MX2012014480A

MX2012014480A - Anticuerpos de peptido relacionado con el gen calcitonina.

Info

Publication number: MX2012014480A
Application number: MX2012014480A
Authority: MX
Inventors: Barrett Allan; Ryan James Darling; Robert Jan Benschop; Mark Geoffrey Chambers
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 2010-06-10
Filing date: 2011-06-07
Publication date: 2013-02-07
Also published as: PT2579894T; CY2019017I2; CY1119789T1; NO2019017I1; HRP20171992T1; NL300979I2; BR112012031501A2; LTC2579894I2; LTPA2019011I1; EP2579894A4; EP2579894B1; SG185648A1; LT2579894T; US9073991B2; HUS1900020I1; AU2011265050B2; JP2013532143A; DK2579894T3; ES2656000T3; JP6466883B2

Abstract

La presente invención provee un anticuerpo de péptido relacionado con gen de calcitonina diseñado humano (CGRP) o su fragmento de unión a antígeno. Además, la presente invención provee el uso de anticuerpos de péptido relacionados con gene de calcitonina diseñado humano (CGRP) o su fragmento de unión a antígeno para el tratamiento de dolor de osteoartritis.

Description

ANTIC U ERPOS DE PEPTI DO RELAC IONADO CON E L G EN CALCITO N 1 NA La presente invención se encuentra en el campo de la medicina, particularmente en el campo de los anticuerpos para el péptido relacionado con el gen calcitonina (CGRP). Más particularmente, la invención se refiere a anticuerpos de CGRP y al uso de los anticuerpos de CGRP para la terapia de dolor por osteoartritis o migrañas.

El péptido relacionado con el gen calcitonina (CGRP) es un neuropéptido de 37 aminoácidos secretado por los nervios de los sistemas nervioso central y periférico. CGRP se distribuye ampliamente en nervios sensoriales, en el sistema periférico y central y despliega un gran número de diferentes actividades biológicas. CGRP se informa que juega un papel. Cuando se libera de fibras trigeminales u otros nervios, CGRP se piensa que media su respuesta biológica mediante la unión a receptores de la superficie celular específica.

Se ha informado que CGRP juega un papel en migrañas como CGRP se libera en la estimulación de nervios sensoriales y tiene potente actividad vasodilatoria. La liberación de CGRP incrementa la permeabilidad vascular y posterior dispersión de proteína de plasma (extravasación de proteína de plasma) en tejidos inervados por fibras del nervio trígeminal durante la estimulación de estas fibras. Además, estudios han reportado que la infusión de CGRP en pacientes que padecen de migrañas ha resultado en síntomas tipo migraña.

También se ha reportado que CGRP juega un papel en osteoartritis (OA) . OA es una condición crónica que afecta un gran porcentaje de gente en todo el mundo. El dolor en artritis se caracteriza por hiperalgesia (excesivamente sensible a estímulos normalmente no nocivos) y dolor espontáneo (dolor durante el reposo). Inflamación de la articulación causa sensibilización periférica y central. En la sensibilización periférica, los nociceptores que contienen CGRP con alto umbral normalmente responden primero a la presión ligera asociada con el movimiento de la articulación normal. CGRP actúa como un facilitador local de los procesos inflamatorios. Este proceso continuo eventualmente lleva a sensibilización central en la médula espinal tal como neuronas que se tornan sensibles a la estimulación de tejido inflamado así como no inflamado. En modelos pre-clínícos de dolor OA en la rata, un incremento en el número de fibras nerviosas positivas CGRP se observa, correlacionado positivamente con la cantidad de dolor.

El estándar común de cuidado para el dolor OA consiste de fármacos anti-inflamatorios no esteroidales (NSAI D) e inhibidores de Cox-2 selectivos. Con el tiempo, muchos pacientes llegarán a ser insensibles a estos tratamientos o no serán capaces de tolerar las dosis altas necesitadas para aliviar efectivamente el dolor. El seguimiento del tratamiento consiste de inyecciones intra-articulares (hialuronano) u opiatos. El tratamiento final es el reemplazo quirúrgico de la articulación total. Muchos de estos tratamientos tienen efectos secundarios negativos, que varían de gastrointestinal (NSAI D) a cardiovascular (inhibidores de Cox-2), son problemáticos y/o no muy eficaces (inyecciones intra-articulares), tienen el riesgo de abuso (opiatos), o se restringen a solo 1 articulación (inyecciones intra-articulares, cirug ía).

Aunque los anticuerpos de CGRP para el tratamiento de migrañas y para el tratamiento de dolor de inflamación se han descrito (migrañas-WO 2007/076336 y WO 2007/054809; ver OA, Antibody G 1 de WO2009/109908A1 ), todavía hay una necesidad de alternativas. Preferiblemente, el tratamiento alternativo es seguro y eficaz. Más preferiblemente, el tratamiento alternativo para OA proporcionará alivio al dolor duradero a través de múltiples articulaciones que es tolerable a los pacientes sin el riesgo de dependencia y/o abuso.

La presente invención provee un anticuerpo de CG R P diseñado humano que comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) y una región variable de cadena pesada (HCVR), en donde dicha LCVR comprende secuencias de aminoácidos de LCDR1 , LCDR2 y LCDR3 y HCVR com prende secuencias de aminoácidos HCDR1 , HCDR2 y HCDR3 que se seleccionan del grupo que consta de : a) LCDR1 es RASQDI DNYLN (SEQ I D NO: 3), LCDR2 es YTSEYHS (SEQ I D NO: 4), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR 1 es GYTFGNYWMQ (SEQ I D NO: 1 2) , HCDR2 es AIYEGTGDTRYIQKFAG (SEQ ID NO: 1 3), y HCDR3 es LSDYVSGFSY (SEQ I D NO: 14); b) LCDR 1 es RASQDI DNYLN (SEQ I D NO: 3) , LCDR2 es YTSEYHS (SEQ ID NO: 4), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 es GYTFGNYWMQ (SEQ I D NO: 12), HCDR2 es AIYEGTGKTVYIQKFAG (SEQ ID NO: 15), y HCDR3 es LSDYVSGFSY (SEQ ID NO: 14); . c) LCDR1 es RASKDESKYLN (SEQ ID NO: 6), LCDR2 es YTSGYHS (SEQ ID NO: 7), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 es GYTFGNYWMQ (SEQ ID NO: 12), HCDR2 es AIYEGTGKTVYIQKFAD (SEQ ID NO: 16), y HCDR3 es LSDYVSGFGY (SEQ ID NO: 39); d) LCDR1 es RASRPIDKYLN (SEQ ID NO: 8), LCDR2 es YTSEYHS (SEQ ID NO: 4), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 es GYTFGNYWMQ (SEQ ID NO: 12), HCDR2 es AIYEGTGKTVYIQKFAG (SEQ ID NO: 15), y HCDR3 es LSDYVSGFGY (SEQ ID NO: 39); y e) LCDR1 es RASQDIDKYLN (SEQ ID NO: 9), LCDR2 es YTSGYHS (SEQ ID NO: 7), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 es GYTFGNYWMQ (SEQ ID NO: 12), HCDR2 es AIYEGTGKTVYIQKFAG (SEQ ID NO: 15), y HCDR3 es LSDYVSGFGY (SEQ ID NO: 39), en donde el anticuerpo de CGRP diseñado humano se une a CGRP humano.

La presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una LCVR y una HCVR en donde LCDR1 es SEQ ID NO: 3, LCDR2 es SEQ ID NO: 4, LCDR3 es SEQ ID NO: 5, HCDR1 es SEQ ID NO: 12, HCDR2 es SEQ ID NO: 13, y HCDR3 es SEQ ID NO: 14, en donde el anticuerpo de CGRP humano diseñado se une a CGRP humano. La presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado o fragmento de unión a antigeno del mismo que comprende una LCVR y una HCVR en donde LCDR1 es SEQ ID NO: 3, LCDR2 es SEQ ID NO: 4, LCDR3 es SEQ ID NO: 5, HCDR1 es SEQ ID NO: 12, HCDR2 es SEQ ID NO: 15, y HCDR3 es SEQ ID NO: 14, en donde el anticuerpo de CGRP humano diseñado se une a CGRP humano. La presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una LCVR y una HCVR en donde LCDR1 es SEQ ID NO: 6, LCDR2 es SEQ ID NO: 7, LCDR3 es SEQ ID NO: 5, HCDR1 es SEQ ID NO: 12, HCDR2 es SEQ ID NO: 16, y HCDR3 es SEQ ID NO: 39, en donde el anticuerpo de CGRP humano diseñado se une a CGRP humano. La presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una LCVR y una HCVR en donde LCDR1 es SEQ ID NO: 8, LCDR2 es SEQ ID NO: 4, LCDR3 es SEQ ID NO: 5, HCDR1 es SEQ ID NO: 12, HCDR2 es SEQ ID NO: 15, y HCDR3 es SEQ ID NO: 39, en donde el anticuerpo de CGRP humano diseñado se une a CGRP humano. La presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una LCVR y una HCVR en donde LCDR1 es SEQ ID NO: 9, LCDR2 es SEQ ID NO: 7, LCDR3 es SEQ ID NO: 5, HCDR1 es SEQ ID NQ: 12, HCDR2 es SEQ ID NO: 15, y HCDR3 es SEQ ID NO: 39, en donde el anticuerpo de CGRP humano diseñado se une a CGRP humano.

La presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una LCVR y una HCVR en donde LCDR1 es RASX1X2IX3X4YLN (SEQ ID NO: 10), LCDR2 es YTSX5YHS (SEQ ID NO: 11), LCDR3 es QQGDALPPT(SEQ ID NO: 5) y HCDR1 es GYTFGNYWMQ (SEQ ID N0:12), HCDR2 es AIYEGTGX6TX7YIQKFAX8 (SEQ ID NO: 37), y HCDR3 es LSDYVSGFX9Y (SEQ ID NO: 38), en donde X, es Q, R, o K; X2 es D o P, X3 es D o S, X4 es N o K, X5 es G o E, X6 es K o D, X7 es V o R, X8 es D o G, y X9 es G o S, en donde el anticuerpo se une a CGRP humano.

En otra modalidad, la presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una región variable de cadena ligera (LCRV) y una región variable de cadena pesada (HCRV), en donde la LCVR comprende: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASX1X2IX3X4YLNWYQQKPGKAPKLLIY YTSX5YHSGVPSRFSGSGSGTDFTX6TISSLQPEDX7ATYYCQQGDALPPTF GX8GTKX9EIK en donde Xi es Q, K, o R; X2 es D o P; X3 es D o S; X4 es K o N; X5 es E o G; X6 es F o L; X7 es I o F; X8 es Q o G; y X9 es L o V. (SEQ ID NO: 42) y la HCVR comprende: QVQLVQSGAEVKKPGXiSVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEW MGAIYEGTGX2TX3YIQ FAX4RVTX5TX6DX7STSTX8YMELSSLRSEDTAVYY CARLSDYVSGFX9YWGQGTX10VTVSS, en donde X,= A o S; X2= K o D; X3=V o R; X4= G o D; X5= M o I; X6=R o A; X7=T o K; X8=V o A; X9=G o S; y Xi0=L o T. (SEQ ID NO: 43), en donde el anticuerpo se une a CGRP humano.

En otra modalidad, la presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) y una región variable de cadena pesada (HCVR), en donde LCVR y HCVR son secuencias de aminoácidos seleccionados del grupo que consta de: a. LCVR es SEQ ID NO: 17 y HCVR es SEQ ID NO: 22; b. LCVR es SEQ ID NO: 18 y HCVR es SEQ ID NO: 23; c. LCVR es SEQ ID NO: 19 y HCVR es SEQ ID NO: 24; d. LCVR es SEQ ID NO: 20 y HCVR es SEQ ID NO: 25; y e. LCVR es SEQ ID NO: 21 y HCVR es SEQ ID NO: 26.

La presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una LCVR de SEQ ID NO: 17 y una HCVR de SEQ ID NO: 22. En una modalidad preferida, La presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una LCVR de SEQ ID NO: 18 y una HCVR de SEQ ID NO: 23. La presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una LCVR de SEQ ID NO: 19 y una HCVR de SEQ ID NO: 24. La presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una LCVR de SEQ ID NO: 20 y una HCVR de SEQ ID NO: 25. La presente invención provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una LCVR de SEQ ID NO: 21 y una HCVR de SEQ ID NO: 26.

La presente invención también provee un anticuerpo de CGRP humano diseñado que comprende una cadena ligera (LC) y una cadena pesada (HC), en donde las secuencias de aminoácidos de LC y HC se seleccionan del grupo que consta de: a) LC es SEQ ID NO: 27 y HC es SEQ ID NO: 32; b) LC es SEQ ID NO: 28 y HC es SEQ ID NO: 33; c) LC es SEQ ID NO: 29 y HC es SEQ ID NO: 34; d) LC es SEQ ID NO: 30 y HC es SEQ ID NO: 35; y e) LC es SEQ OD NO: 31 y HC es SEQ ID NO: 36.

En una modalidad, el anticuerpo de CGRP humano diseñado comprende una LC de SEQ ID NO: 27 y una HC de SEQ ID NO: 32. En otra modalidad, el anticuerpo de CGRP humano diseñado comprende una LC de SEQ ID NO: 28 y una HC de SEQ ID NO: 33. En otra modalidad, el anticuerpo de CGRP humano diseñado comprende una LC de SEQ ID NO: 29 y una HC de SEQ ID NO: 34. En otra modalidad, el anticuerpo de CGRP humano diseñado comprende una LC de SEQ ID NO: 30 y una HC de SEQ ID NO: 35. En otra modalidad, el anticuerpo de CGRP humano diseñado comprende una LC de SEQ ID NO: 31 y una HC de SEQ ID NO: 36. En otra modalidad, el anticuerpo de CGRP humano diseñado comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas en donde cada secuencia de aminoácidos de LC es SEQ ID NO: 27 y cada secuencia de aminoácidos de HC es SEQ ID NO: 32. En una modalidad, el anticuerpo de CGRP humano diseñado comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas en donde cada secuencia de aminoácidos de LC es SEQ ID NO: 28 y cada secuencia de aminoácidos de HC es SEQ ID NO: 33. En una modalidad, el anticuerpo de CGRP humano diseñado comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas en donde cada secuencia de aminoácidos de LC es SEQ ID NO: 29 y cada secuencia de aminoácidos de HC es SEQ ID NO: 34. En una modalidad, el anticuerpo de CGRP humano diseñado comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas en donde cada secuencia de aminoácidos de LC es SEQ ID NO: 30 y cada secuencia de aminoácidos de HC es SEQ I D NO: 35. En una modalidad, el anticuerpo de CG RP humano diseñado comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas en donde cada secuencia de aminoácidos de LC es SEQ I D NO: 31 y cada secuencia de aminoácidos de HC es SEQ I D NO: 36. La presente invención también provee un fragmento de unión a antígeno de los anticuerpos descritos aquí.

La presente invención también provee anticuerpos de CGRP diseñados humanos que tienen una IC50 < 1 .0 nM en un ensayo esencialmente como se describe en el ejemplo 4. En una modalidad, la presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una LCVR y una HCVR en donde LCDR1 es SEQ I D NO: 6, LCDR2 es SEQ I D NO: 7, LCDR3 es SEQ ID NO: 5, HCDR 1 es SEQ I D NO: 1 2, HCDR2 es SEQ I D NO: 16, y HCDR3 es SEQ I D NO: 39, y en donde el anticuerpo de CGRP diseñado humano se une a CGRP humano y también tiene una IC50 < 1 .0 nM en un ensayo esencialmente como se describe en el ejemplo 4. En una modalidad, la presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una secuencia de aminoácidos de LCVR de SEQ I D NO: 1 9 y una secuencia de aminoácidos HCVR de SEQ I D NO: 24, en donde el anticuerpo de CGRP humano diseñado tiene una I C50 < 1 .0 nM en un ensayo esencialmente como se describe en el ejemplo 4. En una modalidad , la presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una secuencia de aminoácidos de LC de SEQ I D NO: 29 y una secuencia de aminoácidos de HC de SEQ I D NO: 34, en donde el anticuerpo CGRP humano diseñado tiene una IC50 < 1 .0 nM en un ensayo esencialmente como se describe en el ejemplo 4.

La presente invención también provee anticuerpos de CGRP diseñados humanos que tienen una I C50 < 0.5 nM en un ensayo esencialmente como se describe en el ejemplo 4. En una modalidad , la presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una LCVR y una HCVR en donde LCDR 1 es SEQ I D NO: 6, LCDR2 es SEQ ID NO: 7, LCDR3 es SEQ ID NO: 5, HCDR1 es SEQ I D NO: 1 2, HCDR2 es SEQ I D NO: 16, y HCDR3 es SEQ I D NO: 39, y en donde el anticuerpo de CGRP diseñado humano se une a CGRP humano y también tiene una I C50 < 0.5 nM en un ensayo esencialmente como se describe en el ejemplo 4. En una modalidad, la presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una secuencia de aminoácidos de LCVR de SEQ I D NO: 19 y una secuencia de aminoácidos HCVR de SEQ I D NO: 24, en donde el anticuerpo de CGRP humano diseñado tiene una I C50 < 0.5 nM en un ensayo esencialmente como se describe en el ejemplo 4. En una modalidad , la presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una secuencia de aminoácidos de LC de SEQ I D NO: 29 y una secuencia de aminoácidos de HC de SEQ I D NO: 34, en donde el anticuerpo CGRP humano diseñado tiene una IC50 < 0.5 nM en un ensayo esencialmente como se describe en el ejemplo 4.

La presente invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo de CGRP diseñado humano o fragmento de unión a antígeno del mismo de la presente invención y un portador farmacéuticamente aceptable, diluyente o excipiente. La presente invención provee además una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo de CGRP de la presente invención junto con un portador farmacéuticamente aceptable y opcionalmente otros ingredientes terapéuticos.

En un aspecto adicional, la presente invención provee un método para el tratamiento de dolor por osteoartritis que comprende la administración a un paciente que lo necesita de un anticuerpo de CGRP humano diseñado o su fragmento de unión a antigeno de la presente invención. En otro aspecto, la presente invención provee un método para el tratamiento de migrañas que comprende la administración a un paciente que lo necesita de un anticuerpo de CGRP diseñado humano o su fragmento de unión a antígeno de la presente invención.

La presente invención también proporciona un anticuerpo de CGRP diseñado humano o su fragmento de unión a antígeno de la presente invención para uso en la terapia. En otro aspecto, la presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano o su fragmento de unión a antígeno de la presente invención para el tratamiento de dolor por osteoartritis. En un aspecto adicional, la presente invención provee un anticuerpo de CGRP diseñado humano o su fragmento de unión a antígeno de la presente invención para el tratamiento de migrañas.

La presente invención también provee el uso de un anticuerpo de CGRP humano diseñado o su fragmento de unión a antígeno de la presente invención para uso en el tratamiento de dolor por osteoartritis. En otro aspecto, la presente invención también provee el uso de un anticuerpo de CGRP diseñado humano o su fragmento de unión a antígeno de la presente invención para uso en el tratamiento de migrañas. La presente invención también provee el uso de un anticuerpo de CGRP humano diseñado o fragmento de unión a antígeno del mismo en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de osteoartritis. La presente invención también provee el uso de un anticuerpo de CGRP humano diseñado o su fragmento de unión a antígeno en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de migrañas.

Un anticuerpo de longitud completa tal como existe en la naturaleza es una molécula de inmunoglobulina que comprende 2 cadenas pesadas (H) y 2 cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces disulfuro. La porción amino terminal de cada cadena incluye una región variable de aproximadamente 100-110 aminoácidos responsables primariamente del reconocimiento de antígeno vía las regiones determinantes de complementariedad (CDR) contenidas en esta. La porción carboxi-terminal de cada cadena define una región constante responsable primariamente de la función efectora.

Las CDR se esparcen con regiones que son más conservadas, denominadas regiones de marco (FR). La región variable de cadena ligera (LCVR) y la región variable de cadena pesada (HCVR) se compone de 3 CDR y 4 FR, dispuestas de amino-terminales a carboxi-terminales en el siguiente orden: FR1 , CDR 1 , FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Las 3 CDR de la cadena ligera se refieren como "LCDR1 , LCDR2, y LCDR3" y las 3 CDR de la cadena pesada son referidas como "HCDR1, HCDR2, y HCDR3." Las CDR contienen la mayoría de los residuos que forman interacciones específicas con el antígeno. La numeración y posicionamiento de residuos de aminoácidos CDR dentro de las regiones de LCVR y HCVR de acuerdo con la convención de numeración Kabat bien conocida.

Las cadenas ligeras se clasifican como kappa o lambda, y se caracterizan por una región constante particular como se conoce en la técnica. Las cadenas pesadas se clasifican como gamma, mu, alfa, delta o epsilon, y definen el isotipo de un anticuerpo como IgG, IgM, IgA, IgD, o IgE, respectivamente. Anticuerpos de IgG se pueden dividir además en sub-clases, por ejemplo, lgG1, lgG2, lgG3, lgG4. Cada tipo de cadena pesada se caracteriza por una región constante particular con una secuencia bien conocida en la técnica.

Como se usa en este documento, el término "anticuerpo monoclonal" (Mab) se refiere a un anticuerpo que se deriva de una copia sencilla o clon que incluye, por ejemplo, cualquier clon eucariótico, procariótico o fago, y no el método por el cual se produce. Mabs de la presente invención preferiblemente existen en una población homogénea o sustancialmente homogénea. Mabs completos contienen 2 cadenas pesadas y 2 cadenas ligeras. "Fragmentos de unión a antígeno" de dichos anticuerpos monoclonales incluyen, por ejemplo, fragmentos Fab, fragmentos Fab', fragmentos F(ab')2, y fragmentos Fv de cadena sencilla. Anticuerpos monoclonales y sus fragmentos de unión a antígeno de la presente invención se puede producir, por ejemplo, mediante tecnologías recombinantes, tecnologías de presentación de fago, tecnologías sintéticas, por ejemplo, injerto de CDR, o combinaciones de dichas tecnolog ías, u otras tecnolog ías conocidas en la técnica. Por ejemplo, los ratones se pueden inmunizar con CGRP humano o sus fragmentos, los anticuerpos resultantes se pueden recuperar y purificar, y la determinación de sí posee propiedades de unión y funcionales similares o lo mismo que los compuestos de anticuerpo descritos aquí se pueden valorar por los métodos descritos en los ejemplos de abajo. Los fragmentos de unión a antígeno también se pueden preparar por métodos convencionales. Métodos para producir y purificar anticuerpos y fragmentos de unión a antígeno se conocen bien en la técnica y se pueden encontrar, por ejemplo, en Harlow y Lañe (1988) Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, capítulos 5-8 y 1 5, I SBN 0-87969-314-2.

La frase "anticuerpos de CGRP humanos diseñados" se refiere a anticuerpos monoclonales creados y/o manipulados que tienen propiedades de unión y funcionales de acuerdo a la invención, se une a CGRP humano, y que tienen regiones de marco que son sustancialmente humanos o completamente humanos que rodean CDR derivadas de un anticuerpo no humano. "Fragmentos de unión a antígeno" de dichos anticuerpos diseñados humanos incluyen, por ejemplo, fragmentos Fab, fragmentos Fab', fragmentos F(ab')2 , y fragmentos Fv de cadena sencilla "región de marco" o "secuencia de marco" se refiere a cualquier región de marco 1 a 4. Anticuerpos humanos diseñados y fragmentos de unión a antígeno de los mismos incluidos por la presente invención incluyen moléculas en donde cualquiera una o más de regiones de marco 1 a 4 son sustancialmente humanos o completamente humanos, es decir, en donde cualquiera de las combinaciones posibles de regiones de marco sustancialmente humano o completamente humano 1 a 4, está presente. Por ejemplo, esto incluye moléculas en donde la región de marco 1 y región de marco 2, región de marco 1 y región de marco 3, región de marco 1 , 2, y 3, etc. son sustancialmente humanos o completamente humanos. Los marcos sustancialmente humanos son aquellos que tienen al menos aproximadamente 80% de identidad de secuencia a una secuencia de marco de línea germinal humano conocido. Preferiblemente, los marcos sustancialmente humanos tienen al menos aproximadamente 85%, aproximadamente 90%, aproximadamente 95%, o aproximadamente 99% de identidad de secuencia a una secuencia de marco de l ínea germinal humano conocido.

Los marcos humanos completamente son aquellos que son idénticos a una secuencia de marco de línea germinal humano conocido. La secuencia de marco de l ínea germinal humano se puede obtener de I mMunoGeneTics (IMGT) vía su sitio en la red http://imgt.cines.fr, o de The I mmunoglobulin FactsBook por Marie-Paule Lefranc y Gerard Lefranc, Academic Press, 2001 , ISBN 012441 351 . Por ejemplo, los marcos de cadena ligera de línea germinal se pueden seleccionar del grupo que consta de: A1 1 , A1 7, A1 8, A1 9, A20, A27, A30, L 1 , L11 , L 1 2, L2, L5, L15, L6, L8, 01 2, 02, y 08, y las regiones de marco de cadena pesada de línea germinal se pueden seleccionar del grupo que consta de: VH2-5, VH2-26, VH2-70, VH3-20, VH3-72, VH I-46, VH3-9, VH3-66, VH3-74, VH4-31 , VHI-1 8, VH I-69, VI-1 3-7, VH3-11 , VH3-1 5, VH3-21 , VH3-23, VH3-30, VH3-48, VH4-39, VH4-59, y VH5-51 .

Anticuerpos humanos diseñados además de aquellos descritos aquí que exhiben propiedades similares funcionales de acuerdo a la presente invención se pueden generar usando varios métodos diferentes. Los compuestos de anticuerpo específicos descritos aqu í se pueden usar como plantillas o compuestos de anticuerpo de origen para preparar compuestos de anticuerpo adicionales. En un método, las CDR del compuesto de anticuerpo de origen se injertan en un marco humano que tiene una identidad de secuencia alta con el marco de compuesto de anticuerpo de origen. La identidad de secuencia del nuevo marco generalmente será al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 85%, al menos aproximadamente 90%, al menos aproximadamente 95%, o al menos aproximadamente 99% idéntica a la secuencia del marco correspondiente en el compuesto de anticuerpo de origen. Este injerto puede resultar en una reducción en afinidad de unión en comparación con aquel del anticuerpo de origen. Si este es el caso, el marco se puede retro-mutar al marco de origen en ciertas posiciones basadas en criterios específicos descritos por Queen et al. ( 1991 ) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 88:2869. Referencias adicionales que describen métodos útiles en anticuerpos de ratón humanizantes incluyen Patente de E. U .A. Nos. 4,816,397; 5,225, 539, y 5,693,761 ; programas de computadora ABMOD y ENCAD como se describe en Levitt (1 983) J. Mol. Biol. 168: 595-620; y el método de Winter y colaboradores (Jones et al. ( 1 986) Nature 321 : 522-525; Riechmann et al. ( 1988) Nature 332: 323-327; y Verhoeyen et al. ( 1 988) Science 239: 1 534-1536.

La identificación de residuos para considerar la retro-mutación se puede realizar como sigue: Cuando un aminoácido se encuentra bajo la siguiente categoría, el aminoácido del marco de la secuencia de línea germinal humana que se usa (el "marco aceptor") se reemplaza por un aminoácido de marco de un marco del compuesto de anticuerpo de origen (el "marco donador"): (a) el aminoácido en la región de marco humano del marco aceptor es inusual para los marcos humanos en esa posición, mientras que el aminoácido correspondiente en la inmunoglobulina donadora es típica para los marcos humanos en esa posición; (b) la posición del aminoácido es inmediatamente adyacente a una de las CDR; o (c) cualquier átomo de cadena lateral de un aminoácido de marco está dentro de aproximadamente 5-6 angstroms (centro a centro) de cualquier átomo de un aminoácido de CDR en un modelo de inmunoglobulina tridimensional.

Cuando cada uno de los aminoácidos en la región de marco humano del marco aceptor y un aminoácido correspondiente en el marco donador es generalmente inusual para marcos humanos en esta posición, dicho aminoácido se puede reemplazar por un aminoácido usual para marcos humanos en esta posición. Este criterio de retro- mutación permite a uno recuperar la actividad del compuesto de anticuerpo de origen .

Otro método para generar anticuerpos diseñados humanos que exhiben propiedades funcionales similares a los compuestos de anticuerpos descritos aquí involucra aminoácidos de mutación aleatoria dentro de CDR injertadas sin cambiar el marco, y clasificando las moléculas resultantes para afinidad de unión y otras propiedades funcionales que son tan buenas o mejores que aquellos de los compuestos de anticuerpo de origen. Mutaciones sencillas también se pueden introducir en cada posición de aminoácido dentro de cada CDR, seguido por la valoración de los efectos de dichas mutaciones en afinidad de unión y otras propiedades funcionales. Mutaciones sencillas que producen propiedades mejoradas se pueden combinar para valorar sus efectos en combinación una con otra .

Además, una combinación de los métodos anteriores es posible. Después del injerto de CDR, unas regiones de marco específicas retro-mutadas además introducen cambios de aminoácido en las CDR. Esta metodología se describe en Wu et al . (1 999) J. Mol . Biol. 294: 1 51 -162.

Al aplicar las enseñanzas de la presente invención, una persona con experiencia en la técnica puede usar técnicas comunes, por ejemplo, mutagénesis dirigida de sitio, para sustituir aminoácidos dentro de las CDR descritas actualmente y secuencias de marco y con lo cual generan secuencias de aminoácido de región variable adicionales derivadas de las secuencias presentes. Todos los aminoácidos de origen natural alternativos se pueden introducir a un sitio de sustitución específico. Los métodos descritos aquí después se pueden usar para clasificar estas secuencias de aminoácido de región variable adicionales para identificar secuencias que tienen funciones in vivo indicadas. En esta manera, secuencias adicionales para preparar anticuerpos diseñados humanos y sus porciones de unión a antígeno de acuerdo con la presente invención se pueden identificar. Preferiblemente, la sustitución de aminoácido dentro de los marcos se restringe a uno, dos o tres posiciones dentro de uno o más de las 4 regiones de marco de cadenas ligeras y/o pesadas descritas aquí. Preferiblemente, sustitución de aminoácido dentro de las CDR se restringe a uno, dos o tres posiciones dentro de cualquiera de uno o más de las 3 CDR de cadena pesada y/o cadena ligera. Combinaciones de varios cambios dentro de estas regiones de marco y CDR se describen anteriormente son también posibles.

El término "que trata" (o "trata" o "tratamiento") se refiere al procedimiento que involucra una disminución, interrupción, detención, control, paro, reducción, o inversión de la progresión o severidad de un síntoma, trastorno, condición o enfermedad, pero no necesariamente involucra una eliminación total de los síntomas, condiciones o trastornos relacionados con la enfermedad asociados con actividad CGRP.

El término "migraña(s)" como se usa aquí se refiere a "migrañas sin aura" (antes conocida como "migraña común") y "migrañas con aura" (antes "migraña clásica") de acuerdo al Comité de Clasificación de Dolor de Cabeza de la Sociedad de Dolor de Cabeza Internacional (International Headache Society, 2004). Por ejemplo, "migrañas sin aura", normalmente se puede caracterizar por tener una calidad de pulsación, una intensidad moderada o severa, se agravan por actividad física de rutina, se localizan unilateralmente y se asocian con nausea y con fotofobia y fonofobia. "Migrañas con aura" pueden incluir disturbios en la visión, disturbios en otros sentidos, debilidad unilateral, y en algunos casos dificultad al hablar.

Los anticuerpos diseñados humanos de la presente invención se pueden usar como medicamentos en medicina humana, administrados por una variedad de rutas. Más preferiblemente, dichas composiciones son para administración parenteral. Dichas composiciones farmacéuticas se pueden preparar por métodos bien conocidos en la técnica (Véase, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19th ed. (1995), A. Gennaro et al., Mack Publishing Co.) y comprenden un anticuerpo diseñado humano como se describe aquí, y un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

Los resultados de los siguientes ensayos demuestran que los anticuerpos monoclonales ejemplificados y sus fragmentos de unión a antígeno de la presente invención se pueden usar para tratar dolor de osteoartritis.

Ejemplo 1 Producción de anticuerpos Anticuerpos l-V se pueden producir y purificar como sigue.

Una célula huésped apropiada, tal como HEK 293 EBNA o CHO, de transfecta de manera transitoria o estable con un sistema de expresión para anticuerpos de secreción usando una relación de vector HC: LC predeterminado óptimo o un sistema de vector sencillo que codifica LC, tal como SEQ I D NO: 27, SEQ I D NO: 28, SEQ I D NO: 29, SEQ I D NO: 30, o SEQ I D NO: 31 , y HC, tal como SEQ I D NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ I D NO: 34, SEQ ID NO: 35 O SEQ ID NO: 36. Medio clarificado, en que el anticuerpo se ha secretado, se purifica usando cualquiera de muchas técnicas usadas comúnmente. Por ejemplo, el medio se puede aplicar convenientemente a una columna FF de sefarosa de proteína A o G que se ha equilibrado con un amortiguador compatible, tal como solución salina regulada de pH de fosfato (pH 7.4). La columna se lava para remover componentes de unión no específica. El anticuerpo unido se eluye, por ejemplo, por gradiente de pH (tal como amortiguador de fosfato de sodio 0.1 M pH 6.8 a amortiguador de citrato de sodio 0.1 M pH 3.0). Se detectan fracciones de anticuerpo, tal como por SDS-PAGE, y después se agrupan . Purificación adicional es opcional, dependiendo del uso destinado. El anticuerpo se puede concentrar y/o filtrar estéril usando técnicas comunes. Agregados solubles y multímeros se pueden remover efectivamente por técnicas comunes, que incluyen exclusión de tamaño, interacción hidrófoba, intercambio iónico, o cromatografía hidroxiapatita. La pureza del anticuerpo después de estas etapas de cromatografía es mayor de 99%: El producto se puede congelar inmediatamente a -70°C o se puede liofilizar. Las secuencias de aminoácido de estos anticuerpos ejemplificados se proveen posteriormente.

Tabla 1 SEQ I D NOS de anticuerpo Ejemplo 2 Mediciones de afinidad (Kd) para anticuerpos CGRP diseñados humanos Afinidad de unión de anticuerpos ejemplificados a CGRP se determina usando un ensayo de resonancia de plasmón superficial en un instrumento T100 Biacore impreso con HBS-EP+ (GE Healthcare, 10 mM de Hepes pH 7.4 + 1 50 mM de NaCI + 3 mM de EDTA + 0.05% de agente surfactante P20) amortiguador de corrida y temperatura de análisis establecida a 37°C. Un chip CM5 que contiene proteína A inmovilizada (generada usando acoplamiento de amina NHS-EDC estándar) en las cuatro células de flujo (Fe) se usa para emplear una metodolog ía de captura. Muestras de anticuerpo se preparan en 2 µg/ml mediante dilución en amortiguador de corrida . Muestras de CGRP humano se preparan en concentraciones finales de 5.0, 2.5, 1 .3, 0.63, 0.31 y 0 (blanco) nM mediante dilución en amortiguador de corrida. Una alícuota de uso sencillo, fresco de CGRP se usa para cada experimento de replica para evitar ciclos de congelación-descongelación múltiples. Cada ciclo de análisis consiste de (1 ) capturar muestras de anticuerpo en células de flujo separado (Fc2, Fc3 y Fc4), (2) inyección de 350 µ? (21 0-seg) de CGRP sobre todo el Fe a 1 00 µ?/min, (3) regresar a un flujo de amortiguador durante 10 minutos para monitorear la fase de disociación, (4) regeneración de superficies del chip con 5 µ? ( 1 5-seg) de inyección de glicina, pH 1 .5, (5) equilibrio de superficies de chip con 5 µ? ( 1 5 seg) de inyección de H BS-EP+. Cada concentración de CGRP se inyecta en duplicado. Los datos se procesan usando referencias dobles estándar en ajuste a un modelo de unión 1 : 1 usando software de evaluación Biacore T1 00, versión 2.0.1 , para determinar la velocidad de asociación (Kon, unidades M" s1 ), velocidad de disociación (unidades Koff, s" 1), y Rmax (unidades RU). La constante de disociación de equilibrio (KD) se calcula como de la relación KD= Koff/Kon y es en unidades molares. Los valores provistos en la tabla 2 son medios de n números de experimentos. La tabla 2 demuestra que los anticuerpos ejemplificados de la presente invención unidos a CGRP con afinidades <200 pM.

Tabla 2 Afinidades de unión de anticuerpo Ejemplo 3 Reducción de dolor en un modelo MIA La inyección de ácido monoyodoacético (MIA) en la articulación de rodilla de ratas produce una lesión inflamatoria aguda que después se desarrolla en degeneración crónica de los tejidos de articulación en la articulación inyectada. El dolor que resulta de la lesión de la articulación se puede medir vía peso diferencial que porta las patas traseras usando un analizador de incapacidad . El modelo MIA se ha descrito bien en la literatura y se ha usado para demostrar eficacia contra dolor por una variedad de mecanismos y compuestos. La eficacia se mide de manera rutinaria por la capacidad de un compuesto de normalizar parcialmente la distribución de peso.

Para determinar la capacidad de anticuerpos ejemplificados de la presente invención para reducir el dolor, ratas Lewis macho (Harían, Indianapolis, I N) de aproximadamente ocho semanas de edad en el tiempo de la inyección de MIA se usan. Las ratas se alojan en grupos de dos o tres por jaula y se mantienen en una temperatura constante y en un ciclo de 1 2 horas luz/12 horas oscuridad. Los animales tienen libre acceso a alimento y agua en todas las veces excepto durante la colección de datos. Todos los experimentos se llevan a cabo de acuerdo con protocolos aprobados por el comité institucional de cuidado y usos de animales de Eli Lilly.

Las rodillas derechas de cada rata se inyectan con 0.3 mg de MIA en 50 µ? de solución salina y las rodillas izquierdas con 50 µ? de solución salina en el día 0. En un día establecido post MIA, control de lgG4 humano o anticuerpo CGRP de prueba se administran subcutáneamente en PBS (n= 6 por grupo. Tres días post dosificación con anticuerpo CGRP de prueba, el dolor se mide usando análisis de incapacidad que mide la diferencia en peso de pata trasera que porta entre las rodillas inyectadas tratadas con MIA y con solución salina. Cada medición es el promedio de tres mediciones separadas cada una medida sobre 1 segundo.

Los datos se presentan como por ciento de inhibición de dolor calculado al dividir la media del grupo tratado con anticuerpo CGRP por la medio del grupo de anticuerpo de control, que sustrae este valor de 1 y multiplica este valor resultante por 100. Grupos tratados con CGRP también se comparan a grupos vehículo por un análisis de manera de medios de la prueba de Dunnett que usa programa de análisis estadísticos JMP (versiones 5.1 y 6) (SAS Institute Inc., Cary, NC). Se consideran diferencias que son significantes si el valor de P es menos de 0.05. Como se muestra en la tabla 3, los datos demuestran que los anticuerpos CGRP ejemplificados de la presente invención reducen significantemente el dolor.

Tabla 3 Por ciento de inhibición de dolor inducido por MIA Ejemplo 4 Inhibición de formación de cAMP inducido por CGRP en células SK-N-MC Para comparar la capacidad de un anticuerpo de la presente invención al anticuerpo G1 (LCVR-SEQ I D NO: 40 y HCVR- SEQ I D NO: 41 ), inhibición de formación de cAM P inducido por CGRP en SK-N-MC se determina. La unión de CGRP a su receptor resulta en la estimulación de producción de cAMP. El receptor CGRP es un complejo hetero-trimérico que consiste del receptor tipo el receptor de calcitonina (CLR, un receptor acoplado a G-proteína) y proteína de modificación de actividad del receptor (RAM P)-1 , acoplada citoplásmicamente a la proteína del componente del receptor (RCP) . La línea celular de neuroepitelioma humana SK-N-MC que expresa estas 3 moléculas naturalmente y pueden por lo tanto ser usada para valorar el efecto de CGRP o eventos de traducción de señal. La producción de cAMP es una medida estándar para activación del receptor acoplado de proteína G.

Células SK-N-MC se cultivan en MEM, que contiene 10% de FBS, aminoácidos no esenciales MEM 1X, piruvato de sodio MEM 1 X 100 nM, 1X Pen/Strep, y 2 mM de L-glutamina. Después de la colección, las células se lavan una vez y se resuspenden en amortiguador de ensayo (amortiguador de estimulación (HBSS con Mg y Ca, 5 mM de HEPES, 0.1% de BSA, 100 µ?t? de ácido ascórbico) diluido con 1:2 con PBS de Dulbecco que contiene una concentración final de 0.5 mM de IBMX) y se coloca en placas de 96 pozos a 15,000 células por pozo. Anticuerpo de prueba o un anticuerpo lgG4 humano de control se añade (diluciones 4 veces serial en amortiguador de ensayo), 10 concentraciones) a las células, seguido por una cantidad fija de a-CGRP humano (2 nM; Bachem H1470). Las placas se incuban durante 1 hora a temperatura ambiente. Los niveles de cAMP se miden por sistema de ensayo de fluorescencia resuelto de tiempo heterogéneo (HTRF) (Cisbio).

La cantidad de cAMP inducida por 2nM CGRP humano en la presencia de variación de concentraciones de anticuerpo se calcula como un porcentaje de inhibición comparado con CGRP solo. La concentración de anticuerpo que produce 50% de inhibición de producción de cAMP (IC50) después se calcula de un modelo de ajuste de curva de parámetro 4. Siguiendo los procedimientos como se describen aquí, el anticuerpo III (IC5o de 0.41 nM) inhibe la cantidad de cAMP inducido por CGRP a un grado mucho mayor que el anticuerpo G1 (IC50 de 5.36 nM).

Ejemplo 5 Modelo de extravasación de proteína de plasma de rata dural El modelo de PPE de rata es un modelo pre-clínico bien establecido que se pueden usar para evaluar la eficacia de anticuerpos anti-CGRP para el tratamiento de migraña.

Una solución 2 mg/ml de un anticuerpo anti-CGRP (Ab) se prepara en solución salina. Todas las diluciones posteriores se hacen con salina. Una solución 2 mg/ml de anticuerpo de control de isotipo monoclonal (IgG) también se prepara en salina.

Ratas Sprague-Dawley de Harían Laboratories (250 a 350 g) se anestesian con Nembutal (60 mg/kg, ip) y se colocan en un marco esterotáxico (David Kopf I nstruments) con la barra incisiva ajustada a -2.5 mm. Siguiendo una incisión en el cuero cabelludo sagital de línea media, dos pares de orificios bilaterales se perforan a través del cráneo (3.2 mm posteriormente, 1 .8 y 3.8 mm lateralmente, todas las coordenadas referenciadas a bregma) . Pares de electrodos de estimulación de acero inoxidable (Rhodes Medical Systems Inc), aislados excepto en las puntas, son bajadas a través de los orificios en ambas hemisferios a una profundidad de 9.2 mm debajo de la dura. Los anticuerpos de prueba o vehículo salino se administran intravenosamente vía la vena femoral ( 1 ml/kg). Ocho minutos después una solución de albúmina de suero bovino marcado con tinta de isotiocianato de fluoresceína (FITC) (BSA) (FITC-BSA, Sigma A9771 ) (20 mg/kg, iv) se inyecta en la vena femoral para funcionar como un marcador para extravasación de proteína. Diez m inutos después de la dosificación con anticuerpos de prueba o vehículo, el ganglio trigeminal izquierdo se estimula durante 5 minutos en una intensidad de corriente de 1.0 mA (5 Hz, 5 ms de duración) con un estimulador Grass Instrument Modelo S48. Cinco minutos después de la estimulación, las ratas se asesinan por desangrado con 40 mi de salina. El desangrado también enjuaga FITC/BSA residual fuera de los vasos sanguíneos. La parte superior del cráneo se retira para colectar las membranas durales. Las muestras de membrana se retiran de ambos hemisferios, se enjuagan con agua, y se dispersan planos en portaobjetos de microscopio. Los portaobjetos se secan durante 15 minutos en un calentador de portaobjetos y cubre-portaobjetos con una solución glicerol/agua 70% Un microscopio de fluorescencia (Zeiss) equipado con un monocromador de parrilla y un espectrofotómetro se usan para cuantificar la cantidad de tinta FITC-BSA en cada muestra dural. El microscopio se equipa con una interfase de atapa motorizada con una computadora personal. Esto facilita el movimiento controlado por computadora de la etapa, con mediciones de fluorescencia en 25 puntos (500 µ?? extravasación inducida por estimulación eléctrica del ganglio trigeminal es un efecto ipsilateral (es decir, ocurre solo en el lado de la dura en donde el ganglio trigeminal se estimula). Esto permite que la otra mitad (no estimulada) de la dura se pueda usar como un control. La relación e extravasación (es decir, la relación de la cantidad de extravasación en la dura del lado estimulado comparado al lado estimulado) se calcula.

SECUENCIAS ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKNNFVPTNVGSKAF (SEQ ID NO:1) ACNTATCVTHRLAGLLSRSGGMVKSNFVPTNVGSKAF (SEQ ID NO:2) X2 es D o P; X3 es D o S; X4 es N o K; y X5 es G o E.

X6 es K o D; X7 es V o R; X8 es D o G; y X9 es G o S.

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIDNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYT SEYHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQGPALPPTFGQGT KLEIK (SEQ ID NO:.17) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQD.IDNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYT SEYHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQGDALPPTFGQGT KLEIK (SEQ ID NO: 18) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASKDISKYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTS GYHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDALPPTFGGGT KVEIK (SEQ ID NO: 19) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPIDKYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTS EYHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQGDALPPTFGQGTK LEIK (SEQ ID NO: 20) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIDKYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTS GYHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDALPPTFGGGT KVEIK (SEQ ID NO: 21) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGDTRYIQKFAGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARL SDYVSGFSYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 22) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGKTVYIQKFAGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARL SDYVSGFSYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 23) QVQLVQSGAEVKKPGSSV VSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGKTVYIQKFADRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLS DYVSGFGYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 24) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGKTVYIQKFAGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARL SDYVSGFGYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 25) QVQLVQSGAEVKKPGSSV VSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGKTVYIQKFAGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLS DYVSGFGYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 26) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIDNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYT SEYHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQGDALPPTFGQGT KLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNAL QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSP VTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 27) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIDNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYT SEYHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQGDALPPTFGQGT KLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNAL QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSP VTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 28) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASKDISKYLNWYQQKPGKAPKLLI YYTS GYHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDALPPTFGGGT KVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSP VTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 29) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASRPIDKYLNWYQQKPGKAPKLLI YYTS EYHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQGDALPPTFGQGTK LEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNAL QSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSP VTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 30) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIDKYLNWYQQKPGKAPKLLI YYTS GYHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDALPPTFGGGT KVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNA LQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSP VTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 31) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGDTRYIQKFAGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARL SDYVSGFSYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY TCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID NO: 32) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGKTVYIQKFAGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARL SDYVSGFSYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY TCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKA GQPREPQVYTLP PSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID NO: 33) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGKTVYIQKFADRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLS DYVSGFGYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYT CNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRV VSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEE TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGKTVYIQKFAGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARL SDYVSGFGYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVK DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTY TCNVDHKPSNTKVDKRVE5KYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID NO: 35) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEWM GAIYEGTGKTVYIQKFAGRVTITAD STSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARLS DYVSGFGYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKD YFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYT CNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTL I SRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRV VSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID NO: 36) EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCKASKRVTTYVSWYQQKPGQAPRLLIYGA SNRYLGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCSQSYNYPYTFGQGT KLEIK (SEQ ID NO: 40) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWISWVRQAPGKGLEWVA EIRSESDASATHYAEAVKGRFTISRDNAKNSLYLQM SLRAEDTAVYYCLA YFDYGLAIQNYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 41) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASX1 X2IX3X4YLNWYQQKPGKAPKLLI YYTSX5YHSGVPSRFSGSGSGTDFTX6TISSLQPEDX7ATYYCQQGDALPP TFGX8GTKX9EIK X1= Q, K, o R; X2= D o P; X3 D o S; X4= K o N; X5= E o G; X6= F o L; X7= I o F; X8= Q o G; y X9= L o V. (SEQ ID NO: 42) QVQLVQSGAEVKKPGX1 SVKVSCKASGYTFGNYWMQWVRQAPGQGLEW MGAIYEGTGX2TX3YIQKFAX4RVTX5TX6DX7STSTX8YMELSSLRSEDTA VYYCARLSDYVSGFX9YWGQGTX10VTVSS X1= A o S; X2= K o D; X3=V o R; X4= G o D; X5= M o l; X6=R o A; X7=T o K; X8=V o A; X9=G o S; y X10=L o T. (SEQ ID NO: 43)

Claims

REIVINDICACIONES

1.- Un anticuerpo de CGRP diseñado humano que comprende una región variable de cadena ligera (LCVR) y una región variable de cadena pesada (HCVR), en donde dicha LCVR comprende secuencias de aminoácido LCDR1, LCDR2, LCDR3 y HCVR comprende secuencias de aminoácido HCDR1, HCDR2, HCDR3, en donde LCDR1 es SEQ ID NO: 10, LCDR2 es SEQ ID NO: 11, LCDR3 es SEQ ID NO: 5 HCDR1 es SEQ ID NO: 12, HCDR2 es SEQ ID NO: 37y HCDR3 es SEQ ID NO: 38, én donde el anticuerpo CGRP humano une a CGRP humano.

2 - El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque LCDR1 es RASQDIDNYLN (SEQ ID NO: 3), LCDR2 es YTSEYHS (SEQ ID NO: 4), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 es GYTFGNYWMQ (SEQ ID NO: 12), HCDR2 es AIYEGTGDTRYIQKFAG (SEQ ID NO: 13), y HCDR3 es LSDYVSGFSY (SEQ ID NO: 14).

3. - El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque LCDR1 es RASQDIDNYLN (SEQ ID NO: 3), LCDR2 es YTSEYHS (SEQ ID NO: 4), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 es GYTFGNYWMQ (SEQ ID NO: 12), HCDR2 es AIYEGTGKTVYIQKFAG (SEQ ID NO: 15), y HCDR3 es LSDYVSGFSY (SEQ ID NO: 14).

4. - El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque LCDR1 es RASKDISKYLN (SEQ ID NO: 6), LCDR2 es YTSGYHS (SEQ ID NO: 7), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 es GYTFGNYWMQ (SEQ ID NO: 12), HCDR2 es AIYEGTGKTVYIQKFAD (SEQ ID NO: 16), y HCDR3 es LSDYVSGFGY (SEQ ID NO: 39).

5.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque LCDR1 es RASRPIDKYLN (SEQ ID NO: 8), LCDR2 es YTSEYHS (SEQ ID NO: 4), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 es GYTFGNYWMQ (SEQ ID NO: 12), HCDR2 es AIYEGTGKTVYIQKFAG (SEQ ID NO: 15), y HCDR3 es LSDYVSGFGY (SEQ ID NO: 39).

6.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque LCDR1 es RASQDIDKYLN (SEQ ID NO: 9), LCDR2 es YTSGYHS (SEQ ID NO: 7), LCDR3 es QQGDALPPT (SEQ ID NO: 5), HCDR1 es GYTFGNYWMQ (SEQ ID NO: 12), HCDR2 es AIYEGTGKTVYIQKFAG (SEQ ID NO: 15), y HCDR3 es LSDYVSGFGY (SEQ ID NO: 39).

7.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la secuencia de aminoácido de LCVR es SEQ ID NO: 42 y la secuencia de aminoácido de HCVR es SEQ ID NO: 43.

8.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la secuencia de aminoácido de LCVR es SEQ ID NO: 17 y la secuencia de aminoácido de HCVR es SEQ ID NO: 22.

9.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque la secuencia de aminoácido de LCVR es SEQ ID NO: 18 y la secuencia de aminoácido de HCVR es SEQ ID NO: 23.

10. - El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque la secuencia de aminoácido de LCVR es SEQ ID NO: 19 y la secuencia de aminoácido de HCVR es SEQ ID NO: 24.

11. - El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque la secuencia de aminoácido de LCVR es SEQ ID NO: 20 y la secuencia de aminoácido de HCVR es SEQ ID NO: 25.

12. - El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque la secuencia de aminoácido de LCVR es SEQ ID NO: 21 y la secuencia de aminoácido de HCVR es SEQ ID NO: 26.

13.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende una cadena ligera y una cadena pesada, en donde la secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ ID NO: 27 y la secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ ID NO: 32.

14.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende una cadena ligera y una cadena pesada, en donde la secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ ID NO: 28 y la secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ ID NO: 33.

15.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1 0, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende una cadena ligera y una cadena pesada, en donde la secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ I D NO: 29 y la secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ I D NO: 34.

16.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1 1 , caracterizado porque dicho anticuerpo comprende una cadena ligera y una cadena pesada, en donde la secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ I D NO: 30 y la secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ ID NO. 35.

17.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1 2, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende una cadena ligera y una cadena pesada, en donde la secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ I D NO: 31 y la secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ I D NO: 36.

1 8.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 1 3, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas, en donde cada secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ I D NO: 27 y cada secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ I D NO: 32.

1 9.- El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas, en donde cada secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ I D NO: 28 y cada secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ I D NO: 33.

20. - El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas, en donde cada secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ ID NO: 29 y cada secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ ID NO: 34.

21. - El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas, en donde cada secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ ID NO: 30 y cada secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ ID NO: 35.

22. - El anticuerpo de CGRP diseñado humano de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas, en donde cada secuencia de aminoácido de cadena ligera es SEQ ID NO: 31 y cada secuencia de aminoácido de cadena pesada es SEQ ID NO: 36.

23.- Una composición farmacéutica, que comprende el anticuerpo CGRP diseñado humano de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-22 y un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

24.- Un método para tratar dolor de osteoartritis, que comprende administrar a un paciente humano en necesidad del mismo el anticuerpo CGRP diseñado humano de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -22.

25.- El anticuerpo CGRP diseñado humano de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -22, para uso en terapia.

26.- El anticuerpo CGRP diseñado humano de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -22, para uso en el tratamiento de dolor de osteoartritis.

27. - El uso de un anticuerpo CGRP diseñado humano de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -22 para uso en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de dolor de osteoartritis.

28. - Un método para el tratamiento de migrañas que comprende la administración a un paciente humano en necesidad del mismo el anticuerpo CGRP diseñado humano de cualquiera de las reivindicaciones 1 -22.

29. - El anticuerpo CGRP diseñado humano de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -22, para uso en el tratamiento de migrañas.

30. - El uso de un anticuerpo CGRP diseñado humano de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -22 para uso en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de migrañas.

31 . - Un fragmento de unión a antígeno del anticuerpo CGRP humano diseñado de cualquiera de las reivindicaciones 1 -22 o 25-28. RES U M E N La presente invención provee un anticuerpo de péptido relacionado con gen de calcitonina diseñado humano (CGRP) o su fragmento de unión a antígeno. Además, la presente invención provee el uso de anticuerpos de péptido relacionados con gene de calcitonina diseñado humano (CGRP) o su fragmento de unión a antigeno para el tratamiento de dolor de osteoartritis.