KR20190137328A - Skin external application composition for anti-aging containing Rhodotypos scandens extract - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 병아리꽃나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항노화용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to an anti-aging external composition for skin comprising chickpea extract as an active ingredient.
피부의 노화는 나이가 들어가면서 자연적으로 발생하는 변화이며 그 밖에도 자외선, 담배, 식이습관 및 환경오염 등 많은 외부적 인자에 의해서 발생한다. 피부의 노화에는 겉보기 나이의 저하, 살결의 저하, 주름증가, 칙칙함의 증가, 피부기능의 저하 등이 있다. 피부는 나이 듦에 따라 붉은색이 감소, 노란색이 증가, 명도가 낮아지는 색조로 변화하여 피부가 칙칙한 상태로 된다. 칙칙함의 요인에는 피부의 색소침착, 단백질의 당화나 산화에 의한 착색 등이 관여한다.Aging of the skin is a naturally occurring change with age, and it is caused by many external factors such as ultraviolet rays, tobacco, dietary habits and environmental pollution. Aging of the skin may include a decrease in apparent age, a decrease in texture, an increase in wrinkles, an increase in dullness, and a decrease in skin function. As the skin ages, the skin becomes dull due to a decrease in red color, an increase in yellow color, and a decrease in brightness. Dull skin factors include pigmentation of the skin, glycation of proteins and coloring by oxidation.
현재 단백질 당화 억제제로 아미노구아니딘이 친핵성 히드라진(hydrazine)으로 아마도리 산물과 결합하여 단백질과의 교차결합을 방지함으로써 최종당화산물의 생성을 억제하여 가장 유망한 당화 억제제 의약품으로 제 3상 임상실험까지 진행되었으나, 장기간 투여 시 카탈라아제의 저해와 관련된 부작용이 우려되고 있어 안전하고 효능이 우수한 새로운 단백질 당화 억제 소재를 탐색하고자 하는 노력이 계속되어 왔다. 또한 체내 생성된 활성산소는 생체 단백질을 변성시키며, 변성된 생체 단백질은 당과의 반응성이 높아져 당화반응이 유도된다. 이러한 메커니즘에 따라 활성산소로 유도된 산화스트레스 억제능이 우수하고 페놀성 화합물이 풍부한 추출물의 항당화 연구가 최근까지도 활발히 진행되고 있지만 아직 실질적 효능을 구현하기에는 부족한 수준이다.Currently, aminoguanidine, a protein glycosylation inhibitor, is a nucleophilic hydrazine that binds to the amadori product to prevent cross-linking with proteins, thereby inhibiting the production of the final glycosylated product and proceeding to phase 3 clinical trials as the most promising glycation inhibitor drug. However, the side effects associated with the inhibition of catalase during long-term administration is concerned, and efforts to search for a new protein glycosylation inhibitor that is safe and effective have continued. In addition, the active oxygen generated in the body denatures the biological protein, and the modified biological protein increases the reactivity with sugars to induce a glycation reaction. According to this mechanism, anti-glycosylation studies of extracts that are excellent in inhibiting oxidative stress induced by active oxygen and rich in phenolic compounds have been actively conducted until recently, but are still insufficient to realize practical efficacy.
상기 문제점을 해결하기 위한 본 발명의 목적은 피부노화 방지, 피부주름 방지, 피부주름 개선, 피부 톤 개선 및 피부모공 축소 효과를 상승시키고 인체에 안전하며 장기간 사용하여도 부작용이 없는 항노화용 피부외용제 조성물을 제공하는 것이다.An object of the present invention for solving the above problems is to prevent skin aging, to prevent wrinkles, to improve skin wrinkles, to improve skin tone and to reduce skin pores, and to be safe for the human body and have no side effects even for long-term use. To provide.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 양상은 병아리꽃나무 추출물을 유효성분으로 포함하고, 상기 병아리꽃나무 추출물은 상기 병아리꽃나무의 잎, 줄기, 뿌리, 꽃 및 열매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 추출물인 항노화용 피부외용제 조성물을 제공하는 것이다.Aspect of the present invention for achieving the above object comprises a chick flower extract as an active ingredient, the chick flower extract is at least one extract selected from the group consisting of leaves, stems, roots, flowers and fruit of the chick flower It is to provide an external skin composition for aging.
본 발명에 있어서, 상기 병아리꽃나무 추출물은 우수한 항산화 효과를 나타내며, 콜라겐 당화반응(collagen glycation)과 최종당화산물(advanced glycation end products, AGEs)의 생성을 억제시켜 피부노화 방지, 피부주름 방지, 피부주름 개선, 피부 톤 개선 및 피부모공 축소에 효과적이다.In the present invention, the chickpea extract exhibits an excellent antioxidant effect, inhibits the production of collagen glycation and advanced glycation end products (AGEs) to prevent skin aging, skin wrinkles, skin wrinkles It is effective in improving skin tone and reducing skin pores.
또한, 피부 세포에 악영향을 미치지 않은 안전성을 가지면서 피부 세포 노화를 방지하므로 피부노화 방지, 피부주름방지 또는 개선, 피부 톤 개선 및 피부모공 축소 등을 위한 의약품, 화장품, 퍼스널 케어 제품 등으로 활용될 수 있다.In addition, since it prevents skin aging while having safety that does not adversely affect skin cells, it can be used as medicines, cosmetics, and personal care products for preventing skin aging, preventing or improving skin wrinkles, improving skin tone, and reducing skin pores. Can be.
도 1은 피부 섬유아세포에 대한 병아리꽃나무의 잎, 줄기, 뿌리 추출물 각각의 농도 별 세포 생존율을 나타낸 그래프이다.
도 2는 병아리꽃나무의 줄기 추출물과 아미노구아니딘 염산염의 섬유아세포 내 카복시메칠라이신(carboxymethyl lysine, CML) 생성 억제 정도를 나타낸 그래프이다.Figure 1 is a graph showing the cell survival rate of each of the leaves, stems, root extract of the chickflower against skin fibroblasts.
Figure 2 is a graph showing the degree of inhibition of carboxymethyl lysine (CML) production in the fibroblasts of the stem extract and aminoguanidine hydrochloride of chickpea.
이하 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 다만, 본 발명의 설명을 위한 것으로, 본 발명의 범위는 청구범위에 기재된 사항을 기초로 한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail. However, for the purpose of explanation of the invention, the scope of the invention is based on the matter described in the claims.
본 발명은 병아리꽃나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항노화용 피부외용제 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to an anti-aging skin external composition comprising a chick flower extract as an active ingredient.
상기 병아리꽃나무 추출물은 상기 병아리꽃나무의 잎, 줄기, 뿌리, 꽃 및 열매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 추출물이 바람직하며, 보다 바람직하게는 병아리꽃나무의 잎, 줄기 및 뿌리 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상이다.The chick flower extract is preferably at least one extract selected from the group consisting of leaves, stems, roots, flowers and fruits of the chick flower tree, more preferably 1 selected from the group consisting of leaves, stems and root extracts of chick flower trees. More than species.
본 발명에 있어서, 상기 ‘항노화’란 피부보호, 피부상태 개선, 피부미백, 피부노화 및 주름의 예방 또는 개선, 피부모공 축소, 피부보호, 피부의 염증 반응 완화, 면역질환 개선능, 피부 장벽기능 개선, 피부자극 완화, 피부세포 증식, 재생능, 항산화능, 콜라겐 합성 증진능 등을 모두 포함하는 개념이다.In the present invention, the 'anti-aging' is skin protection, skin condition improvement, skin whitening, skin aging and wrinkle prevention or improvement, skin pores reduction, skin protection, skin inflammatory response, immune disease improvement ability, skin barrier It is a concept that includes function improvement, skin irritation relief, skin cell proliferation, regenerative capacity, antioxidant activity, collagen synthesis enhancement and so on.
또한, 상기 ‘유효성분으로 포함’의 의미는 피부외용제 조성물로써 항노화에 따른 피부 개선 효과를 나타낼 수 있는, 예컨대 피부외용제 조성물로써 주름개선 효능과 관련된 콜라겐 합성, 멜라닌 형성(melanogenesis) 저해에 따른 피부미백 효능, 피부보습, 모공수축 또는 유도형 산화질소 합성 효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS) 억제 활성, 피지억제, 항균력 등을 나타낼 수 있는 정도의 유효량을 함유하는 것을 의미한다.In addition, the meaning of 'included as an active ingredient' is a skin external composition, which may exhibit skin improvement effect due to anti-aging, for example, a skin external composition, which is related to wrinkle improvement and collagen synthesis, and melanogenesis (melanogenesis) inhibition. It is meant to contain an effective amount that can exhibit whitening efficacy, skin moisturizing, pore contraction or inducible nitric oxide synthase (iNOS) inhibitory activity, sebum inhibitory, antibacterial activity and the like.
본 발명에 있어서, 상기 항노화용 피부외용제 조성물의 유효성분인 병아리꽃나무는 다음과 같은 특징을 가지고 있다.In the present invention, the chick flower which is the active ingredient of the anti-aging skin external composition has the following characteristics.
상기 병아리꽃나무(Rhodotypos scandens)는 쌍떡잎식물 이판화군 장미목 장미과의 낙엽관목을 의미하며 대대추나무라고도 한다. 높이 2m 정도로 가지에 털이 없고, 잎은 마주나고 달걀 모양으로 가장자리에 겹톱니가 있으며 앞면은 짙은 녹색이고 주름이 지며, 뒷면은 연한 녹색으로 긴 털이 있다. 병아리꽃나무라는 이름은 순백의 하얀 꽃을 병아리에 비유하여 붙여졌다. 한국, 일본, 중국 등지에 분포하며 뿌리는 ‘계마’라고 하여 빈혈 치료에 사용한다.The chickflower tree (Rhodotypos scandens) refers to the deciduous shrub of the dicotyledonous dianthus rosaceae rosaceae, also called jujube tree. Branch is about 2m high, hairless, branches facing each other, egg-shaped with cogs on the edge, dark green and wrinkled on the front, and light green with long hair on the back. The name of the chick-petal tree is given by comparing the white white flower to the chick. It is distributed in Korea, Japan, and China, and its root is called `` cage, '' which is used to treat anemia.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 병아리꽃나무 추출물은 피부 콜라겐 당화반응(collagen glycation)과 최종당화산물(advanced glycation end products, AGEs)의 생성을 억제시킬 수 있다.In one embodiment of the present invention, the chickpea extract may inhibit the production of collagen glycation and advanced glycation end products (AGEs).
피부 노화의 주원인 중 하나인 당화반응(non-enzymatic glycation)이란 단백질의 유리 아미노기인 리신(lysine)이나 아르기닌(arginine)과 환원당의 카보닐(carbonyl)기가 반응하여 초기 당화(glycation) 생성물인 시프 염기(schiff base)를 형성한다. 이 반응은 당류 농도에 의존적으로 진행되며, 수 시간 내 반응이 이루어진다. 생성된 시프 염기(schiff base)는 화학적 재배열(chemical rearrangement)을 통해 안정된 아마도리 산물(amadori product)을 생성하며, 수 일 내 반응이 이루어진다. 아마도리 산물이 체내 축적되어 일련의 산화, 탈수, 축합, 재전위, 분열, 고리화 등의 반응을 통해 단백질과 가교결합을 형성하는데 이 반응은 비가역적으로 이루어진다. 이러한 반응이 수 주에서 수 개월 정도 이루어지면 최종적으로 생성된 갈색 화합물의 당화산물인 최종당화산물(advanced glycation end products, AGEs)을 형성하는데 이 물질은 매우 안정하여 체내 축적될 경우 세포 내 외부에 이상을 초래한다.One of the main causes of skin aging is non-enzymatic glycation, which is the initial glycosylation product of lysine or arginine, which is a free amino group of proteins, and carbonyl groups of reducing sugars. to form a (schiff base). The reaction proceeds depending on the sugar concentration and takes place within a few hours. The resulting Schiff base produces a stable amadori product through chemical rearrangement, and the reaction takes place within a few days. Amadori products accumulate in the body and form crosslinks with proteins through a series of reactions such as oxidation, dehydration, condensation, relocation, cleavage, and cyclization, which are irreversible. After several weeks to several months, these reactions form the final glycated end products (AGEs), the glycosylated products of the brown compound that is finally produced. Brings about.
또한, 피부 내 생성된 갈색화합물의 최종당화산물(AGEs)이 축적될 경우 피부의 황색증가 및 얼룩을 유발하고, 멜라닌 생성을 촉진시키는 등 겉보기 노화에 관여하기 때문에 피부 항노화 대책으로 당화스트레스의 억제(항당화)를 의식하는 것이 중요하다. 당화반응은 고혈당을 가지는 당뇨환자에서 정상인보다 급격히 일어나지만 정상 혈당의 경우에도 노화가 진행됨에 따라 체내에서 일어나며, 구체적인 당화 대책으로는 식후 고혈당을 억제하고 당화반응을 억제하며 생성한 AGEs를 분해 배설하는 것 등이 있다.In addition, when the final glycated glycated products (AGEs) of the brown compound produced in the skin accumulate, it causes yellowness and staining of the skin and promotes melanin production. It is important to be aware of (anti glycation). Glycosylation occurs more rapidly than normal people in diabetic patients with hyperglycemia, but normal blood glucose occurs in the body as aging progresses.As a specific glycation countermeasure, it suppresses postprandial hyperglycemia, inhibits glycation, and breaks down the produced AGEs. Things.
또한, 최종당화산물(AGEs)안에 가장 풍부하게 있는 카복시메칠라이신(carboxymethyl lysine, CML)은 당화 초기생성물의 산화적 분해반응에 의해 발생한다. I 형 콜라겐은 진피 안에서 가장 많은 단백질로 당화의 아주 좋은 표적이 된다. 당화스트레스로 인한 피부 콜라겐의 당화 발생시 콜라겐 단백질 변성 및 진피 내 CML 축적, 그리고 이미 생성된 최종당화산물(AGEs)과 가교결합 등의 반응이 지속됨에 따라 MMP-1(matrix metalloproteinase) 단백질 발현을 높게 유지시켜 콜라겐 분해를 촉진하여 피부의 유연성 및 탄력성이 감소되어 주름이 생성된다.In addition, carboxymethyl lysine (CML), which is most abundant in final glycation end products (AGEs), is generated by the oxidative degradation of the initial glycation products. Type I collagen is the most protein in the dermis, making it a very good target for glycosylation. Maintaining high expression of matrix metalloproteinase (MMP-1) protein as glycogenation of skin collagen occurs due to glycation degeneration, collagen protein denaturation and CML accumulation in the dermis, and reactions such as cross-linking with the already produced end glycated products (AGEs). To promote collagen breakdown, thereby reducing the flexibility and elasticity of the skin resulting in wrinkles.
따라서, 상기 병아리꽃나무 추출물은 피부 콜라겐 당화반응(collagen glycation)과 최종당화산물(advanced glycation end products, AGEs)의 생성을 억제시켜 피부노화 방지, 피부주름 방지, 피부주름 개선, 피부 톤 개선 및 피부모공 축소의 효과가 뛰어나다.Therefore, the chickpea extract inhibits skin collagen glycation and production of advanced glycation end products (AGEs) to prevent skin aging, prevent wrinkles, improve skin wrinkles, improve skin tone, and improve skin pores. Excellent reduction effect
상기 병아리꽃나무 추출물은 상기 피부외용제 조성물 전체 중량에 대하여 0.0001 내지 30중량%로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 0.001 내지 10중량%이고, 보다 바람직하게는 0.1 내지 5중량%이다.The chickpea extract may be included as 0.0001 to 30% by weight based on the total weight of the skin external preparation composition, preferably 0.001 to 10% by weight, more preferably 0.1 to 5% by weight.
상기 병아리꽃나무 추출물의 함량이 0.0001중량% 미만이면 유효한 효과를 나타낼 수 없으며, 30중량%를 초과하면 변색, 변취 등 제형 안정성에 문제가 발생될 수 있다.If the content of the chickflower extract is less than 0.0001% by weight can not exhibit an effective effect, if it exceeds 30% by weight may cause problems in formulation stability, such as discoloration, deodorant.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 병아리꽃나무 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물을 사용하여 당업계에 잘 알려진 통상적인 추출 방법에 의하여 추출할 수 있으며, 유기용매를 사용하여 추출하는 것이 바람직하다.In one embodiment of the present invention, the chickflower extract can be extracted by conventional extraction methods well known in the art using water, an organic solvent or a mixture thereof, preferably extracted using an organic solvent. Do.
상기 유기용매는 탄소수 1 내지 10의 무수 또는 함유 메탄올, 에탄올, 프로필 알코올, 부틸알코올, 글리세린, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있다.The organic solvent may be at least one selected from the group consisting of anhydrous or containing methanol having 1 to 10 carbon atoms, ethanol, propyl alcohol, butyl alcohol, glycerin, propylene glycol and butylene glycol.
본 발명에서 있어서, 상기 병아리꽃나무의 줄기 추출물은 상기 병아리꽃나무 줄기를 추출 대상으로 하여 얻어지는 모든 형태의 추출물로서, 예를 들어 식물 줄기에 직/간접적으로 열을 가해 얻는 진액 형태의 추출물, 살아있는 식물 줄기의 윗부분을 잘라 흘러나오는 진액 형태의 추출물, 식물을 유기용매, 물 또는 이들의 혼합물로 추출하여 얻는 추출물, 식물 줄기를 연소시킬 때 기체를 냉각하여 얻는 추출물 등을 모두 포함하는 것이다.In the present invention, the stem extract of the chickflower tree is an extract of all forms obtained by extracting the chickflower stem, for example, extracts of the essence form obtained by applying heat directly or indirectly to the plant stem, living plant stem The extract of the extract form of the extract from the upper portion of the extract, the extract obtained by extracting the plant with an organic solvent, water or a mixture thereof, and the extract obtained by cooling the gas when burning the plant stem and the like.
상기 병아리꽃나무의 뿌리 및 잎 추출물은 유기용매, 물 또는 이들의 혼합물로 추출한 추출물을 의미한다.Root and leaf extract of the chickflower means an extract extracted with an organic solvent, water or a mixture thereof.
본 발명에 있어서 상기 병아리꽃나무 열매 추출물은 유기 용매 또는 물을 사용하여 얻어지는 추출물과 병아리꽃나무 열매를 압착하여 얻어지는 진행 형태의 추출물, 용매 추출물을 감압하여 얻어지는 오일 추출물을 포함한다.In the present invention, the chickpea fruit extract includes an extract obtained by using an organic solvent or water, an extract of a progressive form obtained by compressing the chickpea fruit, and an oil extract obtained by depressurizing the solvent extract.
본 발명에 있어서 상기 병아리꽃나무 꽃 추출물은 유기 용매 또는 물을 사용하여 얻어진 추출물과, 병아리꽃나무 꽃을 압착하여 얻어지는 진액 추출물, 또는 용매 추출물을 감압하여 얻어진 오일 추출물을 포함한다.In the present invention, the chickpea flower extract includes an extract obtained by using an organic solvent or water, a essence extract obtained by compressing the chickpea flower, or an oil extract obtained by depressurizing a solvent extract.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 병아리꽃나무 추출물은 병아리꽃나무의 잎, 줄기, 뿌리를 각각 분쇄한 후 유기용매, 예를 들어 50~100%의 탄소수 1 내지 10의 알코올, 에틸아세테이트, 헥산 및 디클로로메탄으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 추출용매로 추출된 추출물일 수 있으며, 또는 물 추출물일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the chick flower extract is crushed, respectively, the leaves, stems, roots of the chick flower tree, an organic solvent, for example, 50 to 100% of 1 to 10 carbon atoms, ethyl acetate, hexane and It may be an extract extracted with at least one extraction solvent selected from the group consisting of dichloromethane, or may be a water extract.
상기 추출물의 제조방법은 냉침 추출법, 온침 추출법 또는 열 추출법 등이 사용될 수 있으며, 통상의 추출기기, 초음파 분쇄 추출기 또는 분획기를 이용할 수 있다.As the preparation method of the extract, a cold needle extraction method, a hot needle extraction method or a heat extraction method may be used, and a conventional extraction device, an ultrasonic mill extractor or a fractionator may be used.
상기 제조된 추출물은 여과하거나 농축 또는 건조하여 용매를 제거할 수 있다. 상기 여과는 여과지를 이용하거나, 감압 여과기를 이용할 수 있으며, 상기 농축은 감압 농축기, 일 예로 회전 증발기를 이용하여 감압 농축할 수 있고, 상기 건조는 일 예로 동결 건조법으로 수행할 수 있다.The prepared extract may be filtered, concentrated or dried to remove the solvent. The filtration may be performed using a filter paper or a reduced pressure filter. The concentration may be concentrated under reduced pressure using a reduced pressure concentrator, for example, a rotary evaporator, and the drying may be performed by, for example, a freeze drying method.
본 발명에 있어서, 상기 추출물은 농축 또는 희석하여 사용할 수 있고, 추출물의 증류액을 사용할 수도 있다. In the present invention, the extract may be used by concentration or dilution, and distillate of the extract may be used.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 피부외용제 조성물은 피부주름 방지용, 피부주름 개선용, 피부톤 개선용 또는 피부모공 축소용 조성물일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the topical skin composition may be a composition for preventing skin wrinkles, improving skin wrinkles, improving skin tone or reducing skin pores.
상기 피부주름 방지, 피부주름 개선은 주름과 관련된 능력을 유지 또는 강화시키는 것을 의미하는 것으로, 콜라겐 당화반응을 감소시켜 효과적으로 최종당화산물의 생성을 억제하여 피부주름 등과 같은 피부노화 현상을 방지할 수 있으며, 상기 피부 톤 개선은 피부에서의 혈액의 순환을 돕고 피부 콜라겐 당화반응을 억제하여 투명하고, 균일한 피부 톤을 만들어 주는 것이다.The prevention of skin wrinkles and improvement of skin wrinkles means maintaining or enhancing the ability related to wrinkles, and reducing collagen glycation reaction to effectively inhibit the production of the final glycated product to prevent skin aging such as skin wrinkles. The skin tone improvement is to help blood circulation in the skin and to inhibit the skin collagen glycation reaction to create a transparent, uniform skin tone.
또한, 피부 모공이 넓어지는 원인은 피부에 탄력을 주고 지지대 역할을 하는 콜라겐과 엘라스틴의 힘이 떨어지게 되거나, 피부가 늘어져 모공이 커 보이는 것으로 피부 콜라겐 당화반응 억제 활성을 통해 피부 모공을 축소할 수 있다.In addition, the cause of the wide pores of the skin is to reduce the strength of the collagen and elastin, which gives elasticity and support to the skin, or the skin appears to be large due to sagging skin, which can reduce the skin pores by inhibiting the skin collagen glycation reaction. .
또한, 본 발명에 따른 상기 피부외용제 조성물은 특히 프로콜라겐(procollagen) 증가, 콜라겐(collagen) 생합성 증가능을 가지고 있고 피부노화 방지, 피부주름 개선/방지용으로 적용될 수 있으며, 이외에도 미백, 모공수축, 피지억제, 항균, iNOS 억제 활성을 통한 항염, 피부염증 예방, 완화, 경감, 치료용으로 적용될 수 있다.In addition, the composition for external application for skin according to the present invention has a procollagen (procollagen) increase, collagen (collagen) biosynthesis increase ability and can be applied for skin aging prevention, skin wrinkle improvement / prevention, in addition to whitening, pore shrinkage, sebum It can be applied for anti-inflammatory, dermatitis prevention, alleviation, alleviation, treatment through inhibition, antibacterial, iNOS inhibitory activity.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 피부 외용제 조성물은 상기 병아리꽃나무 추출물 이외에 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유, 에탄올, 트리에탄올아민 등을 포함할 수 있으며, 방부제, 항료, 착색료, 정제수 등을 필요에 따라 미량 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the external preparation composition for the skin may include glycerin, butylene glycol, propylene glycol, polyoxyethylene hardened castor oil, ethanol, triethanolamine, etc., in addition to the chickflower extract, preservatives, pharmaceuticals, A coloring agent, purified water, etc. can be contained in a trace amount as needed.
본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은, 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 화장수, 에센스, 젤, 에멀젼, 로션, 크림(수중유적형, 유중수적형, 다중상), 용액, 현탁액(무수 및 수계), 무수 생성물(오일 및 글리콜계), 젤, 마스크, 팩, 분말, 또는 젤라틴 등의 피막이 있는 캅셀(소프트 캅셀, 하드 캅셀), 연고, 패취, 파운데이션, 메이크업베이스, 자외선차단제, 입욕제, 비누, 액체 세정료, 분무제 제형 등의 형태로 제조될 수 있다.The external preparation composition for skin according to the present invention can be prepared in various forms, for example, lotion, essence, gel, emulsion, lotion, cream (oil-in-water, water-in-oil, multiphase), solutions, suspensions (anhydrous and aqueous) ), Anhydrous products (oils and glycols), gels, masks, packs, powders, or capsules with a coating such as gelatin (soft capsules, hard capsules), ointments, patches, foundations, makeup bases, sunscreens, baths, soaps, It may be prepared in the form of a liquid detergent, a spray formulation, and the like.
본 발명에 있어서 피부는 얼굴뿐만 아니라, 두피, 전신도 포함되는 개념으로, 이러한 두피에 적용될 수 있는 피부 외용제 조성물로써, 샴푸, 린스, 트리트먼트, 발모제 등이 있고, 전신에 적용될 수 있는 바디클렌져 등의 용도로써 다양한 형태로 제조될 수 있다.In the present invention, the skin is not only a face, but also includes a scalp and a whole body. As an external composition for skin that can be applied to the scalp, there are shampoos, rinses, treatments, hair regrowths, and the like, and a body cleanser that can be applied to the whole body. It can be prepared in various forms as the use of.
본 발명에 있어서, 상기 병아리꽃나무 추출물을 포함하는 피부 외용제 조성물의 제조방법은 전술한 제조방법에 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 제조방법을 일부 변형시킨 방법으로도 본 발명에 따른 병아리꽃나무 추출물을 함유 피부 외용제 조성물을 제조할 수 있다. 특히, 상기 피부 외용제 조성물은 본 발명에 특별히 개시된 제조방법 이외에도, 통상적으로 알려진 제조방법을 이용하여, 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조될 수 있다. 화장료 조성물로 제조될 경우, 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과 학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.In the present invention, the method for preparing the external preparation for skin composition comprising the chickpea extract is not limited to the above-described preparation method, and those skilled in the art to which the present invention belongs may partially modify the preparation method. It is also possible to prepare a skin external preparation composition containing the chickpea extract according to the present invention. In particular, the external preparation composition for the skin may be prepared in the form of general emulsion formulations and solubilized formulations using a conventionally known production method, in addition to the production method specifically disclosed in the present invention. When the cosmetic composition is prepared, cosmetics of the emulsion formulations include nutrient cosmetics, creams, essences, etc., and cosmetics of the solubilized formulations include soft cosmetics. In addition, by containing a dermatologically acceptable medium or base, it can be prepared in the form of adjuvants for topical or systemic application commonly used in the field of dermatology.
또한, 적합한 화장품의 제형으로는, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.In addition, formulations of suitable cosmetics include, for example, emulsions, suspensions, microemulsions, microcapsules, microgranules or ionic (liposomes), nonionics obtained by dispersing an oil phase in a solution, gel, solid or pasty anhydrous product, aqueous phase, for example. It may be provided in the form of a vesicle dispersant in the form of a cream, skin, lotion, powder, ointment, spray or concealed stick. It may also be prepared in the form of a foam or in the form of an aerosol composition further containing a compressed propellant.
또한, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.In addition, the topical skin composition of the present invention may further comprise fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickeners and gelling agents, emollients, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents, fragrances, surfactants, water, ions Any commonly used in type or nonionic emulsifiers, fillers, metal ion sequestrants and chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic active agents, lipid vesicles or cosmetics It may contain adjuvants conventionally used in the cosmetic or dermatology field as other ingredients. And the above ingredients may be introduced in amounts generally used in the field of dermatology.
본 발명에 있어서, 상기 병아리꽃나무 추출물을 포함하는 피부외용제 조성물은 화장료 조성물 또는 약제학적 조성물일 수 있다.In the present invention, the external skin composition comprising the chick flower extract may be a cosmetic composition or a pharmaceutical composition.
상기 화장료 조성물에 있어서는, 화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있다. 여기서, 화장품 제제에 있어서 수용 가능한 담체란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다.In the cosmetic composition, an acceptable carrier may be included in the cosmetic formulation. Herein, an acceptable carrier in a cosmetic preparation is a compound or composition already known and used that may be included in the cosmetic preparation, or a compound or composition to be developed in the future. Say.
상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 산란제, 자외선흡수제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. 상기 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선산란제, 자외선흡수제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.Examples of the carrier include alcohols, oils, surfactants, fatty acids, silicone oils, wetting agents, humectants, viscosity modifiers, emulsions, stabilizers, ultraviolet scattering agents, ultraviolet absorbers, colorants, fragrances, and the like. Alcohols, oils, surfactants, fatty acids, silicone oils, wetting agents, humectants, viscosity modifiers, emulsions, stabilizers, ultraviolet scatterers, ultraviolet absorbers, colorants, compounds / compositions that can be used as fragrances are already known in the art. As such, those skilled in the art can select and use appropriate materials / compositions.
상기 약제학적 조성물은 피부질환 치료, 상처치유 및 피부재생용 조성물로써, 로션, 연고, 겔, 크림, 패취 또는 분무제와 같은 경피 투여형 제형일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.The pharmaceutical composition may be a transdermal dosage form such as a lotion, ointment, gel, cream, patch or spray as a composition for treating skin diseases, wound healing and skin regeneration, but is not limited thereto.
이하, 하기 구체예들을 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하지만, 이는 본 발명의 예시일 뿐 본 발명의 권리범위가 이에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the following specific examples, which are merely illustrative of the present invention and the scope of the present invention is not limited thereto.
[[ 제조예Production Example ] 병아리꽃나무 잎, 줄기, 뿌리 추출물 제조Manufacture of Chickleaf, Stem, and Root Extracts
병아리꽃나무 잎, 줄기, 뿌리를 각각 20 g씩 수거하여 70% 에탄올 수용액 1 L를 넣고 실온에서 48시간 동안 냉침한 후 여과 및 감압 농축하여 잎, 줄기, 뿌리추출물 각각 3 g을 얻었다. 세포 실험을 진행하기 위해 각 추출물들을 DMSO (Dimethyl sulfoxide)에 녹여 시료를 제조하였다.20 g of chickpea leaves, stems, and roots were collected, and 1 L of 70% ethanol aqueous solution was added thereto, and the mixture was cooled to room temperature for 48 hours, filtered and concentrated under reduced pressure to obtain 3 g of leaves, stems, and root extracts. Samples were prepared by dissolving each extract in DMSO (Dimethyl sulfoxide) to proceed with cell experiments.
[[ 시험예Test Example 1] 병아리꽃나무 추출물의 항산화력 측정 1] Determination of Antioxidant Activity of Chickpea Extract
[[ 시험예Test Example 1-1] 총 폴리페놀( 1-1] total polyphenols ( polyphenolpolyphenol )함량 측정Content measurement
폴리페놀은 몸에 있는 활성산소를 해가 없는 물질로 바꿔주는 항산화물질 중 하나이다. 본 발명의 병아리꽃나무 잎, 줄기, 뿌리 추출물의 총 폴리페놀 함량을 측정하기 위하여 폴린-데니스(Folin-Denis)법을 일부 변형하여 폴린-시약(Folin-reagent)이 추출물의 페놀성 화합물에 의해 환원되면 몰리브덴(molybdenum)의 청색으로 발색되는 원리를 이용하여 정량 하였다. 병아리꽃나무 잎, 줄기, 뿌리 추출물(1 mg/ml) 100 ㎕에 폴린-시오칼토 시약(folin-ciocalteu reagent) 200 ㎕을 가한 후 700 mM Na2CO3용액 800 ㎕를 혼합하고 실온에서 40분 방치한 후 microplate reader를 이용하여 750 nm에서 흡광도를 측정하였다. 갈릭 산(Gallic acid, sigma)를 표준물질로 사용하여 0~500 μg/ml 농도로 제조한 후 시료와 동일한 방법으로 분석하여 얻은 표준검량 선으로부터 병아리꽃나무 잎, 줄기, 뿌리추출물의 폴리페놀 함량을 분석하고, 그 결과를 갈릭 산 당량(GAE, gallic acid equivalents)으로 하기 표 1에 나타내었다.Polyphenols are an antioxidant that converts free radicals in the body into harmless substances. In order to measure the total polyphenol content of the chickflower leaf, stem, and root extract of the present invention, a partial modification of the Folin-Denis method was carried out so that the Folin-reagent was reduced by the phenolic compound of the extract. When the molybdenum (molybdenum) blue color was determined using the principle. 200 μl of folin-ciocalteu reagent was added to 100 μl of chickpea leaves, stems, and root extracts (1 mg / ml), followed by mixing 800 μl of 700 mM Na 2 CO 3 solution and leaving at room temperature for 40 minutes. After absorbance was measured at 750 nm using a microplate reader. Polyphenol content of chickpea leaves, stems and root extracts was prepared from standard calibration curves prepared by using gallic acid (sigma) at a concentration of 0 to 500 μg / ml using the same method as the sample. The results are shown in Table 1 as gallic acid equivalents (GAE).
(㎛ GAE/mg 병아리꽃나무 추출물)Total polyphenol content
(㎛ GAE / mg Chickberry Extract)
표 1에서 나타나는 바와 같이, 병아리꽃나무 잎, 줄기, 뿌리 추출물의 폴리페놀 함량은 각 1 mg 당 59.86 μg, 89.64 μg, 131.54 μg을 함유하고 있어, 병아리꽃나무 뿌리추출물의 총 폴리페놀 함량이 매우 높음을 알 수 있다.As shown in Table 1, the polyphenol content of chickpea leaves, stems, and root extracts contained 59.86 μg, 89.64 μg, and 131.54 μg per 1 mg, indicating a very high total polyphenol content of chickpea root extract. Able to know.
[[ 시험예Test Example 1-2] 1-2] DPPHDPPH 항산화 효과 측정 Antioxidant Effect Measurement
DPPH(1,1-diphenyl-2-picrydrazyl) 법에 의한 항산화 활성을 측정하였다. DPPH법은 DPPH라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 자유라디칼 소거활성을 측정하는 것이다.Antioxidant activity was measured by DPPH (1,1-diphenyl-2-picrydrazyl) method. DPPH method is to measure the free radical scavenging activity by reducing force using a free group called DPPH.
96-웰 플레이트(well-plate)에 연속희석법(serial dilution)으로 각 시료 50 ㎕를 넣은 후, 0.2 mM DPPH(Sigma, St. Louis, USA) 용액 100 ㎕를 첨가하여 30분간 반응을 시켰다. 시료에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 대조군의 흡광도와 비교하여 파장 517 nm에서 자유라디칼 소거율을 측정하였고, 그 결과를 표 2에 나타내었다.50 μl of each sample was put into a 96-well plate by serial dilution, and then 100 μl of 0.2 mM DPPH (Sigma, St. Louis, USA) solution was added to react for 30 minutes. The free radical scavenging rate was measured at a wavelength of 517 nm by comparing the degree of decrease in absorbance by reducing DPPH by the sample, and the results are shown in Table 2.
자유라디칼 소거활성(scavenging activity, %)은 다음의 수학식 1로 산출하였다.Free radical scavenging activity (%) was calculated by the following equation (1).
<수학식 1><Equation 1>
자유라디칼 소거활성 (%) = (A - B) / A X 100Free radical scavenging activity (%) = (A-B) /
A : 시료를 처리하지 않은 대조군의 흡광도A: Absorbance of the control group without treatment
B : 시료를 처리한 시험군의 흡광도B: absorbance of the test group treated with the sample
자유라디칼 소거활성이 50% 감소하는데 필요한 시료의 농도를 SC 50으로 나타냈다.The concentration of sample required for 50% reduction in free radical scavenging activity is represented by
상기 표 2에서 볼 수 있는 바와 같이, 병아리꽃나무 추출물은 뿌리, 줄기, 잎 순으로 DPPH 라디칼 소거능이 우수하였으며, 특히 뿌리 추출물은 항산화 실험에서 대조군으로 사용된 대표적인 항산화 물질인 라스베라트롤의 약 50% 수준의 우수한 항산화 효과를 나타내었다.As can be seen in Table 2, the chickpea extract was excellent in DPPH radical scavenging ability in the order of root, stem, and leaf, in particular, the root extract was about 50% of the representative antioxidant, rasveratrol, which was used as a control in the antioxidant experiment. It showed a good level of antioxidant effect.
[[ 시험예Test Example 2] 단백질 2] protein 당화Saccharification (protein (protein glycationglycation ) 반응 저해 효과 측정) Determination of reaction inhibition effect
우혈청 알부민(bovine serum albumin, BSA; Sigma, St. Louis, USA)을 반응 기질로 하여 당화 반응을 수행하고 형광 변화 정도를 측정함으로써 각 시료의 단백질 당화 반응 저해 효과를 측정하였다.The glycosylation reaction was performed by using bovine serum albumin (BSA; Sigma, St. Louis, USA) as a reaction substrate and the degree of fluorescence change was measured to measure the protein glycosylation inhibitory effect of each sample.
우선 글리옥살(glyoxal) 용액(100 mM) 0.4 ml과 PBS buffer (pH 7.4)에 희석한 500 ppm 농도의 각 시료 용액 0.4 ml을 첨가하여 37℃에서 2시간동안 반응시킨 후, 0.2 ml BSA 용액 (20 mg/ml)을 넣어 추가로 48시간동안 같은 온도에서 반응시켰다. 또한 0.02% 소디움 아자이드(sodium azide)를 넣어 반응기간 동안 미생물의 오염을 방지하였다. 각 시료에 의한 형광도의 간섭을 배제하기 위하여 BSA를 처리하지 않은 시료 처리군도 함께 제조하여 같은 기간 반응시켰다. 시료의 경우 당화반응이 일어나지 않은 각 시료의 형광도를 배제한 값을 사용하였다. 양성대조군으로는 아미노구아니딘 염산염(aminoguanidine-HCl)을 사용하였고, 반응 후 Victor X2 형광분광분석기(Perkin Elmer Inc.)를 이용하여 들뜸파장(Ex: Excitation wavelength) 355 nm, 방출파장(Em: Emission wavelength) 485 nm로 조정하여 형광도를 측정하였다.First, 0.4 ml of glyoxal solution (100 mM) and 0.4 ml of 500 ppm of each sample solution diluted in PBS buffer (pH 7.4) were added and reacted at 37 ° C for 2 hours, followed by 0.2 ml BSA solution ( 20 mg / ml) was added and reacted at the same temperature for 48 hours. In addition, 0.02% sodium azide was added to prevent microbial contamination during the reaction. In order to exclude interference with fluorescence by each sample, a sample treatment group not treated with BSA was also prepared and reacted for the same period. In the case of samples, a value in which the fluorescence of each sample in which glycosylation reaction did not occur was used. As positive control group, aminoguanidine hydrochloride (aminoguanidine-HCl) was used, and after reaction, the excitation wavelength (Ex: excitation wavelength) was 355 nm and emission wavelength (Em) using a Victor X2 fluorescence spectrometer (Perkin Elmer Inc.). ) To 485 nm to measure fluorescence.
최종당화산물 생성 저해율은 다음의 수학식 2로 산출하였다.Final glycation product inhibition rate was calculated by the following equation (2).
<수학식 2><Equation 2>
최종당화산물 생성 저해율(%) = 100-{(샘플처리군-블랭크 값)/(음성대조군-블랭크 값)}X100 % Of final glycation product production inhibition = 100-{(sample-blank value) / (negative control-blank value)} X100
(Aminoguanidine HCl)
(양성대조군)Aminoguanidine hydrochloride
(Aminoguanidine HCl)
(Positive control)
상기 표 3에서 알 수 있는 바와 같이, 500 ppm의 병아리꽃나무 추출물은 잎, 줄기, 뿌리 순으로 최종당화산물 생성 저해율이 우수하였으며, 특히 잎 추출물은 같은 농도의 아미노구아니딘 염산염의 약 40% 수준의 우수한 당화반응 억제효과를 나타내었다.As can be seen in Table 3, the 500 ppm chickpea extract was excellent in inhibiting the production of the final glycation product in the order of leaves, stems, roots, in particular the leaf extract is about 40% of the amino guanidine hydrochloride of the same concentration is excellent Inhibition of glycation reaction was shown.
[[ 시험예Test Example 3] 병아리꽃나무 추출물의 피부 섬유아세포 생존율 측정 3] Measurement of Skin Fibroblast Survival Rate of Chickpea Extract
본 발명의 병아리꽃나무 추출물의 인간 정상 피부 섬유아세포(CCD-986sk)에 대한 세포독성을 측정하기 위해 세포를 1X104 cells/well 농도로 96-well plate에 분주한 후 37℃, 5% CO2 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 배양배지를 제거 후 무혈청배지에 희석한 10~100 ppm 농도의 병아리꽃나무 추출물을 세포에 처리하여 24시간 동안 추가 배양하였다. 배양 후, 세포 생존율을 확인하기 위하여 배양배지를 제거 후 각 well 당 0.5 mg/ml 농도의 MTT용액 200 ㎕를 처리하여 3시간동안 반응시켰다. 생성된 포마잔(formazan)을 DMSO 100 ㎕로 용해시켜 micro-plate reader를 이용하여 540 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. 정상 대조군으로는 추출물을 처리하지 않은 well의 세포 생존율을 100%으로 하여 병아리꽃나무 추출물 처리군의 세포 생존율을 수학식 3에 따라 계산하여 산출한 결과를 도 1에 나타내었다.In order to measure the cytotoxicity of the chickpea extract of the present invention on human normal dermal fibroblasts (CCD-986sk), the cells were dispensed in a 96-well plate at a concentration of 1 × 10 4 cells / well, followed by 37 ° C. and 5% CO 2 conditions. Incubated for 24 hours at. After removing the culture medium, 10 ~ 100 ppm concentration of chickpea extract diluted in serum-free medium was treated to the cells and further incubated for 24 hours. After incubation, after removing the culture medium to check the cell viability, the reaction was treated for 200 hours by treating 200 μl of MTT solution at a concentration of 0.5 mg / ml for each well. The resulting formazan was dissolved in 100 μl of DMSO and the absorbance was measured at 540 nm using a micro-plate reader. As a normal control, as shown in FIG. 1, the cell survival rate of the chickflower tree extract treatment group was calculated according to Equation 3 with the cell survival rate of 100% as well.
<수학식 3><Equation 3>
섬유아세포 생존율(%) = (A/B) X 100Fibroblast survival rate (%) = (A /
A: 시료를 처리한 시험군의 흡광도A: absorbance of the test group treated with the sample
B: 시료를 처리하지 않은 대조군의 흡광도B: Absorbance of Controlled Samples
도 1에 나타낸 바와 같이, 병아리꽃나무 잎, 줄기, 뿌리 추출물을 10~100 ppm 피부 섬유아세포에 처리하였을 때 모두 100 ppm까지 독성이 보이지 않았으며, 추출물을 처리시 정상 대조군보다 더 높은 세포 생존률을 보이는 것으로 확인되었다. 따라서, 본 발명의 따른 병아리꽃나무 잎, 줄기, 뿌리 추출물은 100 ppm 농도까지는 세포 독성이 없어 안전한 것으로 확인되었으며, 피부 섬유아세포의 증식 촉진제로서 우수한 활성을 나타냄을 확인하였다.As shown in Figure 1, when treated with 10 ~ 100 ppm dermal fibroblasts of chickpea leaves, stems, root extract all showed no toxicity up to 100 ppm, when the extract treated showed higher cell viability than the normal control It was confirmed that. Therefore, chickpea leaves, stems, root extract of the present invention was confirmed to be safe because there is no cytotoxicity up to 100 ppm concentration, it was confirmed that the excellent activity as a growth promoter of skin fibroblasts.
[[ 시험예Test Example 4] 4] 당화스트레스에In saccharification stress 의한 콜라겐 Caused by collagen 당화Saccharification 저해 효과 측정 Inhibition effect measurement
시험예 3과 같은 방법으로 세포 분주를 하여 24시간 배양을 한 뒤, 배양배지를 제거 후 무혈청배지에 희석한 10, 25, 50 ppm 농도의 병아리꽃나무 잎, 줄기, 뿌리추출물을 세포에 처리하여 24시간 동안 추가 배양하였다. 24시간 후, 무혈청배지에 희석한 0.5 mM의 글리옥살(glyoxal)을 48시간 처리하여 세포에 당화스트레스를 유발하였다. 48시간 반응이 끝난 후, 각 웰의 상층액을 모아 Human pro-collagen 1 alpha 1 분석 키트 (R&D system, DY6220-05)를 이용하여 상층액의 프로콜라겐 함량(pg/ml)을 측정하였다. 병아리꽃나무 추출물을 처리시 콜라겐 당화 억제로 인한 콜라겐 회복률(%)을 구하기 위해 정상 대조군으로는 시료와 글리옥살을 처리하지 않은 well의 상층액 내 콜라겐 함량을 100%으로 하여 정상 대조군 대비 글리옥살만 처리군 (음성대조군)과 시료 및 글리옥살 처리군의 콜라겐 생성률(%)을 계산하여 결과를 표 4에 나타내었다.After culturing the cells in the same manner as in Test Example 3 and incubating for 24 hours, the culture medium was removed and treated with 10, 25 and 50 ppm chickpea leaves, stems and root extracts diluted in serum-free medium. Further incubation for 24 hours. After 24 hours, 0.5 mM glyoxal diluted in serum-free medium was treated for 48 hours to induce glycation stress in the cells. After 48 hours, the supernatant of each well was collected and the procollagen content (pg / ml) of the supernatant was measured using a human pro-collagen 1 alpha 1 assay kit (R & D system, DY6220-05). In order to obtain the collagen recovery rate (%) due to the inhibition of collagen glycosylation when the chickflower extract was treated, the normal control group treated with glyoxal only with 100% collagen content in the supernatant of the sample and glyoxal-treated wells. The collagen production rate (%) of the group (negative control) and the sample and glyoxal treatment group was calculated and the results are shown in Table 4.
(glyoxal) 0.5mMGlyoxal
(glyoxal) 0.5mM
잎 추출물Chick Blossom Tree
Leaf extract
줄기 추출물Chick Blossom Tree
뿌리 추출물Chick Blossom Tree
Root extract
표 4에서 알 수 있는 바와 같이, 음성대조군에서 정상대조군 대비 71.61%의 콜라겐 생성률을 보여 세포에 당화스트레스를 유도시 콜라겐 생합성 저해 및 콜라겐 당화가 일어나는 것을 확인하였다. 한편 병아리꽃나무 잎, 줄기, 뿌리 추출물을 10, 25, 50 ppm 농도로 선처리 후 당화스트레스를 유도시 잎 추출물은 10 ppm에서 최고 10.08%의 콜라겐 생성 회복률을 보였으며, 줄기 추출물은 처리 농도의존적으로 회복률이 증가하여 50 ppm에서 최고 33.44%의 회복률을 보였다. 그리고 뿌리 추출물은 25 ppm에서 최고 4.57%의 회복률을 확인하였다. As can be seen in Table 4, the negative control group showed a collagen production rate of 71.61% compared to the normal control group, it was confirmed that the inhibition of collagen biosynthesis and collagen glycosylation occurs when inducing glycation stress in the cells. On the other hand, when induction of glycation stress after pretreatment with 10, 25, and 50 ppm concentrations of chickflower leaf, stem, and root extracts, the leaf extract showed a recovery rate of collagen production at 10 ppm up to 10.08%. This increased up to 33.44% recovery at 50 ppm. The root extract was found to recover up to 4.57% at 25 ppm.
따라서, 상기 표 4의 결과와 같이, 본 발명의 병아리꽃나무 추출물, 특히 병아리꽃나무의 줄기 추출물에서 우수한 피부 콜라겐 당화 억제 활성을 나타냄을 확인하였다.Therefore, as shown in the results of Table 4, it was confirmed that the chickflower tree extract of the present invention, in particular the stem extract of the chickflower tree showed excellent skin collagen glycosylation inhibitory activity.
또한, 표 4에는 명시하지 않았지만 0.5 mM의 글리옥살(glyoxal)을 48시간 처리시 정상대조군 대비 90% 이상의 세포 생존율을 확인하여 세포 사멸에 크게 영향을 미치지 않은 글리옥살 농도 내에서 세포에 당화스트레스를 유발하였다.In addition, although not shown in Table 4, the glycosylation stress was induced in the cells within the glyoxal concentration that did not significantly affect cell death by confirming cell viability of 90% or more compared to the normal control group after treating 0.5 mM glyoxal for 48 hours. Induced.
[[ 시험예Test Example 5] 5] 당화스트레스에In saccharification stress 의한 섬유아세포 내 Caused by fibroblasts carboxymethylcarboxymethyl lysine( lysine ( CMLCML ) 생성 저해효과 측정) Measurement of production inhibitory effect
콜라겐 당화 억제 효과가 우수하였던 본 발명의 병아리꽃나무 줄기 추출물의 피부 섬유아세포 내 최종당화산물인 CML의 생성 저해효과를 측정하기 위해 세포를 4x105 cells/well 농도로 100 mm dish에 분주한 후 37℃, 5% CO2 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 배양배지를 제거 후 무혈청배지에 희석한 25, 50 ppm 농도의 병아리꽃나무 줄기 추출물과 10 ppm 농도의 아미노구아니딘 염산염을 세포에 처리하여 24시간 추가 배양하였다. 24시간 후, 무혈청배지에 희석한 0.5 mM의 글리옥살(glyoxal)을 72시간 처리하여 세포에 당화스트레스를 유발하였다. 72시간 반응이 끝난 세포는 PBS buffer로 2회 세척한 후 RIPA lysis buffer를 첨가하고 4℃에서 5분간 lysis 시킨 후 12,000 rpm에서 10분간 원심 분리하였다. 상층액을 취하여 동일하게 단백질 정량한 후 CML competitive ELISA kit (Cell biolabs, STA-816)를 이용하여 상층액의 CML 함량(μg/ml)을 측정하였다. 병아리꽃나무 줄기추출물 처리시 피부 섬유아세포 당화 억제로 인한 세포 내 CML 생성 억제 정도를 확인하기 위해 글리옥살만 처리한 음성 대조군의 CML 함량을 100%으로 하여, 음성 대조군 대비 정상 대조군(시료와 글리옥살 무첨가)과 병아리꽃나무 줄기 추출물 및 아미노구아니딘 염산염 처리군의 CML 생성률(%)을 계산하여 결과를 도 2에 나타내었다.In order to measure the inhibitory effect of CML, the final glycation product in skin fibroblasts of the chickpea stem extract of the present invention, which was excellent in inhibiting collagen glycosylation, the cells were dispensed in a 100 mm dish at a concentration of 4x10 5 cells / well and 37 ° C. , And incubated for 24 hours at 5% CO 2 conditions. After removing the culture medium, the cells were treated with 25, 50 ppm chickpea stem extract and 10 ppm aminoguanidine hydrochloride diluted in serum-free medium and further incubated for 24 hours. After 24 hours, 0.5 mM glyoxal diluted in serum-free medium was treated for 72 hours to induce glycation stress in the cells. After 72 hours, the cells were washed twice with PBS buffer, RIPA lysis buffer was added and lysed at 4 ° C for 5 minutes, and then centrifuged at 12,000 rpm for 10 minutes. After taking the supernatant, the protein was quantified in the same manner, and the CML content (μg / ml) of the supernatant was measured using a CML competitive ELISA kit (Cell biolabs, STA-816). In order to confirm the degree of inhibition of intracellular CML production due to the inhibition of skin fibroblast glycosylation during the treatment of chickpea stem extract, the CML content of the glyoxal-only negative control group was 100%, compared to the normal control (no sample and glyoxal addition). ) And CML generation rate (%) of the chickflower stem extract and aminoguanidine hydrochloride treated group is shown in Figure 2 the results.
도 2에 나타낸 바와 같이, 피부 섬유아세포에 0.5 mM의 글리옥살을 처리시 정상대조군 대비 4배가량 CML 생성률이 증가되었으며, 병아리꽃나무 줄기 추출물을 25, 50 ppm 처리하였을 때 음성 대조군 대비 CML 생성률이 각각 8.19%, 21.23%씩 억제되는 것을 확인하였다. 아미노구아니딘 염산염은 농도 별로 24시간 처리하였을 때 10 ppm까지 세포 독성을 보이지 않아 해당 농도를 세포에 처리하였으며, CML 생성률이 21.66% 억제되는 것을 확인하였다. 병아리꽃나무 줄기 추출물의 세포 독성이 나타나지 않은 농도 범위 한에서는 50 ppm에서 최고 21.23%으로 10 ppm의 아미노구아니딘 염산염과 비슷한 수준의 CML 생성 억제 정도를 보임으로써 훨씬 안전하면서 피부 세포 당화 억제 효과가 우수한 것을 확인하였다.As shown in FIG. 2, CML production rate was increased by 4 times compared to the normal control group when 0.5 mM glyoxal was treated to dermal fibroblasts, and CML production rate was higher than that of the negative control group when 25 and 50 ppm of chickpea stem extracts were treated. It was confirmed that 8.19%, 21.23% were inhibited. Aminoguanidine hydrochloride showed no cytotoxicity up to 10 ppm when treated for 24 hours by concentration, and the cells were treated with the corresponding concentration, and the CML production rate was confirmed to be 21.66% inhibition. In the range of no cytotoxicity of chickpea stem extract, it was found that it was much safer and inhibited skin cell glycosylation by showing the similar level of inhibition of CML production to 10 ppm of aminoguanidine hydrochloride at 50 ppm up to 21.23%. .
상기 시험 결과에 따르면, 본 발명에 따른 병아리꽃나무 추출물을 처리시 항산화 활성, 콜라겐 당화 억제, 그리고 최종당화산물 생성 억제하는 효과가 있음을 확인하였다. 특히 단백질 당화 억제제로 알려져 있는 아미노구아니딘 염산염보다 세포 독성은 적으면서, 세포내 당화 억제효과가 비슷한 것을 확인하여 본 발명에 따른 조성물은 피부 내 당화스트레스로 유도된 피부노화, 주름 및 피부 투명감 저하를 효과적으로 개선시킬 수 있다. According to the test results, it was confirmed that there is an effect of inhibiting the antioxidant activity, collagen saccharification, and the final glycation product production when the chickflower extract according to the present invention. In particular, the composition according to the present invention was found to be less cytotoxic than aminoguanidine hydrochloride, which is known as a protein glycosylation inhibitor, and has a similar effect on inhibiting intracellular glycosylation. Can be improved.
이하, 상기 시험예의 결과를 근거로 하여, 병아리꽃나무 줄기 추출물을 이용한 여러 제형예를 조성하여 제시한다. 그러나 이들 제형예는 본 발명을 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 제형이 이들 제형예에만 국한되지 않는 다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진자에게 있어서 자명한 것이다.Hereinafter, based on the results of the test example, to present a variety of formulation examples using the chick flower stem extract. However, these formulation examples are for illustrating the present invention, it is apparent to those skilled in the art that the formulation of the present invention is not limited to these formulation examples.
Claims (9)
상기 병아리꽃나무 추출물은 상기 병아리꽃나무의 잎, 줄기, 뿌리, 꽃 및 열매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 추출물인 것을 특징으로 하는 항노화용 피부외용제 조성물.
It is an anti-aging skin external composition comprising chick flower extract as an active ingredient,
The chickpea extract is an anti-aging skin external composition, characterized in that at least one extract selected from the group consisting of leaves, stems, roots, flowers and fruits of the chickpea.
상기 병아리꽃나무 추출물은 피부 콜라겐 당화반응(collagen glycation) 및 최종당화산물(advanced glycation end products, AGEs)의 생성을 억제시키는 것을 특징으로 하는 항노화용 피부외용제 조성물.
The method of claim 1,
The chickpea extract is an anti-aging external composition for skin, characterized in that it inhibits the production of collagen glycation and advanced glycation end products (AGEs).
상기 병아리꽃나무 추출물은 상기 피부외용제 조성물 전체 중량에 대하여 0.0001 내지 30중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 항노화용 피부외용제 조성물.
The method of claim 1,
The chickpea extract is an anti-aging skin external composition, characterized in that it comprises 0.0001 to 30% by weight based on the total weight of the external skin composition.
상기 병아리꽃나무 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물로 추출되는 것을 특징으로 하는 항노화용 피부외용제 조성물.
The method of claim 1,
The chickpea extract is an anti-aging skin external composition, characterized in that extracted with water, an organic solvent or a mixture thereof.
상기 유기용매는 탄소수 1 내지 10의 무수 또는 함유 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올, 글리세린, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 항노화용 피부외용제 조성물.
The method of claim 4, wherein
The organic solvent is an external skin composition for anti-aging, characterized in that at least one selected from the group consisting of anhydrous or containing methanol having 1 to 10 carbon atoms, ethanol, propyl alcohol, butyl alcohol, glycerin, propylene glycol and butylene glycol.
상기 피부외용제 조성물은 피부주름 방지용, 피부주름 개선용, 피부톤 개선용 또는 피부모공 축소용 조성물인 것을 특징으로 항노화용 피부외용제 조성물.
The method of claim 1,
The skin external preparation composition is anti-aging skin external composition, characterized in that the composition for preventing wrinkles, improving skin wrinkles, improving skin tone or reducing skin pores.
상기 항노화용 피부외용제 조성물은 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 젤, 연고, 패취, 파운데이션, 메이크업베이스, 자외선차단제, 입욕제, 비누, 액체 세정료 및 분무제로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 제형인 것을 특징으로 하는 항노화용 피부 외용제 조성물.
The method of claim 1,
The anti-aging skin external composition is one or more formulations selected from the group consisting of lotion, essence, lotion, cream, pack, gel, ointment, patch, foundation, makeup base, sunscreen, bath, soap, liquid cleansing agent and spraying agent. Anti-aging skin external composition, characterized in that.
Cosmetic composition comprising chickpea extract of any one of claims 1 to 4.
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