KR20210008657A - 감 심지 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 미백 또는 항염용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 감 심지 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 미백, 또는 항염용 화장료 조성물에 관한 것으로서, DPPH, ABTS 라디칼 소거활성 및 환원력 증가 효과가 우수하며, 항산화 효소인 SOD 활성을 증가시키고, 지질과산화 생성물인 MDA를 유의적으로 감소시켜 항산화 효과가 우수하다. 또한, 세포내 tyrosinase 활성 및 melanin 합성을 유의적으로 억제시켜 미백 효과가 우수하며, NO 및 염증성 cytokines (TNF-α, IL-6) 생성을 억제하여 항염 효과가 있다.
따라서, 감 심지 추출물을 항산화, 미백, 또는 항염용 화장료 조성물의 유효성분으로 이용이 가능하다.

Description

감 심지 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 미백 또는 항염용 조성물{Composition for antioxidant, whitening or anti-inflammation containing persimmon core extracts as an active ingredient}

본 발명은 감 심지 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 미백 또는 항염용 조성물에 관한 것이다.

건조간식은 최근 웰빙 트렌드 확산과 건강, 편의성을 중시하는 현대인들에게 인기가 높아지면서 최근 그 시장규모가 지속적으로 성장하고 있다. 감 또한 이런 트렌드를 따라 주로 건조 가공되어 곶감이나 감 말랭이 형태의 건조간식으로 많이 소비되고 있다. 곶감 및 감 말랭이 제조 시 발생되는 다량의 부산물은 일부가 사료로 이용되고 있지만 상당량 폐기되고 있다. 이 부산물들은 폐기과정에서 초산 발효로 인해 악취를 풍기고 토양을 산성화 시키는 등의 환경오염의 문제로까지 대두되고 있는 실정이다. 전국적으로 경상북도를 중심으로 연간 10만톤 이상의 감이 건조 가공품으로 생산되고 있으며, 이 과정에서 20% 수준의 부산물이 발생하고 있다. 감 부산물에 관한 연구를 살펴보면 대부분 과피와 꼭지에 집중되어 있으며 심지에 대한 활용방안은 미비한 실정이며, 심지는 주로 감 말랭이를 제조 시 기계적으로 박피할 때 제거된다.

한편, 감 말랭이의 수요가 지속적으로 성장하고 있으며, 매년 감 말랭이 생산의 증가에 따라 부산물인 감 심지 역시 증가하고 있어 부산물의 재활용에 대한 관심이 높아지고 있으며, 이는 향후 산업의 지속적인 발전에 큰 걸림돌이 될 것으로 사료된다.

한편, 화장품 분야에서, 미백, 자외선 차단, 주름 개선 등의 기능성이 함유된 화장품을 선호하는 추세로 바뀌고 있으며, 친환경을 중시하는 시대 흐름과 건강한 삶을 추구하는 경향이 강해지면서 천연성분이 포함된 화장품에 대한 기호도가 높아져 천연물질에 관한 연구가 활발히 수행되고 있다. 기능성 화장품은 2016년을 기준으로 약 4.4조원의 생산 실적을 거두었으며 전체 화장품 생산 실적의 15.2% 수준으로 지속적으로 성장할 것으로 전망된다.

따라서, 본 발명에서는 버려지는 감 심지를 이용하여, 천연 화장품의 원료로 활용하고자 하였다.

국내공개특허 제10-2016-0125019호

본 발명의 목적은 감 심지 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 미백, 또는 항염증용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 감 심지 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 미백, 또는 항염증용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 하나의 양태로서, 감 심지 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 미백, 또는 항염용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 용어 감 심지는 감나무(Diospyros kaki)에 열리는 열매 감의 부산물로, 변비를 유발하는 것으로 알려져 있어, 섭취되지 않고 버려지는 부분이다. 상기 감나무는 우리나라에서 재배되는 아열대 과일나무의 하나이다. 감나무는 재배관리가 쉽고 수확도 높으며 과일의 품질과 영양가도 매우 높다. 그러므로 감나무는 산비탈지를 비롯한 빈 땅과 집 주변에 심어 토지이용률을 높일 수 있으며 또한 정원과수로서의 의의도 크다. 감에는 여러 가지 영양물질이 많이 들어 있으므로 신선한 과일과 곶감을 비롯한 가공품을 만드는 데 쓰이며 감나무잎은 차원료로 이용된다.

본 발명에서 상기 화장료 조성물은 감 심지를 건조한 것을 추출에 적용할 수 있고, 또는 감 심지를 건조 및 파쇄하여 분말화한 것을 추출에 적용할 수 있다.

본 발명에서 용어, "추출물"은 추출 처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.

본 발명에서 추출물의 건조는 채취한 식물로부터 유용한 성분들이 파괴되지 않는 범위에서 공지의 방법으로 진행될 수 있고, 예를 들어 음지에서 자연건조의 방법으로 진행되거나, 또는 드라이 오븐에서 진행될 수 있다. 또한, 파쇄 또는 분쇄는 이후 추출과정에서 식물의 유용한 성분들이 충분하게 추출될 수 있을 정도로 파쇄 또는 분쇄하여 분말화할 수 있다. 상기 건조와 파쇄 또는 분쇄 공정은 필요에 따라서 순서를 뒤바꿔서 진행하거나 반복하여 실시할 수 있다.

본 발명의 추출에 있어서, 상기 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다.

본 발명에서 감 심지의 추출물은 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 수득될 수 있다. 또한, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올 일 수 있다.

또한 본 발명에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

본 발명에서, 용어, "항산화"는 산화를 억제하는 작용을 의미하는 것으로, 인체는 산화촉진물질(prooxidant)과 산화억제물질(antioxidant)이 균형을 이루고 있으나 여러 가지 요인들에 의하여 이런 균형상태가 불균형을 이루게 되고 산화촉진 쪽으로 기울게 되면, 산화적 스트레스(oxidative stress)가 유발되어 잠재적인 세포손상 및 병리적 질환을 일으키게 된다. 이러한 산화적 스트레스의 직접적 원인이 되는 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)은 불안정하고 반응성이 높아 여러 생체물질과 쉽게 반응하고, 체내 고분자들을 공격하여 세포와 조직에 비가역적인 손상을 일으키게 된다. NO, HNO₂, ONOO^-와 같은 활성 질소종(reactive nitrogen species, RNS), ROS와 같은 활성산소는 체내에서 세포를 산화시켜 파괴시키며, 그에 따라 각종 질환에 노출되게 된다.

상기 항산화는 세포 내 대사 또는 자외선의 영향으로 인한 산화적 스트레스에 따라 반응성이 높은 자유 라디칼(free radical) 또는 활성 산소종 (Reactive oxygen species, ROS)에 의한 세포의 산화를 억제하는 기능을 의미하며, 자유 라디칼 또는 활성 산소종을 제거하여 이로 인한 세포의 손상이 감소되는 것을 포함한다.

본 발명의 일실시예에서는 감 심지 에탄올 추출물이 농도 의존적으로 DPPH, ABTS 라디칼 소거활성과 환원력을 증가시켰으며, 세포 내 항산화 효소인 SOD 활성을 증가시키고, 지질과산화 생성물인 MDA를 유의적으로 억제하여 항산화 효과가 우수한 것을 확인하였다.

또한 본 발명에서 사용되는 용어, "미백"은 멜라닌 등의 색소의 과다로 인하여 명도가 감소된 피부의 명도를 증가시키거나 또는 피부의 명도를 일정 수준으로 유지하는 방법, 상기 방법으로 형성된 명도가 증가된 피부 등을 포괄하여 의미하는 것으로서, 구체적으로는 피부 미백을 의미할 수 있다. "피부 미백"은 멜라닌의 생성이 저해됨에 따른 결과로서 이해되는데, 구체적으로는 멜라닌의 생성이 저해됨에 따라 멜라닌의 증가에서 비롯되는 증상, 예컨대 기미, 주근깨 개선, 피부 노화 등의 개선으로서 이해될 수 있다.

본 발명의 일실시예에서는 감 심지 에탄올 추출물이 멜라닌 색소의 생합성에 중요 역할을 하는 세포내 tyrosinase 활성 및 melanin 합성을 유의적으로 억제하여 미백 효과가 우수한 것을 확인하였다.

본 발명에 있어서, "항염증"이란 염증을 억제하는 것을 말하며, 상기 염증은 어떤 자극에 대한 생체조직의 방어반응의 하나로, 조직 변질, 순환 장애와 삼출, 조직 증식의 세가지를 병발하는 복잡한 병변을 말한다. 보다 구체적으로 염증은 선천성 면역의 일부이며 다른 동물에서처럼 인간의 선천성 면역은 병원체에 특이적으로 존재하는 세포 표면의 패턴을 인식한다. 식세포는 그런 표면을 가진 세포를 비자기로 인식하고 병원체를 공격한다. 만일 병원균이 신체의 물리적 장벽을 깨고 들어온다면 염증반응이 일어난다. 염증반응은 상처부위에 침입한 미생물들에 대한 적대 환경을 만드는 비특이적인 방어작용이다. 염증반응에서, 상처가 나거나 외부 감염체가 체내로 들어왔을 때, 초기단계 면역반응을 맡고 있는 백혈구들이 몰려들어 사이토카인을 발현한다. 따라서 세포 내 사이토카인의 발현양이 염증반응 활성화의 지표가 된다. 본 발명의 항염증은 피부에서 발병된 염증을 억제하는 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서는, 감 심지 추출물은 LPS에 의해 유도된 Raw264.7 세포에 대한 독성이 없으면서, NO 생성을 감소시키고 및 염증성 사이토카인인 TNF-α, IL-6의 분비량을 감소시켜 항염증 효과가 있는 것을 확인하였다.

본 발명의 항산화, 미백, 또는 항염증용 조성물은 유효성분인 감 심지 추출물 이외에, 항산화, 미백, 또는 항염증용 효과를 상승 또는 보강시킬 수 있도록 항산화, 미백, 또는 항염증용 효과가 있다고 알려진 화합물이나 천연 추출물을 포함할 수 있다.

한편, 본 발명의 항산화, 미백, 또는 항염증용 화장료 조성물에 있어서, 그 유효성분은 항산화, 미백, 또는 항염증 활성을 나타낼 수 있는 한 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 99.99 중량 % 범위 내에서 포함될 수 있다. 여기서 "유효량"이란 항산화, 미백, 또는 항염증 효과를 유도할 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.

본 발명의 항산화, 미백, 또는 항염증용 화장료 조성물은 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 외용연고, 크림, 폼, 영양화장수, 유연화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린크림, 선오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서, 상기 화장료 조성물은 크림 제형을 가질 수 있으며, 상기 크림 제형은 수상층과 유상층을 가열 후 저온에서 혼합하여 제조하며, 크림 형태를 갖추면 천연 방부제를 첨가하여 제조하게 된다. 상기 크림을 구성하는 수상층으로 로즈 플로럴 워터, 네롤리 워터, 로즈마리 워터 및 글리세린으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 사용할 수 있으며, 유상층으로 동백오일, 마카다미아 오일, 아보카도 오일, 호호바 오일, 로즈힙 오일, 세트아르 알코올, 유화왁스, 편백 오일, 자몽 오일로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 사용할 수 있다. 상기 천연 방부제로는 목단피 또는 자몽씨의 추출물을 사용할 수 있다.

상기 수상층을 구성하는 상기 로즈 플로럴 워터, 네롤리 워터, 로즈마리 워터는 플로랄 워터의 일종으로 에센셜 오일을 증류 추출하는 과정에서 얻어지는 응축수로 식물의 수용성 물질이 다량 함유되어 있다. 상기 수상층을 구성하는 글리세린은 코코넛에서 추출된 것으로 보습 효과가 있으며, 식품 첨가물로 사용할 정도로 안정한 물질이다. 상기 유상층을 구성하는 세트아르 알코올은 코코넛에서 추출한 알코올로 크림 제작시 유화를 보조하여 안정화, 점도 조절 그리고 보습 효과가 있다.

본 발명의 항산화, 미백, 또는 항염증용 화장료 조성물은 그 유효성분 이외에 화장료 제제에 있어서 수용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 여기서 "화장료 제제에 있어서 수용 가능한 담체"란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다. 상기 담체는 본 발명의 항산화, 미백, 또는 항염증용 화장료 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량 % 내지 약 99.99 중량 %, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 5 중량% 내지 약 99 중량 %로 포함될 수 있다. 그러나 상기 비율은 본 발명의 화장료의 제조되는 제형에 따라 또한 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴이나 손)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.

한편, 상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. 상기 담체로서 사용될 수 있는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명은 또 다른 하나의 양태로서, 감 심지 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 미백, 또는 항염증용 의약외품 조성물을 제공한다.

본 발명에서, 감 심지 추출물, 항산화, 미백 및 항염증은 전술한 바와 같다.

본 발명에서 사용되는 용어 "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미하는 것으로, 예를 들어 약사법에 따르면 의약외품이란 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람ㆍ동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않는 제품 등이 포함된다.

본 발명의 상기 의약외품 조성물은 바디 클렌저, 소독 청결제, 세정제, 주방용 세정제, 청소용 세정제, 치약, 가글제, 물티슈, 세제, 비누, 핸드 워시, 헤어세정제, 헤어 유연제, 가습기 충진제, 마스크, 연고제 및 필터 충진제로 이루어진 군에서 선택되는 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 조성물을 항산화, 미백, 또는 항염증 목적으로 의약외품에 포함시킬 경우, 상기 조성물을 그대로 포함하여 사용하거나 다른 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정할 수 있으며, 본 발명에 의한 의약외품 조성물은 상기 감 심지 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.01~20 중량%로 함유할 수 있다.

본 발명은 감 심지 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 미백, 또는 항염용 화장료 조성물에 관한 것으로서, DPPH, ABTS 라디칼 소거활성 및 환원력 증가 효과가 우수하며, 항산화 효소인 SOD 활성을 증가시키고, 지질과산화 생성물인 MDA를 유의적으로 감소시켜 항산화 효과가 우수하다. 또한, 세포내 tyrosinase 활성 및 melanin 합성을 유의적으로 억제시켜 미백 효과가 우수하며, NO 및 염증성 cytokines (TNF-α, IL-6) 생성을 억제하여 항염 효과가 있다. 또한, 인체에 유해한 성분을 함유하지 않으며, 천연 성분으로 이루어져 있어, 천연 화장품으로 이용이 가능하다.

따라서, 감 심지 추출물을 항산화, 미백, 또는 항염용 화장료 조성물의 유효성분으로 이용이 가능하다.

도 1은 본 발명에 따른 감 심지 에탄올 추출물 제조과정을 나타낸다.
도 2는 본 발명에 따른 감 심지 에탄올 추출물의 항산화 효과를 나타낸다.
도 3은 본 발명에 따른 감 심지 에탄올 추출물의 항산화 효과를 나타낸다.
도 4는 본 발명에 따른 감 심지 에탄올 추출물의 세포내 항산화 효과를 나타낸다.
도 5는 본 발명에 따른 감 심지 에탄올 추출물의 항염증 효과를 나타낸다.
도 6은 본 발명에 따른 감 심지 에탄올 추출물의 미백 효과를 나타낸다.
도 7은 크림의 제형별 관능 평가 결과이다.
도 8은 감 심지 에탄올 추출물을 첨가한 크림의 관능평가 결과이다.
도 9는 감 심지 에탄올 추출물을 첨가한 크림의 온도 안정성 평가 결과이다.
도 10은 감 심지 에탄올 추출물을 첨가한 크림의 제형 안정성 평가 결과이다.
도 11은 감 심지 에탄올 추출물을 첨가한 크림의 미생물에 대한 안정성 평가 결과이다.

이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 첨부한 도면을 참고로 하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.

실시예 1: 감 심지 에탄올 추출물의 제조

건조한 감 심지(40 g)를 95% 에탄올(1 L)에 침지시켜 24시간 추출 후 여과 멸균, 진공감압 농축, 동결 건조하여 실험에 사용하였으며, 이를 도 1에 나타내었다.

실시예 2: 항산화 효과 평가

2-1: 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드 함량 평가

Folins-Denis 방법 및 Davis 방법을 이용하여 상기 실시예 1에서 제조된 감 심지 에탄올 추출물의 폴리페놀 및 플라보노이드의 함량을 측정하고, 이를 표 1에 나타내었다. 그 결과, 감 심지(40 g)의 추출물에 총 폴리페놀 약 786g, 총 플라보노이드 약 31g을 함유하고 있었다.

2-2: DPPH 및 ABTS 라디칼 소거능 평가

Blois 방법 및 Roberta 방법을 이용하여 상기 실시예 1에서 제조된 감 심지 에탄올 추출물의 DPPH 및 ABTS 라디칼 소거능을 측정하였다. 그 결과, 감 심지 에탄올 추출물의 농도가 증가할수록 DPPH 및 ABTS 라디칼 소거능이 증가하는 것을 확인하여, 항산화 효과가 농도 의존적으로 증가하는 것을 확인하였다(도 2).

2-3: 환원력 평가(FRAP and Reducing power)

Blois 방법 및 Roberta 방법을 이용하여 상기 실시예 1에서 제조된 감 심지 에탄올 추출물의 환원력을 측정하였다. 그 결과, 감 심지 에탄올 추출물의 농도가 증가할수록 환원력이 증가하는 것을 확인하여, 항산화 효과가 농도 의존적으로 증가하는 것을 확인하였다(도 3).

2-4: 세포내 항산화 효과 평가

뇌 해마 세포(HT22)에 감 심지 에탄올 추출물을 처리 후 MTT 시약의 첨가로 생긴 formazan을 microplate reader를 이용하여 570 nm에서 측정하여 세포 생존율을 측정하였다. 그리고 세포내 항산화 효소인 SOD(슈퍼옥사이드 디스뮤타제) 활성 그리고 지질과산화 생성물인 MDA(말론디알데히드) 수준을 측정하였다.

그 결과, 과산화수소 처리에 의해 산화스트레스가 유도된 HT22 세포의 생존율이 감소하였으나, 감 심지 에탄올 추출물 처리에 의해 HT22 세포의 세포생존율이 회복되는 것을 확인하였다(도 4).

또한, 산화스트레스가 유도된 HT22 세포에서 감 심지 에탄올 추출물의 처리에 의해 세포내 SOD 활성이 증가되고 MDA 수준이 감소하는 것을 확인하여, 감 심지 에탄올 추출물의 세포내 항산화 효과를 확인하였다(도 4).

실시예 3: 항염 효과 평가

큰포식 세포(Raw264.7)에 감 심지 에탄올 추출물을 처리 후 MTT 시약의 첨가로 생긴 formazan을 microplate reader를 이용하여 570 nm에서 측정하여 세포 생존율을 측정하였다. 또한, LPS로 유도된 큰포식 세포(Raw264.7)에 감 심지 에탄올 추출물을 처리한 후 상층액을 채취하였으며, ELISA kit를 사용하여 염증성 cytokine (TNF-α, IL-6)의 분비능을 측정하였다. 또한, 상기 상층액과 Griess 시약을 반응시켜 산화질소의 농도를 측정하였다.

그 결과, 감 심지 에탄올 추출물은 Raw 264.7 세포에 독성이 없었으며, 농도 의존적으로 산화질소(NO) 생성을 억제하였으며, 염증성 cytokine 생성을 억제시키는 것을 확인하였다(도 5). 이에 따라 감 심지 에탄올 추출물이 항염 효과가 있는 것을 알 수 있었다.

실시예 4: 미백 효과 평가

흑색종 세포(B16F10)에 감 심지 에탄올 추출물을 처리한 후 MTT 시약의 첨가로 생긴 formazan을 microplate reader를 이용하여 570 nm에서 측정하여 세포 생존율을 측정하였다.

흑색종 세포(B16F10)를 이용한 Tyrosinase 억제 활성을 평가하기 위하여 감 심지 에탄올 추출물을 처리한 후 melanin 생성을 촉진하기 위하여 IBMX를 처리하였다. 세포를 BCA protein detection kit를 사용하여 정량하였고 1 N NaOH를 가하여 melanin 합성 생성 정도를 측정하였다.

또한, 상기 세포를 L-DOPA와 상층액을 반응시켜 생성된 DOPA chrome의 양을 측정하여, tyrosinase 억제 활성을 측정하였다.

그 결과, 감 심지 에탄올 추출물은 흑색종 세포(B16F10)에 독성이 없었으며, 감 심지 에탄올 추출물 처리에 의해 tyrosinase 억제 활성이 농도의존적으로 증가하였으며, 멜라닌 억제 효과 역시 농도의존적으로 증가하는 것을 확인하였다(도 6).

실시예 5: 감 심지 에탄올 추출물을 이용한 천연 기능성 화장품 제형 적합성 평가

5-1: 1차 크림(베이스) 제조

기존의 천연 화장품 제조 방법을 참고하여 5가지 제형의 베이스 크림을 제조하였다. 수상층과 유상층을 각각 가열 후 저온에서 혼합하였으며, 크림 형태를 갖추면 천연방부제를 첨가하여 크림을 제조하였다. 수상층으로 로즈 플로럴 워터, 네롤리 워터, 글리세린을 사용하였다. 유상층으로 동백오일, 마카다미아 오일, 아보카도 오일, 호호바 오일, 로즈힙 오일, 세트아르 알코올, 유화왁스, 편백 오일, 자몽 오일을 사용하였다. 천연방부제로 목단피와 자몽씨를 추출 및 정제하여 방부제로 사용하였다. 1차 크림으로 제조된 제형 성분은 표 2와 같다.

5-2: 1차 크림 평가

완성된 베이스 크림을 20대의 대학생들을 대상으로 관능 평가를 실행하였다. 향기, 색, 발림색 값은 1-5 범위로 나타냈다. 그 결과, 도 7에 나타난 바와 같이, 제형 4번 크림의 경우, 발림성이 좋았으며, 제형 5번 크림의 경우 향기가 좋았다(도 7).

5-3: 2차 크림 제조

평가결과가 좋았던 제형 4번 크림의 발림성과 5번 크림의 향기를 조합하여 새로운 크림 베이스 형태를 제조하였다. 가장 발림성이 좋다고 평가 받은 제형 4번 크림 베이스 수상층을 네롤리 워터로 바꾸고, 향기가 가장 좋았던 5번 크림의 향기 성분인 자몽 오일을 첨가 하였다. 천연방부제로 목단피와 자몽씨를 추출 및 정제하여 사용하였다. 2차 크림의 구체적인 제형 성분은 표 3과 같다. 향을 위하여 로즈 플로럴 워터를 네롤리 워터로 바꾸었으며, 발림성을 위하여 글리세린을 추가하였다.

이후 상기 표 3에서 제조된 제형 6번의 크림에서 10 g 용량을 들고 감심지 추출물 1g(stock:1mg/ml)을 들어서 총합 11g의 제형으로 이루어진 감 심지 크림을 완성하였다. 따라서, 감심지 추출물을 포함하지 않은 제형 6번과 감심지 추출물을 포함하는 제형 7번을 아래 실험을 통하여 비교하고자 하였다.

제형	제형 6번 함량(g)	감심지 추출물(g)	총합(g)
7번	10	1	11

5-4: 2차 크림 평가

상기 표 4와 같이, 감 심지 에탄올 추출물을 첨가한 크림들을 이용하여, 시중 제품과 질감, 발림성, 향기, 끈적임, 흡수력을 비교하여 20대 초반 대학생을 대상으로 관능 평가를 시행하였다. 질감, 발림성, 향기, 끈적임, 흡수력 값은 1-5 범위로 나타냈다.

그 결과, 도 8에 나타난 바와 같이, 감 심지 추출물을 첨가한 크림의 경우, 시중의 I사 제품보다 발림성과 향기가 좋았으며, 끈적임은 낮은 것으로 평가되어서, 선호도가 높은 것으로 평가되었다(도 8).

실시예 6: 감 심지 에탄올 추출물 화장품의 안전성 평가방법 및 결과

6-1: 보존시험(온도 안정성 평가)

상기 실시예 5-3에서 제도된 감 심지 에탄올 추출물 화장품(제형 7번)을 -18℃, 4℃, 25℃, 40℃에서 약 2주간 보관 후 온도별 크림의 향취 및 색상, 점도, 분리도, 유화상태의 변화 정도를 확인하였다.

그 결과, 도 9에 나타난 바와 무첨가군(제형 6번)과 마찬가지로 감 심지 에탄올 추출물 첨가군(제형 7번)에서도 2주전(전)과 비교하여 2주 후(후)에도 변색, 변취 및 크림 제형의 분리가 일어나지 않음을 확인하였다.

6-2: pH 측정

감 심지 에탄올 추출물을 첨가한 감 심지 크림(제형 7번)이 화장품 적정 pH 범위에 해당하는지 알아보기 위해 희석 용매 PBS 15 ml과 감 심지 크림 1ml을 혼합하여 pH를 측정하였다. 그 결과, 크림의 pH는 6.68±0.16으로 크림 적정 pH인 6~7 범위 안에 속하였다.

6-3: 제형 안정성 평가

감 심지 에탄올 추출물을 첨가한 감 심지 크림(제형 7번)을 3000rpm에서 30분간 centrifuge 및 1시간 sonication 하여 크림 제형이 분리되는지를 안정성을 평가하였다.

그 결과, 도 10에 나타난 바와 같이, 크림 제형의 분리가 일어나지 않아 제형 안정성이 높음을 확인하였다.

6-4: 화장품 미생물 한도실험

감 심지 에탄올 추출물을 첨가한 감 심지 크림(제형 7번)을 전처리하여 일반 세균, 일반 진균, 대장균 오염을 알아보기 위해 Plate count agar, Photato dextrose argar, Lactose broth 배지를 이용하였다. 시료를 1 ml씩 분주하여 37℃에서 24시간 배양한 결과 일반세균과 일반진균의 콜로니가 도 11에 나타난 바와 같이, 형성되지 않았으며, 듀람관에 기포가 형성 되지 않아 대장균 음성으로 크림의 미생물 안전성을 확인하였다. 상기 미생물 한도 실험에는 화장품 미생물 한도 시험법에 명시되어 있는 일반세균과 일반 진균을 사용하였다.

이상에서 살펴 본 바와 같이, 감 심지 에탄올 추출물은 농도 의존적으로 DPPH, ABTS 라디칼 소거활성 및 환원력을 증가시켰으며, 세포 내 항산화 효소인 SOD 활성 증가 그리고 지질과산화 생성물인 MDA를 유의적으로 억제하여 항산화 효과가 우수한 것을 확인하였다. 감 심지 에탄올 추출물은 LPS에 의해 유도된 Raw264.7 세포에 대한 독성이 없으면서, 염증성 cytokine과 NO의 분비량을 감소시켜 항염증 효과가 있는 것을 확인하였다. 또한, Melanin 색소의 생합성에 중요 역할을 하는 세포내 tyrosinase 활성 및 melanin 합성을 유의적으로 억제시키는 것으로 관찰되었다.

또한 제품화를 위해 감 심지 에탄올 추출물 첨가 크림의 온도변화에 따른 변색, 변취, 제형 분리 확인, pH 측정, 제형안정성 실험, 미생물 한도 실험을 한 결과 변색, 변취, 제형의 변화가 일어나지 않았으며 화장품 적정 pH기준에 적합하였고 미생물이 검출되지 않아 안전한 것을 확인하였다.

본 발명을 통해, 유해한 성분이 첨가된 화장품으로 인한 문제점을 해결하였고 천연재료 추출물을 첨가해 천연 화장품의 장점을 극대화하며, 피부에 자극을 최소화하고 감 심지 에탄올 추출물을 이용한 천연 기능성 화장품 개발의 가능성을 확인할 수 있었다.

Claims (6)

1. 감 심지 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 미백, 또는 항염증용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 감 심지 추출물은 물, C₁-C₄의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것인 화장료 조성물.
3. 제2항에 있어서, 상기 알코올은 에탄올인 것인 화장료 조성물.
4. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 외용연고, 크림, 폼, 영양화장수, 유연화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린크림, 선오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
5. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 크림 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
6. 감 심지 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 미백, 또는 항염증용 의약외품 조성물.

Images