KR980002265A - 신규한 플라스미드 pKLE와 이를 이용한 리파제의 대량생산방법 - Google Patents

신규한 플라스미드 pKLE와 이를 이용한 리파제의 대량생산방법 Download PDF

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KR980002265A
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Abstract

본 발명은 신규한 플라스미드 pKLE와 이를 이용한 리파제의 대량생산방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 유전자 조작에 의해 제조된 신규한 재조합 벡터 pKLE을 이용하여 알카리 및 단백질 분해효소에 대한 내성이 강하고 용매안정성이 우수한 리파제를 대장균 세포내에서 다량 발현시키고 이를 활성이 있는 안정된 형태로 고수율로 분리정제하여 제조하는 방법에 관한 것이다.

Description

신규한 플라스미드 pKLE와 이를 이용한 리파제의 대량생산방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 본 발명에 따른 신규한 플라스미드 pKLE의 제조과정을 나타낸 도면이다.
제2도는 신규한 플라스미드 pKLE의 유전자 지도이다.
제3도는 1% 아가로우즈 젤 전기영동법에 의해 pKLE를 확인한 분석사진이다.
제4도는 형질전환된 대장균을 배양하고 IPTG 처리후 시간에 따른 세포추출액의 SDS-PAGE 전기영동 분석 결과이다.
제7도는 생산된 리파제의 트리올레인 분해능을 관찰한 사진이다.

Claims (6)

  1. 리파제를 코우드하는 플라스미드 pKLE에 의해 E. coli에 형질전환된 신균주 BL21(DE3)/pKLE(기탁번호: KCTC 8742P).
  2. 제1항의 신균주 BL21(DE3)/pKLE를 배양시켜서 생성된 리파제 코우드로 된 재조합 단백질을 세포추출물로부터 분리하여 리파제 활성이 있는 형태로 전환시키고 정제하는 것을 특징으로 하는 리파제의 제조방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 신균주 BL21(DE3)/pKLE의 배양은 암피실린이 포함된 LB배지에서 IPTG로 단백질 생성을 유도시키는 증식조건에서 배양온도 37℃에서 리파제 재조합 단백질을 생산하는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제2항에 있어서, 상기 리파제 재조합 단백질을 원심분리하고 인산염 완충액으로 투석하고 양이온 교환수지를 통과시켜 리파제를 분리하는 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제4항에 있어서, 상기 양이온 교환수지로는 CM-세파로오즈 컬럼 및 리소스 SHR 5/5칼럼 크로마토그라피를 사용하는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 리파제가 대장균에서 발현되도록 연결된 DNA 서열을 함유하는 플라스미드 pKLE.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019960020320A 1996-06-07 1996-06-07 신규한 플라스미드 pKLE와 이를 이용한 리파제의 대량생산방법 KR0180570B1 (ko)

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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100405475B1 (ko) * 2000-12-06 2003-11-15 현대자동차주식회사 자동차용 시동 장치

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