KR20230034466A - 도라지 및 구절초 추출물을 함유하는 항산화용 조성물 - Google Patents

도라지 및 구절초 추출물을 함유하는 항산화용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20230034466A
KR20230034466A KR1020210116932A KR20210116932A KR20230034466A KR 20230034466 A KR20230034466 A KR 20230034466A KR 1020210116932 A KR1020210116932 A KR 1020210116932A KR 20210116932 A KR20210116932 A KR 20210116932A KR 20230034466 A KR20230034466 A KR 20230034466A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
bellflower
gujeolcho
extract
present
extracts
Prior art date
Application number
KR1020210116932A
Other languages
English (en)
Inventor
안희균
Original Assignee
브이케이프론티어 주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 브이케이프론티어 주식회사 filed Critical 브이케이프론티어 주식회사
Priority to KR1020210116932A priority Critical patent/KR20230034466A/ko
Publication of KR20230034466A publication Critical patent/KR20230034466A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L19/00—Products from fruits or vegetables; Preparation or treatment thereof
    • A23L19/10—Products from fruits or vegetables; Preparation or treatment thereof of tuberous or like starch containing root crops
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/28—Asteraceae or Compositae (Aster or Sunflower family), e.g. chamomile, feverfew, yarrow or echinacea
    • A61K36/287—Chrysanthemum, e.g. daisy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/34—Campanulaceae (Bellflower family)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/302—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having a modulating effect on age
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/308—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on cancer prevention
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/318—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on skin health and hair or coat

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

본 발명은 도라지 및 구절초의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 조성물에 관한 것으로서, 본 발명의 도라지 및 구절초의 혼합 추출물은 도라지 추출물 및 구절초 추출물의 각각의 추출물에 비하여 현저히 우수한 항산화 활성, 대식세포의 NO 분비 활성, 및 염증 관련 물질의 활성 억제 효과가 있으므로 항산화를 식품, 화장료 또는 약학 조성물로 유용하게 사용 가능하다.

Description

도라지 및 구절초 추출물을 함유하는 항산화용 조성물{Composition for antioxidating comprising extracts of Platycodon grandiflorum and Chrysanthemum zawadskii}
본 발명은 도라지 및 구절초의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 도라지 및 구절초의 혼합 추출물은 각각의 추출물에 비하여 항산화 활성, 대식세포의 NO 분비 활성, 및 염증 관련 물질의 활성 억제 효과가 우수하여 항산화용 조성물에 관한 것이다.
산소와 관련된 인체 내 독성물질을 활성산소종 (ROS: reactive oxygen species)이라고 하는데 이러한 ROS의 종류로는 수퍼옥사이드 (superoxide), 히드록실 (hydroxyl), 페록실 (peroxyl), 알콕실 (alkoxyl), 히드로페록실 (hydroperoxyl)과 같은 자유라디칼 (유리기, free radical)과 히드로젠페록사이드 (hydrogen peroxide), 히포클로로스산 (hypochlorous acid), 오존 (ozone), 일중항 산소 (singlet oxygen), 퍼옥시나이트라이트 (peroxinitrite) 등과 같은 비(非)자유라디칼 (비유리기, non-free radical)이 있다. 이 중에서 산소 독성 중 가장 많이 연구되어 왔고 중요한 역할을 하는 것은 수퍼옥사이드 자유라디칼 (superoxide free radical, 활성 산소 또는 유해산소)이다 (Fridorich L., Science, 201, pp175-180, 1978).
강한 산화제인 자유라디칼은 짝이 없는 전자이다. 자유라디칼은 다양한 생물체의 산화 환원 반응에서 생성되며, 식용유지의 변질 또는 여러 생체물질(지질, 단백질, 핵산, 탄수화물)에 산화적인 손상을 유발할 수 있으며 여러 단계를 거치게 되면서 결과적으로 돌연변이가 일어날 수 있다 (Yen GC et al., J. Agric. Food Chem., 43, pp27-32, 1995). 생체막 구성성분인 인지질의 불포화지방산은 활성산소종과 같은 자유라디칼에 의해 과산화 반응이 개시되며 또한 연쇄적으로 진행된다. 그러므로 자유라디칼에 의한 과산화반응은 세포막의 투과성을 항진시킬 뿐 아니라 전반적인 세포독성을 초래하여 노화현상이나 이에 따른 여러 가지 질환의 병리현상을 유도하여 발암과정에도 관여한다. 라디칼 작용은 산화적 스트레스와 관련된 질환인 아토피성 질환, 암, 고혈압, 심근경색, 동맥경화, 류머티스, 백내장, 파킨슨씨병 등 여러 가지 만성질환의 진행에 많은 영향을 주며 (De Souza LC et al., Bioorg. Med. Cehm. Lett., 14, pp5859-5861, 2004), 면역계 기능을 약화시키는 요인으로 작용될 수 있다(Pike J et al., Int. J. Vitam. Nutr. Res., 65, pp117-120, 1995)
DPPH는 여러 가지 자연적 화합물의 항산화 활성의 측정에 많이 이용되는 안정적인 자유라디칼이다 (Yokozawa T et al., Biochem. Pharmacol., 56, pp213-222, 1998). 항산화 즉, DPPH에 전자나 수소이온을 전달하는 DPPH와의 상호작용으로 자유라디칼의 성질을 중화시킨다. 크산틴 산화효소 (Xanthine oxidase, XO)는 퓨린 크산틴 (purines hypoxanthine)과 크산틴 (xanthine)을 산화시켜 요산 (uric acid) 형성하는 효소로써 통풍으로 알려진 질환의 원인이기도 하다. 통풍은 관절 부위에 요산의 침착으로 동통을 동반한 염증이라고 할 수 있다. 그러므로 크산틴 산화효소의 저해는 통풍을 진정시킨다(Chiang et al., Journal of Enzyme Inhibition, 8, pp61-71, 1994). 크산틴 산화효소는 살아 있는 세포에서 산화적인 손상에 작용되는 산소 파생 자유라디칼의 생물학적 원인이 된다. 이와 같이 다양한 산화적인 손상은 염증, 동맥경화, 암 그리고 노화를 포함한 많은 병리학적 질환을 일으킨다(Cos P et al., Journal of Natural Products, 61, pp71-76, 1998). 크산틴 산화효소의 저해는 통풍이나 다른 크산틴 산화효소-유도 질환의 치료에 이용될 수 있는 가능성이 증명되었다(Goodman Gilman A et al., Pharmacological Basis of Therapeutics (eighth edition), pp 674-681, 1990). 자유라디칼로부터 인체를 보호하는 협동적인 방어시스템은 산화를 저해시키는 영양소와 효소를 가지고 있다 (Halliwell B, Annu. Rev. Nutr., 16, pp33-50, 1996). 산화적인 스트레스로부터 인체를 보호하는 효과적인 방법 중 하나는 항산화 수준을 증가시키는 것이다 (De Souza LC et al., Bioorg. Med. Cehm. Lett., 14, pp5859-5861, 2004). 따라서 산화적 손상으로부터 예방하기 위한 대체 물질의 항산화적인 평가는 매우 활발하게 연구되고 있다.
항산화제는 산소를 제거하거나 흡수하는 것이 아니라 자유라디칼과 반응함으로써 특정 비타민류와 필수 아미노산등의 손실을 최소화하거나, 유지 제품의 산패를 지연 또는 방지하는 목적으로 사용된다. 식품 또는 의약품 등에 많이 사용되는 합성 항산화제로는 부틸화 하이드록시아니솔 (BHA, Butylated hydroxyanisole), 부틸화 하이드록시톨루엔 (BHT, Butylated hydroxytoluene), 프로필 갈레이트 (PG, Propyl galate), 터셔리부틸 하이드로퀴논 (TBHQ, Teritiarybutyl hydroquinone) 등이 있으나, 이들을 실험동물에 고농도로 투여할 경우에는 간 비대증이 유발되거나 발암성을 나타내는 것으로 알려져 있다. 특히 부틸화 하이드록시톨루엔은 여러 연구 결과를 통하여 실험동물의 간에서 마이크로솜 효소 활성(microsomal enzyme activity)을 증가시킨다는 것이 알려지면서, 이들 페놀계 합성 항산화제의 안전성에 대하여 논란이 제기되어 현재에는 그 사용량이 법적으로 규제되어 있다(Brannen AL, J. Amer. Oil Chem. Soc., 52, pp59-63, 1975 ; Ito N et al., J. Natl. Cancer Inst., 70, p343, 1983 ; Chan KM et al., J. Food. Sci., 58, pp1-4, 1993).
이에 따라 항산화 효과가 높으면서 안전하고 경제적인 식물기원의 천연 항산화제를 개발하고자 하는 많은 연구가 기대 속에 이루어지고 있다(Larson RA, Phytochemistry, 27, pp969-978, 1988). 최근 천연물을 대상으로 한 연구가 활발히 수행되면서 천연물에 함유되어 있는 2차 대사산물이 생리활성물질로서 주요 관심사가 되고 있으며 특히, 항산화성 물질에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다(中谷延二, 日本食品工業學會誌, 37, p569, 1990). 생리활성물질은 매우 적은 양으로도 현저한 활성을 나타내는 고부가가치 물질로서 많은 종류가 유용하게 쓰이고 있으며, 새로운 물질들에 대한 연구도 활발히 진행되고 있다(條原和毅, 食品と開發, 27, p29, 1992; Kang SS et al., Natural product science. Seoul Univ. Publishers, Seoul, p71, 1988).
현재까지 알려진 천연 항산화 물질로는 토코페롤 (tocopherol)류, 플라보노이드 (flavonoid)류, 고시폴 (gossypol), 세사몰 (sesamol), 오리자놀 (oryzanol) 및 비타민 C 등을 들 수 있다(Huson B et al., Food Chem., 19, pp537-541, 1987 ; Frankel, E.N. Food Chem., 57, p51, 1996 ; Giese J, Food Technol., 5, pp73-81, 1996 ; Pszcczola DE, Food Tech., 55, pp51-59, 2001). 이 중 토코페롤 (tocopherol)과 L-아스코르브산 (L-ascorbic acid)이 천연 항산화제로 선호되고 있는데, 그중 토코페롤은 안전성이 높으나 단독으로는 산화반응 저지 능력이 낮으며(Halliwell B et al., FASEB J., 2, pp2867-2870, 1988) 가격이 비싸다는 단점이 있다.
도라지(Platycodon grandiflorum)는 한국, 중국 동북부, 일본에 자생하며 햇빛이 잘 쪼이는 산야의 초원에서 자라는 다년초이다. 또한, 초롱꽃과에 속하는 다년생초로 뿌리는 굵고 줄기는 단생 또는 족생(簇生)하여 높이 40 ∼ 100 cm이다. 잎은 호생 또는 윤생하며 거의 잎자루 없이 긴 계란형 또는 타원형이다. 꽃은 6 ∼ 8월에 피며 꽃색은 청자색으로 종모양이며 줄기의 끝이나 가지 끝에 하나씩 정생하여 핀다. 흰 꽃이 피는 계통을 백도라지라고 하며 뿌리는 각혈성 환자의 약제 또는 식용으로 쓰인다. 도라지의 뿌리는 식용채소 또는 약용으로 이용되어 왔으며, 뿌리를 물로 씻어 말리거나 껍질을 벗겨서 말리고 건조시킨 것을 길경근이라고 하며 이를 약용한다. 뿌리에는 2%의 트리텔페노이드 사포닌(triterpenoid saponin) 및 0.03%의 스테롤(sterol)이 함유되어 있다[Saeki, T. et al., Planta Med. 65: 428 (1937)]. 그 외 당류로서는 이눌린(inulin), 플라티코디닌(platycodinin: 과당 10 분자로 구성되는 다당류)이 함유되어 있다. 한방에서 도라지의 주요 효능은 기침, 가래 등과 폐의 장해와 밀접한 인후통, 실음(失音), 배뇨곤란, 설사, 후중(後重) 등의 증상에 좋은 것으로 알려져 있다[Lee, K. J. et al., Food Chem. Toxicol. 40: 517 (2002), Han, S. B. et al., Int. Immunopharmacol. 1: 1969 (2001), Choi, C. Y. et al., Cancer Lett. 166: 17 (2001)]. 도라지 추출성분의 암세포 증식 억제 효과[이지영 등, 한국식품과학회지, vol.30(1), 13-21, 1998] 등이 기재되어 있고, 임파구 및 고형암에 대한 입증만 되어 있을 뿐이다.
구절초(Chrysanthemum zawadskii var. latilobum Kitamura)는 국화과에 속하는 여러해살이풀로서, 우리나라 전역에 야생하고 있으며 동속으로는 바위구절초, 산구절초, 포천구절초, 및 서홍 구절초 등이 있다. 민간에서는 주로 부인병의 냉증, 월경통, 월경불순 등에 치료효과가 있는 것으로 사용되어져 왔다.
이들 도라지 및 구절초는 항산화 효과가 우수한 것으로 알려져 있으나, 본 발명자들은 이들 도라지 및 구절초를 혼합한 추출물은 도라지 및 구절초 각각의 추출물에 비하여 현저히 우수한 항산화능을 가짐을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 하나의 목적은 도라지 및 구절초 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 하나의 목적은 상기 조성물을 포함하는 항산화용 화장료, 약학적, 또는 식품 조성물을 제공하는 것이다.
하나의 양태로서, 본 발명은 도라지 및 구절초의 혼합 추출물을 포함하는 항산화용 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 도라지(Platycodon grandiflorum)는 한국, 중국 동북부, 일본에 자생하며 햇빛이 잘 쪼이는 산야의 초원에서 자라는 초롱꽃과의 다년초를 말한다. 상기 도라지는 꽃, 잎, 줄기, 뿌리, 및 전초 등의 어느 부위를 사용하여도 무관하나, 바람직하게는 꽃, 잎, 줄기, 및 뿌리, 중의 어느 하나, 보다 바람직하게는 뿌리를 사용한다.
본 발명에 있어서, 상기 구절초는 한국에서 자생하는 자원식물로서 국화과 구절초(Chrysanthemum zawadskii var. latilobum Kitamura)를 의미하며, 구체적으로는 구절초(Chrysanthemu zawadskii (or sibirium) var. latilobum), 또는 동속 근연식물인 포천구절초(Chrysanthemum zawadskii var. tenuisectum), 한라구절초 (Chrysanthemum zawadskii subsp. coreanum), 낙동구절초(Chrysanthemum zawadskii subsp. Naktongense) 및 바위구절초(Chrysanthemum zawadskii var. alpinum)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하고, 상기 구절초는 꽃, 잎, 줄기, 뿌리, 및 전초 등의 어느 부위를 사용하여도 무관하나, 바람직하게는 꽃, 잎, 및 줄기 중의 어느 하나, 보다 바람직하게는 잎 및 줄기를 사용한다.
본 발명에 있어서, "추출물(extract)"은 목적하는 물질을 다양한 용매에 침지한 다음, 상온 또는 가온상태에서 일정시간 동안 추출, 분획하여 수득한 액상성분, 상기 액상성분으로부터 용매를 제거하여 수득한 고형분 등의 결과물을 의미한다. 뿐만 아니라, 상기 결과물에 더하여, 상기 결과물의 희석액, 이들의 농축액, 이들의 조정제물, 정제물 등을 모두 포함하는 것으로 포괄적으로 해석될 수 있다.
본 발명의 상기 도라지 및 구절초의 혼합 추출물은 도라지 및 구절초를 혼합한 후 추출물을 제조하거나 도라지 및 구절초 각각의 추출물을 제조한 후 혼합하여 제조할 수 있다. 이에 본 발명에서는 이들 방법에 의하여 제조된 도라지 추출물과 구절초 추출물의 혼합물, 및 도라지 및 구절초의 혼합 추출물 모두를 도라지 및 구절초의 혼합 추출물로 명명하고 사용한다.
상기 도라지 및 구절초의 혼합 추출물은 물 또는 다양한 유기용매 등으로 추출하여 수득할 수 있다. 이때, 사용되는 유기용매는 항산화 효과를 갖는 추출물을 수득할 수 있는 한, 특별히 이에 제한되지 않으나, 바람직하게는 물, 극성용매 또는 비극성용매가 될 수 있고, 보다 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올(에탄올, 메탄올, 프로판올 또는 부탄올 등), 이들의 혼합용매 등이 될 수 있으며, 가장 바람직하게는 에탄올을 사용할 수 있다.
또한, 상기 추출물을 수득하기 위한 방법 역시 항산화 효과를 갖는 추출물을 수득할 수 있는 한, 특별히 이에 제한되지 않는다. 추출 방법은 냉침 추출, 초음파 추출, 또는 환류 냉각 추출 방법 등이 있으며, 초음파 추출 방법으로 실시하는 것이 바람직하다.
상기 초음파 추출은 진동수가 1초에 20,000번 이상인 진동소자를 사용하여 각종 천연소재로부터 유용성분을 화학적인 힘이 아닌 물리적인 힘으로 상온에서 추출하는 방법으로, 용매 추출, 식물성 오일 추출 또는 수증기 증류 추출과 달리 상온에서 천연소재가 함유하고 있는 유효성분을 파괴하지 않고 고농도로 추출할 수 있는 장점이 있다.
하나의 구체적 예로서, 상기 초음파 추출은 건조된 도라지 및 구절초의 분말 각각 또는 이의 혼합물을 60% 내지 80% 에탄올 용액을 이용하여 상온에서 24시간 내지 72시간 동안 실시할 수 있다. 바람직하게는 65% 내지 75% 에탄올 용액을 이용하여 상온에서 36시간 내지 60시간 동안 실시하며, 보다 바람직하게는 70% 에탄올 용액을 이용하여 상온에서 48시간 동안 실시한다. 상기 수치의 하한을 벗어나는 경우 도라지 및 구절초 분말에 함유된 본 발명의 유효성분이 충분히 추출되지 않으며 상한을 초과하는 경우 유효성분의 추출량에 유의적인 차이가 없고 상기 유효성분외 불순물이 추출되며 공정의 효율성이 감소하게 된다.
본 발명에 있어서, "항산화"는 산소와 관련된 인체 내 독성물질의 제거 또는 생성을 억제하는 과정을 의미하며, 항산화와 관련된 질환으로 반드시 이로 한정되는 것은 아니지만 아토피성 질환, 암, 고혈압, 심근경색, 동맥경화, 류머티스, 백내장, 파킨슨씨병 등의 만성질환 등이 있다.
본 발명의 조성물의 유효성분인 도라지 및 구절초 혼합 추출물은 도라지 및 구절초 추출물 각각에 비하여 최소 1.6배 이상의 증가된 항산화 효과를 나타내며, 최소 45배 이상의 대식세포의 NO 분비 활성을 증가시키며, COX-2 등의 염증 관련 인자의 발현을 억제하는 효과가 있다. 따라서, 본 발명에 따른 도라지 및 구절초 혼합 추출물은 도라지 및 구절초 추출물 각각과 대비하여 월등하게 우수한 항산화 효과가 있다.
하나의 구체적 양태로서, 본 발명의 상기 조성물은 항산화용 약학적 조성물로 제공될 수 있다.
상기 항산화용 약학적 조성물은 보다 구체적으로 아토피성 질환, 암, 고혈압, 심근경색, 동맥경화, 류머티스, 백내장, 파킨슨씨병 등의 만성질환의 예방 및 치료를 위한 것이다.
본 발명에 있어서, 상기 "약학적 조성물"은 질병의 예방 또는 치료를 목적으로 제조된 것을 의미하며, 각각 통상의 방법에 따라 다양한 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 예컨대, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형으로 제형화할 수 있고, 윤활제, 습윤제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 비경구형 제형으로 제형화하여 사용될 수 있다. 또한, 외용제, 좌제, 피부외용제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용할 수 있다.
또한, 각각의 제형에 따라 약학적으로 허용가능한 담체, 예컨대 완충제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제, 기제 등 당업계에 공지된 담체를 추가로 포함하여 제조할 수 있다. 본 발명에서 사용되는 용어, "약학적으로 허용 가능한 담체"란 생물체를 자극하지 않으면서, 주입되는 유효성분의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 의미할 수 있다. 본 발명에 사용 가능한 상기 담체의 종류는 특별히 제한되지 아니하며 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되고 약학적으로 허용되는 담체라면 어느 것이든 사용할 수 있다. 상기 담체의 비제한적인 예로는, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사 용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다. 상기 담체는 비자연적 담체 (non-naturally occuring carrier)일 수 있다.
본 발명의 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여할 수 있다. 상기 약학적으로 유효한 양은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 건강상태, 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 구체적으로 투여 개체의 몸무게 1㎏ 당 일반적으로 1일 0.01㎎ 내지 5000㎎이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정 시간간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 약학적 조성물에 포함되는 도라지 및 구절초 혼합 추출물은 특별히 이에 제한되지 않으나, 조성물의 총 중량에 대하여 0.00001 내지 100 중량%, 바람직하게 0.0001 내지 15 중량%, 보다 바람직하게 0.001 내지 15중량%, 보다 더 바람직하게 0.001 내지 10중량%로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 단독으로 또는 항산화 효과를 나타내는 기타 약학적 활성 화합물과 결합하여 또는 적당한 집합을 이루어 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여할 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용을 유발하지 않으면서 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 개체에게 본 발명의 약학적 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물의 투여 방식은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방식에 따를 수 있다. 상기 투여 방식의 비제한적인 예로, 조성물을 경구 투여 또는 비경구 투여 방식으로 투여할 수 있다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 목적하는 투여 방식에 따라 다양한 제형으로 제작될 수 있다.
본 발명의 조성물의 투여빈도는 특별히 이에 제한되지 않으나, 1일 1회 투여하거나 또는 용량을 분할하여 수회 투여할 수 있다.
다른 하나의 구체적 양태로서, 본 발명은 도라지 및 구절초 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 식품 조성물을 제공한다.
상기 도라지 및 구절초 혼합 추출물의 항산화 효과에 대해서는 전술한 바와 같다.
본 발명의 조성물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 도라지 및 구절초 혼합 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상의 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있으며, 식품학적으로 허용가능한 식품 보조 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물은 천연물로부터 유래한 추출물을 유효성분으로 하므로 안정성 면에서 문제가 없기 때문에 혼합량에 큰 제한은 없다.
본 발명의 식품 조성물은 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있으며, 기능성 식품, 건강기능식품 등 당업계에 알려진 용어와 혼용 가능하다.
본 발명의 용어 "기능성 식품"은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
또한, 본 발명의 용어 "건강기능식품"은 건강보조의 목적으로 특정성분을 원료로 하거나 식품 원료에 들어있는 특정성분을 추출, 농축, 정제, 혼합 등의 방법으로 제조, 가공한 식품을 말하며, 상기 성분에 의해 생체방어, 생체리듬의 조절, 질병의 방지와 회복 등 생체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발휘할 수 있도록 설계되고 가공된 식품을 말하는 것으로서, 상기 건강식품용 조성물은 질병의 예방 및 질병의 회복 등과 관련된 기능을 수행할 수 있다.
항산화를 위한 본 발명의 조성물이 사용될 수 있는 식품의 종류에는 제한이 없다. 아울러 본 발명의 도라지 및 구절초 전초 추출물을 활성성분으로 포함하는 조성물은 당업자의 선택에 따라 식품에 함유될 수 있는 적절한 기타 보조 성분과 공지의 첨가제를 혼합하여 제조할 수 있다. 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 본 발명에 따른 추출물 및 이의 분획물을 주성분으로 하여 제조한 즙, 차, 젤리 및 주스 등에 첨가하여 제조할 수 있다.
또한, 본 발명에 적용될 수 있는 식품에는 예컨대, 특수영양식품(예: 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예: 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예: 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예:스낵류), 유가공품(예: 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예: 과실, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면스프 등) 등 모든 식품을 포함할 수 있다.
본 발명의 건강기능식품 조성물이 음료의 형태로 사용될 경우에는 통상의 음료와 같이 여러 가지 감미제, 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 외에 본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
다른 하나의 구체적 양태로서, 본 발명은 도라지 및 구절초 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 상기 화장료 조성물은 유효성분으로서 도라지 및 구절초 혼합 추출물 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 첨가되는 성분, 예컨대 항산화제, 안정화제, 가용화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 및 담체를 추가로 첨가할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 영양 크림, 수렴 화장수, 유연 화장수, 로션, 에센스, 영양젤 또는 마사지 크림의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트 검, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 가용화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 검등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 도라지 및 구절초 혼합 추출물은 천연 약용식물을 원료로 하므로 약학 조성물, 식품 조성물, 및 화장료 조성물로 사용할 경우에도 일반적인 합성 화합물에 비하여 부작용이 덜할 수 있으므로 안전하게 포함되어 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 도라지 및 구절초 혼합 추출물은 각각의 추출물에 비하여 증가된 항산화 활성, 대식세포의 NO 분비 활성, 및 염증 관련 물질의 활성 억제 효과를 나타낸다. 특히 본 발명의 도라지 및 구절초 혼합 추출물은 농도 의존적으로 DPPH 라디칼 생성을 억제하여 항산화 활성이 매우 우수하고, 독성이 없으므로 항산화용 약학 및 식품 조성물로서 유용하게 사용 가능하다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 도라지 추출물의 대식세포주 RAW 264.7 세포에 대한 농도별 세포 독성을 분석한 결과이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 구절초 추출물의 대식세포주 RAW 264.7 세포에 대한 농도별 세포 독성을 분석한 결과이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 도라지 추출물의 폐암세포주 A549 세포에 대한 농도별 세포 독성을 분석한 결과이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 구절초 추출물의 폐암세포주 A549 세포에 대한 농도별 세포 독성을 분석한 결과이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 구절초 추출물, 도라지 추출물, 및 이들 혼합 추출물의 항산화 효과를 비교한 결과이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 구절초 추출물 및 도라지 추출물의 면역증강 효능에 관한 실험 결과이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 구절초 추출물, 도라지 추출물, 및 이들 혼합 추출물의 NO 분비량에 따른 면역력 증강 효과를 비교한 결과이다.
도 8 및 9는 본 발명의 일 실시예에 따른 구절초 추출물 및 도라지 추출물의 COX-2 및 β-액틴의 발현량을 농도별 비교 분석한 결과이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
제조예 1: 도라지 및 구절초 추출물의 제조
3 ~ 6년간 재배한 도라지의 뿌리 및 잎, 그리고 구절초의 잎과 줄기를 경동시장에서 구매한 후 깨끗이 세척하고 건조한 다음 분쇄기로 분쇄하여 각각 분말화하였다. 도라지 분말은 80% 에탄올 및 1% 아세트산 수용액에서 6시간 동안 초음파 추출하여 도라지 추출물을 제조하였고, 구절초 분말은 50% 에탄올에서 2시간 동안 초음파 추출하여 구절초 추출물을 제조하였다.
실시예 1: 본 발명에 따른 도라지 및 구절초의 혼합 추출물에 대한 세포 독성 평가
1-1. RAW 264.7 세포내 독성 평가
대식세포주 RAW 264.7 세포를 96웰 플레이트에 2 X 104 cell/well 농도로 배양하고, 배양 24시간 후 상기 제조예 1의 도라지 추출물 및 구절초 추출물을 농도별(0 ㎍/㎖, 62.5 ㎍/㎖, 125 ㎍/㎖, 250 ㎍/㎖, 500 ㎍/㎖, 1000 ㎍/㎖, 2000 ㎍/㎖)로 각각 처리하였다. 처리 24시간 후 각 웰에 MTS 시약을 20 ㎕ 넣고 상온에서 30분 반응시켰다. 반응완료 후 490 nm 파장영역에서 흡광도를 측정하였으며, 이때 상기 과정을 총 3회 반복하였고 평균값을 측정하여 도라지 및 구절초 추출물의 세포 독성을 분석하였다.
그 결과, 도 1 및 2에서 볼 수 있듯이, 상기 제조예 1의 도라지 추출물 및 구절초 추출물은 대식세포주 RAW 264.7 세포에 대한 세포 독성이 없는 것을 확인하였다.
1-2. A549 세포내 독성 평가
폐암세포주 A549 세포를 96웰 플레이트에 2 X 104 cell/well 농도로 배양하고, 배양 24시간 후 상기 제조예 1의 도라지 추출물 및 구절초 추출물을 농도별(0 ㎍/㎖, 62.5 ㎍/㎖, 125 ㎍/㎖, 250 ㎍/㎖, 500 ㎍/㎖, 1000 ㎍/㎖, 2000 ㎍/㎖)로 각각 처리하였다. 처리 24시간 후 각 웰에 MTS 시약을 20 ㎕ 넣고 상온에서 30분 반응시켰다. 반응완료 후 490 nm 파장영역에서 흡광도를 측정하였으며, 이때 상기 과정을 총 3회 반복하였고 평균값을 측정하여 도라지, 구절초 추출물의 세포 독성을 분석하였다.
그 결과, 도 3 및 4에서 볼 수 있듯이, 상기 제조예 1의 도라지 추출물 및 구절초 추출물은 폐암세포주 A549 세포에 대한 세포 독성이 없는 것을 확인하였다.
실시예 2: 도라지 추출물과 구절초 추출물의 폴리페놀 함량 분석
96웰 플레이트에 1000 ㎍/㎖ 농도의 상기 제조예 1의 도라지 및 구절초 추출물을 40 ㎕씩 각각 넣고, 각 웰에 1 노르말 농도의 Folin-Ciocalteu's phenol reagent (FC 시약)을 20 ㎕씩 넣었다. 또한 각 웰에 20% Na2CO3 용액을 60 ㎕씩 넣고 암실에서 30분간 반응시켰다. 반응완료 후 700nm에서 흡광도를 측정하였으며, 이때 상기 과정을 총 3회 반복하였고 평균값을 갈산 표준 곡선과 비교하여 폴리페놀 함량을 분석하였다.
실시예 3: 도라지 추출물과 구절초 추출물의 플라보노이드 함량 분석
96웰 플레이트에 1000 ㎍/㎖ 농도의 상기 제조예 1의 도라지 및 구절초 추출물을 25 ㎕씩 각각 넣고, 각 웰에 2차 증류수를 125 ㎕씩 넣었다. 그리고 각 웰에 5% NaNO2를 8 ㎕ 넣고 5분간 반응시켰다. 반응완료 후 각 웰에 10% AlCl3를 15 ㎕씩 넣고 다시 6분 반응시켰다. 반응완료 후 각 웰에 1M NaOH 50 ㎕와 2차 증류수 27 ㎕를 넣었다. 각 웰의 용액을 잘 섞고 510 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 이때 상기 과정을 총 3회 반복하였고 평균값을 측정하여 플라보노이드 함량을 분석하였다.
실시예 4: 도라지 및 구절초의 혼합 추출물의 항산화 증진 효과
96웰 플레이트에 상기 제조예 1의 도라지 및 구절초 추출물 각각과 이의 혼합 추출물을 농도별(125 ㎍/㎖, 250 ㎍/㎖, 500 ㎍/㎖, 1000 ㎍/㎖, 2000 ㎍/㎖)로 80 ㎕씩 넣었다. 각 웰에 0.2 mM DPPH 용액을 80 ㎕씩 넣고, 암실에서 30분간 반응시켰다. 반응완료 후 517 nM에서 흡광도를 측정하였으며, 이때 상기 과정을 총 3회 반복하였고 평균값을 측정하여 도라지, 구절초 추출물의 DPPH radical 소거활성을 분석하였다. 그 결과를 도 5에 나타내었다.
도 5에서 볼 수 있듯이, 도라지 추출물 및 구절초 추출물 각각의 DPPH radical 소거 활성에 비하여 도라지 및 구절초의 혼합 추출물이 도라지 추출물에 비하여 약 1.6배, 구절초 추출물에 비하여 약 2.8배 증가된 활성이 있음을 확인할 수 있었다.
실시예 4: 본 발명에 따른 추출물의 면역 증진 효과
2-1. 도라지 및 구절초 추출물의 면역력 증강 효능 분석
대식세포주 RAW 264.7 세포를 24웰 플레이트에 2 X 105 cell/well 농도로 배양하고, 배양 24시간 후 인터페론-γ(interferon- γ)를 10 ㎍/㎖ 농도로 처리한 뒤, 상기 제조예 1의 도라지 및 구절초 추출물을 각각 농도별(62.5 ㎍/㎖, 125 ㎍/㎖, 250 ㎍/㎖)로 처리하였다. 처리하고 24시간 후 각 웰에서 배양액 80 ㎕를 96웰 플레이트로 옮기고, 96웰 플레이트의 각 웰에 Griess reagent 80 ㎕를 넣은 뒤, 상온에서 15분간 반응시켰다. 반응완료 후 540nm에서 흡광도를 측정하였으며, 이때 상기 과정을 총 3회 반복하였고 평균값을 NaNO2 표준 곡선과 비교하여 면역력 증강 효능을 분석하였다.
도 6에서 볼 수 있듯이, 비처리군의 NO (Nitric Oxide) 분비 활성에 비하여 구절초 추출물 처리군의 활성이 약 45배, 도라지 추출물 처리군의 활성이 약 135배로 증가했음을 확인할 수 있었다.
2-2. 구절초 및 도라지 추출물의 면역력 증강 시너지 효능 분석
대식세포주 RAW 264.7 세포를 24웰 플레이트에 2 X 105 cell/well 농도로 배양하고, 배양 24시간 후 인터페론-γ(interferon- γ)를 10 ㎍/㎖ 농도로 처리한 뒤, 상기 제조예 1의 본 발명의 도라지 및 구절초 추출물을 농도별(구절초: 0 ㎍/㎖, 62.5 ㎍/㎖, 125 ㎍/㎖, 250 ㎍/㎖, 도라지: 0 ㎍/㎖, 31.25 ㎍/㎖, 62.5 ㎍/㎖, 125 ㎍/㎖, 250 ㎍/㎖, 500 ㎍/㎖)로 혼합 후 처리하였다. 도라지 추출물 처리 24시간 후 각 웰에서 배양액 80 ㎕를 96웰 플레이트로 옮기고, 96웰 플레이트의 각 웰에 Griess reagent 80 ㎕를 넣은 뒤, 상온에서 15분간 반응시켰다. 반응완료 후 540nm에서 흡광도를 측정하였으며, 이때 상기 과정을 총 3회 반복하였고 평균값을 NaNO2 표준 곡선과 비교하여 면역력 증강 시너지 효능을 분석하였다.
도 7에서 볼 수 있듯이, 도라지 추출물 또는 구절초 추출물 처리군에 비하여 도라지 및 구절초 혼합 추출물 처리군의 NO 분비량이 높음을 확인하였다. 특히 도라지 추출물 250 mg/mL와 구절초 추출물 250 mg/mL 농도의 혼합물은 NO 분비량이 동일 농도의 구절초 추출물 처리군에 비해서 약 4배, 도라지 추출물 처리군에 비해서 약 1.25배 증가했음을 확인할 수 있었다.
실시예 3: 본 발명에 따른 추출물의 호흡기 염증 억제 활성
3-1. 폐암세포의 염증관련 바이오마커(단백질) 변화 분석
100 mm 세포배양 접시에 인간 폐암 세포주 A549, 대식구 세포주 RAW264.7을 50 X 104 cell/mL 농도로 각각 배양하고. 배양 24시간 뒤 상기 제조예 1의 도라지 추출물 및 구절초 추출물을 농도별(125 ㎍/㎖, 250 ㎍/㎖)로 처리하였다. 이들 추출물 처리 24시간 후, 세포용해 완충용액 (lysis buffer)을 200 ㎕ 처리하고 원심분리(14000 RPM, 10분)를 통해 상등액을 얻었다. 상등액은 단백질 정량 시험을 통하여 정량 하였다. 정량된 단백질을 1.5 microtube에 8 ㎍ 넣었고, β-mercaptoethanol이 포함된 sample buffer 시약을 5 ㎕ 넣은 뒤, 95℃에서 5분간 반응시켰다. 반응완료 후 125 V, 90분간 폴리아크릴아마이드 겔 전기 영동법으로 단백질을 크기순으로 분리했고, transfer turbo 장비를 이용(25 V, 17분)하여 단백질은 PVDF membrane으로 이동시켰다. PVDF membrane에 3% BSA blocking buffer 처리하고 1시간 반응시켰다. 반응완료 후, 4℃에서 각각의 1차 항체(COX-2, β-actin)를 처리하고 12시간 반응시켰다. 반응완료 후, 2차 항체를 처리하고 1시간 반응시켰다. 반응완료 후, horseradish peroxidase(HRP) 시약과 HRP substrate 시약을 1:1 비율로 혼합한 용액을 1 mL 처리한 뒤, 형광 발현을 측정하여 단백질의 발현 변화를 분석하였다. 이에 대한 결과를 도 8 및 9에 나타내었다.
도 8 및 9에서 볼 수 있듯이, 도라지 추출물 처리군의 COX-2 발현양은 비처리군(cont)의 발현양과 비교하여 약 40% 감소함을 확인할 수 있었다.
3-2. 페암세포의 염증관련 바이오마커(mRNA) 변화 분석
100 mm 세포배양 접시에 인간 폐암 세포주 A549를 50 X 104 cell/mL 농도로 각각 배양하고. 배양 24시간 뒤 상기 제조예 1의 도라지 추출물, 구절초 추출물 및 이의 혼합 추출물을 농도별(62.5 ㎍/㎖, 125 ㎍/㎖, 250 ㎍/㎖)로 각각 처리하였다. 이들 추출물 24시간 후, RNA 추출 kit를 이용하여 각 세포배양접시의 RNA를 추출하였고, 핵산 농도 측정장비 'NaNo drop'을 이용하여 추출한 RNA의 농도와 순도를 측정하였다. 측정한 농도를 바탕으로 각각의 RNA를 정량했고, cDNA 합성 kit을 이용하여 cDNA로 합성했다. PCR 플레이트의 각 웰에 2차 증류수 7 ㎕, forward primer 1 ㎕, reverse primer 1 ㎕, syber green 시약 10 ㎕, cDNA 1 ㎕를 각각 넣고 qPCR 기기를 통해 형광 발현 변화량을 측정하였다. 이때 상기 과정을 총 3회 반복하였고 평균값을 측정하여 mRNA 전사량의 변화를 분석하였다.

Claims (3)

  1. 도라지 및 구절초의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 식품 조성물.
  2. 도라지 및 구절초 추출물의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 화장료 조성물.
  3. 도라지 및 구절초 추출물의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 약학적 조성물로서, 상기 항산화는 아토피성 질환, 암, 고혈압, 심근경색, 동맥경화, 류머티스, 백내장, 및 파킨슨씨병으로 이루어진 군으로부터 1이상 선택된 질환의 예방 및 치료를 위한 것인 약학적 조성물.
KR1020210116932A 2021-09-02 2021-09-02 도라지 및 구절초 추출물을 함유하는 항산화용 조성물 KR20230034466A (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020210116932A KR20230034466A (ko) 2021-09-02 2021-09-02 도라지 및 구절초 추출물을 함유하는 항산화용 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020210116932A KR20230034466A (ko) 2021-09-02 2021-09-02 도라지 및 구절초 추출물을 함유하는 항산화용 조성물

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230034466A true KR20230034466A (ko) 2023-03-10

Family

ID=85570435

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020210116932A KR20230034466A (ko) 2021-09-02 2021-09-02 도라지 및 구절초 추출물을 함유하는 항산화용 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20230034466A (ko)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9445987B2 (en) Ceramide production enhancer and moisturizer
KR101611853B1 (ko) 항염증 활성이 우수한 섬쑥부쟁이 분획물 및 이로부터 분리된 활성화합물
KR101794006B1 (ko) 식물 추출물을 포함하는 염증 개선용 조성물
JP2009107965A (ja) セラミド合成促進剤、並びに皮膚外用剤及び飲食品
KR20180064202A (ko) 사상자 추출물 및 카퍼트리펩타이드-1 혼합물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR102428082B1 (ko) 항염증 면역활성 및 항산화 활성을 가지며, 노인의 근력 또는 근육 강화를 위한 근세포 조성에 우수한 효과를 제공하는 프테로카리아 스테놉테라 추출물을 포함하는 화장료 조성물, 약학적 조성물, 및 식품 조성물
KR101889331B1 (ko) 섬오가피나무 줄기 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염증 또는 항균용 조성물
KR101863117B1 (ko) 봄맞이 추출물, 정금나무 추출물 및 많첩빈도리 추출물을 함유하는 미백 및 항산화 활성 조성물
KR20150034025A (ko) 항산화 또는 혈당 강하 활성 성분 함량이 증가된 새싹보리 차
KR20230034466A (ko) 도라지 및 구절초 추출물을 함유하는 항산화용 조성물
KR20160055748A (ko) 항산화 또는 혈당 강하 활성 성분 함량이 증가된 새싹보리 차
KR102244585B1 (ko) 피부 노화 개선 복합 화장료 조성물
KR101436213B1 (ko) 긴잎모시풀 추출물을 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 조성물
KR101797843B1 (ko) 섬오가피나무 줄기 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 함유하는 항염증 또는 항균용 조성물
KR101526435B1 (ko) 머루근 추출물을 포함하는 미백용 조성물
KR102300922B1 (ko) 유산균 발효 황기 추출물을 포함하는 항산화용 조성물
KR102443334B1 (ko) 무궁화 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증, 피부 보습, 피부 가려움증 개선, 및 피부재생 촉진용 조성물
KR102300930B1 (ko) 유산균 발효 황기 추출물을 포함하는 항산화용 조성물
KR20180120120A (ko) 마리안 플럼 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 항노화 및 보습용 조성물
KR102313083B1 (ko) 등수국 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 조성물
KR102411893B1 (ko) 밤나무 총포 추출물을 유효성분으로 포함하는 피지 분비 억제용 조성물
JP5758563B2 (ja) ヒアルロニダーゼ活性阻害剤、及び腫瘍壊死因子産生抑制剤
KR20170111769A (ko) 송로버섯 균사체, 산뽕나무, 배초향, 장딸기 및 대추나무의 복합추출물을 포함하는 미백 또는 항산화용 조성물
KR20230096821A (ko) 게박쥐나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR20230109888A (ko) 항산화 효과가 우수한 천연 식물 추출물을 함유한 조성물