MX2013013533A - Uso de anticuerpos anti-cgrp y fragmentos de anticuerpo para prevenir o inhibir la fotofobia o aversion a la luz en sujetos en necesidad de los mismos, especialmente pacientes con migraña. - Google Patents

Abstract

La presente invención se dirige a métodos para inhibir o prevenir la fotofobia en sujetos en necesidad de los mismos usando anticuerpos anti-CGRP o fragmentos de anticuerpo que inhiben la fotofobia, especialmente la fotofobia asociada con CGRP. Estos anticuerpos y fragmentos son útiles en tratar diferentes trastornos asociados con la fotofobia tales como migraña, dolores de cabeza por multitud y los similares. La presente invención también proporciona ensayos usando roedores Nestin/Rampl transgénicos, utilizando un modelo de comportamiento aversivo a la luz de modelo CGRP para identificar anticuerpos anti-CGRP terapéuticamente efectivos y fragmentos de los mismos que tienen especificidad de enlace para CGRP que inhiben o previenen la fotofobia en sujetos en necesidad de los mismos. La presente invención se dirige específicamente a métodos para identificar anticuerpos terapéuticamente efectivos y fragmentos de los mismos que tienen especificidad de enlace para CGRP que se pueden usar para tratar trastornos asociados con CGRP tal como migraña. Específicamente, esta invención se relaciona a ensayos y terapias usando los anticuerpos descritos en la presente para inhibir o prevenir la fotofobia, y fragmentos de enlace de los mismos, que comprenden las secuencias de los polipéptidos VH, VL y CDR descritos en la presente, y los polinucleótidos que los codifican.

Description

USO DE ANTICUERPOS ANTI-CGRP Y FRAGMENTOS DE ANTICUERPO PARA PREVENIR O INHIBIR LA FOTOFOBIA O AVERSIÓN A LA LUZ EN SUJETOS EN NECESIDAD DE LOS MISMOS, ESPECIALMENTE PACIENTES CON MIGRAÑA SOLICITUDES RELACIONADAS La presente solicitud reivindica el beneficio de la solicitud provisional estadounidense N.° 61/496.860 (N.° de expediente del apoderado 67858.760000), presentada el 14 de junio de 2011, titulada "USE OF ANTI-CGRP ANTIBODIES AND ANTIBODY FRAGMENTS TO PREVENT OR INHIBIT PHOTOPHOBIA IN SUBJECTS IN NEED THEREOF, ESPECIALLY MIGRAINE" y la solicitud provisional estadounidense N.° 61/488.660 (N.° de expediente del apoderado 67858.730300), presentada el 20 de mayo de 2011, titulada "ANTI-CGRP COMPOSITIONS AND USE THEREOF", cada una de las cuales se incorpora al presente por referencia en su totalidad.

La presente solicitud contiene un listado de secuencias que se ha presentado en formato ASCII a través de EFS-Web y que se incorpora al presente por referencia en su totalidad. Dicha copia en ASCII, creada el 21 de mayo de 2012, se titula 67858o730305.txt y tiene un tamaño de 203.941 bytes.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Campo de la invención La presente invención se refiere al descubrimiento de que se pueden utilizar polipéptidos que inhiben la interacción CGRP/receptor de CGRP y/o anticuerpos y fragmentos de anticuerpos que se unen específicamente a CGRP o a un receptor de CGRP para inhibir la fotofobia inducida por CGRP cuando se le administran a un sujeto que lo necesitan. Los polipéptidos que inhiben la interacción CGRP/receptor de CGRP para su uso en la invención incluyen, a modo de ejemplo, anticuerpos y fragmentos de anticuerpos específicos para CGRP o el receptor de CGRP y fragmentos o variantes de CGRP o el recetor de CGRP que inhiben a CGRP en la interacción con receptores de CGRP. Como la fotofobia es un efecto secundario adverso que suele estar asociado a muchos trastornos que incluyen, a modo de ejemplo, migraña con y sin aura y otras afecciones relacionadas con la cefalea (así como otras indicaciones divulgadas a continuación) , estos inhibidores de receptores de CGRP, p. ej . , anticuerpos y fragmentos de anticuerpos específicos para CGRP o el receptor de CGRP resultarán adecuados para inhibir la fotofobia que suele estar asociada a la migraña y otras afecciones relacionadas con la cefalea así como para tratar otras afecciones asociadas a la fotofobia. Los resultados también sugieren que se pueden utilizar estos anticuerpos y fragmentos de anticuerpos para prevenir el inicio de la fotofobia en sujetos que lo necesitan tales como personas con una historia crónica de fotofobia, p. ej . , como un resultado de migraña (con o sin aura) , otra afección relacionada con la cefalea, depresión, agorafobia u otras afecciones propensas a la fotofobia si los anticuerpos se administran profilácticamente. La invención contempla el uso de estos anticuerpos anti-CGRP y fragmentos de anticuerpos como una monoterapia o en regímenes terapéuticos con otros agentes activos, p. ej . , analgésicos, opioides, antidepresivos u otros agentes activos que dependen de la afección y de la persona tratada.

La invención además proporciona métodos de clasificación de inhibidores de receptores de CGRP, p. ej . , anticuerpos anti-CGRP o anticuerpos de receptores anti-CGRP y fragmentos de estos (incluso fragmentos Fab) que tienen especificidad de unión al péptido relacionado con el gen de la calcitonina humano (en lo sucesivo "CGRP") o al receptor de CGRP en modelos animales específicos para determinar los efectos in vivo es estos, más especialmente su capacidad de antagonizar los efectos secundarios fotofóbicos de CGRP y para tratar afecciones que involucran a la fotofobia, incluso, p. ej . , la migraña.

Descripción de la técnica relacionada El péptido relacionado con el gen de la calcitonina (CGRP) se produce como un neuropéptido multifuncional de 37 aminoácidos de longitud. Existe dos formas de CGRP, las formas CGRP-alfa y CGRP-beta, en los seres humanos y tienen actividades similares. CGRP-alfa y CGRP-beta difieren por tres aminoácidos en los seres humanos y derivan de genes diferentes. La familia de péptidos CGRP incluye amilina, adrenomedulina y calcitonina, aunque cada uno tiene actividades biológicas y receptores distintos. Doods, H., Curr. Op. Invest. Drugs, 2(9) .1261-78 (2001).

CGRP se libera de varios tejidos tales como los nervios trigéminos, que cuando se activan liberan neuropéptidos dentro de las meninges, que realizan una mediación de la inflamación neurogénica que se caracteriza por la vasodilatación, la fuga de los vasos y la degradación de los mastocitos. Durham, P.L., New Eng. J. Med., 350 (ll):1073-75 (2004). Los efectos biológicos de CGRP son mediados a través del receptor de CGRP (CGRP-R) , que consiste en un componente de transmembrana siete, junto con una proteina de membrana asociada al receptor (RAMP) . CGRP-R además requiere la actividad de la proteina del componente del receptor (RCP) , que es esencial para un acoplamiento eficiente a la adenilato ciclasa a través de proteínas G y para la producción de cAMP.

Doods, H . , Curr. Op. Invest. Drugs, 2(9):1261-78 (2001).

Las migrañas constituyen un trastorno neurovascular que afecta aproximadamente el 10 % de la población adulta en Estados Unidos y suelen ir acompañadas de intensos dolores de cabeza. Aproximadamente el 20-30 % de las personas que sufren de migraña experimenta aura, que comprende fenómenos neurológicos focales que preceden y/o acompañan el evento. Se cree que CGRP cumple una función importante en el desarrollo de migrañas. Por ejemplo, se identificó que las concentraciones de CGRP en el plasma son elevadas en la sangre venosa yugular durante la fase de cefalea de la migraña, con exclusión de otros neuropéptidos . Además, de acuerdo con Arulmozhi y col., en las personas que sufren de migraña se ha identificado lo siguiente: (1) una fuerte correlación entre las concentraciones de CGRP en el plasma y las migrañas; (2) la infusión de CGRP produjo una cefalea similar a migraña; (3) los niveles de CGRP de referencia se elevaron; y (4) los cambios en lo niveles de CGRP en el plasma durante los ataques de migraña correlacionaron significativamente con la intensidad de la cefalea. Arulmozhi, D.K., y col., Vas. Pharma., 43: 176-187 (2005). Además, en "Journal of the International Association for the Study of Pain" PII : S0304-3959 ( 11 ) 00313-7 ; doi : 10.1016/j . pain.2011.04.033, publicado en linea el de 06 junio de 2011, Hou y col., se ha informado que expresión de queratinocitos del péptido relacionado con el gen de la calcitonina ß tiene implicaciones para los mecanismos de dolor neuropático e inflamatorio.

Un tratamiento eficaz para la migraña es la administración de triptanos, que son una familia de fármacos basados en triptamina, incluso sumatriptán y rizatriptán. Los miembros de esta familia tienen una afinidad por múltiples receptores de serotonina, incluso 5-HTiB, 5-HTiD y 5-???G. Los miembros de esta familia de fármacos constriñen selectivamente los vasos cerebrales, pero también producen efectos vasoconstrictores de los vasos coronarios. Durham, P.L., New Eng. J. Med. , 350 (ll):1073-75 (2004). Existe un riesgo teórico de espasmo coronario en pacientes con enfermedad cardiaca establecida después de la administración y rara vez se pueden producir eventos cardiacos después de tomar triptanos. Se observó como contraindicado para los pacientes con enfermedad vascular coronaria.

De forma similar, con frecuencia se puede abordar el dolor a través de la administración de determinados narcóticos o fármacos antiinflamatorios no esteroideos (NSAID) . Sin embargo, la administración de estos tratamientos puede suceder a costa de determinadas consecuencias negativas. Los NSAID tienen en potencial para provocar insuficiencia renal, sangrado intestinal y disfunción hepática. Los narcóticos tienen el potencial para provocar náuseas, vómitos, mal funcionamiento mental y adicción. Por lo tanto, es deseable identificar tratamientos alternativos para el dolor a fin de evitar algunas de estas consecuencias negativas .

Aparte de la migraña, se cree que CGRP cumple una función en muchas enfermedades y trastornos, incluso, entre otros, afecciones relacionadas con la cefalea y dolor. Debido a la implicación percibida de CGRP en estas enfermedades y trastornos, aún existe la necesidad en la técnica de composiciones y métodos útiles para prevenir o tratar enfermedades y trastornos asociados a CGRP, que eviten efectos secundarios adversos. En particular, aún existe la necesidad en la técnica de composiciones o métodos que reduzcan o inhiban la fotofobia en enfermedades o trastornos asociados a CGRP, por ejemplo migrañas, cefaleas y dolor.

Los pacientes con migraña suelen desarrollar síntomas de migraña y aumento del dolor cuando se exponen a la luz, un fenómeno conocido como fotofobia. La fotofobia también es común en trastornos oculares, por ejemplo iritis y uveítis, y trastornos intracraneales, por ejemplo meningitis. En la vía óptica clásica, la luz activa los conos y los bastones de la retina, que activan las células ganglionares de la retina que se proyectan por medio del nervio óptico hacia el núcleo geniculado lateral, el coliculo superior y luego la corteza visual. Esta via incluye datos formadores de imágenes y no formadores de imágenes. Una nueva via (información no formadora de imágenes) permite el mantenimiento de los ritmos circadianos normales por medio del núcleo supraquiasmático y se regula por las células ganglionares de la retina intrínsecamente fotosensibles (ipRGC) . Estas ipRGC son independientes de los conos y los bastones y contienen melanopsina, un fotopigmento .

Noseda y col. (Noseda, R. y col. "A neural mechanism for exacerbation of headache by light". Nat . Neurosci. 13, 239-245 (2010) ) estudió a personas ciegas que tenían migraña y correlacionó estos hallazgos con modelos de rata que implicaban trazar las proyecciones de ipRGC para las áreas en percepción de dolor de la duramadre. De los pacientes ciegos con migraña, 6 no tuvieron percepción de la luz debido al grave daño del nervio óptico o la enucleación bilateral. Estos sujetos experimentaron patrones de sueño anormales y respuestas pupilares a la luz pobres. Sus migrañas no empeoraron con la exposición a la luz. En contraste, 14 sujetos ciegos que podían detectar la luz a pesar de la mínima percepción de las imágenes tuvieron patrones de sueños normales y un reflejo pupilar a la luz normal. A pesar de la degradación generalizada de los conos y los bastones, estos pacientes tuvieron síntomas de empeoramiento de la migraña con la exposición a la luz durante los ataques de migraña, lo que sugiere que ipRGC, y no los canos y los bastones, son importantes en la fotofobia.

Estas proyecciones retinianas de áreas del cerebro no formadoras de imágenes se proyectan hacia la región contralateral dorsocaudal del tálamo posterior, como se demostró por el trazado anterogrado en la rata. La entrada de ipRGC a esta área modula las neuronas del dolor sensibles de la duramadre, que también se proyectan hacia esta región. Las neuronas talámicas, doblemente sensibles al dolor dural y la entrada de la luz, se proyectan ampliamente hacia múltiples regiones corticales, incluso la corteza somatosensorial primaria, las cortezas motoras primaria y secundaria, la corteza de asociación parietal y las cortezas visuales primarias y secundarias. Estas proyecciones corticales pueden ayudar a explicar otros síntomas de migraña comunes, además de la fotofobia, por ejemplo debilidad motora o falta de coordinación, alteraciones visuales y falta de concentración.

La fotofobia también acompaña otras afecciones menos frecuentes pero que igualmente incapacitan, por ejemplo cefalea en racimos y otras cefaleas autonómicas trigeminales y blefaroespasmo . Los mecanismos que subyacen a la fotofobia implican el sistema del nervio trigémino. Fotofobia en pacientes ciegos sugiere contribuciones de una via no visual. Además, las cefaleas autonómicas trigeminales , un grupo de las cefaleas primarias menos común, se caracterizan por un dolor mediado por trigémino unilateral que suele estar asociado a la fotofobia ipsilateral.

La estimulación de neuronas sensoriales trigeminales producen la liberación de neuropéptidos (incluso sustancia P y péptido relacionado con el gen de la calcitonina, produciendo dilatación de los vasos sanguíneos y mastocitos, activación endotelial y plaquetaria (inflamación neurogénica) , que producen migraña. (Buzzi MG, Dimitriadou V, Theoharides TC, Moskowitz MA. "5-Hydroxytryptamine receptor agonists for the abortive treatment of vascular headaches block mast cell, endothelial and platelet activation within the rat dura mater after trigeminal stimulation" . Brain Res 1992;583:137-149). CGRP se eleva en la sangre venosa yugular externa durante el dolor de migraña aguda, (Goadsby PJ, Edvinsson L, Ekman R. "Vasoactive peptide reléase in the extracerebral circulation of humans during migraine headache". Ann Neurol 1990;28:183-187) y los triptanos reducen los niveles elevados de CGRP. En modelos animales, ratones sensibilizados a CGRP demuestran un comportamiento aversivo a más luz cuando se exponen a CGRP exógeno. La administración de olcegepant, un antagonista del receptor de CGRP, impidió la fotofobia en estos ratones. (Véase Recober A, Kaiser EA, Kuburas A, Russo AF. "Induction of múltiple photophobic behaviors in a transgenic mouse sensitized to CGRP". Neuropharmacology 2010;58:156-165).

Sin embargo, aunque se ha sugerido el uso de anticuerpos anti-CGRP o anticuerpos de receptores anti-CGRP y fragmentos para tratar migraña, al saber del solicitante no ha habido ningún informe de algún antagonista de polipéptidos de CGRP o en particular un anticuerpo anti-CGRP o anticuerpo del receptor anti-CGRP o fragmento de anticuerpo que pueda aliviar o prevenir las efectos secundarios fotofóbicos de CGRP in vivo. El desarrollo de polipéptidos novedosos que actúan como inhibidores de la interacción CGRP/receptor de CGRP, por ejemplo anticuerpos anti-CGRP o anticuerpos de receptores anti-CGRP o fragmentos de anticuerpos anti-CGRP o fragmentos de anticuerpos de receptores anti-CGRP, seria beneficioso para los pacientes que, o bien no responden a agentes terapéuticos de migraña actuales, como los triptanos, o que no pueden tomarlos o tolerarlos debido a sus potenciales efectos vasoconstrictores.

BREVE COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente' invención se refiere al descubrimiento de que se pueden utilizar polipéptidos que inhiben la interacción CGRP/receptor de CGRP, por ejemplo anticuerpos anti-CGRP o anticuerpos de receptores anti-CGRP y fragmentos de anticuerpos anti-CGRP o fragmentos de anticuerpos de receptores anti-CGRP (incluso fragmentos Fab) que tienen especificidad de unión al péptido relacionado con el gen de la calcitonina humano (en lo sucesivo "CGRP") asi como fragmentos de CGRP y el receptor de CGRP que inhiben la interacción CGRP/receptor de CGRP, para prevenir o inhibir la fotofobia, especialmente la fotofobia asociada a CGR. A continuación, en el presente se ejemplifica particularmente un anticuerpo anti-CGRP identificado como Ab3, que alivia o previene la fotofobia de manera muy eficaz, especialmente los efectos fotofóbicos de CGRP. Otros ejemplos preferidos para su uso en las terapias reivindicadas son Ab6 y AblO, entre otros .

Sobre esa base la invención se refiere al uso de polipéptidos que inhiben la interacción de CGRP/receptor de CGRP, por ejemplo anticuerpos anti-CGRP o anticuerpos de receptores anti-CGRP y fragmentos de anticuerpos anti-CGRP o fragmentos de anticuerpos de receptores anti-CGRP (incluso fragmentos Fab) que tienen especificidad de unión al péptido relacionado con el gen de la calcitonina humano (en lo sucesivo "CGRP") asi como fragmentos de CGRP y el receptor de CGRP que inhiben la interacción CGRP/receptor de CGRP, preferentemente anticuerpos anti-CGRP y fragmentos de anticuerpos anti-CGRP, para tratar o prevenir la fotofobia. La invención abraca al tratamiento o prevención de cualquier fotofobia y, en particular, incluye el tratamiento o prevención de la fotofobia asociada a la migraña y otros trastornos asociados con la fotofobia, por ejemplo cefalea en racimos y otras cefaleas autonómicas trigeminales y blefaroespasmo, depresión, trastornos bipolares, agorafobia, meningitis y fotofobias asociadas a las afecciones relacionadas con los ojos, autismo, síndrome de fatiga crónica, migrañas menstruales y otras afecciones asociadas a la fotofobia.

La presente invención también se refiere a métodos de clasificación de polipéptidos que inhiben la interacción CGRP/receptor de CGRP, por ejemplo anticuerpos anti-CGRP o anticuerpos de receptores anti-CGRP y fragmentos de anticuerpos anti-CGRP o fragmentos de anticuerpos de unión a receptores anti-CGRP (incluso fragmentos Fab) que tienen especificidad de unión al CGRP humano así como fragmentos de CGRP y el receptor de CGRP que inhiben la interacción CGRP/receptor de CGRP, en modelos específicos de animales con fotofobia, p. ej . , el modelo de roedor nestin/hRAMPl divulgado a continuación, para determinar los efectos in vivo de estos, especialmente la capacidad de estos polipéptidos de inhibir la interacción CGRP/receptor de CGRP in vivo y antagonizar asi los efectos secundarios adversos in vivo de CGRP, incluso la fotofobia, y para tratar las afecciones de CGRP que implican fotofobia asociada a CGRP, incluso migraña y otros trastornos asociados con la fotofobia, por ejemplo cefalea en racimos y otras cefaleas autonómicas trigeminales y blefaroespasmo, depresión, trastornos bipolares y otras afecciones asociadas a la fotofobia identificadas en el presente.

La invención también proporciona específicamente un método para evaluar la posible eficacia in vivo de un polipéptido candidato que inhibe la interacción CGRP/receptor de CGRP, por ejemplo anticuerpos anti-CGRP o anticuerpos de receptores anti-CGRP y fragmentos de anticuerpos anti-CGRP o fragmentos de anticuerpos de receptores anti-CGRP (incluso fragmentos Fab) que tienen especificidad de unión al CGRP así como fragmentos de CGRP y el receptor de CGRP que inhiben la interacción CGRP/receptor de CGRP, preferentemente un anticuerpo anti-CGRP o anticuerpo del receptor anti-CGRP, que comprende determinar si el polipéptido, p. ej . , un anticuerpo, inhibe el comportamiento aversivo a la luz en un roedor transgénico que exhibe la fotoaversión cuando se le administra CGRP en comparación con el comportamiento fotoaversivo del roedor al que se le administra CGRP en ausencia del polipéptido inhibidor de CGRP/receptor de CGRP.

Además, la invención proporciona un método para evaluar la posible eficacia in vivo de un polipéptido candidato que inhibe la interacción CGRP/receptor de CGRP, por ejemplo anticuerpos anti-CGRP o anticuerpos de receptores anti-CGRP y fragmentos de anticuerpos anti-CGRP o fragmentos de anticuerpos de receptores anti-CGRP (incluso fragmentos Fab) asi como fragmentos de CGRP y el receptor de CGRP que inhiben la interacción CGRP/receptor de CGRP, preferentemente un anticuerpo anti-CGRP o anticuerpo del receptor anti-CGRP o fragmento del anticuerpo para tratar una afección neurológica u otra afección caracterizada por aumento de los niveles de CGRP que producen fotofobia.

Además, La invención también proporciona específicamente un método para evaluar la posible eficacia in vivo de un polipéptido candidato que inhibe la interacción CGRP/receptor de CGRP, por ejemplo anticuerpos anti-CGRP o anticuerpos de receptores anti-CGRP y fragmentos de anticuerpos anti-CGRP o fragmentos de anticuerpos de receptores anti-CGRP así como fragmentos o variantes de especies de CGRP y receptores de CGRP que inhiben la interacción CGRP/receptor de CGRP, preferentemente anticuerpos anti-CGRP o anticuerpos de receptores anti-CGRP o fragmentos de anticuerpos para tratar o prevenir la fotofobia en migraña o migraña crónica, migrañas menstruales o menopáusicas u otras migrañas hormonales asociadas, cefalea en racimos o trastorno de dolor asociado con cefalea.

Más adicionalmente, la invención proporciona un método para determinar una dosificación terapéutica o régimen de dosificación adecuado del polipéptido inhibidor de CGRP/receptor de CGRP candidato, p. ej . , anticuerpo anti-CGRP o anticuerpo del receptor anti-CGRP o fragmento del anticuerpo en seres humanos en base a los efectos de dicho polipéptido, p. ej . , un anticuerpo o fragmento de anticuerpo en un modelo de animal de roedor Nestin/hRAMPl con comportamiento aversivo a la luz descrito detalladamente a continuación .

Además, la invención se refiere a los métodos de evaluación, según los resultados en un de CGRP de roedor (modelo de animal Nestin/hRAMPl) , una dosificación terapéutica o régimen de dosificación adecuado del polipéptido candidato, p. ej . , un anticuerpo anti-CGRP o anticuerpo del receptor anti-CGRP o fragmento del anticuerpo en seres humanos.

En realizaciones preferidas, le presente invención se refiere al uso terapéutico de anticuerpos específicos y fragmentos de estos que tienen especificidad de unión al CGRP, en particular anticuerpos que tienen especificidad epitópica deseada, alta afinidad o avidez y/o propiedades funcionales. En realizaciones preferidas, le presente invención se refiere a ensayos y uso de anticuerpos descritos en el presente, que comprenden las secuencias de los polipéptidos VH, VL y CDR descritos en el presente y los polinucleótidos que los codifican. Una realización preferida de la invención se refiere a anticuerpos quiméricos o humanizados y fragmentos de estos (incluso fragmentos Fab) que se pueden unir a CGRP o al receptor de CGRP y/o pueden inhibir las actividades biológicas mediadas por la unción de CGRP al receptor de CGRP ("CGRP-R") .

En otra realización preferida de la invención, los ensayos y las terapias utilizan anticuerpos de longitud completa y fragmentos Fab de estos que inhiben la producción de cAMP activada por CGRP-alfa-, CGRP-beta- y CGRP de rata. En otra realización preferida de la invención, se contemplan los de longitud completa y los fragmentos Fab de estos que reducen la vasodilatación e inhiben o previenen la fotofobia en un recipiente luego de la administración.

En otra realización de la invención, anticuerpos quiméricos o humanizados y fragmentos de estos (incluso fragmentos Fab) que se pueden unir a CGRP o al receptor de CGRP son útiles en los métodos dirigidos a reducir, tratar o prevenir la fotofobia asociada con una o más de las siguientes afecciones: migrañas (con o sin aura), cáncer o tumores, angiogénesis asociada con el crecimiento del cáncer o tumoral, angiogénesis asociada con la supervivencia al cáncer o al tumor, pérdida de peso, dolor, migraña hemipléjica, cefaleas en racimos, migrañas menstruales, neuralgia migrañosa, cefaleas crónicas, cefaleas tensionales, cefaleas generales, sofocos, hemicránea paroxismal crónica, cefaleas secundarias debido a un problema estructural subyacente en la cabeza o cuello, neuralgia craneal, cefalea sinusal (por ejemplo, asociada con sinusitis) , migraña sin dolor de cabeza, migraña abdominal y migrañas o cefaleas inducidas por alergias.

Las causas comunes de fotofobia incluyen cefaleas migrañosas,. cataratas o enfermedades oftalmológicas graves, por ejemplo uveitis o abrasión corneal. Una lista más amplia de trastornos asociados con la fotofobia incluye causas relacionadas con los ojos, por ejemplo acromatopsia, aniridia, los fármacos anticolinérgicos pueden provocar fotofobia al paralizar el músculo del esfínter del iris, afaquia (ausencia del cristalino del ojo), buftalmos (ángulo anormalmente estrecho entre la córnea y el iris) , cataratas, distrofia de conos, anomalías congénitas del ojo, •conjuntivitis viral ("ojo rosa"), abrasión corneal, distrofia corneal,, úlcera corneal, alteración del epitelio corneal, por ejemplo el provocado por un cuerpo extraño corneal o queratitis, ectopia del cristalino, endoftalmitis, trauma ocular causado por una enfermedad, lesión o infección, por ejemplo chalazión, episcleritis, glaucoma, queratocono o hipoplasia del nervio óptico, hidroftalmia, o glaucoma congénito, iritis, neuritis óptica, síndrome de dispersión pigmentaria, dilatación pupilar (inducida naturalmente o químicamente) , desprendimiento de retina, cicatrización de la córnea o esclera y uveítis.

Además, la fotofobia tiene causas relacionadas con el sistema nervioso o urológicas que incluyen: trastornos del espectro autista, malformación de Chiari, dislexia, encefalitis, incluso encefalomielitis miálgica también denominada síndrome de fatiga crónica, meningitis, hemorragia subaracnoidea, tumor de la fosa craneal posterior, así como otras causas, por ejemplo espondilitis anquilosante, albinismo, ariboflavinosis , benzodiazepinas (uso a largo plazo o retiro de benzodiazepinas), quimioterapia, chikungunya, cistinosis, Síndrome de Ehlers-Danlos , resaca, influenza, mononucleosis infecciosa, deficiencia de magnesio, envenenamiento por mercurio, migraña, rabia y tirosinemia tipo II, también conocida como "síndrome de Richner-Hanhart " . Adicionalmente, se conoce que la fotofobia es elevada en la depresión, el trastorno bipolar y la agorafobia.

En otra realización de la invención estos anticuerpos y versiones humanizadas para el tratamiento o prevención de la fotofobia pueden derivar de células inmunológicas de conejo (linfocitos B) y se pueden seleccionar según su homología (identidad de secuencia) con las secuencias de la línea germinal humana. Estos anticuerpos puede requerir modificaciones de secuencias mínimas o ninguna modificación de secuencia, facilitando la retención de las propiedades funcionales después de la humanización. Otra realización de la invención se refiere a fragmentos de anticuerpos anti-CGRP o anticuerpos de receptores anti-CGRP que abarca los polipéptidos VH, VL y CDR, p. ej . , derivados de células inmunológicas de conejo y los polinucleótidos que los codifican, así como el uso de estos fragmentos de anticuerpos y los polinucleótidos que los codifican en la creación de anticuerpos novedosos y composiciones de polipéptidos que se pueden unir a CGRP y/o complejos CGRP/CGRP-R.

La invención también considera los conjugados de los anticuerpos anti-CGRP o anticuerpos de receptores anti-CGRP y los fragmentos de unión de estos para el tratamiento o prevención de la fotofobia conjugada con una o más fracciones funcionales o detectables. La invención también considera los métodos para realizar dichos anticuerpos anti-CGRP o anticuerpos anti-CGRP-R quiméricos o humanizados o anticuerpos de complejos anti-CGRP/CGRP-R y los fragmentos de unión de estos para el tratamiento o prevención de la fotofobia. En una realización, los fragmentos de unión incluyen, entre otros, fragmentos Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, SMIP ( inmunofarmacéuticos de molécula pequeña) , camelcuerpos, nanocuerpos e IgNAR.

Realizaciones de la invención se refieren al uso de polipéptidos inhibidores de CGRP/receptor de CGRP, p. ej . , anticuerpos anti-CGRP o anticuerpos anti-CGRP-R o fragmentos de anticuerpos y fragmentos de CGRP o CGRP-R, preferentemente anticuerpos anti-CGRP o anti-CGRP-R y fragmentos de unión de estos para el diagnóstico, evaluación y tratamiento de enfermedades y trastornos asociados con CGRP o su expresión aberrante, especialmente para el tratamiento o prevención de la fotofobia. La invención también considera el uso de polipéptidos inhibidores de CGRP/receptor de CGRP, p. ej . , anticuerpos anti-CGRP o anticuerpos de receptores anti-CGRP o fragmentos de CGRP o fragmentos de receptores de CGRP, especialmente fragmentos de anticuerpos anti-CGRP para el diagnóstico, evaluación y tratamiento de enfermedades y trastornos asociados con CGRP o su expresión aberrante, especialmente para el tratamiento o prevención de la fotofobia. Otras realizaciones de la invención se refieren a la producción de anticuerpos anti-CGRP o anticuerpos de receptores anti-CGRP o fragmentos de estos en células huésped recombinantes , por ejemplo células mamíferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, o células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS DIFERENTES VISTAS DE LOS DIBUJOS La figura 1 proporciona secuencias de polinucleótidos y polipéptidos que corresponden al anticuerpo Abl de longitud completa.

La figura 2 proporciona secuencias de polinucleótidos y polipéptidos que corresponden al anticuerpo Ab2 de longitud completa.

La figura 3 proporciona secuencias de polinucleótidos y polipéptidos que corresponden al anticuerpo Ab3 de longitud completa .

La figura 4 proporciona secuencias de polinucleótidos y polipéptidos que corresponden al anticuerpo Ab4 de longitud completa.

La figura 5 proporciona secuencias de polinucleótidos y polipéptidos que corresponden al anticuerpo Ab5 de longitud completa.

La figura 6 proporciona secuencias de polinucleótidos y polipéptidos que corresponden al anticuerpo Ab6 de longitud completa .

La figura 7 proporciona secuencias de polinucleótidos y polipéptidos que corresponden al anticuerpo Ab7 de longitud completa .

La figura 8 proporciona secuencias de polinucleótidos y polipéptidos que corresponden al anticuerpo Ab8 de longitud completa.

La figura 9 proporciona secuencias de polinucleótidos y polipéptidos que corresponden al anticuerpo Ab9 de longitud completa .

La figura 10 proporciona secuencias de polinucleótidos y polipéptidos que corresponden al anticuerpo AblO de longitud completa.

La figura 11 proporciona secuencias de polinucleótidos y polipéptidos que corresponden al anticuerpo Abll de longitud completa.

La figura 12 proporciona secuencias de polinucleótidos y polipéptidos que corresponden al anticuerpo Abl2 de longitud completa.

La figura 13 proporciona secuencias de polinucleótidos y polipéptidos que corresponden al anticuerpo Abl3 de longitud completa.

La figura 14 proporciona secuencias de polinucleótidos y polipéptidos que corresponden al anticuerpo Abl4 de longitud completa.

La figura 15 proporciona los datos de unión a CGRP-alfa de ELISA obtenidos siguiendo el protocolo en el ejemplo 1 a continuación para los anticuerpos Abl, Ab2, Ab3 y Ab4.

La figura 16 proporciona los datos de unión a CGRP-alfa de ELISA obtenidos siguiendo el protocolo en el ejemplo 1 a continuación para los anticuerpos Ab5, Ab6, Ab7 y Ab8.

La figura 17 proporciona los datos de unión a CGRP-alfa de ELISA obtenidos siguiendo el protocolo en el ejemplo 1 a continuación para los anticuerpos Ab9, AblO y Abl4.

La figura 18 proporciona los datos de unión a CGRP-alfa de ELISA obtenidos siguiendo el protocolo en el ejemplo 1 a continuación para los anticuerpos Abll, Abl2 y Abl3.

La figura 19 demuestra la inhibición de la producción de cAMP activada por CGRP-alfa por los anticuerpos Abl, Ab2 y Ab4, obtenida siguiendo del protocolo en el ejemplo 1 a continuación .

La figura 20 demuestra la inhibición de la producción de cAMP activada por CGRP-alfa por el anticuerpo Ab3, obtenida siguiendo del protocolo en el ejemplo 1 a continuación .

La figura 21 demuestra la inhibición de la producción de cAMP activada por CGRP-alfa por los anticuerpos Ab5 y Ab6, obtenida siguiendo del protocolo en el ejemplo 1 a continuación .

La figura 22 demuestra la inhibición de la producción de cAMP activada por CGRP-alfa por los anticuerpos Ab7, Ab8, Ab9 y AblO, obtenida siguiendo del protocolo en el ejemplo 1 a continuación.

La figura 23 demuestra la inhibición de la producción de cAMP activada por CGRP-alfa por los anticuerpos Abll, Abl2 y Abl3, obtenida siguiendo del protocolo en el ejemplo 1 a continuación .

La figura 24 demuestra la inhibición de la producción de cAMP activada por CGRP-alfa por el anticuerpo Abl4, obtenida siguiendo del protocolo en el ejemplo 1 a continuación.

La figura 25 demuestra la inhibición de la producción de cAMP activada por CGRP-beta por los anticuerpos Abl, Ab2 y Ab3, obtenida siguiendo del protocolo en el ejemplo 1 a continuación .

La figura 26 demuestra la inhibición de la producción de cAMP activada por CGRP-beta por los anticuerpos Ab4, Ab5 y Ab6, obtenida siguiendo del protocolo en el ejemplo 1 a continuación .

La figura 27 demuestra la inhibición de la producción de cAMP activada por CGRP-beta por los anticuerpos Ab7 y Ab8, obtenida siguiendo del protocolo en el ejemplo 1 a continuación .

La figura 28 demuestra la inhibición de la producción de cAMP activada por CGRP-beta por los anticuerpos Ab9, AblO y Abl4, obtenida siguiendo del protocolo en el ejemplo 1 a continuación .

La figura 29 demuestra la inhibición de la producción de cAMP activada por CGRP-beta por los anticuerpos Abll, Abl2 y Abl3, obtenida siguiendo del protocolo en el ejemplo 1 a continuación .

La figura 30 demuestra la inhibición de la producción de cAMP activada por CGRP de rata por los anticuerpos Abl, Ab2, Ab4 y Ab5, obtenida siguiendo del protocolo en el ejemplo 1 a continuación.

La figura 31 demuestra la inhibición de la producción de cAMP activada por CGRP de rata por los anticuerpos Ab3 y Ab6, obtenida siguiendo del protocolo en el ejemplo 1 a continuación.

La figura 32 demuestra la inhibición de la producción de cAMP activada por CGRP de rata por los anticuerpos Ab7 y Ab8, obtenida siguiendo del protocolo en el ejemplo 1 a continuación .

La figura 33 demuestra la inhibición de la producción de cAMP activada por CGRP de rata por el anticuerpo Ab9, obtenida siguiendo del protocolo en el ejemplo 1 a continuación .

La figura 34 demuestra la inhibición de la producción de cAMP activada por CGRP de rata por el anticuerpo AblO, obtenida siguiendo del protocolo en el ejemplo 1 a continuación .

La figura 35 demuestra la inhibición de la producción de cAMP activada por CGRP de rata por los anticuerpos Abll y Abl2, obtenida siguiendo del protocolo en el ejemplo 1 a continuación .

La figura 36 demuestra la inhibición de la producción de cAMP activada por CGRP de rata por el anticuerpo Abl3, obtenida siguiendo del protocolo en el ejemplo 1 a continuación.

La figura 37 demuestra la inhibición de la producción de cAMP activada por CGRP de rata por el anticuerpo Abl4, obtenida siguiendo del protocolo en el ejemplo 1 a continuación .

La figura 38 demuestra la inhibición de la unión de CGRP radiomarcado a CGRP-R por los anticuerpos Abl-Abl3, obtenida siguiendo el protocolo en el ejemplo 6 a continuación .

La figura 39 demuestra una reducción en la vasodilatación obtenida por la administración de los anticuerpos Ab3 y Ab6 después de la administración de capsaicina en un modelo de rata, con respecto al anticuerpo de control, obtenida siguiendo el protocolo en el ejemplo 7 a continuación .

La figura 40 demuestra una reducción en la vasodilatación obtenida por la administración del anticuerpo Ab6 en diferentes concentraciones después de la administración de capsaicina e un modelo de rata, con respecto al anticuerpo de control, obtenida siguiendo el protocolo en el ejemplo 7 a continuación.

La figura 41 muestra el efecto de la inyección ICV de CGRP en ratones tg hRAMPl y compañeros de la misma carnada de control y, en particular, contiene datos que muestran que la administración de CGRP disminuye el tiempo en el comportamiento hacia la luz en ratones tg hRAMPl con respecto a sus compañeros de la misma carnada de control. Se inyectaron ratones con hCGRP (2 ug) por medio de ICV con anestesia y se dejaron recuperar durante 30 minutos. Se colocaron individualmente los ratones en los dos casilleros de luz/oscuridad de la cámara y se registró el movimiento durante 30 minutos. Se analizaron seis ratones por vez en paralelo en seis casilleros diferentes. Cada grupo consistió de siete a nueve ratones.

La figura 42 contiene datos que comparan el efecto de la inyección sistémica (IP) de anticuerpo anti-CGRP (Ab3) en aversión a la luz activada por CGRP. Se administraron Ab3 en vehículo, vehículo y anticuerpos de control en vehículo en un dosificación de 30 mg/kg en ratones Nestin/RA Pl y, posteriormente, se le administró CGRP a los ratones por medio de administración ICV. Los datos en el lado izquierdo de la gráfica es el tiempo total en la luz (segundos) para los primeros 10 minutos después de la administración de CGRP y los datos en el lado derecho de la gráfica es el tiempo total time en la luz (segundos) para los primeros 20 minutos medidos después de la inyección de CGRP. Los datos revelan que los ratones que reciben el anticuerpo Ab3 anti-CGRP (divulgado a continuación) tuvieron un aumento estadísticamente significativo en la cantidad de tiempo transcurrido en la luz comparado con los ratones que recibieron los controles.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS REALIZACIONES PREFERIDAS Definiciones Se entenderá que la presente invención no se limita a la metodología, los protocolos, las líneas celulares, las especies o los géneros animales y los reactivos específicos descritos y como tal puede variar. También se entenderá que se emplea la terminología utilizada aquí con la finalidad de describir las realizaciones particulares exclusivamente y no pretende limitar el alcance de la presente invención, el cual solo se verá limitado por las reivindicaciones anexas. Tal como se emplean aquí, las formas singulares de "un" y "el/la" comprenden referentes plurales a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Por lo tanto, por ejemplo, una referencia a "una célula" incluye diversas de dichas células y una referencia a "la proteína" incluye una referencia a una o más proteínas y equivalentes de estas conocidas para los entendidos en la técnica, y así sucesivamente. Todos los términos técnicos y científicos utilizados aquí tienen el mismo significado que normalmente les asigna el entendido en la técnica a la que pertenece esta invención a menos que se indique claramente lo contrario.

Péptido relacionado con el gen de la calcitonina {CGRP) : según se emplea aquí, CGRP no abarca únicamente las siguientes secuencias de aminoácidos de CGRP-alfa de Homo sapiens y de CGRP-beta de Homo sapiens comercializadas por American Peptides (Sunnyvale CA) y Bachem (Torrance, CA) : CGRP-alfa: ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKNNFVPTNVGSKAF-NH2 (SEC. ID. N.°: 281), en donde se amida la fenilalanina N terminal; CGRP-beta: ACNTATCVTHRLAGLLSRSGG VKSNFVPTNVGSKAF-NH2 (SEC. ID. N.°: 282), en donde se amida la fenilalanina N terminal; sino también cualquier forma de estas secuencias de aminoácidos de CGRP unida a la membrana, asi como mutantes (mutiens), variantes de corte, isoformas, ortólogos, homólogos y variantes de esta secuencia. En particular, CGRP aquí abarca CGRP de roedores (rata o ratón) asi como CGRP de otos mamíferos.

"Receptor de CGRP" o "CGRP-R" se refiere al compañero de CGRP de unión al receptor, preferentemente el receptor de CGRP humano, pero que abarca CGRP-R de otras especies, especialmente CGRP-R de roedores (rata o ratón) , primates no humanos y otros mamíferos.

"Inhibidor de CGRP/receptor de CGRP" aquí se refiere a cualquier polipéptidos que inhibe la interacción de CGRP y receptores de CGRP, p. ej . , anticuerpos anti-CGRP o anticuerpos anti-CGRP-R o fragmentos de anticuerpos y fragmentos de polipéptidos de CGRP o CGRP-R. Preferentemente, estos inhibidores inhibirán esta interacción in vitro e in vivo e inhibirán los efectos secundarios adversos de CGRP que incluyen fotoaversion o fotofobia.

"Fotofobia" aquí se refiere a un síntoma de intolerancia anormal a la percepción visual de la luz, a veces, además, se define por el miedo anormal o irracional a la luz o por la presencia de fotosensibilidad física real de los ojos. En la presente invención la fotofobia incluye en particular la aversión a la luz asociada con migraña, cefalea en racimos y otras causas neurológicas de comportamiento aversivo a la luz que pueden activar una migraña o cefalea en racimos. Los pacientes pueden desarrollar fotofobia como resultada de varias afecciones médicas diferentes, relacionadas con el ojo o el sistema nervioso. La fotofobia puede ser provocada por un aumento en la respuesta a la luz que comienza en cualquier etapa en el sistema visual, por ejemplo: (i) demasiada luz que entra al ojo, (ii) demasiada luz puede entrar al ojo si está dañado, por ejemplo con abrasión corneal y daño en la retina, o si una pupila no puede contraerse normalmente (visto con un daño en el nervio motor ocular común, (iii) sobreestimulación de los fotorreceptores en la retina, (iv) impulsos eléctricos excesivos en el nervio óptico y (v) respuesta excesiva en el sistema nervioso central.

Las causas comunes de fotofobia incluyen cefaleas migrañosas, cataratas o enfermedades oftalmológicas graves, por ejemplo uveitis o abrasión corneal. Una lista más amplia de trastornos asociados con la fotofobia incluye causas relacionadas con los ojos, por ejemplo acromatopsia, aniridia, los fármacos anticolinérgicos pueden provocar fotofobia al paralizar el músculo del esfínter del iris, afaquia (ausencia del cristalino del ojo), buftalmos (ángulo anormalmente estrecho entre la córnea y el iris) , cataratas, distrofia de conos, anomalías congénitas del ojo, conjuntivitis viral ("ojo rosa"), abrasión corneal, distrofia corneal, úlcera corneal, alteración del epitelio corneal, por ejemplo el provocado por un cuerpo extraño corneal o queratitis, ectopia del cristalino, endoftalmitis, trauma ocular causado por una enfermedad, lesión o infección, por ejemplo chalazión, episcleritis, glaucoma, queratocono o hipoplasia del nervio óptico, hidroftalmía, o glaucoma congénito, iritis, neuritis óptica, síndrome de dispersión pigmentaria, dilatación pupilar (inducida naturalmente o químicamente) , desprendimiento de retina, cicatrización de la córnea o esclera y uveítis.

Además, la fotofobia tiene causas relacionadas con el sistema nervioso o urológicas que incluyen: trastornos del espectro autista, malformación de Chiari, dislexia, encefalitis, incluso encefalomielitis miálgica también denominada síndrome de fatiga crónica, meningitis, hemorragia subaracnoidea, tumor de la fosa craneal posterior, así como otras causas, por ejemplo espondilitis anquilosante, albinismo, ariboflavinosis , benzodiazepinas (uso a largo plazo o retiro de benzodiazepinas), quimioterapia, chikungunya, cistinosis, Síndrome de Ehlers-Danlos, resaca, influenza, mononucleosis infecciosa, deficiencia de magnesio, envenenamiento por mercurio, migraña, rabia y tirosinemia tipo II, también conocida como "síndrome de Richner-Hanhart" . Adicionalmente, se conoce que la fotofobia es elevada en la depresión, el trastorno bipolar y la agorafobia.

"Migraña" de las palabras griegas hemi, es decir, la mitad y kranion que significa cráneo) es una afección debilitante que se caracteriza por náuseas y cefaleas de moderadas a fuertes. Es alrededor de tres veces más común en mujeres que en hombres. La cefalea migrañosa típica es unilateral (que afecta a la mitad de la cabeza) y pulsante en la naturaleza y que dura de 4 a 72 horas; los síntomas incluyen vómitos, fotofobia (aumento de la sensibilidad a la luz) , fonofobia (aumento de la sensibilidad al sonido) ; los síntomas generalmente se agravan por la actividad rutinaria. Aproximadamente un tercio de las personas que sufren de migrañas perciben experiencias visuales inusuales-aura, olfativas u otras experiencias sensoriales que son una señal de que pronto ocurrirá la migraña. El tratamiento inicial de las migrañas es típicamente con analgésicos para la cefalea, un antiemético para las náuseas y la prevención de activar afecciones. Estudios de gemelos indican de un 60 a un 65 por ciento de la influencia genética sobre su propensión a desarrollar migrañas. Además, los niveles fluctuantes de hormonas indican una relación de migraña: el 75 por ciento de los pacientes adultos son mujeres, aunque la migraña afecta aproximadamente el mismo número de niños y niñas antes de la pubertad; se sabe que la propensión a la migraña desaparece durante el embarazo, aunque en algunas mujeres las migrañas pueden ser más frecuentes durante el embarazo.

"Tratamiento o prevención efectiva de la fotofobia" aquí se refiere a inhibir el comportamiento aversivo a la luz o la fotofobia o inhibir el inicio del comportamiento aversivo a la luz o la fotofobia en un sujeto que lo necesita, p. ej . , un sujeto que tiene un ataque de migraña activo o cefalea en racimos, un sujeto propenso a la migraña o a las cefaleas en racimos o uno de los otros trastornos asociados a la fotofobia identificados en el presente después de la administración de una cantidad eficaz de un polipéptido inhibidor de CGRP/receptor de CGRP de acuerdo con la invención, p. ej . , un anticuerpos anti-CGRP o fragmento del anticuerpos de acuerdo con la invención. El tratamiento puede efectuarse como una monoterapia o en asociación con otro agente activo, tal como Topirimato o dihidroergotamina a modo de ejemplo.

Especies de levadura competentes de apareamiento: en la presente invención se pretende que esto abarque ampliamente cualquier diploide o tetraploide de levadura que se puede cultivar en cultivo. Dichas especies de levadura pueden existir e forma haploide, diploide o otra forma poliploide.

Las células de una determinada ploidia, en condiciones adecuadas, pueden proliferar durante un número indefinido de generaciones en esa forma. Células diploides también pueden esporular para formar células haploides . El apareamiento secuencial puede producir cepas tetraploides a través de más de apareamiento o fusión de cepas diploides. La presente invención considera el uso de levadura haploide, asi como células de levaduras diploides u otras células de levaduras poliploides producidas, por ejemplo, por apareamiento o fusión de esferoplastos .

En una realización de la invención, la levadura competente de apareamiento es un miembro de la familia Saccharomycetaceae, que incluye los géneros Arxiozyma; Ascobotryozyma; Citeromyces; Debaryomyees; Dekkera; Eremothecium; Issatchenkia ; Kazachstania; Kluyveromyces; Kodamaea; Lodderomyces; Pachysolen; Pichia; Saccharomyces; Saturnispora ; Tetrapisispora ; Torulaspora; Williopsis y Zygosaccharomyces . Otros tipos de levadura potencialmente útil en la invención incluye Yarrowia; Rhodosporidium; Candida; Hansenula ; Filobasium; Sporidiobolus; Bullera; Leucosporidium y Filobasidella .

En una realización preferida de la invención, la levadura competente de apareamiento es un miembro del género Pichia. En otra realización preferida de la invención, la levadura competente de apareamiento del género Pichia es una de las siguientes especies: Pichia pastoris, Pichia methanolica y Hansenula polymorpha {Pichia angusta) . En una realización particularmente preferida de la invención, la levadura competente de apareamiento del género Pichia es la especie Pichia pastoris .

Célula de levadura haploide: una célula que tiene una única copia de cada gen de su complemento (cromosómico) genómico normal.

Célula de levadura poliploide: una célula que tiene más de una copia de su complemento (cromosómico) genómico normal.

Célula de levadura diploide: una célula que tiene dos copias (alelos) de esencialmente cada gen de su complemento genómico normal, típicamente formado por el proceso de fusión (apareamiento) de dos células haploides.

Célula de levadura tetraploide: una célula que tiene cuatro copias (alelos) de esencialmente cada gen de su complemento genómico normal, típicamente formado por el proceso de fusión (apareamiento) de dos células haploides. Los tetraploides pueden tener dos, tres, cuatro o más casetes de expresión diferentes. Dichos tetraploides se pueden obtener en S. cerevisiae por el apareamiento selectivo de diploides homocigótico heterotálico a/a y alfa/alfa y en Pichia por el apareamiento secuencial de haploides para obtener diploides auxotróficos . Por ejemplo, un haploide [met his] se puede aparear con un haploide [ade his] para obtener diploide [his] ; y un haploide [met arg] de puede aparear con haploide [ade arg] para obtener diploide [arg] ; luego el diploide [his] x diploide [arg] para obtener un tetraploide prototrofo. Los entendidos en la técnica entenderán que la referencia a los beneficios y usos de células diploides también se pueden aplicar a las células tetraploides.

Apareamiento de levadura: el proceso por el cual dos células de levaduras haploides se fusionan naturalmente para formar una célula de levadura diploide.

Meiosis: el proceso por el cual una célula de levadura diploide experimenta división reductiva para formar cuatro producto de esporas haploides. Luego, se puede germinar cada espora y formar una linea celular haploide que crece vegetativamente .

Marcador de selección: un marcador de selección es un gen o fragmento de gen que dotan de un fenotipo de crecimiento (característica de crecimiento físico) a una célula que recibe ese gen, por ejemplo, a través de un evento de transformación. El marcador de selección permite que esa célula sobreviva y crezca en un medio de crecimiento selectivo en condiciones en las cuales las células que no reciben ese gen de marcador de selección no pueden crecer. Los genes de marcadores de selección generalmente se dividen en varios tipos, incluso genes de marcadores de selección positivos, por ejemplo un gen que dota de resistencia a un antibiótico a una célula u otro fármaco, temperatura cuando se cruzan dos mutantes sensibles a la temperatura ("ts") o se transforma un mutante ts; genes de marcadores de selección negativos, por ejemplo un gen biosintético que dota de capacidad a una célula de crecer en un medio sin la necesidad de un nutriente especifico por todas las células que no tienen ese gen biosintético o un gen biosintético mutagenizado que dota de incapacidad a una célula de crecer por las células que no tienen el gen natural; y similares. Los marcadores adecuados incluyen, entre otros: ZEO; G418; LYS3; METI ; MET3a; ADE1; ADE3; URA3 y similares.

Vector de expresión: estos vectores de ADN contienen elementos que facilitan la manipulación para la expresión de una proteina extraña dentro de la célula huésped diana. Convenientemente, la manipulación de secuencias y la producción de ADN para la transformación primero se realiza en un huésped bacteriano, p. ej . E. coli, y usualmente los vectores incluirán secuencias para facilitar dichas manipulaciones, incluso un marcador de origen bacteriano de replicación y un marcador de selección bacteriano adecuada. Los marcadores de selección codifican proteínas necesarias' para la supervivencia o crecimiento de las células huésped transformadas crecidas en un medio de cultivo selectivo. Las células huésped no transformadas con el vector que contienen el gen de selección no sobrevivirán en el medio de cultivo. Los genes de selección típicos codifican proteínas que (a) dotan de resistencia a los antibióticos u otras toxinas, (b) complementan las deficiencias auxotróficas o (c) suministran nutrientes fundamentales que no están disponibles en medios complejos. Se describen los vectores ejemplares y lo métodos para la transformación de levadura, por ejemplo, en Burke, D., Dawson, D., & Stearns, T. (2000). "Methods in yeast genetics: a Cold Spring Harbor Laboratory course manual". Plainview, N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press.

Los vectores de expresión para el uso en los métodos de la invención además incluirán secuencias específicas de la levadura, incluso un marcador de selección auxotrófico o marcador de fármaco para identificar las cepas de levadura transformadas. Además, se puede utilizar un marcador de fármaco para amplificar el número de copias del vector en una célula huésped de levadura.

La secuencia codificante de polipéptidos de interés está unida funcionalmente a las secuencias reguladoras transcripcionales y traduccionales que proporcionan la expresión del polipéptido en las células de levadura. Estos componentes del vector pueden incluir, entre otros, uno o más de los siguientes: un elemento potenciador, un promotor y una secuencia de terminación de transcripción. También se pueden incluir las secuencias para la secreción del polipéptido, p. ej . una secuencia señal y similares. Un origen de levadura de replicación es óptimo, ya que los vectores de expresión se suelen integrar en el genoma de la levadura. En una realización de la invención, el polipéptido de interés está unido funcionalmente, o fusionado, a las secuencias que proporcionan una secreción optimizada del polipéptido de las células diploides de levaduras.

Los ácidos nucleicos están "unidos funcionalmente" cuando se colocan en una relación funcional con otra secuencia de ácidos nucleicos. Por ejemplo, el ADN para una secuencia señal está unido funcionalmente al ADN por un polipéptido si se expresa como una preproteina que participa en la secreción del polipéptido; un promotor o potenciador está unido funcionalmente a una secuencia codificante si afecta la transcripción de la secuencia. Generalmente, "unido funcionalmente" significa que las secuencias de ADN que se están uniendo son contiguas y, en el caso de un líder secretor, contiguas y en un marco de lectura. Sin embargo, los potenciadores no tienen que se contiguos. La unión se logra por ligadura en sitios de restricción convenientes o alternativamente mediante un método de recombinación/PCR conocido por los entendidos en la técnica (GatewayR Technology; Invitrogen, Carlsbad California) . Si dichos sitios no existen, se utilizan ligadores o adaptadores de oligonucleótidos sintéticos de acuerdo con la práctica convencional .

Los promotores son secuencias no traducidas ubicadas hacia arriba (51) con respecto al codón de iniciación de un gen estructural (generalmente, entre aproximadamente 100 y 1000 bp) que controlan la transcripción y la traducción de secuencias de ácidos nucleicos particulares a las cuales están unidos funcionalmente . Dichos promotores se dividen en varias clases: promotores inducibles, constitutivos y represibles (que aumentan los niveles de transcripción en respuesta a la ausencia de un represor) . Los promotores inducibles inician mayores niveles de transcripción de ADN bajo su control en respuesta a algún cambio en las condiciones de cultivo, p. ej . , la presencia o la ausencia de un nutriente o un cambio de la temperatura.

El fragmento del promotor de levadura también puede servir como el sitio para la recombinación homologa y la integración del vector de expresión en el mismo sitio en el genoma de la levadura; alternativamente se utiliza un marcador de selección como el sitio para la recombinación homologa. La transformación de Pichía se describe en Cregg y col. (1985) Mol. Cell. Biol. 5:3376-3385.

Ejemplos de promotores adecuados de Pichía incluyen A0X1 y promotor (Cregg y col. (1989) Mol. Cell. Biol. 9:1316-1323); promotor ICL1 (Menendez y col. (2003) Yeast 20(13) : 1097-108) ; promotor de gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa (GAP) ( aterham y col. (1997) Gene 186(1) :37-44); y promotor FLDl (Shen y col. (1998) Gene 216 ( 1 ): 93-102 ) . El promotor GAP es un promotor constitutivo fuerte y los promotores AOX y FLDl son inducibles.

Otros promotores de levaduras incluyen ADH1, alcohol deshidrogenasa II, GAL4, PH03, PH05, Pyk y promotores quiméricos derivados de estos. Adicionalmente, en la invención se pueden utilizar promotores no procedentes de levadura, por ejemplo promotores de mamíferos, de insectos, de plantas, de reptiles, de anfibios, virales y de aves. Más típicamente, el promotor comprenderá un promotor de mamífero (potencialmente endógeno a los genes expresados) o comprenderá un promotor de levadura o viral que proporciona una transcripción eficaz en los sistemas de levadura.

Se pueden producir polipéptidos de interés de forma recombinante no solo directamente, sino que también como un polipéptido de fusión con un polipéptido heterólogo, p. ej . una secuencia señal u otro polipéptido que tienen un sitio de escisión especifico en el extremo amino terminal del polipéptido o la proteina madura. En general, la secuencia señal puede ser un componente del vector o puede ser una parte de la secuencia codificante de polipéptidos que se inserta en el vector. La secuencia señal heteróloga seleccionada preferentemente es una que se reconoce y se procesa a través de uno de las vías estándar disponibles dentro de la célula huésped. La señal pre-pro del factor alfa de S. cerevisiae ha resultado eficaz en la secreción de diversas proteínas recombinantes de P. pastoris. Otras secuencias señal de levadura incluyen la secuencia señal del factor de apareamiento alfa, la secuencia señal de invertasa y las secuencias señal derivadas de otros polipéptidos de levadura secretados. Adicionalmente, se pueden elaborar estas secuencias de péptidos señal para proporcionar un aumento de la secreción en sistemas de expresión de levadura diploide. Otras señales de secreción de interés también incluyen secuencias señal de mamíferos, que pueden ser heterólogas a la proteína que se secreta o pueden ser una secuencia nativa de la proteína que se secreta. Las secuencias señal incluyen secuencias pre-péptidos y en algunos casos pueden incluir secuencias de propéptidos. Muchas de dichas secuencias señal se conocen en la técnica, incluso las secuencias señal encontradas en las cadenas de inmunoglobulina, p. ej . , secuencia preprotoxina K28, PHA-E, FACE, CP-1 humano, secuencias señal de albúmina de suero humano, cadena pesada de Ig humano, cadena ligera de Ig humano y similares. Por ejemplo, véase Hashimoto y col. Protein Eng 11(2) 75 (1998); y Kobayashi y col. Therapeutic Apheresis 2(4) 257 (1998).

Se puede aumentar la transcripción insertando una secuencia activadora transcripcional en el vector. Estos activadores son elementos que actúan en cis de ADN, usualmente entre aproximadamente 10 y 300 bp, que actúan en un promotor para aumentar su transcripción. Los potenciadores transcripcionales son relativamente independientes de la orientación y de la posición, habiéndose encontrado en 5' y en 3' con respecto a la unidad de transcripción, dentro de un intrón, así como dentro de la secuencia codificante misma. El potenciador se puede cortar y empalmar en el vector en una posición 5' o 3' con respecto a la secuencia codificante, pero preferentemente se ubica en el sitio 5' del promotor.

Los vectores de expresión utilizados en células huésped eucariotas también pueden contener secuencias necesarias para la terminación de la transcripción y para la estabilización del ARNm. Dichas secuencias se encuentran disponibles comúnmente de 3 ' al codón de terminación de la traducción, en regiones no traducidas de ADN o ADNc eucariota o viral. Estas regiones contienen segmentos de nucleótidos transcritos como fragmentos poliadenilados en la parte no traducida del ARNm.

La construcción de vectores adecuados que contienen uno o más de los componentes enumerados anteriormente emplea técnicas de ligadura estándar o métodos de recombinación/PCR. Los plásmidos aislados o fragmentos de ADN se escinden, adaptan y vuelven a ligar en la forma deseada para generar los plásmidos necesarios o mediante métodos de recombinación. Para que el análisis confirmen las secuencias correctas en los plásmidos construidos, se utilizan las mezclas de ligaduras para transformar células huésped y los transformantes exitosos seleccionados por resistencia a los antibióticos (p. ej . ampicilina o zeocina) cuando sea adecuado. Se preparan plásmidos a partir de los transformantes, se analizan por digestión de endonucleasas de restricción y/o se secuencian.

Como una alternativa a la restricción y ligadura de los fragmentos, se pueden utilizar métodos de recombinación basados en sitios att y enzimas de recombinación para insertar secuencias de ADN en un vector. Dichos métodos se describen, por ejemplo, por Landy (1989) Ann . Rev . Biochem. 58:913-949; y son conocidos para el entendido en la técnica. Dichos métodos utilizan recombinación de ADN intermolecular que es mediada por una mezcla de proteínas de recombinación codificadas por lambda y E.coli. La recombinación sucede entre sitios de unión (att) específicos en las moléculas de ADN que interactúan. Para obtener una · descripción de sitios att, véase Weisberg y Landy (1983) "Site-Specific Recombination in Phage Lambda", en Lambda II, Weisberg, ed. (Cold Spring Harbor, NY:Cold Spring Harbor Press), pp. 211-250. Se cambian los segmentos de ADN que flanquean los sitios de recombinación, de modo que después de la recombinación, los sitios att son secuencias híbridas que comprenden secuencias donadas por cada vector parental. La recombinación puede suceder entre ADN de cualquier topología.

Se pueden introducir sitios att en una secuencia de interés ligando la secuencia de interés en un vector adecuado; generando un producto de PCR que contiene sitios B att a través del uso de cebadores específicos; generando una genoteca de ADNc clonada en un vector adecuado que contiene sitios att; y similares.

Plegamiento, según se emplea aquí, se refiere a la estructura tridimensional de los polipéptidos y las proteínas, en donde las interacciones entre los residuos de aminoácidos actúan para estabilizar la estructura. Aunque las interacciones no covalentes son importantes para determinar la estructura, usualmente las proteínas de interés tendrán enlaces disulfuro covalentes intra y/o intermolecular formados por dos residuos de cisteina. Para las proteínas y los polipéptidos de origen natural o derivados y variantes de estos, el plegamiento adecuado es típicamente la disposición que produce actividad biológica óptima y se puede monitorizar convenientemente por medio de ensayos para conocer la actividad, p. ej . unión a los ligandos, actividad enzimática, etc.

En algunos casos, por ejemplo cuando el producto deseado es de origen sintético, los ensayos basados en la actividad biológica serán menos significativos. Se puede determinar el plegamiento adecuado de dichas moléculas basándose en propiedades físicas, consideraciones energéticas, estudios de modelización y similares.

El huésped de expresión se puede modificar adicionalmente por la introducción de secuencias que codifican una o más enzimas que mejoran el plegamiento y la formación de enlaces disulfuro, es decir, foldasas, chaperoninas, etc. Dichas secuencias se pueden expresar constitutivamente o induciblemente en la célula huésped de levadura, utilizando vectores, marcadores, etc. como se conoce en la técnica. Preferentemente, las secuencias, incluso los elementos reguladores transcripcionales para el patrón de expresión deseado, se integran de manera estable en el genoma de la levadura a través de una metodología específica .

Por ejemplo, el PDI eucariota no es solamente un catalizador eficaz de la oxidación de la cisterna de la proteína y la isomerización de enlaces de disulfuro, sino que exhibe la actividad de las chaperonas. La coexpresión de PDI puede facilitar la producción de proteínas activas que tienen múltiples enlaces disulfuro. También es de interés la expresión de BIP (proteína de unión a la cadena pesada de la inmunoglobulina) ; ciclofilina; y similares. En una realización de la invención, cada una de las cepas madre haploides expresa una enzima de plegamiento distinta, p. ej . una cepa puede expresar BIP y la otra cepa puede expresar PDI o combinaciones de estos.

Los términos "proteína deseada" o "anticuerpo deseado" se utilizan de forma alternativa y se refieren generalmente a un anticuerpo padre específico para una diana, es decir, CGRP o receptor de CGRP o un anticuerpo quimérico o humanizado o una porción de unión derivada de estos como se describe en el presente. El término "anticuerpo" pretende incluir cualquier estructura molecular que contiene cadena polipeptídica con una forma específica que se adapta y reconoce un epítopo, en donde una o más interacciones de unión no covalentes estabilizan el complejo entre la estructura molecular y el epítopo. La molécula de anticuerpo arquetipica es la inmunoglobulina y todos los tipos de inmunoglobulinas, IgG, IgM, IgA, IgE, IgD, etc., de todas las fuentes, p. ej . humana, de roedores, de conejos, de vaca, de oveja, de cerdo, de perro, de otros mamíferos, de pollo, otras aves, etc., se consideran "anticuerpos". Una fuente preferida para producir anticuerpos útiles como material de partida de acuerdo con la invención son los conejos. Se han descrito numerosas secuencias codificantes de anticuerpos; y se pueden criar otras a través de métodos conocidos en la técnica. Ejemplos de estos incluyen anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanos y otros anticuerpos de mamíferos no humanos, anticuerpos humanizados, anticuerpos de cadena única (por ejemplo scFvs) , camelcuerpos , nanocuerpos, IgNAR (anticuerpos de cadena única derivados de tiburones) , inmunofarmacéuticos modulares pequeños (SMIP) y fragmentos de anticuerpos, por ejemplo Fabs, Fab', F(ab' )2 y similares. Véase Streltsov VA, y col., Structure of a shark IgNAR antibody variable domain and modeling of an early-developmental isotype, Protein Sci. 2005 nov; 14 (11) :2901-9. Epub 2005 sep 30; Greenberg AS, y col., A new antigen receptor gene family that undergoes rearrangement and extensive somatic diversification in sharks, Nature. 1995 mar 9; 374 (6518) : 168-73; Nuttall SD, y col., Isolation of the new antigen receptor from wobbegong sharks, and use as a scaffold for the display of protein loop librarles, Mol Immunol. 2001 ago; 38 (4) : 313-26; Hamers-Casterman C, y col., Naturally occurring antibodies devoid of light chains, Nature. 1993 jun 3 ; 363 ( 6428 ) : 446-8 ; Gilí DS, y col., Biopharmaceutical drug discovery using novel protein scaffolds, Curr Opin Biotechnol. 2006 dic; 17 ( 6) : 653-8. Epub 2006 oct 19.

Por ejemplo, se pueden producir anticuerpos o fragmentos de unión a antigenos a través de ingeniería genética. En esta técnica, como con otros métodos, se sintetizan células que producen anticuerpos a un inmunógeno o antígeno deseado. El ARN mensajero aislado de las células que producen anticuerpos se utiliza como un molde para realizar ADNc utilizando amplificación PCR. Se produce una biblioteca de vectores, cada una con un gen de cadena pesada y un gen de cadena ligera que retienen la especificidad antigénica inicial, por la inserción de secciones adecuadas del ADNc de inmunoglobulina amplificado en los vectores de expresión. Se construye una genoteca de combinación al combinar la biblioteca del gen de cadena pesada con la biblioteca del gen de cadena ligera. Esto genera una biblioteca de clones que coexpresan una cadena pesada y ligera (parecida al fragmento Fab o al fragmento de unión a antígenos de una molécula de anticuerpo) . Los vectores que tienen estos genes se cotransfectan en una célula huésped. Cuando se induce la síntesis de genes de anticuerpos en el huésped transfectado, las proteínas de cadena pesada y ligera se autoensamblan para producir anticuerpos activos que se pueden detectar mediante el análisis con el antígeno o inmunógeno.

Las secuencias codificantes de anticuerpos de interés incluyen las codificadas por las secuencias nativas, así como los ácidos nucleicos que, en virtud de la degradación del código genético, no son idénticos en secuencia a los ácidos nucleicos divulgados, y variantes de estos. Los polipéptidos variantes pueden incluir sustituciones, adiciones o eliminaciones de aminoácidos (aa) . Las sustituciones de aminoácidos pueden ser sustituciones de aminoácidos conservadoras o sustituciones para eliminar los aminoácidos no esenciales, por ejemplo para alterar un sitio de glicosilación o para minimizar el plegamiento incorrecto mediante la sustitución o eliminación de uno o más residuos de cisteína que no son necesarios para la función. Se pueden diseñar variantes para retener o tener actividad biológica mejorada de una región particular de la proteína (p. ej . , un dominio funcional, residuos de aminoácidos catalíticos, etc) . Las variantes también incluyen fragmentos de los polipéptidos divulgados en el presente, particularmente fragmentos biológicamente activos y/o fragmentos correspondientes a los dominios funcionales. Se conocen técnicas para la mutagénesis in vitro de los genes clonados. En la presente invención también se incluyen polipéptidos que se han modificado utilizando técnicas de biología molecular comunes para mejorar sus resistencia a la degradación proteolitica o para optimizar las propiedades de solubilidad o para volverlas más adecuadas como un agente terapéutico.

Se pueden realizar anticuerpos quiméricos por medio de medios recombinantes al combinar las regiones variables de cadena ligera y pesada (VL y VH) , obtenidas de las células que producen anticuerpos de una especie con las regiones constantes de cadena ligera y pesada de otras. Los anticuerpos quiméricos suelen utilizar regiones variables de roedores o conejos y regiones constantes de seres humanos, para producir un anticuerpo con dominios principalmente humanos. En la técnica se conoce la producción de dichos anticuerpos quiméricos y se puede lograr a través de medios estándar (como se describe, p. ej . , en la patente estadounidense N.° 5.624.659, incorporada en el presente por referencia en su totalidad) . También se contempla que las regiones constantes humanas de los anticuerpos quiméricos de la invención se pueden seleccionar de las regiones constantes IgGl, IgG2, IgG3, y IgG4.

Los anticuerpos humanizados se diseñan para contener dominios de inmunoglobulina incluso más similares a humanos, e incorporar solamente las regiones determinantes de la complementariedad del anticuerpo derivado de animal. Esto se logra al examinar cuidadosamente la secuencia de los bucles hipervariables de las regiones variables del anticuerpo monoclonal y al ajustarlos a la estructura de las cadenas de anticuerpo humano. Aunque es facialmente complejo, el proceso es sencillo en la práctica. Véase, p. ej . , la patente estadounidense N.° 6.187.287, incorporada completamente en el presente por referencia.

Además de todas las inmunoglobulinas (o sus contrapartes recombinantes) , los fragmentos de inmunoglobulinas que comprenden el sitio de unión al epitopo (p. ej . , Fab' , F(ab')2 u otros fragmentos) se pueden sintetizar. "Fragmento", o inmunoglobulinas mínimas se pueden diseñar utilizando técnicas recombinantes de inmunoglobulinas. Por ejemplo, se pueden producir inmunoglobulinas "Fv" para su uso en la presente invención mediante la síntesis de una región variable de cadena ligera fusionada y una región variable de cadena pesada. Las combinaciones de anticuerpos también son de interés, p. ej . diacuerpos, que comprenden dos especificidades Fv distintas. En otra realización de la invención, SMIP (inmunofarmacéuticos de molécula pequeña) , camelcuerpos, nanocuerpos e IgNAR están comprendidos en los fragmentos de inmunoglobulinas .

Las inmunoglobulinas y los fragmentos de estas se pueden modificar postraduccionalmente, p. ej . para añadir fracciones efectoras, por ejemplo ligadores químicos, fracciones detectables, por ejemplo tintes fluorescentes, enzimas, toxinas, sustratos, materiales bioluminiscentes, materiales radiactivos, fracciones quimioluminiscentes y similares, o se pueden utilizar fracciones de unión específicas, por ejemplo estreptavidina, avidina o biotina, y similares, en los métodos y composiciones de la presente invención. Más adelante se proporcionan ejemplos de moléculas efectoras adicionales.

Una secuencia de polinucleótidos "corresponde" a una secuencia de polipéptidos si la traducción de la secuencia de polinucleótidos de acuerdo con el código genético produce la secuencia de polipéptidos (es decir, la secuencia de polinucleótidos "codifica" la secuencia de polipéptidos) , una secuencia de polinucleótidos "corresponde" a otra secuencia de polinucleótidos si las dos secuencias codifican la misma secuencia de polipéptidos.

Una región o dominio "heterólogo" de una construcción de ADN es un segmentos identificable de ADN dentro de una molécula de ADN más larga que no se encuentra en asociación con la molécula más larga en la naturaleza. Por lo tanto, cuando la región heteróloga codifica un gen de mamífero, el gen usualmente se flanqueará por el ADN que no flanquea al ADN genómico de mamífero en al genoma del organismo de la fuente. Otro ejemplo de una región heteróloga es una construcción donde la secuencia codificante no se encuentra en la naturaleza (p. ej . , un ADNc donde la secuencia codificante genómica contiene intrones o secuencias sintéticas que tienen codones diferentes al gen natural) . Las variaciones alélicas o los eventos mutacionales de origen natural no dan origen a una región heteróloga de ADN según se define en el presente.

Una "secuencia codificante" es una secuencia en marco de codones que (en vista del código genético) corresponde o codifica una proteína o secuencia de péptidos. Dos secuencias codificantes corresponden la una a la otra si las secuencias o sus secuencias complementarias codifican las mismas secuencias de aminoácidos. Una secuencia codificante en asociación con secuencias reguladoras adecuadas se puede transcribir y traducir en un polipéptido. Una secuencia de terminación de transcripción y señal de poliadenilación usualmente estará ubicada en 3' para la secuencia codificante. Una "secuencia promotora" es una región reguladora de ADN que se puede unir a ARN polimerasa en una célula e iniciar la transcripción de una secuencia codificante (dirección 3') hacia abajo. Las secuencias promotoras suelen contener sitios adicionales para la unión de las moléculas reguladoras (p. ej . , factores de transcripción) que afectan la transcripción de la secuencia codificante. Una secuencia codificante está "bajo el control" de la secuencia promotora o "unida de forma operativa" al promotor cuando ARN polimerasa se une a la secuencia promotora en una célula y transcribe la secuencia codificante en ARNm, que, a su vez, luego se traduce en una proteina codificada por la secuencia codificante.

Se utilizan vectores para introducir una sustancia extraña, por ejemplo ADN, ADN o proteina, en un organismo o célula huésped. Los vectores típicos incluyen virus recombinantes (para polinucleótidos ) y liposomas (para polipéptidos ) . Un "vector de ADN" es un replicón, por ejemplo plásmido, fago o cósmido, al cual otro segmento de polinucleótido puede estar unido para producir la replicación del segmento unido. Un "vector de expresión" es un vector de ADN que contiene secuencias reguladoras que conducirán la síntesis del polipéptido por una célula huésped adecuada. Esto usualmente significa que un promotor se une a ARN polimerasa e inicia la transcripción de ARNm, así como los sitios de unión a ribosomas y señales de iniciación para dirigir la traducción del ARNm en polipéptidos . La incorporación de una secuencia de polinucleótidos en un vector de expresión en el sitio adecuado y en el marco de lectura correcto, seguido de la transformación de una célula huésped adecuada por el vector, permite la producción de un polipéptido codificado por dicha secuencia de polinucleótidos .

"Amplificación" de secuencias de polinucleótidos es la producción in vitro de múltiples copias de una secuencia de ácidos nucleicos particular. La secuencia amplificada usualmente está en forma de ADN. Diversas técnicas para llevar a cabo dicha amplificación se describen en un articulo de revisión de Van Brunt (1990, Bio/Technol . , 8 ( 4 ) : 291-294 ) . La reacción en cadena de la polimerasa o PCR es un prototipo de amplificación de ácidos nucleicos y el uso de PCR en el presente se considerará ejemplar de otras técnicas de amplificación adecuadas.

La estructura general de los anticuerpos en los vertebrados ahora se comprende bien (Edelman, G. M., Ann. N.Y. Acad. Sci., 190: 5 (1971)). Los anticuerpos consisten en dos cadenas de polipéptidos ligeras idénticas de peso molecular de aproximadamente 23.000 daltones (la "cadena ligera") y dos cadenas pesadas idénticas de peso molecular 53.000-70.000 (la "cadena pesada"). Las cuatro cadenas están unidas por enlaces disulfuro en una configuración "Y" en donde las cadenas ligeras agrupan las cadenas pesadas a partir de la desembocadura la configuración "Y". La parte de "ramificación" de la configuración "Y" está designada como región Fab; la parte del tronco de la configuración "Y" está designada como región Fc. La orientación de la secuencia de aminoácidos va desde el extremo N-terminal en la parte superior de la configuración "Y" hasta el extremo C-terminal en la parte inferior de cada cadena. El extremo N-terminal posee la región variable que tiene especificidad por el antigeno que lo produjo y tiene aproximadamente 100 aminoácidos de longitud, con variaciones leves entre la cadena ligera y pesada de anticuerpo a anticuerpo.

La región variable está unida en cada cadena a una región constante que se extiende por la longitud restante de la cadena y que dentro de una clase particular de anticuerpos no varia con la especificidad del anticuerpo (es decir, el antigeno que le dio origen) . Existen cinco clases principales conocidas de regiones constantes que determinan la clase de la molécula de la inmunoglobulina (IgG, IgM, IgA, IgD y IgE correspondientes a las regiones constantes de cadena pesada Y, µ, o¡, d, y e (gamma, mu, alfa, delta o epsilon) ) . La región constante o la clase determina la función efectora posterior del anticuerpo, incluso la activación del complemento (Kabat, E. A., "Structural Concepts in Immunology and Immunochemistry", 2a ed., p. 413-436, Holt, Rinehart, inston (1976)) y otras respuestas celulares (Andrews, D. W., y col., Clinical Immunobiology, pp 1-18, W. B. Sanders (1980); Kohl, S., y col., Immunology, 48: 187 (1983)); mientras la región variable determina el antigeno con el cual reaccionará. Las cadenas ligeras se clasifican como ? (kappa) o ? (lambda) . Cada clase de cadena pesada se puede preparar ya sea con cadena ligera kappa o lambda. Las cadenas ligeras y pesadas están unidas entre si por enlace covalente y las partes de la "cola" de las dos cadenas pesadas están unidas entre si por enlace disulfuro covalente cuando las inmunoglobulinas se generan ya sea por hibridomas o por células B.

La expresión "región variable" o "VR" se refiere a los dominios dentro de cada par de cadenas pesada y ligera en un anticuerpo que participan directamente en la unión del anticuerpo al antigeno. Cada cadena pesada tiene en un extremo un dominio variable (VH) seguido por varios dominios constantes. Cada cadena ligera tiene un dominio variable (VL) en un extremo y un dominio constante en su otro extremo; el dominio constante de la cadena ligera está alineado con al primer dominio constante de la cadena pesada y el dominio variable de la cadena ligera está alienado con el dominio variable de la cadena pesada.

Las expresiones "región determinante de la complementariedad", "región hipervariable" o "CDR" se refieren a una o más de las regiones hipervariables o regiones determinantes de la complementariedad (CDR) que se encuentran en las regiones variables de cadenas ligeras o pesadas de un anticuerpo (véase Kabat, E. A. y col., "Sequences of Proteins of Immunological Interest", National Institutes of Health, Bethesda, Md., (1987)). Estas expresiones incluyen las regiones hipervariables como se define por Kabat y col. ("Sequences of Proteins of Immunological Interest," Kabat E., y col., US Dept . of Health and Human Services, 1983) o los bucles hipervariables en estructuras tridimensionales de anticuerpos (Chothia y Lesk, J Mol. Biol. 196 901-917 (1987)). Las CDR en cada cadena se mantienen muy cerca mediante regiones marco y, con las CDR de la otra cadena, contribuyen a la formación del sitio de unión al antigeno. Dentro de las CDR hay aminoácidos selectos que se han descrito como las regiones determinantes de la selectividad (SDR) que representan los residuos de contacto fundamentales utilizados por la CDR en la interacción anticuerpo-antigeno (Kashmiri, S., Methods, 36:25-34 (2005)).

Las expresiones "región marco" o "FR" se refieren a una o más de las regiones marco dentro de las regiones variables de las cadenas ligeras y pesadas de un anticuerpo (véase Kabat, E. A. y col., Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., (1987)). Estas expresiones incluyen las regiones de secuencias de aminoácidos interpuestas entre las CDR dentro de las regiones variables de las cadenas ligeras y pesadas de un anticuerpo.

Anticuerpos anti-CGRP y sus fragmentos de unión que tienen actividad de unión a C6RP Anticuerpo Abl La presente invención contempla en términos generales la inhibición o prevención de fotofobia en un sujeto que lo necesita, p. ej . , un sujeto que sufre de migraña u otro trastorno asociado a la fotofobia, mediante la administración de una cantidad eficaz de un polipéptido inhibidor de CGRP/receptor de CGRP, p. ej . , un anticuerpo anti-CGRP o un anticuerpo de receptor anti-CGRP o fragmento de estos o un fragmento de CGRP o un receptor de CGRP que pueden tratar o prevenir de forma eficaz la fotofobia. Esto se puede determinar p. ej . , utilizando modelos in vivo adecuados tales como el modelo de ratones transgénico divulgado en el ejemplo 8.

En una realización ejemplar, la invención incluye anticuerpos quiméricos derivados de Abl que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia que se establece a continuación: QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLA YQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSS RFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTEVVVKR (SEC. ID. . ° : 1) .

La invención también incluye anticuerpos quiméricos que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera que comprende la secuencia que se establece a continuación: QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSS RFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC. ID. N.°: 2).

La invención además incluye anticuerpos quiméricos que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia que se establece a continuación: QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYASW AKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS (SEC. ID. N. °: 3) .

La invención también incluye anticuerpos quiméricos que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada que comprende la secuencia que se establece a continuación: QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYASW AKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDI GPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH FPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLM ISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDW LNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPGK (SEC. ID. N.°: 4).

La invención además contempla los anticuerpos que comprenden una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 5; SEC. ID. N.°: 6 y SEC. ID. N.°: 7, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 1 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 2, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 8; SEC. ID. N.°: 9 y SEC. ID. N.°: 10, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 3 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 4, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra realización de la invención, los anticuerpos de la invención o fragmentos de estos comprenden, o alternativamente consisten, combinaciones de una o más de las CDR, las secuencias de cadena ligera variable y pesada variable y las secuencias de cadena ligera y pesada establecidas anteriormente, incluyendo todas ellas.

La invención también contempla los fragmentos del anticuerpo que tiene especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 1 o SEC. ID. N.°: 2. En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 3 o SEC. ID. N.°: 4.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo que tiene especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consiste, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 5; SEC. ID. N.°: 6 y SEC. ID. N.°: 7, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 1 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N. °: 2.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo que tiene especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consiste, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 8; SEC. ID. N.°: 9 y SEC. ID. N.°: 10, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 3 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N . ° : 4.

La invención también contempla los fragmentos de los anticuerpos que incluyen uno o más de los fragmentos del anticuerpo descritos en el presente. En una realización de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes fragmentos de anticuerpos: la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 1; la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 3; las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 5; SEC. ID. N.°: 6 y SEC. ID. N.°: 7) de la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 1 y las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 8; SEC. ID. N.°: 9 y SEC. ID. N.°: 10) de la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 3.

En una realización particularmente preferida de la invención, el anticuerpo anti-CGRP quimérico es Abl, que comprende, o alternativamente consiste, SEC. ID. N.°: 2 y SEC. ID. N.°: 4 y que tiene al menos una de las actividades biológicas establecidas aquí.

En una realización particularmente preferida de la invención, los fragmentos de anticuerpos comprenden, o alternativamente consiste, fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Abl, el fragmento Fab incluye la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 1 y la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 3. Esta realización de la invención además contempla las adiciones, las eliminaciones y las variantes de SEC. ID. N.°: 1 y/o SEC. ID. N.°: 3 en dicho Fab mientras retiene la especificidad de unión al CGRP.

En una realización de la invención descrita aqui (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab para el posible tratamiento o prevención de fotofobia por digestión enzimática (p. ej . , papaina) de Abl. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Abl o fragmentos Fab de este mediante la expresión en células mamiferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

Anticuerpo Ab2 En una realización, la invención incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPS RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKR (SEC. ID. N . ° : 11) .

La invención también incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPS RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQ KVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC. ID. N.°: 12).

La invención además incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQ VRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYAS WAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS (SEC. ID. N . ° : 13) .

La invención también incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada que comprende la secuencia establecida a continuación: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYAS WAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE TKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR QQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK (SEC. ID. N.°: 14).

La invención además contempla los anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que comprenden una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 15; SEC. ID. N.°: 16 y SEC. ID. N.°: 17, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 11 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 12, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 18; SEC. ID. N.°: 19 y SEC. ID. N.°: 20, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 13 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 14, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra realización de la invención, los anticuerpos de la invención o fragmentos de estos comprenden para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consisten, combinaciones de una o más de las CDR, las secuencias de cadena ligera variable y pesada variable y las secuencias de cadena ligera y pesada establecidas anteriormente, incluyendo todas ellas.

La invención también contempla los fragmentos del anticuerpo que tienen especificidad de unión al CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia. En una realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 11 o SEC. ID. N.°: 12. En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 13 o SEC. ID. N.°: 14.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo que tiene especificidad de unión al CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 15; SEC. ID. N.°: 16 y SEC. ID. N.°: 17, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 11 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 12.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo que tiene especificidad de unión al CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 18; SEC. ID. N.°: 19 y SEC. ID. N.°: 20, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad - (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 13 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 14.

La invención también contempla los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que incluyen uno o más de los fragmentos del anticuerpo descritos en el presente. En una realización de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes fragmentos de anticuerpos: la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 11; la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 13; las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 15; SEC. ID. N.°: 16 y SEC. ID. N.°: 17) de la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 11; y las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 18; SEC. ID. N.°: 19 y SEC. ID. N.°: 20) de la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 13.

En una realización particularmente preferida de la invención, el anticuerpo anti-CGRP humanizado para el posible tratamiento o prevención de fotofobia es Ab2, que comprende, o alternativamente consiste, SEC. ID. N.°: 12 y SEC. ID. N.°: 14 y que tienen al menos una de las actividades biológicas establecidas aqui .

En una realización particularmente preferida de la invención, los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Ab2, el fragmento Fab incluye la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 11 y la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 13. Esta realización de la invención además contempla las adiciones, las eliminaciones y las variantes de SEC. ID. N.°: 11 y/o SEC. ID. N.°: 13 en dicho Fab mientras retiene la especificidad de unión al CGRP.

En una realización de la invención descrita aqui (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab para el posible tratamiento o prevención de fotofobia por digestión enzimática (p. ej . , papaina) de Ab2. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Ab2 o fragmentos Fab de este mediante la expresión en células mamiferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

Anticuerpo Ab3 En una realización preferida, la invención incluye anticuerpos humanizados que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación. Como se divulga en el ejemplo 8, este anticuerpo se ha demostrado en un modelo de ratón transgénico con comportamiento de aversión a la luz para inhibir de forma eficaz la fotofobia asociada a CGRP: VLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLA SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKR (SEC. ID. N. ° : 21) .

La invención también incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLA YQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPS RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC. ID. N.°: 22).

La invención además incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYAS WAKGRFTISRDNSKT VYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLV VSS (SEC. ID. N.°: 23) .

La invención también incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada que comprende la secuencia establecida a continuación: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYY Q VRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYAS WAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT L ISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEK ISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVE ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK (SEC. ID. N.°: 24).

La invención además contempla los anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que comprenden una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 25; SEC. ID. N.°: 26 y SEC. ID. N.°: 27, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 21 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 22, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 28; SEC. ID. N.°: 29 y SEC. ID. N.°: 30, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 23 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 24, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra realización de la invención, los anticuerpos de la invención o fragmentos de estos comprenden, o alternativamente consisten, combinaciones de una o más de las CDR, las secuencias de cadena ligera variable y pesada variable y las secuencias de cadena ligera y pesada establecidas anteriormente, incluyendo todas ellas.

La invención también contempla los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 21 o SEC. ID. N.°: 22. En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 23 o SEC. ID. N.°: 24.

En una realización adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que tiene especificidad de unión al CGRP comprende, o alternativamente consiste, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 25; SEC. ID. N.°: 26 y SEC. ID. N.°: 27, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 21 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID.

N.°: 22.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo que tiene especificidad de unión al CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 28; SEC. ID. N.°: 29 y SEC. ID. N.°: 30, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 23 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 24.

La invención también contempla los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que incluyen uno o más de los fragmentos del anticuerpo descritos en el presente. En una realización de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes fragmentos de anticuerpos: la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 21; la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 23; las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 25; SEC. ID. N.°: 26 y SEC. ID. N.°: 27) de la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 21; y las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 28; SEC. ID. N.°: 29 y SEC.

ID. N.°: 30) de la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 23.

En una realización particularmente preferida de la invención, el anticuerpo anti-CGRP quimérico para el tratamiento o prevención de fotofobia es Ab3, que comprende, o alternativamente consiste, SEC. ID. N.°: 22 y SEC. ID. N.°: 24 y que tienen al menos una de las actividades biológicas establecidas aquí.

En una realización particularmente preferida de la invención, los fragmentos de anticuerpos comprenden, o alternativamente consiste, fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Ab3, el fragmento Fab incluye la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 21 y la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 23. Esta realización de la invención además contempla las adiciones, las eliminaciones y las variantes de SEC. ID. N.°: 21 y/o SEC. ID. N.°: 23 en dicho Fab mientras retiene la especificidad de unión al CGRP.

En una realización de la invención descrita aquí (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab para el posible tratamiento o prevención de fotofobia por digestión enzimática (p. ej . , papaina) de Ab3. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Ab3 o fragmentos Fab de este mediante la expresión en células mamiferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

Anticuerpo Ab4 En una realización, la invención incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPS RFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKR (SEC. ID. N. ° : 31) .

La invención también incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPS RFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQ KVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC. ID. N.°: 32).

La invención además incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYY NWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYASW AKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS (SEC. ID. . ° : 33) .

La invención también incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada que comprende la secuencia establecida a continuación: QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYAS AKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLM ISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDW LNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE TKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV HEALHNH YTQKSLSLSPGK (SEC. ID. N.°: 34).

La invención además contempla los anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que comprenden una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 35; SEC. ID. N.°: 36 y SEC. ID. N.°: 37, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 31 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 32, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 38; SEC. ID. N.°: 39 y SEC. ID. N.°: 40, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 33 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 34, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra realización de la invención, los anticuerpos de la invención o fragmentos de estos comprenden, o alternativamente consisten, combinaciones de una o más de las CDR, las secuencias de cadena ligera variable y pesada variable y las secuencias de cadena ligera y pesada establecidas anteriormente, incluyendo todas ellas.

La invención también contempla los fragmentos del anticuerpo que tienen especificidad de unión al CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia. En una realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 31 o SEC. ID. N.°: 32. En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 33 o SEC. ID. N.°: 34.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo que tiene especificidad de unión al CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 35; SEC. ID. N.°: 36 y SEC. ID. N.°: 37, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 31 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 32.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo que tiene especificidad de unión al CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 38; SEC. ID. N.°: 39 y SEC. ID. N.°: 40, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 33 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 34.

La invención también contempla los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que incluyen uno o más de los fragmentos del anticuerpo descritos en el presente. En una realización de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes fragmentos de anticuerpos: la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 31; la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 33; las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 35; SEC. ID. N.°: 36 y SEC. ID. N.°: 37) de la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 31; y las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 38; SEC. ID. N.°: 39 y SEC. ID. N.°: 40) de la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 33.

En una realización particularmente preferida de la invención, el anticuerpo anti-CGRP humanizado para el posible tratamiento o prevención de fotofobia es Ab4, que comprende, o alternativamente consiste, SEC. ID. N.°: 32 y SEC. ID. N.°: 34 y que tienen al menos una de las actividades biológicas establecidas aqui.

En una realización particularmente preferida de la invención, los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, fragmentos Fab (unión fragmento- antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Ab4, el fragmento Fab incluye la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 31 y la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 33. Esta realización de la invención además contempla las adiciones, las eliminaciones y las variantes de SEC. ID. N.°: 31 y/o SEC. ID. N.°: 33 en dicho Fab mientras retiene la especificidad de unión al CGRP.

En una realización de la invención descrita aquí (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab para el posible tratamiento o prevención de fotofobia por digestión enzimática (p. ej . , papaina) de Ab4. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Ab4 o fragmentos Fab de este mediante la expresión en células mamiferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris.

Anticuerpo Ab5 En una realización, la invención incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPS RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR ( SEC . ID. N. ° : 41) .

La invención también incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPS RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC. ID. N.°: 42).

La invención además incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYAS AKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS (SEC. ID. N . ° : 43) .

La invención también incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada que comprende la secuencia establecida a continuación: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMN VRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYAS AKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFN YVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK (SEC. ID. N.°: 44).

La invención además contempla los anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que comprenden una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 45; SEC. ID. N.°: 46 y SEC. ID. N.°: 47, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 41 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 42, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 48; SEC. ID. N.°: 49 y SEC. ID. N.°: 50, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 43 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 44, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos . En otra realización de la invención, los anticuerpos de la invención o fragmentos de estos comprenden, o alternativamente consisten, combinaciones de una o más de las CDR, las secuencias de cadena ligera variable y pesada variable y las secuencias de cadena ligera y pesada establecidas anteriormente, incluyendo todas ellas.

La invención también contempla los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 41 o SEC. ID. N.°: 42. En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 43 o SEC. ID. N.°: 44.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo que tiene especificidad de unión al CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 45; SEC. ID. N.°: 46 y SEC. ID. N.°: 47, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones ipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 41 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 42.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo que tiene especificidad de unión al CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 48; SEC. ID. N.°: 49 y SEC. ID. N.°: 50, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 43 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 44.

La invención también contempla los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que incluyen uno o más de los fragmentos del anticuerpo descritos en el presente. En una realización de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes fragmentos de anticuerpos: la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 41; la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 43; las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 45; SEC. ID. N.°: 46 y SEC. ID. N.°: 47) de la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 41; y las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 48; SEC. ID. N.°: 49 y SEC. ID. N.°: 50) de la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 43.

En una realización particularmente preferida de la invención, el anticuerpo anti-CGRP quimérico para el posible tratamiento o prevención de fotofobia es Ab5, que comprende, o alternativamente consiste, SEC. ID. N.°: 42 y SEC. ID. N.°: 44 y que tienen al menos una de las actividades biológicas establecidas aquí.

En una realización particularmente preferida de la invención, los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Ab5, el fragmento Fab incluye la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 41 y la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 43. Esta realización de la invención además contempla las adiciones, las eliminaciones y las variantes de SEC. ID. N.°: 41 y/o SEC. ID. N.°: 43 en dicho Fab mientras retiene la especificidad de unión al CGRP.

En una realización de la invención descrita aqui (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab para el posible tratamiento o prevención de fotofobia por digestión enzimática (p. ej . , papaina) de Ab5. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Ab5 o fragmentos Fab de este mediante la expresión en células mamiferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

Anticuerpo Ab6 En una realización, la invención incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPS RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR ( SEC .

ID. N. ° : 51) .

La invención también incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLA YQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPS RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC. ID. N.°: 52).

La invención además incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMN VRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYAS WAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS (SEC. ID. N . ° : 53) .

La invención también incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada que comprende la secuencia establecida a continuación: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMN VRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYAS WAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT L ISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK (SEC. ID. N.°: 54).

La invención además contempla los anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que comprenden una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 55; SEC. ID. N.°: 56 y SEC. ID. N.°: 57, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 51 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 52, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 58; SEC. ID. N.°: 59 y SEC. ID. N.°: 60, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 53 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 54, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra realización de la invención, los anticuerpos de la invención o fragmentos de estos comprenden, o alternativamente consisten, combinaciones de una o más de las CDR, las secuencias de cadena ligera variable y pesada variable y las secuencias de cadena ligera y pesada establecidas anteriormente, incluyendo todas ellas.

La invención también contempla los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 51 o SEC. ID. N.°: 52. En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 53 o SEC. ID. N.°: 54.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo que tiene especificidad de unión al CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 55; SEC. ID. N.°: 56 y SEC. ID. N.°: 57, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 51 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 52.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo que tiene especificidad de unión al CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 58; SEC. ID. N.°: 59 y SEC. ID. N.°: 60, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 53 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 54.

La invención también contempla los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que incluyen uno o más de los fragmentos del anticuerpo descritos en el presente. En una realización de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes fragmentos de anticuerpos: la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 51; la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 53; las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 55; SEC. ID. N.°: 56 y SEC. ID. N.°: 57) de la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 51; y las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 58; SEC. ID. N.°: 59 y SEC. ID. N.°: 60) de la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 53.

En una realización particularmente preferida de la invención, el anticuerpo anti-CGRP humanizado para el posible tratamiento o prevención de fotofobia es Ab6, que comprende, o alternativamente consiste, SEC. ID. N.°: 52 y SEC. ID. N.°: 54 y que tienen al menos una de las actividades biológicas establecidas aquí.

En una realización particularmente preferida de la invención, los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Ab6, el fragmento Fab para el posible tratamiento o prevención de fotofobia incluye la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 51 y la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 53. Esta realización de la invención además contempla las adiciones, las eliminaciones y las variantes de SEC. ID. N.°: 51 y/o SEC. ID. N.°: 53 en dicho Fab mientras retiene la especificidad de unión al CGRP.

En una realización de la invención descrita aquí (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab para el posible tratamiento o prevención de fotofobia por digestión enzimática (p. ej . , papaína) de Ab6. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Ab6 o fragmentos Fab de este mediante la expresión en células mamiferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pasto is .

Anticuerpo Ab7 En una realización, la invención incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSS RFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTEVVVKR ( SEC .

ID. N. ° : 61) .

La invención también incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSS RFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSKADYÉKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC. ID. N.°: 62).

La invención además incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHY QWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTYYAS WAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS (SEC. ID. N.°: 63).

La invención también incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada que comprende la secuencia establecida a continuación: QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTYYAS WAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDI GPGTLVTVSSASTKGPSVFPLA PSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS NSGALTSGVH FPAVLQSSGLYSLSSWTVPS SSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFN YVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQD LNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHN HYTQKSLSLSPGK (SEC. ID. N.°: 64).

La invención además contempla los anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que comprenden una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 65; SEC. ID. N.°: 66 y SEC. ID. N.°: 67, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 61 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 62, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 68; SEC. ID. N.°: 69 y SEC. ID.

N.°: 70, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 63 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 64, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos . En otra realización de la invención, los anticuerpos de la invención o fragmentos de estos comprenden para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consisten, combinaciones de una o más de las CDR, las secuencias de cadena ligera variable y pesada variable y las secuencias de cadena ligera y pesada establecidas anteriormente, incluyendo todas ellas.

La invención también contempla los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 61 o SEC. ID. N.°: 62. En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 63 o SEC. ID. N.°: 64.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo que tiene especificidad de unión al CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 65; SEC. ID. N.°: 66 y SEC. ID. N.°: 67, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 61 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 62.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo que tiene especificidad de unión al CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 68; SEC. ID. N.°: 69 y SEC. ID. N.°: 70, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 63 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 64.

La invención también contempla los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que incluyen uno o más de los fragmentos del anticuerpo descritos en el presente. En una realización de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes fragmentos de anticuerpos: la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 61; la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 63; las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 65; SEC. ID. N.°: 66 y SEC. ID. N.°: 67) de la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 61; y las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 68; SEC. ID. N.°: 69 y SEC. ID. N.°: 70) de la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 63.

En una realización particularmente preferida de la invención, el anticuerpo anti-CGRP quimérico para el posible tratamiento o prevención de fotofobia es Ab7, que comprende, o alternativamente consiste, SEC. ID. N.°: 62 y SEC. ID. N.°: 64 y que tienen al menos una de las actividades biológicas establecidas aquí.

En una realización particularmente preferida de la invención, los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Ab7, el fragmento Fab incluye la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 61 y la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 63. Esta realización de la invención además contempla las adiciones, las eliminaciones y las variantes de SEC. ID. N.°: 61 y/o SEC. ID. N.°: 63 en dicho Fab mientras retiene la especificidad de unión al CGRP.

En una realización de la invención descrita aqui (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab para el posible tratamiento o prevención de fotofobia por digestión enzimática (p. ej . , papaina) de Ab7. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Ab7 o fragmentos Fab de este para el posible tratamiento o prevención de fotofobia mediante la expresión en células mamiferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris.

Anticuerpo Ab8 En una realización, la invención incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYNYNYLA YQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPS RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVEIKR ( SEC .

ID. N. ° : 71) .

La invención también incluye anticuerpos humanizados que tienen especificidad de unión al CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia y que poseen una secuencia de cadena ligera que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPS RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC. ID. N.°: 72).

La invención además incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWVGVVGINGRTYYAS WAKGRFTISRDNSKTTVYLQ NSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS (SEC. ID. . ° : 73) .

La invención también incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada que comprende la secuencia establecida a continuación: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHY QWVRQAPGKGLEWVGVVGINGRTYYAS WAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS NSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFN YVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR QQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK (SEC. ID. N.°: 74).

La invención además contempla los anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que comprenden una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 75; SEC. ID. N.°: 76 y SEC. ID. N.°: 77, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 71 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 72, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 78; SEC. ID. N.°: 79 y SEC. ID. N.°: 80, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 73 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 74, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra realización de la invención, los anticuerpos de la invención o fragmentos de estos comprenden para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consisten, combinaciones de una o más de las CDR, las secuencias de cadena ligera variable y pesada variable y las secuencias de cadena ligera y pesada establecidas anteriormente, incluyendo todas ellas.

La invención también contempla los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 71 o SEC. ID. N.°: 72. En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 73 o SEC. ID. N.°: 74.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 75; SEC. ID. N.°: 76 y SEC. ID. N.°: 77, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 71 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID.

N.°: 72.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 78; SEC. ID. N.°: 79 y SEC. ID. N.°: 80, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 73 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 74.

La invención también contempla los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que incluyen uno o más de los fragmentos del anticuerpo descritos en el presente. En una realización de la invención, los fragmentos de los anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes fragmentos de anticuerpos: la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 71; la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 73; las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 75; SEC. ID. N.°: 76 y SEC. ID. N.°: 77) de la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 71; y las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 78; SEC. ID. N.°: 79 y SEC. ID. N.°: 80) de la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 73.

En una realización particularmente preferida de la invención, el anticuerpo anti-CGRP humanizado para el posible tratamiento o prevención de fotofobia es Ab8, que comprende, o alternativamente consiste, SEC. ID. N.°: 72 y SEC. ID. N.°: 74 y que tienen al menos una de las actividades biológicas establecidas aquí.

En una realización particularmente preferida de la invención, los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Ab8, el fragmento Fab incluye la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 71 y la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 73. Esta realización de la invención además contempla las adiciones, las eliminaciones y las variantes de SEC. ID. N.°: 71 y/o SEC. ID. N.°: 73 en dicho Fab mientras retiene la especificidad de unión al CGRP.

En una realización de la invención descrita aqui (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab para el posible tratamiento o prevención de fotofobia por digestión enzimática (p. ej . , papaína) de Ab8. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Ab8 o fragmentos Fab de este mediante la expresión en células mamiferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris.

Anticuerpo Ab9 En una realización, la invención incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSS RFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVVVKR (SEC. ID. . ° : 81) .

La invención también incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSS RFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFI FPPSDEQL SGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC. ID. N.°: 82).

La invención además incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYYMQWVRQSPGRGLE IGVIGSDGKTYYATW AKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIWGPGTLVTVSS (SEC. ID. . ° : 83) .

La invención también incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada que comprende la secuencia establecida a continuación: QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYY QWVRQSPGRGLE IGVIGSDGKTYYAT AKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL ISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFN YVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDW LNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE TKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV HEALHNH YTQKSLSLSPGK (SEC. ID. N.°: 84).

La invención además contempla los anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que comprenden una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 85; SEC. ID. N.°: 86 y SEC. ID. N.°: 87, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 81 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 82, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 88; SEC. ID. N.°: 89 y SEC. ID. N.°: 90, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 83 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 84, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra realización de la invención, los anticuerpos de la invención o fragmentos de estos comprenden para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consisten, combinaciones de una o más de las CDR, las secuencias de cadena ligera variable y pesada variable y las secuencias de cadena ligera y pesada establecidas anteriormente, incluyendo todas ellas.

La invención también contempla los fragmentos del anticuerpo que tienen especificidad de unión al CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia. En una realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 81 o SEC. ID. N.°: 82. En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 83 o SEC. ID. N.°: 84.

En una realización adicional de la invención, los fragmentos del anticuerpo que tiene especificidad de unión al CGRP comprende, o alternativamente consiste, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 85; SEC. ID. N.°: 86 y SEC. ID. N.°: 87, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 81 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 82.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo que tiene especificidad de unión al CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 88; SEC. ID. N.°: 89 y SEC. ID. N.°: 90, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 83 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 84.

La invención también contempla los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que incluyen uno o más de los fragmentos del anticuerpo descritos en el presente. En una realización de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes fragmentos de anticuerpos: la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 81; la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 83; las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 85; SEC. ID. N.°: 86 y SEC. ID. N.°: 87) de la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 81; y las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 88; SEC. ID. N.°: 89 y SEC. ID. N.°: 90) de la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 83.

En una realización particularmente preferida de la invención, el anticuerpo anti-CGRP quimérico para el posible tratamiento o prevención de fotofobia es Ab9, que comprende, o alternativamente consiste, SEC. ID. N.°: 82 y SEC. ID. N.°: 84 y que tienen al menos una de las actividades biológicas establecidas aqui .

En una realización particularmente preferida de la invención, los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, fragmentos Fab (unión fragmento-antígeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Ab9, el fragmento Fab incluye la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 81 y la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 83. Esta realización de la invención además contempla las adiciones, las eliminaciones y las variantes de SEC. ID. N.°: 81 y/o SEC. ID. N.°: 83 en dicho Fab mientras retiene la especificidad de unión al CGRP.

En una realización de la invención descrita aqui (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab para el posible tratamiento o prevención de fotofobia por digestión enzimática (p. ej . , papaina) de Ab9. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia, por ejemplo Ab9 o fragmentos Fab de este mediante la expresión en células mamiferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

Anticuerpo AblO En una realización, la invención incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPS RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR (SEC. ID. N. ° : 91) .

La invención también incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPS RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC. ID. N.°: 92).

La invención además incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQ VRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYAT WAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSS (SEC. ID. N. ° : 93) .

La invención también incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada que comprende la secuencia establecida a continuación: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYAT WAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS VTVP SSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFN YVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQ D LNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLV GF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK (SEC. ID. N.°: 94).

La invención además contempla los anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que comprenden una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 95; SEC. ID. N.°: 96 y SEC. ID. N.°: 97, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 91 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 92, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 98; SEC. ID. N.°: 99 y SEC. ID. N.°: 100, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 93 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 94, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra realización de la invención, los anticuerpos de la invención o fragmentos de estos comprenden, o alternativamente consisten, combinaciones de una o más de las CDR, las secuencias de cadena ligera variable y pesada variable y las secuencias de cadena ligera y pesada establecidas anteriormente, incluyendo todas ellas.

La invención también contempla los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 91 o SEC. ID. N.°: 92. En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 93 o SEC. ID. N.°: 94.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 95; SEC. ID. N.°: 96 y SEC. ID. N.°: 97, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 91 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 92.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo que tiene especificidad de unión al CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 98; SEC. ID. N.°: 99 y SEC. ID. N.°: 100, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 93 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 94.

La invención también contempla los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que incluyen uno o más de los fragmentos del anticuerpo descritos en el presente. En una realización de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consiste, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes fragmentos de anticuerpos: la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 91; la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 93; las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 95; SEC . ID. N.°: 96 y SEC. ID. N.°: 97) de la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 91; y las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 98; SEC. ID. N.°: 99 y SEC. ID. N.°: 100) de la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 93.

En una realización particularmente preferida de la invención, el anticuerpo anti-CGRP humanizado para el posible tratamiento o prevención de fotofobia es AblO, que comprende, o alternativamente consiste, SEC. ID. N.°: 92 y SEC. ID. N.°: 94 y que tienen al menos una de las actividades biológicas establecidas aquí.

En una realización particularmente preferida de la invención, los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo AblO, el fragmento Fab incluye la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 91 y la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 93. Esta realización de la invención además contempla las adiciones, las eliminaciones y las variantes de SEC. ID. N.°: 91 y/o SEC. ID. N.°: 93 en dicho Fab mientras retiene la especificidad de unión al CGRP.

En una realización de la invención descrita aqui (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab para el posible tratamiento o prevención de fotofobia por digestión enzimática (p. e . , papaína) de AblO. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo AblO o fragmentos Fab de este mediante la expresión en células mamiferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastorís.

Anticuerpo Abll En una realización, la invención incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSS RFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKR ( SEC .

ID. . ° : 101) .

La invención también incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSS RFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQ KVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC . ID. N.°: 102).

La invención además incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLE IGVIGVNGKRYYASW AKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDI GPGTLVTVSS (SEC. ID. . ° : 103) .

La invención también incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada que comprende la secuencia establecida a continuación: QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGVNGKRYYAS AKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSS SLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLM ISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDW LNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVE ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPGK (SEC. ID. N.°: 104).

La invención además contempla los anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que comprenden una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 105; SEC. ID. N.°: 106 y SEC. ID. N.°: 107, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 101 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 102, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 108; SEC. ID. N.°: 109 y SEC. ID. N.°: 110, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 103 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 104, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra realización de la invención, los anticuerpos de la invención o fragmentos de estos comprenden para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consisten, combinaciones de una o más de las CDR, las secuencias de cadena ligera variable y pesada variable y las secuencias de cadena ligera y pesada establecidas anteriormente, incluyendo todas ellas.

La invención también contempla los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 101 o SEC. ID. N.°: 102. En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 103 o SEC. ID. N.°: 104.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 105; SEC. ID. N.°: 106 y SEC. ID. N.°: 107, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 101 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID.

N.°: 102.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 108; SEC. ID. N.°: 109 y SEC. ID. N.°: 110, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 103 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 104.

La invención también contempla los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que incluyen uno o más de los fragmentos del anticuerpo descritos en el presente. En una realización de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consiste, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes fragmentos de anticuerpos: la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 101; la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 103; las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 105; SEC. ID. N.°: 106 y SEC. ID. N.°: 107) de la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 101 y las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 108; SEC. ID. N.°: 109 y SEC. ID. N.°: 110) de la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 103.

En una realización particularmente preferida de la invención, el anticuerpo anti-CGRP quimérico para el posible tratamiento o prevención de fotofobia es Abll, que comprende, o alternativamente consiste, SEC. ID. N.°: 102 y SEC. ID. N.°: 104 y que tiene al menos una de las actividades biológicas establecidas aquí.

En una realización particularmente preferida de la invención, los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Abll, el fragmento Fab incluye la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 101 y la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 103. Esta realización de la invención además contempla las adiciones, las eliminaciones y las variantes de SEC. ID. N.°: 101 y/o SEC. ID. N.°: 103 en dicho Fab mientras retiene la especificidad de unión al CGRP.

En una realización de la invención descrita aquí (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab para el posible tratamiento o prevención de fotofobia por digestión enzimática (p. ej . , papaína) de Abll. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Abll o fragmentos Fab de este mediante la expresión en células mamiferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

Anticuerpo Abl2 En una realización, la invención incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPS RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKR ( SEC .

ID. N. ° : 111) .

La invención también incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCRASQSVYYNNYLA YQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPS RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC. ID. N.°: 112).

La invención además incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLE VGVIGVNGKRYYAS WAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS (SEC. ID. N . ° : 113) .

La invención también incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada que comprende la secuencia establecida a continuación: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYY QWVRQAPGKGLEWVGVIGVNGKRYYAS WAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVE ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK (SEC. ID. N.°: 114).

La invención además contempla los anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que comprenden una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 115; SEC. ID. N.°: 116 y SEC. ID. N.°: 117, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 111 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 112, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 118; SEC. ID. N.°: 119 y SEC. ID. N.°: 120, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 113 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 114, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra realización de la invención, los anticuerpos de la invención o fragmentos de estos comprenden para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consisten, combinaciones de una o más de las CDR, las secuencias de cadena ligera variable y pesada variable y las secuencias de cadena ligera y pesada establecidas anteriormente, incluyendo todas ellas.

La invención también contempla los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 111 o SEC. ID.

N.°: 112. En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 113 o SEC. ID. N. ° : 114.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 115; SEC. ID.

N.°: 116 y SEC. ID. N.°: 117, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 111 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID.

N.°: 112.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 118; SEC. ID. N.°: 119 y SEC. ID. N.°: 120, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 113 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 114.

La invención también contempla los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que incluyen uno o más de los fragmentos del anticuerpo descritos en el presente. En una realización de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consiste, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes fragmentos de anticuerpos: la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 111; la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 113; las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 115; SEC. ID. N.°: 116 y SEC. ID. N.°: 117) de la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 111 y las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 118; SEC. ID. N.°: 119 y SEC. ID. N.°: 120) de la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 113.

En una realización particularmente preferida de la invención, el anticuerpo anti-CGRP humanizado para el posible tratamiento o prevención de fotofobia es Abl2, que comprende, o alternativamente consiste, SEC. ID. N.°: 112 y SEC. ID. N.°: 114 y que tiene al menos una de las actividades biológicas establecidas aquí.

En una realización particularmente preferida de la invención, los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Abl2, el fragmento Fab incluye la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 111 y la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 113. Esta realización de la invención además contempla las adiciones, las eliminaciones y las variantes de SEC. ID. N.°: 111 y/o SEC. ID. N.°: 113 en dicho Fab mientras retiene la especificidad de unión al CGRP.

En una realización de la invención descrita aquí (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab para el posible tratamiento o prevención de fotofobia por digestión enzimática (p. ej . , papaina) de Abl2. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia, por ejemplo Abl2 o fragmentos Fab de este mediante la expresión en células mamiferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

Anticuerpo Abl3 En una realización, la invención incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVP SRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVVVKR (SEC. ID. N . ° : 121) .

La invención también incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera que comprende la secuencia establecida a continuación: AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVP SRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVVVKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC. ID. N.°: 122).

La invención además incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAM WVRQAPGKGLEWIGIIYNGDGSTYYAS WVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLWGPGTLVTVSS (SEC. ID. N. ° : 123) .

La invención también incluye anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada que comprende la secuencia establecida a continuación: QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLEWIGCIYNGDGSTYYAS WVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK (SEC. ID. N.°: 124).

La invención además contempla los anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que comprenden una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 125; SEC. ID. N.°: 126 y SEC. ID. N.°: 127, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 121 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 122, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 128; SEC. ID. N.°: 129 y SEC. ID. N.°: 130, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 123 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 124, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos. En otra realización de la invención, los anticuerpos de la invención o fragmentos de estos comprenden, o alternativamente consisten, combinaciones de una o más de las CDR, las secuencias de cadena ligera variable y pesada variable y las secuencias de cadena ligera y pesada establecidas anteriormente, incluyendo todas ellas.

La invención también contempla los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 121 o SEC. ID. N.°: 122. En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 123 o SEC. ID. N.°: 124.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 125; SEC. ID. N.°: 126 y SEC. ID. N.°: 127, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 121 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 122.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 128; SEC. ID. N.°: 129 y SEC. ID. N.°: 130, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 123 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 124.

La invención también contempla los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que incluyen uno o más de los fragmentos del anticuerpo descritos en el presente. En una realización de la invención, los fragmentos de los anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes fragmentos de anticuerpos: la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 121; la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 123; las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 125; SEC. ID. N.°: 126 y SEC. ID. N.°: 127) de la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 121 y las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 128; SEC. ID. N.°: 129 y SEC. ID. N.°: 130) de la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 123.

En una realización particularmente preferida de la invención, el anticuerpo anti-CGRP quimérico para el posible tratamiento o prevención de fotofobia es Abl3, que comprende, o alternativamente consiste, SEC . ID. N.°: 122 y SEC. ID. N.°: 124 y que tiene al menos una de las actividades biológicas establecidas aqui.

En una realización particularmente preferida de la invención, los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Abl3, el fragmento Fab para el posible tratamiento o prevención de fotofobia incluye la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 121 y la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 123. Esta realización de la invención además contempla las adiciones, las eliminaciones y las variantes de SEC. ID. N.°: 121 y/o SEC. ID. N.°: 123 en dicho Fab mientras retiene la especificidad de unión al CGRP.

En una realización de la invención descrita aquí (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab para el posible tratamiento o prevención de fotofobia por digestión enzimática (p. ej . , papaina) de Abl3. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia, por ejemplo Abl3 o fragmentos Fab de este mediante la expresión en células mamiferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

Anticuerpo Abl4 En una realización, la invención incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera variable que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPS RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR (SEC. ID. N. ° : 131) .

La invención también incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena ligera que comprende la secuencia establecida a continuación: QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLA YQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPS RFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFI FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSST LTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC. ID. N.°: 132).

La invención además incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada variable que comprende la secuencia establecida a continuación: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYY Q VRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYAT AKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSS (SEC. ID. N. ° : 133) .

La invención también incluye anticuerpos humanizados para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tienen especificidad de unión al CGRP y que poseen una secuencia de cadena pesada que comprende la secuencia establecida a continuación: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYAT AKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDI GQGTLVTVSSASTKGPSVFPL APSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVP SSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDT L ISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQ DWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVE ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK (SEC. ID. N.°: 134).

La invención además contempla los anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que comprenden una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 135; SEC. ID. N.°: 136 y SEC. ID. N.°: 137, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 131 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 132, y/o una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 138; SEC. ID. N.°: 139 y SEC. ID. N.°: 140, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 133 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 134, o combinaciones de estas secuencias de polipéptidos . En otra realización de la invención, los anticuerpos de la invención o fragmentos de estos comprenden para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consisten, combinaciones de una o más de las CDR, las secuencias de cadena ligera variable y pesada variable y las secuencias de cadena ligera y pesada establecidas anteriormente, incluyendo todas ellas.

La invención también contempla los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 131 o SEC . ID. N.°: 132. En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo de la invención para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consisten, la secuencia de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 133 o SEC. ID. N.°: 134.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 135; SEC. ID. N.°: 136 y SEC. ID. N.°: 137, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 131 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 132.

En otra realización de la invención, los fragmentos del anticuerpo para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que tiene especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polipéptidos de SEC. ID. N.°: 138; SEC. ID. N.°: 139 y SEC. ID. N.°: 140, que corresponden a las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 133 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 134.

La invención también contempla los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que incluyen uno o más de los fragmentos del anticuerpo descritos en el presente. En una realización de la invención, los fragmentos de los anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consiste, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes fragmentos de anticuerpos: la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 131; la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 133; las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 135; SEC. ID. N.°: 136 y SEC. ID. N.°: 137) de la región de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 131 y las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 138; SEC. ID. N.°: 139 y SEC. ID. N.°: 140) de la región de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 133.

En una realización particularmente preferida de la invención, el anticuerpo anti-CGRP humanizado para el posible tratamiento o prevención de fotofobia es Abl4, que comprende, o alternativamente consiste, SEC. ID. N.°: 132 y SEC. ID. N.°: 134 y que tiene al menos una de las actividades biológicas establecidas aqui.

En una realización particularmente preferida de la invención, los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia comprenden, o alternativamente consiste, fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Abl4, el fragmento Fab para el posible tratamiento o prevención de fotofobia incluye la secuencia de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 131 y la secuencia de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 133. Esta realización de la invención además contempla las adiciones, las eliminaciones y las variantes de SEC. ID. N.°: 131 y/o SEC. ID. N.°: 133 en dicho Fab mientras retiene la especificidad de unión al CGRP.

En una realización de la invención descrita aquí (a continuación), se pueden producir fragmentos Fab para el posible tratamiento o prevención de fotofobia por digestión enzimática (p. ej . , papaina) de Abl4. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia, por ejemplo Abl4 o fragmentos Fab de este mediante la expresión en células mamíferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

En otra realización, los fragmentos de anticuerpos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia pueden estar presente en una o más de las siguientes formas no exhaustivas: Fab, Fab', F(ab')2, Fv y formas de anticuerpos Fv de cadena única. En una realización preferida, los anticuerpos anti-CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia descritos aquí además comprenden la secuencia de cadena ligera constante kappa establecida a continuación : VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVT EQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEC. ID. N . ° : 283) .

En otra realización preferida, los anticuerpos anti- CGRP descritos aquí para el posible tratamiento o prevención de fotofobia además comprenden la secuencia de polipéptidos de cadena pesada constante gamma-1 que comprende la secuencia establecida a continuación: ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPE LLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR EEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSR WQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEC. ID. N.°: 284).

En otra realización, la invención contempla un anticuerpo anti-CGRP aislado para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que comprende una secuencia de polipéptidos VH seleccionada de: SEC . ID. N.°: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, 113, 123 o 133, o una variante de esta; y además comprende una secuencia de polipéptidos VL seleccionada de: SEC. ID. N.°: 1, 11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101, 111, 121 o 131, o una variante de esta, en donde uno o más de los residuos marco (residuos FR) en dicho polipéptido VH o VL se han sustituido con otro residuo de aminoácidos, lo que produce un anticuerpo anti-CGRP que se une específicamente a CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia. La invención contempla las formas humanizadas y quiméricas de estos anticuerpos. Los anticuerpos quiméricos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia pueden incluir una Fe derivada de las regiones constantes IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgG5, IgG6, IgG7, IgG8, IgG9, IgGlO, IgGll, IgG12, IgG13, IgG14, IgG15, IgG16, IgG17, IgG18 o IgG19.

En una realización de la invención, los anticuerpos o polipéptidos VH o VL se originan o se seleccionan de una o más población de células B de conejo antes de la iniciación del proceso de humanización que se menciona aquí.

En otra realización de la invención, los anticuerpos anti-CGRP o fragmentos de estos no tienen especificidad de unión al CGRP-R. En una realización adicional de la invención, loa anticuerpos anti-CGRP o fragmentos de estos inhiben la asociación de CGRP con CGRP-R. En otra realización de la invención, los anticuerpos anti-CGRP o fragmentos de estos inhiben la asociación de CGRP con CGRP-R y/o las proteínas y/o multímeros adicionales de estos, y/o antagonizan los efectos biológicos de estos.

Como se indica aquí, los anticuerpos o fragmentos de estos se pueden modificar postraduccionalmente para añadir fracciones efectoras, por ejemplo ligadores químicos, fracciones detectables, por ejemplo tintes fluorescentes, enzimas, sustratos, materiales bioluminiscentes , materiales radiactivos, fracciones quimioluminiscentes , o fracciones funcionales, por ejemplo estreptavidina, avidina, biotina, una citotoxina, un agente citotóxico y materiales radiactivos .

Los anticuerpos o fragmentos de estos también se pueden modificar químicamente para proporcionar ventajas adicionales tales como mayor tiempo de solubilidad, estabilidad y circulación (vida media in vivo) del polipéptido, o inmunogenicidad disminuida (véase la patente estadounidense N.° 4.179.337). Las fracciones químicas para la derivación se pueden seleccionar de polímeros solubles en agua, por ejemplo copolímeros de polietilenglicol, etilenglicol/propilenglicol, carboximetilcelulosa, dextrano, polivinilalcohol y similares. Los anticuerpos y fragmentos de estos se pueden modificar en posiciones aleatorias dentro de la molécula o en posiciones predeterminadas dentro de la molécula y pueden incluir una, dos, tres o más fracciones químicas unidas.

El polímero puede ser de cualquier peso molecular y puede ser ramificado o no ramificado. Para el polietilenglicol, el peso molecular preferido es entre aproximadamente 1 kDa y aproximadamente 100 kDa (el término "aproximadamente" indica que en las preparaciones de polietilenglicol, algunas moléculas pesarán más, algunas menos, que el peso molecular establecido) para la facilidad en el manejo y la fabricación. Se pueden utilizar otros tamaños, dependiendo del perfil terapéutico deseado (p. ej . , la duración de la liberación progresiva deseada, los efectos, en caso de haber en la actividad biológica, la facilidad en el manejo, el grado o falta de antigenicidad y otros efectos conocidos del polietilenglicol a un análogo o proteina terapéutica) . Por ejemplo, el polietilenglicol puede tener un peso molecular promedio de aproximadamente 200, 500, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 6000, 6500, " 7000, 7500, 8000, 8500 , 9000, 9500, 10 .000, 10. 500, 11.000, 11. 500, 12.000, 12. 500, 13.000, 13. 500, 14. 000, 14.500, 15. 000, 15.500, 16. 000, 16.500, 17. 000, 17. 500, 18.000, 18. 500, 19.000, 19. 500, 20.000, 25. 000, 30. 000, 35.000, 40. 000, 50.000, 55. 000, 60.000, 65. 000, 70. 000, 75.000, 80, .000, 85.000, 90 .000, 95.000 o 100. 000 kDa.

Polietilenglicoles ramificados se describen, por ejemplo, en la patente estadounidense N.° 5.643.575; Morpurgo y col., Appl. Biochem. Biotechnol. 56:59-72 (1996); Vorobjev y col., Nucleosides Nucleotides 18:2745-2750 (1999); y Caliceti y col., Bioconjug. Chem. 10:638-646 (1999), cuyas divulgaciones se incorporan al presente por referencia.

Hay varios métodos de unión disponibles para los entendidos en la técnica, véase p. ej . , EP 0 401 384, que se incorpora al presente por referencia (acoplamiento de PEG a G-CSF) , véase también Malik y col., Exp. Hematol. 20:1028-1035 (1992) (sobre la pegilación de GM-CSF utilizando cloruro de tresilo) . Por ejemplo, el polietilenglicol puede estar unido por enlace covalente a través de residuos de aminoácidos por medio de un grupo reactivo, por ejemplo, un grupo amino o carboxilo libre. Los grupos reactivos son a los que una molécula de polietilenglicol activada puede estar unida. Los residuos de aminoácidos que tienen un grupo amino libre pueden incluir residuos de lisina y los residuos de aminoácidos del terminal N; los que tienen un grupo carboxilo libre pueden incluir residuos de ácidos aspárticos, residuos de ácidos glutámicos y el residuo de aminoácidos del terminal C. También se pueden utilizar grupos sulfhidrilo como un grupo reactivo para unir las moléculas de polietilenglicol. Para fines terapéuticos se prefiere la unión en un grupo amino, por ejemplo la unión en el grupo lisina o extremo amino terminal.

Como se sugirió anteriormente, el polietilenglicol puede estar unido a las proteínas por medio de un enlace a cualquiera de varios residuos de aminoácidos. Por ejemplo, el polietilenglicol puede estar unido a polipéptidos por medio de enlaces covalentes a residuos de lisina, histidina, ácido aspártico, ácido glutámico o cisteina. Se pueden emplear una o más químicas de reacción para unir el polietilenglicol a residuos de aminoácidos específicos (p. e . , lisina, histidina, ácido aspártico, ácido glutámico o cisteina) o a más de un tipo de residuos de aminoácidos (p. ej . , lisina, histidina, ácido aspártico, ácido glutámico, cisteina y combinaciones de estos) .

Alternativamente, los anticuerpos o fragmentos de estos pueden tener mayores vidas medias in vivo por medio de la fusión con albúmina (incluso, entre otros, la albúmina de suero humano recombinante o fragmentos o variantes de esta (véase, p. ej . , la patente estadounidense N.° 5.876.969, emitida el 2 marzo de 1999, la patente EP 0 413 622 y la patente estadounidense N.° 5.766.883, emitida el 16 de junio de 1998, incorporadas al presente por referencia en su totalidad) ) u otras proteínas de la sangre circulantes, por ejemplo transferrina o ferritina. En una realización preferida, los polipéptidos y/o anticuerpos de la presente invención (incluso los fragmentos o variantes de estos) están fusionados con la forma madura de la albúmina de suero humano (es decir, aminoácidos 1-585 de la albúmina de suero humano como se muestra en las figuras 1 y 2 de la patente EP 0 322 094), que se incorpora al presente por referencia en su totalidad. Los polinucleótidos que codifican las proteínas de fusión de la invención también están comprendidos por la invención .

Con referencia a las fracciones detectables, enzimas ejemplares adicionales incluyen, entre otros, peroxidasa de rábano picante, acetilcolinesterasa, fosfatasa alcalina, ¿eta-galactosidasa y luciferasa. Materiales fluorescentes ejemplares adicionales incluyen, entre otros, rodamina, fluoresceína, isotiocianato de fluoresceína, umbeliferona, diclorotriazinilamina, ficoeritrina y cloruro de dansilo. Fracciones quimioluminiscentes ejemplares adicionales incluyen, entre otros, luminol. Materiales bioluminiscentes ejemplares adicionales incluyen, entre otros, luciferina y aequorina. Materiales radiactivos ejemplares adicionales incluyen, entre otros, yodo 125 (125I), carbono 14 (14C) , azufre 35 (35S) , tritio (3H) y fósforo 32 (32P) .

Con referencia a las fracciones funcionales, los agentes citotóxicos ejemplares incluyen, entre otros, metotrexato, aminopterina, ß-mercaptopurina, 6-tioguanina, citarabina, 5-fluorouracil decarbazina; los agentes alquilantes, por ejemplo mecloretamina, tioepa, clorambucil, melfalán, carmustina (BSNU) , mitomicina C, lomustina (CCNU) , 1-metilnitrosourea, ciclotosfamida, mecloretamina, busulfano, dibromomanitol , estreptozotocina, mitomicina C, cis-diclorodiamina platino (II) (DDP) cisplatino y carboplatino (paraplatino) ; las antraciclinas incluyen daunorubicina (anteriormente daunomicina) , doxorubicina (adriamicina) , detorubicina, carminomicina, idarrubicina, epirrubicina, mitoxantrona y bisantreno; los antibióticos incluyen dactinomicina (actinomicina D) , bleomicina, caliqueamicina, mitramicina y antramicina (AMC) ; y los agentes antimitóticos, por ejemplo los alcaloides de la vinca, vincristina y vinblastina. Otros agentes citotóxicos incluyen paclitaxel (taxol) , ricina, exotoxina de pseudomonas, gemcitabina, citocalasina B, gramicidina D, bromuro de etidio, emetina, etopósido, tenopósido, colchicina, dihidroxi antracenodiona, 1-dehidrotestosterona, glucocorticoides , procaina, tetracaina, lidocaina, propranolol, puromicina, procarbazina, hidroxiurea, asparaginasa, corticosteroides , mitotano (?,?'- (DDD) ) , interferones, y mezclas de estos agentes citotóxicos.

Agentes citotóxicos adicionales incluyen, entre otros, agentes quimioterapéuticos, por ejemplo carboplatino, cisplatino, paclitaxel, gemcitabina, caliqueamicina, doxorubicina, 5-fluorouracil, mitomicina C, actinomicina D, ciclofosfamida, vincristina y bleomicina. Se pueden conjugar enzimas tóxicas de plantas o bacterias, por ejemplo ricina, toxina diftérica y toxina de Pseudomonas a anticuerpos humanizados o quiméricos, o fragmentos de unión de estos, para generar reactivos de destrucción específicos del tipo de célula (Youle, y col., Proc. Nat 11 Acad. Sci. EUA 77:5483 (1980); Gilliland, y col., Proc. Nat ' 1 Acad. Sci. EUA 77:4539 (1980); Krolick, y col., Proc. Nat ? Acad. Sci. EUA 77:5419 (1980) ) .

Otros agentes citotóxicos incluyen ribonucleasas citotóxicas como describe Goldenberg en la patente estadounidense N.° 6.653.104. Las realizaciones de la invención también se refieren a radioinmunoconj ugados en donde un radionucleido que emite partículas alfa o beta está unido de manera estable al anticuerpo, o fragmentos de unión de este, con o sin el uso de una reactivo de formación de complejos. Dichos radionucleidos incluyen emisores beta, por ejemplo fósforo-32 (32P) , escandio-47 (47Sc) , cobre-67 (67Cu) , galio-67 (67Ga) , itrio-88 (88Y) , itrio-90 (90Y) , yodo-125 (125I), yodo-131 (131I), samario-153 (153Sm) , lutecio-177 (177Lu), renio-186 (186Re) o renio-188 (188Re) , y emisores alfa, por ejemplo astatina-211 (211At) , plomo-212 (212Pb) , bismuto-212 (212Bi) o -213 (213Bi) o actinio-225 (22Ac) .

En la técnica se conocen métodos para conjugar un anticuerpo o fragmento de unión de este a una fracción detectable y similares, por ejemplo los métodos descritos por Hunter y col., Nature 144:945 (1962); David y col., Biochemistry 13:1014 (1974); Pain y col., J. Immunol. Meth. 40:219 (1981); y Nygren, J., Histochem. Y Cytochem. 30:407 (1982) .

Las realizaciones descritas aquí además incluyen variantes y equivalentes que son sustancialmente homologas a los anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, diacuerpos, SMIP, camelcuerpos, nanocuerpos, IgNAR, polipéptidos, regiones variables y CDR que se establecen en el presente. Estos pueden contener, p. ej . , mutaciones de sustitución conservadora, (es decir, la sustitución de uno o más aminoácidos por aminoácidos similares). Por ejemplo, sustitución conservadora se refiere a la sustitución de un aminoácido con otro dentro de la misma clase general, p. ej . , un aminoácido ácido con otro aminoácido ácido, un aminoácido básico con otro aminoácido básico o un aminoácido neutral por otro aminoácido neutral. Lo que se pretende por una sustitución conservadora de aminoácidos se conoce en la técnica .

En otra realización, la invención contempla secuencias de polipéptidos que tienen una homología de secuencias de al menos el 90 % o mayor con una o más de las secuencias de polipéptidos de los fragmentos de anticuerpos, las regiones variables y las CDR establecidos en el presente. Más preferentemente, la invención contempla secuencias de polipéptidos que tienen una homología de secuencias de al menos el 95 % o mayor, incluso más preferentemente una homología de secuencias de al menos el 98 % o mayor, y más preferentemente aún una homología de secuencias de al menos el 99 % o mayor con una o más de las secuencias de polipéptidos de los fragmentos de anticuerpos, las regiones variables y las CDR establecidos en el presente. Los entendidos en la técnica conocen los métodos para determinar la homología entre las secuencias de ácidos nucleicos y de aminoácidos .

En otra realización, la invención contempla adicionalmente los homólogos de polipéptidos mencionados anteriormente de los fragmentos de anticuerpos, las regiones variables y las CDR establecidos en el presente que tienen actividad anti-CGRP. Ejemplos no exhaustivos de actividad anti-CGRP se establecen aquí, por ejemplo, en los párrafos

[0329] -

[0350] más adelante.

En otra realización, la invención contempla adicionalmente la generación y uso de anticuerpos anti- idiotípicos que se unen a cualquiera de las secuencias anteriores. En una realización ejemplar, dicho anticuerpos anti-idiotípico se puede administrar a un sujeto que ha recibido un anticuerpo anti-CGRP para modular, reducir o neutralizar el efecto del anticuerpo anti-CGRP. Dichos anticuerpos anti-idiotipicos también pueden ser útiles para el tratamiento de una enfermedad autoinmune caracterizada por la presencia de anticuerpos anti-CGRP. Un uso ejemplar adicional de dichos anticuerpos anti-idiotipicos es para la detección de los anticuerpos anti-CGRP de la presente invención, por ejemplo para monitorizar los niveles de los anticuerpos anti-CGRP presentes en la sangre u otros fluidos corporales de un sujeto.

La presente invención también contempla anticuerpos anti-CGRP para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que comprenden cualquiera de las secuencias de polipéptidos o polinucleótidos descritas aquí sustituidas por cualquiera de las otras secuencias de polinucleótidos descritas en el presente. Por ejemplo, sin limitación, la presente invención contempla anticuerpos que comprenden la combinación de cualquiera de las secuencias de cadena pesada variable y de cadena ligera variable descritas aquí y además contempla anticuerpos que provienen de la sustitución de cualquiera de las secuencias de CDR descritas aquí por cualquiera de las otras secuencias de CDR descritas aqui.

Realizaciones ejemplares adicionales de la invención En otra realización, la invención contempla uno o más anticuerpos anti-humanos anti-CGRP o fragmentos de anticuerpos de estos para el posible tratamiento o prevención de fotofobia que se unen específicamente a los mismos epítopos conformacionales o lineales que se superponen y/o compiten por la unión a los mismos epítopos conformacionales o lineales que se superponen en un polipéptido de CGRP humano intacto o fragmento de este como un anticuerpos anti-CGRP humano seleccionado de Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3 o Abl4. En una realización preferida, el anticuerpo anti-CGRP humano o fragmento de este se une específicamente a los mismos epítopos conformacionales o lineales que se superponen y/o compite por la unión a los mismos epítopos conformacionales o lineales que se superponen en un polipéptido de CGRP humano intacto o fragmento de este como Ab3, Ab6, Abl3 o Abl4 y, más preferentemente, Ab3.

Una realización preferida de la invención se refiere a anticuerpos quiméricos o humanizados y fragmentos de estos (incluso fragmentos Fab) tienen especificidad de unión al CGRP y que inhiben las actividades biológicas mediadas por la unión de CGRP con el receptor de CGRP especialmente para el tratamiento o prevención de fotofobia. En una realización particularmente preferida de la invención, los anticuerpos anti-CGRP quiméricos o humanizados se seleccionan de Ab3, Ab6, Abl3, Abl4 o, más preferentemente Ab3.

Una realización preferida de la invención se refiere a métodos de clasificación de anticuerpos y fragmentos de estos (incluso fragmentos Fab) que especificidad de unión al péptido relacionado con el gen de la calcitonina humano (en lo sucesivo "CGRP") en modelos animales para determinar los efectos in vivo de estos, especialmente su capacidad para antagonizar los efectos secundarios adversos de CGRP y para tratar afecciones que implican CGRP excedente, especialmente su capacidad de tratar o prevenir fotofobia, p. ej . , en migraña .

Una realización preferida más especifica de la invención proporciona un método para evaluar la posible eficacia in vivo de un polipéptido inhibidor de CGRP/receptor de CGRP candidato, p. ej . , un anticuerpo anti-CGRP o anticuerpo anti-CGRP o fragmento de anticuerpo, que comprende determinar si el anticuerpo inhibe el comportamiento aversivo a la luz en un roedor cuando se le administra CGRP en comparación con un roedor que se administra CGRP en ausencia del anticuerpo anti-CGRP candidato o fragmento de anticuerpo.

Una realización preferida más especifica de la invención proporciona un método para evaluar la posible eficacia in vivo de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-CGRP candidato para tratar una afección neurológica caracterizada por aumento de los niveles de CGRP y fotofobia.

Otra realización preferida más especifica de la invención proporciona un método para evaluar la posible eficacia in vivo de un anticuerpo anti-CGRP candidato o fragmento de anticuerpo para tratar un trastorno asociado a CGRP asociado con fotofobia, por ejemplo migraña o migraña crónica, (con o sin aura) , o afecciones tales como pérdida de peso, cáncer o tumores, angiogénesis asociada con el crecimiento del cáncer o tumoral, angiogénesis asociada con la supervivencia al cáncer o al tumor, diarrea, migraña hemipléjica, cefaleas en racimos, neuralgia migrañosa, cefaleas crónicas, cefaleas tensionales, cefaleas generales, sofocos, hemicránea paroxismal crónica, cefaleas secundarias debido a un problema estructural subyacente en la cabeza o cuello, neuralgia craneal, cefalea sinusal (por ejemplo, asociada con sinusitis) y migrañas o cefaleas inducidas por alergias, dolor, migraña sin dolor de cabeza, migraña abdominal, dolor inflamatorio, dolor de la incisión después de la operación, síndrome de dolor regional complejo, dolor por cáncer, dolor de cáncer de hueso metastásico o primario, dolor de fractura, dolor crónico, dolor de fractura osteoporótica, dolor causado por quemaduras, osteoporosis , gota, dolor en las articulaciones, dolor abdominal, dolor asociado con la crisis de células falciformes, y otro dolor nocicéptico, asi como carcinoma hepatocelular, cáncer de mama, cirrosis hepática, dolor menstrual, dolor neurogénico, dolor neuropático, dolor nocicéptico, neuralgia del trigémino, neuralgia posherpética, dolor del miembro fantasma, fibromialgia, dolor menstrual, ovarialgia, distrofia simpática refleja, dolor neurogénico, dolor por osteoartritis o artritis reumatoide, dolor en la zona lumbar, neuropatía diabética, ciática, o dolor o dolor visceral asociado con: reflujo gastroesofágico, dispepsia, síndrome del intestino irritable, colon irritable, colon espástico, colitis mucosa, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, ileítis, colitis ulcerosa, cólico renal, dismenorrea, cistitis, período menstrual, trabajo de parto, menopausia, prostatitis, pancreatitis, cólico renal, dismenorrea, cistitis, incluso cistitis intersticial (IC), cirugía asociada con el íleo, diverticulitis , peritonitis, pericarditis, hepatitis, apendicitis, colitis, colecistitis, endometriosis, pancreatitis crónica y/o aguda, infarto de miocardio, dolor de los ríñones, dolor pleural, prostatitis, color pélvico, traumatismo en un órgano, dolor nociceptivo crónico, dolor neuropático crónico, dolor inflamatorio crónico, fibromialgia, dolor irruptivo y dolor persistente. Otra realización preferida de la invención proporciona un método para determinar una dosificación terapéutica o régimen de dosificación adecuado de un anticuerpo anti-CGRP candidato o fragmento de anticuerpo en seres humanos para tratar una afección asociada a la fotofobia seleccionada de las identificadas en el presente según los efectos de dicho anticuerpo o fragmento de anticuerpo en un modelo de roedores con comportamiento aversivo a la luz descrito detalladamente a continuación. Las causas comunes de fotofobia incluyen cefaleas migrañosas, cataratas o enfermedades oftalmológicas graves, por ejemplo uveitis o abrasión corneal. Una lista más amplia de trastornos asociados con la fotofobia incluye causas relacionadas con los ojos, por ejemplo acromatopsia, aniridia, los fármacos anticolinérgicos pueden provocar fotofobia al paralizar el músculo del esfínter del iris, afaquia (ausencia del cristalino del ojo), buftalmos (ángulo anormalmente estrecho entre la córnea y el iris) , cataratas, distrofia de conos, anomalías congénitas del ojo, conjuntivitis viral ("ojo rosa"), abrasión corneal, distrofia corneal, úlcera corneal, alteración del epitelio corneal, por ejemplo el provocado por un cuerpo extraño corneal o queratitis, ectopia del cristalino, endoftalmitis , trauma ocular causado por una enfermedad, lesión o infección, por ejemplo chalazión, episcleritis, glaucoma, queratocono o hipoplasia del nervio óptico, hidroftalmía, o glaucoma congénito, iritis, neuritis óptica, síndrome de dispersión pigmentaria, dilatación pupilar (inducida naturalmente o químicamente) , desprendimiento de retina, cicatrización de la córnea o esclera y uveítis. Además, la fotofobia tiene causas relacionadas con el sistema nervioso o urológicas que incluyen: trastornos del espectro autista, malformación de Chiari, dislexia, encefalitis, incluso encefalomielitis miálgica también denominada síndrome de fatiga crónica, meningitis, hemorragia subaracnoidea, tumor de la fosa craneal posterior, así como otras causas, por ejemplo espondilitis anquilosante, albinismo, ariboflavinosis , benzodiazepinas (uso a largo plazo o retiro de benzodiazepinas ) , quimioterapia, chikungunya, cistinosis, Síndrome de Ehlers-Danlos, resaca, influenza, mononucleosis infecciosa, deficiencia de magnesio, envenenamiento por mercurio, migraña, rabia y tirosinemia tipo II, también conocida como "síndrome de Richner-Hanhart" . Adicionalmente, se conoce que la fotofobia es elevada en la depresión, el trastorno bipolar y la agorafobia.

Otra realización preferida adicional de la invención se refiere a métodos de evaluación, según los resultados en un modelo de animal de CGRP de roedor, una dosificación terapéutica o régimen de dosificación adecuado de un anticuerpo anti-CGRP candidato o fragmento de anticuerpo en seres humanos.

Otras realizaciones preferidas de la presente invención se refieren a ensayos de detección y el uso terapéutico de anticuerpos específicos y fragmentos de estos que tienen especificidad de unión al CGRP para el tratamiento o prevención de fotofobia, en particular que tienen especificidad epitópica deseada, alta afinidad o avidez y/o propiedades funcionales. En realizaciones preferidas, le presente invención se refiere a ensayos y uso de anticuerpos descritos en el presente, que comprenden las secuencias de los polipéptidos VH, VL y CDR descritos en el presente y los polinucleótidos que los codifican. Una realización preferida de la invención se refiere a anticuerpos quiméricos o humanizados y fragmentos de estos (incluso fragmentos Fab) que se pueden unir a CGRP y/o que pueden inhibir las actividades biológicas mediadas por la unción de CGRP al receptor de CGRP ("CGRP-R") .

En una realización adicional de la invención se contempla un método para reducir, tratar o prevenir enfermedades o trastornos asociados con CGRP al afectar las actividades biológicas mediadas mediante CGRP, especialmente inhibir o prevenir la fotofobia evitando así las actividades biológicas adversas medidas mediante la unión de CGRP con CGRP-R. En una realización, la enfermedad o trastorno asociada con fotofobia es migraña, cefalea, dolor u otras afecciones mencionadas anteriormente que están asociadas con fotofobia. En el presente se proporciona un listado no exhaustivo de enfermedades y trastornos asociados con CGRP.

Otra realización preferida de la invención contempla el uso de secuencias de polipéptidos Fab para el tratamiento de migrañas y cefaleas y especialmente para el tratamiento o prevención de fotofobia en un paciente. En otras partes de la presente divulgación se proporcionan tipos de migrañas y cefaleas no exhaustivos que se pueden tratar utilizando secuencias de polipéptidos Fab.

En otra realización de la invención, el anticuerpo anti-CGRP humano para el tratamiento o prevención de fotofobia es un anticuerpo que se une específicamente a los mismos epítopos conformacionales o lineales que se superponen en un polipéptido de CGRP intacto o fragmentos de este que se une(n) específicamente por Ab3, Ab6, Abl3 o Abl4 según lo establecido por mapeo epitópico utilizando fragmentos de péptidos lineales que se superponen que se extienden por toda la longitud del polipéptido de CGRP humano natural.

La invención también se refiere a un anticuerpo anti-CGRP para el tratamiento o prevención de fotofobia que se une con el mismo epítopo de CGRP y/o compite con un anticuerpo anti-CGRP por la unión a CGRP como un anticuerpo o fragmento de anticuerpo divulgado aquí, incluso, entre otros, un anticuerpo anti-CGRP seleccionado de Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3 o Abl4, preferentemente Ab6, AblO, Abl2 o Ab3. Como se mencionó, las causas comunes de fotofobia incluyen cefaleas migrañosas, cataratas o enfermedades oftalmológicas graves, por ejemplo uveitis o abrasión corneal. Una lista más amplia de trastornos asociados con la fotofobia incluye causas relacionadas con los ojos, por ejemplo acromatopsia, aniridia, los fármacos anticolinérgicos pueden provocar fotofobia al paralizar el músculo del esfínter del iris, afaquia (ausencia del cristalino del ojo) , buftalmos (ángulo anormalmente estrecho entre la córnea y el iris) , cataratas, distrofia de conos, anomalías congénitas del ojo, conjuntivitis viral ("ojo rosa"), abrasión corneal, distrofia corneal, úlcera corneal, alteración del epitelio corneal, por ejemplo el provocado por un cuerpo extraño corneal o queratitis, ectopia del cristalino, endoftalmitis, trauma ocular causado por una enfermedad, lesión o infección, por ejemplo chalazión, episcleritis, glaucoma, queratocono o hipoplasia del nervio óptico, hidroftalmía, o glaucoma congénito, iritis, neuritis óptica, síndrome de dispersión pigmentaria, dilatación pupilar (inducida naturalmente o químicamente) , desprendimiento de retina, cicatrización de la córnea o esclera y uveitis.

Además, la fotofobia tiene causas relacionadas con el sistema nervioso o urológicas que incluyen: trastornos del espectro autista, malformación de Chiari, dislexia, encefalitis, incluso encefalomielitis miálgica también denominada síndrome de fatiga crónica, meningitis, hemorragia subaracnoidea, tumor de la fosa craneal posterior, así como otras causas, por ejemplo espondilitis anquilosante, albinismo, ariboflavinosis , benzodiazepinas (uso a largo plazo o retiro de benzodiazepinas), quimioterapia, chikungunya, cistinosis, Síndrome de Ehlers-Danlos , resaca, influenza, mononucleosis infecciosa, deficiencia de magnesio, envenenamiento por mercurio, migraña, rabia y tirosinemia tipo II, también conocida como "síndrome de Richner-Hanhart" . Adicionalmente, se conoce que la fotofobia es elevada en la depresión, el trastorno bipolar y la agorafobia.

En otra realización, la invención también se refiere a un anticuerpo anti-CGRP o fragmento de anticuerpo aislado para el tratamiento o prevención de fotofobia que comprende una o más de las CDR contenidas en las secuencias de polipéptidos VH seleccionadas de: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, 113, 123 o 133, o una variante de estas, y/o una o más de las CDR contenidas en las secuencias de polipéptidos VL seleccionadas: 1, 11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101, 111, 121 o 131, o variante de estas.

En una realización de la invención, el anticuerpo anti-CGRP humano para el tratamiento o prevención de fotofobia planteado en los dos párrafos anteriores comprende al menos 2 regiones determinantes de la complementariedad (CDR) en cada una de las regiones pesada variable y ligera variable que son idénticas a las contenidas en un anticuerpo anti-CGRP humano seleccionado de Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7 , Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3 o Abl4.

En una realización preferida, el anticuerpo anti-CGRP humano planteado anteriormente para el tratamiento o prevención de fotofobia comprende al menos 2 regiones determinantes de la complementariedad (CDR) en cada una de las regiones pesada variable y ligera variable que son idénticas a las contenidas en Ab3 o Ab6. En otra realización, todas las CDR del anticuerpo anti-CGRP humano planteado anteriormente son idénticas a las CDR contenidas en un anticuerpo anti-CGRP humano seleccionado de Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3 o Abl4. En una realización preferida de la invención, todas las CDR del anticuerpo anti-CGRP humano planteado anteriormente son idénticas a las CDR contenidas en un anticuerpo anti-CGRP humano seleccionado de Ab3, AblO, Abl2 o Ab6.

La invención además contempla que los anticuerpos anti-CGRP humanos planteados anteriormente para el tratamiento o prevención de fotofobia están glicosilados o mínimamente glicosilados , p. ej . , carecen de N-glicosilación y comprenden alguna O-glicosilación tales como 1 o más residuos de mañosa; p. ej . , que contienen una región Fe que se ha modificado para alterar la función efectora, la vida media, la proteólisis y/o la glicosilación; son humanos, humanizados, de cadena única o quiméricos; y son un anticuerpo humanizado derivado de un anticuerpo anti-CGRP humano de conejo (padre).

La invención además contempla uno o más anticuerpo anti-CGRP humano para el tratamiento o prevención de fotofobia en donde las regiones marco (FR) en la región ligera variable y la región pesada variable de dicho anticuerpo respectivamente son FR humanas que no son modificadas o que se han modificado por la sustitución de uno o más residuos FR humanos en la región de cadena pesada o ligera variable con los residuos FR correspondiente del anticuerpo de conejo padre, y en donde dichas FR humanas se derivaron de secuencias de anticuerpos humanos de cadena ligera y pesada variable que se han seleccionado de una biblioteca de secuencias de anticuerpos de lineas germinales humanas según su alto nivel de homología con las regiones de cadena ligera o pesada variable de conejo correspondientes en comparación con otras secuencias de anticuerpos de líneas germinales humanas contenidas en la biblioteca.

En una realización de la invención, el anticuerpo anti-CGRP humano o fragmento para el tratamiento o prevención de fotofobia se une específicamente a células humanas que expresan CGRP y/o a moléculas de CGRP solubles circulantes in vivo, incluso CGRP expresado por células humanas en un paciente con una enfermedad asociada con las células que expresan CGRP.

En otra realización, la enfermedad se selecciona de fotofobia o aversión a la luz asociada con uno o más de: migrañas (con o sin aura) , cefalea menstrual, migraña menstrual, migraña menopáusica u otra migraña hormonalmente relacionada, migrañas hemipléj icas , cefaleas en racimos, neuralgia migrañosa, cefaleas crónicas, cefaleas tensionales, cefaleas generales, migrañas asociadas con sofocos, hemicránea paroxismal crónica, cefaleas secundarias debido a un problema estructural subyacente en la cabeza o cuello, neuralgia craneal, cefalea sinusal (por ejemplo, asociada con sinusitis) y migrañas o cefaleas inducidas por alergias, migraña sin dolor de cabeza y migraña abdominal.

La invención contempla además anticuerpos anti-CGRP humano o fragmentos para el tratamiento o prevención de fotofobia unidos directamente o indirectamente a una etiqueta detectable o agente terapéutico.

La invención también contempla una o más secuencias de ácidos nucleicos que provocan la expresión de un anticuerpo anti-CGRP humano o fragmento de anticuerpo para el tratamiento o prevención de fotofobia como se estableció anteriormente, incluso los que comprenden, o alternativamente consisten, codones preferidos de levadura o humanos. La invención también contempla vectores (incluso vectores virales recombinantes o de plásmidos) que comprende dichas secuencias de ácidos nucleicos. La invención también contempla células huésped o células huésped recombinantes que expresan al menos uno de los anticuerpos establecidos anteriormente, incluso células de mamíferos, de levadura, de bacterias y de insectos. En una realización preferida, la célula huésped es una célula de levadura. En una realización preferida adicional, la célula de levadura es una célula de levadura diploidal. En una realización más preferida, la célula de levadura es una levadura Pichia.

La invención también contempla un método de tratamiento que comprende la administración a un paciente con una enfermedad o afección asociada con células que expresan CGRP de una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un anticuerpo anti-CGRP humano o fragmento descrito aquí para el tratamiento o prevención de fotofobia. La invención también contempla que el método de tratamiento puede comprender la administración de dos o más anticuerpos anti-CGRP o fragmentos de estos y divulgados en el presente. Si se administra más de un anticuerpo al paciente, los múltiples anticuerpos se deben administrar simultáneamente o en forma conjunta, o pueden ser escalonados en su administración. Las enfermedades que se pueden tratar se presentan en el listado no exhaustivo expuesto anteriormente y en otras partes del presente. En una realización preferida, la enfermedad asociada con fotofobia se selecciona de migraña, cefalea, dolor, diarrea, dolor por cáncer o dolor neuropático. En otra realización, el tratamiento además incluye la administración de otro agente o régimen terapéutico seleccionado de quimioterapia, radioterapia, administración de citocinas o terapia génica.

En una realización no exhaustiva de la invención, otro agente o régimen terapéutico incluye opioides, analgésicos tales como NSAID, taxol (paclitaxel) u sus derivados, compuestos de platino tales como carboplatino o cisplatino, antraciclinas tales como doxorubicina, agentes alquilantes tales como ciclofosfamida, antimetabolitos tales como 5-fluorouracilo etopósido.

La invención además contempla un método de imagenologia in vivo que detecta la presencia de células que expresan CGRP que comprende una cantidad eficaz desde el punto de vista del diagnóstico de al menos un anticuerpo anti-CGRP humano. En una realización, dicha administración además incluye la administración de un radionucleido o fluoróforo que facilita la detección del anticuerpo en los sitios de la enfermedad que expresan CGRP. En una realización adicional, los resultados de dicho método de imagenologia in vivo se utilizan para facilitar el diseño de un régimen terapéutico adecuada, incluso regímenes terapéuticos que incluyen radioterapia, quimioterapia o una combinación de estos.

La actividad anti-CGRP de los anticuerpos anti-CGRP de la presente invención, y los fragmentos de estos que tienen especificidad de unión al CGRP para el tratamiento o prevención de fotofobia, también se pueden describir por su fuerza de unión o su afinidad por CGRP. En una realización de la invención, los anticuerpos anti-CGRP de la presente invención, y los fragmentos de estos que tienen especificidad de unión al CGRP, se unen a CGRP con una constante de disociación (KD) menor o igual que 5xl0~7 M, 10"7 M, 5xl0~8 M, 10"8 M, 5xl0~9 M, 10~9 M, 5xl0~10 M, 10"10 M, 5xl0"n M, 10"11 M, 5xl0~12 M, 10~12 M, 5xl0"13 M o 10"13 M. Preferentemente, los anticuerpos anti-CGRP y los fragmentos de estos se unen a CGRP con una constante de disociación menor o igual que 10~ 11 M, 5xl0~12 M o 10~12 M. En o realización de la invención, los anticuerpos anti-CGRP de la presente invención, y los fragmentos de estos que tienen especificidad de unión al CGRP, se unen a un epítopo lineal o conformacional de CGRP.

En otra realización de la invención, la actividad anti- CGRP de los anticuerpos anti-CGRP de la presente invención, y los fragmentos de estos que tienen especificidad de unión al CGRP, se unen a CGRP con una constante de disociación menor o igual que 10"4 S"1, 5xl0"5 S"1, 10~5 S"1, 5xl0~6 S"1, 10"6 S"1, 5xl0"7 S"1 o 10~7 S'1.

En una realización adicional de la invención, la actividad anti-CGRP de los anticuerpos anti-CGRP de la presente invención, y los fragmentos de estos que tienen especificidad de unión al CGRP, presentan actividad anti-CGRP al prevenir, mejorar o reducir los síntomas, o alternativamente tratar, las enfermedades y trastornos asociados con CGRP especialmente para el tratamiento o prevención de fotofobia. En el presente se presentan ejemplos no exhaustivos de enfermedades y trastornos asociados con CGRP y afecciones asociadas con fotofobia.

Polinucleótidos que codifican polipéptidos de anticuerpos anti-CGRP Anticuerpo Abl La invención además se refiere a polinucleótidos que codifican polipéptidos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 1: CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTC TCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGG AGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT (SEC. ID. N.°: 141).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 2 : CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTC TCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGG AGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTC TTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGC TGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATC GGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCA CCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEC. ID. . ° : 142) .

En otra realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 3: CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACAC TCACCTGCACAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGC TCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGATAACACATACTACGCG AGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAA TGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGG CCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEC. ID. N.°: 143).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 4 : CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCT GCACAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGG GAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGATAACACATACTACGCGAGCTGG GCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCA GTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGG CACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCC TCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCC CCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCC GGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGC AGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGG ACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACC TGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATG ATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGG TCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGA GGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGG CTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGA AAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATC CCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCC AGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGC CTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAG CAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCAC TACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEC. ID. N.°: 144).

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 145; SEC. ID. N.°: 146 y SEC. ID. N.°: 147, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 1 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 2.

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 148; SEC. ID. N.°: 149 y SEC. ID. N.°: 150, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 3 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 4.

La invención también contempla las secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más de las secuencias de polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos descritos aqui . En una realización de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpos: el polinucleótido SEC. ID. N.°: 141 que codifica la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 1; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 142 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 2; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 143 que codifica la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 3; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 144 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 4; los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 145; SEC. ID. N.°: 146 y SEC. ID. N.°: 147) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: l o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 2; y los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 148; SEC. ID. N.°: 149 y SEC. ID. N.°: 150) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 3 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 4.

En una realización preferida de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, polinucleótidos que codifican fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Abl, los polinucleótidos que codifican el anticuerpo Abl de longitud completa comprenden, o alternativamente consisten, el polinucleótido SEC. ID. N.°: 142 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 2 y el polinucleótido SEC. ID. N.°: 144 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 4.

Otra realización de la invención contempla estos polinucleótidos incorporados en un vector de expresión para la expresión en células de mamíferos, por ejemplo CHO, NSO, HEK-293 o en sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura tales como la levadura Pichia. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris . En una realización de la invención descrita aquí (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab por digestión enzimática (p. ej . , papaína) de Abl después de la expresión de los polinucleótidos de longitud completa en un huésped adecuado. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Abl o fragmentos Fab de este mediante la expresión de polinucleótidos de Abl en células mamíferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura dxploide, por ejemplo Pichia dxploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

Anticuerpo Ab2 La invención además se refiere a polinucleótidos que codifican polipéptidos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 11: CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTC CCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGC AGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT (SEC. ID. N.°: 151).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 12: CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTC CCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGC AGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTC TTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGC TGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATC GGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCA CCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEC. ID. . ° : 152) .

En otra realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 13: GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGA GACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCA GGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTAC GCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATC TTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACAT CTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEC. ID. N.°: 153).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 14 : GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGA GACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCA GGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTAC GCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATC TTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACAT CTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTC CCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCA AGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGT GCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACC GTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCA ACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACC GTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAG GACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACG AAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGAC AAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTG CACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAG CCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACAC CCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAA GGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACT ACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCAC CGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCT CTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEC. ID. . ° : 154) .

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 155; SEC. ID. N.°: 156 y SEC. ID. N.°: 157, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 11 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 12.

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 158; SEC. ID. N.°: 159 y SEC. ID. N.°: 160, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 13 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 14.

La invención también contempla las secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más de las secuencias de polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos descritos aquí. En una realización de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpos: el polinucleótido SEC. ID. N.°: 151 que codifica la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 11; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 152 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 12; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 153 que codifica la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 13; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 154 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 14; los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 155; SEC. ID. N.°: 156 y SEC. ID. N.°: 157) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 11 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 12; y los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 158; SEC. ID. N.°: 159 y SEC. ID. N.°: 160) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 13 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 14.

En una realización preferida de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, polinucleótidos que codifican fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Ab2, los polinucleótidos que codifican el anticuerpo Ab2 de longitud completa comprenden, o alternativamente consisten, el polinucleótido SEC. ID. N.°: 152 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 12 y el polinucleótido SEC. ID. N.°: 154 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 14.

Otra realización de la invención contempla estos polinucleótidos incorporados en un vector de expresión para la expresión en células de mamíferos, por ejemplo CHO, NSO, HEK-293 o en sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura tales como la levadura Pichia. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris . En una realización de la invención descrita aquí (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab por digestión enzimática (p. ej . , papaina) de Ab2 después de la expresión de los polinucleótidos de longitud completa en un huésped adecuado. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Ab2 o fragmentos Fab de este mediante la expresión de polinucleótidos de Ab2 en células mamiferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

Anticuerpo Ab3 La invención además se refiere a polinucleótidos que codifican polipéptidos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 21: CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTC CCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGC AGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT (SEC. ID. N.°: 161).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 22: CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTC CCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGC AGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTC TTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGC TGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATC GGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCA CCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEC. ID. N .0 : 162) .

En otra realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 23: GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGA GACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCA GGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTAC GCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATC TTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACAT CTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEC. ID. N.°: 163).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 24: GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGA GACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCA GGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTAC GCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATC TTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACAT CTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTC CCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCA AGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGT GCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACC GTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCA ACACCAAGGTGGACGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACC GTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAG GACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACG AAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGAC AAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTG CACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAG CCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACAC CCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAA GGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACT ACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCAC CGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCT CTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEC. ID. N. ° : 164) .

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 165; SEC. ID. N.°: 166 y SEC. ID. N.°: 167, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 21 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 22.

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 168; SEC. ID. N.°: 169 y SEC. ID. N.°: 170, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 23 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 24.

La invención también contempla las secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más de las secuencias de polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos descritos aquí. En una realización de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpos: el polinucleótido SEC. ID. N.°: 161 que codifica la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 21; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 162 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 22; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 163 que codifica la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 23; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 164 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 24; los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 165; SEC. ID. N.°: 166 y SEC. ID. N.°: 167) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 21 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 22; y los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 168; SEC. ID. N . ° : 169 y SEC. ID. N.°: 170) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 23 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 24.

En una realización preferida de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, polinucleótidos que codifican fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Ab3, los polinucleótidos que codifican el anticuerpo Ab3 de longitud completa comprenden, o alternativamente consisten, el polinucleótido SEC. ID. N.°: 162 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 22 y el polinucleótido SEC. ID. N.°: 164 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 24.

Otra realización de la invención contempla estos polinucleótidos incorporados en un vector de expresión para la expresión en células de mamíferos, por ejemplo CHO, NSO, HEK-293 o en sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura tales como la levadura Pichia. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Píchia pastoris . En una realización de la invención descrita aquí (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab para el tratamiento o prevención de fotofobia por digestión enzimática (p. ej . , papaína) de Ab3 después de la expresión de los polinucleótidos de longitud completa en un huésped adecuado. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP para el tratamiento o prevención de fotofobia, por ejemplo Ab3 o fragmentos Fab de este mediante la expresión de polinucleótidos de Ab3 en células mamíferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris.

Anticuerpo Ab4 La invención además se refiere a polinucleótidos que codifican polipéptidos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 31: CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGCAGCCTCCCAAACAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCGTCTGGGGTC CCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGC AGTGTAACGATGCTGCCGCTTACTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT (SEC. ID. N.°: 171).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 32: CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGCAGCCTCCCAAACAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCGTCTGGGGTC CCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGC AGTGTAACGATGCTGCCGCTTACTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTC TTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGC TGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATC GGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCA CCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEC. ID. N. ° : 172) .

En otra realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 33: CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACAC TCACCTGTTCCGTCTCTGGCATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGC TCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCG AGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAA TGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGG CCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEC. ID. N.°: 173).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 34: CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACAC TCACCTGTTCCGTCTCTGGCATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGC TCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCG AGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAA TGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGG CCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTG GCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACT ACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCC TCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCA AGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCC AGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACC CTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACC CTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCC GCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAG GACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCC CCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTC TATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGA CCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGA CAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCAC AACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEC. ID. N.°: 174) .

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 175; SEC. ID. N.°: 176 y SEC. ID. N.°: 177, que corresponden a los polinucleotidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 31 o la secuencia de cadena ligera de SEC . ID. N.°: 32.

En una realización adicional de la invención, los polinucleotidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleotidos de SEC. ID. N.°: 178; SEC. ID. N.°: 179 y SEC. ID. N.°: 180, que corresponden a los polinucleotidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 33 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 34.

La invención también contempla las secuencias de polinucleotidos que incluyen una o más de las secuencias de polinucleotidos que codifican los fragmentos de anticuerpos descritos aquí. En una realización de la invención, los polinucleotidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpos: el polinucleótido SEC. ID. N.°: 171 que codifica la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 31; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 172 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 32; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 173 que codifica la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 33; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 174 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 34; los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 175; SEC. ID. N.°: 176 y SEC. ID. N.°: 177) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 31 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 32; y los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 178; SEC. ID. N.°: 179 y SEC. ID. N.°: 180) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 33 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. . ° : 34.

En una realización preferida de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, polinucleótidos que codifican fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Ab4, los polinucleótidos que codifican el anticuerpo Ab4 de longitud completa comprenden, o alternativamente consisten, el polinucleótido SEC. ID. N.°: 172 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 32 y el polinucleótido SEC. ID. N.°: 174 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 34.

Otra realización de la invención contempla estos polinucleótidos incorporados en un vector de expresión para la expresión en células de mamíferos, por ejemplo CHO, NSO, HEK-293 o en sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura tales como la levadura Pichia. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris . En una realización de la invención descrita aquí (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab por digestión enzimática (p. ej . , papaína) de Ab4 después de la expresión de los polinucleótidos de longitud completa en un huésped adecuado. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Ab4 o fragmentos Fab de este mediante la expresión de polinucleótidos de Ab4 en células mamíferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

Anticuerpo Ab5 La invención además se refiere a polinucleótidos que codifican polipéptidos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 41: CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTC CCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGC AGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT (SEC. ID. N.°: 181).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 42: CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTC CCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGC AGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTC TTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGC TGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATC GGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCA CCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEC. ID. N. ° : 182) .

En otra realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 43: GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGA GACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGTCA GGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTAC GCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATC TTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACAT CTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEC. ID. N.°: 183).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 44 : GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGA GACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGTCA GGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTAC GCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATC TTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACAT CTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTC CCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCA AGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGT GCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACC GTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCA ACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACC GTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAG GACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACG AAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGAC AAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTG CACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAG CCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACAC CCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAA GGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACT ACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCAC CGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCT CTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEC. ID. N . ° : 184) .

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 185; SEC. ID. N.°: 186 y SEC. ID. N.°: 187, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 41 o la secuencia de cadena ligera de SEC . ID. N.°: 42.

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 188; SEC. ID. N.°: 189 y SEC. ID. N.°: 190, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 43 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 44.

La invención también contempla las secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más de las secuencias de polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos descritos aquí. En una realización de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpos: el polinucleótido SEC. ID. N.°: 181 que codifica la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 41; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 182 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 42; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 183 que codifica la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 43; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 184 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 44; los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 185; SEC. ID. N.°: 186 y SEC. ID. N.°: 187) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 41 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 42; y los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 188; SEC. ID. N.°: 189 y SEC. ID. N.°: 190) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 43 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N. ° : 44.

En una realización preferida de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, polinucleótidos que codifican fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Ab5, los polinucleótidos que codifican el anticuerpo Ab5 de longitud completa comprenden, o alternativamente consisten, el polinucleótido SEC. ID. N.°: 182 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 42 y el polinucleótido SEC. ID. N.°: 184 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 44.

Otra realización de la invención contempla estos polinucleótidos incorporados en un vector de expresión para la expresión en células de mamíferos, por ejemplo CHO, NSO, HEK-293 o en sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura tales como la levadura Pichia. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris . En una realización de la invención descrita aquí (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab por digestión enzimática (p. ej . , papaína) de Ab5 después de la expresión de los polinucleótidos de longitud completa en un huésped adecuado. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Ab5 o fragmentos Fab de este mediante la expresión de polinucleótidos de Ab5 en células mamíferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

Anticuerpo Ab6 La invención además se refiere a polinucleótidos que codifican polipéptidos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 51: CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTC CCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGC AGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT (SEC. ID. N.°: 191).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 52: CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTC CCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGC AGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTC TTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGC TGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATC GGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCA CCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEC. ID. N . ° : 192) .

En otra realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 53: GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGA GACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGTCA GGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTAC GCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATC TTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACAT CTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEC. ID. N.°: 193).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 54 : GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGA GACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGTCA GGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTAC GCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATC TTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACAT CTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTC CCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCA AGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGT GCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACC GTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCA ACACCAAGGTGGACGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACC GTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAG GACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACG AAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGAC AAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTG CACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAG CCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACAC CCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAA GGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACT ACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCAC CGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCT CTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEC. ID. N. °: 194) .

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 195; SEC. ID. N.°: 196 y SEC. ID. N.°: 197, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 51 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 52.

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 198; SEC. ID. N.°: 199 y SEC. ID. N.°: 200, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 53 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 54.

La invención también contempla las secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más de las secuencias de polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos descritos aquí. En una realización de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpos: el polinucleótido SEC. ID. N.°: 191 que codifica la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 51; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 192 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 52; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 193 que codifica la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 53; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 194 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 54; los polinucleotidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 195; SEC . ID. N.°: 196 y SEC. ID. N.°: 197) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 51 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 52; y los polinucleotidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 198; SEC. ID. N.°: 199 y SEC. ID. N.°: 200) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 53 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 54.

En una realización preferida de la invención, los polinucleotidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, polinucleotidos que codifican fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Ab6, los polinucleotidos que codifican el anticuerpo Ab6 de longitud completa comprenden, o alternativamente consisten, el polinucleótido SEC. ID. N.°: 192 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 52 y el polinucleótido SEC. ID. N.°: 194 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 54.

Otra realización de la invención contempla estos polinucleótidos incorporados en un vector de expresión para la expresión en células de mamíferos, por ejemplo CHO, NSO, HEK-293 o en sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura tales como la levadura Pichia. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris . En una realización de la invención descrita aqui (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab por digestión enzimática (p. ej . , papaina) de Ab6 después de la expresión de los polinucleótidos de longitud completa en un huésped adecuado. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Ab6 o fragmentos Fab de este mediante la expresión de polinucleótidos de Ab6 en células mamiferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

Anticuerpo Ab7 La invención además se refiere a polinucleótidos que codifican polipéptidos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 61: CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAATTACAACTACCTTGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTC TCATCGCGATTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGC AGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGACTGTAGTACTGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT (SEC. ID. N.°: 201).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 62: CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAATTACAACTACCTTGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTC TCATCGCGATTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGC AGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGACTGTAGTACTGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTC TTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGC TGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATC GGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCA CCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEC. ID. N . ° : 202) .

En otra realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 63: CAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACATCCCTGA CACTCACCTGCACCGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGGTCCGCCA GGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGAGTCGTTGGTATTAATGGTCGCACATACTAC GCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGA AAATGACCAGGCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTG GGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGC (SEC. ID. N.°: 203).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 64: CAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACATCCCTGA CACTCACCTGCACCGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGGTCCGCCA GGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGAGTCGTTGGTATTAATGGTCGCACATACTAC GCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGA AAATGACCAGGCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTG GGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCC CTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGG ACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCA CACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTG CCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACA CCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTG CCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGAC ACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAG ACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAA GCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCAC CAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCC CCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCT GCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGC TTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGT GGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTG CACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEC. ID. . ° : 204) .

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 205/ SEC. ID. N.°: 206 y SEC. ID. N.°: 207, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 61 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 62.

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 208; SEC. ID. N.°: 209 y SEC. ID. N.°: 210, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 63 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 64.

La invención también contempla las secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más de las secuencias de polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos descritos aquí. En una realización de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpos: el polinucleótido SEC. ID. N.°: 201 que codifica la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 61; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 202 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 62; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 203 que codifica la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 63; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 204 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 64; los polinucleotidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 205; SEC. ID. N.°: 206 y SEC. ID. N.°: 207) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 61 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 62; y los polinucleotidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 208; SEC. ID. N.°: 209 y SEC. ID. N.°: 210) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 63 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 64.

En una realización preferida de la invención, los polinucleotidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, polinucleotidos que codifican fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Ab7, los polinucleótidos que codifican el anticuerpo Ab7 de longitud completa comprenden, o alternativamente consisten, el polinucleótido SEC. ID. N.°: 202 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 62 y el polinucleótido SEC. ID. N.°: 204 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 64.

Otra realización de la invención contempla estos polinucleótidos incorporados en un vector de expresión para la expresión en células de mamíferos, por ejemplo CHO, NSO, HEK-293 o en sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura tales como la levadura Pichia. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris . En una realización de la invención descrita aquí (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab por digestión enzimática (p. ej . , papaína) de Ab7 después de la expresión de los polinucleótidos de longitud completa en un huésped adecuado. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Ab7 o fragmentos Fab de este mediante la expresión de polinucleótidos de Ab7 en células mamíferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

Anticuerpo Ab8 La invención además se refiere a polinucleótidos que codifican polipéptidos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP . En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 71: CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTACAATTACAACTACCTTGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTC CCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGC AGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTACTGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT (SEC. ID. N.°: 211).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 72: CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTACAATTACAACTACCTTGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTC CCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGC AGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTACTGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTC TTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGC TGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATC GGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCA CCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEC. ID. N . ° : 212) .

En otra realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 73: GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGA GACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGGTCCGTCA GGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCGTTGGTATCAATGGTCGCACATACTAC GCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATC TTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACAT CTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEC. ID. N.°: 213).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 74: GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGA GACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGGTCCGTCA GGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCGTTGGTATCAATGGTCGCACATACTAC GCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATC TTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACAT CTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTC CCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCA AGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGT GCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACC GTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCA ACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACC GTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAG GACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACG AAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGAC AAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTG CACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAG CCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACAC CCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAA GGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACT ACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCAC CGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCT CTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEC. ID. . ° : 214) .

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 215; SEC. ID. N.°: 216 y SEC. ID. N.°: 217, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 71 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 72.

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 218; SEC. ID. N.°: 219 y SEC. ID. N.°: 220, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 73 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 74.

La invención también contempla las secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más de las secuencias de polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos descritos aquí. En una realización de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpos: el polinucleótido SEC. ID. N.°: 211 que codifica la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 71; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 212 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 72; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 213 que codifica la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 73; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 214 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 74; los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 215; SEC. ID. N.°: 216 y SEC. ID. N.°: 217) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 71 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 72; y los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 218; SEC. ID. N.°: 219 y SEC. ID. N.°: 220) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 73 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 74.

En una realización preferida de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, polinucleótidos que codifican fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Ab8, los polinucleótidos que codifican el anticuerpo Ab8 de longitud completa comprenden, o alternativamente consisten, el polinucleótido SEC. ID. N.°: 212 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 72 y el polinucleótido SEC. ID. N.°: 214 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 74.

Otra realización de la invención contempla estos polinucleótidos incorporados en un vector de expresión para la expresión en células de mamíferos, por ejemplo CHO, NSO, HEK-293 o en sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura tales como la levadura Pichia. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris . En una realización de la invención descrita aquí (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab por digestión enzimática (p. ej . , papaína) de Ab8 después de la expresión de los polinucleótidos de longitud completa en un huésped adecuado. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Ab8 o fragmentos Fab de este mediante la expresión de polinucleótidos de Ab8 en células mamíferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

Anticuerpo Ab9 La invención además se refiere a polinucleótidos que codifican polipéptidos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 81: CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTATAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACGTCCACTCTGGCATCTGGGGTC TCATCGCGATTCAGAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGC AGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT (SEC. ID. N.°: 221).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 82: CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTATAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACGTCCACTCTGGCATCTGGGGTC TCATCGCGATTCAGAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGC AGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTC TTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGC TGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATC GGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCA CCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEC. ID. N . ° : 222) .

En otra realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 83: CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACAC TCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAGTGGGTCCGCCAGTC TCCAGGGAGGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCG ACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAGAA TGGCCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGG CCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEC. ID. N.°: 223).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 84: CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACAC TCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAGTGGGTCCGCCAGTC TCCAGGGAGGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCG ACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAGAA TGGCCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGG CCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTG GCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACT ACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCC TCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCA AGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCC AGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACC CTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACC CTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCC GCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAG GACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCC CCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTC TATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGA CCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGA CAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCAC AACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEC. ID. N.°: En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 225; SEC. ID. N.°: 226 y SEC. ID. N.°: 227, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 81 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 82.

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 228; SEC. ID. N.°: 229 y SEC. ID. N.°: 230, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 83 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 84.

La invención también contempla las secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más de las secuencias de polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos descritos aquí. En una realización de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpos: el polinucleótido SEC. ID. N.°: 221 que codifica la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 81; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 222 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 82; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 223 que codifica la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 83; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 224 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 84; los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 225; SEC. ID. N.°: 226 y SEC. ID. N.°: 227) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 81 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 82; y los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 228; SEC. ID. N.°: 229 y SEC. ID. N.°: 230) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 83 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 84.

En una realización preferida de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, polinucleótidos que codifican fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Ab9, los polinucleótidos que codifican el anticuerpo Ab9 de longitud completa comprenden, o alternativamente consisten, el polinucleótido SEC. ID. N.°: 222 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 82 y el polinucleótido SEC. ID. N.°: 224 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 84.

Otra realización de la invención contempla estos polinucleótidos incorporados en un vector de expresión para la expresión en células de mamíferos, por ejemplo CHO, NSO, HEK-293 o en sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura tales como la levadura Pichia. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris . En una realización de la invención descrita aquí (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab por digestión enzimática (p. ej . , papaína) de Ab9 después de la expresión de los polinucleótidos de longitud completa en un huésped adecuado. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Ab9 o fragmentos Fab de este mediante la expresión de polinucleótidos de Ab9 en células mamíferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

Anticuerpo AblO La invención además se refiere a polinucleótidos que codifican polipéptidos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 91: CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTACAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTC CCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGC AGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT (SEC. ID. N.°: 231).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 92: CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTACAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTC CCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGC AGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTC TTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGC TGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATC GGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCA CCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEC. ID. N. ° : 232) .

En otra realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 93: GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGA GACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCA GGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTAC GCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATC TTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTACCAGAGGGGACAT CTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEC . ID. N.°: 233).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 94 : GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGA GACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCA GGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTAC GCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATC TTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTACCAGAGGGGACAT CTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTC CCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCA AGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGT GCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACC GTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCA ACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACC GTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAG GACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACG AAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGAC AAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTG CACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAG CCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACAC CCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAA GGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACT ACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCAC CGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCT CTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEC. ID.

N . ° : 234) .

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 235; SEC. ID. N.°: 236 y SEC. ID. N.°: 237, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 91 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 92.

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 238; SEC. ID. N.°: 239 y SEC. ID. N.°: 240, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 93 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 94.

La invención también contempla las secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más de las secuencias de polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos descritos aquí. En una realización de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpos: el polinucleotido SEC. ID. N.°: 231 que codifica la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 91; el polinucleotido SEC. ID. N.°: 232 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 92; el polinucleotido SEC. ID. N.°: 233 que codifica la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 93; el polinucleotido SEC. ID. N.°: 234 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 94; los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 235; SEC. ID. N.°: 236 y SEC. ID. N.°: 237) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 91 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 92; y los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 238; SEC. ID. N.°: 239 y SEC. ID. N.°: 240) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 93 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 94.

En una realización preferida de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, polinucleótidos que codifican fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo AblO, los polinucleótidos que codifican el anticuerpo AblO de longitud completa comprenden, o alternativamente consisten, el polinucleótido SEC. ID. N.°: 232 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 92 y el polinucleótido SEC. ID. N.°: 234 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 94.

Otra realización de la invención contempla estos polinucleótidos incorporados en un vector de expresión para la expresión en células de mamíferos, por ejemplo CHO, NSO, HEK-293 o en sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura tales como la levadura Pichia. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris . En una realización de la invención descrita aqui (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab por digestión enzimática (p. ej . , papaína) de AblO después de la expresión de los polinucleótidos de longitud completa en un huésped adecuado. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo AblO o fragmentos Fab de este mediante la expresión de polinucleótidos de AblO en células mamíferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

Anticuerpo Abll La invención además se refiere a polinucleótidos que codifican polipéptidos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 101: CAGGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTCCAGCTGTGGGAAGCACAGTCA CCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTTATTATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTC TCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGC AGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT (SEC. ID. N.°: 241).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 102: CAGGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTCCAGCTGTGGGAAGCACAGTCA CCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTTATTATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTC TCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGC AGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTC TTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGC TGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATC GGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCA CCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEC. ID. N. ° : 242) .

En otra realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 103: CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGAGGATCCCTGACAC TCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTATATGCAATGGGTCCGCCAGGC TCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTACGCG AGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAA TGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGCGACATCTGGGG CCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEC. ID. N.°: 243).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 104: CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGAGGATCCCTGACAC TCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTATATGCAATGGGTCCGCCAGGC TCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTACGCG AGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAA TGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGCGACATCTGGGG CCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTG GCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACT ACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACAC CTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCC TCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCA AGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCC AGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACC CTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACC CTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCC GCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAG GACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCA TCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCC CCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTC TATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGA CCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGA CAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCAC AACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEC. ID. N.°: 244) .

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 245; SEC. ID. N.°: 246 y SEC. ID. N.°: 247, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 101 o la secuencia de cadena ligera de SEC . ID. N.°: 102.

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 248; SEC. ID. N.°: 249 y SEC. ID. N.°: 250, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 103 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 104.

La invención también contempla las secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más de las secuencias de polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos descritos aqui . En una realización de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpos: el polinucleótido SEC. ID. N.°: 241 que codifica la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 101; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 242 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 102; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 243 que codifica la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 103; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 244 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 104; los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 245; SEC. ID. N.°: 246 y SEC. ID. N.°: 247) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 101 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 102; y los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 248; SEC. ID. N.°: 249 y SEC. ID. N.°: 250) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 103 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 104.

En una realización preferida de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, polinucleótidos que codifican fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Abll, los polinucleótidos que codifican el anticuerpo Abll de longitud completa comprenden, o alternativamente consisten, el polinucleótido SEC. ID. N.°: 242 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 102 y el polinucleótido SEC. ID. N.°: 244 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 104.

Otra realización de la invención contempla estos polinucleótidos incorporados en un vector de expresión para la expresión en células de mamíferos, por ejemplo CHO, NSO, HEK-293 o en sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura tales como la levadura Pichia. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris . En una realización de la invención descrita aquí (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab por digestión enzimática (p. ej . , papaína) de Abll después de la expresión de los polinucleótidos de longitud completa en un huésped adecuado. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Abll o fragmentos Fab de este mediante la expresión de polinucleótidos de Abll en células mamíferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

Anticuerpo Abl2 La invención además se refiere a polinucleótidos que codifican polipéptidos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 111: CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTTACTATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTC CCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGC AGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT (SEC. ID. N.°: 251).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 112: CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTTACTATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTC CCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGC AGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTC TTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGC TGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATC GGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCA CCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEC. ID. N. ° : 252) .

En otra realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 113: GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGA GACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTACATGCAATGGGTCCGTCA GGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTAC GCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATC TTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCCAGAGGGGACAT CTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEC. ID. N.°: 253).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 114 : GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGA GACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTACATGCAATGGGTCCGTCA GGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTAC GCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATC TTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCCAGAGGGGACAT CTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTC CCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCA AGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGT GCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACC GTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCA ACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACC GTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAG GACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACG AAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGAC AAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTG CACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAG CCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACAC CCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAA GGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACT ACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCAC CGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCT CTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEC. ID. N . ° : 254) .

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 255; SEC. ID. N.°: 256 y SEC. ID. N.°: 257, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 111 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 112.

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 258; SEC. ID. N.°: 259 y SEC. ID. N.°: 260, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 113 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 114.

La invención también contempla las secuencias de polinucleótidos que incluyen una o más de las secuencias de polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos descritos aqui . En una realización de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpos: el polinucleótido SEC. ID. N.°: 251 que codifica la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 111; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 252 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 112; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 253 que codifica la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 113; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 254 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 114; los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 255; SEC. ID. N.°: 256 y SEC . ID. N.°: 257) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 111 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 112; y los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 258; SEC. ID. N.°: 259 y SEC. ID. N.°: 260) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 113 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 114.

En una realización preferida de la invención, los polinucleotidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, polinucleotidos que codifican fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Abl2, los polinucleotidos que codifican el anticuerpo Abl2 de longitud completa comprenden, o alternativamente consisten, el polinucleótido SEC. ID. N.°: 252 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 112 y el polinucleótido SEC. ID. N.°: 254 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 114.

Otra realización de la invención contempla estos polinucleotidos incorporados en un vector de expresión para la expresión en células de mamíferos, por ejemplo CHO, NSO, HEK-293 o en sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura tales como la levadura Pichia. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris . En una realización de la invención descrita aqui (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab por digestión enzimática (p. ej . , papaina) de Abl2 después de la expresión de los polinucleotidos de longitud completa en un huésped adecuado. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Abl2 o fragmentos Fab de este mediante la expresión de polinucleótidos de Abl2 en células mamíferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris .

Anticuerpo Abl3 La invención además se refiere a polinucleótidos que codifican polipéptidos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera variable dé SEC. ID. N.°: 121: GCCATCGTGATGACCCAGACTCCATCTTCCAAGTCTGTCCCTGTGGGAGACACAG TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAGTCTTTATAATAACAACGCCTTGGCCTGGTTTCA GCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCGCCTGATCTATGATGCATCCAAACTGGCATCTGGG GTCCCATCGCGGTTCAGTGGCGGTGGGTCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGTGGCG TGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGGAGGCTACAGAAGTGATAGTGTTGATGG TGTTGCTTTCGCCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT {SEC. ID. N.°: 261).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera de SEC . ID. N.°: 122: GCCATCGTGATGACCCAGACTCCATCTTCCAAGTCTGTCCCTGTGGGAGACACAG TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAGTCTTTATAATAACAACGCCTTGGCCTGGTTTCA GCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCGCCTGATCTATGATGCATCCAAACTGGCATCTGGG GTCCCATCGCGGTTCAGTGGCGGTGGGTCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGTGGCG TGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGGAGGCTACAGAAGTGATAGTGTTGATGG TGTTGCTTTCGCCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTC TTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGC TGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATC GGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCA CCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEC. ID. N . ° : 262) .

En otra realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 123: CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCCAGCCTGAGGGATCCCTGACAC TCACCTGCACAGCCTCTGGATTCGACTTCAGTAGCAATGCAATGTGGTGGGTCCGCCAGGC TCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGATGCATTTACAATGGTGATGGCAGCACATACTAC GCGAGCTGGGTGAATGGCCGATTCTCCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGC AACTGAATAGTCTGACAGTCGCGGACACGGCCACGTATTATTGTGCGAGAGATCTTGACTT GTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEC. ID. N.°: 263).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 124: CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCCAGCCTGAGGGATCCCTGACAC TCACCTGCACAGCCTCTGGATTCGACTTCAGTAGCAATGCAATGTGGTGGGTCCGCCAGGC TCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGATGCATTTACAATGGTGATGGCAGCACATACTAC GCGAGCTGGGTGAATGGCCGATTCTCCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGC AACTGAATAGTCTGACAGTCGCGGACACGGCCACGTATTATTGTGCGAGAGATCTTGACTT GTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTC CCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCA AGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGT GCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACC GTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCA ACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACC GTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAG GACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACG AAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGAC AAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTG CACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAG CCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACAC CCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAA GGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACT ACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCAC CGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCT CTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEC. ID. N. ° : 264) .

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 265; SEC. ID. N.°: 266 y SEC. ID. N.°: 267, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 121 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 122.

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 268; SEC. ID. N.°: 269 y SEC. ID. N.°: 270, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 123 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 124.

La invención también contempla las secuencias de polinucleotidos que incluyen una o más de las secuencias de polinucleotidos que codifican los fragmentos de anticuerpos descritos aquí. En una realización de la invención, los polinucleotidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes polinucleotidos que codifican fragmentos de anticuerpos: el polinucleótido SEC. ID. N.°: 261 que codifica la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 121; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 262 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 122; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 263 que codifica la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 123; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 264 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 124; los polinucleotidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 265; SEC. ID. N.°: 266 y SEC. ID. N.°: 267) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 121 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 122; y los polinucleotidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 268; SEC. ID. N.°: 269 y SEC. ID. N.°: 270) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 123 o la secuencia de cadena pesada de SEC.

ID. N.°: 124.

En una realización preferida de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, polinucleótidos que codifican fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Abl3, los polinucleótidos que codifican el anticuerpo Abl3 de longitud completa comprenden, o alternativamente consisten, el polinucleótido SEC. ID. N.°: 262 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 122 y el polinucleótido SEC. ID. N.°: 264 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 124.

Otra realización de la invención contempla estos polinucleótidos incorporados en un vector de expresión para la expresión en células de mamíferos, por ejemplo CHO, NSO, HEK-293 o en sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura tales como la levadura Pichia. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris . En una realización de la invención descrita aquí (a continuación) , se pueden producir fragmentos Fab por digestión enzimática (p. ej . , papaína) de Abl3 después de la expresión de los polinucleótidos de longitud completa en un huésped adecuado. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Abl3 o fragmentos Fab de este mediante la expresión de polinucleótidos de Abl3 en células mamiferas, por ejemplo células CHO, NSO o HEK 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris.

Anticuerpo Abl4 La invención además se refiere a polinucleótidos que codifican polipéptidos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP. En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 131: CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTACAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTC CCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGC AGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT (SEC. ID. N.°: 271).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 132: CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCA CCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTACAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCA GAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTC CCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGC AGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTG TTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTC TTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGC TGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATC GGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCA CCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEC. ID. N. ° : 272) .

En otra realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 133: GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGA ' GACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCA GGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTAC GCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATC TTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTACCAGAGGGGACAT CTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEC. ID. N.°: 273).

En una realización de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, la siguiente secuencia de polinucleótidos que codifica la secuencia de polipéptidos de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 134: GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGA GACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCA GGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTAC GCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATC TTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTACCAGAGGGGACAT CTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTC CCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCA AGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGT GCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACC GTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCA ACACCAAGGTGGACGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACC GTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAG GACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACG AAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGAC AAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTG CACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAG CCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACAC CCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAA GGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACT ACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCAC CGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCT CTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEC. ID. N.°: 274) .

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC . ID. N.°: 275; SEC. ID. N.°: 276 y SEC. ID. N.°: 277, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 131 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 132.

En una realización adicional de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, una o más de las secuencias de polinucleótidos de SEC. ID. N.°: 278; SEC. ID. N.°: 279 y SEC. ID. N.°: 280, que corresponden a los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 133 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 134.

La invención también contempla las secuencias de polinucleotidos que incluyen una o más de las secuencias de polinucleotidos que codifican los fragmentos de anticuerpos descritos aquí. En una realización de la invención, los polinucleótidos que codifican los fragmentos de anticuerpos que tienen especificidad de unión al CGRP comprenden, o alternativamente consisten, uno, dos, tres o más, incluso todos los siguientes polinucleótidos que codifican fragmentos de anticuerpos: el polinucleótido SEC. ID. N.°: 271 que codifica la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 131/ el polinucleótido SEC. ID. N.°: 272 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 132; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 273 que codifica la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 133; el polinucleótido SEC. ID. N.°: 274 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 134; los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 275; SEC. ID. N.°: 276 y SEC. ID. N.°: 277) de la secuencia variable de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 131 o la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 132; y los polinucleótidos que codifican las regiones determinantes de la complementariedad (SEC. ID. N.°: 278; SEC. ID. N.°: 279 y SEC. ID. N.°: 280) de la secuencia variable de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 133 o la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. N.°: 134.

En una realización preferida de la invención, los polinucleótidos de la invención comprenden, o alternativamente consisten, polinucleótidos que codifican fragmentos Fab (unión fragmento-antigeno) que tienen especificidad de unión al CGRP. Con respecto al anticuerpo Abl4, los polinucleótidos que codifican el anticuerpo Abl4 de longitud completa comprenden, o alternativamente consisten, el polinucleótido SEC. ID. N.°: 272 que codifica la secuencia de cadena ligera de SEC. ID. N.°: 132 y el polinucleótido SEC. ID. N.°: 274 que codifica la secuencia de cadena pesada de SEC. ID. . ° : 134.

Otra realización de la invención contempla estos polinucleótidos incorporados en un vector de expresión para la expresión en células de mamíferos, por ejemplo CHO, NSO, HEK-293 o en sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura tales como la levadura Pichia. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris . En una realización de la invención descrita aquí .(a continuación), se pueden producir fragmentos Fab por digestión enzimática (p. ej . , papaina) de Abl4 después de la expresión de los polinucleótidos de longitud completa en un huésped adecuado. En otra realización de la invención, se pueden producir anticuerpos anti-CGRP, por ejemplo Abl4 o fragmentos Fab de este mediante la expresión de polinucleótidos de Abl4 en células mamiferas, por ejemplo células CHO, NSO o HE 293, sistemas de hongos, de insecto o microbianos, por ejemplo células de levadura (por ejemplo levadura diploide, por ejemplo Pichia diploide) y otras cepas de levadura. Las especies Pichia adecuadas incluyen, entre otros, Pichia pastoris.

En una realización, la invención se refiere a un polinucleótido aislado que comprende un polinucleótido que codifica una secuencia de aminoácidos anticuerpo anti-CGRP VH seleccionada de SEC. ID. N.°: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, 113, 123 o 133, o que codifica une variante de esta en donde al menos un residuo marco (residuo FR) se ha sustituido con un aminoácido presente en la posición correspondiente en un polipéptido VH de anticuerpo anti-CGRP de conejo o una sustitución de aminoácidos conservadora.

En otra realización, la invención se refiere a un polinucleótido aislado que comprende la secuencia de polinucleótidos que codifica una secuencia de aminoácidos de anticuerpo anti-CGRP VL de 1, 11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101, 111, 121 o 131, o que codifica una variante de esta en donde al menos un residuo marco (residuo FR) se ha sustituido con un aminoácido presente en la posición correspondiente en un polipéptido VL de anticuerpo anti-CGRP de conejo o una sustitución de aminoácidos conservadora.

En otra realización, la invención se refiere a uno o más polinucleótidos heterólogos que comprenden una secuencia que codifica los polipéptidos contenidos en SEC. ID. N.°: 1 y SEC. ID. N.°: 3; SEC. ID. N.°: 11 y SEC. ID. N.°: 13; SEC. ID. N.°: 21 y SEC. ID. N.°: 23; SEC. ID. N.°: 31 y SEC. ID. N.°: 33; SEC. ID. N.°: 41 y SEC. ID. N.°: 43; SEC. ID. N.°: 51 y SEC. ID. N.°: 53, SEC. ID. N.°: 61 y SEC. ID. N.°: 63; SEC. ID. N.°: 71 y SEC. ID. N.°: 73; SEC. ID. N.°: 81 y SEC. ID. N.°: 83; SEC. ID. N.°: 91 y SEC. ID. N.°: 93; SEC. ID. N.°: 101 y SEC. ID. N.°: 103; SEC. ID. N.°: 111 y SEC. ID. N.°: 113; SEC. ID. N.°: 121 y SEC. ID. N.°: 123; o SEC. ID. N.°: 131 y SEC. ID. N.°: 133.

En otra realización, la invención se refiere a un polinucleótido aislado que expresa un polipéptido que contiene al menos un polipéptido de CDR derivado de un anticuerpo anti-CGRP en donde dicho polipéptido expresado se une solo específicamente CGRP o se une específicamente a CGRP cuando se expresa en asociación con otra secuencia de polinucleótidos que expresa un polipéptido que contiene al menos un polipéptido de CDR derivado de un anticuerpo anti-CGRP en donde dichas CDR se seleccionan de las contenidas en los polipéptidos VL o VH de SEC. ID. N.°: 1, 3, 11, 13, 21, 23, 31, 33, 41, 43, 51, 53, 61, 63, 71, 73, 81, 83, 91, 93, 101, 103, 111, 113, 121, 123, 131 o SEC. ID. N.°: 133.

También se contemplan células huésped y vectores que comprenden dichos polinucleótidos .

La invención además contempla vectores que comprenden las secuencias de polinucleótidos que codifican las secuencias de polipéptidos de cadena ligera y pesada variables, asi como las regiones determinantes de la complementariedad (CDR o regiones hipervariables ) , como se establece en el presente, asi como células huésped que comprenden dichas secuencias de vectores. En una realización de la invención, la célula huésped es una célula de levadura. En otra realización de la invención, la célula huésped de levadura pertenece al género Pichia.

Detección de células B y aislamiento En una realización, la presente invención contempla la preparación y el aislamiento de una población clonal de células B especificas de antigeno que se pueden utilizar para aislar al menos una célula especifica de antigeno de CGRP, que se puede utilizar para producir un anticuerpo monoclonal contra CGRP, que es especifico para un antigeno de CGRP deseado, o una secuencia de ácidos nucleicos correspondiente a dicho anticuerpo. Los métodos para preparar y aislar dicha población clonal de células B especificas de antigeno aparecen, por ejemplo, en la publicación de patente estadounidense N.° US 2007/0269868 de Carvalho-Jensen y col., cuya divulgación se incorpora por referencia al presente en su totalidad. Los métodos para preparar y aislar dicha población clonal de células B especificas de antigeno también aparecen aquí en los ejemplos. Los métodos para "enriquecer" una población celular por tamaño o densidad son conocidos en la técnica. Véase, p. ej . , la patente estadounidense 5.627.052. Estas etapas se pueden utilizar además del enriquecimiento de la población celular mediante la especificidad de antigeno.

Métodos paira, humanizar anticuerpos En otra realización, la presente invención contempla métodos para humanizar las cadenas ligera y pesada de los anticuerpos. Los métodos para humanizar las cadenas ligera y pesada de los anticuerpos que se pueden aplicar a los anticuerpos anti-CGRP aparecen, por ejemplo, en la publicación de la solicitud de patente estadounidense N.° US 2009/0022659 de Olson y col. y en la patente estadounidense N.° 7.935.340 de Garcia-Martinez y col ., cuyas divulgaciones se incorporan al presente por referencia en su totalidad.

Métodos para producir anticuerpos y fragmentos de estos En otra realización, la presente invención, contempla métodos para producir anticuerpos anti-CGRP y fragmentos de estos. Los métodos para producir anticuerpos anti-CGRP y fragmentos de estos secretados de cepas poliploides, preferentemente diploides o tetraploides de levadura competente de apareamiento aparecen, por ejemplo, en la publicación de la solicitud de patente estadounidense N.° US 2009/0022659 de Olson y col. y en la patente estadounidense N.° 7.935.340 de Garcia-Martinez y col., cuyas divulgaciones se incorporan al presente por referencia en su totalidad.

Otros métodos para producir anticuerpos son conocidos por los entendidos en la técnica. Por ejemplo, los métodos para producir anticuerpos quiméricos son conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, la patente estadounidense N.° 4.816.567 de Cabilly y col.; Morrison y col., P.N.A.S. USA, 81:8651-55 (1984); Neuberger, M.S. y col., Nature, 314:268-270 (1985); Boulianne, G.L. y col., Nature, 312:643-46 (1984), cuyas divulgaciones se incorporan al presente por referencia en su totalidad) .

Asimismo, otros métodos para producir anticuerpos humanizados son conocidos en la técnica (véanse, por ejemplo, las patentes estadounidenses N.° 5.530.101, 5.585.089, 5.693.762 y 6.180.370 de Queen y col.; las patentes estadounidenses N.° 5.225.539 y 6.548.640 de Winter; las patentes estadounidenses N.° 6.054.297, 6.407.213 y 6.639.055 de Cárter y col; la patente estadounidense N.° 6.632.927 de Adair; Jones, P.T. y col., Nature, 321:522-525 (1986); Reichmann, L. y col., Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen, M, y col., Science, 239:1534-36 (1988), cuyas divulgaciones se incorporan al presente por referencia en su totalidad) .

También se pueden producir polipéptidos de anticuerpos de la invención con especificidad de unión a CGRP mediante la construcción, utilizando técnicas convencionales conocidas para los entendidos en la técnica, de un vector de expresión que contiene un operón y una secuencia de ADN codificante de una cadena pesada de anticuerpo en la cual la secuencia de ADN codificante de las CDR requeridas para la especificidad de anticuerpo se deriva de una fuente celular no humana, preferentemente una fuente de células B de conejo, mientras que la secuencia de ADN codificante del resto e la cadena del anticuerpo se deriva de una fuente celular humana.

Se produce un segundo vector de expresión utilizando los mismos medios convencionales conocidos para los entendidos en la técnica, dicho vector de expresión contiene un operón y una secuencia de ADN codificante de una cadena ligera de anticuerpo en la cual la secuencia de ADN codificante de las CDR requeridas para la especificidad de anticuerpo se deriva de una fuente celular no humana, preferentemente una fuente de células B de conejo, mientras que la secuencia de ADN codificante del resto de la cadena del anticuerpo se deriva de una fuente celular humana.

Se transfectaron los vectores de expresión a una célula huésped a través de las técnicas convencionales conocidas por los entendidos en la técnica para producir una célula huésped transfectada, se cultivó dicha célula huésped transfectada mediante las técnicas convencionales conocidas por los entendidos en la técnica para producir dichos polipéptidos de anticuerpos .

Se puede cotransfectar la célula huésped con los dos vectores de expresión descritos anteriormente, el primer vector de expresión que contiene ADN codificante de un operón y un polipéptido derivado de cadena ligera y el segundo vector que contiene ADN codificante de un operón y un polipéptido derivado de cadena pesada. Los dos vectores contienen diferentes marcadores de selección, pero preferentemente logran una expresión sustancialmente igual de los polipéptidos de cadena pesada y ligera. Alternativamente, se puede utilizar un único vector, el vector que incluye ADN codificante de los polipéptidos de cadena pesada y ligera. Las secuencias codificantes para las cadenas pesada y ligera pueden comprender ADNc, ADN genómico o ambos.

Las células huésped utilizadas para expresar los polipéptidos de anticuerpos pueden ser una célula bacteriana como E. coli o una célula eucariota como P. pastoris. En una realización de la invención, se puede utilizar una célula mamifera de un tipo bien definido para este fin, como una célula de mieloma, la linea celular de ovario de hámster chino (CHO) , una linea celular NSO o una linea celular HEK293.

Los métodos generales a través de los cuales se pueden construir los vectores, los métodos de transfección requeridos para producir la célula huésped y los métodos de cultivo necesarios para producir los polipéptidos de anticuerpos a partir de dichas células huésped incluyen las técnicas convencionales. Aunque preferentemente la linea celular utilizada para producir el anticuerpo es una linea celular mamifera, se puede utilizar alternativamente cualquier otra linea celular adecuada, como una linea celular bacteriana como una cepa bacteriana derivada de E. coli o una linea celular de levadura.

Asimismo, una vez producidos, se pueden purificar los polipéptidos de anticuerpos de acuerdo con los procedimientos convencionales de la técnica, como por ejemplo la filtración de flujo cruzado, la precipitación con sulfato amónico, la cromatografía en columna de afinidad y similares.

Los polipéptidos de anticuerpos descritos en el presente también se pueden utilizar para el diseño y la síntesis de miméticos de péptidos o no peptídicos que serían útiles para las mismas aplicaciones terapéuticas que los polipéptidos de anticuerpos de la invención. Véase, por ejemplo, Saragobi y col., Science, 253:792-795 (1991), cuyo contenido se incorpora al presente por referencia en su totalidad.

Ensayos de detección La invención también incluye ensayos de detección diseñados para ayudar a identificar enfermedades y trastornos asociados con CGRP, especialmente afecciones asociadas con la fotofobia como la migraña, otras afecciones relacionadas con la cefalea y el dolor, la depresión, el trastorno bipolar, la agorafobia y otros, en pacientes que presentan síntomas de fotofobia o de una enfermedad o trastorno asociado a CGRP.

En una realización de la invención, se utilizan los anticuerpos anti-CGRP de la invención, o los fragmentos de unión a CGRP de estos, para detectar la presencia de CGRP en una muestra biológica obtenida de un paciente que presenta síntomas de una enfermedad o trastorno asociado con CGRP, especialmente uno asociado con la fotofobia. La presencia de CGRP, o de niveles elevados de este en comparación con los niveles de CGRP previos a la dosis en una muestra biológica semejante, puede ser beneficiosa para diagnosticar una enfermedad o trastorno asociado con CGRP.

Otra realización de la invención proporciona un ensayo de detección o diagnóstico para ayudar a diagnosticar enfermedades o trastornos asociados con CGRP y la fotofobia en pacientes que presentan síntomas de una enfermedad o trastorno asociado a CGRP identificado aquí, que comprende evaluar el nivel de expresión de CGRP en una muestra biológica de dicho paciente utilizando un anticuerpo anti-CGRP modificado postraduccionalmente y un fragmento de unión de este. El anticuerpo anti-CGRP o el fragmento de unión de este se puede modificar postraduccionalmente de modo que incluya una fracción detectable como se estableció anteriormente en la divulgación.

El nivel de CGRP en la muestra biológica se determina utilizando un anticuerpo anti-CGRP modificado o un fragmento de unión de este como se estableció aquí y comparando el nivel de CGRP en la muestra biológica contra un nivel estándar de CGRP (p. ej . , el nivel en las muestras biológicas normales) . Los médicos entendidos comprenderán que puede existir algo de variabilidad entre las muestras biológicas normales y lo tendrán en cuenta al evaluar los resultados. En una realización de la invención, se pueden utilizar los anticuerpos anti-CGRP de la invención para correlacionar los niveles de expresión de CGRP con una etapa particular del desarrollo del cáncer. Los entendidos en la técnica podrán medir el CGRP en varios sujetos para establecer intervalos de expresión de CGRP que correspondan a las etapas clínicamente definidas del desarrollo del cáncer. Estos intervalos permitirán a los entendidos medir el CGRP en un sujeto con diagnóstico de cáncer y correlacionar los niveles en cada sujeto con un intervalo que corresponda a una etapa de dicho cáncer. Los entendidos en la técnica comprenderán que a través de la medición de CGRP en el paciente a intervalos diferentes, se puede determinar el avance del cáncer.

El ensayo mencionado anteriormente también puede ser útil para monitorizar una enfermedad o trastorno, en donde el nivel de CGRP obtenido en una muestra biológica de un paciente que se cree que tiene una enfermedad o trastorno asociado con CGRP, especialmente uno asociado con la fotofobia, se compara con el nivel de CGRP en muestras biológicas anteriores del mismo paciente para determinar si el nivel de CGRP en dicho paciente ha cambiado, por ejemplo, con un régimen de tratamiento.

La invención también se refiere a un método de imagenología in vivo que detecta la presencia de células que expresan CGRP que comprende la administración de una cantidad eficaz desde el punto de vista del diagnóstico de una composición de diagnóstico. Dicha imagenología in vivo es útil para la detección o la obtención de imágenes de tumores o metástasis que expresan CGRP y puede ser útil como parte de un régimen de planificación para el diseño de un protocolo de tratamiento del cáncer eficaz. El protocolo de tratamiento puede incluir, por ejemplo, uno o más de radiación, quimioterapia, terapia de citocinas, terapia génica y terapia de anticuerpos, asi como un anticuerpo anti-CGRP o fragmento de este.

La presente invención proporciona además un kit para detectar la unión de un anticuerpo anti-CGRP de la invención a CGRP. En particular, se puede utilizar el kit para detectar la presencia de un CGRP, específicamente reactivo con un anticuerpo anti-CGRP de la invención o un fragmento inmunorreactivo de este. El kit también puede incluir un anticuerpo unido a un sustrato, un anticuerpo secundario reactivo con el antígeno y un reactivo para detectar una reacción del anticuerpo secundario con el antígeno. Dicho kit puede ser un kit ELISA y puede comprender el sustrato, el anticuerpo primario y secundario cuando corresponda y cualquier otro reactivo necesario, como fracciones detectables, sustratos de enzimas y reactivos de color, por ejemplo los descritos aquí. El kit de diagnóstico también puede presentarse en la forma de un kit de inmunoensayo. El kit de diagnóstico también puede presentarse en la forma de un kit quimioluminiscente (Meso · Scale Discovery, Gaithersburg, MD) . El kit de diagnóstico también puede ser un kit de detección basado en lantánidos ( PerkinElmer, San José, CA) .

El médico entendido comprenderá que una muestra biológica incluye, entre otros, sueros, plasma, orine, saliva, mucosa, liquido pleural, liquido sinovial y liquido cefalorraquídeo .

Métodos para mejorar o reducir los síntomas, o tratar o prevenir, enfermedades y trastornos asociados con CGRP En otra realización de la invención, los anticuerpos anti-CGRP descritos aquí, o los fragmentos de estos, son útiles para mejorar o reducir los síntomas, o tratar o prevenir, enfermedades y trastornos asociados con CGRP, especialmente para el tratamiento o la prevención de la fotofobia. En una realización preferida, se demostrará que los anticuerpos anti-CGRP o los fragmentos de anticuerpos son eficaces (bloquearán los efectos secundarios adversos asociados con el exceso de CGRP circulante, incluido el comportamiento aversivo a la luz) en el modelo de roedores divulgado en el ejemplo 8.

Los anticuerpos anti-CGRP descritos aquí, o los fragmentos de estos, así como sus combinaciones, también se pueden administrar en una cantidad terapéuticamente eficaz a pacientes que necesiten tratamiento de enfermedades y trastornos asociados con CGRP para el tratamiento o la prevención de la fotofobia en forma de una composición farmacéutica como se describe en mayor detalle a continuación.

En otra realización de la invención, los anticuerpos anti-CGRP descritos aquí, o los fragmentos de estos, son útiles para mejorar o reducir los síntomas, o tratar o prevenir migrañas (con o sin aura) , pérdida de peso, cáncer o tumores, angiogénesis asociada con el crecimiento del cáncer o tumoral, angiogénesis asociada con la supervivencia al cáncer o al tumor, dolor, migraña hemipléjica, cefaleas en racimos, neuralgia migrañosa, cefaleas crónicas, cefaleas tensionales, cefaleas generales, migraña sin dolor de cabeza, migraña abdominal, sofocos, hemicránea paroxismal crónica, cefaleas secundarias debido a un problema estructural subyacente en la cabeza o cuello, neuralgia craneal, cefalea sinusal (por ejemplo, asociada con sinusitis) y migrañas o cefaleas inducidas por alergias.

En otra realización de la invención, los anticuerpos anti-CGRP descritos aquí, o los fragmentos de estos, y/o con un agente secundario, son útiles para mejorar o reducir los síntomas, o tratar o prevenir la fotofobia asociada con el siguiente listado no exhaustivo de enfermedades y trastornos: dolor neurogénico, neuropático o nocicéptico. El dolor neuropático puede incluir, entre otros, neuralgia del trigémino, neuralgia posherpética, dolor del miembro fantasma, fibromialgia, dolor menstrual, ovarialgia, distrofia simpática refleja y dolor neurogénico. En otras realizaciones preferidas, los anticuerpos anti-CGRP descritos aquí, o los fragmentos de estos, y/o con un agente secundario, son útiles para mejorar o reducir los síntomas, o tratar o prevenir la fotofobia asociada con el dolor por osteoartritis o artritis reumatoide, dolor en la zona lumbar, neuropatía diabética, ciática y otros dolores neuropáticos.

En otra realización de la invención, los anticuerpos anti-CGRP descritos aquí, o los fragmentos de estos, y/o con un agente secundario, son útiles para mejorar o reducir los síntomas, o tratar o prevenir la fotofobia asociada con el siguiente listado no exhaustivo de enfermedades y trastornos: dolor visceral o más específicamente asociado con el reflujo gastroesofágico, dispepsia, síndrome del intestino irritable, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, ileítis, colitis ulcerosa, cólico renal, dismenorrea, cistitis, período menstrual, trabajo de parto, menopausia, prostatitis o pancreatitis.

Administración En una realización de la invención, se administran los anticuerpos o fragmentos anti-CGRP descritos en el presente, o los anticuerpos anti-CGRP-R o fragmentos de estos, así como las combinaciones de dichos anticuerpos o fragmentos de anticuerpos, para el tratamiento o la prevención de la fotofobia, a un sujeto a una concentración de entre aproximadamente 0,1 y 100,0 mg/kg de peso corporal del sujeto receptor. En una realización preferida de la invención, se administran los anticuerpos anti-CGRP descritos aquí, o los fragmentos de unión a CGRP de estos, asi como las combinaciones de dichos anticuerpos o fragmentos de anticuerpos, a un sujeto a una concentración de entre aproximadamente 0,4 mg/kg de peso corporal del sujeto receptor. En una realización preferida de la invención, se administran los anticuerpos anti-CGRP descritos aquí, o los fragmentos de unión a CGRP de estos, asi como las combinaciones de dichos anticuerpos o fragmentos de anticuerpos, a un sujeto receptor con una frecuencia de una vez cada veintiséis semanas o menos, como una vez cada dieciséis semanas o menos, una vez cada ocho semanas o menos, una vez cada cuatro semanas o menos, una vez cada dos semanas o menos, una vez por semana o menos o una vez al día o menos.

Los fragmentos Fab para el tratamiento o la prevención de la fotofobia se pueden administrar cada dos semanas o menos, todas las semanas o menos, una vez al día o menos, varias veces al día y/o cada pocas horas. En una realización de la invención, un paciente recibe fragmentos Fab de 0,1 mg/kg a 40 mg/kg por día, en dosis divididas de 1 a 6 veces al día o en una forma de liberación progresiva eficaz para obtener los resultados deseados.

Se debe entender que la concentración del anticuerpo o de Fab administrado a un paciente determinado para el tratamiento o la prevención de la fotofobia puede ser mayor o menor que las concentraciones de administración ejemplares mencionadas anteriormente en los párrafos

[0566] y

[0567] .

El entendido en la técnica podrá determinar la dosificación eficaz y la frecuencia de administración para el tratamiento o la prevención de la fotofobia a través de la experimentación de rutina, por ejemplo guiada por la presente divulgación y los principios que figuran en Goodman, L. S., Gilman, A., Brunton, L. L., Lazo, J. S. y Parker, K. L. (2006) . "The pharmacological basis of therapeutics" de Goodman y Gilman. Nueva York: McGraw-Hill; Howland, R. D., Mycek, M. J., Harvey, R. A. , Champe, P. C. y Mycek, . J. (2006) . Pharmacolog . illustrated reviews de Lippincott. Filadelfia: Lippincott Williams y Wilkins; y Golan, D. E. (2008) . Principies of pharmacology: the pathophysiologic basis of drug therapy. Filadelfia, Pa., [etc.]: Lippincott Williams y Wilkins.

En otra realización de la invención, se administran los anticuerpos anti-CGRP descritos aquí, o los fragmentos de unión a CGRP de estos, así como las combinaciones de dichos anticuerpos o fragmentos de anticuerpos, para el tratamiento o la prevención de la fotofobia a un sujeto en una formulación farmacéutica.

Una "composición farmacéutica" se refiere a una composición química o biológica adecuada para la administración a un mamífero. Dichas composiciones se pueden formular específicamente para administración a través de una o más de diversas vías, incluso, entre otras, bucal, epicutánea, epidural, inhalación, intraarterial, intracardíaca, intracerebroventricular, intradérmica, intramuscular, intranasal, intraocular, intraperitoneal, intraespinal, intratecal, intravenosa, oral, parenteral, rectal a través de un enema o un supositorio, subcutánea, subdérmica, sublingual, transdérmica y transmucosa. Además, la administración se puede producir por medio de inyección, polvo, líquido, gel, gotas o por otros medios de administración.

En una realización de la invención, los anticuerpos anti-CGRP descritos aquí, o los fragmentos de unión a CGRP de estos, así como las combinaciones de dichos anticuerpos o fragmentos de anticuerpos, para el tratamiento o la prevención de la fotofobia se pueden administrar opcionalmente en combinación con uno o más agentes activos.

Dichos agentes activos incluyen analgésicos, agentes antihistaminicos, antipiréticos, antiinflamatorios, antibióticos, antivirales y anticitocinas . Los agentes activos incluyen agonistas, antagonistas y moduladores de TNF-OÍ, IL-2, IL-4, IL-ß, IL-10, IL-12, IL-13, IL-18, IFN-a, IFN-?, BAFF, CXCL13, IP-10, VEGF, EPO, EGF, HRG, factor de crecimiento de hepatocito (HGF) , hepcidina, incluido anticuerpos reactivos contra cualquiera de los anteriores y anticuerpos reactivos contra cualquiera de sus receptores. Los agentes activos también incluyen, entre otros, ácidos 2-arilpropiónicos, aceclofenaco, acemetacina, ácido acetilsalicilico (aspirina) , alclofenac, alminoprofeno, amoxiprin, ampirona, ácidos arilalcanoicos, azapropazona, benorilato/benorilato, benoxaprofeno, bromfenac, carprofen, celecoxib, salicilato de colina y magnesio, clofezona, inhibidores de COX-2, dexibuprofeno, dexketoprofeno, diclofenaco, diflunisal, droxicam, etenzamida, etodolac, etoricoxib, faislamina, ácidos fenámicos, fenbufen, fenoprofeno, ácido flufenámico, flunoxaprofen, flurbiprofeno, ibuprofeno, ibuproxam, indometacina, indoprofeno, quebuzona, ketoprofeno, ketorolaco, lornoxicam, loxoprofeno, lumiracoxib, salicilato de magnesio, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, meloxicam, metamizol, salicilato de metilo, mofebutazona, nabumetona, naproxeno, ácidos N- arilantranílieos, factor de crecimiento nervioso (NGF) , oxametacin, oxaprozin, oxicams, oxifenbutazona, parecoxib, fenazona, fenilbutazona, fenilbutazona, piroxicam, pirprofeno, profenos, proglumetacina, derivados de pirazolidina, rofecoxib, salicilato salicilico, salicilamida, salicilatos, sustancia P, sulfinpirazona, sulindac, suprofeno, tenoxicam, ácido tiaprofénico, ácido tolfenámico, tolmetin y valdecoxib.

Una antihistamina puede ser cualquier compuesto que se oponga a la acción de la histamina o a su liberación de las células (p. ej . , mastocitos) . Las antihistaminas incluyen, entre otros, acrivastina, astemizol, azatadina, azelastina, betatastina, bromfeniramina, buclizina, cetirizina, análogos de la cetirizina, clorfeniramina, clemastina, CS 560, ciproheptadina, desloratadina, dexclorfeniramina, ebastina, epinastina, fexofenadina, HSR 609, hidroxizina, levocabastina, loratadina, metescopolamine, mizolastina, norastemizol, fenindamina, prometazina, pirilamina, terfenadina y tranilast.

Los antibióticos incluyen, entre otros, amikacina, aminoglucósidos, amoxicilina, ampicilina, ansamicinas, arsfenamina, azitromicina, azlocilina, aztreonam, bacitracina, carbacefem, carbapenemas, carbenicilina, cefaclor, cefadroxilo, cefalexina, cefalotina, cefalotina, cefamandol, cefazolina, cefdinir, cefditoren, cefepima, cefixima, cefoperazona, cefotaxima, cefoxitina, cefpodoxima, cefprozil, ceftazidima, ceftibuten, ceftizoxima, ceftobiprol, ceftriaxona, cefuroxima, cefalosporinas, cloramfenicol, cilastatina, ciprofloxacina, claritromicina, clindamicina, cloxacilina, colistina, cotrimoxazol, dalfopristina, demeclociclina, dicloxacilina, diritromicina, doripenem, doxiciclina, enoxacina, ertapenem, eritromicina, etambutol, flucloxacilina, fosfomicina, furazolidona, ácido fusídico, gatifloxacina, geldanamicina, gentamicina, glucopéptidos, herbimicina, imipenem, isoniazida, kanamicina, levofloxacino, lincomicina, linezolid, lomefloxacina, loracarbef, macrólidos, mafenida, meropenem, meticilina, metronidazol, mezlocilina, minociclina, monobactamas, moxifloxacina, mupirocina, nafcilina, neomicina, netilmicina, nitrofuranto na, norfloxacina, ofloxacina, oxacilina, oxitetraciclina, paromomicina, penicilina, penicilinas, piperacilina, platensimicina, polimixina b, polipéptidos, prontosil, pirazinamida, quinolonas, quinupristina, rifampicina, rifampicina, roxitromicina, espectinomicina, estreptomicina, sulfacetamida, sulfametizol, sulfanilimida, sulfasalazina, sulfisoxazol, sulfonamidas , teicoplanina, telitromicina, tetraciclina, tetraciclinas, ticarcilina, tinidazol, tobramicina, trimetoprim, trimetoprim- sulfametoxazol , troleandomicina , trovafloxacino y vancomicina .

Los agentes activos también incluyen aldosterona, beclometasona, betametasona, corticosteroides, cortisol, acetato de cortisona, acetato desoxicorticosterona, dexametasona, acetato de fludrocortisona, glucocorticoides, hidrocortisona, metilprednisolona, prednisolona, prednisona, esteroides y triamcinolona. Se considera cualquier combinación adecuada de estos agentes activos.

En las realizaciones preferidas, se pueden administrar los anticuerpos y los fragmentos de anticuerpos en un régimen terapéutico que incluye los compuestos utilizados típicamente para tratar las migrañas, incluido las migrañas asociadas con la fotofobia. Los ejemplos incluyen analgésicos como los NSAID. Los ejemplos incluyen aquellos mencionados anteriormente como el ibuprofeno, naproxeno, sumatriptán, paracetamol/acetaminofeno, solos o en combinación con metoclopramida y cafeína.

Los triptanos como el sumatriptán se utilizan comúnmente así como las ergotaminas como ergotamina. Además, se pueden utilizar corticosteroides.

Además, los antimiméticos pueden ayudar a aliviar los síntomas de náuseas y ayudan a prevenir los vómitos, lo que puede disminuir la eficacia de los analgésicos orales.

Además, algunos antieméticos, como la metoclopramida, son procinéticos y ayudan al vaciado gástrico, el cual se suele ver afectado durante los episodios de migraña. Tres preparaciones combinadas de antieméticos y analgésicos utilizados para las migrañas incluyen (aspirina con metoclopramida) , (paracetamol/codeína para la analgesia, con buclizina como el antiemético) y paracetamol/metoclopramida.

Un "excipiente farmacéutico" o un "excipiente farmacéuticamente aceptable" es un portador, generalmente un liquido, en el cual se formula un agente terapéutico activo. En una realización de la invención, el agente terapéutico activo es un anticuerpo humanizado descrito aquí o uno o más fragmentos de este. El excipiente generalmente no proporciona ninguna actividad farmacológica a la formulación, aunque puede proporcionarle estabilidad química y/o biológica y características de liberación. Se pueden encontrar formulaciones ejemplares, por ejemplo, en Remington' s Pharmaceutical Sciences, 19° Ed., Grennaro, A., Ed., 1995 que se incorpora por referencia.

Según se emplea aquí, un "portador farmacéuticamente aceptable" o "excipiente" incluye todos los disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y retardantes de la absorción que son fisiológicamente compatibles. En una realización, el portador es adecuado para la administración parenteral. Alternativamente, el portador puede ser adecuado para la administración intravenosa, intraperitoneal, intramuscular o sublingual. Los portadores farmacéuticamente aceptables incluyen dispersiones o soluciones acuosas estériles y polvos estériles para la preparación extemporánea de dispersiones o soluciones inyectables estériles. El uso de dichos medios y agentes para las sustancias farmacéuticamente activas es conocido en la técnica. Excepto en la medida en que cualquier medio o agente convencional sea incompatible con el compuesto activo, se contempla su uso en las composiciones farmacéuticas de la invención. También se pueden incorporar compuestos activos complementarios a las composiciones .

Las composiciones farmacéuticas típicamente deben ser estériles y estables en condiciones de fabricación y almacenamiento. La invención contempla que la composición farmacéutica esté presente en forma liofilizada. La composición se puede formular como una solución, una microemulsión, un liposoma u otra estructura ordenada adecuada para altas concentraciones del fármaco. El vehículo puede ser un disolvente o medio de dispersión que contenga, por ejemplo, agua, etanol, poliol (p. ej . glicerina, propilenglicol y polietilenglicol líquido) y mezclas adecuadas de estos. La invención contempla además la inclusión de un estabilizante en la composición farmacéutica. La fluidez adecuada se puede mantener, por ejemplo, manteniendo el tamaño de las partículas necesario en caso de una dispersión y mediante el uso de surfactantes .

En muchos casos, será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes como manitol, sorbitol o cloruro de sodio en la composición. La absorción prolongada de las composiciones inyectables puede ocasionarse mediante la inclusión de un agente que retarde la absorción, por ejemplo, sales de monoestearato y gelatina en la composición. Además, el polipéptido alcalino se puede formular en una formulación de liberación con el tiempo, por ejemplo, en una composición que incluye un polímero de liberación lenta. Los compuestos activos se pueden preparar con portadores que protegerán al compuesto de la liberación rápida, por ejemplo, una formulación de liberación controlada, inclusive implantes y sistemas de administración microencapsulados . Se pueden usar polímeros biodegradables y biocompatibles, como el acetato de etilenvinilo, los polianhídridos, el ácido poliglicólico, el colágeno, los poliortoésteres, el ácido poliláctico y los copolímeros poliglicólicos polilácticos (PLG) . Muchos métodos para la preparación de estas formulaciones son conocidos generalmente por los entendidos en la técnica.

Para cada una de las realizaciones mencionadas, se pueden administrar los compuestos a través de diversas formas de dosificación. Se contempla cualquier forma de dosificación biológicamente aceptable conocida por los entendidos en la técnica y las combinaciones de estas. Los ejemplos de dichas formas de dosificación incluyen, entre otros, polvos reconstituibles, elixires, líquidos, soluciones, suspensiones, emulsiones, polvos, gránulos, partículas, micropartículas, gránulos dispersables, cápsulas amiláceas, inhalantes, inhalantes en aerosol, parches, inhalantes de partículas, implantes, implantes de depósito, inyectables (incluso subcutáneos, intramusculares, intravenosos e intradérmicos) , infusiones y combinaciones de estos.

La descripción anterior de las diversas realizaciones ilustradas de la invención no pretende ser exhaustiva ni limitar la invención a las formas específicas divulgadas. Aunque se han descrito realizaciones específicas de la invención y ejemplos de estas con el fin de ilustrar la invención, es posible realizar diversas modificaciones equivalentes dentro del alcance de la invención, como reconocerán los entendidos en la técnica. Los principios de la invención proporcionados aquí, se pueden aplicar para otros fines, aparte de los ejemplos descritos anteriormente.

Se pueden realizar estos y otros cambios a la invención a la luz de la descripción detallada anterior. En general, en las siguientes reivindicaciones, los términos utilizados no se deben interpretar como limitantes de la invención a las realizaciones específicas divulgadas en la especificación y en las reivindicaciones. Por lo tanto, la invención no se verá limitada por la divulgación, sino que, en lugar de eso, el alcance de la invención será determinado enteramente por las siguientes reivindicaciones.

La invención se puede llevar a la práctica de maneras diferentes que las descritas específicamente en la descripción y en los ejemplos anteriores. Es posible realizar numerosas modificaciones y variaciones a la invención a la luz de los principios anteriores y, por lo tanto, se encuentran dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas .

Determinados principios relacionados con los métodos para obtener una población clonal de células B específicas de antígeno se divulgaron en la solicitud de patente provisional estadounidense N.° 60/801.412, presentada el 19 de mayo de 2006, cuya divulgación se incorpora por referencia al presente en su totalidad.

Determinados principios relacionados con la humanización de los anticuerpos monoclonales derivados de conejo y las modificaciones de secuencia preferidas para mantener la afinidad de unión al antigeno se divulgaron en la solicitud internacional N.° PCT/US2008/064421, correspondiente a la publicación internacional N.° WO/2008/144757, titulada "Novel Rabbit Antibody Humanization Methods and Humanized Rabbit Antibodies", presentada el 21 de mayo de 2008, cuya divulgación se incorpora por referencia al presente en su totalidad.

Determinados principios relacionados con la producción de anticuerpos o fragmentos de estos utilizando levadura competente de apareamiento y los métodos correspondientes se divulgaron en la solicitud de patente estadounidense N.° 11/429,053, presentada el 8 de mayo de 2006 (publicación de la solicitud de patente estadounidense N.° US2006/0270045) , cuya divulgación se incorpora por referencia al presente en su totalidad.

Determinados polinucleótidos y polipéptidos de anticuerpos anti-CGRP se divulgan en el listado de secuencias que acompaña esta solicitud de patente y las divulgaciones de dicho listado de secuencias se incorporan por referencia al presente en su totalidad.

La divulgación completa de cada documento citado (incluso patentes, solicitudes de patentes, artículos, resúmenes, manuales, libros u otras divulgaciones) en los antecedentes de la invención, la descripción detallada y los ejemplos se incorpora por referencia al presente en su totalidad.

Los siguientes ejemplos se presentan para proporcionarles a los entendidos en la técnica una divulgación y descripción completa de cómo preparar y utilizar la invención y no pretenden limitar el alcance de lo que se considera como la invención. Se ha hecho lo posible por garantizar la precisión con respecto a las cifras utilizadas (p. ej . cantidades, temperaturas, concentraciones, etc. ) pero puede haber algunos errores experimentales y desviaciones. A menos que se indique lo contrario, las partes son partes en peso, el peso molecular es el peso molecular promedio, la temperatura está en grados centígrados y la presión es atmosférica o cercana a la atmosférica.

EJEMPLOS Ejemplo 1 Preparación de anticuerpos que se unen a CGRP Utilizando el protocolo de selección de anticuerpos descrito en el presente, se puede generar un amplio panel de anticuerpos .

Estrategia de inmunización Se inmunizaron conejos con CGRPa humano (American Peptides, Sunnyvale CA and Bachem, Torrance CA) . La inmunización consistió en una primera inyección subcutánea (se) de 100 µ? de antigeno mezclado con 100 iq de KLH en adyuvante completo de Freund (CFA) (Sigma) seguido de dos refuerzos, dos semanas después cada uno con 50 µg de antigeno mezclado con 50 µg en adyuvante incompleto de Freund (IFA) (Sigma) . Se tomaron muestras de sangre de los animales el día 55 y se determinaron los títulos séricos mediante ELISA (reconocimiento de antígenos) y mediante inhibición del aumento de cAMP activado por CGRP en SK-N-MC.

Evaluación de títulos para selección de anticuerpos Para identificar y caracterizar los anticuerpos que se unen a CGRP humano, se evaluaron soluciones que contenían los anticuerpos mediante ELISA. En resumen, se recubrieron placas recubiertas con neutravidina (Thermo Scientific) con CGRPa humano biotinilado N terminal (50 µ? por pocilio, 1 ]ig/mL) diluido en tampón ELISA (0,5 % de gelatina de piel de pescado en PBS pH 7,4) durante aproximadamente 1 h a temperatura ambiente o alternativamente durante la noche a 4 °C. Se bloquearon adicionalmente las placas con tampón ELISA durante una hora a temperatura ambiente y se lavaron utilizando tampón de lavado (PBS, 0,05 % tween 20). Se diluyeron serialmente las muestras de suero evaluadas utilizando tampón ELISA. Se traspasaron cincuenta microlitros de las muestras de suero diluidas a los pocilios y se incubaron a temperatura ambiente durante una hora. Después de esta incubación, se lavó la placa con tampón de lavado. Para el desarrollo, se añadió una Fe especifica anti-conejo-HRP (dilución 1:5000 en tampón ELISA) en los pocilios y se incubaron durante 45 min a temperatura ambiente. Después de una etapa de lavado 3x con solución de lavado, se desarrolló la placa con sustrato TMB durante dos minutos a temperatura ambiente y se desactivó la reacción con HC1 0,5 M. Se leyó la absorbancia del pocilio a 450 nm.

Determinación del titulo de las muestras de suero por actividad funcional (inhibición de los niveles de cAMP activado por CGRP) Para identificar y caracterizar los anticuerpos con actividad funcional, se realizó un ensayo de inhibición del aumento activado por CGRP de los niveles de cAMP utilizando electroquimioluminiscencia (Meso Scale Discovery, MSD) . En resumen, se diluyeron serialmente las preparaciones de anticuerpos que se iban a analizar en tampón de ensayo MSD (Hepes, MgC12, pH 7,3, 1 mg/mL bloqueador A, Meso Scale Discovery) en una placa de poliestireno de fondo redondo de 96 pocilios (Costar) . A esta placa, se añadió CGRPa humano (10 ng/mL de concentración final) diluido en tampón de ensayo MSD y se incubó durante una hora a 37 °C. Se utilizaron controles adecuados según lo sugerido por el fabricante del kit de ensayo. Se separaron células de neuroepitelioma humano (SK-N-MC, ATCC) utilizando una solución EDTA (5 mM en PBS) y se lavaron con medio de cultivo (MEM, 10 % FBS, antibióticos) mediante centrifugación. Se ajustó la cantidad de células a 2 millones de células por mL en tampón de ensayo y se añadió IB X (3-isobutil-lmetilxantina, Sigma) hasta una concentración final de 0,2 mM justo antes de cargar las células a una placa de ensayo de cAMP. Después de que se incubó la solución de CGRP humano y anticuerpo durante una hora, se traspasaron 20 microlitros de solución que contenia células a la placa de ensayo de cAMP. Todas las muestras se analizaron por duplicado con los controles adecuados. Se añadieron diez microlitros de células a los pocilios y se incubó la placa durante 30 minutos con agitación a temperatura ambiente. Mientras las células eran incubadas con la solución de CGRP, se preparó la solución de parada mediante una solución 1:200 de cAMP marcado con TAG (MSD) en tampón de lisis (MSD) . Para detener la incubación de las células-CGRP, se añadieron 20 microlitros de solución de parada a las células y se incubó la placa durante una hora con agitación a temperatura ambiente. Se diluyó el tampón de lectura (MSD) cuatro veces con agua y se añadieron 100 microlitros a todos los pocilios de la placa. Se leyó la placa utilizando un Sector Imager 2400 (MSD) y se utilizó el software Prism para el ajuste de datos y la determinación de la IC50.

Recolección de tejidos Una vez establecidos los títulos aceptables, se sacrificaron el o los conejos. Se recolectaron el bazo, los ganglios linfáticos y sangre completa y se procesaron de la siguiente manera: Se procesaron el bazo y los ganglios linfáticos en una única suspensión de células disociando el tejido y pasándolo a través de una malla de alambre estéril de 70 µp? (Fisher) con el émbolo de una jeringa de 20 ce. Se recolectaron las células en PBS. Se lavaron las células dos veces mediante centrifugación. Después del último lavado, se determinó la densidad celular por azul de tripano. Se centrifugaron las células a 1500 rpm durante 10 minutos; se descartó el sobrenadante. Se suspendieron nuevamente las células en el volumen apropiado de dimetilsulfóxido al 10 % (DMSO, Sigma) en FBS (Hyclone) y se dispensó a 1 mL/vial. Se almacenaron los viales a -70 °C en una cámara de congelación lenta durante 24 horas y se almacenaron en nitrógeno líquido.

Se aislaron células mononucleares de sangre periférica (PBMC) mediante la mezcla de la sangre completa con partes iguales del medio con bajo nivel de glucosa descrito anteriormente sin FBS. Se dispusieron en capas cuidadosamente 35 mL de la mezcla de sangre completa sobre 8 mL de Lympholyte Rabbit (Cedarlane) en un tubo cónico de 45 mL (Corning) y se centrifugó 30 minutos a 2500 rpm a temperatura ambiente sin freno. Después de la centrifugación, se retiraron cuidadosamente las capas de PBMC utilizando una pipeta Pasteur de vidrio (VWR) combinada y se colocaron en un vial de 50 mL limpio. Se lavaron las células dos veces con el medio modificado descrito anteriormente por centrifugación a 1500 rpm durante 10 minutos a temperatura ambiente y se determinó la densidad celular mediante tinción con azul de tripano. Después del último lavado, se suspendieron nuevamente las células en un volumen adecuado de medio DMSO al 10 %/FBS y se congelaron como se describió anteriormente.

Selección de células B, enriquecimiento y condiciones de cultivo El dia de la creación del cultivo de células B, se descongelaron los viales con PBMC, esplenocitos o ganglios linfáticos para utilizarlos. Se retiraron los viales del tanque de LN2 y se colocaron en un baño de agua a 37°°C hasta que se descongelaron. Se traspasó el contenido de los viales a un tubo cónico de centrifuga de 15 mL (Corning) y se añadieron lentamente 10 mL del medio RPMI modificado descrito anteriormente al tubo. Se centrifugaron las células durante 5 minutos a 2K RPM y se descartó el sobrenadante. Se suspendieron nuevamente las células en 10 mL de medio nuevo. Se determinó la densidad y la viabilidad celular por azul de tripano . a) Se empleó el siguiente protocolo para Abl y Abl3 Se premezclaron las células con el CGRPa humano biotinilado del siguiente modo. Se lavaron las células nuevamente y se volvieron a suspender a 1E07 células/80 µ? de medio. Se añadió CGRPa humano biotinilado a la suspensión de células a la concentración final de 5 ug/mL y se incubó durante 30 minutos a 4 °C. Se retiró el CGRPa humano biotinilado no unido realizando dos lavados de 10 mL con PBF [PBS sin Ca/Mg (Hyclone) , 2 mM ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), 0,5 % albúmina de suero bovino (BSA) (Sigma-sin biotina) ] . Después del segundo lavado, se suspendieron nuevamente las células a 1E07 células/80 µ? PBF y se añadieron 20 µ? de perlas de estreptavidina MACS® (Miltenyi Biotech, Auburn CA) por 10E7 células a la suspensión de células. Se incubaron las células y las perlas a 4°°C durante 15 minutos y se lavaron una vez con 2 mL de PBF por 10E7 células. b) Se empleó el siguiente protocolo para Ab4, Ab7, Ab9 y Abll: Se precargó CGRPa humano biotinilado a las perlas de estreptavidina del siguiente modo. Se mezclaron setenta y cinco microlitros de perlas de estreptavidina (Milteny Biotec, Auburn CA) con huCGRP biotinilado en N terminal (10 ug/mL concentración final) y 300 µ? de PBF. Se incubó esta mezcla a 4°°C durante 30 min y se retiró el CGRP humano biotinilado no unido utilizando una columna de separación MACS® (Miltenyi Biotec) , con un enjuague con 1 mL para eliminar el material no unido. Se retiró el material, se utilizó para suspender nuevamente las células desde encima en 100 ul por 1E7 células, se incubó la mezcla a 4°°C durante 30 min y se lavó una vez con 10 mL de PBF.

Para los protocolos a) y b) se aplica lo siguiente: Después del lavado, se suspendieron nuevamente las células en 500 µ? de PBF y se reservaron. Se preenjuagó una columna MS MACS® (Miltenyi Biotec, Auburn CA) con 500 mL de PBF sobre un soporte magnético (Milteni) . Se aplicó la suspensión de células a la columna a través de un prefiltro y se recogió la fracción no unida. Se lavó la columna con 2,5 mL de tampón PBF. Se retiró la columna del soporte magnético y se colocó en un tubo Eppendorf de 1,5 mL estéril, limpio. Se añadió 1 mL de tampón PBF a la parte superior de la columna y se recogieron las células seleccionadas positivas. Se determinó el rendimiento y la viabilidad de la fracción de células positivas mediante tinción con azul de tripano. La selección positiva produjo un promedio del 1 % de la concentración de células de partida.

Se estableció una detección de células piloto para proporcionar información sobre los niveles de siembra para el cultivo. Se sembraron las placas a 10, 25, 50, 100 o 200 células B enriquecidas/pocilio. Además, cada pocilio contenia 50K células/pocilio de células EL-4.B5 irradiadas (5.000 Rad) y un nivel adecuado de sobrenadante de células T de conejo activado (véase la publicación de la solicitud de patente estadounidense N.° 20070269868) (oscila entre 1-5 % según la preparación) en medio RPMI modificado con altos niveles de glucosa a un volumen final de 250 µ1>/????11?. Se incubaron los cultivos durante 5 a 7 dias a 37° °C en C02 al 4 % .

Detección de cultivo de células B mediante reconocimiento de antigenos (ELISA) Para identificar los pocilios productores de anticuerpos anti-CGRPoc humano, se utilizó el mismo protocolo que el descrito para la determinación del titulo de las muestras de suero por reconocimiento de antigenos (ELISA) con los siguientes cambios. En resumen, se recubrieron placas recubiertas con neutravidina con una mezcla de CGRPa humano biotinilado en N y C terminal (50 L por pocilio, 1 ug/mL de cada uno) . Se evaluaron muestras de sobrenadante de células B (50 µ?) sin dilución previa.

Identificación de actividad funcional en los sobrenadantes de células B utilizando producción de cA P activada por CGRP Para determinar la actividad funcional presente en los sobrenadantes de células B, se utilizó un procedimiento similar al descrito para la determinación del titulo funcional de las muestras de suero con las siguientes modificaciones. En resumen, se utilizó sobrenadante de células B (20 i ) en lugar de las muestras de suero policlonal diluido.

Aislamiento de células B especificas de antígeno Se retiraron las placas que contenían los pocilios de interés de los -70 °C y se recuperaron las células de cada pocilio utilizando cinco lavados de 200 microlitros de medio (10 % RPMI completo, 55 µ? BME) por pocilio. Se sedimentaron las células recuperadas mediante centrifugación y se retiró cuidadosamente el sobrenadante. Se suspendieron nuevamente las células sedimentadas en 100 µ? de medio. Para identificar las células que expresan anticuerpos, se recubrieron perlas magnéticas recubiertas con estreptavidina (M280 dynabeads, Invitrogen) con una combinación de CGRPa humano biotinilado N y C terminal. Se optimizaron los lotes de CGRPa humano biotinilado individuales mediante dilución seriada. Se mezclaron cien microlitros que contenían aproximadamente 4xl0E7 perlas recubiertas con las células resuspendidas . A esta mezcla, se añadieron 15 microlitros de IgG de cabra anti-conejo H&L-FITC (Jackson Immunoresearch) diluidos 1:100 en medio.

Se retiraron veinte microlitros de suspensión de células/perlas/H&L anti-conejo y se colocaron gotas de 5 microlitros en un portaobjetos de vidrio de un pocilio tratado previamente con Sigmacote (Sigma) hasta un total de 35 a 40 gotas por portaobjetos. Se utilizó una barrera impermeable de aceite de parafina (JT Baker) para sumergir las gotas y se incubó el portaobjetos durante 90 minutos a 37°°C en una incubadora con C02 al 4 % en la oscuridad.

Se pueden identificar las células B especificas que producen el anticuerpo a través del anillo fluorescente producido alrededor por la secreción del anticuerpo, reconocimiento del antigeno biotinilado asociado a las perlas y la detección posterior mediante el reactivo de detección de IgG fluorescente. Una vez identificada una célula de interés, se recuperó mediante un micromanipulador (Eppendorf) . La única célula que se sintetizó y exportó al anticuerpo se traspasó a un tubo de microcentrífuga, se congeló utilizando hielo seco y se almacenó a -70 °C.

Amplificación y determinación de secuencia de las secuencias de anticuerpos de las células B especificas de antigeno Se recuperaron secuencias de anticuerpos utilizando un método basado en RT-PCR combinado a partir de una única célula B aislada. Se diseñaron enzimas de restricción que contenían cebadores para hibridar en las regiones conservadas y constantes de los genes de inmunoglobulina diana (pesada y ligera) , como secuencias de inmunoglobulina de conejo y se utilizó una recuperación de PCR anidada de dos etapas para amplificar la secuencia del anticuerpo. Se analizaron los amplicones de cada pocilio en cuanto a la recuperación y la integridad del tamaño. Se digirieron los fragmentos resultantes con AluI para obtener la huella genética de la clonalidad de la secuencia. Las secuencias idénticas mostraron un patrón de fragmentación común en su análisis electroforético . Se digirieron los fragmentos de amplicones de cadena pesada y ligera originales utilizando los sitios de las enzimas de restricción presentes en los cebadores de PCR y se clonaron en un vector de expresión. Se amplificó y se purificó el vector que contenía los fragmentos de ADN subclonados. Se verificó la secuencia de las cadenas pesada y ligera subclonadas antes de la expresión.

Producción recombinante de anticuerpo monoclonal de especificidad antigénica y/o propiedades funcionales deseadas Para determinar la especificidad antigénica y las propiedades funcionales de los anticuerpos recuperados de las células B especificas, se transíectaron los vectores que activan la expresión de las secuencias de cadena pesada y ligera pareadas deseadas en células HEK-293.

Reconocimiento de antigeno de los anticuerpos recombinantes mediante ELISA Para la caracterización de los anticuerpos recombinantes expresados por su capacidad de unirse a CGRP humano, se analizaron soluciones que contenían anticuerpos utilizando ELISA. Todas las incubaciones se llevaron a cabo a temperatura ambiente. En resumen, se recubrieron placas Immulon IV (Thermo Scientific) con una solución que contenía CGRPa (1 ut/mL en PBS) durante 2 horas. Se lavaron tres veces las placas recubiertas con CGRPa en tampón de lavado (PBS, T een-20 0, 05 %) . Se bloquearon las placas utilizando una solución de bloqueo (PBS, 0,5 % de gelatina de piel de pescado, 0,05 % Tween-20) durante aproximadamente una hora. Se retiró la solución de bloqueo y se incubaron las placas con una serie de diluciones del anticuerpo que se estaba analizando durante aproximadamente una hora. Al final de esta incubación, se lavó la placa tres veces con tampón de lavado y se incubó adicionalmente con una solución que contenía anticuerpos secundaria (IgG de cabra anti-humano del fragmento F(ab')2 affinipure conjugado con peroxidasa, específico del fragmento Fe ( Jackson Immunoresearch) ) durante aproximadamente 45 minutos y se lavó tres veces. En ese momento, una solución de sustrato (sustrato de peroxidasa TMB, BioFX) y se incubó durante 3 a 5 minutos en la oscuridad. Se detuvo la reacción mediante el añadido de una solución que contenia HC1 (0,5 M) y se leyó la placa a 450 nm en un lector de placas.

Resultados: las figuras 15-18 demuestran que los anticuerpos anti-CGRP Abl-Abl4 se unen y reconocen a CGRP .

Caracterización funcional de anticuerpos recombinantes mediante la modulación de los niveles de cAMP intracelulares activados por CGRP y la reactividad cruzada a las ratas Para la caracterización de los anticuerpos recombinantes expresados por su ensayo de la capacidad de inhibir los niveles celulares aumentados de cAMP mediados por CGRPa, se utilizó un kit de ensayo de electroquimioluminiscencia (Meso Scale Discovery, MSD) . En resumen, se diluyeron serialmente las preparaciones de anticuerpos que se iban a analizar en tampón de ensayo MSD (Hepes, MgC12, pH 7,3, 1 mg/mL bloqueador A, Meso Scale Discovery) en una placa de poliestireno de fondo redondo de 96 pocilios (Costar) . A esta placa, se añadió CGRPa humano (25 ng/mL de concentración final) diluido en tampón de ensayo MSD y se incubó durante una hora a 37 °C. Se utilizaron controles adecuados según lo sugerido por el fabricante del kit de ensayo. Se separaron células de neuroepitelioma humano (SK-N-MC, ATCC) utilizando una solución EDTA (5 mM) y se lavaron con medio de cultivo (MEM, 10 % FBS, antibióticos) mediante centrifugación. Se ajustó la cantidad de células a 2 millones de células por mL en tampón de ensayo y se añadió IBMX (3-isobutil-lmetilxantina, 50 mM, Sigma) hasta una concentración final de 0,2 mM justo antes de cargar las células a una placa de ensayo de cAMP. Después de que se incubó la solución de CGRP humano y anticuerpo durante una hora, se traspasaron 20 microlitros de solución que contenia células a la placa de ensayo de cAMP. Todas las muestras se analizaron por duplicado con los controles adecuados. Se añadieron diez microlitros de células a los pocilios y se incubó la placa durante 30 minutos con agitación. Mientras las células eran incubadas con la solución de CGRP, se preparó la solución de parada mediante una solución 1:200 de cAMP marcado con TAG (MSD) en tampón de lisis (MSD) . Para detener la incubación de las células-CGRP, se añadieron 20 microlitros de solución de parada a las células y se incubó la placa durante una hora con agitación. Se diluyó el tampón de lectura (MSD) cuatro veces con agua y se añadieron 100 microlitros a todos los pocilios de la placa. Se leyó la placa utilizando un Sector Imager 2400 (MSD) y se utilizó el software Prism para el ajuste de datos y la determinación de la IC50.

Para evaluar la capacidad de los anticuerpos recom inantes de antagonizar al CGRP humano, se realizó un ensayo similar con la sustitución del agonista de CGRP (CGRPP 10 ng/mL de concentración final) . La evaluación de los anticuerpos recombinantes para reconocer e inhibir la generación de cAMP mediada por CGRP de rata se realizó utilizando CGRP de rata (5 ng/mL de concentración final) y la linea celular L6 de rata (ATCC) .

Resultados: las figuras 19-37 demuestran que los anticuerpos anti-CGRP Abl-Abl4 inhiben a CGRPa, CGRP y los niveles celulares aumentados de cAMP mediados por CGRP de rata .

Ejemplo 2: producción enzimática de fragmentos Fab Se realizaron digestiones con papaina utilizando papaina inmovilizada (Thermo/Pierce) según las instrucciones del fabricante. En resumen, se incubaron los anticuerpos purificados en un tampón que contenia cisteina/HCl con papaina inmovilizada a 37°°C con oscilación suave. Se monitorizó la digestión tomando una alícuota y se analizó utilizando SDS-PAGE para la escisión de la cadena pesada. Para detener la reacción, se centrifugó la papaina inmovilizada y se lavó utilizando Tris 50 mM, pH 7,5 y se filtró. Se retiraron el anticuerpo de longitud completa no digerido y los fragmentos Fe utilizando una columna MabSelectSure (GE) .

Ejemplo 3 Expresión celular de la levadura Construcción de vectores de expresión de Pichia pastoris para la cadena pesada y ligera.

Se sintetizaron comercialmente los fragmentos de cadena ligera y pesada humanizados y se subclonaron en un vector de expresión de pGAP. El vector de expresión de pGAP utiliza el promotor GAP para activar la expresión de la secuencia guia de la albúmina de suero humano (HSA) y de la cadena de inmunoglobulina para la exportación. Además, este vector contiene elementos comunes, como un origen de replicación bacteriano y una copia del gen de resistencia a la kanamicina que confiere resistencia al antibiótico G418 en P. pastoris. G418 proporciona un medio de selección para las cepas que contienen el vector de expresión deseado integrado en su genoma.

Transformación de vectores de expresión en las cepas huésped metí y lys3 haploides de Pichia pastoris Se realizaron todos los métodos utilizados para la transformación de las cepas de P. pastoris haploide y la manipulación del ciclo sexual de P. pastoris según se describe en los protocolos de Pichia (Methods in Molecular Biology Higgings, DR. y Cregg, JM, Eds . 1998. Humana Press, Totowa, NJ) . Antes de la transformación, se linealizó cada vector dentro de las secuencias del promotor GAP para dirigir la integración del vector en el locus del promotor GAP del genoma de P. pastoris . Se transíectaron las cepas haploides utilizando electroporación y se seleccionaron los transformantes exitosos sobre placas de agar G418 YPDS (extracto de levadura, dextrosa peptona con sorbitol) . Se determinaron los números de copias de los genes de cadena pesada y ligera para las cepas haploides, mediante análisis de transferencia Southern. Se aparearon las cepas haploides y se seleccionaron por su capacidad para crecer en ausencia de los marcadores de aminoácidos (es decir, Lys y Met) . Los clones diploides resultantes se sometieron a un análisis de transferencia Southern final para confirmar los números de copias de los genes de cadena pesada y ligera. Se seleccionó un clon que expresaba el anticuerpo de interés utilizando biosensores de proteina A de interferometria de biocapa para monitorizar la expresión (Octet, ForteBio) .

Ejemplo 4 Expresión de Ab3, Ab6 y Abl4 en Pichia pastoris Se realizaron tres cepas de Pichia para la expresión de un anticuerpo de cadena completa. Para todas las cepas que expresan anticuerpos de longitud completa, se crearon cepas haploides y se aparearon posteriormente. Una cepa haploide expresó la secuencia de cadena ligera de longitud completa y otra cepa haploide expresó la secuencia de cadena pesada de longitud completa. Se utilizó cada cepa diploide para generar un banco de células de investigación y se utilizó para la expresión en un biorreactor.

Primero, se amplió un inoculo utilizando el banco de células de investigación que emplea medio compuesto de los siguientes nutrientes (% p/v) : extracto de levadura 3 %, dextrosa anhidra 4 %, YNB 1,34 %, biotina 0,004 % y 100 mM de fosfato de potasio. Para generar el inoculo para los fermentadores, se amplió el banco de células durante aproximadamente 24 horas en una incubadora con agitación a 30 °C y 300 rpm. Se añadió un 10 % de inoculo a recipientes de volumen de trabajo de 2,5 L Labfors que contenían 1 L de medio de cultivo estéril. El medio de cultivo contenía los siguientes nutrientes: sulfato de potasio 18,2 g/L, fosfato de amonio monobásico 36,4 g/L, fosfato de potasio dibásico 12,8 g/L, sulfato de magnesio heptahidratado 3,72 g/L, citrato de sodio dihidratado 10 g/L, glicerol 40 g/L, extracto de levadura 30 g/L, trazas metálicas PTMl 4,35 mL/L y antiespumante 204 1,67 mL/L. La solución de trazas metálicas PTMl contenía los siguientes componentes: sulfato de cobre pentahidratado 6 g/L, yoduro de sodio 0,08 g/L, sulfato de manganeso hidratado 3 g/L, molibdato de sodio dihiratado 0,2 g/L, ácido bórico 0,02 g/L, cloruro de cobalto 0,5 g/L, cloruro de zinc 20 g/L, sulfato ferroso heptahidratado 65 g/L, biotina 0,2 g/L y ácido sulfúrico 5 mL/L.

Se establecieron los parámetros de control de los procesos del biorreactor del siguiente modo: agitación 1000 rpm, flujo de aire 1,35 litro estándar por minuto, temperatura 28 °C y se controló el pH a seis utilizando hidróxido de amonio. No se proporcionó complementación con oxigeno .

Los cultivos de fermentación se cultivaron durante aproximadamente 12 a 16 horas hasta que se consumió el glicerol inicial como se demuestra por un pico de oxigeno disuelto. Los cultivos se privaron de alimento durante aproximadamente tres horas después del pico de oxigeno disuelto. Después de este periodo de privación de alimentos, se añadió un bolo de etanol al reactor hasta alcanzar el 1 % de etanol (p/v) . Se dejó que los cultivos de fermentación alcanzaran el equilibrio durante 15 a 30 minutos. Se inició el añadido de alimento 30 minutos después del bolo de etanol y se fijó a una velocidad constante de 1 mL/min durante 40 minutos, después se controló la bomba de alimentación a través de un sensor de etanol manteniendo la concentración de etanol en el 1 % para el resto de la corrida, utilizando una sonda de detección de etanol (Raven Biotech) . La alimentación contenia los siguientes componentes: extracto de levadura 50 g/L, dextrosa 500 g/L, sulfato de magnesio heptahidratado 3 g/L y trazas metálicas PTM1 12 mL/L. Para la fermentación de Ab6 y de Abl4 de longitud completa, también se añadió citrato de sodio dihidratado (0,5 g/L) a la alimentación. El tiempo de fermentación total fue de aproximadamente 90 horas.

Ejezeplo 5 Métodos para humanizar anticuerpos Los métodos para humanizar anticuerpos se han descrito anteriormente en la patente estadounidense emitida N.° 7935340, cuya divulgación se incorpora por referencia al presente en su totalidad. En algunos casos, es necesaria la determinación de si se requieren residuos marco de conejo adicionales para mantener la actividad. En algunos casos, los anticuerpos humanizados necesitan que se conserven algunos residuos marco de conejo fundamentales para minimizar la pérdida de afinidad o la actividad. En estos casos, es necesario cambiar los aminoácidos marco únicos o múltiples de las secuencias de las lineas germinales humanas a los aminoácidos de conejo originales para tener la actividad deseada. Estos cambios se determinan de manera experimental para identificar qué residuos de conejo son necesarios para conservar la afinidad y la actividad. Este es el final de la secuencia de aminoácidos humanizada de cadena pesada y de cadena ligera variable.

Ejemplo 6 Inhibición de la unión de CGRP a su receptor celular Para la caracterización de los anticuerpos expresados de forma recombinante por su capacidad de inhibir la unión de CGRP a su receptor celular, se realizó un ensayo de unión a radioligando como se describió anteriormente [Elshourbagy y col., Endocrinology 139:1678 (1998); Zimmerman y col., Peptides, 16:421 (1995)]. Se utilizaron preparaciones de membranas de receptores de CGRP humano recombinante, receptor similar al receptor de calcitonina y RAMP1 (Chemiscreen, Millipore) . Se preincubaron diluciones de anticuerpos con CGRP humano radiomarcado con 125I (0,03 nM) durante 30 minutos a temperatura ambiente. La unión no especifica se calculó en presencia de 0,1 µ? de CGRPa humano. Se filtraron y se lavaron las membranas . Se contaron los filtros para determinar el CGRPa humano radiomarcado con 125I unido específicamente .

Resultados: La figura 38 demuestra que los anticuerpos anti-CGRP Abl-Abl3 inhiben la unión de CGRP a su receptor celular.

Ejemplo 7 Inhibición de la vasodilatación neurogénica por anticuerpos anti-CGRP en ratas CGRP es un vasodilatador potente (Nature 313: 54-56 (1985) y Br J. Clin. Pharmacol. 26(6): 691-5. (1988)). Se utilizó un ensayo farmacodinámico para medir la actividad antagonista del receptor de CGRP de modo no invasivo para caracterizar los anticuerpos anti-CGRP. El modelo se basó en los cambios en el flujo sanguíneo dérmico medidos utilizando generación de imágenes Doppler por láser después de la aplicación tópica de una solución de capsaicina. La capsaicina activa al receptor de potencial transitorio vaniloide tipo 1 (TRPV-1) y produce inflamación neurogénica y vasodilatación mediante la liberación local de mediadores vasoactivos incluido el CGRP y la sustancia P (Br. J. Pharmacol. 110: 772-776 (1993)).

El dia anterior al ensayo de vasodilatación, se administró a los animales el agente de prueba o control por vía IP ( intraperitoneal ) . Después de la dosificación, se rasuró a los animales y se los depiló en la zona baja trasera del costado dorsal, en un área de aproximadamente 2x6 cm. Se devolvió a los animales a las jaulas durante la noche. El dia del ensayo, aproximadamente 24 horas después de la dosificación, se anestesió a los animales con gas isoflurano, se los colocó en una almohadilla de calor con temperatura controlada y se les colocó un cono nasal para la administración continua de isoflurano. Se utilizó generación de imágenes Doppler para la observación de la vasodilatación.

Un haz de luz roja coherente generado por un láser de helio-neón de 633 nm se dirigió a la zona afeitada, un rectángulo (2x6 cm) y se escaneó en un modo de resolución media. Se obtuvo primero un análisis Doppler de referencia y la ubicación del anillo en 0 predeterminada mediante la identificación de dos áreas similares de flujo bajo. Se colocaron dos anillos en 0 de goma (~1 cm de diámetro) en las regiones seleccionadas y se realizó un análisis de referencia. Inmediatamente después de la finalización del análisis, se aplicó 1 mg de capsaicina en 5 µ? de una solución de etanol : acetona (1:1) dentro de cada uno de los dos anillos en 0. Se repitieron los análisis Doppler en 2,5, 5, 7, 5, 10, 12,5, 15, 17,5, 20, 22,5, 25, 27, 5 y 30 minutos después de la aplicación de la capsaicina. El cambio porcentual con respecto al valor de referencia del flujo promedio dentro de cada uno de los dos anillos en O, se gráfico como los resultados de la vasodilatación debido a la capsaicina .

Para evaluar los anticuerpos expresados de forma recombinante por su capacidad de inhibir la unión de CGRP a su receptor celular, se realizó un ensayo de unión a radioligando como se describió anteriormente.

Resultados: las figuras 39 y 40 demuestran que los anticuerpos anti-CGRP Ab3 y Ab6 redujeron la vasodilatación en este modelo después de la administración de la capsaicina.

Ejemplo 8 Inhibición de la aversión a la luz o de la fotofobia mediante inyección sistémica (IP) del anticuerpo anti-CGRP en ratones Nestin/Rampl transgénicos Como se planteó anteriormente, una de las características de la migraña es la fotofobia o el aumento de la sensibilidad a la luz [Mulleners y col., Headache 41: 31-39 (2001); Recober y col., J. Neuroscience 29:8798:8804 (2009)]. También se sabe que las personas que sufren de migraña, pero no las personas que no sufren de migraña, son sensibles a la cefalea inducida por CGRP [revisado en Neurology 22:241-246 (2009)]. CGRP se une a un receptor unido a la proteína G llamado CLR (receptor similar a calcitonina) que funciona de forma concomitante con la proteína 1 modificadora de la actividad del receptor (RAMP1) en la mediación de la unión de CGRP y la señalización. In vi tro, la actividad de CGRP aumenta notablemente mediante la sobreexpresión de la subunidad de RAMPl del receptor de CGRP [(J. Neurosci. 27:2693-2703 (2007)]. Para estudiar el comportamiento de la aversión a la luz en los ratones, se desarrolló un modelo de ratón transgénico nestin/RAMPl humana [Recober y col., J. Neuroscience 29: 8798-8804 (2009); Russo y col., Mol. Cell. Pharmacol., 1:264-270 (2009)]. Estos ratones, cuando se expusieron a CGRP, presentaron síntomas asociados con las migrañas, en particular aversión a la luz (ibid) . Este protocolo se describe a continuación.

Para evaluar la capacidad de los anticuerpos anti-CGRP de bloquear la aversión a la luz o la fotofobia inducida por CGRP, se colocaron los ratones en jaulas en condiciones estándar en grupos de 2-5 por jaula con un ciclo de luz de 12 horas (luces encendidas a las 0500 CST)/0600 CDT y apagadas a las 1700 CST/1800 CDT) y con acceso a agua y alimento a voluntad. Los ratones utilizados en los estudios son de colonias de ratones del genotipo nestin/hRAMPl que contiene dos alelos transgénicos Tg (Nes-cre) lKln/J y Tg(RAMPl) alelos (B6; SJL-Tg (Nes-cre) lKln Tg(RAMPl). Se introdujo Nes-cre en estos ratones mediante un entrecruzamiento que comprendía ratones obtenidos de The Jackson Laboratory (solución madre 003771) sobre un trasfondo genético B6 productor de ratones.

Los ratones de control utilizados en el protocolo son de la misma carnada y son no transgénicos o transgénicos únicos (no expresan hRAMPl) que contienen el transgén: nestin-cre o Cxl-GFP-hRAMPl . La colonia madre se mantiene por retrocruzamiento de ratones CXl-GFP-hRAMPl con ratones de la misma carnada no transgénicos en la instalación de barrera. Para los estudios de comportamiento, se mantiene la colonia mediante el cruzamiento de CXl-GFP-hRAMPl transgénicos únicos con ratones nestin-cre en las instalaciones sin barrera.

Todos estos ratones tuvieron los cuidados y se sometieron a procedimientos aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Iowa, y además se realizaron de acuerdo con la norma establecida por National Institutes of Health.

Los materiales y los equipos utilizados en este protocolo son un casillero de luz-oscuridad y cámaras de prueba que comprenden un campo abierto de plexiglás (27 x 27 x 20,3 cm) que contenia matrices infrarrojas de rayos 16 (Med Associates Inc., St. Albans, VT) . Se dividió el casillero de luz/oscuridad en dos zonas del mismo tamaño mediante una sección añadida oscura, opaca a la luz visible. Había una apertura (5,2 x 6,8 cm) en la sección añadida oscura que permitía que el ratón se moviera libremente entre las dos zonas. Esta cámara de prueba se colocó dentro de una cabina con atenuación del sonido (56 x 38 x 36 cm) con un ventilador para la ventilación (Med Associates Inc.). Había seis cámaras en el sistema global y este estaba integrado con un ordenador que contenía un software para la grabación y la recopilación de datos (Med Associates Inc. ) .

El software utilizado para monitorizar los resultados es Activity Monitor v 6.02 (Med Associates Inc.). Las configuraciones del software utilizadas para la grabación fueron: resolución (ms) : 50, tamaño del casillero: 3, retraso de descanso (ms) : 500, activación ambulatoria: 3, tipo de sesión: C, tiempo de sesión (min) : 20, intervalo de bloqueo (seg) : 300 y archivo comprimido: DEFAULT.ZIP.

En el protocolo, la fuente de luz para cada cámara es un panel de LED, que se instaló en el techo de la cabina con atenuación del sonido. El panel de LED contenia 36 bombillas LED de 1 vatio colimadas (5500k Daylight White) (LEDwholesalers, Burlingame, CA) . Para controlar la intensidad de la luz, se conectó cada panel de LED a un controlador LED de intensidad regulable (LINEARdrive; eldoLED America Inc., San José, CA) que produjo un rango potencial de intensidad de luz de ~300 a 27.000 lux. La intensidad de la luz estándar es ~1000-1200 lux, a menos que se indique algo diferente. Alternativamente, se han logrado intensidades de luz menores utilizando capas de papel de cera para filtrar la luz que produce una intensidad de ~55 lux.

Los inyectores utilizados son hechos a mano insertando una aguja depurada calibre 30 x ½" en un tubo de polietileno no radiopaco (diámetro interno ,38 mm; diámetro externo 1,09 mm) . Utilizando el tubo descrito anteriormente, se colocó un tapón (~1 cm de longitud) sobre la aguja, dejando aproximadamente 2,5 mm del bisel descubierto. Estos inyectores se conectaron a una jeringa Hamilton de 10 yL.

Se inyectaron los ratones con a-CGRP de rata (Sigma) diluido en solución salina con tampón de fosfato Dulbecco (D-PBS) (Hyclone) . La administración de la dosis total fue 0,5 nmol. Por ejemplo, se diluyeron 250 o 500 µ? de CGRP en 250 o 500 ]i , de PBS estéril hasta una concentración final de 1 µg/µL. Se almacenó el CGRP a -20 °C y se congelaron y descongelaron alícuotas como máximo una vez. Se almacenó el PBS a 4 °C.

Se les administró a los ratones uno de los anticuerpos anti-CGRP divulgados aquí (Ab3) , vehículo o un anticuerpo de control, que se almacenaron a 4 °C antes de la administración. En este protocolo, antes de la administración del CGRP, es decir, aproximadamente 24 horas antes de las pruebas, se pesaron los ratones y recibieron una inyección intraperitoneal (ip) de: vehículo, anticuerpo de control o anticuerpo de unión a CGRP a una dosis de 30 mg/kg. También se evaluaron los ratones para detectar cualquier condición física anormal que pudiera afectar el ensayo como un ojo faltante, cataratas u otras anomalías como el acicalamiento, etc. El día después de la administración del anticuerpo, se transportaron los ratones en jaulas desde el estabularlo en un carro y se colocaron los ratones en la habitación de comportamiento para su aclimatación al menos 1 hora antes de cualquier inyección o prueba. Se retiraron los recubrimientos necesarios para el transporte de las jaulas y se encendieron las condiciones de luz normales (luz fluorescente superior estándar) durante la aclimatación y permanecieron encendidas por el resto del procedimiento. Además, se encendieron todos los equipos que producían sonido, incluidos los dispositivos anestésicos, las cámaras de luz/oscuridad y los paneles de LED durante la aclimatación y permanecieron encendidos hasta que finalizaron las pruebas. Típicamente, hay una presencia humana mínima en la habitación durante la aclimatación.

Después de la aclimatación, se colocó cada ratón en una cámara de inducción y se le administró isoflurano al 3,5 %. Después de anestesiar al ratón, se traspasó a un cono nasal manteniendo la administración de isoflurano al 3,5 %, de modo que permanezca anestesiado durante la inyección. Posteriormente, se efectuó la administración del fármaco utilizando el inyector mediante inyección directa en el ventrículo lateral derecho a través del cuero cabelludo intacto a 1 rom por detrás del bregma y 1 mm a la derecha de la línea media.

Típicamente, para que haya coherencia, todas las inyecciones son realizadas por la misma persona después de un período de capacitación con un índice de éxito de >90 % según se demuestra con inyecciones de tinta en los ventrículos. Los fármacos inyectados fueron 2,0 µ?> de vehículo (D-PBS) µ?? o 2,0 de CGRP en 2,0 µ?, de vehículo (1 \xq/]iL) administrado como una inyección intracerebroventricular directa en el ventrículo lateral derecho del cerebro a través del cuero cabelludo intacto a 1 mm por detrás del bregma y 1 ram a la derecha de la línea media como se describió anteriormente [Recober y col., J. Neuroscience 29: 8798-8804 (2009)]. Después de la administración de 2,0 µ?, al aguja permanece en el lugar durante 10 seg y luego se retira. Se registra la hora de la inyección.

Después de la inyección, se deja que los ratones se recuperen durante 30 minutos antes de la evaluación en una jaula vacía, descubierta que contiene una toalla de papel como cama. Durante la recuperación, se registra lo siguiente: diarrea, orina excesiva, sangrado posterior a la inyección, comportamiento anormal como falta de movimiento, apoplejías, etc. Después de una recuperación de 30 minutos, se realizan las pruebas. Se coloca cada ratón contra la cara trasera (la más lejana de la apertura entre las dos zonas) en la zona de luz aproximadamente en el centro. Esto activa el inicio de la grabación. Se evalúan hasta seis ratones por vez (un ratón por cámara). Durante la evaluación, se empuja el estante con la cámara dentro del gabinete y se cierran las puertas. El software graba el movimiento del ratón durante 20 minutos. Después de que finaliza la grabación, se quitan los ratones y se colocan nuevamente en su jaula para ser transportados nuevamente al estabularlo.

Resultados Utilizando este protocolo, se evaluó un anticuerpo anti-CGRP desarrollado por Alder Biopharmaceuticals (Ab3) para determinar su posible idoneidad para tratar la migraña, específicamente la migraña crónica en seres humanos y más específicamente para el tratamiento o la prevención de la fotofobia asociada a CGRP. Los resultados de estos estudios se muestran en la figura 41 y en la figura 42. La figura 41 contiene datos que comparan el efecto de la inyección ICV de CGRP en ratones tg hRAMPl y en ratones de control de la misma carnada. Los datos revelan que la administración de CGRP produce una disminución del tiempo en el comportamiento de la luz en los ratones tg hRAMPl en comparación con los ratones de control de la misma carnada.

La figura 42 contiene datos que comparan el efecto de la inyección sistémica (IP) del anticuerpo anti-CGRP (Ab3) en vehículo, vehículo solo y anticuerpo de control en vehículo en ratones nestin/RAMPl que reciben estas fracciones por vía intraperitoneal a 30 mg/kg aproximadamente 24 horas antes de la administración de CGRP. Los datos en la parte izquierda de la gráfica son el tiempo total en la luz (segundos) para los primeros 10 minutos y los datos en la parte derecha de la gráfica es el tiempo total en la luz (segundos) para los primeros 20 minutos medidos después de la inyección con CGRP (administrado a través de inyección ICV) y el periodo de recuperación. La intensidad de la luz en la zona de luz era de aproximadamente lxlO3 lx. Los datos revelan que los ratones que recibieron el anticuerpo anti-CGRP Ab3 de acuerdo con la invención presentaron un aumento estadísticamente significativo de la cantidad de tiempo en la luz con relación a los ratones que recibieron los controles.

Estos resultados indican que Ab3 inhibe la fotofobia asociada a CGRP o la aversión a la luz y deberían ser adecuados para tratar la migraña u otros trastornos que comprenden la fotofobia, especialmente la fotofobia relacionada con CGRP. Según lo anterior, se prevé que otros anticuerpos anti-CGRP, incluidos otros anticuerpos divulgados aquí, pueden presentar un comportamiento similar. Estos resultados indican además que se puede utilizar el ensayo de comportamiento del sujeto de la aversión a la luz para evaluar la posible eficacia terapéutica (capacidad de antagonizar los efectos de CGRP in vivo) del candidato de los anticuerpos anti-CGRP y los fragmentos de anticuerpos. Esto fue inesperado ya que era imprevisible que un polipéptido grande, como un anticuerpo anti-CGRP atravesaría la barrera hematoencefálica e inhibiría la fotofobia o la aversión a la luz .

Los resultados revelan que el CGRP excedente que induce el comportamiento aversivo a la luz en los ratones es reducido por la administración sistémica del anticuerpo anti-CGRP, lo que sugiere que el anticuerpo es capaz de unirse a una cantidad suficiente de CGRP circulante para contrarrestar el comportamiento aversivo a la luz. Estos resultados sugieren que el anticuerpo anti-CGRP puede cruzar la barrera hematoencefálica e inhibir asi los efectos neurológicos de CGRP, en particular la migraña asociada a la fotofobia y el dolor .

Esta es la primera demostración de que se puede utilizar el ensayo de comportamiento aversivo a la luz de un animal sujeto para evaluar la eficacia terapéutica de un polipéptido como un anticuerpo anti-CGRP o un fragmento de anticuerpo anti-CGRP. Además, estos resultados sugieren que este modelo de animal potencialmente puede ser útil para determinar las dosis eficaces de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-CGRP candidato, los modos de administración eficaces, asi como un régimen de dosificación adecuado.

Claims (74)

REIVINDICACIONES

1) . Un método para inhibir la fotofobia o la aversión a la luz o para impedir el inicio de la fotofobia o de la fotoaversión en un sujeto que lo necesite, que comprende administrar una cantidad eficaz de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-CGRP, anticuerpo del receptor anti-CGRP o fragmento o un polipéptido que comprende un fragmento de CGRP o un receptor de CGRP, en donde el anticuerpo o el fragmento de anticuerpo o el fragmento de CGRP o el receptor de CGRP reduce o previene la fotofobia o la aversión a la luz asociada a CGRP.

2) . El método de la reivindicación 1 en el cual la molécula administrada comprende un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-CGRP.

3) . El método de la reivindicación 1 o 2 en el cual el sujeto tratado sufre de uno o más de lo siguiente: migraña crónica, migrañas hemiplégicas, cefaleas en racimos, neuralgia migrañosa, cefaleas crónicas, cefaleas tensionales, cefaleas generales, sofocos, hemicránea paroxismal crónica, cefaleas secundarias debido a un problema estructural subyacente en la cabeza o cuello, neuralgia craneal, cefalea sinusal, cefaleas inducidas por alergias, migraña menopáusica, migraña menstrual o cefalea, migraña sin dolor de cabeza, migraña abdominal u otra afección migrañosa.

4) . El método de la reivindicación 1 o 2 en el cual el sujeto sufre de un trastorno ocular asociado con la fotofobia seleccionado de acromatopsia, aniridia, fotofobia causada por un fármaco anticolinérgico, afaquia (ausencia del cristalino del ojo), buftalmos (ángulo anormalmente estrecho entre la córnea y el iris), cataratas, distrofia de conos, anomalías congénitas del ojo, conjuntivitis viral ("ojo rosa"), abrasión corneal, distrofia corneal, úlcera corneal, alteración del epitelio corneal, ectopia del cristalino, endoftalmitis, trauma ocular causado por una enfermedad, lesión o infección, por ejemplo chalazión, episcleritis, glaucoma, queratocono o hipoplasia del nervio óptico, hidroftalmía o glaucoma congénito, iritis, neuritis óptica, síndrome de dispersión pigmentaria, dilatación pupilar (inducida naturalmente o químicamente) , desprendimiento de retina, cicatrización de la córnea o esclera y uveítis.

5) . El método de la reivindicación 1 o 2 en el cual el sujeto sufre de una afección relacionada con el sistema nervioso o urológica asociada con la fotofobia seleccionada de trastornos del espectro autista, malformación de Chiari, dislexia, encefalitis, incluso encefalomielitis miálgica también denominada síndrome de fatiga crónica, meningitis, hemorragia subaracnoidea, tumor de la fosa craneal posterior, espondilitis anquilosante, albinismo, ariboflavinosis, benzodiazepinas (uso a largo plazo o retiro de benzodiazepinas ) , quimioterapia, chikungunya, cistinosis, Síndrome de Ehlers-Danlos, resaca, influenza, mononucleosis infecciosa, deficiencia de magnesio, envenenamiento por mercurio, migraña, rabia y tirosinemia tipo II, también conocida como "síndrome de Richner-Hanhart " .

6) . El método de la reivindicación 1 o 2 en el cual el sujeto sufre de un trastorno asociado con la fotofobia seleccionado del grupo que consiste en migraña (con o sin aura) , iritis, uveítis, meningitis, depresión, trastorno bipolar, cefalea en racimos u otra cefalea autonómica trigeminal o blefaroespasmo, depresión, agorafobia o trastorno bipolar.

7) . El método de la reivindicación 1 o 2 en el cual el sujeto sufre de cefaleas migrañosas.

8) . Un método para evaluar la posible eficacia in vivo de un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-CGRP candidato, anticuerpo del receptor anti-CGRP o fragmento de anticuerpo o un fragmento de CGRP o receptor de CGRP para tratar una afección tratable mediante la administración de un antagonista de CGRP asociado con la fotofobia que comprende determinar si el anticuerpo o el fragmento de anticuerpo inhibe el comportamiento aversivo a la luz en un roedor nestin/Rampl que recibió CGRP en comparación con un roedor que recibió CGRP en ausencia del anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-CGRP candidato.

9) . El método de la reivindicación 8 en el cual se utiliza este ensayo para evaluar si se puede utilizar el anticuerpo o fragmento de anticuerpo para tratar una afección neurológica caracterizada por el aumento de los niveles de CGRP.

10) . El método de la reivindicación 8 en el cual se utiliza este ensayo para evaluar si se puede utilizar el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-CGRP para tratar la migraña, la migraña menstrual o la migraña crónica.

11) . El método de la reivindicación 8 en el cual se utiliza este ensayo para evaluar si se puede utilizar el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-CGRP para tratar las migrañas (con o sin aura) , pérdida de peso, cáncer o tumores, angiogénesis asociada con el crecimiento del cáncer o tumoral, angiogénesis asociada con la supervivencia al cáncer o al tumor, migraña hemipléjica, cefaleas en racimos, neuralgia migrañosa, cefaleas crónicas, cefaleas tensionales, cefaleas generales, migraña sin dolor de cabeza, migraña abdominal, sofocos, hemicránea paroxismal crónica, cefaleas secundarias debido a un problema estructural subyacente en la cabeza o cuello, neuralgia craneal, cefalea sinusal, cefaleas o migrañas inducidas por alergias, dolor, dolor inflamatorio, dolor de la incisión después de la operación, síndrome de dolor regional complejo, dolor por cáncer, dolor de cáncer de hueso metastásico o primario, dolor de fractura, dolor de fractura osteoporótica, dolor causado por quemaduras, osteoporosis, gota, dolor asociado con la crisis de células falciformes, y otro dolor nocicéptico, así como carcinoma hepatocelular, cáncer de mama, cirrosis hepática, dolor neurogénico, dolor neuropático, dolor nocicéptico, neuralgia del trigémino, neuralgia posherpética, dolor del miembro fantasma, fibromialgia, dolor menstrual, ovarialgia, distrofia simpática refleja, dolor neurogénico, dolor por osteoartritis o artritis reumatoide, dolor en la zona lumbar, neuropatía diabética, ciática, o dolor o dolor visceral asociado con reflujo gastroesofágico, dispepsia, síndrome del intestino irritable, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, ileítis, colitis ulcerosa, cólico renal, dismenorrea, cistitis, período menstrual, trabajo de parto, menopausia, prostatitis o pancreatitis.

12) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 que incluye la administración de un agente activo utilizado para tratar la migraña.

13) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-CGRP se administra como una monoterapia.

14) . El método de la reivindicación 12 en el cual se administra el anticuerpo con otro agente activo en la misma composición o en composiciones diferentes.

15) . El método de la reivindicación 14 en el cual el sujeto es un sujeto que sufre de migraña y la terapia incluye un analgésico, triptano, topirimato, dihidroergotamina o un opioide .

16) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es un anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-CGRP antihumano que se une específicamente a los mismos epítopos conformacionales o lineales o que se superponen y/o que compite por la unión a los mismos epítopos conformacionales o lineales o que se superponen en un polipéptido de CGRP intacto o fragmento de este como un anticuerpo anti-CGRP humano seleccionado de Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3 o Abl .

17) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo se une específicamente a los mismos epítopos conformacionales o lineales o que se superponen y/o compite por la unión a los mismos epítopos conformacionales o lineales o que se superponen en un polipéptido de CGRP humano intacto o fragmento de este como Ab2, Ab3, Ab5, Ab6, Abl3 o Abl4.

18) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo se une específicamente a los mismos epítopos conformacionales o lineales o que se superponen y/o compite por la unión a los mismos epítopos conformacionales o lineales o que se superponen en un polipéptido de CGRP humano intacto o fragmento de este como Ab2, Ab3, Ab5 o Ab6.

19) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el cual el fragmento de anticuerpo se selecciona de un fragmento Fab, un fragmento Fab' o un fragmento F(ab')2.

20) . El método de la reivindicación 19 en el cual dicho fragmento es un fragmento Fab.

21) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una cadena ligera variable que comprende la secuencia CDR 1 de SEC. ID. N.°: 25, la secuencia CDR 2 de SEC. ID. N.°: 26 y la secuencia CDR 3 de SEC. ID. N.°: 27 y/o una cadena pesada variable que comprende la secuencia CDR 1 de SEC. ID. N.°: 28, la secuencia CDR 2 de SEC. ID. N.°: 29 y la secuencia CDR 3 de SEC. ID. N.°: 30.

22) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una cadena ligera variable que comprende la secuencia CDR 1 de SEC. ID. N.°: 55, la secuencia CDR 2 de SEC. ID. N.°: 56 y la secuencia CDR 3 de SEC. ID. N.°: 57 y/o una cadena pesada variable que comprende la secuencia CDR 1 de SEC. ID. N.°: 58, la secuencia CDR 2 de SEC. ID. N.°: 59 y la secuencia CDR 3 de SEC. ID. N.°: 60.

23) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende al menos 2 regiones determinantes de la complementariedad (CDR) en cada una de las regiones pesada variable y ligera variable que son idénticas a las contenidas en un anticuerpo anti-CGRP humano seleccionado de Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7 , Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3 o Abl4.

24) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende al menos 2 regiones determinantes de la complementariedad (CDR) en cada una de las regiones pesada variable y ligera variable que son idénticas a las contenidas en Ab2, Ab3, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Abl3 o Abl4.

25) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es completamente no glicosilado o carece de N-glicosilación o contiene solamente residuos de mañosa.

26) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo contiene una región Fe que se ha modificado para alterar la función efectora, la vida media, la proteólisis y/o la glicosilación .

27) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo es un anticuerpo humanizado, de cadena única o quimérico.

28) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo se une específicamente a células humanas que expresan CGRP y/o a moléculas de CGRP solubles circulantes in vivo.

29) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1- 7 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una secuencia de polipéptidos VH seleccionada de: SEC. ID. N.°: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, 113, 123 o 133, o una variante de estas; y que comprende además una secuencia de polipéptidos VL seleccionada de: SEC. ID. N.°: 1, 11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101, 111, 121 o 131 o una variante de estas que posee al menos el 90 % de identidad de secuencia con estas, en donde uno o más de los residuos marco (FR) o residuos CDR en dicho polipéptido VH o VL se ha sustituido con otro residuo de aminoácidos, lo que produce un anticuerpo anti-CGRP que se une específicamente a CGRP.

30) . El método de la reivindicación 29 en el cual uno o más de dichos residuos FR se sustituyen con un aminoácido presente en el sitio correspondiente en un anticuerpo anti-CGRP de conejo padre del cual se han derivado las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) contenidas en dichos polipéptidos VH o VL o por una sustitución conservadora de aminoácidos.

31) . El método de la reivindicación 30 en el cual dicho anticuerpo o fragmento de anticuerpo es humanizado.

32) . El método de la reivindicación 30 en el cual dicho anticuerpo o fragmento de anticuerpo es quimérico.

33) . El método de la reivindicación 30 en el cual dicho anticuerpo comprende un anticuerpo de cadena única.

34) . El método de la reivindicación 32 en el cual dicho anticuerpo quimérico comprende un Fc humano.

35) . El método de la reivindicación 34 en el cual dicho Fc humano se deriva de IgGl, IgG2, IgG3 o IgG4.

36) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo inhibe la asociación de CGRP con CGRP-R y/o sus multímeros, una o más proteínas adicionales en un complejo CGRP-CGRP-R y/o antagoniza sus efectos biológicos.

37) . El método de la reivindicación 29 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una secuencia de polipéptidos que tiene una homología de al menos el 90 % o mayor con dos de las secuencias de polipéptidos mencionadas allí.

38) . El método de la reivindicación 29 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una secuencia de polipéptidos que tiene una homología de al menos el 95% o mayor con cualquiera de las secuencias de polipéptidos mencionadas allí.

39) . El método de la reivindicación 29 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo se une a CGRP con una constante de disociación (Koff) menor o igual que 10~4 S"1, 5xl0~5 S"1, 10"5 S"1, 5xl0-6 S~\ 10"6 S"1, 5xl0"7 S_1 o 10"7 S"1.

40) . El método de la reivindicación 29 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo inhibe la producción de CGRP con CGRP-R y/o sus multimeros y/o la producción de CGRP con CGRP-R y una o más proteínas adicionales en un complejo.

41). El método de cualquiera de las reivindicaciones 1- 7 en el cual el anticuerpo anti-CGRP se une al mismo epítopo de CGRP o a un epítopo que se superpone como un anticuerpo anti-CGRP seleccionado de Abl, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, AblO, Abll, Abl2, Abl3 o Abl .

42). El método de cualquiera de las reivindicaciones 1- 7 en el cual el anticuerpo anti-CGRP o el fragmento de este comprende una o más de las CDR contenidas en las secuencias de polipéptidos VH seleccionadas de: SEC. ID. N.°: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, 113, 123 o 133 y/o una o más de las CDR contenidas en las secuencias de polipéptidos VL seleccionadas de: SEC. ID. N.°: 1, 11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101, 111, 121 o 131.

43) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el cual el anticuerpo anti-CGRP o el fragmento de este comprende al menos 2 de las CDR contenidas en las secuencias de polipéptidos VH seleccionadas de: SEC. ID. N.°: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, 113, 123 o 133 y/o al menos 2 de las CDR contenidas en las secuencias de polipéptidos VL seleccionadas de: SEC. ID. N.°: 1, 11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101, 111, 121 o 131.

44) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el cual el anticuerpo anti-CGRP o el fragmento de este comprende las 3 CDR contenidas en las secuencias de polipéptidos VH seleccionadas de: SEC. ID. N.°: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, 113, 123 o 133 y/o las 3 CDR contenidas en las secuencias de polipéptidos VL seleccionadas de: SEC. ID. N.°: 1, 11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101, 111, 121 o 131.

45) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1- 7 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo se administra por vía intramuscular, subcutánea, intravenosa, rectal, por infusión, oral, transdérmica o por inhalación.

46). El método de cualquiera de las reivindicaciones 1- 7 en el cual el anticuerpo o fragmento de anticuerpo se administra por vía intravenosa.

47) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el cual el tratamiento además incluye la administración de otro agente o régimen terapéutico seleccionado de antihistaminas, agentes antiinflamatorios o antibióticos.

48) . El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el cual el anticuerpo anti-CGRP o fragmento de anticuerpo que tiene especificidad de unión a CGRP comprende las secuencias de polipéptidos CDRl, CDR2 y CDR3 de cadena ligera variable y las secuencias de polipéptidos CDRl, CDR2 y CDR3 de cadena pesada variable seleccionadas de las siguientes :

49) . El método de la reivindicación 48 en el cual dicho fragmento de anticuerpo es un scFv, camelcuerpo, nanocuerpo, IgNAR (anticuerpos de cadena única derivados de tiburones) , fragmento Fab, Fab* o F(ab')2.

50) . El método de la reivindicación 48 en el cual dicho fragmento de anticuerpo anti-CGRP es un fragmento Fab.

51) . El método de la reivindicación 48 en el cual dicho anticuerpo o fragmento comprende una secuencia de polipéptidos de cadena ligera variable y una secuencia de polipéptidos de cadena pesada variable seleccionadas de las siguientes:

52) . El método de la reivindicación 48 en el cual dicho anticuerpo o fragmento comprende una secuencia de polipéptidos de cadena ligera y una secuencia de polipéptidos de cadena pesada seleccionadas de las siguientes:

53). El método de la reivindicación 48 en el cual dicho anticuerpo o fragmento comprende secuencias de polipéptidos de cadena ligera variable y de cadena pesada variable que son al menos el 90 % idénticas a una de las secuencias de polipéptidos de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 1, 11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101, 111, 121 o 131 y al menos el 90 % idénticas a una de las secuencias de polipéptidos de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, 113, 123 o 133, respectivamente .

54). El método de la reivindicación 48 en el cual dicho anticuerpo o fragmento comprende secuencias de polipéptidos de cadena ligera variable y de cadena pesada variable que son al menos el 95 % idénticas a una de las secuencias de polipéptidos de cadena ligera variable de SEC. ID. N.°: 1, 11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101, 111, 121 o 131 y al menos el 95 % idénticas a una de las secuencias de polipéptidos de cadena pesada variable de SEC. ID. N.°: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, 113, 123 o 133, respectivamente .

55) . El método de la reivindicación 48 en el cual dicho anticuerpo o fragmento es quimérico o humanizado.

56) . El método de la reivindicación 48 en el cual dicho anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-CGRP es completamente no glicosilado o carece de N-glicosilación o comprende solamente residuos de mañosa.

57) . El método de la reivindicación 48 en el cual dicho anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-CGRP comprende un dominio constante humano.

58) . El método de la reivindicación 48 en el cual dicho anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-CGRP es un anticuerpo IgGl, IgG2, IgG3 o IgG4.

59) . El método de la reivindicación 48 en el cual dicho anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-CGRP contiene una región Fe que se ha modificado para alterar al menos una de la función efectora, la vida media, la proteólisis y/o la glicosilacion.

60) . El método de la reivindicación 48 en el cual dicho anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-CGRP tiene una región Fe que contiene una mutación que altera o elimina toda la glicosilacion o que reduce o elimina la N-glicosilación.

61) . El método de la reivindicación 48 en el cual dicho anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-CGRP está unido directamente o indirectamente a una etiqueta detectable o agente terapéutico.

62) . El método de la reivindicación 48 en el cual dicho anticuerpo o fragmento de anticuerpo anti-CGRP comprende además una fracción efectora.

63) . El método de la reivindicación 62 en el cual dicha fracción efectora es una fracción detectable o una fracción funcional .

64) . El método de la reivindicación 63 en el cual dicha fracción detectable es un tinte fluorescente, una enzima, un sustrato, un material bioluminiscente , un material radiactivo o un material quimioluminiscente .

65) . El método de la reivindicación 63 en el cual dicha fracción funcional es estreptavidina, avidina, biotina, una citotoxina, un agente citotóxico o un material radiactivo.

66) . El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores que incluye además la administración de al menos uno de un betabloqueador, flunarizina, ácido valproico, topiramato, amitriptilina, venlafaxina, gabapentina, naproxeno, raíz de petasita, vitamina B2 y magnesio.

67) . El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores que incluye además la administración de al menos otro agente activo seleccionado de agentes analgésicos, antihistaminicos , antipiréticos, antiinflamatorios, antibióticos, antivirales y anticitocinas .

68) . El método de la reivindicación 67 en el cual el otro agente activo se selecciona de agonistas, antagonistas y moduladores de TNF- , IL-2, IL-4, IL-ß, IL-10, IL-12, IL-13, IL-18, IFN-a, IFN-?, BAFF, CXCL13, IP-10, VEGF, EPO, EGF, HRG, factor de crecimiento de hepatocito (HGF) , hepcidina, incluido anticuerpos reactivos contra cualquiera de los anteriores y anticuerpos reactivos contra cualquiera de sus receptores .

69) . El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores que incluye además la administración de un agente activo, incluido, entre otros, ácidos 2-arilpropiónicos, aceclofenaco, acemetacina, ácido acetilsalicilico (aspirina) , alclofenac, alminoprofeno, amoxiprin, ampirona, ácidos arilalcanoicos, azapropazona, benorilato/benorilato, benoxaprofeno, bromfenac, carprofen, celecoxib, salicilato de colina y magnesio, clofezona, inhibidores de COX-2, dexibuprofeno, dexketoprofeno, diclofenaco, diflunisal, droxicam, etenzamida, etodolac, etoricoxib, faislamina, ácidos fenámicos, fenbufen, fenoprofeno, ácido flufenámico, flunoxaprofen, flurbiprofeno, ibuprofeno, ibuproxam, indometacina, indoprofeno, quebuzona, ketoprofeno, ketorolaco, lornoxicam, loxoprofeno, lumiracoxib, salicilato de magnesio, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, meloxicam, metamizol, salicilato de metilo, mofebutazona, nabumetona, naproxeno, ácidos N-arilantranilicos, factor de crecimiento nervioso (NGF) , oxametacin, oxaprozin, oxicams, oxifenbutazona, parecoxib, fenazona, fenilbutazona, fenilbutazona, piroxicam, pirprofeno, profenos, proglumetacina, derivados de pirazolidina, rofecoxib, salicilato salicílico, salicilamida, salicilatos, sustancia P, sulfinpirazona, sulindac, suprofeno, tenoxicam, ácido tiaprofénico, ácido tolfenámico, tolmetin y valdecoxib.

70) . El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores que incluye además la administración de un agente activo antihistaminico que incluye, entre otros, acrivastina, astemizol, azatadina, azelastina, betatastina, bromfeniramina, buclizina, cetirizina, análogos de la cetirizina, clorfeniramina, clemastina, CS 560, ciproheptadina, desloratadina, dexclorfeniramina, ebastina, epinastina, fexofenadina, HSR 609, hidroxizina, levocabastina, loratadina, metescopolamine, mizolastina, norastemizol, fenindamina, prometazina, pirilamina, terfenadina y tranilast.

71). El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores que incluye además la administración de un agente activo antibiótico que incluye, entre otros, amikacina, aminoglucósidos , amoxicilina, ampicilina, ansamicinas, arsfenamina, azitromicina, azlocilina, aztreonam, bacitracina, carbacefem, carbapenemas, carbenicilina, cefaclor, cefadroxilo, cefalexina, cefalotina, cefalotina, cefamandol, cefazolina, cefdinir, cefditoren, cefepima, cefixima, cefoperazona, cefotaxima, cefoxitina, cefpodoxima, cefprozil, ceftazidima, ceftibuten, ceftizoxima, ceftobiprol, ceftriaxona, cefuroxima, cefalosporinas, cloramfenicol, cilastatina, ciprofloxacina, claritromicina, clindamicina, cloxacilina, colistina, cotrimoxazol , dalfopristina, demeclociclina, dicloxacilina, diritromicina, doripenem, doxiciclina, enoxacina, ertapenem, eritromicina, etambutol, flucloxacilina, fosfomicina, furazolidona, ácido fusidico, gatifloxacina, geldanamicina, gentamicina, glucopéptidos, herbimicina, iraipenem, isoniazida, kanamicina, levofloxacino, lincomicina, linezolid, lomefloxacina, loracarbef, macrólidos, mafenida, meropenem, meticilina, metronidazol, mezlocilina, minociclina, monobactamas, moxifloxacina, mupirocina, nafcilina, neomicina, netilmicina, nitrofurantoina, norfloxacina, ofloxacina, oxacilina, oxitetraciclina, paromomicina, penicilina, penicilinas, piperacilina, platensimicina, poliraixina b, polipéptidos, prontosil, pirazinamida, quinolonas, quinupristina, rifampicina, rifampicina, roxitromicina, espectinomicina, estreptomicina, sulfacetamida, sulfametizol, sulfanilimida, sulfasalazina, sulfisoxazol, sulfonamidas , teicoplanina, telitromicina, tetraciclina, tetraciclinas, ticarcilina, tinidazol, tobramicina, trimetoprim, trimetoprim-sulfametoxazol, troleandomicina, trovafloxacino y vancomicina .

72) . El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores que incluye además la administración de un agente activo incluido, entre otros, aldosterona, beclometasona, betametasona, corticosteroides, cortisol, acetato de cortisona, acetato de desoxicorticosterona, dexametasona, acetato de fludrocortisona, glucocorticoides, hidrocortisona, metilprednisolona, prednisolona, prednisona, esteroides y triamcinolona y sus combinaciones.

73) . El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores que incluye además la administración de un agente activo incluido, entre otros, ibuprofeno, naproxeno, sumatriptán, paracetamol/acetaminofeno, cafeína, un triptano como las ergotaminas como ergotamina, un corticosteroide, un antimimético incluido, entre otros, metoclopramida y sus combinaciones .

74) . El método de cualquiera de las reivindicaciones anteriores que incluye además la administración de una combinación de agentes activos incluido, entre otros, aspirina con metoclopramida) , (paracetamol/codeína para la analgesia, con buclizina como el antiemético) y paracetamol/metoclopramida .