KR20240051172A - 조합 의약 - Google Patents

조합 의약 Download PDF

Info

Publication number
KR20240051172A
KR20240051172A KR1020247008747A KR20247008747A KR20240051172A KR 20240051172 A KR20240051172 A KR 20240051172A KR 1020247008747 A KR1020247008747 A KR 1020247008747A KR 20247008747 A KR20247008747 A KR 20247008747A KR 20240051172 A KR20240051172 A KR 20240051172A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cell
cells
pharmaceutically acceptable
express
pharmaceutical composition
Prior art date
Application number
KR1020247008747A
Other languages
English (en)
Inventor
마사유키 소네
히로노리 마츠야마
게이스케 다즈루
요스케 고구에
히로키 아카미네
도시키 스도
Original Assignee
오츠카 세이야쿠 가부시키가이샤
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 오츠카 세이야쿠 가부시키가이샤 filed Critical 오츠카 세이야쿠 가부시키가이샤
Publication of KR20240051172A publication Critical patent/KR20240051172A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4613—Natural-killer cells [NK or NK-T]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4632—T-cell receptors [TCR]; antibody T-cell receptor constructs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
    • A61K39/464412—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464484—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A61K39/464488—NY-ESO
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

톨리나판트계 약제를 함유하는 의약 조성물을, 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 면역 세포를 함유하는 의약 조성물과 조합하여 투여하는 것이 개시된다.

Description

조합 의약
하기 식 (1):
로 표시되는 화합물(톨리나판트, IUPAC명: 1-[6-[(4-플루오로페닐)메틸]-5-(히드록시메틸)-3,3-디메틸-2H-피롤로[3,2-b]피리딘-1-일]-2-[(2R,5R)-5-메틸-2-[[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]메틸]피페라진-1-일]에타논), 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물(이하, 「톨리나판트계 약제」라고 칭함), 혹은, 개변 면역 세포를 함유하는 의약 조성물, 그리고, 거기에 관련하는 주제가 개시된다.
아포토시스 저해 단백질(IAP)은, 많은 악성 종양에서 과잉 발현되고, 종양 증식 등에 관여하고 있다. IAP 패밀리는 8개의 멤버, 즉 XIAP, cIAP1, cIAP2, NAIP, ILP2, ML-IAP, survivin(서바이빈) 및 BRUCE를 포함한다. IAP 패밀리의 멤버는 공통되고, 바큘로 바이러스 IAP 리피트(BIR) 도메인이라고 불리는, 약 70개의 아미노산으로 구성되는 아연 배위 도메인을 1 내지 3 카피 갖고 있다. BIR 도메인은 카스파아제 3, 7, 9 등의 카스파아제와 결합하고, 아포토시스를 저해하는 작용을 갖는다.
IAP 안타고니스트는, 카스파아제의 BIR 도메인에 대한 결합을 저해하여 아포토시스를 유도함으로써 종양을 치료할 수 있다. IAP 안타고니스트로서는, 톨리나판트(ASTX660) 등의 비펩티드 모방물 소분자 안타고니스트(예를 들어 특허문헌 1) 및 비리나판트, LCL161, AT406 등의 제2 미토콘드리아 유래 카스파아제 활성화 인자(SMAC) 모방물이 알려져 있다.
Figure pct00002
종양을 치료하기 위한 다른 어프로치로서, 유전자 개변 면역 세포를 사용한 양자 면역 요법이 알려져 있다.
예를 들어, 생체로부터 채취한 T 세포에 키메라 항원 수용체를 코드하는 핵산을 도입하고, 얻어진 T 세포를 체외에서 증식시켜서 수주하는 방법이 알려져 있다(예를 들어 특허문헌 2). 제1 세대의 키메라 항원 수용체는, 종양 세포의 표면 항원을 인식할 수 있는 단쇄 항체, 막 관통 도메인 및 T 세포를 활성화시키는 TCR 복합체 CD3ζ의 세포 내 시그널 전달 도메인으로 구성된다. 제1 세대의 키메라 항원 수용체의 T 세포 활성화를 증강하는 목적으로, T 세포의 공자극 분자인 CD28의 세포 내 시그널 전달 도메인을 연결한 제2 세대의 키메라 항원 수용체가 개발되어 있다. 또한, 종양 괴사 인자(TNF) 수용체 슈퍼 패밀리인 CD137(4-1BB) 또는 CD134(OX40) 유래의 세포 내 시그널 전달 도메인을 탠덤에 연결한 제3 세대의 키메라 항원 수용체도 개발되어 있다.
또한, 생체로부터 채취한 T 세포에, 특정한 항원을 인식할 수 있는 T 세포 수용체를 코드하는 핵산을 도입하고, 얻어진 T 세포를 체외에서 증식시켜서 주수하는 방법도 알려져 있다. T 세포 수용체를 코드하는 핵산으로서는, 예를 들어 gp100, MART-1, CEA, MAGE-A4, WT1, NY-ESO-1 등의 종양 항원을 표적으로 한 TCR 유전자가 알려져 있다.
국제 공개 제2015/092420호 국제 공개 제1993/019163호
본 개시는, 유전자 개변 면역 요법에 있어서의 치료 효과를 개선하는 것을 과제의 하나로 한다.
상기의 과제를 해결하기 위하여 예의 검토한 결과, 톨리나판트계 약제를 함유하는 의약 조성물을 개변 면역 세포와 조합하여 투여함으로써, 혹은, 개변 면역 세포를 함유하는 의약 조성물을 톨리나판트계 약제와 조합하여 투여함으로써, 효능이 현저하게 증대하고, 상승적 효과를 발휘하는 것을 알아냈다.
본 개시는, 대표적으로는, 하기의 양태를 포함한다.
항 1.
하기 식 (1):
로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물을 함유하는 의약 조성물(또는 약제, 의약, 혹은 IAP 저해제)이며, 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 면역 세포와 조합하여 투여되는, 상기 의약 조성물(또는 약제, 의약, 혹은 IAP 저해제).
항 1a.
상기 면역 세포의 투여 전, 동시, 또는 후에 투여되는, 항 1에 기재된 의약 조성물(또는 약제, 의약, 혹은 IAP 저해제).
항 2.
키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 면역 세포를 함유하는 의약 조성물이며, 하기 식 (1):
로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물과 조합하여 투여되는, 상기 의약 조성물.
항 2a.
상기 식 (1)로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물의 투여 전, 동시, 또는 후에 투여되는, 항 2에 기재된 의약 조성물.
항 3.
상기 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체가 CD19, 인테그린 β7 및 NY-ESO-1에서 선택되는 항원을 특이적으로 인식하는, 항 1 또는 2, 혹은, 항 1a 또는 2a에 기재된 의약 조성물.
항 4.
상기 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체가, 활성형 인테그린 β7을 특이적으로 인식하는, 항 1 또는 2, 혹은, 항 1a 또는 2a에 기재된 의약 조성물.
항 5.
상기 면역 세포가 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포 또는 NK 세포이고, 상기 키메라 항원 수용체가,
(1) 항원을 인식 가능한 세포 외 도메인,
(2) 막 관통 도메인,
(3) 공자극 분자의 세포 내 시그널 전달 도메인, 및
(4) CD3ζ의 세포 내 시그널 전달 도메인
을 함유하는, 항 1 내지 4, 1a 및 2a의 어느 것에 기재된 의약 조성물.
항 6.
상기 세포 외 도메인이 CD19 또는 인테그린 β7을 인식 가능한 세포 외 도메인인, 항 5에 기재된 의약 조성물.
항 7.
상기 막 관통 도메인이 CD28 또는 CD8의 막 관통 도메인인, 항 5 또는 6에 기재된 의약 조성물.
항 8.
상기 공자극 분자가 CD2, CD4, CD5, CD8α, CD8β, CD28, CD134(OX40), CD137(4-1BB), 또는 CD278(ICOS)인, 항 5 내지 7의 어느 것에 기재된 의약 조성물.
항 9.
상기 면역 세포가 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포 또는 NK 세포이고, 상기 재조합 T 세포 수용체가, NY-ESO-1을 인식 가능한 가변 도메인을 갖는, 항 1 또는 2, 혹은, 항 1a 또는 2a에 기재된 의약 조성물.
항 10.
상기 면역 세포가 CD19를 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포, 인테그린 β7을 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포, CD19를 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 NK 세포, 또는 NY-ESO-1을 특이적으로 인식하는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포인, 항 1 또는 2, 혹은, 항 1a 또는 2a에 기재된 의약 조성물.
항 11.
암을 예방 및/또는 치료하기 위한, 항 1 내지 10, 1a 및 2a의 어느 것에 기재된 의약 조성물.
항 12.
상기 식 (1)로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물이, 10mg 내지 180mg/일로 투여되는, 항 1 내지 11, 1a 및 2a의 어느 것에 기재된 의약 조성물.
항 12a.
상기 식 (1)로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물이, 단독으로 투여하는 경우의 투여량보다도 적은 양, 또는 단독으로는 유효하지 않은 양으로 투여되는, 항 1 내지 11, 1a 및 2a의 어느 것에 기재된 의약 조성물.
항 13.
상기 면역 세포가 1×103개 내지 1×108개(생세포수)/kg 체중/일로 투여되는, 항 1 내지 12, 1a, 2a 및 12a의 어느 것에 기재된 의약 조성물.
항 13a.
상기 면역 세포가 단독으로 투여하는 경우의 투여량보다도 적은 양, 또는 단독으로는 유효하지 않은 양으로 투여되는, 항 1 내지 12, 1a, 2a 및 12a의 어느 것에 기재된 의약 조성물.
항 14.
하기 식 (1):
로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물을 함유하는 제1제, 그리고, 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 면역 세포를 함유하는 제2제를 구비하는 키트.
항 14a.
상기 제1제 및 제2제는, 동일한 제제에 있고, 동시에 투여되는, 혹은 상기 제1제 및 제2제는, 다른 제제에 있고, 동시에, 따로따로, 또는 연속적으로 투여되는,
항 14에 기재된 키트.
항 14b.
상기 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체가 CD19, 인테그린 β7 및 NY-ESO-1에서 선택되는 항원을 특이적으로 인식하는, 항 14 또는 14a에 기재된 키트.
항 14c.
상기 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체가, 활성형 인테그린 β7을 특이적으로 인식하는, 항 14 또는 14a에 기재된 키트.
항 14d.
상기 면역 세포가 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포 또는 NK 세포이고, 상기 키메라 항원 수용체가,
(1) 항원을 인식 가능한 세포 외 도메인,
(2) 막 관통 도메인,
(3) 공자극 분자의 세포 내 시그널 전달 도메인, 및
(4) CD3ζ의 세포 내 시그널 전달 도메인
을 함유하는, 항 14 및 14a 내지 14c의 어느 것에 기재된 키트.
항 14e.
상기 세포 외 도메인이 CD19 또는 인테그린 β7을 인식 가능한 세포 외 도메인인, 항 14d에 기재된 키트.
항 14f.
상기 막 관통 도메인이 CD28 또는 CD8의 막 관통 도메인인, 항 14d 또는 14e에 기재된 키트.
항 14g.
상기 공자극 분자가 CD2, CD4, CD5, CD8α, CD8β, CD28, CD134(OX40), CD137(4-1BB), 또는 CD278(ICOS)인, 항 14d 내지 14f의 어느 것에 기재된 키트.
항 14h.
상기 면역 세포가 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포 또는 NK 세포이고, 상기 재조합 T 세포 수용체가, NY-ESO-1을 인식 가능한 가변 도메인을 갖는, 청구항 14 또는 14a에 기재된 키트.
항 14i.
상기 면역 세포가 CD19를 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포, 인테그린 β7을 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포, CD19를 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 NK 세포, 또는 NY-ESO-1을 특이적으로 인식하는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포인, 청구항 14 또는 14a에 기재된 키트.
항 14j.
암을 예방 및/또는 치료하기 위한, 항 14 및 14a 내지 14i의 어느 것에 기재된 키트.
항 14k.
상기 식 (1)로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물이, 10mg 내지 180mg/일, 단독으로 투여하는 경우의 투여량보다도 적은 양, 또는 단독으로는 유효하지 않은 양으로 투여되는, 항 14 및 14a 내지 14j의 어느 것에 기재된 키트.
항 14L.
상기 면역 세포가, 1×103개 내지 1×108개(생세포수)/kg 체중/일, 단독으로 투여하는 경우의 투여량보다도 적은 양, 또는 단독으로는 유효하지 않은 양으로 투여되는, 항 14 및 14a 내지 14k의 어느 것에 기재된 키트.
항 15.
암을 예방 및/또는 치료하는 방법이며,
암의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 대상에, 하기 식 (1):
로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물을, 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 면역 세포와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 방법.
항 15a.
상기 투여하는 것이 상기 식 (1)로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물을, 상기 면역 세포의 투여 전, 동시, 또는 후에 투여하는 것인, 항 15에 기재된 방법.
항 15b.
상기 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체가 CD19, 인테그린 β7 및 NY-ESO-1에서 선택되는 항원을 특이적으로 인식하는, 항 15 또는 15a에 기재된 방법.
항 15c.
상기 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체가 활성형 인테그린 β7을 특이적으로 인식하는, 항 15 또는 15a에 기재된 방법.
항 15d.
상기 면역 세포가 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포 또는 NK 세포이고, 상기 키메라 항원 수용체가,
(1) 항원을 인식 가능한 세포 외 도메인,
(2) 막 관통 도메인,
(3) 공자극 분자의 세포 내 시그널 전달 도메인, 및
(4) CD3ζ의 세포 내 시그널 전달 도메인
을 함유하는, 항 15 및 15a 내지 15c의 어느 것에 기재된 방법.
항 15e.
상기 세포 외 도메인이 CD19 또는 인테그린 β7을 인식 가능한 세포 외 도메인인, 항 15d에 기재된 방법.
항 15f.
상기 막 관통 도메인이 CD28 또는 CD8의 막 관통 도메인인, 항 15d 또는 15e에 기재된 방법.
항 15g.
상기 공자극 분자가 CD2, CD4, CD5, CD8α, CD8β, CD28, CD134(OX40), CD137(4-1BB), 또는 CD278(ICOS)인, 항 15d 내지 15f의 어느 것에 기재된 방법.
항 15h.
상기 면역 세포가 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포 또는 NK 세포이고, 상기 재조합 T 세포 수용체가, NY-ESO-1을 인식 가능한 가변 도메인을 갖는, 항 15 또는 15a에 기재된 방법.
항 15i.
상기 면역 세포가 CD19를 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포, 인테그린 β7을 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포, CD19를 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 NK 세포, 또는 NY-ESO-1을 특이적으로 인식하는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포인, 항 15 또는 15a에 기재된 방법.
항 15j.
상기 식 (1)로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물을, 10mg 내지 180mg/일, 단독으로 투여하는 경우의 투여량보다도 적은 양, 또는 단독으로는 유효하지 않은 양으로 투여하는, 항 15 및 15a 내지 15i의 어느 것에 기재된 방법.
항 15k.
상기 면역 세포를, 1×103개 내지 1×108개(생세포수)/kg 체중/일, 단독으로 투여하는 경우의 투여량보다도 적은 양, 또는 단독으로는 유효하지 않은 양으로 투여하는, 항 15 및 15a 내지 15j의 어느 것에 기재된 방법.
항 16.
키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 면역 세포와 조합하여 투여하기 위한 의약의 조제를 위한, 하기 식 (1):
로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물의 사용.
항 16a.
상기 의약이 상기 면역 세포의 투여 전, 동시, 또는 후에 투여하기 위한 의약인, 항 16에 기재된 사용.
항 16b.
상기 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체가 CD19, 인테그린 β7 및 NY-ESO-1에서 선택되는 항원을 특이적으로 인식하는, 항 16 또는 16a에 기재된 사용.
항 16c.
상기 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체가 활성형 인테그린 β7을 특이적으로 인식하는, 항 16 또는 16a에 기재된 사용.
항 16d.
상기 면역 세포가 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포 또는 NK 세포이고, 상기 키메라 항원 수용체가,
(1) 항원을 인식 가능한 세포 외 도메인,
(2) 막 관통 도메인,
(3) 공자극 분자의 세포 내 시그널 전달 도메인, 및
(4) CD3ζ의 세포 내 시그널 전달 도메인
을 함유하는, 항 16 및 16a 내지 16c의 어느 것에 기재된 사용.
항 16e.
상기 세포 외 도메인이 CD19 또는 인테그린 β7을 인식 가능한 세포 외 도메인인, 항 16d에 기재된 사용.
항 16f.
상기 막 관통 도메인이 CD28 또는 CD8의 막 관통 도메인인, 항 16d 또는 16e에 기재된 사용.
항 16g.
상기 공자극 분자가 CD2, CD4, CD5, CD8α, CD8β, CD28, CD134(OX40), CD137(4-1BB), 또는 CD278(ICOS)인, 항 16d 내지 16f의 어느 것에 기재된 사용.
항 16h.
상기 면역 세포가 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포 또는 NK 세포이고, 상기 재조합 T 세포 수용체가, NY-ESO-1을 인식 가능한 가변 도메인을 갖는, 항 16 또는 16a에 기재된 사용.
항 16i.
상기 면역 세포가 CD19를 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포, 인테그린 β7을 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포, CD19를 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 NK 세포, 또는 NY-ESO-1을 특이적으로 인식하는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포인, 항 16 또는 16a에 기재된 사용.
항 16j.
상기 의약이 암을 예방 및/또는 치료하기 위한 의약인, 항 16 및 16a 내지 16i의 어느 것에 기재된 사용.
항 16k.
상기 의약이, 상기 식 (1)로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물을 10mg 내지 180mg/일, 단독으로 투여하는 경우의 투여량보다도 적은 양, 또는 단독으로는 유효하지 않은 양으로 투여하기 위한 의약인, 항 16 및 16a 내지 16j의 어느 것에 기재된 사용.
항 16L.
상기 의약이, 1×103개 내지 1×108개(생세포수)/kg 체중/일, 단독으로 투여하는 경우의 투여량보다도 적은 양, 또는 단독으로는 유효하지 않은 양의 상기 면역 세포와 조합하여 투여하기 위한 의약인, 항 16 및 16a 내지 16k의 어느 것에 기재된 사용.
항 17.
하기 식 (1):
로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물과 조합하여 투여하기 위한 의약의 조제를 위한, 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 면역 세포의 사용.
항 17a.
상기 의약이 상기 식 (1)로 표현되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물의 투여 전, 동시, 또는 후에 투여하기 위한 의약인, 항 17에 기재된 사용.
항 17b.
상기 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체가 CD19, 인테그린 β7 및 NY-ESO-1에서 선택되는 항원을 특이적으로 인식하는, 항 17 또는 17a에 기재된 사용.
항 17c.
상기 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체가 활성형 인테그린 β7을 특이적으로 인식하는, 항 17 또는 17a에 기재된 사용.
항 17d.
상기 면역 세포가 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포 또는 NK 세포이고, 상기 키메라 항원 수용체가,
(1) 항원을 인식 가능한 세포 외 도메인,
(2) 막 관통 도메인,
(3) 공자극 분자의 세포 내 시그널 전달 도메인, 및
(4) CD3ζ의 세포 내 시그널 전달 도메인
을 함유하는, 항 17 및 17a 내지 17c의 어느 것에 기재된 사용.
항 17e.
상기 세포 외 도메인이 CD19 또는 인테그린 β7을 인식 가능한 세포 외 도메인인, 항 17d에 기재된 사용.
항 17f.
상기 막 관통 도메인이 CD28 또는 CD8의 막 관통 도메인인, 항 17d 또는 17e에 기재된 사용.
항 17g.
상기 공자극 분자가 CD2, CD4, CD5, CD8α, CD8β, CD28, CD134(OX40), CD137(4-1BB), 또는 CD278(ICOS)인, 항 17d 내지 17f의 어느 것에 기재된 사용.
항 17h.
상기 면역 세포가 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포 또는 NK 세포이고, 상기 재조합 T 세포 수용체가, NY-ESO-1을 인식 가능한 가변 도메인을 갖는, 항 17 또는 17a에 기재된 사용.
항 17i.
상기 면역 세포가 CD19를 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포, 인테그린 β7을 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포, CD19를 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 NK 세포, 또는 NY-ESO-1을 특이적으로 인식하는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포인, 항 17 또는 17a에 기재된 사용.
항 17j.
상기 의약이 암을 예방 및/또는 치료하기 위한 의약인, 항 17 및 17a 내지 17i의 어느 것에 기재된 사용.
항 17k.
상기 의약이, 상기 면역 세포를 1×103개 내지 1×108개(생세포수)/kg 체중/일, 단독으로 투여하는 경우의 투여량보다도 적은 양, 또는 단독으로는 유효하지 않은 양으로 투여하기 위한 의약인, 항 17 및 17a 내지 17j의 어느 것에 기재된 사용.
항 17L.
상기 의약이 10mg 내지 180mg/일, 단독으로 투여하는 경우의 투여량보다도 적은 양, 또는 단독으로는 유효하지 않은 양의, 상기 식 (1)로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물과 조합하여 투여하기 위한 의약인, 항 17 및 17a 내지 17k의 어느 것에 기재된 사용.
항 18.
키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 면역 세포와 조합하여 투여하기 위하여 사용되는, 하기 식 (1):
로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물.
항 18a.
상기 면역 세포의 투여 전, 동시, 또는 후에 투여하기 위하여 사용되는, 항 18에 기재된 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물.
항 18b.
상기 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체가 CD19, 인테그린 β7 및 NY-ESO-1에서 선택되는 항원을 특이적으로 인식하는, 항18 또는 18a에 기재된 사용.
항 18c.
상기 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체가, 활성형 인테그린 β7을 특이적으로 인식하는, 항 18 또는 18a에 기재된 사용.
항 18d.
상기 면역 세포가 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포 또는 NK 세포이고, 상기 키메라 항원 수용체가,
(1) 항원을 인식 가능한 세포 외 도메인,
(2) 막 관통 도메인,
(3) 공자극 분자의 세포 내 시그널 전달 도메인, 및
(4) CD3ζ의 세포 내 시그널 전달 도메인
을 함유하는, 항 18 및 18a 내지 18c의 어느 것에 기재된 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물.
항 18e.
상기 세포 외 도메인이 CD19 또는 인테그린 β7을 인식 가능한 세포 외 도메인인, 항 18d에 기재된 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물.
항 18f.
상기 막 관통 도메인이 CD28 또는 CD8의 막 관통 도메인인, 항 18d 또는 18e에 기재된 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물.
항 18g.
상기 공자극 분자가 CD2, CD4, CD5, CD8α, CD8β, CD28, CD134(OX40), CD137(4-1BB), 또는 CD278(ICOS)인, 항 18d 내지 18f의 어느 것에 기재된 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물.
항 18h.
상기 면역 세포가 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포 또는 NK 세포이고, 상기 재조합 T 세포 수용체가, NY-ESO-1을 인식 가능한 가변 도메인을 갖는, 항 18 또는 18a에 기재된 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물.
항 18i.
상기 면역 세포가 CD19를 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포, 인테그린 β7을 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포, CD19를 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 NK 세포, 또는 NY-ESO-1을 특이적으로 인식하는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포인, 항 18 또는 18a에 기재된 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물.
항 18j.
암을 예방 및/또는 치료하기 위하여 사용되는, 항 18 및 18a 내지 18i의 어느 것에 기재된 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물.
항 18k.
10mg 내지 180mg/일, 단독으로 투여하는 경우의 투여량보다도 적은 양, 또는 단독으로는 유효하지 않은 양으로 투여하기 위하여 사용되는, 항 18 및 18a 내지 18j의 어느 것에 기재된 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물.
항 18L.
1×103개 내지 1×108개(생세포수)/kg 체중/일, 단독으로 투여하는 경우의 투여량보다도 적은 양, 또는 단독으로는 유효하지 않은 양의 상기 면역 세포와 조합하여 투여하기 위하여 사용되는, 항 18 및 18a 내지 18k의 어느 것에 기재된 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물.
항 19.
하기 식 (1):
로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물과 조합하여 투여하기 위하여 사용되는, 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 면역 세포.
항 19a.
상기 식 (1)로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물의 투여 전, 동시, 또는 후에 투여하기 위하여 사용되는, 항 19에 기재된 면역 세포.
항 19b.
상기 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체가 CD19, 인테그린 β7 및 NY-ESO-1에서 선택되는 항원을 특이적으로 인식하는, 항 19 또는 19a에 기재된 면역 세포.
항 19c.
상기 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체가 활성형 인테그린 β7을 특이적으로 인식하는, 항 19 또는 19a에 기재된 면역 세포.
항 19d.
키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포 또는 NK 세포이고, 상기 키메라 항원 수용체가,
(1) 항원을 인식 가능한 세포 외 도메인,
(2) 막 관통 도메인,
(3) 공자극 분자의 세포 내 시그널 전달 도메인, 및
(4) CD3ζ의 세포 내 시그널 전달 도메인
을 함유하는, 항 19 및 19a 내지 19c의 어느 것에 기재된 면역 세포.
항 19e.
상기 세포 외 도메인이 CD19 또는 인테그린 β7을 인식 가능한 세포 외 도메인인, 항 19d에 기재된 면역 세포.
항 19f.
상기 막 관통 도메인이 CD28 또는 CD8의 막 관통 도메인인, 항 19d 또는 19e에 기재된 면역 세포.
항 19g.
상기 공자극 분자가 CD2, CD4, CD5, CD8α, CD8β, CD28, CD134(OX40), CD137(4-1BB), 또는 CD278(ICOS)인, 항 19d 내지 19f의 어느 것에 기재된 면역 세포.
항 19h.
상기 면역 세포가 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포 또는 NK 세포이고, 상기 재조합 T 세포 수용체가 NY-ESO-1을 인식 가능한 가변 도메인을 갖는 항 19 또는 19a에 기재된 면역 세포.
항 19i.
상기 면역 세포가 CD19를 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포, 인테그린 β7을 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포, CD19를 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 NK 세포, 또는 NY-ESO-1을 특이적으로 인식하는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포인, 항 19 또는 19i에 기재된 면역 세포.
항 19j.
암을 예방 및/또는 치료하기 위하여 사용되는, 항 19 및 19a 내지 19i의 어느 것에 기재된 면역 세포.
항 19k.
1×103개 내지 1×108개(생세포수)/kg 체중/일, 단독으로 투여하는 경우의 투여량보다도 적은 양, 또는 단독으로는 유효하지 않은 양으로 투여하기 위하여 사용되는, 항 19 및 19a 내지 19j의 어느 것에 기재된 면역 세포.
항 19L.
10mg 내지 180mg/일, 단독으로 투여하는 경우의 투여량보다도 적은 양, 또는 단독으로는 유효하지 않은 양의, 상기 식 (1)로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물과 조합하여 투여하기 위하여 사용되는, 항 19 및 19a 내지 19k의 어느 것에 기재된 면역 세포.
본 개시에 의해, 톨리나판트계 약제 또는 개변 면역 세포를 함유하는 의약 조성물의 효능을 현저하게 증대시킬 수 있다.
도 1은, Birinapant(비리나판트)와 CD19 CAR-T의 병용 효과를 나타내는 그래프이다.
도 2는, Tolinapant(톨리나판트)(당해 도면에서는 식 (1)로 표시되는 화합물의 (+)-L-락트산염을 의미함)와 CD19 CAR-T의 병용 효과를 나타내는 그래프이다. ＊은, 일원 배치 모델에 있어서의 병용 효과의 검정을 행하고, 대조(톨리나판트, CD19 CAR-T(1×105cells/body) 각각)에 대하여, 톨리나판트와 CD19 CAR-T(1×105cells/body)의 병용에서 유의미한(p<0.05) 효과를 나타낸 것을 나타낸다.
도 3은, 저종양량에 대한 톨리나판트(당해 도면에서는 식 (1)로 표시되는 화합물의 (+)-L-락트산염을 의미함)와 CD19 CAR-T의 병용 효과를 나타내는 그래프이다.
도 4는, LCL161과 CD19 CAR-T의 병용 효과를 나타내는 그래프이다.
도 5는, AT406과 CD19 CAR-T의 병용 효과를 나타내는 그래프이다.
도 6은, 투여 레지멘을 도시하는 도면이다.
도 7은, 톨리나판트와 활성형 인테그린 β7 CAR-T와의 병용 효과를 나타내는 그래프이다.
도 8은, 투여 레지멘을 도시하는 도면이다.
도 9는, 톨리나판트와 CD19CAR-KHYG-1과의 병용 효과를 나타내는 그래프이다.
도 10은, 투여 레지멘을 도시하는 도면이다.
A. 톨리나판트계 약제를 함유하는 의약 조성물
본 개시의 톨리나판트계 약제를 함유하는 의약 조성물(이하, 「의약 조성물 A」라고 칭함)은, 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 면역 세포(후술하는 의약 조성물 B의 형태여도 됨)와 조합하여 투여되는 의약 조성물인 것이 바람직하고, 구체적으로는 상기 면역 세포의 투여 전, 동시, 또는 후에 투여되는 의약 조성물인 것이 바람직하다. 의약 조성물 A는, 전형적으로는 IAP 안타고니스트일 수 있고, 특히 XIAP, cIAP1 및 cIAP2의 안타고니스트일 수 있다. 톨리나판트계 약제는, 예를 들어 다른 IAP 안타고니스트와 비교하여, 개변된 면역 세포와 조합하여 투여했을 때에, 보다 신속하게 효능을 발휘할 수 있다.
A-1. 톨리나판트계 약제
식 (1)로 표시되는 화합물은 총량의 55％ 이상, 60％ 이상, 65％ 이상, 70％ 이상, 75％ 이상, 80％ 이상, 85％ 이상, 90％ 이상, 95％ 이상, 99％ 이상, 99.5％ 이상, 99.9％ 이상, 또는 100％가 단일의 광학 이성체로서 존재할 수 있다.
식 (1)로 표시되는 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염은, 산 부가 염인 것이 바람직하다. 산 부가 염은 유기산 부가 염이어도 무기산 부가 염이어도 된다. 산 부가 염의 비한정적인 예로서는, 아세트산, 2,2-디클로로아세트산, 아디프산, 알긴산, 아스코르브산(예: L-아스코르브산), L-아스파르트산, 벤젠술폰산, 벤조산, 4-아세트아미드벤조산, 부탄산, (+)캄포산, 캄포-술폰산, (+)-(1S)-캄포-10-술폰산, 카프르산, 카프로산, 카프릴산, 신남산, 시트르산, 사이클람산, 도데실황산, 에탄-1,2-디술폰산, 에탄술폰산, 2-히드록시에탄술폰산, 포름산, 푸마르산, 갈락타르산, 겐티스산, 글루코헵톤산, D-글루콘산, 글루쿠론산(예: D-글루쿠론산), 글루탐산(예: L-글루탐산), α-옥소글루탈산, 글리콜산, 히푸르산, 할로겐화수소산(예: 브롬화수소산, 염산, 요오드화수소산), 이세티온산, 락트산(예: (+)-L-락트산, (-)-D-락트산, (±)-DL-락트산), 락토비온산, 말레산, 말산, (-)-L-말산, 말론산, (±)-DL-만델산, 메탄술폰산, 나프탈렌-2-술폰산, 나프탈렌-1,5-디술폰산, 1-히드록시-2-나프토산, 니코틴산, 질산, 올레산, 오로틴산, 옥살산, 팔미트산, 파모산, 인산, 프로피온산, 피루브산, L-피로글루탐산, 살리실산, 4-아미노살리실산, 세바스산, 스테아르산, 숙신산, 황산, 탄닌산, (+)-L-타르타르산, 티오시안산, p-톨루엔술폰산, 운데실렌산, 발레르산, 아실화아미노산 등을 들 수 있다. 일 실시 형태에 있어서, 식 (1)로 표시되는 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염은, 락트산염(예를 들어 (+)-L-락트산), 염산염(이염산염을 포함함), 황산염, 또는 메실산염인 것이 바람직하다.
상기 약학적으로 허용 가능한 용매화물의 비한정적인 예로서는, 물, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 아세트산, 아세트산에틸, 에탄올아민, 디메틸술폭시드(DMSO) 등을 들 수 있다.
A-2. 다른 성분
의약 조성물 A는, 다른 성분으로서, 약학적으로 허용 가능한 부형제를 함유하는 것이 바람직하다. 약학적으로 허용 가능한 부형제로서는, 예를 들어 담체(고체 담체, 반고체 담체 및 액체 담체를 포함함), 보조제, 희석제, 충전제 또는 증량제, 조립제, 코팅제, 방출 제어제, 결합제, 붕괴제, 활택제, 보존제, 항산화제, 완충제, 침전 방지제, 증점제, 교미 교취제, 안정제, 계면 활성제, 킬레이트제, 또는 그 밖의 의약 조성물에서 관용되고 있는 부형제 등을 들 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 부형제는 1종을 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 조합하여 사용해도 된다.
A-3. 형태
의약 조성물 A는, 액상 제제(예: 주사제, 점안제, 점비제, 현탁제), 고형 제제(예: 정제, 과립제, 산제), 반고형 제재(예: 연고제, 좌제) 및 그 밖의 당업자에게 공지된 제제 형태의 어느 것이어도 된다.
A-4. 투여
의약 조성물 A는, 경구 투여용이어도 비경구 투여용이어도 된다. 의약 조성물 A는, 국소 투여용이어도 된다. 의약 조성물 A는, 예를 들어 눈 내, 귀, 비강 내, 설하, 기관지 내, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 직장 내, 질 내, 또는 경피 투여용이어도 된다. 의약 조성물 A는, 주사용이어도 된다.
톨리나판트계 약제의 투여량은, 투여 목적, 투여 대상 및 그의 상태 등에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예를 들어, 대상의 체중 1kg당의 1일 투여량의 하한은, 0.01mg, 0.05mg, 0.1mg, 0.2mg, 0.3mg, 0.4mg, 0.5mg, 0.6mg, 0.7mg, 0.8mg, 0.9mg, 또는 1mg이어도 된다. 또한, 대상의 체중 1kg당의 1일 투여량의 상한도, 하한과 마찬가지로 적절히 선택할 수 있고, 예를 들어 10mg, 9mg, 8mg, 7mg, 6mg, 5mg, 4mg, 3mg, 2mg, 또는 1mg이어도 된다. 예를 들어, 대상의 체중 1kg당의 1일 투여량은, 0.01mg 내지 5mg, 0.05mg 내지 4mg, 또는 0.1mg 내지 3mg이어도 된다. 1일 투여량은, 예를 들어 1mg 이상, 5mg 이상, 10mg 이상, 20mg 이상, 30mg 이상, 40mg 이상, 50mg 이상, 60mg 이상, 70mg 이상, 80mg 이상, 90mg 이상, 또는 100mg 이상이어도 되고, 500mg 이하, 400mg 이하, 300mg 이하, 200mg 이하, 190mg 이하, 180mg 이하, 170mg 이하, 160mg 이하, 150mg 이하, 140mg 이하, 130mg 이하, 120mg 이하, 110mg 이하, 또는 100mg 이하여도 된다. 예를 들어, 1일 투여량은 1mg 내지 300mg, 5mg 내지 200mg, 또는 10mg 내지 180mg이어도 된다. 또한, 톨리나판트계 약제의 투여량은, 톨리나판트의 염이나 용매화물의 경우, 톨리나판트의 프리체(상기 식 (1)로 표시되는 화합물)의 중량으로 환산한 양이어도 되고, 염이나 용매화물의 실제 중량이어도 된다. 일 실시 형태에 있어서, 톨리나판트계 약제의 투여량은, 톨리나판트의 염이나 용매화물의 경우, 톨리나판트의 프리체의 중량으로 환산한 양이다. 1일 투여량이 상기 범위가 되도록 2회 이상(예: 2회 또는 3회)으로 나누어서 투여해도 되지만, 1회로 투여하는 것이 바람직하다. 톨리나판트계 약제의 투여량은, 단독으로 투여하는 경우의 투여량보다도 적은 양, 또는 단독으로는 유효하지 않은 양이어도 된다. 이러한 양으로 투여한 경우에도, 개변된 면역 세포의 투여와 더불어 우수한 효능을 발휘할 수 있다.
의약 조성물 A는 임의의 빈도로 투여할 수 있다. 예를 들어, 의약 조성물 A는 1일에 1회, 2회, 또는 3회, 2일에 1회, 3일에 1회, 4일에 1회, 5일에 1회, 6일에 1회, 1주일에 1회, 2주일에 1회, 3주일에 1회, 또는 4주일에 1회의 빈도로 투여할 수 있다. 또한, 의약 조성물 A는, 상기 빈도(예: 1일 1회)로 소정의 기간(예: 1주일, 2주일, 3주일, 또는 4주일) 투여를 계속해도 되고, 그 후, 소정의 기간(예: 1주일, 2주일, 3주일, 또는 4주일) 투여를 중단해도 되고, 투여의 계속 및 중단의 사이클을 반복해도 된다. 예를 들어, 의약 조성물 A를, 1일에 1회, 7일간 투여하고, 그 후, 7일간 투여를 중단하는 사이클을, 1회, 또는 2회 이상 행할 수 있다.
의약 조성물 A는, 개변된 면역 세포의 투여 전, 예를 들어 투여의 직전, 1분 전, 2분 전, 3분 전, 4분 전, 5분 전, 10분 전, 20분 전, 30분 전, 1시간 전, 2시간 전, 3시간 전, 4시간 전, 5시간 전, 6시간 전, 7시간 전, 8시간 전, 9시간 전, 10시간 전, 11시간 전, 12시간 전, 18시간 전, 24시간 전, 2일 전, 3일 전, 4일 전, 5일 전, 6일 전, 또는 1주일 전에 투여해도 된다. 의약 조성물 A는, 개변된 면역 세포의 투여와 동시에 투여해도 된다. 의약 조성물 A는, 개변된 면역 세포의 투여 후, 예를 들어 투여의 직후, 1분 후, 2분 후, 3분 후, 4분 후, 5분 후, 10분 후, 20분 후, 30분 후, 1시간 후, 2시간 후, 3시간 후, 4시간 후, 5시간 후, 6시간 후, 7시간 후, 8시간 후, 9시간 후, 10시간 후, 11시간 후, 12시간 후, 18시간 후, 24시간 후, 2일 후, 3일 후, 4일 후, 5일 후, 6일 후, 또는 1주일 후에 투여해도 된다. 또한, 의약 조성물 A는, 예를 들어 개변된 면역 세포의 투여 후이며, 종양 마커의 레벨이 베이스 라인 레벨을 상회하는 경우에 투여해도 된다.
의약 조성물 A의 투여와 개변된 면역 세포의 투여 사이에, 혹은, 의약 조성물 A의 투여 후로부터 다음 의약 조성물 A의 투여까지 사이에, 다른 화학 요법(다른 약제의 투여)을 행해도 되고, 비화학 요법(예: 방사선 요법, 광선 역학 요법, 외과 수술, 식사 제한) 등을 행해도 된다. 다른 약제의 비한정적인 예로서는, 알킬화제, DNA 메틸화 저해제, 대사 길항제(예: 피리미딘계 대사 길항제, 퓨린계 대사 길항제, 엽산 대사 길항제) 등을 들 수 있다.
의약 조성물 A의 투여 대상으로서는, 예를 들어 인간, 개, 고양이, 원숭이, 양, 말, 소, 마우스, 래트 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다. 또한, 의약 조성물 A의 투여 대상은, 개변된 면역 세포를 투여되는 또는 투여된 대상이어도 된다. 의약 조성물 A의 투여 대상은, IAP 관련 질환, 특히 암의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 대상(또는 초발 환자 혹은 재발 환자)인 것이 바람직하다.
의약 조성물 A의 조성, 제조 방법, 투여 방법 등은, 예를 들어 WO2015/092420(참조함으로써 그의 전체가 명세서에 원용됨)의 기재에 기초하여 설계할 수 있다.
A-5. 의약 용도
의약 조성물 A는, 의약 조성물 B의 효과(유전자 개변 면역 요법에 있어서의 치료 효과)를 증강할 수 있는 용도로 사용하는 한, 그의 용도는 특별히 제한되지 않는다. 의약 조성물 A는, 예를 들어 IAP 관련 질환의 예방 및/또는 치료에 사용할 수 있다. 본 명세서에 있어서, 「예방」은, 예를 들어 재발 방지를 포함하는 의미에서 사용하고, 「치료」는, 예를 들어 진행의 방지 또는 지연, 경감, 완화 및 관해를 포함하는 의미에서 사용한다. IAP 관련 질환으로서는, 예를 들어 세포 축적에 관계되는 질환(예: 암, 자기 면역 장해, 염증, 재협착), 과잉 아포토시스가 세포의 손실을 초래하는 장해(예: 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅턴병, 근위축성 측삭 경화증 등의 신경 변성, 허혈, 뇌졸중, 심근경색, 심부전, 골조송증, AIDS) 등을 들 수 있다. 본 명세서에 있어서, 「암」은 광의적인 의미에서 「종양」을 나타내고, 「종양」과 동일한 의미로 사용할 수 있다. IAP 관련 질환은 암인 것이 바람직하다. 암은 XIAP, cIAP1, cIAP2, NAIP, ILP2, ML-IAP, 서바이빈 및 BRUCE, 보다 구체적으로는 XIAP, cIAP1, cIAP2 및 ML-IAP, 더욱 구체적으로는 XIAP, cIAP1 및 cIAP2, 가장 구체적으로는 XIAP에서 선택되는 1 이상의 어느 것의 IAP의 길항 작용에 대하여 감수성을 갖는 암일 수 있다. 암은, 재발 또는 난치성의 암이어도 된다.
암은 고형암이어도 혈액암이어도 된다. 고형암은, 상피 유래, 간충직 유래, 또는 그 밖의 암이어도 된다.
일 실시 형태에 있어서, 고형암의 비한정적인 예로서는, 이행상피암; 방광 및 요로의 암; 유방암; 위장관(식도, 위, 소장, 대장, 결장, 직장 및 항문을 포함함)의 암; 간암(예: 간세포암, 간 아종); 담낭 및 담관계 암(예: 담관암); 췌장암(예: 전이성 췌장암 등의 췌장 내분비암, 췌관 선암 등의 췌장 외분비암); 신장암(예: 신장 세포암, 신장 아종); 폐암(예: 선암, 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 기관지 폐포 상피암, 중피종); 두경부의 암(예: 혀, 구강, 후두, 인두, 비인강, 편도선, 타액선, 비강, 부비강의 암, 시각 및 부속기의 암(예: 망막 아세포종)); 난소, 팔로피오관, 복막, 질, 음문, 음경, 자궁경부, 자궁근층, 또는 자궁 내막의 암; 갑상선암(예: 갑상선 골수 모양 암, 갑상선 유두암, 미분화 갑상선암, 갑상선 여포암); 부신암(예: 부신피질암); 전립선암(예: 호르몬 불응성 전립선암); 피부암(예: 흑색종(예: 스테이지 3 및 4의 악성 흑색종), 기저 세포암, 편평 상피암, 두경부 편평 상피암(HNSCC), 각화 극세포종, 이형성 모반, 균상 폴립종) 등을 들 수 있다. 일 실시 형태에 있어서, 고형 암의 다른 비한정적인 예로서는, 메르켈 세포 암, 전이성 비소세포암, 전이성 유방암, 전이성 대장암, 전이성 위암, 전이성 비뇨 생식기암, 전이성 비소 세포 폐암, 전이성 성 난소암, 전이성 신장 세포암, HBV 감염증 및 관련 암, 외음부 질환 등을 들 수 있다.
일 실시 형태에 있어서, 고형암의 다른 비한정적인 예로서는, 연부 조직 육종, 골육종, 섬유 육종, 연골 육종, 횡문근 육종, 평활근 육종, 지방 육종, 혈관 육종, 카포시 육종, 유잉 육종, 활막 육종, 유상피 육종, 소화관 간엽성 종양, 양성 및 악성 조직구종, 융기성 피부 섬유 육종 등의 연섬유, 뼈, 또는 연골의 육종을 들 수 있다.
일 실시 형태에 있어서, 고형암의 또한 추가로 다른 비한정적인 예로서는, 중추 또는 말초 신경계의 종양(예: 성상 세포종, 신경교종, 교아종, 수막종, 뇌종양, 뇌실상의종, 과체부 종양, 슈반 세포종); 내분비선의 종양(예: 하수체 종양, 부신 종양, 췌도 종양, 갑상선방 종양, 카르시노이드 종양, 갑상선의 골수 모양 암); 생식 세포 및 영양아층 종양(예: 기형종, 정상피종, 미분화 배세포종, 포상기태, 융모막암종); 소아 및 배아종(예: 수모세포종, 신경아세포종, 윌름스 종양, 원시 신경 외배엽성 종양); 환자가 악성 종양에 영향을 받게 되는, 선천적 또는 그렇지 않은 증후군(색소성 건피증) 등을 들 수 있다.
혈액암의 비한정적인 예로서는, 급성 림프성 백혈병(ALL)(예: B-ALL, T-ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL)(예: 헤어리 세포 백혈병, 전 림프성 백혈병) 등의 림프성 백혈병; B 세포 림프종(예: 미만성 대세포형 B 세포 림프종(DLBCL), 종격 원발대 세포형 B 세포 림프종(PMBCL), 여포성 림프종, 버킷 림프종, 맨틀 세포 림프종, 림프 아구성 백혈병; 변연대 B 세포 림프종, 고악성도 B 세포 림프종, 림프 형질 세포성 림프종, 비변연대 림프종); T 세포 림프종(예: 말초성 T 세포 림프종(PTCL), 피부 T 세포 림프종(CTCL), 성인 T 세포 림프종, 미분화 대세포 림프종, 혈관 면역 아구성 T 세포 림프종, 시자리 증후군); 내츄럴 킬러 [NK] 세포 림프종; 호지킨 림프종(HL); 비호지킨 림프종; MALT 림프종; 원발성 피부 여포 중심 림프 종양(PCFCL) ; T 세포 백혈병(예: 성인 T 세포 백혈병, T 세포 대과립 림프구성 백혈병, 전구 T 림프 아구성 백혈병); 백혈병/림프종; 성인 T 세포 백혈병/림프종(ATLL); 털 모양 세포 백혈병; 의의 불명의 단클론성 γ 글로불린 혈증; 플라스마 세포종; 다발성 골수종(MM) 및 이식 후 림프 증식성 장해; 급성 골수 아구성 백혈병; 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML) 등의 골수성 백혈병; 만성 골수 단구성 백혈병(CMML); 호산구 증가 증후군, 진성 적혈구 증가증, 본태성 혈소판 혈증 및 원발성 골수 섬유증 등의 골수 증식 증후군, 골수 이형성 증후군 및 전 골수성 백혈병 등을 들 수 있다.
일 실시 형태에서는, 암은 급성 골수성 백혈병(AML), T 세포 림프종(말초성 T 세포 림프종(PTCL), 피부 T 세포 림프종(CTCL), 성인 T 세포 백혈병 림프종(ATLL), 만성 골수 단구성 백혈병(CMML), 급성 림프성 백혈병(ALL) 및 미만성 대세포형 B 세포 림프종(DLBCL)을 포함하는 혈액암이다. 다른 실시 형태에서는, 암은 다발성 골수종을 포함하는 혈액암이다.
일 실시 형태에서는, 암은 두경부 편평 상피암(HNSCC), 전립선암, 췌장암, 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 대장암, 흑색종, 직장암, 방광, 자궁경부의 암 및 유방암을 포함하는 고형암이다.
B. 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 면역 세포를 함유하는 의약 조성물
본 개시의 키메라 항원 수용체(CAR) 또는 재조합 T 세포 수용체(TCR)를 발현하도록 개변된 면역 세포를 함유하는 의약 조성물(이하, 「의약 조성물 B」라고 칭함)은, 톨리나판트계 약제(의약 조성물 A의 형태여도 됨)와 조합하여 투여되는 의약 조성물인 것이 바람직하고, 구체적으로는 상기 톨리나판트계 약제의 투여 전, 동시, 또는 후에 투여되는 의약 조성물인 것이 바람직하다.
키메라 항원 수용체(CAR) 또는 재조합 T 세포 수용체(TCR)는, 특정한 항원을 인식하여 결합한다. 항원은, 종양 항원인 것이 바람직하다. 종양 항원의 비한정적인 예로서는 5T4, α5β1-인테그린, 인테그린 β7(예를 들어 활성형 인테그린 β7), 707-AP, AFP, ART-4, B7H4, BAGE, β-카테닌/m, Bcr-abl, MN/C IX 항체, CA125, CAMEL, CAP-1, CASP-8, CD4, CD19, CD20, CD22, CD25, CDC27/m, CD30, CD33, CD52, CD56, CD80, CD98, CDK4/m, CEA, CT, Cyp-B, DAM, EGFR, ErbB3, ELF2M, EMMPRIN, EpCam, ETV6-AML1, G250, GAGE, GnT-V, Gp100, HAGE, HER-2/new, HLA-A＊0201-R170I, HPV-E7, HSP70-2M, HST-2, hTERT(또는 hTRT), iCE, IGF-1R, IL-2R, IL-5, KIAA0205, LAGE, LDLR/FUT, MAGE, MART-1/melan-A, MART-2/Ski, MC1R, 미오신/m, MUC1, MUM-1, MUM-2, MUM-3, NA88-A, PAP, 프로테이나제-3, p190 minor bcr-abl, Pml/RARα, PRAME, PSA, PSM, PSMA, RAGE, RU1, RU2, SAGE, SART-1, SART-3, 서바이빈, TEL/AML1, TGFβ, TPI/m, TRP-1, TRP-2, TRP-2/INT2, VEGF, WT1, NY-ESO-1, NY-ESO-B, MAGE-A1, MAGE-A3, MAGE-A4 등을 들 수 있다. 일 실시 형태에 있어서, 종양 항원은 CD19, 인테그린 β7 또는 NY-ESO-1인 것이 바람직하다. 다른 실시 형태에 있어서, 종양 항원은 CD19, 활성형 인테그린 β7, 또는 NY-ESO-1인 것이 바람직하다.
B-1. CAR
CAR은, 세포 외 도메인 및 세포내 시그널 전달 도메인을 함유하는 것이 바람직하다.
B-1-1. 세포 외 도메인
세포 외 도메인은, 항원을 인식(또는 항원에 결합 혹은 특이적으로 결합)할 수 있는 한, 특별히 한정되지 않는다. 세포 외 도메인은, 항체의 항원 결합 부위, 또는 수용체의 항원(리간드) 결합 부위를 함유하는 것이 바람직하다.
항체의 항원 결합 부위는, 항체의 전체 영역이어도 되고, 항체의 항원 결합 프래그먼트여도 된다. 항체는, 모노클로날 항체여도 폴리클로날 항체여도 된다. 또한, 항체는, 예를 들어 마우스 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 또는 완전 인간화 항체일 수 있다. 항원 결합 프래그먼트는, H쇄(중쇄) 및 L쇄(경쇄)의 가변 영역을 함유하는 한, 특별히 한정되지 않는다. 항원 결합 프래그먼트의 비한정적인 예로서는, Fv, Fab, Fab', (Fab')2, scFv, scFv-Fc, diabody, triabody, tetrabody, minibody, nanobody 등을 들 수 있다.
수용체의 항원 결합 부위는, 수용체의 전체 영역이어도 되고, 수용체의 항원 결합 도메인이어도 된다. 수용체로서는, 예를 들어 TCRα, TCRβ, TCRγ, TCRδ 등의 TCR; CD4, CD8α, CD8β, CD11A, CD11B, CD11C, CD18, CD29, CD41, CD49A, CD49B, CD49D, CD49E, CD49F, CD51, CD61 등의 T 세포 보조 수용체; NKp30, NKp44, NKp46 등의 NK 세포의 천연 세포 상해성 수용체(NCR) 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다.
일 실시 형태에 있어서, 세포 외 도메인은, 항체의 항원 결합 부위를 함유하는 것이 바람직하고, scFv를 함유하는 것이 보다 바람직하고, 항 인간 CD19 항체(예: FMC63) 또는 항 인간 활성형 인테그린 β7 항체(예: MMG49) 유래의 scFv를 함유하는 것이 더욱 바람직하다. scFv는, 관용의 방법에 의해 조제할 수 있다. 당해 방법의 비한정적인 예로서는, 미국 특허 제4694778호, Science, vol.242, pp.423-442(1988), Nature, vol.334, p.54454(1989), Science, vol.242, pp.1038-1041(1988), Molecular Immunology, Vol.34, No.16-17, pp.1157-1165(1997)에 기재되어 있는 방법 등을 들 수 있다.
세포 외 도메인이 인식 또는 결합할 수 있는 항원은, 종양 항원인 것이 바람직하다. 종양 항원의 비한정적인 예로서는, 5T4, α5β1-인테그린, 인테그린 β7(예를 들어 활성형 인테그린 β7), 707-AP, AFP, ART-4, B7H4, BAGE, β-카테닌/m, Bcr-abl, MN/C IX 항체, CA125, CAMEL, CAP-1, CASP-8, CD4, CD19, CD20, CD22, CD25, CDC27/m, CD30, CD33, CD52, CD56, CD80, CD98, CDK4/m, CEA, CT, Cyp-B, DAM, EGFR, ErbB3, ELF2M, EMMPRIN, EpCam, ETV6-AML1, G250, GAGE, GnT-V, Gp100, HAGE, HER-2/new, HLA-A＊0201-R170I, HPV-E7, HSP70-2M, HST-2, hTERT(또는 hTRT), iCE, IGF-1R, IL-2R, IL-5, KIAA0205, LAGE, LDLR/FUT, MAGE, MART-1/melan-A, MART-2/Ski, MC1R, 미오신/m, MUC1, MUM-1, MUM-2, MUM-3, NA88-A, PAP, 프로테이나제-3, p190 minor bcr-abl, Pml/RARα, PRAME, PSA, PSM, PSMA, RAGE, RU1, RU2, SAGE, SART-1, SART-3, 서바이빈, TEL/AML1, TGFβ, TPI/m, TRP-1, TRP-2, TRP-2/INT2, VEGF, WT1, NY-ESO-1, NY-ESO-B 등을 들 수 있다. 일 실시 형태에 있어서, 종양 항원은 CD19 또는 인테그린 β7인 것이 바람직하다. 다른 실시 형태에 있어서, 종양 항원은 CD19 또는 활성형 인테그린 β7인 것이 바람직하다. 또한 다른 실시 형태에 있어서, 종양 항원은 활성형 인테그린 β7인 것이 바람직하다. 또한, CD19를 인식 또는 결합할 수 있는 CAR을 「CD19 CAR」이라고 칭하고, CD19 CAR을 발현하도록 개변된 T 세포 및 NK 세포를 각각 「CD19 CAR-T」 및 「CD19 CAR-NK」라고 칭한다. CD19 CAR-NK로서는, 예를 들어 CD19 CAR-KHYG-1 등을 들 수 있다. 활성형 인테그린 β7을 인식 또는 결합할 수 있는 CAR로서는, 예를 들어 활성형 인테그린 β7 CAR 등을 들 수 있고, 활성형 인테그린 β7 CAR을 발현하도록 개변된 T 세포를 「활성형 인테그린 β7 CAR-T(aITGB7 CAR-T)」라고 칭한다.
일 실시 형태에 있어서, 세포 외 도메인은, 서열 번호 1에 나타내는 아미노산 서열(GVSLPDYG)을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 2에 나타내는 아미노산 서열(IWGSETT)을 갖는 중쇄 CDR2, 서열 번호 3에 나타내는 아미노산 서열(AKHYYYGGSYAMDY)을 갖는 중쇄 CDR3, 서열 번호 4(QDISKY)에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 5(HTS)에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 6(QQGNTLPYT)에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3을 함유하는 것이 바람직하다. 또한, 본 명세서에 있어서, 중쇄 CDR1 내지 3 및 경쇄 CDR1 내지 3은 IMGT/BlastSearch(http://www.imgt.org/blast/)에 의한 상동성 검색에 의해 특정된다.
또한, 당해 세포 외 도메인은, 서열 번호 1에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 2에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2, 서열 번호 3에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3, 서열 번호 4에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 5에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 6에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3을 포함하는 항체의 CD19에의 결합을 경합적으로 저해하는 항체의 항원 결합 부위(특히 scFv)를 함유하는 것이 바람직하다.
일 실시 형태에 있어서, 세포 외 도메인은, 서열 번호 7에 나타내는 아미노산 서열(GYTFSSYW)을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 8에 나타내는 아미노산 서열(MLPGSGSS)을 갖는 중쇄 CDR2, 서열 번호 9에 나타내는 아미노산 서열(ARGDGNYWYFDV)을 갖는 중쇄 CDR3, 서열 번호 10(SSVGY)에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 11(ATS)에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 12(QQWSSDPPT)에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3을 함유하는 것이 바람직하다.
또한, 당해 세포 외 도메인은, 서열 번호 7에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 번호 8에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2, 서열 번호 9에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3, 서열 번호 10에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 번호 11에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2 및 서열 번호 12에 나타내는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3을 포함하는 항체의 CD19에의 결합을 경합적으로 저해하는 항체의 항원 결합 부위(특히 scFv)를 함유하는 것이 바람직하다.
일 실시 형태에 있어서, 세포 외 도메인은, 활성형 인간 인테그린 β7의 20 내지 109번째의 아미노산 잔기를 포함하는 영역에 에피토프를 갖는 항체의 항원 결합 부위를 함유하는 것이 바람직하다. 당해 항체는, 활성형 인간 인테그린 β7에 대하여 친화성을 갖고, 골수종 세포에는 결합하지만 정상 혈액 세포에는 결합하지 않는 것인 것이 바람직하다. 본 발명에 있어서의 활성형 인테그린 β7 CAR-T(aITGB7 CAR-T)는, WO2017/026331 또는 Nature Medicine 23 12 2007 1436에 기재되어 있고, 그의 전체가 명세서에 원용된다.
본 명세서에 있어서, 아미노산 서열의 「동일성」이란, 비교 대상의 2 이상의 아미노산 서열을 최적으로 얼라인먼트시켰을 때의 아미노산의 일치의 정도를 말한다. 아미노산 서열의 동일성은, 예를 들어 미국 전체 바이오테크놀로지 정보 센터(NCBI)의 상동성 알고리즘 BLAST(Basic local alignment search tool)(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)에 있어서 디폴트(초기 설정)의 파라미터를 사용하여 산출할 수 있다. 또한, 「보존적 치환」이란, 단백질의 기능 또는 성질을 실질적으로 개변하지 않도록, 1개 또는 복수개의 아미노산을, 다른 아미노산으로 치환하는 것을 의미한다. 보존적 치환된 비한정적인 예로서는, 비극성 아미노산(소수성 아미노산)의 군: 알라닌(A), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 프롤린(P), 페닐알라닌(F), 메티오닌(M), 트립토판(W)에 있어서의 치환, 극성 아미노산(중성 아미노산)의 군: 글리신(G), 아스파라긴(N), 글루타민(Q), 세린(S), 트레오닌(T), 티로신(Y), 시스테인(C)에 있어서의 치환, 산성 아미노산의 군: 아스파르트산(D), 글루탐산(E)에 있어서의 치환, 염기성 아미노산의 군: 리신(K), 아르기닌(R), 히스티딘(H)에 있어서의 치환 등을 들 수 있다.
세포 외 도메인의 항원에 대한 결합 친화성을 나타내는 평형 해리 상수(KD)는, 예를 들어 1μM 이하, 500nM 이하, 또는 100nM 이하여도 되고, 0.1pM 이상, 0.5pM 이상, 또는 1pM 이상이어도 된다. 평형 해리 상수는, 예를 들어 SPR 측정 또는 Biacore(상표) 분석에 의해 결정할 수 있다.
세포 외 도메인은, 항체의 항원 결합 부위, 또는 수용체의 항원(리간드) 결합 부위에 추가하여, 또한 다른 단백질의 세포 외 도메인을 함유하고 있어도 된다. 당해 다른 단백질의 비한정적인 예로서는 CD3ζ, CD3ε, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD28, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134(OX40), CD137, CD154, CD278(ICOS) 등의 T 세포 보조 수용체 등을 들 수 있다. 일 실시 형태에 있어서, 당해 다른 단백질의 세포 외 도메인은, CD28의 세포 외 도메인인 것이 바람직하다. 다른 실시 형태에 있어서, 당해 다른 단백질의 세포 외 도메인은, 서열 번호 13에 나타내는 아미노산 서열:
IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP,
당해 아미노산 서열에 대하여 70％ 이상, 75％ 이상, 80％ 이상, 85％ 이상, 90％ 이상, 91％ 이상, 92％ 이상, 93％ 이상, 94％ 이상, 95％ 이상, 96％ 이상, 97％ 이상, 98％ 이상, 또는 99％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 혹은 당해 아미노산 서열에 대하여 1 내지 3개의 아미노산이 결실, 치환(예: 보존적 치환), 삽입, 및/또는 부가한 아미노산 서열인 것이 바람직하다.
B-1-2. 세포 내 시그널 전달 도메인
세포 내 시그널 전달 도메인은, 세포 외 도메인이 항원을 인식했을 때, 세포 내에 시그널을 전달하는 것이 가능한 것인 한, 특별히 한정되지 않는다. 일 실시 형태에 있어서, 세포 내 시그널 전달 도메인은, 항원 의존적인 1차 활성화가 가능한 서열(1차 세포질 시그널 전달 서열) 및 항원 비의존적인 2차 활성화 또는 공자극이 가능한 서열(2차 세포질 시그널 전달 서열)을 갖는 것이 바람직하다.
1차 세포질 시그널 전달 서열은, 면역 수용체 티로신 베이스 활성화 모티프(ITAM)(Nature, vol.338, pp.383-384(1989))로서 알려지는 시그널 전달 모티프를 갖고 있어도 되고, 및/또는, 면역 수용체 티로신 베이스 억제 모티프(ITIM)(J Immunol., vol.162, No.2, pp.897-902(1999))로서 알려지는 시그널 전달 모티프를 갖고 있어도 된다.
1차 세포질 시그널 전달 서열을 갖는 세포 내 시그널 전달 도메인은, 1 이상의 ITAM을 갖는 것이 바람직하고, 외인성 STAT3 관련 모티프를 갖는 것도 바람직하다. 당해 세포 내 시그널 전달 도메인의 비한정적인 예로서는, CD3ζ, FcRγ, FcRβ, CD3γ, CD3δ, CD3ε, CD5, CD22, CD79a, CD79b, CD66d의 세포 내 시그널 전달 도메인 등을 들 수 있다. 일 실시 형태에 있어서, 당해 세포 내 시그널 전달 도메인은, CD3ζ의 세포 내 시그널 전달 도메인인 것이 바람직하다. 다른 실시 형태에 있어서, 당해 세포 내 시그널 전달 도메인은, 서열 번호 14에 나타내는 아미노산 서열:
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR,
당해 아미노산 서열에 대하여 70％ 이상, 75％ 이상, 80％ 이상, 85％ 이상, 90％ 이상, 91％ 이상, 92％ 이상, 93％ 이상, 94％ 이상, 95％ 이상, 96％ 이상, 97％ 이상, 98％ 이상, 또는 99％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 혹은 당해 아미노산 서열에 대하여 1 내지 3개의 아미노산이 결실, 치환(예: 보존적 치환), 삽입, 및/또는 부가한 아미노산 서열인 것이 바람직하다.
2차 세포질 시그널 전달 서열을 갖는 세포 내 시그널 전달 도메인은, 1 이상의 공자극 분자의 세포 내 시그널 전달 도메인인 것이 바람직하다. 공자극 분자의 비한정적인 예로서는, CD2, CD4, CD5, CD8α, CD8β, CD28, CD134(OX40), CD137(4-1BB), CD154, CD278(ICOS) 등을 들 수 있다. 일 실시 형태에 있어서, 당해 세포 내 시그널 전달 도메인은, CD28의 세포 내 시그널 전달 도메인 및/또는 CD137(4-1BB)의 세포 내 시그널 전달 도메인인 것이 바람직하고, CD28의 세포 내 시그널 전달 도메인인 것이 더욱 바람직하다. 다른 실시 형태에 있어서, 당해 세포 내 시그널 전달 도메인은, 서열 번호 15에 나타내는 아미노산 서열:
RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS,
당해 아미노산 서열에 대하여 70％ 이상, 75％ 이상, 80％ 이상, 85％ 이상, 90％ 이상, 91％ 이상, 92％ 이상, 93％ 이상, 94％ 이상, 95％ 이상, 96％ 이상, 97％ 이상, 98％ 이상, 또는 99％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 혹은 당해 아미노산 서열에 대하여 1 내지 3개의 아미노산이 결실, 치환(예: 보존적 치환), 삽입, 및/또는 부가한 아미노산 서열인 것이 바람직하다.
CAR은, 상기의 것 이외의 새로운 추가의 세포 내 시그널 전달 도메인을 갖고 있어도 된다. 예를 들어, CAR은 사이토카인(예를 들어 IL-12)의 발현을 유도하는 도메인을 갖고 있어도 된다. 또한, CAR은 사이토카인 수용체의 세포 내 도메인(예를 들어 IL-2Rβ쇄 프래그먼트)을 포함하고 있어도 된다. 추가의 세포 내 시그널 전달 도메인은, 예를 들어 공자극 분자의 세포 내 시그널 전달 도메인과 1차 세포질 시그널 전달 서열 사이에 삽입되어도 된다.
B-1-3. 막 관통 도메인
CAR은, 세포 외 도메인과 세포 내 시그널 전달 도메인 사이에 막 관통 도메인을 함유하는 것이 바람직하다. 막 관통 도메인은, 1 이상의 막 관통 서열을 갖는 임의의 폴리펩티드 유래의 막 관통 도메인일 수 있다. 당해 폴리펩티드는 천연 폴리펩티드여도 인공 폴리펩티드여도 된다.
천연 폴리펩티드 유래의 막 관통 도메인의 비한정적인 예로서는, TCRα, TCRβ 등의 TCR; CD3ζ, CD3ε, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD28, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134(OX40), CD137, CD154, CD278(ICOS) 등의 T 세포 보조 수용체; GITR 등의 TNF 수용체의 막 관통 도메인 등을 들 수 있다.
인공 폴리펩티드 유래의 막 관통 도메인은, 주로, 류신 및 발린 등의 소수성 잔기를 함유하는 폴리펩티드인 것이 바람직하다. 또한, 당해 막 관통 도메인은 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 트리플렛을 각 말단에 갖는 것이 바람직하다.
일 실시 형태에 있어서, 막 관통 도메인은, CD28 또는 CD8의 막 관통 도메인인 것이 바람직하고, CD28의 막 관통 도메인인 것이 더욱 바람직하다. 다른 실시 형태에 있어서, 막 관통 도메인은 서열 번호 16에 나타내는 아미노산 서열:
FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV,
당해 아미노산 서열에 대하여 70％ 이상, 75％ 이상, 80％ 이상, 85％ 이상, 90％ 이상, 91％ 이상, 92％ 이상, 93％ 이상, 94％ 이상, 95％ 이상, 96％ 이상, 97％ 이상, 98％ 이상, 또는 99％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 혹은 당해 아미노산 서열에 대하여 1 내지 3개의 아미노산이 결실, 치환(예: 보존적 치환), 삽입, 및/또는 부가한 아미노산 서열인 것이 바람직하다.
B-1-4. 링커 서열 또는 스페이서 도메인
CAR은, 세포 외 도메인과 막 관통 도메인 사이, 또는, 막 관통 도메인과 세포 내 시그널 전달 도메인 사이에, 링커 서열 또는 스페이서 도메인을 갖고 있어도 된다.
링커 서열 또는 스페이서 도메인은, 2개의 도메인을 연결하는 기능을 갖는 한, 특별히 한정되지 않는다. 링커 서열은, 10개 이하의 아미노산을 함유하는 것이 바람직하고, 2개 이상의 아미노산을 함유하는 것이 바람직하다. 스페이서 도메인은 300개 이하, 200개 이하, 100개 이하, 또는 50개 이하의 아미노산을 함유하는 것이 바람직하고, 10개 이상, 15개 이상, 20개 이상, 또는 25개 이상의 아미노산을 함유하는 것이 바람직하다.
링커 서열은 글리신-세린 연속 서열, 서열 번호 17에 나타내는 아미노산 서열(GSTSGSGKPGSGEGSTKG) 및 서열 번호 18에 나타내는 아미노산 서열(GSTSGGGSGGGSGGGGSS) 등에서 선택되는 것이 바람직하다.
스페이서 도메인은, CAR과 항원의 결합을 촉진하고, 또한, 세포에의 시그널 전달을 증강하는 서열을 갖는 것이 바람직하다. 당해 서열은 시스테인, 하전 아미노산, 잠재적 글리코실화 부위 내의 세린 또는 트레오닌 등을 함유하는 것이 바람직하다. 스페이서 도메인의 비한정적인 예로서는, CD8α, CD8β, CD28, IgG4의 일부(예: 힌지 영역) 등을 들 수 있다.
CAR은, N 말단에 리더 서열(시그널 펩티드 서열)을 갖고 있어도 된다. 시그널 펩티드 서열은, 15개 이상의 아미노산을 함유하는 것이 바람직하고, 30개 이하의 아미노산을 함유하는 것이 바람직하다. 시그널 펩티드의 비한정적인 예로서는, 세포 내 시그널 전달 도메인을 갖는 상기 단백질의 시그널 펩티드를 들 수 있다. 예를 들어, 시그널 펩티드는 GM-CSFR 시그널 펩티드, 온코스타틴 M 시그널 펩티드, 또는 CD8a, IL-2, IL-3 등의 시그널 펩티드여도 된다. 혹은, Ig 중쇄 시그널 서열(an Ig heavy chain signal sequence)(VHCAMP)이어도 된다. 시그널 펩티드는, 인간 유래이면 되고, 비인간 유래, 예를 들어 곤충 세포 또는 바이러스 유래여도 된다. 일 실시 형태에 있어서, 리더 서열(시그널 펩티드 서열)은, 서열 번호 19에 나타내는 아미노산 서열:
MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP,
당해 아미노산 서열에 대하여 70％ 이상, 75％ 이상, 80％ 이상, 85％ 이상, 90％ 이상, 91％ 이상, 92％ 이상, 93％ 이상, 94％ 이상, 95％ 이상, 96％ 이상, 97％ 이상, 98％ 이상, 또는 99％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 혹은 당해 아미노산 서열에 대하여 1 내지 3개의 아미노산이 결실, 치환(예: 보존적 치환), 삽입, 및/또는 부가한 아미노산 서열인 것이 바람직하다.
일 실시 형태에 있어서, CAR은 N 말단측으로부터 차례로, 항 인간 CD19 항체(예: FMC63) 또는 항 인간 활성형 인테그린 β7 항체(예: MMG49) 유래의 scFv, CD28 세포 외 도메인, CD28 막 관통 도메인, CD28 세포 내 시그널 전달 도메인 및 CD3ζ 세포 내 시그널 전달 도메인을 함유하는 것이 바람직하고, 항 인간 CD19 항체(예: FMC63) 또는 항 인간 활성형 인테그린 β7 항체(예: MMG49) 유래의 scFv의 N 말단측에 GM-CSFR 시그널 펩티드를 더 함유하는 것도 바람직하다.
다른 실시 형태에 있어서, CAR은 서열 번호 20에 나타내는 아미노산 서열(GenBank Accession No. HM852952.1):
MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR,
서열 번호 1 내지 6에 나타내는 아미노산 서열을 갖고, 또한, 서열 번호 20에 나타내는 아미노산 서열에 대하여 70％ 이상, 75％ 이상, 80％ 이상, 85％ 이상, 90％ 이상, 91％ 이상, 92％ 이상, 93％ 이상, 94％ 이상, 95％ 이상, 96％ 이상, 97％ 이상, 98％ 이상, 또는 99％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 혹은
서열 번호 1 내지 6에 나타내는 아미노산 서열을 갖고, 또한, 서열 번호 20에 나타내는 아미노산 서열에 대하여 1 내지 3개의 아미노산이 결실, 치환(예: 보존적 치환), 삽입, 및/또는 부가한 아미노산 서열인 것이 바람직하다.
또한 다른 실시 형태에 있어서, CAR은, 서열 번호 21에 나타내는 아미노산 서열:
MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGQIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVGYMHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSESGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSSDPPTFGGGTKLEIKRGSTSGSGKPGSGEGSQVQLQQSGAELMKPGASVKISCKASGYTFSSYWIEWVKQRPGHGLEWIGEMLPGSGSSNYNEKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGDGNYWYFDVWGAGTTVTVSSAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR,
서열 번호 7 내지 12에 나타내는 아미노산 서열을 갖고, 또한, 서열 번호 21에 나타내는 아미노산 서열에 대하여 70％ 이상, 75％ 이상, 80％ 이상, 85％ 이상, 90％ 이상, 91％ 이상, 92％ 이상, 93％ 이상, 94％ 이상, 95％ 이상, 96％ 이상, 97％ 이상, 98％ 이상, 또는 99％ 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열, 혹은
서열 번호 7 내지 12에 나타내는 아미노산 서열을 갖고, 또한, 서열 번호 21에 나타내는 아미노산 서열에 대하여 1 내지 3개의 아미노산이 결실, 치환(예: 보존적 치환), 삽입, 및/또는 부가한 아미노산 서열인 것이 바람직하다.
CAR은, 이량체화 등 다량체화된 것이어도 된다. 예를 들어, 디술피드 결합을 통해 CAR을 이량체화하는 경우, CAR의 스페이서 도메인 및/또는 막 관통 도메인에 시스테인을 삽입하는 것이 바람직하다.
B-2. 재조합 TCR
재조합 TCR은 α쇄 및 β쇄로 구성되는 헤테로 다이머여도 되고, γ쇄 및 δ쇄로 구성되는 헤테로 다이머여도 된다. 각 쇄는 가변 도메인(V 도메인) 및 정상 도메인(C 도메인)을 갖고, V 도메인에 3개의 CDR, 즉, CDR1, CDR2 및 CDR3을 갖고 있고, 3개의 CDR 서열이 항원을 인식 또는 결합할 수 있도록 설계되어 있다.
재조합 TCR은, 임의의 항원을 인식(또는 결합)할 수 있다. 즉, 재조합 TCR은, 항원을 인식 가능한 가변 도메인을 가질 수 있다. 항원으로서는, 예를 들어 B-1-1에 기재된 항원과 동일한 것을 들 수 있다. 일 실시 형태에 있어서, 항원은 종양 항원인 것이 바람직하고, gp100, MART-1, CEA, MAGE-A1, MAGE-A3, MAGE-A4, WT1, 또는 NY-ESO-1인 것이 바람직하다. 항원은 인간 백혈구 항원 A(HLA-A) 구속성인 것이 바람직하고, HLA-A＊02 구속성(예: HLA-A＊02:01 구속성, HLA-A＊02:06 구속성) 또는 HLA-A＊24 구속성(예: HLA-A＊24:02 구속성)인 것이 더욱 바람직하다. 재조합 TCR은, HLA-A＊02 구속성 gp100 특이적 TCR, HLA-A＊02 구속성 MART-1 특이적 TCR, HLA-A＊02 구속성 MAGE-A3 특이적 TCR, HLA-A＊02 구속성 NY-ESO-1 특이적 TCR, HLA-A＊24 구속성 MAGE-A4 특이적 TCR, 또는 HLA-A＊24 구속성 WT1 특이적 TCR이어도 된다. 또한, NY-ESO-1을 인식 또는 결합할 수 있는 TCR을 「NY-ESO-1 TCR」이라고 칭하고, NY-ESO-1 TCR을 발현하도록 개변된 T 세포를 「NY-ESO-1 TCR-T」라고 칭한다.
재조합 TCR의 항원에 대한 결합 친화성을 나타내는 평형 해리 상수(KD)는, 예를 들어 100μM 이하, 10μM 이하, 1μM 이하, 500nM 이하, 또는 100nM 이하여도 되고, 0.1pM 이상, 0.5pM 이상, 또는 1pM 이상이어도 된다. 평형 해리 상수는, 예를 들어 SPR 측정 또는 Biacore(상표) 분석에 의해 결정할 수 있다.
B-3. CAR 또는 재조합 TCR을 발현하도록 개변된 면역 세포
CAR을 발현하도록 개변된 면역 세포(예: CAR-T 세포, CAR-NK 세포)는, CAR 발현용 핵산(핵산 구축물을 포함함)을 함유하는 면역 세포인 것이 바람직하다. 마찬가지로, 재조합 TCR을 발현하도록 개변된 면역 세포(예: TCR-T 세포)는, 재조합 TCR 발현용 핵산(핵산 구축물을 포함함)을 함유하는 면역 세포인 것이 바람직하다.
B-3-1. CAR 또는 재조합 TCR 발현용 핵산
CAR 또는 재조합 TCR 발현용 핵산은, CAR 또는 재조합 TCR을 코드하는 핵산에 추가하여, 프로모터를 함유하는 것이 바람직하다. 프로모터의 비한정적인 예로서는, CMV 프로모터, EF1 프로모터, SV40 프로모터, MSCV 프로모터 등의 pol II계 프로모터; trc나 tac 등의 트립토판 프로모터; lac 프로모터; T7 프로모터; T5 프로모터; T3 프로모터; SP6 프로모터; 아라비노오스 유도 프로모터; 콜드 쇼크 프로모터; 테트라사이클린 유도성 프로모터; 유비키틴 프로모터 등을 들 수 있다.
CAR 또는 재조합 TCR 발현용 핵산은, 또한 다른 엘리먼트를 함유하고 있어도 된다. 다른 엘리먼트의 비한정적인 예로서는, 복제 기점, 인핸서 서열, 터미네이터 서열, 리포터 단백질 코드 서열, 약제 내성 유전자 코드 서열 등을 들 수 있다.
재조합 TCR 발현용 핵산은, 예를 들어 WO2008/153029(참조함으로써 그의 전체가 명세서에 원용됨)에 기재되어 있는 바와 같이, 내재성 TCR의 발현을 억제하는 서열(예: 내재성 TCRα쇄 및 β쇄에 대한 siRNA)을 함유하는 것이 바람직하다.
CAR 또는 재조합 TCR 발현용 핵산은, 벡터의 형태여도 된다. 벡터는 비바이러스 벡터여도 되지만, 바이러스 벡터인 것이 바람직하다.
바이러스 벡터의 비한정적인 예로서는, 레트로바이러스 벡터(온코레트로 바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터 및 위형 벡터를 포함함), 아데노바이러스 벡터, 아데노 수반 바이러스(AAV) 벡터, 시미안 바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터 또는 센다이 바이러스 벡터, 엡스타인-바 바이러스(EBV) 벡터, HSV 벡터 등을 들 수 있다. 바이러스 벡터는, 감염 세포 내에서 자기 복제하지 않도록 복제능을 결여하는 바이러스 벡터를 사용할 수도 있다.
B-3-2. 면역 세포
면역 세포는, CAR 또는 재조합 TCR을 발현하도록 개변할 수 있는 것이면, 특별히 한정되지 않는다. 면역 세포의 비한정적인 예로서는, 단구, 마크로파지, T 세포, B 세포, NK 세포를 들 수 있다. 일 실시 형태에 있어서, 면역 세포는 T 세포 또는 NK 세포인 것이 바람직하다. T 세포의 비한정적인 예로서는, CD4 양성 T 세포(예: 헬퍼 T 세포), CD8 양성 T 세포(예: 세포 상해성 T 세포), 내츄럴 킬러 T 세포, 제어성 T 세포(Treg), 나이브 T 세포, 이펙터 T 세포, 기억 T 세포, 종양 침윤 림프구(TIL), αβT 세포, γδT 세포를 들 수 있다. 전형적으로는, 면역 세포는 세포 집단일 수 있고, 당해 세포 집단은, 예를 들어 말초혈 단핵 세포(PBMC)를 함유하는 세포 집단이어도 된다. 면역 세포는, 조혈 줄기세포로부터 분화되도록 한 것이어도 되지만, 생체에서 유래되는 것, 예를 들어 생체(말초혈, 제대혈, 골수, 림프절, 비장 등)로부터 채취한 것, 또는 생체로부터 채취하여 확대 배양한 것인 것이 바람직하다. 면역 세포는, 자가 면역 세포(의약 조성물 B를 투여하는 대상의 면역 세포)여도 되고, 타가 면역 세포여도 된다. 타가 면역 세포의 경우, HLA의 형이 일치하고 있는 것이 바람직하다.
일 실시 형태에 있어서, 면역 세포는, 형질 도입 전에, 가용형 또는 막 결합형의 항CD3 항체(예: OKT3 또는 mOKT3) 및/또는 APC(예: 인공 APC)로 자극해도 된다. APC는, 막형의 항CD3 모노클로날 항체를 발현하고 있어도 된다.
B-3-3. CAR 또는 재조합 TCR 발현용 핵산의 면역 세포에의 형질 도입
CAR 또는 재조합 TCR 발현용 핵산을 면역 세포에 형질 도입하는 방법으로서는, 예를 들어 바이러스 감염법, 칼슘 인산법, 리포펙션법, 미세 주입법, 일렉트로포레이션법 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다.
B-3-4. 개변 면역 세포의 비한정적인 예
개변 면역 세포 중 CAR-T 세포의 비한정적인 예로서는, CD19 CAR을 발현하도록 개변된 T 세포(예: 길리아드사의 Yescarta(axicabtagene ciloleucel), 노바티스사의 Kymriah(tisagenlecleucel), 브리스톨·마이야즈 스퀴브사의 Breyanzi(lisocabtagene maraleucel), 다카라 바이오 가부시키가이샤의 TBI-1501, 니혼 서비어사의 UCART19/ALLO-501), BCMA CAR을 발현하도록 개변된 T 세포(예: 셀진사의 bb2121, ide-cel, 얀센 파마사의 JNJ-68284528), CD98 CAR을 발현하도록 개변된 T 세포(예: 미국 특허 출원 공개 제2018/0230212호(참조함으로써 그의 전체가 명세서에 원용됨)에 기재된 CAR을 발현하도록 개변된 T 세포), 활성형 인테그린 β7 CAR을 발현하도록 개변된 T 세포(예: 미국 특허 출원 공개 제2018/0230216호(참조함으로써 그의 전체가 명세서에 원용됨)에 기재된 CAR을 발현하도록 개변된 T 세포)를 들 수 있다. TCR-T 세포의 비한정적인 예로서는, NY-ESO-1 특이적 TCR-T 세포(예: Tmunity사의 NY-ESO-1TCR-T Triple Knockout TCR(NYCE), 다카라 바이오 가부시키가이샤의 TBI-1301), MAGE-A4 특이적 TCR-T 세포(예: Adaptimmune사의 ADP-A2M4 SPEAR T-cells), MAGE-A3 및/또는 MAGE-A6 특이적 TCR-T 세포(예: Kite/Gilead Sciences사의 KITE-718)를 들 수 있다. 일 실시 형태에 있어서, 개변 면역 세포는, CD19를 특이적으로 인식하는 CAR을 발현하도록 개변된 T 세포, 인테그린 β7(예를 들어 활성형 인테그린 β7)을 특이적으로 인식하는 CAR을 발현하도록 개변된 T 세포, CD19를 특이적으로 인식하는 CAR을 발현하도록 개변된 NK 세포, 또는 NY-ESO-1을 특이적으로 인식하는 재조합 TCR을 발현하도록 개변된 T 세포인 것이 바람직하다.
B-4. 다른 성분
의약 조성물 B는, 다른 성분으로서, 약학적으로 허용 가능한 부형제를 함유하는 것이 바람직하다. 약학적으로 허용 가능한 부형제로서는, 예를 들어 A-2에 기재된 부형제와 동일한 것을 들 수 있다. 일 실시 형태에 있어서, 약학적으로 허용 가능한 부형제는, 담체(예: 멸균수, 생리 식염수), 안정제, 항산화제(예: 아스코르브산), 완충제(예: 인산, 시트르산 등의 유기산), 보존제, 계면 활성제(예: 폴리에틸렌글리콜, Tween), 킬레이트제(예: EDTA), 당 또는 당알코올(예: 글루코오스, 만노오스, 수크로오스, 만니톨), 아미노산(예: 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌, 리신), 폴리펩티드 또는 단백질(예: 혈청 알부민, 젤라틴, 면역 글로불린) 및 아쥬반트(예: 수산화알루미늄 등의 아쥬반트)로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종이다.
B-5. 투여
개변된 면역 세포의 투여량의 하한은, 투여 목적, 투여 대상 및 그의 상태 등에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예를 들어, 1일 투여량의 하한은, 대상의 체중 1kg당, 생세포수로서, 1×102개, 5×102개, 1×103개, 2×103개, 3×103개, 4×103개, 5×103개, 6×103개, 7×103개, 8×103개, 9×103개, 1×104개, 2×104개, 3×104개, 4×104개, 5×104개, 6×104개, 7×104개, 8×104개, 9×104개, 또는 1×105개여도 된다. 또한, 1일 투여량의 상한도, 하한과 마찬가지로 적절히 선택할 수 있고, 예를 들어 대상의 체중 1kg당, 생세포수로서, 1×109개, 5×108개, 1×108개, 5×107개, 1×107개, 5×106개, 또는 1×106개여도 된다. 예를 들어, 1일 투여량은, 대상의 체중 1kg당, 생세포수로서, 1×103개 내지 1×108개, 5×103개 내지 5×107개, 또는 1×104개 내지 1×107개여도 된다. 1일 투여량이 상기 범위가 되도록 2회 이상(예: 2회 또는 3회)으로 나누어서 투여해도 되고, 경우에 따라 2일로 나누어서 투여해도 된다. 개변된 면역 세포의 투여량은, 단독으로 투여하는 경우의 투여량보다도 적은 양, 또는 단독으로는 유효하지 않은 양이어도 된다. 이러한 양으로 투여한 경우에도, 톨리나판트계 약제의 투여와 더불어 우수한 효능을 발휘할 수 있다.
의약 조성물 B는 임의의 빈도로 투여할 수 있다. 예를 들어, 의약 조성물 B는 1일에 1회, 2회, 또는 3회, 2일에 1회, 3일에 1회, 4일에 1회, 5일에 1회, 6일에 1회, 1주일에 1회, 2주일에 1회, 3주일에 1회, 또는 4주일에 1회의 빈도로 투여할 수 있다. 또한, 의약 조성물 B는, 상기 빈도(예: 1일 1회)로 소정의 기간(예: 1주일, 2주일, 3주일, 또는 4주일) 투여를 계속해도 되고, 그 후, 소정의 기간(예: 1주일, 2주일, 3주일, 또는 4주일) 투여를 중단해도 되고, 투여의 계속 및 중단의 사이클을 반복해도 된다.
일 실시 형태에 있어서, 의약 조성물 B(또는 개변된 면역 세포)의 투여에는, (1) 의약 조성물 B(또는 개변된 면역 세포)를 투여하는 것, (2) 의약 조성물 B(또는 개변된 면역 세포)의 투여 후의 대상으로부터 취득한 면역 세포를 사용하여 제작된, 새로운 의약 조성물 B(또는 개변된 면역 세포)를 투여하는 것 및 필요에 따라 (3)(2)를 반복하는 것을 포함하는 것이 바람직하다.
의약 조성물 B는, 톨리나판트계 약제의 투여 전, 예를 들어 투여의 직전, 1분 전, 2분 전, 3분 전, 4분 전, 5분 전, 10분 전, 20분 전, 30분 전, 1시간 전, 2시간 전, 3시간 전, 4시간 전, 5시간 전, 6시간 전, 7시간 전, 8시간 전, 9시간 전, 10시간 전, 11시간 전, 12시간 전, 18시간 전, 24시간 전, 2일 전, 3일 전, 4일 전, 5일 전, 6일 전, 또는 1주일 전에 투여해도 된다. 의약 조성물 B는, 톨리나판트계 약제의 투여와 동시에 투여해도 된다. 의약 조성물 B는, 톨리나판트계 약제의 투여 후, 예를 들어 투여의 직후, 1분 후, 2분 후, 3분 후, 4분 후, 5분 후, 10분 후, 20분 후, 30분 후, 1시간 후, 2시간 후, 3시간 후, 4시간 후, 5시간 후, 6시간 후, 7시간 후, 8시간 후, 9시간 후, 10시간 후, 11시간 후, 12시간 후, 18시간 후, 24시간 후, 2일 후, 3일 후, 4일 후, 5일 후, 6일 후, 또는 1주일 후에 투여해도 된다. 또한, 의약 조성물 B는, 예를 들어 톨리나판트계 약제의 투여 후이며, 종양 마커의 레벨이 베이스 라인 레벨을 상회하는 경우에 투여해도 된다.
의약 조성물 B의 투여와 톨리나판트계 약제의 투여 사이에, 혹은, 의약 조성물 B의 투여 후로부터 다음 의약 조성물 B의 투여까지 사이에, 다른 화학 요법(다른 약제의 투여)을 행해도 되고, 비화학 요법(예: 방사선 요법, 광선 역학 요법, 외과 수술, 식사 제한) 등을 행해도 된다. 다른 약제의 비한정적인 예로서는, 알킬화제, DNA 메틸화 저해제, 대사 길항제(예: 피리미딘계 대사 길항제, 퓨린계 대사 길항제, 엽산 대사 길항제) 등을 들 수 있다.
의약 조성물 B의 투여 대상으로서는, 예를 들어 의약 조성물 A의 투여 대상과 동일한 것을 들 수 있다. 의약 조성물 B의 투여 대상은, 톨리나판트계 약제를 투여되는 또는 투여된 대상이어도 된다. 의약 조성물 B의 투여 대상은, IAP 관련 질환, 특히 암의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 대상(또는 초발 환자 혹은 재발 환자)인 것이 바람직하다.
의약 조성물 B의 조성, 제조 방법, 투여 방법 등은, 예를 들어 WO1993/019163(참조함으로써 그의 전체가 명세서에 원용됨)의 기재에 기초하여 설계할 수 있다.
B-6. 의약 용도
의약 조성물 B는, 의약 조성물 A와 조합하여 그의 약효(유전자 개변 면역 요법에 있어서의 치료 효과)가 증강할 수 있는 양태에서 사용되는 한, 그의 용도는 특별히 제한되지 않는다. 의약 조성물 B는, 예를 들어 유전자 개변 면역 요법의 대상이 되는 질환, 전형적으로는 암인 것이 바람직하다. 암의 비한정적인 예로서는, 의약 조성물 A에서 예시한 것과 마찬가지의 것을 들 수 있다.
C. 키트
본 개시의 키트는, 식 (1)로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물을 함유하는 제1제, 그리고, 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 면역 세포를 함유하는 제2제를 구비하는 것이 바람직하다.
제1제는 의약 조성물 A를 포함하는 것이 바람직하고, 제2제는 의약 조성물 B를 포함하는 것이 바람직하다. 제1제 및 제2제는, 동일한 제제에 있고 동시에 투여하는 것이어도 되고, 다른 제제에 있고 동시에, 따로따로, 또는 연속적으로 투여하는 것이어도 된다.
상기의 각 실시 형태에 대하여 설명한 각종 구성(성질, 구조, 기능 등)은, 본 개시에 포함되는 주제를 특정함에 있어서, 어떻게 조합되어도 된다. 본 개시는, 상기의 각 실시 형태에 한정되는 것은 아니고, 본 명세서의 개시에 기초하여 당업자가 인식할 수 있는 모두를 포함한다.
실시예
이하, 본 개시에 포함되는 주제를 보다 구체적으로 설명하지만, 당해 주제는 하기의 예에 한정되는 것은 아니다.
1. 시험 재료 및 시험 방법
1.1 피험 세포
1.1.1 피험 세포
1-1) 세포명: CD19 CAR-T(다카라 바이오 가부시키가이샤제)
1-2) 유래: 인간 말초혈 유래 T 세포
1-3) 입수처: ACCUCELL 등
특성: 시판 인간 PMBC를 항CD3 항체(클론; OKT3)로 자극하고, 또한 IL-2(250U/mL) 함유 배지에서 증식시킴으로써 유도한 T 세포에, 리더 서열, 항 인간 CD19 항체(클론; FMC63)의 중쇄 및 경쇄 가변 영역(Variable Region)을 연결시킨 단일쇄 가변 단편(single-chain variable fragment)(scFv) 서열, 링커 서열, CD28 분자의 세포 외 영역·막 관통 영역·세포 내 영역을 포함하는 서열 및 CD3ζ 분자의 세포 내 영역을 연결한 서열을 레트로바이러스 벡터를 사용하여 도입하고, 증식, 배양 후, 동결 보존된 세포.
2-1) 세포명: 활성형 인테그린 β7 CAR-T 세포
2-2) 유래: 인간 말초혈 유래 T 세포
2-3) 입수처: ACCUCELL 등
특성: 시판 인간 PMBC를 항CD3 항체(클론; OKT3) 및 항CD28 항체(클론; 28.2)로 자극하고, 또한 IL-2(100U/mL) 함유 배지에서 증식시킴으로써 유도한 T 세포에, 항 인간 활성형 인테그린 β7 항체(클론; MMG49)의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 연결시킨 단일쇄 가변 단편(scFv) 서열, 리더 서열, 링커 서열, CD28 분자의 세포 외 영역·막 관통 영역·세포 내 영역을 포함하는 서열 및 CD3ζ 분자의 세포 내 영역을 연결한 서열을, 레트로바이러스 벡터를 사용하여 도입하고, 증식, 배양 후, 동결 보존된 세포.
3-1) 세포명: HLA-A＊02:01 구속성 NY-ESO-1TCR-T(이하 NY-ESO-1 TCR-T)
3-2) 유래: 인간 말초혈 유래 T 세포
3-3) 입수처: ACCUCELL 등
특성: 시판 인간 PMBC를 항CD3 항체(클론; OKT3) 및 항CD28 항체(클론; 28.2)로 자극하고, 또한 IL-2(100U/mL) 함유 배지에서 증식시킴으로써 유도한 T 세포에, HLA-A＊02:01 구속성 NY-ESO-1을 특이적으로 인식하는 T 세포 수용체(TCR) α쇄 및 β쇄, 그리고 내재성의 TCR α쇄 및 β쇄 유전자에 간섭하는 siRNA를 발현하는 레트로바이러스 벡터 MS3II-NYESO1-siTCR(일본 특허 제5969468호)을 감염시킴으로써 유전자 개변된 T 세포(일본 특허 제5271901호, 일본 특허 제5828861호). 제작 후, 동결 보존된 세포.
4-1) 세포주명: CD19 CAR-KHYG-1
4-2) 유래: 인간 NK 모양 세포
4-3) 입수처: JCRB
입수 후 CD19 CAR 발현주를 수립
4-4) 배양 조건: 10％ 비동화(56℃, 30분 처리) 소 태아 혈청 그리고 이하의 첨가물, 사이토카인을 포함하는 RPMI1640 배지, CO2 인큐베이터(37℃, 5％ CO2)
a) 배양액: RPMI1640
i) 입수처: 나카라이 테스크 가부시키가이샤
b) 혈청: 소 태아 혈청
i) 농도: 10％
ii) 입수처: 시그마 알드리치
c) 첨가물: 페니실린-스트렙토마이신 혼합 용액
i) 농도: 100Units/mL 페니실린, 100μg/mL 스트렙토마이신
ii) 입수처: 나카라이 테스크 가부시키가이샤
d) 사이토카인: 재조합 인간 IL-2
i) 농도: 100U/m
ii) 입수처: PeproTech
특성: 인간 NK 모양 세포주인 KHYG-1에 CD19 CAR 레트로바이러스 벡터를 사용하여 유전자 도입하고, 증식시킨 뒤 FCM에서 양성 세포를 소팅, 다시 확대 배양 후, 동결 보존한 세포.
1.1.2 대조 세포
1-1) 세포주명: 컨트롤-T 세포(인간 T 세포)
1-2) 유래: 인간 말초혈 PBMC
1-3) 입수처: ACCUCELL 등
특성: 시판 인간 PBMC를 항CD3 항체(클론; OKT3) 및 항CD28 항체(클론; 28.2)로 자극하고, 또한 IL-2(100U/mL) 함유 배지에서 증식, 배양 후, 동결 보존된 세포.
2-1) 세포주명: KHYG-1
2-2) 유래: 인간 NK 모양 세포
2-3) 입수처: JCRB
2-4) 배양 조건: 10％ 비동화(56℃, 30분 처리) 소 태아 혈청 그리고 이하의 첨가물, 사이토카인을 포함하는 RPMI1640 배지, CO2 인큐베이터(37℃, 5％ CO2)
a) 배양액: RPMI1640
i) 입수처: 나카라이 테스크 가부시키가이샤
b) 혈청: 소 태아 혈청
i) 농도: 10％
ii) 입수처: 시그마 알드리치
c) 첨가물: 페니실린-스트렙토마이신 혼합 용액
i) 농도: 100Units/mL 페니실린, 100μg/mL 스트렙토마이신
ii) 입수처: 나카라이테스크 가부시키가이샤
d) 사이토카인: 재조합 인간 IL-2
i) 농도: 100U/mL
ii) 입수처: PeproTech
1.1.3 세포 희석액의 조제
세포 희석액은 47％ 비카본 수액, 20％ 저분자 덱스트란 당주, 28％ 인간 혈청 알부민 25％, 5％ 디메틸술폭시드를 사용하였다. 모든 용액을 혼합 후, 사용할 때까지 초저온 냉동고(설정 온도 -80℃)에 보존하였다.
1.1.4 피험 세포 투여액 및 대조 세포 투여액의 조제
1) 동결 보존된 CD19 CAR-T를 37℃의 항온조에서 급속 융해 후, 세포 희석액에 현탁하고, 원심(800×g, 5분, 4℃)에 의해 상청을 제거하였다. 세포를 세포 희석액에 재현탁한 후, 현탁액의 일부를 취하여 AOPI 염색 용액으로 사세포를 염색하고, 혈구 측정 장치 Cellometer Auto 2000 Cell Viability Counter(Nexcelom Bioscience사제)를 사용하여 생세포수를 카운트하였다. 세포의 생세포수의 측정 결과로부터 군 구성을 따라 0.1mL/body가 되도록 세포 희석액으로 조제하였다. 조제 후의 세포 현탁액은, 투여 시까지 빙수 중에서 보존하였다.
2) 동결 보존된 활성형 인테그린 β7 CAR-T를 37℃의 항온조에서 급속 융해 후, 세포 희석액에 현탁하고, 원심(800×g, 5분, 4℃)에 의해 상청을 제거하였다. 세포를 세포 희석액에 재현탁한 후, 현탁액의 일부를 취하여 AOPI 염색 용액으로 사세포를 염색하고, 혈구 측정 장치를 사용하여 생세포수를 카운트하였다. 세포의 생세포수의 측정 결과로부터 군 구성을 따라 0.1mL/body가 되도록 세포 희석액으로 조제하였다. 조제 후의 세포 현탁액은, 투여 시까지 빙수 중에서 보존하였다.
3) 동결 보존된 컨트롤-T를 37℃의 항온조에서 급속 융해 후, 세포 희석액에 현탁하고, 원심(800×g, 5분, 4℃)에 의해 상청을 제거하였다. 세포를 세포 희석액에 재현탁한 후, 현탁액의 일부를 취하여 AOPI 염색 용액으로 사세포를 염색하고, 혈구 측정 장치를 사용하여 생세포수를 카운트하였다. 세포의 생세포수의 측정 결과로부터 군 구성을 따라 0.1mL/body가 되도록 세포 희석액으로 조제하였다. 조제 후의 세포 현탁액은, 투여 시까지 빙수 중에서 보존하였다.
4) 동결 보존된 NY-ESO-1TCR-T를 37℃의 항온조에서 급속 융해 후, 세포 희석액에 현탁하고, 원심(800×g, 5분, 4℃)에 의해 상청을 제거하였다. 세포를 세포 희석액에 재현탁한 후, 현탁액의 일부를 취하여 AOPI 염색 용액으로 사세포를 염색하고, 혈구 측정 장치를 사용하여 생세포수를 카운트하였다. 세포의 생세포수의 측정 결과로부터 군 구성을 따라 0.1mL/body가 되도록 세포 희석액으로 조제하였다. 조제 후의 세포 현탁액은, 투여 시까지 빙수 중에서 보존하였다.
5) 동결 보존된 CD19 CAR-KHYG-1 및 KHYG-1을 37℃의 항온조에서 급속 융해 후, 배지에 현탁하고, 원심(150×g, 5분, 20℃)에 의해 상청을 제거하였다. 세포를 배지에 재현탁 후, 전량을 플라스크에 파종하여, 37℃, 5％ CO2 존재 하에서 배양하였다. 배양 개시 후, 현미경으로 세포의 형태 및 증식 상태를 관찰하고, 서브 컨플루언트가 될 때까지 배양하였다. 서브 컨플루언트의 세포 현탁액을 새로운 배지가 들어간 배양 플라스크에 계대하였다. 그 후도 마찬가지의 조작을 계속하여 확대 배양을 하고, 시험 기간 중은 투여에 필요한 세포를 유지하였다.
각 투여일은 서브 컨플루언트의 상태까지 배양한 각 세포 현탁액을 필요량 회수하고, 원심 조작에 의해 D-PBS(-)에서 3회 세정한 뒤 무혈청의 RPMI1640에서 재현탁하였다. 재현탁 후, 세포 현탁액의 일부를 취하여 AOPI 염색 용액으로 사세포를 염색하고, 혈구 측정 장치를 사용하여 생세포수를 카운트하였다. 세포의 생세포수의 측정 결과로부터 군 구성을 따라 0.1mL/body가 되도록 세포 희석액으로 조제하였다. 조제 후의 투여액은, 투여 시까지 빙수 중에서 보존하였다.
1.2 피험 물질
1.2.1 피험 물질
Figure pct00011
톨리나판트: 본 실시예에 한하여 식 (1)로 표시되는 화합물의 (+)-L-락트산염을 나타낸다.
보관 조건: 냉장, 차광
1.2.2 매체의 조제
기본 매체로 하여 톨리나판트는 증류수, 비리나판트는 캡티솔, LCL161은 아세트산나트륨, 그리고 AT406은 히프로멜로오스를 사용하였다.
캡티솔은 필요량을 칭량 후, 증류수로 용해, 12.5％ 캡티솔 용액이 되도록 조제하여 비리나판트의 용매로 하였다.
아세트산나트륨은 3M 아세트산나트륨 완충액(pH5.2)에 0.1M 염산을 첨가하여 pH를 4.3 내지 4.6의 범위 내가 되도록 맞추어 LCL161의 용매로 하였다.
히프로멜로오스는 필요량을 칭량 후 PBS에서 용해, 1％ 히프로멜로오스 용액을 조제하였다. 용해 후, 오토클레이브를 가한 뒤 0.1％ 상당량의 Tween 80을 첨가하고 용해하여 AT406의 용매로 하였다.
모든 매체는 약제 조제까지 저온실(설정 온도 4℃)에 보존하였다.
1.2.3 톨리나판트 투여액의 조제
톨리나판트의 조제는 기보에 기초하여 16mg/kg가 되도록 조제하였다(참고 문헌 1: Mol Cancer Ther. 2018 July; 17(7): 1381-1391; 참고 문헌 2: Oncoimmunology, 2020 January 9; 9(1): 1710398). 톨리나판트는 1.6mg/mL가 되도록 필요량 칭량 후, 증류수로 무색 투명으로 용해시켰다. 투여액은 멸균 완료 튜브에 분주하고, 투여까지 차광하여 냉동 보존하였다.
1.2.4 비리나판트 투여액의 조제
비리나판트의 조제는 기보에 기초하여 12mg/kg가 되도록 조제하였다(참고 문헌 3: Jessica Michie, et al., Cancer Immunol Res. 2019; 7(2): 183-192). 비리나판트 1.2mg/mL가 되도록 필요량 칭량 후, 사전에 조제한 캡티솔로 현탁하였다. 현탁은 마노 유발을 사용하여 균일한 미세한 현탁액이 될 때까지 갈아 으깨어 제작하였다. 투여액은 멸균 완료 튜브에 분주하고, 투여까지 차광하여 저온실(설정 온도 4℃)에 보존하였다.
1.2.5 LCL161 투여액의 조제
LCL161의 조제는 기보에 기초하여 30mg/kg가 되도록 조제하였다(참고 문헌 4: Peter J Houghton et al., Pediatr Blood Cancer. 2012; 58(4): 636-639). LCL161은 3mg/mL가 되도록 필요량 칭량 후, 사전에 조제한 아세트산나트륨 용액으로 무색 투명으로 용해시켰다. 투여액은 멸균 완료 튜브에 분주하고, 투여까지 차광하여 저온실(설정 온도 4℃)에 보존하였다.
1.2.6 AT406 투여액의 조제
AT406의 조제는 기보에 기초하여 100mg/kg가 되도록 조제하였다(참고 문헌 5: Melissa K Brunckhorst et al., Cancer Biology & Therapy. 2012; 13(9): 804-811). AT406은 처음에 200mg/mL DMSO 용액을 조제하였다. 다음으로 10mg/mL이 되도록 필요량을 분취하고, 사전에 조제한 히프로멜로오스 용액으로 현탁하였다. 현탁은 마노 유발을 사용하여 균일한 미세한 현탁액이 될 때까지 갈아 으깨어 제작하였다. 투여액은 멸균 완료 튜브에 분주하고, 투여까지 차광하여 저온실(설정 온도 4℃)에 보존하였다.
1.3 시험계
1.3.1 사용 세포
1.3.1.1 NALM6-luc2
1) 세포주명: NALM6-luc2
2) 유래: 급성 림프구성 백혈병
3) 입수처: ATCC CRL-3273
입수 후: luc2주를 수립
4) 배양 조건: 10％ 비동화(56℃, 30분 처리) 소 태아 혈청을 포함하는 RPMI1640 배지, CO2 인큐베이터(37℃, 5％ CO2)
a) 배양액: RPMI1640
i) 입수처: 나카라이 테스크 가부시키가이샤
b) 혈청: 소 태아 혈청
i) 농도: 10％
ii) 입수처: 니치레이 바이오사이언스
c) 첨가물: 페니실린-스트렙토마이신 혼합 용액
i) 농도: 100Units/mL 페니실린, 100μg/mL 스트렙토마이신
ii) 입수처: 나카라이 테스크 가부시키가이샤
1.3.1.2 MM.1S-luc2
1) 세포주명: MM.1S
2) 유래: 다발성 골수종
3) 입수처: ATCC(입수 후에 luc2주를 수립)
4) 배양 조건: 10％ 비동화(56℃, 30분 처리) 소 태아 혈청을 포함하는 RPMI1640 배지, CO2 인큐베이터(37℃, 5％ CO2)
a) 배양액: RPMI1640
i) 입수처: 나카라이테스크 가부시키가이샤
b) 혈청: 소 태아 혈청
i) 농도: 10％
ii) 입수처: 시그마 알드리치
c) 첨가물: 페니실린-스트렙토마이신 혼합 용액
i) 농도: 100Units/mL 페니실린, 100μg/mL 스트렙토마이신
ii) 입수처: 나카라이 테스크 가부시키가이샤
1.3.1.3 A375
1) 세포주명: A375
2) 유래: 악성 흑색종
3) 입수처: ATCC CRL-1619
4) 배양 조건: 10％ 비동화(56℃, 30분 처리) 소 태아 혈청을 포함하는 DMEM 배지, CO2 인큐베이터(37℃, 5％ CO2)
a) 배양액: DMEM
i) 입수처: 나카라이 테스크 가부시키가이샤
b) 혈청: 소 태아 혈청
i) 농도: 10％
ii) 입수처: 시그마 알드리치
c) 첨가물: 페니실린-스트렙토마이신 혼합 용액
i) 농도: 100Units/mL 페니실린, 100μg/mL 스트렙토마이신
ii) 입수처: 나카라이 테스크 가부시키가이샤
1.3.1.4 NALM6
1) 세포주명: NALM6
2) 유래: 급성 림프구성 백혈병
3) 입수처: ATCC CRL-3273
4) 배양 조건: 10％ 비동화(56℃, 30분 처리) 소 태아 혈청을 포함하는 RPMI1640 배지, CO2 인큐베이터(37℃, 5％ CO2)
a) 배양액: RPMI1640
i) 입수처: 나카라이테스크 가부시키가이샤
b) 혈청: 소 태아 혈청
i) 농도: 10％
ii) 입수처: 시그마 알드리치
c) 첨가물: 페니실린-스트렙토마이신 혼합 용액
i) 농도: 100Units/mL 페니실린, 100μg/mL 스트렙토마이신
ii) 입수처: 나카라이 테스크 가부시키가이샤
1.3.2 동물
1) 종/계통: 마우스/NOD/Shi-scid, IL-2RγKO Jic(NOG)
2) 미생물학적 그레이드: 무특이 병원체(specific pathogen-free)(SPF)
3) 입수처: 인 비보 사이언스(주)
4) 주령(입하 시): 6주령
5) 사육 조건
하기의 조건에 설정된 환경 하에서, 동물의 사육을 행하였다.
a) 온도: 23±3℃
b) 습도: 55±15％
c) 조명: 조명 시간: 오전 8시 내지 오후 8시
소등 시간: 오후 8시 내지 오전 8시
d) 먹이 및 물: 자유 섭취, CL-2(고형 사료, 방사선 멸균 완료, 니혼 클레아 가부시키가이샤), 오토클레이브 멸균한 수돗물
1.3.3 군 구성
1.3.3.1 IAP 안타고니스트와 CD19 CAR-T의 병용
각 시험의 군 구성은 이하이다.
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
1.3.3.2 IAP 안타고니스트와 활성형 인테그린 β7 CAR-T(aITGB7 CAR-T)의 병용
본 시험의 군 구성은 이하이다.
Figure pct00016
1.3.3.3 IAP 안타고니스트와 NY-ESO-1TCR-T의 병용
본 시험의 군 구성은 이하이다.
Figure pct00017
1.3.3.4 IAP 안타고니스트와 CD19 CAR-KHYG-1의 병용
본 시험의 군 구성은 이하이다.
Figure pct00018
1.3.4 용법 용량의 설정 근거
1.3.4.1 톨리나판트
IAP 안타고니스트의 시험에서 일반적으로 사용되는 인간 유방암 세포주 MDA-MB-231 이종 이식 마우스계에 있어서 효과를 나타내는 용법 용량(16mg/kg, 연일 경구 투여)으로부터 설정하였다(참고 문헌 1 및 2). 또한 본 시험계인 NALM6-luc2에 있어서는, 동일한 레지멘에서 효과를 전혀 나타내지 않은 것을 확인하였다.
1.3.4.2 비리나판트
CAR-T와 비리나판트의 병용 논문에 의해 용법 용량을 설정(12mg/kg, 주 2회 복강 내 투여)하였다(참고 문헌 3). 또한 본 시험계인 NALM6-luc2에 있어서는, 동일한 레지멘에서 효과를 전혀 나타내지 않은 것을 확인하였다.
1.3.4.3 LCL161
기보의 최저 용량(30mg/kg, 주 2회 경구 투여)을 참고로 하였다(참고 문헌 4). 본 시험계인 NALM6-luc2에 있어서는 30mg/kg, 주 2회 경구 투여로 효과를 나타내지 않는 한편, 반수 이상의 사망 예가 인정된 것을 확인하였다. 이것으로부터 용법 용량을 주 1회 경구 투여로 낮춘 설정(30mg/kg, 주 1회 경구 투여)으로 하였다.
1.3.4.4 AT406
기보에 의해 인간 난소암 세포주 OVCAR 이종 이식 마우스계, 그리고 인간 유방암 세포주 MDA-MB-231 이종 이식 마우스계에 있어서 효과를 나타내는 용법 용량으로부터 휴약 없음의 최대 투여량(100mg/kg, 연일 경구 투여)을 설정하였다(참고 문헌 5; 참고 문헌 6: Qian Cai, et al., Med Chem. 2011; 54(8): 2714-2726). 또한 본 시험계인 NALM6-luc2에 있어서는, 동일한 레지멘에서 효과를 전혀 나타내지 않은 것을 확인하였다.
1.3.4.5 CD19 CAR-KHYG-1 및 KHYG-1
교아종 세포주의 피하 종양 마우스 모델에 있어서, KHYG-1을 사용한 Ev CAR-KHYG-1의 약리 시험에서는 1×107cells/body, 주 2회(계 3회)의 종양 내 투여가 실시되고(참고 문헌 7: Nakazawa T, et al., Anticancer Res. 2020; 40(6): 3231-3237), 또한 위암 세포주를 사용한 FOLR1 CAR-KHYG-1에서는 주 1회(계 2회)의 종양 내 투여가 실시되고 있다(참고 문헌 8: Minsung Kim, et al., PLoS One. 2018; 13(6): e0198347).
1.4 시험 방법
1.4.1 IAP 안타고니스트와 CD19 CAR-T의 병용 시험 방법
인 비보 사이언스 가부시키가이샤에서 생산된 NOG 마우스를 6주령으로 입하하고, 7주령으로 종양 세포를 정맥 내 이식하여 담암 마우스를 제작하였다. 이식의 전날에 20mg/kg의 부설펙스(BSF)를 복강 내 투여하였다. 사육 기간 중은, 5마리씩 수용하고, 온도 24℃(실측: 19.7 내지 25.0℃), 습도 50％(실측: 38.6 내지 58.5％), 조명 12시간/1일(8:00AM으로부터 8:00PM)에 설정한 P2A 사육실에서 사육하였다. 그 사이, 방사선 멸균한 마우스용 고형 사료(니혼 클레아, CL-2) 및 물병에 넣은 오토클레이브 멸균 수돗물을 자유롭게 섭취시켰다.
투여하는 CD19 CAR-T 세포는 군 구성을 따라, 1회, 군 분류와 동일 일에 iv 투여하였다. IAP 안타고니스트에 있어서도 군 분류와 동일 일에 투여를 개시하고, 군 구성표를 따라서 po 또는 ip 투여하였다.
평가 기간은 3주 내지 4주간으로 하고, IVIS(상표)에 의한 종양 발광값을 지표에 군 분류와 약리 평가를 행하였다. IVIS(상표)에서의 발광값의 측정 그리고 체중 측정은 주 2회 실시하였다.
1.4.2 IAP 안타고니스트와 활성형 인테그린 β7 CAR-T의 병용 시험 방법
인 비보 사이언스 가부시키가이샤에서 생산된 NOG 마우스를 6주령으로 입하하고, 7주령으로 종양 세포를 정맥 내 이식하여 담암 마우스를 제작하였다. 마우스는 꼬리에 번호를 붙여서 식별하였다. 사육 기간 중은, 5마리씩 수용하고, 온도 24℃(실측: 19.7 내지 25.0℃), 습도 50％(실측: 38.6 내지 58.5％), 조명 12시간/1일(8:00AM으로부터 8:00PM)에 설정한 P2A 사육실에서 사육하였다. 그 사이, 방사선 멸균한 마우스용 고형 사료(니혼 클레아, CL-2) 및 물병에 넣은 오토클레이브 멸균 수돗물을 자유롭게 섭취시켰다.
투여하는 컨트롤-T 세포 그리고 활성형 인테그린 β7 CAR-T(aITGB7 CAR-T) 세포는 군 구성을 따라, 1회, 군 분류와 동일 일에 iv 투여하였다. 톨리나판트에 있어서도 군 분류와 동일 일에 투여를 개시하고, 군 구성표를 따라서 연일 po 투여하였다.
평가 기간은 Day 14 또는 Day 21까지로 하고, IVIS에 의한 종양 발광값을 지표에 군 분류와 약리 평가를 행하였다. IVIS에서의 발광값의 측정 그리고 체중 측정은 주 2회 실시하였다.
1.4.3 IAP 안타고니스트와 NY-ESO-1TCR-T의 병용 시험 방법
인 비보 사이언스 가부시키가이샤에서 생산된 NOG 마우스를 6주령으로 입하하고, 7주령으로 종양 세포를 피하 이식하여 담암 마우스를 제작하였다. 마우스는 꼬리에 번호를 붙여서 식별하였다. 사육 기간 중은, 5마리씩 수용하고, 온도 23℃, 습도 55％, 조명 12시간/1일(8:00AM으로부터 8:00PM)에 설정한 P2A 사육실에서 사육하였다. 그 사이, 방사선 멸균한 마우스용 고형 사료(니혼 클레아, CL-2) 및 물병에 넣은 오토클레이브 멸균 수돗물을 자유롭게 섭취시켰다.
투여하는 NY-ESO-1TCR-T 세포는 군 구성을 따라, 1회, 군 분류와 동일 일에 iv 투여하였다. 톨리나판트에 있어서도 군 분류와 동일 일을 투여 개시일로 하고, 군 구성표를 따라서 po 투여하였다.
평가 기간은 2주일로 하고, 노기스를 사용한 종양 직경 측정의 결과로부터 군 분류와 약리 평가를 행하였다. 종양 직경 측정 그리고 체중 측정은 주 2회 실시하였다.
1.4.4 IAP 안타고니스트와 CD19 CAR-KHYG-1의 병용 시험 방법
인 비보 사이언스 가부시키가이샤에서 생산된 NOG 마우스를 6주령으로 입하하고, 7주령으로 종양 세포를 마트리겔을 사용하여 피하 이식하여 담암 마우스를 제작하였다. 마우스는 꼬리에 번호를 붙여서 식별하였다. 사육 기간 중은, 5마리씩 수용하고, 온도 24℃(실측: 19.7 내지 25.0℃), 습도 50％(실측: 38.6 내지 58.5％), 조명 12시간/1일(8:00AM으로부터 8:00PM)에 설정한 P2A 사육실에서 사육하였다. 그 사이, 방사선 멸균한 마우스용 고형 사료(니혼 클레아, CL-2) 및 물병에 넣은 오토클레이브 멸균 수돗물을 자유롭게 섭취시켰다.
투여하는 CD19 CAR KHYG-1 세포 그리고 KHYG-1 세포는 군 구성을 따라, 군 분류 후, 계 4회, 종양 내 투여하였다. 톨리나판트에 있어서도 군 분류와 동일 일에 투여를 개시하고, 군 구성표를 따라서 연일 경구 투여하였다.
평가 기간은 Day 17까지로 하고, 노기스에 의한 종양 체적을 지표에 군 분류와 약리 평가를 행하였다. 종양 체적 측정 그리고 체중 측정은 주 2회, 각 투여 전에 실시하였다.
1.4.1 배양용 배지의 조제
1.4.1.1 RPMI1640 배지의 조제
500mL의 RPMI1640 배지에, 비동화(56℃, 30분 처리)한 소 태아 혈청을 50mL, 항생 물질을 5mL 첨가하여 배양용 배지로 하였다. 한편, KHYG-1 세포 그리고 CD19 CAR-KHYG-1 세포는, 또한 IL-2를 최종 농도가 100U/mL이 되도록 첨가한 것을 배양용 배지로 하였다. 각각은 사용할 때까지 저온실(설정 온도 4℃)에 보존하였다.
1.4.1.2 DMEM 배지의 조제
500mL의 DMEM 배지에, 비동화(56℃, 30분 처리)한 소 태아 혈청을 50mL 및 항생 물질을 5mL 첨가하여, 사용할 때까지 저온실(설정 온도 4℃)에 보존하였다.
1.4.2 이식용 세포 현탁액의 조제
1.4.2.1 이식용 NALM6-luc2, MM.1S-luc2 및 NALM6 세포 현탁액의 조제
세포의 배양은, 배양용 배지(이하, 배지)를 사용하여 CO2 인큐베이터 내(5％ CO2, 37℃)에서 배양하였다. 동결 보존된 세포주를 37℃의 항온조에서 급속 융해 후, 배지에 현탁하고, 원심(150×g, 5분, 20℃)에 의해 상청을 제거하였다. 세포를 배지에 재현탁 후, 전량을 플라스크에 파종하여, 37℃, 5％ CO2 존재 하에서 배양하였다. 배양 개시 후, 현미경으로 세포의 형태 및 증식 상태를 관찰하고, 서브 컨플루언트가 될 때까지 배양하였다(계대 1회째). 서브 컨플루언트의 세포 현탁액을 새로운 배지가 들어간 배양 플라스크에 계대하였다(계대 2회째). 융해 후, 3회 이상 계대 배양한 세포를 이식에 사용하였다. 계관한 배양액 양은, 새로운 배지의 액량에 대하여 1/10 내지 1/3양의 배양액으로 하였다.
서브 컨플루언트의 상태까지 배양한 세포 현탁액을 원심 조작에 의해 D-PBS(-)에서 3회 세정한 뒤 무혈청의 RPMI1640에서 재현탁하였다.
NALM6-luc2의 경우, 재현탁 후, 세포 현탁액의 일부를 취하여 AOPI 염색 용액으로 사세포를 염색하고, 혈구 측정 장치에서 생세포수를 카운트하였다. 세포의 생세포수의 측정 결과로부터 1×107cells/mL이 되도록 RPMI1640에서 희석하여 조제하였다. 마찬가지로, 저종양량의 계에 있어서는 1×106cells/mL이 되도록 무혈청의 RPMI1640으로 희석해 조제하였다.
MM.1S-luc2의 경우, 재 현탁후, 세포 현탁액의 일부를 취해 AOPI 염색 용액에서 사세포를 염색하고, 혈구 측정 장치에서 생세포수를 카운트하였다. 세포의 생세포수의 측정 결과로부터3×107cells/mL이 되도록 RPMI1640으로 희석하여 조제하였다.
NALM6의 경우, 재현탁 후, 세포 현탁액의 일부를 취하여 AOPI 염색 용액으로 사세포를 염색하고, 혈구 측정 장치에서 생세포수를 카운트하였다. 세포의 생세포수의 측정 결과로부터 1×108cells/mL이 되도록 RPMI1640으로 희석하여 조제하였다. 조제한 세포 현탁액은 발판이 되는 마트리겔(Corning(상표) 고농도 마트리겔 기저막 매트릭스)과 등량 혼화하고, 최종적인 이식용 현탁액(5×107cells/mL)으로 하였다.
조제 후의 세포 현탁액은, 이식 시까지 빙수 중에서 보존하였다.
1.4.2.2 이식용 A375 세포 현탁액의 조제
세포의 배양은, 배양용 배지(이하, 배지)를 사용하여 CO2 인큐베이터 내(5％ CO2, 37℃)에서 배양하였다. 동결 보존된 A375 세포주를 37℃의 항온조에서 급속 융해 후, 배지에 현탁하고, 원심(150×g, 5분, 20℃)에 의해 상청을 제거하였다. 세포를 배지에 재현탁 후, 전량을 디쉬에 파종하여, 37℃, 5％ CO2 존재 하에서 배양하였다. 배양 개시 후, 현미경으로 세포의 형태 및 증식 상태를 관찰하고, 서브 컨플루언트가 될 때까지 배양하였다(계대 1회째). 서브 컨플루언트의 디쉬 상청을 제거하고, D-PBS(-)(나카라이 테스크)를 사용하여 세정하고, 트립신-EDTA(나카라이 테스크)를 첨가하여, 세포를 박리 회수하고, 원심 처리(4℃, 1200rpm, 5분간)하였다. DMEM 배지에서 현탁하고, AOPI 염색 용액을 사용하여 생세포수를 측정하였다. 그리고 디쉬 사이즈에 적합한 세포 밀도로 파종하고, CO2 인큐베이터에서 배양하였다(계대 2회째). 3회 이상 계대 배양한 세포를 이식에 사용하였다.
배양한 세포를 트립신-EDTA에서 박리 회수하고, 원심 처리(4℃, 1200rpm, 5분간)하였다. 상청을 제거 후, D-PBS(-)를 첨가하여 재현탁하고, 마찬가지로 원심 분리하여 세포를 세정하였다. 이 세정 조작을 추가로 2회 반복하였다. 세포 현탁액의 일부를 AOPI 염색 용액을 사용하여 생세포수를 측정 후, D-PBS(-)를 사용하여 1×107cells/mL의 세포 현탁액을 조제하였다. 조제 후의 세포 현탁액은, 이식시까지 얼음 중에서 보존하였다.
1.4.3 이식
1.4.3.1 NALM6-luc2 이식
유지 기구를 사용하여 마우스를 유지 후, 무마취 하의 동물의 미정맥에 27G의 마이젝터(1mL, 데루모 가부시키가이샤)를 사용하여 1×106cells/0.1mL/body의 세포 현탁액을 이식하였다. 또한 저종양량의 계에 있어서는 1×105cells/0.1mL/body의 세포 현탁액을 이식하였다.
1.4.3.2 MM.1S-luc2 이식
유지 기구를 사용하여 마우스를 유지 후, 무마취 하의 동물 미정맥에 27G의 마이젝터(1mL, 데루모 가부시키가이샤)를 사용하여 3×106cells/0.1mL/body의 세포 현탁액을 이식하였다.
1.4.3.3 A375 이식
피하 이식군은, 이식 조작 및 그 후의 종양 증식의 관찰을 용이하게 하기 위해서, 종양 이식 전날까지 안전 면도기를 사용하여 이식 부위(오른쪽 겨드랑이부)를 면도하였다. 담암 마우스를 제작하기 위해서, 무마취 하에서 세포 현탁액을 겨드랑이 피하에 26G 주사 바늘이 딸린 인슐린용 주사통(1mL, 데루모 가부시키가이샤)을 사용하여 1×106cells/0.1mL/body의 세포 현탁액을 이식하였다.
1.4.3.4 NALM6 이식
피하 이식군은, 이식 조작 및 그 후의 종양 증식의 관찰을 용이하게 하기 위해서, 종양 이식 전날까지 안전 면도기를 사용하여 이식 부위(오른쪽 겨드랑이부)를 면도하였다. 담암 마우스를 제작하기 위해서, 무마취 하에서 세포 현탁액을 겨드랑이 피하에 26G 주사 바늘이 딸린 인슐린용 주사통(1mL, 데루모 가부시키가이샤)을 사용하여 5×106cells/0.1mL/body의 세포 현탁액을 이식하였다.
1.4.4 군 분류
1.4.4.1 NALM6-luc2 이식 후의 군 분류
도 6의 투여 레지멘을 따라, 부설펙스에서 처치한 다음날에 NALM6-luc2를 이식하고, 3일째에 In-Vivo 이미징 시스템 IVIS(상표) Lumina X5(Perkin Elmer사)를 사용하여 발광값을 측정하고, 그 발광값을 지표에 SAS software R9.4(SAS Institute Japan)를 사용하여, 층별 무작위 추출법으로 1군 5마리에 할당하였다.
1.4.4.2 MM.1S-luc2 이식 후의 군 분류
도 9의 투여 레지멘을 따라, 이식 후, 7일째에 In-Vivo 이미징 시스템 IVIS(상표) Lumina X5(Perkin Elmer사)를 사용하여 발광값을 측정하고, 그 발광값을 지표에 SAS software R9.4(SAS Institute Japan)를 사용하여, 층별 무작위 추출법으로 1군 5마리에 할당하였다. 군 분류 후는 마우스 꼬리 부분에의 마킹을 행함으로써 개체 식별을 행하였다.
1.4.4.3 A375 이식 후의 군 분류
이식 후, 8일째에 종양의 긴 직경과 짧은 직경을 측정하고, 종양 체적을 산출하였다. SAS software R9.4(SAS Institu1 Japan)를 사용하여, 종양 사이즈 지표로 하여, 층별 무작위 추출법으로 1군 5마리에 할당하였다. 군 분류 후는, 마우스 꼬리 부분에의 마킹을 행함으로써 개체 식별을 행하였다.
1.4.4.4 NALM6 이식 후의 군 분류
이식 후, 21일째에 종양의 긴 직경과 짧은 직경을 측정하고, 종양 체적을 산출하였다. SAS software R9.4(SAS Institute Japan)를 사용하여, 종양 사이즈 지표로 하여, 층별 무작위 추출법으로 1군 5마리에 할당하였다. 군 분류 후는, 마우스 꼬리 부분에의 마킹을 행함으로써 개체 식별을 행하였다.
1.4.5 투여 방법
1) CD19 CAR-T 세포의 현탁액은 미정맥에 군 분류 시에 투여하였다. 투여량은 CD19 CAR-T 생세포수를 카운트하고, 군 구성표를 따라 0.1mL/body로 1회 투여하였다. 투여에는 27G의 마이젝터를 사용하였다.
2) 활성형 인테그린 β7 CAR-T(aITGB7 CAR-T) 세포 및 컨트롤-T 세포의 현탁액은 미정맥에 군 분류 시에 투여하였다. 투여량은 aITGB7 CAR-T 생세포수를 카운트하고, 군 구성표를 따른 세포 밀도의 현탁액을 조제하고, 0.1mL/body로 1회 투여하였다. 투여에는 27G의 마이젝터를 사용하였다.
3) NY-ESO-1TCR-T 세포의 현탁액은 미정맥으로부터 투여하였다. 투여량은 NY-ESO-1 TCR-T 생세포수를 카운트하고, 군 구성표를 따른 세포 밀도의 현탁액을 조제하고, 0.1mL/body로 1회 투여하였다. 투여에는 27G의 마이젝터를 사용하였다.
4) KHYG-1 세포 및 CD19 CAR-KHYG-1 세포의 투여액은, 생세포수를 카운트하여 군 구성표를 따른 세포 밀도의 현탁액을 조제하고, 0.1mL/body로 종양 내에 주 2회 투여(계 4회)하였다. 투여에는 27G의 마이젝터를 사용하였다.
5) 비리나판트는 복강 내에 군 구성표를 따라 10mL/kg로 투여, 톨리나판트, LCL161 그리고 AT406은 마찬가지로 존데를 사용하여 군 구성표를 따라 10mL/kg로 경구 투여하였다. 복강 내 투여에는 26G 주사 바늘이 딸린 인슐린용 주사통을, 경구 투여는 주사 바늘을 존데로 치환하여 투여하였다.
1.4.6 종양 측정
1.4.6.1 종양 발광값(Photones/sec)의 측정
VivoGloTM-luciferin(프로메가)을 D-PBS(-)에서 30mg/mL이 되도록 용해 후, -20℃에서 차광 냉동 보존하였다. 측정 당일, 용해시킨 VivoGloTM-luciferin을 등량의 D-PBS(-)로 희석하였다. 시험에 사용할 때까지 차광 하 실온에서 보존하였다. 미리 측정한 체중을 기초로, VivoGloTM-luciferin을 10mL/kg의 용량으로 복강 내 투여하고, 투여 20분 후에 IVIS(상표) Imaging System을 사용하여 종양의 발광값을 측정하였다. 측정에는 IVIS(상표) Lumina X5를 사용하였다. 도 1 내지 5 및 7에 있어서, 종축의 Total Flux[p/s]는, 종양 발광값(Photones/sec)을 의미한다.
1.4.6.2 종양 직경의 측정
종양 직경의 측정은, 전자 노기스(미츠토요)를 사용하여 짧은 직경과 긴 직경을 측정하였다. 종양 세포 이식 후, 주 2회 종양 직경의 측정을 행하였다.
1.4.6.3 종양 체적의 측정
종양 직경의 측정 결과를 기초로, 다음 식을 사용하여 종양 체적(TV: tumor volume)을 산출하였다.
TV =L×W2×1/2
단
TV: 종양 체적(mm3)
L: 긴 직경(mm)
W: 짧은 직경(mm)
1.4.7 체중
체중은, 군 분류일과 부검일, 투여 기간 중은 주 2회, 측정을 행하였다.
1.5 평가 항목
종양 발광값 또는 종양 체적
체중
체중 변화
1.6 통계 해석 방법
각 데이터는, Microsoft Excel 2013을 사용하여, 요약 통계량(평균값 및 표준 편차 및 표준 오차)을 산출하였다. 통계 해석을 수반하는 데이터는 SAS 소프트웨어 R9.4(SAS Institute Japan)를 사용하여 행하였다. 유의성은 p<0.05로 정의하였다.
2. 결과
2.1 IAP 안타고니스트와 CD19 CAR-T의 병용 시험
2.1.1 비리나판트와 CD19 CAR-T의 병용 시험
CD19 CAR-T 단독과 비교하여, 비리나판트와 CD19 CAR-T의 병용으로 항종양 효과를 높이는 일은 없었다(도 1).
2.1.2 톨리나판트와 CD19 CAR-T의 병용 시험
톨리나판트와 CD19 CAR-T의 병용에 의해 Day7 이후로 유의미한 병용 효과를 확인했다. 1×105cells의 CD19 CAR-T에 톨리나판트를 병용했을 때, Day14에서 1×106cells CD19 CAR-T 단독 효과로 동등, 그 이후에서는 더 상회하는 종양의 퇴축을 확인했다(도 2).
2.1.3 저종양에 대한 톨리나판트와 CD19 CAR-T의 병용 시험
톨리나판트와 CD19 CAR-T의 병용에 의해 강한 병용 효과를 확인했다. 1×105cells의 CD19 CAR-T에 톨리나판트를 병용했을 때, Day17에서 1×106cells CD19 CAR-T 단독과 동등한 효과를 나타내고, 2×104cells의 CD19 CAR-T에 톨리나판트를 병용했을 때에는, Day21에서 1×106cells CD19 CAR-T 단독과 동등한 효력이 얻어지고, 실질 50배 이상의 CAR-T 세포수 삭감의 가능성을 시사하는 결과였다(도 3).
2.1.4 LCL161, AT406과 CD19 CAR-T의 병용 시험
LCL161과 CD19 CAR-T의 병용에 의해 Day7 이후로 병용 효과를 확인했다. 단 LCL161의 독성이 높고, 반수 이상의 동물이 LCL161에 의해 사망하였다. 1×105cells의 CD19 CAR-T에 LCL161을 병용했을 때, Day14 이후로 1×106cells CD19 CAR-T 단독 효과와 동등해지고, 최대 효력에 있어서도 톨리나판트에 비해 모자랐다(도 4).
한편, AT406은 CD19 CAR-T의 병용에 의해 Day10 이후로 병용 효과를 확인했다. 1×105cells의 CD19 CAR-T에 AT406을 병용했을 때, Day14 이후로 1×106cells CD19 CAR-T 단독 효과와 동등해졌다(도 5).
2.2 톨리나판트와 활성형 인테그린 β7 CAR-T(aITGB7 CAR-T)의 병용 시험
톨리나판트와 3×104cells aITGB7 CAR-T의 조합의 효과에 대해서 21일간의 평가를 행하여 유의미한 병용 효과를 확인했다. 3×104cells aITGB7 CAR-T 단독 투여군에 있어서 Day 14 이후로 항종양 효과를 나타내기 시작한 한편, 톨리나판트와의 조합에 있어서는 Day 11 이후, 명확한 퇴축을 나타내고, 유의미한 상승 효과를 확인했다(도 7).
2.3 톨리나판트와 NY-ESO-1 TCR-T의 병용 시험
3×106cells/body의 NY-ESO-1TCR-T와 톨리나판트의 병용 군은, Day 15의 종양 체적에 대해서, 각각의 단제 군에 대하여 유의미한 차가 확인되었다. 1×107cells/body의 NY-ESO-1TCR-T 단독 투여군은, 3×106cells/body의 NY-ESO-1TCR-T 단독 투여군보다도 높은 항종양 효과를 나타내고, Day 7 이후에 있어서는, Day 0을 하회하는 종양량이 되었지만, 그 조합군에 있어서는, 더 높은 퇴축이 확인되어, 병용하는 것에 의한 상승 효과가 나타났다.
2.4 톨리나판트와 CD19 CAR-KHYG-1의 병용 시험
톨리나판트와 CD19 CAR-KHYG-1의 조합 효과에 대해서 17일간의 평가를 행하여 유의미한 병용 효과를 확인했다. CD19 CAR-KHYG-1 그리고 톨리나판트의 단독 투여에서는 항종양 효과를 나타내지 않는 한편, 2제제의 조합에 있어서는 Day 7 이후 명확한 증식 억제 효과를 나타내고, Day 17에서는 유의미한 병용 효과를 확인했다(도 9).
3 결론
톨리나판트를 포함하는 IAP 안타고니스트 단독으로는 NALM6(B-ALL) 및 MM.1S(MM)에 대한 효력은 확인되지 않았다. 한편, 톨리나판트+CD19 CAR-T, 톨리나판트+활성형 인테그린 β7 CAR-T(aITGB7 CAR-T), 톨리나판트+NY-ESO-1 TCR-T 및 톨리나판트+CD19 CAR-KHYG-1의 병용 활성은 재현성이 높은 유의미한 결과를 얻었다. 다른 IAP 안타고니스트인 AT406, LCL161도 CD19 CAR-T와의 병용 효과를 확인했지만, LCL161에 있어서는 체중 감소 및 사망 예를 확인할 수 있는 독성이 확인되었다. 또한 최대 효과에 있어서도 톨리나판트의 병용이 우위에 있었다. 이어서 AT406은 톨리나판트와 닮은 병용 효과 추이를 나타냈지만, 효과의 스피드가 다른 점에서 병용 결과의 AUC, 그리고 최대 종양량(발광값)에 의해 AT406과 톨리나판트의 차별화를 검증하였다. 그 해석으로, Day17까지의 병용 데이터의 AUC에 있어서, 톨리나판트 병용에 수반하는 유의성을 얻을 수 있고, Day14라도 마찬가지의 결과가 얻어졌다(표 9, 표 10). 동일하게 최대 종양량에 있어서도 AT406과 톨리나판트에서 유의미한 차를 얻을 수 있었다(표 11).
이상에 의해, 톨리나판트가 다른 IAP 안타고니스트보다도 높은 CAR-T 세포와의 병용에 있어서의 약효 증강 작용을 나타내는 것이 확인되었다. 이에 의해, 톨리나판트계 약제가, CAR-T 세포, TCR-T 세포 및 CAR-NK 세포를 포함하는 개변 면역 세포와의 병용에 있어서의 약효 증강 작용에 있어서도 현저하게 우수한 것이 시사되었다.
또한, 시험관 내에 있어서, 본 실시예의 CAR-T가 표적 CAR 항원 발현 종양 세포(예를 들어 CD19 양성 NALM6)와 반응함으로써, 사이토카인(예를 들어 TNF-α)이 산생되는 것을 확인하고 있다. 또한, CAR-T로부터 산생되는 사이토카인과 톨리나판트가 공존했을 경우, 항원 발현 세포뿐만 아니라 항원 음성 종양 세포(예를 들어 CD19 음성 NALM6)에 대해서도 세포사(예를 들어 아포토시스)를 유도시키는 것이 확인되어 있다. 이러한 종양 세포에 대한 비접촉적인 세포사의 유도에 의해, 항원 이스케이프가 발생한 종양 세포나, 개변 면역 세포가 어프로치할 수 없는 부위로 전이한 종양 세포에 대해서도, 항종양 효과를 발휘하는 것이 기대된다.
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021

Claims (17)

  1. 하기 식 (1):

    로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물을 함유하는 의약 조성물이며, 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 면역 세포와 조합하여 투여되는, 상기 의약 조성물.
  2. 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 면역 세포를 함유하는 의약 조성물이며, 하기 식 (1):

    로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물과 조합하여 투여되는, 상기 의약 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체가 CD19, 인테그린 β7 및 NY-ESO-1에서 선택되는 항원을 특이적으로 인식하는, 의약 조성물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체가, 활성형 인테그린 β7을 특이적으로 인식하는, 의약 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 세포가 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포 또는 NK 세포이고, 상기 키메라 항원 수용체가,
    (1) 항원을 인식 가능한 세포 외 도메인,
    (2) 막 관통 도메인,
    (3) 공자극 분자의 세포 내 시그널 전달 도메인, 및
    (4) CD3ζ의 세포 내 시그널 전달 도메인
    을 함유하는, 의약 조성물.
  6. 제5항에 있어서, 상기 세포 외 도메인이 CD19 또는 인테그린 β7을 인식 가능한 세포 외 도메인인, 의약 조성물.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서, 상기 막 관통 도메인이 CD28 또는 CD8의 막 관통 도메인인, 의약 조성물.
  8. 제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 공자극 분자가 CD2, CD4, CD5, CD8α, CD8β, CD28, CD134(OX40), CD137(4-1BB), 또는 CD278(ICOS)인, 의약 조성물.
  9. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 면역 세포가 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포 또는 NK 세포이고, 상기 재조합 T 세포 수용체가, NY-ESO-1을 인식 가능한 가변 도메인을 갖는, 의약 조성물.
  10. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 면역 세포가 CD19를 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포, 인테그린 β7을 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포, CD19를 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체를 발현하도록 개변된 NK 세포, 또는 NY-ESO-1을 특이적으로 인식하는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 T 세포인, 의약 조성물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 암을 예방 및/또는 치료하기 위한, 의약 조성물.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 식 (1)로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물이, 10mg 내지 180mg/일로 투여되는, 의약 조성물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 세포가 1×103개 내지 1×108개(생세포수)/kg 체중/일로 투여되는, 의약 조성물.
  14. 하기 식 (1):

    로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물을 함유하는 제1제, 그리고, 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 면역 세포를 함유하는 제2제를 구비하는 키트.
  15. 암을 예방 및/또는 치료하는 방법이며,
    암의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 대상에, 하기 식 (1):

    로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물을, 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 면역 세포와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  16. 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 면역 세포와 조합하여 투여하기 위한 의약의 조제를 위한, 하기 식 (1):

    로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물의 사용.
  17. 하기 식 (1):

    로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 용매화물과 조합하여 투여하기 위한 의약의 조제를 위한, 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T 세포 수용체를 발현하도록 개변된 면역 세포의 사용.
KR1020247008747A 2021-08-20 2022-08-19 조합 의약 KR20240051172A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JPJP-P-2021-135138 2021-08-20
JP2021135138 2021-08-20
PCT/JP2022/031444 WO2023022235A1 (ja) 2021-08-20 2022-08-19 組み合わせ医薬

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20240051172A true KR20240051172A (ko) 2024-04-19

Family

ID=85239824

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020247008747A KR20240051172A (ko) 2021-08-20 2022-08-19 조합 의약

Country Status (10)

Country Link
EP (1) EP4389128A1 (ko)
JP (1) JPWO2023022235A1 (ko)
KR (1) KR20240051172A (ko)
CN (1) CN117835983A (ko)
AU (1) AU2022329514A1 (ko)
CA (1) CA3229750A1 (ko)
IL (1) IL310867A (ko)
MX (1) MX2024002214A (ko)
TW (1) TW202322822A (ko)
WO (1) WO2023022235A1 (ko)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993019163A1 (en) 1992-03-18 1993-09-30 Yeda Research And Development Co, Ltd. Chimeric receptor genes and cells transformed therewith
WO2015092420A1 (en) 2013-12-20 2015-06-25 Astex Therapeutics Limited Bicyclic heterocycle compounds and their uses in therapy

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4694778A (en) 1984-05-04 1987-09-22 Anicon, Inc. Chemical vapor deposition wafer boat
CN101815785B (zh) 2007-06-11 2013-06-19 宝生物工程株式会社 特异性基因表达的方法
JP6534074B2 (ja) 2015-08-10 2019-06-26 国立大学法人大阪大学 抗体
AU2016306320B2 (en) 2015-08-11 2022-04-14 Osaka University Antibody
GB201522592D0 (en) * 2015-12-22 2016-02-03 Immunocore Ltd T cell receptors
KR20220162133A (ko) * 2020-03-31 2022-12-07 프레드 허친슨 캔서 센터 항원 표적화된 면역 요법에서 항원 음성 세포 사망의 증강

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993019163A1 (en) 1992-03-18 1993-09-30 Yeda Research And Development Co, Ltd. Chimeric receptor genes and cells transformed therewith
WO2015092420A1 (en) 2013-12-20 2015-06-25 Astex Therapeutics Limited Bicyclic heterocycle compounds and their uses in therapy

Also Published As

Publication number Publication date
WO2023022235A1 (ja) 2023-02-23
MX2024002214A (es) 2024-03-12
CN117835983A (zh) 2024-04-05
CA3229750A1 (en) 2023-02-23
JPWO2023022235A1 (ko) 2023-02-23
AU2022329514A1 (en) 2024-03-07
IL310867A (en) 2024-04-01
TW202322822A (zh) 2023-06-16
EP4389128A1 (en) 2024-06-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240091264A1 (en) Anti-b-cell maturation antigen chimeric antigen receptors with human domains
US11938153B2 (en) Methods of treating T cell exhaustion by inhibiting or modulating T cell receptor signaling
WO2020224606A1 (zh) 靶向bcma的工程化免疫细胞及其用途
JP6682438B2 (ja) 癌治療のための改善された細胞組成物および方法
JP2020505438A (ja) インテグリン結合性ポリペプチド−Ｆｃ融合タンパク質および免疫調節物質を用いる併用がん治療法
WO2019185792A1 (en) Cancer treatment using immunoconjugates and immune check-point inhibitors
WO2020224605A1 (zh) 靶向bcma的工程化免疫细胞及其用途
US11866504B2 (en) Bispecific polypeptides for engagement of CAR expressing immune cells with antigen presenting cells and uses thereof
US20220331416A1 (en) Combined expression of a chimeric cd3 fusion protein and an anti-cd3-based bispecific t cell activating element
KR20210146952A (ko) 암의 치료를 위한 면역요법
KR20240051172A (ko) 조합 의약
CN115501330A (zh) 用于细胞免疫治疗的方法和组合物
KR20240109293A (ko) 암 치료에서 fshr을 표적으로 하는 이중특이 t세포 활성제와 사용 방법
Rotte et al. Promising immunotherapeutic approaches in clinical trials