KR20150118293A

KR20150118293A - 천연한방약재 감초, 당귀, 고삼 혼합추출물로 항산화, 항염증억제, 주름억제, 미백 효과를 갖는 다기능 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20150118293A
Application number: KR1020140043924A
Authority: KR
Inventors: 양승인
Original assignee: 양승인
Priority date: 2014-04-14
Filing date: 2014-04-14
Publication date: 2015-10-22

Abstract

본 발명은 항산화, 주름개선, 항염증 및 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다상세하게는 감초,고삼, 당귀 혼합추출물의 피부 노화 방지 및 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 한방약재 추출 물은 DPPH 소거율을 통한 항산화효과, 콜라게네이즈 활성 억제를 통한 항 주름효과, NO생성억제를 통한 항염증 효과, 멜라닌 생합성 과정에 핵심적으로 작용하는 티로시나제 활성 및 그에 따른 세포내 멜라닌색소의 생성을 효과적으로 억제하는 피부 노화방지 및 미백용 천연한방 화장료 조성물이다.

Description

천연한방약재 감초, 당귀, 고삼 혼합추출물로 항산화, 항염증억제, 주름억제, 미백 효과를 갖는 다기능 화장료 조성물{Oriental medicinal herb admixture (Glycyrrhizae Radix, Sopharae Radix, Angelica gigas) by using of multifunctional cosmetic compositions have anti-oxidative, anti-inflammatory, anti-wrinkle and whitening effect}

본 발명은 감초, 당귀, 고삼 혼합추출물을 포함하는 항노화 및 미백 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 항산화효과, 항염증효과, 항주름효과, 미백효과를 갖는 한방 약재 혼합추출물과 그 추출물의 제조방법 및 이를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다상세하게는 산화를 억제하여 피부 세포의 손상 및 노화를 예방하고, 피부 미백기능이 뛰어난 한방 약재 혼합 추출물과 그 추출물의 제조방법 및 이를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로 본 발명의 배경이 되는 기술과 혼합추출물을 구성하는 약재들에 대하여 알아보면 다음과 같다.

모든 생물체는 정상적인 대사과정에서도 지속적으로 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)이 생성되는데 이들로부터 발생되는 hydroxy radical과 singlet oxygen 등의 free radical은 대표적인 피부노화의 원인으로 알려져 있다. 정상적인 대사과정에서는 superoxide dismutase, glutathione peroxidase, catalase와 같은 항산화효소나 α-tocopherol, gluetachione과 같은 저분자 항산화제등이 이러한 활성산소종들을 제거시킨다. 하지만 심한 스트레스가 계속되어 활성산소가 과다하게 생성될 경우 효소의 활성저화, 색소체파괴, 지질 과산화작용을 통한 생체막의 파괴 및 여러 가지 질병과 연관되있다. 따라서 superoxide, DPPH, lipid peroxide와 같은 대표적인 활성산소종에 대한 항산화 활성을 지닌 butylated hydroxytoluene(BHT)등과 같은 황산화력이 뛰어난 합성 항산화제가 개발되어 이용되어 왔다. 하지만 이들은 낮은 열 안정성과 발암의 문제로 천연 항산화제의 개발이 요구되고 있다.

진피를 구성하는 주요 물질중의 하나인 콜라겐과 엘라스틴은 피부에 강도와 장력을 주며 피부 탄력에 영향을 주는 물질이다. 콜라겐은 섬유아세포의 작용에 의해 합성되고 콜라게나아제에 의해 분해되며, 엘라스틴은 엘라스타아제에 의해 분해되는데

나이가 들어감에 따라, 섬유아세포의 세포수 및 작용이 감소함에 따라 콜라겐과 엘라스틴이 줄어들고, 피부세포내의 수분이 손실되며, 콜라게나아제의 작용이 증가하여 콜라겐의 가교된 형태가 증가함으로써 피부노화가 진행됨으로써 피부주름이 형성되어진다. 이러한 피부 주름억제(anti-wrinkle) 방법은 피부내 탄력을 유지시키는 콜라겐 생합성을 촉진시키거나, 각질층 내의 세라마이드 자체를 보충하는 방법, 자외선에 의해 콜라겐을 분해시키는 MMP-1의 기능을 억제시키는 방법, 결합조직의 불용성 탄력섬유인 엘라스틴을 분해하여 기저층 그물망 구조를 끊어 주름을 생성시키는 엘라스타아제 (elastase)의 기능 억제 방법이 있다. 이러한 주름 개선 원료로는 비타민 A 레티놀(retinol), 레티노익산(retinoic acid), 레티날(retinal) 등이 포함된다. 하지만 레티노익산은 피부자극성이 있어 화장품에 사용되지 않으나 그 유도체인 레티놀, 레티놀의 유도체인 팔미틸산 레티놀등의 배합체제가 사용되고 있다. 레티놀은 주름개선 효과가 우수한 성분 중 하나로 콜라겐 합성을 촉진하여 주름을 개선하는 효과가 있다. 반면, 빛과 열,공기에 의해 쉽게 파괴되는 불안정한 성질 때문에 안정화 기술이 필요한 성분이다.

멜라닌은 피부 내 세포손상을 유발하는 활성산소의 생성을 억제하기 위한 방어 작용을 위해 생성되는데 피부에 해가 되는 자외선의 진피 내 흡수를 막기 위하여 대신 흡수함으로써 에너지를 분산시켜 피부에 대한 자극을 감소시키는 중요한 역할을 담당하고 있다. 하지만 이에 반하여 여성들 미용의 주요 고민이 되는 기미, 주근깨 등을 유발하기도 한다. 이를 억제하기 위한 대표적인 방법으로는 멜라닌 형성에서 L-DOPA을 만드는 주효소인 티로시나아제를 억제하는 방법으로 효소가 작용하지못하게 결합하는 방법과 멜라닌 형성과정에서의 L-DOPA의 산화과정을 억제하는 방법이 있다.

또한, 타이로신의 산화반응을 억제함으로써 멜라닌 색소의 합성을 억제하는 것으로 비타민 C 및 그 유도체, 글루타치온(glutachion), 코엔자임 Q10등이 있으며 이중에 가장 많이 이용되고 있는 것은 도파퀴논(dopa quinone)을 도파로 환원시켜 멜라닌 합성을 저해하는 비타민 C (ascorbic acid)가 대표적인 성분이다. 하지만 비타민 C 는 쉽게 산화되는 성질을 가지고 있어 아스코르빈산 인산 마그네슘, 아스코르빈산 팔미테이트(ascorbic acid palmitate), 아스코르빈산 스테아레이트(ascorbic acid sterate), 아스코르빈산 글루코사이드(ascorbic acid glucoside)와 같은 유도체들이 개발되었다.또한 비타민 C는 강력한 항산화 작용에 의한 기미, 주근께의 치료뿐만 아니라 섬유아세포의 증식 및 콜라겐 합성촉진 작용으로 세포의 성장을 촉진하는 기능으로도 사용되고 있다. 이러한 타이로시나제의 활성을 저해하여 멜라닌 생성을 억제하는 것으로 최근에 부작용으로 인하여 사용이 정지된 코직산(kojic acid), 알부틴(albutin), 감초추출물, 닥나무추출물등이 있다. 하지만 최근에 가장 많이 사용되는 알부틴은 하이드로 퀴논에 포도당 한 분자가 결합된 화학구조로, 월귤나무와 서양나무배의 잎에서 추출되는 천연물이나 최근에 대부분 화학적으로 합성된다.

감초(Glycyrrhizae Radix)는 콩과(Leguminosae)에 속하는 다년생 초본인 Glycyrrhiza uratensis, G. inflata, G. glabra의 뿌리와 뿌리줄기를 건조한 것으로 한방에서는 주로 열과 독성물질의 제거, 경련 및 통증의 감소등에 효능이 있는 것으로 알려져 있다.

감초의 주성분은 glycyrrhizin, saponin, flavonoid류, 다당류로서 liqcoumarin, glucose, sucrose, mannitol, asparagine 등이 있으며 기타 약간의 고미질, 수지, 섬유등이 함유되어 있다. 이러한 감초성분 중에서 중요 기능성물질인 glycyrrhizin은 항염작용, 피부병에 대한 치료효과와 약물중독, 음식물중독, 파상풍, 디프테리아균 독소에 대하여 해독 작용이 있다. 항암성, 항균활성(Korean J. Food Sci. Technol.37(3), 456-464, 2005), 항산화성(Korean J. Food Sci. Technol. 38(4), 584-588. 2006),멜라닌 형성 억제( Koeran J. Oriental Physiology & Pathology 16(6), 1230-1235. 2002), Tyrosinase 활성 억제(Korean J. Pharmacogn .34(1), 34-39. 2003) 등 많은 생리 활성이 있으며 계면활성으로 다른 성분들과 쉽게 혼합하는 장점이 있어 약품, 건강식품, 화장품에 사용되고 있다.

고삼(Sopharae Radix)은 콩과(Leguminosae)에 속한 도둑놈의지팡이(Sophora flavescens Ait.)의 근을 건조한 것으로 한국의 중부, 북부, 남부의 전 지역, 일본, 중국에서 두루 자생하고 있으며 한방에서는 해열, 이뇨, 습진, 피부소양, 구충을 목적으로 사용되는 생약이다. 이러한 고삼의 주성분은 alkaloid의 d-matrine, d-oxymatrine,d-sophoranol, l-anagyrine, l-methylcytisine,l-baptifoline,l-sophocarpine,flavonoid류의 xanthohumol, isoxanthohumol, 3,4',5-trihy- droxy-7-methoxy-8-isopentenyl -flavone,8-isopentenyl-kaempferol, saponin 등을 함유하고 있다.

고삼에서 분리한 Sophoraflavanone G 는 항균효과(Kor J. Oriental preventive Medical Society 9(1), 135-141. 2005)등의 항균효과에 대한 연구 논문이 다수를 이르는데 100% 천연 화장품을 만들기 위해서는 합성 방부제를 대체할 천연 방부제를 찾는 것이 시급한 상황인데 고삼의 강력한 항균효과는 천연 방부제로 많이 이용되리라고 본다.

당귀는 산형과(Umbeniferae) Angelica 속의 참당귀(A.gigas), 일당귀(A. acutiloba), 중국당귀(A.sinensis)를 일컷는 이름으로 본연구에서 사용한 참당귀(Angelica gigas)는 우리나라와 중국의 동북부지역에 자생분포하고 강원도, 경상북도, 충북 제천에서 재배 생산되고 있다. 이러한 참당귀의 주요성은 decursin, nodakenin, decursinol, α-pinene, limonene등이며 한방에서는 진정, 진통,정혈, 혈압강화 제로 사용하고 있다.

참당귀의 Decursin은 UV-B에 의해 발현된 NF-kB의 활성을 억제하여 MMP-1. MMP-3의 발현을 억제한다( Int J Mol Med, 31, 477-483, 2013), 항 알러지 효과와 항 염증 효과(Environ Toxi & Pharma, 30(2), 127-133, 2010)에 대한 보고를 참고 해보면 광노화 작용억제 및 피부 알러지나 염증 치료에 효과 및 항산화제인 BHT(butyl hydroxyl toluene)과의 비교시험에서, 우수한 항산화 효과를 나타내었고, 이는 활성산소에 의한 피부의 노화, 주름, 트러블 등을 예방해 줄 것으로 기대되고 있다. 또한, Tyrosinase inhibition assay와 melanogenesis inhibition assay로 참당귀 뿌리 추출물의 미백 효과(Int J Mol Med, 20(5), 763-767, 2007)를 평가한 결과 그 효능이 매우 우수한 것으로 밝혀졌다. 이러한 연구 결과에 근거하여, 참당귀 뿌리 추출물을 피부에 적용하면 항산화 및 미백 효과와 같은 피부개선효과를 보여줄 것으로 기대된다.

천연물의 다양한 활성성분과 안정성은 앞에서 언급한 종래에 사용되었던 원료가 갖는 문제점인 피부자극, 빛, 열,공기등에 안정화지 못한 원료들의 문제점 해결에 적합한 이유로 천연물로부터 유효한 성분을 추출하거나 혼합추출물을 적용하는 연구가 더욱더 활발하게 진행될 것이다.

따라서 피부에 손상을 주는 근본적인 원인인 활성산소를 제거하는 항산화, 항주름, 항염증, 미백효과 및 천연항균효과를 가지는 다기능성 신규 천연원료 및 이를 이용한 제품 개발이 필요한 실정이다.

이에 본 발명자는 항산화효과, 항염증, 주름개선, 피부미백, 항균효과에 효능을 가지는 복합 기능 천연유래물질을 찾고자 다양한 동식물 추출물 및 한방 약재 혼합추출물을 연구한 결과, 감초, 당귀, 고삼 혼합추출물에서 활성산소의 제거 및 세포보호 효과인 항산화효과, 염증억제효과, 주름개선효과, 미백효과를 나타내는 안전한 혼합추출물을 얻어 이를 제형화하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 감초(Glycyrrhizae Radix), 당귀(Angelica gigas Nakai), 고삼(Sopharae Radix) 혼합추출물로 항산화, 항염, 항주름, 미백효과를 갖는 기능성 화장료 조성물을 제공함을 목적으로 한다.

또한 본 발명은 기능성 화장료 조성물을 제조하기 위한 감초, 당귀, 고삼 혼합추출물을 추출하는 방법을 제공함을 목적으로 한다.

본 발명자는 주름개선 및 탄력 증진 등의 항노화 활성과 미백효과 및 천연항균 효과를 갖는 화장료 조성물을 개발하고자 감초, 고삼, 당귀 혼합 추출물이 항산화, NO 합성억제, 콜라겐 생성 촉진,미백 활성 등에 우수한 활성을 나타냄을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 감초, 고삼, 당귀 혼합 추출물을 포함하는 항노화 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 감초, 고삼, 당귀 혼합 추출물은 항산화, 항염증, 콜라게나아제 발현 저해, NO 생성 억제, 미백활성을 통해 주름 개선, 탄력 증진 및 미백작용를 가짐으로써 피부 노화를 방지한다.

본 발명에서 감초, 당귀, 고삼은 경동시장 한약재 약재시장에서 구입하였으며 또한 국내 한약재 시장, 온라인 마켓등으로 부터 구입하여 사용할 수 있다.

본 발명에서 감초, 당귀, 고삼을 정제수로 깨끗이 세척하여 사용하며, 추출 방법에 따라 원물 그대로 사용하거나 파쇄하여 사용하는 것이 바람직하다.

본 발명에서 감초, 당귀, 고삼 혼합추출물은 감초 및 당귀 건조 물질을 먼저 혼합한 후 추출하거나, 감초, 당귀, 고삼을 혼합하여 추출 또는 감초, 당귀 및 고삼을 각각 추출한 후 이를 혼합한 혼합 추출물일 수 있다.

본 발명에서는 감초, 당귀, 고삼 혼합 추출물은 농축된 액상일 수도 있고, 동결 건조된 분말형태일 수도 있다.

본 발명에서 감초, 당귀 및 고삼 혼합 추출물은 통상의 기술자에게 알려진 공지의 추출법에 의해 제조된다. 예를 들어, 감초, 당귀 및 고삼 건조물을 혼합하여 세절하고, 그 건조 중량의 1~50배 부피량의 물, 탄소수 1~4의 알코올 또는 이들의 함수 알코올 중에서 선택된 추출용매를 부가하여 4∼30℃에서 3∼20일간 침적, 초음파추출을 수행 추출용매를 감압농축기로 농축하여 수득될 수 있다.

또한, 본 발명의 감초, 당귀 및 고삼 혼합추출물은 건조물을 분쇄하여 혼합하고, 이들의 혼합 건조 중량의 1~30배 부피량의 증류수, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜 및 이들의 혼합용매(예를 들어, 함수알코올, 함수글리세린, 함수에틸렌글리콜, 함수프로필렌글리콜,함수 부틸렌글리콜) 중에서 선택된 용매로 추출될 수 있으며, 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 4의 무수알코올 또는 함수알코올에서 선택된 용매로 추출할 수 있다. 여기서, 탄소수 1 내지 4의 알코올은 메탄올, 에탄올, n-프로판올, iso-프로판올, n-부탄올, iso-부탄올, tert-부탄올일 수 있으며, 보다바람직하게는 에탄올일 수 있으며, 함수 알코올은 물을 0.3 내지 90(wt/wt)%로 함유할 수 있다. 감초, 당귀 및 고삼 혼합추출물은 30∼100℃에서 1∼48시간 동안 가열 추출하거나 5∼30℃에서 1~5일간 침적시켜 60℃ 온도에서 40kHz로 초음파추출 유효성분을 추출할 수 있으며, 바람직하게 용매가 증발되는 것을 방지하기 위하여 냉각 콘덴서를 구비한 추출기로 추출할 수 있다. 마지막으로 추출 용매를 감압농축기로 농축하여 수득될 수 있다.

또한, 본 발명의 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물은 위의 방법으로 각각 추출한 후, 이를 혼합하여 수득할 수도 있다.

또한, 위에서 열거한 추출용매에 공지된 초음파 추출법 등을 이용하여 제조할 수 있다.

본 발명에서 감초, 당귀 및 고삼 혼합추출물의 혼합 중량비는 다양하게 변할 수 있으나, 건조 중량비로 1:1:1 내지 2:1:1로 혼합된 것이 바람직하며, 감초 추출물, 당귀 추출물, 고삼 추출물의 혼합 건조 중량비는 1:1:1로 혼합한 것이 더욱 바람직하다.

본 발명에서 감초, 당귀 및 고삼 혼합 추출물은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 분말형태 또는 액상 형태로 0.001 내지 10 중량%의 양으로 화장료에 첨가될 수 있으며, 바람직하게는 화장료 조성물 총 중량에 대하여 분말형태 또는 액상형태로 0.001 내지 6 중량%의 양으로 화장료에 첨가될 수 있다.

본 발명에서 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서의 감초, 당귀 및 고삼 혼합추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해제, 비타민, 안료, 색소 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어,용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 맛사지 크림, 에센스, 팩, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 글리세롤, 글리세린, 지방족 에스테르, 페녹시에탄올, 트리에탄올아민, 폴리에틸렌 글리콜, 밀납, 폴리솔베이트 60, 솔비탄세스퀴오레이드, 파라핀, 소르비탄 스테아레이트, 친유형 모노스테아린산 글리세린, 스테아린산, 글리세릴스테아레이트/피이지-400스테아레이트, 카르복시폴리머, 시토스테롤, 폴리글리세릴 2-올레이트, 세라마이드, 콜레스테롤, 스테아레스-4, 디세틸포스페이트, 마카다미아 오일, 카르복시비닐폴리머, 산탄검 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올, 부틸렌글리콜 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 하이드록시에틸셀룰로오즈,소디움히아루로네이트

, 페녹시에탄올, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

상술한 바와 같이, 본 발명의 감초, 고삼, 당귀 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 항산화효과, 주름살개선효과, 항염즘효과, 티로시나제의 활성억제 및 세포 내 멜라닌 생성 저해 효과를 가지는, 피부 노화방지 및 미백용 천연한방 화장료 조성물로써 유용하고 안전화게 이용될 수 있을 것이다.

도1 은 본 발명에 의해 제조된 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물의 농도에 따른 HaCat 세포에서의 세포 생존율을 통한 독성 효과를 나타내는 그래프.
도2 은 본 발명에 의해 제조된 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물의 농도에 따른 NO 생성저해능을 통한 항염증 효과를 나타내는 그래프.
도3 은 본 발명에 의해 제조된 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물의 농도에 따른 DPPH 소거능을 통한 항산화 효과를 나타내는 그래프.
도4 은 본 발명에 의해 제조된 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물의 농도에 따른 콜라게네이즈 활성 저해능을 통한 주름개선효과를 나타내는 그래프.
도5 은 본 발명에 의해 제조된 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물의 농도에 따른 티로시나제 활성억제를 통한 미백효과를 나타내는 그래프.
도6 은 본 발명에 의해 제조된 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물의 농도에 따른 세포내 멜라닌 합성 저해능을 통한 미백효과를 나타내는 그래프.

이하, 하기 실시예 및 실험예에 의해 본 발명을 보다상세하게 설명한다. 그러나, 하기 실시예는 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니며, 이는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것으로 해석되어야 할 것이다.

실시예 1 : 식물 추출물의 제조 방법

1-1. 에탄올 가용 추출물의 제조

완전 건조시킨, 감초(20g), 고삼(20g), 당귀(20g) 또는 이들 혼합시료(30g)을 2-3분 믹서로 갈아 분쇄를 한 후 에탄올 300ml에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 15 내지 37℃에서 3일간 추출하였다. 그 추출물을 400 메쉬 여과포로 여과하고, 에탄올 300ml을 60℃ 온도에서 40kHz로 60분간 초음파추출하여 2차 추출한 후, 여과하여 다시 한번 에탄올 300ml을 60℃에서 40kHz로 60분간 초음파 추출하여 3차 추출을 한 후 와트만 2번 여과지로 여과하였다. 이들 식물 추출물을 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 감압 농축하여 각각 3.04g(수율15.2%), 3.66g(수율18.3%), 5.4g(수율27%)건조중량을 얻었다. 혼합추출물은 각각의 추출물 동량(1:1:1)을 섞어 Dimethylsulfoxide(DMSO)에 20-100mg/ml로 녹여 실험 시료로 사용하였다.

1-2. 물 가용 추출물의 제조

완전 건조시킨 감초(20g), 고삼(20g), 당귀(20g) 및 이들 혼합시료(30g)을 2-3분 믹서로 갈아 분쇄를 한 후 증류수 300ml에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 15 내지 37℃에서 3일간 추출하였다. 그 추출물을 400 메쉬 여과포로 여과하고, 증류수 300ml을 60℃ 온도에서 40kHz로 60분간 초음파추출하여 2차 추출한 후, 여과하여 다시 한번 증류수 300ml을 60℃ 온도에서 40kHz로 60 분간 초음파 추출하여 3차 추출을 한 후 와트만 2번 여과지로 여과하였다. 이들 식물 추출물을 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 감압 농축하여 각각의 추출물과 혼합추출물을 얻었다.

1-3. 메탄올 가용 추출물의 제조

완전 건조시킨, 감초(20g), 고삼(20g), 및 당귀(20g) 또는 이들 혼합시료(30g)를 2-3분 믹서로 갈아 분쇄를 한 후 메탄올 300ml에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 15 내지 37℃에서 3일간 추출하였다. 그 추출물을 400 메쉬 여과포로 여과하고, 메탄올 300ml을 60℃ 온도에서 40kHz로 60분간 초음파추출하여 2차 추출한 후, 여과하여 다시 한번 메탄올 300ml을 60℃에서 40kHz로 60분간 초음파추출하여 3차 추출을 한 후 와트만 2번 여과지로 여과하였다. 이들 식물 추출물을 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 감압 농축하여 각각 와트만 2번 여과지로 여과하였다. 이들 식물 추출물을 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 감압 농축하여 각각의 추출물과 혼합추출물을 얻었다.

실시예 2 : 혼합추출물의 세포독성 평가

상기 실시예 1에서 얻은 감초, 고삼, 당귀 혼합 추출물의 세포독성 효과를 알아보기위해 인간 각질세포주인 HaCaT 세포주를 이용하여 MTT 실험을 수행하여 세포 생존율을 평가하였다.

세포 생존율 측정은 세포 배양판 (24-well)에 HaCaT 세포주를 1ml씩 분주하여 24시간 이상 배양 후 추출물을 다양한 농도로 처리한 다음, 37℃, 5% CO₂하에서 72시간 배양한 후, MTT용액 (5mg/ml)을 배양액 최종 부피의 1/10되게 첨가하였다. 3시간 후 배양액을 제거하고 형성된 formazan 침전물을 dimethylsulfoxide (DMSO) 1 ml로 녹여서 540 nm에서 흡광도를 측정하였다(n=3).

세포생존율(%) = (시료흡광도/대조군흡광도) X 100으로 산출하였다.

도 1은 본 발명에 의해 제조된 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물의 농도에 따른 세포 생존율 효과를 나타내는 그래프로서, 이를 더욱 상세하게 설명하면, 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물의 농도를 15, 30, 60, 120, 240㎍/ml 처리해서 세포독성을 알아본 결과 혼합 추출물 100ug/ml 농도 이하에서는 세포독성이 나타나지 않았으며 각각의 결과 수치는 [표 1]에 나타내었다.

농도(ug/ml)	대조군	15	30	60	120	240
세포생존율%	100	102.5	102.0	99.4	68.3	29.7
LC₅₀	180ug/ml

실험예 3: 혼합추출물의 질소산화물(NO) 생성 억제 효과 측정

상기 실시 예 1에서 얻은 감초, 고삼, 당귀 혼합 추출물의 농도에 따른 NO 억제에 의한 항 염증 효과를 평가하였다(Anal. Biochem., 126, pp 131-138, 1982).

먼저, 10% 우태아혈청(FBS), 페니실린(100U/mL) 및 스트렙토마이신(100μg/mL)이 첨가된 DMEM(Dulbecco's modifiedEagle medium) 배지용액을 RAW 264.7 세포와 혼합하여 96 웰 플레이트에 웰 당 6×10⁴세포를 넣어 6시간 동안 5% 이산화탄소 및 37℃의 조건에서 배양하였다. 세포가 안정화된 후에 무자극 대조군은 동일 배지로, 자극 대조군은 지질다당류(LPS, 10μg/mL)를 포함한 배지로, 자극 처리군은 지질다당류(LPS,10μg/mL)를 포함하며 상기 실시예 1에서 제조한 감초, 고삼, 당귀 혼합 추출물을 각각 10, 20, 40, 75, 150ug/mL의 농도로 포함한 배지로 바꾸어 준 후 24시간 동안 5% 이산화탄소 및 37℃의 조건에서 배양하였다. 배양 종료 후 50μL의 배양액을 취하여 동일 부피의 그리에스(Griess) 시약과 혼합한 후 550 nm의 흡광도를 측정하였다(n=3). 동일 배지에 녹인 여러 농도의 아질산나트륨(sodium nitrite) 표준 곡선을 이용하여 시료의 아질산염(nitrite) 양을 정량하였다.

NO생성억제율(%)= (대조군 흡광도-시료흡광도/대조군 흡광도) X 100

도 2는 본 발명에 의해 제조된 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물의 NO 생성억제에 의한 항염 효과를 나타내는 그래프로서, 이를 더욱 상세하게 설명하면, 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물 10, 20, 40, 75, 150ug/mL 농도에서 LPS 자극 처리 대조군에 비하여 농도에 비례하게 NO 생성을 억제시키는 결과를 얻었다.

각각의 결과 수치는 [표 2]에 나타냈다.

농도(ug/ml)	-LPS	대조군	10	20	40	75	150
NO함량(%)	56.8	100	96.3	90.3	85.0	66.1	37.3
세포생존율%	107	100	102.5	101.8	101.6	99.2	84.6

실시예 4 :혼합추출물의 DPPH 소거능에 의한 항산화 효과 평가

상기실시예 1에서 얻은 감초, 고삼, 당귀 혼합 추출물의 농도에 따른 DPPH 소거능에 의한 항산화 효과를 평가하였다.

DPPH 소거능 측정은 각 농도의 혼합추출물 100㎕와 0.1mM 농도의 DPPH 100㎕를 혼합 후, 빛을 차단한 상태의 실온에서 30분간 반응시켰다. 반응이 끝난 후, 분광광도계의 515nm에서 흡광도를 측정하였다(n=3).

DPPH 소거능= (대조군흡광도-시료흡광도/대조군흡광도)×100의 식을 사용하여 계산하였다.

도 3은 본 발명에 의해 제조된 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물의 DPPH 소거능에 의한 항산화 효과를 나타내는 그래프로서, 이를 더욱 상세하게 설명하면, 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물의 농도를 각각 15, 30, 60, 120, 240ug/ml에서 테스트하였을 때 농도에 비례하게 DPPH 소거능력이 증가하는 형태의 항산화 효과를 나타내었으며 각각의 결과 수치는 [표 3]에 나타내었다.

농도(ug/ml)	대조군	15	30	60	120	240
DPPH소거(%)	0	12	13.4	28.6	50.5	82.1
SC₅₀	115ug/ml

실험예 5 : 혼합추출물의 콜라게네이즈 활성 저해에 의한 항주름 효과 평가

상기실시예 1에서 얻은 감초, 고삼, 당귀 혼합 추출물의 콜라게네이즈 활성 억제에 의한 피부 주름 개선의 효과를 평가하였다.

반응구로서 0.05M tricine buffer(pH7.5) 0.8㎕에, 0.2mM 농도의 FALGPA을 녹인 기질액 0.05㎕ 및 시료용액을 농도별로 0.05㎕ 첨가하고,여기에 콜라게네이즈 (3mg/ml) 0.05㎖을 첨가하여 20℃ 에서 18시간 방치하였다.그 후, 1N 아세테이트 10㎕를 넣어 반응을 정지시킨 후, 흡광도 324nm에서 저해 활성을 측정하였다(n=3).

콜라게네이즈발현저해율(%)=(대조군흡광도-시료흡광도/대조군흡광도) X 100

도 4는 본 발명에 의해 제조된 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물의 콜라게네이즈 활성 저해능 효과를 나타내는 그래프로서, 이를 더욱 상세하게 설명하면, 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물의 농도를 각각 15, 30, 60ug/ml에서 테스트해 보았을 때 농도에 비례하여 콜라게네이즈 활성 저해능이 나타났으며 각각의 결과 수치는 [표 4]에 나타내었다.

농도 (ug/ml)	대조군	15	30	60
Collagenase 억제%	0	17.5	20.2	52.4

실험예 6 : 혼합추출물의 티로시나제 활성 억제 효과 평가

상기 실시예 1에서 얻은 감초, 고삼, 당귀 혼합 추출물을 사용하여 티로시나제활성 억제효과를 통해 미백효과를 평가하였다(LifeScience, 65, 241-246, 1999).

먼저 0.3mg/㎖ 티로신 용액을 1 씩 시험관에 넣고, 여기에 0.1M 인산칼륨 완충용액(pH 6.8) 1㎖ 및 혼합추출물과 코직산 농도별(0.3, 0.6, 1.2, 3, 6ug/ml) 시료 0.9㎖ 을 넣은 뒤, 25℃ 항온조에서 10분 동안 반응시켰다. 이때 대조군으로 각 시료 대신 용매만을 0.9㎖ 을 넣은 것을 사용하였다. 이 반응액에 2500Unit/의 티로시나제 효소 0.1㎖씩을 넣고 다시 25℃ 항온조에서 10분 동안 반응시켰다. 이 반응액이 든 시험관을 얼음물 속에 넣어 급냉시켜 반응을 중지시키고, 광전 분광분석계로 파장 475nm에서 흡광도를 측정하였다(n=3).

타이로시나아제저해율(%)=(대조군흡광도-시료흡광도/대조군흡광도) X 100

도 5는 본 발명에 의해 제조된 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물의 티로시나제 활성 저해능 효과를 나타내는 그래프로서, 이를 더욱 상세하게 설명하면, 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물의 농도를 각각 0.3, 0.6, 1.2, 3, 6ug/ml에서 테스트해 본 결과 IC₅₀값을 코직산과 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물을 비교한 결과 농도에 비례하여 티로시나아제 억제 효과를 나타냈으며 혼합추출물이 코직산(kojic acid) 보다 2.5배 타이로시나아제 억제 효과를 보였다. 각각의 결과 수치는 [표 5]에 나타내었다.

농도(ug/ml)	대조근	0.3	0.6	1.2	3	6	IC₅₀
Kojic acid	O	5.4	6.2	12.1	30.2	56.8	5.288
혼합추출물	0	6.5	15.6	33.1	69.6	91.6	2.1

실험예 7 : 혼합추출물의 세포내 멜라닌 생성 저해 효과 평가

상기 실시예 1에서 얻은 감초, 고삼, 당귀 혼합 추출물을 사용하여 세포내 멜라닌 생성억제효과를 통한 미백효과를 평가하였다.

C57BL/6 마우스에서 유래된 쥐의 색소세포를, 둘베코 변형-이글스 배지(Dulbeccos modified Eagles media;DMEM)에 10% PBS(fetal bovine serum), 10nM 12-O-테트라데카노일포르볼-1아세테이트(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate), 1nM 콜레라 독소(cholera toxin)를 첨가한 배지에서 37℃, 5% CO₂ 조건으로 배양하였다.

24개 웰 플래이트(well plate)에 1 x 10⁵세포/웰의 농도로 세포를 배양하고 세포의 부착을 확인한 뒤,배양액에 2uM의α-MSH 와 혼합추출물 15, 30, 60, 120ug/ml을 처리하여 3일 동안 배양하였다. 배양액을 제거하고, PBS로 세척한 후 1N NaOH로 세포를 녹여 400㎚에서 흡광도를 측정하였다. 시험물질을 첨가하지 않은 세포를 대조군으로 하여, 대조군에서의 멜라닌 함량과 비교하여 시험물질의 멜라닌 생성 저해 정도를 측정하여 미백효과를 측정하였다. 또한, 비교예로, 상기와 같은 방법으로 추출한 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물 및 알부틴(arbutin)에 대하여 C57BL/6 마우스색소세포를 이용하여 동일한 방법으로 미백효과를 측정하였다(n=3).

멜라닌 생성억제율(%)=(대조군 흡광도-시료흡광도/대조군 흡광도) X 100

도 6은 본 발명에 의해 제조된 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물의 세포내 멜라닌 합성활성 저해능 효과를 나타내는 그래프로서, 이를 더욱 상세하게 설명하면, 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물과 알부틴 농도를 각각 15, 30, 60, 120, 240ug/ml에서 테스트해 보았을때 그 결과 세포내 멜라닌 저해 IC₅₀값을 알부틴과 감초, 고삼, 당귀 혼합추출물을 비교한 결과 농도에 비례하여 멜라닌 생성 저해 효과를 나타냈으며 혼합 추출물이 알부틴보다 1.8배 멜라닌 합성 억제율을 보였다. 각각의 결과 수치는 [표 6]에 나타내었다.

농도(ug/ml)	-ａMSH	대조군	15	30	60	120	240	IC₅₀
Arbutin 멜라닌함량(%)	30.5	100	92.5	79.6	53.5	38.1	28.8	87.5
혼합물 멜라닌함량(%)	30.5	100	83.0	70.7	36.8	17.9	16.1	48

본 발명은 상기에서 언급한 바람직한 실시예와 관련하여 설명됐지만, 본 발명의 범위가 이러한 실시예에 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 범위는 이하의 특허청구범위에 의하여 정하여지는 것으로 본 발명과 균등 범위에 속하는 다양한 수정 및 변형을 포함할 것이다.

제조예

제조예 1 :영양화장수

하기와 같이, 실시예 1에서 수득한 혼합추출물을 함유한 영양화장수(로숀)을 통상의방법 [표 7]에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
혼합추출물	3.0
에탄올	1.0
스테아릴알코올	1.0
소르비탄모노스테아레이트	1.0
글리세린모노스테아레이트	3.0
폴리옥시에틸렌소르비탄 모노올레이트	2.0
유동파라핀	6.0
바세린	2.0
스쿠알렌	5.0
옥틸도데실미리스테이트	5.0
글리세린	5.0
1,3-부틸렌글리콜	5.0
카르복시비닐폴리머	0.3
트리에탄올아민	0.3
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔부

제조예 2 : 유연화장수

하기와 같이, 실시예 1에서 수득한 혼합추출물을 함유한 유연화장수(스킨)을 통상의방법 [표 8]에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
혼합추출물	1.5
에탄올	10.0
부틸렌글리콜	2.0
프로필렌글리콜	3.0
농 글리세린	2.0
카르복시비닐폴리머	0.1
트리에탄올아민	0.1
방부제	미량
색소	미량
향료	미량
정제수	잔부

제조예 3 : 에센스

하기와 같이, 실시예 1에서 습득한 혼합추출물을 함유한 에센스를 통상의 방법 [표 9]에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
혼합추출물	3.0
에탄올	5.0
폴리에틸렌글리콜 1500	5.0
플로필렌글리콜	5.0
히드록시에틸셀룰로오스	0.5
폴리옥시에틸렌노닐페닐에테르	0.7
글리세린	10.0
1,3-부틸렌글리콜	10.0
카르복시비닐폴리머	0.5
트리에탄올아민	0.5
방부제	미량
색소	미량
향료	미량
정제수	전부

제조예 4 : 영양크림

하기와같이, 실시예 1에서 수득한 혼합추출물을 함유한 영양크림을 통상의 방법[표10]에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
혼합추출물	6.0
밀랍	10.0
유동파라핀	6.0
농글리세린	6.0
카프필릭/카프릭트리글리세라이드	5.0
스쿠알렌	4.0
프로필렌글리콜	3.0
부틸렌글리콜	2.0
소르비탄세스퀴올레이트	0.5
폴리솔베이트 60	1.5
트리에탄올아민	0.2
방부제	미량
색소	미량
향료	미량
정제수	잔부

제조예 5: 맛사지크림

하기와같이, 실시예 1에서 수득한 혼합추출물을 함유한 맛사지크림을 통상의 방법 [표 11]에 따라 제조하였다.

성분	함량%
혼합추출물	1.0
유동파라핀	40.0
밀랍	10.0
농 글리세린	6.0
부틸렌글리콜	4.0
스쿠알렌	5.0
플로필렌글리콜	2.0
폴리솔베이트 60	1.5
카프필릭/카프릭트리그리세라이드	4.0
트리에탄올아민	0.2
방부제	미량
색소	미량
향료	미량
정제수	잔부

제조예 6 : 팩

하기와같이, 실시예 1에서 수득한 혼합추출물을 함유한 팩을 통상의 방법 [표 12]에 따라 제조하였다.

성분	함량(중량%)
혼합추출물	1.5
폴리비닐알코올	13.0
에탄올	5.0
노닐페닐에테르	0.3
알란토인	0.2
나트륨카르복시메틸셀룰로오스	0.2
방부제	미량
색소	미량
향료	미량
정제수	잔부

LC₅₀ : Lethal Concentration 50%로 반수치 치사농도
SC₅₀ :Scavenging Concentration 50%로 반수치 라디칼 소거 농도
IC₅₀ : Inhibition Concentration 50% 로 반수치 억제 농도

Claims

감초, 당귀, 고삼 혼합추출물로 이루어진 항산화, 주름억제, 항염 및 미백용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 식물 혼합추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매로 추출된 화장료조성물.
제2항에 있어서, 상기 유기용매는 에탄올, 메탄올, 부탄올, 아세톤, 에틸 아세테이트, 핵산, 프로판올, 부틸렌글리콜 및 프로필렌 글리콜로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 스킨로션, 스킨소프터, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혼합추출물이 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 10중량%로 포함된 화장료 조성물.
제5항에 있어서, 조성물은 스킨로션, 스킨소프터, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누,클렌징폼, 클렌징로션,클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형인 것을
특징으로 하는 화장료조성.