KR20210086109A

KR20210086109A - 도라지 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20210086109A
Application number: KR1020190179815A
Authority: KR
Inventors: 김택중; 김윤석; 김민정
Original assignee: 연세대학교 원주산학협력단
Priority date: 2019-12-31
Filing date: 2019-12-31
Publication date: 2021-07-08

Abstract

본 발명은 도라지 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로서, 본 발명의 도라지 추출물은 염증성 분자 산화질소(NO)의 생성 억제효과 및 염증 관련 인자의 단백질 iNOS 및 COX-2 발현 감소 효과를 확인하여, 염증성 질환 예방 또는 치료용 조성물로 사용될 수 있다.

Description

도라지 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 조성물{Composition for treating inflammatory disease by Platycodon grandiflorum extracts}

본 발명은 도라지 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

염증은 감염으로 인한 인체 조직손상을 막는 방어기전으로 발전, 발열, 통증과 같은 증상을 수반하며, 병원성 물질 등의 유해한 요소를 제거하고 세포 및 조직을 회복시키는 중요한 면역 반응이다. 하지만 항원이 제거되지 않거나 내부물질이 원인이 되어 염증반응이 과도하게 혹은 지속적으로 야기되면 점막손상이 촉진되고, 과도한 급성 또는 만성 염증은 관절염, 천식, 대장염, 파킨슨병, 알츠하이머병 및 패혈증과 같은 심각한 장애를 일으킬 수 있다.

인체 내 면역반응에서 대식세포(macrophage)는 산화질소(Nitric oxide; NO), 프로스타글란딘(prostaglandin; PG), 전 염증성 사이토카인(pro-inflammatory cyrokine) 등과 같은 염증매개물질의 생성에 관여하고 조절하며, 염증매개물질은 염증 반응을 유도하여 인체 방어기전으로 작용하게 되나, 숙주의 면역반응이 적절하게 대응하지 못할 경우 염증성 질환을 유발할 수도 있다. 리포다당류(lipopolysaccharide; LPS)로 알려진 그람음성균의 외막은 강력한 전염증 내독소로 LPS 자극은 대식세포 및 미세아교세포에서 유도형 NO 합성효소(inducible NO synthase; iNOS) 유래 NO 및 시클로옥시게나아제-2(cyclooxygenase; COX-2) 유래 프로스타글란틴 E2(PGE2)를 포함하는 전염증성 매개체의 생성을 유도할 수 있다. 과도한 iNOS 활성 증가 또는 NO 생성은 다양한 염증성 질환의 병인이고 COX-2 효소에 의해 합성되는 PGE2는 발열 및 통증 같은 염증 증상의 중요한 매개체이고, 이들 매개체의 생산 억제는 다양한 염증성 질환의 치료에 유용하다.

현재까지 항염증의 목적으로 이용되고 있는 물질로는 비스테로이드 계통으로 플루페나믹산(flufenamic acid), 이부프로펜(ibuprofen), 벤지다민(benzydamine), 인도메타신(indomethacin) 등이 있고 스테로이드 계통으로 프레드니솔론(prednisolone), 덱사메타손(dexamethasone) 등이 있다. 또한, 알란토인(allantoin), 아즈렌(azlen), 하이드로코티손(hydrocortisone) 등이 항염증에 효과가 있는 것으로 알려져 있으나, 피부에 대한 안정성의 문제로 사용량이 제한되거나 효과가 미미하여 실질적으로 염증 완화 효과를 기대할 수 없는 문제점이 있다.

한편, 도라지(Platycodon grandiflorum)는 초롱꽃과(Campanulaceae)에 속하는 다년생 초본류로서 중국, 일본 및 우리나라 각지에 자생하고 있으며 예로부터 약용과 식용으로 이용되어 최근까지 널리 재배하여 생산되고 있다. 기본적으로 감기, 천식, 폐결핵에 거담제로서 유용한 것으로 보고되고 있어서 기관지 천식 치료나 면역증강 및 활성에 효능이 있는 것으로 밝혀지고 있다[비특허문헌 1 내지 5].

이에, 본 발명자들은 부작용이 적은 항염증제를 개발하기 위해 연구해온 결과 도라지 추출물을 처리하고 염증 반응을 유도한 대식세포에서 NO의 생성이 억제되고, iNOS 및 COX-2 단백질의 발현이 억제되는 효과를 밝힘으로써 도라지 추출물을 이용한 새로운 염증 예방 또는 치료용 조성물을 발명하기에 이르렀다.

대한민국 등록특허 10-0750333

Lee EB, Kor. J. Pharmacog. 5, 49-56.(1974) Chung JH et al., J. of the Kor. Agricuture Chemistry and Biotechnology. 40, 148-151.(1997) Chung JH., J. of the Kor. Agriculture Chemistry and Biotechnology. 40, 152-156.(1997) Kim CH et al., Kor. J. Pharmacog. 6, 43-47.(1975). Kim HD et al., J. Korean Soc. Food Nutr. 21, 91-96.(1992)

본 발명은 도라지 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 및 건강식품을 제공하기 위한 것이다.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 염증 증상의 중요한 매개체인 산화질소(Nitric oxide; NO) 생성 억제 및 염증관련 인자 iNOS 및 COX-2 발현 감소 효과가 있는 도라지 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 및 염증성 질환 예방 또는 개선용 건강식품을 제공한다.

본 발명에 따른 도라지 추출물은 산화질소(Nitric oxide; NO) 생성 억제효과 및 염증관련 인자 iNOS 및 COX-2 발현 감소 효과가 있으므로 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 및 염증성 질환 예방 또는 개선용 건강식품의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 대식세포주 RAW246.7 세포에 도라지 추출물 처리 또는 무처리 조건에서, LPS(Lipopolysaccharide) 1 ㎍/㎖ 처리하였을 때의 산화질소(Nitric oxide; NO) 생성량을 나타낸 도이다. 대조군은 도라지 추출물 및 LPS 모두 처리하지 않은 RAW246.7 세포를 사용하였다.
도 2는 대식세포주 RAW246.7 세포에 도라지 추출물 처리 또는 무처리 조건에서, LPS 1 ㎍/㎖를 처리하였을 때의 유도형 NO 합성효소(inducible NO synthase; iNOS) 발현량을 나타낸 도이다. 대조군은 도라지 추출물 및 LPS 모두 처리하지 않은 RAW246.7 세포를 사용하였다.
도 3은 대식세포주 RAW246.7 세포에 도라지 추출물 처리 또는 무처리 조건에서, LPS 1 ㎍/㎖를 처리하였을 때의 시클로옥시게나아제-2(cyclooxygenase; COX-2) 발현량을 나타낸 도이다. 대조군은 도라지 추출물 및 LPS 모두 처리하지 않은 RAW246.7 세포를 사용하였다.

이하, 본원의 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시형태를 들어 상세히 설명한다. 본 발명의 실시형태는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 더욱 완전하게 설명하기 위해서 제공되는 것이다. 따라서 본 발명의 실시형태는 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 이하 설명하는 실시형태로 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성 요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성 요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.

본 발명은 도라지 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 유효성분인 도라지 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다:

1) 도라지에 추출용매를 가하여 추출하는 단계; 및

2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계.

본 발명에서, 상기 단계 1)의 도라지는 재배한 것 또는 시판되는 것을 제한없이 사용할 수 있다. 또한, 상기 도라지는 도라지의 꽃, 잎, 가지, 줄기, 뿌리, 열매 및 씨앗 껍질로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 부위를 사용하는 것이 바람직하다.

본 발명에서 상기 단계 1)의 추출용매는 물 및 유기용매로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출하는 것이 바람직하며, 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 5의 알코올, 에틸 아세테이트, 아세톤, 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산 및 디클로로메탄으로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상으로 이루어지는 것이 더욱 바람직하다. 상기 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 이소프로판올로 이루어진 그룹에서 선택될 수 있고, 바람직하게는 에탄올일 수 있다. 추출방법으로는 초음파추출, 진탕추출, Soxhelt 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 추출용매를 세척하고 잘 건조된 도라지 분량의 1 내지 15배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하고, 2 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 또한, 추출시간은 1 내지 72시간이 바람직하며, 2 내지 48시간이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 아울러 추출 횟수는 1 내지 5회인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 일 실시형태에 따르면, 도라지 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 전체 약학적 조성물 100 중량%에 대하여 0.00001 내지 1 중량%, 바람직하게는 0.0001 내지 0.1 중량%, 보다 바람직하게는 0.001 내지 0.01 중량%일 수 있다.

본 발명의 도라지 추출물은 산화질소(Nitric oxide; NO) 생성 억제효과 및 염증 관련 인자의 단백질인 유도형 NO 합성효소(inducible NO synthase; iNOS) 또는 시클로옥시게나아제-2(cyclooxygenase; COX-2) 발현 억제효과를 통해 항염증 효과를 확인하였고, 상기 iNOS의 활성 증가 또는 NO 생성은 염증성 질환의 병인이며 COX-2 효소는 발열 및 통증 같은 염증 증상의 매개체인 프로스타글란틴 E2(prostaglandin E2; PGE2)을 합성하므로, 이들의 생산 억제는 염증성 질환의 치료에 유용하다.

본 발명의 일 실시양태에서, 염증성 질환은 관절염, 비염, 간염, 각막염, 위염, 장염, 신장염, 기관지염, 흉막염, 복막염, 척추염, 췌장염, 염증성 통증, 요도염, 방광염, 화상 염증, 치주염, 치은염 및 퇴행성 신경염증으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으나, 이로 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일 실시양태에서 도라지 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 통상의 방법에 따라 제형화하여 제제로 사용할 수 있다. 상기 제제는 정제, 캡슐제, 주사제, 트로키제, 산제, 과립제, 액제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 좌제, 질정제 및 환제로 이루어진 군으로부터 선택되는 제제으로 제형화될 수 있으나, 이로 제한되는 것은 아니다.

상기 조성물은 약학적으로 허용되는 담체와 함께 당업계에 공지된 방법으로 투여경로에 따라 다양하게 제형화될 수 있다. 상기 "약학적으로 허용되는" 이란 인간에게 투여될 때 활성성분의 작용을 저해하지 않으며 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 비독성의 조성물을 말한다. 상기 담체는 희석제, 활택제, 결합제, 붕해제, 감미제, 안정제, 방부제 중 1종 또는 2종 이상을 선택하여 사용할 수 있다.

상기 조성물을 제형화할 경우, 보통 사용되는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조할 수 있다.

경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 조성물에 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 제조한다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다.

비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 일 실시양태에서 도라지 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 통상의 방법에 따라 병용제 키트로 사용할 수 있다. 상기 조성물의 함량, 함량비, 염증성 질환에 대해서는 상기 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 대한 설명과 동일한 바, 구체적인 설명은 상기 내용을 원용한다.

본 발명의 일 실시양태에서 도라지 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 상기 "약학적으로 유효한 양" 은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 배합된 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

구체적으로, 본 발명에 따른 화합물의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 1 kg 당 0.1 mg 내지 100 mg, 바람직하게는 0.5 mg 내지 10 mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 질환의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 대상은 염증성 질환 치료를 필요로 하는 포유동물이다. 일반적으로 대상은 인간 염증성 질환 환자이다. 본 발명의 일 양태에서, 대상은 사람이 아닌 영장류와 같은 비인간 포유동물, 모델 시스템에 사용된 동물(예를 들어, 약제의 스크리닝, 특징화 및 평가에 사용되는 마우스 및 랫트) 및 그 밖의 포유동물, 예를 들어 토끼, 기니아피그, 햄스터, 개, 고양이, 침팬지, 고릴라, 원숭이와 같은 유인원류 동물일 수 있다.

또한, 본 발명의 도라지 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한이 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 과자류, 빵류, 면류 등과 같은 각종 식품류, 물, 청량음료, 과실음료 등의 드링크류, 껌, 차, 젤리, 즙, 엑기스, 비타민 복합제, 민간요법제, 조미료류, 건강기능 식품류 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다. 이와같이 다양한 형태로 가공된 본 발명의 건강기능식품은 인체에 부작용이 없고 복용이 용이하며 장기간 보관이 가능하다.

본 발명의 도라지 추출물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로 식품 또는 음료의 제조 시에는 본 발명의 도라지 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 5 중량%로 가할 수 있고, 건강 음료 조성물에는 100 ㎖을 기준으로 0.02 내지 2 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g 의 비율로 첨가할 수 있다.

그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없으므로 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 도라지 추출물을 함유하는 것 외에는 다른 성분에 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당; 디사카라이드, 예를 들어, 말토스, 수크로즈 등 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리스리톨 등의 당알코올이다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 도라지 추출물 건강 음료 조성물에 100 ㎖을 기준으로 0.02 내지 2 g, 보다 바람직하게는 0.3 내지 1 g 의 비율로 첨가할 수 있다.

상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제, 예를 들어 타우마킨, 스테비아 추출물 등 및 합성 향미제, 예를 들어 사카린, 아스파르탄 등을 유리하게 사용할 수 있다.

본 발명의 건강기능식품은 식품의 제조공정 중 상술한 본 발명의 도라지 추출물을 추가하는 공정을 가함으로써 또는 식품의 제조 후에 상술한 본 발명의 추출물을 첨가하는 공정을 가함으로써 용이하게 얻을 수 있다. 이때 필요에 따라 맛과 냄새 교정제를 첨가하여도 좋다.

상기 외에 본 발명의 도라지 추출물은 여러가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 도라지 추출물은 천연과일 주스, 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 도라지 추출물 100 중량부 당 0.0001 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명을 하기의 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다. 단 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 도라지 추출물 제조

표준화된 5 중량 % 플라티코딘 D 함유 도라지 추출물은 (주) 비엔씨바이오팜으로부터 공급받았으며, 구체적인 제조는 다음과 같다.

도라지 원료를 물(정제수), 에탄올 또는 메탄올을 이용하여 2회 이상 추출하여 얻어진 추출물을 발효 후 원심분리하여 고형분을 제거한 다음 농축하고 동결건조하여 용매가 제거된 각각의 추출물을 확보하였다. 추출물로부터 단일 활성성분을 분리정제하기 위하여 위에서 얻어진 추출물을 물로 완전히 녹인 다음 RP-18, Diaion HP-20, 그리고 이온 교환 겔 컬럼(Ion exchange gel column)을 이용하여 각 분획 별 활성을 확인한 후 활성을 보이는 분획만을 얻어내었고, 추가 HPLC 과정을 통해 각 단일 활성성분을 분리 정제하였다.

○ 분석기기

- HPLC system : Agilent 1260 series

- Column : kinetex C18 column (2.6㎛, 4.6mm x 100mm, Phenomenex, Germany)

- 검출기 : Alltech ELSD 2000

○ HPLC 및 ELSD 조건

시료는 Agilent 1260 series HPLC를 이용하여 분석하였다. 컬럼은 C₁₈column (2.6㎛, 4.6mm x 100mm, Phenomenex, Germany)을 사용하였고, 이동상은 0.15% 포름산(A), 아세토니트릴(B), 메탄올(C)를 사용하였으며, 다음과 같은 조건으로 기울기용매흘림(gradient flow) 방법으로 대상물질인 플라티코딘 D를 분석하였다.

기울기용매흘림 완료 후 컬럼의 안정화를 위해 10분간 0.15% 포름산(A) : 아세토니트릴(B) : 메탄올(C) = 75 : 20 : 5(v/v) 로 post-run을 실시하였다. 이때, 시료의 주입량 및 유속은 20 ㎕ 와 0.6ml/min 로 조정하였다.

플라티코딘 D 시료의 검출은 ELSD 검출기를 이용하였고, 이때 건조가스는 질소를 사용하였으며 유속 및 온도는 1.5L/min 및 80℃ 로 설정하여 플라티코딘 D 를 정량하였다.

○ 플라티코딘 D 표준품의 표준정량곡선

플라티코딘 D는 상용 표준품(Futoro lab.사)을 정확히 계량하여 50% 메탄올에 용해시킨 후 HPLC/ELSD를 이용하여 표준정량곡선을 그려 플라티코딘 D 함량을 확인하였다. 플라티코딘 D 상용 표준품으로부터 구한 표준정량곡선의 검량선 계산식은 y=17.757x-643.76 (R²=0.999)로 양호한 직선성을 나타내었다. 시험물질의 표준화를 위하여 각 시료를 50% 메탄올에 20 mg/ml이 되도록 용해한 다음 불순물을 제거하고 (0.45㎛ filter) HPLC/ELSD 검출을 실시하였다. 얻어진 크로마토그램으로부터 내부 표준물질의 피크 면적에 대한 플라티코딘 D 의 피크 면적비를 구하여 미리 작성한 표준곡선으로부터 추출물 내의 플라티코딘 D 농도를 구하여 제품을 표준화하였다.

<실험예 1> 도라지 추출물의 산화질소 생성 억제효과 확인

도라지 추출물의 항염증 효과를 알아보기 위하여, 대식세포주에 상기 <실시예 1>에서 제조한 도라지 추출물을 처리하고 염증반응을 유도한 후, 산화질소(Nitric oxide; NO)의 생성 변화를 ELISA로 확인하였다.

구체적으로, 대식세포주로 RAW264.7 세포 2.5×10⁵개를 24 well plate에 분주한 후, 10% FBS가 포함된 DMEM 배지로 37℃, 5% CO₂ 하에서 24시간 동안 배양하였다. 상기 <실시예 1>에서 제조한 도라지 추출물을 농도 100 ㎍/㎖가 되도록 DMEM 배지로 희석 한 후 상기 24시간 배양한 세포에 처리하였다. 30분 후 LPS 1 ㎍/㎖를 처리한 다음 10% FBS가 포함된 DMEM 배지로 37℃, 5% CO₂ 하에서 18시간 동안 배양 후 세포를 NO ELISA kit(invitrogen, US)를 이용하여 제조사의 절차에 따라 ELISA를 수행하여 NO 생성 정도를 측정하였다. 대조군으로는 LPS 및 <실시예 1>의 도라지 추출물을 모두 처리하지 않고 배양한 RAW264.7 세포를 사용하였다.

그 결과, LPS만을 처리한 대식세포의 경우 NO 생성량이 증가한 반면, LPS 및 <실시예 1>의 도라지 추출물을 처리한 대식세포의 경우 NO 생성량이 감소하였음을 확인하였다.

<실험예 2> 도라지 추출물의 염증 관련 인자의 단백질 발현 억제효과 확인

도라지 추출물의 항염증 효과를 알아보기 위하여, 대식세포주에 상기 <실시예 1>에서 제조한 도라지 추출물을 처리하고 염증 관련 인자의 단백질 발현 변화를 웨스턴 블럿팅으로 확인하였다.

구체적으로, 상기 <실험예 1>과 동일한 방법으로 LPS 및 <실시예 1>의 도라지 추출물을 처리한 RAW264.7 세포, 및 LPS 및 <실시예 1>의 도라지 추출물을 모두 처리하지 않은 대조군 세포를 회수한 후 프로테아제 억제제(Protease inhibitor, Sigma) 및 포스파타아제 억제제 칵테일(Phosphatase inhibitor coctail 2,3, Sigma)이 풍부한 RIPA 완충액으로 용해하여 단백질을 분리하였다. 상기 용해된 단백질(40㎍)을 SDS-PAGE로 전기영동한 후, PVDF 막(Immobilon-P)으로 전달시켰다. iNOS 및 COX-2 단백질의 발현 변화를 확인하기 위하여 일차 항체로 항 iNOS 항체, 항 COX-2 항체를 처리하여 반응시킨 후, 상기 막에 붙은 일차 항체에 HRP-접합 이차 항체를 붙이고, WestGlow(Biomax)를 이용하여 확인하였다. 분석은 ImageQuant LAS4000(GE Healthcare LifeSceinces)을 이용하였다.

그 결과, LPS만을 처리한 대식세포의 경우 iNOS 및 COX-2 단백질의 발현량이 증가한 반면, LPS 및 <실시예 1>의 도라지 추출물을 처리한 대식세포의 경우 iNOS 및 COX-2 단백질의 발현량이 감소하였음을 확인하였다.

결론적으로 도라지 추출물이 급성 또는 만성 염증질환의 원인이 되는 NO 생성 억제효과 및 염증 관련 인자인 iNOS 및 COX-2 발현 감소 효과를 확인하여 항염증 효과를 보여주었다.

하기에 본 발명의 조성물을 위한 제조예를 예시한다.

<제조예 1> 본 발명의 추출물을 유효성분으로 함유하는 약학적 제제의 제조

<1-1> 산제의 제조

본 발명의 추출물 10 mg

유당 1 g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<1-2> 정제의 제조

본 발명의 추출물 0.1 mg

옥수수전분 100 mg

유 당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

<1-3> 캡슐제의 제조

본 발명의 추출물 0.1 mg

옥수수전분 100 mg

유 당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

<1-4> 환의 제조

본 발명의 추출물 1 mg

유당 1.5 g

글리세린 1 g

자일리톨 0.5 g

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1 환 당 4 g이 되도록 제조하였다.

<1-5> 과립의 제조

본 발명의 추출물 0.15 mg

포도당 200 mg

전분 600 mg

상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 mg을 첨가하여 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.

<제조예 2> 본 발명의 추출물을 유효성분으로 함유하는 건강식품의 제조

<2-1> 밀가루 식품의 제조

본 발명의 추출물의 0.5 내지 5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.

<2-2> 스프 및 육즙(gravies)의 제조

본 발명의 추출물의 0.1 내지 5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.

<2-3> 그라운드 비프(ground beef)의 제조

본 발명의 추출물의 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.

<2-4> 유제품(dairy products)의 제조

본 발명의 추출물의 5 내지 10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

<2-5> 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

본 발명의 추출물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 본 발명의 추출물을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.

곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),

종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),

본 발명의 추출물(3 중량부),

영지(0.5 중량부),

지황(0.5 중량부)

<제조예 3> 본 발명의 추출물을 유효성분으로 함유하는 건강음료의 제조

<3-1> 건강음료의 제조

액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 본 발명의 추출물 100 mL를 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.

<3-2> 야채 주스의 제조

본 발명의 추출물 100 mL를 토마토 또는 당근 주스 1,000 mL에 가하여 야채 주스를 제조하였다.

<3-3> 과일 주스의 제조

본 발명의 추출물 100 mL를 사과 또는 포도 주스 1,000 mL에 가하여 과일 주스를 제조하였다.

Claims

산화질소 및 염증 관련 인자의 단백질 발현을 억제하는 도라지 추출물을 유효성분으로 포함하는, 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 도라지 추출물은 물 또는 유기용매로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상으로 추출되는 것을 특징으로 하는, 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제2항에 있어서,
상기 유기용매는 탄소수 1 내지 5의 알코올, 에틸 아세테이트, 아세톤, 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산 및 디클로로메탄으로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상으로 이루어지는 것을 특징으로 하는, 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 도라지 추출물은 도라지의 꽃, 잎, 가지, 줄기, 뿌리, 열매 및 씨앗 껍질로 이루어진 그룹에서 선택된 하나 이상의 추출물로 이루어지는 것을 특징으로 하는, 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 도라지 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 전체 약학적 조성물 100 중량%에 대하여 0.00001 내지 1 중량 %인, 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 염증 관련 인자의 단백질은 iNOS 또는 COX-2인, 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 도라지 추출물을 포함하는 약학적 조성물은 정제, 캡슐제, 주사제, 트로키제, 산제, 과립제, 액제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 좌제, 질정제, 및 환제로 이루어진 군으로부터 선택되는 제제로 제형화되는, 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항에 있어서,
상기 염증성 질환은 관절염, 비염, 간염, 각막염, 위염, 장염, 신장염, 기관지염, 흉막염, 복막염, 척추염, 췌장염, 염증성 통증, 요도염, 방광염, 화상 염증, 치주염, 치은염 및 퇴행성 신경염증으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
도라지 추출물을 유효성분으로 포함하는, 염증성 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품.
제9항에 있어서,
상기 염증성 질환은 관절염, 비염, 간염, 각막염, 위염, 장염, 신장염, 기관지염, 흉막역, 복막염, 척추염, 췌장염, 염증성 통증, 요도염, 방광염, 화상 염증, 치주염, 치은염 및 퇴행성 신경염증으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 염증성 질환 예방 또는 개선용 건강기능식품.