KR20160137577A

KR20160137577A - 동결건조된 ix 인자 제형

Info

Publication number: KR20160137577A
Application number: KR1020167028692A
Authority: KR
Inventors: 브라이언 엠 톰; 체리 파크허스트-랭; 브랜든 더블유 리베일
Original assignee: 바이오젠 엠에이 인코포레이티드
Priority date: 2014-03-24
Filing date: 2015-03-24
Publication date: 2016-11-30
Also published as: JP7058940B2; PH12016501877A1; SG10201913735SA; TW201605492A; IL247869B; JP7503583B2; CA2943034C; NZ724351A; EP3123090A4; JP2024053015A; SG10201808249VA; IL272257A; AU2020202863A1; AU2015236340A1; AR099838A1; IL247869A0; AU2015236340B2; SG11201607642RA; JP2022044689A; MX2016012447A

Abstract

본 발명은, 특히, 사전-동결건조 제형, 재구성된 제형, 및 동결건조 분말 IX 인자(FIX) 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한 FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말을 생성하는 동결건조 방법을 제공한다. 본 발명은 (a) FIX 응고 활성을 갖는 IX 인자(FIX) 폴리펩타이드; (b) 완충제; (c) 안정제; (d) 증량제; 및 (e) 계면활성제를 포함하는 사전-동결건조 제형에 관한 것이되, 상기 제형은 충전 용적이 약 5㎖ 미만이고, 각각의 (a) 내지 (e)는 (1) 동결건조될 때 FIX 폴리펩타이드의 안정성을 개선시키기에 충분한 바이알 당 양(㎎/바이알)이다.

Description

동결건조된 IX 인자 제형{LYOPHILIZED FACTOR IX FORMULATIONS}

본 발명은 일반적으로 혈액응고 장애에 대한 치료제 분야에 관한 것이다.

B형 혈우병(또한 크리스마스병으로 알려짐)은 세계에서 가장 흔한 유전성 출혈 장애이다. 이는 감소된 생체내 및 시험관내 혈액 응고 활성을 야기하며, 병에 걸린 개체의 수명 내내 광대한 의학적 모니터링을 필요로 한다. 처치가 없을 때, 병에 걸린 개체는 중증의 통증 및 쇠약하게 하는 부동상태를 생성하는 관절에서의 자발적 출혈로 고통받을 것이며; 근육 내로의 출혈은 해당 조직에서의 혈액의 축적을 초래하고; 인두 및 목의 자발적 출혈은 즉시 치료되지 않는다면 기절을 야기할 수 있으며, 신출혈; 및 수술후 중증의 출혈, 작은 사고에 의한 손상 또는 발치가 또한 일반적이다.

정상적인 생체내 혈액 응고는 세린 프로테아제 II(프로트롬빈), VII, IX, X 및 XI인자(가용성 혈장 단백질); 막관통 단백질 조직 인자 및 혈장 단백질 V 및 VIII 인자, 피브리노겐, 트랜스글루타미나제 XIII 인자, 인지질(활성 혈소판을 포함함), 및 칼슘을 포함하는 보조인자를 최소로 필요로 한다. 칼리크레인, 고분자량 키니노겐 및 XII 인자를 포함하는 추가적인 단백질은 일부 시험관내 응고 시험에 필요하며, 병리적 병태 하에 생체내에서 어떤 역할을 할 수 있다.

혈우병에서, 혈액 응고는 특정 혈액 응고 인자의 결여에 의해 방해된다. B형 혈우병은 IX 인자 단백질의 감소된 합성 또는 감소된 활성을 지니는 결함 분자 중 하나로부터 초래될 수 있는 IX 인자의 결핍에 의해 야기된다. 혈우병의 치료는 상실 응고 인자의 IX 인자가 고도로 풍부한 외인성 인자 농축물에 의한 대체에 의해 일어난다. 그러나, 혈액으로부터 이러한 농축물의 생성은 이하에 기재하는 바와 같은 기술적 어려움이 많다.

혈장으로부터의 IX 인자(혈장 유래 IX 인자; pdFIX)의 정제는 활성 IX 인자를 거의 배타적으로 수득한다. 그러나, 혈장으로부터의 IX 인자의 이러한 정제는 매우 어려운데, IX 인자는 혈장 중에서 단지 저농도(5㎍/㎖)로 존재하기 때문이다. 문헌[Andersson, Thrombosis Research 7: 451 459 (1975)]. 추가로, 혈액으로부터의 정제는 감염성 제제, 예컨대 HIV 및 HCV의 제거 또는 불활성화를 필요로 한다. 추가로, pdFIX는 짧은 반감기를 가지며, 따라서 빈번한 투약을 필요로 한다. 재조합 IX 인자(rFIX)가 또한 이용가능하지만, 동일한 짧은 반감기로 고통받으며, pdFIX와 같이 빈번한 투약(예를 들어, 예방을 위해 주당 2 내지 3회)을 필요로 한다. rFIX는 또한 pdFIX에 비해 더 낮은 회복 증가분(incremental recovery)(K 값)을 가지는데, 이는 pdFIX보다 더 고용량의 rFIX의 사용을 필요로 한다.

감소된 사망률, 관절 손상의 예방 및 개선된 삶의 질은 혈장-유래 및 재조합 IX 인자의 발생에 기인하여 중요한 성취가 되었다. 출혈로부터의 장기적인 보호는 B형 혈우병 대상체의 치료에서 다른 중요한 진보를 나타낼 것이다. 그러나, 지금까지, 장기적인 보호를 허용하는 생성물은 개발되지 않았다. 따라서, 현재의 요법보다 더 괜찮고 더 효과적인 IX 인자 결핍증에 기인하여 혈우병을 치료하는 개선된 방법에 대한 필요가 남아있다.

특히, 더 높은 약물 생성물 강도, 더 긴 보관수명, 감소된 동결건조 처리 시간 및 더 짧은 재구성 시간을 지니는 개선된 동결건조 FIX 제형에 대한 필요가 남아있다.

본 발명은 (a) IX 인자(Factor IX: FIX) 응고 활성을 갖는 FIX 폴리펩타이드; (b) 완충제; (c) 안정제; (d) 증량제; 및 (e) 계면활성제를 포함하는 사전-동결건조 제형에 관한 것이되, 제형은 약 5㎖ 미만, 약 4㎖ 미만, 또는 약 3㎖의 충전 용적을 가지며, 각각의 (a) 내지 (e)는, 기준 사전-동결건조 제형에 비해, (1) 동결건조될 때 FIX 폴리펩타이드의 안정성을 개선시키거나; (2) 동결건조될 때 재구성 시간을 감소시키거나; (3) 상기 제형을 포함하는 스토퍼 상에서의 스플래싱(splashing)을 감소시키거나; (4) 동결건조 순환 시간을 감소시키거나; (5) 실온에서 사전-동결건조 제형으로부터 제조된 동결건조물의 보관수명을 증가시키거나; 또는 (6) 이들의 임의의 조합을 허용하기에 충분한 바이알 당 양(㎎/바이알)이며, 기준 제형은 사전-동결건조 제형에 대해 동일한 바이알 당 양으로 (a) 내지 (e)를 포함하지만, 충전 용적이 적어도 5㎖이다. 특정 실시형태에서, 제형의 충전 용적은 약 2.65㎖이다.

일부 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 FIX 폴리펩타이드의 적어도 100IU/바이알을 포함한다. 일부 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 FIX 폴리펩타이드의 약 200IU/바이알 내지 약 10,000IU/바이알을 포함한다.

일부 실시형태에서, FIX 폴리펩타이드는 야생형 FIX를 포함한다. 일부 실시형태에서, FIX 폴리펩타이드는 야생형 FIX에 융합된 이종성 모이어티를 추가로 포함한다. 일 실시형태에서, 이종성 모이어티는 FIX의 반감기를 연장시키는 모이어티이다. 다른 실시형태에서, 이종성 모이어티는 폴리펩타이드 또는 비-폴리펩타이드 모이어티를 포함한다. 일 실시형태에서, FIX의 반감기를 연장시키는 모이어티는 FcRn 결합 상대 또는 Fc 영역을 포함한다. 일 실시형태에서, FIX 폴리펩타이드는 서열번호 2에 대해 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 100% 동일하다.

일부 실시형태에서, 충전 용적은 약 4㎖, 약 3.5㎖, 약 3.0㎖, 약 2.9㎖, 약 2.8㎖, 약 2.7㎖, 약 2.65㎖, 약 2.6mL, 약 2.5㎖, 약 2.4㎖, 약 2.3㎖, 약 2.2㎖, 약 2.1㎖ 또는 약 2.0㎖이다.

일부 실시형태에서, 감소된 재구성 시간은 1.5분 미만, 1분 미만, 50초 미만, 40초 미만, 30초 미만, 20초 미만 또는 10초 미만이다.

일부 실시형태에서, 완충제는 L-히스티딘이다. 일 실시형태에서, 완충제는 약 3㎎/㎖ 내지 약 15㎎/㎖의 농도(㎎/㎖)이다. 다른 실시형태에서, 완충제는 바이알 당 약 8㎎ 내지 약 39㎎의 농도이다.

일부 실시형태에서, 안정제는 수크로스이다. 일 실시형태에서, 안정제는 10㎎/㎖ 내지 약 50㎎/㎖의 농도(㎎/㎖)이다. 다른 실시형태에서, 안정제는 바이알 당 약 27㎎ 내지 약 132㎎의 농도이다.

일부 실시형태에서, 증량제는 만니톨이다. 일 실시형태에서, 증량제는 20㎎/㎖ 내지 약 100㎎/㎖의 농도(㎎/㎖)이다. 다른 실시형태에서, 증량제는 바이알 당 약 53㎎ 내지 바이알 당 약 265㎎의 농도이다.

일부 실시형태에서, 계면활성제는 폴리솔베이트 20이다. 일 실시형태에서, 계면활성제는 0.01㎎/㎖ 내지 약 5㎎/㎖의 농도(㎎/㎖)이다. 다른 실시형태에서, 계면활성제 바이알 당 약 0.03㎎ 내지 약 13㎎의 농도이다.

일 양상에서, 본 발명은 (a) 약 80 내지 약 2,750IU/㎖의 rFIXFc; (b) 약 7.76㎎/㎖의 L-히스티딘; (c) 약 47.6㎎/㎖의 만니톨; (d) 약 23.8㎎/㎖의 수크로스; 및 (e) 약 0.2㎎/㎖의 폴리솔베이트-20을 포함하는 사전-동결건조 제형에 관한 것이다.

본 발명은 추가로 FIX 폴리펩타이드, 완충제, 안정제, 증량제, 계면활성제, 또는 이들의 임의의 조합물을 포함하는 동결건조 분말에 관한 것이다.

일부 실시형태에서, 동결건조 분말의 잔여 수분 수준은 1% 미만이다.

일 실시형태에서, 동결건조 분말은 (a) 바이알 당 약 2㎎ 내지 바이알 당 약 150㎎의 양으로 FIX 폴리펩타이드; (b) 바이알 당 10㎎ 내지 바이알 당 약 30㎎의 양으로 완충제; (c) 바이알 당 70㎎ 내지 바이알 당 약 200㎎의 양으로 증량제; (d) 바이알 당 30㎎ 내지 바이알 당 약 100㎎의 양으로 안정제; 및 (e) 바이알 당 0.05㎎ 내지 바이알 당 약 5㎎의 양으로 계면활성제를 포함한다.

다른 실시형태에서, 동결건조 분말은 (a) 바이알 당 약 2.2㎎ 내지 바이알 당 약 125㎎의 양으로 동결건조된 FIX 폴리펩타이드; (b) 바이알 당 약 12.5㎎ 내지 바이알 당 약 25㎎의 양으로 완충제; (c) 바이알 당 약 32.5㎎ 내지 바이알 당 약 80㎎의 양으로 안정제; (d) 바이알 당 약 75㎎ 내지 바이알 당 약 150㎎의 양으로 증량제; 및 (e) 바이알 당 약 0.1㎎ 내지 바이알 당 약 2㎎의 양으로 계면활성제를 포함한다.

다른 실시형태에서, 동결건조 분말은: (a) 약 2.2 내지 약 125㎎/바이알의 FIX 폴리펩타이드; (b) 약 20.6㎎/바이알의 L-히스티딘; (c) 약 126.1㎎/바이알의 만니톨; (d) 약 63.1㎎/바이알의 수크로스; 및, (e) 약 0.53㎎/바이알의 폴리솔베이트-20을 포함한다;

본 발명은 또한 재구성 완충제에 의해 재구성된 본 명세서에 기재된 동결건조 분말을 포함하는 재구성된 제형에 관한 것이다.

일 실시형태에서, 재구성된 제형은 (a) 약 0.9㎎/㎖ 내지 약 50㎎/㎖의 농도로 FIX 폴리펩타이드; (b) 1.5㎎/㎖ 내지 약 7.5㎎/㎖의 농도로 완충제; (c) 10㎎/㎖ 내지 약 50㎎/㎖의 농도로 증량제; (d) 바이알 당 5㎎/㎖ 내지 25㎎/㎖의 농도로 안정제; 및 (e) 0.005㎎/㎖ 내지 약 2.5㎎/㎖의 농도로 계면활성제를 포함한다.

다른 실시형태에서, 재구성된 제형은: (a) 약 0.9㎎/㎖ 내지 약 50㎎/㎖의 농도로 FIX 폴리펩타이드; (b) 약 3.88㎎/㎖의 농도로 완충제; (c) 약 23.8㎎/㎖의 농도로 증량제; (d) 약 11.9㎎/㎖의 농도로 안정제; (e) 약 0.1㎎/㎖의 농도로 계면활성제; 및 (f) 재구성 완충제를 포함한다.

다른 실시형태에서, 재구성된 제형은 (a) 약 80IU/㎖ 내지 약 2,750IU/㎖의 농도로 FIX 폴리펩타이드; (b) 약 25mM의 농도로 완충제; (c) 약 131 mM의 농도로 증량제; (d) 약 35mM의 농도로 안정제; (e) 0.01 % (w/v)의 농도로 계면활성제; 및 (f) 재구성 완충제를 포함한다.

본 발명은 추가로 환자에게 본 명세서에 기재된 재구성된 제형을 투여하는 단계를 포함하는, 투여가 필요한 B형 혈우병 환자에게 FIX 폴리펩타이드를 투여하는 방법, 또는 예방, 치료, 개선 또는 관리가 필요한 환자에서 B형 혈우병을 에방, 치료, 개선 또는 관리하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 본 명세서에 기재된 사전-동결건조 제형을 동결건조시키는 단계를 포함하는 FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말의 생성 방법에 관한 것이다.

일 양상에서, 본 발명은 (a) FIX 폴리펩타이드 및 수성 용매를 포함하는 사전-동결건조 제형을 냉동시키는 것을 포함하는 "냉동 단계"; (b) 냉동된 사전-동결건조 제형으로부터 수성 용매를 제거하기 위한 효과적인 양에 의해 냉동된 사전-동결건조 제형의 압력을 감소시키는 것을 포함하는 "진공 단계"; 및, (c) 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도를 붕괴 온도 초과로 증가시키는 것을 포함하는 단일 "건조 단계"를 포함함으로써, 동결건조 분말을 생성하는 FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 멸균 여과되고, 단계 (a) 전에 바이알 내로 멸균 충전된다.

다른 양상에서, 본 발명은 (a) 약 2시간 동안 온도를 약 -55℃의 냉동 온도로 하강시킴으로써, 그리고 약 2시간 동안 냉동 온도를 유지함으로써 FIX 폴리펩타이드를 포함하는 사전-동결건조 제형을 냉동시키는 것을 포함하는 "냉동 단계"; (a') 약 1.5 시간 동안 단계 (a)의 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도를 약 -6℃의 어닐링 온도로 상승시키고, 약 3시간 동안 어닐링 온도를 유지하고 나서, 약 1.5시간 동안 실온을 약 -55℃로 하강시키는 것을 포함하는, "어닐링 단계"; (b) 대기압에서 2시간 동안 약 -55℃에서 단계 (a')의 냉동된 사전-동결건조 제형을 유지하고, 약 2시간 동안 압력을 약 0.33mbar로 하강시키는 것을 포함하는 "진공 단계"; 및, (c) 3시간 동안 단계 (b)의 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도를 약 40℃로 상승시키는 한편, 약 0.33mbar의 압력을 유지하고, 약 40℃에서 약 25시간 동안 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도를 유지하는 한편, 0.33mbar에서 압력을 유지하는 것을 포함하는 단일 "건조 단계"를 포함함으로써, 동결건조 분말을 생성하는, FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말의 생성 방법에 관한 것이다.

추가 양상에서, 동결건조 분말은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 특징을 가진다: (1) 동결건조될 때 FIX 폴리펩타이드의 개선된 안정성; (2) 동결건조될 때 감소된 재구성 시간; (3) 상기 제형을 포함하는 스토퍼 상에서의 감소된 스플래싱; (4) 감소된 동결건조 순환 시간; (5) 실온에서 사전-동결건조 제형으로부터 제조된 동결건조물의 증가된 보관수명; 또는 (6) 이들의 임의의 조합.

일 양상에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 방법에 따라 사전-동결건조 제형을 동결건조시키는 단계를 포함하는, FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말을 안정화시키는 방법을 제공하되, 동결건조 분말은 1회 이상의 건조 단계를 포함하는 동결건조 방법을 이용함으로써 동결건조 분말에 비해 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 측정되는 바와 같이 안정화된다.

다른 양상에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 방법에 따라 사전-동결건조 제형을 동결건조시키는 단계를 포함하는, FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말의 보관수명을 증가시키는 방법을 제공하되, 동결건조 분말의 보관수명은 1회 이상의 건조 단계를 포함하는 동결건조 방법을 이용함으로써 제조된 동결건조 분말의 보관 수명에 비해 SEC 및/또는 FIX 응고 활성 분석에 의해 측정되는 바와 같이 증가된다.

본 개시내용은 또한 본 명세서에 기재된 방법에 따른 사전-동결건조 제형을 동결건조시키는 단계를 포함하는 FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말의 재구성 시간을 감소시키는 방법을 제공하되, 동결건조 분말의 재구성 시간은 1회 이상의 건조 단계를 포함하는 동결건조 방법을 이용함으로써 제조된 동결건조 분말의 재구성 시간에 비해 감소된다.

본 개시내용은 추가로 본 명세서에 기재된 방법에 따라 사전-동결건조 제형을 동결건조시키는 단계를 포함하는, FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말을 생성하는 동결건조 처리 시간을 감소시키는 방법을 제공하되, 사전-동결건조 제형의 동결건조 과정은 1회 이상의 건조 단계를 포함하는 동결건조 방법을 이용하여 동결건조 분말을 생성하는 것의 동결건조 과정 시간에 비해 감소된다.

도 1은 각각의 동결건조 주기에 대한 바이알 장입 패턴을 도시한 도면. 숫자 1, 2 및 3은 열전대 위치를 나타낸다.
도 2는 동결건조 변수(온도, 진공 및 시간)의 함수로서 잔여 수분의 DOE 분석으로부터의 예측 프로파일러를 도시한 도면.
도 3은 동결건조 변수(온도 및 진공)의 함수로서 승화 동안 생성물 온도의 DOE 분석으로부터의 예측 프로파일러를 도시한 도면.
도 4는 동결건조 변수(온도 및 진공)의 함수로서 승화 동안 바이알 질량 흐름의 DOE 분석으로부터의 예측 프로파일러를 도시한 도면.
도 5는 제안된 rFIXFc-2G 동결건조 주기와 유사한 실시예 2에서의 DOE 실행 8로부터의 동결건조 데이터(40℃의 보관 온도, 250mTorr(0.33mBar)의 챔버 진공 및 25시간의 건조 시간)를 도시한 도면.

본 개시내용은, 특히, 사전-동결건조 제형, 재구성된 제형, 및 동결건조 분말 IX 인자(FIX) 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 개시내용은 또한 FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말을 생성하는 동결건조 방법을 제공한다. 또한 FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말을 안정화시키는 방법, FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말의 보관수명을 증가시키는 방법, FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말의 재구성 시간을 감소시키는 방법, 및 FIX 폴리펩타이드를 포함하는 사전-동결건조 제형의 동결건조 과정 시간을 감소시키는 방법이 제공된다. 추가로, 본 개시내용은 FIX 폴리펩타이드를 포함하는 재구성된 제형을 투여함으로써 예방, 치료, 개선 또는 관리가 필요한 환자에서 B형 혈우병을 예방, 치료, 개선 또는 관리하는 방법을 제공한다.

정의

본 개시내용 전체적으로 단수의 용어 독립체는 하나 이상의 해당 독립체를 지칭하며; 예를 들어, "폴리뉴클레오타이드"는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 나타내는 것으로 이해된다. 이와 같이 단수의 용어, "하나 이상" 및 "적어도 하나"는 본 명세서에서 상호호환적으로 사용될 수 있다.

더 나아가, 본 명세서에서 사용되는 "및/또는"은 다른 것이 있거나 또는 다른 것이 없는 각각 2개의 구체화된 특징 또는 성분의 구체적 개시내용으로서 취해져야 한다. 따라서, 본 명세서 "A 및/또는 B"와 같은 어구에서 사용되는 용어 "및/또는"은 "A 및 B," "A 또는 B," "A"(단독), 및 "B"(단독)를 포함하는 것으로 의도된다. 마찬가지로, "A, B 및/또는 C"와 같은 어구에서 사용되는 용어 "및/또는"은 다음의 양상의 각각을 포함하는 것으로 의도된다: A, B 및 C; A, B 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독).

어느 양상에서나 언어 "포함하는"과 함께 본 명세서에 기재되어 있으며, "이루어진" 및/또는 "본질적으로 이루어진"에 대해 기재된 다른 유사한 양상이 또한 제공된다는 것이 이해된다.

달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 개시내용이 관련된 분야의 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 예를 들어, 문헌[Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press; 및 the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press]은 본 개시내용에 사용되는 다수 용어의 일반적 사전을 당업자에게 제공한다.

단위, 접두사 및 기호는 그들의 국제 단위체계(SI) 허용 형태로 나타낸다. 수치적 범위는 범위를 정하는 숫자를 포함한다. 달리 표시되지 않는 한, 아미노산 서열은 아미노에서 카복시 배향의 좌에서 우로 기재된다. 본 명세서에 제공되는 표제는 본 명세서에 대해 전체로서 참고가 될 수 있는 개시내용의 다양한 양상의 제한이 아니다. 따라서, 바로 이하에 정의되는 용어는 그의 전문이 본 명세서에 대해 참고로서 더욱 완전하게 정의된다.

용어 "약"은 본 명세서에서 대략, 거의, 주변의, 또는 약을 의미하기 위해 사용되며, 값은 측정 시스템의 제한 방법에 의존할 것이다. 용어 "약"이 수치적 범위와 함께 사용될 때, 이는 제시된 수치적 값 초과 및 미만의 경계로 확장함으로써 해당 범위를 변형시킨다. 일반적으로, 용어 "약"은, 예를 들어, 10% 또는 20%, 위 또는 아래(더 높거나 또는 더 낮음)의 분산에 의해 언급된 값 초과 및 미만으로 수치적 값을 변형시킬 수 있다. 달리 언급되지 않는 한, "약"의 의미는 제형 또는 조성물에 대한 특정 값에 대해 허용가능한 오차 범위 내인 것으로 추정되어야 한다.

용어 "폴리펩타이드", "펩타이드" 및 "단백질"은 상호호환적으로 사용되며, 공유결합된 아미노산 잔기를 포함하는 중합체 화합물을 지칭한다.

용어 "폴리뉴클레오타이드" 및 "핵산"은 상호호환적으로 사용되며, 공유결합되니 뉴클레오타이드 잔기를 포함하는 중합체 화합물을 지칭한다. 폴리뉴클레오타이드는 DNA, cDNA, RNA, 단일 가닥 또는 이중 가닥, 벡터, 플라스미드, 파지 또는 바이러스일 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "투여하는"은, 예를 들어, FIX 폴리펩타이드를 포함하는 약제학적 조성물을 대상체에게 처방 또는 제공하는 것을 의미한다. 투여 경로의 예는, 예를 들어, 중심 정맥 접근을 통한 정맥내, 예를 들어, 정맥내 주사 및 정맥내 주입을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 추가적인 투여 경로는 피하, 근육내, 경구, 비강 및 폐 투여를 포함한다. FIX 폴리펩타이드를 포함하는 약제학적 조성물은 본 명세서에 기재된 바와 같은 하나 이상의 부형제를 포함할 수 있다. 본 명세서에 제공된 방법, 조성물 및 약제학적 키트의 이점은 개선된 요법 준수; 출혈을 통한 감소된 파열; 출혈로부터의 관절의 증가된 보호; 관절 손상의 예방; 감소된 이환율; 감소된 사망률; 출혈로부터의 연장된 보호; 감소된 혈전 사건; 및 개선된 삶의 질을 포함한다. 투여하는 단계는 비경구 투여를 포함한다. 일부 실시형태에서, 비경구 투여는 정맥내 또는 피하 투여이다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "치료" 또는 "치료하는"은 B형 혈우병을 포함하지만, 이것으로 제한되지 않는 출혈 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상의 개선 또는 감소를 의미한다. 일 실시형태에서, 출혈 질환 또는 장애"의 치료" 또는 "치료하는"은 출혈 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상의 예방을 포함한다. FIX 결핍증(예를 들어, 낮은 기준 FIX 활성)에 의해 야기되는 출혈 질환 또는 장애에서, 용어 "치료" 또는 "치료하는"은 FIX 대체 요법을 의미할 수 있다. 대상체에 FIXFc 폴리펩타이드를 투여함으로써, 대상체는 약 1IU/㎗ 또는 1IU/㎗ 초과로 FIX 활성의 혈장 트로프 수준을 달성 및/또는 유지할 수 있다. 다른 실시형태에서, "치료" 또는 "치료하는"은 출혈 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상, 예를 들어, 자발적 또는 제어가능하지 않은 출혈 에피소드의 빈도 감소를 의미한다. 그러나, "치료"는 치유가 필요하지 않다.

본 명세서에 사용된 바와 같은 "환자"는 제어가능하지 않은 출혈 에피소드의 적어도 1회 발생률을 갖는 것으로 알려진 개체, 제어가능하지 않은 출혈 에피소드, 예를 들어 출혈 질환 또는 장애, 예를 들어 B형 혈우병과 관련된 질환 또는 장애로 진단된 개체, 제어가능하지 않은 출혈 에피소드, 예를 들어 혈우병의 여지가 있는 개체, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 환자는 또한 특정 활동, 예를 들어, 수술, 수술 활동 또는 임의의 격렬한 활동 전에 하나 이상의 제어가능하지 않은 출혈 에피소드의 위험에 있는 개체를 포함할 수 있다. 환자는 1% 미만, 0.5% 미만, 2% 미만, 2.5% 미만, 3% 미만 또는 4% 미만의 기준 FIX 활성을 가질 수 있다. 환자는 또한 소아 인간을 포함한다. 소아 환자는 출생 내지 20세, 바람직하게는 출생 내지 18세, 출생 내지 16세, 출생 내지 15세, 출생 내지 12세, 출생 내지 11세, 출생 내지 6세, 출생 내지 5세, 출생 내지 2세, 및 2 내지 11세이다.

본 명세서에 사용되는 바와 같은 "기준"은 용량을 투여하기 전에 대상체에서 가장 낮게 측정된 혈장 IX 인자 수준이다. IX 인자 혈장 수준은 투약 전 2회 시점에(선별 방문 시 그리고 투약 직전에) 측정될 수 있다. 대안적으로, (a) 전처리 FIX 활성이 1% 미만인 대상체, 검출가능하지 않은 FIX 항원을 가지며, 넌센스 유전자형을 갖는 대상체에서의 기준은 0%로서 나타낼 수 있으며, (b) 1% 미만의 전처리 FIX 활성을 지니고 검출가능한 FIX 항원을 갖는 대상체에 대한 기준은 0.5%로 설정될 수 있고, (c) 전처리 FIX 활성이 1 내지 2%인 대상체에 대한 기준은 Cmin(PK 연구 내내 가장 낮은 활성)이며, (d) 전처리 FIX 활성이 2% 이상인 대상체에 대한 기준은 2%로 설정될 수 있다. 기준 사전 투약 초과의 활성은 사전 치료로부터의 잔여 약물을 고려할 수 있으며, 기준에 대해 붕괴되고, rFIXFBP 투약 후 PK 데이터로부터 차감될 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "트로프"는 본 발명의 또는 다른 IX 분자의 키메라 폴리펩타이드의 용량을 투여한 후에 그리고 만약에 있다면 다음 용량이 투여되기 전에 도달된 가장 낮은 혈장 IX 인자 활성 수준이다. 트로프는 본 명세서에서 "역치"와 상호호환적으로 사용된다. 기준 IX 인자 수준은 트로프 수준을 계산하기 위해 측정된 IX 인자로부터 차감된다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "반감기"는 생체내 특정 폴리펩타이드의 생물학적 반감기를 지칭한다. 반감기는 대상체에게 투여되는 양의 절반이 동물 내의 순환 및/또는 다른 조직으로부터 클리어런스되는데 필요한 시간으로서 표시될 수 있다.

용어 "장시간 작용성" 및 "지속성"은 본 명세서에서 상호호환적으로 사용된다. 일 실시형태에서, 용어 "장시간 작용성" 또는 "지속성"은 rFIXFBP 폴리펩타이드의 투여 결과로서의 FIX 활성이 야생형 FIX(예를 들어, 베네픽스(BENEFIX)(등록상표) 또는 혈장-유래 FIX("pdFIX"))의 FIX 활성보다 더 길다는 것을 나타낸다. "더 긴" FIX 활성은 당업계의 임의의 공지된 방법, 예를 들어, aPTT 분석, 색원체(chromogenic) 분석, ROTEM, TGA 등에 의해 측정될 수 있다. 일 실시형태에서, "더 긴" FIX 활성은 T_1/ _2베타(활성)에 의해 나타날 수 있다. 다른 실시형태에서, "더 긴" FIX 활성은 혈장에 존재하는 FIX 항원 수준에 의해, 예를 들어, T_1/ _2베타(항원)에 의해 추론될 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "동결건조물", "동결건조 분말", "동결건조된 생성물" 또는 "생성물 케이크"는 냉동-건조 방법에 의해 제조된 제형을 의미한다. 용어(예를 들어, 물)는 진공 하에서 승화 및 승온에서 잔여 물의 탈착 후 냉동에 의해 제거된다. 약제학적 분야에서, 동결건조물은 분말로서 또는 물리적으로 안정한 케이크로서 제공된다. 동결건조물은 재구성 배지의 첨가 후 빠른 용해를 특징으로 한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "사전-동결건조 제형" 또는 "동결건조 공급물"은 용매(예를 들어, 물)가 냉동 건조 방법에 의해 제거되기 전의 액체 제형을 의미한다. 사전-동결건조 제형의 "충전 용적"은 동결건조 전 액체 제형의 총 용적이다.

본 명세서에서 사용되는 "T_1/ _2β" 또는 "T_{1/2 베타}" 또는 "베타 HL"은 소실 단계와 관련된 반감기, 즉, 최종 단계와 관련된 t_1/ _2β=(ln2)/소실 속도 상수이다. T_{1/2 베타}는 혈장 내 FIX 활성에 의해 또는 또는 FIX 항원 수준에 의해 측정될 수 있다. 활성에 기반한 T_{1/2 베타}는 T_{1/2 베타} (활성)으로서 나타내며, FIX 항원 수준에 기반한 T_{1/2 베타}는 T_1/2 _베타(항원)으로서 나타낼 수 있다. T_{1/2 베타}(활성)와 T_1/2 _베타(항원)은 둘 다 범위 또는 기하평균으로서 나타낼 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "재구성된 제형" 또는 "재구성 후 조성물"은 동결건조되고 희석제의 첨가에 의해 재용해되는 제형을 의미한다. 희석제는, 제한 없이, 주사용수(water for injection: WFI), 멸균 주사용수(bacteriostatic water for injection: BWFI), 염화나트륨 용액(예를 들어, 0.9% (w/v) NaCl), 글루코스 용액(예를 들어, 5% 글루코스), 계면활성제 함유 용액(예를 들어, 0.01% 폴리솔베이트 20 또는 폴리솔베이트 80), pH-완충 용액(예를 들어 인산염 완충 용액) 및 이들의 조합물을 함유할 수 있다.

일반적 동결건조 과정

동결건조, 또는 냉동 건조는 생물 및 약제학적 물질의 보존을 위한 약제학적 산업에서 널리 사용되는 과정이다. 또한 동결건조 주기로서 공지된 동결건조 과정은 전통적으로 3가지의 별도 단계(냉동, 1차 건조 및 2차 건조)로 나뉘어진다. 본 명세서에서 사용되는 "동결건조하는"은 냉동 단계와 건조 단계를 둘 다 포함하는 전체 동결건조 단계를 지칭한다.

동결건조에서, 물질 중에 존재하는 물은 냉동 단계 동안 얼음으로 전환되고, 이어서, 1차 건조 단계 동안 저압 조건 하에 직접 승화에 의해 물질로부터 제거된다. 그러나, 냉동 동안 모든 물이 얼음으로 전환되지는 않는다. 물의 일부분은, 예를 들어, 제형 성분 및/또는 활성 성분을 함유하는 고체 기질에 가두어진다. 기질 내의 과량의 결합수는 2차 건조 단계 동안 목적으로 하는 수분 수준으로 감소될 수 있다. 모든 동결건조 단계, 냉동, 1차 건조 및 2차 건조는 최종 생성물 특성을 결정한다. 1차 건조는 전형적으로 동결건조 과정에서 가장 긴 단계이며, 따라서, 과정의 이 부분의 최적화는 상당한 경제적 효과를 가진다.

본 발명의 특정 양상에서, 동결건조 과정은 1차 건조 단계만을 포함한다.

본 발명의 특정 양상에서, 동결건조 과정은 또한 냉동 단계와 1차 건조 단계 사이에 별도의 "진공 단계"를 포함한다.

본 발명의 다른 양상에서, 동결건조 과정은 추가로 냉동 단계와 1차 건조 단계 사이에 "어닐링 단계"를 포함한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "어닐링 단계"는 제제의 건조 단계 전에 동결건조를 겪는 폴리펩타이드 제제의 동결건조 과정의 단계를 지칭하며, 이때, 제조 온도는 더 저온으로부터 더 고온으로 상승되고, 이어서, 일정 시간 후에 냉각된다.

주기 및 제형 최적화는 1차 건조 동안 생성물 온도가 붕괴 온도를 결코 초과하지 않는다는 것을 보장하기 위해 전통적으로 수행되었다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "붕괴 온도"는 생성물 케이크가 그의 본래의 구조를 상실하기 시작하는 상기 냉동-건조 동안의 생성물 온도를 지칭한다. 붕괴 온도 초과에서, 생성물은 생성물의 외관에 대한 결과를 가질 수 있는 느린 산발적 버블링, 거품형성, 공동현상, 천공, 전체 붕괴, 수축 및 비드화를 겪을 수 있었다. 그 결과, 붕괴는 불량한 생성물 안정성, 긴 건조 시간, 불균일 건조 및 질감 상실을 초래할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제2010/0041870호 참조.

본 발명에 따른 동결건조 생성물은 생성물 품질 분석, 재구성 시간, 재구성 품질, 고분자량, 수분, 유리 전이 온도(T_g), 및 생물학적 또는 생화학적 활성에 기반하여 평가될 수 있다. 전형적으로, 생성물 품질 분석은 크기 배제 크로마토그래피(SEC), 양이온 교환-HPLC(CEX-HPLC), X-선 회절(XRD), 변조 시차 주사 열량측정법(mDSC), 역상 HPLC(RP-HPLC), 다각 광산란 검출기(MALS), 형광, 자외선 흡수, 비탁법, 모세관 전기이동(CE), SDS-PAGE, 및 이들의 조합을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 방법을 이용하는 생성물 분해 속도 분석을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 발명에 따른 동결건조 생성물의 평가는 케이크 외관을 평가하는 단계를 포함한다. 추가적으로, 동결건조된 생성물은 전형적으로 재구성 후에 생성물의 생물학적 또는 생화학적 활성에 기반하여 평가될 수 있다.

동결건조된 IX 인자 제형

본 개시내용은 사전-동결건조, 동결건조 및 재구성 후 제형, 또는 FIX 폴리펩타이드를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 특정 양상에서, 본 명세서에 개시된 제형은 FIX 폴리펩타이드, 완충제, 안정제, 증량제 및 계면활성제, 또는 이들의 임의의 조합물을 포함한다. 제형은 또한 약제학적 제형에 유용한 임의의 다른 제제를 함유할 수 있다.

IX 인자(FIX) 폴리펩타이드

제형에 유용한 FIX 폴리펩타이드 또는 FIX 단백질은 달리 구체화되지 않는 한 응고에서의 그의 정상적 역할에서 기능성 인자 FIX 단백질이다. 따라서, FIX 폴리펩타이드는 기능성인 변이체 폴리펩타이드 및 이러한 기능성 변이체 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 일 실시형태에서, FIX 폴리펩타이드는 인간, 소, 돼지, 개, 고양이 및 뮤린 FIX 폴리펩타이드이다. 다수의 기능성 변이체, 예를 들어, 단편, 돌연변이체 및 변형된 형태와 같은 FIX의 전장 폴리펩타이드 및 폴리뉴클레오타이드 서열이 공지되어 있다. FIX 폴리펩타이드는 전장 FIX, N-말단에서 전장 FIX - Met, 신호 서열에서 전장 FIX - 신호 서열, 성숙 FIX(- 신호 서열 및 프로펩타이드), 및 N-말단에서 추가적인 Met를 지니는 성숙 FIX를 포함한다. FIX는 재조합 수단("재조합 IX 인자" 또는 "rFIX")에 의해 생성될 수 있으며, 즉, 천연 유래가 아니거나 또는 혈장으로부터 유래되지 않는다.

매우 다수의 기능성 FIX 변이체가 공지되어 있다. 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 국제 특허 출원 공개 번호 WO 02/040544 A3은 4페이지, 9 내지 30번째줄 및 15페이지, 6 내지 31번째 줄에서 헤파린에 의한 저해에 대해 증가된 저항을 나타내는 돌연변이체를 개시한다. 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 국제 특허 출원 공개 번호 WO 03/020764 A2는 표 2 및 3(14 내지 24페이지) 및 12페이지, 1 내지 27번째 줄에서 감소된 T 세포 면역원성을 지니는 FIX 돌연변이체를 개시한다. 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2007/149406 A2는 4페이지, 1번째줄 내지 19페이지, 11번째줄에 대해 증가된 단백질 안정성, 증가된 생체내 및 시험관내 반감기 및 프로테아제에 대한 증가된 내성을 나타내는 기능성 돌연변이체 FIX 분자를 개시한다. WO 2007/149406 A2는 또한 19페이지, 12번째줄 내지 20페이지, 9번째줄에서 키메라 및 다른 변이체 FIX 분자를 개시한다. 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 국제 특허 출원 공개 번호 WO 08/118507 A2는 5페이지, 14번째줄 내지 6페이지 5번째줄에서 증가된 응고 활성을 나타내는 FIX 돌연변이체를 개시한다. 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 국제 특허 출원 공개 번호 WO 09/051717 A2는 9페이지, 11번째줄 내지 20페이지 2번째줄에서 증가된 반감기 및/또는 회복을 야기하는 증가된 수의 N-연결 및/또는 O-연결 글리코실화 부위를 갖는 FIX 돌연변이체를 개시한다. 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 국제 특허 출원 공개 번호 WO 09/137254 A2는 또한 2페이지, 단락 [006] 내지 5페이지, 단락 [011] 및 16페이지, 단락 [044] 내지 24페이지, 단락 [057]에서 증가된 수의 글리코실화 부위를 지니는 IX 인자 돌연변이체를 개시한다. 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 국제 특허 출원 공개 번호 WO 09/130198 A2는 4페이지 26번째줄 내지 12페이지, 6번째줄에서 증가된 반감기를 야기하는 증가된 수의 글리코실화 부위를 갖는 기능성 돌연변이체 FIX 분자를 개시한다. 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 국제 특허 출원 공개 번호 WO 09/140015 A2는 11페이지, 단락 [0043] 내지 13페이지, 단락 [0053]에서 중합체(예를 들어, PEG) 컨쥬게이션을 위해 사용될 수 있는 Cys 잔기의 수가 증가된 기능성 FIX 돌연변이체를 개시한다. FIX 폴리펩타이드는 또한 전문이 본 명세서에 참고로 포함된 2011년 7월 11일자로 출원되고, 2012년 1월 12일자의 WO 2012/006624로서 공개된 국제 특허 출원 PCT/US2011/043569에 기재되어 있다.

특정 실시형태에서, FIX 폴리펩타이드는 야생형 FIX를 포함한다. 일부 실시형태에서, FIX 폴리펩타이드는 야생형 FIX에 융합된 이종성 모이어티를 추가로 포함한다. 특정 실시형태에서, 이종성 모이어티는 FIX의 반감기를 연장시키는 모이어티이다. 특정 실시형태에서, 이종성 모이어티는 폴리펩타이드 또는 비-폴리펩타이드 모이어티를 포함한다.

다른 실시형태에서, FIX 폴리펩타이드는 장시간 작용성 FIX 폴리펩타이드이다. 장시간 작용성 FIX 폴리펩타이드는 FIX 부분 및 비 FIX 부분, 예를 들어, FIX 폴리펩타이드의 생체내 또는 시험관내 반감기를 연장시킬 수 있는 이종성 모이어티를 포함할 수 있다. 예시적인 비-FIX 부분은, 예를 들어, Fc, 알부민, PAS 서열, 트랜스페린, CTP(4개의 O-글리칸을 지니는 인간 융모성 고나도트로핀(hCG)의 28개의 아미노산 C-말단 펩타이드(CTP)), 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 하이드록시에틸 전분(HES), 알부민 결합 폴리펩타이드, 알부민-결합 소분자 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 발명의 예시적인 장시간 작용성 FIX 폴리펩타이드는, 예를 들어, IX 인자-Fc 폴리펩타이드, IX 인자-알부민 폴리펩타이드, IX 인자-PAS 폴리펩타이드, IX 인자 -트랜스페린 폴리펩타이드, IX 인자 -CTP 폴리펩타이드, IX 인자 -PEG 폴리펩타이드, IX 인자 -HES 폴리펩타이드, IX 인자 -알부민 결합 폴리펩타이드 폴리펩타이드, 또는 IX 인자 -알부민-결합 소분자 폴리펩타이드를 포함한다.

일 실시형태에서, FIX 폴리펩타이드는 인간 항체(IgG1 아이소타입)의 인간 응고 IX 인자(FIX) 및 Fc 도메인을 포함하는 재조합 융합 단백질인 rFIXFc이다. 예를 들어, 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 2011년 7월 11일자로 출원되고, WO 2012/006624로서 공개된 PCT 출원 번호 PCT/US2011/043569 참조. rFIXFc 폴리펩타이드는 FIXFc 단일쇄(FIXFc-sc) 및 Fc의 힌지 영역에서 2개의 이황화 결합을 통해 함께 결합된 단일쇄(Fc-sc)를 지니는 이형이량체 단백질이다. rFIXFc는 최종 단백질 생성물인 rFIXFc를 형성하기 위해 형질감염 세포주 내에서 조립되는 2개의 단백질 서브유닛, 즉, FIXFc-sc(642개의 아미노산, 서열번호 2) 및 Fc-sc(227개의 아미노산, 서열번호 4)가 필요하다. FIXFc-sc 및 Fc-sc를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 각각 열번호 1 및 서열번호 3으로서 제시된다.

특정 실시형태에서, rFIXFc의 IX 인자 부분은 혈장 유래 IX 인자의 Thr148 대립형질 형태와 동일한 1차 아미노산 서열을 가지며, 내인성 IX 인자와 유사한 구조적 및 기능성 특징을 가진다. rFIXFc의 Fc 도메인은 IgG1의 힌지, CH2 및 CH3 영역을 함유한다. rFIXFc의 조립된 이형이량체 성숙 형태는 분자량이 대략 98 킬로달톤인 869개의 아미노산을 함유한다. 일부 실시형태에서, rFIXFc 폴리펩타이드는 서열번호 2의 아미노산 1 내지 642에 대해 적어도 90%, 95% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, FIX에 융합된 제2 부분은 FcRn 결합 상대이다. 다른 실시형태에서, FIX에 융합된 FcRn 결합 상대는 Fc 단편이다. FcRn 결합 상대는 FcRn 결합 상대의 FcRn 수용체에 의해 결과적인 활성 수송을 지니는 FcRn 수용체에 의해 특이적으로 결합될 수 있는 임의의 분자이다. 따라서, 용어 Fc는 기능성인 IgG Fc의 임의의 변이체를 포함한다. FcRn 수용체에 결합하는 IgG의 Fc 부분의 영역은 X선 결정학에 기반하여 기재되었다(본 명세서에 전문이 참고로 포함된 문헌[Burmeister et al., Nature 372:379 (1994)]). Fc와 FcRn과의 주요 접촉 면적은 CH2 및 CH3 도메인의 접합 근처이다. Fc-FcRn 접촉은 모두 단일 Ig 중쇄 내에 있다. FcRn 결합 상대는, 예를 들어, 전체 IgG, IgG의 Fc 단편, 및 FcRn의 완전한 결합 영역을 포함하는 IgG의 다른 단편을 포함한다. 주요 접촉 부위는 CH2 도메인의 아미노산 잔기 248, 250-257, 272, 285, 288, 290-291, 308-311, 및 314 및 CH3 도메인의 아미노산 잔기 385-387, 428 및 433-436을 포함한다. 면역글로불린 또는 면역글로불린 단편 또는 영역의 아미노산 넘버링에 대한 언급은 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 문헌[Kabat et al. 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, U. S. Department of Public Health, Bethesda; MD]에 모두 기반한다. FcRn 수용체는 인간을 포함하는 몇몇 포유류 종으로부터 단리되었다. 인간 FcRn, 래트 FcRn 및 마우스 FcRn의 서열은 공지되어 있다(본 명세서에 전문이 참고로 포함된 문헌[Story et al., J. Exp. Med. 180: 2377 (1994)]) Fc는 면역글로불린의 힌지 영역을 지니는 또는 힌지 영역이 없는 면역글로불린의 CH2 및 CH3 도메인을 포함할 수 있다. 예시적인 Fc 변이체는 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 WO 2004/101740 및 WO 2006/074199에서 제공된다.

Fc(또는 키메라 폴리펩타이드의 Fc 부분)은 하나 이상의 돌연변이 및 돌연변이의 조합을 함유할 수 있다.

Fc(또는 키메라 폴리펩타이드의 Fc 부분)은 증가된 반감기를 부여하는 돌연변이, 예컨대 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 문헌[Oganesyan et al., Mol . Immunol. 46:1750 (2009)]에 개시된 바와 같은 M252Y, S254T, T256E, 및 이들의 조합; 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 문헌[Vaccaro et al., Nat. Biotechnol . 23:1283 (2005)]에 개시된 바와 같은 H433K, N434F 및 이들의 조합; 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 미국 특허 제2009/0264627 A1호의 1 내지 2페이지, 단락 [0012] 및 실시예 9 및 10에 개시된 돌연변이체; 및 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 미국 특허 제20090163699 A1의 2페이지 단락 [0014] 내지 [0021]에 개시된 돌연변이체를 함유할 수 있다.

Fc(또는 키메라 폴리펩타이드의 Fc 부분)는 또한, 예를 들어 다음의 돌연변이를 포함할 수 있다: IgG의 Fc 영역 부위 지정 돌연변이유발 등과 같은 잘 인식된 절차에 따라 변형되어 FcRn에 의해 결합될 변형된 IgG 또는 Fc 단편 또는 이의 부분을 수득할 수 있다. 이러한 변형은, 예를 들어, FcRn 접촉 부위로부터 떨어져 있는 변형뿐만 아니라 FcRn에 대한 결합을 보존 또는 심지어 향상시키는 접촉 부위 내의 변형을 포함한다. 예를 들어, 인간 IgG1 Fc(Fcy1)에서 다음의 단일 아미노산 잔기는 FcRn에 대한 Fc 결합 친화도의 상당한 상실 없이 치환될 수 있다: P238A, S239A, K246A, K248A, D249A, M252A, T256A, E258A, T260A, D265A, S267A, H268A, E269A, D270A, E272A, L274A, N276A, Y278A, D280A, V282A, E283A, H285A, N286A, T289A, K290A, R292A, E293A, E294A, Q295A, Y296F, N297A, S298A, Y300F, R301A, V303A, V305A, T307A, L309A, Q311A, D312A, N315A, K317A, E318A, K320A, K322A, S324A, K326A, A327Q, P329A, A330Q, A330S, P331A, P331S, E333A, K334A, T335A, S337A, K338A, K340A, Q342A, R344A, E345A, Q347A, R355A, E356A, M358A, T359A, K360A, N361A, Q362A, Y373A, S375A D376A, A378Q, E380A, E382A, S383A, N384A, Q386A, E388A, N389A, N390A, Y391F, K392A, L398A, S400A, D401A, D413A, K414A, R416A, Q418A, Q419A, N421A, V422A, S424A, E430A, N434A, T437A, Q438A, K439A, S440A, S444A 및 K447A, 여기서, 예를 들어 P238A는 위치 번호 238에서 알라닌에 의해 치환되는 야생형 프롤린을 나타낸다. 알라닌에 추가로 다른 아미노산이 상기 구체화된 위치에서 야생형 아미노산을 치환할 수 있다. 돌연변이는 Fc 내로 개별적으로 도입되어 천연 Fc와 별개의 100개 초과의 FcRn 결합 상대가 생기게 할 수 있다. 추가적으로, 이들 개개 돌연변이의 2, 3개 이상의 조합은 함께 도입되어 수백개 초과의 FcRn 결합 상대가 생기게 할 수 있다. 특정 이들 돌연변이는 FcRn 결합 상대에 대해 새로운 기능성을 부여할 수 있다. 예를 들어, 일 실시형태는 고도로 보존된 N-글리코실화 부위를 제거하는 N297A를 포함한다. 이 돌연변이의 효과는 면역원성을 감소시킴으로써 FcRn 결합 상대의 순환 반감기를 향상시키는 것, 그리고 FcRn에 대한 친화도를 손상시키는 일 없이 FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB 및 FcyRIIIA에 결합할 수 없는 FcRn 결합 상대를 제공하는 것이다(본 명세서에 전문이 참고로 포함된 문헌[Routledge et al. 1995, Transplantation 60:847]; 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 문헌[Friend et al. 1999, Transplantation 68:1632]; 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 문헌[Shields et al. 1995, J. Biol. Chem. 276:6591]). 추가적으로, 적어도 3개의 인간 Fc 감마 수용체는 하부의 힌지 영역, 일반적으로 아미노산 234 내지 237 내에서 IgG 상의 결합 부위를 인식하는 것으로 나타난다. 따라서, 새로운 기능성 및 잠재적으로 감소된 면역원성의 다른 예는, 예를 들어 인간 IgG1 "ELLG"의 아미노산 233 내지 236을 IgG2 "PVA"로부터의 대응하는 서열(하나의 아미노산 결실을 지님)로 대체함으로써, 이 영역의 돌연변이로부터 생길 수 있다. 다양한 효과기 기능을 매개하는 FcyRI, FcyRII 및 FcyRIII는 이러한 돌연변이가 도입될 때 IgG1에 결합하지 않는 것으로 나타났다(본 명세서에 전문이 참고로 포함되는 문헌[Ward and Ghetie, Therapeutic Immunology 2:77 (1995)]; 및 본 명세서에 전문이 참고로 포함되는 문헌[Armour et al., Eur . J. Immunol . 29:2613 (1999)]). 상기 기재한 돌연변이로부터 생기는 새로운 기능성의 추가적인 예로서, FcRn에 대한 친화도는 일부 예에서 야생형의 친화도 이상으로 증가될 수 있다. 이 증가된 친화도는 증가된 "온(on)" 속도, 감소된 "오프(off)" 속도 또는 증가된 "온" 속도와 감소된 "오프" 속도 둘 다를 반영할 수 있다. FcRn에 대해 증가된 친화도를 부여하는 것으로 믿어지는 돌연변이는, 예를 들어, T256A, T307A, E380A 및 N434A(본 명세서에 전문이 참고로 포함된 문헌[Shields et al., J. Biol . Chem . 276:6591 (2001)])를 포함한다.

Fc(또는 키메라 폴리펩타이드의 Fc 부분)는 표 14에 나타낸 Fc 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 4의 아미노산 21 내지 247)에 대해 적어도 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 100% 동일할 수 있다. Fc(또는 키메라 폴리펩타이드의 Fc 부분)는 표 14에 나타낸 Fc 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 4의 아미노산 21 내지 247)과 동일할 수 있다.

상기 논의한 바와 같이, 예시적인 장시간 작용성 폴리펩타이드는 또한 하나 이상의 알부민 폴리펩타이드, 알부민 결합 폴리펩타이드, 또는 알부민-결합 소분자에 융합된 FIX를 포함한다. 일 실시형태에서, 알부민은 인간 알부민이다. 알부민 또는 알부민 결합 단백질은 FIX의 N-말단 단부에 또는 FIX의 C-말단 단부에 융합되거나 또는 FIX에서 두 아미노산 사이에 삽입될 수 있다. 본 발명에서 사용될 수 있는 알부민, 예를 들어 이의 단편의 예는 공지되어 있다. 예를 들어, 본 명세서에 각각 전문이 참고로 포함되는 미국 특허 제7,592,010호; 미국 특허 제6,686,179호; 및 문헌[Schulte, Thrombosis Res. 124 Suppl. 2:S6-S8 (2009)].

알부민 결합 폴리펩타이드는, 이하로 제한되지 않고, 박테리아 알부민-결합 도메인, 알부민-결합 펩타이드, 또는 알부민에 결합할 수 있는 알부민-결합 항체 단편을 포함할 수 있다. 문헌[Kraulis et al., FEBS Lett. 378:190-194 (1996) 및 Linhult et al., Protein Sci . 11:206-213 (2002)]에 개시된 바와 같은 스트렙토코커스 단백질 G로부터의 도메인 3은 박테리아 알부민-결합 도메인의 예이다. 알부민-결합 펩타이드의 예는 코어 서열 DICLPRWGCLW(서열번호 5)를 갖는 일련의 펩타이드를 포함한다. 예를 들어, 문헌[Dennis et al., J. Biol . Chem . 2002, 277: 35035-35043 (2002)] 참조. 알부민-결합 항체 단편의 예는 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 문헌[Muller and Kontermann, Curr . Opin . Mol . Ther . 9:319-326 (2007); Rooverset et al., Cancer Immunol . Immunother . 56:303-317 (2007), 및 Holt et al., Prot . Eng . Design Sci ., 21:283-288 (2008)]에 개시되어 있다.

특정 양상에서, 본 발명의 재조합 FIX 폴리펩타이드는 이의 알부민에 결합할 수 있는 비-폴리펩타이드 소분자, 변이체 또는 유도체에 대한 적어도 하나의 부착 부위를 포함한다. 이러한 알부민 결합 모이어티의 예는 문헌[Trusselet et al., Bioconjugate Chem . 20:2286-2292 (2009)]에 의해 개시되는 바와 같은 2-(3-말레이미도프로판아미도)-6-(4-(4-요오도페닐)부탄아미도)헥사노에이트("Albu" 태그)이다.

상기 논의한 바와 같은 예시적인 장시간 작용성 폴리펩타이드는 또한 인간 융모성 고나도트로핀 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체의 β 서브유닛의 적어도 하나의 C-말단 펩타이드(CTP)에 융합된 FIX를 포함한다. CTP는 FIX의 N-말단 단부에 또는 FIX의 C-말단 단부에 대해 FIX에 융합될 수 있다. 재조합 단백질에 융합되거나 또는 재조합 단백질 내로 삽입된 하나 이상의 CTP 펩타이드는 해당 단백질의 생체내 반감기를 증가시키는 것으로 알려져 있다. 예를 들어, 본 명세서에 전문이 참고로 포함된 미국 특허 제5,712,122호 참조. 예시적인 CTP 펩타이드는 DPRFQDSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPIL(서열번호 6) 또는 SSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ를 포함한다. (서열번호 7). 예를 들어, 참고로 포함된 미국 특허 출원 공개 제2009/0087411 A1호 참조.

상기 논의한 바와 같이, 예시적인 장시간 작용성 폴리펩타이드는 또한 적어도 하나의 PAS 서열 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 융합된 FIX를 포함한다. PAS 서열은 FIX의 N-말단 단부에 또는 FIX의 C-말단 단부에 융합될 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같은 PAS 펩타이드 또는 PAS 서열은 주로 알라닌 및 세린 잔기를 포함하거나 또는 주로 알라닌, 세린 및 프롤린 잔기를 포함하는 아미노산 서열, 생리적 조건 하에 무작위 나선 입체구조를 형성하는 아미노산 서열을 의미한다. 따라서, PAS 서열은 빌딩 블록, 아미노산 중합체, 또는 키메라 단백질에서 이종성 모이어티의 부분으로서 사용될 수 있는 알라닌, 세린 및 프롤린을 포함하거나, 본질적으로 이루어지거나, 또는 이루어진 서열 카세트이다. 아미노산 중합체는 또한 알라닌, 세린 및 프롤린 이외의 잔기가 PAS 서열에서 소수의 구성요소로서 첨가될 때, 무작위 나선 입체구조를 형성할 수 있다. "소수의 구성요소"는 알라닌, 세린 및 프롤린 이외의 아미노산이 PAS 서열에서 특정 정도로, 예를 들어, 아미노산의 약 12%까지, 즉, 약 PAS 서열의 100개 아미노산 중 12개, 약 10%까지, 약 9%까지, 약 8%, 약 6%, 약 5%, 약 4%, 약 3%까지, 즉, 약 2%, 또는 약 1%가 첨가될 수 있다는 것이 이해된다. 알라닌, 세린 및 프롤린과 상이한 아미노산은 Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Thr, Trp, Tyr 및 Val로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 생리적 조건 하에서, PAS 펩타이드는 무작위 나선 입체구조를 형성하고, 이에 의해 본 발명의 재조합 단백질에 대해 증가된 생체내 및/또는 시험관내 안정성을 매개할 수 있으며, 전응고 활성을 가진다.

PAS 펩타이드의 비제한적 예는 ASPAAPAPASPAAPAPSAPA(서열번호 8), AAPASPAPAAPSAPAPAAPS(서열번호 9), APSSPSPSAPSSPSPASPSS(서열번호 10), APSSPSPSAPSSPSPASPS(서열번호 11), SSPSAPSPSSPASPSPSSPA(서열번호 12), AASPAAPSAPPAAASPAAPSAPPA(서열번호 13), ASAAAPAAASAAASAPSAAA(서열번호 14) 또는 이들의 임의의 변이체, 유도체, 단편 또는 조합을 포함한다. PAS 서열의 추가적인 예는, 예를 들어, 미국 특허 공개 제2010/0292130 A1호, 국제특허출원 공개 WO 2008/155134 A1, 및 유럽 특허 EP2173890호로부터 공지되어 있다.

상기 논의한 바와 같이, 예시적인 장시간 작용성 폴리펩타이드는 또한 적어도 하나의 트랜스페린 펩타이드 또는 이의 단편, 변이체, 또는 유도체에 융합된 FIX를 포함한다. 적어도 하나의 트랜스페린 펩타이드는 FIX의 N-말단 단부에 또는 FIX의 C-말단 단부에 융합되거나 또는 FIX에서 두 아미노산 사이에 삽입될 수 있다. 임의의 트랜스페린은 본 발명의 재조합 FIX 단백질에 융합되거나 삽입될 수 있다. 예로서, 야생형 인간 Tf(Tf)는 유전자 중복으로부터 유래되는 것으로 나타난 2개의 주요 도메인인 N(약 330개의 아미노산) 및 C(약 340개의 아미노산)을 지니는 대략 75KDa(글리코실화를 설명하지 않음) 679개의 아미노산 단백질이다. 본 명세서에 전체가 참고로 포함된 젠뱅크(GenBank) 수탁 번호NM001063, XM002793, M12530, XM039845, XM 039847 및 S95936(www.ncbi.nlm.nih.gov) 참조.

트랜스페린은 트랜스페린 수용체(TfR)-매개 내포 작용을 통해 철을 수송한다. 철이 엔도솜 구획 내로 방출되로 Tf-TfR 복합체가 세포 표면으로 재순환된 후에, Tf는 철 수송의 다음 주기를 위핸 세포외 공간으로 다시 방출된다. Tf는 14 내지 17일 이상의 긴 반감기를 가진다(Li et al., Trends Pharmacol. Sci. 23:206-209 (2002)).트랜스페린 융합 단백질은 반감기 연장, 암 요법을 위한 표적화된 전달, 경구 전달 및 프로인슐린의 지속적 활성화에 대해 연구되었다(Brandsma et al., Biotechnol . Adv ., 29: 230-238 (2011); Bai et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 102:7292-7296 (2005); Kim et al., J. Pharmacol . Exp . Ther ., 334:682-692 (2010); Wang et al., J. Controlled Release 155:386-392 (2011)).

상기 논의한 바와 같이, 예시적인 장시간 작용성 폴리펩타이드는 또한 적어도 하나의 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 모이어티에 융합된 FIX를 포함한다.

페길화된(PEGylated) FIX는 FIX와 적어도 하나의 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 분자 사이에 형성된 컨쥬게이트를 지칭할 수 있다. PEG는 매우 다양한 분자량 및 평균 분자량 범위에서 상업적으로 입수가능하다. PEG 평균 분자량 범위의 전형적인 예는 약 200, 약 300, 약 400, 약 600, 약 1000, 약 1300 내지 1600, 약 1450, 약 2000, 약 3000, 약 3000 내지 3750, 약 3350, 약 3000 내지 7000, 약 3500 내지 4500, 약 5000 내지 7000, 약 7000 내지 9000, 약 8000, 약 10000, 약 8500 내지 1500, 약 16000 내지 24000, 약 35000, 약 40000, 약 60000, 내지 약 80000 달톤을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 이들 평균 분자량은 단지 예로서 제공되며, 임의의 방법으로 제한하는 것을 의미하지 않는다.

본 발명의 재조합 장시간 작용성 FIX 단백질은 모노- 또는 폴리-(예를 들어, 2-4) PEG 모이어티를 포함하도록 페길화될 수 있다. 페길화는 당업계에 공지된 임의의 페길화 반응에 의해 수행될 수 있다. 페길화된 단백질 생성물을 제조하는 방법은 일반적으로 (i) 본 발명의 펩타이드가 하나 이상의 PEG 기에 부착되는 조건 하에서 폴리펩타이드를 폴리에틸렌 글리콜(예컨대 PEG의 반응성 에스터 또는 알데하이드)과 반응시키는 단계, 및 (ii) 반응 생성물(들)을 얻는 단계를 포함할 것이다. 일반적으로, 반응을 위한 최적의 반응 조건은 공지된 변수 및 목적으로 하는 결과에 기반하여 경우에 따라 결정될 것이다.

당업자에게 이용가능한 다수의 PEG 부착 방법이 있다, 예를 들어 문헌[Malik F et al., Exp . Hematol. 20:1028-35 (1992); Francis, Focus on Growth Factors 3(2):4-10 (1992)]; 유럽특허 공개 EP0401384호, EP0154316호 및 EP0401384; 및 국제특허출원 공개 WO92/16221 및 WO95/34326. 비제한적 예로서, FIX 변이체는 FIX 내 하나 이상의 삽입 부위에서 시스테인 치환을 함유할 수 있고, 시스테인은 PEG 중합체에 추가로 컨쥬게이팅될 수 있다. 본 명세서에 전문이 참고로 포함되는 문헌[Mei et al., Blood 116:270-279 (2010)] 및 미국 특허 제7,632,921호.

상기 논의한 바와 같이, 예시적인 장시간 작용성 폴리펩타이드는 또한 적어도 하나의 하이드록시에틸 전분(HES) 중합체에 융합된 FIX를 포함한다. HES는 천연 유래 아밀로펙틴의 유도체이고, 신체 내 알파-아밀라제에 의해 분해된다. HES는 유리한 생물학적 특성을 나타내며, 혈액 용적 대체제로서 그리고 임상에서 혈액희석 요법에서 사용된다. 예를 들어, 문헌[Sommermeyer et al., Krankenhauspharmazie 8:271-278 (1987)]; 및 문헌[Weidler et al., Arzneim .- Forschung /Drug Res. 41: 494-498 (1991)] 참조.

HES는 주로 분자량 분포 및 치환 정도를 특징으로 한다. HES는 1 내지 300kD, 2 내지 200kD, 3 내지 100kD, 또는 4 내지 70kD의 평균 분자량(중량 평균)을 가진다. 하이드록시에틸 전분은 추가로 0.1 내지 3, 0.1 내지 2, 0.1 내지 0.9, 또는 0.1 내지 0.8의 몰 치환도, 및 하이드록시에틸기에 대해 2 내지 20 범위의 C2:C6 치환비를 나타낼 수 있다. 평균 분자량이 약 130kD인 HES는 프레지니우스사(Fresenius)의 볼루벤(Voluven)(등록상표)이다. 볼루벤(등록상표)은, 예를 들어, 혈액감량증의 치료 및 예방을 위한 치료적 적응증에서 사용되는 용적 대체를 위해 사용되는 인공 콜로이드이다. 당업자에게 이용가능한 다수의 HES 부착 방법, 예를 들어, 상기 기재한 것과 동일한 PEG 부착 방법이 있다.

IX 인자 응고 활성은 국제 단위(들)(IU)로서 표현한다. IX 인자 활성의 하나의 IU는 정상 인간 혈장의 1밀리리터에서 IX 인자의 양에 가깝게 대응한다. 1 단계 응고 분석(활성화된 부분적 트롬보플라스틴 시간; aPTT), 트롬빈 생성 시간(TGA) 및 회전 트롬보탄성측정(rotational thromboelastometry)(ROTEM(등록상표))을 포함하는 몇몇 분석이 IX 인자 활성을 측정하는데 이용가능하다.

완충제

본 발명에 유용한 완충제는 다른 산 또는 염기의 첨가 후 선택된 값 근처의 용액의 산도(pH)를 유지하기 위해 사용되는 약산 또는 염기일 수 있다. 적합한 완충제는 제형의 pH 제어를 유지함으로써 약제학적 제형의 안정성을 최대화할 수 있다. 적합한 완충제는 또한 생리적 적합성을 보장하거나 용해도를 최적화할 수 있다. 유동성, 점성 및 다른 특성은 또한 제형의 pH에 의존할 수 있다. 통상적인 완충제는 히스티딘, 시트르산염, 숙신산염, 아세트산염 및 인산염을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 완충제는 L-히스티딘 또는 L-히스티딘과 L-히스티딘 하이드로클로라이드의 혼합물을 등장제와 함께 포함하고, 잠재적으로 당업계에 공지된 산 또는 염기에 의한 pH 조절을 포함한다. 특정 실시형태에서, 완충제는 L-히스티딘이다. 특정 실시형태에서, 제형의 pH는 약 6 내지 약 8, 또는 약 6.5 내지 약 7.5에서 유지된다.

안정제

안정제는 해당 생성물을 안정화하기 위해 약제학적 생성물에 첨가된다. 이러한 제제는 다수의 상이한 방법으로 단백질을 안정화시킬 수 있다. 통상적인 안정화제는 아미노산 예컨대 글리신, 알라닌, 라이신, 알기닌 또는 트레오닌, 탄수화물, 예컨대 글루코스, 수크로스, 트레할로스, 라피노스 또는 말토스, 임의의 종류 및 분자량의 폴리올, 예컨대 글리세롤, 만니톨, 솔비톨, 사이클로덱스트린 또는 데스트란, 또는 PEG를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 발명의 일 양상에서, 안정제는 동결건조 제제에서 FIX 폴리펩타이드의 안정성을 최대화하기 위해 선택된다. 특정 실시형태에서, 안정제는 수크로스이다.

증량제

증량제는 생성물에 용적 및 질량을 첨가하기 위해 약제학적 생성물에 첨가될 수 있고, 이에 의해 이의 정확한 측정 및 조절을 용이하게 한다. 통상적인 증량제는 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨, 솔비톨, 탄산칼슘 또는 스테아르산마그네슘을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 특정 실시형태에서, 증량제는 만니톨이다.

계면활성제

계면활성제는 친액성 및 소액성기를 지니는 양친매성 물질이다. 계면활성제는 음이온성, 양이온성, 쌍성이온 또는 비이온성일 수 있다. 비이온성 계면활성제의 예는 알킬 에톡실레이트, 노닐페놀 에톡실레이트, 아민 에톡실레이트, 폴리에틸렌 옥사이드, 폴리프로필렌 옥사이드, 지방 알코올, 예컨대 세틸 알코올 또는 올레일 알코올, 코카마이드 MEA, 코카마이드 DEA, 폴리솔베이트 또는 도데실 다이메틸아민 옥사이드를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 특정 실시형태에서, 계면활성제는 폴리솔베이트 20 또는 폴리솔베이트 80이다.

사전동결건조 제형

일 양상에서, 본 개시내용은 하기를 포함하는 사전-동결건조 제형을 제공한다:

(a) FIX 응고 활성을 갖는 IX 인자 (FIX) 폴리펩타이드;

(b) 완충제;

(c) 안정제;

(d) 증량제; 및

(e) 계면활성제,

여기서, 제형은 약 5㎖ 미만, 약 4㎖ 미만, 또는 약 3㎖ 미만의 충전 용적을 가지며, 각각의 (a) 내지 (e)는, 기준 사전-동결건조 제형에 비해,

(1) 동결건조될 때 FIX 폴리펩타이드의 안정성을 개선시키거나;

(2) 동결건조될 때 재구성 시간을 감소시키거나;

(3) 상기 제형을 포함하는 스토퍼 상에서의 스플래싱을 감소시키거나;

(4) 동결건조 순환 시간을 감소시키거나;

(5) 실온에서 사전-동결건조 제형으로부터 제조된 동결건조물의 보관수명을 증가시키거나; 또는

(6) 이들의 임의의 조합

을 허용하는데 충분한 바이알 당 양(㎎/바이알)이며,

기준 제형은 사전-동결건조 제형과 동일하지만, 적어도 5㎖ 충전 용적을 갖는 바이알 당 양으로 (a) 내지 (e)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 기준 제형은 5.3㎖ 충전 용적 또는 5㎖ 충전 용적을 가진다.

다른 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 (1) 동결건조될 때 FIX 폴리펩타이드의 개선된 안정성; (2) 동결건조될 때 감소된 재구성 시간; (3) 상기 제형을 포함하는 스토퍼 상에서의 감소된 스플래싱; (4) 감소된 동결건조 순환 시간; 및 (5) 실온에서 사전-동결건조 제형으로부터 제조된 동결건조물의 증가된 보관수명으로부터 선택된 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4 또는 적어도 5가지 특성을 허용한다. 특정 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 (1) 동결건조될 때 FIX 폴리펩타이드의 안정성을 개선시킨다. 특정 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 (2) 동결건조될 때 재구성 시간을 감소시킨다. 특정 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 (3) 상기 제형을 포함하는 스토퍼 상에서의 스플래싱을 감소시킨다. 특정 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 (4) 동결건조 순환 시간을 감소시킨다. 특정 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 (5) 실온에서 사전-동결건조 제형으로부터 제조된 동결건조물의 보관수명을 증가시킨다. 특정 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 (6) 본 명세서에 기재된 특성의 임의의 조합을 허용한다.

특정 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 FIX 폴리펩타이드의 적어도 약 100IU/바이알을 포함한다. 특정 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 FIX 폴리펩타이드의 적어도 약 200IU/바이알 내지 약 10,000IU/바이알, 약 200IU/바이알 내지 약 6,000IU/바이알, 또는 약 500IU/바이알 내지 약 5,000IU/바이알을 포함한다. 특정 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 FIX 폴리펩타이드의 약 220IU/바이알, 약 250IU/바이알, 약 300IU/바이알, 약 400IU/바이알, 약 500IU/바이알, 약 600IU/바이알, 약 700IU/바이알, 약 800IU/바이알, 약 900IU/바이알, 약 1,000IU/바이알, 약 1,100IU/바이알, 약 1,200IU/바이알, 약 1,300IU/바이알, 약 1,400IU/바이알, 약 1,500IU/바이알, 약 2,000IU/바이알, 약 2,500IU/바이알, 약 3,000IU/바이알, 약 4,000IU/바이알, 약 5,000IU/바이알, 약 5,500IU/바이알, 약 6,000IU/바이알, 약 6,500IU/바이알, 약 7,000IU/바이알, 약 7,500IU/바이알, 약 8,000IU/바이알, 약 8,500IU/바이알, 약 9,000IU/바이알, 약 9,500IU/바이알 또는 약 10,000IU/바이알을 포함한다.

일부 실시형태에서, 더 고농도의 사전-동결건조 제형은 충전 용적을 감소시킴으로써 달성된다. 특정 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 약 4.0㎖, 약 3.5㎖, 약 3.0㎖, 약 2.9㎖, 약 2.8㎖, 약 2.7㎖, 약 2.65㎖, 약 2.6mL, 약 2.5㎖, 약 2.4㎖, 약 2.3㎖, 약 2.2㎖, 약 2.1㎖, 또는 약 2.0㎖의 충전 용적을 가진다. 일부 실시형태에서, 사전-동결건조 제형의 충전 용적은 약 2.65㎖이다. 일부 실시형태에서, 사전-동결건조 제형의 충전 용적은 약 5㎖ 미만이다.

일부 실시형태에서, FIX 폴리펩타이드는 추가적인 정제 단계, 예를 들어, 제2 초미세여과 단계에 의해 추가로 농축될 수 있다.

특정 실시형태에서, 감소된 재구성 시간은 1.5분 미만, 1분 미만, 50초 미만, 40초 미만, 30초 미만, 20초 미만 또는 10초 미만이다. 구체적 실시형태에서, 감소된 재구성 시간은 30초 미만이다.

특정 실시형태에서, 사전-동결건조 제형의 감소된 동결건조 순환 시간은 약 4일 이하, 약 3일 이하, 약 2일 이하, 또는 약 1일 이하이다.

특정 실시형태에서, 사전-동결건조 제형 중의 완충제의 농도는 약 3㎎/㎖ 내지 약 15㎎/㎖, 4㎎/㎖ 내지 약 12㎎/㎖, 약 5㎎/㎖ 내지 약 10㎎/㎖, 또는 약 5.82㎎/㎖ 내지 약 9.7㎎/㎖이다. 일 실시형태에서, 완충제는 약 3.88㎎/㎖ 내지 약 9.7㎎/㎖의 농도이다. 일 실시형태에서, 완충제는 약 7.76㎎/㎖의 농도이다. 일부 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 약 7.76㎎/㎖의 농도로 L-히스티딘을 함유한다.

특정 실시형태에서, 사전-동결건조 제형 중의 안정제의 농도는 10㎎/㎖ 내지 약 50㎎/㎖, 약 13㎎/㎖ 내지 약 40㎎/㎖, 약 15㎎/㎖ 내지 약 35㎎/㎖, 또는 약 17.85㎎/㎖ 내지 약 29.95㎎/㎖이다. 일 실시형태에서, 완충제는 약 23.8㎎/㎖의 농도이다. 일부 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 23.8㎎/㎖의 농도로 수크로스를 함유한다.

특정 실시형태에서, 사전-동결건조 제형 중의 증량제의 농도는 약 20㎎/㎖ 내지 약 100㎎/㎖, 약 30㎎/㎖ 내지 약 70㎎/㎖, 약 30㎎/㎖ 내지 약 60㎎/㎖, 또는 약 35.7㎎/㎖ 내지 약 59.5㎎/㎖이다. 일 실시형태에서, 증량제는 약 47.6㎎/㎖의 농도이다. 일부 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 약 47.6㎎/㎖의 농도로 만니톨을 함유한다.

특정 실시형태에서, 사전-동결건조 제형 중의 계면활성제의 농도는 약 0.01㎎/㎖ 내지 약 5㎎/㎖, 약 0.1㎎/㎖ 내지 약 4㎎/㎖, 약 0.1㎎/㎖ 내지 약 3㎎/㎖, 약 0.01㎎/㎖ 내지 약 2㎎/㎖, 또는 약 0.05㎎/㎖ 내지 약 1㎎/㎖이다. 일 실시형태에서, 계면활성제는 약 0.2㎎/㎖의 농도이다. 일부 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 약 0.2㎎/㎖의 농도로 폴리솔베이트 20 또는 폴리솔베이트 80을 함유한다.

특정 실시형태에서, 사전-동결건조 제형 중의 FIX 폴리펩타이드 농도는 약 80IU/㎖ 내지 약 2,750IU/㎖이다. 일부 실시형태에서, 사전-동결건조 제형 중의 FIX 폴리펩타이드의 농도는 적어도 약 100IU/㎖, 적어도 약 200IU/㎖, 적어도 약 300IU/㎖, 적어도 약 400IU/㎖, 적어도 약 500IU/㎖, 적어도 약 600IU/㎖, 적어도 약 700IU/㎖, 적어도 약 800IU/㎖, 적어도 약 900IU/㎖, 적어도 약 1000IU/㎖, 적어도 약 1500IU/㎖, 적어도 약 2000IU/㎖, 또는 적어도 약 2500IU/㎖이다.

일 양상에서, 본 개시내용은 추가로 하기를 포함하는 사전-동결건조 제형을 제공한다:

(a) 약 80 내지 약 2,750IU/㎖의 rFIXFc;

(b) 약 7.76㎎/㎖의 L-히스티딘.

(c) 약 47.6㎎/㎖의 만니톨;

(d) 약 23.8㎎/㎖의 수크로스; 및

(e) 약 0.2㎎/㎖의 폴리솔베이트-20.

특정 실시형태에서, 이러한 사전-동결건조 제형의 충전 용적은 약 3㎖, 약 2.9㎖, 약 2.8㎖, 약 2.7㎖, 약 2.65㎖, 약 2.6㎖, 약 2.5㎖, 약 2.4㎖, 약 2.3㎖, 약 2.2㎖, 약 2.1㎖, 또는 약 2.0㎖이다. 일 실시형태에서, 이러한 사전-동결건조 제형의 충전 용적은 약 2.65㎖이다.

추가로, 본 개시내용은 임의의 상기 사전-동결건조 제형으로부터 동결건조된 동결건조 분말을 제공한다. 일부 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 본 명세서에 기재된 임의의 제형이다.

동결건조 분말

본 개시내용은 또한 FIX 폴리펩타이드, 완충제, 안정제, 증량제, 계면활성제, 또는 이들의 임의의 조합물을 포함하는 동결건조 분말을 제공한다.

특정 실시형태에서, 동결건조 분말은 완충제(예를 들어, L-히스티딘)의 바이알 당 약 8㎎ 내지 약 39㎎, 바이알 당 약 9mg 내지 약 35㎎, 바이알 당 약 10㎎ 내지 약 30㎎, 바이알 당 약 12㎎ 내지 약 25㎎, 바이알 당 약 15㎎ 내지 약 23㎎을 포함한다. 일 실시형태에서, 동결건조 분말은 완충제의 바이알 당 약 25㎎, 바이알 당 약 24㎎, 바이알 당 약 23㎎, 바이알 당 약 22㎎, 바이알 당 약 21㎎, 바이알 당 약 20㎎, 바이알 당 약 19㎎, 바이알 당 약 18㎎, 바이알 당 약 17㎎, 바이알 당 약 16㎎, 바이알 당 약 15㎎을 포함한다. 다른 실시형태에서, 동결건조 분말은 완충제의 바이알 당 약 20.6㎎을 포함한다. 일부 실시형태에서, 완충제는 L-히스티딘이다.

특정 실시형태에서, 동결건조 분말은 안정제의 바이알 당 약 27㎎ 내지 약 132㎎, 바이알 당 약 30㎎ 내지 약 120㎎, 바이알 당 약 40㎎ 내지 약 110㎎, 바이알 당 약 50㎎ 내지 약 100㎎, 바이알 당 약 60㎎ 내지 약 90㎎을 포함한다. 일 실시형태에서, 동결건조 분말은 안정제의 바이알 당 약 68㎎, 바이알 당 약 67㎎, 바이알 당 66㎎, 바이알 당 약 65㎎, 바이알 당 약 64㎎, 바이알 당 약 63㎎, 바이알 당 약 62㎎, 바이알 당 약 61㎎, 바이알 당 약 60㎎, 바이알 당 약 59㎎을 포함한다. 다른 실시형태에서, 동결건조 분말은 안정제의 바이알 당 약 63.1㎎을 포함한다. 일부 실시형태에서, 안정제는 수크로스이다.

특정 실시형태에서, 동결건조 분말은 증량제의 바이알 당 약 50㎎ 내지 약 265㎎, 바이알 당 약 53㎎ 내지 약 265㎎, 바이알 당 약 50㎎ 내지 약 250㎎, 바이알 당 약 53㎎ 내지 약 265㎎, 바이알 당 약 80㎎ 내지 약 200㎎, 바이알 당 약 100㎎ 내지 약 150 또는 바이알 당 약 110㎎ 내지 약 140㎎을 포함한다. 일 실시형태에서, 동결건조 분말은 증량제의 약 131㎎, 바이알 당 약 130㎎, 바이알 당 약 129㎎, 바이알 당 약 128㎎, 바이알 당 약 127㎎, 바이알 당 약 126㎎, 바이알 당 약 125㎎, 바이알 당 약 124㎎, 바이알 당 약 123㎎, 또는 바이알 당 약 122㎎을 포함한다. 다른 실시형태에서, 동결건조 분말은 증량제의 바이알 당 약 126.1㎎을 포함한다. 일부 실시형태에서, 증량제는 만니톨이다.

특정 실시형태에서, 동결건조 분말은 계면활성제의 바이알 당 약 0.03㎎ 내지 약 13㎎, 바이알 당 약 0.05㎎ 내지 약 10㎎, 바이알 당 약 0.07㎎ 내지 약 8㎎, 바이알 당 약 0.1㎎ 내지 약 2㎎을 포함한다. 일 실시형태에서, 동결건조 분말은 계면활성제의 바이알 당 약 1㎎, 바이알 당 약 0.9㎎, 바이알 당 약 0.8㎎, 바이알 당 약 0.7㎎, 바이알 당 약 0.6㎎, 바이알 당 약 0.5㎎, 바이알 당 약 0.4㎎, 바이알 당 약 0.3㎎, 바이알 당 약 0.2㎎, 또는 바이알 당 약 0.1㎎을 포함한다. 다른 실시형태에서, 동결건조 분말은 계면활성제의 바이알 당 약 0.5㎎을 포함한다. 일 실시형태에서, 동결건조 분말은 계면활성제의 바이알 당 약 0.53㎎을 포함한다. 일부 실시형태에서, 계면활성제는 폴리솔베이트 20 또는 폴리솔베이트 80이다.

특정 실시형태에서, 동결건조 분말은 하기를 포함한다:

(a) 바이알 당 약 2㎎ 내지 바이알 당 약 150㎎의 양으로 FIX 폴리펩타이드;

(b) 바이알 당 약 10㎎ 내지 바이알 당 약 30㎎의 양으로 완충제;

(c) 바이알 당 약 70㎎ 내지 바이알 당 약 200㎎의 양으로 증량제.

(d) 바이알 당 약 30㎎ 내지 바이알 당 약 100㎎의 양으로 안정제; 및

(e) 바이알 당 약 0.05㎎ 내지 바이알 당 약 5㎎의 양으로 계면활성제.

일부 실시형태에서, 동결건조 분말은 하기를 포함한다:

(a) 바이알 당 약 2.2㎎ 내지 바이알 당 약 125㎎의 양으로 FIX 폴리펩타이드;

(b) 바이알 당 약 8㎎ 내지 바이알 당 약 39㎎의 양으로 완충제;

(c) 바이알 당 약 53㎎ 내지 바이알 당 약 265㎎의 양으로 증량제.

(d) 바이알 당 약 27㎎ 내지 바이알 당 약 132㎎의 양으로 안정제; 및

(e) 바이알 당 약 0.03㎎ 내지 바이알 당 약 13㎎의 양으로 계면활성제.

특정 실시형태에서, 동결건조 분말은 하기를 포함한다:

(a) 바이알 당 약 2.2㎎ 내지 바이알 당 약 125㎎의 양으로 동결건조된 FIX 폴리펩타이드;

(b) 바이알 당 약 12.5㎎ 내지 바이알 당 약 25㎎의 양으로 완충제;

(c) 바이알 당 약 32.5㎎ 내지 바이알 당 약 80㎎의 양으로 안정제;

(d) 바이알 당 약 75㎎ 내지 바이알 당 약 150㎎의 양으로 증량제; 및

(e) 바이알 당 약 0.1㎎/㎖ 내지 바이알 당 약 2㎎/㎖의 양으로 계면활성제.

일 실시형태에서, 동결건조 분말은 하기를 포함한다:

(a) 약 2.2 내지 약 125㎎/바이알의 FIX 폴리펩타이드;

(b) 약 20.6㎎/바이알의 L-히스티딘;

(c) 약 126.1㎎/바이알의 만니톨;

(d) 약 63.1㎎/바이알의 수크로스; 및

(e) 약 0.53㎎/바이알의 폴리솔베이트 20.

재구성된 제형

더 나아가, 본 개시내용은 재구성 완충제에 의해 재구성된 임의의 상기 동결건조 분말을 포함하는 재구성된 제형을 제공한다.

특정 실시형태에서, 재구성 완충제는 NaCl 용액이다. 일부 실시형태에서, 재구성 완충제는 5㎖이다.

특정 실시형태에서, 재구성된 제형은 하기를 포함한다:

(a) 약 0.9㎎/㎖ 내지 약 50㎎/㎖의 농도로 FIX 폴리펩타이드;

(b) 2㎎/㎖ 내지 약 5㎎/㎖의 농도로 완충제;

(c) 20㎎/㎖ 내지 약 30㎎/㎖의 농도로 증량제;

(d) 바이알 당 8㎎/㎖ 내지 15㎎/㎖의 농도로 안정제; 및

(e) 0.05㎎/㎖ 내지 약 0.4㎎/㎖의 농도로 계면활성제.

특정 실시형태에서, 재구성된 제형은 하기를 포함한다:

(a) 약 0.9㎎/㎖ 내지 약 50㎎/㎖의 농도로 FIX 폴리펩타이드;

(b) 약 3.88㎎/㎖의 농도로 완충제;

(c) 약 23.8㎎/㎖의 농도로 증량제;

(c) 약 11.9㎎/㎖의 농도로 안정제;

(e) 약 0.1㎎/㎖의 농도로 계면활성제; 및

(f) 약 3.25㎎/㎖ NaCl을 포함하는 재구성 완충제.

특정 실시형태에서, 재구성된 제형은 하기를 포함한다:

(a) 약 80IU/㎖ 내지 약 2,750IU/㎖의 농도로 FIX 폴리펩타이드;

(b) 약 25 mM의 농도로 완충제;

(c) 약 131 mM의 농도로 증량제;

(d) 약 35 mM의 농도로 안정제;

(e) 약 0.01%(w/v)의 농도로 계면활성제; 및

(f) 재구성 완충제.

제형 조성물의 예는 표 2 내지 4에서 추가로 제공된다.

일 양상에서, 본 개시내용은 추가로 본 명세서에 기재된 사전-동결건조 제형, 동결건조 분말, 또는 재구성된 제형을 포함하는 바이알을 제공한다.

다른 양상에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 동결건조 분말을 포함하는 제1 용기 및 제1 용기의 동결건조 분말과 조합될 때 재구성된 제형을 생성하기에 충분한 용적으로 재구성 완충제를 포함하는 제2 용기를 포함하는 키트를 제공한다. 특정 실시형태에서, 키트의 재구성 완충제의 용적은 약 5㎖이다. 일부 실시형태에서, 용적은 약 5.3㎖이다. 특정 실시형태에서, 키트의 재구성 완충제는 NaCl을 포함한다. 일부 실시형태에서, 키트는 B형 혈우병을 치료하기 위해 사용된다.

또 다른 양상에서, 본 개시내용은 환자에게 본 명세서에 기재된 재구성된 제형을 투여하는 단계를 포함하는, 투여가 필요한 B형 혈우병 환자에게 FIX 폴리펩타이드를 포함하는 방법을 제공하되, 투여는 환자에서 출혈 에피소드의 빈도 또는 중증도를 예방 또는 감소시킨다.

본 개시내용은 추가로 본 명세서에 기재된 재구성된 제형을 투여함으로써 예방, 치료, 개선 또는 관리가 필요한 환자에서 B형 혈우병을 예방, 치료, 개선 또는 관리하는 방법을 제공한다.

FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말을 생성하는 방법

본 개시내용은 FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말을 생성하는 방법을 제공한다. 일 양상에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 사전-동결건조 제형을 동결건조시키는 단계를 포함하는 동결건조 방법을 제공한다. 다른 양상에서, 본 개시내용은 단일 건조 단계를 포함하는 동결건조 방법을 제공한다.

일 양상에서, 본 개시내용은 하기 단계들:

(a) FIX 폴리펩타이드 및 수성 용매를 포함하는 사전 동결건조제형을 냉동시키는 것을 포함하는 "냉동 단계";

(b) 냉동된 사전-동결건조 제형으로부터 수성 용매를 제거하는데 효과적인 양에 의해 상기 냉동된 사전-동결건조 제형의 압력을 감소시키는 것을 포함하는 "진공 단계"; 및

(c) 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도를 붕괴 온도 초과로 증가시키는 것을 포함하는 단일 "건조 단계"를 포함함으로써

동결건조 분말을 생성하는, FIX 폴리펩타이드의 동결건조 방법을 제공한다. 다른 양상에서, 동결건조 처리 시간은 기준 방법, 예를 들어, 2회 이상의 건조 단계를 갖는 동결건조 과정에 비해 감소된다.

다른 양상에서, 본 발명에 의해 생성된 동결건조 분말은 다음 중 하나 이상의 특징을 가진다: (1) FIX 폴리펩타이드의 개선된 안정성; (2) 감소된 재구성 시간; (3) 상기 제형을 포함하는 스토퍼 상에서의 감소된 스플래싱; 또는 (4) 실온에서 동결건조 분말의 증가된 보관수명.

특정 실시형태에서, 붕괴 온도는 -1.5℃이다.

특정 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 냉동 단계 동안 약 -65 내지 약 -40℃, 약 -65 내지 약 -45℃, 약 -65 내지 약 -55℃, 약 -60 내지 약 -40℃, 약 -60 내지 약 -50℃ 또는 약 -60 내지 약 -55℃의 냉동 온도로 냉동된다. 특정 실시형태에서, 사전-동결건조 제형은 냉동 단계 동안 약 -55℃의 냉동 온도로 냉동된다. 특정 실시형태에서, 냉동 온도는 냉동 단계 동안 약 5℃로부터 약 -55℃로 하강된다.

특정 실시형태에서, 냉동 온도는 냉동 단계 동안 약 30분 내지 약 5시간, 약 1시간 내지 약 5시간, 약 1.5시간 내지 약 5시간, 약 1.5시간 내지 약 4시간, 약 1.5시간 내지 약 3시간, 또는 약 1.5시간 내지 약 2.5시간에 유지된다. 특정 실시형태에서, 냉동 온도는 냉동 단계 동안 약 2시간 동안 유지된다.

특정 실시형태에서, 단계 (a)의 냉동된 사전-동결건조 제형은 추가로 "진공 단계" (b) 전에 "어닐링 단계" (a')가 실시된다. 특정 실시형태에서, 단계 (a)의 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도는 어닐링 단계 동안 약 -15℃ 내지 약 -2℃의 어닐링 온도까지 상승된다. 특정 실시형태에서, 단계 (a)의 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도는 어닐링 단계 동안 약 -6℃의 어닐링 온도로 상승된다.

특정 실시형태에서, 어닐링 온도는 어닐링 단계 동안 약 2시간 내지 약 4 시간 동안 유지된다. 특정 실시형태에서, 어닐링 온도는 어닐링 단계 동안 약 30분 내지 약 5시간, 약 1시간 내지 약 5시간, 약 2시간 내지 약 5시간, 약 2시간 내지 약 4시간 또는 약 2.5시간 내지 약 3.5시간 동안 유지된다. 특정 실시형태에서, 어닐링 온도는 어닐링 단계 동안 약 3시간 동안 유지된다.

특정 실시형태에서, 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도는 어닐링 단계 동안 어닐링 온도로부터 약 -65℃ 내지 약 -40℃의 온도로 하강된다. 특정 실시형태에서, 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도는 어닐링 단계 동안 어닐링 온도로부터 -55℃의 온도로 하강된다.

특정 실시형태에서, "진공 단계"는 냉동된 사전-동결건조 제형에 약 0.05 내지 약 1mbar, 약 0.05 내지 약 0.50mbar, 약 0.10 내지 약 0.50mbar, 약 0.15 내지 약 0.50mbar, 약 0.20 내지 약 0.50mbar, 또는 약 0.25 내지 약 0.50mbar의 진공을 실시하는 것을 포함한다. 특정 실시형태에서, "진공 단계"에서 진공은 약 0.33mbar이다.

특정 실시형태에서, 진공은 약 5시간, 약 4시간, 약 3시간, 약 2시간, 또는 약 1시간 동안 "진공 단계"에서 유지된다. 일부 실시형태에서, 진공은 약 2시간 동안 "진공 단계"에서 유지된다.

특정 실시형태에서, "건조 단계"는 약 -55℃에서부터 약 40℃의 건조 온도로 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도를 상승시키는 것을 포함한다. 특정 실시형태에서, 건조 단계는 적어도 약 30℃, 적어도 약 32℃, 적어도 약 34℃, 적어도 약 35℃, 적어도 약 36℃, 적어도 약 38℃, 적어도 약 39℃, 적어도 약 40℃이다. 다른 실시형태에서, 건조 단계는 약 35℃, 약 40℃, 약 32℃ 또는 약 45℃이다.

특정 실시형태에서, 건조 단계는 추가로 약 10시간 내지 약 40시간, 약 10시간 내지 약 30시간, 또는 약 20시간 내지 약 30시간 동안 건조 단계를 유지하는 것을 포함한다. 특정 실시형태에서, 건조 단계는 약 25시간 동안 유지된다.

특정 실시형태에서, 건조 단계는 약 0.05mbar 내지 약 1mbar, 약 0.05 내지 약 0.50mbar, 약 0.10 내지 약 0.50mbar, 약 0.15 내지 약 0.50mbar, 약 0.20 내지 약 0.50mbar, 또는 약 0.20mbar 내지 약 0.45mbar의 압력에서 수행된다. 특정 실시형태에서, 압력은 건조 단계 동안 약 0.33mbar에서 유지된다. mbar 단위는 Torr 또는 임의의 다른 단위로 전환될 수 있다. 예를 들어, 1mbar는 0.75006375541921 Torr로 전환될 수 있다.

일 양상에서, 본 개시내용은 하기 단계들:

(a) 약 2시간 동안 온도를 약 -55℃의 냉동 온도로 하강시킴으로써, 그리고 상기 냉동 온도를 약 2시간 동안 유지함으로써 FIX 폴리펩타이드를 포함하는 사전-동결건조 제형을 냉동시키는 것을 포함하는 "냉동 단계";

(a') 단계 (a)의 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도를 약 -6℃의 어닐링 온도로 약 1.5시간 동안 상승시키고, 약 3시간 동안 어닐링 온도를 유지하고 나서, 약 1.5시간 동안 온도를 약 -55℃로 하강시키는 것을 포함하는 "어닐링 단계";

(b) 대기압에서 2시간 동안 약 -55℃에서 단계 (a')의 냉동된 사전-동결건조 제형을 유지하고, 약 2시간 동안 압력을 약 0.33mbar로 하강시키는 것을 포함하는 "진공 단계"; 및

(c) 단계 (b)의 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도를 약 40℃로 3시간 동안까지 상승시키는 한편, 약 0.33mbar의 압력을 유지하고, 또는 약 25시간 동안 약 40℃에서 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도를 유지하는 한편, 약 0.33mbar의 압력을 유지하는 것을 포함하는 단일 "건조 단계"를 포함함으로써,

동결건조 분말을 생성하는, FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말을 생성하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 동결건조 방법은 더 적은 순환 시간을 취한다.

특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 의해 생성된 동결건조 분말은 다음의 특징을 가진다:

(1) FIX 폴리펩타이드의 개선된 안정성;

(2) 감소된 재구성 시간;

(3) 상기 제형을 포함하는 스토퍼 상에서의 감소된 스플래싱;

(4) 실온에서 동결건조 분말의 증가된 보관 수명; 또는

(5) 이들의 임의의 조합

일부 실시형태에서, 동결건조 주기 기간은 약 4.5일, 약 4일, 약 3.5일, 약 3일, 약 2.5일, 또는 약 2일 미만일 수 있다. 다른 실시형태에서, 동결건조 주기 기간은 약 3일 이하이다. 특정 실시형태에서, 동결건조 방법에서 사용되는 사전-동결건조 제형의 충전 용적은 약 5㎖ 미만이다. 특정 실시형태에서, 충전 용적은 약 4㎖, 약 3.5㎖, 약 3.0㎖, 약 2.9㎖, 약 2.8㎖, 약 2.7㎖, 약 2.65㎖, 약 2.6㎖, 약 2.5㎖, 약 2.4㎖, 약 2.3㎖, 약 2.2㎖, 약 2.1㎖, 또는 약 2.0㎖이다. 일 실시형태에서, 충전 용적은 약 2.65㎖이다.

특정 실시형태에서, 동결건조 방법에 의해 생성되는 동결건조 분말의 감소된 재구성 시간은 약 1.5분 미만, 약 1분 미만, 약 50초 미만, 약 40초 미만, 약 30초 미만, 약 20초 미만 또는 약 10초 미만이다. 특정 실시형태에서, 동결건조 방법에 의해 생성된 동결건조 분말의 감소된 재구성 시간은 약 30초 미만이다.

특정 실시형태에서, 동결건조 방법에서 사용되는 사전-동결건조 제형의 감소된 동결건조 순환 시간은 약 4일 이하, 약 3일 이하, 약 2일 이하, 또는 약 1일 이하이다.

일부 실시형태에서, 동결건조 분말은 약 90시간 이하, 약 80시간 이하, 약 70시간 이하, 약 60시간 이하, 약 50시간 이하, 약 45시간 이하, 약 40시간 이하, 또는 약 30시간 이하로 사전-동결건조 제형으로부터 생성된다. 특정 실시형태에서, 동결건조 분말은 약 45시간 이하에 사전-동결건조 제형으로부터 생성된다.

특정 실시형태에서, 동결건조 분말에서 잔여 수분은 약 1.0%, 약 0.7%, 약 0.6%, 약 0.5%, 약 0.4% 또는 약 0.3% 미만이다. 일부 실시형태에서, 동결건조 분말 중의 잔여 수분은 약 0.5% 미만이다.

이제 본 발명을 상세하게 기재하면, 단지 예시의 목적을 위해 본 명세서에 포함되고 본 발명을 제한하는 것으로 의도되지 않는 다음의 실시예를 참고로 하여 더 명확하게 이해될 것이다. 본 명세서에서 언급되는 모든 특허 및 간행물은 명확하게 참고로 포함된다.

실시예

실시예 1: IX 인자-Fc 약물 물질 및 약물 생성물 조성물

rFIXFc 설명

rFIXFc는 인간 면역글로불린 G1(IgG1)의 Fc 도메인에 공유결합된 인간 응고 IX 인자(FIX)로 이루어진 장시간 작용성, 완전 재조합 융합 단백질이다. rFIXFc의 IX 인자 부분은 혈장 유래 IX 인자의 Thr¹⁴⁸ 대립형질 형태와 동일한 1차 아미노산 서열을 가지며, 내인성 IX 인자와 유사한 구조적 및 기능성 특징을 가진다. rFIXFc의 Fc 도메인은 IgG1의 힌지, CH2 및 CH3 영역을 함유한다. rFIXFc는 대략 98 킬로달톤의 분자량을 지니는 869개의 아미노산을 함유한다.

rFIXFc를 인간 배아 신장(HEK) 세포주에서 재조합 DNA 기법에 의해 생성하고, 이어서 정제한다.

rFIXFc를 포함하는 본 발명의 rFIXFc 약물 생성물 제형은 고농도 약물 생성물, 예를 들어, 4000+IU/바이알 약물 생성물 강도를 개발하게 한다. 이는 이하의 표 1과 비교하여 나타내는 바와 같이 약물 물질 중의 더 고농도의 rFIXFc 단백질을 필요로 한다. 본 발명의 rFIXFc 약물 생성물 제형은 실온 안정성을 증가시키도록 250 및 500IU/바이알 약물 생성물 강도의 보관 수명을 증가시킬 수 있다. 연구 데이터는 250 및 500IU/바이알 약물 생성물 강도가 기준 약물 생성물보다 가속되된 조건 하에서 상당히 더 안정하다는 것을 시사한다.

본 발명의 rFIXFc 약물 생성물 제형은 또한 동결건조될 때 체류 시간을 감소시킬 수 있다. 기준 약물 생성물 재구성 시간은 1 내지 2분으로 변한다. 연구 데이터는 LCM 약물 생성물이 재구성 시간을 30초 미만으로 감소시킨다는 것을 시사한다.

본 발명의 rFIXFc 약물 생성물 제형은 또한 동결건조 처리 시간을 감소시킬 수 있다. 현재 동결건조 주기는 대략 4.5일이다. 더 낮은 바이알 용적에 의해, 이는 더 경제적인 제조를 위해 대략 3일 이하로 감소될 가능성이 있을 수 있다.

약물 물질(Drug Substance: DS)

본 발명의 rFIXFc 제형에 대한 약물 물질은 기준 약물 물질과 동일한 제형 부형제를 사용할 것이다. 더 고농도는 약물 물질 제조 동안 제2 초미세여과 단계를 이용하여 달성될 것이다. 표 1 참조.

약물 생성물(DP)

상기 언급한 목적을 달성하기 위해, 기준 약물 생성물(단백질 및 부형제)의 농도가 2배가 되는 한편, 동결건조 전에 바이알의 충전 용적을 감소시키는 약물 생성물을 설계하였다. 이는 환자에 대한 모든 성분의 용량이 일정하게 남아있는 한편, 상기 언급한 약물 생성물 성능 변수가 개선된다는 것을 보장한다.

이하의 표 2 내지 4는 동결건조 공급원료의 조성, 동결건조 후 바이알 내 고체 생성물의 함량 및 재구성 후 조성을 상술한다. rFIXFc 단백질 농도의 넓은 변화를 주목하는 것이 중요하다. IX 인자의 각각의 배취는 그의 활성(IU/mg)이 약간 상이하다는 사실에 기인하여, 공급원료는 분석 활성을 이용하여 조제된다. 이는 다양한 단백질 농도를 초래하고, 상이한 강도의 약물 생성물에 첨가된 이 변화는 이하에 언급되는 범위를 제공한다.

실시예 2: 제2 세대 rFIXFc 약물 생성물에 대한 동결건조 주기 변수의 연구

요약

본 연구의 목적은 본 발명의 rFIXFc 약물 생성물에 대한 동결건조 주기의 건조 단계 과정 변수 주위의 범위를 평가하는 것이다.

이 보고는 동결건조 과정 변수(건조 보관 온도, 챔버 진공 수준 및 건조 시간)를 평가하는 실험의 통계학적 설계(DOE) 및 건조 동안 생성물 온도에 대한 그들의 효과, 얻어진 잔여 수분 및 약물 생성물의 건조 속도를 요약한다.

제2 세대 rFIXFc 약물 생성물에 대한 예비 동결건조 주기 설계 실험은 별도의 1차 및 2차 건조 단계가 대략 -1.5℃의 제형의 높은 붕괴 온도에 기인하여 필수적이지 않다는 것을 입증하였다. 보관 온도의 효과, 진공 수준 및 잔여 수분 수준에 대한 건조 시간 및 위약에 대한 동결건조 과정 동안 생성물 온도를 평가하기 위해 실험 설계(DOE)의 12가지의 실험을 개발하였다. 데이터의 분석은 1% 미만의 잔여 수분을 달성하기 위해, 건조 단계 동안 30℃의 최소 보관 온도가 필요하다는 것을 나타낸다. 분석은 또한 25시간 이상의 건조 시간이 바이알 내 잔여 수분을 추가로 감소시키지 않고, 챔버 진공 수준이 잔여 수분에 대해 적은 효과만을 가진다는 것을 입증하였다. 건조 동안 생성물 온도는 보관 온도 및 챔버 진공 수준에 의해 상당하게 영향받지만, 연구에서 대부분의 응집 건조 조건(1000mTorr 챔버 진공에서 40℃ 보관 온도)은 붕괴 온도보다 10℃ 더 낮은 생성물 온도를 초래하였다. 바이알 질량 흐름은 대부분 보관 온도의 함수이며, 진공 제어를 유지하기 위해, 상업적 동결건조기는 0.7g/시간/바이알의 수분 유동 속도를 조절할 필요가 있을 것이다. 동결건조 주기는 보관 온도 40℃, 250mTorr(0.33mBar)의 챔버 진공 및 25시간의 건조 시간을 이용하여 0.5% 미만의 잔여 수준을 지니는 생성물을 달성하도록 제안되었다.

도입

가속화된 저장 동안 개선된 단백질 안정성, 개선된 재구성 시간 및 스토퍼 상의 스플래싱을 감소시키기 위한 감소된 충전 용적을 가능하게 하도록 제2 세대 IX인자-Fc(rFIXFc-2G) 약물 생성물 조성은 설계하였다. 이는 재구성 생성물이 제1 세대 조성물과 동일하게 되도록 5.3㎖로부터 2.65㎖로 충전 용적을 감소시킴으로써, 그리고 제형 내 단백질 및 부형제 농도를 배가시킴으로써 달성하였다. 충전 용적을 감소시키기 위한 다른 이점은 동결건조 동안 제거될 필요가 있는 물의 양의 감소였다.

새로운 약물 생성물 설계는 약물 생성물 과정의 재입증을 필요로 하기 때문에, 동결건조 주기를 재연구하였다. 위약 형성의 붕괴 온도는 대략 -1.5℃로서 측정되었는데, 이는 기준 rFIXFc 동결건조 과정에 대해 설계된 것보다 동결건조 주기가 더 짧아지게 할 것이다. 생성물은 40℃를 초과하는 보관 온도에서조차 붕괴를 겪지 않기 때문에 초기 실험을 통해 별도의 1차 건조 단계를 분리가 필요하지 않다는 것을 결정하였다. 진공이 적용된 후에 1차 건조 온도에 대해 직접 단계와 조합한 기준 약물 생성물로부터의 냉동 프로파일을 이용하여 주기를 설계하였다. 만니톨은 활성 바이알과 동일한 외관을 만드는 케이크에 대한 결정질 구조를 제공하기 때문에, 위약은 활성 rFIXFc-2G 바이알에 대한 양호한 대용물이다. 무정형당은 또한 단백질보다 건조시키기가 더 어려우며, 따라서, 얻어진 수분은 약간 더 많고, 과정에 대한 최악의 경우값을 제공한다. 바이알로부터 단백질의 제거는 또한 수증기에 대한 내성을 감소시켜서, 바이알 질량흐름에 대한 최악 경우의 추정을 제공한다.

통계학적 실험 설계(DOE) 연구를 수행하여 동결건조 과정 변수(건조 보관 온도, 챔버 진공 수준 및 건조 시간) 및 건조 과정 동안 생성물 온도에 대한 그들의 효과, 얻어진 잔여 수분 및 약물 생성물의 건조 속도를 평가하였다.

물질 및 방법

본 연구의 목적은 제2 세대 rFIXFc 약물 생성물에 대한 동결건조 주기의 건조 단계 과정 변수 주위의 범위를 평가하는 것이다. JMP 9에서 DOE 연구를 설계하기 위해 사용한 건조 단계 변수 및 범위를 표 5에 나타낸다. 개개 실행 변수 설정값을 나타내는 얻어진 12가지 실험 DOE 계획을 표 6에 나타낸다.

연구에서 각각의 동결건조 주기에 대해, 80개의 10㎖ 스캇(Schott) 바이알(P/N: 68000320)을 표 7에 나타낸 바와 같은 제2 세대 rFIXFc 위약 2.75㎖로 충전하여, 잔여 수분 평가에 대한 최악 충전 용적을 제공한다. 이 충전 바이알을 도 1에 나타낸 각각의 실험에 대해 3개의 열전대를 지니는 단일 선반 상에 배열하였다.

사용한 동결건조 주기는 표 8에 나타낸 주기의 변화였다. 동결건조기 선반 건조 온도, 건조 단계 시간 및 건조 진공 수준은 표 6에 나타낸 실험표의 설계에 기반하였다. SP 인더스트리즈 리오스타 II(SP Industries Lyostar II)를 각각의 동결건조 주기에 대해 사용하고 나서, 바이알을 중간 선반에 두었다.

각각의 동결건조 주기 후에, 5개의 바이알을 코너 및 중간 위치로부터 선택하고, 절차 TDMP-74를 이용하여 잔여 수분을 측정하고 나서, 선반에 걸쳐 평균화하였다. 건조 동안 생성물 온도 및 바이알 질량흐름 속도를 열전대를 이용하고, 리오스타 II 소프트웨어 내의 압력측정 온도 측정(Manometric Temperature Measurement)에 의해 측정하였다. 이들 산출을 JMP 9 소프트웨어를 이용하여 분석하여 제2 세대 rFIXFc 동결건조 과정에 대한 건조 변수의 효과를 측정하였다. JMP 단계 분석을 수행하여 유의한 변수를 결정하였고, 이어서, 이들 변수를 과정 산출(잔여 수분, 생성물 온도 및 건조 동안의 질량 유동)이 입력 변수에 반응하는 방법을 나타내는 표준 최소 제곱 효과 선별 알고리즘을 이용하여 분석하였다.

결과 및 논의

12가지의 동결건조 실험 결과를 표 9에 나타낸다.

1. 잔여 수분에 대한 동결건조 주기 변수의 분석

rFIXFc-2G 위약을 약물 생성물에 대한 최악 대용물로서 사용하였는데, 일반적으로 단백질보다 2차 건조 동안 당으로부터 잔여 수분을 제거하는 것이 더 어렵기 때문이다. DOE 분석 결과를 나타내는 얻어진 예측 프로파일러를 도 2에 나타낸다. 몇몇 관찰은 명확하다: 보관 온도는 약물 생성물에서 잔여 수분에 대한 가장 유의한 효과를 가진다. 이는 밀착 결합된 물을 제거하는 2차 건조가 확산 및 탈착 제어 과정이라는 사실에 기반하여 예측된다. 상기 모델은 30℃보다 더 높은 보관 온도가 1%보다 낮은 잔여 수분 수준을 달성하는데 필요하다는 것을 고신뢰도로 예측한다. 진공 수준은 얻어진 잔여 수분에 대해 작지만 측정가능한 효과를 갖는 것을 나타난다. 건조 시간은 추가적인 건조 시간의 추가가 잔여 수분 수준을 계속해서 감소시키지 않는 경우 25시간에 시작하는 감소된 복귀 지점을 나타내는 것으로 나타난다. 이 유형의 거동은 보관 온도에 의해 결정되는 평형경계에 대한 역학 접근과 일치하고, 잔여 수분은 추가 건조가 가능하지 않은 점근선에 접근한다. 이런 잔여 수분 DOE 분석에 기반하여, 건조 보관 온도는 30℃ 이상이어야 하고, 건조 시간은 25시간 이하에서 고정되어야 한다.

2. 승화 동안 생성물 온도에 대한 동결건조 주기 변수의 분석

rFIXFc-2G 약물 생성물 위약의 냉동 건조 붕괴 온도를 대략 -1.5℃로서 측정하였다. 실행적으로, 이는 증량수(bulk water)가 동결건조 동안 바이알로부터 제거됨에 따라 생성물 온도가 이 붕괴 온도 미만에서 유지되는 한, 약물 생성물이 훌륭한 케이크 구조를 유지할 것이라는 것을 의미한다. DOE 분석은 보관 온도 및 챔버 진공 수준이 둘 다 도 3에서 나타내는 바와 같이 생성물에 대해 상당한 효과를 가진다는 것을 결정하였다. 챔버 진공은 가장 큰 효과를 가지며, 더 높은 압력은 승화 동안 더 높은 생성물 온도로 바뀐다. 1000mTorr(1.33mBar)에서조차, 가장 높게 측정된 생성물 온도는 생성물 붕괴 온도 미만의 -15.2℃, 대략 13℃였다. 보관 온도는 또한 생성물 온도에 대한 보통의 효과를 갖지만, 결과는 진공 효과보다 덜 확연하다. 이 분석은 보관 온도 40℃ 및 챔버 진공 수준 1000mTorr에서 조차 붕괴 위험이 거의 없으며, 임의의 실행적 동결건조 주기 설계 공간의 가능성을 본질적으로 제거한다는 것을 나타낸다.

3. 승화 동안 바이알 질량 흐름 속도에 대한 동결건조 주기 변수의 분석

바이알 질량 흐름 속도(dm/dt)는 승화 과정 동안 물이 바이알로부터 제거되는 속도의 측정이다. 동결건조 주기에 필요한 시간을 감소시키기 위해 더 빠른 건조가 바람직하지만, 너무 많은 수분은 스케일 냉동 건조기를 제조함에 있어서 응축기에 충격을 줄 수 있고, 생성물 챔버 내 진공 제어의 상실을 야기한다. 위약은 최악 바이알 질량 흐름 조건을 나타낸다. 제형에 존재하는 단백질이 없기 때문에, 케이크 내 고체 백분율은 최소화되며, 이는 냉동 건조 케이크로부터 질량 흐름에 대한 더 낮은 저항성을 야기한다. 보관 온도는 도 4에 나타내는 바와 같이 바이알에 대해 유의한 효과를 가지며, 증가된 온도는 더 빠른 승화를 야기한다. 챔버 진동 수준은 DOE 분석 모델에 포함되지만, p값은 0.136인데, 이는 95% 신뢰도로 유의하지 않다. 본 연구에서 가장 높게 측정된 dm/dt는 0.7 g/hr/바이알이었다.

4. 위약 DOE 연구에 기반하여 제안된 제2 세대 rFIXFc 동결건조 주기

위약 DOE 연구로부터의 데이터는 0.5% 미만의 잔여 수분 표적을 달성하는 한편, 단일 건조 주기를 이용하여 생성물을 그의 붕괴 온도 미만으로 유지하기 위한 동결건조 주기를 설계하는 것이 실현가능하다는 것을 시사한다. 제안된 동결건조 주기를 표 10에 나타내고, rFIXFc-2G 동결건조 주기와 유사한 조건 하에 있는 DOE 실행 8로부터의 데이터를 도 5에 나타낸다. 0.5%의 잔여 수분 표적을 선택하였는데, 이는 제1 세대 rFIXFc 약물 생성물 강도 시리즈의 평균값이기 때문이다. 이 수분 수준은 쿠션을 제공하며, 따라서 생성물이 가속화된 안정성 동안 수분을 흡수함에 따라, 생성물 품질 속성은 영향받지 않을 것이다.

동결건조 주기의 냉동 및 어닐링 부분을 기준 rFIXFc 약물 생성물 동결건조 주기에 대해 연구한 바와 같이 사용하였고, 별도의 1차 및 2차 건조 단계를 40℃ 보관 온도 및 250mTorr 진공에서 25시간 동안 단일 건조 단계로 대체하였다.

결론

잔여 수분에 대한 제2 세대 rFIXFc 약물 생성물 동결건조 과정 변수, 생성물 온도 및 위약의 바이알 질량 흐름 속도를 평가하는 12가지 실험 DOE 연구를 완료하였다. 데이터의 분석은 1% 미만의 잔여 수분을 달성하기 위해, 건조 단계 동안 30℃의 최소 보관 온도가 필요하다는 것을 나타낸다. 상기 분석은 또한 25시간보다 더 긴 건조시간이 바이알 내 잔여 수분을 감소시키지 않고, 진공 수준이 잔여 수분에 대해 적은 효과만을 가진다는 것을 입증하였다. 건조 동안 생성물 온도는 보관 온도 및 챔버 진공 수준에 의해 유의하게 영향받는다. 본 연구에서 대부분의 응집 조건(1000mTorr 챔버 진공에서 40℃ 보관 온도)은 붕괴 온도보다 10℃ 더 높은 생성물 온도를 야기하였다.

동결건조 주기는 보관 온도 40℃, 250mTorr(0.33mBar)의 챔버 진공 및 25시간의 건조 시간을 이용하여 0.5% 미만의 잔여 수준을 지니는 생성물을 달성하도록 제안되었다.

구체적 실시형태의 앞서 언급한 설명은 본 발명의 일반적 특성을 매우 완전하게 나타낼 것이며, 당업계의 기술 내의 지식을 적용함으로써, 과도한 실험 없이 본 발명의 일반적 개념으로부터 벗어나지 않고 이러한 구체적 실시형태를 다양한 적용을 위해 용이하게 변형시키고/시키거나 적합하게 할 수 있을 것이다. 따라서, 이러한 적합화 및 변형은 본 명세서에 제시된 교시 및 가이드에 기반하여 개시된 실시형태의 동등물의 의미 및 범위 내인 것으로 의도된다. 본 명세서의 용어 또는 어구가 교시 및 가이드에 비추어 당업자에 의해 이해되도록, 본 명세서의 어구 또는 용어는 설명의 목적을 위해, 제한 없이 이해되어야 한다.

본 발명의 범위 및 범주는 상기 기재한 예시적 실시형태에 의해 제한되어서는 안되지만, 다음의 청구범위 및 그들의 동등물에 따라서만 한정되어야 한다. 본 발명의 다른 실시형태는 본 명세서에 개시된 본 발명의 명시 및 실행을 고려하여 당업자에게 명확할 것이다.

본 명세서에 언급된 모든 문헌, 논문, 간행물, 특허 및 특허 출원은 각각의 개개 간행물 또는 특허 출원이 참고로 포함되는 것으로 개개로 표시되는 것과 동일한 정도로 본 명세서에 참고로 포함된다.

본 출원은 본 명세서에 전문이 참고로 포함되는 2014년 3월 24일자로 출원된 미국 가출원 특허61/969,801호에 대한 우선권을 주장한다.

서열 표

SEQUENCE LISTING <110> BIOGEN IDEC MA INC. <120> LYOPHILIZED FACTOR IX FORMULATIONS <130> WO/2015/148444 <140> PCT/US2015/022141 <141> 2015-03-24 <150> US 61/969,801 <151> 2014-03-24 <160> 14 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 7583 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> FIX-Fc Chain <400> 1 gcgcgcgttg acattgatta ttgactagtt attaatagta atcaattacg gggtcattag 60 ttcatagccc atatatggag ttccgcgtta cataacttac ggtaaatggc ccgcctggct 120 gaccgcccaa cgacccccgc ccattgacgt caataatgac gtatgttccc atagtaacgc 180 caatagggac tttccattga cgtcaatggg tggagtattt acggtaaact gcccacttgg 240 cagtacatca agtgtatcat atgccaagta cgccccctat tgacgtcaat gacggtaaat 300 ggcccgcctg gcattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca 360 tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc 420 gtggatagcg gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga 480 gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat 540 tgacgcaaat gggcggtagg cgtgtacggt gggaggtcta tataagcaga gctctctggc 600 taactagaga acccactgct tactggctta tcgaaattaa tacgactcac tatagggaga 660 cccaagcttc gcgacgtacg gccgccacca tgcagcgcgt gaacatgatc atggcagaat 720 caccaggcct catcaccatc tgccttttag gatatctact cagtgctgaa tgtacaggtt 780 tgtttccttt tttaaaatac attgagtatg cttgcctttt agatatagaa atatctgatg 840 ctgtcttctt cactaaattt tgattacatg atttgacagc aatattgaag agtctaacag 900 ccagcacgca ggttggtaag tactgtggga acatcacaga ttttggctcc atgccctaaa 960 gagaaattgg ctttcagatt atttggatta aaaacaaaga ctttcttaag agatgtaaaa 1020 ttttcatgat gttttctttt ttgctaaaac taaagaatta ttcttttaca tttcagtttt 1080 tcttgatcat gaaaacgcca acaaaattct gaatcggcca aagaggtata attcaggtaa 1140 attggaagag tttgttcaag ggaatctaga gagagaatgt atggaagaaa agtgtagttt 1200 tgaagaagca cgagaagttt ttgaaaacac tgaaagaaca actgaatttt ggaagcagta 1260 tgttgatgga gatcagtgtg agtccaatcc atgtttaaat ggcggcagtt gcaaggatga 1320 cattaattcc tatgaatgtt ggtgtccctt tggatttgaa ggaaagaact gtgaattaga 1380 tgtaacatgt aacattaaga atggcagatg cgagcagttt tgtaaaaata gtgctgataa 1440 caaggtggtt tgctcctgta ctgagggata tcgacttgca gaaaaccaga agtcctgtga 1500 accagcagtg ccatttccat gtggaagagt ttctgtttca caaacttcta agctcacccg 1560 tgctgagact gtttttcctg atgtggacta tgtaaattct actgaagctg aaaccatttt 1620 ggataacatc actcaaagca cccaatcatt taatgacttc actcgggttg ttggtggaga 1680 agatgccaaa ccaggtcaat tcccttggca ggttgttttg aatggtaaag ttgatgcatt 1740 ctgtggaggc tctatcgtta atgaaaaatg gattgtaact gctgcccact gtgttgaaac 1800 tggtgttaaa attacagttg tcgcaggtga acataatatt gaggagacag aacatacaga 1860 gcaaaagcga aatgtgattc gaattattcc tcaccacaac tacaatgcag ctattaataa 1920 gtacaaccat gacattgccc ttctggaact ggacgaaccc ttagtgctaa acagctacgt 1980 tacacctatt tgcattgctg acaaggaata cacgaacatc ttcctcaaat ttggatctgg 2040 ctatgtaagt ggctggggaa gagtcttcca caaagggaga tcagctttag ttcttcagta 2100 ccttagagtt ccacttgttg accgagccac atgtcttcga tctacaaagt tcaccatcta 2160 taacaacatg ttctgtgctg gcttccatga aggaggtaga gattcatgtc aaggagatag 2220 tgggggaccc catgttactg aagtggaagg gaccagtttc ttaactggaa ttattagctg 2280 gggtgaagag tgtgcaatga aaggcaaata tggaatatat accaaggtgt cccggtatgt 2340 caactggatt aaggaaaaaa caaagctcac tgacaaaact cacacatgcc caccgtgccc 2400 agctccggaa ctcctgggcg gaccgtcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac 2460 cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga 2520 ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa 2580 gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca 2640 ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccagc 2700 ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc cgagaaccac aggtgtacac 2760 cctgccccca tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa 2820 aggcttctat cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa 2880 ctacaagacc acgcctcccg tgttggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct 2940 caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga 3000 ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg tctccgggta aatgagaatt 3060 cagacatgat aagatacatt gatgagtttg gacaaaccac aactagaatg cagtgaaaaa 3120 aatgctttat ttgtgaaatt tgtgatgcta ttgctttatt tgtaaccatt ataagctgca 3180 ataaacaagt tggggtgggc gaagaactcc agcatgagat ccccgcgctg gaggatcatc 3240 cagccggcgt cccggaaaac gattccgaag cccaaccttt catagaaggc ggcggtggaa 3300 tcgaaatctc gtagcacgtg tcagtcctgc tcctcggcca cgaagtgcac gcagttgccg 3360 gccgggtcgc gcagggcgaa ctcccgcccc cacggctgct cgccgatctc ggtcatggcc 3420 ggcccggagg cgtcccggaa gttcgtggac acgacctccg accactcggc gtacagctcg 3480 tccaggccgc gcacccacac ccaggccagg gtgttgtccg gcaccacctg gtcctggacc 3540 gcgctgatga acagggtcac gtcgtcccgg accacaccgg cgaagtcgtc ctccacgaag 3600 tcccgggaga acccgagccg gtcggtccag aactcgaccg ctccggcgac gtcgcgcgcg 3660 gtgagcaccg gaacggcact ggtcaacttg gccatggttt agttcctcac cttgtcgtat 3720 tatactatgc cgatatacta tgccgatgat taattgtcaa cacgtgctga tcagatccga 3780 aaatggatat acaagctccc gggagctttt tgcaaaagcc taggcctcca aaaaagcctc 3840 ctcactactt ctggaatagc tcagaggcag aggcggcctc ggcctctgca taaataaaaa 3900 aaattagtca gccatggggc ggagaatggg cggaactggg cggagttagg ggcgggatgg 3960 gcggagttag gggcgggact atggttgctg actaattgag atgcatgctt tgcatacttc 4020 tgcctgctgg ggagcctggg gactttccac acctggttgc tgactaattg agatgcatgc 4080 tttgcatact tctgcctgct ggggagcctg gggactttcc acaccctcgt cgagctagct 4140 tcgtgaggct ccggtgcccg tcagtgggca gagcgcacat cgcccacagt ccccgagaag 4200 ttggggggag gggtcggcaa ttgaaccggt gcctagagaa ggtggcgcgg ggtaaactgg 4260 gaaagtgatg tcgtgtactg gctccgcctt tttcccgagg gtgggggaga accgtatata 4320 agtgcagtag tcgccgtgaa cgttcttttt cgcaacgggt ttgccgccag aacacaggta 4380 agtgccgtgt gtggttcccg cgggcctggc ctctttacgg gttatggccc ttgcgtgcct 4440 tgaattactt ccacctggct ccagtacgtg attcttgatc ccgagctgga gccaggggcg 4500 ggccttgcgc tttaggagcc ccttcgcctc gtgcttgagt tgaggcctgg cctgggcgct 4560 ggggccgccg cgtgcgaatc tggtggcacc ttcgcgcctg tctcgctgct ttcgataagt 4620 ctctagccat ttaaaatttt tgatgacctg ctgcgacgct ttttttctgg caagatagtc 4680 ttgtaaatgc gggccaggat ctgcacactg gtatttcggt ttttggggcc gcgggcggcg 4740 acggggcccg tgcgtcccag cgcacatgtt cggcgaggcg gggcctgcga gcgcggccac 4800 cgagaatcgg acgggggtag tctcaagctg gccggcctgc tctggtgcct ggcctcgcgc 4860 cgccgtgtat cgccccgccc tgggcggcaa ggctggcccg gtcggcacca gttgcgtgag 4920 cggaaagatg gccgcttccc ggccctgctc cagggggctc aaaatggagg acgcggcgct 4980 cgggagagcg ggcgggtgag tcacccacac aaaggaaagg ggcctttccg tcctcagccg 5040 tcgcttcatg tgactccacg gagtaccggg cgccgtccag gcacctcgat tagttctgga 5100 gcttttggag tacgtcgtct ttaggttggg gggaggggtt ttatgcgatg gagtttcccc 5160 acactgagtg ggtggagact gaagttaggc cagcttggca cttgatgtaa ttctccttgg 5220 aatttgccct ttttgagttt ggatcttggt tcattctcaa gcctcagaca gtggttcaaa 5280 gtttttttct tccatttcag gtgtcgtgaa cacgtggtcg cggccgcgcc gccaccatgg 5340 agacagacac actcctgcta tgggtactgc tgctctgggt tccaggttcc actggtgaca 5400 aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct gggaggaccg tcagtcttcc 5460 tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg 5520 tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg 5580 tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc acgtaccgtg 5640 tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca 5700 aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc 5760 agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg cgatgagctg accaagaacc 5820 aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg 5880 agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgttg gactccgacg 5940 gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg 6000 tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct 6060 ccctgtctcc gggtaaatga ctcgagagat ctggccggct gggcccgttt cgaaggtaag 6120 cctatcccta accctctcct cggtctcgat tctacgcgta ccggtcatca tcaccatcac 6180 cattgagttt aaacccgctg atcagcctcg actgtgcctt ctagttgcca gccatctgtt 6240 gtttgcccct cccccgtgcc ttccttgacc ctggaaggtg ccactcccac tgtcctttcc 6300 taataaaatg aggaaattgc atcgcattgt ctgagtaggt gtcattctat tctggggggt 6360 ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat tgggaagaca atagcaggca tgctggggat 6420 gcggtgggct ctatggcttc tgaggcggaa agaaccagtg gcggtaatac ggttatccac 6480 agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa 6540 ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca 6600 caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc 6660 gtttccccct agaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata 6720 cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac gctgtaggta 6780 tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca 6840 gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga 6900 cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg 6960 tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa cagtatttgg 7020 tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg 7080 caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag 7140 aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa 7200 cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gacattaacc tataaaaata ggcgtatcac 7260 gaggcccttt cgtctcgcgc gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct 7320 cccggagacg gtcacagctt gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg 7380 cgcgtcagcg ggtgttggcg ggtgtcgggg ctggcttaac tatgcggcat cagagcagat 7440 tgtactgaga gtgcaccata tatgcggtgt gaaataccgc acagatgcgt aaggagaaaa 7500 taccgcatca ggcgccattc gccattcagg ctgcgcaact gttgggaagg gcgatcggtg 7560 cgggcctctt cgctattacg cca 7583 <210> 2 <211> 642 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> FIX-Fc Chain <400> 2 Tyr Asn Ser Gly Lys Leu Glu Glu Phe Val Gln Gly Asn Leu Glu Arg 1 5 10 15 Glu Cys Met Glu Glu Lys Cys Ser Phe Glu Glu Ala Arg Glu Val Phe 20 25 30 Glu Asn Thr Glu Arg Thr Thr Glu Phe Trp Lys Gln Tyr Val Asp Gly 35 40 45 Asp Gln Cys Glu Ser Asn Pro Cys Leu Asn Gly Gly Ser Cys Lys Asp 50 55 60 Asp Ile Asn Ser Tyr Glu Cys Trp Cys Pro Phe Gly Phe Glu Gly Lys 65 70 75 80 Asn Cys Glu Leu Asp Val Thr Cys Asn Ile Lys Asn Gly Arg Cys Glu 85 90 95 Gln Phe Cys Lys Asn Ser Ala Asp Asn Lys Val Val Cys Ser Cys Thr 100 105 110 Glu Gly Tyr Arg Leu Ala Glu Asn Gln Lys Ser Cys Glu Pro Ala Val 115 120 125 Pro Phe Pro Cys Gly Arg Val Ser Val Ser Gln Thr Ser Lys Leu Thr 130 135 140 Arg Ala Glu Thr Val Phe Pro Asp Val Asp Tyr Val Asn Ser Thr Glu 145 150 155 160 Ala Glu Thr Ile Leu Asp Asn Ile Thr Gln Ser Thr Gln Ser Phe Asn 165 170 175 Asp Phe Thr Arg Val Val Gly Gly Glu Asp Ala Lys Pro Gly Gln Phe 180 185 190 Pro Trp Gln Val Val Leu Asn Gly Lys Val Asp Ala Phe Cys Gly Gly 195 200 205 Ser Ile Val Asn Glu Lys Trp Ile Val Thr Ala Ala His Cys Val Glu 210 215 220 Thr Gly Val Lys Ile Thr Val Val Ala Gly Glu His Asn Ile Glu Glu 225 230 235 240 Thr Glu His Thr Glu Gln Lys Arg Asn Val Ile Arg Ile Ile Pro His 245 250 255 His Asn Tyr Asn Ala Ala Ile Asn Lys Tyr Asn His Asp Ile Ala Leu 260 265 270 Leu Glu Leu Asp Glu Pro Leu Val Leu Asn Ser Tyr Val Thr Pro Ile 275 280 285 Cys Ile Ala Asp Lys Glu Tyr Thr Asn Ile Phe Leu Lys Phe Gly Ser 290 295 300 Gly Tyr Val Ser Gly Trp Gly Arg Val Phe His Lys Gly Arg Ser Ala 305 310 315 320 Leu Val Leu Gln Tyr Leu Arg Val Pro Leu Val Asp Arg Ala Thr Cys 325 330 335 Leu Arg Ser Thr Lys Phe Thr Ile Tyr Asn Asn Met Phe Cys Ala Gly 340 345 350 Phe His Glu Gly Gly Arg Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro 355 360 365 His Val Thr Glu Val Glu Gly Thr Ser Phe Leu Thr Gly Ile Ile Ser 370 375 380 Trp Gly Glu Glu Cys Ala Met Lys Gly Lys Tyr Gly Ile Tyr Thr Lys 385 390 395 400 Val Ser Arg Tyr Val Asn Trp Ile Lys Glu Lys Thr Lys Leu Thr Asp 405 410 415 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 420 425 430 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 435 440 445 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 450 455 460 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 465 470 475 480 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 485 490 495 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 500 505 510 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 515 520 525 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 530 535 540 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 545 550 555 560 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 565 570 575 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 580 585 590 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 595 600 605 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 610 615 620 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 625 630 635 640 Gly Lys <210> 3 <211> 741 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Fc Portion <400> 3 atggagacag acacactcct gctatgggta ctgctgctct gggttccagg ttccactggt 60 gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggagg accgtcagtc 120 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 180 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 240 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 300 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 360 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 420 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgcgatga gctgaccaag 480 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 540 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gttggactcc 600 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 660 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 720 ctctccctgt ctccgggtaa a 741 <210> 4 <211> 227 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fc Portion <400> 4 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 1 5 10 15 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 20 25 30 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 35 40 45 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 50 55 60 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 65 70 75 80 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 85 90 95 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 100 105 110 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 115 120 125 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 130 135 140 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 145 150 155 160 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 165 170 175 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 180 185 190 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 195 200 205 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 210 215 220 Pro Gly Lys 225 <210> 5 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Core sequence of albumin-binding peptides <400> 5 Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp 1 5 10 <210> 6 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP peptide <400> 6 Asp Pro Arg Phe Gln Asp Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser 1 5 10 15 Leu Pro Ser Pro Ser Arg Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu 20 25 30 <210> 7 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CTP peptide <400> 7 Ser Ser Ser Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser Leu Pro Ser Pro Ser Arg 1 5 10 15 Leu Pro Gly Pro Ser Asp Thr Pro Ile Leu Pro Gln 20 25 <210> 8 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PAS peptide <400> 8 Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Pro 1 5 10 15 Ser Ala Pro Ala 20 <210> 9 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PAS peptide <400> 9 Ala Ala Pro Ala Ser Pro Ala Pro Ala Ala Pro Ser Ala Pro Ala Pro 1 5 10 15 Ala Ala Pro Ser 20 <210> 10 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PAS peptide <400> 10 Ala Pro Ser Ser Pro Ser Pro Ser Ala Pro Ser Ser Pro Ser Pro Ala 1 5 10 15 Ser Pro Ser Ser 20 <210> 11 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PAS peptide <400> 11 Ala Pro Ser Ser Pro Ser Pro Ser Ala Pro Ser Ser Pro Ser Pro Ala 1 5 10 15 Ser Pro Ser <210> 12 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PAS peptide <400> 12 Ser Ser Pro Ser Ala Pro Ser Pro Ser Ser Pro Ala Ser Pro Ser Pro 1 5 10 15 Ser Ser Pro Ala 20 <210> 13 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PAS peptide <400> 13 Ala Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ser Ala Pro Pro Ala Ala Ala Ser Pro 1 5 10 15 Ala Ala Pro Ser Ala Pro Pro Ala 20 <210> 14 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PAS peptide <400> 14 Ala Ser Ala Ala Ala Pro Ala Ala Ala Ser Ala Ala Ala Ser Ala Pro 1 5 10 15 Ser Ala Ala Ala 20

Claims

사전-동결건조 제형으로서,
(a) IX 인자(Factor IX: FIX) 응고 활성을 갖는 FIX 폴리펩타이드;
(b) 완충제;
(c) 안정제;
(d) 증량제; 및
(e) 계면활성제를 포함하되,
상기 제형은 충전 용적이 약 5㎖ 미만, 약 4㎖ 미만, 또는 약 3㎖ 미만이며, 각각의 (a) 내지 (e)는, 기준 사전-동결건조 제형에 비해,
(1) 동결건조될 때 상기 FIX 폴리펩타이드의 안정성을 개선시키거나;
(2) 동결건조될 때 재구성 시간을 감소시키거나;
(3) 상기 제형을 포함하는 스토퍼 상에서 스플래싱(splashing)을 감소시키거나;
(4) 동결건조 순환 시간을 감소시키거나;
(5) 실온에서 상기 사전-동결건조 제형으로부터 제조된 동결건조물의 보관수명을 증가시키거나; 또는
(6) 이들의 임의의 조합
을 허용하는데 충분한 바이알 당 양(㎎/바이알)이며,
상기 기준 제형은 사전-동결건조 제형과 동일하지만, 충전 용적이 5㎖인 바이알 당 양으로 (a) 내지 (e)를 포함하는, 사전-동결건조 제형.
제1항에 있어서, 상기 충전 용적은 약 4㎖, 약 3.5㎖, 약 3.0㎖, 약 2.9㎖, 약 2.8㎖, 약 2.7㎖, 약 2.65㎖, 약 2.6mL, 약 2.5㎖, 약 2.4㎖, 약 2.3㎖, 약 2.2㎖, 약 2.1㎖ 또는 약 2.0㎖인, 사전-동결건조 제형.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 충전 용적은 약 2.65㎖인, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 감소된 재구성 시간은 1.5분 미만, 1분 미만, 50초 미만, 40초 미만, 30초 미만, 20초 미만 또는 10초 미만인, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 감소된 재구성 시간은 30초 미만인, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 감소된 동결건조 순환 시간은 약 4일 이하, 약 3일 이하, 약 2일 이하, 또는 약 1일 이하인, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충제는 L-히스티딘인, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정제는 수크로스인, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 증량제는 만니톨인, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 계면활성제는 폴리솔베이트 20인, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형은 상기 FIX 폴리펩타이드의 적어도 100IU/바이알을 포함하는, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형은 상기 FIX 폴리펩타이드의 약 200IU/바이알 내지 약 10,000IU/바이알을 포함하는, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 FIX 폴리펩타이드는 약 220IU/바이알, 약 250IU/바이알, 약 300IU/바이알, 약 400IU/바이알, 약 500IU/바이알, 약 600IU/바이알, 약 700IU/바이알, 약 800IU/바이알, 약 900IU/바이알, 약 1,000IU/바이알, 약 1,100IU/바이알, 약 1,200IU/바이알, 약 1,300IU/바이알, 약 1,400IU/바이알, 약 1,500IU/바이알, 약 2,000IU/바이알, 약 2,500IU/바이알, 약 3,000IU/바이알, 약 4,000IU/바이알, 약 5,000IU/바이알, 약 5,500IU/바이알, 약 6,000IU/바이알, 약 6,500IU/바이알, 약 7,000IU/바이알, 약 7,500IU/바이알, 약 8,000IU/바이알, 약 8,500IU/바이알, 약 9,000IU/바이알, 약 9,500IU/바이알 또는 약 10,000IU/바이알을 포함하는, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충제는 약 3㎎/㎖ 내지 약 15㎎/㎖의 농도(㎎/㎖)인, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충제는 약 3.88㎎/㎖ 내지 약 9.7㎎/㎖의 농도(㎎/㎖)인, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충제는 약 7.76㎎/㎖의 농도(㎎/㎖)인, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정제는 약 10㎎/㎖ 내지 약 50㎎/㎖의 농도(㎎/㎖)인, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정제는 약 17.85㎎/㎖ 내지 약 29.95㎎/㎖의 농도(㎎/㎖)인, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정제는 약 23.8㎎/㎖의 농도(㎎/㎖)인, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 증량제는 약 20㎎/㎖ 내지 약 100㎎/㎖의 농도(㎎/㎖)인, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 증량제는 약 35.7㎎/㎖ 내지 약 59.5㎎/㎖의 농도(㎎/㎖)인, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 증량제는 약 47.6㎎/㎖의 농도(㎎/㎖)인, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 계면활성제는 약 0.01㎎/㎖ 내지 약 5㎎/㎖의 농도(㎎/㎖)인, 사전-동결건조 제형.
제23항에 있어서, 상기 계면활성제는 0.2㎎/㎖의 농도(㎎/㎖)인, 사전-동결건조 제형.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 FIX 폴리펩타이드는 약 80IU/㎖ 내지 약 2,750IU/㎖의 농도(IU/㎖)를 갖는, 사전-동결건조 제형.
사전-동결건조 제형으로서,
(a) 약 80 내지 약 2,750IU/㎖의 rFIXFc;
(b) 약 7.76㎎/㎖의 L-히스티딘;
(c) 약 47.6㎎/㎖의 만니톨;
(d) 약 23.8㎎/㎖의 수크로스; 및
(e) 약 0.2㎎/㎖의 폴리솔베이트-20을 포함하는, 사전-동결건조 제형.
제26항에 있어서, 상기 제형은 바이알 당 충전 용적이 약 3㎖, 약 2.9㎖, 약 2.8㎖, 약 2.7㎖, 약 2.65㎖, 약 2.6㎖, 약 2.5㎖, 약 2.4㎖, 약 2.3㎖, 약 2.2㎖, 약 2.1㎖, 또는 약 2.0㎖인, 사전-동결건조 제형.
제27항에 있어서, 상기 제형은 바이알 당 충전 용적이 약 2.65㎖인, 사전-동결건조제형.
제1항 내지 제28항 중 어느 한의 사전-동결건조 제형으로부터 동결건조된, 동결건조 분말.
제29항에 있어서, 잔여 수분 수준이 1% 미만인, 동결건조 분말.
제29항 또는 제30항에 있어서, 완충제, 안정제, 증량제, 계면활성제, 또는 이들의 임의의 조합물을 포함하는, 동결건조 분말.
제31항에 있어서, 상기 완충제는 L-히스티딘인, 동결건조 분말.
제31항에 있어서, 상기 안정제는 수크로스인, 동결건조 분말.
제31항에 있어서, 상기 계면활성제는 폴리솔베이트 20인, 동결건조 분말.
제31항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충제는 바이알 당 약 8㎎ 내지 약 39㎎의 농도인, 동결건조 분말.
제35항에 있어서, 상기 완충제는 바이알 당 약 20.6㎎의 농도인, 동결건조 분말.
제31항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정제는 바이알 당 약 27㎎ 내지 약 132㎎의 농도인, 동결건조 분말.
제37항에 있어서, 상기 안정제는 바이알 당 약 63.1㎎의 농도인, 동결건조 분말.
제31항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 증량제는 바이알 당 약 53㎎ 내지 바이알 당 약 265㎎의 농도인, 동결건조 분말.
제39항에 있어서, 상기 증량제는 바이알 당 약 126.1㎎의 농도인, 동결건조 분말.
제31항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 계면활성제는 바이알 당 약 0.03㎎ 내지 약 13㎎의 농도인, 동결건조 분말.
제41항에 있어서, 상기 계면활성제는 바이알 당 약 0.53㎎의 농도인, 동결건조 분말.
동결건조 분말로서,
(a) 바이알 당 약 2㎎ 내지 바이알 당 약 150㎎의 양으로 FIX 폴리펩타이드;
(b) 바이알 당 약 10㎎ 내지 바이알 당 약 30㎎의 양으로 완충제;
(c) 바이알 당 약 70㎎ 내지 바이알 당 약 200㎎의 양으로 증량제;
(d) 바이알 당 약 30㎎ 내지 바이알 당 약 100㎎의 양으로 안정제; 및
(e) 바이알 당 약 0.05㎎ 내지 바이알 당 약 5㎎의 양으로 계면활성제를 포함하는, 동결건조 분말.
제43항에 있어서,
(a) 바이알 당 약 2.2㎎ 내지 바이알 당 약 125㎎의 양으로 상기 동결건조된 FIX 폴리펩타이드;
(b) 바이알 당 약 12.5㎎ 내지 바이알 당 약 25㎎의 양으로 완충제;
(c) 바이알 당 약 32.5㎎ 내지 바이알 당 약 80㎎의 양으로 안정제;
(d) 바이알 당 약 75㎎ 내지 바이알 당 약 150㎎의 양으로 증량제; 및
(e) 바이알 당 약 0.1㎎ 내지 바이알 당 약 2㎎의 양으로 계면활성제를 포함하는 동결건조 분말.
제44항에 있어서,
(a) 약 2.2 내지 약 125㎎/바이알의 FIX 폴리펩타이드;
(b) 약 20.6㎎/바이알의 L-히스티딘;
(c) 약 126.1㎎/바이알의 만니톨;
(d) 약 63.1㎎/바이알의 수크로스; 및
(e) 약 0.53㎎/바이알의 폴리솔베이트 20을 포함하는 동결건조 분말.
재구성 완충제에 의해 재구성된 제29항 내지 제45항 중 어느 한 항의 동결건조 분말을 포함하는 재구성된 제형.
제46항에 있어서, B형 혈우병을 치료하기 위해 사용되는, 재구성된 제형.
제46항 또는 제47항에 있어서, 비경구 투여에 적합한, 재구성된 제형.
제48항에 있어서, 상기 비경구 투여는 정맥내 또는 피하 투여인, 재구성된 제형.
제47항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 약 0.9㎎/㎖ 내지 약 50㎎/㎖의 농도로 FIX 폴리펩타이드;
(b) 1.5㎎/㎖ 내지 약 7.5㎎/㎖의 농도로 완충제;
(c) 10㎎/㎖ 내지 약 50㎎/㎖의 농도로 증량제;
(d) 바이알 당 5㎎/㎖ 내지 25㎎/㎖의 농도로 안정제; 및
(e) 0.005㎎/㎖ 내지 약 2.5㎎/㎖의 농도로 계면활성제를 포함하는, 재구성된 제형.
제50항에 있어서,
(a) 약 0.9㎎/㎖ 내지 약 50㎎/㎖의 농도로 FIX 폴리펩타이드;
(b) 약 3.88㎎/㎖의 농도로 완충제;
(c) 약 23.8㎎/㎖의 농도로 증량제;
(d) 약 11.9㎎/㎖의 농도로 안정제;
(e) 약 0.1㎎/㎖의 농도로 계면활성제; 및
(f) 재구성 완충제를 포함하는, 재구성된 제형.
제49항에 있어서,
(a) 약 80IU/㎖ 내지 약 2,750IU/㎖의 농도로 FIX 폴리펩타이드;
(b) 약 25 mM의 농도로 완충제;
(c) 약 131㎎/㎖의 농도로 증량제;
(d) 약 35㎎/㎖의 농도로 안정제;
(e) 약 0.01%(w/v)의 농도로 계면활성제; 및
(f) 재구성 완충제를 포함하는, 재구성된 제형.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 사전-동결건조 제형, 제29항 내지 제45항 중 어느 한 항의 동결건조 분말 또는 제46항 내지 제52항 중 어느 한 항의 재구성된 제형을 포함하는 바이알.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 사전-동결건조 제형, 제29항 내지 제45항 중 어느 항의 동결건조 분말, 제46항 내지 제52항의 재구성된 제형 또는 제53항의 바이알로서, 상기 FIX 폴리펩타이드가 야생형 FIX를 포함하는, 사전-동결건조 제형, 동결건조 분말, 재구성된 제형 또는 바이알.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 사전-동결건조 제형, 제29항 내지 제45항 중 어느 항의 동결건조 분말, 제46항 내지 제52항의 재구성된 제형 또는 제53항의 바이알로서, 상기 FIX 폴리펩타이드가 야생형 FIX에 융합된 이종성 모이어티를 더 포함하는, 사전-동결건조 제형, 동결건조 분말, 재구성된 제형 또는 바이알.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 사전-동결건조 제형, 제29항 내지 제45항 중 어느 항의 동결건조 분말, 제46항 내지 제52항의 재구성된 제형 또는 제53항의 바이알로서, 상기 이종성 모이어티는 FIX의 반감기를 연장시키는 모이어티인, 사전-동결건조 제형, 동결건조 분말, 재구성된 제형 또는 바이알.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 사전-동결건조 제형, 제29항 내지 제45항 중 어느 항의 동결건조 분말, 제46항 내지 제52항의 재구성된 제형 또는 제53항의 바이알로서, 상기 이종성 모이어티는 폴리펩타이드 또는 비폴리펩타이드 모이어티인, 사전-동결건조 제형, 동결건조 분말, 재구성된 제형 또는 바이알.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 사전-동결건조 제형, 제29항 내지 제45항 중 어느 항의 동결건조 분말, 제46항 내지 제52항의 재구성된 제형 또는 제53항의 바이알로서, 상기 FIX의 반감기를 연장시키는 모이어티는 FcRn 결합 상대 또는 Fc 영역을 포함하는, 사전-동결건조 제형, 동결건조 분말, 재구성된 제형 또는 바이알.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 사전-동결건조 제형, 제29항 내지 제45항 중 어느 항의 동결건조 분말, 제46항 내지 제52항의 재구성된 제형 또는 제53항의 바이알로서, 상기 FIX 폴리펩타이드는 서열번호 2에 대해 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 100%를 포함하는, 사전-동결건조 제형, 동결건조 분말, 재구성된 제형 또는 바이알.
제29항 내지 제45항 중 어느 한 항의 동결건조 분말을 포함하는 제1 용기 및 제1 용기의 동결건조 제형과 조합될 때 생성하기에 충분한 용적으로 재구성 완충제를 포함하는 제2 용기를 포함하는 키트.
제60항에 있어서, B형 혈우병을 치료하기 위해 사용되는, 키트.
제60항 또는 제61항에 있어서, 상기 재구성 완충제는 NaCl을 포함하는, 키트.
투여가 필요한 B형 혈우병 환자에게 FIX 폴리펩타이드를 투여하는 방법으로서, 상기 환자에게 제46항 내지 제52항 중 어느 한 항의 재구성된 제형을 투여하는 단계를 포함하되, 상기 투여는 상기 환자에서 출혈 에피소드의 빈도 또는 중증도를 예방 또는 감소시키는, B형 혈우병 환자에게 FIX 폴리펩타이드를 포함하는 방법.
제46항 내지 제52항 중 어느 한 항의 재구성된 제형을 투여함으로써 예방, 치료, 개선 또는 관리가 필요한 환자에서 B형 혈우병을 예방, 치료, 개선 또는 관리하는 방법.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 사전-동결건조 제형을 동결건조시키는 단계를 포함하는 FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말의 생성 방법.
FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법으로서,
(a) 상기 FIX 폴리펩타이드 및 수성 용매를 포함하는 사전 동결건조 제형을 냉동시키는 것을 포함하는 "냉동 단계";
(b) 상기 냉동된 사전-동결건조 제형으로부터 수성 용매를 제거하는데 효과적인 양에 의해 상기 냉동된 사전-동결건조 제형의 압력을 감소시키는 것을 포함하는 "진공 단계"; 및
(c) 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도를 붕괴 온도 초과로 증가시키는 것을 포함하는 단일 "건조 단계"를 포함함으로써,
동결건조 분말을 생성하는, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제66항에 있어서, 상기 붕괴 온도는 약 -1.5℃인, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제66항 또는 제67항에 있어서, 상기 사전-동결건조 제형은 상기 냉동 단계 동안 약 -65 내지 약 -40℃의 냉동 온도로 냉동된, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제66항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사전-동결건조 제형은 상기 냉동 단계 동안 약 -55℃의 냉동 온도로 냉동된, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제66항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 냉동 온도는 냉동 단계 동안 약 5℃로부터 약 -55℃로 하강되는, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제66항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 냉동 온도는 상기 냉동 단계 동안 약 30분 내지 약 5시간에 유지되는, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제66항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 냉동 온도는 상기 냉동 단계 동안 약 2시간 동안 유지되는, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제66항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (a)의 냉동된 사전-동결건조 제형은 "진공 단계" (b) 전에 "어닐링 단계" (a')가 더 실시되는, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제73항에 있어서, 단계 (a)의 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도는 어닐링 단계 동안 약 -15℃ 내지 약 -2℃의 어닐링 온도까지 상승되는, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제74항에 있어서, 단계 (a)의 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도는 어닐링 단계 동안 약 -6℃의 어닐링 온도까지 상승되는, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제73항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 어닐링 온도는 상기 어닐링 단계 동안 약 30분 내지 약 5시간 동안 유지되는, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제76항에 있어서, 상기 어닐링 온도는 상기 어닐링 단계 동안 약 3시간 동안 유지되는, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제73항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도는 어닐링 단계 동안 어닐링 온도로부터 약 -65℃ 내지 약 -40℃의 온도로 하강되는, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제78항에 있어서, 상기 냉동된 사전-동결건조 제형의 상기 온도는 상기 어닐링 단계 동안 상기 어닐링 온도로부터 -55℃의 온도로 하강되는, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제66항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 “진공 단계"는 상기 냉동된 사전-동결건조 제형에 약 0.05 내지 약 1mbar의 진공을 실시하는 단계를 포함하는, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제80항에 있어서, 상기 "진공 단계"에서 상기 진공은 약 0.33mbar인, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제66항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 진공은 약 2시간 동안 "진공 단계"에서 유지되는, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제66항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, "건조 단계"는 약 -55℃에서부터 약 40℃의 건조 온도로 상기 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도를 상승시키는 것을 포함하는, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제66항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 건조 단계는 약 10시간 내지 약 40시간 동안 상기 건조 단계를 유지하는 것을 더 포함하는, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제84항에 있어서, 상기 건조 단계는 약 25시간 동안 유지되는, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제66항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 건조 단계는 약 0.05mbar 내지 약 1mbar의 압력에서 수행되는, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
제86항에 있어서, 상기 압력은 상기 건조 단계 동안 약 0.33mbar에서 유지되는, FIX 폴리펩타이드를 동결건조시키는 방법.
FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말의 생성방법으로서,
(a) 약 2시간 동안 온도를 약 -55℃의 냉동 온도로 하강시킴으로써, 그리고 상기 냉동 온도를 약 2시간 동안 유지함으로써 FIX 폴리펩타이드를 포함하는 사전-동결건조 제형을 냉동시키는 것을 포함하는 "냉동 단계";
(a') 단계 (a)의 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도를 약 -6℃의 어닐링 온도로 약 1.5시간 동안 상승시키고, 약 3시간 동안 어닐링 온도를 유지하고 나서, 약 1.5시간 동안 온도를 약 -55℃로 하강시키는 것을 포함하는 "어닐링 단계";
(b) 대기압에서 2시간 동안 약 -55℃에서 단계 (a')의 냉동된 사전-동결건조 제형을 유지하고, 약 2시간 동안 압력을 약 0.33mbar로 하강시키는 것을 포함하는 "진공 단계"; 및
(c) 단계 (b)의 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도를 약 40℃로 3시간 동안까지 상승시키는 한편, 약 0.33mbar의 압력을 유지하고, 또는 약 25시간 동안 약 40℃에서 냉동된 사전-동결건조 제형의 온도를 유지하는 한편, 약 0.33mbar의 압력을 유지하는 것을 포함하는 단일 "건조 단계"를 포함함으로써,
동결건조 분말을 생성하는, FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말의 생성방법.
제66항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사전-동결건조 제형은 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 제형인, 방법.
제65항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 동결건조 분말은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 특징을 갖는, 방법:
(1) 동결건조될 때 상기 FIX 폴리펩타이드의 개선된 안정성;
(2) 동결건조될 때 감소된 재구성 시간;
(3) 상기 제형을 포함하는 스토퍼 상에서의 감소된 스플래싱;
(4) 감소된 동결건조 순환 시간;
(5) 실온에서 사전-동결건조 제형으로부터 제조된 동결건조물의 증가된 보관수명; 또는
(6) 이들의 임의의 조합.
제65항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사전-동결건조 제형은 충전 용적이 5㎖ 미만인, 방법.
제91항에 있어서, 상기 사전-동결건조 제형의 상기 충전 용적은 약 4㎖, 약 3.5㎖, 약 3.0㎖, 약 2.9㎖, 약 2.8㎖, 약 2.7㎖, 약 2.65㎖, 약 2.6㎖, 약 2.5㎖, 약 2.4㎖, 약 2.3㎖, 약 2.2㎖, 약 2.1㎖ 또는 약 2.0㎖인, 방법.
제91항 또는 제92항에 있어서, 상기 사전-동결건조 제형의 상기 충전 용적은 약 2.65㎖인, 방법.
제90항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 감소된 재구성 시간은 1.5분 미만, 1분 미만, 50초 미만, 40초 미만, 30초 미만, 20초 미만 또는 10초 미만인, 방법.
제90항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 감소된 재구성 시간은 30초 미만인, 방법.
제90항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 감소된 동결건조 순환 시간은 약 4일 이하, 약 3일 이하, 약 2일 이하 또는 약 1일 이하인, 방법.
제66항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사전-동결건조 제형은 멸균 여과되고, 단계 (a) 전에 바이알 내로 멸균 충전되는, 방법.
제65항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 동결건조 분말은 약 45시간 이하에 상기 사전-동결건조 제형으로부터 생성되는, 방법.
제65항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 동결건조 분말 중의 상기 잔여 수분은 0.7% 미만인, 방법.
제65항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 동결건조 분말 중의 상기 잔여 수분은 약 0.5%인, 방법.
FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말을 안정화시키는 방법으로서, 제65항 내지 제100항 중 어느 한 항의 방법에 따라 사전-동결건조 제형을 동결건조시키는 단계를 포함하되, 상기 동결건조 분말은 1회 이상의 건조 단계를 포함하는 동결건조 방법을 이용함으로써 제조된 동결건조 분말에 비해 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 측정하여 안정화된, 동결건조 분말을 안정화시키는 방법.
FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말의 보관수명을 증가시키는 방법으로서, 제65항 내지 제100항 중 어느 한 항의 방법에 따라 사전-동결건조 제형을 동결건조시키는 단계를 포함하되, 상기 동결건조 분말의 상기 보관수명은 1회 이상의 건조 단계를 포함하는 동결건조 방법을 이용함으로써 제조된 동결건조 분말의 보관 수명에 비해 SEC 및/또는 FIX 응고 활성 분석에 의해 측정되는 바와 같이 증가되는, 동결건조 분말의 보관수명을 증가시키는 방법.
FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말의 재구성 시간을 감소시키는 방법으로서, 제65항 내지 제100항 중 어느 한 항의 방법에 따라 사전-동결건조 제형을 동결건조시키는 단계를 포함하되, 상기 동결건조 분말의 상기 재구성 시간은 1회 이상의 건조 단계를 포함하는 동결건조 방법을 이용함으로써 제조된 동결건조 분말의 재구성 시간에 비해 감소되는, 동결건조 분말의 재구성 시간을 감소시키는 방법.
FIX 폴리펩타이드를 포함하는 동결건조 분말을 생성하는 동결건조 처리 시간을 감소시키는 방법으로서, 제65항 내지 제100항 중 어느 한 항에 따른 사전-동결건조 제형을 동결건조시키는 단계를 포함하되, 사전-동결건조 제형의 상기 동결건조 과정은 1회 이상의 건조 단계를 포함하는 동결건조 방법을 이용하여 동결건조 분말을 생성하는 것의 동결건조 과정 시간에 비해 감소되는, 동결건조 처리 시간을 감소시키는 방법.