KR20220094230A - 탁시폴린을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 또는 피부 보습 증진용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 탁시폴린을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 또는 피부 보습 증진용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 탁시폴린은 피부 주름 개선 및 피부 보습 증진 효과가 우수하므로 손상된 피부의 회복을 위한 화장품 및 건강기능식품의 개발 소재로 유용하게 활용될 수 있을 것이다.
Description
본 발명은 탁시폴린을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 또는 피부 보습 증진용 조성물에 관한 것이다.
피부는 주로 외부의 물리적 손상 및 화학물질로부터 인체를 보호하고, 세균, 곰팡이, 바이러스 등이 피부로 침범하는 것을 방지하며, 수분 손실을 막는 보호장벽 역할을 한다. 피부의 구조를 보면 표피, 진피, 피하지방과 같은 3개 층으로 구성되고 표피는 이중 가장 얇은 층으로 피부의 보습 및 보호를 담당하는 중요한 기능을 한다.
최근 들어, 기후 변화 또는 환경 오염 등으로 인해 강한 자외선에 노출되는 경우가 많아짐에 따라 피부의 수분 손실 및 피부 노화가 가속화되고 있다. 피부 노화는 연령이 증가함에 따라 생체의 생리적인 기능이 저하되어 자연적으로 유발되는 내인성 생리적 노화와 장기간 자외선 노출에 의해 진행되는 외인성 광노화(photoaging)로 구분될 수 있다. 내인성 피부 노화의 임상적 특징은 피부가 얇아지고 탄력성이 감소하는 것이고, 조직학적 소견으로는 표피 및 진피의 두께가 얇아지고 혈관이 감소되며 진피 내 섬유아세포의 수가 감소하게 되는 것이다. 또한, 외인성 피부 노화인 광노화의 임상적 특징은 피부가 거칠고 탄력성이 없어지며 불규칙한 색소 침착이 발생되고 깊은 주름살이 증가되는 것이다.
주름의 생성 원인으로는 여러 가지가 보고되고 있는데, 우선 피부가 과다한 자외선에 노출되면 피부 구성 성분인 콜라겐 분해가 촉진되어 피부가 탄력을 잃고 주름이 생성될 수 있다. 또한, 과도한 온도 변화, 습도 저하 또는 바람 등에 의해 피부가 지나치게 건조해지면 외부에 대한 방어벽으로서의 피부 기능이 저하되어 주름이 생기기도 한다. 그리고 피부가 활성 산소종이나 자유라디칼에 노출되면 산화 작용에 의해 과산화 지질이 생성되고, 그로 인해 콜라겐 등의 피부 구성 단백질이 변형 또는 감소되어 주름이 생성될 수 있다. 이러한 외부적 요인과 내부적 요인에 의한 주름 발생을 억제하고자 다양한 화장품 조성물이 연구되고 있다.
한편, 한국등록특허 제1071785호에 '진달래 뿌리 추출물로부터 분리한 탁시폴린 3-Ｏ-β-Ｄ-글루코피라노사이드를 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부염 치료용 조성물'이 개시되어 있고, 한국공개특허 제2018-0103317호에 '탁시폴린을 유효성분으로 포함하는 골다공증 예방, 개선 또는 치료용 조성물'이 개시되어 있으나, 본 발명의 탁시폴린을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 또는 피부 보습 증진용 조성물에 대해서는 기재된 바가 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명자들은 탁시폴린이 세포 내 히알루론산(hyaluronic acid)의 생성량을 증가시키고, 콜라게나아제(collagenase) 및 엘라스타아제(elastase)의 활성을 저해시켜 피부 보습 증진과 피부 주름 개선에 효과가 있음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 탁시폴린(Taxifolin) 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 또는 피부 보습 증진용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 탁시폴린 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 또는 피부 보습 증진용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 탁시폴린은 세포 독성이 없고, 피부 보습 증진 및 피부 주름 개선 효과가 우수하므로, 피부의 노화 방지, 보습 증진, 주름 개선 등을 위한 화장료, 식품 및 피부외용제의 원료로 유용하게 활용될 수 있을 것으로 기대된다.
도 1은 피부각질세포(HaCaT)에 탁시폴린(Taxifolin)을 농도별(1, 5, 10, 25, 50 ㎍/㎖)로 처리하여 세포 생존율을 측정한 결과이다. Control: 탁시폴린 무처리.
도 2는 탁시폴린의 피부 보습 증진 효과를 확인한 것으로, A는 HaCaT 세포에 탁시폴린을 농도별로 처리한 후 히알루론산 합성효소(Hyaluronic Acid Synthase, HAS)를 코딩하는 HAS2 유전자의 mRNA 발현량을 측정한 결과이고, B는 HaCaT 세포에 탁시폴린을 농도별(1, 5, 10, 25, 50 ㎍/㎖)로 처리한 후 세포 내 히알루론산 생성량을 측정한 결과이다. Control: 탁시폴린 무처리, RA(Retinoic acid): 양성 대조군.
도 3은 탁시폴린의 피부 주름 개선 효과를 확인한 것으로, A는 탁시폴린의 콜라게나아제(collagenase) 활성 저해 효과를 확인한 결과이고, B는 탁시폴린의 엘라스타아제(elastase) 활성 저해 효과를 확인한 결과이다. A의 Control: 클로스트리듐 히스톨리티쿰(Clostridium histolyticum)에서 추출된 콜라게나아제 처리, B의 Control: 인간 호중구 엘라스타아제(Human leukocyte elastase) 처리.
도 2는 탁시폴린의 피부 보습 증진 효과를 확인한 것으로, A는 HaCaT 세포에 탁시폴린을 농도별로 처리한 후 히알루론산 합성효소(Hyaluronic Acid Synthase, HAS)를 코딩하는 HAS2 유전자의 mRNA 발현량을 측정한 결과이고, B는 HaCaT 세포에 탁시폴린을 농도별(1, 5, 10, 25, 50 ㎍/㎖)로 처리한 후 세포 내 히알루론산 생성량을 측정한 결과이다. Control: 탁시폴린 무처리, RA(Retinoic acid): 양성 대조군.
도 3은 탁시폴린의 피부 주름 개선 효과를 확인한 것으로, A는 탁시폴린의 콜라게나아제(collagenase) 활성 저해 효과를 확인한 결과이고, B는 탁시폴린의 엘라스타아제(elastase) 활성 저해 효과를 확인한 결과이다. A의 Control: 클로스트리듐 히스톨리티쿰(Clostridium histolyticum)에서 추출된 콜라게나아제 처리, B의 Control: 인간 호중구 엘라스타아제(Human leukocyte elastase) 처리.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 탁시폴린(Taxifolin) 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 또는 피부 보습 증진용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 탁시폴린의 IUPAC(International Union of Pure and Applied Chemistry) 명칭은 (2R,3R)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3,5,7-trihydroxy-2,3-dihydrochromen-4-one이고, 화학식은 C15H12O7이며, 분자량은 304.25158 g/mol이다.
본 명세서에서, 상기 "이의 염"은 본 발명 화합물의 생물학적 특성을 유지하면서 독성을 나타내지 않거나 제약 용도로 부적절하지 않은 임의의 본 발명 화합물의 염을 나타낸다. 이러한 염은 당업계에 공지된 다양한 유기 및 무기 반대이온으로부터 유래할 수 있으며, 이들을 포함한다. 이러한 염으로는 유기 또는 무기산, 예컨대 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산, 술팜산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 트리클로로아세트산, 프로피온산, 헥산산, 시클로 펜틸프로피온산, 글리콜산, 글루타르산, 피루브산, 락트산, 말론산, 숙신산, 소르브산, 아스코르브산, 말산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 3-(4-히드록시벤조일)벤조산, 크르산, 신남산, 만델산, 프탈산, 라우르산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 1,2-에탄-디술폰산, 2-히드록시에탄술폰산, 벤젠 술폰산, 4-클로로벤젠술폰산, 2-나프탈렌술폰산, 4-톨루엔술폰산, 캄포르산, 캄포르술폰산, 4-메틸비시클로 [2.2.2]-옥트-2-엔-1-카르복실산, 글루코헵톤산, 3-페닐프로피온산, 트리메틸아세트산, 테르트-부틸아세트산, 라우릴 황산, 글루콘산, 글루탐산, 히드록시나프토산, 살리실산, 스테아르산, 시클로헥실술팜산, 퀸산 또는 뮤콘산 등과 형성된 산 부가염; 또는 모 화합물에 존재하는 산성 양성자가 금속 이온(예를 들면, 알칼리 금속 이온, 알칼리 토금속 이온 또는 알루미늄 이온), 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속수산화물(예컨대, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 알루미늄, 리튬, 아연 및 바륨 수산화물), 암모니아로 치환되거나, 또는 유기 염기, 예컨대 지방족, 지환족 또는 방향족 유기 아민, 예를 들면 암모니아, 메틸아민, 디메틸아민, 디에틸아민, 피콜린, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 에틸렌디아민, 리신, 아르기닌, 오르니틴, 콜린, N,N'-디벤질에틸렌-디아민, 클로로프로카인, 디에탄올아민, 프로카인, N-벤질페네틸아민, N-메틸글루카민 피페라진, 트리스(히드록시메틸)-아미노메탄 또는 테트라메틸암모늄 히드록시드와 배위 결합한 경우에 형성된 염 등을 포함할 수 있다.
또한, 염의 예로는 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 암모늄 또는 테트라알킬암모늄 염 등이 있으며, 화합물이 염기성 관능기를 함유하는 경우에는 비독성유기산 또는 무기산과의 염, 예컨대 히드로할라이드(예를 들면, 히드로클로라이드 또는 히드로브로마이드), 술페이트, 포스페이트, 술파메이트, 니트레이트, 아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 트리클로로아세테이트, 프로피오네이트, 헥사노에이트, 시클로펜틸프로피오네이트, 글리콜레이트, 글루타레이트, 루베이트, 락테이트, 말로네이트, 숙시네이트, 소르베이트, 아스코르베이트, 말레이트, 말레에이트, 푸마레이트, 타르타레이트, 시트레이트, 벤조에이트, 3-(4-히드록시벤조일푸마레이트, 타르타레이트, 시트레이트, 벤조에이트, 3-(4-히드록시벤조일)벤조에이트, 피크레이트, 신나메이트, 만델레이트, 프탈레이트, 라우레이트, 메탄술포네이트 메실레이트), 에탄술포네이트, 1,2-에탄-디술포네이트, 2-히드록시에탄술포네이트, 벤젠술포네이트(베실레이트), 4-클로로벤젠술포네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 4-톨루엔술포네이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 4-메틸비시클로[2.2.2]-옥트-2-엔-1-카르복실레이트, 글루코헵토네이트, 3-페닐프로피오네이트, 트리메틸아세테이트, 테르트-부틸아세테이트, 라우릴 술페이트, 글루코네이트, 벤조에이트, 글루타메이트, 히드록시나프토에이트, 살리실레이트, 스테아레이트, 시클로헥실술파메이트, 퀴네이트 또는 뮤코네이트 염 등을 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 탁시폴린은 정상세포인 피부각질세포(HaCaT)에 대한 세포 독성이 없고, 피부각질세포에서 히알루론산 합성효소(Hyaluronic Acid Synthase, HAS)를 코딩하는 HAS2 유전자의 발현량을 증가시켜 세포 내 히알루론산의 함량을 증가시킬 수 있으므로, 피부의 보습 증진 효과가 우수하다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 상기 탁시폴린은 콜라게나아제(collagenase) 및 엘라스타아제(elastase)의 활성을 효과적으로 저해시킬 수 있으므로, 피부의 주름 개선 효과가 우수하다.
본 발명의 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 파운데이션 및 스프레이 중에서 선택된 어느 하나의 제형인 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 스킨, 스킨 소프트너, 스킨 토너, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 아이크림, 모이스쳐크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 클렌징폼, 클렌징워터, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌져, 비누 및 파우더 중에서 선택된 어느 하나의 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형으로 이루어진 화장료 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 담체와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판-부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 아세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 살진균제, 굴수성 유발물질, 보습제, 방향제, 방향제 담체, 단백질, 용해화제, 당 유도체, 일광차단제, 비타민, 식물 추출물 등을 포함하는 부형제를 추가로 함유할 수 있다.
본 발명은 또한, 탁시폴린 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 또는 피부 보습 증진용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 건강기능식품 조성물에 있어서, 상기 탁시폴린 또는 이의 염은 상기 전술한 것과 같다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 정상세포인 피부각질세포(HaCaT)에 대한 세포 독성이 없고, 정상세포에서 히알루론산 합성효소(Hyaluronic Acid Synthase, HAS)를 코딩하는 HAS2 유전자의 발현량을 증가시켜 히알루론산의 함량을 증가시킬 수 있으며, 콜라게나아제(collagenase) 및 엘라스타아제(elastase)의 활성을 저해시키는 효과가 우수한 탁시폴린을 유효성분으로 포함하고 있어, 피부 주름 개선 및 피부 보습 증진에 효과가 있다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 이너뷰티 푸드(inner beauty food)의 형태로 섭취함으로써 더욱 우수한 효과를 갖는 장점을 가진다. 상기 이너뷰티는 '먹는 화장품 또는 뷰티 푸드'로 일컬어지는 푸드로, 피부에 좋은 여러 가지 성분을 몸속으로 흡수시켜 피부 체질을 건강하게 바꾸는 식품을 지칭하며, 피부 타입에 맞는 화장품을 고르듯 피부 컨디션과 라이프스타일을 고려해 개개인에게 맞는 이너뷰티 푸드를 선택하여 섭취할 수 있다. 전술한 화장료 조성물을 포함하는 화장품과 상기 탁시폴린 또는 이의 염을 포함하는 이너뷰티 푸드를 혼용할 경우, 화장품만 사용하는 것에 비해 피부 주름 개선 또는 피부 보습 증진 효과가 월등히 높아져 더욱 효과적인 피부의 주름 개선 및 보습 증진 효과를 볼 수 있는 장점을 가진다.
본 발명의 탁시폴린 또는 이의 염을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 탁시폴린 또는 이의 염을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 건강기능식품 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 건강기능식품 조성물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다. 상기 음료는 탄산음료, 기능성이온음료, 쥬스(예를 들어, 사과, 배, 포도, 알로에, 감귤, 복숭아, 당근, 토마토쥬스 등), 식혜 등을 포함한다.
본 발명의 기능성 식품은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분 이외에 천연 탄수화물 또는 향미제를 추가 성분으로서 포함시킬 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등) 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다. 상기 건강기능식품 조성물 외에 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다.
상기 건강기능식품 조성물 이외에 여러 가지 영양제, 비타민, 저해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 함유할 수 있다. 이러한 상기 첨가되는 성분의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강기능식품 조성물 100 중량부에 대하여, 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 세포 독성 시험
피부각질세포(HaCaT)를 96-웰 배양용기에 2×104 cells/㎖로 분주하고 24시간 동안 배양하여 안정화시킨 후 탁시폴린을 농도별(1, 5, 10, 25, 50 ㎍/㎖)로 각 웰에 처리하고 24시간 동안 다시 배양하였다. 배양이 끝난 후 MTS(4,5-dimethylthiazol-2-yl-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfo-phenyl)-2H-tetrazolium) 용액 20 ㎕를 각 웰에 처리하고 4시간 동안 배양한 다음 흡광도 측정기(Multiskan Go, Thermo Scientific, 미국)를 이용하여 490 nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 대조구(탁시폴린 무처리)와 탁시폴린 처리구의 세포 생존율이 유사한 수준인 것을 확인하였다(도 1). 이를 통해, 본 발명의 탁시폴린은 피부 세포에 독성이 없음을 알 수 있었다.
실시예 2. 탁시폴린의 피부 보습 증진 효과 분석
천연보습인자인 히알루론산은 피부 표피의 수분 증발을 억제하여 피부의 탄력성을 유지하고, 영양 성분의 저장과 확산, 세포 이동 등에 관여한다. 본 발명의 탁시폴린이 세포 내 히알루론산 생성에 미치는 영향을 확인하기 위해, HaCaT 세포에 탁시폴린을 농도별(1, 5, 10, 25, 50 ㎍/㎖)로 처리하고 24시간 동안 배양한 후 qPCR(quantitative PCR)을 수행하여 히알루론산 합성효소(Hyaluronic Acid Synthase, HAS)를 코딩하는 HAS2 유전자의 mRNA 발현량을 측정하였다.
PCR을 위해 DNA 5 ㎕(20 ng), 10 pmole의 정방향 프라이머 0.5 ㎕, 10 pmole의 역방향 프라이머 0.5 ㎕, Taq mixture 10 ㎕, 증류수 4 ㎕를 혼합하여 20 ㎕의 PCR 반응 혼합물을 만들었다. PCR 과정은 GAPDH(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)의 경우 94℃에서 20초, 60℃에서 45초, 72℃에서 45초(50 cycles) 수행하였고, HAS2의 경우 94℃에서 20초, 60℃에서 45초, 72℃ 45초(50 cycles) 수행하였으며, 프라이머 서열 정보는 하기 표 1과 같다.
| 유전자 | 서열(5'→3') (서열번호) |
| GAPDH | F: TGAAGGTCGGTGTCAACGGA (1) |
| R: AGGGATCTCGCTCCTGGAA (2) | |
| HAS2 | F: TTTGTTCAAGTCCCAGCAGC (3) |
| R: ATCCTCCTGGGTGGTGTGAT (4) |
PCR 수행 결과, 탁시폴린 무처리 대조구에 비해 5, 10, 25, 50 ㎍/㎖ 농도의 탁시폴린 처리구에서 HAS2 유전자의 mRNA 발현량이 증가하였고, 특히 50 ㎍/㎖ 농도의 탁시폴린 처리구에서 HAS2 유전자의 mRNA 발현량은 양성 대조구(Retinoic acid, RA)과 유사한 수준임을 확인하였다(도 2A).
또한, HaCaT 세포에 탁시폴린을 농도별(1, 5, 10, 25, 50 ㎍/㎖)로 처리하고 24시간 동안 배양한 후 세포 배양액을 회수하여 세포 배양액 내 히알루론산 함량을 ELISA 방법(Corgenix, Hylauronic aicd(HA) Quantitative Test Kit)으로 측정한 결과, 탁시폴린 1, 5, 10, 25 또는 50 ㎍/㎖ 처리구의 히알루론산 생성량이 탁시폴린 무처리 대조구에 비해 각각 14%, 16%, 19%, 114%, 179% 증가한 것을 확인하였다. 특히 탁시폴린 25 또는 50 ㎍/㎖ 처리구는 양성 대조구(RA)의 히알루론산 생성량과 비슷하거나 더 많은 히알루론산이 생산된 것을 확인하였다(도 2B).
실시예 3.
탁시폴린의 피부 주름 개선 효과 분석
피부의 진피 조직에서 콜라겐(collagen)과 엘라스틴(elastin)이 구조를 형성하여 피부의 탄력성을 유지시켜 주는데, 콜라겐 분해 효소인 콜라게나아제(collagenase)와 엘라스틴 분해 효소인 엘라스타아제(elastase)가 피부 세포 내에서 과다 발현되면 콜라겐과 엘라스틴의 구조가 깨지면서 피부의 탄력이 저하되고 주름 생성이 촉진되어 피부 노화가 발생한다.
본 발명의 탁시폴린이 콜라게나아제 활성에 미치는 영향을 확인하기 위해 EnzChek Collagenase Assay Kit(Molecular Probes)를 사용하였으며, 대조구에는 클로스트리듐 히스톨리티쿰(Clostridium histolyticum)에서 추출된 콜라게나아제를 처리하였다.
콜라게나아제 활성을 측정한 결과, 1 ㎍/㎖의 탁시폴린 처리구는 대조구에 비해 오히려 콜라게나아제 저해능이 감소하여 콜라게나아제 활성 억제 효과가 거의 없었지만, 5, 10, 25 또는 50 ㎍/㎖의 탁시폴린 처리구에서는 농도 의존적으로 콜라게나아제 저해능이 증가하였고, 특히 50 ㎍/㎖의 탁시폴린 처리구는 대조구에 비해 콜라게나아제 활성이 약 17% 정도 저해된 것을 확인하였다(도 3A).
또한, 탁시폴린이 엘라스타아제 활성에 미치는 영향을 확인하기 위해 EnzChek Elastase Assay Kit(Molecular Probes)를 사용하였으며, 대조구에는 인간 호중구 엘라스타아제(Human leukocyte elastase)를 처리하였다.
엘라스타아제 활성을 측정한 결과, 대조구와 비교하여 1, 5, 10 또는 25 ㎍/㎖의 탁시폴린 처리구는 엘라스타아제 저해 효과가 거의 없었지만, 50 ㎍/㎖의 탁시폴린 처리구에서는 대조구에 비해 엘라스타아제 활성이 약 10% 정도 저해된 것을 확인하였다(도 3B).
상기 결과를 통해, 본 발명의 탁시폴린은 피부 세포에서 천연보습인자인 히알루론산의 생성량을 증가시키고, 콜라게나아제 및 엘라스타아제 활성을 저해시키는 효과가 우수하므로, 피부 주름 개선 또는 피부 보습 증진을 위한 화장료 및 건강기능성 식품의 소재로 사용될 수 있을 것으로 사료되었다.
<110> JEONJU BIOMATERIALS INSTITUTE
<120> Composition for improving skin wrinkle or skin moisturing
comprising taxifolin as effective component
<130> PN20371
<160> 4
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 1
tgaaggtcgg tgtcaacgga 20
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 2
agggatctcg ctcctggaa 19
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 3
tttgttcaag tcccagcagc 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 4
atcctcctgg gtggtgtgat 20
Claims (3)
- 탁시폴린(Taxifolin) 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 또는 피부 보습 증진용 화장료 조성물.
- 탁시폴린(Taxifolin) 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 또는 피부 보습 증진용 건강기능식품 조성물.
- 제2항에 있어서, 상기 건강기능식품은 이너뷰티 푸드(inner beauty food)인 것을 특징으로 하는 피부 주름 개선 또는 피부 보습 증진용 건강기능식품 조성물.
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| KR1020200184154A KR20220094230A (ko) | 2020-12-28 | 2020-12-28 | 탁시폴린을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 또는 피부 보습 증진용 조성물 |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020200184154A KR20220094230A (ko) | 2020-12-28 | 2020-12-28 | 탁시폴린을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 또는 피부 보습 증진용 조성물 |
Publications (1)
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| KR20220094230A true KR20220094230A (ko) | 2022-07-06 |
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ID=82400455
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| KR1020200184154A KR20220094230A (ko) | 2020-12-28 | 2020-12-28 | 탁시폴린을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 또는 피부 보습 증진용 조성물 |
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| KR (1) | KR20220094230A (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102565298B1 (ko) * | 2023-01-26 | 2023-08-11 | (주)원오세븐 | 고함량의 탁시폴린을 함유하는 식물 추출물 및 이의 제조방법 |
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2020
- 2020-12-28 KR KR1020200184154A patent/KR20220094230A/ko not_active Application Discontinuation
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|---|---|---|---|---|
| KR102565298B1 (ko) * | 2023-01-26 | 2023-08-11 | (주)원오세븐 | 고함량의 탁시폴린을 함유하는 식물 추출물 및 이의 제조방법 |
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