KR20220075343A - 접합된 헵시딘 모방체 - Google Patents

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KR20220075343A
KR20220075343A KR1020227011086A KR20227011086A KR20220075343A KR 20220075343 A KR20220075343 A KR 20220075343A KR 1020227011086 A KR1020227011086 A KR 1020227011086A KR 20227011086 A KR20227011086 A KR 20227011086A KR 20220075343 A KR20220075343 A KR 20220075343A
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hepcidin
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데이비드 와이. 리우
그레고리 토마스 본
루파 타라나스
수닐 쿠마르 굽타
니쉬트 바추랄 모디
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프로타고니스트 테라퓨틱스, 인코포레이티드
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Abstract

본 발명은 헵시딘 유사체 및 관련 약제학적 조성물 및 진성 적혈구증가증의 치료에서의 이의 용도에 관한 것이다.

Description

접합된 헵시딘 모방체
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 미국 가출원 제62/895,201호(출원일: 2019년 9월 3일), 미국 가출원 제62/983,515호(출원일: 2020년 2월 28일), 미국 가출원 제63/020,945호(2020년 5월 6일) 및 미국 가출원 제63/059,747호(출원일: 2020년 7월 31일)에 대한 우선권을 주장하며, 이들 모두는 전문이 참조에 의해 본 명세서에 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 형식으로 전자적으로 제출된 서열 목롤을 포함하고, 이의 전문은 참조에 의해 본 명세서에 포함된다. 2020년 9월 1일자로 상기 ASCII 사본은 PRTH_037_05WO_ST25.txt이고, 25KB 크기이다.
기술분야　
본 발명은 특히 펩타이드 단량체 및 펩타이드 이량체 및 이들의 접합체 및 유도체 모두를 비롯하여 특정 헵시딘(hepcidin) 펩타이드 유사체 및 진성 적혈구증가증(PV)의 치료 및/또는 예방에서의 펩타이드 유사체의 용도에 관한 것이다.
간에 의해 생산되는 펩타이드 호르몬인 헵시딘(LEAP-1이라고도 지칭됨)은 인간 및 다른 포유동물에서 철 항상성의 조절인자이다. 헵시딘은 이의 수용체, 철 외수송 채널 페로포틴(ferroportin)에 결합하여 이의 내재화(internalization) 및 분해를 유발함으로써 작용한다. 인간 헵시딘은 25-아미노산 펩타이드(Hep25)이다. 문헌[Krause et al. (2000) FEBS Lett 480:147-150 및 Park et al. (2001) J Biol Chem 276:7806-7810] 참조. 헵시딘의 생물활성 25-아미노산 형태의 구조는, 문헌[Jordan et al. J Biol Chem 284:24155-67]에 의해 기재된 바와 같이 4개의 이황화 결합을 형성하는 8개의 시스테인을 갖는 단순 헤어핀이다. 철-조절 기능을 위해서는 N 말단 영역이 필요하며, 5개의 N-말단 아미노산 잔기의 결실은 철-조절 기능의 손실을 유발한다. 문헌[Nemeth et al. (2006) Blood 107:328-33] 참조.
비정상적인 헵시딘 활성은 유전성 혈색소침착증(hereditary hemochromatosis: HH) 및 철-부하 빈혈을 포함하는 철-과부하 질환과 연관된다. 유전성 혈색소침착증은 헵시딘 결핍에 의해 또는 일부 경우에는 헵시딘 내성에 의해 주로 유발되는 유전적 철 과부하 질환이다. 이는 식이로부터의 과도한 철 흡수 및 철 과부하의 발생을 가능하게 한다. HH의 임상 양상은 간 질환(예를 들어, 간 경변증 및 간세포 암종), 당뇨병 및 심부전을 포함할 수 있다. 현재, HH에 대한 유일한 치료는 규칙적인 정맥절개술(phlebotomy)이며, 이는 환자에게 매우 부담이다. 철-부하 빈혈은 β-지중해빈혈(thalassemia)과 같은 비효과적인 적혈구 생성을 갖는 유전성 빈혈이며, 이는 중증의 철 과부하가 동반된다. 이러한 환자의 경우, 철 과부하로부터의 합병증은 이환율 및 치사율의 주원인이다. 헵시딘 결핍은 비-수혈 환자에서 철 과부하의 주원인이고, 수혈 환자에서 철 과부하에 기여한다. 이러한 환자에서 철 과부하에 대한 현재의 치료는 철 킬레이트화인데, 이는 매우 부담이 되고, 때때로 비효과적이며, 빈번한 부작용을 수반한다. 헵시딘은, 부분적으로 폴딩 동안 단백질의 응집 및 침전으로 인한 어려운 합성 공정을 포함하고, 이는 결국 제품의 높은 비용을 유발하여 약물로서의 이의 용도를 제한하는 다수의 한계를 나타낸다.
미국 특허 제US 9,822,157호 및 제US 10,030,061호에는 유전성 혈색소침착증 및 철-부하 빈혈을 포함하는 철 과부하 질환을 치료하기 위한 신규한 헵시딘 유사체 및 이의 용도가 기재되어 있다.
PCT 출원 공개, 제WO15200916호에는 철 과부하 질환을 치료하기 위한 추가의 신규한 헵시딘 유사체 및 이의 용도가 기재되어 있다.
PCT 출원 공개, 제WO17117411호에는 철 과부하 질환을 치료하기 위한 생체내 반감기가 개선된 추가의 신규한 헵시딘 유사체 및 이의 용도가 기재되어 있다.
PCT 출원 공개, 제WO18048944호에는 대상체에서 철 과부하를 치료 또는 예방하거나/또는 대상체에서 혈청 철 수준을 감소시키기 위한 추가의 신규한 헵시딘 유사체 및 이의 용도가 기재되어 있다.
PCT 출원 공개, 제WO18128828호에는 철 과부하 질환, 예컨대, 혈색소침착증, 철-부하 빈혈, 예컨대, 지중해빈혈의 예방 및 치료를 포함하는, 헵시딘-연관 장애를 치료하기 위한 추가의 신규한 헵시딘 유사체 및 이의 용도가 기재되어 있으며, 질환은 비효과적이거나 증강된 적혈구생성과 연관된다.
PCT 출원 공개, 제WO17068089호에는 지중해빈혈 및 혈색소침착증을 치료하기 위한 추가의 신규한 헵시딘 유사체(페로포틴 저해제) 및 이의 용도가 기재되어 있다.
미국 특허, 제US9315545호에는 철 대사 질환, 베타 지중해빈혈, 혈색소침착증, 철-부하 빈혈, 알코올성 간 질환 또는 만성 C형 간염을 치료하기 위한 추가의 신규한 헵시딘 유사체 및 이의 용도가 기재되어 있다.
진성적혈구증가증(PV)은 골수, 적혈구, 거핵구 세포 증식/축적의 증가를 나타내는 만성 진행성 삼계통 클론 장애이며, 세계보건기구(World Health Organization: WHO)는 이를 골수증식성 신생물로 특징규명하였다(Arber et al., 2016,127(20):2391-405). 진단은 2개의 기준으로 정의되는데; 첫 번째는 증가된 적혈구 질량, 삼계통 과세포성을 나타내는 골수 생검 및 JAK2V617F 또는 JAK2 엑손 12 돌연변이의 존재이고, 두 번째 기준은 적혈구증가증, 골수 생검 확인 및 정상보다 낮은 혈청 에리트로포이에틴 수준을 통합한다(문헌[Arber et al., 2016,127(20):2391-405]).
미국에서 추정되는 148,000명의 사람들이 PV를 가지면서 살아가는데, 진단 시 중앙값 연령이 61세이다(문헌[Stein et al., J Clin Oncol. 2015 Nov 20;33(33):3953-60]). 혈액 과점성과 관련된 적혈구증가증 증상은 피로, 뼈 통증, 두통, 현기증, 시각 장애, 비정형 흉통, 소양증, 홍반성 통증 및 감각 이상 등을 포함한다(문헌[Tefferi et al., Blood Cancer J. 2018, 8(1):3]). 임상적 특징은 비장종대, 혈전 및 출혈 합병증, 백혈병 변형의 위험을 포함한다.
PV는 적혈구생성 증가를 특징으로 하는 질환이므로, 고용량의 헵시딘 모방체가 적혈구생성을 감소시킴으로써 이 질환을 개선할 수 있다는 것이 동물 모델에서 밝혀졌다(문헌[Casu et al., Blood. 2016;128(2):265-276]). 인간 PV를 유발하는 이종 JAK2 돌연변이를 발현하는 PV 마우스에서, 미니헵시딘의 투여는 비장 비대를 유의하게 감소시키고, 헤마토크리트를 정상화시킨다. 이러한 연구는 약물-유사 미니헵시딘이 수혈되지 않은 β-지중해빈혈 및 PV에 대한 미래 치료제로서의 잠재력을 갖는다는 것을 나타낸다(문헌[Casu et al., Blood. 2016;128(2):265-276).
고위험 환자 또는 정맥절개술을 견딜 수 없는 환자에서의 PV를 비롯한 PV를 치료 및 예방하기 위한 새로운 치료제 및 방법이 명백하게 필요하다. 본 발명은 PV 치료의 이러한 요구를 다룬다.
구체적인 양상에서, 본 발명은 대상체에게 유효량의 헵시딘 유사체의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법을 제공한다.
보다 구체적인 양상에서, 본 발명은 대상체에게 유효량의 헵시딘 유사체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법을 제공한다.
일 실시형태에서, 헵시딘 유사체는 하기 화학식 (I) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 포함하는 펩타이드를 포함한다:
R1-X-Y-R2 (I)(서열번호 1)
식 중,
R1은 수소, C1-C6 알킬, C6-C12 아릴, C1-C20 알칸오일 또는 pGlu이고;
R2는 NH2 또는 OH이며;
X는 하기 화학식 II를 갖는 펩타이드 서열이고;
X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10 (II)(서열번호 2)
식 중,
X1은 Asp, Ala, Ida, pGlu, bhAsp, Leu, D-Asp이거나 존재하지 않고;
X2는 Thr, Ala 또는 D-Thr이고;
X3은 His, Lys 또는 D-His이며;
X4는 Phe, Ala, Dpa 또는 D-Phe이고;
X5는 Pro, Gly, Arg, Lys, Ala, D-Pro 또는 bhPro이며;
X6은 Ile, Cys, Arg, Lys, D-Ile 또는 D-Cys이고;
X7은 Cys, Ile, Leu, Val, Phe, D-Ile 또는 D-Cys이며;
X8은 Ile, Arg, Phe, Gln, Lys, Glu, Val, Leu 또는 D-Ile이고;
X9는 Phe 또는 bhPhe이며;
X10은 Lys, Phe이거나 존재하지 않고;
Y가 존재하지 않는 경우, X7은 Ile이며;
Y는 하기 화학식 III을 갖는 펩타이드 서열이고:
Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y11-Y12-Y13-Y14-Y15 (III)(서열번호 3)
식 중,
Y1은 Gly, Cys, Ala, Phe, Pro, Glu, Lys, D-Pro, Val, Ser이거나 존재하지 않으며;
Y2는 Pro, Ala, Cys, Gly이거나 존재하지 않고;
Y3은 Arg, Lys, Pro, Gly, His, Ala, Trp이거나 존재하지 않으며;
Y4는 Ser, Arg, Gly, Trp, Ala, His, Tyr이거나 존재하지 않고;
Y5는 Lys, Met, Arg, Ala이거나 존재하지 않으며;
Y6은 Gly, Ser, Lys, Ile, Ala, Pro, Val이거나 존재하지 않고;
Y7은 Trp, Lys, Gly, Ala, Ile, Val이거나 존재하지 않으며;
Y8은 Val, Thr, Gly, Cys, Met, Tyr, Ala, Glu, Lys, Asp, Arg이거나 존재하지 않으며;
Y9는 Cys, Tyr이거나 존재하지 않고;
Y10은 Met, Lys, Arg, Tyr이거나 존재하지 않으며;
Y11은 Arg, Met, Cys, Lys이거나 존재하지 않고;
Y12는 Arg, Lys, Ala이거나 존재하지 않으며;
Y13은 Arg, Cys, Lys, Val이거나 존재하지 않고;
Y14는 Arg, Lys, Pro, Cys, Thr이거나 존재하지 않으며;
Y15는 Thr, Arg이거나 존재하지 않고;
식 중, 상기 화학식 I의 펩타이드는 선택적으로 R1, X 또는 Y 상에서 페길화되고, 상기 펩타이드의 아미노산의 측쇄는 선택적으로 친유성 치환체 또는 중합체 모이어티에 접합된다. 관련 실시형태에서, 화학식 II는 상기와 같이 제시되지만, X3은 D-Lys이다.
일 실시형태에서, R1은 수소, 아이소발레르산, 아이소부티르산 또는 아세틸이다.
본 발명의 헵시딘 유사체 또는 이량체 중 임의의 것의 특별한 실시형태에서, 반감기 연장 모이어티는 C12(라우르산), C14(미스테르산(Mysteric acid)), C16(팔미트산), C18(스테아르산), C20, C12 이산, C14 이산, C16 이산, C18 이산, C20 이산, 바이오틴 및 아이소발레르산으로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, 반감기 연장 모이어티는 펩타이드에 부착된 링커 모이어티에 부착된다. 특정 실시형태에서, 반감기 연장 모이어티는 헵시딘 유사체의 분자량을 약 50D 내지 약 2KD만큼 증가시킨다. 각종 실시형태에서, 반감기 연장 모이어티는 헵시딘 유사체의 혈청 반감기를 증가시키고/시키거나, 용해도를 향상시키고/시키거나 생체이용률을 개선시킨다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드 유사체 또는 이량체는 N-말단 Asp 잔기에 접합된 아이소발레르산 모이어티를 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드 유사체는 아마이드화된 C-말단 잔기를 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체 또는 이량체는 하기열을 포함하거나: Asp-Thr-His-Phe-Pro-Cys-Ile-Lys-Phe-Glu-Pro-Arg-Ser-Lys-Gly-Cys-Lys(서열번호 19), 이 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 94% 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체 또는 이량체는 하기 서열을 포함하거나: Asp-Thr-His-Phe-Pro-Cys-Ile-Lys-Phe-Pro-Arg-Ser-Lys-Gly-Cys-Lys(서열번호 19), 이 서열과 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 94% 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
관련 실시형태에서, 본 발명은 본 발명의 헵시딘 유사체 또는 이량체(또는 이량체의 단량체 소단위)의 펩타이드를 암호화하는 폴리폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
추가의 관련 실시형태에서, 본 발명은 본 발명의 폴리폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터를 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 본 발명은 헵시딘 유사체, 이량체, 폴리폴리뉴클레오타이드 또는 본 발명의 벡터 및 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 비히클을 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 본 발명은 페로포틴을 결합하는 방법 또는 페로포틴 내재화 및 분해를 유도하는 방법을 제공하며, 이 방법은 페로포틴을 본 발명의 적어도 1종의 헵시딘 유사체, 이량체 또는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 본 발명은 진성 적혈구증가증의 치료 방법을 제공한다.
추가 실시형태에서, 본 발명은 대상체에게 유효량의 본 발명의 헵시딘 유사체 또는 약제학적 조성물을 제공하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법을 포함한다. 특정 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 약제학적 조성물은 경구, 정맥내, 복막, 피부내, 피하, 근육내, 척추강내, 흡입, 증기요법(vaporization), 분무요법(nebulization), 설하, 협측, 비경구, 직장, 질 또는 국소 투여 경로에 의해서 대상체에게 제공된다. 특정 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 약제학적 조성물은 경구 또는 피하 투여 경로에 의해서 상기 대상체에게 제공된다. 특정 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 약제학적 조성물은 대상체에게 최대 약 1일 2회, 최대 또는 약 1일 1회, 최대 또는 약 2일마다 1회, 최대 또는 약 주 1회 또는 최대 또는 약 월 1회 제공된다.
특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체는 대상체에게 약 10㎎ 내지 약 100㎎, 약 10㎎ 내지 약 80㎎ 또는 약 10㎎ 내지 약 50㎎의 투여량으로 제공된다. 보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체는 대상체에게 약 20㎎ 내지 약 40㎎의 투여량으로 제공된다. 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체는 대상체에게 약 10㎎, 약 15㎎, 약 20㎎, 약 25㎎, 약 30㎎, 약 40㎎, 약 50㎎, 약 60㎎, 약 70㎎ 또는 약 80㎎의 투여량으로 제공된다. 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체는 대상체에게 약 주 1회 제공된다. 또 다른 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체는 대상체에게 약 주 2회, 예를 들어, 피하로 제공된다.
특정 실시형태에서, 개시된 방법 중 임의의 것은 헵시딘 유사체를 투여한 후 하나 이상의 시점에 대상체의 헤마토크리트 수준을 결정하는 단계 및 대상체에게 투여되는 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 양을 유지시키거나 조정하는 단계를 더 포함하되, 이 양은 대상체의 결정된 헤마토크리트가 44% 또는 45%를 초과하는 경우에는 증가되고, 이 양은 대상체의 결정된 헤마토크리트가 37.5% 또는 40% 미만인 경우에는 감소되고, 대상체의 결정된 헤마토크리트가 37.5% 내지 45%, 37.5% 내지 44%, 40% 내지 45% 또는 40% 내지 44%인 경우에는 이 양을 유지시킨다.
또 다른 실시형태에서, 본 발명은 본 발명의 헵시딘 유사체 또는 이량체를 대상체에게 선택적으로 경구로 또는 피하로 전달하기 위한, 본 발명의 약제학적 조성물을 포함하는 디바이스를 제공한다.
추가의 또 다른 실시형태에서, 본 발명은 시약, 디바이스 또는 설명서 또는 이들의 조합과 함께 패키징된 본 발명의 약제학적 조성물을 포함하는 키트를 포함한다.
개시된 방법 중 임의의 것의 특별한 실시형태에서, 진성 적혈구증가증은 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증 또는 저위험 환자에서의 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증이다.
개시된 방법 중 임의의 것의 특별한 실시형태에서, 대상체는 저위험 진성 적혈구증가증 환자, 고위험 진성 적혈구증가증 환자, 증상이 있는 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증 환자, 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증을 갖는 고위험 환자 또는 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증을 갖는 저위험 환자이다.
개시된 방법 중 임의의 것의 특별한 실시형태에서, 대상체는 진성 적혈구증가증으로 진단되고, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드를 대상체에게 투여하기 전에 24주 동안 45% 이하의 헤마토크리트를 목표로 하기 위해서 적어도 3회의 정맥절개술을 제공받은 적이 있다.
개시된 방법 중 임의의 것의 특정 실시형태에서, 대상체는 약 5㎎ 내지 약 200㎎, 예를 들어, 약 10㎎ 내지 약 100㎎, 약 20㎎ 내지 약 100㎎, 약 20㎎, 약 40㎎, 약 80㎎, 약 100㎎ 또는 약 120㎎의 헵시딘 유사체 또는 펩타이드가 투여된다.
개시된 방법 중 임의의 것의 특정 실시형태에서, 약제학적 조성물은 피하 주사를 통해서 투여된다.
개시된 방법 중 임의의 것의 특정 실시형태에서, 약제학적 조성물은 일정 시간 기간에 걸쳐서 약 주 단위로 투여된다.
개시된 방법 중 임의의 것의 특정 실시형태에서, 투여되는 헵시딘 유사체 또는 펩타이드의 양은 일정 시간 기간에 걸쳐서 증가된다.
개시된 방법 중 임의의 것의 특정 실시형태에서, 대상체는 포유동물, 예를 들어, 인간이다.
개시된 방법 중 임의의 것의 특정 실시형태에서, 방법은 대상체의 헤마토크리트 수준을 45% 이하로 감소시키고/시키거나, 대상체의 헤마토크리트를 적어도 3% 감소시키고/시키거나 대상체의 혈청 페리틴을 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 대상체는 치료 기간 동안 정맥절개술 없이, 예를 들어, 일정 시간 기간 동안 약 주 1회의 치료가 유지된다.
도 1A 및 1B는 화합물 A 및 화합물 B에 대한 Cobas Iron2 분석 실험에서 얻은 데이터를 기재한 도면. 도 1A는 화합물 A로 처리한 후 표시된 시간에 화합물 A의 혈청 철 수준 및 혈청 농도를 나타내는 그래프이다. 도 1B는 화합물 B로 처리한 후 표시된 시간에 화합물 B의 혈청 철 수준 및 혈청 농도를 나타내는 그래프이다.
도 2는 1(●), 3(□) 및 10(■)㎎/㎏/의 용량으로 비히클(○) 또는 화합물 A를 4회 투여 동안 주 1회 피하 투여한 후 그리고 28일의 회복 기간 후 수컷 시노몰거스 원숭이에서 헤마토크리트 및 RBC 지수의 시간적 프로파일을 도시한 도면. 화합물 A는 철-제한 적혈구생성을 나타내는 2차 혈액학적 지수(평균 미립자 헤모글로빈 농도, MCHC 및 평균 미립자 헤모글로빈, MCH)의 변화를 유도하였다. 각각의 점은 주 치료(모든 군)에서 최대 6마리 동물 및 회복 단계(비히클 및 10㎎/㎏ 화합물 A)에서 최대 2마리 동물의 평균 ± SD를 나타낸다. 화살표는 화합물 A가 투여된 시기를 나타낸다.
도 3은 화합물 A가 헤마토크리트(Hct) 및 2차 혈액학적 지수에서 상당한 변화를 유도한다는 것을 입증한 도면. 0.6(●), 2(□) 및 6(■)㎎/㎏의 용량으로 비히클(○) 또는 화합물 A를 연속 13주 동안 주 1회 연속 피하 투여한 후 그리고 그 다음 35일의 회복 기간 후 Hct, 평균 미립자 부피(mean corpuscular volume: MCV), 평균 미립자 헤모글로빈(mean corpuscular hemoglobin: MCH), 평균 미립자 헤모글로빈 농도(mean corpuscular hemoglobin concentration: MCHC)의 변화를 평가한 도면. 화살표는 제1일에 시작하는 투여일을 나타낸다. 각각의 점은 주 단계에서 최대 6마리의 동물/성별 및 회복 단계에서 최대 2마리의 동물/성별의 평균 ± SD를 나타낸다.
도 4는 빌리루빈 프로파일이 철-풍부 시노몰거스 원숭이에서 철-제한 적혈구생성과 일치함을 도시한 도면. 0.6(●), 2(□) 및 6(■)㎎/㎏의 용량으로 비히클(○) 또는 화합물 A를 연속 13주 동안 주 1회 연속 피하 투여한 후 그리고 그 다음 35일의 회복 기간 후 수컷(좌측) 및 암컷 시노몰거스 원숭이(우측)에서 총 빌리루빈 수준. 화살표는 제1일에 시작하는 투여일을 나타낸다. 각각의 점은 주 단계에서 최대 6마리의 동물/성별 및 회복 단계에서 최대 2마리의 동물/성별의 평균 ± SD를 나타낸다.
도 5는 0.6(●), 2(□) 및 6(■)㎎/㎏의 용량으로 비히클(○) 또는 화합물 A를 연속 13주 동안 주 1회 연속 피하 투여한 후 그리고 그 다음 35일의 회복 기간 후 수컷(좌측) 및 암컷 시노몰거스 원숭이(우측)에서 혈소판 프로파일을 도시한 도면. 화살표는 제1일에 시작하는 투여일을 나타낸다. 각각의 점은 주 단계에서 최대 6마리의 동물/성별 및 회복 단계에서 최대 2마리의 동물/성별의 평균 ± SD를 나타낸다.
도 6은 II상 임상 시험 설계의 다이어그램을 제공한 도면.
도 7은 13명의 인간 PV 환자에 대한 치료적 정맥절개술 및 화합물 A의 표시된 투여량으로의 치료의 시기를 도시한 타임라인.
도 8은 표시된 시점에서 화합물 A로 치료된 PV 환자에서 페리틴(ng/㎖) 수준을 나타낸 그래프. 대상체 번호는 표 9에 표시된 번호와 관련이 있다.
도 9는 표시된 시점에서 화합물 A로 치료된 PV 환자에서 TSAT(%)를 나타낸 그래프. 대상체 번호는 표 9에 표시된 번호와 관련이 있다.
도 10은 표시된 시점에서 화합물 A로 치료된 PV 환자에서 MCV(fL)를 나타낸 그래프. 대상체 번호는 표 9에 표시된 번호와 관련이 있다.
도 11은 표시된 시점에서 화합물 A로 치료된 PV 환자에서 MCH(pg)를 나타낸 그래프. 대상체 번호는 표 9에 표시된 번호와 관련이 있다.
도 12는 표시된 시점에서 화합물 A로 치료된 PV 환자에서 헤마토크리트(%)를 나타낸 그래프. 대상체 번호는 표 9에 표시된 번호와 관련이 있다.
도 13은 표시된 시점에서 화합물 A로 치료된 PV 환자에서 적혈구(106/uL)를 나타낸 그래프. 대상체 번호는 표 9에 표시된 번호와 관련이 있다.
도 14는 표시된 시점에서 표시된 투여량의 화합물 A로 치료하기 전 및 후에 PV 환자에서 혈소판(103/uL)을 나타낸 그래프. 도 14 내지 도 16의 경우, 표시된 대상체 번호는 다음과 같이 표 9에 제공된 대상체 번호와 관련이 있다: 1501-01 = 3; 1501-02 = 5; 1502-1 = 1; 1502-02 = 2; 1502-04 = 4; 1505-01 = 6; 1505-02 = 7; 및 1509-01 = 8.
도 15는 표시된 시점에서 표시된 투여량의 화합물 A로 치료하기 전 및 후에 PV 환자에서 망상적혈구(%)를 나타낸 그래프.
도 16은 표시된 시점에서 표시된 투여량의 화합물 A로 치료하기 전 및 후에 PV 환자에서 백혈구(/uL)를 나타낸 그래프.
도 17A 및 도 17B는 표시된 양의 화합물 A를 투여한 후 다양한 시간에 PV 환자에서 화합물 A의 혈장 농도를 나타낸 도면. 도 17A는 개별 시점에 대한 데이터를 나타내고, 도 17B는 특정 시간 간격에 대한 평균을 나타낸다.
본 개시내용은 일반적으로 진성 적혈구증가증(PV)을 치료 및 예방하기 위한 헵시딘 유사체 펩타이드의 용도에 관한 것이다.
간에 의해 생산되는 펩타이드 호르몬인 헵시딘(LEAP-1이라고도 지칭됨)은 인간 및 다른 포유동물에서 철 항상성의 조절인자이다. 헵시딘은 이의 수용체, 철 외수송 채널 페로포틴(ferroportin)에 결합하여 이의 내재화(internalization) 및 분해를 유발함으로써 작용한다. 인간 헵시딘은 25-아미노산 펩타이드(Hep25)이다. 문헌[Krause et al. (2000) FEBS Lett 480:147-150 및 Park et al. (2001) J Biol Chem 276:7806-7810] 참조. 헵시딘의 생물활성 25-아미노산 형태의 구조는, 문헌[Jordan et al. J Biol Chem 284:24155-67]에 의해 기재된 바와 같이 4개의 이황화 결합을 형성하는 8개의 시스테인을 갖는 단순 헤어핀이다. 철-조절 기능을 위해서는 N 말단 영역이 필요하며, 5개의 N-말단 아미노산 잔기의 결실은 철-조절 기능의 손실을 유발한다. 문헌[Nemeth et al. (2006) Blood 107:328-33] 참조.
비정상적인 헵시딘 활성은 유전성 혈색소침착증(hereditary hemochromatosis: HH) 및 철-부하 빈혈을 포함하는 철-과부하 질환과 연관된다. 유전성 혈색소침착증은 헵시딘 결핍에 의해 또는 일부 경우에는 헵시딘 내성에 의해 주로 유발되는 유전적 철 과부하 질환이다. 이는 식이로부터의 과도한 철 흡수 및 철 과부하의 발생을 가능하게 한다. HH의 임상 양상은 간 질환(예를 들어, 간 경변증 및 간세포 암종), 당뇨병 및 심부전을 포함할 수 있다. 철-부하 빈혈은 β-지중해빈혈(thalassemia)과 같은 비효과적인 적혈구 생성을 갖는 유전성 빈혈이며, 이는 중증의 철 과부하가 동반된다.
헵시딘은, 부분적으로 폴딩 동안 단백질의 응집 및 침전으로 인한 어려운 합성 공정을 포함하고, 이는 결국 제품의 높은 비용을 유발하여 약물로서의 이의 용도를 제한하는 다수의 한계를 나타낸다. 본 개시내용은 헵시딘 활성을 갖고, 다른 이로운 물성, 예컨대, 개선된 용해도, 안정성 및/또는 효력을 또한 보유하는 헵시딘 유사체 펩타이드를 제공하여, 헵시딘-유사 생물의약품(biologics)이 저비용으로 생산될 수 있고, 진성 적혈구증가증을 치료하고 예방하는 데 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 일반적으로 헵시딘 유사체 펩타이드 및 이의 제조 방법 및 사용 방법에 관한 것이다. 특정 실시형태에서, 헵시딘 유사체는 1종 이상의 헵시딘 활성을 나타낸다. 특정 실시형태에서, 본 발명은 분자내 결합, 예를 들어, 분자내 이황화 결합을 통해 고리화된 구조를 형성하는 1종 이상의 펩타이드 소단위를 포함하는 헵시딘 펩타이드 유사체에 관한 것이다. 특별한 실시형태에서, 고리화된 구조는 비고리화된 헵시딘 펩타이드 및 이의 유사체와 비교할 때 증가된 효력 및 선택성을 갖는다. 특별한 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체 펩타이드는 헵시딘 또는 이전의 헵시딘 유사체와 비교할 때 예를 들어, 경구로 전달되는 경우 증가된 반감기를 나타낸다.
정의 및 명명법
본 명세서에 달리 정의되지 않는 한, 본 출원에 사용되는 과학 기술 용어는 당업자가 통상적으로 이해하는 의미를 가질 것이다. 일반적으로, 본 명세서에 기재된 화학, 분자생물학, 세포 및 암 생물학, 면역학, 미생물학, 약리학, 단백질 및 핵산 화학의 기술에, 그리고 이와 관련하여 사용되는 명명법은 당업계에 널리 공지되고, 일반적으로 사용되는 것들이다.
달리 명시되지 않는 한 본 명세서에 사용되는 하기 용어는 그들에게 부여된 의미를 갖는다.
본 명세서 전체에 걸쳐, 용어 "포함하다" 또는 "포함한다" 또는 "포함하는"과 같은 변형은 임의의 다른 정수(또는 구성성분) 또는 정수(또는 구성성분)의 그룹의 배제가 아니라, 언급된 정수(또는 구성성분) 또는 정수(또는 구성성분)의 그룹의 포함을 시사하는 것으로 이해될 것이다.
단수 형태는 문맥상 명확하게 달리 지시되지 않는 한, 복수형을 포함한다.
용어 "포함하는"은 "포함하지만 이들로 제한되지 않는"을 의미하기 위해 사용된다. "포함하는" 및 "포함하지만 이들로 제한되지 않는"은 상호 호환적으로 사용된다.
용어 "환자", "대상체" 및 "개체"는 상호 호환적으로 사용될 수 있으며, 인간 또는 비-인간 동물을 지칭한다. 이들 용어는 포유동물, 예컨대, 인간, 영장류, 가축(예를 들어, 소, 돼지), 반려 동물(예를 들어, 개, 고양이) 및 설치류(예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함한다. 용어 "포유동물"는 임의의 포유동물 종, 예컨대, 인간, 마우스, 래트, 개, 고양이, 햄스터, 기니 피그, 토끼, 가축 등을 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 용어 "펩타이드"는 펩타이드 결합에 의해 함께 연결된 2개 이상의 아미노산의 서열을 광범위하게 지칭한다. 이 용어는 아미노산의 중합체의 특정 길이를 내포하는 것이 아니며, 재조합 기술, 화학적 합성 또는 효소적 합성을 사용하여 폴리펩타이드를 제조하는지 또는 폴리펩타이드가 자연적으로 발생한 것인지 여부를 시사하거나 구별하고자 하는 것이 아님을 이해해야 한다.
본 명세서에 사용되는 용어 "펩타이드 유사체"는, 헵시딘과 공통적인 하나 이상의 구조적 특징 및/또는 작용 활성 또는 이의 작용 영역을 포함하는 펩타이드 단량체 및 펩타이드 이량체를 광범위하게 지칭한다. 특정 실시형태에서, 펩타이드 유사체는 헵시딘과 실질적인 아미노산 서열 동일성을 공유하는 펩타이드, 예를 들어, 야생형 헵시딘, 예를 들어, 인간 헵시딘 아미노산 서열에 비교하여 하나 이상의 아미노산 삽입, 결실 또는 치환을 포함하는 펩타이드를 포함한다. 특정 실시형태에서 펩타이드 유사체는, 예를 들어, 또 다른 화합물에 대한 접합과 같은 하나 이상의 추가의 변형을 포함한다. 용어 "펩타이드 유사체"는 본 발명의 임의의 펩타이드 단량체 또는 펩타이드 이량체를 포괄한다. 특정 예에, 본 명세서에서 "펩타이드 유사체"는 또한 또는 대안적으로 "헵시딘 유사체", "헵시딘 펩타이드 유사체" 또는 "헵시딘 유사체 펩타이드"라고 지칭될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 "서열 동일성", "% 동일성", "% 상동성" 또는, 예를 들어, "에 대해 50% 동일한 서열"을 포함하는 설명은, 비교 윈도우에 걸쳐 뉴클레오타이드-대-뉴클레오타이드 기준 또는 아미노산-대-아미노산 기준 상에서 서열이 동일한 정도를 지칭한다. 따라서, "서열 동일성의 백분율"는 비교 윈도우에 걸쳐 최적으로 정렬된 2개의 서열을 비교하는 단계, 동일한 핵산 염기(예를 들어, A, T, C, G, I) 또는 동일한 아미노산 잔기(예를 들어, Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Lys, Arg, His, Asp, Glu, Asn, Gln, Cys 및 Met)가 둘 모두의 서열 내에 발생하는 위치의 개수를 결정하여 일치하는 위치의 개수를 산출하는 단계, 일치하는 위치의 개수를 비교 윈도우 내의 위치의 총 개수(즉, 윈도우 크기)로 나누는 단계 및 그 결과에 100을 곱하여 서열 동일성의 백분율을 산출하는 단계에 의해 계산할 수 있다.
서열들 사이의 서열 유사성 또는 서열 동일성(이 용어들은 본 명세서에서 호환적으로 사용됨)의 계산은 하기와 같이 수행될 수 있다. 2개의 아미노산 서열 또는 2개의 핵산 서열의 % 동일성을 결정하기 위해, 최적 비교 목적으로 서열들을 정렬할 수 있다(예를 들어, 최적 정렬을 위해 제1 및 제2 아미노산 또는 핵산 서열 중 하나 또는 양자 모두에 갭을 도입하고 비교 목적으로 비-상동 서열을 무시할 수 있음). 특정 실시형태에서, 비교 목적으로 정렬되는 기준 서열의 길이는 기준 서열의 길이의 적어도 30%, 바람직하게 적어도 40%, 보다 바람직하게 적어도 50%, 60%, 보다 더 바람직하게 적어도 70%, 80%, 90%, 100%이다. 이어서, 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드를 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오타이드 위치에서 비교한다. 제1 서열에서의 위치가 제2 서열에서의 상응하는 위치와 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드에 의해 점유되는 경우, 그 위치에서 분자들은 동일하다.
2개 서열 사이의 % 동일성은, 2개 서열의 최적 정렬을 위해 도입될 필요가 있는 갭의 개수 및 각각의 갭의 길이를 고려하여, 서열들에 의해 공유되는 동일한 위치의 개수의 함수이다.
2개 서열 사이의 서열 비교 및 % 동일성 결정은 수학적 알고리즘을 사용하여 수행할 수 있다. 일부 실시형태에서, GCG 소프트웨어 패키지 내의 GAP 프로그램에 포함된 문헌[Needleman and Wunsch, (1970, J. Mol. Biol. 48: 444-453)]의 알고리듬을 사용하여, 블로섬(Blossum) 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스 및 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 가중치를 사용하여, 2개 아미노산 서열 사이의 % 동일성을 결정한다. 추가의 또 다른 바람직한 실시형태에서, GCG 소프트웨어 패키지 내의 GAP 프로그램을 사용하여, NWSgapdna.CMP 매트릭스 및 40, 50, 60, 70 또는 80의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 가중치를 사용하여, 2개 뉴클레오타이드 서열 사이의 % 동일성을 결정한다. 또 다른 예시적인 파라미터 세트는 갭 페널티가 12이고, 갭 연장 페널티가 4이며, 프레임쉬프트 변위 갭 페널티가 5인 Blossum 62 점수화 매트릭스를 포함한다. 또한, ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 포함된 문헌[E. Meyers and W. Miller (1989, Cabios, 4: 11-17]의 알고리듬을 사용하여, PAM120 가중치 잔기 표(weight residue table), 12의 갭 길이 페널티 및 4의 갭 페널티를 사용하여, 2개 아미노산 또는 뉴클레오타이드 서열 사이의 % 동일성을 결정할 수 있다.
예를 들어, 다른 패밀리 구성원 또는 관련 서열을 식별하기하기 위해, 본 명세서에 기재된 펩타이드 서열을 "질의 서열"로 사용하여 공용 데이터베이스에 대한 검색을 수행할 수 있다. 문헌[Altschul, et al., (1990, J. Mol. Biol, 215: 403-10)]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램(버전 2.0)을 사용하여 이러한 검색을 수행할 수 있다. NBLAST 프로그램(점수=100, 단어길이=12)으로 BLAST 뉴클레오타이드 검색을 수행하여 본 발명의 핵산 분자에 상동성인 뉴클레오타이드 서열을 얻을 수 있다. XBLAST 프로그램(점수=50, 단어길이= 3)으로 BLAST 단백질 검색을 수행하여 본 발명의 단백질 분자에 상동성인 아미노산 서열을 얻을 수 있다. 비교 목적으로 갭이 있는 정렬을 얻기 위해, 문헌[Altschul et al. (Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997)]에 기재된 바와 같이 갭이 있는 BLAST를 이용할 수 있다. BLAST 및 갭이 있는 BLAST 프로그램을 이용하는 경우, 각각의 프로그램(예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 기본 파라미터를 사용할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 용어 "보존적 치환"은 하나 이상의 아미노산이 생물학적으로 유사한 다른 잔기에 의해 대체된다는 것을 나타낸다. 예는 유사한 특징을 갖는 아미노산 잔기, 예를 들어, 작은 아미노산, 산성 아미노산, 극성 아미노산, 염기성 아미노산, 소수성 아미노산 및 방향족 아미노산의 치환을 포함한다. 예를 들어, 하기 표를 참조한다. 본 발명의 일부 실시형태에서는, 하나 이상의 Met 잔기가 노르류신(Nle)으로 치환되며, 이는 Met에 대한 생물동배체(bioisostere)이지만 Met와는 대조적으로 용이하게 산화되지 않는다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 Trp 잔기는 Phe로 치환되거나, 하나 이상의 Phe 잔기는 Trp으로 치환되는 반면, 일부 실시형태에서, 하나 이상의 Pro 잔기는 Npc로 치환되거나, 하나 이상의 Npc 잔기는 Pro으로 치환된다. 내인성 포유동물 펩타이드 및 단백질에서 정상적으로 발견되지 않는 잔기에 의한 보존적 치환의 또 다른 예는, 예를 들어, 오르니틴, 카나바닌, 아미노에틸시스테인 또는 또 다른 염기성 아미노산에 의한 Arg 또는 Lys의 보존적 치환이다. 일부 실시형태에서, 또 다른 보존적 치환은 하나 이상의 Pro 잔기의 bhPro 또는 Leu 또는 D-Npc(아이소니페코트산)로의 치환이다. 펩타이드 및 단백질에서의 표현형 침묵 치환에 관한 추가의 정보에 대해서는, 예를 들어, 문헌[Bowie et. al. Science 247, 1306-1310, 1990]을 참조한다. 하기 도표에서, 아미노산의 보존적 치환은 물리화학적 특성에 의해 분류된다. I: 중성, 친수성, II: 산 및 아마이드, III: 염기성, IV: 소수성, V: 방향족, 벌키(bulky) 아미노산.
Figure pct00001
하기 도표에서, 아미노산의 보존적 치환은 물리화학적 특성에 의해 분류된다. VI: 중성 또는 소수성, VII: 산성, VIII: 염기성, IX: 극성, X: 방향족.
Figure pct00002
본 명세서에 사용되는 용어 "아미노산" 또는 "임의의 아미노산"은, 자연 발생 아미노산(예를 들어, a-아미노산), 비자연(unnatural) 아미노산, 변형된 아미노산 및 비정규(non-natural) 아미노산을 포함하는 임의의 모든 아미노산을 지칭한다. 그것은 D- 및 L-아미노산 둘 다를 포함한다. 자연 아미노산은, 예를 들어, 펩타이드 쇄 내에 조합되어 방대한 배열의 단백질의 빌딩-블록을 형성하는 23개의 아미노산과 같은, 자연에서 발견되는 것을 포함한다. 박테리아 외피 및 일부 항생제에서는 몇몇 D-아미노산이 발생하지만, 이들은 주로 L 입체이성질체이다. 20개의 "표준" 자연 아미노산은 상기 표에 열거되어 있다. "비-표준" 자연 아미노산은 피롤라이신(메탄생성 유기체 및 다른 진핵생물에서 발견됨), 셀레노시스테인(대부분의 진핵생물 뿐 아니라 다수의 비진핵 생물(noneukaryote)에 존재함) 및 N-폼일메티오닌(박테리아, 미토콘드리아 및 엽록체에서 시작 코돈 AUG에 의해 암호화됨)이다. "비자연" 또는 "비정규" 아미노산은, 자연 발생하거나 화학적으로 합성되는 비-단백질생성 아미노산(즉, 유전 암호에서 자연적으로 암호화되거나 발견되지 않는 것)이다. 140개가 넘는 자연 아미노산이 공지되어 있으며, 수 천 개의 더 많은 조합이 가능하다. "비자연" 아미노산의 예는 β-아미노산(β3 및 β2), 동종-아미노산, 프롤린 및 피루브산 유도체, 3-치환 알라닌 유도체, 글리신 유도체, 고리-치환 페닐알라닌 및 티로신 유도체, 선형 코어 아미노산, 다이아미노산, D-아미노산 및 N-메틸 아미노산을 포함한다. 비자연 또는 비정규 아미노산은 변형된 아미노산을 또한 포함한다. "변형된" 아미노산은 아미노산 상에 자연적으로 존재하지 않는 기, 기들 또는 화학 모이어티를 포함하도록 화학적으로 변형된 아미노산(예를 들어, 자연 아미노산)을 포함한다.
당업자에게 명확한 바와 같이, 본 명세서에 개시된 펩타이드 서열은 좌측으로부터 우측으로 진행하는 것으로 나타내며, 서열의 좌측 단부는 펩타이드의 N-말단이고 서열의 우측 단부는 펩타이드의 C-말단이다. 본 명세서에 개시된 서열 중에는 서열의 아미노 말단(N-말단)에 "Hy-" 모이어티를 포함하고, 서열의 카복시 말단(C-말단)에 "-OH" 모이어티 또는 "-NH2" 모이어티를 포함하는 서열이 있다. 이러한 경우, 달리 표시되지 않는 한, 문제의 서열의 N-말단에 있는 "Hy-" 모이어티는 수소 원자를 표시하며, N-말단에 있는 유리 1차 또는 2차 아미노기의 존재에 상응하는 반면, 서열의 C-말단에 있는 "-OH" 또는 "-NH2" 모이어티는 각각 하이드록시기 또는 아미노기를 표시하며, C-말단에 있는 아미도(CONH2)기의 존재에 상응한다. 본 발명의 각각의 서열에서, C-말단 "-OH" 모이어티는 C-말단 "-NH2" 모이어티를 대체할 수 있으며, 그 역도 성립한다. 특히 아미노 말단 또는 카복시 말단이 링커 또는 다른 화학 모이어티, 예를 들어, PEG 모이어티에 결합되는 상황에서, 아미노 말단 또는 카복시 말단에 있는 모이어티는 결합, 예를 들어, 공유 결합일 수 있다는 것이 추가로 이해된다.
본 명세서에 사용되는 용어 "NH2"는 폴리펩타이드의 아미노 말단에 존재하는 유리 아미노기를 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 용어 "OH"는 펩타이드의 카복시 말단에 존재하는 유리 카복시기를 지칭한다. 추가로, 본 명세서에 사용되는 용어 "Ac"는 폴리펩타이드의 C- 또는 N-말단의 아실화를 통한 아세틸 보호를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 용어 "카복시"는 -CO2H를 지칭한다.
대부분, 본 명세서에 사용되는 자연적으로 발생하는 아미노아실 잔기 및 비-자연 발생 아미노아실 잔기의 명칭은 문헌["Nomenclature of α-Amino Acids (Recommendations, 1974)" Biochemistry, 14(2), (1975)]에 제시된 바와 같은 IUPAC-IUB 생화학 명명법 위원회(IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature) 및 IUPAC 유기 화학 명명법 위원회(IUPAC Commission on the Nomenclature of Organic Chemistry)에 의해 제시된 명명 규칙을 따른다. 본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 아미노산 및 아미노아실 잔기의 명칭 및 약어가 그러한 제시와 상이할 경우, 그들은 독자에게 명료해질 것이다. 본 발명을 기재함에 있어서 유용한 일부 약어가 하기 표 1에 정의되어 있다.
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Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
본 명세서 전체에 걸쳐, 자연 발생 아미노산을 이들의 전체 명칭(예를 들어, 알라닌, 아르기닌 등)으로 지칭하지 않는 한, 그들은 이들의 관용적인 3-문자 또는 1-문자 약어(예를 들어, 알라닌의 경우 Ala 또는 A, 아르기닌의 경우 Arg 또는 R 등)로 지정된다. 덜 통상적이거나 비-자연 발생 아미노산의 경우, 이들의 전체 명칭(예를 들어, 사르코신, 오르니틴 등)으로 그들을 지칭하지 않는 한, Sar 또는 Sarc(사르코신, 즉, N-메틸글리신), Aib(α-아미노아이소부티르산), Daba(2,4-다이아미노부타노산), Dapa(2,3-다이아미노프로판산), γ-Glu(γ-글루탐산), pGlu(피로글루탐산), Gaba(γ-아미노부탄산), β-Pro(피롤리딘-3-카복실산), 8Ado(8-아미노-3,6-다이옥사옥탄산), Abu(4-아미노부티르산), bhPro(β-호모-프롤린), bhPhe(β-호모-L-페닐알라닌), bhAsp(β-호모-아스파트산), Dpa(β,β 다이페닐알라닌), Ida(이미노다이아세트산), hCys(호모시스테인), bhDpa(β-호모-β,β-다이페닐알라닌)을 포함하는, 빈번하게 사용되는 3-문자 또는 4-문자 코드를 이의 잔기에 사용한다.
추가로, R1은 모든 서열에서 아이소발레르산 또는 균등물로 치환될 수 있다. 예를 들어, 아이소발레르산, 아이소부티르산, 발레르산 등과 같은 산성 화합물에 본 발명의 펩타이드가 접합되는 일부 실시형태에서, 이러한 접합의 존재는 산 형태로 언급된다. 그러므로, 예를 들어, 그러나 어떤 방식으로도 이로 제한되지 않으면서, 아이소발레로일을 언급함으로써 펩타이드에 대한 아이소발레르산의 접합을 표시하는 대신에, 일부 실시형태에서, 본 출원은 이러한 접합을 아이소발레르산으로서 언급할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 용어 "L-아미노산"은 펩타이드의 "L" 이성질체 형태를 지칭하고, 역으로 용어 "D-아미노산"은 펩타이드의 "D" 이성질체 형태를 지칭한다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 아미노산 잔기는 "L" 이성질체 형태이지만, 펩타이드가 목적하는 작용성을 유지하는 한, "D" 이성질체 형태의 잔기로 임의의 L-아미노산 잔기를 치환할 수 있다.
달리 표시되지 않는 한, 카이럴 중심을 보유한 해당 자연 및 비자연 아미노산의 L-이성질체 형태를 언급한다. 적절한 경우, 관용적인 3-문자 코드 앞의 접두어 "D"에 의해 관용적인 방식으로 아미노산의 D-이성질체 형태를 표시한다(예를 들어, Dasp, (D)Asp 또는 D-Asp; Dphe, (D)Phe 또는 D-Phe).
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "Lys의 저급 동족체"는 라이신의 구조를 갖지만 라이신과 비교할 때 측쇄에 하나 이상 더 적은 탄소를 갖는 아미노산을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, "Lys의 고급 동족체"는 라이신의 구조를 갖지만 라이신과 비교할 때 특쇄에 하나 이상의 추가 탄소를 갖는 아미노산을 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 용어 "DRP"는 이황화 풍부 펩타이드를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 용어 "이량체"는, 2개 이상의 단량체 소단위를 포함하는 펩타이드를 광범위하게 지칭한다. 특정 이량체는 2개의 DRP를 포함한다. 본 발명의 이량체는 동종이량체 및 이종이량체를 포함한다. 이량체의 단량체 소단위는 이의 C- 또는 N-말단에서 연결될 수 있거나, 그것은 내부 아미노산 잔기를 통해 연결될 수 있다. 이량체의 각각의 단량체 소단위는 동일한 부위를 통해 연결될 수 있거나, 각각이 상이한 부위(예를 들어, C-말단, N-말단 또는 내부 부위)를 통해 연결될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 특정 개시된 펩타이드 서열의 맥락에서, 괄호, 예를 들어, (__)는 측쇄 접합을 나타내고, 대괄호, 예를 들어, [__]는 비자연 아미노산 치환을 나타낸다. 일반적으로, 펩타이드 서열의 N-말단에 링커를 나타내는 경우, 그것은 펩타이드가 다른 펩타이드와 이량체화되며, 여기서 링커는 2개의 펩타이드의 N-말단에 부착됨을 표시한다. 일반적으로, 펩타이드 서열의 C-말단에 링커를 나타 내는 경우, 그것은 펩타이드가 다른 펩타이드와 이량체화되며, 여기서 링커는 2개의 펩타이드의 C-말단에 부착됨을 표시한다.
본 명세서에서 용어 "동배체 대체" 또는 "동배체 치환"은 명시된 아미노산과 유사한 화학적 및/또는 구조적 특성을 나타내는 임의의 아미노산 또는 다른 유사체 모이어티를 지칭하기 위해 상호 호환적으로 사용된다. 특정 실시형태에서, 동배체 대체는 자연 또는 비자연 아미노산에 의한 보존적 치환이다.
본 명세서에 사용되는 용어 "고리화"는, 예컨대, 이황화 가교 또는 다른 유사한 결합을 형성함으로써, 폴리펩타이드 분자의 일부분이 폴리펩타이드 분자의 또 다른 부분에 연결되어 폐환을 형성하는 반응을 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 용어 "소단위"는, 결합되어 이량체 펩타이드 조성물을 형성하는 폴리펩타이드 단량체의 쌍 중 하나를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 용어 "링커 모이어티"는, 2개의 펩타이드 단량체 소단위를 함께 연결하거나 결합하여 이량체를 형성할 수 있는 화학적 구조를 광범위하게 지칭한다.
본 발명의 맥락에서 용어 "용매화물"은 용질(예를 들어, 본 발명에 따른 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염)과 용매 사이에 형성되는 정의된 화학양론의 복합체를 지칭한다. 이와 관련된 용매는, 예를 들어, 물, 에탄올 또는 아세트산 또는 락트산과 같지만 이들로 제한되지 않는 전형적으로 소분자인 약제학적으로 허용 가능한 또 다른 유기 화학종일 수 있다. 해당 용매가 물인 경우, 이러한 용매화물은 통상적으로 수화물이라고 지칭된다.
본 명세서에 사용되는 용어 "약제학적으로 허용 가능한 염"은, 물 또는 오일에 가용성이거나 분산성이고, 과도한 독성, 자극성 및 알레르기 반응 없이 질환의 치료에 적합하며; 합리적인 유익/유해 비에 상응하고, 이들의 의도되는 용도에 효과적인, 본 발명의 펩타이드 또는 화합물의 염 또는 쯔비터이온 형태를 나타낸다. 염은 화합물의 최종 단리 및 정제 중에 제조되거나, 아미노기를 적합한 산과 반응시킴으로써 별도로 제조될 수 있다. 대표적인 산 부가 염은 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 시트레이트, 아스파테이트, 벤조에이트, 벤젠설포네이트, 바이설페이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포설포네이트, 다이글루코네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 폼에이트, 푸마레이트, 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 하이드로아이오다이드, 2-하이드록시에탄설포네이트(이세티오네이트), 락테이트, 말레에이트, 메시틸렌설포네이트, 메탄설포네이트, 나프틸렌설포네이트, 니코틴에이트, 2-나프탈렌설포네이트, 옥살레이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로프리오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 석신에이트, 타르트레이트, 트라이클로로아세테이트, 트라이플루오로아세테이트, 포스페이트, 글루타메이트, 바이카보네이트, 파라-톨루엔설포네이트 및 운데칸오에이트를 포함한다. 또한, 본 발명의 화합물에서 아미노기는 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드; 다이메틸, 다이에틸, 다이부틸 및 다이아밀 설페이트; 데실, 라우릴, 미리스틸 및 스테릴 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드; 및 벤질 및 펜에틸 브로마이드에 의해 4차화될 수 있다. 치료적으로 허용 가능한 부가염을 형성하기 위해 사용될 수 있는 산의 예는 무기산, 예컨대, 염산, 브롬산, 황산 및 인산 및 유기산, 예컨대, 옥살산, 말레산, 석신산 및 시트르산을 포함한다. 적합하게, 약제학적으로 허용 가능한 염은, 예를 들어, 산 부가염 및 염기성 염 중에서 선택되는 염일 수 있다. 산 부가염의 예는 클로라이드염, 시트레이트염 및 아세테이트염을 포함한다. 염기성 염의 예는 양이온이 알칼리 금속 양이온, 예컨대, 나트륨 또는 칼륨 이온, 알칼리성 토금속 양이온, 예컨대, 칼슘 또는 마그네슘 이온뿐만 아니라 치환된 암모늄 이온, 예컨대, 유형 N(R1)(R2)(R3)(R4)+의 이온 중에서 선택되는 염을 포함하며, 상기 식에서 R1, R2, R3 및 R4는 독립적으로 수소, 선택적으로 치환된 C1-6-알킬 또는 선택적으로 치환된 C2-6-알켄일을 전형적으로 나타낼 것이다. 적절한 C1-6-알킬기의 예는 메틸, 에틸, 1-프로필 및 2-프로필기를 포함한다. 가능한 적절성의 C2-6-알켄일기의 예는 에텐일, 1-프로펜일 및 2-프로펜일을 포함한다. 약제학적으로 허용 가능한 염의 다른 예는 문헌["Remington's Pharmaceutical Sciences", 17th edition, Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mark Publishing Company, Easton, PA, USA, 1985(및 이의 보다 최근 판), "Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology", 3rd edition, James Swarbrick (Ed.), Informa Healthcare USA (Inc.), NY, USA, 2007 및 J. Pharm. Sci. 66: 2 (1977)]에 기재되어 있다. 또한, 적합한 염에 대한 개관의 경우, 문헌[Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, 2002)]을 참고하기 바란다. 다른 적합한 염기 염은 비-독성 염을 형성하는 염기로부터 형성된다. 대표적인 예는 알루미늄, 아르기닌, 벤자틴, 칼슘, 콜린, 다이에틸아민, 다이올아민, 글리신, 라이신, 마그네슘, 메글루민, 올아민, 칼륨, 나트륨, 트로메타민 및 아연염을 포함한다. 산 및 염기의 헤미염(hemisalt), 예를 들어, 헤미설페이트 및 헤미칼슘 염 또한 형성될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 용어 "N(알파)메틸화"는 아미노산의 알파 아민의 메틸화를 기재하며, 일반적으로 N-메틸화라고도 불린다.
본 명세서에 사용되는 용어 "sym 메틸화" 또는 "Arg-Me-sym"은, 아르기닌의 구아니딘기의 2개의 질소의 대칭적 메틸화를 기재한다. 추가로, 용어 "asym 메틸화" 또는 "Arg-Me-asym"은 아르기닌의 구아니딘기의 단일 질소의 메틸화를 기재한다.
본 명세서에 사용되는 용어 "아실화 유기 화합물"은 C-말단 이량체를 형성하기 전에 아미노산 소단위의 N-말단을 아실화하기 위해 사용되는 카복실산 작용기를 갖는 다양한 화합물을 지칭한다. 아실화 유기 화합물의 비제한적 예는 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐아세트산, 3-페닐프로피온산, 석신산, 글루타르산, 사이클로펜탄 카복실산, 3,3,3-트라이플루오로프로페온산, 3-플루오로메틸부티르산, 테트라헤드로-2H-피란-4-카복실산을 포함한다.
용어 "알킬"은 1 내지 24개의 탄소 원자를 함유하는 직쇄 또는 분지쇄, 비환식 또는 환식, 포화 지방족 탄화수소를 포함한다. 대표적인 포화 직쇄 알킬은 메틸, 에틸, n-프로필, n-부틸, n-펜틸, n-헥실 등을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 반면, 포화 분지형 알킬은 아이소프로필, sec-부틸, 아이소부틸, tert-부틸, 아이소펜틸 등을 비제한적으로 포함한다. 대표적인 포화 환식 알킬은 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 등을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 반면에, 불포화 환식 알킬은 사이클로펜텐일, 사이클로헥센일 등을 비제한적으로 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 본 발명의 펩타이드 효능제의 "치료적 유효량"은 본 명세서에 기재된 임의의 질환 및 장애(예를 들어, 철 대사의 질환)를 포함하지만 이들로 제한되지 않는 헵시딘-관련 질환을 치료하기에 충분한 펩타이드 작용제의 양을 기재하는 의미이다. 특정 실시형태에서, 치료적 유효량은 임의의 의학적 치료에 적용 가능한 목적하는 유익/유해 비를 달성할 것이다.
헤마토크리트는 전체 혈액의 부피에 대한 적혈구의 부피의 비이다. 헤마토크리트에 대한 정상 범위는 성별에 따라 다르며, 남성의 경우 대략 45% 내지 52%이고, 여성의 경우 37% 내지 48%이다. PV의 치료에 대한 임상적 목표는 45% 미만의 헤마토크리트를 달성하는 것이다. 헤마토크리트는 본 명세서에서 헤마토크리트 수준이라고도 지칭될 수 있고, 헤마토크리트 수준에 대한 수치 값, 예를 들어, 45는 45%의 헤마토크리트를 의미한다.
헵시딘의 펩타이드 유사체
본 발명은 단량체 또는 이량체일 수 있는 헵시딘의 펩타이드 유사체(집합적으로 "헵시딘 유사체")를 제공한다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 페로포틴, 예를 들어, 인간 페로포틴에 결합한다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 인간 페로포틴에 특이적으로 결합한다. 본 명세서에 사용되는 "특이적으로 결합하다"는, 샘플 중의 다른 작용제에 비해 특이적 결합제가 주어진 리간드와 우선적으로 상호작용함을 지칭한다. 예를 들어, 주어진 리간드에 특이적으로 결합하는 특이적 결합제는, 적합한 조건 하에서, 샘플 중의 다른 구성성분과의 임의의 비특이적 상호작용의 것에 비해 관찰 가능한 양 또는 정도로 주어진 리간드에 결합한다. 적합한 조건은 주어진 특이적 결합제와 주어진 리간드 사이의 상호작용을 가능하게 하는 조건이다. 이들 조건은 pH, 온도, 농도, 용매, 인큐베이션 시간 등을 포함하며, 주어진 특이적 결합제 및 리간드 쌍들 사이에 상이할 수 있지만, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 헵시딘 기준 화합물(예를 들어, 본 명세서에 제공된 헵시딘 기준 화합물 중 어느 하나)보다 더 큰 특이성으로 페로포틴에 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 헵시딘 기준 화합물(예를 들어, 본 명세서에 제공된 헵시딘 기준 화합물 중 어느 하나)보다 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500%, 700%, 1000% 또는 10,000% 더 높은 페로포틴 특이성을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 헵시딘 기준 화합물(예를 들어, 본 명세서에 제공된 헵시딘 기준 화합물 중 어느 하나)보다 적어도 약 5배 또는 적어도 약 10, 20, 50 또는 100배 더 높은 페로포틴 특이성을 나타낸다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 헵시딘 활성을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 활성은 시험관내 또는 생체내 활성, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 생체내 또는 시험관내 활성이다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 헵시딘 기준 화합물(예를 들어, 본 명세서에 제공된 헵시딘 기준 화합물 중 어느 하나)에 의해 나타나는 활성의 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 99% 초과를 나타낸다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 기준 헵시딘에 의해 나타나는 페로포틴 결합 능력의 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 99% 초과를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 기준 헵시딘에 비교하여 페로포틴(예를 들어, 인간 페로포틴) 결합에 대한 더 낮은 IC50(즉, 더 높은 결합 친화도)을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 페로포틴 경쟁적 결합 검정에서 기준 헵시딘보다 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500%, 700% 또는 1000% 더 낮은 IC50을 나타낸다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 헵시딘 기준 펩타이드에 비교하여 증가된 헵시딘 활성을 나타낸 다. 일부 실시형태에서, 활성은 시험관내 또는 생체내 활성, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 생체내 또는 시험관내 활성이다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 기준 헵시딘보다 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180 또는 200배 더 큰 헵시딘 활성을 나타낸다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 기준 헵시딘보다 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 99%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500%, 700% 또는 1000% 초과만큼 더 큰 활성을 나타낸다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드 유사체는 인간 페로포틴 단백질의 분해를 유도함에 있어서 기준 헵시딘의 것보다 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 99%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500%, 700% 또는 1000% 초과만큼 더 큰 시험관내 활성을 나타내며, 여기서 활성은 본 명세서에 기재된 방법에 따라 측정된다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드 또는 펩타이드 이량체는 개체에서 유리 혈장 철의 감소를 유도함에 있어서 기준 헵시딘이 하는 것보다 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% 또는 99%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500%, 700% 또는 1000% 초과만큼 더 큰 생체내 활성을 나타내며, 여기서 활성은 본 명세서에 기재된 방법에 따라 측정된다.
일부 실시형태에서, 활성은 시험관내 또는 생체내 활성, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 생체내 또는 시험관내 활성이다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 기준 헵시딘보다 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180 또는 200배 더 크거나 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500%, 700% 또는 1000% 더 큰 활성을 나타내며, 여기서 활성은, 예를 들어, 본 명세서의 실시예에 따라 측정된 페로포틴의 분해를 유도하는 시험관내 활성이거나; 여기서 활성은, 예를 들어, 본 명세서의 실시예에 따라 측정된 유리 혈장 철을 감소시키는 생체내 활성이다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 본 명세서에서 "미니-헵시딘"이라고 지칭하는 생물활성 인간 25-아미노산 형태인 Hep25의 헵시딘 활성을 모방한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 특정 실시형태에서, "헵시딘 활성"을 나타내는 화합물(예를 들어, 헵시딘 유사체)은, 화합물이 대상체에 투여되는 경우(예를 들어, 비경구 주사 또는 경구 투여), 용량-의존적이고 시간-의존적인 방식으로 대상(예를 들어, 마우스 또는 인간) 내의 혈장 철 농도를 낮추는 능력을 나타냄을 의미한다. 예를 들어, 문헌[Rivera et al. (2005), Blood 106:2196-9]에 입증된 바와 같은 것을 참조한다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드는 대상 내의 혈장 철 농도를 적어도 약 1.2, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10-배 또는 적어도 약 5%, 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 약 99% 만큼 낮춘다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 문헌[Nemeth et al. (2006) Blood 107:328-33]에 교시된 바와 같이 페로포틴-발현 세포주에서 페로포틴의 내재화 및 분해를 유발하는 능력에 의해 검정되는 시험관내 활성을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 시험관내 활성은 문헌[Nemeth et al. (2006) Blood 107:328-33]에서와 같이 녹색 형광 단백질에 융합된 페로포틴을 디스플레이하도록 조작된 세포의 형광의 용량-의존적 손실에 의해 측정된다. 세포의 분취량을 차등 농도의 Hep25 또는 미니-헵시딘의 기준 제제와 함께 24시간 동안 인큐베이션시킨다. 본 명세서에 제공되는 바와 같이, EC50 값은 기준 화합물에 의해 발생한 형광의 최대 손실의 50%를 도출하는 주 어진 화합물(예를 들어, 본 발명의 헵시딘 유사체 펩타이드 또는 펩타이드 이량체)의 농도로서 제공된다. 이러한 검정 범위에서 Hep25 제제의 EC50은 5 내지 15nM이며, 특정 실시형태에서, 본 발명의 바람직한 헵시딘 유사체는 시험관내 활성 검정에서 약 1,000nM 이하의 EC50 값을 나타낸다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 시험관내 활성 검정(예를 들어, 문헌[Nemeth et al. (2006) Blood 107:328-33] 또는 본 명세서의 실시예에 기재된 바와 같음)에서 약 0.01, 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 또는 500 nM 중 어느 하나 미만의 EC50을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 생물치료제 조성물(예를 들어, 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물 중 어느 하나)은 약 1nM 이하의 EC50 값을 나타낸다.
헵시딘 활성 및 본 발명에 따른 헵시딘 유사체의 시험관내 활성을 계산하는 당업계에 공지된 다른 방법을 사용할 수 있다. 예를 들어, 특정 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 기준 펩타이드의 시험관내 활성을, 세포 페로포틴을 내재화하는 이의 능력에 의해 측정하며, 이는 페로포틴의 세포외 에피토프를 인식하는 항체를 사용하는 면역조직화학 또는 유세포분석에 의해 결정된다. 대안적으로, 특정 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 기준 펩타이드의 시험관내 활성은, 문헌[Nemeth et al. (2006) Blood 107:328-33]에서와 같이 철의 방사성 동위 원소 또는 안정한 동위원소로 사전 로딩된 페로포틴-발현 세포로부터 철의 유출을 저해하는 이의 용량-의존적 능력에 의해 측정된다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 기준 헵시딘에 비교하여 증가된 안정성(예를 들어, 반감기, 단백질 분해 속도에 의해 측정됨)을 나타낸다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체의 안정성은 기준 헵시딘보다 적어도 약 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180 또는 200-배 더 크거나 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400% 또는 500% 더 크게 증가된다. 일부 실시형태에서, 안정성은 본 명세서에 기재된 안정성이다. 일부 실시형태에서 안정성은, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 선택적으로 측정된 혈장 안정성이다. 일부 실시형태에서, 안정성은 경구로 전달될 때의 안정성이다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 기준 헵시딘보다 더 긴 반감기를 나타낸다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 주어진 세트의 조건(예를 들어, 온도, pH) 하에서 적어도 약 5분, 적어도 약 10분, 적어도 약 20분, 적어도 약 30분, 적어도 약 45분, 적어도 약 1시간, 적어도 약 2시간, 적어도 약 3시간, 적어도 약 4시간, 적어도 약 5시간, 적어도 약 6시간, 적어도 약 12시간, 적어도 약 18시간, 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 4일, 적어도 약 7일, 적어도 약 10일, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월 또는 그 초과 또는 임의의 사이에 있는 반감기 또는 그 사이의 범위, 약 5분, 약 10분, 약 20분, 약 30분, 약 45분, 약 1시간, 약 2시간, 약 3시간, 약 4시간, 약 5시간, 약 6시간, 약 12시간, 약 18시간, 약 1일, 약 2일, 약 4일, 약 7일, 약 10일, 약 2주, 약 3주, 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월 또는 그 초과 또는 임의의 사이의 반감기 또는 그 사이의 범위의 반감기를 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체의 반감기는 하나 이상의 친유성 치환체 또는 반감기 연장 모이어티, 예를 들어, 본 명세서에 개시된 임의의 친유성 치환체 또는 반감기 연장 모이어티에 그것이 접합됨으로 인해 연장된다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체의 반감기는 하나 이상의 중합체 모이어티, 예를 들어, 본 명세서에 개시된 임의의 중합체 모이어티 또는 반감기 연장 모이어티에 그것이 접합됨으로 인해서 연장된다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 주어진 세트의 조건 하에서 상기 기재된 바와 같은 반감기를 나타내며, 여기서 온도는 약 25℃, 약 4℃또는 약 37℃이고, pH는 생리학적 pH 또는 약 7.4의pH이다.
특정 실시형태에서, 접합된 반감기 연장 모이어티를 포함하는 본 발명의 헵시딘 유사체는 접합된 반감기 연장 모이어티가 없는 동일한 유사체와 비교할 때 경구, 정맥내 또는 피하 투여 후 증가된 혈청 반감기를 갖는다. 특별한 실시형태에서, 경구, 정맥내 또는 피하 투여 중 어느 하나 이후에 본 발명의 헵시딘 유사체의 혈청 반감기는 적어도 12시간, 적어도 24시간, 적어도 30시간, 적어도 36시간, 적어도 48시간, 적어도 72시간 또는 적어도 168시간이다. 특별한 실시형태에서, 그것은 12 내지 168시간, 24 내지 168시간, 36 내지 168시간 또는 48 내지 168시간이다.
특정 실시형태에서, 접합된 반감기 연장 모이어티를 포함하는 본 발명의 헵시딘 유사체는 대상체에게 경구, 정맥내 또는 피하 투여한 후 혈청 철의 농도가 감소한다. 특별한 실시형태에서, 대상체의 혈청 철 농도는 대상체에게 헵시딘 유사체를 투여하지 않았을 경우의 혈청 철 농도의 10% 미만, 20% 미만, 25% 미만, 30% 미만, 40% 미만, 50% 미만, 60% 미만, 70% 미만, 80% 미만 또는 90% 미만으로 감소된다. 특별한 실시형태에서, 감소된 혈청 철 농도는 대상체에게 투여한 후에 적어도 1시간, 적어도 4시간, 적어도 10시간, 적어도 12시간, 적어도 24시간, 적어도 36시간, 적어도 48시간 또는 적어도 72시간 동안 유지된다. 특별한 실시형태에서, 그것은 12 내지 168시간, 24 내지 168시간, 36 내지 168시간 또는 48 내지 168시간 동안 유지된다. 일 실시형태에서, 대상체의 혈청 철 농도는 대상체에게, 예를 들어, 정맥내, 경구 또는 피하로 투여한 후 약 4시간 또는 약 10시간에 20% 미만으로 감소된다. 일 실시형태에서, 대상체의 혈청 철 농도는 예를 들어, 정맥내, 경구 또는 피하로 투여한 후 약 24 내지 약 30시간 동안 50% 미만 또는 60% 미만으로 감소된다.
일부 실시형태에서, 반감기는 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법을 사용하여 시험관내에서 측정되며, 예를 들어, 일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체의 안정성은 헵시딘 유사체를 사전-가온된 인간 혈청(시그마사(Sigma))과 함께 37℃에서 인큐베이션시킴으로써 결정된다. 전형적으로 최대 24시간의 다양한 시점에 샘플을 채취하고, 혈청 단백질로부터 헵시딘 유사체를 분리한 후에 LC-MS를 사용하여 관심 헵시딘 유사체의 존재에 대해 분석함으로써 샘플의 안정성을 분석한다.
일부 실시형태에서, 헵시딘 유사체의 안정성은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법을 사용하여 생체내에서 측정되며, 예를 들어, 일부 실시형태에서, 헵시딘 유사체의 안정성은 펩타이드 또는 펩타이드 이량체를 인간 또는 임의의 포유동물(예를 들어, 마우스)와 같은 대상체에게 투여한 후에, 전형적으로 최대 24시간의 다양한 시점에 채혈을 통해 대상체로부터 샘플을 채취함으로써 생체내에서 결정된다. 이어서, 반감기 측정의 시험관내 방법에 관련하여 상기에 기재된 바와 같이 샘플을 분석한다. 일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체의 생체내 안정성은 본 명세서의 실시예에 개시된 방법을 통해 결정된다.
일부 실시형태에서 본 발명은, 본 명세서에 기재된 바와 같은 헵시딘 유사체를 제공하며, 여기서 헵시딘 유사체는 기준 헵시딘에 비교하여 개선된 용해도 또는 개선된 응집 특징을 나타낸다. 용해도는 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법을 통해 결정될 수 있다. 일부 실시형태에서, 용해도를 결정하는 당업계에 공지된 적합한 방법은 펩타이드(예를 들어, 본 발명의 헵시딘 유사체)를 다양한 완충액(아세테이트 pH 4.0, 아세테이트 pH 5.0, Phos/시트레이트 pH 5.0, Phos 시트레이트 pH 6.0, Phos pH 6.0, Phos pH 7.0, 포스 pH 7.5, 강력한 PBS(Strong PBS) pH 7.5, Tris pH 7.5, Tris pH 8.0, 글리신 pH 9.0, 물, 아세트산 pH 5.0 및 당업계에 공지된 다른 것) 중에 배양하는 단계 및 표준 기술을 사용하여 응집 또는 용해도에 대해 시험하는 단계를 포함한다. 이들은, 예를 들어, 표면 소수성을 측정하고 응집 또는 섬유화를 측정하기 위한 시각적 침전(visual precipitation), 동적 광산란, 원편광 이색성 및 형광성 염료를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 개선된 용해도는 펩타이드(예를 들어, 본 발명의 헵시딘 유사체)가 기준 헵시딘보다 주어진 액체에 더 가용성임을 의미한다.
특정 실시형태에서 본 발명은, 본 명세서에 기재된 바와 같은 헵시딘 유사체를 제공하며, 여기서 헵시딘 유사체는 특정 용액 또는 완충액, 예를 들어, 물 또는 당업계에 공지되거나 본 명세서에 개시된 완충액 중에서 기준 헵시딘보다 적어도 약 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180 또는 200-배 더 크거나, 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400% 또는 500% 더 크게 증가된 용해도를 나타낸다.
특정 실시형태에서 본 발명은, 본 명세서에 기재된 바와 같은 헵시딘 유사체를 제공하며, 여기서 헵시딘 유 사체는 감소된 응집을 나타내고, 여기서 용액 중의 펩타이드의 응집은 특정 용액 또는 완충액, 예를 들어, 물 또는 당업계에 공지되거나 본 명세서에 개시된 완충액 중에서 기준 헵시딘보다 적어도 약 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180 또는 200배 더 적거나, 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 300%, 400% 또는 500% 더 적다.
일부 실시형태에서 본 발명은, 본 명세서에 기재된 바와 같은 헵시딘 유사체를 제공하며, 여기서 헵시딘 유사체는 더 적은 분해(즉, 더 큰 분해 안정성)를 나타내고, 예를 들어, 기준 헵시딘보다 약 10% 이상 더 적거나, 약 20% 이상 더 적거나, 약 30% 이상 더 적거나, 약 40% 이상 더 적거나, 약 50% 이상 더 적다. 일부 실시형태에서, 분해 안정성은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법에 의해서 결정된다. 일부 실시형태에서, 분해 안정성을 결정하는 당업계에 공지된 적합한 방법은 본 명세서에 전문이 포함된 문헌[Hawe et al J Pharm Sci, VOL. 101, NO. 3, 2012, p 895-913]에 기재된 방법을 포함한다. 일부 실시형태에서 이러한 방법을 사용하여 저장 수명이 향상된 강력한 서열을 선택한다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 합성에 의해 제조된다. 다른 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 재조합에 의해 제조된다.
자연 아미노산만으로 본 발명의 다양한 헵시딘 유사체 단량체 및 이량체 펩타이드를 작제할 수 있다. 대안적으로, 이들 헵시딘 유사체는 변형된 아미노산을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 비자연 또는 비정규 아미노산을 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 변형된 아미노산은 아미노산 상에 자연적으로 존재하지 않는 기, 기들, 또는 화학 모이어티를 포함하도록 화학적으로 변형된 자연 아미노산을 포함한다. 본 발명의 헵시딘 유사체는 D-아미노산을 추가로 포함할 수 있다. 더 추가로, 본 발명의 헵시딘 유사체 펩타이드 단량체 및 이량체는 아미노산 유사체를 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서 본 발명의 펩타이드 유사체는, 펩타이드 유사체의 하나 이상의 자연 아미노산 잔기가 비자연 또는 비정규 아미노산 또는 D-아미노산으로 치환된, 본 명세서에 기재된 것 중 임의의 것을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 하나 이상의 변형된 아미노산 또는 비자연 아미노산을 포함한다. 예를 들어, 특정 실시형태에서, 헵시딘 유사체는 Daba, Dapa, Pen, Sar, Cit, Cav, HLeu, 2-Nal, 1-Nal, d-1-Nal, d-2-Nal, Bip, Phe(4-OMe), Tyr(4-OMe), βhTrp, βhPhe, Phe(4-CF3), 2-2-인단, 1-1-인단, 사이클로 부틸, βhPhe, hLeu, Gla, Phe(4-NH2), hPhe, 1-Nal, Nle, 3-3-diPhe, 사이클로부틸-Ala, Cha, Bip, β-Glu, Phe(4-Guan), 호모 아미노산, D-아미노산 및 다양한 N-메틸화 아미노산 중 하나 이상을 포함한다. 당업자는 다른 변형된 아미노산 또는 비자연 아미노산 및 변형된 아미노산 또는 비자연 아미노산에 의한 자연 아미노산의 다른 다양한 치환을 수행하여 유사한 목적하는 결과를 달성할 수 있으며, 이러한 치환은 본 발명의 교시 및 사상 이내에 있음을 인정할 것이다.
본 발명은 본 명세서에 기재된 임의의 헵시딘 유사체를, 예를 들어, 유리 형태 또는 염 형태로 포함한다.
본 명세서에 기재된 화합물은 방사성 표지된 화합물을 포함하는데, 이것은 하나 이상의 원자가 자연에서 일반적으로 발견되는 원자 질량 또는 질량수와 상이한 원자 질량 또는 질량 수를 갖는 원자로 대체된다는 사실을 제외하고는 본 명세서에 제시된 다양한 화학식 및 구조에 인용된 것과 동일하다. 본 발명의 화합물에 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 플루오린 및 염소의 동위원소, 예컨대, 각각 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 35S, 18F, 36Cl을 포함한다. 본 명세서에 기재된 특정 방사서 표지된 화합물, 예를 들어, 방사성 동위원소, 예컨대, 3H 및 14C가 혼입된 것은 약물 및/또는 물질 조직 분포 검정에 유용하다. 추가로, 동위원소, 예컨대, 중수소, 즉, 2H로의 치환은 더 큰 대사 안정성으로 유래되는 치료 이점, 예를 들어, 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투여량 요건을 제공한다.
본 발명의 헵시딘 유사체는, 본 명세서에 기재된 임의의 특정 링커 모이어티를 포함하는, 링커 모이어티에 연결된 본 명세서에 기재된 임의의 펩타이드 단량체 또는 이량체를 포함한다.
본 발명의 헵시딘 유사체는 표 2 및 표 3에 제시된 아미노산 서열 중 임의의 것을 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 본 명세서에 기재된 헵시딘 유사체 펩타이드 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 펩타이드 단량체 소단위를 포함하는 펩타이드, 예를 들어, 단량체 또는 이량체를 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 펩타이드 유사체 또는 본 발명의 이량체 펩타이드 유사체의 단량체 소단위는, 7 내지 35개의 아미노산 잔기, 8 내지 35개의 아미노산 잔기, 9 내지 35개의 아미노산 잔기, 10 내지 35개의 아미 노산 잔기, 7 내지 25개의 아미노산 잔기, 8 내지 25개의 아미노산 잔기, 9 내지 25개의 아미노산 잔기, 10 내지 25개의 아미노산 잔기, 7 내지 18개의 아미노산 잔기, 8 내지 18개의 아미노산 잔기, 9 내지 18개의 아미노산 잔기 또는 10 내지 18개의 아미노산 잔기 및 선택적으로, 하나 이상의 부가적인 비-아미노산 모이어티, 예컨대, 접합된 화학 모이어티, 예를 들어, 반감기 연장 모이어티, PEG 또는 링커 모이어티를 포함하거나 이들로 이루어진다. 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체의 단량체 소단위는 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 또는 35개의 아미노산 잔기를 포함하거나 이들로 이루어진다. 특별한 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체의 단량체 소단위는 10 내지 18개의 아미노산 잔기 및 선택적으로, 하나 이상의 추가 비-아미노산 모이어티, 예컨대, 접합된 화학 모이어티, 예를 들어, PEG 또는 링커 모이어티를 포함하거나 이들로 이루어진다. 다양한 실시형태에서, 단량체 소단위는 7 내지 35개의 아미노산 잔기, 9 내지 18개의 아미노산 잔기 또는 10 내지 18개의 아미노산 잔기를 포함하거나 이들로 이루어진다. 본 명세서에 기재된 임의의 다양한 화학식의 특별한 실시형태에서, X는 7 내지 35개의 아미노산 잔기, 8 내지 35개의 아미노산 잔기, 9 내지 35개의 아미 노산 잔기, 10 내지 35개의 아미노산 잔기, 7 내지 25개의 아미노산 잔기, 8 내지 25개의 아미노산 잔기, 9 내지 25개의 아미노산 잔기, 10 내지 25개의 아미노산 잔기, 7 내지 18개의 아미노산 잔기, 8 내지 18개의 아미노산 잔기, 9 내지 18개의 아미노산 잔기 또는 10 내지 18개의 아미노산 잔기를 포함하거나 이들로 이루어진다.
특정 실시형태에서, 본 발명에 따른 헵시딘 유사체는 PCT 특허 출원 공개 제WO2014/145561호, 제WO2015/200916호 또는 제WO2017/117411호에 개시된 임의의 및 모든 헵시딘 유사체를 포함한다.
펩타이드 단량체 헵시딘 유사체
구체적인 양상에서, 본 발명은 진성 적혈구증가증의 치료를 필요로 하는 대상체에서 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 유효량의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
보다 구체적인 양상에서, 본 발명은 진성 적혈구증가증의 치료를 필요로 하는 대상체에서 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 치료적 유효량의 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 및 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
일 실시형태에서, 헵시딘 유사체는 하기 화학식 (I) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 포함하는 펩타이드를 포함한다:
R1-X-Y-R2 (I)(서열번호 1)
식 중,
R1은 수소, C1-C6 알킬, C6-C12 아릴, C1-C20 알칸오일 또는 pGlu이고;
R2는 NH2 또는 OH이며;
X는 하기 화학식 II를 갖는 펩타이드 서열이고;
X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10 (II)(서열번호 2)
식 중,
X1은 Asp, Ala, Ida, pGlu, bhAsp, Leu, D-Asp이거나 존재하지 않고;
X2는 Thr, Ala 또는 D-Thr이고;
X3은 His, Lys 또는 D-His이며;
X4는 Phe, Ala, Dpa 또는 D-Phe이고;
X5는 Pro, Gly, Arg, Lys, Ala, D-Pro 또는 bhPro이며;
X6은 Ile, Cys, Arg, Lys, D-Ile 또는 D-Cys이고;
X7은 Cys, Ile, Leu, Val, Phe, D-Ile 또는 D-Cys이며;
X8은 Ile, Arg, Phe, Gln, Lys, Glu, Val, Leu 또는 D-Ile이고;
X9는 Phe 또는 bhPhe이며;
X10은 Lys, Phe이거나 존재하지 않고;
Y가 존재하지 않는 경우, X7은 Ile이며;
Y는 하기 화학식 III을 갖는 펩타이드 서열이고:
Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y11-Y12-Y13-Y14-Y15 (III)(서열번호 3)
식 중,
Y1은 Gly, Cys, Ala, Phe, Pro, Glu, Lys, D-Pro, Val, Ser이거나 존재하지 않으며;
Y2는 Pro, Ala, Cys, Gly이거나 존재하지 않고;
Y3은 Arg, Lys, Pro, Gly, His, Ala, Trp이거나 존재하지 않으며;
Y4는 Ser, Arg, Gly, Trp, Ala, His, Tyr이거나 존재하지 않고;
Y5는 Lys, Met, Arg, Ala이거나 존재하지 않으며;
Y6은 Gly, Ser, Lys, Ile, Ala, Pro, Val이거나 존재하지 않고;
Y7은 Trp, Lys, Gly, Ala, Ile, Val이거나 존재하지 않으며;
Y8은 Val, Thr, Gly, Cys, Met, Tyr, Ala, Glu, Lys, Asp, Arg이거나 존재하지 않으며;
Y9는 Cys, Tyr이거나 존재하지 않고;
Y10은 Met, Lys, Arg, Tyr이거나 존재하지 않으며;
Y11은 Arg, Met, Cys, Lys이거나 존재하지 않고;
Y12는 Arg, Lys, Ala이거나 존재하지 않으며;
Y13은 Arg, Cys, Lys, Val이거나 존재하지 않고;
Y14는 Arg, Lys, Pro, Cys, Thr이거나 존재하지 않으며;
Y15는 Thr, Arg이거나 존재하지 않고;
식 중, 상기 화학식 I의 펩타이드는 선택적으로 R1, X 또는 Y 상에서 페길화되고, 상기 펩타이드의 아미노산의 측쇄는 선택적으로 친유성 치환체 또는 중합체 모이어티에 접합된다.
관련 실시형태에서, 화학식 II는 X1, X2, X4, X5, X6, X7, X8, X9 및 X1의 경우 상기와 같이 제시되지만, X3은 His, Lys, D-His 또는 D-Lys이다.
일 실시형태에서, R1은 수소, 아이소발레르산, 아이소부티르산 또는 아세틸이다. 또 다른 실시형태에서, R1은 아이소발레르산 또는 아이소부티르산이다. 특정 실시형태에서, R1은 아이소발레르산이다.
일 실시형태에서, X는 화학식 IV를 갖는 펩타이드 서열이다:
X1-Thr-His-X4-X5-X6-X7-X8-Phe-X10 (IV)(서열번호 4)
식 중,
X1은 Asp, Ida, pGlu, bhAsp이거나 존재하지 않으며;
X4는 Phe 또는 Dpa이고;
X5는 Pro 또는 bhPro이며;
X6은 Ile, Cys 또는 Arg이고;
X7은 Cys, Ile, Leu 또는 Val이며;
X8은 Ile, Lys, Glu, Phe, Gln 또는 Arg이고;
X10은 Lys이거나 존재하지 않는다.
또 다른 실시형태에서, X는 화학식 V를 갖는 펩타이드 서열이다:
X1-Thr-His-X4-X5-Cys-Ile-X8-Phe-X10 (V)(서열번호 5)
X1은 Asp, Ida, pGlu, bhAsp이거나 존재하지 않으며;
X4는 Phe 또는 Dpa이고;
X5는 Pro 또는 bhPro이며;
X8은 Ile, Lys, Glu, Phe, Gln 또는 Arg이고;
X10은 Lys이거나 존재하지 않는다.
특정 실시형태에서, 펩타이드는 하기 화학식 VI에 따른다:
R1-X-Y-R2 (VI)(서열번호 6)
또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 식 중,
R1은 수소, 아이소발레르산, 아이소부티르산 또는 아세틸이고;
R2는 NH2 또는 OH이며;
X는 하기 화학식 VII을 갖는 펩타이드 서열이고;
X1-Thr-His-X4-X5-Cys-Ile-X8-Phe-X10 (VII)(서열번호 7)
식 중,
X1은 Asp, Ida, pGlu, bhAsp이거나 존재하지 않으며;
X4는 Phe 또는 Dpa이고;
X5는 Pro 또는 bhPro이며;
X8은 Ile, Lys, Glu, Phe, Gln 또는 Arg이고;
X10은 Lys이거나 존재하지 않으며;
Y는 하기 화학식 VIII을 갖는 펩타이드 서열이고:
Y1-Pro-Y3-Ser-Y5-Y6-Y7-Y8-Cys-Y10 (VIII)(서열번호 8)
식 중,
Y1은 Gly, Glu, Val 또는 Lys이고;
Y3은 Arg 또는 Lys이며;
Y5는 Arg 또는 Lys이고;
Y6은 Gly, Ser, Lys, Ile 또는 Arg이며;
Y7은 Trp이거나 존재하지 않고;
Y8은 Val, Thr, Asp, Glu이거나 존재하지 않으며;
Y10은 Lys이거나 존재하지 않고;
상기 펩타이드는 2개의 Cys 사이에 이황화 결합을 포함하며;
상기 화학식 I의 펩타이드는 선택적으로 R1, X 또는 Y 상에서 페길화되고;
상기 펩타이드의 아미노산의 측쇄는 선택적으로 친유성 치환체 또는 중합체 모이어티에 접합되고;
Ida는 이미노다이아세트산이고; pGlu는 피로글루탐산이며; bhAsp는 β-호모아스파트산이고; bhPro는 β-호모프롤린이다.
특정 추가 실시형태에서, 펩타이드는 하기 서열 중 하나를 포함한다:
DTHFPICIFGPRSKGWVC(서열번호 9);
DTHFPCIIFGPRSKGWVCK(서열번호 10);
DTHFPCIIFEPRSKGWVCK(서열번호 11);
DTHFPCIIFGPRSKGWACK(서열번호 12);
DTHFPCIIFGPRSKGWVCKK(서열번호 13);
DTHFPCIIFVCHRPKGCYRRVCR(서열번호 14);
DTHFPCIKFGPRSKGWVCK(서열번호 15);
DTHFPCIKFKPRSKGWVCK(서열번호 16);
DTHFPCIIFGPRSRGWVCK(서열번호 17);
DTHFPCIKFGPKSKGWVCK(서열번호 18);
DTHFPCIKFEPRSKGCK(서열번호 19);
DTHFPCIKFEPKSKGWECK(서열번호 20);
DTHFPCIKFEPRSKKCK(서열번호 21);
DTHFPCIKFEPRSKGCKK(서열번호 22);
DTHFPCIKFKPRSKGCK(서열번호 23);
DTHFPCIKFEPKSKGCK(서열번호 24);
DTHFPCIKF(서열번호 25);
DTHFPCIIF(서열번호 26); 또는
DTKFPCIIF(서열번호 27),
식 중, 펩타이드는 선택적으로 R1, X 또는 Y 상에서 페길화되고, 상기 펩타이드의 아미노산의 측쇄는 선택적으로 친유성 치환체 또는 중합체 모이어티에 접합된다.
특정 추가 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기 서열 중 하나를 포함한다:
아이소발레르산-DTHFPICIFGPRSKGWVC-NH2(서열번호 9);
아이소발레르산-DTHFPCIIFGPRSKGWVCK-NH2(서열번호 10);
아이소발레르산-DTHFPCIIFEPRSKGWVCK-NH2(서열번호 11);
아이소발레르산-DTHFPCIIFGPRSKGWACK-NH2(서열번호 12);
아이소발레르산-DTHFPCIIFGPRSKGWVCKK-NH2(서열번호 13);
아이소발레르산-DTHFPCIIFVCHRPKGCYRRVCR-NH2(서열번호 14);
아이소발레르산-DTHFPCI(K(PEG8))FGPRSKGWVCK-NH2(서열번호 28);
아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(PEG8))PRSKGWVCK-NH2(서열번호 16);
아이소발레르산-DTHFPICIFGPRS(K(PEG8))GWVC-NH2(서열번호 29);
아이소발레르산-DTHFPICIFGPRS(K(PEG4))GWVC-NH2(서열번호 30);
아이소발레르산-DTHFPCIIFGPRSRGWVC(K(PEG8))-NH2(서열번호 31);
아이소발레르산-DTHFPCIIFGPRSRGWVC(K(PEG4))-NH2(서열번호 32);
아이소발레르산-DTHFPCIIFGPRSRGWVC(K(PEG2))-NH2(서열번호 33);
아이소발레르산-DTHFPCI(K(Palm))FGPRSKGWVCK-NH2(서열번호 34);
아이소발레르산-DTHFPCIKF)K(Palm))PRSKGWVCK-NH2(서열번호 35);
아이소발레르산-DTHFPCIKFGP(K(Palm))SKGWVCK-NH2(서열번호 36);
아이소발레르산-DTHFPCIKFGPRS(K(Palm))GWVCK-NH2(서열번호 37);
아이소발레르산-DTHFPCIKFGPRSKGWVC(K(Palm))NH2(서열번호 38);
아이소발레르산-DTHFPCI(K(PEG3-Palm))FGPRSKGWVCK-NH2(서열번호 39);
아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(PEG3-Palm))PRSKGWVCK-NH2(서열번호 40);
아이소발레르산-DTHFPCIKFGP(K(PEG3-Palm))SKGWVCK-NH2(서열번호 41);
아이소발레르산-DTHFPCIKFGPRS(K(PEG3-Palm))GWVCK-NH2(서열번호 42);
아이소발레르산-DTHFPCIKFGPRSKGWVC(K(PEG3-Palm))-NH2(서열번호 43);
아이소발레르산-DTHFPCIKFGPRSKGWVC(K(PEG8))-NH2(서열번호 44);
아이소발레르산-DTHFPCI(K(아이소Glu-Palm))FEPRSKGCK-NH2(서열번호 45);
아이소발레르산-DTHFPCIKF-K(아이소Glu-Palm)-PRSKGCK-NH2(서열번호 46);
아이소발레르산-DTHFPCIKFEP(K(아이소Glu-Palm))SKGCK-NH2(서열번호 47);
아이소발레르산-DTHFPCIKFEP(K(아이소Glu-Palm))SKGWECK-NH2(서열번호 20);
아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRS(K(아이소Glu-Palm))GCK-NH2(서열번호 48);
아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRSK(K(아이소Glu-Palm))CK-NH2(서열번호 21);
아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRSKGCK(K(아이소Glu-Palm))-NH2(서열번호 49);
아이소발레르산-DTHFPCI-K(Dapa-Palm)-FEPRSKGCK-NH2(서열번호 50);
아이소발레르산-DTHFPCIK(F(Dapa-Palm))PRSKGCK-NH2(서열번호 23);
아이소발레르산-DTHFPCIKFEP(K(Dapa-Palm))SKGCK-NH2(서열번호 24);
아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRS(K(Dapa-Palm))GCK-NH2(서열번호 51);
아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRSK(K(Dapa-Palm))CK-NH2(서열번호 52);
아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRSKGC(K(Dapa-Palm))K-NH2(서열번호 53);
아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRSKGC(K(Dapa-Palm))-NH2(서열번호 54);
아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(PEG11-Palm))PRSK[Sar]CK-NH2(서열번호 55);
아이소발레르산-DTHFPCIKF-NH2(서열번호 25);
Hy-DTHFPCIKF-NH2(서열번호 25);
아이소발레르산-DTHFPCIIF-NH2(서열번호 26);
Hy-DTHFPCIIKF-NH2(서열번호 26);
아이소발레르산-DTKFPCIIF-NH2(서열번호 27); 또는
Hy-DTKFPCIIF-NH2(서열번호 27).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCIIFGPRSKGWVCK-NH2(서열번호 10).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCIIFEPRSKGWVCK-NH2(서열번호 11).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCI(K(PEG8))FGPRSKGWVCK-NH2(서열번호 28).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(PEG8))PRSKGWVCK-NH2(서열번호 16).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCIIFGPRSRGWVC(K(PEG8))-NH2(서열번호 31).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCI(K(Palm))FGPRSKGWVCK-NH2(서열번호 34).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(Palm))PRSKGWVCK-NH2(서열번호 35).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCIKFGP(K(Palm))SKGWVCK-NH2(서열번호 36).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCIKFGPRSKGWVC(K(Palm))-NH2(서열번호 38).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCI(K(PEG3-Palm))FGPRSKGWVCK-NH2(서열번호 39).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(PEG3-Palm))PRSKGWVCK-NH2(서열번호 40).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCIKFGP(K(PEG3-Palm))SKGWVCK-NH2(서열번호 41).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCIKFGPRS(K(PEG3-Palm))GWVCK-NH2(서열번호 42).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCIKFGPRSKGWVC(K(PEG3-Palm))-NH2(서열번호 43).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCIKFGPRSKGWVC(K(PEG8))-NH2(서열번호 44).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCI(K(아이소Glu-Palm))FEPRSKGCK-NH2(서열번호 45).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(아이소Glu-Palm))PRSKGCK-NH2(서열번호 46).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCIKFEP(K(아이소Glu-Palm))SKGCK-NH2(서열번호 47).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRS(K(아이소Glu-Palm))GCK-NH2(서열번호 48).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCI(K(Dapa-Palm))FEPRSKGCK-NH2(서열번호 50).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기이다: 아이소발레르산-DTHFPCIKFEP(K(Dapa-Palm))SKGCK-NH2(서열번호 24).
보다 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
(a)
Figure pct00007
아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(PEG3-Palm))PRSKGWVCK-NH2(서열번호 40);
(b)
Figure pct00008
아이소발레르산-DTHFPCI(K(아이소Glu-Palm))FEPRSKGCK-NH2(서열번호 45);
(c)
Figure pct00009
아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(아이소Glu-Palm))PRSKGCK-NH2(서열번호 46);
(d)
Figure pct00010
아이소발레르산-DTHFPCIKFEP(K(아이소Glu-Palm))SKGCK-NH2(서열번호 47); 및
(e)
Figure pct00011
아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRS(K(아이소Glu-Palm))GCK-NH2(서열번호 48) 및 상기에 언급된 것 중 임의의 것의 약제학적으로 허용 가능한 염(식 중, 아미노산은 L-아미노산임).
일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 이량체 입체배좌에서, 특히 펩타이드 내에 유리 시스테인 잔기가 존재하는 경우에 활성이다. 특정 실시형태에서, 이는 합성 이량체로서 또는 특히 유리 시스테인 단량체 펩타이드가 존재하고 산화성 조건 하에 이량체화되는 경우에 발생한다. 일부 실시형태에서, 이량체는 동종이량체이다. 다른 실시형태에서, 이량체는 이종이량체이다.
특정 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체 이량체는 본 발명의 2개의 헵시딘 유사체 펩타이드 단량체를 포함하는 펩타이드 이량체이다.
특정 실시형태에서, 본 발명은 본 명세서에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이들 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94% 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 임의의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이다. 관련 실시형태에서, 본 발명은 2개의 폴리펩타이드를 포함하는 이량체를 포함하는데, 이들 각각은 본 명세서에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이들 아미노산 서열에 대해 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 94% 또는 적어도 95% 동일성을 갖는 임의의 아미노산 서열을 갖는다.
특별한 실시형태에서, 단량체 소단위는 2개의 시스테인 잔기(각각의 펩타이드 단량체 소단위 내에 하나) 사이의 이황화 가교에 의해 이량체화될 수 있거나, 이들은 본 명세서에 기재된 것을 포함하는 또 다른 적합한 링커 모이어티에 의해 이량체화될 수 있다. 단량체 소단위 중 일부는 둘 다 유리 아민을 포함하는 C- 및 N-말단을 갖는 것으로 나타난다. 따라서, 펩타이드 이량체 저해제를 제조하기 위해, C- 또는 N-말단 유리 아민을 제거함으로써 잔류하는 유리 아민에서의 이량체화를 허용하도록 단량체 소단위를 변형할 수 있다. 추가로, 일부 경우에는, 2-me-트리플루오로부틸, 트리플루오로펜틸, 아세틸, 옥토닐, 부틸, 펜틸, 헥실, 팔미틸, 트리플루오로메틸 부티르산, 사이클로펜탄 카복실산, 사이클로프로필아세트산, 4-플루오로벤조산, 4-플루오로페닐 아세트산, 3-페닐프로피온산, 테트라헤드로-2H-피란-4카복실산, 석신산 및 글루타르산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아실화 유기 화합물로 하나 이상의 단량체 소단위의 말단 단부를 아실화한다. 일부 경우에, 단량체 소단위는 유리 카복시 말단 및 유리 아미노 말단 둘 다를 포함하며, 이에 의해 사용자는 소단위를 선택적으로 변형하여 목적하는 말단에 서의 이량체화를 달성할 수 있다. 따라서, 당업자는 본 발명의 단량체 소단위를 선택적으로 변형시켜 목적하는 이량체화를 위한 단일의 특정 아민을 달성할 수 있음을 인지할 것이다.
달리 표시되지 않는 한, 본 명세서에 개시된 단량체 소단위의 C-말단 잔기는 아마이드라는 것이 추가로 이해된다. 추가로, 당업계에서 일반적으로 이해되는 바와 같이, 특정 실시형태에서, 아민 작용기를 갖는 측쇄를 갖는 적합한 아미노산을 사용함으로써 C-말단에서의 이량체화가 촉진된다는 것이 이해된다. N-말단 잔기에 관련하여, 당업계에서 일반적으로 이해되는 바와 같이, 이량체화는 말단 잔기의 유리 아민을 통해 달성할 수 있거나, 유리 아민을 갖는 적합한 아미노산 측쇄를 사용함으로써 달성할 수 있음이 일반적으로 이해된다.
또한, 본 발명의 헵시딘 유사체 펩타이드 단량체에 포함된 하나 이상의 내부 잔기의 측쇄를 이량체화의 목적으로 이용할 수 있음이 이해된다. 이러한 실시형태에서, 측쇄는 일부 실시형태에서 적합한 자연 아미노산(예를 들어, Lys)이거나, 대안적으로 그것은 본 명세서에 정의된 바와 같이, 예를 들어, 적합한 링커 모이어티에 대한 접합에 적합한 측쇄를 포함하는 비자연 아미노산이다.
단량체 소단위를 연결하는 링커 모이어티는 본 명세서의 교시와 상용성인 임의의 구조, 길이 및/또는 크기를 포함할 수 있다. 적어도 하나의 실시형태에서, 링커 모이어티는 시스테인, 라이신, DIG, PEG4, PEG4-바이오틴, PEG13, PEG25, PEG1K, PEG2K, PEG3.4K, PEG4K, PEG5K, IDA, IDA-Palm, ADA, Boc-IDA, 글루타르산, 아이소프탈산, 1,3-페닐렌다이아세트산, 1,4-페닐렌다이아세트산, 1,2-페닐렌다이아세트산, 트리아진, Boc-트리아진, IDA-바이오틴, PEG4-바이오틴, AADA, 적합한 지방족, 방향족, 헤테로방향족 및 대략 400Da 내지 대략 40,000Da의 분자량을 나타내는 폴리에틸렌 글리콜계 링커로 이루어진 비제한적인 군으로부터 선택된다. 적합한 링커 모이어티의 비제한적인 예는 하기 표 2에 제공된다. 특별한 실시형태에서, 이들 링커 모이어티는 대안적으로 반감기 연장 모이어티를 헵시딘 유사체에 연결할 수 있다.
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
당업자는 본 명세서에 개시된 C- 및 N-말단 및 내부 링커 모이어티가 적합한 링커 모이어티의 비제한적 예이며, 본 발명이 임의의 적합한 링커 모이어티를 포함할 수 있음을 인지할 것이다.
임의의 헵시딘 유사체 펩타이드 이량체의 특정 실시형태에서, 각각의 펩타이드 단량체 소단위의 N-말단은 링커 모이어티에 의해 연결된다.
임의의 헵시딘 유사체 펩타이드 이량체의 특정 실시형태에서, 각각의 펩타이드 단량체 소단위의 C-말단은 링커 모이어티에 의해 연결된다.
특정 실시형태에서, 헵시딘 유사체 펩타이드 이량체의 각각의 펩타이드 단량체 소단위에 포함된 하나 이상의 내부 아미노산 잔기(예를 들어, Lys 잔기)의 측쇄는 링커 모이어티에 의해 연결된다.
임의의 헵시딘 유사체 펩타이드 이량체의 특정 실시형태에서, 각각의 펩타이드 단량체 소단위의 C-말단, N 말단 또는 내부 아미노산(예를 들어, 라이신 측쇄)은 링커 모이어티에 의해 연결되고 헵시딘 유사체 펩타이드 이량체의 적어도 2개의 시스테인 잔기는 이황화 가교에 의해 연결된다. 일부 실시형태에서, 펩타이드 이량체는 하기에 나타낸 일반 구조를 갖는다. 이러한 헵시딘 유사체의 비제한적인 개략적인 예를 하기 예시에 나타낸다:
Figure pct00016
펩타이드 유사체 접합체
특정 실시형태에서, 단량체 및 이량체 둘 다를 포함하는 본 발명의 헵시딘 유사체는, 총괄하여 반감기 연장 모이어티라고 지칭되는, 하나 이상의 접합된 화학적 치환체, 예컨대, 친유성 치환체 및 중합체 모이어티를 포함한다. 임의의 특정 이론에 얽매이고자 함은 아니지만, 친유성 치환체는 혈류 중의 알부민에 결합하며, 이에 의해 헵시딘 유사체를 효소적 분해로부터 보호함으로써, 이의 반감기를 향상시키는 것으로 생각된다. 또한, 중합체 모이어티는 반감기를 향상시키고 혈류 중의 청소율을 감소시키며, 일부 경우에는 상피를 통한 투과성 및 고유판 내의 체류를 향상시키는 것으로 생각된다. 또한, 이들 치환체는 일부 경우에 상피를 통한 투과성 및 고유판 내의 체류를 향상시킬 수 있다고 또한 추정된다. 당업자는 본 발명의 맥락에서 사용되는 화합물의 적합한 제조 기술을 잘 인식할 것이다. 비제한적인 적합한 화학의 예에 대해서는, 예를 들어, 국제 특허 제WO98/08871호, 국제 특허 제WO00/55184호, 국제 특허 제WO00/55119호, 문헌[Madsen et al., (J. Med. Chem. 2007, 50, 6126-32)] 및 문헌[Knudsen et al., 2000, (J. Med Chem. 43, 1664-1669)]을 참조한다.
일 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체 내의 하나 이상의 아미노산 잔기(예를 들어, Lys 잔기)의 측쇄는 친유성 치환체 또는 다른 반감기 연장 모이어티에 추가로 접합된다(예를 들어, 공유 부착됨). 친유성 치환체는 아미노산 측쇄 내의 원자에 공유적으로 결합될 수 있거나, 대안적으로 하나 이상의 스페이서 또는 링커 모이어티를 통해 아미노산 측쇄에 접합될 수 있다. 존재하는 경우, 스페이서 또는 링커 모이어티는 헵시딘 유사체와 친유성 치환체 사이에 간격을 제공할 수 있다. 특별한 실시형태에서, 반감기 연장 모이어티는 링커 모이어티를 통해서 헵시딘 유사체에 접합되는데, 이것은 특정 실시형태에서 표 2에 도시되거나 표 2 내지 7 중 임의의 것에 개시되거나 도시된 링커 모이어티이다.
특정 실시형태에서, 친유성 치환체 또는 반감기 연장 모이어티는 4 내지 30개의 C 원자, 예를 들어, 적어도 8 또는 12개의 C 원자, 바람 직하게 24개 이하의 C 원자 또는 20개 이하의 C 원자를 갖는 탄화수소 쇄를 포함한다. 탄화수소 쇄는 선형이거나 분지형일 수 있으며, 포화되거나 불포화될 수 있다. 특정 실시형태에서, 탄화수소 쇄는 아미노산 측쇄 또는 스페이서에 대한 부착 부분을 형성하는 부분, 예를 들어, 아실기, 설포닐기, N 원자, O 원자 또는 S 원자로 치환된다. 일부 실시형태에서, 탄화수소 쇄는 아실기로 치환되며, 따라서 탄화수소 쇄는 알칸오일기, 예를 들어, 팔미토일, 카프로일, 라우로일, 미리스토일 또는 스테아로일의 일부를 형성할 수 있다.
친유성 치환체는 본 발명의 헵시딘 유사체 내의 임의의 아미노산 측쇄에 접합될 수 있다. 특정 실시형태에서, 스페이서 또는 친유성 치환체와 에스터, 설포닐 에스터, 티오에스터, 아마이드 또는 설폰아마이드를 형성하기 위해서, 아미노산 측쇄는 카복시, 하이드록실, 티올, 아마이드 또는 아민기를 포함한다. 특정 실시형태에서, 예를 들어, 친유성 치환체는 Asn, Asp, Glu, Gln, His, Lys, Arg, Ser, Thr, Tyr, Trp, Cys 또는 Dbu, Dpr 또는 Orn에 접합될 수 있다. 특정 실시형태에서, 친유성 치환체는 Lys에 접합된다. 친유성 치환체가 첨가되는 경우, 본 명세서에 제공된 임의의 화학식에서 Lys로 나타낸 아미노산은, 예를 들어, Dbu, Dpr 또는 Orn에 의해 대체될 수 있다.
본 발명의 추가의 실시형태에서, 예를 들어, 용해도 및/또는 생체내(예를 들어, 혈장내) 반감기 및/또는 생체이용률을 증가시키기 위해, 대안적으로 또는 부가적으로, 본 발명의 헵시딘 유사체 내의 하나 이상의 아미노산 잔기의 측쇄를 중합체 모이어티 또는 반감기 연장 모이어티에 접합할 수 있다. 이러한 변형은 또한, 치료용 단백질 및 펩타이드의 청소율(예를 들어, 신장 청소율)을 감소시키는 것으로 공지되어 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "폴리에틸렌 글리콜" 또는 "PEG"는 일반식 H-(O-CH2-CH2)n-OH의 폴리에터 화합물이다. PEG는 또한 폴리에틸렌 옥사이드(PEO) 또는 폴리옥시에틸렌(POE)으로서 공지되어 있으며, 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 PEO, PEE 또는 POG는 이들의 분자량에 따라 에틸렌 옥사이드의 올리고머 또는 중합체를 지칭한다. 3개의 명칭은 화학적으로 동의어이지만, PEG는 분자량이 20,000g/㏖ 미만인 올리고머 및 중합체를 지칭하고, PEO는 분자량이 20,000g/㏖을 초과하는 중합체를 지칭하고, POE는 임의의 분자량의 중합체를 지칭하는 경향이 있다. PEG 및 PEO는 이들의 분자량에 따라 액체 또는 저-융점 고체이다. 본 개시내용 전체에서, 3개의 명칭이 구별 가능하지 않게 사용된다. PEG는 에틸렌 옥사이드의 중합에 의해 제조되며, 300g/㏖ 내지 10,000,000g/㏖의 광범위한 분자량에 걸쳐 상업적으로 입수 가능하다. 상이한 분자량을 갖는 PEG 및 PEO는 상이한 응용에 사용되며, 쇄 길이 효과로 인해 상이한 물성(예를 들어, 점도)을 나타내지만, 이들의 화학적 특성은 거의 동일하다. 중합체 모이어티는 바람직하게 수용성(양친매성 또는 친수성)이고, 비-독성이며, 약제학적으로 불활성이다. 적합한 중합체 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), PEG의 단일-중합체 또는 공중합체, PEG의 모노메틸-치환된 중합체(mPEG) 또는 폴리옥시에틸렌 글리세롤(POG)을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Int. J. Hematology 68:1 (1998); Bioconjugate Chem. 6:150 (1995); 및 Crit. Rev. Therap. Drug Carrier Sys. 9:249 (1992)] 참조. 반감기 연장의 목적으로 제조된 PEG 또한 포함되며, 예를 들어, 모노 활성화 알콕시-말단 폴리알킬렌 옥사이드(POA), 예컨대, 모노-메톡시-말단 폴리에틸렌 글리콜(mPEG); 비스 활성화 폴리에틸렌 옥사이드(글리콜) 또는 다른 PEG 유도체가 또한 고려된다. 약 200 내지 약 40,000 범위의 중량에 의해 실질적으로 변동될 적합한 중합체가 본 발명의 목적을 위해 통상적으로 선택된다. 특정 실시형태에서, 200 내지 2,000, 또는 200 내지 500의 분자량을 나타내는 PEG가 사용된다. 중합 공정에 사용되는 개시제에 따라 상이한 형태의 PEG가 또한 사용할 수 있으며, 예를 들어, 통상의 개시제는 단작용성 메틸 에터 PEG 또는 메톡시폴리(에틸렌 글리콜)(mPEG라고 약칭함)이다. 다른 적합한 개시제가 당업계에 공지되어 있으며, 본 발명에 사용하기에 적합하다.
더 낮은 분자량의 PEG가 또한 단분산성이거나 균일하거나 이산성(discrete)인 것으로 지칭되는 순수한 올리고머로서 입수 가능하다. 이들은 본 발명의 특정 실시형태에서 사용된다.
PEG는 또한 상이한 기하형태로 입수 가능한데, 분지형 PEG는 중심 코어기로부터 나오는 3 내지 10개의 PEG 쇄를 갖고; 별형 PEG는 중심 코어기로부터 나오는 10 내지 100개의 PEG 쇄를 가지며; 빗형 PEG는 중합체 골격 상에 수직으로 그래프팅된 다중 PEG 쇄를 갖는다. 또한 PEG는 선형일 수 있다. PEG의 명칭에 흔히 포함되는 숫자는 이들의 평균 분자량을 표시한다(예를 들어, n=9인 PEG는 대략 400달톤의 평균 분자량을 나타낼 것이며, PEG 400으로 표지될 것이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "페길화"는 본 발명의 헵시딘 유사체에 PEG 구조를 커플링(예를 들어, 공유적으로)하는 행위이며, 이는 특정 실시형태에서 "페길화 헵시딘 유사체"라고 지칭된다. 특정 실시형태에서, 페길화 측쇄의 PEG는 분자량이 약 200 내지 약 40,000인 PEG이다. 특정 실시형태에서, 접합된 반감기 연장 모이어티의 PEG 부분은 PEG3, PEG4, PEG5, PEG6, PEG7, PEG8, PEG9, PEG10 또는 PEG11이다. 특별한 실시형태에서, 그것은 PEG11이다. 특정 실시형태에서, 페길화 스페이서의 PEG는 PEG3 또는 PEG8이다. 일부 실시형태에서, 스페이서는 페길화된다. 특정 실시형태에서, 페길화 스페이서의 PEG는 PEG3, PEG4, PEG5, PEG6, PEG7, PEG8, PEG9, PEG10 또는 PEG11이다. 특정 실시형태에서, 페길화 스페이서의 PEG는 PEG3 또는 PEG8이다.
일부 실시형태에서 본 발명은, 예를 들어, 아마이드, 티올을 통해, 클릭 화학을 통해, 또는 당업계에 공지된 임의의 다른 적합한 수단을 통해 공유적으로 부착된 PEG와 접합된 헵시딘 유사체 펩타이드(또는 이의 이량체)를 포함한다. 특별한 실시형태에서, PEG는 아마이드 결합을 통해 부착되며, 사용되는 소정의 PEG 유도체는 그렇게 적절하게 작용화될 것이다. 예를 들어, 특정 실시형태에서, O-(2-아미노에틸)-O'-(2-카복시에틸)-운데카에틸렌글리콜인 PEG11은 본 발명의 펩타이드에 부착되기 위한 아민 및 카복실산 양자 모두를 갖는다. 특정 실시형태에서, PEG25는 이산 및 25개의 글리콜 모이어티를 함유한다.
다른 적합한 중합체 모이어티는 폴리-아미노산, 예컨대, 폴리-라이신, 폴리-아스파트산, 및 폴리-글루탐산을 포함한다(예를 들어, 문헌[Gombotz, et al. (1995), Bioconjugate Chem., vol. 6: 332-351; Hudecz, et al. (1992), Bioconjugate Chem., vol. 3, 49-57 및 Tsukada, et al. (1984), J. Natl. Cancer Inst., vol. 73: 721-729] 참조). 중합체 모이어티는 직쇄형 또는 분지형일 수 있다. 일부 실시형태에서, 그것은 500 내지 40,000Da, 예를 들어, 500 내지 10,000Da, 1000 내지 5000Da, 10,000 내지 20,000Da 또는 20,000 내지 40,000Da의 분자량을 갖는다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 2개 이상의 이러한 중합체 모이어티를 포함할 수 있으며, 이 경우에 모든 이러한 부분의 총 분자량은 일반적으로 상기 제공된 범위 내에 포함될 것이다.
일부 실시형태에서, 중합체 모이어티는 아미노산 측쇄의 아미노, 카복실, 또는 티올 기에 커플링될 수 있다(공유 연결부에 의해서). 특정 예는 Cys 잔기의 티올기 및 Lys 잔기의 엡실론 아미노기이며, Asp 및 Glu 잔기의 카복실기가 또한 포함될 수 있다.
당업자는 커플링 반응을 수행하기 위해 사용될 수 있는 적합한 기술을 잘 인식할 것이다. 예를 들어, 넥타르테 라퓨틱스 AL사(Nektar Therapeutics AL)로부터 입수 가능한 시약을 사용하여 말레이미도 연결부에 의해 메톡시기를 보유하는 PEG 부분을 Cys 티올기에 커플링할 수 있다. 적합한 화학의 상세 사항에 대해서는 국제 특허 제WO2008/101017호 및 상기에 인용된 참고 문헌을 또한 참조한다. 또한, 말레이미드-작용화 PEG를 Cys 잔기의 측쇄 설프하이드릴기에 접합할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 다이설파이드 결합 산화는 단일 단계 내에서 일어날 수 있거나, 2-단계 공정이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 단일 산화 단계의 경우, 조립 중에 트리틸 보호기를 흔히 사용하고, 절단 중에 탈보호를 허용하며, 용액 산화가 이어진다. 제2 이황화 결합이 필요한 경우, 자연 산화(native oxidation) 또는 선택적 산화(selective oxidation)의 선택이 주어진다. 직교 보호기(orthogonal protecting group)가 필요한 선택적 산화의 경우, 시스테인을 위한 보호기로서 Acm 및 트리틸이 사용된다. 절단은 시스테인의 보호 쌍 하나의 제거를 유발하여 이 쌍의 산화를 허용한다. 이어서, Acm 기로 보호된 시스테인의 제2 산화성 탈보호 단계를 수행한다. 자연 산화의 경우, 모든 시스테인에 대해 트리틸 보호기를 사용하며, 펩타이드의 자연 폴딩을 허용한다.
당업자는 산화 단계를 수행하기 위해 사용할 수 있는 적합한 기술을 잘 인식할 것이다.
특별한 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 반감기 연장 모이어티를 포함하며, 이것은 하기로부터 선택될 수 있지만 이들에 제한되지는 않는다: Ahx-Palm, PEG2-Palm, PEG11-Palm, 아이소Glu-Palm, dapa-Palm, 아이소Glu-라우르산, 아이소Glu-미스테르산 및 아이소Glu-아이소발레르산.
특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체는 하기에 도시된 구조를 갖는 반감기 연장 모이어티를 포함하고, 식 중, n=0 내지 24 또는 n=14 내지 24이다:
Figure pct00017
.
특정 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 표 3에 제시된 접합된 반감기 연장 모이어티를 포함한다.
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
특정 실시형태에서, 반감기 연장 모이어티는 헵시딘 유사체에 직접 접합되는 반면, 다른 실시형태에서, 반감기 연장 모이어티는 링커 모이어티, 예를 들어, 표 2 또는 표 4에 도시된 것 중 임의의 것을 통해 헵시딘 유사체 펩타이드에 접합된다.
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
표 4에 제시된 링커 구조와 관련하여, (예를 들어, L4, L8 또는 L13에서) n=1 내지 24 또는 n= 1 내지 25 등에 대한 언급은 n이 제시된 범위 내의 임의의 정수일 수 있다는 것을 나타낸다. 예를 들어, 표 4에 제시된 L4의 경우, n은 1, 2, 3 등일 수 있고, n=5인 경우, L4는 L3(Ahx)에 제시된 구조를 갖는다.
특별한 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 표 5에 제시된 하기 조합 중 임의의 것을 비롯하여 표 4에 제시된 링커 모이어티 중 임의의 것 및 표 3에 제시된 반감기 연장 모이어티 중 임의의 것을 포함한다.
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
특정 실시형태에서, 헵시딘 유사체는 2개 이상의 링커를 포함한다. 특별한 실시형태에서, 2개의 링커는 연쇄화되어 있고(concatamerized), 즉 서로에 결합되어 있다.
관련 실시형태에서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 헵시딘 유사체 중 임의의 것에 존재하는 펩타이드 서열을 갖는 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리폴리뉴클레오타이드를 포함한다.
또한 본 발명은 본 발명의 폴리폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터, 예를 들어, 발현 벡터를 포함한다.
치료 방법
진성적혈구증가증(PV)은 골수, 적혈구, 거핵구 세포 증식/축적의 증가를 나타내는 만성 진행성 삼계통 클론 장애이며, 세계보건기구(World Health Organization: WHO)는 이를 골수증식성 신생물로 특징규명하였다(Arber et al., Blood, 2016,127(20):2391-405). 진단은 2개의 기준으로 정의되는데; 첫 번째는 증가된 적혈구 질량, 삼계통 과세포성을 나타내는 골수 생검 및 JAK2V617F 또는 JAK2 엑손 12 돌연변이의 존재이고, 두 번째 기준은 적혈구증가증, 골수 생검 확인 및 정상보다 낮은 혈청 에리트로포이에틴 수준을 통합한다(문헌[Arber et al., Blood, 2016,127(20):2391-405]).
정상적혈구 개체에서 적혈구 생산 동안, 적혈구 생성은 JAK2에 의존하는 에리트로포이에틴에 의해 조절되지만, JAK2가 구성적으로 활성화되는 경우 에리트로포이에틴-독립적인 적혈구 생산이 적혈구증가증을 유발한다. PV 환자의 약 95%가 JAK2V617F 돌연변이를 보유한다(문헌[Rampal et a., Blood. 2014, 123(22):e123-33]). PV는 골수섬유증으로 진행하거나 백혈병 변형을 겪을 수 있다. PV 남성의 적혈구증가증은 16.5g/㎗ 초과의 Hgb 또는 49% 초과의 Hct, 여성에서는 16.0g/㎗ 초과의 Hgb 또는 48% 초과의 Hct를 특징으로 한다. PV 환자에서 44% 초과의 헤마토크리트는 겪은 혈전색전성 합병증의 수의 급격한 증가와 관련이 있다(문헌[Pearson et al., Lancet. 1978;2:1219-1221]). 골수 생검은 본태성 혈소판 증가증으로부터 PV를 확인하기 위해 채취되며, 삼계통 성장과 함께 연령에 대한 과세포성을 나타내야 한다.
미국에서 추정되는 148,000명의 사람들이 PV를 가지면서 살아가는데, 진단 시 중앙값 연령이 61세이다(문헌[Stein et al., J Clin Oncol. 2015 Nov 20;33(33):3953-60]). 혈액 과점성과 관련된 적혈구증가증 증상은 피로, 뼈 통증, 두통, 현기증, 시각 장애, 비정형 흉통, 소양증, 홍반성 통증 및 감각 이상 등을 포함한다(문헌[Tefferi et al., Blood Cancer J. 2018, 8(1):3]). 임상적 특징은 비장종대, 혈전 및 출혈 합병증, 백혈병 변형의 위험을 포함한다.
PV는 후속 치료 요법을 정의하는 2개의 위험 범주로 분류된다: 고위험(60세 이상 및 혈전증 병력) 및 저위험(60세 미만의 연령 및 혈전증 병력 없음)(문헌[Tefferi & Barbui, Am J Hematol. 2017 Jan;92(1):94-108]). 미국에서, 대안적인 분류가 사용될 수 있다: 고위험(연령 60세 이상) 및 저위험(연령 60세 미만). 모든 PV 환자는 혈전출혈 합병증을 예방하기 위해서 헤마토크리트를 줄이기 위한 치료적 정맥절개술 및 1일 1회 아스피린(81㎎)을 제공받는다. 치료적 정맥절개술을 도입하기 전에, 치료되지 않은 PV의 중앙값 생존은 2년 미만이었고, 사망은 혈전 합병증으로 인한 것이었다(문헌[Tefferi et al., 2018]). 현재 치료법으로, 60세 미만 환자에서 진단 시점부터 중앙 생존 기간은 24년이며, 60세 초과의 환자에서 생존 기간은 14년이다. 치료적 정맥절개술을 위한 헤마토크리트 목표는 남성의 경우 45% 미만, 여성의 경우 42% 미만, 임신 중에는 36% 미만이며(문헌[(Streiff et al., Blood. 2002, 99 (4): 1144-9]), 이는 각각 15, 14 및 12g/㎗의 Hgb에 상응한다. 치료적 정맥 절개술의 목표는 만성 철 결핍 상태를 생성하여, 적혈구 생산을 감소시키는 것이다. 더욱이, 철-결핍 적혈구는 감소된 크기로 인해 정상적혈구보다 점성이 낮다. 다행하게도, 다음 운동 평가에서 확인된 만성 철-결핍 PV 환자는 정상적혈구 대응 환자에게서 예상되는 철 결핍과 관련된 유산소 결핍을 경험하지 않는다(문헌[Rector et al., Medicine (Baltimore). 1982 Nov;61(6):382-9]).
세포감소 요법(cytoreductive therapy)은 정맥절개술을 견딜 수 없거나, 진행성 비장비대를 나타내거나, 혈소판 수치가 1500×109/L 또는 진행성 백혈구 증가증을 갖는 고위험 환자 및 저위험 환자에게 사용된다. 세포감소제는 하이드록시유레아, 인터페론 알파, 룩소리티닙(Jakafi®) 및 부설판을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 미국에서, 하이드록시유레아는 정맥절개술 단독 사용에 비해 골수 억제를 효과적으로 개선하고, 혈전증 위험을 감소시키기 때문에 40세 초과의 PV 환자의 1차 치료제이다. 그러나, 2차 백혈병에 대한 하이드록시유레아의 장기적인 위험에 대한 우려는 타당하다. 8년 초과의 중앙값 추적관찰 후, 진성 적혈구증가증 연구 군은 PV가 있는 평가된 환자의 5.4%가 하이드록시유레아를 제공받은 후 백혈병이 발병한 반면, 정맥절개만으로 치료된 환자의 1.5%가 백혈병이 발병하였다고 보고하였다(문헌[Fruchtman et al., Semin Hematol. 1997, 34:17-23]). 하이드록시유레아에 대한 내약성이 없거나 내성이 있는 환자는 페길화된 IFN-α 또는 부설판으로 관리할 수 있다. IFN-α는 65세 미만의 환자에서 선호되고, 부설판은 고령자에서 선호된다.
PV가 있는 환자 4명 중 대략 1명은 하이드록시유레아에 대한 부적절한 반응을 갖거나 내약성이 없기 때문에 통제되지 않는 것으로 간주된다. Jakafi®(룩솔리티닙)는 하이드록시유레아에 내성이 있거나 내약성이 없는 PV 환자를 위해 미국 식품의약국(FDA)에서 승인한 JAK1/JAK2 저해제이다. 승인은 하이드록시유레아에 내성이 있거나 내약성이 없는 진성 적혈구증가증 대상체에서 효능 및 안전성의 반응-무작위 공개 다기관 3상 연구라고 지칭되는 3상 연구에 기초하였다: JAK 저해제 INC424 정제 대 최선의 치료(best available care: BAT). 이 시험은 하이드록시유레아에 내약성이 없거나 내성이 있는 정맥절개술-의존적 PV 및 비장종대를 갖는 환자를 평가하였고, 룩솔리티닙(n=110) 또는 최선의 치료(n=112)에 대해 무작위 배정하였다. 종합 1차 평가변수는 제32주에 헤마토크리트 제어(45% 미만) 및 비장 감소(35% 이상 감소)를 포함하였다. 제32주 이후에, 최선의 치료에 무작위 배정된 환자는 룩소리티닙으로 넘어갈 수 있었다. 제32주에, 룩소리티닙에 무작위 배정된 환자의 77%가 1차 평가변수의 적어도 1개 구성성분을 충족했지만 BAT를 제공받은 환자의 1%만 1차 평가변수에 도달하였다. 1차 평가변수에 도달한 룩소리티닙-치료 환자의 대다수(91%)는 제48주에 확인된 반응을 보였고, 1년 동안 1차 반응을 유지할 확률은 94%였다. 혈전색전증 발병률은 룩소리티닙군에서 더 낮았으며, BAT를 제공받은 환자에서의 6건의 사례와 비교하여 32주 동안 보고된 사례는 단 1건(문맥 혈전증)이었다. 반응 시험 조사관은 하이드록시유레아에 부적절한 반응을 보이거나 내약성이 없는 PV 환자에서 룩소리티닙이 정맥절개술 없이 헤마토크리트를 통제하고, 혈구 수치를 정상화하고, 비장 부피를 줄이고, 가려움증, 피로 및 식은땀을 비롯한 PV-연관 증상을 개선하는 데 BAT보다 우수하다고 결론지었다.
미국의 환자들은 고통, 성가심 및 불편을 야기하는 절차로 연간 약 8회의 정맥 절개술을 제공받는다(문헌[Boccia et al., Blood, 2017, 130(Suppl 1), 5271]). 정맥절개술을 받는 데 상당한 시간이 소요되는데, 이것은 절차당 대략 반나절을 포함한다. 더욱이, 많은 산화환원/대사 순환이 발생하므로(이에 대해 더 많이 필요함), 진성 적혈구증가증에서 정맥절개술 요법의 궁극적인 목표가 적혈구생성을 제한하는 만성 철 결핍 상태를 달성하는 것이라면, 이것은 이론적으로 헵시딘/헵시딘 모방체로 얻을 수 있다.
25개 아미노산 펩타이드인 헵시딘은 전신 철 항상성을 조절하고, 혈장 철 농도 및 철 저장에 반응하여 간에 의해 생성된다. 헵시딘은 철 흡수, 재순환 및 저장에 관여하는 세포 표면에서 발현되는 세포 철 외수송 페로포틴(FPN-1)을 저해한다. 헵시딘은 전신 철 제한을 조절하며, 외인성 헵시딘 모방체의 외부 투여는 뮤린 PV 모델에서 Hgb 농도 및 비장비대를 감소시켰다(문헌[Casu et al, Blood. 2016;128(2):265-276]).
JAK2가 구성적으로 활성화되는 경우, 에리트로포이에틴-독립적인 적혈구 생성이 촉발되어 적혈구증가증을 유발한다. 돌연변이 Jak2의 효과를 방지하기 위한 접근법은 헵시딘 또는 헵시딘 모방 펩타이드로 철 제한을 유도하는 것이다. 낮은 철 수준은 Jak2의 하류에 있는 지점에서 에리트로포이에틴 신호 전달을 저해하여 무시 신호를 제공한다. 돌연변이를 유발하는 적혈구증가증을 보유하는 인간 Jak2 유전자를 발현하는 트랜스제닉 마우스에 헵시딘 모방 펩타이드를 투여하면, 진성 적혈구증가증의 특징인 적혈구 생산 및 헤마토크리트 증가가 정상 범위로 되돌아간다(문헌[Casu et al Blood. 2016;128(2):265-276] 참조).
일부 실시형태에서, 본 발명은 진성적혈구증가증과 관련된 질환 또는 장애를 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 본 발명의 헵시딘 유사체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 대상체에게 투여되는 헵시딘 유사체는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)로 존재한다. 전체적으로 헵시딘 유사체에 대한 언급은 이러한 헵시딘 유사체의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 것으로 이해된다.
일 실시형태에서, 페로포틴의 증가된 활성 또는 발현을 특징으로 하는 질환 또는 장애를 앓고 있는 대상체를 치료하기 위한 방법이 제공되며, 이 방법은 본 발명의 헵시딘 유사체 또는 조성물을 개체에서 페로포틴에 (부분적으로 또는 완전히) 결합하여 이를 효능작용시키기에 충분한 양으로 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 조절되지 않은 철 대사를 특징으로 하는 질환 또는 장애를 앓고 있는 대상체를 치료하기 위한 방법이 제공되며, 이 방법은 대상체에게 본 발명의 헵시딘 유사체 또는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 방법은 본 발명의 헵시딘 유사체 또는 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 제공하는 단계를 포함한다. 특별한 실시형태에서, 이를 필요로 하는 대상체는 조절되지 않은 철 수준을 특징으로 하는 질환 또는 장애(예를 들어, 철 대사의 질환 또는 장애, 철 과부하와 관련된 질환 또는 장애; 및 비정상적인 헵시딘 활성 또는 발현과 관련된 질환 또는 장애)로 진단된 적이 있거나 이것이 발병할 위험이 있다고 결정된 적이 있다. 특별한 실시형태에서, 대상체는 포유동물(예를 들어, 인간)이다.
특정 실시형태에서, 질환 또는 장애는 진성 적혈구증가증이다. 특정 실시형태에서, 진성 적혈구증가증은 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증이다. 일부 실시형태에서, 진성 적혈구증가증은 저위험 환자에서의 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 고위험 진성 적혈구증가증 환자이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 저위험 진성 적혈구증가증 환자이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 증상이 있는 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증 환자이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증을 갖는 저위험 환자이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증을 갖는 고위험 환자이다. 일부 실시형태에서 대상체는 진성 적혈구증가증으로 진단되고, 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하기 전 24주 동안 45% 이하의 헤마토크리트를 목표로 적어도 3회의 정맥절개술을 제공받은 적이 있다. 일부 실시형태에서, 대상체는 포유동물, 예를 들어, 인간이다.
따라서, 일 실시형태에서, 진성 적혈구증가증을 앓고 있거나 이것으로 진단된 대상체를 치료하기 위한 방법이 제공되며, 이 방법은 대상체에게 본 명세서에 개시된 헵시딘 유사체 또는 조성물을 진성 적혈구증가증을 치료하는 데 효과적인 양으로 투여하는 단계를 포함한다. 특정 실시형태에서, 진성 적혈구증가증은 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증이다. 일부 실시형태에서, 진성 적혈구증가증은 저위험 환자에서의 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증이다. 일부 실시형태에서, 진성 적혈구증가증은 고위험 환자에서의 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 저위험 진성 적혈구증가증 환자이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 고위험 진성 적혈구증가증 환자이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 증상이 있는 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증 환자이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증을 갖는 저위험 환자이다. 일부 실시형태에서 대상체는 진성 적혈구증가증으로 진단되고, 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하기 전 24주 동안 45% 이하의 헤마토크리트를 목표로 적어도 3회의 정맥절개술을 제공받은 적이 있다. 일부 실시형태에서, 대상체는 포유동물, 예를 들어, 인간이다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 진성 적혈구증가증의 치료를 필요로 하는 인간 대상체에서 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 개시된 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 펩타이드 또는 조성물, 예를 들어, 서열번호 40, 서열번호 45, 서열번호 46; 서열번호 47 또는 서열번호 48의 구조를 갖는 펩타이드를 투여하는 단계를 포함한다. 특정 실시형태에서, 진성 적혈구증가증은 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증이다. 일부 실시형태에서, 진성 적혈구증가증은 저위험 환자 또는 고위험 환자에서의 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 저위험 진성 적혈구증가증 환자이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 고위험 진성 적혈구증가증 환자이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 증상이 있는 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증 환자이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증을 갖는 저위험 환자이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증을 갖는 고위험 환자이다. 일부 실시형태에서 대상체는 진성 적혈구증가증으로 진단되고, 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하기 전 24주 동안 45% 이하의 헤마토크리트를 목표로 적어도 3회의 정맥절개술을 제공받은 적이 있다.
본 명세서에 개시된 방법 중 임의의 것의 특별한 실시형태에서, 유효량은 약 5㎎ 내지 약 200㎎ 또는 약 10㎎ 내지 약 100㎎, 예를 들어, 약 10㎎, 약 15㎎, 약 20㎎, 약 25㎎, 약 30㎎, 약 40㎎, 약 50㎎, 약 60㎎, 약 70㎎, 약 80㎎, 약 100㎎ 또는 약 120㎎이다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증을 갖는 인간 대상체의 치료 방법을 제공하며, 이 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 개시된 헵시딘 유사체, 예를 들어, 서열번호 40, 서열번호 45, 서열번호 46; 서열번호 47 또는 서열번호 48의 구조를 갖는 펩타이드를 피하로 투여하는 단계를 포함한다. 특별한 실시형태에서, 유효량은 약 10㎎ 내지 약 100㎎, 예를 들어, 약 10㎎, 약 15㎎, 약 20㎎, 약 25㎎, 약 30㎎, 약 40㎎, 약 50㎎, 약 60㎎, 약 70㎎, 약 80㎎ 또는 약 100㎎이고, 헵시딘 유사체는 대상체에게 약 주 2회, 약 주 1회, 약 격주 1회 또는 약 월 1회 투여된다. 특별한 실시형태에서, 대상체는 약 15㎎, 약 20㎎, 약 30㎎, 약 40㎎, 약 50㎎, 약 60㎎, 약 70㎎ 또는 약 80㎎의 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 약 주 1회 투여된다. 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체가 여성에게 투여되는 경우, 헵시딘 유사체의 감소된 양, 예를 들어, 약 10㎎ 내지 약 60㎎, 예를 들어, 약 10㎎, 약 15㎎, 약 20㎎, 약 25㎎, 약 30㎎, 약 40㎎, 약 50㎎ 또는 약 60㎎이 투여된다. 일부 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 약 2주마다 1회 또는 약 월 1회 투여된다. 일부 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 일정 시간 기간에 걸쳐서, 예를 들어, 적어도 6개월, 적어도 또는 약 1년, 적어도 또는 약 2년, 적어도 또는 약 5년 또는 대상체의 생애의 시간에 걸쳐서 다회 투여된다.
본 명세서에 개시된 방법의 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 펩타이드는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)로 투여되고, 일부 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 펩타이드(또는 조성물)은 피하 주사를 통해 투여된다. 일부 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 펩타이드(또는 조성물)는 예를 들어, 필요할 때까지 일정 시간 기간에 걸쳐서, 약 매주 투여된다. 일부 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 펩타이드(또는 조성물)는 약 3일 마다, 약 주 2회, 약 4일마다, 약 5일마다, 약 주 단위로, 약 2주마다 1회, 약 월 1회, 약 6주마다 1회, 약 8주마다 1회, 약 2개월마다 1회 또는 약 3개월마다 1회 투여된다. 특별한 실시형태에서, 그것은 약 주 1회 또는 약 2주마다 1회 투여된다. 특별한 실시형태에서, 그것은 약 주 1회 투여된다. 일부 실시형태에서, 그것은 약 2주마다 1회, 약 월 1회 또는 약 2개월마다 1회 투여된다.
본 명세서에 개시된 방법의 각종 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 유효량은 대상체에서 약 5ng/㎖ 내지 약 3500ng/㎖, 약 100ng/㎖ 내지 약 3000ng/㎖, 약 5ng/㎖ 내지 약 900ng/㎖ 또는 약 5ng/㎖ 내지 약 250ng/㎖ 또는 약 20ng/㎖ 내지 150ng/㎖의 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 혈장 또는 혈청 농도를 달성하기에 충분한 양이다. 유효량은 환자를 본 명세서에 정의된 헤마토크리트 값의 바람직한 범위로 유지시킨다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 PV를 치료하는 방법을 제공하며, 이 방법은 유효량의 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 대상체에게 제공하는 단계를 포함하며, 대상체는 약 2ng/㎖ 내지 약 3500ng/㎖, 약 5ng/㎖ 내지 약 3500ng/㎖, 약 100ng/㎖ 내지 약 3000ng/㎖, 약 5ng/㎖ 내지 약 900ng/㎖, 약 5ng/㎖ 내지 약 250ng/㎖ 또는 약 20ng/㎖ 내지 150ng/㎖의 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 혈장 또는 혈청 농도를 달성하는 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 양이 제공된다. 특정 실시형태에서, 달성될 혈장 또는 혈청 농도는 적어도 약 25ng/㎖, 적어도 약 50 ng/㎖, 적어도 약 100ng/㎖, 적어도 약 200ng/㎖, 적어도 약 500ng/㎖, 적어도 약 1000ng/㎖, 적어도 약 1500ng/㎖, 적어도 약 2000ng/㎖, 적어도 약 2500ng/㎖ 또는 적어도 약 3000ng/㎖이다. 특정 실시형태에서, 달성될 혈장 또는 혈청 농도는 예를 들어, 화합물 A의 경우 약 200ng/㎖ 내지 약 3200ng/㎖ 또는 약 1000ng/㎖ 내지 약 3200ng/㎖ 또는 약 1000ng/㎖ 내지 약 2000ng/㎖ 또는 약 2000ng/㎖ 내지 약 3000ng/㎖이다. 특정 실시형태에서, 달성될 혈장 또는 혈청 농도는 예를 들어, 화합물 A의 경우 적어도 4ng/㎖, 적어도 5ng/㎖, 적어도 8ng/㎖, 적어도 10ng/㎖, 적어도 12ng/㎖/㎖, 적어도 15ng/㎖, 적어도 17ng/㎖ 또는 적어도 20ng/㎖이다. 특별한 실시형태에서, 달성될 혈장 또는 혈청 농도는 예를 들어, 화합물 A의 경우 적어도 약 4ng/㎖ 또는 적어도 약 17ng/㎖이다. 특별한 실시형태에서, 이러한 혈장 또는 혈청 수준은 1회 투여 후에 달성되고, 헵시딘 유사체, 예를 들어, 화합물 A 또는 화합물 B의 다음 투여까지 유지된다. 특별한 실시형태에서, 이러한 혈장 또는 혈청 수준이 달성되고, 헵시딘 유사체, 예를 들어, 화합물 A 또는 화합물 B의 투여 후 적어도 4일, 적어도 5일, 적어도 6일 또는 적어도 1주 동안 유지된다.특정 실시형태에서, 달성될 혈장 또는 혈청 농도는 예를 들어, 화합물 A의 경우 적어도 약 20ng/㎖, 적어도 약 30ng/㎖, 적어도 약 50ng/㎖, 적어도 약 100ng/㎖, 적어도 약 150ng/㎖, 적어도 약 200ng/㎖, 적어도 약 500ng/㎖, 적어도 약 1000ng/㎖, 적어도 약 1500ng/㎖, 적어도 약 2000ng/㎖, 적어도 약 2500ng/㎖ 또는 적어도 약 3000ng/㎖이다. 특정 실시형태에서, 달성될 혈장 또는 혈청 농도는 예를 들어, 화합물 A의 경우 투여 후 20 내지 48시간 이내에 적어도 약 50ng/㎖, 투여 후 20 내지 48시간 이내에 적어도 약 100ng/㎖, 투여 후 20 내지 48시간 이내에 적어도 약 250ng/㎖, 투여 후 20 내지 48시간 이내에 적어도 약 400ng/㎖, 투여 후 20 내지 48시간 이내에 적어도 500ng/㎖, 투여 후 20 내지 48시간 이내에 적어도 약 800ng/㎖ 또는 투여 후 20 내지 48시간 이내에 적어도 약 1000ng/㎖이다. 특정 실시형태에서, 달성될 혈장 또는 혈청 농도는 예를 들어, 화합물 A의 경우 투여 후 20 내지 48시간 이내에 약 25ng/㎖ 내지 약 1000ng/㎖, 투여 후 20 내지 48시간 이내에 약 100ng/㎖ 내지 약 1000ng/㎖, 투여 후 20 내지 48시간 이내에 약 200ng/㎖ 내지 약 1000ng/㎖, 투여 후 20 내지 48시간 이내에 약 400ng/㎖ 내지 약 850ng/㎖이다. 특정 실시형태에서, 달성될 혈장 또는 혈청 농도는 예를 들어, 화합물 B의 경우 약 25ng/㎖ 내지 약 125ng/㎖ 또는 약 50ng/㎖ 내지 약 125ng/㎖이다. 특정 실시형태에서, 달성될 혈장 또는 혈청 농도는 예를 들어, 화합물 B의 경우 적어도 약 25ng/㎖, 적어도 약 50ng/㎖ 또는 적어도 약 100ng/㎖이다. 특정 실시형태에서, 이러한 혈장 또는 혈청 농도는 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 투여 후 최대 혈장 또는 혈청 농도이다. 특정 실시형태에서, 이러한 혈장 또는 혈청 농도는 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 투여 후 일정 시간 기간 동안 예를 들어, 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 4일, 적어도 5일, 적어도 6일, 적어도 1주일, 적어도 9일, 적어도 12일 또는 적어도 2주일의 시간 기간 동안 유지된다. 특정 실시형태에서, 예를 들어, 화합물 A의 경우, 예를 들어, 약 4시간, 약 8시간, 약 12시간, 약 24시간 또는 약 48시간 동안 달성되는 혈장 또는 혈청 농도는 약 200ng/㎖ 내지 약 3200ng/㎖ 또는 약 1000ng/㎖ 내지 약 3200ng/㎖ 또는 약 1000ng/㎖ 내지 약 2000ng/㎖ 또는 약 2000ng/㎖ 내지 약 3000ng/㎖이다. 특정 실시형태에서, 예를 들어, 화합물 A의 경우, 적어도 약 4시간, 약 8시간, 약 12시간, 약 24시간, 약 48시간 또는 약 72시간 동안 달성되는 혈장 또는 혈청 농도는 적어도 약 200ng/㎖, 적어도 약 500ng/㎖, 적어도 약 1000ng/㎖, 적어도 약 1500ng/㎖, 적어도 약 2000ng/㎖, 적어도 약 2500ng/㎖ 또는 적어도 약 3000ng/㎖이다. 특정 실시형태에서, 예를 들어, 화합물 B의 경우, 예를 들어, 약 4시간, 약 8시간, 약 12시간, 약 24시간 또는 약 48시간 동안 달성되는 혈장 또는 혈청 농도는 약 25ng/㎖ 내지 약 125ng/㎖ 또는 약 50ng/㎖ 내지 약 125ng/㎖이다. 특정 실시형태에서, 예를 들어, 화합물 B의 경우, 예를 들어, 약 4시간, 약 8시간, 약 12시간, 약 24시간 또는 약 48시간 동안 달성되는 혈장 또는 혈청 농도는 적어도 약 25ng/㎖, 적어도 약 50 ng/㎖ 또는 적어도 약 100ng/㎖이다. 특별한 실시형태에서. 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 피하로 투여된다. 특별한 실시형태에서, 대상체는 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증을 갖는다. 특별한 실시형태에서, 대상체는 약 10㎎ 내지 약 100㎎, 예를 들어, 약 10㎎, 약 15㎎, 약 20㎎, 약 25㎎, 약 30㎎, 약 40㎎, 약 50㎎, 약 60㎎, 약 70㎎, 약 80㎎ 또는 약 100㎎의 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 투여되고, 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 대상체에게 약 주 2회, 약 주 1회, 약 격주 1회 또는 약 월 1회 투여된다. 특별한 실시형태에서, 대상체는 약 15㎎, 약 20㎎, 약 30㎎, 약 40㎎, 약 50㎎, 약 60㎎, 약 70㎎ 또는 약 80㎎의 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 약 주 1회 또는 약 2주 1회 투여된다. 특별한 실시형태에서, 대상체는 약 15㎎, 약 20㎎, 약 30㎎, 약 40㎎, 약 50㎎, 약 60㎎, 약 70㎎ 또는 약 80㎎의 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 약 주 1회 투여된다.
특정 실시형태에서, 대상체는 세포감소 요법, 예를 들어, 하이드록시유레아, 인터페론 또는 룩솔리티닙과 조합하여 본 명세서에 개시된 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 예를 들어, 서열번호 40, 서열번호 45, 서열번호 46; 서열번호 47 또는 서열번호 48의 구조를 갖는 헵시딘 유사체 또는 화합물 A 또는 화합물 B로 치료된다. 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체가 세포감소 요법과 조합하여 사용되는 경우, 헵시딘 유사체의 감소된 양, 예를 들어, 약 10㎎ 내지 약 60㎎, 예를 들어, 약 10㎎, 약 15㎎, 약 20㎎, 약 25㎎, 약 30㎎, 약 40㎎, 약 50㎎ 또는 약 60㎎이 투여된다.
본 명세서에 개시된 방법 중 임의의 것은 헵시딘 유사체의 투여 후 대상체의 헤마토크리트를 결정하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 도 7에 도시된 바와 같이, 헤마토크리트 수준은 환자에게 투여된 헵시딘 유사체의 양을 적정함으로써 목적하는 수준으로 유지될 수 있다. 따라서, 이 방법은 헤마토크리트를 목표 수준 미만으로 유지시키는 데 최적으로 적합한 헵시딘 유사체의 농도/용량을 식별하여 투여하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 인간의 경우 목표 수준은 예를 들어, 본 명세서에서 측정되는 경우 45% 이하이다. 특정 실시형태에서, 남성의 경우 목표 수준은 45% 이하(예를 들어, 약 37% 내지 약 45%)이고; 일부 예에서, 여성의 경우 목표 임계 수치(예를 들어, 임산부 아님)는 43% 이하 또는 42% 이하(예를 들어, 약 35% 내지 약 42% 또는 43%)이고; 일부 예에서, 임산부의 경우 목표 수준은 36% 이하(예를 들어, 약 30% 내지 약 36%)이다. 일부 실시형태에서, 방법은 헵시딘 유사체 용량과 헤마토크리트 반응(즉, 헤마토크리트의 감소) 사이에 관계의 이해에 기초하여 환자에 대해서 45% 미만(또는 정의된 수준까지, 예를 들어, 42%)을 달성하도록 실시된다. 따라서, 본 개시내용은 환자의 헤마토크리트가 목적하는 목표 수준 미만인 시간을 최대화하고, 이러한 목표 수준을 초과하여 변동하는 것을 최소화할 수 있는 투여 요법을 제공한다.
특별한 실시형태에서, 대상체의 헤마토크리트는 헵시딘 유사체의 투여 후 약 1일 내지 약 7일의 시간 기간 동안 결정된다. 특별한 실시형태에서, 대상체의 헤마토크리트가 45% 초과로 결정되는 경우, 헤마토크리트가 결정되기 직전에 투여된 용량과 비교하여 더 높은 용량의 헵시딘 유사체가 다음 예정된 치료에서 대상체에게 투여된다. 특별한 실시형태에서, 대상체의 헤마토크리트가 대상체의 성별 및 임신 상태에 대한 목적하는 목표 수준보다 높은 것으로 결정되면, 헤마토크리트가 결정되기 직전에 투여된 용량과 비교하여 더 높은 용량의 헵시딘 유사체가 다음 예정된 치료에서 대상체에게 투여된다. 특별한 실시형태에서, 대상체의 헤마토크리트가 역치 수준 미만, 예를 들어, 42% 미만, 40% 미만, 37.5% 미만, 36% 미만 또는 35% 미만으로 결정되는 경우, 헤마토크리트가 결정되기 직전에 투여된 용량과 비교하여 더 낮은 용량의 헵시딘 유사체가 다음 예정된 치료에서 대상체에게 투여된다. 일부 실시형태에서, 대상체의 헤마토크리트가 허용 가능한 범위, 예를 들어 35% 내지 42%, 35% 내지 45%, 37.5% 내지 45%, 40% 내지 45% 또는 40% 내지 44%인 것으로 결정되는 경우, 헤마토크리트가 결정되기 직전에 투여된 용량과 비교하여 동일한 용량의 헵시딘 유사체가 다음 예정된 치료에서 대상체에게 투여된다. 허용 가능한 범위는 대상체의 성별 및 임신 상태에 따라 다를 수 있다. 특별한 실시형태에서, 남성에 대한 허용 가능한 범위는 약 37% 내지 약 45%이고, 비임신 여성에 대해 허용 가능한 범위는 약 35% 내지 약 42% 또는 43%이며, 임신한 여성에 대해 허용 가능한 범위는 약 30% 내지 약 36%이다.
특별한 실시형태에서, 방법은 투여된 투여량의 효과를 모니터링하기 위해 치료 과정에 걸쳐 대상체의 헤마토크리트 수준을 여러 번 결정하는 단계 및 대상체의 헤마토크리트를 목표 범위, 예를 들어, 30% 내지 35%, 35%내지 41%, 35% 내지 45%, 37.5% 내지 45%, 40% 내지 45%, 또는 40% 내지 43% 내에서 유지시키는 것이 필요할 때 투여량을 변경시키는 단계를 포함한다. 특정 실시형태에서, 대상체의 헤마토크리트 수준은 치료 기간에 걸쳐 약 2주마다, 약 3주마다, 약 4주마다 또는 약 8주마다 결정된다. 특정 실시형태에서, 이는 치료 과정에 걸쳐 약 4주마다 결정된다. 특별한 실시형태에서, 목표 범위는 대상의 성별 및 임신 상태에 대해 허용 가능한 범위이다. 특정 실시형태에서, 임의의 방법은 대상체에게 투여되는 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 양을 유지시키거나 조정하는 단계를 포함하고, 이 양은 대상체의 결정된 헤마토크리트가 45%를 초과하는 경우에는 증가되고, 이 양은 대상체의 결정된 헤마토크리트가 37.5% 또는 40% 미만인 경우에는 감소되고, 대상체의 결정된 헤마토크리트가 37.5% 내지 45% 또는 40 내지 44%인 경우에는 이 양을 유지시킨다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 PV의 치료 방법을 제공하며, 이 방법은 PV로 진단된 환자에게 헵시딘 유사체, 예를 들어, 화합물 A를 약 10㎎ 내지 약 80㎎의 투여량으로 적어도 7주의 시간 기간에 걸쳐서 약 주 1회 피하 투여하는 단계를 포함하며, 이 방법은 대상체가 7주 동안 치료적 정맥절개술이 필요하지 않거나 이를 겪지 않게 한다. 특별한 실시형태에서, 투여량은 약 10㎎, 약 15㎎, 약 20㎎, 약 25㎎, 약 30㎎, 약 40㎎, 약 50㎎, 약 60㎎, 약 70㎎ 또는 약 80㎎이다. 특별한 실시형태에서, 대상체는 헵시딘 유사체로 치료되기 전에 1회 이상의 치료적 정맥절개술을 받았다. 특별한 실시형태에서, 대상체는 헵시딘 유사체로 치료되기 전 8주 이내에 1회 이상의 치료적 정맥절개술을 받았다. 특별한 실시형태에서, 대상체는 남성이고, 그의 헤마토크리트 수준은 적어도 7주 동안 45% 미만으로 유지된다. 특별한 실시형태에서, 대상체는 비임신 여성이고, 그녀의 헤마토크리트 수준은 적어도 7주 동안 42% 미만 또는 43% 미만으로 유지된다. 특별한 실시형태에서, 대상체는 임신한 여성이고, 그녀의 헤마토크리트 수준은 적어도 7주 동안 36% 미만으로 유지된다. 특별한 실시형태에서, 헤마토크리트 수준은 헵시딘 유사체의 최초 투여 후 적어도 8주, 적어도 12주, 적어도 16주, 적어도 6개월, 적어도 1년, 또는 적어도 2년 동안 그리고 치료 동안 유지된다.
일 실시형태에서, 본 개시내용은 PV의 치료 방법을 제공하며, 이 방법은 PV로 진단된 환자에게 헵시딘 유사체, 예를 들어, 화합물 A를 약 10㎎ 내지 약 80㎎의 투여량으로 적어도 7주의 시간 기간에 걸쳐서 약 주 1회 피하 투여하는 단계를 포함하며, 이 방법은 대상체가 7주 동안 치료적 정맥절개술이 필요하지 않거나 이를 겪지 않게 한다. 특별한 실시형태에서, 대상체는 헵시딘 유사체로 치료되기 전에 1회 이상의 치료적 정맥절개술을 받았다. 특별한 실시형태에서, 대상체는 헵시딘 유사체로 치료되기 전 8주 이내에 1회 이상의 치료적 정맥절개술을 받았다. 특별한 실시형태에서, 대상체의 헤마토크리트 수준은 7주 동안 1회 이상 측정되고, 그 다음 주 단위의 용량은 대상체의 헤마토크리트 수준이 허용 가능한 범위를 초과하면 증가되거나, 대상체의 헤마토크리트 수준이 허용 가능한 범위 미만이면 감소된다. 특별한 실시형태에서, 대상체는 남성이고, 허용 가능한 범위는 약 37% 내지 약 45%이다. 특별한 실시형태에서, 증가되거나 감소되는 투여량은 또한 약 10㎎ 내지 약 80㎎이다. 특정 실시형태에서, 투여량은 약 5㎎, 약 10㎎, 약 15㎎ 또는 약 20㎎만큰 증가되거나 감소된다. 특별한 실시형태에서, 투여량은 약 10㎎, 약 15㎎, 약 20㎎, 약 25㎎, 약 30㎎, 약 40㎎, 약 50㎎, 약 60㎎, 약 70㎎ 또는 약 80㎎이다. 일 실시형태에서, 대상체는 비임신 여성이고, 허용 가능한 범위는 약 35% 내지 약 43%이다. 일 실시형태에서, 대상체는 임신한 여성이고, 허용 가능한 범위는 약 30% 내지 약 36%이다. 특별한 실시형태에서, 대상체는 헵시딘 유사체의 최초 투여 후 적어도 8주, 적어도 12주, 적어도 16주, 적어도 6개월, 적어도 1년, 또는 적어도 2년 동안 그리고 치료 동안 정맥절개술이 필요하지 않거나 이를 겪지 않는다. 특별한 실시형태에서, 치료는 적어도 8주, 적어도 12주, 적어도 16주, 적어도 6개월, 적어도 1년 또는 적어도 2년 동안 계속된다.
본 명세서에 개시된 방법의 각종 실시형태에서, 방법은 유효량의 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 일정 시간 기간에 걸쳐서 다회 투여하는 것을 포함하며, 예를 들어, 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 일정 시간 기간에 걸쳐서 약 주 1회 또는 약 주 2회 대상체에게 투여된다. 유효량은 하나의 투여에서 또 다른 투여까지 달라질 수 있거나, 그것은 동일하게 유지될 수 있다. 시간 기간은 달라질 수 있고, 예를 들어, 1주 내지 10년, 1개월 내지 10년, 1개월 내지 5년, 1개월 내지 2년 또는 4개월 내지 1년일 수 있다. 특정 실시형태에서, 헵시딘 유사체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
(a) 아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(PEG3-Palm))PRSKGWVCK-NH2(서열번호 40) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; (b) 아이소발레르산-DTHFPCI(K(아이소Glu-Palm))FEPRSKGCK-NH2(서열번호 45) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염;
(c) 아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(아이소Glu-Palm))PRSKGCK-NH2(서열번호 46) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; (d) 아이소발레르산-DTHFPCIKFEP(K(아이소Glu-Palm))SKGCK-NH2(서열번호 47) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및 (e) 아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRS(K(아이소Glu-Palm))GCK-NH2(서열번호 48) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 선택적으로 헵시딘 유사체는 2개의 Cys 아미노산 사이에 이황화 결합을 포함한다. 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 일정 시간 기간에 걸쳐서 약 주 1회 약 10㎎, 약 15㎎, 약 20㎎, 약 25㎎, 약 30㎎, 약 35㎎, 약 40㎎, 약 50㎎, 약 60㎎, 약 70㎎ 또는 약 80㎎의 투여량으로 피하 투여 경로에 의해 대상체에게 제공된다. 유효량은 하나의 투여에서 또 다른 투여까지 달라질 수 있거나, 그것은 동일하게 유지될 수 있다. 특정 실시형태에서, 투여량은 일정 시간 기간에 걸쳐서 대상체의 헤마토크리트 수준에 기초하여 적정된다. 따라서, 특정 실시형태에서, 이 방법은 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 다회 투여 중 1회 이상 후에 대상체의 헤마토크리트를 결정하는 단계를 추가로 포함하며, 다음 투여 동안 대사체에게 제공되는 투여량은 헤마토크리트 값에 기초하여 유지되거나 조정된다. 예를 들어, 대상체의 결정된 헤마토크리트가 대상체의 성별 및 임산 상태에 기초하여 허용 가능한 범위를 초과하면 다음 투여되는 양은 이전에 투여된 양과 비교하여 증가될 수 있거나; 대상체의 결정된 헤마토크리트가 허용 가능한 범위 미만이면 다음 투여되는 양은 이전에 투여된 양과 비교하여 감소될 수 있거나; 대상체의 결정된 헤마토크리트가 허용 가능한 범위 이내이면 다음 투여되는 양은 이전에 투여된 양과 동일할 수 있다. 특정 실시형태에서, 대상체의 헤마토크리트는 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 투여 후 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일 또는 약 7일 후에 투여된다. 대상체의 헤마토크리트 수준은 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 염의 각각의 투여 후에 결정될 수 있거나, 그것은 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 특정 투여 후에만, 예를 들어, 2주마다 1회, 월 1회, 2개월마다 1회, 4개월마다 1회 또는 6개월마다 1회 결정될 수 있다.
본 명세서에 개시된 방법 및 치료 요법의 각종 실시형태에서, 방법은 45% 이하의 대상체의 헤마토크리트 수준을 초래한다. 특정 실시형태에서, 대상체의 헤마토크리트는 일정 시간 기간에 걸쳐서, 예를 들어, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 6개월 또는 더 긴 기간 동안 약 37.5% 내지 약 45% 범위(또는 대상체의 성별 및 임산 상태에 대한 허용 가능한 범위) 이내로 유지된다. 특별한 실시형태에서, 이러한 방법 또는 치료 요법은 (예를 들어, 정맥절개술 필요 환자에서) 적어도 3%, 적어도 5%, 적어도 10%의 헤마토크리트(Hct%) 감소 및/또는 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 40% 또는 적어도 50%의 정맥절개술 감소를 초래한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 3%의 헤마토크리트 감소는 절대 감소, 예를 들어, 46% 내지 43% 감소를 의미한다.
본 명세서에 개시된 방법의 각종 실시형태에서, 방법은 대상체의 혈청 페리틴 수준을 증가시킨다. 특별한 실시형태에서, 혈청 페리틴 수준은 치료 요법 동안 또는 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 6개월 또는 더 긴 기간 동안 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 50%, 적어도 100% 또는 적어도 200%만큼 증가된다. 특별한 실시형태에서, 대상체의 혈청 페리틴 수준은 일정 시간 기간에 걸쳐서, 예를 들어, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 6개월 또는 더 긴 기간 동안 약 25ng/㎖ 내지 약 150ng/㎖의 범위 내에서 유지된다.
본 명세서에 개시된 방법의 각종 실시형태에서, 방법은 대상체의 트랜스페린 포화(TSAT) 수준 및/또는 적어도 60% 또는 적어도 80%의 혈청 철 수준의 감소를 초래하거나 유발한다. 일부 실시형태에서, 대상체의 TSAT 수준은 40% 미만으로 감소된다. 본 명세서에 개시된 방법의 일부 실시형태에서, 방법은 TSAT 및/또는 혈청 철 수준의 약간의 증가를 초래하거나 이를 변화시키지 않고, 특정 실시형태에서, TSAT 및/또는 혈청 철 수준은 정상 수준 미만에서 유지된다.
본 명세서에 개시된 방법의 각종 실시형태에서, 방법은 대상체의 MCV 및/또는 MCH를 증가시킨다. 특별한 실시형태에서, MCV 및/또는 MCH는 치료 요법 동안 또는 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 6개월 또는 더 긴 기간 동안 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 50%, 적어도 100% 또는 적어도 200%만큼 증가된다.
본 명세서에 개시된 방법의 각종 실시형태에서, 방법은 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 80%의 대상체의 헤마토크리트 및/또는 적혈구 수치의 감소를 초래하거나 유발한다. 일부 실시형태에서, 대상체의 TSAT 수준은 40% 미만으로 감소된다. 본 명세서에 개시된 방법의 일부 실시형태에서, 방법은 TSAT 및/또는 혈청 철 수준의 약간의 증가를 초래하거나 이를 변화시키지 않고, 특정 실시형태에서, TSAT 및/또는 혈청 철 수준은 정상 수준 미만에서 유지된다.
본 명세서에 개시된 방법의 각종 실시형태에서, 방법은 예를 들어, 적어도 7주 동안, 적어도 8주 동안, 적어도 9주 동안, 적어도 10주 동안, 적어도 11주 동안 또는 적어도 12주 동안 대상체에서 치료적 정맥절개술을 필요로 하지 않거나 갖지 않는다.
각종 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 방법은 저위험 또는 고위험 PV 환자에 대해서 실시될 수 있다. 특별한 실시형태에서, 저위험 PV 환자는 60세 미만의 PV 환자이다. 특별한 실시형태에서, 고위험 PV 환자는 60세 이상의 PV 환자이다.
특별한 실시형태에서, 치료 요법은 일정 시간 기간에 걸쳐서 헵시딘 유사체를 2회 이상, 3회 이상, 4회 이상 또는 연속적으로, 예를 들어, 일정 시간 기간 동안, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 6개월 또는 더 긴 기간 동안 약 주 1회 또는 약 2주마다 1회 투여하는 것을 포함한다.
본 명세서에 개시된 방법의 각종 실시형태에서, 방법은 대상체의 혈소판 수치의 실질적인 변화, 예를 들어, 50% 초과의 증가 또는 감소를 초래하지 않는다. 특정 실시형태에서, 대상체의 혈소판 수치는 10%, 20%, 30%, 40% 또는 50%만큼 증가되거나 감소되지 않는다.
본 명세서에 개시된 방법의 각종 실시형태에서, 방법은 대상체의 적혈구 수치의 실질적인 변화, 예를 들어, 50% 초과의 증가 또는 감소를 초래하지 않는다. 특정 실시형태에서, 대상체의 적혈구 수치는 10%, 20%, 30%, 40% 또는 50%만큼 증가되거나 감소되지 않는다.
본 명세서에 개시된 방법의 각종 실시형태에서, 방법은 대상체의 백혈구 또는 백혈구 세포 수치의 실질적인 변화, 예를 들어, 50% 초과의 증가 또는 감소를 초래하지 않는다. 특정 실시형태에서, 대상체의 백혈구 또는 백혈구 세포는 10%, 20%, 30%, 40% 또는 50%만큼 증가되거나 감소되지 않는다.
개시된 방법의 특별한 실시형태에서, 방법은 PV의 1종 이상의 증상의 경감 또는 완화를 포함할 수 있는, 대상체에게 치료 이익을 초래한다. 이러한 증상은 가려움증, 탈모, 피로, 두통, 시각 장애, 식은땀 및 혈전성 사건을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서 본 발명의 방법은, 본 발명의 헵시딘 유사체(즉, 제1 치료제)를 제2 치료제와 조합하여 이를 필요로 하는 대상체에게 제공하는 단계를 포함한다. 특정 실시형태에서, 제2 치료제는 약제학적 조성물이 대 상체에게 투여되기 전에 및/또는 그와 동시에 및/또는 그 후에 대상체에게 제공된다. 특별한 실시형태에서, 제2 치료제는 철 킬레이터이다. 특정 실시형태에서, 제2 치료제는 철 킬레이터 데페록사민(Deferoxamine) 및 데페라시록스(Deferasirox)(Exjade™) 중에서 선택된다. 또 다른 실시형태에서, 본 방법은 대상체에게 제3 치료제를 투여하는 단계를 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명은 1종 이상의 본 발명의 헵시딘 유사체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)을 제공한다. 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제, 또는 부형제는 비-독성 고체, 반-고체, 또는 액체 충전제, 희석제, 캡슐화 물질 또는 임의의 유형의 제형화 보조제(formulation auxiliary)를 지칭한다.
용어 "약제학적으로 허용 가능한 담체"는 표준 약제학적 담체 중 임의의 것을 포함한다. 치료 용도를 위한 약제학적으로 허용가능한 담체는 약제학적 기술에서 잘 알려져 있고 예를 들어, 문헌["Remington's Pharmaceutical Sciences", 17th edition, Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mark Publishing Company, Easton, PA, USA, 1985]에 기재되어 있다. 예를 들어, 약산성 또는 생리학적 pH의 멸균된 염수 및 인산염 완충 식염수가 사용될 수 있다. 적합한 pH-완충제는, 예를 들어, 포스페이트, 시트레이트, 아세테이트, 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄(TRIS), N-트리스(하이드록시메틸)메틸-3-아미노프로판설폰산(TAPS), 중탄산암모늄, 다이에탄올아민, 히스티딘, 아르기닌, 라이신 또는 아세테이트(예를 들어, 아세트산나트륨으로서) 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 이 용어는 인간을 포함하는 동물에서 사용하기 위한 미국 약전에서 열거된 임의의 담체 작용제를 추가로 포함한다.
특정 실시형태에서, 조성물은 본 명세서에 개시된 2종 이상의 헵시딘 유사체를 포함한다. 특정 실시형태에서, 조합물은 하기 중 하나로부터 선택된다: (i) 본 명세서에 제시된 헵시딘 유사체 펩타이드 단량체 중 임의의 2종 이상; (ii) 본 명세서에 개시된 헵시딘 유사체 펩타이드 이량체 중 임의의 2종 이상; (iii) 본 명세서에 개시된 헵시딘 유사체 펩타이드 단량체 중 임의의 1종 이상 및 본 명세서에 개시된 헵시딘 유사체 펩타이드 이량체 중 임의의 1종 이상.
본 발명의 헵시딘 유사체(즉, 하나 이상의 본 발명의 헵시딘 유사체 펩타이드 단량체 또는 1종 이상의 본 발명의 헵시딘 유사체 펩타이드 이량체)를 약제학적 조성물 내에 포함시키는 것은 본 발명의 헵시딘 유사체의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 포함시키는 것을 또한 포괄한다는 것을 이해해야 한다. 특별한 실시형태에서, 약제학적 조성물은 1종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 또는 비히클을 추가로 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 발명은 본 명세서 또는 다른 곳에 개시된 바와 같은(예를 들어, 본 명세서의 치료 방법을 참조) 다양한 병태, 질환, 또는 장애의 치료를 위한, 헵시딘 유사체, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 특별한 실시형태에서, 본 발명은 본 명세서 또는 다른 곳에 개시된 바와 같은(예를 들어, 본 명세서의 치료 방법을 참조) 다양한 병태, 질환, 또는 장애의 치료를 위한, 헵시딘 유사체 펩타이드 단량체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 특별한 실시형태에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 바와 같은 다양한 병태, 질환, 또는 장애의 치료를 위한, 헵시딘 유사체 펩타이드 이량체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
본 명세서에 기재된 화합물은 방사성 표지된 화합물을 포함하는데, 이것은 하나 이상의 원자가 자연에서 일반적으로 발견되는 원자 질량 또는 질량수와 상이한 원자 질량 또는 질량 수를 갖는 원자로 대체된다는 사실을 제외하고는 본 명세서에 제시된 다양한 화학식 및 구조에 인용된 것과 동일하다. 본 발명의 화합물에 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 플루오린 및 염소의 동위원소, 예컨대, 각각 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 35S, 18F, 36Cl을 포함한다. 본 명세서에 기재된 특정 방사서 표지된 화합물, 예를 들어, 방사성 동위원소, 예컨대, 3H 및 14C가 혼입된 것은 약물 및/또는 물질 조직 분포 검정에 유용하다. 추가로, 동위원소, 예컨대, 중수소, 즉, 2H로의 치환은 더 큰 대사 안정성으로 유래되는 치료 이점, 예를 들어, 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투여량 요건을 제공한다.
본 발명의 헵시딘 유사체는, 저장하거나 하지 않는 투여에 적합하고, 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 또는 비히클과 함께 치료적 유효량의 적어도 1종의 본 발명의 헵시딘 유사체를 전형적으로 포함하는 약제학적 조성물로서 제형화될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체 약제학적 조성물은 단위 투여 형태이다. 이러한 형태에서, 조성물 은 적절한 양의 활성 구성성분 또는 구성성분들을 함유하는 단위 용량으로 분할된다. 단위 투여 형태는 포장된 제제로서 제공될 수 있으며, 포장재는 분리량(discrete quantity)의 제제, 예를 들어, 바이알 또는 앰플 내에 포장된 정제, 캡슐 또는 분말을 함유한다. 단위 투여 형태는 또한, 예를 들어, 그 자체가 캡슐, 카쉐(cachet), 또는 정제일 수 있거나, 적절한 개수의 임의의 이들 포장된 형태일 수 있다. 단위 투여 형태는 또한, 단일-용량 주사용 형태로, 예를 들어, 액상(전형적으로 수성) 조성물을 함유하는 펜 디바이스의 형태로 제공될 수 있다. 임의의 적합한 투여 경로 및 수단, 예를 들어, 본 명세서에 개시된 투여 경로 및 수단 중 어느 하나를 위해 조성물을 제형화할 수 있다.
특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체, 또는 헵시딘 유사체를 포함하는 약제학적 조성물은 서방형 매트릭스 내에 현탁된다. 본 명세서에 사용되는 서방형 매트릭스는, 효소적 가수분해 또는 산-염기 가수분해에 의해, 또는 용해에 의해 분해 가능한 재료, 통상적으로 중합체로 제조된 매트릭스이다. 일단 체내로 삽입되면, 효소 및 체액이 매트릭스에 작용한다. 서방형 매트릭스는 생체적합성 재료, 예컨대, 리포좀, 폴리락티드(폴리락트산), 폴리글리콜리드(글리콜산의 중합체), 폴리락티드 코-글리콜리드(락트산과 글리콜산의 공중합체) 폴리언하이드라이드, 폴리(오쏘)에스터, 폴리펩타이드, 히알루론산, 콜라겐, 콘드로이틴 설페이트, 카복실산, 지방산, 인지질, 다당류, 핵산, 폴리아미노산, 아미노산, 예컨대, 페닐알라닌, 티로신, 아이소류신, 폴리뉴클레오타이드, 폴리바이닐 프로필렌, 폴리바이닐피롤리돈 및 실리콘 중에서 바람직하게 선택된다. 생분해성 매트릭스의 일 실시형태는 폴리락티드, 폴리글리콜리드, 또는 폴리락티드 코-글리콜리드(락트산과 글리콜산의 공중합체) 중 하나의 매트릭스이다.
특정 실시형태에서, 조성물은 비경구로, 피하로 또는 경구로 투여된다. 특별한 실시형태에서, 조성물은 경구로, 낭내로, 질내로, 복강내로, 직장내로, 국소로(분말, 연고, 점적액, 좌제, 또는 경피 패치에 의해서, 예컨대, 유리체내, 비강내, 및 흡입을 통한 전달 포함) 또는 협측으로 투여된다. 본 명세서에 사용되는 용어 "비경구"는 정맥내, 근육내, 복강내, 흉골내, 피하, 피부내 및 관절내 주사 및 주입을 포함하는 투여 모드를 지칭한다. 따라서, 특정 실시형태에서, 조성물은 이들 임의의 투여 경로에 의한 전달을 위해 제형화된다.
특정 실시형태에서, 비경구 주사를 위한 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 멸균 수성 또는 비수성 용액, 분산액, 현탁액, 또는 유탁액, 또는 사용 직전에 멸균 주사용 용액 또는 분산액으로 재구성하기 위한 멸균 분말을 포함한다. 적합한 수성 및 비수성 담체, 희석제, 용매, 또는 비히클의 예는 물, 에탄올, 폴리올(예컨대, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등), 카복시메틸셀룰로스, 및 그의 적합한 혼합물, 베타-사이클 로덱스트린, 식물유(예컨대, 올리브유) 및 주사용 유기 에스터, 예컨대, 에틸 올레에이트를 포함한다. 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅 재료의 사용에 의해, 분산액의 경우에는 필요한 입자 크기의 유지에 의해, 그리고 계면 활성제의 사용에 의해, 적당한 유동성을 유지할 수 있다. 이들 조성물은 방부제, 습윤제, 유화제, 및 분산제와 같은 보조제 또한 함유할 수 있다. 흡수를 지연시키는 작용제, 예컨대, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 포함에 의해 주사용 제약 형태의 장기적인 흡수를 유발할 수 있다.
주사용 데포(depot) 형태는 하나 이상의 생분해성 중합체, 예컨대, 폴리락티드-폴리글리콜리드, 폴리(오쏘에스터), 폴리(언하이드라이드), 및 (폴리)글리콜, 예컨대, PEG 중에 헵시딘 유사체의 마이크로엔캡슐 매트릭스 (microencapsule matrix)를 형성시킴으로써 제조되는 것을 포함한다. 펩타이드 대 중합체의 비율 및 사용되는 특정 중합체의 성질에 따라, 헵시딘 유사체의 방출 속도를 제어할 수 있다. 데포 주사용 제형은 또한 체조직과 상용성인 리포좀 또는 마이크로에멀션 중에 헵시딘 유사체를 포집함으로써 제조한다.
예를 들어, 박테리아-보유 필터(bacterial-retaining filter)를 통한 여과에 의해, 또는 사용 직전에 멸균수 또는 다른 멸균 주사용 매질에 용해되거나 분산될 수 있는 멸균 고체 조성물 형태의 멸균제를 혼입시킴으로써, 주사용 제형을 멸균할 수 있다.
본 발명의 헵시딘 유사체는 또한 리포좀 또는 다른 지질-기반의 담체 중에 투여될 수 있다. 당업계에 공지된 바와 같이, 리포좀은 일반적으로 인지질 또는 다른 지질 물질로부터 유도된다. 리포좀은 수성 매질 내에 분산된 단일층 또는 다중층 수화 액정에 의해 형성된다. 리포좀을 형성할 수 있는 생리학적으로 허용되고 대사 가능한 임의의 비-독성 지질을 사용할 수 있다. 리포좀 형태의 본 조성물은 본 발명의 헵시딘 유사체에 부가하여 안정화제, 보존제, 부형제 등을 함유할 수 있다. 특정 실시형태에서, 지질은 포스파티딜 콜린(레시틴) 및 세린(천연 및 합성 둘 다)을 포함하는 인지질을 포함한다. 리포좀의 형성 방법은 당업계에 공지되어 있다.
비경구 투여에 적합한 본 발명에 사용할 약제학적 조성물은, 일반적으로 염화나트륨, 글리세린, 글루코스, 만니톨, 솔비톨 등을 사용하여 수여자의 혈액과 등장성이 되도록 만든 펩타이드 저해제의 멸균 수용액 및/또는 현탁액을 포함할 수 있다.
일부 양상에서, 본 발명은 경구 전달용 약제학적 조성물을 제공한다. 본 명세서에 기재된 임의의 방법, 기술, 및/또는 전달 비히클에 따라 본 발명의 조성물 및 헵시딘 유사체를 경구 투여용으로 제조할 수 있다. 추가로, 당업자는 본 발명의 헵시딘 유사체를 변형시키거나 본 명세서에는 개시되지 않지만 당업계에 주지되고 펩타이드의 경구 전달에 사용하기에 상용성인 시스템 또는 전달 비히클 내로 통합할 수 있다는 것을 인정할 것이다.
특정 실시형태에서, 경구 투여용 제형은 장 벽의 투과성을 인공적으로 증가시키기 위한 보조제(예를 들어, 레소르시놀 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대, 폴리옥시에틸렌 올레일 에터 및 n-헥사데실폴리에틸렌 에터) 및/또는 효소적 분해를 저해하기 위한 효소 저해제(예를 들어, 췌장 트립신 저해제, 다이아이소프로필플루오로포스페이트(DFF) 또는 트라실롤)를 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 경구 투여용 고체-유형 투여 형태의 헵시딘 유사체를 적어도 하나의 첨가제, 예컨대, 수크로스, 락토스, 셀룰로스, 만니톨, 트레할로스, 라피노스, 말티톨, 덱스트란, 녹말, 아가, 알기네이트, 키틴, 키토산, 펙틴, 트래거캔스 고무, 아라비아 고무, 젤라틴, 콜라겐, 카세인, 알부민, 합성 또는 반합성 중합체 또는 글리세리드와 혼합할 수 있다. 이들 투여 형태는 다른 유형(들)의 첨가제, 예를 들어, 비활성 희석제, 윤활제, 예컨대, 마그네슘 스테아레이트, 파라벤, 방부제, 예컨대, 소르브산, 아스코르브산, 알파-토코페롤, 산화방지제, 예컨대, 시스테인, 붕해제, 결합제, 증점제, 완충제, pH 조절제, 감미제, 향미제, 또는 방향제를 또한 함유할 수 있다.
특별한 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체와 함께 사용하기에 상용성인 경구 투여 형태 또는 단위 용량은 헵시딘 유사체와 비약물 구성성분 또는 부형제의 혼합물과 더불어, 성분 또는 포장재로서 간주될 수 있는 다른 재사용 불가 재료를 포함할 수 있다. 경구 조성물은 액체, 고체, 및 반-고체 투여 형태 중 적어도 하나를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에는, 유효량의 헵시딘 유사체를 포함하는 경구 투여 형태가 제공되며, 여기서 투여 형태는 환제, 정제, 캡슐, 겔, 페이스트, 드링크, 시럽, 연고 및 좌제 중 적어도 하나를 포함한다. 일부예에서, 대상체의 소장 및/또는 결장 내에서 헵시딘 유사체의 지연 방출을 달성하도록 설계되고 구성된 경구 투여 형태가 제공된다.
일 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체를 포함하는 경구 약제학적 조성물은 소장 내에서 헵시딘 유사체의 방출을 지연시키도록 설계된 장용 코팅을 포함한다. 적어도 일부 실시형태에서, 지연 방출형 약제학적 제형 내에 본 발명의 헵시딘 유사체 및 프로테아제 저해제, 예컨대, 아프로티닌을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 일부 경우에, 본 발명의 약제학적 조성물은 약 5.0 이상의 pH에서 위액에 가용성인 장용 코트를 포함한다. 적어도 하나의 실시형태에서, 해리성 카복실기를 갖는 중합체, 예컨대, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스 프탈레이트, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트 및 셀룰로스 아세테이트 트리멜리테이트 및 셀룰로스의 유사한 유도체를 포함하는 셀룰로스의 유도체 및 다른 탄수화물 중합체를 포함하는 장용 코팅을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
일 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체를 포함하는 약제학적 조성물은 장용 코팅 내에 제공되며, 장용 코팅은 대상의 하부 위장관 시스템 내부에서 제어된 방식으로 약제학적 조성물을 보호하고 방출하며 전신 부작용을 방지하도록 설계된다. 장용 코팅에 부가하여, 본 발명의 헵시딘 유사체는 임의의 상용성 경구 약물 전달 시스템 또는 구성성분 내부에 캡슐화되거나, 코팅되거나, 포획되거나, 다른 방법으로 연계될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시형태에서 본 발명의 헵시딘 유사체는 중합체 하이드로겔, 나노입자, 미소구체, 마이셀, 및 다른 지질 시스 템 중 적어도 하나를 포함하는 지질 담체 시스템 내에 제공된다.
소장 내에서의 펩타이드 분해를 극복하기 위해, 본 발명의 일부 실시형태는 본 발명의 헵시딘 유사체가 함유된 하이드로겔 중합체 담체 시스템을 포함하며, 이에 의해 하이드로겔 중합체는 헵시딘 유사체를 소장 및/또는 결장 내에서의 단백질 분해로부터 보호한다. 본 발명의 헵시딘 유사체는 펩타이드의 용해 동력학을 증가시키고 장 흡수를 향상시키도록 설계된 담체 시스템과의 상용성 사용을 위해 추가로 제형화될 수 있다. 이들 방법은 펩타이드의 GI 계 투과를 증가시키기 위한 리포좀, 마이셀 및 나노입자의 사용을 포함한다.
경구 전달용 약제를 제공하기 위해, 또한 다양한 생물반응성(bioresponsive) 시스템을 하나 이상의 본 발명의 헵시딘 유사체와 조합할 수 있다. 일부 실시형태에서, 경구 투여용 치료제를 제공하기 위해, 본 발명의 헵시딘 유사체를 생물반응성 시스템, 예컨대, 수소 결합기를 갖는 하이드로겔 및 점막부착성 중합체(예를 들어, PEG, 폴리(메타크릴)산[PMAA], 셀룰로스, Eudragit®, 키토산, 및 알지네이트)와 조합하여 사용한다. 다른 실시형태는 본 명세서에 개시된 헵시딘 유사체에 대해 약물 체류 시간을 최적화하거나 연장하는 방법을 포함하며, 여기서 헵시딘 유사체 표면의 표면은 수소 결합, 연결된 뮤신을 갖는 중합체 및/또는 소수성 상호작용을 통해 점막부착성 특성을 포함하도록 개질된다. 본 발명의 목적하는 특징에 따라, 이들 개질된 펩타이드 분자는 대상체 내에서 증가된 약물 체류 시간을 나타낼 수 있다. 또한, 표적화된 점막부착성 시스템은 장세포 및 M-세포 표면에서 수용체에 특이적으로 결합함으로써, 헵시딘 유사체를 함유하는 입자의 흡수를 추가로 증가시킬 수 있다.
다른 실시형태는 본 발명의 헵시딘 유사체의 경구 전달 방법을 포함하며, 여기서 헵시딘 유사체는 세포간 투과 또는 경세포 투과를 증가시킴으로써 장 점막을 가로질러 펩타이드의 수송을 촉진하는 투과 촉진제와 조합하여 대상체에게 제공된다. 예를 들어, 일 실시형태에서, 투과 촉진제는 헵시딘 유사체와 조합되며, 여기서 투과 촉진제는 장쇄 지방산, 담즙산염, 양친매성 계면활성제 및 킬레이팅제 중 적어도 하나를 포함한다. 일 실시형태에서, 소듐 N-[하이드록시벤조일)아미노] 카프릴레이트를 포함하는 투과 촉진제를 사용하여 본 발명의 헵시딘 유사체와 약한 비공유 회합을 형성하며, 여기서 투과 촉진제는 막 수송을 지원하고, 일단 혈액 순환에 도달하면 추가의 해리를 지원한다. 다른 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 올리고아르기닌에 접합되며, 이에 의해 다양한 세포 유형 내로의 펩타이드의 세포 침투를 증가시킨다. 추가로, 적어도 하나의 실시형태에서는, 본 발명의 펩타이드 저해제와 사이클로덱스트린(CD) 및 덴드리머로 이루어진 군으로부터 선택되는 투과 촉진제 사 이에 비공유 결합을 제공하며, 여기서 투과 촉진제는 펩타이드 응집을 감소시키고 헵시딘 유사체 분자의 안정성 및 용해도를 증가시킨다.
본 발명의 다른 실시형태는 증가된 반감기를 갖는 본 발명의 헵시딘 유사체로 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 일 양상에서 본 발명은, 치료적 유효량의 매일(q.d.) 또는 매일 2회(b.i.d.) 투여에 충분한 적어도 몇 시간 내지 매일의 시험관내 또는 생체내 반감기(예를 들어, 인간 대상체에게 투여하는 경우)를 나타내는 헵시딘 유사체를 제공한다. 다른 실시형태에서, 헵시딘 유사체는 치료적 유효량의 매주(q.w.) 투여에 충분한 3일 이상의 반감기를 갖는다. 추가로, 다른 실시형태에서, 헵시딘 유사체는 치료적 유효량의 격주(b.i.w.) 또는 월 단위 투여에 충분한 8일 이상의 반감기를 갖는다. 다른 실시형태에서, 유도체화되지 않거나 개질되지 않은 헵시딘 유사체에 비교하여 더 긴 반감기를 나타내도록 헵시딘 유사체를 유도체화하거나 개질한다. 또 다른 실시형태에서, 헵시딘 유사체는 혈청 반감기를 증가시키기 위한 하나 이상의 화학적 개질을 함유한다.
본 명세서에 기재된 치료 또는 전달 시스템 중 적어도 하나에 사용되는 경우, 본 발명의 헵시딘 유사체는 순수한 형태 또는, 이러한 형태가 존재하는 경우, 약제학적으로 허용 가능한 염 형태로 사용될 수 있다.
투여량
본 발명의 헵시딘 유사체 및 조성물의 총 1일 사용량은 정상적인 의학적 판단의 범위 내에서 주치의에 의해 결정될 수 있다. 임의의 특정 대상체에 대한 특이적 치료적 유효 용량 수준은 하기의 것을 포함하는 다양한 인자에 의존할 것이다: a) 치료될 장애 및 장애의 중증도; b) 사용되는 특정 화합물의 활성; c) 사용되는 특정 조성물, 환자의 연령, 체중, 일반적 건강, 성별, 및 식이; d) 투여 시간, 투여 경로, 및 사용되는 특정 헵시딘 유사체의 배출 속도; e) 치료의 지속기간; f) 사용되는 특정 헵시딘 유사체와 조합하거나 동시에 사용되는 약물 및 의료 기술 분야에 널리 공지된 유사한 인자.
특별한 실시형태에서, 인간 또는 다른 포유동물 숙주에 단일 용량 또는 분할 용량으로 투여될 본 발명의 헵시딘 유사체의 총 1일 용량은, 예를 들어, 1일당 0.0001 내지 300㎎/㎏ 체중 또는 1일 1 내지 300㎎/㎏ 체중의 양일 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체의 투여량은 1일당 약 0.0001 내지 약 100㎎/㎏ 체중, 예컨대, 일당 약 0.0005 내지 약 50㎎/㎏ 체중, 예컨대, 1일당 약 0.001 내지 약 10㎎/㎏ 체중, 예를 들어, 1일당 약 0.01 내지 약 1㎎/㎏ 체중의 범위이며, 1회 이상의 용량, 예컨대, 1 내지 3회 용량으로 투여된다.
특별한 실시형태에서, 총 투여량은 예를 들어, 인간 환자의 경우 약 10㎎ 내지 약 100㎎ 또는 약 10㎎ 내지 약 70㎎, 약 10㎎ 내지 약 60㎎, 약 20㎎ 내지 약 50㎎, 약 20㎎ 내지 약 40㎎, 약 30㎎, 약 25㎎, 약 20㎎, 약 15㎎ 또는 약 10㎎이다. 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체는 대상체에게 주 1회 제공된다. 또 다른 특별한 실시형태에서, 헵시딘 유사체는 예를 들어, 인간 환자의 경우 대상체에게 주 2회 투여된다.
보다 특별한 실시형태에서, 총 투여량은 인간 환자의 주 1회 또는 2회 경우 약 10㎎, 약 15㎎, 약 20㎎, 약 25㎎, 약 30㎎, 약 40㎎, 약 50㎎, 약 60㎎, 약 70㎎ 또는 약 80㎎이다. 보다 특별한 실시형태에서, 총 투여량은 인간 환자의 경우 약 격주마다 또는 약 월 1회 약 10㎎, 약 15㎎, 약 20㎎, 약 25㎎, 약 30㎎, 약 40㎎, 약 50㎎, 약 60㎎, 약 70㎎ 또는 약 80㎎이다.
다양한 실시형태에서, 목적하는 투여량 및 특정 대상체에 대해 당업자가 선택한 약제학적 조성물에 따라, 본 발 명의 헵시딘 유사체를 연속적으로(예를 들어, 정맥내 투여 또는 다른 연속적 약물 투여 방법에 의함) 투여할 수 있거나, 간격을 두고, 전형적으로 규칙적인 시간 간격으로 대상체에게 투여할 수 있다. 규칙적인 투여 용량 간 격은, 예를 들어, 1일 1회, 1일 2회, 2, 3, 4, 5, 또는 6일마다 1회 또는 주 1회 또는 2회, 월 1회 또는 2회 등을 포함한다.
예를 들어, 만성 장기 투여 중과 같은 특정 상황에서, 투약되는 대상체가 투약의 수준을 감소시키거나 투약을 중지하도록, 본 발명의 이러한 규칙적인 헵시딘 유사체 투여 요법을 일정 시간 기간 동안 유리하게 중단할 수 있다(흔히 "약물 휴지기"를 갖는다고 지칭함). 약물 휴지기는, 예를 들어, 특히 장기 만성 치료 중에 약물에 대 한 감수성을 유지하거나 회복하거나, 또는 약물에 의한 대상의 장기 만성 치료의 원치 않는 부작용을 감소시키는 데 유용하다. 약물 휴지기의 시기는 규칙적인 투여 요법의 시기 및 약물 휴지기를 갖는 목적(예를 들 어, 약물 감수성을 회복하기 위함 및/또는 연속적 장기 투여의 원치 않는 부작용을 감소시키기 위함)에 의존한다. 일부 실시형태에서, 약물 휴지기는 약물 투여량의 감소일 수 있다(예를 들어, 특정 시간 간격 동안 치료적 유효량 미만으로). 다른 실시형태에서, 약물의 투여를 특정 시간 간격 동안 중지한 후에 동일하거나 상이한 투여 요법(예를 들어, 더 낮거나 더 높은 용량 및/또는 투여 빈도로)을 사용하여 투여를 다시 시작한다. 따라서 본 발명의 약물 휴지기는 광범위한 기간 및 투여량 요법 중에서 선택될 수 있다. 예시적인 약물 휴지기는 2일 이상, 1주 이상, 또는 1개월 이상, 최대 약 24개월의 약물 휴지기이다. 그러므로, 예를 들어, 본 발명의 펩타이드, 펩타이드 유사체, 또는 이량체에 의한 규칙적인 1일 투여 요법은, 예를 들어, 1주, 또는 2주, 또는 4주의 약물 휴지기에 의해 중단될 수 있으며, 이 시간 후에 이전의 규칙적인 투여량 요법(예를 들어, 일 단위 또는 주 단위 투여 요법)이 재개된다. 다양한 다른 약물 휴지기 요법이 본 발명의 헵시딘 유사체의 투여에 유용할 것으 로 예상된다.
따라서, 헵시딘 유사체는 각각의 약물 휴지기 단계에 의해 분리된 2개 이상의 투여 단계를 포함하는 투여 요법을 통해 전달될 수 있다.
각각의 투여 단계 중에, 헵시딘 유사체는 사전-결정된 투여 패턴에 따라 치료적 유효량으로 수여자 대상체에게 투여된다. 투여 패턴은 투여 단계의 지속 기간에 걸친 수여자 대상체에 대한 약물의 연속적 투여를 포함할 수 있다. 대안적으로, 투여 패턴은 수여자 대상체에 대한 복수의 용량의 헵시딘 유사체의 투여를 포함할 수 있으며, 여기서 상기 용량은 투여 간격에 의해 이격된다.
투여 패턴은 투여 단계당 적어도 2회 용량, 투여 단계당 적어도 5회 용량, 투여 단계당 적어도 10회 용량, 투여 단계당 적어도 20회 용량, 투여 단계당 적어도 30회 용량, 또는 그 초과를 포함할 수 있다.
상기 투여 간격은 상기에 제시된 바와 같을 수 있는 규칙적인 투여 간격일 수 있으며, 이는 본 발명의 헵시딘 유사체의 특정 투여 제형, 생체이용률 및 약동학적 프로파일에 따라 1일 1회, 1일 2회, 2, 3, 4, 5, 또는 6일마다 1회, 주 1회 또는 2회, 월 1회 또는 2회 또는 규칙적이고 심지어 덜 빈번한 투여 간격을 포함한다.
투여 단계는 적어도 2일, 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 4주, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 6개월 또는 그 초과의 지속 기간을 가질 수 있다.
투여 패턴이 복수의 용량을 포함하는 경우, 이어지는 약물 휴지기 단계의 지속 기간은 그 투여 패턴에 사용되는 투여 간격보다 더 길다. 투여 간격이 불규칙적인 경우, 약물 휴지기 단계의 지속 기간은 투여 단계의 경로에 걸친 용량들 사이의 평균 간격보다 더 클 수 있다. 대안적으로 약물 휴지기의 지속기간은 투여 단계 중의 연속적인 용량들 사이의 최장 간격보다 더 길 수 있다.
약물 휴지기 단계의 지속 기간은 관련 투여 간격의 지속 기간(또는 이의 평균)의 적어도 2배, 관련 투여 간격의 지속 기간 또는 그의 평균의 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 10배, 또는 적어도 20배일 수 있다.
이들 제약 이내에서, 약물 휴지기 단계는 이전 투여 단계 중의 투여 패턴에 따라 적어도 2일, 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 4주, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 6개월, 또는 그 초과의 지속기간을 가질 수 있다.
투여 요법은 적어도 2개의 투여 단계를 포함한다. 연이은 투여 단계는 각각의 약물 휴지기 단계에 의해 분리된다. 따라서 투여 요법은 각각의 약물 휴지기 단계에 의해 각각 분리된 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 10, 적어도 15, 적어도 20, 적어도 25, 또는 적어도 30개의 투여 단계 또는 그 초과를 포함할 수 있다.
연이은 투여 단계는 동일한 투여 패턴을 이용할 수 있으나, 이것이 항상 바람직하거나 필요한 것은 아니다. 그러나, 본 발명의 헵시딘 유사체와 조합하여 다른 약물 또는 활성 약제가 투여된다면, 전형적으로 동일한 조합의 약물 또는 활성 약제가 연이은 투여 단계에 주어진다. 특정 실시형태에서, 수여자 대상체는 인간이다.
일부 실시형태에서 본 발명은, 본 명세서에 개시된 바와 같은 적어도 1종의 헵시딘 유사체를 포함하는 조성물 및 의약품을 제공한다. 일부 실시형태에서 본 발명은, 철 대사 질환, 예컨대, 철 과부하 질환의 치료를 위해 본 명세서에 개시된 바와 같은 적어도 1종의 헵시딘 유사체를 포함하는 의약품의 제조 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서 본 발명은, 당뇨병(I형 또는 II형), 인슐린 내성 또는 글루코스 불내성의 치료를 위해 본 명세서에 개시된 바와 같은 적어도 1종의 헵시딘 유사체를 포함하는 의약품의 제조 방법을 제공한다. 본 명세서에 개시된 바와 같은 적어도 1종의 헵시딘 유사체 또는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체, 예컨대, 포유동물 대상체, 바람직하게 인간 대상체에서 철 대사의 질환을 치료하는 방법 또한 제공된다. 일부 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 조성물은 치료적 유효량으로 투여된다. 본 명세서에 개시된 바와 같은 적어도 1종의 헵시딘 유사체 또는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체, 예컨대, 포유동물 대상 체, 바람직하게 인간 대상체에서 당뇨병(I형 또는 II형), 인슐린 내성 또는 글루코스 불내성을 치료하는 방법이 또한 제공된다. 일부 실시형태에서, 헵시딘 유사체 또는 조성물은 치료적 유효량으로 투여된다.
일부 실시형태에서 본 발명은, 본 명세서에 개시된 바와 같이, 헵시딘 유사체 또는 헵시딘 유사체 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)을 제조하는 공정을 제공한다.
일부 실시형태에서 본 발명은, 헵시딘 유사체를 대상체에게 전달하기 위한, 적어도 하나의 본 발명의 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 포함하는 디바이스를 제공한다.
일부 실시형태에서 본 발명은, 페로포틴을 본 명세서에 개시된 바와 같은 적어도 1종의 헵시딘 유사체 또는 헵시딘 유사체 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 페로포틴을 결합시키거나 페로포틴 내재화 및 분해를 유도하는 방법을 제공한다.
일부 실시형태에서 본 발명은, 시약, 디바이스, 설명 자료 또는 이들의 조합과 함께 포장된, 본 명세서에 개시된 바와 같은 적어도 1종의 헵시딘 유사체 또는 헵시딘 유사체 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)을 포함하는 키트를 제공한다.
일부 실시형태에서 본 발명은, 당업계에 널리 공지된 바와 같이, 임플란트 또는 삼투 펌프를 통해, 카트리지 또는 마이크로 펌프에 의해 또는 당업자가 인정하는 다른 수단에 의해, 본 발명의 헵시딘 유사체 또는 헵시딘 유사체 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)을 대상체에게 투여하는 방법을 제공한다.
일부 실시형태에서 본 발명은, 페로포틴, 바람직하게 인간 페로포틴 또는 항체, 예컨대, 본 명세서에 개시된 바와 같은 헵시딘 유사체에 특이적으로 결합하는 항체, Hep25 또는 이의 조합에 결합된 본 명세서에 개시된 바와 같은 적어도 1종의 헵시딘 유사체를 포함하는 복합체를 제공한다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 Fpn 내재화 검정에서 500nM 미만의 측정값(예를 들어, EC50)을 나타낸다. 당업자가 인식할 바와 같이, 헵시딘 유사체의 작용은 헵시딘 유사체의 3차 구조 및 제공되는 결합 표면에 의존적이다. 그러므로, 헵시딘 유사체를 암호화하는 서열에, 폴딩에 영향을 주지 않거나 결합 표면 상에 있지 않으며 작용을 유지하는 부수적인 변화를 일으키는 것이 가능하다. 다른 실시형태에서, 본 발명은, 활성 (예를 들어, 헵시딘 활성)을 나타내거나 헵시딘이 관련된 질환 또는 적응증의 증상을 경감시키는 본 명세서에 기재된 임의의 헵시딘 유사체의 아미노산 서열에 대해 85% 이상(예를 들어, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 99.5%)의 동일성 또는 상동성을 나타내는 헵시딘 유사체를 제공한다.
다른 실시형태에서 본 발명은, 본 명세서에 제공된 임의의 헵시딘 유사체 또는 본 명세서에 기재된 화학식 또는 헵시딘 유사체 중 어느 하나에 따른 펩타이드의 아미노산 서열에 대해 85% 이상(예를 들어, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 99.5%)의 동일성 또는 상동성을 나타내는 헵시딘 유사체를 제공한다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 헵시딘 유사체는 본 명세서에 제시된 특정 펩타이드 유사체 서열 중 하나 이상에 비교하여 최대 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1개의 아미노산 치환을 나타내는 작용성 단편 또는 이의 변이체를 포함할 수 있다.
본 명세서의 실시예에 기재된 방법에 부가하여, 화학적 합성, 재조합 DNA 방법을 사용하는 생합성 또는 시험관내 합성 및 고체상 합성을 포함하는, 당업계에 공지된 방법을 사용하여 본 발명의 헵시딘 유사체 펩타이드 및 펩타이드 이량체를 제조할 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 참조에 의해 포함된 문헌[Kelly & Winkler (1990) Genetic Engineering Principles and Methods, vol. 12, J. K. Setlow ed., Plenum Press, NY, pp. 1-19; Merrifield (1964) J Amer Chem Soc 85:2149; Houghten (1985) PNAS USA 82:5131-5135; 및 Stewart & Young (1984) Solid Phase Peptide Synthesis, 2ed. Pierce, Rockford, IL] 참조. 당업계에 공지된 단백질 정제 기술, 예컨대, 역상 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC), 이온 교환 또는 면역친화도 크로마토그래피, 여과 또는 크기 배제 또는 전기영동을 사용하여 본 발명의 헵시딘 유사체를 정제시킬 수 있다. 본 명세서에 참조에 의해 포함된 문헌[Olsnes, S. and A. Pihl (1973) Biochem. 12(16):3121-3126; 및 Scopes (1982) Protein Purification, Springer-Verlag, NY] 참조. 대안적으로, 본 발명의 헵시딘 유사체는 당업계에 공지된 재조합 DNA 기술에 의해 제조될 수 있다. 따라서, 본 명세서에는 본 발명의 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 고려된다. 특정 바람직한 실시형태에서, 폴리뉴클레오타이드는 단리된다. 본 명세서에 사용되는 "단리된 폴리뉴클레오타이드"는 폴리뉴클레오타이드가 자연 발생하는 환경과는 상이한 환경에 있는 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다.
실시예
하기 실시예는 본 발명의 특별한 구체적인 실시형태를 나타낸다. 달리 상세하게 기재된 경우를 제외하고는, 당업자에게 널리 공지되고, 일상적인 표준 기술을 사용하여 하기 실시예를 실행하였다. 이들 실시예는 단지 예시적인 목적을 위한 것이며, 본 발명의 조건 또는 범위에 관련하여 완전히 확정적인 것으로 주장되지 않음을 이해해야 한다. 따라서, 이들은 어떤 방식으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
약어:
DCM: 다이클로로메탄
DMF: N,N-다이메틸폼아마이드
NMP: N-메틸피롤리돈
HBTU: O-(벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트
HATU: 2-(7-아자-1H-벤조트라이아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트
DCC: 다이사이클로헥실카보다이이미드
NHS: N-하이드록시석신이미드
DIPEA: 다이아이소프로필에틸아민
EtOH: 에탄올
Et2O: 다이에틸 에터
Hy: 수소
TFA: 트라이플루오로아세트산
TIS: 트라이아이소프로필실란
ACN: 아세토나이트릴
HPLC: 고성능 액체 크로마토그래피
ESI-MS: 전자 분무 이온화 질량 분광분석법
PBS: 인산염 완충 식염수
Boc: t-부톡시카보닐
Fmoc: 플루오렌일메틸옥시카보닐
Acm: 아세트아미도메틸
IVA: 아이소발레르산(또는 아이소발레릴)
K( ): 본 명세서에 제공되는 펩타이드 서열에서, 라이신 잔기 직후의 괄호 내에 화합물 또는 화학 기가 제공되는 경우, 괄호 내의 화합물 또는 화학 기는 라이신 잔기에 접합된 측쇄임을 이해해야 한다. 따라서, 예를 들어 (그러나 어떠한 방식으로든 이로 제한되지 않음), K-[(PEG8)]-은 PEG8 모이어티가 라이신의 측쇄에 접합된다는 것을 나타낸다.
Palm: 팔미트산(팔미토일)의 접합을 표시한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "C( )"는 특정 이황화 가교에 관련된 시스테인 잔기를 지칭한다. 예를 들어, 헵시딘에는, 4개의 이황화 가교가 존재하며: 첫번째는 2개의 C(1) 잔기 사이; 두번째는 2개의 C(2) 잔기 사이; 세번째는 2개의 C(3) 잔기 사이: 네번째는 2개의 C(4) 잔기 사이에 존재한다. 따라서, 일부 실시형태에서, 헵시딘에 대한 서열은 하기와 같이 작성되며:
Hy-DTHFPIC(1)IFC(2)C(3)GC(2)C(4)HRSKC(3)GMC(4)C(1)KT-OH; 다른 펩타이드에 대한 서열 또한 선택적으로 동일한 방식으로 작성될 수 있다.
실시예 1
펩타이드 유사체의 합성
달리 명시되지 않는 한, 하기에 사용된 시약 및 용매는 표준 실험실 시약 또는 분석용 등급으로 상업적으로 입수 가능하며, 추가의 정제 없이 사용하였다.
펩타이드의 고체-상 합성을 위한 절차
최적화된 9-플루오렌일메톡시 카보닐(Fmoc) 고체상 펩타이드 합성 프로토콜을 사용하여 본 발명의 펩타이드 유사체를 화학적으로 합성하였다. C-말단 아마이드의 경우, 링크-아마이드(rink-amide) 수지를 사용하였으나, C-말단 산을 생성시키기 위해서는 왕(wang) 및 트리틸 수지를 또한 사용하였다. 측쇄 보호기는 하기와 같았다: Glu, Thr 및 Tyr: O-t부틸; Trp 및 Lys: t-Boc(t-부틸옥시카보닐); Arg: N-감마-2,2,4,6,7-펜타메틸다이하이드로벤조퓨란-5-설포닐; His, Gln, Asn, Cys: 트리틸. 선택적인 이황화 가교 형성의 경우, Acm(아세트아미도메틸)을 또한 Cys 보호기로 사용하였다. 커플링의 경우, DMF 중에 Fmoc 아미노산, HBTU, 및 DIPEA(1:1:1.1)를 함유하는 4 내지 10배 과량의 용액을 팽윤된 수지에 첨가하였다[HBTU: O-(벤조트라이아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트; DIPEA: 다이이소프로필에틸아민; DMF: 다이메틸폼아마이드] HATU(O-(7-아자벤조트라이아졸1-일)-1,1,3,3,-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트)를 HBTU 대신에 사용하여 어려운 영역에서 커플링 효율을 개선시켰다. Fmoc 보호기 제거는 DMF, 피페리딘(2:1) 용액으로의 처리에 의해서 달성하였다.
수지로부터 펩타이드의 절단을 위한 절차
건조 수지를 트라이플루오로아세트산, 물, 에탄다이티올, 및 트라이-아이소프로필실란(90:5:2.5:2.5)을 함유하는 용액 중에서 2 내지 4시간 동안 교반함으로써 본 발명의 펩타이드 유사체(예를 들어, 화합물 번호 2)의 측쇄 탈보호 및 절단을 달성하였다. TFA 제거 후에, 빙랭 다이에틸 에터를 사용하여 펩타이드를 침전시켰다. 용액을 원심분리시키고, 에터를 경사분리시킨 후에, 제2 다이에틸 에터 세척을 수행하였다. 0.1% TFA(트라이플루오로아세트산)를 함유하는 아세토나이트릴, 수용액(1:1)에 펩타이드를 용해시키고, 생성되는 용액을 여과하였다. 전기분무 이온화 질량 분광분석법(ESI-MS)을 사용하여 선형 펩타이드 품질을 평가하였다.
펩타이드의 정제를 위한 절차
역상 고성능 액체 크로마토그래피(RP-HPLC)를 사용하여 본 발명의 펩타이드(예를 들어, 화합물 번호 2)의 정제를 달성하였다. C18 칼럼(3μm, 50×2mm)을 사용하여 1㎖/분의 유량으로 분석을 수행하였다. C18 칼럼(5μm, 250×21.2mm)을 갖는 분취용 RP-HPLC를 사용하여 20㎖/분의 유량으로 선형 펩타이드의 정제를 달성하였다. 완충액 A 중의 완충액 B(완충액 A: 수성 0.05% TFA; 완충액 B: 0.043% TFA, 물 중의 90% 아세토나이트릴)의 선형 구배를 사용하여 분리를 달성하였다.
펩타이드의 산화를 위한 절차
방법 A(단일 이황화 산화). MeOH 중의 아이오딘(1㎖당 1㎎)을 용액(ACN:H2O, 7:3, 0.5% TFA) 중의 펩타이드에 적가함으로써 본 발명의 보호되지 않은 펩타이드의 산화를 달성하였다. 2분 동안 교반한 후, 용액이 맑아질 때까지 아스코르브산을 나누어 첨가하고, 샘플을 정제용 HPLC 상에 즉시 로딩하였다.
방법 B(2개의 이황화물의 선택적 산화).
1개 초과의 이황화물이 존재하는 경우, 보통 선택적 산화를 수행하였다. pH 7.6 NH4CO3 용액에서 1㎎/10㎖의 펩타이드로 유리 시스테인의 산화를 달성하였다. 24시간 교반 후에 그리고 정제 전에 TFA로 pH 3까지 용액을 산성화시킨 후 동결건조시켰다. 그 다음 생성된 단일 산화된 펩타이드(ACM 보호된 시스테인을 가짐)를 아이오딘 용액을 사용하여 산화/선택적 탈보호시켰다. 펩타이드(2㎖당 1㎎)를 MeOH/H2O, 80:20에 용해시키고, 반응 용매에 용해된 아이오딘을 실온에서 반응물에 첨가하였다(최종 농도: 5㎎/㎖). 용액을 7분 동안 교반한 후, 용액이 맑아질 때까지 아스코르브산을 나누어 첨가하였다. 이어서 용액을 HPLC 상에 직접 로딩하였다.
방법 C(자연 산화).
1개 초과의 이황화물이 존재하는 경우, 그리고 선택적 산화를 수행하지 않는 경우, 자연 산화를 수행하였다. (펩타이드:GSSG: GSH, 1:10, 100)의 산화된 글루타티온 및 환원된 글루타티온(펩타이드/GSH/GSSG, 1:100:10 몰비))의 존재 하에서 100mM NH4CO3(pH 7.4) 용액을 사용하여 자연 산화를 달성하였다. 24시간 교반 후에 그리고 RP-HPLC 정제 전에 TFA로 pH 3까지 용액을 산성화시킨 후 동결건조시켰다.
이량체를 제조하기 위한 시스테인 산화 절차
MeOH 중의 아이오딘(1㎖당 1㎎)을 용액(ACN:H2O, 7:3, 0.5% TFA) 중의 펩타이드에 적가함으로써 본 발명의 보호되지 않은 펩타이드의 산화를 달성하였다. 2분 동안 교반한 후, 용액이 맑아질 때까지 아스코르브산을 나누어 첨가하고, 샘플을 정제용 HPLC 상에 즉시 로딩하였다.
이량체화를 위한 절차
1당량("eq"로 약칭함)의 산을 NMP(N-메틸 피롤리돈) 중의 2.2eq의 N-하이드록시석신이미드(NHS) 및 다이사이클로헥실 카보다이이미드(DCC) 둘 다로 0.1M의 최종 농도에서 처리함으로써 글리옥실산(DIG), IDA, 또는 Fmoc-β-Ala-IDA를 N-하이드록시석신이미드 에스터로서 사전-활성화시켰다. PEG13 및 PEG25 링커의 경우, 이들 화학 실체는 활성화된 석신이미드 에스터로서 사전-형성된 것을 구매하였다. NMP 중의 펩타이드(1㎎/㎖)에 활성화된 에스터 약 0.4eq를 천천히 나누어 첨가하였다. 용액을 10분 동안 교반한 후, 추가의 2 내지 3개의 분취량의 링커 약 0.05eq를 천천히 첨가하였다. 용액을 추가로 3시간 동안 교반한 후, 진공 하에서 용매를 제거하고 잔류물을 역상 HPLC에 의해 정제시켰다. 추가의 역상 HPLC 정제 전에 DMF 중의 20% 피페리딘에서 펩타이드를 교반하는 추가 단계를 수행하였다(2×10분).
당업자는 펩타이드 합성의 표준 방법을 사용하여 본 발명의 화합물을 생성시킬 수 있다는 것을 인정할 것이다.
링커 활성화 및 이량체화 링커
하기에 기재된 바와 같이 펩타이드 단량체 소단위를 연결하여 헵시딘 유사체 펩타이드 이량체를 형성하였다.
소규모 DIG 링커 활성화 절차: IDA 이산(304.2㎎, 1m㏖), N-하이드록시석신이미드(NHS, 253.2㎎, 2.2eq. 2.2m㏖) 및 교반 막대를 포함하는 유리 바이알에 5㎖의 NMP를 첨가하였다. 실온에서 혼합물을 교반하여 고체 출발 물질을 완전히 용해시켰다. 이어서, N,N'-다이사이클로헥실카보다이이미드(DCC, 453.9㎎, 2.2eq., 2.2m㏖)를 혼합물에 첨가하였다. 10분 이내에 침전이 일어났고, 반응 혼합물을 실온에서 추가로 밤새 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 여과하여 침전된 다이사이클로헥실유레아(DCU)를 제거하였다. 활성화된 링커를 이량체화에 사용하기 전에 밀폐된 바이알에 보관하였다. 활성화된 링커의 공칭 농도는 대략 0.20M이었다.
PEG 링커를 사용하는 이량체화의 경우, 사전-활성화 단계가 포함되지 않았다. 상업적으로 입수 가능한 사전-활성화된 2작용성 PEG 링커를 사용하였다.
이량체화 절차: 펩타이드 단량체(0.1m㏖)를 함유하는 바이알에 2㎖의 무수 DMF를 첨가하였다. DIEA로 펩타이드의 pH를 8 내지 9로 조정하였다. 이어서, 활성화된 링커(IDA 또는 PEG13, PEG 25)(단량체에 대해 0.48eq, 0.048m㏖)를 단량체 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 분석용 HPLC를 사용하여 이량체화 반응의 완료를 모니터링하였다. 이량체화 반응의 완료를 위한 시간은 링커에 따라 달라졌다. 반응의 완료 후에, 차가운 에터 중에서 펩타이드를 침전시키고 원심분리시켰다. 상청액 에터 층을 폐기하였다. 침전 단계를 2회 반복하였다. 이어서, 역상 HPLC(Luna C18 지지체, 10u, 100A, 이동상 A: 0.1% TFA를 함유하는 물, 이동상 B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토나이트릴(ACN), 15% B 및 60분에 걸쳐 45% B로 변화하는 구배, 유량 15㎖/분)를 사용하여 조 이량체를 정제시켰다. 이어서, 순수한 생성물을 함유하는 분획을 동결건조기 상에서 냉동-건조시켰다.
반감기 연장 모이어티의 접합
펩타이드의 접합을 수지에서 수행하였다. Lys(ivDde)을 주 아미노산으로 사용하였다. 수지 상에서의 펩타이드의 조립 후, 3x5분의 DMF 중의 2% 하이드라진을 5분 동안 사용하여 ivDde기의 선택적 탈보호를 수행하였다. HBTU, DIEA 1 내지 2당량을 사용한 3시간 동안의 링커의 활성화 및 아실화 및 Fmoc 제거, 그 다음 지질산으로의 2차 아실화는 접합된 펩타이드를 제공하였다.
실시예 2
펩타이드 유사체의 활성
인간 페로포틴 단백질의 내재화의 유도에 대해 펩타이드 유사체를 시험관내에서 시험하였다. 내재화 후에, 펩타이드는 분해된다. 검정은 수용체의 형광의 감소를 측정한다.
인간 페로포틴을 암호화하는 cDNA(SLC40A1)를 오리진사(Origene)로부터의 cDNA 클론(NM_014585)으로부터 클로닝하였다. 서브클로닝을 위한 말단 제한 부위 또한 암호화하지만 종결 코돈이 없는 프라이머를 사용하는 PCR에 의해 페로포틴을 암호화하는 DNA을 증폭시켰다. 페로포틴의 해독틀이 GFP 단백질과 해독틀 내에서 융합되도록, 네오마이신(G418) 내성 마커를 함유하는 포유동물 GFP 발현 벡터 내로 페로포틴 수용체를 서브클로닝하였다. 단백질을 암호화하는 DNA의 정확도를 DNA 서열결정에 의해 확인하였다. 페로포틴-GFP 수용체 발현 플라스미드의 형질주입의 경우 HEK293 세포를 사용하였다. 표준 프로토콜에 따라 성장 배지 내에서 세포를 성장시키고, 리포펙타민(제조자의 프로토콜, 인비트로젠사(Invitrogen))을 사용하여 플라스미드로 형질주입시켰다. 성장 배지 내에서 G418을 사용하여 페로포틴-GFP를 안정적으로 발현시키는 세포를 선택하고(cDNA 발현 플라스미드를 흡수하고 혼입시킨 세포만 생존하므로) Cytomation MoFlo™ 세포 분류기 상에서 수회 분류하여 GFP-양성 세포(488nm/530nm)를 얻었다. 세포를 증식시키고 분취량으로 냉동하였다.
인간 페로포틴에 대한 헵시딘 유사체(화합물)의 활성을 결정하기 위해서, 페놀 레드 없이 표준 배지 내에서 96웰 플레이트 내에 세포를 인큐베이션시켰다. 인큐베이터에서 적어도 18시간 동안 화합물을 목적하는 최종 농도로 첨가하였다. 인큐베이션 후에, 전체 세포 GFP 형광(Envision 플레이트 판독기, 485/535 필터 쌍)에 의해, 또는 Beckman Coulter Quanta™ 유세포 분석기(485nm/525nm에서 형광 강도의 기하 평균으로서 표현됨)에 의해 잔류하는 GFP-형광을 결정하였다. 인큐베이터에서 적어도 18시간 동안, 그러나 24시간 이하로 화합물을 목적하는 최종 농도로 첨가하였다.
특정 실험에서, 기준 화합물은 천연 헵시딘, 미니-헵시딘 및 R1-미니-헵시딘(이는 미니-헵시딘의 유사체임)을 포함하였다. RI-미니-헵시딘에서 "RI"는 레트로 인버스(Retro Inverse)를 지칭한다. 레트로 인버스 펩타이드는 모든 D 아미노산에서 역방향 서열을 갖는 펩타이드이다. 일례는 Hy-Glu-Thr-His-NH2가 Hy-DHis-DThr-DGlu-NH2가 되는 것이다. 상기에 기재된 활성 검정에 따라 페로포틴 분해에 대한 이들 기준 화합물의 EC50을 결정하였다. 이들 펩타이드는 대조군 표준의 역할을 하였다.
Figure pct00028
본 발명의 다양한 펩타이드 유사체에 대해서 결정된 효력 EC50 값(nM)은 등록 미국 특허 제9,822,157호 및 미국 특허 제10,030,061호에 제공되어 있다. 이들 특허는 전문이 참조에 의해 본 명세서에 포함된다.
실시예 3
진성 적혈구증가증에서의 헵시딘 저해
본 발명의 헵시딘 유사체를 문헌[Casu et al., Blood. 2016; 128(2):265-276]에 기재된 바와 같이 진성 적혈구증가증에서의 활성에 대해서 시험한다.
25개 아미노산 펩타이드인 헵시딘은 전신 철 항상성을 조절하고, 혈장 철 농도 및 철 저장에 반응하여 간에 의해 생성된다. 헵시딘은 철 흡수, 재순환 및 저장에 관여하는 세포 표면에서 발현되는 세포 철 외수송 페로포틴(FPN-1)을 저해한다. 헵시딘은 전신 철 제한을 조절하며, 외인성 헵시딘 모방체의 외부 투여는 적혈구증가증에 대한 뮤린 모델에서 Hgb 농도 및 비장비대를 감소시켰다(문헌[Casu et al, Blood. 2016;128(2):265-276]).
JAK2가 구성적으로 활성화되는 경우, 에리트로포이에틴-독립적인 적혈구 생성이 촉발되어 적혈구증가증을 유발한다. 돌연변이 Jak2의 효과를 방지하기 위한 접근법은 헵시딘 또는 헵시딘 모방 펩타이드로 철 제한을 유도하는 것이다. 낮은 철 수준은 Jak2의 하류에 있는 지점에서 에리트로포이에틴 신호 전달을 저해하여 무시 신호를 제공한다. 돌연변이를 유발하는 적혈구증가증을 보유하는 인간 Jak2 유전자를 발현하는 트랜스제닉 마우스에 헵시딘 모방 펩타이드를 투여하면, 진성 적혈구증가증의 특징인 적혈구 생산 및 헤마토크리트 증가가 정상 범위로 되돌아간다(문헌[Casu et al Blood. 2016;128(2):265-276] 참조).
실시예 4
헵시딘의 펩타이드 유사체의 생체내 검증
본 발명의 헵시딘 유사체를 생체내 활성에 대해서 시험하여, 혈청에서 유리 Fe2+를 감소시키는 능력을 결정하였다.
PK-PD 실험에서, 헵시딘 유사체(화합물 A(서열번호 45) 또는 화합물 B(서열번호 55)) 또는 비히클 대조군을 시노몰거스 원숭이(n=3/군)에게 화합물 A 2.44㎎/㎏ 또는 화합물 B 2.93㎎/㎏으로 피하로 투여하였다. 용량의 투여 후 0.5시간, 1시간, 2시간, 4시간, 8시간, 12시간, 24시간, 30시간, 36시간, 48시간, 60시간, 72시간 및 144시간에 헵시딘 유사체가 투여된 원숭이의 군으로부터 혈청 샘플을 채취하였다. 검정의 제조자로부터의 설명서에 따라 Cobas c 111 상에서의 비색 검정(검정: IRON2: ACN 661)을 사용하여 혈장/혈청 중의 철 함량을 측정하였다. Cobas Iron2 분석으로부터 얻은 데이터를 화합물 A의 경우 도 1A에 그리고 화합물 B의 경우 도 1B에 제시한다(SD를 갖는 평균 값으로서). 화합물 A는 화합물 투여 8시간 후에 혈청 철의 대략 5배 감소를 생성하였다. 화합물 B에 대한 혈청 철 감소는 화합물 투여 후 약 12시간에 최대였고, 이것은 투여전 수준보다 12배 더 낮았다.
이들 시험은 본 발명의 헵시딘 유사체가 시노몰거스 원숭이에게 투여될 때 적어도 60시간 동안 혈청 철 수준을 감소시킨다는 것을 입증한다. 화합물 A 및 화합물 B 둘 다의 경우 혈청 철의 감소에 대해서 농도 의존적 효과가 존재한다. 또한 헵시딘 유사체의 혈청 농도와 이에 상응하는 효과 사이에는 효과 지연이 또한 존재하며, 즉, 효과의 최하점은 화합물의 최고 혈청 농도에서 지연된 시간에 발생한다. 화합물 A의 경우, 200 내지 3200ng/㎖ 범위의 혈청 농도가 효과적이었고, 1000 내지 3200ng/㎖가 최대 효과를 갖는다. 화합물 B의 경우, 25 내지 125ng/㎖의 혈청 농도가 효과를 가졌고, 50 내지 125ng/㎖가 최대 효과를 갖는다.
실시예 5
적혈구생성 제한에 있어서의 펩타이드의 효능
본 발명의 헵시딘 유사체를 건강한 시노몰거스 원숭이에게 투여될 때 적혈구생성 활성을 제한하는 효능에 대해 시험하였다. 반복 투여 연구에서, 화합물 A 또는 비히클 대조군의 4회의 주 단위 용량을 0.6㎎/㎏/용량, 2㎎/㎏/용량 또는 6㎎/㎏/용량의 3가지 상이한 용량으로 시노몰거스 원숭이에게 피하(SC) 투여하였다(n=6/성별/고용량 또는 대조군 및 n=3/성별/저용량 또는 중간 용량 군).
3㎎/㎏/용량 이상에서 화합물 A는 약리학-매개 빈혈, 특히 헤마토크리트(Hct) 및 헤모글로빈(Hgb)의 용량 및 시간 의존적 감소를 야기하였다(표 7 및 도 2). 제29일에, 1, 3 및 10㎎/㎏의 화합물 A 처리된 수컷에 대한 Hgb 수준은 동시 대조군과 비교할 때 각각 0.1, 2.7 및 7.2g/㎗ 감소되었다. 절대적으로 Hct 수준은 3 및 10㎎/㎏/용량 수컷 군에서 각각 6% 및 22% 감소하였다. 수컷 동물은 암컷과 유사한 약리학적 반응을 보였다. 망상적혈구증가증은 적혈구(RBC) 감소가 연장된 후 발생하였으며, 통계적으로 유의한 증가는 제29일에 관찰되었다. 투여 중단 후 RBC 매개변수는 동시 대조군 값으로 복귀되었다.
Figure pct00029
RBC의 크기 및 Hgb 함량을 반영하는 평균 미립자 부피(MCV), 평균 미립자 헤모글로빈 농도(MCHC), 세포당 평균 미립자 Hgb(MCH)를 포함하는 헤마토크리트 수준 및 2차 혈액학적 지표를 도 2에 도시한다. 화합물 A-유도된 철-제한 적혈구생성 후에 생성된 RBC는 동시 대조군에 대해서 크기(MCV)가 유사하지만 동시 대조군과 비교할 때 세포당 Hgb 농도(MCHC 및 MCH)에서 용량 의존적 감소를 나타낸다. 회복 시, 비히클 대조군 및 10㎎/㎏ 화합물 A 투여 군은 유사하였는데, 이는 혈액학적 변화의 가역성을 나타낸다. 원래 철-풍부 동물에서 과장되고 지속적인 철-제한 빈혈 후에 관찰된 혈액학적 소견이 예상될 것이다.
실시예 6
적혈구생성 제한에 있어서의 펩타이드의 효능
또 다른 반복 투여 연구에서, 화합물 A 또는 비히클 대조군의 13회의 주 단위 용량을 3가지 상이한 용량으로 시노몰거스 원숭이에게 피하 투여하였고, 그 다음 5주의 회복 기간이 존재하였다.
시노몰거스 원숭이(6마리/성별/군)에게 화합물 A 0(0.9% 식염수), 0.6, 2, 또는 6㎎/㎏/용량의 피하 용량을 총 13회 용량에 대해 3개월 동안 QW 투여하였다(1일, 8일, 15일, 22일, 29일, 36일, 43일, 50일, 57일, 64일, 71일, 78일, 85일). 동물 코호트(4/성별/군)를 92일(메인(Main))에 희생시켰고, 나머지 동물(2/성별/군)은 35일의 회복 기간(회복) 후 제120일에 희생시켰다. 혈액학적 샘플을 치료 시작 전 2회(-7일 및 -3일), 메인 및 회복 동물의 경우 27일, 55일 및 90일에 얻었는데, 이는 제4, 제8 및 제13 투여 후 제5일에 해당하며, 회복 동물의 경우 제119일에 얻었다.
혈액학적 변화는 철이 풍부한 NHP에 투여된 헵시딘 모방체의 예상되는 약리학과 일치하였으며, RBC 매개변수(RBC 수치, Hgb 및 Hct)의 용량-의존적 감소 및 망상적혈구의 증가 및 RBC 지수의 변경(MCHC 및 MCH 감소) 및 RBC 형태(예를 들어, 소적혈구증 및 저혁색소증)(데이터는 표시되지 않음)의 변경을 포함하였다. 화합물 A 유도 빈혈과 일치하게, 2㎎/㎏/용량 이상에서 조혈세포 세포과다증(hematopoietic hypercellularity)이 골수(대퇴골, 흉골)에서 일어났고, 골수외 조혈 및 혈철소 침착이 간 및 비장에서 관찰되었다(6㎎/㎏/용량에서 증가된 장기 중량과 상관관계가 있음)(데이터 나타내지 않음).
철 결핍성 빈혈을 유도하는데 있어서 헵시딘 모방체의 공지된 적혈구생성 약리학적 작용과 일치하는 혈액학적 변화가 발생하였다(표 8). 제90일에, 암컷에서 0.6. 2, 및 6㎎/㎏의 화합물 A에 대한 Hgb 수준은 각각 동시 대조군에 비해서 1.3, 3.0 및 5.6g/㎗만큼 감소하였다. 수컷 동물은 암컷과 유사한 약리학적 반응을 보였다. 망상적혈구는 빈혈에 대한 반응으로 용량 의존적 방식으로 모든 투여 단계 시점에 걸쳐 상승하였다. 투여 중단 후 RBC 매개변수는 동시 대조군 값으로 복귀되었다.
Figure pct00030
동일한 연구에서, 화합물 A는 도 3에 나타낸 바와 같이 2차 혈액학적 지수에서 상당한 변화를 유도하였다. MCHC 및 MCH의 용량-의존적 감소는 철-제한 적혈구생성과 관련된 예상되는 RBC 유변학적 변화와 일치한다. 혈액학적 효과는 투여 중단 35일 후 동시 대조군과 유사하였다.
2㎎/㎏/일 이상의 총 빌리루빈(tBili)의 증가가 또한 철 결핍성 빈혈과 관련된 RBC의 파괴와 관련된 치료 기간 동안 관찰되었으며(도 4), 이는 가장 젊은 적혈구인 망상적혈구의 우선적인 파괴와 관련된 것으로 간주되었다(문헌[Robinson & Koeppel, 1971]). 화합물 A로 인한 철-결핍성 빈혈의 예상된 유도와 일치하게, 수컷 및 암컷 동물 둘 다에서 6㎎/㎏/용량의 최고 평가 용량에서 상당히 상승된 수준의 혈소판이 관찰되었었다(도 5). 회복 시점에 투여를 중단한 후, 빌리루빈 수준은 정상 수준으로 복귀된 반면, 혈소판 수준은 정상 한계 이내로 역전되었다(동시 대조군과 비교).
실시예 7
정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증을 갖는 환자에서 화합물 A의 2상 연구
배경: 진성적혈구증가증(PV) 환자는 일반적으로 45% 미만의 헤마토크리트를 유지하기 위해서 주기적으로 치료적 정맥절개술(동시 세포감소 요법을 포함하거나 포함하지 않음)으로 치료된다. 결과적으로, 정맥 절개술 요구 사항이 높은 PV 환자는 약속 사이에 45% 초과의 헤마토크리트를 가질 가능성이 있다. 다른 한편, PV 환자의 대부분은 진단 시 철 결핍이며, 반복적인 정맥절개술 후에 악화된다. PV 환자는 철 결핍(빈혈이 없는 경우에도 인지 장애 및 피로가 있음)으로부터의의 증상이 존재할 수 있고, 철 보충은 전형적으로 정맥절개술 비율을 증가시킨다. 최근 연구는, 이용 가능한 요법은 부분적으로 철 결핍을 역전시켜 PV-관련 증상을 개선한다는 것을 입증한다. 따라서, 증상이 있는 정맥절개술-필요 PV 환자는 충족되지 않은 치료 요구를 제시한다. 본 발명자들은 헵시딘 모방체가 비장 대식세포에서 철의 격리를 촉진하여, 악성 적혈구생성에 대한 철 가용성을 감소시켜 정맥절개술 요구 사항을 줄이면서 철 결핍-관련 증상을 역전시킨다는 가설을 세웠다.
화합물 A는 다발성 혈액 장애에 대한 임상 연구에서 헵시딘 모방제이다. 야생형 마우스에서, 화합물 A의 반복된 피하 주사는 일시적으로 혈청 철을 감소시키고 헤마토크리트의 용량 관련 감소를 초래하였다. 62명의 건강한 대상체에서 단일 용량으로서 화합물 A의 I상 연구는 중대한 이상 반응 없이 기준선으로부터 혈청 철 농도의 65% 감소 및 트랜스페린 포화도의 70% 감소를 입증하였다.
목적: 이러한 3-부분 2상 임상 시험(도 6에 요약됨)의 주요 목적은 정맥절개술-필요 PV 환자에서 화합물 A의 효능(정맥절개술 요구 사항의 감소) 및 안전성을 입증하는 것이었다. 2차 목적은 환자 보고된 결과 및 철 대사의 마커에 대한 화합물 A의 효과를 결정하는 것이었다.
방법: 적격성 기준은 PV 진단(2016 WHO 기준에 따름) 및 안정적인 용량의 세포감소 요법을 포함하거나 포함하지 않으면서 등록 전 6개월 동안 45% 이하의 헤마토크리트를 목표로 하기 위해서 3회 이상의 정맥절개술을 포함하였다. 적격 환자를 2상 시험의 28주 용량 결정 파트에 등록하였다. 환자에게 개별 조정으로 10, 20, 40, 60 및 80㎎의 화합물 A 용량을 매주 피하 투여하여 도 7에 요약된 바와 같이 45% 미만의 헤마토크리트를 유지하였다. 체내 철 상태는 혈청 페리틴, 혈청 철, 트랜스페린 포화도(TSAT), 평균 미립자 부피(MCV) 및 평균 미립자 헤모글로빈(MCH)을 모니터링함으로써 정량하였다.
결과: 효능 데이터는 시험에 등록된 13명의 대상체에 대해 이용 가능하였다: 저위험 PV가 있는 7/13 및 고위험 PV가 있는 6/13; 평균 연령 57.4세(범위 31 내지 74); 6명은 TP 단독, 6명은 동시 하이드록시유레아, 1명은 동시 인터페론 제공; 등록 전 24주 동안 TP=3 내지 9; TP=42일 사이의 중간 시간. 환자 특징을 표 9에 제공한다.
Figure pct00031
Figure pct00032
모든 대상에는 적절한 용량 조정 후 45% 미만의 헤마토크트를 유지하였다. 평균 기준선 값은 혈청 페리틴=14.2ng/㎖(5, 37); 혈청 철=33.0ug/㎗(16.8, 107.8); 및 TSAT=7.6%(4, 30)였다. 화합물 A로 치료하는 동안, 혈청 페리틴 수준은 정상치를 향해 점진적으로 증가하였는데(도 8), 이는 철 저장의 증가를 반영한다. TSAT(도 9) 및 혈청 철 값은 일시적으로 변했지만, 정상 범위 미만으로 유지되었는데, 이는 세포내 저장으로부터 철 방출을 저해하는 화합물 A의 약력학적 효과를 반영한다. 이는 MCV(도 10) 및 MCH(도 11)의 증가 및 헤마토크리트 및 적혈구 수치의 감소와 관련이 있으며 함께 철 분포의 정상화를 시사한다.
대상체 중 8명을 3개월 이상 동안 화합물 A로 치료하였다(도 7). 3명의 대상체를 무작위 배정하였다. 연구의 공개 용량 결정 파트 동안, 치료를 준수하지 않았고, 4주 내지 9주에 계획된 치료를 누락하여 약 13주에 정맥절개술을 받은 1명의 대상체를 제외하고는 모든 대상체는 정맥절개술을 겪지 않았다. 3명의 대상체는 연구 시작 전 유사한 기간에 필요한 3 내지 5 TP와 비교하여 TP 없이 파트 1(28주)을 완료하였다. 28주의 용량 결정 기간 동안 헤마토크리트는 2명의 대상체를 제외한 모두에서 45% 미만으로 지속적으로 제어되었다(도 12). 2명의 대상체는 일시적으로 45% 초과의 헤마토크리트를 가졌지만, 1명은 정맥절개술 후 45% 미만으로 유지되었고, 용량이 둘 다에서 증가한다. 또한, 적혈구 수는 감소하였고(도 13), MCV는 2명을 제외한 모든 대상체에서 증가하였다. 이러한 발견은 적혈구생성 내에서 철의 재분배를 시사한다. 마지막으로, 치료 전, 평균 철-관련 매개변수는 전신 철 결핍과 일치한 반면, 혈청 페리틴은 정상 범위로 점진적으로 증가하였다. 가장 빈번한 이상 반응은 3명의 환자가 보고한 주사 부위 반응(ISR)이었다. 대부분의 반응은 1 내지 2등급이었고, 본질적으로 일시적이었고 약물을 중단한 환자는 없었다.
이러한 연구는 화합물 A가 양호하게 내약성이었다는 것을 입증한다. 치료 순응 대상체는 사전 등록과 비교하여 평가 가능한 치료 기간이 끝날 때 헤마토크리트 및 절대 수준이 45% 미만으로 상당히 감소하였고, 페리틴이 증가하였는데, 이는 철 결핍 증상이 개선되어야 한다는 것을 시사한다. 대상체의 혈소판 수치는 치료 기간에 걸쳐서 일반적으로 일정하게 유지되었다(도 14). 대상체의 망상적혈구 %는 치료 기간에 걸쳐 상향하는 경향을 나타내었지만(도 15), 성숙한 적혈구의 유사한 증가는 관찰되지 않았다(데이터 나타내지 않음). 대상체의 백혈구 수치는 치료 기간에 걸쳐 일반적으로 일정하게 유지되었는데, 이는 치료가 염증 반응을 일으키지 않았음을 시사한다(도 16). 혈소판 및 백혈구 세포의 증가 없음으로 입증된 바와 같이 PV 질환 진행은 없는 것으로 나타났다.
PV 환자에서 10㎎ 내지 80㎎의 피하 용량을 투여한 후 다양한 시간에 화합물 A의 혈장 농도를 측정하였다. 농도는 용량 의존적으로 증가하였고, 샘플링 시간 및 용량에 따라 달라졌다. 화합물 A 농도의 범위는 검출 가능 미만(2ng/㎖ 내지) 내지 866ng/㎖ 범위였다(도 17A 및 도 17B).
결론: 현재 결과는 높은 치료적 정맥절개술 요구 사항을 갖는 저위험 PV 환자를 포함하여 PV 환자의 치료에서 화합물 A와 같은 헵시딘 모방체의 사용을 뒷받침한다. 화합물 A 및 다른 헵시딘 유사체가 비장 대식세포에서 철의 격리를 촉진하여, 악성 적혈구생성에 대한 철 가용성을 감소시켜 정맥절개술 요구 사항을 줄이면서 철 결핍-관련 증상을 역전시킨다는 가설이 확립된다. 이들 연구는 화합물 A가 PV 치료를 위한 효과적인 작용제이며, 철 결핍을 역전시키고, PV 환자에서 TP의 필요성을 제거한다는 것을 나타낸다. TP-의존성 PV 환자에서 7개월 동안 TP 요구 사항을 제거하는 것은 중요하고 예상치 못한 것이다. 현재 결과는 화합물 A가 저위험 환자 및 고위험 환자 둘 다에서 헤마토크리트를 제어하고, 철 결핍을 역전시키며, 치료적 정맥절제술을 제거하는 데 효과적인 작용제임을 나타낸다. 이러한 결과는 또한 투여 요법, 투여 경로, 치료 전반에 걸쳐 투여량을 모니터링 하는 방법 및 조절하는 방법을 확립한다.
본 명세서에 언급되고/되거나 출원 데이터 시트에 열거된 모든 상기 미국 특허, 미국 특허 출원 공개, 미국 특허 출원, 외국 특허, 외국 특허 출원 및 비-특허 간행물은 참조에 의해 전체적으로 본 명세서에 포함된다.
본 발명의 특정 실시형태가 예시의 목적으로 본 명세서에 기재되어 있지만, 본 발명의 사상 및 범위로부터 벗어나지 않으면서 다양한 개질이 실행될 수 있다는 것이 전술한 내용으로부터 인정될 것이다.
<110> Protagonist Therapeutics, Inc. <120> CONJUGATED HEPCIDIN MIMETICS <130> 2022-FPA-1333 <150> US 62/895,201 <151> 2019-09-03 <150> US 62/983,515 <151> 2020-02-28 <150> US 63/020,945 <151> 2020-05-06 <150> US 63/059,747 <151> 2020-07-31 <160> 58 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hepcidin analogue formula <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Xaa is Asp, Ala, Ida, pGlu, bhAsp, Leu, D-Asp or absent <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> N-terminal residue modified with hydrogen, a C1-C6 alkyl, a C6-C12 aryl, a C1-C20 alkanoyl or pGlu <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Xaa is Thr, Ala, or D-Thr <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Xaa is His, Lys or D-His <220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> Xaa is Phe, Ala, Dpa or D-Phe <220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> Xaa is Pro, Gly, Arg, Lys, Ala, D-Pro or bhPro <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> Xaa is Ile, Cys, Arg, Lys, D-Ile or D-Cys <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Xaa is Cys, Ile, Leu, Val, Phe, D-Ile or D-Cys <220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> Xaa is Ile, Arg, Phe, Gln, Lys, Glu, Val, Leu or D-Ile <220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> Xaa is Phe or bhPhe <220> <221> MOD_RES <222> (10) <223> Xaa is Lys, Phe or absent <220> <221> MOD_RES <222> (11) <223> Xaa is Gly, Cys, Ala, Phe, Pro, Glu, Lys, D-Pro, Val, Ser or absent <220> <221> MOD_RES <222> (12) <223> Xaa is Pro, Ala, Cys, Gly or absent <220> <221> MOD_RES <222> (13) <223> Xaa is Arg, Lys, Pro, Gly, His, Ala, Trp or absent <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> Xaa is Ser, Arg, Gly, Trp, Ala, His, Tyr or absent <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> Xaa is Lys, Met, Arg, Ala or absent <220> <221> MOD_RES <222> (16) <223> Xaa is Gly, Ser, Lys, Ile, Ala, Pro, Val or absent <220> <221> MOD_RES <222> (17) <223> Xaa is Trp, Lys, Gly, Ala, Ile, Val or absent <220> <221> MOD_RES <222> (18) <223> Xaa is Val, Thr, Gly, Cys, Met, Tyr, Ala, Glu, Lys, Asp, Arg or absent <220> <221> MOD_RES <222> (19) <223> Xaa is Cys, Tyr or absent <220> <221> MOD_RES <222> (20) <223> Xaa is Met, Lys, Arg, Tyr or absent <220> <221> MOD_RES <222> (21) <223> Xaa is Arg, Met, Cys, Lys or absent <220> <221> MOD_RES <222> (22) <223> Xaa is Arg, Lys, Ala or absent <220> <221> MOD_RES <222> (23) <223> Xaa is Arg, Cys, Lys, Val or absent <220> <221> MOD_RES <222> (24) <223> Xaa is Arg, Lys, Pro, Cys, Thr or absent <220> <221> MOD_RES <222> (25) <223> Xaa is Thr, Arg or absent <220> <221> MOD_RES <222> (25) <223> Xaa is Thr, Arg or absent <220> <221> MOD_RES <222> (25) <223> C-Terminal residue modified with NH2 or OH <400> 1 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hepcidin analogue formula <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Xaa is Asp, Ala, Ida, pGlu, bhAsp, Leu, D-Asp or absent <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Xaa is Thr, Ala, or D-Thr <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Xaa is His, Lys or D-His <220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> Xaa is Phe, Ala, Dpa or D-Phe <220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> Xaa is Pro, Gly, Arg, Lys, Ala, D-Pro or bhPro <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> Xaa is Ile, Cys, Arg, Lys, D-Ile or D-Cys <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Xaa is Cys, Ile, Leu, Val, Phe, D-Ile or D-Cys <220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> Xaa is Ile, Arg, Phe, Gln, Lys, Glu, Val, Leu or D-Ile <220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> Xaa is Phe or bhPhe <220> <221> MOD_RES <222> (10) <223> Xaa is Lys, Phe or absent <400> 2 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 <210> 3 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hepcidin analogue formula <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Xaa is Gly, Cys, Ala, Phe, Pro, Glu, Lys, D-Pro, Val, Ser or absent <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Xaa is Pro, Ala, Cys, Gly or absent <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Xaa is Arg, Lys, Pro, Gly, His, Ala, Trp or absent <220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> Xaa is Ser, Arg, Gly, Trp, Ala, His, Tyr or absent <220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> Xaa is Lys, Met, Arg, Ala or absent <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> Xaa is Gly, Ser, Lys, Ile, Ala, Pro, Val or absent <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Xaa is Trp, Lys, Gly, Ala, Ile, Val or absent <220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> Xaa is Val, Thr, Gly, Cys, Met, Tyr, Ala, Glu, Lys, Asp, Arg or absent <220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> Xaa is Cys, Tyr or absent <220> <221> MOD_RES <222> (10) <223> Xaa is Met, Lys, Arg, Tyr or absent <220> <221> MOD_RES <222> (11) <223> Xaa is Arg, Met, Cys, Lys or absent <220> <221> MOD_RES <222> (12) <223> Xaa is Arg, Lys, Ala or absent <220> <221> MOD_RES <222> (13) <223> Xaa is Arg, Cys, Lys, Val or absent <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> Xaa is Arg, Lys, Pro, Cys, Thr or absent <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> Xaa is Thr, Arg or absent <400> 3 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hepcidin analogue formula <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Xaa is Asp, Ida, pGlu, bhAsp or absent <220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> Xaa is Phe or Dpa <220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> Xaa is Pro or bhPro <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> Xaa is Ile, Cys or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Xaa is Cys, Ile, Leu or Val <220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> Xaa is Ile, Lys, Glu, Phe, Gln or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (10) <223> Xaa is Lys or absent <400> 4 Xaa Thr His Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Xaa 1 5 10 <210> 5 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hepcidin analogue formula <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Xaa is Asp, Ida, pGlu, bhAsp or absent <220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> Xaa is Phe or Dpa <220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> Xaa is Pro or bhPro <220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> Xaa is Ile, Lys, Glu, Phe, Gln or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (10) <223> Xaa is Lys or absent <400> 5 Xaa Thr His Xaa Xaa Cys Ile Xaa Phe Xaa 1 5 10 <210> 6 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hepcidin analogue formula <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Xaa is Asp, Ida, pGlu, bhAsp or absent <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> N-terminal residue modified with hydrogen, isovaleric acid, isobutyric acid or acetyl <220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> Xaa is Phe or Dpa <220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> Xaa is Pro or bhPro <220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> Xaa is Ile, Lys, Glu, Phe, Gln or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (10) <223> Xaa is Lys or absent <220> <221> MOD_RES <222> (11) <223> Xaa is Gly, Glu, Val or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (13) <223> Xaa is Arg or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> Xaa is Arg or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (16) <223> Xaa is Gly, Ser, Lys, Ile or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (17) <223> Xaa is Trp or absent <220> <221> MOD_RES <222> (18) <223> Xaa is Val, Thr, Asp, Glu or absent <220> <221> MOD_RES <222> (20) <223> Xaa is Lys or absent <220> <221> MOD_RES <222> (20) <223> C-terminal residue modified with NH2 or OH <400> 6 Xaa Thr His Xaa Xaa Cys Ile Xaa Phe Xaa Xaa Pro Xaa Ser Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Cys Xaa 20 <210> 7 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hepcidin analogue formula <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Xaa is Asp, Ida, pGlu, bhAsp or absent <220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> Xaa is Phe or Dpa <220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> Xaa is Pro or bhPro <220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> Xaa is Ile, Lys, Glu, Phe, Gln or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (10) <223> Xaa is Lys or absent <400> 7 Xaa Thr His Xaa Xaa Cys Ile Xaa Phe Xaa 1 5 10 <210> 8 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hepcidin analogue formula <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Xaa is Gly, Glu, Val or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Xaa is Arg or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> Xaa is Arg or Lys <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> Xaa is Gly, Ser, Lys, Ile or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Xaa is Trp or absent <220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> Xaa is Val, Thr, Asp, Glu or absent <220> <221> MOD_RES <222> (10) <223> Xaa is Lys or absent <400> 8 Xaa Pro Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa 1 5 10 <210> 9 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 9 Asp Thr His Phe Pro Ile Cys Ile Phe Gly Pro Arg Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys <210> 10 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 10 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Ile Phe Gly Pro Arg Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 11 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 11 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Ile Phe Glu Pro Arg Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 12 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 12 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Ile Phe Gly Pro Arg Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Ala Cys Lys <210> 13 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 13 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Ile Phe Gly Pro Arg Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys Lys 20 <210> 14 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 14 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Ile Phe Val Cys His Arg Pro Lys Gly 1 5 10 15 Cys Tyr Arg Arg Val Cys Arg 20 <210> 15 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 15 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Gly Pro Arg Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 16 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 16 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Lys Pro Arg Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 17 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 17 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Ile Phe Gly Pro Arg Ser Arg Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 18 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 18 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Gly Pro Lys Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 19 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 19 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Glu Pro Arg Ser Lys Gly Cys 1 5 10 15 Lys <210> 20 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 20 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Glu Pro Lys Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Glu Cys Lys <210> 21 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 21 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Glu Pro Arg Ser Lys Lys Cys 1 5 10 15 Lys <210> 22 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 22 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Glu Pro Arg Ser Lys Gly Cys 1 5 10 15 Lys Lys <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 23 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Lys Pro Arg Ser Lys Gly Cys 1 5 10 15 Lys <210> 24 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 24 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Glu Pro Lys Ser Lys Gly Cys 1 5 10 15 Lys <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 25 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe 1 5 <210> 26 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 26 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Ile Phe 1 5 <210> 27 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 27 Asp Thr Lys Phe Pro Cys Ile Ile Phe 1 5 <210> 28 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 28 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Gly Pro Arg Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 29 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 29 Asp Thr His Phe Pro Ile Cys Ile Phe Gly Pro Arg Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys <210> 30 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 30 Asp Thr His Phe Pro Ile Cys Ile Phe Gly Pro Arg Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys <210> 31 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 31 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Ile Phe Gly Pro Arg Ser Arg Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 32 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 32 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Ile Phe Gly Pro Arg Ser Arg Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 33 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 33 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Ile Phe Gly Pro Arg Ser Arg Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 34 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 34 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Gly Pro Arg Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 35 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 35 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Lys Pro Arg Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 36 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 36 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Gly Pro Lys Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 37 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 37 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Gly Pro Arg Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 38 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 38 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Gly Pro Arg Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 39 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 39 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Gly Pro Arg Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 40 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 40 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Lys Pro Arg Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 41 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 41 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Gly Pro Lys Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 42 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 42 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Gly Pro Arg Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 43 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 43 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Gly Pro Arg Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 44 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 44 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Gly Pro Arg Ser Lys Gly Trp 1 5 10 15 Val Cys Lys <210> 45 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 45 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Glu Pro Arg Ser Lys Gly Cys 1 5 10 15 Lys <210> 46 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 46 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Lys Pro Arg Ser Lys Gly Cys 1 5 10 15 Lys <210> 47 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 47 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Glu Pro Lys Ser Lys Gly Cys 1 5 10 15 Lys <210> 48 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 48 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Glu Pro Arg Ser Lys Gly Cys 1 5 10 15 Lys <210> 49 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 49 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Glu Pro Arg Ser Lys Gly Cys 1 5 10 15 Lys Lys <210> 50 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 50 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Glu Pro Arg Ser Lys Gly Cys 1 5 10 15 Lys <210> 51 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 51 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Glu Pro Arg Ser Lys Gly Cys 1 5 10 15 Lys <210> 52 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 52 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Glu Pro Arg Ser Lys Lys Cys 1 5 10 15 Lys <210> 53 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 53 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Glu Pro Arg Ser Lys Gly Cys 1 5 10 15 Lys Lys <210> 54 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <400> 54 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Glu Pro Arg Ser Lys Gly Cys 1 5 10 15 Lys <210> 55 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - hepcidin peptide analogue <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> Xaa is sarcosine <400> 55 Asp Thr His Phe Pro Cys Ile Lys Phe Lys Pro Arg Ser Lys Xaa Cys 1 5 10 15 Lys <210> 56 <211> 25 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56 Asp Thr His Phe Pro Ile Cys Ile Phe Cys Cys Gly Cys Cys His Arg 1 5 10 15 Ser Lys Cys Gly Met Cys Cys Lys Thr 20 25 <210> 57 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57 Asp Thr His Phe Pro Ile Cys Ile Phe 1 5 <210> 58 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Made in Lab - retro inverse mini hepcidin analogue <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> D form Phe <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> D form Ile <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> D form Cys <220> <221> MOD_RES <222> (4) <223> D form Ile <220> <221> MOD_RES <222> (5) <223> D form Pro <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> D form Phe <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> D form His <220> <221> MOD_RES <222> (8) <223> D form Thr <220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> D form Asp <400> 58 Phe Ile Cys Ile Pro Phe His Thr Asp 1 5

Claims (82)

  1. 대상체에게 유효량의 헵시딘(hepcidin) 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 진성 적혈구증가증(polycythemia vera)을 치료하는 방법으로서,
    상기 헵시딘 유사체는 하기 화학식 I을 포함하거나 이것으로 이루어진 펩타이드를 포함하고:
    R1-X-Y-R2 (I)(서열번호 1)
    [식 중,
    R1은 수소, C1-C6 알킬, C6-C12 아릴, C1-C20 알칸오일 또는 pGlu이고;
    R2는 NH2 또는 OH이며;
    X는 하기 화학식 II를 갖는 펩타이드 서열이고;
    X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10 (II)(서열번호 2)
    식 중,
    X1은 Asp, Ala, Ida, pGlu, bhAsp, Leu, D-Asp이거나 존재하지 않고;
    X2는 Thr, Ala 또는 D-Thr이고;
    X3은 His, Lys 또는 D-His이며;
    X4는 Phe, Ala, Dpa 또는 D-Phe이고;
    X5는 Pro, Gly, Arg, Lys, Ala, D-Pro 또는 bhPro이며;
    X6은 Ile, Cys, Arg, Lys, D-Ile 또는 D-Cys이고;
    X7은 Cys, Ile, Leu, Val, Phe, D-Ile 또는 D-Cys이며;
    X8은 Ile, Arg, Phe, Gln, Lys, Glu, Val, Leu 또는 D-Ile이고;
    X9는 Phe 또는 bhPhe이며;
    X10은 Lys, Phe이거나 존재하지 않고;
    Y가 존재하지 않는 경우, X7은 Ile이며;
    Y는 하기 화학식 III을 갖는 펩타이드 서열이고:
    Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y11-Y12-Y13-Y14-Y15 (III)(서열번호 3)
    식 중,
    Y1은 Gly, Cys, Ala, Phe, Pro, Glu, Lys, D-Pro, Val, Ser이거나 존재하지 않으며;
    Y2는 Pro, Ala, Cys, Gly이거나 존재하지 않고;
    Y3은 Arg, Lys, Pro, Gly, His, Ala, Trp이거나 존재하지 않으며;
    Y4는 Ser, Arg, Gly, Trp, Ala, His, Tyr이거나 존재하지 않고;
    Y5는 Lys, Met, Arg, Ala이거나 존재하지 않으며;
    Y6은 Gly, Ser, Lys, Ile, Ala, Pro, Val이거나 존재하지 않고;
    Y7은 Trp, Lys, Gly, Ala, Ile, Val이거나 존재하지 않으며;
    Y8은 Val, Thr, Gly, Cys, Met, Tyr, Ala, Glu, Lys, Asp, Arg이거나 존재하지 않으며;
    Y9는 Cys, Tyr이거나 존재하지 않고;
    Y10은 Met, Lys, Arg, Tyr이거나 존재하지 않으며;
    Y11은 Arg, Met, Cys, Lys이거나 존재하지 않고;
    Y12는 Arg, Lys, Ala이거나 존재하지 않으며;
    Y13은 Arg, Cys, Lys, Val이거나 존재하지 않고;
    Y14는 Arg, Lys, Pro, Cys, Thr이거나 존재하지 않으며;
    Y15는 Thr, Arg이거나 존재하지 않음];
    화학식 I을 포함하거나 이것으로 이루어진 상기 펩타이드는 선택적으로 R1, X 또는 Y 상에서 페길화되고,
    상기 펩타이드의 아미노산의 측쇄는 선택적으로 친유성 치환체 또는 중합체 모이어티에 접합된, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  2. 청구항 1에 있어서,
    R1은 수소, 아이소발레르산, 아이소부티르산 또는 아세틸인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  3. 청구항 1에 있어서,
    X는 하기 화학식 IV를 갖는 펩타이드 서열인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법:
    X1-Thr-His-X4-X5-X6-X7-X8-Phe-X10 (IV)(서열번호 4)
    식 중,
    X1은 Asp, Ida, pGlu, bhAsp이거나 존재하지 않으며;
    X4는 Phe 또는 Dpa이고;
    X5는 Pro 또는 bhPro이며;
    X6은 Ile, Cys 또는 Arg이고;
    X7은 Cys, Ile, Leu 또는 Val이며;
    X8은 Ile, Lys, Glu, Phe, Gln 또는 Arg이고;
    X10은 Lys이거나 존재하지 않는다.
  4. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    X는 하기 화학식 V를 갖는 펩타이드 서열인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법:
    X1-Thr-His-X4-X5-Cys-Ile-X8-Phe-X10 (V)(서열번호 5)
    식 중,
    X1은 Asp, Ida, pGlu, bhAsp이거나 존재하지 않으며;
    X4는 Phe 또는 Dpa이고;
    X5는 Pro 또는 bhPro이며;
    X8은 Ile, Lys, Glu, Phe, Gln 또는 Arg이고;
    X10은 Lys이거나 존재하지 않는다.
  5. 청구항 1에 있어서,
    상기 펩타이드는 하기 화학식 VI 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이되:
    R1-X-Y-R2 (VI)(서열번호 6)
    [식 중,
    R1은 수소, 아이소발레르산, 아이소부티르산 또는 아세틸이고;
    R2는 NH2 또는 OH이며;
    X는 하기 화학식 VII을 갖는 펩타이드 서열이고;
    X1-Thr-His-X4-X5-Cys-Ile-X8-Phe-X10 (VII)(서열번호 7)
    식 중,
    X1은 Asp, Ida, pGlu, bhAsp이거나 존재하지 않으며;
    X4는 Phe 또는 Dpa이고;
    X5는 Pro 또는 bhPro이며;
    X8은 Ile, Lys, Glu, Phe, Gln 또는 Arg이고;
    X10은 Lys이거나 존재하지 않으며;
    Y는 하기 화학식 VIII을 갖는 펩타이드 서열이고:
    Y1-Pro-Y3-Ser-Y5-Y6-Y7-Y8-Cys-Y10 (VIII)(서열번호 8)
    식 중,
    Y1은 Gly, Glu, Val 또는 Lys이고;
    Y3은 Arg 또는 Lys이며;
    Y5는 Arg 또는 Lys이고;
    Y6은 Gly, Ser, Lys, Ile 또는 Arg이며;
    Y7은 Trp이거나 존재하지 않고;
    Y8은 Val, Thr, Asp, Glu이거나 존재하지 않으며;
    Y10은 Lys이거나 존재하지 않음];
    상기 펩타이드는 2개의 Cys 사이에 이황화 결합을 포함하며;
    상기 화학식 I의 펩타이드는 선택적으로 R1, X 또는 Y 상에서 페길화되고;
    상기 펩타이드의 아미노산의 측쇄는 선택적으로 친유성 치환체 또는 중합체 모이어티에 접합되고;
    Ida는 이미노다이아세트산이고; pGlu는 피로글루탐산이며; bhAsp는 β-호모아스파트산이고; bhPro는 β-호모프롤린인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  6. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 펩타이드는 하기 서열 중 하나를 포함하되:
    DTHFPICIFGPRSKGWVC(서열번호 9);
    DTHFPCIIFGPRSKGWVCK(서열번호 10);
    DTHFPCIIFEPRSKGWVCK(서열번호 11);
    DTHFPCIIFGPRSKGWACK(서열번호 12);
    DTHFPCIIFGPRSKGWVCKK(서열번호 13);
    DTHFPCIIFVCHRPKGCYRRVCR(서열번호 14);
    DTHFPCIKFGPRSKGWVCK(서열번호 15);
    DTHFPCIKFKPRSKGWVCK(서열번호 16);
    DTHFPCIIFGPRSRGWVCK(서열번호 17);
    DTHFPCIKFGPKSKGWVCK(서열번호 18);
    DTHFPCIKFEPRSKGCK(서열번호 19);
    DTHFPCIKFEPKSKGWECK(서열번호 20);
    DTHFPCIKFEPRSKKCK(서열번호 21);
    DTHFPCIKFEPRSKGCKK(서열번호 22);
    DTHFPCIKFKPRSKGCK(서열번호 23);
    DTHFPCIKFEPKSKGCK(서열번호 24);
    DTHFPCIKF(서열번호 25);
    DTHFPCIIF(서열번호 26); 또는
    DTKFPCIIF(서열번호 27),
    상기 펩타이드는 선택적으로 R1, X 또는 Y 상에서 페길화되고, 상기 펩타이드의 아미노산의 측쇄는 선택적으로 친유성 치환체 또는 중합체 모이어티에 접합된, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  7. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 하기 서열 중 하나를 포함하는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법:
    아이소발레르산-DTHFPICIFGPRSKGWVC-NH2(서열번호 9);
    아이소발레르산-DTHFPCIIFGPRSKGWVCK-NH2(서열번호 10);
    아이소발레르산-DTHFPCIIFEPRSKGWVCK-NH2(서열번호 11);
    아이소발레르산-DTHFPCIIFGPRSKGWACK-NH2(서열번호 12);
    아이소발레르산-DTHFPCIIFGPRSKGWVCKK-NH2(서열번호 13);
    아이소발레르산-DTHFPCIIFVCHRPKGCYRRVCR-NH2(서열번호 14);
    아이소발레르산-DTHFPCI(K(PEG8))FGPRSKGWVCK-NH2(서열번호 28);
    아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(PEG8))PRSKGWVCK-NH2(서열번호 16);
    아이소발레르산-DTHFPICIFGPRS(K(PEG8))GWVC-NH2(서열번호 29);
    아이소발레르산-DTHFPICIFGPRS(K(PEG4))GWVC-NH2(서열번호 30);
    아이소발레르산-DTHFPCIIFGPRSRGWVC(K(PEG8))-NH2(서열번호 31);
    아이소발레르산-DTHFPCIIFGPRSRGWVC(K(PEG4))-NH2(서열번호 32);
    아이소발레르산-DTHFPCIIFGPRSRGWVC(K(PEG2))-NH2(서열번호 33);
    아이소발레르산-DTHFPCI(K(Palm))FGPRSKGWVCK-NH2(서열번호 34);
    아이소발레르산-DTHFPCIKF)K(Palm))PRSKGWVCK-NH2(서열번호 35);
    아이소발레르산-DTHFPCIKFGP(K(Palm))SKGWVCK-NH2(서열번호 36);
    아이소발레르산-DTHFPCIKFGPRS(K(Palm))GWVCK-NH2(서열번호 37);
    아이소발레르산-DTHFPCIKFGPRSKGWVC(K(Palm))NH2(서열번호 38);
    아이소발레르산-DTHFPCI(K(PEG3-Palm))FGPRSKGWVCK-NH2(서열번호 39);
    아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(PEG3-Palm))PRSKGWVCK-NH2(서열번호 40);
    아이소발레르산-DTHFPCIKFGP(K(PEG3-Palm))SKGWVCK-NH2(서열번호 41);
    아이소발레르산-DTHFPCIKFGPRS(K(PEG3-Palm))GWVCK-NH2(서열번호 42);
    아이소발레르산-DTHFPCIKFGPRSKGWVC(K(PEG3-Palm))-NH2(서열번호 43);
    아이소발레르산-DTHFPCIKFGPRSKGWVC(K(PEG8))-NH2(서열번호 44);
    아이소발레르산-DTHFPCI(K(아이소Glu-Palm))FEPRSKGCK-NH2(서열번호 45);
    아이소발레르산-DTHFPCIKF-K(아이소Glu-Palm)-PRSKGCK-NH2(서열번호 46);
    아이소발레르산-DTHFPCIKFEP(K(아이소Glu-Palm))SKGCK-NH2(서열번호 47);
    아이소발레르산-DTHFPCIKFEP(K(아이소Glu-Palm))SKGWECK-NH2(서열번호 20);
    아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRS(K(아이소Glu-Palm))GCK-NH2(서열번호 48);
    아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRSK(K(아이소Glu-Palm))CK-NH2(서열번호 21);
    아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRSKGCK(K(아이소Glu-Palm))-NH2(서열번호 49);
    아이소발레르산-DTHFPCI-K(Dapa-Palm)-FEPRSKGCK-NH2(서열번호 50);
    아이소발레르산-DTHFPCIK(F(Dapa-Palm))PRSKGCK-NH2(서열번호 23);
    아이소발레르산-DTHFPCIKFEP(K(Dapa-Palm))SKGCK-NH2(서열번호 24);
    아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRS(K(Dapa-Palm))GCK-NH2(서열번호 51);
    아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRSK(K(Dapa-Palm))CK-NH2(서열번호 52);
    아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRSKGC(K(Dapa-Palm))K-NH2(서열번호 53);
    아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRSKGC(K(Dapa-Palm))-NH2(서열번호 54);
    아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(PEG11-Palm))PRSK[Sar]CK-NH2(서열번호 55);
    아이소발레르산-DTHFPCIKF-NH2(서열번호 25);
    Hy-DTHFPCIKF-NH2(서열번호 25);
    아이소발레르산-DTHFPCIIF-NH2(서열번호 26);
    Hy-DTHFPCIIKF-NH2(서열번호 26);
    아이소발레르산-DTKFPCIIF-NH2(서열번호 27); 또는
    Hy-DTKFPCIIF-NH2(서열번호 27).
  8. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIIFGPRSKGWVCK-NH2(서열번호 10) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  9. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIIFEPRSKGWVCK-NH2(서열번호 11) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  10. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCI(K(PEG8))FGPRSKGWVCK-NH2(서열번호 28) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  11. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(PEG8))PRSKGWVCK-NH2(서열번호 16) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  12. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIIFGPRSRGWVC(K(PEG8))-NH2(서열번호 31) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  13. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCI(K(Palm))FGPRSKGWVCK-NH2(서열번호 34) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  14. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(Palm))PRSKGWVCK-NH2(서열번호 35) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  15. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIKFGP(K(Palm))SKGWVCK-NH2(서열번호 36) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  16. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIKFGPRSKGWVC(K(Palm))-NH2(서열번호 38) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  17. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCI(K(PEG3-Palm))FGPRSKGWVCK-NH2(서열번호 39) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  18. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(PEG3-Palm))PRSKGWVCK-NH2(서열번호 40) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  19. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIKFGP(K(PEG3-Palm))SKGWVCK-NH2(서열번호 41) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  20. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIKFGPRS(K(PEG3-Palm))GWVCK-NH2(서열번호 42) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  21. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIKFGPRSKGWVC(K(PEG3-Palm))-NH2(서열번호 43) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  22. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIKFGPRSKGWVC(K(PEG8))-NH2(서열번호 44) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  23. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCI(K(아이소Glu-Palm))FEPRSKGCK-NH2(서열번호 45) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  24. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(아이소Glu-Palm))PRSKGCK-NH2(서열번호 46) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  25. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIKFEP(K(아이소Glu-Palm))SKGCK-NH2(서열번호 47) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  26. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRS(K(아이소Glu-Palm))GCK-NH2(서열번호 48) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  27. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCI(K(Dapa-Palm))FEPRSKGCK-NH2(서열번호 50) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  28. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIKFEP(K(Dapa-Palm))SKGCK-NH2(서열번호 24) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  29. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 하기 화합물 및 이의 약제학적으로 허용 가능한 염으로 이루어진 군으로부터 선택되되:
    (a)
    Figure pct00033

    아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(PEG3-Palm))PRSKGWVCK-NH2(서열번호 40);
    (b)
    Figure pct00034

    아이소발레르산-DTHFPCI(K(아이소Glu-Palm))FEPRSKGCK-NH2(서열번호 45);
    (c)
    Figure pct00035

    아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(아이소Glu-Palm))PRSKGCK-NH2(서열번호 46);
    (d)
    Figure pct00036

    아이소발레르산-DTHFPCIKFEP(K(아이소Glu-Palm))SKGCK-NH2(서열번호 47); 및
    (e)
    Figure pct00037

    아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRS(K(아이소Glu-Palm))GCK-NH2(서열번호 48),
    상기 아미노산은 L-아미노산인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  30. 청구항 1 내지 청구항 29 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 1종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물로 상기 대상체에게 투여되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  31. 청구항 30에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 경구, 정맥내, 복막, 피부내, 피하, 근육내, 척추강내, 흡입, 증기요법(vaporization), 분무요법(nebulization), 설하, 협측, 비경구, 직장, 질 또는 국소 투여 경로에 의해서 상기 대상체에게 제공되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  32. 청구항 31에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 경구 또는 피하 투여 경로에 의해서 상기 대상체에게 제공되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  33. 청구항 1 내지 청구항 32 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체 또는 약제학적 조성물은 상기 대상체에게 최대 주 2회 또는 최대 주 1회 제공되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  34. 청구항 1 내지 청구항 33 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 약 10㎎ 내지 약 100㎎, 약 10㎎ 내지 약 70㎎, 약 10㎎ 내지 약 60㎎, 약 20㎎ 내지 약 50㎎, 약 20㎎ 내지 약 40㎎, 약 80㎎, 약 70㎎, 약 60㎎, 약 50㎎, 약 40㎎, 약 30㎎, 약 25㎎, 약 20㎎, 약 15㎎ 또는 약 10㎎의 투여량으로 상기 대상체에게 제공되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  35. 청구항 1 내지 청구항 33 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 펩타이드 또는 상기 약제학적 조성물은 약 10㎎, 약 15㎎, 약 20㎎, 약 25㎎, 약 30㎎, 약 35㎎ 또는 약 40㎎의 투여량으로 상기 대상체에게 제공되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  36. 청구항 1 내지 청구항 33 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 펩타이드 또는 상기 약제학적 조성물은 약 주 1회 약 15㎎, 약 20㎎, 약 25㎎, 약 30㎎ 또는 약 40㎎의 투여량으로 상기 대상체에게 제공되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  37. 청구항 1 내지 청구항 33 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 펩타이드 또는 상기 약제학적 조성물은 약 주 2회 약 15㎎, 약 20㎎, 약 25㎎, 약 30㎎ 또는 약 40㎎의 투여량으로 상기 대상체에게 제공되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  38. 청구항 1에 있어서,
    상기 대상체에게 유효량의 헵시딘 유사체를 투여하는 단계를 포함하되, 상기 헵시딘 유사체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되며:
    (a)
    Figure pct00038

    아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(PEG3-Palm))PRSKGWVCK-NH2(서열번호 40) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염;
    (b)
    Figure pct00039

    아이소발레르산-DTHFPCI(K(아이소Glu-Palm))FEPRSKGCK-NH2(서열번호 45) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염;
    (c)
    Figure pct00040

    아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(아이소Glu-Palm))PRSKGCK-NH2(서열번호 46) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염;
    (d)
    Figure pct00041

    아이소발레르산-DTHFPCIKFEP(K(아이소Glu-Palm))SKGCK-NH2(서열번호 47) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및
    (e)
    Figure pct00042

    아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRS(K(아이소Glu-Palm))GCK-NH2(서열번호 48) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염,
    상기 아미노산은 L-아미노산이고;
    선택적으로 상기 헵시딘 유사체는 2개의 Cys 아미노산 사이에 이황화 결합을 포함하며;
    상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 약 주 1회 약 5㎎ 내지 약 200㎎, 약 10㎎, 약 15㎎, 약 20㎎, 약 25㎎, 약 30㎎, 약 35㎎, 약 40㎎, 약 50㎎, 약 60㎎, 약 70㎎ 또는 약 80㎎의 투여량으로 상기 대상체에게 제공되고;
    상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 피하 투여 경로에 의해서 상기 대상체에게 전달되며;
    상기 대상체는 인간이고;
    선택적으로 상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함하는 약제학적 조성물로 존재하는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  39. 청구항 1 내지 청구항 33 및 청구항 38 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 약 10㎎의 투여량으로 상기 대상체에게 제공되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  40. 청구항 1 내지 청구항 33 및 청구항 38 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 약 15㎎의 투여량으로 상기 대상체에게 제공되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  41. 청구항 1 내지 청구항 33 및 청구항 38 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 약 20㎎의 투여량으로 상기 대상체에게 제공되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  42. 청구항 1 내지 청구항 33 및 청구항 38 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 약 25㎎의 투여량으로 상기 대상체에게 제공되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  43. 청구항 1 내지 청구항 33 및 청구항 38 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 약 30㎎의 투여량으로 상기 대상체에게 제공되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  44. 청구항 1 내지 청구항 33 및 청구항 38 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 약 40㎎의 투여량으로 상기 대상체에게 제공되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  45. 청구항 1 내지 청구항 33 및 청구항 38 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 약 50㎎의 투여량으로 상기 대상체에게 제공되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  46. 청구항 1 내지 청구항 33 및 청구항 38 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 약 60㎎의 투여량으로 상기 대상체에게 제공되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  47. 청구항 1 내지 청구항 33 및 청구항 38 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 약 70㎎의 투여량으로 상기 대상체에게 제공되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  48. 청구항 1 내지 청구항 33 및 청구항 38 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 약 80㎎의 투여량으로 상기 대상체에게 제공되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  49. 청구항 38 내지 청구항 48 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(PEG3-Palm))PRSKGWVCK-NH2(서열번호 40) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  50. 청구항 38 내지 청구항 48 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCI(K(아이소Glu-Palm))FEPRSKGCK-NH2(서열번호 45) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  51. 청구항 38 내지 청구항 48 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(아이소Glu-Palm))PRSKGCK-NH2(서열번호 46) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  52. 청구항 38 내지 청구항 48 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIKFEP(K(아이소Glu-Palm))SKGCK-NH2(서열번호 47) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  53. 청구항 38 내지 청구항 48 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRS(K(아이소Glu-Palm))GCK-NH2(서열번호 48) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  54. 청구항 1 내지 청구항 53 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 진성 적혈구증가증은 정맥절개술(phlebotomy)-필요 진성 적혈구증가증인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  55. 청구항 1 내지 청구항 54 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 진성 적혈구증가증은 저위험 환자에서의 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  56. 청구항 1 내지 청구항 54 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 저위험 진성 적혈구증가증 환자 또는 고위험 적혈구증가증 환자인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  57. 청구항 1 내지 청구항 56 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 증상이 있는 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증 환자인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  58. 청구항 1 내지 청구항 54 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증을 갖는 저위험 환자 또는 정맥절개술-필요 진성 적혈구증가증을 갖는 고위험 환자인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  59. 청구항 1 내지 청구항 58 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 진성 적혈구증가증으로 진단되고, 상기 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하기 전 24주 동안 45% 이하의 헤마토크리트를 목표로 적어도 3회의 정맥절개술을 제공받은 적이 있는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  60. 청구항 1 내지 청구항 33, 청구항 38 및 청구항 49 내지 청구항 59 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 약 5㎎ 내지 약 200㎎의 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 투여되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  61. 청구항 1 내지 청구항 33, 청구항 38 및 청구항 49 내지 청구항 59 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 약 10㎎ 내지 약 100㎎의 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 투여되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  62. 청구항 1 내지 청구항 33, 청구항 38 및 청구항 49 내지 청구항 59 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 약 20㎎ 내지 약 100㎎의 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 투여되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  63. 청구항 1 내지 청구항 33, 청구항 38 및 청구항 49 내지 청구항 59 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 약 20㎎의 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 투여되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  64. 청구항 1 내지 청구항 33, 청구항 38 및 청구항 49 내지 청구항 59 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 약 40㎎의 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 투여되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  65. 청구항 1 내지 청구항 33, 청구항 38 및 청구항 49 내지 청구항 59 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 약 80㎎의 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 투여되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  66. 청구항 1 내지 청구항 33, 청구항 38 및 청구항 49 내지 청구항 59 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 약 100㎎의 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 투여되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  67. 청구항 1 내지 청구항 33, 청구항 38 및 청구항 49 내지 청구항 59 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 약 120㎎의 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 투여되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  68. 청구항 1 내지 청구항 67 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 약제학적 조성물은 피하 주사를 통해 투여되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  69. 청구항 1 내지 청구항 68 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 약제학적 조성물은 일정 시간 기간에 걸쳐서 약 주 단위로 투여되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  70. 청구항 1 내지 청구항 69 중 어느 한 항에 있어서,
    투여되는 상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 양은 일정 시간 기간에 걸쳐서 증가되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  71. 청구항 1 내지 청구항 69 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 투여한 후 하나 이상의 시점에 상기 대상체의 헤마토크리트를 결정하는 단계 및 상기 대상체에게 투여되는 상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 양을 유지시키거나 조정하는 단계를 더 포함하되, 상기 양은 상기 대상체의 결정된 헤마토크리트가 45를 초과하는 경우에는 증가되고, 상기 양은 상기 대상체의 결정된 헤마토크리트가 37.5 또는 40 미만인 경우에는 감소되고, 상기 대상체의 결정된 헤마토크리트가 37.5 내지 45 또는 40 내지 44인 경우에는 상기 양을 유지시키는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  72. 청구항 1 내지 청구항 71 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 포유동물인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  73. 청구항 1 내지 청구항 72 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 인간인, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  74. 청구항 72 또는 청구항 73에 있어서,
    상기 대상체는 세포감소 요법(cytoreductive therapy), 선택적으로 하이드록시유레아에 의해서 치료되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  75. 청구항 1 내지 청구항 74 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은 상기 대상체의 헤마토크리트 수준을 45% 이하로 감소시키는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  76. 청구항 1 내지 청구항 75 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은 헤마토크리트를 적어도 3% 감소시키는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  77. 청구항 1 내지 청구항 76 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은 상기 대상체에서 혈청 페리틴을 증가시키는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  78. 청구항 1 내지 청구항 77 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은 상기 대상체에서 혈소판 수치를 실질적으로 변경하지 않는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  79. 청구항 1 내지 청구항 78 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은 상기 대상체의 혈액 또는 혈청에서 백혈구(leukocyte) 또는 백혈구 세포(white blood cell)를 실질적으로 증가시키지 않는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  80. 청구항 1 내지 청구항 79 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 치료 과정 동안 정맥절개술 없이 예를 들어, 일정 시간 기간 동안 약 주 1회, 약 2주마다 1회 또는 약 월 1회 치료가 유지되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  81. 청구항 1 내지 청구항 80 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은 일정 시간 기간에 걸쳐서 유효량의 상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 다회 투여하는 단계를 포함하되, 선택적으로 상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 상기 대상체에게 일정 시간 기간에 걸쳐서 약 주 1회 투여되는, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
  82. 청구항 81에 있어서,
    상기 헵시딘 유사체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되되:
    (a)
    Figure pct00043

    아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(PEG3-Palm))PRSKGWVCK-NH2(서열번호 40) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염;
    (b)
    Figure pct00044

    아이소발레르산-DTHFPCI(K(아이소Glu-Palm))FEPRSKGCK-NH2(서열번호 45) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염;
    (c)
    Figure pct00045

    아이소발레르산-DTHFPCIKF(K(아이소Glu-Palm))PRSKGCK-NH2(서열번호 46) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염;
    (d)
    Figure pct00046

    아이소발레르산-DTHFPCIKFEP(K(아이소Glu-Palm))SKGCK-NH2(서열번호 47) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염; 및
    (e)
    Figure pct00047

    아이소발레르산-DTHFPCIKFEPRS(K(아이소Glu-Palm))GCK-NH2(서열번호 48) 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염,
    상기 아미노산은 L-아미노산이고;
    선택적으로 상기 헵시딘 유사체는 2개의 Cys 아미노산 사이에 이황화 결합을 포함하며;
    상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 일정 시간 기간에 걸쳐서 약 주 1회 약 10㎎, 약 15㎎, 약 20㎎, 약 25㎎, 약 30㎎, 약 35㎎, 약 40㎎, 약 50㎎, 약 60㎎, 약 70㎎ 또는 약 80㎎의 투여량으로 상기 대상체에게 제공되고;
    상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 피하 투여 경로에 의해서 상기 대상체에게 전달되며;
    상기 대상체는 인간이고;
    선택적으로 상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염은 약제학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함하는 약제학적 조성물로 존재하며;
    상기 방법은 상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 다회 투여 중 1회 이상 이후에 상기 대상체의 헤마토크리트를 결정하는 단계 및 상기 대상체에게 그 다음 투여되는 상기 헵시딘 유사체 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염의 양을 유지시키거나 조정하는 단계를 더 포함하되, 상기 그 다음 투여되는 양은 상기 대상체의 결정된 헤마토크리트가 상기 대상체의 성별 및 임신 상태에 기초하여 허용 가능한 범위를 초과하면 증가되고, 상기 그 다음 투여되는 양은 상기 대상체의 결정된 헤마토크리트가 허용 가능한 범위 미만이면 감소되고, 그 다음 투여되는 양은 상기 대상체의 결정된 헤마토크리트가 허용 가능한 범위 이내이면 이전에 투여된 양과 동일한, 진성 적혈구증가증을 치료하는 방법.
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