KR20160023013A

KR20160023013A - 장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 억제 또는 상처 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20160023013A
Application number: KR1020140108479A
Authority: KR
Inventors: 유학선; 박미경; 강신애; 박상균; 조민경; 장세복
Original assignee: 부산대학교 산학협력단
Priority date: 2014-08-20
Filing date: 2014-08-20
Publication date: 2016-03-03
Also published as: KR101617770B1

Abstract

본 발명은 장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 억제, 주름 개선 또는 상처 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 T.s 15-1 단백질을 피부에 처리 시, 피부에서 타입 I 콜라겐의 발현이 효과적으로 증가하는 우수한 효과를 가지고 있으며, 피부의 노화를 예방하고, 주름 생성이 개선될 뿐만 아니라, 피부 상처 치료에 그 효과가 뛰어나므로, 의약분야 및 화장품 분야에서 유용하게 사용될 수 있다.

Description

장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 억제 또는 상처 치료용 조성물{Composition comprising T.s 15-1 protein from Intestinal Parasitic Nematode for anti-aging of skin or wound healing}

본 발명은 장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 억제, 주름 개선; 또는 상처 치료용 조성물에 관한 것이다.

피부는 신체 외부를 덮고 있는 하나의 막으로, 여러 가지 환경요소로부터 신체를 보호하는 동시에 외적으로 비추어지는 미적 기능을 담당한다. 이러한 피부는 노화가 진행됨에 따라 피부면역기능이 저하될 뿐만 아니라 피부탄력 감소, 피부색 변화 및 피부주름 형성 등의 외형적인 변형 또한 함께 수반된다. 이러한 피부 노화 과정은 내인성 노화와 외인성 노화로 분류될 수 있다. 내인성 노화는 나이가 들어감에 따라 자연적으로 일어나는 자연 노화로, 주로 유전적 요인에 의해 영향을 받기 때문에 인위적인 조절이 어려운 반면, 외인성 노화의 경우 자외선과 같은 환경적 요인에 의해 영향을 받으므로 인위적인 조절을 통한 예방이 가능하다. 따라서 외인성 노화를 중심으로 피부노화 예방 및 치료를 위한 기능성 소재 발굴 연구가 활발히 이루어지고 있다.

피부의 노화 혹은 상처를 예방하고 치유 하는 데에 있어서, 콜라겐의 구성 정도가 중요하다. 피부와 뼈를 구성하는 주요 기질 단백질로서 세포 외 간질에 존재하고, 생체 단백질 총 중량의 30%를 차지하며 견고한 3중 나선 구조를 가지고 있고, 그 종류로는 총 28종이 알려져 있다. 주로 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력과 조직의 결합력, 세포접착의 지탱 및 세포분할과 분화를 유도하는 것으로 알려져 있다. 피부의 경우, 특히 타입 I 콜라겐이 80% 및 타입 II 콜라겐이 15% 정도 차지하고 있으며, 노화가 진행되면서 타입 I 콜라겐의 비율이 상대적으로 낮아진다고 보고되어 있다(Brain Behav Immun. 2009 Nov;23(8):1089-95). 피부의 노화에 따라 타입 I 콜라겐이 줄어들어 상대적으로 다른 타입의 콜라겐들이 증가하게 되는데 그 결과 피부조직이 두꺼워지고 탄력을 잃게 된다. 또한 스트레스 및 흡연 등에 의해서도 피부의 타입 I 콜라겐의 양이 줄어든다고 알려져 있다. 그러므로 피부의 노화 속도를 늦추기 위해서는 선택적으로 타입 I 콜라겐의 합성을 유도하거나 보존할 수 있는 기술개발이 필요하다. 상처 치유 과정에서도 피부 내 콜라겐의 합성 촉진에 의해 콜라겐 대사가 활발해지면 진피 매트릭스 성분이 증가 되므로, 빠른 치유와 관련하여 콜라겐은 매우 중요한 역할을 한다. 또한, Smad 2 및 TGF-β와 같은 양한 관련 유전자의 발현도 콜라겐 합성에 관여하는 것으로 알려져 있다(Arch Dermatol Res. 2008 Apr; 300 Suppl 1:S57-64). 이들 유전자의 발현을 상승시킬 수 있다면 조직 내 콜라겐의 합성이 빨라 질 수 있다.

이에 본 발명자는 효과적으로 타입 I 콜라겐의 발현을 증가시키기 위해 연구를 지속한 결과, 장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질은 타입 I 콜라겐의 발현을 유의적으로 증가시킴으로써 피부 노화 억제, 주름 개선; 또는 상처의 치료에 효과적임을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 억제용 조성물을 제공하는 것이다.

또한 본 발명의 목적은, 장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 주름의 예방 또는 개선용 조성물을 제공하는 것이다.

또한 본 발명의 목적은, 장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 상처 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

상기와 같은 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 장 내 기생 선충에서 유래한 T.s15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 노화의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 노화의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 주름의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 주름의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 상처 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 상처 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 T.s 15-1 단백질을 피부에 처리 시, 피부에서 타입 I 콜라겐의 발현이 효과적으로 증가하는 우수한 효과를 가지고 있으며, 피부의 노화를 예방하고, 주름 생성이 개선될 뿐만 아니라, 피부 상처 치료에 그 효과가 뛰어나므로, 의약분야 및 화장품 분야에서 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 T.s 15 유전자의 도메인을 나타낸 도이다.
도 2는 T.s 15-1 단백질 구조를 3D 모델로 나타낸 도이다.
도 3은 14주령 마우스 귀 조직에 T.s 15-1 단백질을 14일간 처리한 후, 떼어낸 과정을 나타낸 도이다.
도 4는 14주령 마우스 귀 조직에 T.s 15-1 단백질을 14일간 처리한 후, 상기 귀 조직을 콜라겐 스테인법을 이용하여 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 5는 14주령 마우스 귀 조직에 T.s 15-1 단백질을 14일간 처리한 후, 타입 I 콜라겐 유전자의 발현 및 이와 관련된 유전자인 TGF-β의 발현을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 14주령 마우스 귀 조직에 T.s 15-1 단백질을 14일간 처리한 후, Smad2 및 3의 유전자 발현을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 7은 14주령 마우스 귀 조직에 T.s 15-1 단백질을 14일간 처리한 후, 타입 I 콜라겐 단백질, TGF-β 단백질, Smad2 및 3의 단백질 발현을 웨스턴 블랏으로 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 8은 장 내 기생 선충의 분비배설항원(ES-P) 처리군; T.s 15-1 단백질의 단독 처리군; 및 T.s 15-1 단백질 및 LPS 길항제 폴리믹신B(polymyxin B)의 혼합 처리군을 배아 섬유아세포에 처리 시, 타입 I 콜라겐 유전자의 발현 및 이와 관련된 유전자인 TGF-β의 발현을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 9는 장 내 기생 선충의 분비배설항원(ES-P) 처리군; T.s 15-1 단백질의 단독 처리군; 및 T.s 15-1 단백질 및 LPS 길항제 폴리믹신B(polymyxin B)의 혼합 처리군을 배아 섬유아세포에 처리 시, Smad2 및 3의 유전자 발현을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 10은 장 내 기생 선충의 분비배설항원(ES-P) 처리군; T.s 15-1의 단독 처리군; 및 T.s15-1 및 LPS 길항제 폴리믹신B(polymyxin B)의 혼합 처리군을 배아 섬유아세포에 처리 시, 타입 I 콜라겐 단백질, TGF-β 단백질, Smad2 및 3의 단백질 발현을 웨스턴 블랏으로 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 11은 UV를 조사한 마우스의 왼쪽 귀에 T.s 15-1 단백질을 처리하고; 오른쪽 귀에 장 내 기생 선충의 분비배설단백질을 처리하면서 시기별로 상처치유 정도를 시각적으로 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 12는 UV를 조사한 마우스의 귀 조직에 T.s 15-1 단백질 및 장 내 기생 선충의 분비배설단백질을 처리한 후, 타입 I 콜라겐 유전자의 발현 및 이와 관련된 유전자인 TGF-β의 발현을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 13은 UV를 조사한 마우스의 귀 조직에 T.s 15-1 단백질 및 장 내 기생 선충의 분비배설단백질을 처리한 후, Smad2 및 3의 유전자 발현을 확인한 결과를 나타낸 도이다.

본 발명은 장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 노화의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은, 장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 노화의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

상기 T.s 15-1 단백질은 N-terminal 및 C-terminal을 포함하는, 서열번호 1로 나타내는 T.s 15 유전자에 포함된 것으로, T.s 15-1 단백질은 C-terminal을 나타내는 서열번호 2로 표시되는 염기서열로 이루어진 T.s 15-1 유전자에 의하여 코딩되는 단백질이며, 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어져 있다.

또한, 상기 T.s 15 유전자는 putative serine protease에 포함되어 있는 2개의 트립신 유사(trypsin-like) 도메인 중 하나이다. 상기 putative serine protease가 단백분해 효소능력을 가지고 있기 때문에 E.coli 시스템에서 단백질 발현을 할 때, 스스로 단백질을 분해하므로, 상기 2개의 트립신-유사 도메인 유전자에 의해 코딩되는 단백질을 획득하는 것은 용이하지 않다. 또한, 상기 putative serine protease는 피부에 직접적으로 처리 시, 효과적으로 흡수 될 수 없는 단백질 크기이므로, C-terminal을 나타내는 T.s 15-1 유전자를 선택하였고, 이를 통상적인 클로닝 방법에 의하여 얻어진 T.s 15-1 단백질을 이용하여, 피부 노화, 주름 개선 및 상처 치료에 효과적임을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명에 있어서, 상기 서열번호 2로 표시되는 염기서열로 이루어진 T.s 15-1 유전자는 당해 유전자의 염기 서열을 참조하여 핵산 합성기 등을 이용하여 인공적으로 합성하거나, T.s 15 전체 서열을 주형으로 사용하여 목적한 T.s 15-1 유전자의 양 말단에 상보적인 서열을 가지는 올리고 뉴클레오타이드를 프라이머로 이용하여 PCR을 실시함으로써 제조할 수 있다. 한편, 코돈의 축퇴성으로 인하여 본 발명의 T.s 15-1 유전자는 다양한 염기 서열로 존재할 수 있으며, 이들은 모두 본 발명의 범주에 포함된다. 또한, 상기 서열번호 2로 표시되는 염기서열의 변이체가 본 발명의 범주에 포함된다. 구체적으로, 상기 T.s 15-1 유전자는 서열번호 2의 염기서열과 각각 70% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 보다 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 염기서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드에 대한 "서열 상동성의 %"는 두 개의 최적으로 배열된 서열과 비교 영역을 비교함으로써 확인되며, 비교 영역에서의 폴리뉴클레오티드 서열의 일부는 두 서열의 최적 배열에 대한 참고 서열(추가 또는 삭제를 포함하지 않음)에 비해 추가 또는 삭제(즉, 갭)를 포함할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 T.s 15-1 단백질에는 이의 천연형 아미노산 서열을 갖는 단백질뿐만 아니라 이의 아미노산 서열 변이체가 또한 본 발명의 범위에 포함된다. T.s 15-1 단백질의 변이체란 T.s 15-1 천연 아미노산 서열과 하나 이상의 아미노산 잔기가 결실, 삽입, 비보전적 또는 보전적 치환 또는 이들의 조합에 의하여 상이한 서열을 가지는 단백질을 의미한다. 분자의 활성을 전체적으로 변경시키지 않는 단백질 및 펩티드에서의 아미노산 교환은 당해 분야에 공지되어 있다. 상기 T.s 15-1 단백질 또는 이의 변이체는 천연에서 추출하거나 합성 (Merrifleld, J. Amer. chem. Soc. 85:2149-2156, 1963) 또는 DNA 서열을 기본으로 하는 유전자 재조합 방법에 의해 제조될 수 있다 (Sambrook et al, Molecular Cloning, Cold Spring Harbour Laboratory Press, New York, USA, 2판, 1989).

상기 T.s 15-1 단백질은 타입 I 콜라겐의 발현 증가능을 갖는다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 T.s 15-1 단백질을 노화가 진행된 14주령의 마우스에 처리 시, 타입 I 콜라겐과 그 관련 유전자인 Smad2, 3 및 TGF-β의 발현이 유의하게 증가함을 확인하여, 피부 노화 예방에 효과적임을 확인하였다. 또한, 상기 T.s 15-1 단백질을 마우스 배아 섬유아세포에 처리 시, 타입 I 콜라겐의 발현을 증가시켜, 주름 개선에도 효과가 있음을 확인하였다. 또한, 상기 T.s 15-1 단백질을 상처를 입은 마우스 귀 조직에 처리 시, 장 내 기생 선충의 분비배설 단백질을 처리한 것 보다 상처 치유가 더 빠름을 확인하였으며, 타입 I 콜라겐과 그 관련 유전자인 Smad2, 3 및 TGF-β의 발현이 유의하게 증가함을 확인하여, 상처 치료에 효과적임을 확인하였다.

본 발명의 화장료 조성물은 상기 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 향료 등과 같은 통상적인 보조제 및 담체가 더 포함될 수 있다. 예를 들어, 상기 화장료 조성물에는 글리세린, 부틸렌 글라이콜, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 토코페릴 아세테이트, 시트릭산, 판테놀, 스쿠알란, 소듐 시트레이트, 알란토인 등의 보조성분이 추가로 더 포함될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 기본적으로 피부에 도포되는 것이므로, 당업계의 화장료 조성물을 참조하여 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 마스크팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 등이 포함될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트, 폴리아미드 파우더 등이 포함될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄, 디메틸 에테르 등의 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로 용매, 용해화제, 유탁화제 등이 포함될 수 있고, 구체적으로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 포함될 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로 물, 에탄올, 프로필렌글리콜 등의 액상 희석제; 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 등의 현탁제; 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가, 트라칸트 등이 포함될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린유도체, 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 포함될 수 있다.

본 발명의 T.s 15-1 단백질이 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 T.s 15-1 단백질을 그대로 첨가하거나, 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 혼합하여 사용되는 등 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 본 발명의 T.s 15-1 단백질을첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료, 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 식품 조성물이 음료로 제조될 경우 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등의 추가 성분을 포함할 수 있다. 상기 천연 탄수화물로는 포도당, 과당 등의 모노사카라이드; 말토오스, 수크로오스 등의 디사카라이드; 덱스트린, 사이클로덱스트린 등의 천연 감미제나 사카린, 아스파르탐 등의 합성 감미제 등이 사용될 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 본 발명의 식품 조성물 총 중량에 대하여 0.01~10중량%, 바람직하게는 0.01~0.1중량%로 포함되는 것이다.

상기 외에 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 뿐만 아니라, 본 발명의 조성물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 상기의 첨가제 비율은 크게 제한되지는 않으나, 본 발명의 식품 조성물 총 중량에 대하여 0.01~0.1중량% 범위내로 포함되는 것이 좋다.

본 발명의 T.s 15-1 단백질을 약학적 조성물로 사용할 경우, 상기 약학적 조성물은 T.s 15-1 단백질을 단독으로 포함하거나, 상기 피부 노화, 주름 개선 및 상처 치료에 효과가 있는 물질을 유효성분으로 더 포함할 수 있고, 상기 유효성분 외에도 제형, 사용방법 및 사용목적에 따라 추가성분, 즉, 약제학적으로 허용되거나 영양학적으로 허용되는 담체, 부형제, 희석제 또는 부성분을 추가로 포함할 수 있다.

보다 상세하게는 상기 약학적 조성물은 상기 유효성분 외에 추가로 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 중진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 추가로 함유할 수 있다.

상기 담체, 부형제 및 희석제로는 통상의 것을 모두 사용 가능하고, 일 예로 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 칼슘카보네이트, 덱스트린, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀 및 생리식염수로 이루어진 군에서 선택된 1 이상 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 성분들은 유효성분 즉, T.s 15-1 단백질에 독립적으로 또는 조합하여 추가될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체로는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당 분야의 적정한 방법으로 또는 Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하다. 본 발명의 T.s 15-1 단백질의 일일 투여량은 0.01 내지 10000 ㎎/㎏이며, 바람직하게는 0.1 내지 15㎎/㎏이고, 더욱 바람직하게는 1 내지 10㎎/㎏을 하루 1회 내지 3회에 나눠 투여하는 것이 바람직하다.

상기 피부 노화 관련 질환은 광선 각화증, 지루각화증, 일광 흑색점, 점 (Nevus), 주근깨 (Freckle), 기미, 후천성 양측성 오타양모반, 피부주름살 (Wrinkle) 및 다크서클 (Infraorbital Dark circle)군으로부터 선택된 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 화장료 조성물 또는 식품 조성물은 상술한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 화장료 제제 또는 식품 제제를 포함하기 때문에, 상술한 본 발명의 조성물과 중복된 내용은 중복된 내용의 기재에 의한 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.

본 발명의 약학적 조성물 또는 화장료 조성물은 상술한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 약학적 제제 또는 화장료 제제를 포함하기 때문에, 상술한 본 발명의 조성물과 중복된 내용은 중복된 내용의 기재에 의한 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.

이하, 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1. 장 내 기생 선충의 분비물에서 유효 단백질의 선발 및 상기 단백질의 정제

실시예 1-1. 장 내 기생 선충의 분비물에서 유효 단백질의 선발

장 내 기생 선충의 분비물에서 유효 단백질을 선발하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.

장 내 기생 선충의 근육유충이 분비하는 물질들을 CM-Sepharose column을 이용하여 분자량에 따라 분획(fraction)하여 총 3가지(F1, F2, F3)의 단백질을 획득하였다. 상기 1 ㎍의 3가지 단백질(F1, F2, F3) 각각을 마우스의 배아섬유아세포에 처리하여 타입 I 콜라겐 및 콜라겐 관련 유전자들(TGF-β, Smad2 및 3)의 발현 정도를 확인하여 F3을 후보물질로 선별하였다. 타입 I 콜라겐의 발현에 효과적인 F3 단백질 분획을 완전 및 불환전 어쥬번트(complete, incomplete adjuvant)를 이용하여 1주마다 총 4회 8주령 ICR 마우스의 피하 내에 접종한 후 5주째에 마우스를 희생시켰다. 그 후, 전혈을 심장에서 분리하여 혈청을 분리하고 다중클론 항체(polyclonal antibody)를 합성하였다. 장 내 기생 선충의 근육유충의 cDNA library를 F3에 대한 다중클론 항체를 이용하여 면역 스크리닝을 시행한 결과, 10개의 클론을 확인하였고, N-terminal 및 C-terminal을 포함하는 T.s 15 유전자를 확인하여 서열번호 1로 나타내고, 그 중에서도 C-terminal을 나타내는 T.s 15-1 유전자를 확인하여 서열번호 2로 나타내었다. 또한, 상기 T.s 15 유전자의 도메인 구조 및 T.s 15-1 유전자의 도메인 구조를 도 1에 나타내었다

실시예 1-2. T.s 15-1 유전자의 클로닝 및 상기 유전자가 코딩하는 단백질의 정제

상기 실시예 1-1에서 선발한 T.s 15-1 유전자를 클로닝하고, 상기 유전자가 코딩하는 단백질을 정제하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.

보다 구체적으로, 상기 실시예1-1에서 선발한 T.s 15-1 유전자 부위를 면역 스크리닝에서 특정 단백질로 명명되었던 전체 서열을 바탕으로 프라이머를 디자인한 후, 일반적인 PCR 방법을 이용하여 증폭하였다. 이 과정에서 사용된 주형가닥으로는 상기 실시예 1-1에서 사용한 면역 스크리닝에서 사용하였던 T.s 15-1 클론을 사용하였고, 센스 프라이머(sense primer)로서 5'-CCG GAA TTC GGG ACA TTT TGG ATA TTA-3'(서열번호 4), 안티센스 프라이머(antisense primer)로서 5'-CCG CTC GAG AGT TTC TTT CAA CCA ATC-3'(서열번호 5)를 이용하였고, 어닐링(anealing) 온도는 65℃로 지정하였다. T.s 15-1 유전자가 증폭이 잘 되었는지 확인하기 위해, 증폭된 유전자를 상용화된 pGEM T-easy에 삽입하여 서열을 확인한 후, 발현 벡터인 pET 28a에 다시 삽입하여 단백질을 발현 및 정제하였다. 단백질 발현은 E. coli BL21 내에서 이루어졌으며 IPTG를 최종 농도가 0.5mM이 되도록 처리한 후 25℃에서 12시간 이상 배양하는 과정으로 이루어졌다. 배양 후 박테리아를 원심분리기를 이용하여 다운시키고, PBS로 다시 풀어 분쇄기를 이용하여 박테리아를 적절히 깬 후 T.s 15-1 단백질을 정제하였다. 상기 T.s 15-1의 단백질 구조를 도 2에 나타내었으며, 이의 아미노산 서열을 서열번호 3으로 나타내었다.

실시예 2. T.s 15-1 단백질 처리에 따른 노화 예방 효과 확인

상기 실시예 1-2에서 수득한 T.s 15-1 단백질의 노화 예방 효과를 확인하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.

보다 구체적으로, 대조군으로서 상기 T.s 15-1 단백질을 처리하지 않은 6주령(노화하지 않음) 및 14주령(노화가 진행됨) 마우스의 귀 조직을 이용하였고, 실험군은 C57BL6 14주령 마우스의 귀에 14일간 T.s 15-1 단백질을 10 ㎍/ml 도포하였다. 상기 T.s 15-1 단백질을 14일간 도포한 후, 대조군 및 실험군의 각 마우스 귀 조직을 떼어내었으며, 그 과정을 도 3에 나타내었다. 상기 떼어낸 귀 조직을 파라핀 블록으로 고정한 뒤, 이를 슬라이드 상에서 콜라겐 스테인법(Sirius red collagen stein, sigma)을 수행하여 각 귀 조직의 콜라겐 양을 눈으로 확인하였다(도 4). 대조군 및 실험군의 각 마우스 조직 중 일부는 퀴아졸(Qiazol, Qiagen science)을 이용하여 RNA를 정제한 후, 합성한 cDNA를 사용하여 타입 I 콜라겐 유전자와 이와 관련된 유전자인 Smad2, 3 및 TGF-β 유전자의 발현 양상(도 5 및 도 6); 및 타입 Ⅱ 콜라겐 유전자와 이와 관련된 유전자인 TGF-β 유전자의 발현 양상을 확인하였다(도 8). 또한, 다른 귀 조직의 일부는 PRO-PREP 시약(Intron)을 이용하여 단백질을 획득한 후, 웨스턴 블랏(western blot)법을 시행하여 타입 I 콜라겐 단백질과 이와 관련된 단백질인 Smad2, 3 및 TGF-β의 발현양을 비교하였다(도 7). 그 결과를 도 4 내지 도 8에 나타내었다.

도 4에 나타낸 바와 같이, 14주차인 대조군 마우스 귀 조직에서보다 T.s 15-1 단백질을 처리한 14주차 실험군 마우스 귀 조직에서 전제적인 콜라겐의 발현 정도가 더 높음을 확인하였다

또한, 도 5 및 도 6에 나타낸 바와 같이, 특이적으로 타입 I 콜라겐 유전자와 이와 관련된 유전자인 Smad2, 3 및 TGF-β 유전자의 발현 양상을 확인한 결과, T.s 15-1 물질을 14일 동안 도포한 14주령 마우스의 귀 조직에서는, 아무것도 처리하지 않은 대조군의 14주령 마우스 귀 조직에 비해 타입 I 콜라겐과 그 관련 유전자인 Smad2, 3 및 TGF-β의 발현이 증가함을 확인하였다.

또한, 도 7에 나타낸 바와 같이, 타입 I 콜라겐 단백질과 이와 관련된 단백질인 Smad2, 3 및 TGF-β 단백질의 발현량을 확인한 결과, T.s 15-1 물질을 14일 동안 도포한 14주령 마우스의 귀 조직은, 아무것도 처리하지 않은 14주령 마우스 귀 조직에 비해 I 콜라겐과 이와 관련된 단백질인 Smad2, 3 및 TGF-β의 발현이 증가함을 확인하였다.

실시예 3. T.s 15-1 단백질 처리에 따른 배아 섬유아세포에서의 타입 I 콜라겐 발현 증가 정도 확인

상기 실시예 1-2에서 수득한 T.s 15-1 단백질이 배아 섬유아세포에서 타입 I 콜라겐 발현 증가에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.

보다 구체적으로, 장 내 기생 선충의 분비배설항원(ES-P) 처리군; 상기 실시예 1-2에서 수득한 T.s 15-1 단백질의 단독 처리군; 및 T.s 15-1 단백질 및 LPS 길항제 폴리믹신B(polymyxin B)의 혼합 처리군으로 나누어 마우스 배아(10일째)에서 얻은 배아 섬유아세포에 각 1 ㎍/ml 처리하였다. 그 후, 각 처리된 배아 섬유아세포를 RNA 분리 과정을 거쳐 토탈(total) RNA를 정제한 후, 합성한 cDNA를 사용하여 타입 I 콜라겐과 이와 관련된 유전자인 Smad2, 3 및 TGF-β 유전자의 발현 양상 정도를 미처리군과 비교하였다(도 8 및 도 9). 또한, 각 처리된 배아 섬유아세포의 일부에 PRO-PREP 시약을 이용하여 단백질을 획득한 후, 웨스턴 블랏을 수행하여 타입 I 콜라겐 단백질과 이와 관련된 단백질인 TGF-β의 발현양을 비교하였다(도 10). 그 결과를 도 8 내지 도 9에 나타내었다.

도 8 및 도 9에 나타낸 바와 같이, T.s 15-1 단백질 및 LPS 길항제 폴리믹신 B의 혼합 처리군; 및 T.s 15-1 단백질의 단독 처리군이 분비배설항원(ES-P) 처리군 보다 타입 I 콜라겐의 발현이 증가함을 확인하였다.

또한, 도 10에 나타낸 바와 같이, 타입 I 콜라겐 단백질 발현은 분비배설항원(ES-P) 처리군 보다 T.s15-1 단백질 및 LPS 길항제 폴리믹신 B의 혼합 처리군; 및 T.s 15-1 단백질의 단독 처리군에서 증가함을 확인하였다.

따라서, 상기 결과는 LPS 길항제인 폴리믹신 B을 처리하였을 때에도 T.s 15-1 단백질의 단독 처리군과 유사한 타입 I 콜라겐의 발현이 보임에 따라, T.s 15-1 단백질은 타입 I 콜라겐의 발현을 증가시킴을 확인하였다.

실시예 4. T.s 15-1 단백질 처리에 따른 상처 치유능 확인

상기 실시예 1-2에서 수득한 T.s 15-1 단백질의 상처 치유능을 확인하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.

보다 구체적으로, C57BL6 14주령 마우스의 귀에 7일간 매일 15분씩 UV를 조사하여 인위적으로 상처를 만들었다. 그 후, T.s 15-1 단백질은 왼쪽 귀에 10 ㎍/ml 처리하고, 장 내 기생 선충의 분비배설단백질을 마우스의 오른쪽 귀에 처리하였다. 각 단백질을 1, 6 및 11일 간격으로 처리하는 동안 주기적으로 상처 치유 정도를 눈으로 관찰하였다(도 11). 또한, 그 후, 각 처리된 마우스의 귀 조직의 RNA 분리 과정을 거쳐 토탈(total) RNA를 정제한 후, 합성한 cDNA를 사용하여 타입 I 콜라겐과 이와 관련된 유전자인 Smad2, 3 및 TGF-β 유전자의 발현 양상 정도를 UV 처리군(상처 처리); UV + 분비배설항원(ES-P)처리군; 및 UV + T.s 15-1 단백질 처리군과 비교하였다(도 12 및 도 13). 그 결과를 도 11 및 도 13에 나타내었다.

도 11에 나타낸 바와 같이, T.s 15-1 단백질을 처리한 마우스 왼쪽 귀는 시간이 지남에 따라 상처가 장 내 기생 선충의 분비배설 단백질을 처리한 오른쪽 귀보다 상처 치유가 더 빠름을 확인하였다.

또한, 도 12 및 도 13에 나타낸 바와 같이, T.s 15-1 단백질을 처리한 마우스의 귀 조직에서는, UV를 처리하여 상과 분비배설항원(ES-P) 처리군보다 특이적으로 타입 I 콜라겐 유전자와 이와 관련된 유전자인 Smad2, 3 및 TGF-β 유전자의 발현이 증가함을 확인하였다.

이하 본 발명의 약학적 조성물, 화장료 조성물 및 식품 조성물의 제제예를 설명하나, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 약학적 조성물의 제조

1-1. 산제의 제조

T.s 15-1 단백질 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

1-2. 정제의 제조

T.s 15-1 단백질 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

1-3. 캡슐제의 제조

T.s 15-1 단백질 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

1-4. 주사제의 제조

T.s 15-1 단백질 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na2HPO42H2O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 ml) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

1-5. 액제의 제조

T.s 15-1 단백질 20 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ml로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 2. 화장료 조성물의 제조

2-1. 유연화장수 제조

T.s 15-1 단백질 0.1중량%, 1,3-부틸렌글리콜 5.2중량%, 올레일알코올 1.5중량%, 에탄올 3.2중량%, 폴리솔베이트 20 3.2중량%, 벤조페논-9 2.0중량%, 카르복실비닐폴리머 1.0중량%, 글리세린 3.5중량%, 미량의 향, 미량의 방부제 및 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 유연화장수를 제조하였다.

2-2. 밀크로션 제조

T.s 15-1 단백질 0.1중량%, 글리세린 5.1중량%, 프로필렌글리콜 4.2중량%, 토코페릴아세테이트 3.0중량%, 유동파라핀 4.6중량%, 트리에탄올아민 1.0중량%, 스쿠알란 3.1중량%, 마카다미아너트오일 2.5중량%, 폴리솔베이트 60 1.6중량%, 솔비탄세스퀴롤레이트 1.6중량%, 프로필파라벤 0.6중량%, 카르복실비닐폴리머 1.5중량%, 미량의 향, 미량의 방부제, 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 밀크로션을 제조하였다.

2-3. 영양크림 제조

T.s 15-1 단백질 0.5중량%, 글리세린 4.0중량%, 바셀린 3.5중량%, 트리에탄올아민 2.1중량%, 유동파라핀 5.3중량%, 스쿠알란 3.0중량%, 밀납 2.6중량%, 토코페릴아세테이트 5.4중량%, 폴리솔베이트 60 3.2중량%, 카르복실비닐폴리머 1.0중량%, 솔비탄세스퀴올레이트 3.1중량%, 미량의 향, 미량의 방부제 및 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 영양크림을 제조하였다.

2-4. 마사지크림 제조

T.s 15-1 단백질 0.5중량%, 글리세린 4.0중량%, 바셀린 3.5중량%, 트리에탄올아민 0.5중량%, 유동파라핀 24.0중량%, 스쿠알란 3.0중량%, 밀납 2.1중량%, 토코페릴아세테이트 0.1중량%, 폴리솔베이트 60 2.4중량%, 카르복실비닐폴리머 1.0중량%, 솔비탄세스퀴올레이트 2.3중량%, 미량의 향, 미량의 방부제 및 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 마사지크림을 제조하였다.

2-5. 세정용 바디클렌저 제조

T.s 15-1 단백질 1g, 음이온계면활성제 18g, 비이온계면활성제 5g, 글리세린 7g, 소듐클로라이드 3g, 천연올리브액상비누 1.5g, 향료 1g 및 물 100g을 혼합하여 통상의 방법으로 세정용 바디클렌저를 제조하였다.

제제예 3. 식품 조성물의 제조

3-1. 건강 식품 제조

T.s 15-1 단백질 100㎎, 비타민 혼합물 적량, 비타민 A 아세테이트 70g, 비타민 E 1.0㎎, 비타민 B1 0.13㎎, 비타민 B2 0.15㎎, 비타민 B6 0.5㎎, 비타민 B12 0.2g, 비타민 C 10㎎, 비오틴 10g, 니코틴산아미드 1.7㎎, 엽산 50g, 판토텐산 칼슘 0.5㎎, 무기질 혼합물 적량, 황산제1철 1.75㎎, 산화아연 0.82㎎, 탄산마그네슘 25.3㎎, 제1인산칼륨 15㎎, 제2인산칼슘 55㎎, 구연산칼륨 90㎎, 탄산칼슘 100㎎ 및 염화마그네슘 24.8㎎을 혼합한 다음, 과립을 제조하고 통상의 방법에 따라 건강식품을 제조하였다. 이때, 상기 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

3-2. 건강 음료 제조

통상의 건강음료 제조방법에 따라 T.s 15-1 단백질 100㎎, 비타민 C 15g, 비타민 E(분말) 100g, 젖산철 19.75g, 산화아연 3.5g, 니코틴산아미드 3.5g, 비타민 A 0.2g, 비타민 B1 0.25g, 비타민 B2 0.3g 및 정량의 물을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85?에서 교반 가열한 후 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 건강음료를 제조하였다. 이때, 상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

<110> Pusan National University Industry-University Cooperation Foundation <120> Composition comprising T.s 15-1 protein from Intestinal Parasitic Nematode for anti-aging of skin or wound healing <130> 1-189 <160> 5 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 2004 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of T.s 15 gene <400> 1 atgaaaactg taatatgcat tttacttctt ccattaacta tacttgcact accagatgac 60 aaatgtggat taactgcata tccaataaga aaaactgatc catcaggcaa caaaattgca 120 ggtggctggt atgcaacacc gcactctcta ccatatcaag taaagttatt aattgaaaaa 180 agtgggatac atgcttcatg cggtggtgtt ataattcaac tgaagtctgg caacggtaca 240 gacgcagtcc tcacatcagc acgttgcctt tatcaagaat cattaagaaa acctgtgccc 300 gtggataaag ttgatgttat tagtggagct cacgatcttg aaaacaactt tgaagaaagt 360 caaaggaaaa tccccgttaa aaattttgta ctccatccgg agtataaagg aaattcaatt 420 aacgatatag cattgttaaa attgaaggag aaaatactat acacagacaa aactcgacca 480 gcatgtttac ctgacaaaga tgcagagccg agtgcgggcg agctgtgtta tgcatctgga 540 tggggatccc ctttctctgg agccgaggat agcgcagttt tgaaaatggc agcgataccc 600 gttcaaacta aagagaaatg taacttggct ggtggaatag caaccagatt ttgtgctgga 660 ggaagctttg gaggacacgg aatttgtgac ggtgattcag gaggaccatt aacatgcgaa 720 agaaatggaa aattggttgt atttggcata tcaagtggac atacaggcct ctgtggtcaa 780 tatggcaaac caggaatttt tacaaaagta tcatcctttt tggattggat taaaaaaact 840 gatacagaat tagatactgc agtggatatg agcaaaggaa aaaaagcaga aaacattgct 900 cagccacttg attctgatga aactactgat gctaaacagg caggcaaagt taaagaacaa 960 tttccatgcg gcctttcagc atttcctatg aaaaaagagc aatctccatc aaacagagtg 1020 tctggtggat gggaaacaag acccaattca ttgccgtatc aagtgaaatt aataaatcaa 1080 aaacagggaa aagaatttgc gtgtggtgga acattaattc agtttaaacc aggaaatggg 1140 acattttgga tattaacggc agctcactgc atttatgaca acctacggaa aaaaacgttg 1200 gatcctgaga aagtacaggt tttggtaggg gctcataatg tatacaggga tagtgaagaa 1260 aacagaaaac aaatcgctgt tcaaaatgtt ataatgcaac caggctataa tgaccgtaca 1320 attgcaaatg atattgcatt gctgcagctg caagaacctg ttttctacac aacggtcaca 1380 agacctgctt gcttacctaa ccctggagaa aaacccttac caactacttc gtgttgggtg 1440 agcggatggg gagctgaatc atcttatggt gaaccaactg caattttgaa agtggctaag 1500 gtggctattt ggaatgacgc tgattgtaaa gtagatgcaa cttctagcat atgtctcggt 1560 ggtaaagcag atagacgtgg atcatgccaa ggtgattctg gtggaccgct tctttgtgaa 1620 cataataaga ggatggtagt attcggtgta tccagttcag tcgtaggtca ttgtggccaa 1680 ttgaatcagc catctattta tacaagagta acacattatt tggattggtt gaaagaaact 1740 tcagaaaaag ctggtgactt aaaagtcacg gctgcaagtt caactggagg aagttctgca 1800 acttcaaagc caaataaagc gaaagatgac tttacagttc gtccctctag tccagcaaaa 1860 tcagtatcca gcgtcccaag ccaacctgct tttccaggta gcagatttat gactcctctg 1920 cctacgcccg gacgtccagc tgcatccaga ttttacactc ccccatcatc aggtttatcc 1980 cgttcccgtt ttcagacact ttga 2004 <210> 2 <211> 603 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of T.s 15-1 gene <400> 2 gggacatttt ggatattaac ggcagctcac tgcatttatg acaacctacg gaaaaaaacg 60 ttggatcctg agaaagtaca ggttttggta ggggctcata atgtatacag ggatagtgaa 120 gaaaacagaa aacaaatcgc tgttcaaaat gttataatgc aaccaggcta taatgaccgt 180 acaattgcaa atgatattgc attgctgcag ctgcaagaac ctgttttcta cacaacggtc 240 acaagacctg cttgcttacc taaccctgga gaaaaaccct taccaactac ttcgtgttgg 300 gtgagcggat ggggagctga atcatcttat ggtgaaccaa ctgcaatttt gaaagtggct 360 aaggtggcta tttggaatga cgctgattgt aaagtagatg caacttctag catatgtctc 420 ggtggtaaag cagatagacg tggatcatgc caaggtgatt ctggtggacc gcttctttgt 480 gaacataata agaggatggt agtattcggt gtatccagtt cagtcgtagg tcattgtggc 540 caattgaatc agccatctat ttatacaaga gtaacacatt atttggattg gttgaaagaa 600 act 603 <210> 3 <211> 201 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of T.s 15-1 <400> 3 Gly Thr Phe Trp Ile Leu Thr Ala Ala His Cys Ile Tyr Asp Asn Leu 1 5 10 15 Arg Lys Lys Thr Leu Asp Pro Glu Lys Val Gln Val Leu Val Gly Ala 20 25 30 His Asn Val Tyr Arg Asp Ser Glu Glu Asn Arg Lys Gln Ile Ala Val 35 40 45 Gln Asn Val Ile Met Gln Pro Gly Tyr Asn Asp Arg Thr Ile Ala Asn 50 55 60 Asp Ile Ala Leu Leu Gln Leu Gln Glu Pro Val Phe Tyr Thr Thr Val 65 70 75 80 Thr Arg Pro Ala Cys Leu Pro Asn Pro Gly Glu Lys Pro Leu Pro Thr 85 90 95 Thr Ser Cys Trp Val Ser Gly Trp Gly Ala Glu Ser Ser Tyr Gly Glu 100 105 110 Pro Thr Ala Ile Leu Lys Val Ala Lys Val Ala Ile Trp Asn Asp Ala 115 120 125 Asp Cys Lys Val Asp Ala Thr Ser Ser Ile Cys Leu Gly Gly Lys Ala 130 135 140 Asp Arg Arg Gly Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Leu Cys 145 150 155 160 Glu His Asn Lys Arg Met Val Val Phe Gly Val Ser Ser Ser Val Val 165 170 175 Gly His Cys Gly Gln Leu Asn Gln Pro Ser Ile Tyr Thr Arg Val Thr 180 185 190 His Tyr Leu Asp Trp Leu Lys Glu Thr 195 200 <210> 4 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> sense primer of T.s 15-1 <400> 4 ccggaattcg ggacattttg gatatta 27 <210> 5 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense primer of T.s 15-1 <400> 5 ccgctcgaga gtttctttca accaatc 27

Claims

장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 노화의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 T.s 15-1 단백질은 서열번호 2로 표시되는 염기서열에 의하여 코딩되는 단백질인 것을 특징으로 하는, 피부 노화의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 T.s 15-1 단백질은 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 단백질인 것을 특징으로 하는, 피부 노화의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 T.s 15-1 단백질은 타입 I 콜라겐의 발현 증가능을 갖는 것을 특징으로 하는, 피부 노화의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 노화의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제6항에 있어서,
상기 피부 노화 관련 질환은 광선 각화증, 지루각화증, 일광 흑색점, 점(Nevus), 주근깨(Freckle), 기미, 후천성 양측성 오타양모반, 피부주름살(Wrinkle) 및 다크서클(Infraorbital Dark circle)군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 피부 노화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 주름의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 주름의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 상처 치료용 약학적 조성물.
장 내 기생 선충에서 유래한 T.s 15-1 단백질을 유효성분으로 포함하는 피부 상처 개선용 화장료 조성물.