACCTA COGATTTTTG | 3506 |
| AGCATTTTTG | CCAAGGAAîT CTATCCCCAC IATCTCCATC CCACTCCCCC GCCTGTACAA | 3566 |
| AATTTTATCC | ATCAQCTAGC | 3566 |
(2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR: 2:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:13 (A) LUNGIME: 359 aminoacizi (B) TIP: aminoacid15 (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULĂ: proteină17
DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR: 2:
| Mec 1 | LeU Thr | Ala | G1U 5 | Arg ile Lye Phe Thr Gin Lys Arg Gly 10 | Phe Arg 15 | 21 | ||||||||||
| Arg | Val | Leu | Asn | Gin | Arg | Val | Asp | Ala | Tyr | Phe | Ala | Glu | His | Gly | Leu | |
| 20 | 25 | 30 | 23 | |||||||||||||
| Thr | Gin | Arg | Asp | Asn | Pro | Ser | Met | Tyr | Leu | Lys | Thr | Leu | Ile | Ile | Val | nc |
| 35 | 40 | 45 | Zu | |||||||||||||
| Leu | Trp | Leu | Phe | Ser | Ala | Trp | Ala | Phe | Val | Leu | Phe | Ala | Pro | Val | Ile | 27 |
| 50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
| Phe | Pro | Val | Arg | Leu | Leu | Gly | cye | Met | Val | Leu | Ala | Ile | Ala | Leu | Ala | 29 |
| 65 | 70 | 75 | 60 | |||||||||||||
| Ala | Phe | Ser | Phe | Asn | Val | Gly | His | Asp | Ala | ASn | His | Asn | Ala | Tyr | Ser | 31 |
| B5 | ¢0 | 95 | ||||||||||||||
| Ser | Asn | Pro | His | Ile | Aar. | Arg | Val | Leu | Gly | Met | Thr | Tyr | Asp | Phe | Val | 33 |
| 100 | 105 | 110 | ||||||||||||||
| Gly | Leu | Ser | Ser | Phe | Leu | Trp | Arg | Tyr | Arg | His | Asn | Tyr | Leu | His | Hie | 35 |
| 115 | 120 | 125 | ||||||||||||||
| Thr | Tyr | Thr | Asn | Ile | Leu | Gly | His | Asp | Val | Glu | Ile | His | Gly | Asp | Gly | 37 |
| 130 | 135 | 140 | ||||||||||||||
| 39 | ||||||||||||||||
| Ala | Val | Arg | Met | Ser | Pro | G1U | Gin | Glu | His | Val | Gly | Ile | Tyr | Arg | Phe | |
| 145 | 1S0 | 155 | 160 |
RO 121387 Β1
| Cin | Gin | Phe | Tyr | Ile Trp 155 | Gly Leu | Tyr | Leu 170 | Phe | Ile | Pro | Phe | Tyr 175 | Trp | ||
| Phe | Leu | Tyr Aep | Val | Tyr | Leu | Val | Leu | Asn | Lys | Gly Lys | Tyr | His | Aep | ||
| 1S0 | 185 | 190 | |||||||||||||
| His | Lye | Ile | Pro | Pro | Phe | Gin | PrO | Leu | Glu | Leu | Ala | Ser | Leu | Leu | Gly |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Ile | Lys | Leu | Leu | Trp | Leu | Gly | Tyr | val | Phe | Gly | Leu | Pro | Leu | Ala | Lâu |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Gly | Phe | Ser | Ile | Pro | Glu | Val | Leu | Ile | Gly | Ala | Ser | Val | Thr | Tyr | Net |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| Thr | Tyr | Gly | Ile | Val | Val | Cys | Thr | Ile | Phe | Net | Leu | Ala | His | Val | Leu |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Glu | Ser | Thr | Glu | Phe | Leu | Thr | Pro | Asp Gly | G1U | Ser | Gly | Ala | Ile | Asp | |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Aep | Glu | Trp | Ala | Ile | cye | Gin | Ile | Arg | Thr | Thr | Ala | Asn | Phe | Ala | Thr |
| 275 | 200 | 265 | |||||||||||||
| Asn | Asn | Pro | Phe | Trp | Asn | Trp | Phe | Cye | Gly | Gly | Leu | Asn | Hi& | Gin | Val |
| 290 | 795 | 300 | |||||||||||||
| Thr | His | His | Leu | Phe | Pro | Asn | Ile | Cys | His | Ile | His | Tyr | Pro | Gin | Leu |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
| Glu | Asn | Ile | Ile | Lye | Asp | Val | Cys | Gin | Glu | Phs | Gly | Val | Glu | Tyr | Lys |
| 325 | 330 | 335 | |||||||||||||
| Val | Tyr | Pro | Thr | Phe | Lys | Ala | Ala | Ile | Ala | Ser | Asn | Tyr Arg | Trp | Leu | |
| 340 | 345 | 350 | |||||||||||||
| Glu | Ala | Met | Gly | Lys | Ala | Ser |
355 (2) INFORMAȚIE PENTRU ID. SECV. NR: 3 (i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 1884 perechi de baze (B) TIP: acid nucleic (C) ÎMPLETIRE: ambele (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULA: ADN (genomic) (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SECV ID NR: 3:
RO 121387 Β1
AGCTTCACTT CGGTTTTATA TTGTGACCAT GGTTCCCAGG
TCCGCTGCCT TTAGAGACTA TTTTCTCCAA GTCGGCTAAC
TCATATACAG
ACTATCCCAA
TATTGCCAGA
GCTTTGATGA
AAAATTCTAG
CAATGGACTC
CCAGTTGGAA
ΤΛΑΑΤΤΓΤΤΑ ttttttgtag
TTAATGGCGG
TATAATGTGA
AAGTTTTTTA
CTAACAGCGG
AAAGAATTAA
ATTTACCCAG
AAACGGGGGT
COGGTGGATG
CCTACTTTGC
CGAGCATCGC
CTGACCCAAA
CTGAAAACCC
TGATTATTGT
GCTCTGGTTC
TTTTCCGCTT
CCAGTTATTT
TTCCGGTGCG
CCTACTGGGT
TGTATGGTTT
TTJTCCTTCA
ATGTCGGCCA
CGATGCCAAC
CACAATGCCT
AACCOGGTTC
TOGGCATGAC
CTACGATTTT
GTCGGGTTAT
COCCACAACT
ATTTGCACCA
CACCTACACC
AATATTCTTG
GGAGATGGCG
CAGTACGTAT
GAGTCCTGAA
CAAGAACATG
CAATTTTATA
TTTGGGGTTT
ATATCTTTTC
ATTCCCTTTT
TACCTAGTGC
TTAATAAAGG
CAAATATCAC
GACCATAAAA
GAATTAGCTA
GTTTGCTAOG
GATTÂA0CTA
TTATGGCTCG
CTGGCTCTGG gctittccat
TCCTCAAGTA
TTAATTGGTG
TATGGCATCG
TCGTTTGCAC
CATCTTTATG
CTGGCCCATG
CTCACCCCCG
ATCGTGAATC
CGGTGCCATT
GATGACGAGT
ACCACGGCCA
ATTTTGCCAC
CAATAATCCC
TTTTGGAACT
CACCAAGTTA
CCCACCATCT
TTTCCCCAAT
ATTTGTCATA
AATÂTTATTA
AGGATGTTTG
CCAAGAGTTT
GGTGTGGAAT
AAAGCGGCGA
TCGCCTCTAA
CTATCGCTGG
CTAGAGGCCA.
TGCCTTGGGA
TTGAAGCAAA
ATGGCAAAAT
CCCTCGTAAA
GTTGCCCGCC
GACCAAATCC
CCGATGCTCA
CCAAACGTTG
CCACTTTGAG
GGGGTTCATT
GGCCGCAGTT
TCAAGCTGAC
GATTTTGCTC
AAATCCGCTG
GGATATTGAA
AGGCTTCACC
TCAATGGGAA
GGACAAACCG
TCAGAATTGT
TTATTCTGGT
CATCTGGTCT
AACCCAGCCC
TGGCCAAGGC
TTGGACCAAQ
GGCTAGGCCA
GAAAAATTAT
ATTGGCTCCT
GATTTCTTCC
TTTGAGCATT
TTTGCCAAGG
AATTCTATCC
CCACTATCTC
ACAAAATTTT
ATCCATCAGC
TAGC
| CATCTGCTCT TCCCCCATTT | AGGGAGTTTT TTAGGCAAAA | 60 | |
| 120 | 3 | ||
| CTCACTGTAG | AAGGCAGACT | 180 | 5 |
| GTCTCCCCCG | GCGCTGGAGT | 240 | |
| TCTATTTAAA | TTTATAAATG | 300 | 7 |
| TTCGTCGGGT | ACTAAACCAA | 360 | 9 |
| GGGATAATCC GGGCCTTTGT | CTCCATGTAT | 420 | 11 |
| GCTTTTTGCT | 480 | ||
| TCGCGATCOC | CTTOGCGGCC | 540 | 13 |
| ATTCCTCCAA | TCCCCACATC | 600 | |
| CTAGTTTTCT | TTGGOGCTAT | 660 | 15 |
| GCCATGACGT | GGAAATCCAT | 720 | 17 |
| TTCGTATTTA | TCGTTTCCAG | 780 | |
| ATTGGTTTCT | CTACGATGTC | 840 | 19 |
| TTCCTCCTTT | CCAGCCCCTA | 900 | 21 |
| GCTACGTTTT | CGGCTTACCT | 960 | |
| CTTCGGTAAC | CTATATGACC | 1020 | 23 |
| TGTTGGAATC | AACTGAATTT | 1080 | |
| GGGCTATTTG | CCAAATTCOT | 1140 | 25 |
| GGTTTTGTGG | CGGTTTAAAT | 1200 | 27 |
| TTCACTATCC | CCAATTGGAA | 1260 | |
| ATAAAQTTTA | TCCCACCTTC | 1320 | 29 |
| TGGGCAAAGC | ATCGTGACAT | 1380 | |
| TCTATGATCG | AAGCCTTTCT | 1440 | 31 |
| ATOTTGGCAT | TGCTCCAAAC | 1500 | 33 |
| CTAGGAGGCA | AAGATTGGGT | 1560 | |
| ACCTTTGGTT | TCTACCCTGC | 1620 | 35 |
| GACACCATCA | CCGACCCATC | 1680 | 37 |
| GCCATGCAAA | TTCTCCACGA | 1740 | |
| GGCTATCGCA | CCTACCGATT | îaoo | 39 41 |
| CATCCCACTC | CCCCGCCTGT | 1860 1884 | 43 |
RO 121387 Β1 (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR: 4:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 1685 baze perechi (B) TIP: acid nucleic (C) ÎMPLETIRE: ambele (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic) (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: SECV ID NR: 4:
| AATATCTGCC | TACCCTCCCA AAGAGAGTAG TOATTTTTCA TCAATGGCTG CTCAAATCAA 60 |
| GAAATACATT | ACCTCAGATG AACTCAAGAA CCACGATAAA CCCGGAGATC TATGGATCTC 120 |
| GATTCAAGGG | AAAGCCTATG ATGTTTCGGA TTGGGTGAAA GACCATCCAG GTGGCAGCTT 180 |
| TCCCTTGAAJG | AGTCTTOCTG GTCAAGAGGT AACTGATGCA TTTGTTGCAT TCCATCCTOC 240 |
| CTCTACATGG | AAGAATCTTG ATAAGTTTTT CACTGGGTAT TATCTTAAAG ATTACTCTGT 300 |
| TTCTGAGOTT | TCTAAAGATT ATAGGAAGCT TGTGTTTGAG TTTTCTAAAA TGGG7TTCTA 360 |
| TGACAAAAAA | GGTCATATTA TGTTTGCAAC TTTGTGCTTT ATAGCAATGC TGTTTGCTAT 420 |
| GAGTGTTTAT | GGGGTTTTGT TTTGTGAGGG TGTTTTGGTA ΟΑΤΠνΓΓΤΤ CTGGGTOTTT 480 |
| GATGGGGTTT | CTTTGGATTC AGAGTGGTTG GATTGGACAT GATCCTGGGC ATTATATGGT 540 |
| ACTTGTCTGAT | TCAAGGCTTA ATAAGTTTAT GGGTATTTTT GCTGCAAATT GTCTTTCAGG 600 |
| AATAAGTATT | GGTTGGTCGA AATGGAACCA TAATCCACAT CACATTGCCT GTAATAGCCT €60 |
| TCAATATGAC | CCTGATTTAC AATATÂTACC ATTCCTTGTT GTGTCTTCCĂ ACTTTTTTQG 720 |
| TTCACTCACC | TCTCATTTCT ATGAGAAAAG GTTGACTTTT GACTCTTTAT CAAGATTCTT 780 |
| TGTAAGTTAT | CAACATTGGA CATTTTACCC TATTATGTGT GCTGCTAGGC TCAATATGTA 840 |
| TGTACAATCT | CTCATAATGT TOTTGACCAA GAGAAATGTG TCCTATCGAG CTCW3GAACT 900 |
| CTTGGGATGC | CTAGTGTTCT CGATTTGGTA CCCGTTGCTT GTTTCTTGTT TGCCTAATTG 960 |
| GGGTGAAAGA | ATTATGTTTG TTATTOCAAG TTTATCAGTG ACTGGAATGC AACAAGTTCA 1020 |
| GTTCTCCTTG | AACCACTTCT CTTCAAGTGT TTATGTTGGA AAGCCTAAAG GGAATAATTG 1080 |
| GTTTGAGAAA | CAAACGGATO GGACACTTGA ΟΑΤΓΤΟΓΤΟΤ CCTCCTT0GA TGMATTGOTT 1140 |
| TCATGGTGGA | TTGCAATTCC AAATTCAGCA TCATTTGTTT CCCAAGATGC CTAGATGCAA 1200 |
RO 121387 Β1
CCTTAGGAAA ATCTCGCCCT ACGTdATCGA GTTATGKAAG TTATOCATCT TTCTCCAAQG CCAATOAAAT GACACTCAGA CCAGCCTACG GATATAACCA AOCCCCTCCC GAAGAATTTG TCATGGTTAA AAI^ACCCTT AGTTCATGTA ΑΓΑΑΓΤΠΜ GTGTCTTGTC TTGGTTCTAC TTGTTGGAGT CATTGCAACT ATGTTTTTTA ATATATTTTA GACCTTTTGC TTTCATCTCC •7CCATATTCT CAATTCTICT CCTCAATATC TCATMTTTC TGTTTTCAGT TGAAGC7CAT GTOTACTTCT ATAGACTTTC TATTT (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR: 5:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 448 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic) (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR: 5:
| AAACATAATT TGCCTTACAA | 1260 | 1 |
| ACATTGAGGA ACACAGCATT | 1320 | 3 |
| GTATCCGAAC CTCTTCACAC | 1360 | |
| ATTATGTATC TCCTATGTTT | 1440 | 5 |
| 7GTCTTTTAT GGTTTATIAG | 1500 | 7 |
| ATTATTGATG AATAAQ3AGT | 1560 | |
| GAATGTACTT TCTACCACTG | 1620 | 9 |
| TTTAAATGGT TATOTCATOT | 1660 1665 | 11 |
| Met 1 | Ala Ala Gin | Ile Lys Lye Tyr 5 | Ile | Thr Ser Asp Glu Leu Lys | Asn | 21 | ||||||||||
| 10 | 15 | |||||||||||||||
| His | Asp | Lys | Pro | Gly Asp | Leu | Trp | Ile | Ser | Ile | Gin | Gly | Lys | Ala | Tyr | 23 | |
| 20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
| Asp | Val | Ser | Asp | Trp | Val | Lys | Asp | His | Pro | Gly Gly | Ser | Phe | Pro | Leu | 25 | |
| 35 | 40 | Ala | 45 | 27 | ||||||||||||
| Lys | ser | Leu | Ala | Gly | Gin | Glu | Val | Thr | Asp | Phe | val | Ala | Phe | His | ||
| 50 | 55 | 60 | 29 | |||||||||||||
| Pro | Ala | Ser | Thr | Trp | Lys | Asn | Leu | Asp | Lye | Phe | Phe | Thr | Gly | Tyr Tyr | ||
| 65 | 70 | 7S | 80 | 31 | ||||||||||||
| Leu | Lys | Asp Tyr | Ser | Val | Ser | Glu | Val | Ser | Lys | Asp | Tyr | Arg | Lys | Leu | ||
| 85 | 90 | 95 | 33 | |||||||||||||
| Val | Phe | Glu | Phe | Ser | Lys | Met | Gly | Leu | Tyr Asp | Lys | Lys | Giy | His | Ile | ||
| 100 | 105 | 110 | 35 | |||||||||||||
| Met | Phe | Ala | Thr | Leu | Cys | Phe | Ila | Ala | Met | Leu | Phe | Ala | Met | Ser | Val | |
| 115 | 120 | 125 | 37 | |||||||||||||
| •îyr | Gly | Val | Leu | Phe | Cys | Glu | Gly | Val | Leu | Val | His | Leu | Phe | ser | Gly | |
| 130 | 135 | 140 | 39 |
RO 121387 Β1
| Cya Leu 145 | Met | Gly | Phe Leu 1S0 | Trp Ile Gin | Ser Gly Trp 155 | Ile Gly | His | Asp 160 | |||||||
| Ala | Gly | Hia | Tyr | Met | Val | Val | Ser | Aep | Ser | Arg | Leu | Asn | Lye | Phe | Met |
| 16S | 170 | 175 | |||||||||||||
| Gly | Ile | Phe | Ala | Ala | Ain | cya | Leu | Ser | Gly | Ile | Ser | ile | Gly Trp Trp | ||
| 180 | 185 | 190 | |||||||||||||
| Lye | Trp | Asn | Hia | ΑίΠ | Ala | His | Hia | Ile | Ala | Cys | Asn | Ser | Leu | Glu | Tyr |
| 195 | 200 | 205 | |||||||||||||
| Aep | Pro | Asp | Leu | Gin | Tyr | Ile | Pro | Phe | Leu | Val | Val | Ser | Ser | Lys | Phe |
| 210 | 215 | 220 | |||||||||||||
| Phe | Gly | Ser | Leu | Thr | Ser | Mie | Phe | Tyr | Glu | Lye | Arg | Leu | Thr | Phe | Asp |
| 225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
| Ser | Leu | Ser | Arg | Phe | Phe | Val | Ser | Tyr | Gin | His | Trp | Thr | Phe | Tyr | Pro |
| 245 | 250 | 255 | |||||||||||||
| Ile | Met | Cye | Ala | Ala | Arg | Leu | Asn | Met | Tyr | Val | Gin | Ser | Leu | Ile | Met |
| 260 | 265 | 270 | |||||||||||||
| Leu | Leu | Thr | Lye | Arg | Asn | Val | Ser | Tyr Arg | Ala | Gin | Glu | Leu | Leu | Gly | |
| 275 | 280 | 285 | |||||||||||||
| cye | Leu | Val | Phe | Ser | Ile | Trp | Tyr | Pro | Leu | Leu | Val | Ser | Cys | Leu | Pro |
| 290 | 295 | 300 | |||||||||||||
| Asn | Trp | Gly | Glu | Arg | Ile | Met | Phe | val | ile | Ala | Ser | Leu | Ser | Val | Thr |
| 305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
| Gly | Met | Gin | Gin | val | Gin | Phe | Ser | Leu | Aen | His | Phe | Ser | Ser | Ser | Val |
| 32S | 330 | 335 | |||||||||||||
| Tyr | Val | Gly | Lye | Pro | Lye | Gly | Aen | Asn | Trp | Phe | Glu | Lya | Gin | Thr | Asp |
| 340 | 345 | 350 | |||||||||||||
| Gly | Thr | Leu | Asp | Ile | Ser | Cye | Pro | Pro | Trp | Met | Asp | Trp | Phe | His | Gly |
| 355 | 360 | 365 | |||||||||||||
| Gly | Ser | Gin | Phe | Gin | Ile | Glu | Hi· | Hi· | Leu | Phe | Pro | Lye | Met | Pro | **9 |
| 370 | 375 | 380 | |||||||||||||
| Cya | Aan | Leu | Arg | Lye | Ile | Ser | Pro | Tyr | Val | Ile | Glu | Leu | Cya | Lys | Lys |
| 385 | 390 | 395 | 400 | ||||||||||||
| Mie | Aan | Leu | Pro | Tyr | Asn | Tyr | Ala | Ser | Phe | Ser | Lys | Ala | Aen | Glu | Met |
| 405 | 410 | 41S | |||||||||||||
| Thr | Leu | Arg | Thr | Leu | Arg | Aen | Thr | Ala | Leu | Gin | Ala | Arg | Asp | Ile | Thr |
| 420 | 425 | 430 | |||||||||||||
| Lye | Pro | Leu | pro | Lys | Aen | Leu | Val | Trp | Glu | Ala | Leu | His | Thr | His | Gly |
| 435 | 440 | 445 |
(2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR: 6:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 8 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară
RO 121387 Β1 (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic) 1 (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR: 6:
Trp Ile Gly HLa λβρ Al* Gly Kis3
1s (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR: 7:5 (i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 8 aminoacizi7 (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară9 (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic) (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR: 7:11
Α·η Val Gly His Asp Al* Aen His 1 513 (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR: 8:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:15 (A) LUNGIME: 8 aminoacizi (B) TIP: aminoacid17 (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic)19 (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR: 8:
Val L<eu Gly Hi* A»p Cys Gly Hi·21 (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR: 9:23 (i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 8 aminoacizi25 (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară27 (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic) (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR: 9:29
Val Ile Ala His Glu Cys Gly Hi·
531 (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR: 10:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:33 (A) LUNGIME: 8 aminoacizi (B) TIP: aminoacid35 (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic)37 (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR: 10:
val Ile Gly Hi· Asp cys Ala His
1s (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR: 11:41 (i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 8 aminoacizi43 (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară45 (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic) (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR: 11:47
V*1 VaI Gly Hi· Aep Cye Gly Hi·
RO 121387 Β1 (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR: 12:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 5 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic) (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR: 12
His Asp Arg His Hie
5 (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR: 13:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 6 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic) (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR: 13
Kie Aen ryr Leu Kla Hi* $
(2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR: 14:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 5 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic) (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR: 14:
His Arg Thr His His
X S (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR: 15:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 5 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic) (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR: 15
His Arg Arg His His
S (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR:16:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 5 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic) (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR:16:
Hie Asp Qln Hie Hie
6 (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR:17:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 5 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară
RO 121387 Β1 (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic)1 (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR:17:
Hi· Asp Gin Hi· Hi·3
1S (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR:18:5 (i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 5 aminoacizi7 (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară9 (ii) TIP MOLECULA: ADN (genomic) (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR:18:11
Hi· Aop Hi· Hi· Hi· 1 513 (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR:19:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:15 (A) LUNGIME: 5 aminoacizi (B) TIP: aminoacid17 (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic)19 (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR:19:
Hi· Aen Hie His Hifl (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR:20:23 (i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 6 aminoacizi25 (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară27 (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic) (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR:20:29
Phe Gin lle Glu Hie Hie 1 s31 (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR:21:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:33 (A) LUNGIME: 6 aminoacizi (B) TIP: aminoacid35 (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic)37 (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR:21:
His Gin Val Thr His Hie39
1S (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR: 22:41 (i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 5 aminoacizi43 (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară45 (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic) (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR:22:47
His Val 11« Mia Hio
549
RO 121387 Β1 (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR:23:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 5 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic) (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR:23:
Hi· Val Ala Hi* Hi»
5 (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR:24:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 5 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic) (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR:24:
His Ile pro His His
5 (2) INFORMAȚIE PENTRU ID SECV NR:25:
(i) CARACTERISTICI DE SECVENȚĂ:
(A) LUNGIME: 5 aminoacizi (B) TIP: aminoacid (D) TOPOLOGIE: lineară (ii) TIP MOLECULĂ: ADN (genomic) (xi) DESCRIEREA SECVENȚEI: ID SECV NR:25:
Hi· Val Pro Hi* Hio
Claims (27)
- Revendicări1. Acid nucleic izolat care codifică o Δδ-desaturază, caracterizat prin aceea că este selectat dintre:a) un acid nucleic care codifică secvența de aminoacizi ID SECV NR: 5 sau un fragment al acestuia;b) un acid nucleic reprezentat în ID SECV NR:4 sau un fragment al acestuia;c) un acid nucleic care cuprinde gena A6-desaturază, care hibridizează cu oricare dintre acizii nucleici de la punctele a) sau b) într-o soluție de hibridizare conținând 6x SSC, 1x soluție Denharts, 0,05% pirofosfat de sodiu și 100 pg/ml ADN denaturat din spermă de somon la o temperatură de hibridizare de 60°C.
- 2. Acid nucleic izolat, caracterizat prin aceea că, codifică pentru secvența de aminoacizi ID SECV NR: 5.
- 3. Vector, caracterizat prin aceea că, cuprinde acidul nucleic definit în oricare din revendicările 1-2.
- 4. Vector de expresie, caracterizat prin aceea că, cuprinde acidul nucleic izolat definit în oricare din revendicările 1-2 legat operațional la un promotor și opțional la un semnal terminal capabil să efectueze expresia produsului genei corespunzând numitului acid nucleic izolat.RO 121387 Β1
- 5. Vector de expresie conform revendicării 4, caracterizat prin aceea că promotorul 1 este un promotor A6-desaturază, un promotor carboxilază din Anabaena, un promotor heliantinină, un promotor glicină, un promotor napină, promotorul 35S de la CaMV, sau un pro- 3 motor heliantinină specific de țesut.
- 6. Vector de expresie conform revendicării 4, caracterizat prin aceea că promotorul 5 este un promotor constitutiv sau un promotor specific de țesut.
- 7. Vector de expresie conform revendicării 4, caracterizat prin aceea că semnalul 7 terminal este un semnal terminal din Synechocystis, un semnal terminal nopalin sintazăsau un semnal terminal din sămânță.9
- 8. Celulă, caracterizată prin aceea că, cuprinde vectorul definit în oricare dintre revendicările 3-7.11
- 9. Celulă conform revendicării 8, caracterizată prin aceea că este o celulă animală, o celulă bacteriană, o celulă de plantă sau o celulă fungică.13
- 10. Organism modificat genetic non-uman caracterizat prin aceea că este transformat cu vectorul definit în oricare din revendicările 3-7.15
- 11. Organism transformat conform revendicării 10, caracterizat prin aceea că este o bacterie, un fung, o plantă, sau un animal.17
- 12. Plantă sau descendent al acesteia regenerat din celula de plantă definită la revendicarea 9, caracterizată prin aceea că este transformată genetic cu vectorul definit 19 în oricare din revendicările 3-7.
- 13. Plantă conform revendicării 12, caracterizată prin aceea că este o plantă de 21 floarea-soarelui, soia, porumb, tutun, arahide, morcov sau o plantă de rapiță.
- 14. Procedeu de obținere a unei plante având conținut crescut de acid gama linolenic 23- GLA, caracterizat prin aceea că, cuprinde:(a) transformarea unei celule de plantă cu acidul nucleic izolat definit în oricare dintre 25 revendicările 1-2; și (b) regenerarea unei plante având conținut crescut de GLA din numita celulă de 27 plantă.
- 15. Procedeu de obținere a unei plante având conținut crescut de acid gama linolenic 29- GLA, caracterizat prin aceea că, cuprinde:(a) transformarea unei celule de plantă cu vectorul definit în oricare dintre reven- 31 dicările 3-7; și (b) regenerarea unei plante având conținut crescut de GLA din numita celulă de 33 plantă.
- 16. Procedeu conform oricăreia dintre revendicările 14 sau 15, caracterizat prin 35 aceea că planta este o plantă de floarea-soarelui, soia, porumb, tutun, arahide, morcov sau o plantă de rapiță. 37
- 17. Utilizare a unui acid nucleic izolat definit în oricare din revendicările 1-2 la prepararea unui agent de inducere a producerii acidului gama linolenic - GLA într-un organism 39 deficient sau căruia îi lipsește GLA.
- 18. Utilizare a unui vector definit în oricare din revendicările 3-7 la prepararea unui 41 agent de inducere a producerii acidului gama linolenic - GLA într-un organism deficient sau căruia îi lipsește GLA.43
- 19. Utilizare a unui acid nucleic izolat care codifică o Δβ-desaturază definit în oricare din revendicările 1 sau 2 și a unui acid nucleic izolat care codifică pentru Δ12-desaturază la45 prepararea unui agent de inducere a producerii acidului gama linolenic - GLA într-un organism deficient sau căruia îi lipsește GLA și acid linoleic - LA.47RO 121387 Β1
- 20. Utilizare conform revendicării 19, caracterizată prin aceea că, acidul nucleic izolat care codifică Δβ-desaturaza cuprinde nucleotidele 44 până la 1390 ale ID SECV. Nr: 4
- 21. Utilizare a unui acid nucleic izolat defint în oricare din revendicările 1 sau 2 pentru prepararea unui agent de inducere a producerii de acid octadecatetraeonic într-un organism deficient sau căruia îi lipsește acidul gama linolenic.
- 22. Utilizare a unui vector definit în oricare din revendicările 3 - 7 pentru prepararea unui agent de inducere a producerii de acid octadecatetraeonic într-un organism deficient sau căruia îi lipsește acidul gama linolenic.
- 23. Utilizare conform revendicărilor 21 sau 22, caracterizată prin aceea că, organismul este o bacterie, un fung, o plantă, sau un animal.
- 24. Procedeu de obținere a unei plante având rezistență îmbunătățită la frig, caracterizat prin aceea că, cuprinde:(a) transformarea unei celule de plantă cu acidul nucleic izolat definit în oricare din revendicările 1-2; și (b) regenerarea plantei având rezistență îmbunătățită la frig din celula de plantă transformată.
- 25. Procedeu, conform revendicării 24, caracterizat prin aceea că, planta este o plantă de floarea-soarelui, soia, porumb, tutun, arahide, morcov sau o plantă de rapiță.
- 26. Utilizare a unui acid nucleic izolat definit în oricare din revendicările 1 sau 2 drept probă de hibridizare pentru identificarea unui acid nucleic izolat care codifică Δθ-desaturaza de la alte organisme care produc GLA.
- 27. Utilizare conform revendicării 26, caracterizată prin aceea că acidul nucleic izolat este acidul nucleic care codifică secvența de aminoacizi ID SECV NR: 5 sau un fragment al acestuia sau acidul nucleic reprezentat de ID SECV NR: 4 sau un fragment al acestuia.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/366,779 US5614393A (en) | 1991-10-10 | 1994-12-30 | Production of γ-linolenic acid by a Δ6-desaturase |
| PCT/IB1995/001167 WO1996021022A2 (en) | 1994-12-30 | 1995-12-28 | Production of gamma linolenic acid by a δ6-desaturase |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO121387B1 true RO121387B1 (ro) | 2007-04-30 |
Family
ID=23444458
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RO97-01202A RO121387B1 (ro) | 1994-12-30 | 1995-12-28 | Producerea acidului gama linolenic printr-o delta6-desaturază |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5614393A (ro) |
| EP (1) | EP0801680B1 (ro) |
| JP (2) | JP4422211B2 (ro) |
| CN (1) | CN1117864C (ro) |
| AR (1) | AR000582A1 (ro) |
| AU (1) | AU707061B2 (ro) |
| BR (1) | BR9510411A (ro) |
| CA (1) | CA2207906C (ro) |
| DE (1) | DE69535064T2 (ro) |
| ES (1) | ES2262146T3 (ro) |
| RO (1) | RO121387B1 (ro) |
| RU (1) | RU2181772C2 (ro) |
| UA (1) | UA61880C2 (ro) |
| WO (1) | WO1996021022A2 (ro) |
Families Citing this family (106)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5614393A (en) * | 1991-10-10 | 1997-03-25 | Rhone-Poulenc Agrochimie | Production of γ-linolenic acid by a Δ6-desaturase |
| US20090077692A1 (en) * | 1991-10-10 | 2009-03-19 | Thomas Terry L | Production of gamma linolenic acid by a delta6-desaturase |
| US20070130654A1 (en) * | 1991-10-10 | 2007-06-07 | Thomas Terry L | Production of gamma linolenic acid by a delta6-desaturase |
| US7109392B1 (en) | 1996-10-09 | 2006-09-19 | Cargill, Incorporated | Methods for increasing oleic acid content in seeds from transgenic plants containing a mutant delta 12 desaturase |
| US5977436A (en) | 1997-04-09 | 1999-11-02 | Rhone Poulenc Agrochimie | Oleosin 5' regulatory region for the modification of plant seed lipid composition |
| US5959175A (en) * | 1997-04-09 | 1999-09-28 | Thomas; Terry L. | Sunflower albumin 5' regulatory region for the modification of plant seed lipid composition |
| US6051754A (en) * | 1997-04-11 | 2000-04-18 | Abbott Laboratories | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids in plants |
| US5972664A (en) * | 1997-04-11 | 1999-10-26 | Abbott Laboratories | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids |
| US5968809A (en) * | 1997-04-11 | 1999-10-19 | Abbot Laboratories | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids |
| PT1598422E (pt) * | 1997-04-11 | 2013-04-03 | Abbott Lab | Métodos e composições para síntese de ácidos gordos poliinsaturados de cadeia longa em plantas |
| US7745694B1 (en) | 1997-04-11 | 2010-06-29 | Monsanto Technology Llc | Methods and compositions for synthesis of long chain polyunsaturated fatty acids in plants |
| US6075183A (en) * | 1997-04-11 | 2000-06-13 | Abbott Laboratories | Methods and compositions for synthesis of long chain poly-unsaturated fatty acids in plants |
| US6100450A (en) * | 1997-10-22 | 2000-08-08 | Rhone-Poulenc Agrochimie | Seed specific promoters based on arabidopsis genes |
| GB9724783D0 (en) * | 1997-11-24 | 1998-01-21 | Inst Arable Crops Research | Novel polypeptides |
| AU761152B2 (en) * | 1998-03-17 | 2003-05-29 | Cargill Incorporated | Genes for mutant microsomal delta-12 fatty acid desaturases and related enzymes from plants |
| US6635806B1 (en) * | 1998-05-14 | 2003-10-21 | Dekalb Genetics Corporation | Methods and compositions for expression of transgenes in plants |
| WO1999061602A1 (en) * | 1998-05-29 | 1999-12-02 | Ohio University | Compositions and methods for the synthesis of fatty acids, their derivatives and downstream products |
| PT1086236E (pt) | 1998-06-12 | 2007-12-12 | Calgene Llc | Ácidos gordos poliinsaturados em plantas |
| DE19828850A1 (de) * | 1998-06-27 | 1999-12-30 | Gvs Ges Fuer Erwerb Und Verwer | Sphingolipid-Desaturase |
| CA2339084C (en) * | 1998-08-04 | 2013-01-08 | Cargill, Incorporated | Plant fatty acid desaturase promoters |
| AU1097900A (en) * | 1998-10-05 | 2000-04-26 | Abbott Laboratories | Delta 6 and delta 12 desaturases and modified fatty acid biosynthesis and products produced therefrom |
| WO2000021557A1 (en) * | 1998-10-09 | 2000-04-20 | Merck & Co., Inc. | Delta 6 fatty acid desaturase |
| US6864077B1 (en) | 1998-12-03 | 2005-03-08 | Edgar B. Cahoon | Membrane-bound desaturases |
| WO2000032790A2 (en) * | 1998-12-03 | 2000-06-08 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Membrane-bound desaturases |
| US6825017B1 (en) | 1998-12-07 | 2004-11-30 | Washington State University Research Foundation | Desaturases and methods of using them for synthesis of polyunsaturated fatty acids |
| US8791327B2 (en) | 1998-12-07 | 2014-07-29 | Washington State University Research Foundation | Desaturases and methods of using them for synthesis of polyunsaturated fatty acids |
| CA2354672C (en) * | 1998-12-07 | 2012-10-02 | Washington State University Research Foundation | Desaturases and methods of using them for synthesis of polyunsaturated fatty acids |
| ATE273373T1 (de) | 1999-02-26 | 2004-08-15 | Martek Biosciences Corp | Verfahren zum abtrennen von einem docosahexaensäure enthaltenden triglyerid aus einem triglyceridgemisch |
| ATE334206T1 (de) | 1999-06-07 | 2006-08-15 | Basf Plant Science Gmbh | Delta6-acetylenase und delta6-desaturase aus ceratodon purpureus |
| AU776417B2 (en) * | 1999-07-06 | 2004-09-09 | Basf Plant Science Gmbh | Plants expressing delta6-desaturase genes and oils from these plants containing pufas and method for producing unsaturated fatty acids |
| DE10030976A1 (de) | 2000-06-30 | 2002-01-10 | Basf Ag | DELTA6-Desaturasegene exprimierende Pflanzen und PUFAS enthaltende Öle aus diesen Pflanzen und ein Verfahren zur Herstellung ungesättigter Fettsäuren |
| AU6350300A (en) * | 1999-07-13 | 2001-01-30 | Dow Chemical Company, The | Method for chemical analysis of biological material |
| EP1214418B1 (de) * | 1999-09-10 | 2008-03-05 | Nutrinova Nutrition Specialties & Food Ingredients GmbH | Nukleinsäure aus tetrahymena kodierend fuer eine delta 6-desaturase, ihre herstellung und verwendung |
| CA2301158A1 (en) * | 2000-03-24 | 2001-09-24 | Stephen J. Allen | Screening methods for compounds useful for modulating lipid metabolism in disease |
| CN101845446B (zh) | 2000-09-28 | 2016-01-20 | 生物源食物及科学公司 | 脂肪酸去饱和酶家族成员fad4、fad5、fad5-2和fad6及它们的应用 |
| DE10102337A1 (de) * | 2001-01-19 | 2002-07-25 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur Herstellung mehrfach ungesättigter Fettsäuren, neue Biosynthesegene sowie neue pflanzliche Expressionskonstrukte |
| US7211656B2 (en) * | 2002-01-30 | 2007-05-01 | Abbott Laboratories | Desaturase genes, enzymes encoded thereby, and uses thereof |
| MXPA04007327A (es) * | 2002-01-30 | 2004-11-26 | Basf Plant Science Gmbh | Nuevo gen de enlogasa y metodo para producir acidos grasos poliinsaturados. |
| GB2385852A (en) * | 2002-02-27 | 2003-09-03 | Rothamsted Ex Station | Delta 6-desaturases from Primulaceae |
| DE10219203A1 (de) | 2002-04-29 | 2003-11-13 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur Herstellung mehrfach ungesättigter Fettsäuren in Pflanzen |
| EP2216405A1 (en) | 2002-05-03 | 2010-08-11 | Monsanto Technology LLC | Speed specific USP promoters for expressing genes in plants |
| US7078234B2 (en) | 2002-12-18 | 2006-07-18 | Monsanto Technology Llc | Maize embryo-specific promoter compositions and methods for use thereof |
| CA2510462A1 (en) * | 2002-12-19 | 2004-07-08 | University Of Bristol | Method for producing polyunsaturated fatty acids in a transgenic plant or microorganism comprising an introduced delta-9-elongase and a delta-8-desaturase |
| WO2004076617A2 (de) | 2003-02-27 | 2004-09-10 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur herstellung mehrfach ungesättigter fettsäuren |
| BRPI0408896A (pt) | 2003-03-28 | 2006-04-25 | Monsanto Technology Llc | promotores de planta para uso no desenvolvimento precoce de sementes |
| EP2365063B1 (de) * | 2003-03-31 | 2015-10-14 | University Of Bristol | Neue pflanzliche Acyltransferase spezifisch für langkettige mehrfach ungesättigte Fettsäuren |
| MXPA05010571A (es) * | 2003-04-08 | 2005-11-23 | Basf Plant Science Gmbh | Delta-4-desaturasas a partir de euglena gracilis, que expresan plantas y aceites que comprenden pufa |
| AU2003252958A1 (en) * | 2003-07-31 | 2005-02-25 | The University Of York | Fatty acid biosynthesis 3 |
| US11952581B2 (en) | 2003-08-01 | 2024-04-09 | Basf Plant Science Gmbh | Process for the production of polyunsaturated fatty acids in transgenic organisms |
| ES2590077T3 (es) | 2003-08-01 | 2016-11-18 | Basf Plant Science Gmbh | Procedimiento para la producción de ácidos grasos poliinsaturados en organismos transgénicos |
| EP1656449B1 (en) | 2003-08-21 | 2009-05-06 | Monsanto Technology LLC | Fatty acid desaturases from primula |
| CA2450000A1 (en) | 2003-12-18 | 2005-06-18 | Alberta Research Council Inc. | Method of creating plants with reduced level of saturated fatty acid in seed oil |
| EP2623584B1 (de) | 2004-02-27 | 2019-04-10 | BASF Plant Science GmbH | Verfahren zur Herstellung mehrfach ungesättigter Fettsäuren in transgenen Pflanzen |
| AU2005217080B2 (en) * | 2004-02-27 | 2011-02-24 | Basf Plant Science Gmbh | Method for producing unsaturated omega-3 fatty acids in transgenic organisms |
| US20050220901A1 (en) * | 2004-03-22 | 2005-10-06 | Huttenbauer Samuel Jr | Methods of pharmaceutical separation from plants |
| CN1968688A (zh) | 2004-04-16 | 2007-05-23 | 孟山都技术有限公司 | 脂肪酸去饱和酶在玉米中的表达 |
| CN102559364B (zh) | 2004-04-22 | 2016-08-17 | 联邦科学技术研究组织 | 用重组细胞合成长链多不饱和脂肪酸 |
| EP1756280B2 (en) | 2004-04-22 | 2024-01-17 | Commonwealth Scientific and Industrial Research Organisation | Synthesis of long-chain polyunsaturated fatty acids by recombinant cells |
| US7364883B2 (en) | 2004-05-07 | 2008-04-29 | Yeastern Biotech Co., Ltd. | Process for producing poly-unsaturated fatty acids by oleaginous yeasts |
| ATE394233T1 (de) * | 2004-12-17 | 2008-05-15 | Agfa Graphics Nv | Tintenzirkulationssystem für das tintenstrahldrucken |
| DE102004063326A1 (de) * | 2004-12-23 | 2006-07-06 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur Herstellung mehrfach ungesättigter Fettsäuren in transgenen Organismen |
| EP1856264B1 (en) | 2005-02-26 | 2014-07-23 | BASF Plant Science GmbH | Expression cassettes for seed-preferential expression in plants |
| DE102005013779A1 (de) | 2005-03-22 | 2006-09-28 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur Herstellung von mehrfach ungesättigten C20- und C22-Fettsäuren mit mindestens vier Doppelbindungen in transgenen Pflanzen |
| AU2006257101B2 (en) * | 2005-04-19 | 2011-04-28 | Basf Plant Science Gmbh | Starchy-endosperm and/or germinating embryo-specific expression in mono-cotyledonous plants |
| EP2151498A3 (en) | 2005-04-20 | 2010-12-15 | BASF Plant Science GmbH | Expression cassettes for seed-preferential expression in plants |
| EP1882037A2 (en) | 2005-05-10 | 2008-01-30 | BASF Plant Science GmbH | Expression cassettes for seed-preferential expression in plants |
| US7893321B2 (en) * | 2005-05-23 | 2011-02-22 | Arcadia Biosciences, Inc. | Safflower with elevated gamma-linolenic acid |
| DE102005038036A1 (de) | 2005-08-09 | 2007-02-15 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur Herstellung von Arachidonsäure und/oder Eicosapentaensäure in transgenen Nutzpflanzen |
| GB2431158A (en) | 2005-10-13 | 2007-04-18 | Rothamsted Res Ltd | Process for the production of arachidonic and/or eicosapentaenoic acid |
| DE102005052551A1 (de) * | 2005-11-02 | 2007-05-16 | Rothamsted Res Harpenden | Verfahren zur Herstellung von y-Linolensäure und/oder Stearidonsäure in transgenen Brassicaceae und Linaceae |
| EP1806398A1 (en) * | 2006-01-04 | 2007-07-11 | Monsanto S.A.S. | Fad-2 mutants and high oleic plants |
| GB0603160D0 (en) | 2006-02-16 | 2006-03-29 | Rothamsted Res Ltd | Nucleic acid |
| AR059376A1 (es) | 2006-02-21 | 2008-03-26 | Basf Plant Science Gmbh | Procedimiento para la produccion de acidos grasos poliinsaturados |
| US8629195B2 (en) | 2006-04-08 | 2014-01-14 | Bayer Materialscience Ag | Production of polyurethane foams |
| US7678560B2 (en) * | 2006-05-17 | 2010-03-16 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Δ 5 desaturase and its use in making polyunsaturated fatty acids |
| EP2041275B1 (en) | 2006-07-19 | 2011-05-04 | Monsanto Technology, LLC | Fatty acid desaturases from tetraselmis suecica |
| EP2061879A2 (en) | 2006-08-24 | 2009-05-27 | BASF Plant Science GmbH | Isolation and characterization of a novel pythium omega 3 desaturase with specificity to all omega 6 fatty acids longer than 18 carbon chains |
| CN101578363A (zh) | 2006-08-29 | 2009-11-11 | 联邦科学技术研究组织 | 脂肪酸的合成 |
| US8710299B2 (en) | 2006-10-06 | 2014-04-29 | Basf Plant Science Gmbh | Processes for producing polyunsaturated fatty acids in transgenic organisms |
| CN101631868B (zh) | 2007-02-16 | 2016-02-10 | 巴斯福植物科学有限公司 | 用于在单子叶植物中调节胚特异性表达的核酸序列 |
| EP2176416B1 (de) * | 2007-07-31 | 2016-03-16 | BASF Plant Science GmbH | Elongasen und verfahren zur herstellung mehrfach ungesättigter fettsäuren in transgenen organismen |
| DE112008003237T5 (de) | 2007-12-14 | 2011-03-17 | Basf Plant Science Gmbh | Promotoren von Brassica napus für samenspezifische Genexpression |
| CN102066564B (zh) * | 2008-04-30 | 2015-02-11 | 罗特哈姆斯泰德研究有限公司 | 去饱和酶和在转基因生物中产生多不饱和脂肪酸的方法 |
| US8853383B2 (en) | 2008-07-01 | 2014-10-07 | Basf Plant Science Gmbh | Promoters from Brassica napus for seed specific gene expression |
| EP2331695B1 (en) | 2008-08-26 | 2014-07-23 | BASF Plant Science GmbH | Nucleic acids encoding desaturases and modified plant oil |
| CN102317459A (zh) | 2008-11-18 | 2012-01-11 | 联邦科学技术研究组织 | 产生ω-3脂肪酸的酶和方法 |
| ES2435572T3 (es) | 2008-12-12 | 2013-12-20 | Basf Plant Science Gmbh | Desaturasas y proceso para la producción de ácidos grasos poliinsaturados en organismos transgénicos |
| CA2758824A1 (en) | 2009-04-17 | 2010-10-21 | Basf Plant Science Company Gmbh | Plant promoter operable in endosperm and uses thereof |
| CA3020943A1 (en) | 2009-04-22 | 2010-10-28 | Basf Plant Science Company Gmbh | Whole seed specific promoter |
| CA2760326A1 (en) | 2009-05-13 | 2010-11-18 | Basf Plant Science Company Gmbh | Acyltransferases and uses thereof in fatty acid production |
| WO2011003901A1 (en) | 2009-07-10 | 2011-01-13 | Basf Plant Science Company Gmbh | Expression cassettes for endosperm-specific expression in plants |
| DE112010002967T5 (de) | 2009-07-17 | 2012-10-11 | Basf Plant Science Company Gmbh | Neue Fettsäuredesaturasen und -elongasen und Anwendungen davon |
| WO2011067712A1 (en) | 2009-12-03 | 2011-06-09 | Basf Plant Science Company Gmbh | Expression cassettes for embryo-specific expression in plants |
| CA2804925A1 (en) | 2010-06-25 | 2011-12-29 | Basf Plant Science Company Gmbh | Acyltransferases from thraustochytrium species and uses thereof in fatty acid production |
| CN102250928A (zh) * | 2011-04-07 | 2011-11-23 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | Δ-6脂肪酸脱氢酶突变基因及其表达载体和应用 |
| AU2013246661B2 (en) | 2012-04-12 | 2018-12-20 | Rothamsted Research Ltd | Production of omega-3 long chain polyunsaturated fatty acids |
| NZ631702A (en) | 2012-06-15 | 2017-01-27 | Grains Res & Dev Corp | Production of long chain polyunsaturated fatty acids in plant cells |
| KR101437605B1 (ko) * | 2012-06-29 | 2014-09-15 | 대한민국 | 형질 전환된 유채를 제조하는 방법 |
| GB201217524D0 (en) | 2012-10-01 | 2012-11-14 | Rothamsted Res Ltd | Recombinant organisms |
| BR112016002721A2 (pt) * | 2013-08-07 | 2018-07-10 | Yeda Research And Development Company Ltd. | peptídeos capazes de reativar p53 mutantes |
| KR102386838B1 (ko) | 2013-12-18 | 2022-04-15 | 커먼웰쓰 사이언티픽 앤 인더스트리알 리서치 오거니제이션 | 장쇄 다중불포화 지방산을 포함하는 지질 |
| EP3160482A4 (en) | 2014-06-27 | 2018-02-14 | Commonwealth Scientific and Industrial Research Organisation | Lipid comprising docosapentaenoic acid |
| JP7072508B2 (ja) | 2016-02-04 | 2022-05-20 | イェダ リサーチ アンド ディベロップメント カンパニー リミテッド | 変異型ｐ５３と関連している疾患、障害または病状の処置におけるペプチドおよびその使用 |
| FR3053052B1 (fr) | 2016-06-28 | 2021-02-12 | Fermentalg | Microalgue modifiee pour une production enrichie en tag |
| CN112048460B (zh) * | 2020-08-07 | 2023-06-16 | 中国科学院水生生物研究所 | 工程化细鞘丝藻及其生产gla的应用 |
| WO2023108250A1 (en) * | 2021-12-16 | 2023-06-22 | Bioriginal Food & Science Corp. | Plants with ehnhanced gamma linolenic acid production |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4736866A (en) * | 1984-06-22 | 1988-04-12 | President And Fellows Of Harvard College | Transgenic non-human mammals |
| NZ221259A (en) * | 1986-07-31 | 1990-05-28 | Calgene Inc | Seed specific transcriptional regulation |
| DK0413019T3 (da) * | 1989-02-24 | 2001-11-12 | Monsanto Technology Llc | Syntetiske plantegener og fremgangsmåde til fremstilling af disse |
| US5260379A (en) * | 1991-09-13 | 1993-11-09 | Eastman Kodak Company | Polyester blends with improved processability |
| US5614393A (en) * | 1991-10-10 | 1997-03-25 | Rhone-Poulenc Agrochimie | Production of γ-linolenic acid by a Δ6-desaturase |
| PH31293A (en) * | 1991-10-10 | 1998-07-06 | Rhone Poulenc Agrochimie | Production of y-linolenic acid by a delta6-desaturage. |
| EP0684998A1 (en) * | 1993-02-05 | 1995-12-06 | Monsanto Company | Altered linolenic and linoleic acid content in plants |
-
1994
- 1994-12-30 US US08/366,779 patent/US5614393A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-12-28 CN CN95197728A patent/CN1117864C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1995-12-28 RO RO97-01202A patent/RO121387B1/ro unknown
- 1995-12-28 WO PCT/IB1995/001167 patent/WO1996021022A2/en active IP Right Grant
- 1995-12-28 CA CA002207906A patent/CA2207906C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-12-28 AU AU46735/96A patent/AU707061B2/en not_active Ceased
- 1995-12-28 JP JP52082796A patent/JP4422211B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-12-28 ES ES95944464T patent/ES2262146T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-12-28 BR BR9510411A patent/BR9510411A/pt not_active IP Right Cessation
- 1995-12-28 DE DE69535064T patent/DE69535064T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-12-28 AR AR33486195A patent/AR000582A1/es active IP Right Grant
- 1995-12-28 UA UA97063197A patent/UA61880C2/uk unknown
- 1995-12-28 RU RU97112919/13A patent/RU2181772C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1995-12-28 EP EP95944464A patent/EP0801680B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-01-28 US US08/789,936 patent/US5789220A/en not_active Expired - Lifetime
-
2007
- 2007-08-01 JP JP2007201265A patent/JP2007330267A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU707061B2 (en) | 1999-07-01 |
| CN1117864C (zh) | 2003-08-13 |
| JPH10511848A (ja) | 1998-11-17 |
| US5614393A (en) | 1997-03-25 |
| UA61880C2 (en) | 2003-12-15 |
| DE69535064T2 (de) | 2006-12-07 |
| JP2007330267A (ja) | 2007-12-27 |
| CN1177379A (zh) | 1998-03-25 |
| AR000582A1 (es) | 1997-07-10 |
| EP0801680B1 (en) | 2006-06-14 |
| RU2181772C2 (ru) | 2002-04-27 |
| AU4673596A (en) | 1996-07-24 |
| WO1996021022A3 (en) | 1996-09-12 |
| BR9510411A (pt) | 1998-05-19 |
| DE69535064D1 (de) | 2006-07-27 |
| JP4422211B2 (ja) | 2010-02-24 |
| CA2207906C (en) | 2009-12-01 |
| WO1996021022A2 (en) | 1996-07-11 |
| US5789220A (en) | 1998-08-04 |
| CA2207906A1 (en) | 1996-07-11 |
| ES2262146T3 (es) | 2006-11-16 |
| EP0801680A2 (en) | 1997-10-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU707061B2 (en) | Production of gamma linolenic acid by a delta6-desaturase | |
| US6355861B1 (en) | Production of gamma linolenic acid by a Δ6-desaturase | |
| RU2152996C2 (ru) | Фрагмент днк (варианты), вектор, способ получения растения, способ индуцирования продукции гамма-линоленовой кислоты (варианты), способ индуцирования продукции октадекатетраеновой кислоты и дельта-6-десатураза цианобактерий | |
| US20170283780A1 (en) | Fatty acid desaturases from primula | |
| US20020042933A1 (en) | Omega-3 fatty acid desaturase | |
| CA2323754C (en) | Modification of fatty acid composition in plants by expression of an aspergillus nidulans delta-9 coa desaturase | |
| US6683232B1 (en) | Production of γ linolenic acid by a Δ6-desaturase | |
| US20070130654A1 (en) | Production of gamma linolenic acid by a delta6-desaturase |