KR20190108352A - 약독화된 폐렴구균 균주를 포함하는 약제학적 조성물 및 이의 용도 - Google Patents

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Abstract

본원은 약독화된 폐렴구균 균주를 포함하는 약제학적 조성물, 및 이의 알레르기성 질환의 예방 또는 치료를 위한 용도에 관한 것이다.

Description

약독화된 폐렴구균 균주를 포함하는 약제학적 조성물 및 이의 용도{PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING ATTENUATED STREPTOCOCCUS PNEUMOCOCCUS AND USES THEREOF}
본원은 약독화된 폐렴구균 균주를 포함하는 약제학적 조성물, 및 이의 알레르기성 질환의 예방 또는 치료를 위한 용도에 관한 것이다.
천식은 전 세계적으로 어린이와 어른 모두에서 가장 흔한 만성 질환 중 하나이며 (Anandan 등, 2010), 전 세계 천식 환자 수는 대략 3 억 명으로서 이로 인해 막대한 의료 비용이 지출되고 있다 (WHO, 2007). 전세계적으로 천식 환자 수는 매년 증가하여 2025 년까지 1 억 명 이상이 더 증가될 것으로 예측된다. 미국 질병 관리본부의 통계에 의하면 미국 천식환자 비율은 1980년 3.1%에서 2010년 8.4%까지 증가하였고 계속 증가 추세이다 (https://www.cdc.gov/asthma). 또한 70%의 천식환자가 알레르기를 갖고 있다 [GINA guidelines, 2016]. 2015년 한국에서의 천식 환자는 166 만명 (건강보험심사평가원 2015년 통계)이며, 우리나라 사람의 10 대 만성 질환 중 질병부담 순위 6 위에 해당한다.
천식 및 기타 알레르기성 질환의 발병은 서구 생활양식에서 비롯된 환경 변화 및 도시화 증가와 밀접한 관련이 있다 (GINA guidelines, 2016). 천식은 발병원인이 다양한 이질적인 질병이나 주로 염증으로 인해 야기된다. 천식 환자는 비슷한 증상을 나타내지만 그 작용 기전은 각각 다를 수 있다 (GINA guidelines, 2016; National Asthma Education and Prevention Program, 2007). 또한 기도의 염증 양상은 천식 종류에 따라 다르다 (GINA guidelines, 2016). 천식의 전형적인 병인 기전은 면역글로불린 E (IgE)가 매개되어 나타나는 호산구 기도 염증이며 병리학 및 천식 연구의 많은 연구 결과들이 Th2 관련 후천적 면역반응에 초점을 맞추어 왔다 (GINA guidelines, 2016). 그러나, 최근의 연구는 선천면역과 마이크로비옴, 및 체내의 미생물 등에 집중되고 있다 (Bjorksten 등, 2001; Kalliomaki 등, 2001; Penders 등, 2007; Hilty 등, 2010; Green 등, 2014; Ozturk 등, 2017).
미국 천식 및 알레르기 재단 (Asthma and Allergy Foundation of America, http://www.aafa.org/)에 의하면, 현재 사용되는 천식 관련 약물은 증세를 경감시켜 관리할 수 있을 뿐, 천식을 완치시킬 수는 없다. 천식의 특징은 알레르기성 과민반응 (airway hyper-responsiveness; AHR)으로 과도한 기관지 수축 반응이 일어나는 것이다. 비록 흡입 글루코코르티코스테로이드를 규칙적으로 사용하여 사망률이 지난 몇 년 동안 현저히 감소했지만, 아직도 매년 약 250,000 명이 천식으로 사망하고 있으며 세계적으로 천식으로 인한 부담이 상당히 크다 (Suissa 등, 2000). 천식은 발병 회수에 따라 경증 (한달에 1-2 회 발생), 중경증 (매주 1-2 회 발생), 및 중증 (매일 천식 발생)으로 분류되며 중증의 경우 3-4 개의 약을 매일 복용해야 하고, 경증의 경우에도 정기적인 약의 복용이 요구된다. 천식은 호흡기 염증으로 기관지가 수축되어 호흡이 곤란할 시에는 기도확장용 흡입제를 즉시 분무해야 한다. 또한 천식 환자 및 중증 천식 환자의 일부는 부신피질 호르몬에 대해 전혀 반응이 없어 임상적 효과를 경험하지 못해 질환으로 고생하거나 사망할 수도 있다 (Durham 등, 2011). 최근에 출시된 항 IL-5 제제는 4주에 한번 주사하여 천식증상을 완화시킬 수 있다. 그러나 천식을 완치시킬 수 있거나 예방할 수 있는 약물은 아직 개발되거나 보고된 바 없다.
Anandan C, Nurmatov U, van Schayck OC, Sheikh A. Is the prevalence of asthma declining? Systematic review of epidemiological studies. Allergy. 2010 Feb;65(2):152-67. Bjorksten B, Sepp E, Julge K, Voor T, Mikelsaar M. Allergy development and the intestinal microflora during the first year of life. J Allergy Clin Immunol. 2001;108(4):51620. Cho SH, Stanciu LA, Begishivili T, Bates PJ, Holgate ST, Johnston SL. Peripheral blood CD4+ and CD8+ T cell type 1 and type 2 cytokine production in atopic asthmatic and normal subjects. Clin Exp Allergy. 2002 Mar;32(3):427-33.. Choi SY, Tran TD, Briles DE, Rhee DK. Inactivated pep27 mutant as an effective mucosal vaccine against a secondary lethal pneumococcal challenge in mice. Clin Exp Vaccine Res. 2013 Jan;2(1):58-65. Durham A, Adcock IM, Tliba O.Steroid resistance in severe asthma: current mechanisms and future treatment. Curr Pharm Des. 2011;17(7):674-84. Ennis DP, Cassidy JP, Mahon BP. 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Preston JA, Thorburn AN, Starkey MR, Beckett EL, Horvat JC, Wade MA, O'Sullivan BJ, Thomas R, Beagley KW, Gibson PG, Foster PS, Hansbro PM. Streptococcus pneumoniae infection suppresses allergic airways disease by inducing regulatory T-cells. Eur Respir J. 2011 Jan;37(1):53-64. Suissa S, Ernst P, Benayoun S, Baltzan M, Cai B.Low-dose inhaled corticosteroids and the prevention of death from asthma.N Engl J Med. 2000 Aug 3;343(5):332-6. Takabayashi K, Libet L, Chisholm D, Zubeldia J, Horner AA. Intranasal immunotherapy is more effective than intradermal immunotherapy for the induction of airway allergen tolerance in Th2-sensitized mice. J Immunol 2003 Apr 1;170(7):3898-905. Thorburn AN, O'Sullivan BJ, Thomas R, Kumar RK, Foster PS, Gibson PG, Hansbro PM. Pneumococcal conjugate vaccine-induced regulatory T cells suppress the development of allergic airways disease. Thorax. 2010 Dec;65(12):1053-60. Thorburn AN, Foster PS, Gibson PG, Hansbro PM. 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현재 사용되는 천식약은 좁아진 기관지를 확장시키는 증상 완화제 (기관지 확장제)와 기관지 염증을 억제하여 천식 발작을 예방하는 질병 조절제 (항염증제)로 구분되나, 이들은 천식을 완치하거나 예방할 수는 없다. 따라서 본원에서는 천식을 포함하는 알레르기성 질환을 예방 또는 치료할 수 있는 신규한 수단으로서 폐렴구균을 포함하는 약제학적 조성물을 제공하고자 하였다. 특히, 폐렴구균을 백신 등의 약제학적 조성물에 사용시 독성이 강해 불활성화된 균을 사용하거나 균의 특정 성분만을 분리 정제하여 사용하였던 단점을 개선하기 위해, 충분히 약독화되어 인후 감염, 복강 내 주입 및 혈액 내 주입시에도 안전성을 확보할 수 있는 약독화 폐렴구균 균주를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하고자 하였다.
그러나, 본원이 해결하고자 하는 과제는 이상에서 언급한 과제로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본원에서는, pep27 유전자의 변이로 약독화된 폐렴구균 균주의, 알레르기성 호흡기 질환을 포함하는 다양한 알레르기성 질환의 예방 또는 치료를 위한 용도, 및 이를 위한 약제학적 조성물을 제공하고자 한다.
상술한 과제 해결 수단은 단지 예시적인 것으로서, 본 발명을 제한하려는 의도로 해석되지 않아야 한다. 상술한 예시적인 구현예 외에도, 도면 및 발명의 상세한 설명에 기재된 추가적인 구현예 및 실시예가 존재할 수 있다.
본원발명은, 폐렴구균 pep27 변이주를 이용하여 천식을 비롯한 알레르기 질환의 예방 내지 치료 방법을 제공할 수 있다. 특히, 폐렴구균 pep27 변이주의 접종에 의해 천식, 알레르기성 비염, 부비동염, 및 만성 폐색성 폐질환 등을 포함하는 알레르기성 호흡기 질환 외에도 두드러기, 결막염, 꽃가루 알레르기 및 아토피 등과 같은 다른 알레르기성 질환을 예방하거나 치료할 수 있다.
더욱이, 본원발명에 따른 폐렴구균 pep27 변이주는 충분히 약독화되어 있어 인후 감염, 복강 내 주입 및 혈액 내 주입시에도 안전성이 확보된다는 장점이 있다.
도 1은 본원의 일 실시예에 따른 Δpep27 변이주의 알레르기 질환 예방효과 실험의 순서도 (A) 및 다양한 알레르기 유발 사이토카인 분비 억제 효과를 나타내는 실험 결과 (B)이다.
도 2는 본원의 일 실시예에 따른 Δpep27 변이주의 알레르기 질환 예방효과를 보여주는 조직화학적 염색 결과이다.
도 3은 본원의 일 실시예에 따른 Δpep27 변이주의 알레르기 질환 치료효과 실험의 순서도 (A) 및 다양한 알레르기 유발 사이토카인 분비 억제 효과를 나타내는 실험 결과 (B)이다.
도 4는 본원의 일 실시예에 따른 Δpep27 변이주의 알레르기 질환 치료효과를 보여주는 조직화학적 염색 결과이다.
아래에서는 첨부한 도면을 참조하여 본원이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본원의 실시예를 상세히 설명한다. 그러나 본원은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다. 그리고 도면에서 본원을 명확하게 설명하기 위해서 설명과 관계없는 부분은 생략하였다.
본원 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함" 한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
본원 명세서 전체에서 사용되는 정도의 용어 "약", "실질적으로" 등은 언급된 의미에 고유한 제조 및 물질 허용오차가 제시될 때 그 수치에서 또는 그 수치에 근접한 의미로 사용되고, 본원의 이해를 돕기 위해 정확하거나 절대적인 수치가 언급된 개시 내용을 비양심적인 침해자가 부당하게 이용하는 것을 방지하기 위해 사용된다. 본원 명세서 전체에서 사용되는 정도의 용어 "~(하는) 단계" 또는 "~의 단계"는 "~ 를 위한 단계"를 의미하지 않는다.
본원 명세서 전체에서, 마쿠시 형식의 표현에 포함된 "이들의 조합"의 용어는 마쿠시 형식의 표현에 기재된 구성 요소들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 혼합 또는 조합을 의미하는 것으로서, 상기 구성 요소들로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 포함하는 것을 의미한다.
본원 명세서 전체에서, "A 및/또는 B" 의 기재는, "A, B, 또는, A 및 B" 를 의미한다.
본원 명세서 전체에서, "폐렴구균"은 폐구균 또는 폐렴쌍구균(Diplococcus pneumonia)이라고도 명명되는 그람양성(Gram-positive) 세균으로서, 시간이 지나 분열함에 따라 균들이 계속 이어져 사슬 모양이 되는 것이 관찰되어 연쇄상구균과로 분류되며, 폐렴의 주요 원인으로 알려져 있다.
본원 명세서 전체에서, "pep27" 은 27 개의 폴리펩타이드로 구성되어 있으며 vex 전달체(transporter)에 의해 분비되어 생장억제 및 세포 사멸(apoptosis)을 유도하는데, 구체적으로는 막-결합 히스티딘 단백질 카이네이즈(membrane-bound histidine protein kinase)인 vncS 및 세포질 효과기(cytoplasmic effector)인 반응 조절자(response regulator) vncR에 의해 발현이 조절되어 세포 사멸을 유도하는 것으로 알려져 있다(Novak et al., 1999). pep27 유전자 또는 그로부터 코딩되는 단백질은 폐렴구균의 혈청형 마다 다른 이름으로 명명되기도 하며, pep27의 유전자 서열 또는 이의 펩타이드 서열의 미차가 존재할 수 있으나, 상기 기술한 바와 같이 본 발명의 pep27 유전자는 실질적으로 pep27과 동일한 기능을 수행하는 유전자이면 혈청형에 제한되지 않고 이를 손상시킴으로서 본 발명의 약독화된 폐렴구균 균주를 제조할 수 있다. 바람직하게 상기 pep27 유전자와 실질적으로 동일한 기능을 수행하는 폐렴구균의 유전자를 모두 포함한다. 더욱 바람직하게 본 발명의 pep27 유전자는 서열번호 1로 표시되는 pep27 펩타이드의 아미노산을 코딩하는 유전자가 돌연변이됨으로써 손상될 수 있다.
본원 명세서 전체에서, "약독화"란 독성 있는 균주가 변형 전보다 덜 독성 있는 균주거나 약한 병원균이 되는 방식으로 변형되는 것을 의미하며, 이러한 균주는 숙주 안에서 여전히 복제 분열될 수 있는 동안, 임상적 질병을 유발할 수 있는 능력이 현저히 감소된 것을 말한다. 바람직하게 본 발명의 약독화된 균주는, 독성 또는 병원성이 백신용으로 투여를 허용할 수 있을 정도로 감소된 균주이며, 더욱 바람직하게는 균주가 숙주 내에서 여전히 복제할 수 있으면서도 임상적 질병을 유발할 수 없는 정도까지 약독화시키는 것을 의미한다. 또한 약독화 돌연변이는 본 발명의 약독화 돌연변이를 제조하기 위한 다양한 방법, 예를 들어 점 돌연변이, 연관된 바이러스 사이의 서열 교환, 또는 뉴클레오티드 결실에 의해 달성될 수 있다.
본원 명세서 전체에서, "돌연변이"는 유전자의 유전적 기능을 변화시키는 모든 행위를 의미하며, 구체적으로는 유전자의 돌연변이는 생물의 여러 가지 변이 중 유전자의 양적 또는 질적인 변화에 의해 생긴 변이를 말한다.
본원 명세서 전체에서, "알레르기"는 인체의 어떤 물질에 대한 과민증, 즉 외부로부터 들어온 물질에 대한 신체 면역계의 과도한 반응으로 유발되는 다양한 질환, 질병 또는 이상 상태를 의미한다. 본원의 조성물에 적용되는 알레르기 질환으로는, 바람직하게는, 제 Ⅰ 형 즉시형 과민반응 및 제 Ⅳ 형 지연형 과민반응이다. 제 Ⅰ 형 즉시형 과민반응은 기관지 천식, 비염, 아토피성 피부염, 결막염, 중이염, 두드러기 및 아나필라시 쇼크(anaphylatic shock)를 포함할 수 있고, 제 Ⅳ 형 지연형 과민반응은 접촉성 과민증, 접촉성 피부염, 세균 알레르기, 진균 알레르기, 바이러스 알레르기, 약물 알레르기, 갑상선염 및 알레르기성 뇌염을 포함할 수 있다. 제 Ⅰ 형 즉시형 과민반응은 2 단계로 나뉘는데 제 1 단계는 알레르겐의 체내 침입에 의하여 IgE 및 IgG1의 분비를 억제하고, IgG2a의 분비를 증가시키는 IL-12 및 IFN-γ를 생산하는 Th1 세포반응과 IL-4, IL-5 및 IL-13 등을 생산하는 Th2 세포반응의 균형이 Th2 쪽으로 기울어지게 되면 Th2의 과도한 면역반응으로 IL-4 및 IL-13 등이 분비되고 그 영향으로 B 세포가 생산한 IgE 특이항체들이 비만세포(mast cell) 및 호염기구(basophil)의 표면에 부착됨으로써 알레르기 발증이 준비된 단계이다. 이를 알레르겐에 감작 (sensitization) 되었다고 한다. 알레르기 발증의 제 2 단계는 초기반응과 후기반응으로 나뉘며, 초기반응은 알레르겐이 체내에 재침입하여 비만세포를 자극하고 탈과립 반응을 유발하여 이때 방출된, 히스타민, 지질대사물, 사이토카인 등에 의한 혈관확장 등이 일어나는 것이고, 후기반응은 해당 조직에 호중구, 호산구, 대식세포, Th2 세포, 호염기구 등이 침윤하여 활성화됨으로써 염증이 유발되어 아토피피부염, 비염, 천식 등을 일으키는 것이다.
본원 명세서 전체에서, "예방"이란 조성물의 투여에 의해 질환의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본원 명세서 전체에서, "치료"란 조성물의 투여에 의해 이미 유발된 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 되는 모든 행위를 의미한다.
본원 명세서 전체에서, "백신"이란 감염 질환을 예방하기 위한 면역을 위하여 쓰이는 항원으로서, 약독화시킨 미생물 또는 바이러스로 제조되며, 특정 감염증에 대해 인공적으로 면역원성을 획득하기 위하여 약화시키거나 사멸시킨 병원 미생물을 개체 내에 투여하는 것을 의미한다. 백신에 의해 자극을 받으면 개체 내의 면역 시스템이 작동하여 항체를 생성하게 되고, 그 감수성을 유지하다가 재감염이 일어나는 경우, 빠른 시간 내에 항체를 효과적으로 생성함으로써 질환을 극복할 수 있게 된다. 다만 본원발명에 따른 약독화된 폐렴구균을 포함하는 백신은 면역관용 원리에 의하여 기존의 백신과 달리 특정 항원 성분에 대한 방어만이 아니라 바이러스 및 세균 감염성 질환을 포함하는 광범위한 질병의 예방 및 치료 효과를 가질 수 있다.
본원 명세서 전체에서, "ermB" 는 매크로라이드(macrolide)에 내성을 가질 수 있게 하는 유전자를 의미하며, 매크로라이드는 폐렴구균의 치료에 있어서 페니실린의 대체 약제로 사용되어져 온 것으로 에리스로마이신(erythromycin), 클라리스로마이신(clarithromycin), 아지스로마이신(azithromycin) 등이 여기에 속한다.
이하, 본원의 약독화된 폐렴구균 균주를 포함하는 약제학적 조성물, 및 이의 알레르기성 질환의 예방 또는 치료를 위한 용도에 대하여 구현예 및 실시예와 도면을 참조하여 구체적으로 설명하도록 한다. 그러나, 본원이 이러한 구현예 및 실시예와 도면에 제한되는 것은 아니다.
본원의 제 1 측면은, 약독화된 폐렴구균 균주를 포함하는, 알레르기성 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공할 수 있다. 예를 들어, 상기 약제학적 조성물은 백신 조성물을 포함할 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 약독화된 폐렴구균 균주는 pep27 유전자의 일부 또는 전부가 결실된 것일 수 있고, 예를 들어, 서열번호 1로 표시되는 pep27 유전자 핵산서열의 1번 내지 53번이 결실된 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 약독화된 폐렴구균 균주는 서열번호 1로 표시되는 pep27 유전자 핵산서열의 1번 내지 53번의 결실 및 ermB 카세트로 치환한 돌연변이를 포함하는 약독화된 폐렴구균 균주일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 예를 들어, 상기 약독화된 폐렴구균 균주는 대한민국 등록특허 제10-1252911호에 개시된 pep27 돌연변이를 포함하는 약독화된 폐렴구균 균주일 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 알레르기성 질환은 천식, 알레르기성 비염, 부비동염, 및 만성 폐색성 폐질환으로부터 선택되는 알레르기성 호흡기 질환일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 알레르기성 질환은 두드러기, 결막염, 꽃가루 알레르기 및 아토피로부터 선택되는 알레르기성 질환 외에도, 식품알레르기, 알레르기성 중이염, 아나필라시 쇼크, 접촉성 과민증, 알레르기성 접촉성 피부염, 세균 알레르기, 진균 알레르기, 바이러스 알레르기, 약물 알레르기 및 알레르기성 뇌염 등도 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 약제학적 조성물은, 면역과민반응과 연관된 Th1 사이토카인 및/또는 Th2 사이토카인의 생성을 억제할 수 있다. 여기서 상기 Th1 사이토카인은 인터페론-감마 (IFN-γ), 종양괴사인자알파 (TNF-α) 및 인터류킨-12 (IL-12)로부터 선택될 수 있으며, 상기 Th2 사이토카인은 인터류킨-4 (IL-4), 인터류킨-5 (IL-5) 및 인터류킨-13 (IL-13)로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
상기 Th1 사이토카인 및/또는 Th2 사이토카인의 수준은, 폐기관지 세척액 (폐포액) 또는 혈청과 같은 체액으로부터 측정될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 약제학적 조성물은 폐, 비장, 혈액 또는 뇌에 비침습성일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 상기 "비침습성"이란 직접적으로 약제학적 조성물이 투여되는 기관, 조직, 및 세포 이외에 전신의 다른 영역으로 약제학적 조성물이 침투되지 않거나, 혹은 침투되더라도 빠르게 제거되는 것을 의미하며, 이는 약제학적 조성물이 투여되는 기관, 조직, 및 세포 이외에 전신의 다른 영역으로 침투되어 인체에 손상을 미치는 침투성과 반대되는 의미이다.
용어 "투여"란 어떠한 적절한 방법으로 대상에게 본원발명의 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 본원발명의 조성물의 투여경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 경구 투여, 복강 내 투여, 정맥 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여, 강내 투여, 경막 내, 점막 내 투여가 이루어질 수 있으나, 이에 제한되지는 않을 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 약제학적 조성물은 복강내 또는 점막내로 투여하기 위한 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 상기 점막의 위치는 특별히 제한되지 않으며, 당업계에서 점막 투여를 위해 사용되는 신체 위치들. 예를 들어 코 점막, 구강 내 점막, 눈 점막, 귀 점막, 생식기 점막, 인후 점막, 인두 점막, 기도 점막, 기관지 점막, 폐 점막, 위 점막, 장관 점막, 직장 점막 등으로부터 통상의 기술자가 적절히 선택할 수 있다.
상기 약제학적 조성물의 제형은, 예를 들어 겔제(젤리제), 크림제, 연고제, 경고제 등의 반고형제, 액제, 산제, 세립제, 과립제, 필름제, 정제, 구강 내 붕괴정 등의 고형 제제, 반고형 제제, 에어졸제 등의 점막용 스프레이제, 및 흡인제 등으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 또한, 상기 약제학적 조성물이 인간 또는 동물의 점막에 투여되는 경우, 상기 반고형 제재 및 고형 제제는 체액 및/또는 체온에 의하여 용해되는 것일 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 약제학적 조성물은 인후 점막내로 투여하기 위한 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 인후 점막을 통한 백신화는 예를 들어 에어로졸 또는 점적 전달 시스템 형태를 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원발명에 따른 약제학적 조성물을 점막으로 투여하는 경우, 기존에 주사제로 피하에 투여해야 하던 불편을 없앨 수 있을 뿐만 아니라, 주사제로의 투입에 특히 고통을 겪고 있는 영유아에게 투여하기에 유리할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 본원발명에 따른 약제학적 조성물을 투여할 수 있는 개체는 제한이 없으며, 랫트, 마우스, 가축, 인간 등의 포유동물을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다. 본원발명에 따른 조성물의 유효 투여량의 범위는 성별, 체표면적, 질환의 종류 및 중증도, 연령, 약물에 대한 민감도, 투여경로 및 배출비율, 투여시간, 치료기간, 표적세포, 발현 수준 등 기타 의학 분야에 잘 알려진 다양한 요인에 따라 달라질 수 있으며, 당 분야의 전문가들에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본원의 일 구현예에 따르면, 상기 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 면역 보조제를 추가적으로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원발명의 약제학적 조성물에 포함될 수 있는 담체로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
본원발명에서 사용될 수 있는 면역보조제로는 당업계에서 통상적으로 사용되는 면역보조제가 제한 없이 사용될 수 있으며, 상기 면역보조제는 cholera toxin binding unit, aluminum salts, lipid emulsion (MF-59), synthetic detergent (Tween), microspheres, liposomes, mucoadhesive polymers 등을 들 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니며, 이 분야의 새로운 제형이 개발되고 있는바, 이들 또한 사용될 수 있다.
본원발명에 따른 약제학적 조성물을 제형화할 경우 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
예를 들어, 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되고, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있으며, 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있으나 이에 제한되지 않을 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함될 수 있으며, 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 오일, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있으나 이에 제한되지 않을 수 있다.
이하 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 하나, 하기의 실시예는 단지 설명의 목적을 위한 것이며 본원의 범위를 한정하고자 하는 것은 아니다.
[실시예]
1. 재료 및 방법
1.1. 약독화된 폐렴구균 균주 THpep27
Δpep27 폐렴구균 균주 (THpep27, D39Δpep27::Cheshire)는 Choi SY 등 (Inactivated pep27 mutant as an effective mucosal vaccine against a secondary lethal pneumococcal challenge in mice. Clin Exp Vaccine Res. 2013)의 문헌에서 보고된 균주이며, 대한민국 등록특허 제10-1252911호에 개시된 pep27 돌연변이 폐렴구균 균주에서 선별을 위한 에리스로마이신 내성 마커를 가지지 않는다는 것을 제외하고는 동일한 균주이다.
선택을 위한 일시적 마커로 사용할 수 있는 에리스로마이신 내성 마커 (ermAM)를 갖는 Cheshire 카세트 (Genbank accession No. FJ981645)를 Donald Morrison 박사 (University of Illinois of Chicago)로부터 얻은 프라이머 (5'-TGG CTT ACC GTT CGT ATA G-3' (서열번호 2)과 5'-TCG ATA CCG TTC GTA TAA TGT-3' (서열번호 3))를 이용하여, 상류 및 하류 서열을 증폭하는 프라이머 (5'-TCT CTA TCG GCC TCA AGC AG-3' (서열번호 4)과 5'-CTA TAC GAA CGG TAA GCC A GAT TTT CAC CAC TGC TTT CG-3' (서열번호 5) 및 5'-ACA TTA TAC GAA CGG TAT CGA AAG GCC AGC AAG AGA CTA-3' (서열번호 6)과 5'-CTG CGA GGC TTG CAC TGT AG-3' (서열번호 7)) 로 D39 게놈 DNA를 주형으로 이용하여 PCR에 의한 중합효소 연쇄반응 (PCR)으로 연결하였다. 이어서, 연결된 생성물을 D39로 형질전환시켜 pep27 돌연변이체를 생성시켰다.
체셔 (Cheshire) 카세트 절단은 1% L-후코스(fucose) (Sigma, St. Louis, MO, USA)를 첨가하여 유도하였다. 후코스-처리된 배양물을 THY 혈액 한천배지에 도말하여 단일 콜로니를 얻었다. 각 콜로니에서 체셔 카세트의 존재는 다음 프라이머를 사용하여 PCR로 확인하였다: 5´-TCT CTA TCG GCC TCA AGC AG-3´ (서열번호 8) 과 5´-CTG CGA GGC TTG CAC TGT AG-3´ (서열번호 9). 돌연변이체 (THpep27) 서열은 Pep27 항체로 면역 블롯 분석뿐만 아니라 뉴클레오타이드 시퀀싱 (Cosmo, Seoul, Korea)으로도 확인하였다 (미도시).
RNA 수준에서 THpep27 돌연변이체를 확인하기 위해, 초기 대수기에 있는 세균으로부터 RNA를 이전에 기술된 뜨거운 페놀 방법을 사용하여 분리하였다. DNA를 DNase I (Takara, Tokyo, Japan)으로 제거한 후, 무작위 프라이머 (Takara)를 사용하여 1 마이크로그램의 세균 RNA를 cDNA로 역전사 시켰다. 역전사 PCR은 권장 프라이머를 사용하여 제조자의 지침 (Super Bio, American Building Restoration Products Inc., Franklin, WI, USA)에 따라 수행하였다.
제조된 THpep27 돌연변이 폐렴구균 균주는 37℃의 THY 브로스 (0.5% 효모 추출물을 함유한 Todd-Hewitt 브로스; Difco Laboratories)에서 OD550 값이 0.3 (1 × 108 CFU/ml)이 될 때까지 배양하였다. 배양된 균을 PBS로 세척한 후, 여과된 PBS를 이용하여 최종 농도 1 × 108 CFU/50 ㎕ 로 희석하여 면역화에 사용하였다.
1.2. 실험동물
BALB/c 암컷 생쥐 (5 주령, 오리엔트, 한국)를 구입 후 7 일 동안 동물실에서 순화시켜 안정시킨 후 사용하였다. 케타민 (케타민 주사, 유한양행, 한국)과 실라진 (럼푼, Bayer Korea Ltd, 한국)을 4:1로 혼합한 후 PBS로 두 배 희석한 용액 100 ㎕를 생쥐에 복강 주사하여 마취시켰다. 챌린지(challenge) 및 백신 투여 전에 마취하였으며 실험동물을 이용한 실험은 성균관대학교 동물 윤리위원회의 가이드라인에 의거하여 진행되었다.
1.3. Δpep27 돌연변이체의 천식 예방 효과 측정
1) 생쥐를 3 군 (n=7/군) 으로 나누어, 멸균수 (PBS)를 제공한 정상군, OVA (Ovalbumin)로 천식을 유도한 후 멸균수를 제공한 천식 유도군, 및 pep27 변이주 (Δpep27) 백신 투여 후 천식 유도군으로 구분하였다.
2) 실험 시작 0 일, 7 일, 14 일째에 생쥐를 마취시키고 1 × 108 CFU/50 ㎕ 의 Δpep27 을 인후 (I.N) 접종하여 면역화 하였다. 실험 시작 38 일과 49 일째에 50 ㎍ OVA (Albumin from chicken egg white, Sigma Chemical Co., USA)와 2 mg Alum (Aluminum hydroxide hydrate, Thermo Co., USA)을 100 ㎕ (0.9% 식염수, pH 4.0, 다인바이오, 한국)에 첨가하고 4 시간 동안 4℃에서 볼텍싱하여 용해시켜 제조한 감작액 100 ㎕을 복강 내에 주입하여 감작시켰다. 이후 59 일부터 64 일째까지 6 일 동안 매일 생리식염수에 OVA을 0.4 ㎎/㎖이 되도록 녹여 25 ㎕를 인후 양쪽에 각각 12.5 ㎕씩 점적하여 챌린지하여 (최종 주입량 OVA 10 ㎍/마리) 천식을 유도하였다. 마지막 OVA 챌린지 24 시간 후 실험동물을 희생하여 폐 기관지 세척액 (bronchoalveolar lavage fluid, BALF)을 채취하여 사이토카인을 측정하고, 폐 조직은 분리하여 고정시킨 후 헤마토실린-에오신(Hematoxylin-eosin, H&E) 염색을 수행하였다 (도 1).
1.4. 천식 치료 효과 측정
1) 생쥐를 3 군 (n=7/군)으로 구분하여 멸균수 (PBS)를 제공한 정상군, OVA를 투여한 천식군 (천식 유도군), 및 OVA 투여 후 Δpep27 변이주 백신 투여군 (천식 치료 실험군)으로 구분하였다.
2) 천식 유도군: 구체적으로, 실험 시작 0 일 및 10 일째에 정상군을 제외한 모든 군에 50 ㎍ OVA (Albumin from chicken egg white, Sigma Chemical Co., USA)와 2 mg Alum (Aluminum hydroxide hydrate, Thermo Co., USA)를 100 ㎕의 0.9% 식염수) pH 4.0, 다인바이오, 한국)에 첨가하고 4 시간 동안 4℃에서 볼텍싱하여 제조한 감작액을 복강으로 100 ㎕ 주사하여 감작시켰다. 이후, 10 일이 경과한 20 일부터 25 일까지 6 일 동안, 생리식염수에 OVA를 0.4 ㎎/㎖이 되도록 녹인 용액 25 ㎕ (최종 주입량 10 ㎍/마리)를 양쪽 인후 (Intranasal; I.N)에 12.5 ㎕ 씩 챌린지하였다. 정상군의 경우 생리식염수만 투여하였다 (도 3).
3) 천식 치료 실험군: 상기 2)에서와 같은 OVA 챌린지 일주일 후 매주 1 회씩 1 × 108 CFU/50 ㎕의 Δpep27를 3 회 인후 접종하여 생쥐를 면역화 하였다. 3 주의 치료기간 동안 백신 투여 전 3 일부터 OVA 10 ㎍/25 ㎕를 1 주일에 3 회 (총 9 회) I.N. 챌린지하여 천식을 유도하였다. 마지막 백신 투여 1 주일 후에 마지막 OVA 챌린지를 하고, 24 시간 후에 생쥐를 희생하였다 (도 3).
1.5. 조직화학적 검사
폐 및 기관지 조직을 분리하여 10% (v/v) 포름알데히드 용액으로 고정한 후 파라핀 고정(paraffin block)을 수행하였다. 상기 파라핀 고정된 조직을 4 ㎛ 의 두께로 자른 후, H&E 염색을 실시하였다. H&E 염색된 조직은 광학현미경을 이용하여 사진을 촬영하였다. 조직화학적 검사는 KNOTUS Co., Ltd. (Korea)에 의뢰하여 실시하였다.
1.6. 사이토카인 분석
폐 기관지 세척액 (bronchoalveolar lavage fluid, BALF)을 채취하여 사이토카인 수준을 측정하였다. 구체적으로, 생쥐의 기도를 열고 폐기관지 세척용 PBS 완충액이 들어있는 카테터를 연결한 후, PBS 완충액 1.0 ㎖을 폐기관지에 천천히 밀어 넣고 0.9 ㎖ 정도를 뽑아낸 후 그대로 다시 밀어넣고 뽑아내는 과정을 두 번 더 반복하여 총 0.8 ㎖ 의 폐기관지 세척액을 획득하였다. 상기 채취한 폐기관지 세척액을 4℃, 3,000 rpm에서 10 분간 원심분리한 후, 상층액을 사이토카인 측정용 폐기관지 세척액으로 분리하여 사용할 때 까지 -70℃에서 냉동 보관하였다. 폐기관지 세척액의 사이토카인 수준은 ELISA 키트 (ELISA Ready-SET-Go!, eBioscience, San Diego)를 이용하여 측정하였다.
1.7. 통계
실험 데이터는 평균 ± 표준 편차로 나타냈다. 사이토카인 측정에 대한 통계 처리는 One-Way ANOVA를 통해 수행되었다. 각 군의 비교는 본페로니 검정 (Bonferroni test)을 이용하여 수행되었다 (*,P≤0.05; **,P≤0.01; ***,P≤0.001). P <0.05이면 유의한 차이가 있다고 판단하였다.
2. 결과
2.1. Δpep27 돌연변이체의 천식 예방 효능
2.1.1. Δpep27 백신 접종에 의한 천식으로 유도되는 사이토카인 분비 억제
폐포에서의 사이토카인 수준을 ELISA 키트를 이용해 측정하였을 때 Δpep27 백신 접종군은 천식군보다 알레르기 유발 사이토카인 (Th2 cytokine; Cho 등, 2002) IL-4, IL-5, IL-13의 수준이 각각 현저히 감소하여 정상 대조군과 유사한 수준으로 감소되었다 (도 1).
2.1.2. Δpep27 백신 접종에 의한 천식에서의 기도 부종 억제
기도 알레르기 질환은 알레르기 유발 물질 투여시 염증으로 인해 기도가 현저히 두꺼워진다 (도 2, 천식군). 염증 (Hematoxylin-eosin, HE) 및 잔세포(goblet cells)(Periodic acid Schiff, PAS)를 조직학적 면역화학적 염색하여 400배로 관찰하였을 때, Δpep27 백신 투여군은 천식군에 비해 현저히 염증이 억제되어 대조군과 유사한 수준을 나타내었다 (도 2, 백신 투여군).
2.2. Δpep27 돌연변이체의 천식 치료 효능
2.2.1. Δpep27 백신의 천식 관련 사이토카인 억제에 의한 치료 효능
Δpep27 백신을 1 주일 간격으로 3 회 접종하고 최종 면역화 1 주일 후에 생쥐의 폐포액에서의 사이토카인 수준을 정량하였을 때 (도 3의 A), 천식군에서는 Th2 사이토카인 (IL-4, IL-5, IL-13) 수준이 현저히 증가되었으나 백신 투여군에서는 정상군과 유사한 수준을 나타내었다 (도 3의 B).
2.2.2. Δ pep27 백신 투여시 폐의 염증 억제에 의한 치료 효능
도 4과 같이 실험한 생쥐의 폐를 Hematoxylin-eosin (HE) 염색하여 관찰하였을 때 Δpep27 백신 투여군 (C)은 천식 유발군 (B)에 비해 현저히 염증이 현저히 억제되었다. 특히 백신 투여군은 기관지와 혈관 주변의 염증세포 침윤 및 점액 분비가 억제되어 정상 대조군 (A)과 거의 유사한 양상을 나타내었다 (도 4).
3. 토론
현재까지 미생물을 이용한 천식 예방/치료에 대한 논문은 불활성화 Mycobacterium phlei 흡입시 중등 정도의 어린이 천식환자에서 기관지 과민반응이 억제되고 (Ming 등, 2013) 불활성화된 Mycobacterium phlei 흡입으로 IL-23R 발현이 억제되어 IL-17 생성 γδT 세포 매개 기도 염증이 억제됨으로써 천식 치료에 도움이 되었음에 관한 것뿐이었다 (Ming 등, 2017). 또한 약독화 백일해 균주 BPZE1를 생쥐 인후에 접종하여 알레르기성 기도 염증과 접촉성 피부 과민반응을 감소시켜 이들 질환의 예방 및 치료에 사용될 수 있음이 보고된 바 있으며 (Li 등, 2012), 생쥐모델에서 디프테리아와 파상풍 약독화 독소 단독 또는 백일해 전균 백신과 함께 접종할 경우 알레르기에 의해 유도되는 Th2 면역반응을 억제하여 기도 염증이나 과민반응 억제에 이용될 수 있음이 보고된 바 있다 (Grber 등, 2006).
또한, 폐렴구균을 감염시키면 조절 T-세포를 유도하여 알레르기성 기도 질환을 억제하였다 (Preston 등, 2011). 뿐만 아니라 현재 시판되고 있는 폐렴구균 접합 백신을 인후 접종하면 기도 알레르기 질환으로 진행되는 것을 억제하였으나 근육 주사 시에는 효과가 없었다 (Thorburn 등, 2010). 따라서 폐렴구균 성분인 다당류와 약독화 독소를 기도에 주입하였을 때 알레르기성 기도 질환을 억제하고 알레르기성 기도 질환 발생을 억제하는 조절 T 세포를 유도하여 알레르기 유발 물질에 대한 면역반응을 회피하고 억제함을 밝혔다 (Thorburn 등, 2013). 그러나 세균을 이용한 천식의 예방 및 치료방법은 약독화된 백일해 균을 제외하고는 대부분 독성이 강해 모두 불활성화된 균을 사용하거나 특정 성분을 사용하여야만 했다. 또한 인후 접종 방법이 피하 접종 방법보다 기도 알레르기 반응을 억제에서 더 효과가 높다고 보고된 바 있다 (Takabayashi 등, 2003).
백일해 균 감염은 생쥐 알레르기 기도 질환 모델에서 Th1 반응을 유도하여 (IFN-γ 수준 증가) 염증을 악화시킬 수도 있었다 (Ennis 등, 2004; Cho 등, 2003; Kumar 등, 2004). 따라서 IFN-γ 수준이 유도되지 않고 알레르기 반응을 억제하는 것이 필요하다. 폐렴구균 사균을 기도에 주입하여 천식 예방 효과를 측정하였을 때 IL-5, IL-13 수준이 유의성있게 억제되지 않았고 Th1 반응을 유도하여 IFN-γ 수준이 유의성있게 증가되었다 (Preston 등, 2007; Gibson 등, 2012; 미국 특허 8,226,959). 즉 Th1 반응을 유도하여 Th2 반응이 억제되더라도 염증이 악화될 가능성을 배제할 수 없었다. 따라서 Gibson 등 (2012; 미국 특허 8,226,959) 은 폐렴구균 성분을 분리하여 알레르기성 기도 질환 억제 효능에 초점을 맞추었다.
그러나 본원발명의 약독화된 Δpep27 변이주를 사용할 경우 Th2 사이토카인 (IL-13 및 IL-4)뿐만 아니라 Th1 사이토카인 (IFN-γ)의 수준도 유의성 있게 억제하여 정상 수준을 나타내었으며, 조직학적인 소견으로도 정상군과 유사하였다. 따라서, 본원발명에 따른 약독화된 폐렴구균 균주를 포함하는 약제학적 조성물은 종래의 백신 또는 의약에 비해 더욱 안전한 알레르기 질환 예방 내지 치료제가 될 수 있을 것으로 기대된다.
전술한 본원의 설명은 예시를 위한 것이며, 본원이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본원의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며, 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.
본원의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본원의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
<110> SUNGKYUNKWAN UNIVERSITY Foundation for Corporate Collaboration <120> PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING ATTENUATED STREPTOCOCCUS PNEUMOCOCCUS AND USES THEREOF <130> 1 <160> 17 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 84 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pep27 of Streptococcus pneumoniae D39 <400> 1 atgagaaagg aatttcacaa cgttttatct agtgatcagt tacttacaga caaaaggcca 60 gcaagagact ataatagaaa atag 84 <210> 2 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer 1 <400> 2 tggcttaccg ttcgtatag 19 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer 2 <400> 3 tcgataccgt tcgtataatg t 21 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer 3 <400> 4 tctctatcgg cctcaagcag 20 <210> 5 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer 4 <400> 5 ctatacgaac ggtaagccag attttcacca ctgctttcg 39 <210> 6 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer 5 <400> 6 acattatacg aacggtatcg aaaggccagc aagagacta 39 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer 6 <400> 7 ctgcgaggct tgcactgtag 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer 7 <400> 8 tctctatcgg cctcaagcag 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer 8 <400> 9 ctgcgaggct tgcactgtag 20

Claims (13)

  1. 약독화된 폐렴구균 균주를 포함하는, 알레르기성 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 약독화된 폐렴구균 균주는 pep27 유전자의 일부 또는 전부가 결실된 것인, 약제학적 조성물.
  3. 제 2 항에 있어서,
    상기 약독화된 폐렴구균 균주는 서열번호 1로 표시되는 pep27 유전자 핵산서열의 1번 내지 53번이 결실된 것인, 약제학적 조성물.
  4. 제 1 항에 있어서,
    상기 알레르기성 질환은 천식, 알레르기성 비염, 부비동염, 및 만성 폐색성 폐질환으로부터 선택되는 알레르기성 호흡기 질환인, 약제학적 조성물.
  5. 제 1 항에 있어서,
    상기 알레르기성 질환은 두드러기, 알레르기성 결막염, 꽃가루 알레르기, 아토피, 식품알레르기, 알레르기성 중이염, 아나필라시 쇼크, 접촉성 과민증, 알레르기성 접촉성 피부염, 세균 알레르기, 진균 알레르기, 바이러스 알레르기, 약물 알레르기 및 알레르기성 뇌염로부터 선택되는 것인, 약제학적 조성물.
  6. 제 1 항에 있어서,
    Th1 사이토카인의 생성을 억제하는, 약제학적 조성물.
  7. 제 6 항에 있어서,
    상기 Th1 사이토카인은 인터페론-감마 (IFN-γ), 종양괴사인자알파 (TNF-α) 및 인터류킨-12 (IL-12)로부터 선택되는 것인, 약제학적 조성물.
  8. 제 1 항에 있어서,
    Th2 사이토카인의 생성을 억제하는, 약제학적 조성물.
  9. 제 8 항에 있어서,
    상기 Th2 사이토카인은 인터류킨-4 (IL-4), 인터류킨-5 (IL-5) 및 인터류킨-13 (IL-13)로부터 선택되는 것인, 약제학적 조성물.
  10. 제 1 항에 있어서,
    폐, 비장, 혈액 또는 뇌에 비침습성인, 약제학적 조성물.
  11. 제 1 항에 있어서,
    복강내 또는 점막내로 투여하기 위한, 약제학적 조성물.
  12. 제 11 항에 있어서,
    인후 점막내로 투여하기 위한, 약제학적 조성물.
  13. 제 1 항에 있어서,
    약제학적으로 허용가능한 담체 또는 면역 보조제를 추가적으로 포함하는, 약제학적 조성물.
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