KR20240042649A

KR20240042649A - 합성 펩티드, 화장료 조성물 또는 약학 조성물 및 그의 사용

Info

Publication number: KR20240042649A
Application number: KR1020247007789A
Authority: KR
Inventors: 웬펭 딩; 웬하오 자오; 씬린 선; 쓔 첸; o 첸; 얀 펭; 푸이 구안
Original assignee: 쉔젠 윈키 테크놀로지 컴퍼니 리미티드
Priority date: 2021-08-12
Filing date: 2021-08-12
Publication date: 2024-04-02
Also published as: EP4385516A1; CN116829169A; WO2023015533A1

Abstract

일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물, 또는 그의 화장료로 허용되는 염 또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 화장료 조성물 또는 그의 약학적 조성물, 및 그의 치료 또는 관리를 위한 적용 장애, 질병, 피부나 점막의 질병.

Description

합성 펩티드, 화장료 조성물 또는 약학 조성물 및 그의 사용

본 발명은 피부 또는 점막에서 섬유아세포의 증식을 촉진할 수 있는 펩티드, 및 이들 펩티드를 함유하는 화장료 또는 약학 조성물, 그리고 피부 또는 점막의 치료 또는 관리에 있어서의 그의 사용에 관한 것이다.

피부는 인체의 가장 큰 기관이다. 피부는 신체 표면을 덮고 있으며 신체에 중요한 장벽 역할을 한다. 기계적 손상에 저항하고, 외부 충격을 완충하며, 신체 조직 및 기관의 손상을 방지하고, 외부로부터 유해 물질의 침입을 방지하며, 산화 및 UV 손상에 저항할 수 있다. 또한 체내의 각종 영양소, 수분, 전해질의 손실을 방지할 수 있으며, 인체 내부 환경의 안정성을 유지하는 데 중요한 역할을 한다. 피부는 표피, 진피, 피하조직으로 구성되어 있다. 가장 바깥층은 표피로, 주로 각질세포, 멜라닌세포, 랑게르한스 세포로 구성되어 있다. 진피는 표피 아래에 위치하며 진피 세포, 콜라겐 섬유, 탄력 섬유, 기질, 모발, 피지선, 땀샘, 혈관 등을 포함한다. 진피는 기저막에 의해 표피와 단단히 연결되어 있다.

진피에서 가장 지배적인 세포는 섬유아세포이다. 섬유아세포는 크기가 크고, 형상도 다양하며, 대부분 방추형이나 별 모양의 편평한 구조로 돌출되어 있다. 세포질에는 발달된 조면소포체, 골지체(Golgi apparatus), 유리 리보솜이 다량 함유되어 있어 분비단백질을 합성하는 능력이 강하고, 프로콜라겐, 피브로넥틴, 콜라게나제 등의 세포외기질성분을 분비할 수 있다. 섬유아세포는 프롤린, 라이신과 같은 아미노산을 사용하여 거친 소포체의 리보솜에서 프로알파 폴리펩티드 사슬을 합성할 수 있으며, 생성된 폴리펩티드 사슬은 골지체로 운반되어 프로콜라겐 분자를 형성하고 세포외유출에 의해 세포외로 방출된다. 프로콜라겐 펩티다제의 촉매작용 하에서 프로콜라겐 분자의 프리알파 폴리펩티드 사슬의 꼬리 부분이 제거되어 트로포콜라겐 분자가 된다. 트로포콜라겐 분자는 평행한 열로 배열되어 주기적인 수평 줄무늬가 있는 콜라겐 원섬유로 결합된다. 콜라겐 원섬유는 서로 결합하여 콜라겐 섬유를 형성한다. 콜라겐 섬유를 생성하는 것 외에도 섬유아세포는 탄력 섬유도 생성할 수 있다. 콜라겐 섬유의 주성분은 I형 콜라겐으로, 이것은 인장력이 강하고 피부에 탄력을 부여한다. 엘라스틴과 피브로인이 뭉쳐 형성된 탄력섬유는 피부에 탄력을 부여해준다. 콜라겐 섬유, 탄력 섬유, 섬유와 세포 사이에 채워져 있는 세포외 기질이 피부를 지지하는 역할을 한다.

노화가 진행되면 피부의 형태, 생리, 기계적 특성이 크게 변화한다. 피부의 자연적인 노화 과정에서 섬유아세포의 기능이 저하되고, 콜라겐 섬유와 탄력 섬유가 손상되어 깨지며, 피부 내 콜라겐과 같은 중요한 생체분자의 생성과 분해 사이의 균형이 나이가 들수록 분해 과정으로 치우쳐지게 된다. 점진적으로 진피가 얇아지고 조직이 파괴되며, 결과적으로 진피가 이완되어 주름이 형성된다. 햇빛이나 환경 오염 물질에 장기간 노출되면 피부 노화 과정이 가속화될 수 있다. 자외선은 섬유아세포의 콜라겐과 피브로넥틴의 합성을 저해하여 기질금속단백질분해효소(matrix metalloproteinases, MMP)의 높은 발현을 유발하고, 진피층의 콜라겐에 심각한 손상을 주어 피부의 온전함을 파괴하고, 피부의 강도와 탄력을 감소시켜 피부노화를 가속화시키게 된다.

따라서 섬유아세포의 증식을 촉진하여 그의 활성을 강화하고 콜라겐, 엘라스틴, 글리코사미노글리칸 등의 성분의 합성과 분비를 증가시켜, 노화, 햇빛 노출 및/또는 환경 오염 물질에 대한 노출로 인한 유연성, 탄력성, 견고함과 같은 피부 기계적 특성의 손실을 개선하여 손상된 피부를 복구하고 주름을 줄이는 것이 가능하다.

피부는 인체의 1차 방어선으로 외부 손상에 취약하여 장벽 기능을 상실하고 저항력이 약해진다. 비병원성 세균이나 기회 감염성 세균은 피부에 침입하여 감염을 유발하고 신체 건강에 큰 영향을 미칠 수도 있다. 따라서 피부 상처의 회복을 가속화하는 것은 난치성 상처가 있는 질병의 치료와 수술 후 회복에 매우 중요하다.

상처 복구는 세포 증식, 이동, 세포외 기질의 분해, 혈관 신생 및 상피 조직 리모델링과 같은 다양한 세포의 네트워크 조절을 포함하는 정확하고 복잡하며 시간에 따른 동적 과정이다. 섬유아세포는 상처 복구의 주요 세포이다. 성숙한 섬유아세포는 정지상태에 있으며, 세포체의 부피가 감소하여 긴 방추형을 나타내고, 거친 소포체와 골지체가 감소되어 성숙한 섬유아세포를 섬유세포라 한다. 섬유아세포와 섬유세포는 특정 조건에서 서로 변형될 수 있다. 외상 및 기타 요인의 자극으로 인해 일부 섬유세포는 미성숙 섬유아세포로 재변형되고, 이에 따라 합성 및 분비 기능이 회복되어 새로운 세포외 기질의 생성이 자극되고 다량의 세포외 기질이 새로운 모세혈관과 결합하여 육아 조직을 형성하여 결함 조직을 채운다. 복구 과정에서 섬유아세포의 증식과 이동은 육아 조직 형성과 상처 복구에 중요하다. 연구에 따르면 섬유아세포는 주로 상처 복구의 증식 단계와 조직 리모델링 단계에 관여하는 것으로 나타났다. 증식 단계에서 섬유아세포는 크게 증식하고 이동하여 육아 조직을 형성하며 주로 감염에 저항하고 상처를 채우는 역할을 한다. 조직 재형성 기간 동안 섬유아세포에서 분화된 근섬유아세포, 내피세포 및 대식세포는 세포사멸을 겪고, 최종적으로 진피 조직은 세포외 기질 단백질로 채워져 상처 복구 및 피부 구조와 기능의 온전한 유지라는 목적을 달성한다.

요약하면, 섬유아세포는 피부 노화와 상처 회복 과정에서 중요한 역할을 한다. 섬유아세포의 증식을 촉진하고, 섬유아세포의 활성을 강화시키며, 콜라겐, 엘라스틴, 글리코사미노글리칸 등의 성분의 합성 및 분비를 증가시켜 콜라겐, 엘라스틴과 같은 세포외기질의 손실을 보상하고, 노화 또는 햇빛 노출 및/또는 환경 오염 물질에 대한 노출, 노화 지연, 피부 손상 후 괴사 조직 부위의 빈 공간을 채우고 상처 복구를 촉진하는 제품을 개발하는 것은 큰 의의가 있다.

본 발명자들은 놀랍게도 엄청난 실험적 연구를 통해 섬유아세포의 증식과 활성이 특정 합성 펩티드에 의해 조절될 수 있음을 발견하였다. 본 발명은 피부 또는 점막 내 섬유아세포의 증식을 촉진할 수 있는 펩티드를 제공하는 것을 목적으로 한다. 이들 펩티드 및 이들 펩티드를 함유하는 화장료 조성물 또는 약학적 조성물은 섬유아세포의 증식을 촉진함으로써; 피부 장벽 기능을 개선함으로써; 피부 노화 또는 광노화를 치료, 예방 또는 복구함으로써; 또는 피부나 점막의 재상피화 및/또는 치유에 의해 피부 또는 점막의 상태, 장애 또는 질환을 개선, 예방, 치료, 피부 또는 점막의 상태, 장애 또는 질병의 치료할 수 있다.

이러한 관점에서, 본 발명은 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물, 그의 화장료에서 허용되는 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다:

본 발명이 종래 기술과 비교하여 얻는 유익한 효과는 다음과 같다:

본 발명에 기술된 펩티드는 인위적인 설계에 의해 얻어지며, 합성이 용이하고, 섬유아세포의 증식을 촉진할 수 있으며, 피부 장벽 기능을 향상시킬 수 있고, 상처 치유 촉진에 유익하며, 체표 상처, 화상, 피부 궤양의 치료 또는 관리에 유익하다. 흉터 발생을 줄이고 흉터 회복을 가속화하고, 또한 피부 노화 및/또는 광노화를 치료, 예방 및/또는 복구하는 데 유용하다.

도 1은 펩티드(1) 내지 펩티드(5)가 HaCaT 세포의 활성에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다. ^*는 투여군과 블랭크 대조군 사이에 통계적 차이가 있음을 나타내며, p<0.05(n=4)이다. ^**는 투여군과 블랭크 대조군 사이에 유의한 차이가 있음을 나타내며, p<0.01(n=4)이다.
도 2는 NIH3T3 세포의 활성에 대한 펩티드(1) 내지 펩티드(5)의 효과를 나타내는 그래프이다. ^*는 투여군과 블랭크 대조군 사이에 통계적 차이가 있음을 나타내며, p<0.05(n=4)이다. ^**는 투여군과 블랭크 대조군 사이에 유의한 차이가 있음을 나타내며, p<0.01(n=4)이다.
도 3은 펩티드(1) 및 펩티드(2)가 HaCaT 세포의 활성도에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다. ^*는 투여군과 블랭크 대조군 사이에 통계적 차이가 있음을 나타내며, p<0.05(n=4)이다. ^**는 투여군과 블랭크 대조군 사이에 유의한 차이가 있음을 나타내며, p<0.01(n=4)이다. ^***는 투여군과 블랭크 대조군 사이에 매우 유의한 차이가 있음을 나타내며, p<0.001(n=4)이다.
도 4는 HaCaT 세포에 대한 스크래치 실험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 빛에 의해 손상된 HaCaT 세포에 대한 펩티드(1) 대 펩티드(5)의 복구 효과를 나타내는 그래프이다. ###은 방사선 조사를 받지 않은 일반 대조군과 비교하여 매우 유의한 차이가 있음을 나타내며, p<0.001(n=4)이었다. ^*는 방사선 조사 후 대조군과 통계적으로 차이가 있음을 의미하며, p<0.05(n=4)이었다. ^**는 방사선 조사 후 대조군과 비교하여 유의미한 차이가 있음을 나타내며, p<0.01(n=4)이다. ^***는 방사선 조사 후 대조군과 비교하여 매우 유의미한 차이를 나타내며, p<0.001(n=4)이다.
도 6은 광손상된 NIH3T3 세포에 대한 펩티드(1) 및 펩티드(2)의 복구 효과를 보여주는 그래프이다. ###은 방사선 조사를 받지 않은 일반 대조군과 비교하여 매우 유의한 차이가 있음을 나타내며, p<0.001(n=4)이다. ^*는 방사선 조사 후 대조군과 통계적으로 차이가 있음을 의미하며, p<0.05(n=4)이다. ^**는 방사선 조사 후 대조군과 비교하여 유의미한 차이가 있음을 나타내며, p<0.01(n=4)이다. ^***는 방사선 조사 후 대조군과 비교하여 매우 유의미한 차이가 있음을 의미하며, p<0.001(n=4)이다.
도 7은 TNF-α 분비에 대한 펩티드(2)의 효과를 나타내는 그래프이다. ###은 대조군과 비교하여 매우 유의미한 차이가 있음을 나타내며, p<0.001(n=4)이다. ^***는 LPS군과 비교하여 매우 유의미한 차이가 있음을 의미하며, p<0.001(n=4)이다.
도 8은 IL-6 분비에 대한 펩티드(2)의 효과를 보여주는 그래프이다. ###은 대조군과 비교하여 매우 유의미한 차이가 있음을 나타내며, p<0.001(n=4)이다. ^***는 LPS군과 비교하여 매우 유의미한 차이가 있음을 나타내며, p<0.001(n=4)이다.
도 9는 IL-8 분비에 대한 펩티드(2)의 효과를 보여주는 그래프이다. ##은 대조군과 비교하여 유의미한 차이가 있음을 나타내며, p<0.01(n=4)이다. ^**는 LPS 그룹과 비교하여 유의미한 차이가 있음을 나타내며, p<0.01(n=4)이다.

식 (I)중,

R₂는 H, 알킬, 알케닐알킬, 카르복시알킬, 에스테릴알킬, 알킬메르캅토, 카르복시알킬메르캅토, 또는

를 나타내고,

상기 식 (I) 및 (i)에 있어서,

n은 1 또는 2 중에서 선택되며;

R₁은 H 또는 R₄-CO- 중에서 선택되며(여기서, R₄는 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알케닐을 나타내고);

R₃은 -NR₅R₆ 또는 -OR₅ 중에서 선택되며(여기서, R₅ 및 R₆은 각각 독립적으로 H, 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알케닐을 나타내고);

R₁ 및 R₃ 그룹은 각각 이들 펩티드 서열의 아미노 말단(N-말단) 및 카르복시 말단(C-말단)에 결합되어 있다.

"알킬", "알케닐알킬", "카르복시알킬", "에스테릴알킬", "알킬메르캅토", "카르복시알킬메르캅토"에서 알킬은 1 내지 24개의 탄소원자를 갖는(바람직하기로는 1 내지 16개의 탄소원자를 갖는; 더 바람직하기로는 1 내지 14개의 탄소원자를 갖는; 더더욱 바람직하기로는 1 내지 12개의 탄소원자를 갖는; 그리고 더더더욱 바람직하기로는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 탄소원자를 갖는) 포화 지방족 직쇄 또는 분지형 알킬기를 의미하고; 예를 들면, 메틸, 에틸, 이소프로필, 이소부틸, tert-부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 데실, 도데실, 테트라데실, 헥사데실, 옥타데실, 2-에틸헥실, 2-메틸부틸 또는 5-메틸헥실로부터 선택된 것을 들 수 있고;

"알케닐" 및 "알케닐알킬"에서 알케닐은 탄소수 2 내지 24개(바람직하기로는 탄소수 2 내지 16개; 더 바람직하기로는 탄소수 2 내지 14개; 더욱 바람직하기로는 탄소수 2 내지 12개; 더더욱 바람직하기로는 탄소수 2 내지 12개; 더더더욱 바람직하기로는 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탄소원자를 갖는 원자)를 갖는 직쇄 또는 분지형 알케닐기를 의미하며; 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖고, 바람직하기로는 1, 2 또는 3개의 공액 또는 비공액 탄소-탄소 이중 결합을 갖고; 상기 "알케닐"은 단일 결합을 통해 분자의 나머지 부분에 결합되며; 바람직하기로는 비닐, 올레일 또는 리놀레일로부터 선택되고;

"에스테릴알킬"의 에스테릴은 R(C=O)OR'기이고, 여기서 R 및 R'는 각각 독립적으로 단일 결합, 알킬기 또는 알킬렌기이고;

당분야에서 통상의 지식의 가진 자라면 이해할 수 있는 바와 같이, 전술한 기는 어느 정도의 치환이 존재할 수 있다. 따라서 치환은 본 발명의 임의의 기에 존재할 수 있다. 본 발명의 기에서 치환된 그룹을 언급할 때, 특정 그룹은 하나 이상의 이용 가능한 위치, 바람직하게는 1, 2 또는 3 위치, 보다 바람직하게는 1 또는 3 위치에서 하나 이상의 치환기로 치환될 수 있음을 나타낸다. 2개 위치, 더욱 바람직하게는 1개 위치. 이러한 치환체에는, 예를 들어 C₁-C₄알킬; 하이드록시; C₁-C₄알콕시; 아미노; C₁-C₄아미노알킬; C₁-C₄ 카르보닐옥시; C₁-C₄옥시카르보닐; 할로겐(불소, 염소, 브롬, 요오드 등); 시아노; 니트로; 아지드; C₁-C₄알킬술포닐; 티올; C₁-C₄알킬티올; 페녹시와 같은 C₆-C₃₀ 아릴옥시; -NR_b(C=NR_b)NR_bR_c(여기서, R_b 및 R_c는 독립적으로 H, C₁-C₄알킬, C₂-C₄알케닐, C₂-C₄알키닐, C₃-C₁₀ 사이클로알킬, C₆-C₁₈ 아릴, C₇-C₁₇ 아랄킬, 3~10원 헤테로고리기, 또는 아미노기의 보호기를 들 수 있다.

임의로, 일반식 (I)에서, n이 2일 때, R₂는 H, 알킬, 알케닐알킬, 카르복시알킬, 에스테르릴알킬, 알킬메르캅토 또는 카르복시알킬메르캅토로부터 선택된다.

바람직하기로는, R₁은 H, 아세틸, tert-부티릴, 헥사노일, 2-메틸헥사노일, 카프릴, 데카노일, 라우로일, 미리스토일, 팔미토일, 스테아로일, 올레오일 아실 또는 리놀레오일로부터 선택된다.

바람직하기로는, R₁은 H, 아세틸, 라우로일, 미리스토일 또는 팔미토일로부터 선택된다.

바람직하기로는, R₁은 H, 아세틸 또는 팔미토일이다.

바람직하기로는, R₂는 H, -CH₃, -CH₂CH₃, -CH₂CH=CH₂, -CH₂COOH, -CH₂COOC(CH₃)₃, -S-CH₂CH₃, -S-(CH₂)₅CH₃, -S-CH₂COOH 또는

바람직하기로는, n이 2인 경우, R₂는 H, -CH₃, -CH₂CH₃, -CH₂CH=CH₂, -CH₂COOH, -CH₂COOC(CH₃)₃, -S-CH₂CH₃, -S-(CH₂)₅CH₃ 또는 -S-CH₂COOH 중에서 선택된다.

바람직하기로는, R₅ 및 R₆은 각각 H, 메틸, 에틸, 헥실, 도데실 또는 헥사데실로부터 선택되고;

바람직하기로는, R₅는 H이고, R₆은 H, 메틸, 에틸, 헥실, 도데실 및 헥사데실로부터 선택되고;

바람직하기로는 R₃은 -OH 또는 -NH₂이다.

일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물, 그의 화장료에서 허용되는 염 또는 그의 약학적으로 허용되는 염은 하기 펩티드(1)-(46) 중에서 선택된다:

(2) H-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Met-Thr-Thr-Asn-OH;

(3)

(4)

(5)

(6)

(7)

(8) Palm-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Cys-Thr-Thr-Asn-OH;

(9) Palm-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Cys-Thr-Thr-Asn-NH₂;

(10) Ac-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Cys-Thr-Thr-Asn-OH;

(11) Ac-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Cys-Thr-Thr-Asn-NH₂;

(12)

(13)

(14)

(15)

(16)

(17)

(18)

(19)

(20)

(21)

(22)

(23)

(24)

(25)

(26)

(27)

(28)

(29)

(30)

(31)

(32)

(33)

(34)

(35)

(36)

(37)

(38)

(39)

(40)

(41)

(42）H-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Met-Thr-Thr-Asn-NH₂；

(43）Palm-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Met-Thr-Thr-Asn-OH；

(44）Palm-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Met-Thr-Thr-Asn-NH₂；

(45）Ac-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Met-Thr-Thr-Asn-OH；

(46）Ac-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Met-Thr-Thr-Asn-NH₂.

본 발명의 일반식 (I)로 표시되는 펩티드는 입체이성체 또는 입체이성체의 혼합물로 존재할 수 있으며; 예를 들면, 그 화합물 내에 함유된 이들 아미노산 잔기는 L-, D- 또는 서로 독립적으로 라세미의 구성을 가질 수 있다. 따라서, 비대칭 탄소의 수 및 이성질체 또는 이성질체 혼합물의 존재 여부에 따라 이성질체 혼합물뿐만 아니라 라세미 또는 부분입체이성질체 혼합물, 또는 순수한 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체를 얻는 것이 가능하다. 본 발명의 일반식 (I)로 표시되는 펩티드의 바람직한 구조는 순수한 이성질체, 즉 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체이다.

예를 들면, 본 발명에서 -Phe-가 언급되는 경우, -Phe-는 -L-Phe-, -D-Phe- 또는 이들의 혼합물 중에서 선택되고, 라세미 또는 비라세미인 것으로 이해되어야 한다. 본 명세서에 기술된 제조 방법을 통해 당업자는 올바른 배열을 갖는 아미노산을 선택함으로써 본 발명의 펩티드의 각 입체이성질체를 얻을 수 있다.

"화장료에서 허용되는 염 또는 약학적으로 허용되는 염"이라는 용어는 동물, 보다 구체적으로 인간에게 사용하도록 승인된 염을 말하며, 일반식 (I)로 표시되는 펩티드의 금속염을 포함하며, 금속으로는 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 망간, 구리, 아연 또는 알루미늄 등이 포함되지만, 이에 특히 한정되는 것은 아니며; 일반식 (I)로 표시되는 펩티드와 유기 염기에 의해 형성된 염을 포함하며, 유기 염기로는 에틸아민, 디에틸아민, 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 아르기닌, 라이신, 히스티딘 또는 피페라진 등이 포함되지만 이에 한정되는 것은 아니며; 일반식 (I)로 표시되는 펩티드 및 무기산 또는 유기산에 의해 형성된 염을 포함하며, 유기산으로는 아세트산, 시트르산, 젖산, 말론산, 말레산, 타르타르산, 푸마르산, 벤조산, 아스파르트산, 글루탐산, 숙신산, 올레산, 트리플루오로아세트산, 옥살산, 파모산(파모에이트) 또는 글루콘산 등이 포함되지만 이에 국한되는 것은 아니며; 무기산으로는 염산, 황산, 붕산 또는 탄산이 포함되지만 이에 국한되는 것은 아니다.

본 발명의 펩티드, 그의 입체이성질체, 그의 화장료에서 허용되는 염 또는 약학적으로 허용되는 염의 합성은 선행 기술에 공지된 통상의 방법, 예컨대, 상 펩티드 합성을 위한 고체 방법(Solid Methods for Phase Peptide Synthesis)을 사용하여 수행될 수 있다[Stewart J.M. 및 Young J.D., "Solid Phase Peptide Synthesis", Second Edition, (1984), Pierce Chemical Co. Chemical Company, Rockford, Illinois; Bodanzsky M., Bodanzsky A. "The Practice of Peptide Synthesis", (1984), Springer Verlag, New York; Lloyd-Williams P., Albericio F., Giralt E. "Peptides and Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins", (1997), CRC, Boca Raton, FL, USA], Synthesis In Solution, Solid Phase Synthesis, And Synthesis In Solution Combination Of Methods Or Enzymatic Synthesis [Kullmann W. (Kullmann W.), "Proteases as catalysts for enzymic syntheses of opioid Peptides" (1980), Biochemical Journal (J. Biol. Chem.), 255, 8234-8238]. 또한 펩티드는 원하는 서열을 생성하는 것을 목표로 하는 생명공학적 방법에 의해 제조될 수도 있고, 또는 적어도 원하는 서열을 함유하는 펩티드 단편을 방출하는 동물, 진균 또는 바람직하게는 식물 기원의 단백질의 조절된 가수분해에 의해 제조될 수도 있다.

예를 들어, 일반식(I)의 펩티드를 얻는 방법은 다음 단계를 포함한다:

- 보호된 N-말단 및 유리 C-말단을 갖는 아미노산을 유리 N-말단 및 보호된 C-말단을 갖는 아미노산에 커플링시키거나 고체 지지체에 결합시키는 단계;

- N-말단 보호기를 제거하는 단계;

- 원하는 펩티드 서열이 얻어질 때까지 커플링 서열을 반복하고 N-말단을 보호하는 기를 제거하는 단계;

- 고체 지지체로부터 C-말단기나 절단을 제거하는 단계.

바람직하기로는, C-말단은 고체 지지체에 결합되고, 이 방법은 보호된 N-말단 및 유리 C-말단을 갖는 아미노산을 폴리머 담체에 결합된 C-말단 유리 N-말단과 C-말단을 갖는 아미노산과 커플링시키고; N-말단을 보호하는 기를 제거하고; 및 필요에 따라, 이 절차를 반복하여 원하는 길그의 펩티드를 얻은 다음, 원래의 중합체 담체로부터 펩티드를 절단하여 합성 펩티드를 생성하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 고상에서 수행하는 것이다.

아미노산 측쇄의 작용기는 합성 전반에 걸쳐 임시 또는 영구 보호기로 완전히 보호된 상태로 유지되며, 중합체 지지체로부터 펩티드가 절단되는 과정과 동시에 또는 직교적으로 탈보호될 수 있다.

대안적으로, 고상 합성은 디펩티드 또는 트리펩티드가 중합체 지지체에 커플링되거나, 또는 중합체 지지체에 미리 결합된 디펩티드 또는 아미노산에 커플링되는 집중 전략에 의해 수행될 수 있다. 집중 합성 전략은 당업자에게 잘 알려져 있으며, Lloyd-Williams P., Albericio F. and Giralt E. "Convergent Solid Phase Peptide Synthesis", (1993), Tetrahedron 49:11065-11133에 설명되어 있다.

이 방법은 추가 단계를 포함할 수 있다: N-말단 및 C-말단을 탈보호하는 단계 및/또는 당업계에 공지된 표준 조건 및 방법을 사용하여 결정되지 않은 순서로 중합체 지지체로부터 펩티드를 절단하는 단계, 이어서, 생성된 말단 작용기는 수식되는 단계. N-말단 및 C-말단의 임의 수식은 중합체 지지체에 결합된 일반식 (I)의 펩티드에 대해 수행될 수 있거나, 펩티드가 중합체 지지체로부터 절단된 후에 수행될 수 있다.

본 발명의 펩티드는 섬유모세포 증식을 촉진하고 콜라겐 생성을 증가시키기 위해 이들 펩티드와 포유동물의 작용 부위(바람직하게는 인간의 작용 부위) 사이의 접촉을 일으키는 임의의 수단에 의해 이를 함유하는 조성물의 형태로 투여될 수 있다.

이러한 이유로, 본 발명의 또 다른 실시 태양은 유효량의 전술한 일반식 (I)의 펩티드, 그의 입체이성체, 또는 입체이성체의 혼합물, 또는 그의 화장료에서 허용되는 염, 그의 약학적으로 허용되는 염, 그리고 1종 이상의 부형제 또는 바람직하기로는 화장료로 또는 약학적으로 허용되는 보조제를 포함하는 화장료 조성물 또는 약학적 조성물을 제공한다. 이들 조성물은 당업자에게 알려진 통상의 방법에 의해 제조될 수 있다["Harry's Cosmetology", Seventh Edition, (1982), Wilkinson J.B. (Wilkinson J.B.), Moore R.J. (Moore R.J., Longman House, Essex, UK].

바람직하기로는, 보조제는 다음의 성분들로부터 선택될 수 있다. 즉, 콜라겐 합성 자극제, PGC-1α의 합성 조절제, PPARγ의 활성 조절제, 지방세포의 트리글리세리드 함량을 증가시키거나 감소시키는 조절제, 지방세포의 분화를 자극하거나 지연시키는 물질, 지방분해제 또는 지방분해 자극제, 지방친화제, 지방형성제, 아세틸콜린 수용체 응집 억제제, 근육 수축 억제제, 항콜린제, 엘라스타제 억제제, 매트릭스 금속단백분해효소 억제제, 멜라닌 합성 자극제 또는 억제제, 미백제 또는 탈색제, 과색소침착제, 셀프 태닝제, 노화 방지제, NO-합성효소 억제제, 5α-환원효소 억제제, 리실 수산화 효소 및/또는 프롤릴 수산화효소 억제제, 항산화제, 자유 라디칼 제거제 및/또는 대기 오염 방지제, 활성 카르보닐종 제거제, 항당화제, 항히스타민제, 항바이러스제, 항기생충제, 유화제, 연화제, 유기용제, 액체 추진제, 피부 컨디셔너, 보습제, 수분 유지 물질, 알파 하이드록시산, 베타 하이드록시산, 보습제, 표피 가수분해 효소, 비타민, 아미노산, 단백질, 색소 또는 착색제, 염료, 생체고분자, 겔화 중합체, 증점제, 계면활성제, 연화제, 접착제, 방부제, 주름 방지제, 눈 밑 처짐을 줄이거나 치료하는 제제, 굳은 살 제거제, 각질 제거제, 각질 용해제, 항균제 항진균제, 살균제, 살균제, 정균제, 진피 또는 표피 거대분자의 합성을 자극하거나 또는 이들의 분해를 억제 또는 예방할 수 있는 제제, 엘라스틴 합성을 자극하는 제제, 데코린 합성을 자극하는 제제, 라미닌 합성을 자극하는 제제, 디펜신 합성 자극제, 샤페론 단백질 합성 자극제, cAMP 합성 자극제, 열 충격 단백질, HSP70 합성 자극제, 열 충격 단백질 합성 자극제, 히알루론산 합성 자극제 피브로넥틴 합성촉진제, 시르투인 합성촉진제, 지질 및 각질층 성분의 합성촉진제, 세라마이드, 지방산, 콜라겐 분해억제제, 엘라스틴 분해억제제, 세린억제제 프로테아제, 섬유아세포 증식촉진제, 각질세포 증식촉진제, 지방세포 증식촉진제, 멜라닌세포 증식촉진제, 각질세포 분화촉진제, 아세틸콜린에스테라제 억제제, 피부 이완제, 글리코사미노글리칸 합성 촉진제, 항고각화증제, 여드름 용해제, 항건선제, 항피부염제, 항습진제, DNA 복구제, DNA 보호제, 안정제, 항소양제, 민감 피부 치료 및/또는 관리 제제, 경화제, 퍼밍제, 구조조정제, 스트레치 마크 방지제, 접착제, 피지 생성 조절제, 발한 억제제, 치유 촉진제, 치유 보조제, 재상피화 촉진제, 재상피화 보조제, 사이토카인, 성장 인자, 진정제, 항염증제 마취제, 모세혈관순환 및/또는 미세순환작용제, 혈관신생촉진제, 혈관투과억제제, 정맥긴장제, 세포대사작용제, 진피-표피접합 개선제, 모발성장유도제, 모발 성장을 억제하거나 지연시키는 향료, 킬레이트제, 식물 추출물, 에센셜 오일, 해양 추출물, 생물학적 발효 공정에서 추출한 제제, 무기염, 세포 추출물, 자외선 차단제, 자외선 A 및/또는 자외선 B에 효과적인 유기 또는 무기 광 보호제 또는 이들의 혼합물. 다만, 이들은 조성물의 성분, 특히 본 발명의 조성물에 함유된 일반식(I)의 펩티드와 물리적 및 화학적으로 화합할 수 있어야 한다. 또한, 이들 추가 성분의 성질은 본 발명의 펩티드의 이점을 허용할 수 없을 정도로 변경해서는 안 된다. 이러한 추가 성분의 특성은 식물 추출물과 같은 합성 또는 천연일 수도 있고, 생명공학 공정에서 나온 것일 수도 있고, 합성과 생명공학 공정의 조합에서 나온 것일 수도 있다. 추가 예시는 "CTFA 국제 화장료 성분 사전 및 핸드북, 12판(2008)"에서 찾을 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 생명공학적 방법은 유기체 또는 유기체의 일부에서 활성 성분 또는 활성 성분의 일부를 생산하는 방법의 어느 하나로 이해될 수 있다.

대안으로, 본 발명의 상기 화장료 조성물 또는 약학 조성물은 다음과 같은 적어도 1종의 합성 화합물, 식물 추출물 또는 생명공학적 방법에 의해 얻은 산물의 화장료로 또는 약학적으로 유효한 양으로 함유할 수 있다: 이러한 성분은 특히 제한은 없으며, 그의 예로서, 콜라겐 합성 자극제, 아스코르빌 팔미테이트, 마그네슘 아스코빌 포스페이트, 나트륨 아스코르빌 포스페이트 및 아스코르빌 α- 및 β-글루코사이드와 같은 아스코르브산 및 그 유도체, 레티노산, 레티놀 크산탈, 레티닐 아세테이트 또는 레티닐 팔미테이트와 같은 레티놀 및 레티놀 유도체; 알로에베라, 센텔라아시아티카, 카르니틴, 카르노신, 크레아틴, 아시아틱애씨드, 마데카식산, 센텔라아시아티카풀배당체, 아시아티카사포닌, 센텔라아시아티카추출물, 나이아신아마이드, 아사잔틴, 덱스트란, 대두추출물과 같은 야채 추출물; 제니스테인, 다이드제인 등의 대두이소플라본, 루틴, 크리신, 모린, 아레카 너트 알칼로이드, 포스콜린, 베툴린산, 질경이 추출물, TGF-베타, 은행빌로바 추출물, 글루타민, 글리콜산, Sederma/Croda에서 판매하는 [INCI: 팔미토일 펜타펩티드-4], Matrixyl[INCI: 팔미토일 테트라펩티드-7, 팔미토일 올리고펩티드] 또는 [INCI: C12-15 알킬 벤조에이트, 트리베헤닌, 세라미드 2, PEG10 평지씨 스테롤, 팔미토일 올리고펩티드], Pentapharm/DSM에서 판매하는 -Coll[INCI: 팔미토일 트리펩티드-5], [INCI:로커스트 빈(Ceratonia Siliqua) 검], Biotechmarine에서 판매하는 BeauActiveTM MTP[INCI:가수분해 유단백], ThalassineTM[INCI: 알게 (Algae) 엑기스], Coletica/Engelhard/BASF에서 판매하는 EquiStatTM[INCI: 사과 엑기스, 야생 콩 엑기스] 또는 Juvenesce [INCI:에톡시디글리콜 및 카플릴 트리글리세리드, 레티놀, 우르솔산, 비타민 K1, Ilomastat], Silab에서 판매하는 SMS Anti-[INCI:Low Purified from Annona Squamosa] 폴리펩티드], Atrium Innovations/Unipex Group에서 판매하는 ChroNOIineTM[INCI:글리세롤, 물(Aqua), 덱스트란, 헥사노일 테르라 펩티드-3(카프로일 테트라펩티드-3)], [INCI:트리펩티드-1] 또는 4[INCI:물, 덱스트란, 아세틸 테트라펩티드-2], Solabia BioLyse T.A.에서 판매하는 [INCI:프로토올리고머 펩티드, 리신 및 L-아르기닌의 구성물] 또는 [INCI:Arginine/Lysine 폴리펩티드], Gattefosse에서 판매하는 In-Tense[INCI:카프릴릭/카프릴 트리글리세리드, Golden Button (Spilanthes Acmella) Flower 엑기스], Mibelle Biochemistry에서 판매하는 PhytoCellTec^TM Malus Domestica[INCI: Apple(Malus Domestica) 과일 세포 배양물, 크산탄 검, 글리세린, 레시틴, 펜옥시에탄올, 물], Evonik Goldschmidt SLC에서 판매하는 피토스핀고신[INCI:살리실 피토핀고신], Soliance에서 판매하는 Dakaline[INCI:Prunus Amygdalus kernel 엑기스, Anogeissus Leiocarpus bark 엑기스]. Vinscience에서 판매하는 [INCI: 헥사펩티드-9], GP4G[INCI:아르테미아 엑기스], D'orientine^TM[INCI:Phoenix Dactylifera (Date) Seed 엑기스], 또는 Ederline^TM[INCI:Apple (Pyrus Malus) 사과 엑기스], Provital에서 판매하는 Homeostatine[INCI:Enteromorpha Compressa, Caesalpinia Spinosa].

대안적으로, 본 발명의 상기 언급된 화장료 또는 약학 조성물은 적어도 1종의 합성 화합물, 식물 추출물 또는 생명공학적 방법에 의해 얻은 생성물의 화장료 또는 약학적 유효량을 함유할 수 있으며, 이것은 활성 카르보닐종 물질 포촉제, 프리 라디칼 포촉제, 카르노신 및 그 유도체, GHK [INCI: 트리펩타이드-1] 및 그 염 및/또는 유도체, 또는 [INCI: 가수분해된 밀 단백질, 가수분해된 대두 단백질, 트리펩타이드-1] 또는 Lipotec에서 판매하는 PreventheliaTM [INCI: 디아미노프로피오닐 트리펩타이드-33] 등과 같은 항당화제이다.

바람직하기로는, 본 발명의 상기 화장료 조성물 또는 약학 조성물은 다음의 주름 방지제 및/또는 노화 방지제를, 특히 제한 없이, 적어도 1종 이상의 추출물을 화장료학적 또는 약학적 유효량으로 함유할 수 있다: 즉, 포도, 로즈힙오일(Rosa canina), 강황, 아이리스 팔리다(Iris pallida), 코코아 버터(Theobroma cacao), 깅코 빌로바(Ginkgo biloba), 알피늄 레온토포디움(Leontopodium Alpinum) 또는 디날리엘라 살리나(naliella salina) 등의 추출물, 또는 주름 방지 또는 노화 방지제인 적어도 하나의 합성 화합물 또는 제품, 특히 제한 없이, Sederma/Croda에서 판매하는 [INCI: 팔미토일 Penta펩티드-3], Matrixyl [INCI: 팔미토일 테트라펩티드-7, 팔미토일 올리고펩티드], EssenskinTM [INCI: 칼슘 하이드록시메티오닌], Renovage [INCI: 테레프레논] 또는 [INCI: 팔미토일 올리고펩티드], Pentapharm/D SM에서 판매하는 [INCI: 펜타펩티드-3], Syn [INCI: 다이펩티드 다이아미노부티릴 벤질아마이드 다이아세테이트], -Coll [INCI: 팔미토일 트라이펩티드-5], 피탈루로네이트 [INCI: 로커스트 콩(캐롭) 검] 또는 [INCI: 야생 콩 (대두) 단백질, 산화환원효소], Laboratoires Serobiologiques/Cognis 판매하는 MyoxinolTM [INCI: 가수분해 커피 암브레트(Hibiscus Esculentus) 추출물], SyniorageTM [INCI: 아세틸테트라펩티드-11], DermicanTM [INCI: 아세틸 테트라펩티드-9] 또는 DN-AGETMLS [INCI: 계수나무 알라타 잎 추출물], Exsymol에서 판매하는 Algisum [INCI: 메틸실라놀 만누로네이트] 또는 하이드록시프롤리실란[INCI: 메틸실라놀 하이드록시프롤린 아스파르테이트], Lipotec에서 판매하는 [INCI: 아세틸 헥사펩티드-8], SNAP-7[INCI: 아세틸헥사펩티드-8], 펩티드-4], SNAP-8 [INCI: 아세틸옥타펩티드-3], [INCI: 펜타펩티드-18], InylineTM [INCI: (추천) 아세틸헥사펩티드-30], [INCI: 가수분해밀 단백질, 가수분해 대두단백질, 트리펩티드-1], PreventheliaTM [INCI: 디아미노프로피오닐 트리펩티드-33], DecorinylTM [INCI: 트리펩티드-10 시트룰린], TrylagenTM [INCI: Pseudo-Alternating Units 슈도알테로모나스 발효 추출물, 가수분해 밀 단백질, 가수분해 대두 단백질, 트리펩티드-10 시트룰린, 트리펩티드-1]; [INCI: 아세틸 테트라펩티드-5], 펩티드AC29 [INCI: 아세틸트리펩티드-30 시트룰린], Lipochroman-6 [INCI: 디메틸메톡시크로마놀], ChromabrightTM [INCI: 디메틸메톡시크로마닐팔미테이트], VilasteneTM [INCI: 라이신 염산염, 레시틴, 트리펩티드-10 시트룰린], dGlyAGETM [INCI: 라이신 염산염, 레시틴, 트리펩티드-9 시트룰린] 또는 [INCI: 슈도알테로모나스 발효 추출물], InstitutEuropeen de BiologieCellulaire에서 독점 판매하는 [INCI: 트리펩티드-1, 덱스트란], Vinscience에서 판매하는 [INCI: 헥사펩티드-9) ], OrsirtineTM GL [INCI: Oryza Sativa (쌀) 추출물], D'orientineTM IS, Vinscience에서 판매하는 [INCI: 대추야자(대추) 종자 추출물], PhytoquintescineTM [INCI: Einkorn (Triticum monococcum) 추출물] 또는 QuintescineTM IS [INCI: Di펩티드-4], InfinitecActivos에서 독점 판매하는 BONT-L 펩티드 [INCI: 팔미토일 헥사펩티드-19], Seppic에서 판매하는 DeepalineTM PVB [INCI: 팔미토일 가수분해 밀 단백] 또는 DPHP [INCI: 디팔미토일 하이드록시프롤린], Gattefosse Expression에서 판매하는 [INCI: Acmella oleracea 추출물], In-Tense [INCI: 황금 단추 꽃 추출물] 또는 Age Defense 2 [INCI: Juglans Regia (호두) 종자 추출물], Biotechmarine에서 판매하는 ThalassineTM [INCI: 조류 추출물], Atrium Innovations/Unipex Group에서 판매하는 ChroNOlineTM [INCI: 헥사노일 테트라펩티드-3] 또는 티물렌-4 [INCI: 아세틸 테트라펩티드-2], Coletica/Engelhard/BASF에서 판매하는 EquiStat [INCI: 사과 과일 추출물, 야생 콩 종자 추출물] 또는 Juvenesce [INCI: 에톡실화 디글리콜 및 카프릴산 트리글리세리드, 레티놀, 우르솔산, 비타민 K1, Ilomastat], Mibelle Biochemistry, Bioxilift에서 판매하는 Ameliox [INCI: 카르노신, 토코페롤, 실리붐 마리아눔 과일 추출물] 또는 PhytoCellTec Malus Domestica [INCI: 사과 세포 배양물], Silab에서 판매하는 [INCI: 아니스(Pimpinella) Anisum) 추출물] 또는 SMS 항-[INCI: 아니사 사과씨 추출물], 알버린, 망간 또는 마그네슘염, 특정 2차 또는 3차 아민, 레티놀 및 그와 같은 Ca²⁺ 채널 길항제(이에 국한되지 않음) 유도체 및 이데베논(idebenone) 및 그 유도체, 코엔자임 Q10 및 그 유도체, 보스웰산 및 그 유도체, GHK 및 그 유도체 및/또는 염, 카르노신 및 그 유도체 DNA 복구 효소(예: 포토리아제 또는 T4에 국한되지 않음), Silab에서 판매하는 엔도뉴클레아제 V 또는 염화물 채널 길항제 등.

대안적으로, 전술한 본 발명의 화장료 또는 약제학적 조성물은 치유 촉진제, 치유 보조제, 치유 촉진제, 재상피화 자극 제제 및/또는 특히 한정되는 것은 아니나, 센텔라 아시아티카 추출물과 같은 재상피화 보조제, 로사모샤타(Rosa moschata) 추출물, 에키네이셔 앙구수티폴리아(Echinacea angustifolia) 추출물, 컴프리(Symphytum officinal) 추출물, 쇠뜨기 (Equisetum arvense) 추출물, 하이페리쿰(Hypericum perforatum) 추출물, 미모사 테누이플로라 추출물, 알로에베라 추출물, Provital에서 판매하는 Epithelizing[INCI: Calendula (Calendula officinalis), Hypericum, Matricaria (Chamomilla recutita), 로즈마리 (Rosmarinus officinalis)], Laboratories Serobiologiques/Cognis에서 판매하는 LS9028 [INCI: 가수분해 카제인, 가수분해 효모 단백질, 라이신 염산염], Coletica/Engelhard/BASF에서 판매하는 [INCI: 제아 메이스(옥수수) 곡물 추출물], 카드헤린, 인테그린, 선택 단백질, 히알루로난 수용체, 면역글로불린, 섬유아세포 성장 인자, 결합 조직 성장 인자, 혈소판 유래 성장 인자, 혈관 내피 성장 인자, 표피 성장 인자, 인슐린 유사 성장 인자, 각질세포 성장 인자, 콜로니 자극 인자, 형질전환 성장 인자-베타, 종양 괴사 인자-알파, 인터페론, 인터루킨, 매트릭스 메탈로프로테이나제, 단백질 티로신 포스파타제, Lipotec에서 판매하는 수용체(Coletica/Engelhard/BASF에서 판매), [INCI: 슈도알테로모나스 발효 추출물] 또는 [INCI: 트리펩티드-10 시트룰린], 또는 이들의 혼합물인 합성 화합물, 식물 추출물 또는 생명공학적 방법으로 얻은 적어도 하나의 생성물의 미용학적 또는 약제학적 유효량을 함유할 수 있다.

또한, 본 발명의 전술한 화장료 또는 약학적 조성물은 민감한 피부 및 치유 과정과 관련된 부기 및 자극을 감소시키거나 과도하게 커진 흉터 또는 딱지를 치료하기 위해 진통제 및/또는 항염증제 화합물을 함유하거나 이와 함께 투여할 수 있다. 상기 화합물 중에서, 하이드로코르티손과 같은 스테로이드형 화합물, 아세트아미노펜 또는 아세틸살리실산과 같은 비스테로이드형 화합물, 또는 고유한 진통 및 항염증 활성을 갖는 천연 추출물 또는 에센셜 오일를 함유할 수 있다.

바람직하기로는, 상기 화장료 또는 약학 조성물의 제형은 크림, 오일, 밀크, 밤, 포움, 로션, 젤, 도포제, 에센스, 비누, 샴푸, 컨디셔너, 세럼, 연고, 무스, 포마드, 파우더, 스틱, 펜, 스프레이, 에어로졸, 캡슐, 정제, 과립, 츄잉검, 용액, 현탁액, 유제, 시럽, 엘릭서, 다당류 필름, 젤리 또는 젤라틴으로부터 선택될 수 있다.

바람직하기로는, 캡슐에는 연질 캡슐, 경질 캡슐, 바람직하기로는 젤라틴 캡슐이 포함된다.

바람직하기로는 정제에는 당의정이 포함된다.

본 발명의 화장료 또는 약학 조성물은 본 발명의 펩티드의 흡수를 증가시키는 경피 강화제, 특히 한정되는 것은 아니나, 예를 들어 디메틸술폭시드, 디메틸아세트아미드, 디메틸포름아미드, 계면활성제, 아존(1-도데실아지시클로헵탄-2-온), 알코올, 요소, 에톡시디글리콜, 아세톤, 프로필렌글리콜 또는 폴리에틸렌글리콜 등을 들 수 있다.

또한, 이온영동법, 초음파영동법, 전기천공법, 미세전기패치, 기계적 압축법, 삼투압 구배법, 드레싱 요법, 미세주사법 또는 압력을 이용한 바늘 없는 주사(예: 산소압하 주사) 또는 이들의 조합에 의해 제조되는 본 발명의 일반식 (I)로 표시되는 펩티드 또는 그의 입체이성질체 또는 입체이성질체의 혼합물, 또는 그의 화장료에서 허용되는 염, 그의 약학적으로 허용되는 염으로 제조할 수 있는 화장료 또는 약학적 조성물은 본 발명의 펩티드의 더 큰 침투를 달성하기 위해 국소 부위에 투여될 수 있다. 투여 영역은 치료 및/또는 치료할 상태, 장애 및/또는 질병의 조건에 따라 결정된다.

또한, 본 발명에 따른 일반식 (I)로 표시되는 펩티드 또는 그의 입체이성질체 또는 입체이성질체의 혼합물, 또는 그의 화장료에서 허용되는 염, 그의 약학적으로 허용되는 염, 또는 상기 화장료 또는 약학적 조성물은 식이 바 또는 압축 또는 비압축 분말과 같은 모든 형태의 기능성 식품 또는 강화 식품에 결합될 수 있다. 이들 분말은 물, 주스, 탄산음료, 유제품, 콩 파생물에 용해되거나 식사 바에 포함될 수 있다. 본 발명의 펩티드는 지방 성분, 수성 성분, 습윤제, 방부제, 증점제, 향료, 향료, 항산화제 또는 착색제와 같은 경구용 조성물 또는 식품 보충제에 사용되는 일반적인 부형제 또는 보조제와 함께 제제화될 수 있다.

본 발명의 펩티드는 서열의 성질 또는 N-말단 및/또는 C-말단의 임의의 가능한 변형에 따라 물에 대한 다양한 용해도를 갖는다. 따라서 본 발명의 펩티드는 수용액에 의해 조성물에 혼입될 수 있고, 물에 불용성인 것들은 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 프로필렌글리콜, 글리세린, 부틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 또는 이들의 조합과 같은 화장료로 또는 약학적으로 허용되는 통상의 용매에 용해하여 혼입될 수 있다.

투여될 본 발명의 펩티드의 미용학적 또는 약학적 유효량 및 그의 투여량은 연령, 환자의 상태, 상태 또는 질환의 중증도, 발병 경로 및 빈도 그리고 투여 경로 및 사용되는 펩티드의 특정 특성를 비롯한 많은 요인에 따라 달라질 것이다.

"화장용 또는 약학적 유효량"은 원하는 효과를 제공하기에 충분한 본 발명의 하나 이상의 펩티드의 무독성 양을 의미한다. 본 발명의 펩티드는 원하는 효과를 얻기 위해 화장료로 또는 약제학적으로 유효한 농도로 본 발명의 화장료 또는 약제학적 조성물에 사용되며, 바람직한 형태에서는 0.00000001 중량% 내지 20 중량%, 바람직하게는 0.000001 중량% 내지 15 중량%, 보다 바람직하게는 0.0001 중량% 내지 10 중량%, 더욱 더 바람직하게는 0.0001 중량% 및 중량% 5%로 사용된다.

본 발명의 또 다른 실시 태양에서, 활성 성분의 더 나은 침투를 달성하기 위해서 또는 활성 성분의 약동학적 및 약력학적 특성을 개선하기 위해 화장료로 또는 약학적으로 허용되는 전달 시스템 또는 지속 방출 시스템이 제공되며, 이는 유효량의 상기 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 또는 그의 입체이성질체, 또는 입체이성질체의 혼합물, 또는 그의 화장료에서 허용되는 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 또는 상기 언급된 화장 또는 약학적 조성물을 함유한다.

"전달 시스템"이라는 용어는 본 발명의 펩티드가 함께 투여되는 희석제, 보조제, 부형제 또는 담체석유 공급원, 동물 공급원, 식물 공급원 또는 합성 기원의 물, 오일 또는 계면활성제를 의미하며, 이들의 예로서는 특히 한정되는 것은 아니나, 낙화생유, 대두유, 광유, 참기름, 피마자유, 폴리소르베이트, 소르비탄 에스테르, 에테르 황산염, 황산염, 베타인, 글루코시드, 말토시드, 지방 알코올, 노녹시놀, 폴록사머, 폴리옥시에틸렌, 마크로골, 포도당, 글리세린, 디지토닌 등을 들 수 있다. 당업자는 본 발명의 펩티드가 투여될 수 있는 다양한 전달 시스템에 사용될 수 있는 희석제를 알고 있다.

용어 "지속 방출"은 경시적으로 화합물의 점진적인 방출, 바람직하게는 전체 기간에 걸쳐 상대적으로 일정한 수준의 화합물 방출을 제공하는 통상의 전달 시스템을 의미한다.

전달 시스템 또는 지속 방출 시스템의 예는 리포솜, 올레오솜, 비이온성 계면활성제 리포솜 소포, 에토솜, 밀리미터 캡슐, 마이크로캡슐, 나노캡슐, 나노구조 지질 담체, 스펀지, 시클로덱스트린, 지질 소포, 미셀, 밀리미터 구, 마이크로구, 나노구, 지질구, 마이크로에멀젼, 나노에멀젼, 밀리미터 입자, 마이크로입자 또는 나노입자를 들 수 있다. 바람직한 전달 시스템 또는 지속 방출 시스템은 리포솜 및 마이크로에멀젼, 더 바람직하게는 역 미셀의 내부 구조를 갖는 유중수 마이크로에멀젼이다.

지속 방출 시스템은 당업계에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있고, 예를 들어 접착성 패치, 비부착성 패치, 폐쇄성 패치 및 마이크로전자 패치를 포함하는 국소 또는 경피 투여에 의해 투여; 또는 비강, 직장, 피하 이식 또는 주사를 포함하는 경구 또는 비경구 경로, 또는 특정 신체 부위에의 직접 이식 또는 주사와 같은 전신 투여에 의해 투여될 수 있으며, 바람직하게는 비교적 일정한 양의 본 발명의 펩티드가 방출되어야 한다. 서방형 시스템에 함유된 펩티드의 양은, 예를 들어 조성물이 투여되는 부위, 본 발명의 펩티드의 방출 역학 및 지속 기간, 그리고 투여되는 상태, 장애 및/또는 조건, 치료 및/또는 보살핌의 조건, 질병의 특성에 따라 달라질 것이다.

본 발명의 또 다른 실시 태양은 상기 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성체, 또는 입체이성체, 화장료에서 허용되는 그의 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염의 유효량 함유하는 것으로, 이것은, 특히 한정되지 않으나, 탈크, 벤토나이트, 이산화규소, 전분, 말토덱스트린 등과 같은 화장료로 또는 그의 약학적으로 허용되는 고체 유기 중합체 또는 고체 무기 지지체를 함유할 수 있다.

본 발명의 또 다른 실시 태양은 상기 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물, 그의 화장료에서 허용되는 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염의 유효량을 포함하는 화장료, 화장료 또는 약학적 조성물을 제공한다.

바람직하기로는 화장료은 컨실러, 파운데이션, 메이크업 리무버, 메이크업 리무버 밀크, 아이섀도, 립스틱, 립글로스, 립밤 또는 립 파우더 중에서 선택될 수 있다.

본 발명의 또 다른 실시 태양은 상기 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성질체 또는 입체이성질체의 혼합물, 또는 그의 화장료에서 허용되는 염, 그의 약학적으로 허용되는 염, 또는 상기 언급된 화장료 또는 의약의 유효량을 포함하는 직물, 부직포 또는 의료용 장치를 제공한다. 본 발명의 펩티드는 직물 또는 부직포으 생분해 또는 의료 장치의 앵커링 시스템, 신체와의 마찰, 신체 수분, 피부의 pH 또는 체온에 의해 방출됩니다. 또한, 직포와 부직포를 이용하여 몸에 직접 닿는 의류를 만들 수도 있다.

직물, 부직포, 의류, 의료 장치 및 이에 펩티드를 고정시키는 수단의 예에는

선행 기술에, 예컨대, [Schaab C.K. (1986)"마이크로캡슐로 직물 함침(직물 함침을 위해 마이크로캡슐 사용)", HAPPI May 1986; Nelson G. (2002) "직물에 마이크로캡슐화 적용(직물에 마이크로캡슐화)" Int. J.Pharm. 242:5562; "생체 기능성 섬유와 피부"(2006) Curr. Probl. Dermatol. v.33, edited by Hipler U.C. 및 Elsner P. S. Karger A.G., Basel, Switzerland; Malcom R.K.; McCullagh S.D., Woolfson A.D., Gorman S.P., Jones D.S., and Cuddy J. (2004) "새로운 자체 윤활 실리콘에서 모델 항균 약물의 제어 방출(새로운 자체 윤활 실리콘에서) 윤활 실리콘 생체 재료에서 항균 약물 모델의 제어 방출)" J.Cont.Release 97:313320]에 공지되어 있는 전술한 전달 시스템 및/또는 지속 방출 시스템이 포함된다. 바람직한 직물, 부직포, 의류 또는 의료 기기로는 붕대, 거즈, 티셔츠, 양말, 팬티 스타킹, 속옷, 거들, 장갑, 기저귀, 생리대, 드레싱, 침대보, 물티슈, 접착 패치 패치, 비접착 패치, 폐색 패치, 마이크로 전자 패치 또는 마스크를 들 수 있다.

본 발명의 또 다른 실시 태양은 상기 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물, 또는 그의 화장료에서 허용되는 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 또는 화장료로의 사용, 또는 상기 기재된 약제학적 조성물, 또는 상기 기재된 화장료로 또는 약제학적으로 허용되는 전달 시스템 또는 지속 방출 시스템, 또는 상기 기재된 화장료로 또는 약제학적으로 허용되는 고체 유기 중합체 또는 고체 무기 지지체, 또는 상기 언급된 화장료, 또는 상기 언급된 직물, 피부 또는 점막의 치료 또는 관리를 위한 화장료 또는 약학 조성물 제조에 사용되는 직물 또는 의료 기기를 제공한다.

본 발명의 또 다른 실시 태양은 상기 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 또는 그의 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물, 또는 그의 화장료에서 허용되는 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 또는 상기 기재된 화장료 또는 약학적 조성물의 사용, 또는 전술한 화장용 또는 약학적으로 허용되는 전달 시스템 또는 서방형 시스템, 또는 또는 전술한 화장용 또는 약학적으로 허용되는 고체 유기 중합체 또는 고체 무기 지지체, 또는 상기 언급된 화장료, 또는 상기 언급된 직물, 부직포 또는 의료 기기 신체 표면 상처, 화상, 피부 궤양을 치료 또는 간호하고, 흉터 생성을 감소시키거나, 흉터 복구를 가속화하기 위한 화장료 조성물 또는 제약 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 실시 태양은 상기 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 또는 그의 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물, 또는 그의 화장료에서 허용되는 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 또는 전술한 화장료 또는 약학적 조성물에의 사용, 또는 전술한 화장용 또는 약학적으로 허용되는 전달 시스템 또는 서방형 시스템, 또는 전술한 화장용 또는 약학적으로 허용되는 고체 유기 중합체 또는 고체 무기 지지체, 또는 상기 언급된 화장료, 또는 상기 언급된 직물, 부직포 또는 의료 기기 섬유아세포 증식 촉진, 콜라겐 생성 증가, 피부 장벽 기능 개선, 피부 또는 점막의 재상피화 또는 치유를 위한 화장료 또는 약학적 조성물의 사용을 제공한다.

본 발명의 한 실시 태양은 상기 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 또는 그의 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물, 또는 그의 화장료에서 허용되는 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 또는 상기 화장료 또는 약학 조성물의 사용, 또는 상기 언급된 화장용 또는 약학적으로 허용되는 전달 시스템 또는 서방형 시스템, 또는 상기 언급된 화장료 또는 약학적으로 허용되는 고체 유기 중합체 또는 고체 무기 지지체, 또는 상기 언급된 화장료, 또는 상기 언급된 직물의 사용, 피부 노화 또는 광노화를 치료, 예방 또는 복구하기 위한 화장료 조성물 또는 제약 조성물의 제조에 있어서 부직포 또는 의료 장치에의 사용을 제공한다.

바람직하기로는, 피부 노화 또는 광노화의 치료, 예방 또는 회복은 얼굴 주름의 감소, 예방 또는 치료이다.

본 발명의 또 다른 실시 태양은 상기 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성질체, 또는 이들의 혼합물, 화장료학적 또는 약학적 유효량, 또는 또는 전술한 화장료 또는 제약 조성물을 투여하는 것을 특징으로하느 피부 또는 점막의 치료 또는 관리 방법을 제공한다.

본 발명의 또 다른 실시 태양은 상기 일반식 (I)의 화장료학적 또는 약학적으로 허용되는 염, 그의 입체이성질체, 또는 입체이성질체의 혼합물, 또는 또는 전술한 화장료 또는 제약 조성물을 투여하는 것을 특징으로 하는 체표면 상처, 화상, 피부 궤양의 치료 또는 간호, 흉터 생성 감소 및 흉터 회복 촉진 방법을 제공한다.

본 발명의 또 다른 실시 태양은 상기 일반식 (I)로 표시되는 펩티드 또는 그의 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물, 또는 그의 화장료에서 허용되는 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염의 유효량, 또는 전술한 화장료 또는 약학적 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 피부 노화 또는 광노화를 치료, 예방 또는 회복하는 방법을 제공한다.

피부 노화 또는 광노화의 치료, 예방 또는 회복은 얼굴 주름의 감소, 예방 또는 치료이다.

본 발명의 상기 일반식 (I)로 표시되는 펩티드 또는 그의 입체이성질체 또는 입체이성질체의 혼합물, 또는 그의 화장료에서 허용되는 염 또는 그의 약학적으로 허용되는 염을 함유하는 조성물, 또는 상기 화장료 또는 약학 조성물 상태, 장애 및/또는 질병의 치료 및/또는 관리를 위해 필요에 따라 피부 및/또는 점막에 바르거나 경구 또는 비경구로 투여할 수 있다.

투여 또는 투여 빈도는 각 대상의 필요에 따라 크게 달라질 수 있으며, 권장 투여 또는 투여량은 월 1회 내지 하루 10회, 바람직하게는 주 1회 내지 하루 4회, 더욱 바람직하게는 주 3회 내지 하루 3회, 더더욱 바람직하게는 하루 1 또는 2회이다.

정의

본 발명의 이해를 돕기 위해, 본 발명에서 사용되는 일부 용어와 그 표현의 의미를 설명하면 다음과 같다.

본 발명에 있어서, "피부"라는 용어는 최상층 또는 각질층으로부터 최하층 또는 피하조직까지, 양단을 포함하여 피부를 총괄적으로 구성하는 층을 의미하는 것으로 이해된다. 이러한 층은 특히 각질세포, 섬유아세포, 멜라닌세포 및/또는 지방세포와 같은 다양한 유형의 세포로 구성됩니다. 본 발명에 있어서, "피부"라는 용어에는 두피도 포함된다.

"치료"라는 용어는 질병 또는 상태를 완화 또는 제거하거나, 그러한 질병 또는 상태와 관련된 하나 이상의 증상을 감소 또는 제거하기 위해 본 발명에 따른 펩티드를 투여하는 것을 의미한다. "치료"라는 용어는 또한 질병 또는 장애의 생리학적 결과를 완화하거나 제거하는 능력을 포함한다.

"치료"라는 용어에는 질병 및/또는 상태의 예방이 포함된다.

"예방"이라는 용어는 질병 또는 상태가 발생하기 전에 질병 또는 상태의 발병 또는 발달을 예방, 지연 또는 방해하는 본 발명의 펩티드의 능력을 의미한다.

"노화"라는 용어는 피부가 나이가 들어감에 따라(자연 노화), 햇빛에 노출(광노화)되거나, 화학적 먼지나 오염 물질, 담배 연기 등과 같은 환경 오염 물질에 노출됨에 따라 겪는 변화를 의미하며, 모든 변화를 포함하였다. 피부의 불연속성 발달(예: 주름, 잔주름, 표정 주름, 튼살, 줄무늬, 고랑 주름, 불균일 또는 거칠기, 모공 크기 증가), 수분상실, 탄력상실, 탄력상실, 매끄러움상실, 변형회복능력상실, 탄력상실), 피부처짐(볼처짐, 눈 밑 처짐, 이중턱 등), 피부색 변화(예: 흉터, 발적, 눈 밑 처짐 또는 검버섯이나 주근깨와 같은 과다 색소 침착 부위), 비정상적인 분화, 과각질화, 탄력증, 각화증, 탈모, 주황색 유피 피부, 콜라겐 손실 각질층, 진피, 표피, 혈관계(예: 거미 정맥 또는 모세혈관 확장증의 발생) 또는 피부에 인접한 조직의 구조 및 기타 조직학적 변화를 의미한다.

광노화"라는 용어는 피부가 자외선에 장기간 노출되어 피부가 조기 노화되는 것을 말하며, 이는 처짐, 처짐, 색 변화 또는 과다색소침착, 규칙적, 비정상적 및/또는 각화증 등 자연 노화와 동일한 생리학적 특성을 나타낸다.

본 명세서에서 아미노산에 사용되는 약어는 European Journal of Biochemistry(Eur.J.Biochem.1984, 138:9-37)의 IUPAC-IUB 생화학 명명법 위원회에서 지정한 규칙을 따른다.

따라서, 예를 들어 Ala는 NH₂-CH(CH₃)-COOH를 나타내고, Ala-는 NH₂-CH(CH₃)-CO-를 나타내고, -Ala는 -NH-CH(CH₃)-COOH를 나타내고, -Ala-는 -NH-를 나타내고, CH(CH₃)-CO-를 나타낸다. 따라서, 펩티드 결합을 나타내는 하이픈은 하이픈 오른쪽에 위치할 때 아미노산의 1-카르복실기(여기서는 기존의 비이온화 형태로 표시됨)에 있는 OH를 제거하고, 아미노산 2-카르복실기에서 H를 제거한다. 하이픈 왼쪽에 위치하면 아미노; 두 가지 수정 사항 모두 동일한 기호에 적용될 수 있다(표 1 참조).

명칭/약어	아미노산 잔기	명칭/약어	아미노산 잔기
패날알라닐 -Phe- F		프롤릴 -Pro- P
알기닐 -Arg- R		메티오닐 -Met- M
글리실 -Gly- G		이소로이실 -Ile I
시스테이닐 -Cys- C		트레오닐 -Thr- T
알라닐 -Ala- A		아스파라기닐 -Asn- N

<표 1: 아미노산 잔기의 구조와 한 글자 및 세 글자 약어>

본 발명에서 약어 "Ac-"는 아세틸기(CH₃-CO-)를 나타내기 위해 사용되며, 약어 "Palm-"는 팔미토일기(CH₃-(CH₂)₁₄-CO-)를 나타내기 위해 사용된다.

실시예

이하, 본 발명을 더욱 잘 이해하기 위해 실시예 및 첨부 도면을 결합하여 본 발명을 상세히 설명하지만, 이들 실시예 및 첨부 도면은 단지 예시의 목적으로만 사용되며 본 발명의 범위를 제한하려는 의도가 아니라는 점을 이해해야 한다.

약어

아미노산에 사용되는 약어는 Eur J. Biochem.(1984) 138:9-37 및 J. Chem (1989) 264:633-673 Biochem.의 IUPAC-IUB의 생화학 명명법 위원회에서 지정한 규칙을 따른다.

Wang Resin; 왕 수지; DMF: N,N-디메틸포름아미드; DCM: 디클로로메탄; DIC: 디이소프로필카르보디이미드; Ac₂O: 무수 아세트산; DIPEA: 디이소프로필에틸아민; Fmoc: 9-플루오레닐메톡시카르보닐; 피페리딘: 피페리딘; HOBt: 1-히드록시벤조트리아졸; TFA: 트리플루오로아세트산; TIS: 트리이소프로필실란; EDT: 1,2-에탄디설파이드 알코올; DMSO: 디메틸설폭사이드; Ac: 아세틸; Palm: 팔미토일; Ala: 알라닌; Pro: 프롤린; Phe: 페닐알라닌; Arg: 아르기닌; Met: 메티오닌; Gly: 글리신; Ile: 이소류신; Cys: 시스테인; Thr: 트레오닌; Asn: 아스파라긴; Pbf: (2,2,4,6,7-펜타메틸-2,3-디히드로-1-벤조푸란-5-일)술포닐; Trt: 트리페닐메틸 또는 트리틸; tBu: tert-부틸; 아미드 수지: 폴리펩티드 합성을 위한 출발 수지. Fmoc-linker: 4-[(2,4-디메톡시페닐)(Fmoc-아미노)메틸]페녹시아세트산.

실시예 1 (Fmoc-Ala-Pro-Phe-Arg(Pbf)-Met-Gly-Ile-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Wang Resin의 제조)

1.1 수지 팽창

Wang Resin 35g(49.7mmol)을 칭량하여 2L 고상 합성 반응 컬럼에 넣었다. DMF 100ml를 가하여 수지를 완전히 침지한 후, 질소가스를 넣고, 질소가스 밸브를 키고, 5분간 교반하고 불어넣은 후, 5분간 용매를 제거했다. DMF 100ml를 계속해서 넣고, 수지를 완전히 침지한 후, 질소가스에 30분간 투입하여 수지가 완전히 팽윤된 후, 용매를 제거하였다. 그런 다음 DMF 100ml를 넣고 수지를 완전히 침지한 후, 질소가스를 넣고 질소가스 밸브를 키고, 교반, 불어넣은 후, 5분간 용매를 제거하여 팽윤을 완료하였다.

1.2 De-Fmoc

팽윤 수지를 20% 피페리딘/DMF 500ml로 2회 de-Fmoc 처리하고, 1차 반응은 5분, 2차 반응은 8분 행하고, 용매를 3분 동안 배출시켰다. 수지를 DMF로 7~8회 세척한 후, 용매를 제거하였다.

1.3 피딩(feeding) 반응

Fmoc-Asn(Trt)-OH(89.46mmol; 1.8당량) 53.38g을 칭량하고, HOBt 14.51g을 건조 500ml 환저 플라스크에 넣었다. DMF를 가하여 용해한 후, ±5℃ 냉장고에 10분간 넣어둔다. 20.78ml DIC를 가하여 10분간 활성화하고, 수증기를 피하였다. 수지에 활성 아미노산을 가하여 2시간 동안 반응시킨 후, 반응온도를 25~35℃로 조절하고, 반응액을 제거하였다. 수지를 100ml씩 DMF로 세척하고, 수지와 용매를 균일하게 혼합한 후, 타이밍에 맞춰 2분간 교반하고, 용매를 배출하였다. 흡인 여과된 용매가 투명해질 때까지 DMF로 여러 번 세척하였다.

수지의 치환도는 0.5로 검출되었으며, 계산된 합성 규모는 24.9mmol이었다.

N-말단 Fmoc기를 탈보호하고, 24.74g의 활성 Fmoc-Thr(tBu)-OH(62.25mmol; 2.5당량)를 10.09g HOBt 및 14.46ml DIC의 존재 하에 DMF를 용매로 사용하여 펩티딜 수지에 커플링했다. 이 반응을 2시간 동안 계속하였다. 이어서 수지를 세척한 후, 아미노산의 커플링을 위해 Fmoc기의 탈보호 처리를 반복하였다. 각 커플링에서, 24.74g의 Fmoc-Thr(tBu)-OH(62.25 mmol; 2.5당량); 36.46g의 Fmoc-Cys(Trt)-OH(62.25mmol; 2.5당량); 22g의 Fmoc-Ile-OH(62.25mmol; 2.5당량); 18.51g의 Fmoc-Gly-OH(62.25mmol; 2.5당량)를 10.09g의 HOBt 및 14.46ml의 DIC의 존재하에 용매로서 DMF를 사용하여 순차적으로 커플링하였다.

N-말단 Fmoc기를 탈보호하고, 32.37g의 활성 Fmoc-Met-OH(87.15mmol; 3.5당량)를 14.13g의 HOBt 및 20.24ml의 DIC의 존재 하에 DMF를 용매로 사용하여 펩티딜 수지에 커플링시켰다. 이 반응을 2시간 동안 계속됐다. 이어서 수지를 세척한 후, 아미노산의 커플링을 위해 Fmoc기의 탈보호 처리를 반복하였다. 각 커플링에서, 56.54g의 Fmoc-Arg(Pbf)-OH(87.15mmol; 3.5당량); 33.76g의 Fmoc-Phe-OH(87.15mmol; 3.5당량); 29.40g의 Fmoc-Pro-OH(87.15mmol; 3.5당량) 및 27.13g의 Fmoc-Ala-OH(87.15mmol; 3.5당량)를 14.13g HOBt 및 20.24ml DIC의 존재 하에 DMF를 용매로 사용하여 순차적으로 커플링하였다.

합성 후 수지를 DMF로 100ml씩 세척하고, 수지와 용매를 균일하게 혼합한 후, 2분간 교반한 후 용매를 배출하였다. 흡인으로 여과된 용매가 징명해질 때까지 수지를 DMF로 여러 번 세척하였다.

실시예 2 (Fmoc-Ala-Pro-Phe-Arg(Pbf)-Met-Gly-Ile-Cys(Trt)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Linker-Amid Resin의 제조)

2.1 Fmoc-Link-Amid Resin의 제조

50g(60mmol)의 아미드 수지를 2L 고상 합성 반응 컬럼에 넣었다. 수지를 DMF 400ml로 1회 세척한 후, DCM 500ml로 20분간 팽윤시킨 후, 용매를 제거하였다. DMF 400ml로 수지를 3회 세척하였다.

Fmoc-linker 80.9g(150mmol)과 HOBt 24.3g(180mmol)을 건조한 500ml 입구가 넓은 삼각 플라스크에 넣었다. DMF 용매 약 150ml를 첨가하여 녹인 후, 빙수 중탕에 넣어 2분간 식힌 후, 수증기를 피하면서 DIC 30ml(195mmol)를 첨가하여 3분간 활성화시킨다. 팽윤된 수지에 활성 Fmoc-linker를 첨가하여 2시간 동안 반응시킨 후 반응액을 제거하였다. 수지를 DMF 400ml로 2분씩 3회 세척하였다.

Ac₂O 28ml(300mmol), DIPEA 10.7ml(60mmol) 및 DMF 400ml의 혼합물을 첨가하여 3시간 동안 밀봉한 후, 수지를 DMF 500ml로 4회, DCM 500ml로 2회 세척하였다. 용매를 제거하였다.

2.2 De-Fmoc

Fmoc-Linker-Amide Resin을 20% 피페리딘/DMF 500ml로 2회 de-Fmoc하고, 1차 반응은 5분, 2차 반응은 8분, 3분 동안 용매를 배출시켰다. 수지를 DMF 500ml로 4회, DCM 500ml로 2회 세척하고, 용매를 제거하였다.

2.3 피딩 반응

Fmoc-Asn(Trt)-OH(87.5mmol) 52.21g의 무게를 칭량하고, 건조한 500ml 입구가 넓은 삼각 플라스크에 HOBt 14g을 추가하였다. DMF를 첨가하여 용해시킨 후, 빙수조에서 냉각시켰다. 20ml DIC를 추가하여 3분간 활성화하고 수증기를 피하였다. 탈보호된 수지에 활성 아미노산을 첨가하여 2시간 동안 반응시킨 후, 반응액을 제거하였다. 수지를 DMF 500ml로 2분씩 2회 세척하고, DCM 400ml로 수지를 2회 세척한 후, 용매를 제거하였다.

N-말단 Fmoc기를 탈보호하고, DMF를 용매로 사용하여 34.78g의 활성 Fmoc-Thr(tBu)-OH(87.5mmol)를 14g HOBt 및 20ml DIC의 존재 하에 펩티딜 수지에 커플링시키고, 2시간 동안 반응을 계속하였다. 이어서 수지를 세척한 후, 아미노산의 커플링을 위해 Fmoc기의 탈보호 처리를 반복하였다. 각 커플링에서 Fmoc-Thr(tBu)-OH(87.5mmol) 34.78g, 51.25g의 Fmoc-Cys(Trt)-OH(87.5mmol), 30.92g의 Fmoc-Ile-OH(87.5mmol), 26.01g의 Fmoc-Gly-OH(87.5mmol), 32.50g의 Fmoc-Met-OH(87.5mmol), 56.77g의 Fmoc-Arg(Pbf)-OH(87.5mmol), 33.90g의 Fmoc-Phe-OH(87.5mmol), 29.52g의 Fmoc-Pro-OH(87.5mmol) 및 27.24g의 Fmoc-Ala-OH(87.5mmol)을 커플링시켰다.

이 합성 후, 수지를 600ml DMF로 각각 2분간 4회, 500ml DCM으로 2회 세척한 후, 용매를 제거했다.

실시예 3

N-말단 Fmoc 보호기를 제거하였다.

실시예 1 및 실시예 2에서 얻은 펩티딜 수지의 N-말단 Fmoc기를 탈보호하고, 20% 피페리딘/DMF 500ml를 사용하여 Fmoc를 2회 제거하고, 제1 반응은 5분, 제2반응은 8분간 행한 후, 3분간 용매를 배출하였다. 수지를 DMF 600ml로 2분씩 4회 세척하고, DCM 500ml로 수지를 2회 세척한 후, 용매를 제거하였다.

실시예 4

실시예 3에서 얻은 펩티딜 수지에 R₁ 팔미토일기를 도입하였다.

1.53g의 HOBt(10mmol; 10당량) 및 1.54ml의 DIC(10mmol; 10당량) 존재하에 1ml의 DMF에 미리 용해된 2.56g의 팔미트산(10mmol; 10당량)을 첨가하였다. 실시예 3에서 얻은 펩티딜 수지 1mmol에 첨가하여 15시간 동안 반응시킨 후 수지를 DMF 600ml로 2분간 4회, DCM 500ml로 2회 세척하고 용매를 제거하였다.

실시예 5

실시예 3에서 얻은 펩티딜 수지에 R₁ 아세틸기를 도입하였다.

실시예 3에서 얻은 펩티딜 수지 1mmol을 DIPEA 25당량 존재하에 DMF 5ml를 용매로 하여 Ac₂O 25당량으로 처리하였다. 30분간 반응시킨 후, 수지를 600ml DMF로 2분간 4회, 500ml DCM으로 2회 세척하고 용매를 제거하였다.

실시예 6

실시예 3, 4, 5에서 얻은 펩티딜 수지를 고분자 지지체로부터 떼어냈다.

실시예 3, 4, 5에서 얻은 펩티딜 수지를 메탄올 500ml, 300ml, 200ml로 3회 수축시키고, 진공 건조하였다.

실시예 3, 4, 5에서 얻은 건조 펩티딜 수지 1g을 달아 용해물(TFA:EDT:anisole:thioanisole:TIS:H2O=87.5:2.5:2.5:2.5:2.5:2.5) 7ml로 2.5시간 동안 처리하였다. 샌드 코어 깔대기를 갖춘 석션 필터를 사용하여 수지를 트리플루오로아세트산 1ml로 세척하고, 여액을 냉동 이소프로필에테르 64ml에 천천히 적가하였더니 다량의 백색 고체 침전물이 생성되었다. 이를 원심분리 후, 이소프로필에테르로 6회 세척하였다. 얻어진 최종 침전물을 진공하에 건조시켰다.

실시예 7

고성능 액체 크로마토그래피로 정제하였다.

실시예 6에서 얻은 조 펩티드를 메탄올과 물에 녹인 후, 포어 크기가 0.45㎛인 필터막으로 여과하였다.

정제 준비 조건:

이동상 A: 순수 아세토니트릴; 이동상 B: 0.1% 아세트산 수용액;

검출 파장: 215nm;

크로마토그래피 컬럼: C18-20*150mm;

용출 구배:

여과된 샘플을 주입 및 정제하고, 분획을 수집하고, 농축, 동결건조하여 하기의 순도 90% 이상의 펩티드를 얻었다.

1. H-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Cys-Thr-Thr-Asn-OH;

2. H-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Cys-Thr-Thr-Asn-NH₂;

3. Palm-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Cys-Thr-Thr-Asn-OH, 즉, 펩티드(8);

4. Palm-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Cys-Thr-Thr-Asn-NH₂, 즉, 펩티드(9);

5. Ac-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Cys-Thr-Thr-Asn-OH, 즉, 펩티드(10);

6. Ac-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Cys-Thr-Thr-Asn-NH₂, 즉, 펩티드(11).

실시예 8

실시예 7에서 얻은 펩티드를 산화시켰다.

실시예 7에서 얻은 펩티드를 250ml 배 모양(pear-shape) 병에 넣고 정제수 80ml에 용해한 후, 구아니딘 염산염 8g과 DMSO 20ml를 넣고, 30시간 동안 방치한 후, 교반하는 후, 반응과정을 HPLC로 모니터링하였다. 산화 후, 아세트산 4ml를 넣어 침전물을 녹인 후, 0.22㎛ 여과막으로 진공여과하였다.

실시예 9

실시예 8에서 얻은 여과액을 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하였다.

정제 준비 조건:

검출 파장: 215nm;

크로마토그래피 컬럼: C18-20*150mm;

용출 구배:

여액을 주입 및 정제하고, 분획을 수집하고, 농축하고, 동결건조하여 95% 이상의 순도를 갖는 하기 펩티드를 얻었다.

7, 즉, 펩티드(1)

8, 즉, 펩티드(12)

9, 즉, 펩티드(13)

10, 즉, 펩티드(14)

11, 즉, 펩티드(15)

12, 즉, 펩티드(16)

실시예 10

실시예 7에서 얻은 펩티드의 Cys8의 측쇄 머캅토기를 알릴기로 수식하였다.

실시예 7에서 얻은 펩티드 120mg을 취하여 물 40ml에 용해하고, 질소압 하에서 보호한 후, 알릴브로마이드를 5배량 첨가하여 상온에서 반응시킨 후, 반응이 완료될 때까지 HPLC로 반응과정을 모니터링하여 다음의 조 펩티드를 얻었다:

13, 즉, 펩티드(3)

14, 즉, 펩티드(17)

15, 즉, 펩티드(18)

16, 즉, 펩티드(19)

17, 즉, 펩티드(20)

18, 즉, 펩티드(21)

실시예 11

실시예 7에서 얻은 펩티드의 Cys8의 측쇄 티올을 tert-부틸 브로모아세테이트로 수식하였다.

실시예 7에서 얻은 펩티드 120mg을 취하여 물 40ml에 용해하고, 질소압 하 보호한 후, tert-부틸 브로모아세테이트를 5배량 첨가하여 상온에서 반응시키고, 반응이 완료될 때까지 HPLC로 반응과정을 모니터링하여 다음의 조 펩티드를 얻었다:

19, 즉, 펩티드(4)

20, 즉, 펩티드(22)

21, 즉, 펩티드(23)

22, 즉, 펩티드(24)

23, 즉, 펩티드(25)

24, 즉, 펩티드(26)

실시예 12

실시예 7에서 얻은 펩티드의 Cys8 측쇄의 머캅토기를 머캅토에탄으로 수식하였다.

실시예 7에서 얻은 펩티드 120mg을 달아 물 40ml에 용해하고, 질소압 하에서 보호한 후, 5배량의 메르캅토에탄을 첨가하고 상온에서 반응시킨 후, 반응이 완료될 때까지 HPLC로 반응과정을 모니터링하여 하기 조 펩티드를 얻었다. :

25, 즉, 펩티드(5)

26, 즉, 펩티드(27)

27, 즉, 펩티드(28)

28, 즉, 펩티드(29)

29, 즉, 펩티드(30)

30, 즉, 펩티드(31)

실시예 13

실시예 7에서 얻은 펩티드의 Cys8 측쇄의 티올기를 헥산티올로 수식하였다.

실시예 7에서 얻은 펩티드 120mg을 달아 물 40ml에 용해하고, 질소압 하에서 보호한 후, 헥산티올을 5배량 첨가하고 상온에서 반응시킨 후, 반응이 완료될 때까지 HPLC로 반응과정을 모니터링하여 다음의 조 펩티드를 얻었다.:

31, 즉, 펩티드(6)

32, 즉, 펩티드(32)

33, 즉, 펩티드(33)

34, 즉, 펩티드(34)

35, 즉, 펩티드(35)

36, 즉, 펩티드(36)

실시예 14

실시예 7에서 얻은 펩티드의 Cys8의 측쇄 설프히드릴기를 브로모아세트산으로 수식하였다.

실시예 7에서 얻은 펩티드 120mg을 달아 물 40ml에 용해하고 질소압 하에서 보호한 후, 브로모아세트산을 5배량 첨가하여 상온에서 반응시킨 후, 반응이 완료될 때까지 HPLC로 반응과정을 모니터링하여 하기 조 펩티드를 얻었다:

37, 즉, 펩티드(7)

38, 즉, 펩티드(37)

39, 즉, 펩티드(38)

40, 즉, 펩티드(39)

41, 즉, 펩티드(40)

42, 즉, 펩티드(41)

실시예 15

실시예 10~14에서 얻은 생성물을 고성능 액체 크로마토그래피로 정제하였다.

정제 준비 조건:

검출 파장: 215nm;

크로마토그래피 컬럼: C18-20*150mm;

용출 구배:

주입에 의한 정제, 분획물을 모아 농축하고 동결건조하여 순도 80% 이상의 펩티드를 얻었다.

실시예 16 (Fmoc-Ala-Pro-Phe-Arg(Pbf)-Met-Gly-Ile-Met-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Wang Resin의 제조)

16.1 수지 팽윤

Wang Resin 35g(49.7mmol)을 칭량하여 2L 고상 합성 반응 컬럼에 넣었다. DMF 100ml를 첨가하여 수지를 완전히 침지한 후, 질소가스를 주입하고, 질소가스를 켜서 5분간 교반하고 불어넣은 후, 5분간 용매를 빼낸다. 계속해서 DMF 100ml를 넣고 수지를 완전히 침지한 후, 질소가스에 30분간 투입하여 수지를 완전히 팽윤시키고 용매를 빼내었다. 그런 다음 DMF 100ml를 넣고, 수지를 완전히 침지한 후 질소가스를 넣고 질소가스를 켜서 교반하고, 불어넣은 후, 5분간 용매를 제거하여 팽윤을 완료하였다.

16.2 De-Fmoc

팽윤된 수지를 20% 피페리딘/DMF 500ml로 2회 de-Fmoc 처리하고, 제1 반응은 5분, 제2반응은 8분, 용매를 3분 동안 배출시켰다. 수지를 DMF로 7~8회 세척하고 용매를 제거하였다.

16.3 피딩 반응

Fmoc-Asn(Trt)-OH(89.46mmol; 1.8당량) 53.38g을 계량하고 HOBt 14.51g을 건조한 500ml 둥근바닥 플라스크에 넣었다. DMF를 넣어 녹인 후 ±5℃ 냉장고에 10분간 방치하였다. 20.78ml DIC를 추가하여 10분간 활성화하고 수증기를 피하였다. de-Fmoc 보호 후, 수지에 활성 아미노산을 첨가하여 2시간 동안 반응시킨 후, 반응온도를 25~35℃로 조절하고 반응액을 제거하였다. 수지를 100ml씩 DMF로 세척하고 수지와 용매를 균일하게 섞은 후 타이밍에 맞춰 2분간 저어주고 용매를 제거했다. 흡인으로 여과된 용매가 맑고 투명해질 때까지 수지를 DMF로 여러 번 세척하였다.

N-말단 Fmoc기를 탈보호하고, 24.74g의 활성 Fmoc-Thr(tBu)-OH(62.25mmol; 2.5eq.)를 10.09g의 HOBt 및 14.46ml의 존재 하에 DMF를 용매로 사용하여 펩티딜 수지에 커플링하였다. DIC에 첨가하고, 반응을 2시간 동안 계속하였다. 이어서 수지를 세척한 후, 아미노산의 커플링을 위해 Fmoc기의 탈보호 처리를 반복하였다. 각 커플링에서, 24.74g의 Fmoc-Thr(tBu)-OH(62.25mmol; 2.5당량); 23.12g의 Fmoc-Met-OH(62.25mmol; 2.5당량); 22g의 Fmoc-Ile-OH(62.25mmol; 2.5당량); 18.51g의 Fmoc-Gly-OH(62.25mmol; 2.5당량)를 10.09g의 HOBt 및 14.46ml의 DIC의 존재 하에 용매로서 DMF를 사용하여 순차적으로 커플링하였다.

N-말단 Fmoc기를 탈보호하고, 32.37g의 활성 Fmoc-Met-OH(87.15mmol; 3.5당량)를 14.13g의 HOBt 및 20.24ml의 DIC의 존재 하에 DMF를 용매로 사용하여 펩티딜 수지에 커플링시켰으며, 2시간 동안 계속 반응시켰다. 이어서 수지를 세척한 후 아미노산의 커플링을 위해 Fmoc기의 탈보호 처리를 반복하였다. 각 커플링에서, 56.54g의 Fmoc-Arg(Pbf)-OH(87.15mmol; 3.5당량); 33.76g의 Fmoc-Phe-OH(87.15mmol; 3.5당량); 29.40g의 Fmoc-Pro-OH(87.15mmol; 3.5당량) 및 27.13g의 Fmoc-Ala-OH(87.15mmol; 3.5당량)를 14.13g HOBt 및 20.24ml DIC의 존재 하에 DMF를 용매로 사용하여 순차적으로 커플링하였다.

합성 후 수지를 DMF로 100ml씩 세척하고 수지와 용매를 균일하게 혼합한 후, 2분간 교반하고, 용매를 배출하였다. 흡인으로 여과된 용매가 맑고 투명해질 때까지 수지를 DMF로 수회 세척하였다.

실시예 17 (Fmoc-Ala-Pro-Phe-Arg(Pbf)-Met-Gly-Ile-Met-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Link-Amid Resin의 제조)

17.1 Fmoc-Link-Amid Resin의 제조

50g(60mmol)의 아미드 수지 수지를 2L 고상 합성 반응 컬럼에 넣었다. 수지를 DMF 400ml로 1회 세척하고, DCM 500ml로 20분간 팽윤시킨 후, 용매를 제거하였다. DMF 400ml로 수지를 3회 세척하였다.

Fmoc-linker 80.9g(150mmol)과 HOBt 24.3g(180mmol)을 건조한 500ml 입구가 넓은 삼각 플라스크에 넣었다. DMF 용매 약 150ml를 넣어 용해하고, 빙수조에 넣어 2분간 식힌 후, 수증기를 피하면서 DIC30ml(195mmol)을 넣어 3분간 활성화시켰다. 팽윤된 수지에 활성 Fmoc-linker를 첨가하여 2시간 동안 반응시킨 후, 반응액을 제거하였다. 수지를 DMF 400ml로 2분씩 3회 세척하였다.

Ac₂O 28ml(300mmol), DIPEA 10.7ml(60mmol) 및 DMF 400ml의 혼합물을 첨가하여 3시간 동안 밀봉한 후, 수지를 DMF 500ml로 4회, DCM 500ml로 2회 세척하고, 용매를 제거하였다.

17.2 De-Fmoc

Fmoc-Linker-Amide Resin은 20% 피페리딘/DMF 500ml로 2회 de-Fmoc를 수행하였고, 1차 반응은 5분, 2차 반응은 8분, 3분 동안 용매를 빼냈다. 수지를 DMF 500ml로 4회 세척하고, DCM 500ml로 수지를 2회 세척하였다. 용매를 제거하였다.

17.3 피딩 반응

Fmoc-Asn(Trt)-OH(87.5mmol) 52.21g의 무게를 측정하고 건조한 500ml 입구가 넓은 삼각 플라스크에 HOBt 14g을 추가하였다. DMF 용매를 첨가하여 용해하고, 빙수조에 넣어 냉각하였다. 20ml DIC를 추가하여 3분간 활성화하고 수증기를 피하였다. 탈보호된 수지에 활성 아미노산을 첨가하여 2시간 동안 반응시킨 후, 반응액을 제거하였다. 수지를 DMF 500ml로 2분씩 2회 세척하고, DCM 400ml로 수지를 2회 세척한 후 용매를 제거하였다.

N-말단 Fmoc기를 탈보호하고, 34.78g의 활성 Fmoc-Thr(tBu)-OH(87.5mmol)를 14g HOBt 및 20ml DIC의 존재하에 용매로서 DMF를 사용하여 펩티딜 수지에 커플링시켰으며, 2시간 동안 계속 반응시켰다. 이어서 수지를 세척한 후, 아미노산의 커플링을 위해 Fmoc기의 탈보호 처리를 반복하였다. 각 커플링에서 Fmoc-Thr(tBu)-OH(87.5mmol) 34.78g; 32.50g의 Fmoc-Met-OH(87.5mmol); 30.92g의 Fmoc-Ile-OH(87.5mmol); 26.01g의 Fmoc-Gly-OH(87.5mmol); 32.50g의 Fmoc-Met-OH(87.5mmol); 56.77g의 Fmoc-Arg(Pbf)-OH(87.5mmol); 33.90g의 Fmoc-Phe-OH(87.5mmol); 29.52g의 Fmoc-Pro-OH(87.5mmol)에 이어 27.24g의 Fmoc-Ala-OH(87.5mmol)를 HOBt 14g 및 DIC 20ml의 존재하에 용매로서 DMF를 사용하여 순차적으로 커플링시켰다.

이 합성 후, 수지를 600ml DMF로 각각 2분간 4회, 500ml DCM으로 2회 세척하고 용매를 제거했다.

실시예 18

N-말단 Fmoc 보호기를 제거하였다.

실시예 16 및 실시예 17에서 얻은 이들 펩티딜 수지의 N-말단 Fmoc기를 탈보호하여 de-Fmoc를 20% 피페리딘/DMF 500ml로 2회, 1차 반응은 5분, 2차 반응은 8분 수행하고, 3분간 용매를 제거하였다. 수지를 DMF 600ml로 2분씩 4회 세척하고, DCM 500ml로 수지를 2회 세척한 후, 용매를 제거하였다.

실시예 19

실시예 18에서 얻은 펩티딜 수지에 R₁ 팔미토일기를 도입하였다.

1.53g의 HOBt(10mmol; 10당량) 및 1.54ml의 DIC(10mmol; 10당량) 존재하에 1ml의 DMF에 미리 용해된 2.56g의 팔미트산(10mmol; 10당량)을 첨가하였다. 실시예 18에서 얻은 펩티딜 수지 1mmol에 첨가하여 15시간 동안 반응시킨 후, 수지를 DMF 600ml로 2분간 4회, DCM 500ml로 2회 세척하고 용매를 제거하였다.

실시예 20

실시예 18에서 얻은 펩티딜 수지에 R₁ 아세틸기를 도입하였다.

실시예 18에서 얻은 펩티딜 수지 1mmol을 DIPEA 25당량 존재하에 DMF 5ml를 용매로 하여 Ac₂O 25당량으로 처리하였다. 30분간 반응시킨 후, 수지를 600ml DMF로 2분간 4회, 500ml DCM으로 2회 세척하고 용매를 제거하였다.

실시예 21

실시예 18, 19 및 20에서 얻은 펩티딜 수지를 중합체 지지체로부터 떼어냈다.

실시예 18, 19, 20에서 얻은 펩티딜 수지를 메탄올 500ml, 300ml, 200ml로 3회 수축시키고, 진공 건조하였다.

실시예 18, 19, 20에서 얻은 건조된 펩티딜 수지 1g을 칭량하고 용해물(TFA:EDT:anisole:thioanisole:TIS:H2O=87.5:2.5:2.5:2.5:2.5:2.5) 7ml로 처리하였다. 2.5시간 샌드 코어 깔대기를 갖춘 석션 필터를 사용하여 수지를 트리플루오로아세트산 1ml로 세척하고, 여액을 냉 이소프로필에테르 64ml에 천천히 적가하여 생성된 다량의 백색 고체 침전물을 원심분리한 후, 이소프로필에테르로 6회 세척하였다. 얻어진 최종 침전물을 진공하에 건조시켰다.

실시예 22

고성능 액체 크로마토그래피로 정제를 수행하였다.

실시예 21에서 얻은 조 펩티드를 메탄올과 물에 녹인 후, 포어 크기가 0.45㎛인 필터막을 통해 여과시켰다.

정제 준비 조건:

검출 파장: 215nm;

크로마토그래피 컬럼: C18-20*150mm;

용출 구배:

여과된 샘플을 주입 및 정제하고, 분획을 수집하고, 농축하고, 동결건조하여 하기의 순도 90% 이상의 펩티드를 얻었다.

43. H-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Met-Thr-Thr-Asn-OH, 즉, 펩티드(2);

44. H-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Met-Thr-Thr-Asn-NH₂, 즉, 펩티드(42);

45. Palm-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Met-Thr-Thr-Asn-OH, 즉, 펩티드(43);

46. Palm-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Met-Thr-Thr-Asn-NH₂, 즉, 펩티드(44);

47. Ac-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Met-Thr-Thr-Asn-OH, 즉, 펩티드(45);

48. Ac-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Met-Thr-Thr-Asn-NH₂, 즉, 펩티드(46).

실시예 23

본 발명의 일반식(I)의 다른 화합물은 유사한 방법에 의해 제조될 수 있다.

얻어진 펩티드의 분자량은 ESI-MS를 통해 측정하였고, 일부 화합물에 대한 실험 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

번호	서열/구조	질량분석법에 의한 분자량
(1)		2418.45
(2)	H-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Met-Thr-Thr-Asn-OH	1237.58
(3)		1249.57
(4)		1323.61
(5)		1269.55
(6)		1325.60
(7)		1267.54

<표 2: 질량 분석법을 통한 분자량 측정>

실시예 24 (세포 증식 실험)

24.1 시약 및 재료

인산염 완충 식염수(PBS)(Gibco), 티아졸륨 블루(MTT)(Sigma), 디메틸설폭사이드(DMSO)(Sigma), 고혈당 배지(DMEM)(Gibco), 소태아혈청(Gibco).

24.2 기기

마이크로플레이트 리더(MD, USA), CO₂ 인큐베이터(Shanghai Yiheng), 울트라 클린 벤치(Suzhou Purification), 생물학적 도립 현미경(Chongqing Optoelectronics).

24.3 세포주

인간 각질세포(HaCaT)는 중국 과학원 유형 배양 수집 위원회의 쿤밍 세포 은행에서 구입하였고, 마우스 피부 섬유아세포(NIH3T3)는 중국 과학원 유형 배양 수집 위원회의 상하이 세포 은행에서 구입했다. 과학.

24.4 테스트할 샘플

투여군: 펩티드(1), 펩티드(2), 펩티드(3), 펩티드(4), 펩티드(5), 농도는 각각 12.5ppm, 25ppm, 50ppm, 100ppm이었다.

대조군: PBS 블랭크 대조군.

24.5 실험 방법

a) 대수성장기의 양호한 상태의 세포를 채취하여 0.25% 트립신 소화액을 첨가하고 소화하여 부착된 세포가 떨어지도록 한 후, 1-4×10⁵개 세포/ml를 계수하고 세포 현탁액을 만들었다;

b) 세포현탁액을 2000 세포/웰로 적당량 희석하여 96웰 플레이트에 200μl/웰로 접종하고, 항온 CO₂ 인큐베이터에서 24시간 배양하였다.

c) 배지를 바꾸고, 테스트할 샘플을 20μl/웰로 추가하고 24시간 동안 배양하였다.

d) MTT 시약을 96웰 플레이트에 20μl/웰씩 첨가하고 인큐베이터에서 4시간 동안 반응시켰다.

e) 상층액을 흡인하고 DMSO(150μl/웰)를 첨가한 후 플레이트 쉐이커에서 5분간 진탕하였다.

f) 5분 후 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 490nm 및 630nm 파장에서 기준 OD값을 판독하고, 세포 생존율을 산출하였다.

세포 생존율 = [OD(투여 웰) - OD(제로 조정 웰)]/[(OD(대조군 웰) - OD(제로 조정 웰)]×100%

24.6 결과

병렬설계의 원리에 따라 실험은 3회 이상 반복하였고, 실험 데이터는 평균 ± SD로 표현하였으며, 데이터 분석은 SPSS 17.0 통계 소프트웨어를 사용하였다.

MTT법은 세포의 생존과 성장을 검출하는 방법이다. 측정된 OD값은 세포 활동에 정비례하였다. OD값이 클수록 세포 활성도가 높다.

HaCaT 세포의 활성에 대한 펩티드(1)~(5)의 효과는 도 1로부터 확인할 수 있다. 결과는 펩티드(1) 및 펩티드(5)는 HaCaT 세포의 활성을 어느 정도 향상시킬 수 있으며, 펩티드(2)와 펩티드(3)가 HaCaT 세포의 활성에 더 큰 영향을 미치는 것으로 나타났다. 12.5ppm-100ppm의 펩티드(2) 또는 펩티드(3)는 둘 다 HaCaT 세포의 활성을 향상시키고 증식을 촉진힌다.

NIH3T3 세포의 활성에 대한 펩티드(1) ~ (5)의 효과는 도 2로부터 확인할 수 있다. 결과는 펩티드(1) 및 펩티드(5) 둘다 NIH3T3 세포의 활성을 어느 정도 향상시킬 수 있으며, 펩티드(3)이 NIH3T3 세포의 활성에 더 큰 영향을 미쳤으며, 12.5ppm-100ppm의 각 용량에서 증식을 촉진하였다.

실시예 25 (세포 접착력 테스트 촉진)

25.1 시약 및 재료

25.2 기기

25.3 세포주

인간 각질세포(HaCaT)는 중국과학원 유형 배양 수집 위원회의 쿤밍 세포 은행에서 구입했다.

25.4 테스트할 샘플

투여군: 펩티드(1), 펩티드(2)의 농도는 각각 12.5ppm, 25ppm, 50ppm, 100ppm이었다. PBS 용액으로 녹였다.

대조군: PBS 블랭크 대조군.

25.5 실험 방법

냉동보존된 HaCaT 인간 큐티클 세포를 배양하고, 1:2 내지 약 5 대 비율로 계대 배양하여 성장이 더 양호한 세포를 실험 대상으로 선정하였다.

테스트할 시료를 96-웰 plate에 20μl/웰의 비율로 첨가하고, 37℃ 항온오븐에서 하룻밤 동안 건조시켰다. 둘째 날에는 잘 성장한 HaCaT 세포를 소화시킨 후, 10,000 HaCaT 세포/웰의 밀도로 플레이트에 식균하고, 배지를 200μl로 보충한 후, 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 3시간 동안 배양하였다. 배양이 끝나면 배양판을 꺼내어 액면이 넘칠 때까지 계속해서 배양액을 보충하고, 파라필름으로 밀봉하여 기포가 없는지 확인하였다. 3차원 힘의 작용으로 20분 동안 뒤집었다. 원배지를 버리고, 각 웰에 90μl의 신선한 배지와 10μl의 5mg/ml MTT를 첨가한 후 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에 3시간 동안 정치했다. 용액을 버리고, 150μl의 DMSO를 추가하였다. 검출 파장을 490nm, 기준 파장을 630nm로 설정하고 마이크로플레이트 리더를 사용하여 OD값을 판독했다.

25.6 결과

HaCaT 세포를 선별하여 약물이 코팅된 96웰 플레이트에 플레이트하고, 배양 및 3차원 힘의 기간을 거친 후, 강한 접착력을 지닌 세포를 96웰 플레이트에 유지하였다. 플레이트 위의 살아있는 세포에 대해 MTT 정량 분석을 수행함으로써, 즉 약물이 세포 접착에 미치는 영향을 평가하여 본 발명의 펩티드가 세포 탄력성을 향상시킬 수 있는지를 판단할 수 있다. 3차원 힘 작용 후 96웰 플레이트에 살아있는 세포가 많이 남아 있을수록 측정된 OD값이 커져 세포의 접착력이 강해졌음을 나타낸다.

실험 결과는 도 3에 나타내었다. 일반 대조군과 비교하여 펩티드(1)과 펩티드(2) 모두 HaCaT 세포의 접착력을 향상시켜 탄력성을 향상시키는데 유리하다.

실시예 26 스크래치 테스트

26.1 시약 및 재료

인산염 완충 식염수(PBS)(Gibco), 고혈당 배지(DMEM)(Gibco), 소 태아 혈청(Gibco).

26.2 기기

광학 현미경, CO₂ 인큐베이터.

26.3 세포주

26.4 테스트할 샘플

투여군: 펩티드(1) 100ppm, 펩티드(2) 100ppm, 표피성장인자(EGF) 50U/ml.

대조군: PBS 블랭크 대조군.

26.5 실험 방법

냉동보존된 HaCaT 세포를 배양한 후, 1:2 비율로 약 5 대까지 계대배양하고, 성장이 더 양호한 세포를 실험대상으로 선정하였다. 세포를 12웰 플레이트에 200,000개 세포/웰의 밀도로 접종하고 각 웰에 2ml의 세포 현탁액을 넣었다. 세포를 벽에 부착한 후, 배지를 0.5%~1% 소태아혈청으로 교체하여 24시간 동안 세포를 동기화시켜 유지하였다. 변화되어 멸균된 피펫팁으로 긁어 떨어뜨린 세포를 PBS로 세척하고, 검사할 검체를 첨가한 후, 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 계속 배양하고 24시간 후, 광학현미경에 놓아 상처 힐링 영역를 분석하였다.

26.6 결과

세포 스크래치 이동 테스트는 세포의 증식 및 복구 능력을 반영할 수 있다. 결과는 도 4에 나타냈다. 일반 대조군의 셀 스크래치는 여전히 뚜렷하고 스크래치 간격은 정상이었다. 대조군과 비교하여 EGF 양성 기의 세포 증식 및 이동은 명백하며 간격이 크게 단축되었다. 반면, 펩티드(1)과 펩티드(2)의 스크래치 간격은 일반 대조군에 비해 짧았고, 세포 이동 경로가 나타났다. 결과는 본 발명의 펩티드는 HaCaT 인간 케라틴의 증식 및 이동을 촉진하여 피부 회복 효과가 있음을 입증함을 알 수 있다.

실시예 27 (가벼운 손상 복구 실험)

27.1 시약 및 재료

27.2 기기

27.3 세포주

27.4 시험할 샘플

펩티드(1), 펩티드(2), 펩티드(3), 펩티드(4), 펩티드(5)의 농도는 각각 12.5ppm, 25ppm, 50ppm, 100ppm이었다.

27.5 실험 방법

지수 성장이 양호한 세포를 채취하여 0.25% 트립신 소화액을 첨가하고 소화하여 부착된 세포가 탈락한 후, 1×10⁵-4×10⁵ 세포/ml를 계수하고, 세포 현탁액을 만들었다.

세포를 96웰 플레이트에 10,000개 세포/웰로 식균하고, 세포가 약 80% 합류에 도달했을 때 UVB 광손상 모델을 확립했다. UVB 조사 없이 배지 50μl를 추가하고, 이를 블랭크 대조군으로 사용하였다. 실험군에 적당량의 PBS를 첨가하고 무색이 될 때까지 반복 세척한 후 PBS 50μl를 첨가하고, 80J/cm³ UVB 램프를 조사하며, 램프원과 배양병 사그의 거리는 15cm, 실험군은 조사 후, PBS를 버리고, 배양액과 2배로 희석한 약물을 200μl 첨가한 후, 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 24시간 동안 배양을 지속하였다.

24시간 후, 각 웰에 5mg/ml MTT 22μl를 추가하고 인큐베이터에 넣고 4시간 동안 배양한 후 원래 용액을 버리고 DMSO 150μl/웰을 추가하였다. 5분 후 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 490nm 및 630nm 파장에서 참조 OD값을 판독했다.

27.6 결과

UVB 광 손상 세포 모델을 구축하고, 자외선 조사 후 24시간 후에 투여하고, MTT법을 이용하여 세포 증식 활성을 검출함으로써, 본 발명의 펩티드의 광 손상 세포 복구 능력을 평가하였다.

HaCaT 세포의 광손상 복구 결과는 도 5에 나타내었다. 그 결과, 조사되지 않은 정상 대조군과 비교하여 UVB 조사 후 세포 생존율이 크게 감소하여 광손상 모델이 성공적으로 모델링되었음을 시사한다. 투여 후, 펩티드(1)- 펩티드(5)는 모두 광손상된 HaCaT 세포의 활성을 어느 정도 향상시킬 수 있었고, 펩티드(2)와 (3)은 세포 활성 개선에 더 양호한 효과를 나타냈다. 이는 본 발명의 펩티드가 빛에 의해 손상된 HaCaT 세포를 복구할 수 있고, 그 활성을 향상시키며, 피부 복구 능력이 우수함을 보여준다.

NIH3T3 세포의 광손상 복구 결과를 도 6에 나타내었다. 그 결과, 조사되지 않은 정상군과 비교하여 조사 후 NIH3T3 세포의 활성이 현저히 감소하는 것으로 나타나 광손상 모델의 모델링이 성공했음을 시사한다. 투여 후, 펩티드(1)은 50 및 100ppm에서 세포 활성을 크게 증가시킬 수 있다. 펩티드(2)는 12.5ppm-100ppm의 각 용량에서 NIH3T3 세포 활성을 크게 증가시킬 수 있다. 이 결과는 펩티드(1)과 펩티드(2) 모두 특정 농도 범위 내에서 광손상된 NIH3T3 세포를 복구하고 활성을 향상시키며 우수한 피부 복구 능력을 가짐을 보여준다.

실시예 28 (항염증 복구 실험)

28.1 시약 및 재료

LPS, 덱사메타손(DXM), ELISA 키트.

28.2 기기

마이크로플레이트 리더(MD, USA), CO₂ 인큐베이터(Shanghai Yiheng), 울트라 클린 벤치(Suzhou Purification).

28.3 세포주

마우스 단핵 대식세포(RAW264.7 세포).

28.4 시험할 샘플

100ppm 농도에서 테스트된 펩티드(2).

28.5 실험 방법

a) 양호한 지수 성장 단계의 RAW264.7 세포를 취하고, 0.25% 트립신 분해 용액을 첨가하고, 분해하여 부착 세포가 떨어지도록 하고, 1-4×10⁶ 세포/ml를 계수하고, 세포 현탁액을 만들었다;

b) 세포 현탁액을 웰당 100,000개 세포를 적당하게 희석하여 6웰 플레이트에 접종하고, 세포가 약 80% 컨플루언트에 도달하면 LPS 자극 염증 모델을 확립한다. 블랭크 대조군(control), LPS 그룹, 덱사메타손 그룹(DXM), 폴리펩티드 그룹을 설정하였다. 블랭크 대조군에 1000μl 배지를 추가하였다. LPS 그룹에 200ng/ml LPS를 추가하고 배양 배지를 1000μl에 추가하였다. 덱사메타손 그룹에 200ng/ml LPS 및 50ng/ml 덱사메타손을 추가하고 배양 배지를 1000μl에 추가하였다. 200ng/ml LPS와 펩티드(2)를 폴리펩티드 그룹에 추가하고, 배양 배지를 1000μl에 추가하였다(펩티드의 최종 테스트 농도는 100ppm이었다). 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 48시간 동안 계속 배양하였다.

c) 3000rmp에서 10분 동안 원심분리하여 세포 상층액을 수집하여 시료액을 얻었다.

d) ELISA 작동 지침에 따라 작동하였다. 모든 시약을 실온으로 하고, 최소 30분 동안 평형을 유지한 다음 지침에 따라 시약을 준비하고 따로 보관하였다. 표준품용 웰과 시험할 검체용 웰을 설치하고, 각 웰에 표준품 또는 시험할 검체를 100μl씩 넣고 가볍게 흔든 후 플레이트 스티커로 덮고 37℃에서 2시간 동안 배양하였다. 각 샘플에 대해 4개의 복제 웰을 설정했다. 액체를 버리고 탈수한 후 플레이트를 5회 세척하였다. 각 웰에 100μl의 비오틴 표지 항체 작업 용액을 추가하고 새 플레이트 스티커로 덮고 37℃에서 1시간 동안 배양하였다. 웰에 있는 액체를 버리고 회전 건조시킨 후 플레이트를 5회 세척하고 매번 1분 동안 200μl/웰에 담가서 회전 건조시켰다. 100μl의 양 고추 냉이 퍼옥시다아제 라벨이 붙은 아비딘 작업 용액을 각 웰에 추가하고 새 플레이트로 덮고 37℃에서 1시간 동안 배양하였다. 웰에 있는 액체를 버리고 회전 건조시킨 후 플레이트를 5회 세척하고 매번 1분 동안 200μl/웰에 담가서 회전 건조시켰다. 각 웰에 기질용액 100μl를 순차적으로 첨가하고, 암실에서 37℃에서 15~30분 동안 발색하였다. 각 웰에 100μl의 정지 용액을 순차적으로 추가하여 반응을 중지하였다. 반응 종료 후 15분 이내에 마이크로플레이트 리더를 이용하여 각 웰의 OD값을 450nm에서 순차적으로 측정하였다.

28.6 실험 결과

TNF-α, IL-6, IL-8 등의 염증인자는 신체의 과도한 면역반응을 유발하여 피부궤양, 발적, 부종 등을 유발할 수 있다. 따라서 TNF-α, IL-6, IL-8 등의 염증인자의 억제는 항염증 복구 효과를 달성할 수 있다. RAW264.7 세포를 200ng/ml LPS로 자극하여 염증 모델을 확립하고, 본 발명의 펩티드의 항염증 회복 효과를 탐색하였다.

실험 결과는 도 7-9에 나와 있다. LPS 자극 후, TNF-α, IL-6 및 IL-8 사이토카인은 상당히 상향 조절되었다. 투여 후, 100ppm 펩티드(2)는 TNF-α, IL-6 및 IL-8을 상당히 하향 조절했으며, 그의 항염증 효과는 양성 약물인 덱사메타손과 동일하며, 이는 펩티드(2)가 명백한 항염증 복구 효과를 나타낸다.

실시예 29 (안정성 테스트 연구)

1. 본 발명의 펩티드 H-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Cys-Thr-Thr-Asn-OH(이하, 기준 펩티드A) 시료 및 펩티드(1), 펩티드(2) 시료를 각각 물에 용해한 후, 상온 조건에서 정치하고, 0일, 8일, 18일에 각 시료의 순도 변화를 HPLC로 조사하였다. 결과는 하기 표 3에 나타냈다:

시험 조건	참조 펩티드A 수용액 (순도)	펩티드(1) 수용액 (순도)	펩티드(2) 수용액 (순도)
수용액, 0일	88.030%	98.443%	99.291%
실온에서 8일	80.880%	98.362%	99.122%
실온에서 18일	72.693%	96.703%	98.045%

<표 3: 참조 펩티드 A 수용액과 펩티드(1), 펩티드(2) 수용액의 안정성 연구>

상기 표 3의 결과로부터, 참조 펩타이드 A 수용액을 공기 중에 노출시킬 때, 수용액중의 참고 펩티드 A의 순도는 0일에 유의하게 떨어지는 것을 볼 수 있다. 그의 순도는 실온에서 18일 동안 방치하면 순도가 72.693%로 떨어졌다. 참조 펩타이드 A 수용액과 비교하여 펩타이드(1) 및 펩타이드(2)의 수용액은 18일 동안 실온에 방치하였을 때, 그의 순도의 유의한 변화는 없었다.

2. 참조 펩티드 A 분말, 펩티드(1) 분말 및 펩티드(2) 분말의 안정성 연구

참조 펩티드 A 분말, 펩타이드(1) 분말, 펩타이드(2) 분말을 각각 25℃, 40℃에 두고 시간에 따른 순도 변화를 HPLC로 조사하였다. 결과는 하기 표 4에 나타냈다:

시험 조건	참조 펩티드A 분말 (순도)	시험 조건	펩티드(1) 분말 (순도)	펩티드(2) 분말 (순도)
분말, 0 일	88.030%	분말, 0 일	98.442%	99.291%
25℃에서 5일	85.913%	25℃에서 5일	98.331%	99.146%
40℃에서 5일	57.503%	40℃에서 5일	96.716%	98.583%

<표 4: 참조 펩티드A 분말, 펩티드(1) 분말 및 펩티드(2) 분말의 안정성 연구>

표 4의 결과로부터, 참조 펩티드A 분말의 순도는 40℃에서 5일 동안 방치한 후 크게 감소하여 단지 57.503%에 불과함을 알 수 있다. 이에 반해, 펩티드(1) 분말과 펩티드(2) 분말의 순도는 40℃에서 20일 동안 변함이 없었다.

3. 펩티드(3)-(7) 분말의 안정성에 관한 연구

펩티드(3)-(7)의 분말 시료를 고습도(RH92.5%, 25℃) 조건에 10일 동안 방치한 후, 각 시료의 순도 변화를 HPLC로 조사하였다. 결과를 하기 표 5에 나타내었다:

샘플 일련번호	0 일 (순도)	고습, 10일 (순도)
펩티드(3)	97.605%	96.251%
펩티드(4)	96.017%	93.962%
펩티드(5)	97.482%	94.603%
펩티드(6)	96.235%	95.719%
펩티드(7)	98.541%	97.863%

<표 5: 펩티드(3)-(7) 분말의 안정성 연구>

표 5의 결과로부터, 10일 동안 고습도(RH92.5%, 25℃)에 방치하였을 때 펩티드(3)-(7)의 순도는 큰 변화가 없음을 알 수 있다.

실시예 29에서 HPLC 크로마토그래피 분리 조건은 다음과 같다:

크로마토그래피 컬럼: 필러로 옥타데실 결합 실리카겔 4.6*250 mm, 5μm

이동상 A: 아세토니트릴(트리플루오로아세트산 0.09% 함유)

이동상 B: 0.1% 트리플루오로아세트산

희석제: 물

유속: 1.0 ml/분;

컬럼 온도: 35℃;

검출 파장: 215 nm;

주입량: 10μl;

상영 시간: 32분

기울기 용출표:

검액: 이 품목 적당량을 취하여 물을 가하여 용해하고 희석하여 1ml당 1mg을 함유하는 액으로 하였다.

실시예 30 (펩티드(1)을 함유하는 리포좀의 제조)

디팔미토일포스파티딜콜린의 무게를 칭량하여 클로로포름에 용해시켰다. 인지질의 얇은 층이 얻어질 때까지 용매를 진공 하에서 증발시켰고, 이를 55℃에서 원하는 농도의 펩티드 수용액으로 처리하여 수화시켜 다중 라멜라 리포솜을 얻었다. 다중 라멜라 리포솜은 고압 하에서 균질화하여 더 작고 균일한 단일 라멜라 리포솜을 얻었다.

실시예 31 (펩티드(2)를 함유하는 마이크로에멀젼 조성물의 제조)

규정된 용량에 따라 상 B의 성분을 계량하여 용기에 첨가하였다. 다음으로, 상 D를 상 B에 첨가하고 계속 교반하면서 균질화하였다. 그런 다음, 상 A를 혼합물에 첨가하였다. 마지막으로, 상 C를 첨가하여 펩티드(2)를 함유하는 마이크로에멀젼 조성물을 얻었다.

위의 내용은 특정한 바람직한 실시예와 관련하여 본 발명에 대한 더욱 상세한 설명이지만, 본 발명의 특정한 구현이 이러한 설명으로 제한된다는 의미는 아니다. 본 발명의 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 사상을 벗어나지 않는 범위에서 몇 가지 간단한 추론이나 대체가 가능하며, 이는 본 발명의 보호 범위에 속하는 것으로 간주되어야 한다.

Claims

하기 일반식 (I)로 표시되는 펩티드 또는 그의 입체이성질체, 또는 그의 입체이성질체의 혼합물, 또는 그의 화장료에서 허용되는 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염.

상기 식(1)에서
R₂는 H, 알킬, 알케닐알킬, 카르복시알킬, 에스테르릴알킬, 알킬메르캅토, 카르복시알킬메르캅토, 또는

에서 선택된 것을 나타내고,
상기 식(I) 및 (i)에서,
n은 1 또는 2를 나타내고,
R₁은 H 또는 R₄-CO- 중에서 선택되며, 여기서 R₄는 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알케닐을 나타내고,
R₃은 -NR₅R₆ 또는 -OR₅ 중에서 선택되며, 여기서 각각의 R₅ 및 R₆은 독립적으로 H, 치환 또는 비치환 알킬, 치환 또는 비치환 알케닐을 나타내고,
상기에서 "알킬", "알케닐알킬", "카르복시알킬", "에스테르릴알킬", "알킬메르캅토", "카르복시알킬메르캅토"에서의 알킬은 1 내지 24개의 탄소원자를 갖는(바람직하기로는 1 내지 24개의 탄소원자를 갖는) 포화 지방족 직쇄 또는 분지형 알킬기를 의미한다. 16개의 탄소원자, 바람직하기로는 1 내지 14개의 탄소원자를 가짐, 바람직하기로는 1 내지 12개의 탄소원자를 가짐, 바람직하기로는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탄소원자를 가짐); 임의로 메틸, 에틸, 이소프로필, 이소부틸, tert-부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 데실, 도데실, 테트라데실, 헥사데실, 옥타데실, 2-에틸헥실, 2-메틸부틸 또는 5-메틸헥실로부터 선택된 것을 나타내고,
상기에서, "알케닐" 및 "알케닐알킬"에서 알케닐은 탄소수 2 내지 24개(바람직하기로는 탄소수 2 내지 16개; 바람직하기로는 탄소수 2 내지 14개; 탄소수 2 내지 14개; 바람직하기로는 탄소수 2 내지 12개, 바람직하기로는 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탄소원자)를 갖는 직쇄 또는 분지형 알케닐기를 의미하고, 상기 "알케닐"은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖고, 바람직하기로는 1, 2 또는 3개의 공액 또는 비공액 탄소-탄소 이중 결합을 갖고; 상기 "알케닐"은 단일 결합을 통해 분자의 나머지 부분에 결합되며; 바람직하기로는 비닐, 올레일 또는 리놀레일로부터 선택된 것을 나타내고
상기에서 "에스테르릴알킬"의 에스테르릴은 R(C=O)OR'기이고, 여기서 R 및 R'는 각각, 독립적으로 단일 결합, 알킬기 또는 알킬렌기이고;
임의로, "치환된 알킬" 및 "치환된 알케닐"의 치환기는 C₁-C₄알킬에서 선택된 것을 나타내고, 히드록시기; C₁-C₄알콕시; 아미노; C₁-C₄아미노알킬; C₁-C₄카르보닐옥시; C₁-C₄옥시카르보닐; 할로겐(불소, 염소, 브롬, 요오드); 시아노; 니트로; 아지드; C₁-C₄알킬술포닐; 티올; C₁-C₄알킬티오; 페녹시와 같은 C₆-C₃₀아릴옥시; -NR_b(C=NR_b)NR_bR_c(여기서, R_b 및 R_c는 독립적으로 H, C₁-C₄알킬, C₂-C₄알케닐, C₂-C₄알키닐, C₃-C₁₀사이클로알킬, C₆-C₁₈아릴, C₇-C₁₇아랄킬, 3~10원 헤테로사이클릭기, 또는 아미노기 보호기를 나타낸다.
제1항에 있어서,
일반식 (I)에서 n이 2일 때, R₂는 H, 알킬, 알케닐알킬, 카르복시알킬, 에스테르릴알킬, 알킬메르캅토 또는 카르복시알킬메르캅토로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물, 그의 화장료로 허용되는 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염.
제1항 또는 제2항에 있어서,
R₁이 H, 아세틸, tert-부티릴, 헥사노일, 2-메틸헥사노일, 옥타노일, 카프로일, 라우로일, 미리스토일, 팔미토일, 스테아로일, 올레오일 또는 리놀레오일로부터 선택된 것을 특징으로 하는 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물, 그의 화장료로 허용되는 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염.
상기에서, 바람직하기로는 R₁은 H, 아세틸, 라우로일, 미리스토일 또는 팔미토일로부터 선택된 것이고,
더 바람직하기로는 R₁은 H, 아세틸 또는 팔미토일로부터 선택된 것일 수 있다.
제1항 또는 제2항에 있어서,
R₂가 H, -CH₃, -CH₂CH₃, -CH₂CH=CH₂, -CH₂COOH, -CH₂COOC(CH₃)₃, -S-CH₂CH₃, -S-(CH₂)₅CH₃, -S-CH₂COOH 또는

(i);
로부터 선택된 것것을 특징으로 하는 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물, 그의 화장료로 허용되는 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염.
상기에서 바람직하기로는, n이 2인 경우, R₂는 H, -CH₃, -CH₂CH₃, -CH₂CH=CH₂, -CH₂COOH, -CH₂COOC(CH₃)₃, -S-CH₂CH₃, -S-(CH₂)₅CH₃ 또는 -S-CH₂COOH로부터 선택된 것일 수 있다.
제1항 또는 제2항에 있어서,
R₅ 및 R₆이 H, 메틸, 에틸, 헥실, 도데실 또는 헥사데실 중에서 독립적으로 선택된 것을 특징으로 하는 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물, 그의 화장료로 허용되는 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염.
상기에서, 바람직하기로는 R₅는 H이고 R₆은 H, 메틸, 에틸, 헥실, 도데실 또는 헥사데실로부터 선택되고;
더 바람직하기로는 R₃은 -OH 또는 -NH₂로부터 선택된 것일 수 있다.
하기 펩티드(1)-(46)로부터 선택된 것을 특징으로 하는 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물, 그의 화장료에서 허용되는 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염:
(1)

(2) H-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Met-Thr-Thr-Asn-OH;
(3)

(4)

(5)

(6)

(7)

(8) Palm-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Cys-Thr-Thr-Asn-OH;
(9) Palm-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Cys-Thr-Thr-Asn-NH₂;
(10) Ac-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Cys-Thr-Thr-Asn-OH;
(11) Ac-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Cys-Thr-Thr-Asn-NH₂;
(12)

(13)

(14)

(15)

(16)

(17)

(18)

(19)

(20)

(21)

(22)

(23)

(24)

(25)

(26)

(27)

(28)

(29)

(30)

(31)

(32)

(33)

(34)

(35)

(36)

(37)

(38)

(39)

(40)

(41)

(42) H-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Met-Thr-Thr-Asn-NH₂;
(43) Palm-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Met-Thr-Thr-Asn-OH;
(44) Palm-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Met-Thr-Thr-Asn-NH₂;
(45) Ac-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Met-Thr-Thr-Asn-OH;
(46) Ac-Ala-Pro-Phe-Arg-Met-Gly-Ile-Met-Thr-Thr-Asn-NH₂.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
화장료에서 허용되는 염 또는 약학적으로 허용되는 염은 일반식 (I)에 나타낸 펩티드의 금속염을 포함하고, 금속은 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 망간, 구리, 아연 또는 알루미늄을 포함하는 것을 특징으로 하는 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물, 그의 화장료에서 허용되는 염 또는 그의 약학적으로 허용되는 염.
상기에서 임의로, 화장료에서 허용되는 염 또는 약학적으로 허용되는 염은 일반식 (I)로 표시되는 펩티드와 유기 염기에 의해 형성된 염을 포함하고, 유기 염기는 에틸아민, 디에틸아민, 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 아르기닌, 라이신, 히스티딘 또는 피페라진을 포함하고;
임의로, 화장료에서 허용되는 염 또는 약학적으로 허용되는 염은 일반식 (I)로 표시되는 펩티드와 무기산 또는 유기산에 의해 형성된 염을 포함하고, 유기산에는 아세트산, 시트르산, 젖산, 말론산, 말레산, 타르타르산, 푸마르산, 벤조산, 아스파르트산, 글루탐산, 숙신산, 올레산, 트리플루오로아세트산, 옥살산, 파모산 또는 글루콘산을 포함하고;
바람직하기로는 무기산에는 염산, 황산, 붕산 또는 탄산이 포함하는 것일 수 있다.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성체, 또는 그의 입체이성체의 혼합물, 또는 화장용 제제의 유효량 및 적어도 1종 이상의 부형제 및 임의로 화장료로 또는 약학적으로 허용되는 보조제를 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 또는 약학 조성물.
상기에서, 조성물은 임의로, 보조제로서는 콜라겐 합성 자극제, PGC-1α의 합성을 조절하는 작용제, PPARγ의 활성 조절제, 지방세포의 트리글리세리드 함량을 증가시키거나 감소시키는 작용제, 지방세포 분화 지연제, 지방분해제 또는 지방분해 자극제, 지방형성제, 지방생성제, 아세틸콜린 수용체 응집 억제제, 근육 수축 억제제, 항콜린제, 엘라스타제 억제제, 매트릭스 금속단백분해효소 억제제, 멜라닌 합성 자극제 또는 억제제, 미백제 또는 탈색제, 과다색소침착제, 셀프태닝제, 노화방지제, NO-합성효소 억제제, 5α-환원효소 억제제, 리실 수산화 효소 및/또는 프롤릴 수산화효소 억제제, 항산화제, 자유 라디칼 제거제 및/또는 대기 오염 방지제, 활성 카르보닐 종 제거제, 항당화제, 항히스타민제, 항바이러스제, 항기생충제, 유화제, 연화제, 유기용제, 액체추진제, 피부컨디셔너, 보습제, 보습제, 알파하이드록시산, 베타하이드록시산, 보습제, 표피가수분해효소, 비타민, 아미노 산, 단백질, 색소 또는 착색제, 염료, 생체고분자, 겔화 중합체, 증점제, 계면활성제, 연화제, 접착제, 방부제, 주름 방지제, 눈 밑 처짐을 줄이거나 치료하는 제제, 굳은 살 제거제, 각질 제거제, 각질 용해제, 항균제 제제, 항진균제, 살균제, 살균제, 정균제, 진피 또는 표피 거대분자의 합성을 자극하고/하거나 이들의 분해를 억제 또는 예방할 수 있는 제제, 엘라스틴 합성을 자극하는 제제, 데코린 합성을 자극하는 제제, 라미닌을 자극하는 제제 합성, 디펜신 합성 자극제, 샤페론 단백질 합성 자극제, cAMP 합성 자극제, 열 충격 단백질, HSP70 합성 자극제, 열 충격 단백질 합성 자극제, 히알루론산 합성 자극제 산, 피브로넥틴 합성 자극제, 시르투인 합성 자극제, 지질 및 각질층 성분의 합성 자극제, 세라마이드, 지방산, 콜라겐 분해 억제제, 엘라스틴 분해 억제제, 억제제 세린 프로테아제, 섬유아세포 증식 자극제, 각질세포 증식 자극제, 지방세포 증식 자극제, 멜라닌세포 증식 자극제, 각질세포 분화 자극제, 아세틸콜린에스테라제 억제제, 피부 이완제, 글리코사미노글리칸 합성 자극제, 항각화증제, 여드름 용해제, 항건선제, 항피부염제, 항습진제, DNA 복구제, DNA 보호제, 안정제, 항소양제, 민감성 피부 치료 및/또는 관리용 제제, 경화제, 퍼밍제, 구조조정제 튼살 방지제, 접착제, 피지 생성 조절제, 발한 억제제, 치유 촉진제, 치유 보조제, 재상피화 촉진제, 재상피화 보조제, 사이토카인, 성장 인자, 진정제, 항염증제 염증제, 마취제, 모세혈관 순환 및/또는 미세순환 작용제, 혈관 신생 촉진제, 혈관 투과성 억제제, 정맥 긴장제, 세포 대사 작용제, 진피-표피 접합 개선제, 모발 성장 유도제, 모발 성장을 억제하거나 지연시키는 물질, 향료, 킬레이트제, 식물 추출물, 에센셜 오일, 해양 추출물, 생물학적 발효 공정에서 파생된 물질, 무기염, 세포 추출물, 자외선 차단제, A 및/또는 B UV에 효과적인 유기 또는 무기 광 광선 방부제 또는 이들의 혼합물을 들 수 있다.
제8항에 있어서,
전술한 화장료 또는 약제학적 조성물의 제형이 크림, 오일, 밀크, 밤, 폼, 로션, 젤, 도포제, 에센스, 비누, 샴푸, 컨디셔너, 세럼, 연고, 무스, 포마드, 분말, 스틱, 펜, 스프레이, 에어로졸, 캡슐, 정제, 과립, 츄잉검, 용액, 현탁액, 유제, 시럽, 엘릭서, 다당류 필름, 젤리 또는 젤라틴인 것을 특징으로 하는 화장료 또는 약제학적 조성물.
상기에서 임의로, 캡슐에는 연질 캡슐, 경질 캡슐, 임의로 젤라틴 캡슐이 포함되며;
바람직하기로는, 정제에는 당의정으로부터 선택되는 것일 수 있다.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 또는 그의 입체이성질체 또는 입체이성질체 또는 그의 화장료에서 허용되는 염 또는 약학적으로 허용되는 염, 또는 제8항 또는 제9항에 따른 화장료 또는 약학 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료로 또는 약학적으로 허용되는 전달 시스템 또는 지속 방출 시스템.
상기 화장료로 또는 약학적으로 허용되는 전달 시스템 또는 지속 방출 시스템은 리포솜, 올레오솜, 비이온성 계면활성제 리포솜 소포, 에토솜, 밀리미터 캡슐, 마이크로캡슐, 나노캡슐 캡슐, 나노구조 지질 담체, 스폰지, 시클로덱스트린, 지질 소포, 미셀, 밀리미터로부터 선택됩니다. 구체, 마이크로구, 나노구, 지질 구체, 마이크로에멀젼, 나노에멀젼, 밀리미터 입자, 마이크로입자 또는 나노입자; 임의로 리포솜 또는 마이크로에멀젼, 임의로 역 미셀의 내부 구조를 갖는 유중수 마이크로에멀젼일 수 있다.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 또는 그의 입체이성질체, 그의 입체이성질체의 혼합물 또는 그의 화장료에서 허용되는 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 또는 또는 제8항 또는 제9항에 따른 화장료 또는 약학적 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료로 또는 약학적으로 허용되는 고체 유기 중합체 또는 고체 무기 지지체;
상기 화장료로 또는 약학적으로 허용되는 고체 유기 중합체 또는 고체 무기 지지체는 활석, 벤토나이트, 이산화규소, 전분 또는 말토덱스트린으로부터 선택될 수 있다.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성질체, 또는 입체이성질체의 혼합물, 또는 그의 화장료로 하용되는 염 또는 그의 약학적을 허용되는 염의 유효량 또는 제8항 또는 제9항에 따른 화장료 또는 약학 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료;
싱기 화장료은 컨실러, 파운데이션, 메이크업 리무버, 메이크업 리무버 밀크, 아이섀도, 립스틱, 립글로스, 립밤 또는 립 파우더 중에서 선택될 수 있다.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 또는 그의 입체이성체, 또는 입체이성체 또는 화장료에서 허용되는 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염의 유효량 또는 제8항 또는 제9항에 따른 화장료 또는 약학적 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 직물, 부직포 또는 의료기기;
상기 직물, 부직포 또는 의료 장치는 선택적으로 붕대, 거즈, 티셔츠, 양말, 팬티 스타킹, 속옷, 거들, 장갑, 기저귀, 생리대, 드레싱, 침대보, 물티슈, 접착 패치, 비점착 패치, 폐쇄형 패치, 마이크로 전자 패치 또는 마스크로부터 선택된 것일 수 있다.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물, 또는 그의 화장료에서 허용되는 염, 그의 약학적으로 허용되는 염, 또는 화장료 또는 의약용으로의 사용, 제8항 또는 제9항에 따른 조성물, 또는 제10항에 따른 화장료 또는 약학적으로 허용되는 전달 시스템 또는 지속 방출 시스템에의 사용, 또는 제11항에 따른 화장료 또는 약학적으로 허용되는 고체 유기 중합체 또는 고체 무기 지지체에의 사용, 또는 제11항에 따른 화장료 피부 또는 점막의 치료 또는 관리를 위한 화장료 조성물 또는 약학적 조성물의 제조에서의 사용, 또는 제13항에 따른 직물, 부직포 또는 의료기기로서의 사용.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물, 또는 그의 화장료에서 허용되는 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 또는 화장료 또는 의약용으로의 사용, 제8항 또는 제9항에 따른 조성물로의 사용, 또는 제10항에 따른 화장료 또는 약학적으로 허용되는 전달 시스템 또는 지속 방출 시스템에의 사용, 또는 제11항에 따른 화장료 또는 약학적으로 허용되는 고체 유기 중합체 또는 고체 무기 지지체에의 사용, 또는 제11항에 따른 화장료 신체 표면의 상처, 화상, 피부 궤양을 치료하거나 간호하고, 흉터 생성을 감소시키거나 흉터 복구를 가속화하기 위한 화장료 또는 약학 조성물의 제조에의 사용, 제12항, 또는 제13항에 따른 직물, 부직포 또는 의료 장치에의 사용.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물, 또는 그의 화장료에서 허용되는 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 또는 화장료 또는 의약용으로의 사용, 제8항 또는 제9항에 따른 조성물에의 사용, 또는 제10항에 따른 화장료 또는 약학적으로 허용되는 전달 시스템 또는 지속 방출 시스템에의 사용, 또는 제11항에 따른 화장료 또는 약학적으로 허용되는 고체 유기 중합체 또는 고체 무기 지지체에의 사용, 또는 제11항에 따른 화장료 섬유아세포 증식 촉진, 콜라겐 생성 증가, 피부 장벽 기능 개선, 또는 피부 또는 점막의 재상피화 또는 치유를 위한 화장료 또는 약학적 조성물의 제조에의 사용, 제12항, 또는 제13항에 따른 직물, 부직포 또는 의료 장치에의 사용.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 일반식 (I)로 표시되는 펩티드, 그의 입체이성질체, 입체이성질체의 혼합물, 또는 그의 화장료에서 허용되는 염, 또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 또는 화장용 또는 의약용으로의 사용, 제8항 또는 제9항에 따른 조성물에의 사용, 또는 제10항에 따른 화장료 또는 약학적으로 허용되는 전달 시스템 또는 지속 방출 시스템에의 사용, 또는 제11항에 따른 화장료 또는 약학적으로 허용되는 고체 유기 중합체 또는 고체 무기 지지체에의 사용, 또는 제11항에 따른 화장료 피부 노화 또는 광노화의 치료, 예방 또는 회복을 위한 화장료 또는 약학 조성물의 제조에의 사용, 또는 제13항에 따른 직물, 부직포 또는 의료 장치에의 사용.
제17항에 있어서, 피부 노화 또는 광노화의 치료, 예방 또는 회복이 얼굴 주름을 감소, 예방 또는 치료하기 위한 용도.