METODO PARA IDENTIFICAR PECES DE RAPIDO CRECIMIENTO EN SALINIDADES DIFERENTES Solicitudes Relacionadas Esta solicitud reivindica el beneficio de la solicitud número de serie 60/315,156 que se presentó el 27 de agosto del -2001. Patrocinio del Gobierno Esta Invención es provista de fondos en parte por NSF DBI 9803946, USDA/NRICGP 00352059287. Derechos de Autor Una porción de la descripción de este documento de patente contiene material que está. sujeto a la protección de derechos de autor. El propietario de los derechos de autor no tiene objeción para la reproducción por facsímil de cualquiera del documento de patente o la descripción de patente como aparece en los archivos o registros de patentes de la Oficina de Patentes y Marcas de los Estados Unidos, pero de otra manera se reserva todos los derechos de autor de cualquier clase. Campo de la Invención La invención se relaciona a la selección de peces para crecimiento óptimo. Más particularmente, la invención se relaciona a métodos para seleccionar peces, en particular tilapia, para el crecimiento óptimo en agua de salinidad diferente. Más particularmente, la invención se relaciona al uso de un polimorfismo en el gen de prolactina de tilapia para seleccionar y luego reproducir peces, basados en el genotipo, para el crecimiento óptimo en agua de salinidad diferente. Antecedentes de la Invención Las tilapias están entre los peces de aletas de acuacultura más importantes del mundo e incluyen cualquiera de riumerosas especies de peces, principalmente de agua dulce (género Tilapia, familia Cichlidae) originarias de África. Las tilapias se asemejan a los peces sol de Norteamérica y una especie puede crecer hasta 9 kg (20 lbs) . Las especies de tilapia son populares como peces de acuacultura debido a que son fáciles de criar- y colectar para alimento. Ellas crecen rápidamente, resisten enfermedades y comen fácilmente abundante algas y zooplancton. Como resultado, la tilapia se ha usado en sistemas de acuacultura de agua caliente desde la civilización Egipcia antigua y se ha introducido en muchos hábitats de agua dulce. Además, algunas tilapias también crecen bien en el agua salada, y varias razas difieren en su tolerancia al agua salada. Por ejemplo, en ciertas áreas del mundo es preferible criar tilapia en bahias o aguas salinas, pero no todos los individuos crecen bien en estas condiciones. De hecho, la especie de tilapiina difiere grandemente en la tolerancia a la sal y la respuesta de crecimiento en salinidades diferentes. Asi, ha sido, y continua siendo un poco dificil seleccionar o predecir que individuos crecerán mejor en esa salinidad. Una multitud de estudios han dirigido medios para criar tilapia - más grande y más rápido . Como con cualquier animal alimenticio', los productores buscan maneras para seleccionar y criar ani¾áles más grandea' en menos½" tiempo . Asi, se ha investigado el uso de hormonas de^ crecimiento a varaos grados con la mayoría de tipos de animales alimenticios, incluyendo tilapia. Además, han existido experimentos con la temperatura del agua, salinidad e hibridación. Sin embargo, no hay un método presente, diferente al de prueba y error, para identificar razas de tilapia para el crecimiento en salinidades diferentes. Con respecto a las hormonas, se conoce mucho a cerca de la función de las hormonas de péptido en la osmorr-egulación del pez. La prolactina es un miembro de la familia del gen GH/Prl cuyo papel de ""adaptación de agua dulce" es incrementar la osmolalidad del plasma al reducir la actividad de Na+K+ ATP-asa de branquia. La pituitaria de la tilapiina produce dos formas de prolactina, codificadas por diferentes genes, prl 1 y prl 2, que difieren ambas en el peso molecular (24 y 20 kD respectivamente) y número de residuos de aminoácidos (188 y 177 respectivamente) . Estas dos formas son aproximadamente 70% idénticas en el nivel de aminoácido y aparecen para tener acciones osmorreguladas y somatotrópicas diferenciales. Los experimentos pasados sugieren que conforme los peces se mueven en medios ambientes más salinos, ambos mRNA' s de prolactina asi como los niveles en el suero de prolactina disminuyen, y este efecto es más notable para la prolactina 1. El promotor prl 1 de tilapia comparte elementos no canónicos con aquel de la rata. Ambor¥-promotores tienen dos microsatélites (CA)n (secuencias cortas de nucleótidos repetidos) interdispersados entre los sitios de enlace putativos para el factor de transcripción especifico de pituitaria Pit-1 (ver la Figura 1) . Naylor y Clark (Naylor L. H. y Clarke E. M. Nucleic Acids Res 18: 159501601, 1990) demostraron en la rata que estas secuencias de repetición formaron Z-DNA por la izquierda in vitro y la expresión prl 1 reprimida. Actualmente los microsatélites y la variación de longitud de microsatélite de no codificación entre los individuos de una especie generalmente se piensa que son neutros y carecen de consecuencia funcionales, excepto quizás que están relacionadas a ciertas enfermedades genéticas, y generalmente no se han investigado detalladamente. Sin embargo, a pesar de la interpretación de los libros de texto de que las repeticiones de secuencia simple de no codificación evolucionan en un aspecto neutro, recientes reportes lo han indicado de otra manera. De hecho, la abundancia y la posición de los microsatélites de dinucleótido en genomas eucarióticos, acoplados con una alta proporción de mutación, sugieren una función potencial y penetrante para microsatélites en la regulación del gen. Por lo tanto, seria deseable tener un método simple, basado en una variedad de genotipos, para identificar y seleccionar animales (por ejemplo, tilapia) para l crecimiento óptimo en condiciones de salinidad diferentes. Tal, método eliminaría la necesidad para experimentar, con la condiciones del medio ambiente/acuacultura del crecimiento de los peces, así también eliminaría la necesidad de suplementar los peces con estimulantes del crecimiento u otros medios artificiales. Breve Descripción de la Invención La invención más generalmente se relaciona a la provisión de un medio confiable para seleccionar y reproducir peces para el crecimiento de óptimo en salinidades diferentes . En el desarrollo de la invención, los Solicitantes simplemente usaron un sistema natural para evaluar la asociación entre la variación del microsatélite de dinucleótido, a diferencias cuantitativas en la expresión de gen y la respuesta fisiológica a medios ambientes contrastantes. El trabajo de los solicitantes, de hecho, proporciona la primera evidencia in vivo de que las diferencias en la longitud del microsatélite dentro de los individuos pueden en realidad afectar la expresión del gen y que la variación en la expresión tiene consecuencias fisiológicas concomitantes . Una modalidad más básica de la invención, por lo tanto, de preferencia usa diferencias entre los peces individuales en la longitud de un estiramiento de repetición de secuencia simple de DNA (un microsatélite} en el promotor " prolactin 1 para seleccionar individuos para el crecimiento óptimo en salinidades diferentes. La invención incluye métodos para seleccionar peces individuales para el crecimiento óptimo en condiciones de varias salinidades. Los peces son seleccionados para la reproducción y cria en una salinidad especifica basado en su genotipo de prolactina. Los solicitantes descubrieron que un polimorfismo de repetición de secuencia simple (microsatélite) en el promotor de prolactina 1 (prl 2) de tilapia está asociado con diferencias en la expresión prl 1 y el crecimiento en los peces de "reto salino" o "efecto salino". Este descubrimiento sugiere que los microsatélites de dinucleótido pueden representar una fuente subestimada de variación genética para la evolución reguladora, y contradice la interpretación de los libros de ^texto de que la variación de la longitud de microsatélite de no codificación carece de consecuencias funcionales. En el desarrollo de la invención, los solicitantes razonaron que un efecto regulador similar a aquel encontrado con respecto a las secuencias de repetición de microsatélite que formaron Z-DNA y reprimieron prl 1 en la rata (Naylor L.H. y Clarke E.M. Micleíc Acids Res 18: 1595-1601, 1990) se puede encontrar en otras especies aunque la variación de longitud de microsatélite generalmente se piensa que carece de consecuencias funcionales. En la presente invención, los solicitantes investigaron si algún efecto regulador podria estar presente en la tilapia con respecto la longitud de microsatélite del promotor prl 1, y si las diferencias individuales en la longitud del microsatélite podria efectuar la expresión de prl 1 in vivo y podria contribuir a la variación conocida en la tolerancia a la sal y el crecimiento de la tilapia en salinidades diferentes . De hecho, los solicitantes encontraron que las diferencias en la longitud del estiramiento de repetición de secuencia simple de DNA en el promotor de prolactina de tilapia producen cambios en la cantidad de prolactina que es producida de la pituitaria. Esta variación en la expresión de prolactina está asociada con proporciones de crecimiento divergentes de los individuos en condiciones de '' salinidad diferentes. Los solicitantes encontraron con la tilapia que la variación individual en la longitud del microsatélite afecta la expresión prl 1 in vivo y contribuye a la variación conocida en la tolerancia a la sal y el crecimiento. El conocimiento de las combinaciones óptimas de genotipo/salinidad conduce a los métodos de la presente invención en los cuales muchos mejores proporciones de crecimiento y tiempo de crecimiento reducido al tamaño del mercado pueden ser alcanzados con la tilapia. En los métodos de la invención, los genotipos prl 1 de los peces son determinados, luego los peces de un genotipo deseado son seleccionados y reproducidos para el crecimiento óptimo con respecto al genotip -para el crecimiento con una salinidad especifica. Una vez que los peces del genotipo deseados son encontrados y seleccionados ellos pueden ser reproducidos para dar por resultado crias, todas que tienen el o los genotipo (s) deseado (s) que crecen mejor en la salinidad del medio ambiente de acuacultura en el cual serán criados los peces . Asi, la invención proporciona un medio simple y poco costoso para seleccionar individuos, basado en su genotipo de prolactina, para el crecimiento rápido en salinidades diferentes. La invención -también hace uso de un enlace genético entre un polimorfismo en el gen de prolactina de tilapia y la proporción de crecimiento de pececillos a salinidades diferentes, de ag a dulce a agua completamente salada, para seleccionar individuos apropiados para la reproducción y el crecimiento óptimo en varias salinidades. La invención también proporciona un medio para alcanzar el crecimiento notablemente incrementado de individuos seleccionados y criados en la salinidad óptima para el genotipo de cada individuo. De hecho, la selección óptima, basada en una combinación de un genotipo de prolactina del individuo y la salinidad puede dar por resultado una diferencia de dos veces en la proporción de crecimiento si el individuo es criado en agua con una salinidad apropiada a su genotipo Contra una salinidad no compatible con el genotipo del individuo. Además, la invención también proporciona un método para seleccionar peces para la reproducción, tal que todas las crias son de un genotipo prl 1 más compatible con un medio ambiente de salinidad dado o seleccionado (ya sea localmente disponible, o seleccionado, construido y mantenido por el acuacultivador) . Breve Descripción de los Dibujos — La Figura 1 (Técnica Previa) es una representación esquemática de la región del promotor prl 1 de tilapia. La identificación de los sitios de enlace del factor de transcripción putativo (por ejemplo,"~Pit 1) sigue los métodos de S ennen y colaboradores, DNA and Cell Biol. lia; 673-684, 1992. Las Figuras 2a-f ilustran los efectos de la expresión de prl 1 diferente y la masa de los peces a través de diferentes tratamientos con agua salada. Descripción Detallada de la Invención Una modalidad más básica de la invención es un medio mediante el cual los animales, de preferencia el pez tilapia, puede ser clasificado basado . en su genotipo de prolactina, y luego reproducido y criado en un medio ambiente con una salinidad compatible con su genotipo de prolactina para dar por resultado un crecimiento óptimo. *
Como se mencionó, los experimentos pasados sugieren que, conforme los peces se mueven en medios ambientes más salinos, ambos mRNA' s de prolactina 1 y 2 asi como los niveles en el suero de prolactina disminuyen, y este efecto es más notable para la prolactina 1. Asi, los experimentos y los ejemplos de los solicitantes se refieren al gen de prolactina 1, sin embargo, los métodos de la invención no están limitados solamente a la prolactina 1. En el desarrollo de la invención, los solicitantes inicialmente se concentraron en el microsatélite más cercano al inicio de la transcripción de prl 1 (-200 pares bases, bp) . Los solicitantes cruzaron hembras de los peces Oreochromis mossambicus (adaptados al agua salada) con un macho Oreochromis niloticus (adaptado al agua dulce) que lleva alelos de microsatélites que difirieron por 17 unidades de repetición (CA3i vs. CA14) . La madres O. mossambicus fueron homocigotas para los alelos largos (CA3i) y el padre O. niloticus fue un heterocigoto para los alelos largos y cortos- Ver la Figura 1 para una representación esquemática de la región del promotor prl 1 de tilapia. El CA„ a -200bp es la región discutida en los ejemplos. Los individuos Fi se seleccionaron para la reproducción tal que hubieron tres genotipos para seguir en la generación F2: homocigotos paralelos cortos (después en la presente WSS"), homocigotos paralelos largos ("LL") y heterocigotos ("SL") . 75 peces F2 de la misma carnada se criaron en tres tratamientos de salinidad en tanques de 200 L separados que varian de agua dulce (~0 partes por 1000 de NaCl, "ppt") a 16 ppt a agua salada (32 ppt) . Pececillos de dos semanas se aclimataron para los tratamientos durante un periodo de 3 dias y se mantuvieron hasta que la masa de pez promedió 15 g (aproximadamente 6 meses) . Dentro de los tratamientos con sal todos los 3 genotipos se criaron en el mismo tanque. Al final del periodo experimental los peces se sacrificaron, se clasificaron 'por sexo y se pesaron. Las pituitarias se colectaron y se almacenaron a -20 grados C en RNA posterior (Ambion) hasta la extracción de RNA. La expresión de prl 1 se midió de las pituitarias de los individuos F2 (preparaciones de cDNA) usando sondas Taqman (PE Biosystems) para PCR de tiempo real con b-actin como una referencia. Los cebadores y las sondas se diseñaron para cada cDNA usando Primer Express, (versión 1.5 Applied Biosystems). Los sitios de enlace de la sonda se localizaron en los limites de intrón-exón para prevenir la amplificación DNA genómico. Las sondas fueron marcadas fluorescentemente en el extremo 3' . La fluorescencia se inspeccionó durante 40 ciclos de PCR sobre un sistema de detección de secuencia GeneAmp 5700 (Applied Biosystems) a 95 grados durante 15 segundos, 55 grados C -durante 30 segundos y 65 grados C durante 1 minuto . El número de ciclos críticos se determinó cuando la fluorescencia excedió un valor umbral ajustado cercano al antecedente. La expresión de gen relativa a prl 1 se determinó de acuerdo con la fórmula 2B~ac inCT_i>-r-í 1 CT donde CT es el número de ciclos crítico. El cebador PCR de tiempo real y las secuencias de sondas son como sigue: cebador F, cccatcaacgaactgttcga (SEQ. ID. NO. 1); cebador R gcatgatcacctgcctatagg (SEQ. ID. NO. 2) sonda, ctcacccaggagctggactctcacttccctc (SEQ. ID. NO. 3) . Los individuos F2 fueron clasificados en genotipo como es descrito por Lee .J. y Kocher T.D. en Microsatellite Mappinq of the Prolactin Locus in the Tilapia Genome Anim. Genet. 29:68-69, 1998 que es incorporada en la presente por referencia en su totalidad, o por un RFLP de Sac II en cDNA de prl 1 que distingue los alelos de origen. Aquellos expertos en la técnica conocerán el método Sac II. Las diferencias entre los genotipos y los tratamientos se evaluaron mediante A OVA de una vía y las pruebas de comparación múltiples post hoc apropiadas. Resultados Las hembras fueron más grandes que los machos a través de todos los tratamientos de salinidad pero no difirieron de los machos en la expresión prl 1. En general, la masa de los peces promedio se incrementó con la salinidad incrementada (p = 3.4 x 10"06) . La expresión difirió entre los, genotipos en 0 ppt (p 0 0.006); los individuos SS expresaron aproximadamente 2 veces tanto prl 1 como los peces SL y aproximadamente 7 veces tanto prl 1 como los peces LL. Estos resultados son mostrados en la Figura 2a. Todas las representaciones gráficas mostradas en las Figuras 2a-f representan promedio +/- errores estándares . La expresión difirió entre los genotipos en 16 ppt
(p = 0.0005) pero con un patrón casi opuesto a aquel observado en el agua dulce. Los individuos del genotipo LL expresaron dos veces tanto prl 1 como lo hacen los peces de los genotipos SS y SL, como es mostrado en la Figura 2b. Notablemente, sin embargo,, los individuos LL fueron casi dos veces tan pequeños como aquellos de otros genotipos en 16 ppt, como es mostrado en la Figura 2d, mientras que los individuos SS fueron los más pequeños en 0 ppt como es mostrado en la Figura 2c. Sin embargo, no hubo diferencias entre los tres genotipos en cualquier expresión prl 1 o la masa del pez en 32 ppt. Todos los genotipos crecieron muy bien en 32 ppt y estos datos no son mostrados, pero observar la Figura 2f para las masas de los tres genotipos en 32 ppt. Existieron interacciones significantes de genotipo x medio ambiente detectado para todos los genotipos. Para todos los genotipos, tanto la expresión prl 1 como la masa difirió a través de los tratamientos con sal. Para SS: p = 1.5 x 10~05 para la expresión y p = 0.03 para la masa. Para SL: p = 3.8 x 10"06 para expresión y p = 0.008 para la masa. Para LL: p = 0.0008 para la expresión y p = 0.06 para la masa. Los individuos del genotipo SS y SL mostraron disminuciones notables (mayor que 10 veces) en la expresión de prl 1 de 0 - 16 ppt. Esta respuesta no fue aproximadamente tan evidente para el genotipo LL, como es mostrado en la Figura 2e. Cada genotipo creció mejor a vina salinidad diferente como es mostrado en la Figura 2f, y el crecimiento promedio de los genotipos fue inversamente correlacionado con la expresión prl 1 promedio a través de las salinidades. Para SS: r2 = 0.957, para SL: r2 = 0.971 y para LL:. r2 = 0.530. Sin embargo, las Figuras 2e y 2f demuestran normas divergentes de reacción para cada genotipo en respuesta a la concentración de sal externa. En poblaciones naturales estas "interacciones de cruzamiento" son la prueba suficiente a primera vista para el mantenimiento adaptativo de la variación genética en los medios ambientes fluctuantes. En otras palabras, mientras que estas son condiciones bajo las cuales algunos genotipos prosperan mejor que otros, todos los tres genotipos son capaces de crecer en condiciones de salinidad que varían de agua dulce a agua salada. La variedad de los genotipos -de esta manera permite la adaptación a varios medios ambientes utilizando el mismo gen. Esto se correlaciona con la investigación inicial de los solicitantes en la variación supuestamente no fusional en microsatélites que en realidad puede tener una función muy importante. La posibilidad de que. las corridas de purinas y pirimidinas alternantes podria afectar la expresión del gen fue sugerida hace casi 20 años por Alexander Rich y otros (Nordheim, . A. y Rich, A., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 80: 1821-?ß¾5, 1983) . Esta sugerencia y los resultados sorprendentes de los solicitantes sugieren que las repeticiones de longitud variable -pueden inducir las conformaciones del promotor que difieren en su habilidad para enlazar reguladores de transcripción. Existe buena evidencia de que la expresión prl 1 de tilapia es regulada en respuesta a la osmolalidad del plasma, quizá por medio de las interacciones con Pit-1. Los alelos de microsatélite prl 1 largos de esta manera pueden actuar como aisladores, restringiendo el acceso de los mej oradores (por ejemplo, agua dulce) y represores (por ejemplo, agua salada) a los sitios Pit-1. Debido a que los peces F2 no son lineas isogénicas que segregan para diferentes alelos de microsatélite, formalmente no se puede excluir la posibilidad de que los alelos seguidos por los solicitantes están en desequilibrio de enlace con un polimorfismo causativo/ no medido. Sin embargo, la secuencia de 1.2 Kb del promotor prl 1 en los individuos SS vs . LL no reveló sustituciones consistentes en los sitios de enlace del elemento regulador conocido. De hecho, las diferencias de la secuencia adicional en esta región se encuentran en la segunda repetición de secuencia simple de 800 bp corriente arriba del codón de inicio. Los individuos del genotipo SS tiene alelos más cortos (GT14) que los peces LL (GT39) en esta repetición. Tomados con untamente, ambos microsatélites en el promotor prl 1 de los peces SS son menores que la mitad del tamaño de la secuencia correspondiente en los individuos LL. Estos resultados muestran un patrón de covariación positiva que contrasta con los datos de otros peces espinosos. Es posible que estas repeticiones de secuencia simple interactúen con otra para producir el cambio transcripcional. Aunque otros han sugerido la posibilidad de un papel funcional para los microsatélites, los resultados de los solicitantes proporcionan la primera evidencia in vivo de que las diferencias en la longitud del microsatélite dentro de los individuos puede afectar la expresión del gen y que la variación en la expresión tiene consecuencias fisiológicas concomitantes. Estos resultados se oponen a la interpretación de -los libros de texto de que la variación del microsatélite de dinucleótido carece de consecuencias funcionales . La correlación negativa entre la expresión prl 1 y la masa del pez es más dificil de explicar. Tanto la prolactina como la hormona de crecimiento son activadas por Pit-l en los linajes de células de pituitaria distintas y estas hormonas tienen efectos antagonisticos sobre la osmorregulación del pez. Los datos de los solicitantes no distinguen si los efectos de crecimiento son mediados por medio de las diferencias osmorreguladoras o la inhibición transcripcional de los somatótrofos que expresan GH. Desde una perspectiva evolucionista, como es mencionado en lo anterior, los resultados de los solicitantes se oponen a la interpretación de los libros de texto de que la variación del microsatélite de dinucleótido carece de consecuencias funcionales . Estos sitios están rápidamente evolucionando y los componentes ubicuos de genomas eucarióticos . Encontrados preferencialmente en el DNA de no codificación, las repeticiones de dinucleótido proporcionan un medio para alterar la cantidad de producto de gen entre los individuos sin cambiar la secuencia de aminoácidos de la proteina o péptido. La asociación de microsatélites con' una larga lista de factores de transcripción y genes ambientalmente regulados sugiere una función subestimada para microsatélites en la modulación de escala fina de la expresión del gen. Aunque los solicitantes no han determinado el ^mecanismo exacto mediante lo cual la tolerancia a la salinidad en la tilapia es regulada, el enlace que los solicitantes han descubierto entre las variaciones del microsatélite y la tolerancia a la salinidad han permitido a los solicitantes desarrollar un medio simple y poco costoso para seleccionar peces individuales, basados en su genotipo de prolactina, para el crecimiento rápido en salinidades diferentes. Asi, el método de la invención incluye la determinación o selección de la salinidad del medio ambiente, en el cual crecerán los peces, determinar el genotipo de prolactina (prl 1) de por lo menos un pe2 macho y por lo menos un pez hembra que son considerados para la reproducción; reproducir por lo menos un pez macho y un pez hembra que tienen el o los genotipo (s) deseado (s) para dar por resultado crias que tienen genotipos predecibles, conocidos; y crear las crias en un medio ambiente que tiene la salinidad seleccionada.
Por ejemplo, sí el agua dulce fuera más fácilmente disponible, más barato de adquirir y mantener un medio ambiente de agua dulce, etc., los peces que crecen mejor en el agua dulce serían deseados (es decir, peces SL o LL) y. seleccionados para reproducción. Mientras que sí el agua salina (en el rango de aproximadamente 8 ppt a aproximadamente 16 ppt) fuera -el suministro de agua localmente disponible o fuera más fácilmente disponible o deseable, los peces SS o SL serían los genotipos de elección. La clasificación de los genotipos de los peces se hace de acuerdo con Lee y Kocher (1998), que se han incorporado en la presente por referencia en su totalidad, o por un RFLP de Sac II en cDNA de prl 1, como se mencionó en lo anterior. Brevemente, el DNA de los peces que son determinados, es extraído de recortes de aleta (una pieza de tejido de una aleta del pez) en un procedimiento similar a la prueba de DNA del cabello humano, por ejemplo. Los alelos de microsatélite de prolactina 1 son amplificados por PCR y visualizados en geles de acrilamida, un tipo de procedimiento con el cual un experto ordinario en la técnica estará familiarizado. Los cebadores y sondas usados para la prueba de clasificación de genotipo son como se describe en lo anterior, en la SEQ. ID. NO.'s 1-3. Ver también Lee y Kocher 1998.
Una vez que se han encontrado los peces de reproducción adecuados, ellos pueden ser utilizados como la base para establecer una población uniforme de peces, todos los cuales tienen los genotipos deseados, selectivamente reproducidos y son mejor adecuados para el crecimiento óptimo y máximo en la salinidad seleccionada. Además, el método proporciona un asnera poco costosa para establecer una población de peces mejor adecuada a las condiciones de salinidad del medio ambiente de crecimiento particular debido a la etapa de prueba de genotipo necesaria que solamente se ha hecho una vez para cada población - para inicialmente encontrar peces adecuados para la reproducción. Una vez que los peces apropiados son seleccionados y son reproducidos, todas las crias tendrán los genotipos deseados y crecerán en la salinidad seleccionada. Además, debido a que todas las crias serán de genotipos conocidos, cualquiera de esas crias luego pueden ser seleccionadas y usadas para la reproducción para iniciar nuevas poblaciones de peces que tiene un genotipo conocido, sin tener que probar para el genotipo de cada pez usado para la nueva base de reproducción. Mientras que la descripción anterior y los ejemplos describen algunas modalidades preferidas de la invención, por ejemplo tilapia y prolactina 1, la invención no está limitada en el alcance por las modalidades especificas descritas. Las modalidades descritas se proponen como únicas ilustraciones de aspectos individuales de la invención, y métodos y componentes funcionalmente equivalentes que están dentro del alcance de la invención. Por ejemplo, los métodos de la invención pueden ser adaptados para el uso con otras especies de peces, y serian particularmente útiles con otros peces reproducidos para alimento, tal como salmón o besugo. Los métodos y principios de la invención también pueden ser aplicados con respecto a otros genes, tal' como quizás prolactina 2. Asi, puede haber variaciones y modificaciones de la invención, además de aquellas mostradas y descritas en la presente, que, mientras que no se describen específicamente, no se apartan del espíritu y el alcance de la invención como es descrito en lo anterior en las reivindicaciones adjuntas y que llegarán a ser evidentes para aquellos expertos en la técnica a partir de la descripción anterior y los dibujos acompañantes. Tales modificaciones se proponen que caen dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas.