KR20190030397A - Cosmetic Composition Comprising Extracts of Pinecone of Pinus sylvestris - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 구주소나무(Pinus sylvestris) 솔방울 추출물을 유효 성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. The invention Scots pine (Pinus sylvestris ) pine cone extract as an active ingredient.
사람의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리· 화학적인 변화가 일어난다. 그 원인으로는 크게 내적인 노화 (intrinsic aging)와 광노화 (photo-aging)로 구분되며 이에 관한 연구가 활발히 이루어져 왔다. 자외선, 스트레스, 질병 상태, 환경 인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 자유라디칼이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. A variety of physical and chemical changes occur in human skin during the aging process. The cause of this phenomenon is divided into intrinsic aging and photo-aging. Free radicals can be caused by activation of ultraviolet rays, stress, disease state, environmental factors, wounds, and aging. When such state is deepened, the antioxidant defense network existing in the living body is destroyed, And aging.
좀 더 구체적으로 말하자면, 피부의 주요 구성 물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부 노화 현상이 생겨나는 것이다. 특히, 단백질의 산화는 피부의 결합 조직인 콜라겐 (collagen), 히아루론산 (hyaluronic acid), 엘라스틴 (elastin), 프로테오글리칸 (proteoglycan), 피브로넥틴 (fibronectin) 등이 절단되어 심한 과다 염증 반응과 피부의 탄력에 지장을 주고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역 기능 저하의 사태에 이르게 된다. More specifically, lipids, proteins, polysaccharides and nucleic acids, which are major components of the skin, are oxidized to destroy skin cells and tissues, resulting in skin aging. In particular, the oxidation of proteins can cause collagen (collagen), hyaluronic acid, elastin, proteoglycan, fibronectin, and the like that are severely hyperinflammatory reactions and skin elasticity If this gets worse, DNA mutations can lead to mutations, cancer, and immune deficiency.
그러므로 신체의 대사 과정 중 발생하는 자유라디칼이나 자외선 조사, 염증 반응에 의해 매개되어 발생하는 자유라디칼을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진 대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부는 빠르게 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다. Therefore, it is necessary to protect the cell membrane by destroying the free radicals mediated by free radicals, ultraviolet rays, and inflammation that occur during the metabolism of the body, and to regenerate already damaged cells by active metabolism, Can quickly recover and maintain healthy skin.
노화에는 이러한 자유라디칼 뿐만 아니라 콜라겐 분해효소인 기질 금속 단백질 분해 효소 (Matrix Metalloproteinase; MMP)라는 효소도 관여한다. 즉, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나, 노화가 진행되면서 콜라겐 합성이 감소하고, 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한, 자외선 조사에 의해 이러한 분해 효소가 활성화되기도 한다. Aging involves not only these free radicals, but also enzyme called matrix metalloproteinase (MMP), a collagenase. That is, synthesis and degradation of extracellular matrix such as collagen in vivo are appropriately controlled, but collagen synthesis is reduced as aging progresses, and expression of matrix metalloproteinase (MMP), an enzyme that degrades collagen, is promoted, And the wrinkles are formed. These degrading enzymes are also activated by ultraviolet irradiation.
그러므로, 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다. 이제까지 화장품의 소재로서 사용된 원료들은 단순히 효소 활성만을 억제하는 것이 대부분이었다. 이에 세포내 자연노화와 광노화에 의해 그 발현이 유도되는 MMP 발현량 및 활성을 조절하고자 하였다. Therefore, there is a demand for development of a substance capable of modulating MMP expression induced in the cell or inhibiting its activity. Until now, the raw materials used as cosmetic materials mostly inhibited only the enzyme activity. Therefore, we tried to control the amount and activity of MMP expression induced by intracellular natural aging and photoaging.
한편, 색소 침착에 의한 피부 변화가 생긴다. 피부색을 결정하는 인자에는 기본적으로 인종과 지역, 성별, 나이에 따른 차이를 배제하면 기미, 주근깨와 자외선 노출로 인한 태닝과 같은, 부분 또는 전체적인 색소 침착, 그 외에 여드름 및 흉터, 각질의 분포 상태와 혈액 순환, 스트레스, 건강 상태 등이 있다. 이상의 인자들 가운데에서도 가장 중요한 인자는 색소 침착이다. On the other hand, skin changes due to pigment deposition occur. The factors that determine skin color are basically the partial or total pigmentation such as stain, freckle and tanning due to ultraviolet exposure, and the distribution of acne and scars and keratin Blood circulation, stress, and health. The most important factor among these factors is pigmentation.
피부색에 영향을 주는 색소로는 멜라닌, 멜라노이드, 카로틴, 헤모글로빈 등이 있는데, 이중 가장 중요한 것은 멜라닌으로서, 이 멜라닌의 생합성에 영향을 미치는 가장 큰 요인은 자외선과 체내 호르몬 분비 정도이다. Melanin, melanoid, carotene and hemoglobin are the most important factors affecting skin color. Among them, melanin is the most important factor affecting the biosynthesis of melanin.
멜라닌은 자외선을 흡수 또는 산란시켜 자외선으로부터 피부가 손상되는 것을 방지하는데 큰 역할을 하는데, 특별한 최대 흡수 파장이 없고 전 영역의 빛을 흡수한다. 또한 활성 산소종을 제거하는 기능이 탁월하나, 때로는 멜라닌 자체가 활성 산소를 발생시키기도 하며, 멜라닌 구조 내의 카테콜이나 퀴논에 의하여 다른 물질을 환원시키거나 산화시키고, 멜라닌 자체가 자유라디칼의 성질을 나타내기도 한다. Melanin absorbs or scatters ultraviolet light and plays a major role in preventing damage to the skin from ultraviolet rays. It does not have a specific maximum absorption wavelength and absorbs light in all areas. In addition, it has excellent ability to remove reactive oxygen species, sometimes melanin itself generates active oxygen, and other substances are reduced or oxidized by catechol or quinone in the melanin structure, and melanin itself shows free radical properties Pray.
멜라닌의 생합성은 아미노산의 일종인 티로신이 멜라닌 형성 세포의 멜라노좀에서 티로시나제에 의해 산화되어 디하이드록시 페닐알라닌 (dihydroxy phenylalanine)으로 전환되는 것을 시작으로 계속되는 일련의 산화 과정을 거쳐 갈색 (pheomelanin), 흑색 (eumelanin)의 중합체로 형성된다. The biosynthesis of melanin begins with the conversion of tyrosine, an amino acid, into melanosomes of melanocyte-forming cells by tyrosinase to dihydroxyphenylalanine, followed by a series of oxidation steps to produce pheomelanin, eumelanin.
이러한 생합성 과정은 멜라노좀이라는 특수한 형태의 갈색 세포 내 소기관에서 진행되며 멜라닌 과립을 포함한 멜라노좀은 핵 주변 부위에서 수지상 돌기 끝부분으로 이동, 각질 세포의 식세포 작용에 의해 세포질 내로 이동하고 이들은 각질 세포의 핵 주변에 축적된다. This biosynthesis process is carried out in a special form of melanocyte in the brown intracellular organelle. The melanomas, including melanin granules, migrate from the nucleus to the tip of the dendritic process, and migrate into the cytoplasm by phagocytosis of keratinocytes. It accumulates around the nucleus.
멜라닌의 합성과 멜라노좀의 수, 주위의 각질 세포로의 이동은 부분적으로 호르몬과 자외선 등에 영향을 받고 일차적으로는 유전적인 영향을 크게 받는다. 그 밖에 티로시나제의 발현 및 멜라닌의 합성, 전송에 관여하는 세포내 조절인자인 싸이토카인 (cytokine), 구리, 아연, 철 등의 금속 이온 및 인터페론, 프로스타글란딘, 히스타민 등이 관여하는 것으로 알려져 있다. The synthesis of melanin, the number of melanosomes, and the migration to keratinocytes in the periphery are partially affected by hormones and ultraviolet rays, and are primarily affected by genetics. In addition, it is known that interleukins, prostaglandins, histamines, and the like are involved in the expression of tyrosinase and cytokine, which is an intracellular regulator involved in the synthesis and transmission of melanin, and metal ions such as copper, zinc and iron.
이미 아스코르빈산, 하이드로퀴논, 코직산, 알부틴 및 일부의 추출물 등이 티로시나제 저해 활성을 가지고 있어 미백 화장료로 이용되고 있으나 화장품 제형 중에서의 안정성이 낮으므로 분해되어 착색되거나, 이취의 발생, 생체 레벨에서의 효능, 효과의 불분명 및 안전성 문제 등으로 그 사용이 제한되고 있는 실정이다. 그리고 상기한 물질들은 그 티로시나제 억제 효과가 입증되었으나 실제 생체 레벨과 유사한 실험에서는 그 효과가 낮게 나타난다. 따라서 생체 레벨과 유사한 흑색종 세포 배양에 의한 저해효과 평가가 요구되고 있는 실정이다. 또한, 하이드로퀴논은 발암성 물질로 규정되어 화장품에서는 그 사용이 금지 또는 제한되고 있다. 코직산과 아스코르빈산은 매우 불안정한 물질이다. 상기 성분들을 소량 함유한 화장료는 실온에서 수 주일동안 보관하면 갈변 현상이 발생한다. It has already been used as a whitening cosmetic because it has a tyrosinase inhibitory activity such as ascorbic acid, hydroquinone, kojic acid, arbutin and some extracts. However, since it is low in stability in cosmetic formulations, it is decomposed to be colored, Its efficacy, its unclear effect, and its safety. These substances have proved their tyrosinase inhibitory effect, but their effect is lower in experiments similar to actual living body level. Therefore, it is required to evaluate the inhibitory effect by the melanoma cell culture similar to the biological level. Hydroquinone is also defined as a carcinogenic substance and its use in cosmetics is prohibited or restricted. Kojic acid and ascorbic acid are very unstable substances. When a cosmetic containing a small amount of the above components is kept at room temperature for several weeks, browning occurs.
이러한 여러 가지 문제점을 해결하기 위하여, 최근 여러 화학 물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 화장품이 많이 개발되고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐만 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발 가치가 한층 늘어나고 있다. In order to solve these various problems, recently, many cosmetics using natural products have been developed to reduce skin irritation caused by various chemical substances and the like. Natural materials are not only less harmful to the skin, but also have increased their value as a raw material for cosmetics due to the recent popularity of cosmetics using natural materials.
한편, 한국공개특허 제2002-0089216호에서는 유자, 마두령, 빈랑자, 편축, 솔방울 등을 포함하는 화장료 조성물의 미백 효과를 개시하고 있다.On the other hand, Korean Patent Publication No. 2002-0089216 discloses a whitening effect of a cosmetic composition including citron, horse mackerel, bingo, single axle, pine cone, and the like.
또한, 한국공개특허 제2007-0108966호에서는 홍삼 추출물, 녹차 추출물,소나무잎추출물(Pinus Sylvestris Bud Extract), 은행잎추출물 및 마치현을 포함하여 피부주름 개선, 피부탄력 증진 및 피부보습 증진 효과가 있는 화장료 조성물을 개시하고 있다. Korean Patent Publication No. 2007-0108966 discloses a cosmetic composition containing red ginseng extract, green tea extract, Pinus sylvestris bud extract, ginkgo biloba extract and marjoram, which has the effect of improving skin wrinkles, improving skin elasticity, .
하지만, 구주소나무 솔방울 추출물의 효과에 대해서는 아직 공지되어 있지 않다.However, the effect of the extract of the pine cone pine cone has not been known yet.
이에, 본 발명자들은 이제까지 알려지지 않은 여러 천연물들에 대하여 화장품으로의 응용 가능성을 연구한 결과, 구주소나무 솔방울을 선정하고 이로부터 추출물을 제조하여 MMP-1 생성 억제 효과, 콜라겐 생합성 효과, 멜라닌 생성 억제 효과, 항산화효과, 염증성 사이토카인 발현 억제 효과, 보습 효과, 피부 주름개선 효과, 피부 탄력 개선 효과를 측정한 결과, 그 효능이 매우 우수하므로 화장품으로서의 효능을 기대할 수 있다는 것을 발견하게 되었다. The present inventors have studied the applicability of various natural products not yet known to cosmetics as a result, and found that the extract of Pine cones of Guizhou was selected and the extracts were used to produce MMP-1 production inhibitory effect, collagen biosynthesis effect, , An antioxidative effect, an inflammatory cytokine expression inhibiting effect, a moisturizing effect, a skin wrinkle improving effect, and a skin elasticity improving effect, and as a result, it was found that the efficacy as a cosmetic product can be expected.
본 발명의 목적은 구주소나무 솔방울 추출물을 함유하여 MMP-1 생성억제효과, 콜라겐 생합성효과, 피부 주름개선 효과, 피부 탄력 개선효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공하는데 있다. It is an object of the present invention to provide a cosmetic composition which contains an extract of pine cone pine cone and exhibits an effect of inhibiting MMP-1 production, an effect of collagen biosynthesis, a skin wrinkle improving effect and a skin elasticity improving effect.
또한, 본 발명의 목적은 구주소나무 솔방울 추출물 효능을 극대화하기 위해 초임계, 초음파를 제조하고 정제과정을 거쳐 효능 효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공하는데 있다. It is also an object of the present invention to provide a cosmetic composition which exhibits efficacy by preparing supercritical and ultrasound to maximize the efficacy of the pine cone extract.
본 발명의 다른 목적은 상기 구주소나무솔방울추출물을 함유하는 화장료 조성물을 이용하는 화장 방법을 제공하는데 있다. Another object of the present invention is to provide a make-up method using a cosmetic composition containing the pine cone extract.
따라서, 상기와 같은 본 발명의 목적은 구주소나무솔방울추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 의해 달성된다. Therefore, the object of the present invention as described above is achieved by a cosmetic composition containing an extract of Pine Pinus koraiensis as an active ingredient.
바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 피부주름 개선용인 것을 특징으로 한다. Preferably, the cosmetic composition is for improving skin wrinkles.
또한, 바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 피부 미백용인 것을 특징으로 한다. Further, preferably, the cosmetic composition is characterized by being for skin whitening.
또한, 바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 항산화용인 것을 특징으로 한다. Preferably, the cosmetic composition is characterized by being for antioxidation.
또한, 바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 항염증용인 것을 특징으로 한다. Further, preferably, the cosmetic composition is characterized by being anti-inflammatory.
또한, 바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 보습용인 것을 특징으로 한다. Preferably, the cosmetic composition is characterized in that it is for moisturizing.
또한, 바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 피부 탄력 개선용인 것을 특징으로 한다. Preferably, the cosmetic composition is for improving skin elasticity.
또한, 바람직하게는, 상기 구주소나무 솔방울 추출물은 상기 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.0001 ~ 30.0 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다. Preferably, the pine cone pine cone extract is contained in an amount of 0.0001 to 30.0% by weight based on the total weight of the cosmetic composition.
또한, 바람직하게는, 상기 구주소나무 솔방울 추출물은 (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 추출용매를 이용한 용매 추출법, (b) 초임계 추출법 또는 (c) 초음파 추출법으로 추출된 것을 특징으로 한다. The pine cone extract of the present invention may be prepared by a process comprising the steps of (a) mixing water, an anhydrous or a lower alcohol having 1-4 carbon atoms, propylene glycol, butylene glycol, glycerin, acetone, ethyl acetate, chloroform, butyl acetate, diethyl ether (B) a supercritical extraction method, or (c) an extraction method using an ultrasonic extraction method, in which the solvent is extracted with an extraction solvent selected from the group consisting of dichloromethane, hexane and mixtures thereof.
본 발명에 따른 구주소나무솔방울추출물은 MMP-1 생성 억제 효과(실험예 1), 콜라겐 합성 증진 효과(실험예 2), 멜라닌 생성 억제 효과(실험예 3), 항산화효과 (실험예 4), 염증성 사이토카인 발현 억제 효과(실험예 5), 보습 효과(실험예 6), 및 피부 탄력 개선 효과(실험예 7)를 갖는다.The extract of Pine Pinus koraiensis according to the present invention showed an effect of inhibiting MMP-1 production (Experimental Example 1), collagen synthesis enhancing effect (Experimental Example 2), melanin formation inhibitory effect (Experimental Example 3), antioxidative effect (Experimental Example 4) (Experimental Example 5), moisturizing effect (Experimental Example 6), and skin elasticity improving effect (Experimental Example 7).
또한, 본 발명에 따르면, 구주소나무솔방울추출물을 효능을 극대화하기 위해 초음파추출 또는 초임계추출을 통해 MMP-1 생성억제 효과, 콜라겐 합성 증진 효과, 멜라닌 생성억제 효과, 피부 탄력 개선 효과 등을 더욱 증진시켜준다. Further, according to the present invention, in order to maximize the efficacy of the pine cone pine cone extract, the present invention further enhances the effect of inhibiting MMP-1 production, enhancing collagen synthesis, inhibiting melanin generation, and improving skin elasticity through ultrasonic extraction or supercritical extraction I will.
본 발명의 화장료 조성물은 구주소나무(Pinus sylvestris) 솔방울 추출물을 유효성분으로 포함한다. 구주소나무의 잎은 2개씩 달리며 길이는 3~7cm로서 비틀리고 회청색이며 횡단면의 수지구가 외위이다. 구과는 1~3개씩 모여서 착생하며 하향한다. 짧은 대가 있고 길이 3~7cm로서 흑황색이며 원주상 긴 타원형이고 비후부는 편평하지만 때로는 비후해져 피라미드 형상이 되며 제에 작은 가시 또는 흑적 같은 가시가 있다. 종자에는 종자 길이의 3~4배가 되는 날개가 있다. The cosmetic composition of the present invention is characterized in that it contains Pinus sylvestris ) contains pine cone extract as an active ingredient. The leaves of the pine tree are two, with a length of 3 ~ 7cm. The cones are gathered by one to three and are mixed down. It is short and has a length of 3 ~ 7cm. It is blackish yellow, circumferential long oval, and the thickened part is flat, but sometimes it becomes thick and pyramidal. The seeds have wings which are three to four times the seed length.
구주소나무의 꽃은 4~5월에 피며 수분한 뒤에 3~5년이 지나야 성숙한다. 높이가 25~40m에 달하며 가지가 사방으로 퍼지며 수피는 적색 또는 작갈색으로 얇고 밋밋하지만 밑부분이 흑색으로 되며, 소지는 회황색이며 동아는 긴 타원상 난형으로 갈색이고 수지가 뭍는다. 유럽에서는 중요한 조림수종이며 목재는 건축재, 펄프재 등으로 쓰인다. 우리나라에는 조림지역 적응시험을 위하여 도입되어 임업시험장에 심어져 있으며 분포지역이 넓어 변이가 많다.The flowers of the pine tree bloom in April-May, and mature after 3 to 5 years after pollination. Its height is 25 ~ 40m. Branches spread in all directions. The bark is red or small brown. It is thin and flat, but its bottom is black. Its base is yellowish yellow. Donga is brown with long oval ovate and resin. It is an important planting species in Europe, and timber is used as building material, pulp material and so on. It is introduced in Korea for adaptation test of forest area and is planted in forestry test site.
본 발명에 있어서, 구주소나무 솔방울추출물은 구주소나무의 솔방울로부터 얻은 추출물을 의미한다. In the present invention, the pine cone pine cone extract means an extract obtained from the pine cones of the pine cones.
또한, 본 발명의 구주소나무솔방울추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건 하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있으나, 바람직하게는 (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 이용한 용매 추출법 (b) 이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 초임계 추출법 또는 (c) 초음파 추출법을 이용하여 추출한다. The pine cone pine cone extract of the present invention can also be prepared using conventional solvents according to conventional methods known in the art, that is, under the conditions of ordinary temperature and pressure, preferably (a) water Propanol and butanol), propylene glycol, 1,3-butylene glycol, glycerin, acetone, diethyl ether, ethyl acetate, butyl acetate, (B) solvent extraction using a solvent selected from the group consisting of dichloromethane, chloroform, hexane and mixtures thereof; (b) supercritical extraction with carbon dioxide and supercritical extraction with high temperature; or (c) extraction with ultrasonic extraction.
본 발명에서는 바람직하게는 추출용매를 이용한 용매 추출법을 이용하였다. In the present invention, a solvent extraction method using an extraction solvent is preferably used.
본 발명에서 구주소나무솔방울추출물은 다양한 추출용매, 예를 들어, 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출 용매를 사용하여 얻을 수 있으며, 바람직하게는 에탄올, 70%(v/v) 에탄올 또는 물을 사용하여 얻어진 것이고, 가장 바람직하게는 70%(v/v) 에탄올을 사용하여 얻어진 것이다. The pine cone extract of the present invention may be used in a variety of extraction solvents, such as water, anhydrous or lower alcohols having 1-4 carbon atoms (e.g., methanol, ethanol, propanol and butanol), propylene glycol, It may be obtained by using at least one extraction solvent selected from the group consisting of glycerin, glycerin, acetone, diethyl ether, ethyl acetate, butyl acetate, dichloromethane, chloroform, hexane and mixtures thereof, Most preferably 70% (v / v) ethanol or water, and most preferably 70% (v / v) ethanol.
한편, 본 발명의 구주소나무솔방울추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다. It will be apparent to those skilled in the art that the extract of Pine Pinus densiflora extract of the present invention can be obtained not only by the above-mentioned extraction solvent but also by other extraction solvent, which exhibits substantially the same effect.
또한, 본 발명의 구주소나무솔방울추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 및 발효 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계추출법에 의한 추출, 초음파를 이용한 추출법에 의한 추출, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리하거나 자연 상태나 각종 미생물을 이용한 발효산물에 의한 추출물 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 및 추출방법을 통해 얻어진 활성 분획도 본 발명의 추출물에 포함된다. The pine cone pine cone extract of the present invention includes not only the extract obtained by the above-mentioned extraction solvent, but also an ordinary purified and fermented extract. For example, decompression by carbon dioxide, extraction by supercritical extraction with high temperature, extraction by extraction using ultrasound, separation by ultrafiltration membrane with constant molecular weight cutoff value, various chromatography (size, charge, hydrophobic or affinity And the active fraction obtained through various purification and extraction methods, such as an extract obtained by fermentation products using natural or various microorganisms, are also included in the extract of the present invention.
또한, 본 발명은 상기 추출물이 상온에서 냉침, 가열 여과하여 얻어진 액상물, 추가로 용매를 감압농축 또는 동결 건조하여 얻은 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다. Further, the present invention provides a cosmetic composition characterized in that the above extract is obtained by liquid-freezing obtained by cold-pressing and heating filtration at room temperature, and further by concentrating or lyophilizing the solvent under reduced pressure.
상기 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계추출법에 의한 추출법은 초임계 유체 추출법(supercritical fluid extraction)을 의미하는 것으로, 일반적으로 초임계 유체는 기체가 고온 고압 조건에서 임계점에 도달하였을 때 갖는 액체 및 기체의 성질을 지니고 있으며, 화학적으로 비극성 용매와 유사한 극성을 지니고 있으며 이러한 특성으로 인해 초임계 유체는 지용성 물질의 추출에 사용되고 있다(J. Chromatogr. A. 1998;479:200-205). The supercritical fluid extraction refers to supercritical fluid extraction. Generally, the supercritical fluid is extracted from the liquid and the liquid when the gas reaches the critical point at high temperature and high pressure. (J. Chromatogr. A. 1998; 479: 200-205). In addition, it has been reported that the supercritical fluid has a polarity similar to that of a nonpolar solvent.
이산화탄소는 초임계 유체기기의 작동으로 압력 및 온도가 임계점까지 이르는 과정을 거치면서 액체 및 기체 성질을 동시에 지닌 초임계 유체가 되고 그 결과 지용성 용질에 대한 용해도가 증가한다. 초임계 이산화탄소가 일정량의 시료를 함유한 추출 용기를 통과하게 되면 시료에 함유된 지용성 물질은 초임계 이산화탄소에 추출되어 나온다. Carbon dioxide is a supercritical fluid with both liquid and gaseous nature, with the operation of supercritical fluid equipment reaching its critical pressure and temperature, resulting in increased solubility in fat-soluble solutes. When supercritical carbon dioxide passes through an extraction vessel containing a certain amount of sample, the lipophilic substance contained in the sample is extracted into supercritical carbon dioxide.
지용성 물질을 추출한 후 추출 용기에 남아있는 시료에 다시 소량의 공용매가 함유된 초임계 이산화탄소를 흘려 통과시키면 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않았던 성분들이 추출되어 나오게 할 수 있다. When the supernatant carbon dioxide containing a small amount of cosolvent is passed through the sample remaining in the extraction vessel after extracting the lipid-soluble substance, components that were not extracted by pure supercritical carbon dioxide can be extracted.
본 발명의 초임계추출법에 사용되는 초임계 유체는 초임계 이산화탄소 또는 이산화탄소에 추가적으로 공용매를 혼합한 혼합유체를 사용함으로써 효과적으로 유효 성분을 추출할 수 있다. The supercritical fluid used in the supercritical extraction method of the present invention can effectively extract an active ingredient by using a mixed fluid in which a cosolvent is further mixed with supercritical carbon dioxide or carbon dioxide.
이러한 공용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다. These co-solvents may be used alone or in admixture of two or more selected from the group consisting of chloroform, ethanol, methanol, water, ethyl acetate, hexane and diethyl ether.
추출된 시료는 대부분 이산화탄소를 함유하고 있는데 이산화탄소는 실온에서 공기 중으로 휘발되므로 상기 방법으로 얻은 추출물을 화장료 조성물로서 사용할 수 있으며, 공용매는 감압증발기로 제거할 수 있다. Most of the extracted samples contain carbon dioxide. Since the carbon dioxide is volatilized into air at room temperature, the extract obtained by the above method can be used as a cosmetic composition, and the cosolvent can be removed by a reduced pressure evaporator.
또한 상기 초음파 추출법은 초음파 진동에 의해 발생되는 에너지를 이용하는 추출방법으로, 초음파가 수용성 용매 속에서 시료에 포함된 불용성인 용매를 파괴시킬 수 있으며, 이때 발생되는 높은 국부온도로 인하여 주위에 위치하는 반응물 입자들의 운동에너지를 크게 하기 때문에 반응에 필요한 충분한 에너지를 얻게 되고, 초음파 에너지의 충격효과로 높은 압력을 유도하여 시료에 함유된 물질과 용매의 혼합 효과를 높여주어 추출효율을 증가시키게 된다. In addition, the ultrasonic extraction method is an extraction method using energy generated by ultrasonic vibration. Ultrasonic waves can destroy an insoluble solvent contained in a sample in a water-soluble solvent. Due to the high local temperature generated at this time, Since the kinetic energy of the particles is increased, sufficient energy required for the reaction is obtained. By inducing the high pressure by the shock effect of the ultrasonic energy, the mixing efficiency of the substance contained in the sample and the solvent is increased, thereby increasing the extraction efficiency.
초음파 추출법에 사용할 수 있는 추출용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다. 추출된 시료는 진공 여과하여 여과액을 회수한 후 감압증발기로 제거하고, 동결 건조하는 통상의 추출물 제조방법을 통해 추출물을 얻을 수 있다. As the extraction solvent which can be used for the ultrasonic extraction method, one or a mixture of two or more selected from the group consisting of chloroform, ethanol, methanol, water, ethyl acetate, hexane and diethyl ether can be used. The extracted sample is recovered by vacuum filtration, and the filtrate is recovered, and the extract is removed by a vacuum evaporator and freeze-dried to obtain an extract.
본 발명에 따르면, 상기 구주소나무솔방울추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.0001 ~ 30.0 중량% 함유되며, 더욱 바람직하게는, 상기 구주소나무솔방울추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.01 ~ 10 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다. 상기 추출물의 함량이 0.0001 중량% 미만인 경우에는 피부 개선 효과가 나타나지 않으며, 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 개선 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다. According to the present invention, the pine cone pine cone extract is contained in an amount of 0.0001 to 30.0% by weight based on the total weight of the cosmetic composition, more preferably 0.01 to 10% by weight of the cone pine cone extract . When the content of the extract is less than 0.0001% by weight, the effect of improving the skin is not exhibited. When the content of the extract is more than 30.0% by weight, the degree of improvement of the skin against the increase of the content is insignificant, It is not even.
따라서, 이러한 다양한 기능을 가진 구주소나무솔방울추출물을 포함하는 본 발명의 화장료 조성물은 우수한 콜라겐 합성 증진 효과, MMP-1 생성 억제 효과, 염증성 사이토카인 발현 억제 효과, 항산화 효과, 피부 주름 개선 효과, 피부 탄력 개선 효과, 피부 미백 효과, 멜라닌 생성 억제 효과, 보습효과, 피부노화방지 효과를 갖는 것을 특징으로 한다. Therefore, the cosmetic composition of the present invention including the extract of Pine Pinus koraiensis having various functions can be used for a cosmetic composition having excellent collagen synthesis promoting effect, MMP-1 production inhibiting effect, inflammatory cytokine expression inhibiting effect, antioxidant effect, An improvement effect, a skin whitening effect, a melanin formation inhibiting effect, a moisturizing effect, and a skin aging-preventing effect.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 유효 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다. The ingredients contained in the cosmetic composition of the present invention may contain, as an active ingredient, the ingredients commonly used in cosmetic compositions in addition to the above-mentioned effective ingredients, and may contain conventional ingredients such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, Supplements, and carriers.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다. The cosmetic composition of the present invention can be prepared into any of the formulations conventionally produced in the art and can be used in the form of solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, soaps, , Oil, powdered foundation, emulsion foundation, wax foundation, pack, massage cream and spray, but is not limited thereto. More specifically, it can be manufactured in the form of a soft lotion, a nutritional lotion, a nutritional cream, a massage cream, an essence, an eye cream, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a pack, a spray or a powder.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다. When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, an animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide may be used as the carrier component .
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다. When the formulation of the present invention is a solution or an emulsion, a solvent, a dissolving agent or an emulsifying agent is used as a carrier component, and examples thereof include water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, , 3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan fatty acid esters.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다. In the case where the formulation of the present invention is a suspension, a carrier such as water, a liquid diluent such as ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, Cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracant, etc. may be used.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다. When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component. In the case of a spray, in particular, / Propane or dimethyl ether.
본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다. When the formulation of the present invention is a surfactant-containing cleansing, the carrier component may include aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyltaurate, sarcosinate, fatty acid amide ether Alkylamido betaine, aliphatic alcohol, fatty acid glyceride, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, lanolin derivative, or ethoxylated glycerol fatty acid ester.
본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다. When the cosmetic composition of the present invention is a soap, a surfactant-containing cleansing formulation or a surfactant-free cleansing formulation, it may be applied to the skin and then wiped off, washed or rinsed with water. The surfactant-containing cleansing formulation may be a cleansing foam, a cleansing water, a cleansing towel and a cleansing pack. The surfactant-free cleansing formulation may be a cleansing cream, , Cleansing lotion, cleansing water and cleansing gel, but is not limited thereto.
한편, 본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 이용하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 이용하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다. On the other hand, the cosmetic process of the present invention refers to all cosmetic processes using the cosmetic composition of the present invention. That is, all methods known in the art using a cosmetic composition belong to the cosmetic method of the present invention.
본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다. The cosmetic composition of the present invention may be used alone or in combination, or may be used in combination with other cosmetic compositions other than the present invention. The cosmetic composition according to the present invention may be used according to a conventional method of use, and may be used in a number of times depending on the skin condition or taste of the user.
본 발명의 구주소나무솔방울추출물을 포함하는 화장료 조성물을 이용하는 화장방법을 수행하면, MMP-1 생성 억제 효과, 콜라겐 합성 증진 효과, 멜라닌 생성 억제 효과, 염증성 사이토카인 발현 억제 효과, 항산화 효과, 보습효과 및 탄력 개선 효과를 얻을 수 있다. When the cosmetic method using the cosmetic composition comprising the extract of Pine Pinus koraiensis according to the present invention is carried out, the cosmetic composition containing the extract of Pine Pinus densiflora extract of the present invention can inhibit MMP-1 production, collagen synthesis, melanogenesis inhibition, inflammatory cytokine expression inhibition, The elasticity improving effect can be obtained.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. It is to be understood by those skilled in the art that these embodiments are only for describing the present invention in more detail and that the scope of the present invention is not limited by these embodiments in accordance with the gist of the present invention .
제조예Manufacturing example 1: 구주소나무 솔방울 추출물 제조 1: Manufacture of pine cone extract
세절하여 음건한 구주소나무솔방울을 1kg을 70% (V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50 ℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하여 45g을 수득하였다.One kilogram of shrub pine cones with shade was shaken out three times for 5 hours with 70% (v / v) ethanol aqueous solution, followed by cooling and filtration with Whatman # 4 filter paper. The filtered extract was concentrated under reduced pressure at 50 DEG C or below and lyophilized to obtain 45 g.
제조예Manufacturing example 2 및 3: 2 and 3: 초임계Supercritical 유체 추출물 및 초음파 추출물 제조 Manufacture of fluid extracts and ultrasonic extracts
통상적인 초임계 추출법(약 60℃의 온도에서 약 300 기압의 압력 하에 초임계 상태에서 공용매로서 에탄올을 이용하여 추출함)으로 추출하여 초임계 추출물을 얻었다(제조예 2). 초음파(슈퍼소닉 초음파기기를 이용하여 25KHz의 강도로 30℃에서 약 2시간 동안 추출)를 이용한 추출을 통해 추출물을 얻었다. 단, 제조예 3의 경우에는 공용매로 에탄올을 사용하였다. The supercritical extract was obtained by extracting with a conventional supercritical extraction method (extracting with ethanol as a co-solvent in a supercritical state under a pressure of about 300 atm at a temperature of about 60 DEG C). Extracts were obtained by extraction using ultrasound (Super Sonic Ultrasonic Device at 25 ° C for 2 hours at 30 ° C). In the case of Production Example 3, ethanol was used as a co-solvent.
실험예Experimental Example 1. 구주소나무솔방울추출물의 1. Pine cone extract MMPMMP -1 생성 억제 효과-1 production inhibitory effect
본 실험예 1은 제조예 1, 2, 3에서 수득한 구주소나무솔방울추출물이 콜라겐 분해효소인 MMP-1 생성을 억제하는 효과를 측정하였다. In Experimental Example 1, the effect of inhibiting the production of MMP-1, a collagenase, was evaluated by the extracts of pine cones obtained in Production Examples 1, 2 and 3. [
인간 정상 피부 세포인 섬유아세포 (한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)에 각 웰당 1× 106 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma, 미합중국) 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후 상기 제조예 1,2,3 의 구주소나무 솔방울 추출물을 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 구주소나무솔방울추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다. Human normal skin cells were inoculated into a 48-well microplate (Nunc, Denmark) at a concentration of 1 × 10 6 cells per well and cultured in DMEM medium (Sigma, USA) and 37 ° C For 24 hours. Then, the cells were further cultured in serum-free DMEM medium supplemented with the pine cone extracts of Preparation Examples 1, 2 and 3 and in serum-free DMEM medium containing no pine cone extract for 48 hours .
배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 킷트(Amersham, 미합중국)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, 하기 수학식 1에 따라 MMP-1 생성 억제율(%)을 계산하였으며, 그 결과를 표 1에 나타내었다. After the incubation, the supernatant of each well was collected and the amount (ng / ml) of the newly synthesized MMP-1 was measured using an MMP-1 assay kit (Amersham, USA) The inhibition rate (%) was calculated and the results are shown in Table 1.
상기 표 1의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명의 구주소나무 솔방울 추출물은 농도 의존적으로 MMP-1의 생성을 억제(MMP-1 활성 억제)시키는 것을 확인할 수 있었다. MMP-1 생성 억제효과가 있는 것으로 알려진 물질인 TGF-β의 농도(200nM)와 본원발명의 구주소나무 솔방울 추출물의 농도(500ppm) 차이를 감안해도, 여러 종류의 물질이 혼합된 추출물 수준에서 상기와 같은 정도의 MMP-1 억제율을 나타낸 것은 본원발명의 구주소나무 솔방울 추출물은 MMP-1 생성 억제 효과가 있다는 것을 보여준다. As shown in the results of Table 1, it was confirmed that the pine cone extract of the present invention suppresses the production of MMP-1 (inhibits MMP-1 activity) in a concentration-dependent manner. Even considering the difference between the concentration of TGF-beta (200 nM), which is known to have an inhibitory effect on MMP-1 production, and the concentration (500 ppm) of pearl pine cone extract of the present invention, The same degree of inhibition of MMP-1 is shown in that the pine cone extract of the present invention has an inhibitory effect on MMP-1 production.
실험예Experimental Example 2. 구주소나무 솔방울 추출물의 콜라겐 합성 증진 효과 2. Enhancement of collagen synthesis of pine cone extract
인간 정상 상피 세포인 섬유아세포를 48-웰 마이크로 플레이트에 각 웰당 1 x 106 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 상기 제조예 1, 2, 3에 의해 제조된 구주소나무 솔방울 추출물을 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 구주소나무솔방울추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 콜라겐 키트(Takara, 일본)를 이용하여 프로콜라겐(procollagen) 타입 I C-펩타이드(PICP) 양을 측정하여 ng/㎖ 환산하였으며, 이에 의해 합성된 콜라겐 양을 측정하였다. 콜라겐 생합성 증가율(%)은 하기 수학식 2에 따라 계산하였으며, 그 결과를 표 2에 나타내었다. Human normal epithelial cells, fibroblasts, were inoculated into 48-well microplates at a density of 1 x 10 6 cells per well and cultured in DMEM medium for 24 hours. The serum-free DMEM medium supplemented with the pine cone extract prepared in Preparation Examples 1, 2 and 3 and the control group were further cultured in serum-free DMEM medium containing no pine cone extract for 48 hours. After the incubation, the supernatant of each well was collected, and the amount of procollagen type I C-peptide (PICP) was measured using a collagen kit (Takara, Japan) and converted into ng / Respectively. Collagen biosynthesis increase rate (%) was calculated according to the following formula (2), and the results are shown in Table 2.
표 2에 따르면, 본 발명의 제조예 1, 2, 3에 의해 제조된 구주소나무솔방울추출물의 콜라겐 생합성율이 농도의존적으로 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 특히 제조예 2에 의해 제조된 추출물의 효과가 제조예 1, 3의 추출물보다 효과가 더 좋은 것을 확인하였다. According to Table 2, it was confirmed that the collagen biosynthesis rate of the pine cone pine cone extract prepared according to Production Examples 1, 2, and 3 of the present invention was increased in a concentration-dependent manner. In particular, it was confirmed that the effect of the extract prepared in Preparation Example 2 was better than that of the extracts of Preparation Examples 1 and 3.
실험예Experimental Example 3: 구주소나무솔방울추출물의 B16F1 멜라닌형성세포를 이용한 멜라닌 생성 억제효과 3: Inhibition of Melanogenesis by B16F1 Melanocyte-forming Cells of Pine Pinus thunbergii Extract
본 실험예 3은 상기 제조예 1, 2, 3에서 수득한 구주소나무솔방울추출물의 미백 효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라닌 형성 세포에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 보고 미백 효과를 판단한 것이다. 본 실험예 3에 사용된 B16F1 멜라닌 형성 세포는 마우스에서 유래한 세포균주이며, 멜라닌이라는 흑색 색소를 분비하는 세포이다. Experimental Example 3 was conducted to examine the whitening effect of the extract of the pine cone pine obtained in Preparation Examples 1, 2 and 3 and to examine the inhibitory effect of melanin formation on B16F1 melanin-forming cells. The B16F1 melanin-forming cell used in Experimental Example 3 is a cell strain derived from a mouse, and is a cell that secretes a melanin pigment called melanin.
이 세포의 인공 배양 중에 시료를 처리하여 멜라닌 흑색 색소가 감소하는 정도를 비교 평가하였다. 본 실험예에 사용된 B16F1 멜라닌 형성 세포는 ATCC(American Type Culture Collection)로부터 분양받아 사용하였다. B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생합성 억제 효과 측정은 다음과 같이 행하였다. During the artificial culture of these cells, samples were treated to compare the degree of reduction of melanin pigment. The B16F1 melanin-forming cells used in this experiment were purchased from the American Type Culture Collection (ATCC). Melanin biosynthesis inhibitory effect of B16F1 melanin-forming cells was measured as follows.
B16F1 멜라닌 형성 세포를 6웰 플레이트에 각 웰당 2 X 105 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 제조예 1~3에 따른 구주소나무솔방울추출물을 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포 내 멜라닌의 정량은 로탄(Lotan: Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액(50 mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1ml를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리(3,000 rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH(10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405 nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생성 저해율(%)은 하기 수학식 3에 의하여 계산하였으며, 그 결과를 표 3에 기재하였다. B16F1 melanocyte-forming cells were divided into 6 well plates at a concentration of 2 X 10 5 per well. Cells were attached and cultured for 72 hours at a concentration that did not induce toxicity after treatment with the extracts of pine cones of Preparation Example 1 to 3 . After incubation for 72 hours, the cells were detached with trypsin-EDTA, the number of cells was measured, and the cells were recovered by centrifugation. Quantification of intracellular melanin was carried out with a slight modification of the method of Lotan (Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980). Cell pellet was washed once with PBS, and 1 ml of homogenization buffer solution (50 mM sodium phosphate, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) was added and vortexed for 5 minutes to disrupt the cells. After centrifugation (3,000 rpm, 10 min), 1N NaOH (10% DMSO) was added to the cell filtrate to dissolve the extracted melanin, and the absorbance of melanin was measured at 405 nm with a microplate reader. The inhibition rate (%) of melanin formation was measured. Melanin formation inhibition rate (%) of B16F1 melanin-forming cells was calculated according to the following equation (3), and the results are shown in Table 3 below.
상기 표 3의 결과에서 알 수 있듯이, 본 발명의 제조예 1~3에 의해 제조된 구주소나무솔방울추출물은 B16F1 멜라닌 형성 세포에서 멜라닌 생성을 크게 저해하는 것을 알 수 있었다. As can be seen from the results of Table 3, it can be seen that the extract of the pine cone pine, produced by Production Examples 1 to 3 of the present invention, significantly inhibited melanogenesis in B16F1 melanin-forming cells.
실험예Experimental Example 4: 구주소나무솔방울추출물의 4: Pine Cone Extract of Pine Cone DPPHDPPH 라디칼Radical 소거능Scatters 분석 analysis
본 실험예 4는 제조예 1~3에서 수득한 구주소나무솔방울추출물의 항산화 효과를 측정하기 위해 DPPH법을 이용하여 항산화 효과(자유라디칼 소거율)를 측정하였다. DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl) 자유라디칼이라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 효과를 측정한다. 피검 물질(구주소나무 솔방울 추출물)에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율(%)을 측정한다. 사용한 시약으로서는 2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl 자유라디칼(Aldrich Chem. Co., MW=618.76) 0.1 mM 용액으로서 61.88 mg을 메탄올에 용해하여 100ml로 한다. In this Experimental Example 4, the antioxidative effect (free radical scavenging ratio) was measured by the DPPH method in order to measure the antioxidative effect of the pine cone pine extract obtained in Preparation Examples 1 to 3. The DPPH method measures the antioxidative effect by reducing power using a free radical called DPPH (2,2-Di (4-tert-octylphenyl) -1-picrylhydrazyl) free radical. The degree of free radical scavenging (%) at a wavelength of 560 nm is measured by comparing the degree of reduction of DPPH by the test substance (pine cone pine cone extract) to the absorbance of the blank test solution. As a reagent used, 61.88 mg of a 0.1 mM solution of 2,2-Di (4-tert-octylphenyl) -1-picrylhydrazyl free radical (Aldrich Chem. Co., MW = 618.76) was dissolved in methanol to make 100 ml.
측정방법은 다음과 같다: The measurement method is as follows:
① 96-웰 플레이트에 0.1 mM DPPH 용액 0.15 ml에 시료 용액 0.15ml를 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 10분간의 배양을 개시한다. (1) Add 0.15 ml of the sample solution to 0.15 ml of 0.1 mM DPPH solution in a 96-well plate, stir rapidly, and start culturing at 25 ° C for 10 minutes.
② 그 후 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다. ② Measure the absorbance St at 560 nm thereafter.
③ 시료 용액의 블랭크 (Blank)는 상기 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용하는 것을 제외하고는 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 So를 측정한다. (3) The blank of the sample solution is measured by the same procedure as that for measuring the absorbance St except that methanol is used instead of the 0.1 mM DPPH solution.
④ 공시험은 상기 시료 용액 대신 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 Bt를 측정한다. (4) The absorbance Bt is measured by operating in the same manner as in the measurement of the absorbance St except that distilled water is used instead of the sample solution.
⑤ 공시험의 블랭크(Blank)는 상기 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용하고 상기 시료 용액 대신 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다. (5) Blank of the blank test is carried out in the same manner as in the measurement of the absorbance St except that methanol is used instead of the 0.1 mM DPPH solution and distilled water is used instead of the sample solution, and the absorbance Bo is measured.
자유라디칼 소거율(%)의 결과는 수학식 4에 의하여 산출하였으며, 결과는 하기의 표 4와 같다. The results of the free radical scavenging rate (%) were calculated by the equation (4), and the results are shown in Table 4 below.
St : 시료용액의 자유라디칼 소거 후의 514nm에서의 흡광도St: absorbance at 514 nm after free radical scavenging of the sample solution
Bt : 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 514nm에서의 흡광도Bt: Absorbance at 514 nm after free radical scavenging of blank test solution
So : 시료용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 514nm에서의 흡광도So: the absorbance at 514 nm before the reaction in the absence of free radicals in the sample solution
Bo : 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 514nm에서의 흡광도Bo: absorbance at 514 nm before the reaction in the absence of the free radical of the blank test solution
DPPH 자유라디칼을 50% 소거하는데 필요한 시료의 농도인 SC50을 확인한 결과 제조예 1~3은 항산화 효과를 보였다. SC 50 , which is the concentration of the sample required to remove 50% of the DPPH free radical, was confirmed. As a result, Production Examples 1 to 3 showed antioxidative effects.
실험예Experimental Example 5: 구주소나무솔방울추출물의 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제 효과 5: Inhibitory effect of inflammatory cytokine expression by ultraviolet irradiation of pine cone extract
본 실험예 5은 제조예 1,2,3 에서 수득한 구주소나무 솔방울 추출물의 자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제 효과를 평가하기 위한 것으로서, 사람의 표피 조직에서 분리한 섬유아세포 (Fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 5 X 104개씩 넣고 24 시간 동안 부착시켰다. The present Experimental Example 5 is for evaluating the inhibitory effect of inflammatory cytokine expression expressed by ultraviolet irradiation of the pine cone extract obtained in Production Examples 1, 2, and 3, and it was confirmed that fibroblasts isolated from human epidermal tissue, Were placed in a 24-well test plate in an amount of 5 × 10 4 and adhered for 24 hours.
각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500㎕의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선 B (UVB) 램프 (Model: F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10 mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포배양 배지 (DMEM에 FBS가 첨가되지 않은 배지) 350 ㎕를 첨가하였다. Each well was washed once with PBS and 500 占 퐇 of PBS was added to each well. After irradiating the fibroblasts with 10 mJ / cm 2 of ultraviolet light using an ultraviolet B (UVB) lamp (Model: F15T8, UVB 15W, Sankyo Dennki, Japan), PBS was removed and the cell culture medium ≪ / RTI > medium).
여기에 평가하고자 하는 구주소나무 솔방울 추출물을 처리한 후 5시간 동안 배양하였다. 배양 상층액을 150㎕ 취하여 IL-1α를 정량함으로서 구주소나무솔방울추출물 의 염증성 사이토카인 발현 억제 효과를 판단하였다. IL-1α의 양은 효소 면역 분석법 (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)을 이용하여 정량화하였으며, 염증성 사이토카인 (IL-1α)의 발현 억제율(%)은 하기 수학식 5에 의해 계산하였다.The pine cone pine extract was treated and then cultured for 5 hours. The inhibitory effect of IL-1α on the expression of inflammatory cytokines was evaluated by extracting 150 μl of culture supernatant. The amount of IL-1α was quantitated using an enzyme-linked immunosorbent assay, and the inhibition rate (%) of inflammatory cytokine (IL-1α) was calculated by the following equation (5).
Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 IL-1α생성량Bo: IL-1? Production in wells without UV irradiation
Bt : 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1α생성량Bt: IL-1? Production in wells irradiated with ultraviolet light and not treated with the sample
St : 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 IL-1α생성량St: IL-1α production in wells irradiated with ultraviolet light and treated with the sample
발현 억제율(%)Inflammatory cytokine
Expression inhibition rate (%)
표 5에 따르면, 구주소나무솔방울추출물의 제조예 2에 의해 제조된 추출물은 자외선에 의한 염증성 사이토카인인 IL-1α의 생성을 1000ppm 농도에서 85.06%을 억제하는 것을 알 수 있었다. 본 발명에 따른 구주소나무솔방울추출물은 동일 농도에서 염증성사이토카인 발현 억제물질인 인도메타신 보다도 우수한 염증성 사이토카인 발현율을 보임을 알 수 있었다. 따라서 본 발명의 구주소나무솔방울추출물은 자외선 조사에 의한 염증 발생을 낮은 농도에서도 효과적으로 방어함을 알 수 있다.According to Table 5, it can be seen that the extract prepared by Preparation Example 2 of the pine cone extract of Guizhou pine inhibits the production of IL-1α, an inflammatory cytokine caused by ultraviolet rays, by 85.06% at a concentration of 1000 ppm. The pine cone pine extract of the present invention showed an excellent inflammatory cytokine expression ratio at the same concentration as that of indomethacin, which is an inhibitor of inflammatory cytokine expression. Therefore, it can be seen that the pine cone pine cone extract of the present invention effectively prevents the inflammation caused by ultraviolet irradiation even at a low concentration.
제형예Formulation Example 1: 구주소나무 솔방울 추출물을 함유하는 1: Pine cones containing pine cone extract 화장료Cosmetics 조성물의 제조 Preparation of composition
구주소나무 솔방울 추출물을 포함하는 화장료는 제조예 1~3의 구주소나무솔방울추출물을 각각 포함하는 화장료(제형예 1,2,3)를 제조하였으며, 효능의 비교를 위해 구주소나무솔방울추출물 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3부틸렌글리콜을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 1), 구주소나무솔잎추출물을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 2), 추출물이나 보습제를 모두 포함하지 않는 화장료 조성물(비교제형예 3)을 하기 표 6에 나타내었다. Cosmetic preparations containing the pine cone extract of Gujuz pine were prepared as cosmetic preparations (Formulation examples 1, 2 and 3, respectively) containing the cones extract of pine cones of Preparation Examples 1 to 3, and as a moisturizing agent (Comparative formulation example 1) containing glycerin and 1,3-butylene glycol, a cosmetic composition containing comparative formulation 2 (comparative formulation example 2) containing extract of Pine pine needles and a cosmetic composition containing no extract or moisturizer 3) are shown in Table 6 below.
제형예 1compare
Formulation Example 1
제형예 2compare
Formulation Example 2
제형예 3compare
Formulation Example 3
A
B
실험예Experimental Example 6: 구주소나무솔방울추출물의 보습 효과 6: Moisturizing effect of pine cone extract
상기 제형예 1, 2, 3의 화장료 조성물에 대한 임상 보습 효과를 다음과 같이 측정하였다. 설문 조사를 통하여 피부가 건조하다고 느끼는 건강한 성인 남녀 125 명을 무작위로 25 명씩 5개 그룹(A, B, C, D, E 및 F)으로 나눈 후, A, B, C 그룹에는 제형예 1,2,3의 화장료 조성물을, D 그룹에는 구주소나무솔방울추출물 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3부틸렌글리콜을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 1), E 그룹에는 구주소나무솔잎추출물을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 2), F 그룹에는 구주소나무솔방울추출물 및 보습제를 포함하지 않는 화장료 조성물(비교제형예 3)을 각각 1일 2회씩 2주간 안면에 도포하게 하였다. 보습 효과는 실사용 시험 시작 후부터 매 1주간, 그리고 종료 후의 개선 효과를 Corneometer CM 820 (Corage +Khazaka, Germany)를 이용하여 평가하였다. 실험 결과는 하기 표 7에 나타내었다. The clinical moisturizing effects of the cosmetic compositions of Formulation Examples 1, 2 and 3 were measured as follows. A, B, and C groups were divided into five groups (A, B, C, D, E, and F) (Comparative Formulation Example 1) containing glycerin and 1,3-butylene glycol as moisturizing agents instead of the pine cone pine cone extract in Group D, and cosmetic compositions containing Comparative Pine Needle Extract (Comparative Formulation Example 2) and a cosmetic composition (Comparative Formulation Example 3) containing no pine cone extract and a moisturizing agent were applied to the F group twice a day for two weeks, respectively, for two weeks. The moisturizing effect was evaluated by the Corneometer CM 820 (Corage + Khazaka, Germany) after every week and after the end of the test. The experimental results are shown in Table 7 below.
상기 표 7에 나타낸 바와 같이, 일반 다른 보습제를 함유한 화장료(비교제형예 1) 및 구주소나무솔잎추출물을 함유한 화장료(비교제형예 2)와 비교하여도 본 발명의 구주소나무솔방울추출물 함유한 화장료(제형예 1, 2, 3)의 보습효과가 우수함을 확인할 수 있었다.As shown in Table 7, compared with the cosmetic containing the other moisturizing agents (Comparative Formulation Example 1) and the cosmetic containing Comparative Pine Needle Extract (Comparative Formulation Example 2), the cosmetic composition containing the pine cone extract of the present invention (Formulation Examples 1, 2, and 3) exhibited excellent moisturizing effect.
실험예Experimental Example 7: 피부 탄력 개선 효과 측정 7: Measurement of skin elasticity improvement effect
본 실험예 7은 제조예 1, 2, 3에서 수득한 구주소나무솔방울추출물을 포함하는 제형예 및 비교제형예에 따른 화장료 조성물의 피부 탄력 개선 효과를 알아보기 위하여, 30~40대의 탄력이 감소한 여성 40명을 대상으로 측정하였다. 10명씩 4개 그룹으로 나눈 뒤, 1 그룹에는 제형예 1을, 2그룹에는 제형예 2를, 3그룹에는 제형예 3을, 그리고 4그룹에는 비교제형예 1을 안면에 매일 아침, 저녁으로 2회씩 12주간 도포하게 한 후, 12주 후 피부 탄력을 측정하였다. 얼굴 부위의 탄력을 cutometer SEM575 (MPA 580, Courage+Khazaka GmbH, Germany)를 이용하여 측정하였으며, 피부 탄력을 나타내는 R2(biological elasticity)를 도포 전과 도포 후를 측정한 뒤 개선도(%)로 평가하였다. 그 결과는 하기 표 8에 나타내었으며, 결과는 각 군에 대한 개선도의 평균치이다.In order to examine the skin elasticity improving effect of the cosmetic composition according to the formulation examples and the comparative formulations including the pine cone extract obtained in Preparation Examples 1, 2 and 3, Experimental Example 7 was applied to a female 40 patients were measured. 10 groups were divided into four groups, and the first group had Formulation Example 1, the second group had Formulation Example 2, the third group had Formulation Example 3, and the fourth group had Comparative Formulation Example 1 in the morning, morning and evening The skin elasticity was measured after 12 weeks. The elasticity of the facial region was measured using a cutometer SEM575 (MPA 580, Courage + Khazaka GmbH, Germany), and the R2 (biological elasticity) indicating skin elasticity was measured before and after application . The results are shown in Table 8 below, and the results are the average of the degree of improvement for each group.
상기 표 8에 나타난 바와 같이, 구주소나무 솔방울 추출물이 함유된 제형예 1, 2 및 3는 비교제형예 1,2에 비하여 피부 탄력이 매우 향상됨을 알 수 있었다.As shown in Table 8, Formulations 1, 2 and 3 containing the extract of Pine Pinus koraiensis showed significantly improved skin elasticity compared to Comparative Formulations 1 and 2.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.While the present invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments thereof, it is to be understood that the same is by way of illustration and example only and is not to be construed as limiting the scope of the present invention. It is therefore intended that the scope of the invention be defined by the claims appended hereto and their equivalents.
Claims (4)
The pine cone extract according to any one of claims 1 to 3, wherein the pine cone extract is selected from the group consisting of (a) water, an anhydrous or hydrated lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, propylene glycol, butylene glycol, glycerin, acetone, (B) a supercritical extraction method, or (c) an extraction method using ultrasonic extraction, wherein the solvent is extracted with an extraction solvent selected from the group consisting of chloroform, butyl acetate, diethyl ether, dichloromethane, A cosmetic composition for improving wrinkles.
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| 뷰티누리 화장품신문, URL : http://beautynury.com/news/printing_ajax/67952/cat/10/page/1 (2015.07.17.)* * |
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| PX0701 | Decision of registration after re-examination |
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