KR20140012127A - 인터류킨-1 수용체의 길항제 - Google Patents

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블라디미르 베레진
엘리자베스 복
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세로두스 에이에스에이
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Abstract

본 발명은 세포 표면 IL-1 수용체 1 (IL1R1)에 결합하고 IL-1의 IL1R1에 결합을 방해할 수 있는, IL-1 수용체 길항 단백질 (IL1RA)로부터 유도된 새로운 펩티드를 개시한다. 따라서 이 결합은, 예를 들어, 대식 세포로부터 TNF-알파 분비를 감소시킴으로써 IL-1의 염증성 효과에 효과적으로 길항작용한다. 이것은 중추 신경계를 포함하는, 사람 신체를 통해 항-염증성 인자로서 잠재적으로 사용된다. 따라서, IL-1이 중요한 역할을 하는 병리학적 질병, 예를 들어, 신체 및 중추 신경계의 염증성 질병의 치료용 항-염증제로서 상기 펩티드의 사용이 본 발명의 양태이다.

Description

인터류킨-1 수용체의 길항제{ANTAGONISTS OF THE INTERLEUKIN-1 RECEPTOR}
본 발명은 세포 표면 IL-1 수용체 1에 결합하여 인간 신체 전체에서 IL-1의 염증성 효과에 길항 작용할 수 있는, IL-1 수용체 길항 단백질 (IL1RA)로부터 유도된 짧은 펩티드를 포함하는 새로운 화합물에 관한 것이다. IL-1이 중요한 역할을 하는, 병리학적 질병, 예를 들어, 신체 및 중추 신경계의 염증성 질병의 치료를 위한 항-염증제로서 상기 펩티드의 사용이 또한 개시된다.
인터류킨 1 (IL-1)은 2개의 별개의 단백질, IL-1알파 및 IL-1베타의 일반명이며, 주요 전염증성 시토킨이다. IL-1은 특이적 막관통 수용체 (IL-1RI)에 결합함으로써 다양한 세포 타입에 대하여 그것의 효과를 발휘한다. IL-1의 효과는 가용성 IL-1 수용체 및 IL-1R 길항 단백질 (IL1RA 또는 IL1Ra)과 같은 천연 억제제에 의해 상쇄된다. IL1RA는 그것의 세포 표면 수용체와 상호작용을 차단함으로써 IL-1의 효과를 억제한다.
항-염증성 목적으로 IL-1을 표적화하기 위한 치료적 접근이 업계에서 다루어졌다. 이것들은 관절염 (arthritis)의 실험 모델에서 재조합 IL-1R 길항 단백질, IL-1 트랩 (trap) 융합 단백질, 항-IL-1항체, 항-IL-1RI 및 가용성 IL-1RI 및 II의 투여를 포함한다 (Gabay C et al. 2010에서 논의됨).
IL-1R 길항제 활성을 갖는 펩티드가, 예를 들어, US20060094663A1에 개시된다. 이들 서열들은 IL-1RAcP (IL-1RI 악세사리 단백질)로부터 유도된다.
항-염증제로서 사용되는 재조합 IL-1R 길항 단백질이 상업화되었다: 상표명 'Kineret' 하에 판매된, Anakinra (US5075222 참조). 그것은 류머티스성 관절염 (rheumatoid arthritis)의 치료에 대하여 입증되었다. Anakinra의 문제점은 (1) 그것은 각각의 투여량 중에 100 mg의 주사 농축물로서 전달된다; (2) 그것은 재조합 DNA 기술을 사용하여 유전적으로 변형된 이. 콜리 (E. coli)로부터 제조된다; 및 (3) 그것은 더 높은 분자량을 갖는다 (전체 길이 IL-1RA)는 것이다.
따라서, IL1RA로부터 유도된 더 짧고 강한 펩티드의 확인은, (1) 더 낮은 농도의 본 펩티드가 사용될 수도 있고, (2) 더 작은 펩티드가 용액에서 안정하고 더 낮은 관련 비용으로 더 쉽게 화학적으로 합성될 수 있고, (3) 더 낮은 분자량의 작은 모방 펩티드 (mimetic peptide)는 그것들이 혈액-뇌 관문 (blood-brain barrier)을 더 쉽게 통과할 수 있도록 한다는 점에서, 이들 불이익을 다룰 수도 있으며, 뇌에서 작용 농도에 도달하기 위해 더 낮은 펩티드 양이 필요하다는 것을 의미한다 - 이것은 그것들을 신경 염증성 질환의 치료에도 특히 유용하게 만든다. 특이적 표적화는 또한 더 적은 부작용 및 개선된 효험의 가능성을 가진다.
WO05086695A2 특허 패밀리는 IL-1R 길항 단백질의 특이적 펩티드 단편을 개시한다. 이들 단편은 염증성 장애에서 조직 파괴를 억제할 수 있고, 만성 염증성 장애 및 류머티스성 관절염을 치료하기 위해 사용될 수도 있다 (US2007027082; 발행된 US7674464의 특허 출원). 퇴행성 신경 장애 (neurodegenerative disorder)에 대한 효과는 다루어지지 않았다.
US2007027082에 따라, 개시된 펩티드 단편은 바람직하게 서열 LVAGY ("SEQ ID NO: 42")를 포함하며; US2007027082의 "SEQ ID NOs: 13, 18, 21, 23, 24 및 43"에 존재한다. IL-1 유발된 효과의 반전을 시험관 내에서 "SEQ ID NO: 13, 15, 23 및 24" (실시예 3), 및 생체 내에서 "SEQ ID NO: 18 및 43" (실시예 10)에 대하여 관찰하였다.
US2007027082의 "SEQ ID NOs: 13, 18 및 19"는 ILR1A의 서열 SGRKSSKMQA (SEQ ID NO: 1에 존재)를 추가로 포함한다. US2007027082에 따르는 효과를 갖는 ILR1A의 서열 SGRKSSKMQA를 포함하는 가장 짧은 펩티드는 35개의 아미노산 길이 ("SEQ ID NO: 13")이며, 핵 국소화 신호가 최적화를 위해 추가될 때 42개의 아미노산 길이이다 ("SEQ ID NO: 18"). 15개의 아미노산만큼 짧게 - LVAGY 서열 ("SEQ ID NO: 19")을 제외하고 - 검사될 때, 시험관 내에서 IL-1에 의해 자극된 콜라게나제 생산의 억제에 대하여 아무 효과도 관찰되지 않는다 (실시예 3). 따라서 US2007027082에서 IL-1베타에 의해 MMP-1 (콜라게나제)를 억제시 활성인 모든 펩티드는 IL1RA의 잔기 LVAGY를 함유하며; IL1RA의 4개의 이소폼 모두에 일반적인 것으로 결론을 내렸다 (US2007027082 [0115]).
본 발명은 IL-1RA의 추가의 펩티드 단편을 개시한다; 한 구체예에서, 10개의 아미노산만큼 짧고 한 구체예에서 SGRKSSKMQA (SEQ ID NO: 1)를 포함하거나 이로 구성된다. 이러한 단편은 여기에서 IL-1RI에 직접적으로 결합하고 IL-1R의 IL-1베타에 결합을 방해하는 것으로 나타나며; 이것은 IL1R1에 결합하지 않는 US2007027082의 35-아미노산 길이 펩티드 단편 ("SEQ ID NO: 13")과 대조적이다.
본 발명에 따르는 짧은 펩티드는 SGRKSSKMQA (SEQ ID NO: 1) 또는 변이체, 단편, 또는 이들의 단편의 변이체를 포함하거나 이로 구성될 수도 있다. 그것들은 그것들이 매우 안정하고, 높은 용해도를 갖고 또한 낮은 합성 비용을 갖는, 전체 길이 IL1RA (anakinra) 및 US2007027082의 35 및 42개의 아미노산 길이 펩티드 둘 다 (둘 다 서열 SGRKSSKMQA를 포함)를 통해 이점을 갖는다. 이들 효과는 IL1R1에 결합하고 IL-1의 효과를 길항 작용하는 펩티드의 잠복 능력과 함께 발생한다.
IL1RA 발명으로부터 유도된 본 발명의 추가의 짧은 펩티드는 RIWDVNQKT (SEQ ID NO: 29), TAMEADQPVS (SEQ ID NO: 35) 또는 GPNAKLEEKA (SEQ ID NO: 36) 또는 변이체, 단편, 또는 이들의 단편의 변이체를 포함하거나 이로 구성되며; 여기에서 SEQ ID NO: 1에 대하여 요약된 바와 같은 장점을 가진다.
게다가, 특정 짧은 길이의 펩티드; 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 10개의 아미노산 펩티드는 중추 신경계 (CNS)의 세포에 대한 효과를 유도하기 위해 혈액-뇌 관문 (BBB)을 통과하는 증가된 능력을 갖고; 따라서 IL-1과 관련된 신경 염증성 장애에서 상기 짧은 펩티드의 사용을 가능하게 한다. IL1RA 또는 이들의 펩티드 단편의 뉴런에 대한 효과는 이전에 업계에서 다루어지지 않았거나, BBB의 통과를 갖지 않는다. 신경 돌기 돌출 및 신경 세포 생존에 대한 긍정적인 효과가 여기에 나타난다.
본 발명은 전체 길이 IL1RA 단백질 및 anakinra에 걸쳐 개선된 성질을 갖는 IL1RA의 절단된 형태와 관련된다.
펩티드는 여기에서 본 발명자에 의해 IL-1RI에 결합되고, IL-1RI의 시토킨 IL-1베타에 결합을 방해하고, 따라서 NF-κB 활성화의 억제 및 감소된 TNF-알파 증가를 포함하는, IL-1다운스트림 신호 전달에 대한 억제 효과를 갖는 것으로 나타난다. 또한, 신경 돌기 돌출 및 세포 생존에 대한 긍정적인 효과가 뉴런에서 관찰되고, 류머티스성 관절염의 징후는 생체 내에서 개선된다.
본 발명의 양태는 IL-1 수용체 길항 단백질 (IL1RA)로부터 유도된 5 내지 20개의 인접한 아미노산 잔기의 펩티드 서열로 구성된 분리된 펩티드를 제공하는 것이고, 상기 펩티드는 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 35 또는 SEQ ID NO: 36 중 어떤 하나의 아미노산 서열로 구성되거나; 단편은 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 35 또는 SEQ ID NO: 36 중 어떤 하나의 5개 이상의 아미노산으로 구성되거나; SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 35 또는 SEQ ID NO: 36 중 어떤 하나의 변이체로서, 상기 변이체는 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 35 또는 SEQ ID NO: 36 중 어떤 하나와 적어도 50% 동일성을 가진 5 내지 20개의 아미노산의 아미노산 서열로 구성되며, 상기 펩티드는 IL-1 수용체 타입 1 (IL1RI)에 결합할 수 있고, IL-1의 IL1RI에 결합을 방해할 수 있다.
본 발명의 양태는 또한 본 발명에 따르는 적어도 하나의 펩티드를 포함하는 화합물을 제공하는 것이다. 상기 화합물은 단일 카피의 펩티드로 구성된 모노머로서 조제될 수도 있거나, 본 발명에 따르는 둘 이상의 펩티드를 포함하는 멀티머 화합물로서 조제될 수도 있다. 상기 둘 이상의 펩티드는 서로 동일할 수도 있고 아닐 수도 있다. 상기 멀티머는 특정 구체예에서 다이머 또는 테트라머 덴드리머일 수도 있다.
본 발명에 따르는 펩티드 또는 화합물을 포함하는 조성물, 예를 들어, 약학적 조성물 또는 제형이 또한 여기에 제공된다.
흥미로운 양태에서, 약제로서 사용되는, 본 발명에 따르는 펩티드, 화합물 및 조성물이 제공된다.
상기 사용은 염증성 장애, 특히 IL-1이 중요한 역할을 하는 것들의 서브세트의 치료를 포함할 수도 있다. 이것들은 류머티스성 관절염, 진성 당뇨병 (diabetes mellitus), 예를 들어, 진성 당뇨병 타입 I, 퇴행성 신경 장애를 포함하며, 상기 퇴행성 신경 장애는 알츠하이머 병 (Alzheimer's disease), 파킨슨 병 (Parkinson's disease), 헌팅턴 병 (Huntington's disease) 및 다발성 경화증 (Multiple Sclerosis)을 포함하는, 신경 염증성 구성 요소를 갖는다.
정의 및 약어
IL1RA 또는 IL1Ra: IL-1 수용체 길항 단백질은 또한 여기에서 IL-1 수용체 길항제를 나타낼 수도 있다.
IL1R1 또는 IL1RI: IL1 수용체 타입 1.
친화도: 수용체 및 그것들의 리간드 사이의 결합의 힘.
일란타핀/일란티드: IL1RA의 단편을 나타내기 위해 여기에서 교체 가능하게 사용됨; 일란타핀-8이 주로 검사되었고 서열 식별자 SEQ ID NO: 1에게 제공되었다. SEQ ID NO: 1은 또한 여기에서 '일란타핀' 또는 '일란티드'로서 간단히 나타낼 수도 있다.
용어 "개체"는 척추동물, 포유동물 종의 특정 멤버, 바람직하게 사람을 포함하는 영장류를 나타낸다. 여기에 사용된 바와 같이, '대상체' 및 '개체'는 교체 가능하게 사용될 수도 있다.
"폴리펩티드" 또는 "단백질"은 바람직하게 펩티드 결합에 의해 독점적으로 결합된 아미노산 잔기의 폴리머이며, 자연적으로 또는 합성에 의해 생산된다. 용어 "폴리펩티드"는 여기에 사용된 바와 같이 단백질, 펩티드 및 폴리펩티드를 커버하며, 상기 단백질, 펩티드 또는 폴리펩티드는 번역 후에 변형될 수도 있거나 아닐 수도 있다. 펩티드는 보통 단백질보다 길이가 더 짧다.
"분리된 폴리펩티드"는 세포 성분, 예를 들어, 탄수화물, 지질, 또는 자연에서 폴리펩티드와 결합된 다른 단백질성 불순물을 오염시키는 것으로부터 본질적으로 자유로운 폴리펩티드이다. 전형적으로, 분리된 폴리펩티드의 조제물은 고도로 순수한 형태, 적어도 약 80% 순수, 적어도 약 90% 순수, 적어도 약 95% 순수, 95% 이상 순수, 또는 99% 이상 순수한 폴리펩티드를 함유한다. 특정 단백질 조제물이 분리된 폴리펩티드를 함유한다는 것을 나타내는 한 방법은 단백질 조제물의 나트륨 도데실 술페이트 (SDS)-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 및 겔의 Coomassie Brilliant Blue 염색 후 단일 밴드의 출현에 의한 것이다. 하지만, 용어 "분리된"은 대안의 물리적 형태, 예를 들어, 다이머 또는 대안으로 글리코실화 또는 유도된 형태의 같은 폴리펩티드의 존재를 제외하지 않는다.
"아미노산 잔기"는 펩티드 결합 또는 펩티드 결합과 다른 결합으로 결합된 천연 또는 비천연 아미노산 잔기일 수 있다. 아미노산 잔기는 D형 또는 L형일 수도 있다. 아미노산 잔기는 탄소 원자, 또는 탄소 원자의 사슬을 포함하는 중심부에 의해 분리된 아미노 말단부 (NH2) 및 카르복시 말단부 (COOH)를 포함하며, 이것들 중 적어도 하나는 적어도 하나의 측쇄 또는 작용기를 포함한다. NH2는 아미노산 또는 펩티드의 아미노 말단 끝에 존재하는 아미노기를 나타내고, COOH는 아미노산 또는 펩티드의 카르복시 말단 끝에 존재하는 카르복시기를 나타낸다.
일반 용어 아미노산은 천연 및 비-천연 아미노산 둘 다를 포함한다. J. Biol. Chem., 243: 3552-59 (1969)에 나열되고 37 C.F.R., 섹션 1.822(b)(2)에 이용된 바와 같은 표준 명칭의 천연 아미노산은 하기 여기에서 표 1에 나열된 아미노산의 기에 속한다. 비-천연 아미노산은 표 1에 나열되지 않은 것들이다. 또한 비-천연 아미노산 잔기는 변형된 아미노산 잔기, L-아미노산 잔기, 및 D-아미노산 잔기의 스테레오이소머를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
표 1: 천연 아미노산 및 그것들의 각각의 코드.
"동등한 아미노산 잔기"는 폴리펩티드의 구조 및/또는 기능성을 실질적으로 변화시키지 않고 폴리펩티드의 또 다른 아미노산 잔기를 대체할 수 있는 아미노산 잔기를 나타낸다. 따라서 동등한 아미노산은 측쇄의 벌키성 (bulkiness), 측쇄 양극성 (극성 또는 비극성), 소수성 (소수성 또는 친수성), pH (산성, 중성 또는 염기성) 및 탄소 분자의 측쇄 조직 (방향족/지방족)와 같은 유사한 성질을 가진다. 이와 같이, "동등한 아미노산 잔기"는 "보존적인 아미노산 치환"으로 생각될 수 있다.
동등한 아미노산의 분류는 한 구체예에서 다음 분류를 나타낸다: 1) HRK, 2) DENQ, 3) C, 4) STPAG, 5) MILV 및 6) FYW
여기에 지원된 바와 같이 용어 "동등한 아미노산 치환"의 의미 내에서, 한 아미노산은, 한 구체예에서, 하기 여기에 지시된 아미노산의 그룹 내의 또 다른 것과 치환될 수도 있다:
i) 극성 측쇄를 가진 아미노산 (Asp, Glu, Lys, Arg, His, Asn, Gln, Ser, Thr, Tyr, 및 Cys),
ii) 비극성 측쇄를 가진 아미노산 (Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Phe, Trp, Pro, 및 Met),
iii) 지방족 측쇄를 가진 아미노산 (Gly, Ala Val, Leu, Ile),
iv) 순환 측쇄를 가진 아미노산 (Phe, Tyr, Trp, His, Pro),
v) 방향족 측쇄를 가진 아미노산 (Phe, Tyr, Trp),
vi) 산성 측쇄를 가진 아미노산 (Asp, Glu),
vii) 염기성 측쇄를 가진 아미노산 (Lys, Arg, His),
viii) 아미드 측쇄를 가진 아미노산 (Asn, Gln),
ix) 히드록시 측쇄를 가진 아미노산 (Ser, Thr),
x) 황-함유 측쇄를 가진 아미노산 (Cys, Met),
xi) 중성, 약 소수성 아미노산 (Pro, Ala, Gly, Ser, Thr),
xii) 친수성, 산성 아미노산 (Gln, Asn, Glu, Asp), 및
xiii) 소수성 아미노산 (Leu, Ile, Val)
"생활성제" (즉, 생물학적 활성 물질/약제)는 생체 내 또는 시험관 내에서 입증될 수 있는, 어떤 약학적, 종종 이로운, 효과를 제공하는 물질 또는 혼합물의 어떤 약제, 약물, 화합물, 조성물도 된다. 그것은 일란타핀/일란티드 펩티드 서열, 또는 이들을 포함하는 화합물을 나타낼 수도 있다. 여기에 사용된 바와 같이, 이 용어는 어떤 생리학적으로 또는 약학적으로 활성인 물질도 추가로 포함한다. 생활성제의 추가의 예는 올리고당을 포함하거나 이로 구성된 약제, 다당류를 포함하거나 이로 구성된 약제, 선택적으로 글리코실화된 펩티드를 포함하거나 이로 구성된 약제, 선택적으로 글리코실화된 폴리펩티드를 포함하거나 이로 구성된 약제, 핵산을 포함하거나 이로 구성된 약제, 올리고뉴클레오티드를 포함하거나 이로 구성된 약제, 폴리뉴클레오티드를 포함하거나 이로 구성된 약제, 지질을 포함하거나 이로 구성된 약제, 지방산을 포함하거나 이로 구성된 약제, 지방산 에스테르를 포함하거나 이로 구성된 약제 및 이차 대사산물을 포함하거나 이로 구성된 약제를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 그것은 사람 또는 다른 동물과 같은, 개체의 치료와 관련하여, 예방적으로, 치료적으로 사용될 수도 있다.
용어 "약물", "약"은 여기에 사용된 바와 같이 사람 또는 동물 신체에서 국부적으로 또는 전신성으로 작용하는, 생물학적으로, 생리학적으로, 또는 약학적으로 활성인 물질을 포함한다.
용어 "치료하는", "치료" 및 "요법"은 여기에 사용된 바와 같이 동일하게 치유 요법, 예방적 또는 방지적 요법 및 개선 또는 완화 요법을 나타낸다. 용어는 이로운 또는 원하는 생리학적 결과를 얻기 위한 접근을 포함하며, 이것은 임상적으로 확립될 수도 있다. 본 발명의 목적을 위해, 유익한 또는 원하는 임상적 결과는 증상의 완화, 질환의 정도의 감소, 안정화된 (즉, 악화되지 않는) 상태, 상태/증상의 진행 또는 악화를 지연 또는 둔화, 상태 또는 증상의 개선 또는 완화, 및 차도 (일부 또는 전체), 검출 가능하거나 검출 불가능한지를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 용어 "완화", 및 이들의 변이체는 여기에 사용된 바와 같이 본 발명의 조성물을 투여하지 않는 것과 비교하여, 생리학적 상태 또는 증상의 정도 및/또는 원하지 않는 징후가 줄어들고 및/또는 진행의 시간 경로가 느려지거나 길어진다는 것을 의미한다.
"치료 효과" 또는 "치료 효과"는 용어 "치료하는" 및 "치료"의 정의를 구성하는 기준에 의해 측정된 바와 같이, 치료된 상태의 변화가 있는 경우에 나타난다. 적어도 5% 개선, 바람직하게 10% 개선, 더 바람직하게 적어도 25%, 더 바람직하게 적어도 50%, 예를 들어, 적어도 75%, 및 가장 바람직하게 적어도 100% 개선이 있는 경우 치료되는 상태의 "변화"가 있다. 변화는 생활성제를 처리하거나 하지 않고, 또는 본 발명의 약학적 조성물과 조합된 생활성제로 개체의 치료된 상태의 심각도의 개선, 또는 개체의 집단의 개선된 상태의 빈도의 차이에 기초할 수 있다.
본 발명에 따르는 치료는 예방적, 개선적 또는 치유적일 수도 있다.
"생활성제"의 "약학적 유효량", "약제학적 유효량" 또는 "생리학적 유효량"은 여기에 설명된 바와 같이 혈류에서 또는 이러한 조성물이 투여될 때 기대하던 생리학적 반응을 제공하기 위해 처리되는 개체의 활성의 부위 (예를 들어, 폐, 위장계, 대장계, 전립선)에서 원하는 수준의 활성제를 제공하는데 필요한, 약학적 조성물에 존재하는 활성제의 양이다.
정확한 양은 많은 인자, 예를 들어, 활성제, 조성물의 활성, 이용된 전달 장치, 조성물의 생리학적 특성, 의도된 환자 사용 (즉, 하루에 투여된 투여의 수), 환자 고려사항, 등에 의존적일 것이고, 여기에 제공된 정보에 기초하여, 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있다. 생활성제의 "유효량"은 일회 투여로, 또는 바람직하게 24시간 내에 총 유효량이 되는 양의 다회수 투여를 통해 투여될 수 있다. 그것은 적절한 양 및 투여의 시기를 결정하기 위해 표준 임상 과정을 사용하여 결정될 수 있다. "유효량"은 전문적 및/또는 개별적인 치료의 건강 관리의 부분에서 경험적 및/또는 개별화 (개별적으로) 결정의 결과일 수 있다는 것으로 생각된다.
용어 유익한 효과, 및 이들의 변형을 "향상시키는 것" 및 "개선하는 것"은, 여기에 사용된 바와 같이, 플라세보 (placebo)에 대한 생활성제의 치료적 효과, 또는 약학적 조성물이 본 발명의 생활성제 없이 투여될 때 정상적으로 얻어진 상기 최첨단 (the state-of-the-art) 의학적 치료의 치료적 효과의 증가를 나타낸다. "치료적 효과의 증가"는 생활성제(들)의 투여의 결과로서 얻어진 치료적 효과의 강도 및/또는 정도의 가속화 및/또는 증가가 있을 때 나타난다. 그것은 또한 치료적 이점의 지속의 확대를 포함한다. 그것은 또한 생활성제의 부재시 약학적 조성물의 더 많은 양의 투여와 비교하여 본 발명에 의해 제공된 생활성제(들)과 함께 동시 투여될 때 같은 이점 및/또는 효과를 얻기 위해 약학적 조성물의 더 적은 양이 필요한 경우를 나타낼 수 있다. 효과를 향상시키는 것은 바람직하게, 하지만 필수적이지 않게, 약학적 조성물 단독이 효과적이지 않거나 또는 치료적으로 덜 효과적인 급성 증상의 치료를 일으킨다. 향상은 약학적 조성물 단독의 투여와 비교하여 본 발명의 생활성제가 약학적 조성물과 동시 투여될 때 치료적 효과의 적어도 5% 증가, 예를 들어, 치료적 효과의 적어도 10% 증가가 있을 때 이루어진다. 바람직하게, 증가는 적어도 25%, 더 바람직하게 적어도 50%, 더 바람직하게 적어도 75%, 가장 바람직하게 적어도 100%이다.
생활성제 및 최첨단 약의 "동시 투여하는" 또는 "동시 투여"는, 여기에 사용된 바와 같이, 특정 기간 내에 본 발명의 하나 이상의 생활성제의 투여, 또는 본 발명의 하나 이상의 생활성제 및 최첨단 약학적 조성물의 투여를 나타낸다. 상기 기간은 바람직하게 72시간 미만, 예를 들어, 48시간, 예를 들어, 24시간 미만, 예를 들어, 12시간 미만, 예를 들어, 6시간 미만, 예를 들어, 3시간 미만이다. 하지만, 이들 용어는 또한 생활성제 및 치료적 조성물이 함께 투여될 수 있다는 것을 의미한다.
"이들이 필요한 개체"는 본 발명으로부터 이익을 얻은 개체를 나타낸다. 한 구체예에서, 상기 이들이 필요한 개체는 병에 걸린 개체이며, 상기 병은 IL-1이 중요한 역할을 하는 면역 질환일 수도 있다.
본 발명에 사용된 바와 같이 용어 "성분의 키트"는 본 발명에 따르는 하나 이상의 펩티드, 화합물 또는 조성물 및 조합으로 투여를 위해 2차 생활성제를 제공한다. 키트의 성분은 동시, 별도 또는 순차적인 사용을 위한 것을 의미한다. 사용은 치료적 사용, 예를 들어, IL-1이 중요한 역할을 하는 염증의 치료일 수도 있다.
표준 분석 방법의 부정확성으로 인해, 폴리머의 분자량 및 길이는 정확한 값인 것으로 생각된다. 이러한 값이 "약" X 또는 "대략" X로서 표현되는 경우, X의 명시된 값은 +/- 20%, 예를 들어, +/- 10%, 예를 들어, +/- 5%로 정확한 것으로 생각된다.
도 1은 IL1Ra (공간 소비 형태) 및 IL1RI (백본 2차 구조) 사이에서 복합체의 3차 구조 모델을 나타낸다. 일란타핀 (Ilantafin) (일란티드 (Ilantide)로도 불림) 펩티드 서열 (SEQ ID NO: 1)의 위치는 검은색으로 나타난다.
도 2는 표면 플라스몬 공명 (surface plasmon resonance; SPR) 분석을 이용하여 센서 칩 IL1RI에 고정된 것에 IL1β (A), IL1Ra (B) 및 일란타핀 펩티드 (SEQ ID NO: 1)를 나타낸다. RU - 공명 유닛.
도 3은 일란타핀 (SEQ ID NO: 1), IL-1β 및 IL1Ra, 및 IL1RI 사이의 상호작용에 대한 친화도 및 속도 상수를 나타낸다.
도 4는 고정된 IL1β에 결합에 대한 가용성 IL1RI (SILR1) 및 일란타핀 펩티드 (SEQ ID NO: 1) 사이의 경쟁을 나타낸다. SILR1 단독의 결합과 비교할 때, *p < 0.05.
도 5는 IL1β에 의해 활성화된 NF-κB에 대한 일란타핀 (SEQ ID NO: 1)의 억제 효과를 나타낸다. 일란타핀 펩티드는 리신 백본에 부착된 테트라머 덴드리머 (일란타핀-d)로서 합성되었다. 검은 막대와 비교할 때, *p < 0.05. **p < 0.01.
도 6은 IL1β에 의해 활성화된 NF-κB에 대한 일란타핀 (SEQ ID NO: 1)의 억제 효과를 나타낸다. 일란타핀 펩티드는 리신 백본에 부착된 모노머 (일란타핀-m)로서 합성되었다. 검은 막대와 비교할 때, *p < 0.05. **p < 0.01.
도 7은 IL1β에 의해 활성화된 NF-κB에 대한 ILRa (a) 및 SILR1 (b) 단백질의 억제 효과를 나타낸다. 검은 막대와 비교할 때, *p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001.
도 8은 스크램블 서열, 일란타핀 scr-d1 (KQSAGKRSMS), 일란타핀 scr-d2 (KASQKGMSRS)를 가진 2개의 펩티드, 및 역순 서열, 일란타핀 rev-d (AQMKSSKRGS)을 가진 펩티드 둘 다 IL1β에 의해 유발된 NF-κB의 활성화를 억제하지 않기 때문에, 일란타핀-d 펩티드 (SEQ ID NO: 1의 테트라머 덴드리머)의 효과가 서열 특이적이다는 것을 나타낸다.
도 9는 펩티드가 IL6에 의해 유발된 STAT 신호 전달의 활성화에 영향을 미치지 않기 때문에, 일란타핀-d 펩티드 (SEQ ID NO: 1의 테트라머 덴드리머)의 효과가 표적 (IL1RI)-특이적이다는 것을 나타낸다.
도 10은 IL1β-활성화된 AMJ2-C8 대식 세포에 의한 TNFα 분비에 대한 일란타핀 (SEQ ID NO: 1)의 억제 효과를 나타낸다. 일란타핀 펩티드는 리신 백본에 부착된 테트라머 덴드리머 (일란타핀-d)로서 합성되었다. 검은 막대와 비교할 때, *p < 0.05.
도 11은 IL1β-활성화된 AMJ2-C8 대식 세포에 의한 TNFα 분비에 대한 일란타핀 (SEQ ID NO: 1)의 억제 효과를 나타낸다. 일란타핀 펩티드는 모노머로서 합성되었다. 검은 막대와 비교할 때, *p < 0.05.
도 12는 IL1β-활성화된 AMJ2-C8 대식 세포에 의한 TNFα 분비에 대한 ILRa (a) 및 SIL1R1의 억제 효과를 나타낸다. 검은 막대와 비교할 때, *p < 0.05, **p < 0.01.
도 13은 소뇌 과립 뉴런의 1차 배양에서 신경 돌기 돌출에 대한 일란타핀 (SEQ ID NO: 1), IL1Ra (b), SIL-1R1 (c) 및 IL1β (d)의 효과를 나타낸다. 미처리된 대조군과 비교할때, *p < 0.05, **p < 0.01.
도 14는 IL1β는 일란타핀 (SEQ ID NO: 1) 및 IL1Ra와 경쟁하고 그로 인해 일란타핀 (a) - 및 IL1Ra (b) - 유발된 신경 돌기 돌출을 억제한다. 검은 막대와 비교할 때, *p < 0.05.
도 15는 덴드리머 (일란타핀-d, a) 및 a 모노머 (일란타핀-m, b) 둘 다로서, 일란타핀 (SEQ ID NO: 1)는 칼륨 농도를 낮춤으로써 아폽토시스 (apoptosis)를 거치도록 유도된 소뇌 과립 뉴런의 생존을 촉진한다. IGF - 인슐린-유사 성장 인자-1. 2번의 독립적인 실험의 결과가 나타난다.
도 16은 래트의 콜라겐 유발 류머티스성 관절염 모델을 이용하는 생체 내 (in vivo) 연구의 결과를 나타낸다. 미처리된 대조군 그룹과 비교할 때, 일란타핀-d (SEQ ID NO: 1의 테트라머 덴드리머)의 처리는 질환의 임상적 징후의 증가를 폐지하였다.
도 17은 어떻게 CIA에 걸린 동물의 발병율을 감소시키는지 나타낸다. 발병율은 임상 지수 7에 도달한 동물의 퍼센트로서 표현했고 그러므로 테스트 날에 의해 희생되었다. 일란타핀은 dpi 12로 발병율을 크게 감소시켰다. * - P < 0.05 (웰치 보정 (Welch's correction)된 언페어드 (unpaired) t-테스트)
도 18은 어떻게 일란타핀이 CIA의 심각도 (임상 평가)를 감소시키는지 나타낸다. 이원분산분석 (Two-way ANOVA)은 CIA에 걸린 동물의 임상 점수에 대한 치료의 큰 효과를 나타냈다. [F(1,238)=18.05, P<0.0001]. 일란타핀은 dpi 13-15에서 CIA의 심각도를 감소시켰다. * - P < 0.05 (웰치 보정된 언페어드 t-테스트).
도면에 대한 더 상세한 설명은 하기 여기의 실시예에서 발견될 수도 있다.
염증
염증 (라틴어, inflammare, to set on fire)은 해로운 자극, 예를 들어, 병원체, 손상된 세포, 또는 자극물에 대한 관 조직에 대한 복잡한 생물학적 반응의 일부이다. 염증은 해로운 자극을 제거하기 위해 및 치유과정을 개시하기 위해 유기체에 의한 보호적 시도이다. 염증이 감염에 의해 유발된 경우에도, 염증은 감염에 대한 동의어가 아니다. 감염이 미생물에 의해 유발되지만, 염증은 병원체에 대한 유기체의 반응 중 하나이다.
염증은 급성 또는 만성으로 분류될 수 있다. 급성 염증은 해로운 자극에 대한 신체의 초기의 반응이고 혈액에서 손상된 조직으로, 혈장 및 백혈구의 증가된 움직임에 의해 이루어진다. 생화학적 이벤트의 캐스케이드는 면역 반응을 전파하며, 국부적 혈관 시스템, 면역 시스템, 및 손상된 조직 내의 다양한 세포를 수반한다. 만성 염증으로 알려진, 장기적인 염증은 염증의 부위에 존재하는 세포의 타입의 점진적 시프트로 이어지고 염증 과정으로부터 조직의 동시의 파괴 및 치유에 의해 특성화된다.
인터류킨
인터류킨은 백혈구 (백혈구)에 의해 발현되는 것으로 처음 보이는 시토킨의 그룹 (분비된 단백질/신호 전달 분자)이다. 용어 인터류킨은 (인터-) "의사소통의 수단으로서", 및 (-류킨) (이들 단백질 중 많은 것들이 백혈구에 의해 생산되고 백혈구에서 작용한다는 사실로부터 유도"로부터 유도된다. 이름은 그것이 그 후로 인터류킨이 다양한 세포에 의해 생산된다는 것을 발견했기 때문에 유물이었다.
면역 시스템의 기능은 인터류킨의 많은 부분에서 의존적이고, 그것들 중 다수의 희귀한 결함이 설명되었고, 모두 자동 면역 질환 또는 면역 결핍을 특징으로 한다. 인터류킨의 대부분은 보조 CD4+ T 림프구, 뿐만 아니라 단핵구, 대식 세포, 및 내피 세포에 의해 합성된다. 그것들은 T, B, 및 조혈 세포의 개발 빛 분화 를 촉진한다.
인터류킨 -1 ( IL -1)
인터류킨 1 (IL-1)은 2개의 별개의 단백질, IL-1알파 (IL1α) 및 IL-1베타 (IL1B)에 대한 일반명이며, 이것은 주요 전염증성 시토킨이다. 그것들은 면역 반응, 염증성 반응, 조직 손상 및 혈액 생성에 참여한다.
IL1 유전자 패밀리는 3개의 멤버, IL1α, IL1β, 및 IL1RA (IL-1 수용체 길항 단백질, 또는 IL1Ra)로 구성된다. IL1RA는 3개의 β-헤어핀 루프에 의해 한 측면이 폐쇄된 6개의 가닥 β-배럴로 구성된다. IL1α 및 IL1β가 IL1 수용체의 작용제이지만, 자연 발생한 IL1RA는 수용체의 특이적 길항제로서 기능한다 (Hallegua and Weisman, 2002).
IL-1알파
인터류킨-1 알파 (IL-1α)는 사람에서 IL1α 유전자에 의해 암호화된 단백질이다. 이 유전자에 의해 암호화된 단백질은 인터류킨-1 패밀리의 시토킨이고, 인터류킨-1 알파는 넓은 스펙트럼의 대사, 생리학적, 조혈 활성을 소유하고, 면역 반응의 조절에 중심 역할 중 하나를 한다. 그것은 인터류킨-1 수용체에 결합한다. IL-1α는 그것의 초기에 합성된 전구체의 구조가 신호 펩티드 단편을 함유하지 않는다는 점에서 시토킨 패밀리의 독특한 멤버이다 (IL-1β 및 IL-18에 대하여 같은 것이 알려짐). 특이적 프로테아제에 의한 N-말단 아미노산의 제거에 의한 가공 후, 결과의 펩티드는 "성숙한" 형태로 불린다. 원형질 막과 결합되는, 칼페인, 칼슘-활성화된 시스테인 프로테아제는 주로 IL-1α 전구체의 성숙한 분자로 분할에 대한 원인이 된다. IL-1α의 31 kDa 전구체 형태 및 그것의 18 kDa 성숙한 형태 둘 다는 생물학적으로 활성이다.
IL-1α의 3차 구조는 전체가 베타-주름진 가닥으로 구성된 오픈-엔드 (open-ended) 배럴이다. IL-1α의 성숙한 형태의 결정 구조 분석은 IL-1 수용체와 결합하는 2개의 부위를 갖는다는 것을 나타낸다. 그것의 배럴의 오픈 톱 (open top)에 위치한 주요 결합 부위가 있으며, 이것은 IL-1β와 유사하지만, 동일하지 않다.
IL-1α는 본질적으로 상피 세포에 의해 생산되고 정상적인 사람 표피에서 실질적인 양으로 발견되며, 그것은 피부 장벽 기능의 유지에서 필수적인 역할을 가진다. 피부 케라틴 형성 세포를 제외하고, 일부 상피 세포 및 중추신경계의 특정 세포, IL-1α는 대부분의 세포 타입, 조직에서 및 혈액에서 건강하게 관찰되지 않았다. 다양한 다른 세포들은 자극시에만 IL-1α 유전자를 전사하고 IL-1α의 전구체 형태를 생산하도록 유도될 수 있다. 그것들 중에 섬유아세포, 대식 세포, 과립구, 호산성 백혈구 (eosinophil), 비만 세포 및 호염기성 세포 (basophil), 내피 세포, 혈소판, 단핵구 및 골수 세포주, 혈액 T-림프구 및 B-림프구, 성상 세포 (astrocyte), 신장 혈관 사이 세포 (kidney mesangial cell), 랑게르한스 세포 (Langerhans cell), 진피 수상 돌기 세포 (dermal dendritic cell), 자연살 세포 (natural killer cell), 대형 과립 림프구, 소교 세포 (microglia), 혈액 호중구 세포 (blood neutrophils), 림프절 세포 (lymph node cell), 모체 태반 세포 (maternal placental cell) 및 여러 다른 세포 타입이 있다.
IL-1α 활성에 가장 중요한 조절 분자는 IL-1RA이며, 이것은 보통 10-100배 몰 초과로 생산된다. 게다가, IL-1R 타입 I의 가용성 형태는 IL-1α에 대하여 높은 친화도를 갖고 5-10 몰 초과로 생산된다. IL-10은 또한 IL-1α 합성을 억제한다.
IL - 1베타
카타볼린 (catabolin)으로도 알려진 인터류킨-1 베타 (IL-1β)는 사람에서 IL1B 유전자에 의해 암호화된 시토킨 단백질이다. IL-1β 전구체는 카스파제 1 (인터류킨 1 베타 전환 효소)에 의해 분열된다. 세포질 티올 프로테아제는 생성물을 분열하여 성숙한 IL-1β를 형성한다.
IL-1β는 인터류킨 1 시토킨 패밀리의 멤버이다. 이 시토킨은 프로단백질로서 활성화된 대식 세포에 의해 생산되며, 이것은 카스파제 1에 의해 단백질 가수 분해하여 그것의 활성형으로 가공된다. 이 시토킨은 염증성 반응의 중요한 매개자이고, 세포 증식, 분화, 및 아폽토시스를 포함하는 다양한 세포 활성에 수반된다. 중추 신경계 (CNS)에서 이 시토킨에 의한 시클로옥시게나제-2 (PTGS2/COX2)의 유발은 염증성 통증 과민증에 기여하는 것으로 발견된다. 이 유전자 및 8개의 다른 인터류킨 1 패밀리 유전자는 염색체 2 상에서 시토킨 유전자 클러스터 (cluster)를 형성한다.
IL -1 수용체 길항 단백질 ( ILIRA )
인터류킨-1 수용체 길항 단백질 (IL1RA)은 사람에서 IL1RN 유전자에 의해 암호화된 단백질이다. 그것은 IL1A 및 IL1B의 활성화를 억제하고, 다양한 IL-1 관련 면역 및 염증성 반응을 조절하는 IL-1 시토킨 패밀리의 멤버이다. 이 유전자 및 5개의 다른 밀접하게 관련된 시토킨 유전자는 염색체 2 상에서 대략 400 kb에 걸친 유전자 클러스터를 형성한다. 별개의 이소폼를 암호화하는, 4개의 대안으로 스플라이스된 (spliced) 전사 변이체가 보고되었다. IL1RN 유전자의 돌연변이는 인터류킨-1-수용체 길항제의 결핍 (DIRA)으로 불리는 희귀 질환을 일으킨다. IL1RN 유전자의 변이체는 또한 정신분열증 (Schizophrenia)의 위험과 관련된다.
단백질 유사성의 면에서, IL-1β는 그것이 IL-1α에 대한 것보다 IL-1RA와 더 밀접하게 관련된다. 성숙한 사람 IL-1α 및 성숙한 IL-1β 사이에서 동일한 아미노산은 22%이지만 IL-1RA에 대한 IL-1β와 바교할 때 26%이고 IL-1RA에 대한 IL-1α와 비교할 때 단 18%이다.
IL1RA의 서열은 IL1RA의 4개의 이소폼 모두에 대하여 여기에서 하기 개시된다 ('서열').
IL -1 수용체
IL1은 2개의 별개의 수용체, IL1RI 및 IL1RII (각각, IL-1 수용체 타입 I 및 II, 또는 1 및 2)를 가진다. IL1RI는 IL1 결합하는 3개의 면역글로불린-유사 모듈 및 긴 세포질 도메인이 있는 세포 외 부분을 포함하는 반면에, IL1RII은 같은 엑토도메인을 함유하지만 더 짧은 세포질 도메인을 함유한다.
수용체 둘다는 막관통 (TM) 및 가용성 형태로 존재한다: 가용성 IL-1 수용체는 번역 후에 막 수용체의 세포 외 부분의 분할로부터 유도되는 것으로 생각된다. IL-1 수용체 (CD121a/IL1R1, CD121b/IL1R2)는 진화 중에 잘 보존된 것으로 나타나고 같은 염색체 위치에 매핑한다. 수용체 둘 다는 IL-1의 3가지 형태 (IL-1알파, IL-1베타 및 IL-1RA) 모두에 결합할 수 있다.
IL1는 낮은 친화도로 IL1RI와 결합하고, IL1R 악세사리 단백질 (IL1R-AcP)의 복합체와 결합은 IL1, IL1RI, 및 IL1R-AcP로 구성된 비대칭 3차 복합체를 형성하는 높은 친화도 결합을 발생시키며, 수용체 활성화 및 이후의 세포 내 신호 변환 및 세포 반응을 일으킨다. IL1RA는 주로 IL1RI에 결합하지만 그것은 2차 결합 부위가 없기 때문에 신호 변환을 유발하지 않는다. IL1RII는 IL1의 ILRII에 결합이 세포 내 신호를 촉발시킬 수 없기 때문에 데코이 (decoy) 수용체이다. 자연 발생한 IL1RA 및 데코이 수용체는 IL1의 효과를 감소시키고, 따라서 시토킨 생물학의 독특한 현상인 것으로 나타난다 (Dinarello, 1996).
본 발명의 펩티드 단편
본 발명은 전체 길이 IL1RA 단백질 및 anakinra보다 개선된 성질을 가진 IL1RA의 절단된 형태를 개시한다. 본 발명의 짧은 펩티드의 개선된 성질은 증가된 가용성, 증가된 안정성 및 낮은 합성 비용과 관련된다. 게다가, 여기의 다른 곳에서 지시된 여러 바람직한 다운스트림 효과에 더하여, 본 발명의 펩티드는 IL-1RI에 결합하고 IL-1베타의 이 수용체에 결합을 방해하는 그것의 능력을 유지한다.
본 발명에 따르는 짧은 펩티드의 공급은 또한 혈액-뇌 관문을 통한 상기 짧은 펩티드의 더 나은 통과를 허용한다. 이것은 10개의 아미노산 잔기의 본 발명의 펩티드 (SEQ ID NO: 1)가 본 발명자에 의해 신경 돌기 돌출 및 뉴런 세포 생존에 대하여 긍정적인 효과를 갖는 것으로 나타난다는 점에서 특히 흥미롭다.
혈액-뇌 관문 (BBB)은 중추 신경계 (CNS)에서 순환 혈액 및 뇌척수액 (CSF)의 분리이며, 항상성을 유지하기 위해 제공된다. 그것은 모든 뇌 모세혈관을 따라 발생하고 정상 순환에 존재하지 않는 모세혈관 주위의 치밀 이음부 (tight junction)로 구성된다. 내피 세포는 미세한 물체 (예를 들어, 박테리아) 및 크거나 친수성 분자의 뇌척수액으로 확산을 제한하는 한편, 작은 소수성 분자 (O2, 호르몬, CO2)의 확산을 허용한다. 장막의 세포는 특이적 단백질을 가진 장막을 통해 대사 산물, 글루코스를 활발하게 수송한다. 이 장막은 또한 두꺼운 기저막 및 성상 세포 엔드피트 (endfeet)를 포함한다. 따라서 BBB는 대부분의 분자의 뇌로 진입을 효과적으로 차단한다. 이것은 많은 약물은 CNS의 장애를 치료할 수 있지만, 그렇지 않으면 그것들이 정적인 바로 그 영역에 접근이 거부된다.
대부분의 펩티드는 어느 정도 BBB를 투과할 수도 있는 한편, 단백질의 분자량 (MW) 및 투과의 정도 사이에 명백한 상호 관계가 있다 - 따라서, 낮은 MW을 갖는 더 짧고, 분지되지 않은 펩티드는 투과의 더 좋은 정도를 갖고, 더 적은 량의 펩티드가 뇌에서 작용 농도에 도달하기 위해 작은 MW 펩티드가 필요하다는 것을 의미한다.
본 발명에 따르는 펩티드는 IL1RA 단백질의 짧은 단편을 포함한다. 한 구체예에서, 상기 펩티드는 SGRKSSKMQA (SEQ ID NO: 1), 또는 기능적 단편 또는 이들의 변이체를 포함하거나 이들로 구성된다.
'단편 또는 이들의 변이체'는 여기에 사용된 바와 같이 SEQ ID NO: 1의 단편 (길이), SEQ ID NO: 1의 변이체 (동일성), 및 SEQ ID NO: 1의 단편의 변이체 (동일성 및 길이)를 나타낸다. 후자는 '변이체 단편'으로 표시될 수도 있다.
본 발명에 따르는 아미노산 서열의 단편 및 변이체 둘 다는 상기 서열의 기능적 등가물이다, 즉, IL1R1에 결합하는 그것들의 능력을 유지한다는 것을 의미한다.
여기에서 SEQ ID NO: 1에 대하여 약술된 바와 같이, IL1RA 발명으로부터 유도된 본 발명의 추가의 짧은 펩티드는 RIWDVNQKT (SEQ ID NO: 29), TAMEADQPVS (SEQ ID NO: 35) 또는 GPNAKLEEKA (SEQ ID NO: 36) 또는 변이체, 단편, 또는 이들의 단편의 변이체를 포함하거나 이들로 구성된다.
바람직한 구체예에서, 본 발명에 따르는 펩티드는 아미노산 서열이 스크램블되거나 반전될 때 펩티드 서열이 효과를 갖지 않거나 실질적으로 감소된 효과를 갖는다는 점에서, 특이적이다. 또한, 펩티드는 바람직하게 IL-1의 효과를 길항작용하지만, 다른 단백질 및 인터류킨을 길항작용하지 않는 것에 특이적이다.
예를 들어, SEQ ID NO: 1의 기능적 단편 또는 변이체는 그것의 IL-1RI에 결합하고 IL-1베타의 상기 수용체에 결합을 방해하는 능력을 유지하고, 및/또는 IL-1 유발된 NF-κB 활성화의 억제, 대식 세포로부터 IL-1 유발된 TNF-알파 방출의 감소, 신경 돌기 돌출의 유발 및/또는 뉴런 세포 생존의 촉진에 관하여 SEQ ID NO: 1과 비슷한 수준으로 다운스트림 효과에 영향을 미치는 능력을 유지하는 단편 또는 변이체 (또는 단편의 변이체)이다. 같은 것은 SEQ ID NOs: 29, 35 및 36에 적용한다.
본 맥락에서 아미노산 잔기에 대한 표준 한 문자 코드뿐만 아니라 표준 세 문자 코드가 적용된다. 아미노산에 대한 약어는 Biochemical Nomenclature Eur. J. Biochem, 1984, vol. 184, pp 9-37 상의 IUPAC-IUB 공동 위원회의 추천에 따른다. 적용 동안 천연 아미노산에 대하여 세 문자 코드 또는 한 문자 코드가 사용된다. L 또는 D형 (광학 이성질체)가 명시되지 않는 경우 문제의 아미노산은 형성된 펩티드가 L형, D형, 또는 혼합된 L형 및 D형의 서열의 아미노산으로 구성되도록, Pure & Appl Chem. Vol. (56(5) pp 595-624 (1984)를 참조하는 천연 L형, 또는 D형을 갖는 것으로 생각될 수도 있다.
아무것도 명시되지 않은 경우, 본 발명에 따르는 펩티드의 C-말단 아미노산은 자유 카르복시산으로서 존재하고, 이것은 또한 "-OH"로서 명시될 수도 있다. 하지만, 본 발명에 따라 사용되는 펩티드의 C-말단 아미노산은 또 다른 구체예에서 아미드화된 유도체일 수도 있으며, 이것은 "-NH2"로서 나타난다. 다른 아무것도 펩티드의 N-말단 아미노산이 자유 아미노기를 포함한다는 것으로 진술되지 않은 경우, 이것은 또한 "H-"로서 명시될 수도 있다. 하지만, 본 발명에 따르는 펩티드의 N-말단 아미노산은 또 다른 구체예에서 아세틸화된 유도체일 수도 있으며, 이것은 "-아세틸" 또는 "COCH3"으로 나타난다.
본 발명에 따르는 펩티드는 한 구체예에서 단백질 구성 아미노산 또는 천연 아미노산으로 불리는, 자연스럽게 폴리펩티드에 통합된 22개의 아미노산 중 적어도 5개를 포함한다. 이들 중에, 20개는 보편적인 유전 암호에 의해 암호화된다. 남은 2개, 셀레노시스테인 및 피롤리신은 독특한 합성 메카니즘에 의해 단백질에 통합된다. 본 발명에 따르는 펩티드는 또한 하나 이상의 비천연, 비-단백질 구성 또는 비-표준 아미노산을 포함할 수 있다.
바람직한 구체예에서, 본 발명의 펩티드는 SGRKSSKMQA (SEQ ID NO: 1), 또는 단편 또는 변이체, 또는 이들의 변이체 단편으로 구성되거나 이들을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 펩티드는 SEQ ID NOs: 29, 35 또는 36, 또는 단편 또는 변이체, 또는 이들의 변이체 단편으로 구성되거나 이들을 포함한다.
한 구체예에서, 펩티드는 SEQ ID NO: 1, 또는 단편 또는 변이체, 또는 이들의 변이체 단편을 포함하는 IL1RA로부터 유도된, 최대 14개의 아미노산, 예를 들어, 최대 13개의 아미노산, 예를 들어, 최대 12개의 아미노산, 예를 들어, 최대 11개의 아미노산, 예를 들어, 최대 10개의 아미노산을 포함한다.
본 발명의 펩티드는 한 구체예에서 SEQ ID NO: 1로 구성된 IL1RA의 10개의 인접한 아미노산 잔기로 구성된다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 펩티드는 IL1RA로부터 유도된, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14개 이하의 인접한 아미노산 잔기의 전체 길이를 갖고 SEQ ID NO: 1 또는 변이체 또는 단편, 또는 이들의 변이체 단편을 포함한다.
본 발명의 펩티드는 5-10개의 인접한 아미노산, 예를 들어, 6-10개의 인접한 아미노산, 예를 들어, 8-10개의 인접한 아미노산으로 구성될 수도 있다. 한 구체예에서, 본 발명의 펩티드는 SEQ ID NOs: 1, 29, 35 또는 36, 또는 변이체, 단편 또는 이들의 변이체 단편 중 어떤 것도 포함하는, 5-6, 예를 들어, 6-7, 예를 들어, 7-8, 예를 들어, 8-9, 예를 들어, 9-10, 예를 들어, 10-11, 예를 들어, 11-12, 예를 들어, 12-13, 예를 들어, 13-14개의 인접한 아미노산으로 구성된다.
한 구체예에서, 본 발명의 펩티드는 SEQ ID NOs: 29, 35 또는 36, 또는 변이체, 단편 또는 이들의 변이체 단편 중 어떤 것도 포함하는, 5-6, 예를 들어, 6-7, 예를 들어, 7-8, 예를 들어, 8-9, 예를 들어, 9-10, 예를 들어, 10-11, 예를 들어, 11-12, 예를 들어, 12-13, 예를 들어, 13-14, 예를 들어, 14-15, 예를 들어, 15-16, 예를 들어, 16-17, 예를 들어, 17-18, 예를 들어, 18-19, 예를 들어, 19-20개의 인접한 아미노산으로 구성된다.
본 발명의 펩티드는 또 다른 구체예에서 SEQ ID NOs: 29, 35 또는 36, 또는 단편 또는 변이체, 또는 이들의 변이체 단편을 포함하는 IL1RA로부터 유도된, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개 이하의 인접한 아미노산 잔기의 총 길이를 가진 인접한 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 펩티드는 상기 펩티드 서열(들) 중 적어도 5개, 예를 들어, 상기 펩티드 서열(들) 중 5개의 인접한 아미노산, 예를 들어, 6개의 인접한 아미노산, 예를 들어, 7개의 인접한 아미노산, 예를 들어, 8개의 인접한 아미노산, 예를 들어, 9개의 인접한 아미노산을 포함하는, SEQ ID NOs: 1, 29, 35 또는 36의 단편을 포함하거나 이들로 구성된다.
펩티드의 단편은 따라서 SEQ ID NOs: 1, 29, 35 또는 36의 적어도 5개의 인접한 아미노산, 예를 들어, SEQ ID NOs: 1, 29, 35 또는 36의 5개의 인접한 아미노산, 예를 들어, 6개의 인접한 아미노산, 예를 들어, 7개의 인접한 아미노산, 예를 들어, 8개의 인접한 아미노산, 예를 들어, 9개의 인접한 아미노산을 포함하는 펩티드로서 여기에 정의된다. SEQ ID NOs: 1, 35 또는 36의 단편은 따라서 상기 서열 중 5 내지 9개의 아미노산 서열을 포함할 수도 있고, SEQ ID NO: 29의 단편은 따라서 상기 서열 중 5 내지 8개의 아미노산을 포함할 수도 있다.
본 발명의 펩티드의 변이체, 또는 상기 펩티드의 단편의 변이체는 SEQ ID NOs: 1, 29, 35 또는 36 또는 이들의 단편과 적어도 40% 서열 동일성, 예를 들어, SEQ ID NOs: 1, 29, 35 또는 36 또는 이들의 단편에 적어도 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NOs: 1, 29, 35 또는 36 또는 이들의 단편에 40-50% 동일성, 예를 들어, 50-60% 동일성, 예를 들어, 60-70% 동일성, 예를 들어, 70-80% 동일성, 예를 들어, 80-90%, 예를 들어, 95-99% 서열 동일성을 갖는 아미노산일 수도 있으며, 여기에서 동일성은 그것을 SEQ ID NOs: 1, 29, 35 또는 36 또는 이들의 단편과 맞추어볼 때 상기 변이체 서열에서 동일한 아미노산의 퍼센트로서 정의된다.
아미노산 서열 사이의 동일성은 BLOSUM 30, BLOSUM 40, BLOSUM 45, BLOSUM 50, BLOSUM 55, BLOSUM 60, BLOSUM 62, BLOSUM 65, BLOSUM 70, BLOSUM 75, BLOSUM 80, BLOSUM 85, 또는 BLOSUM 90과 같은, 잘 알려진 알고리즘을 사용하여, 또는 비교되는 2개의 펩티드 서열의 해당 위치에 존재하는 특정 아미노산의 단순 비교에 의해 계산될 수도 있다.
상동성은 동일성/서열 동일성에 대한 동의어로서 사용될 수도 있다.
본 발명의 펩티드의 변이체는 또한 SEQ ID NOs: 1, 29, 35 또는 36 또는 이들의 단편과 약 10% 양성 아미노산 매치, 예를 들어, 약 20% 양성 아미노산 매치, 예를 들어, 약 30% 양성 아미노산 매치, 예를 들어, 약 40% 양성 아미노산 매치, 예를 들어, 약 50% 양성 아미노산 매치, 예를 들어, 약 60% 양성 아미노산 매치, 예를 들어, 약 70% 양성 아미노산 매치, 예를 들어, 약 80% 양성 아미노산 매치, 예를 들어, 약 90% 양성 아미노산 매치를 가진 아미노산 서열일 수도 있으며, 양성 아미노산 매치는 유사한 물리적 및/또는 화학적 성질을 갖는 아미노산 잔기의 2개의 비교된 서열의 같은 위치의 존재로서 정의된다. 본 발명의 특정 양성 아미노산 매치는 K 대 R, E 대 D, L 대 M, Q 대 E, I 대 V, I 대 L, A 대 S, Y 대 W, K 대 Q, S 대 T, N 대 S 및 Q 대 R이다.
변이체는 알킬 아미노산이 알킬 아미노산에 대하여 치환되고, 방향족 아미노산이 방향족 아미노산에 대하여 치환되고, 황 함유 아미노산이 황 함유 아미노산에 대하여 치환되고, 히드록시 함유 아미노산이 히드록시 함유 아미노산에 대하여 치환되고, 산성 아미노산이 산성 아미노산에 대하여 치환되고, 염기성 아미노산이 염기성 아미노산에 대하여 치환되고, 이염기성 모노 카르복실 아미노산이 이염기성 모노 카르복실 아미노산에 대하여 치환되는 서열을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명에 따르는 펩티드 서열의 변이체, 또는 펩티드 서열의 단편의 변이체는 적어도 하나의 치환, 예를 들어, 서로 독립적으로 도입된 복수의 치환을 포함할 수도 있다. 한 구체예에서, 펩티드 변이체는 SEQ ID NOs: 1, 29, 35 또는 36 또는 이들의 단편의 아미노산에 관하여 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 아미노산 치환을 포함한다.
EQ ID NOs: 1, 29, 35 또는 36, 또는 이들의 단편의 변이체는 서로 독립적으로 하나 이상의 보보존적 치환을 포함하며, 이것은 측쇄가 유사한 생화학적 성질을 갖고 따라서 펩티드의 기능에 영향을 미치지 않는 아미노산 치환이다.
보통의 아미노산 중에서, 예를 들어, "보존적 아미노산 치환"은 또한 다음 각각의 그룹 내 아미노산 사이의 치환에 의해 설명될 수 있다: (1) 글리신, 알라닌, 발린, 루신, 및 이소루신, (2) 페닐알라닌, 티로신, 및 트립토판, (3) 세린 및 트레오닌, (4) 아스파르테이트 및 글루타메이트, (5) 글루타민 및 아스파라긴, 및 (6) 리신, 아르기닌 및 히스티딘.
본 발명에 따르는 폴리펩티드는 또한 비-자연 발생한 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 비-자연 발생한 아미노산은, 예를 들어, 제한 없이, 트랜스-3-메틸프롤린, 2,4-메타노프롤린, 씨스-4-히드록시프롤린, 트랜스-4-히드록시프롤린, N-메틸글리신, 알로-트레오닌, 메틸트레오닌, 히드록실-에틸시스테인, 히드록시에틸호모시스테인, 니트로글루타민, 호모글루타민, 피페콜산, 티아졸리딘 카르복시산, 데히드로프롤린, 3- 및 4-메틸프롤린, 3,3-디메틸-프롤린, 3차-루신, 노르발린, 2-아자페닐알라닌, 3-아자페닐알라닌, 4-아자페닐-알라닌, 및 4-플루오로페닐알라닌을 포함한다.
보존적 치환 (또는 동의어 치환)은 변이체, 또는 단편의 변이체가 기능성을 유지하는 동안, 본 발명에 따르는 펩티드 또는 이들의 단편의 어떤 하나 이상의 위치에 도입될 수도 있다. 하지만, 하나 이상의 위치에 비-보존적 치환 (비-동의어 치환)을 도입하는 것이 또한 바람직할 수도 있다.
본 발명에 따르는 펩티드의 변이체의 형성으로 이어지는 비-보존적 치환은 i) 예를 들어, 극성, 예를 들어, Gly, Ser, Thr, Cys, Tyr, Asn, 또는 Gln과 같이 극성 측쇄를 가진 잔기 또는 Asp, Glu, Arg, 또는 Lys와 같이 전하를 띈 아미노산에 대하여 치환된, 또는 전하를 띈 또는 극성 잔기를 비극성인 것에 대하여 치환하는 비극성 측쇄 (Ala, Leu, Pro, Trp, Val, lie, Leu, Phe 또는 Met)를 가진 잔기가 실질적으로 다를 것이고; 및/또는 ii) Pro 또는 Gly의 또는 이에 대한 또 다른 잔기에 의한 치환과 같은 펩티드 백본 방향에 대한 그것의 효과가 실질적으로 다를 것이고; iii) 전하, 예를 들어, Lys, His 또는 Arg와 같이 양전하를 띈 잔기에 대하여 Glu 또는 Asp와 같이 음전하를 띈 잔기의 치환 (및 그 반대)이 실질적으로 다를 것이고; 및/또는 iv) 입체적 부피, 예를 들어, His, Trp, Phe 또는 Tyr와 같이 부피가 큰 잔기의 작은 측쇄, 예를 들어, Ala, Gly 또는 Ser을 갖는 것에 대한 치환 (및 그 반대)이 실질적으로 다를 것이다.
아미노산의 치환은 한 구체예에서 그것들의 소수성 및 친수성 값 및 전하, 크기, 등을 포함하는, 아미노산 측쇄 치환기의 상대적 유사성에 기초하여 이루어질 수도 있다.
한 구체예에서, SEQ ID NO: 1, 또는 이들의 단편의 1, 2 또는 3개의 세린 잔기 (Ser)는 Gln, Asn 및 Thr (극성 비전하를 띈 측쇄를 가진 모든 아미노산)로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고; 이들과 독립적으로, 글리신 (Gly)는 Ala, Val, Leu, 및 He로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고; 이들과 독립적으로 적어도 하나의 아르기닌 (Arg)는 Lys 및 His (모두 양전하를 띈 측쇄를 가짐)로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고; 이들과 독립적으로, 1 또는 2개의 리신 잔기 (Lys)는 Arg 및 His로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고; 이들과 독립적으로, 메티오닌 (Met)은 Leu, Pro, Ile, Val, Phe, Tyr 및 Trp (모두 소수성 측쇄를 가짐)로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고; 이들과 독립적으로, 적어도 하나의 글루타민 (Gln)은 Asp, Glu, 및 Asn으로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고; 이들과 독립적으로, 적어도 하나의 알라닌 (Ala)은 Gly, Val, Leu, 및 Ile로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산으로 치환된다.
SEQ ID NO: 1은 10개의 아미노산으로 구성되며, 위치 1 내지 10으로 나타난다. 한 구체예에서, SEQ ID NO: 1의 위치 1에서 Ser은 전하를 띄지 않거나, 삭제되거나 Gly로 치환된다; 위치 2에서 Gly는 전하를 띄지 않거나, 삭제되거나 Ala, Ser 또는 Arg로 치환된다; 위치 3에서 Arg는 전하를 띄지 않거나, 삭제되거나 Lys로 치환된다; 위치 4에서 Lys는 전하를 띄지 않거나 Arg, Thr, Gln, Met, Gly 또는 Ser로 치환된다; 위치 5에서 Ser은 전하를 띄지 않거나 Arg, Thr, Gln, Met, Gly 또는 Ser로 치환된다; 위치 6에서 Ser은 전하를 띄지 않거나 His, Gln, Trp, Asn, Glu, Pro, Ala, Thr, Cys, Gly 또는 Arg로 치환된다; 위치 7에서 Lys는 전하를 띄지 않거나 Arg, His, Glu 또는 Ser로 치환된다; 위치 8에서 Met는 전하를 띄지 않거나 Leu, Thr 또는 Ser로 치환된다; 위치 9에서 Gln은 전하를 띄지 않거나, 삭제되거나 Glu, His 또는 Lys로 치환된다; 및/또는 위치 10에서 Ala는 전하를 띄지 않거나, 삭제되거나 Leu 또는 Met로 치환된다
게다가, SEQ ID NOs: 1, 29, 35 또는 36의 기능적 변이체는 상기 서열 내에 또는 끝에 하나 이상의 아미노산 추가, 예를 들어, SEQ ID NOs: 1, 29, 35 또는 36, 또는 변이체, 단편 또는 이들의 변이체 단편 내에 또는 끝에 추가된 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산을 포함할 수도 있다.
본 발명에 따르는 SEQ ID NO: 1의 변이체, 단편 및 변이체의 단편의 예는 다음을 포함한다 (SEQ ID NO: 1과 비교하여 동일한 아미노산은 밑줄 그어져 있고, SEQ ID NO: 1과 비교하여 '분실된' 또는 생략된 아미노산이 나타나고 SEQ ID NO: 1과 비교된 바와 같이 전체적인 동일성 점수가 나타난다):
본 발명의 펩티드의 변이체는 또한 펩티드 서열이 변형될 수도 있다는 것을 의미할 수도 있다. 변형은 당업자에게 알려진 어떤 변형, 예를 들어, 번역 후 변형으로서 나타난 것들일 수도 있다. 이것은 하나 이상의 아미노산 잔기의 아세틸화, 인산화, 메틸화, 글루코실화, 글리칸화, 아미드화, 히드록기화, 탈이민화, 카르바밀화 및 황화를 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명의 펩티드는 아미노산 서열 RPSGRKSSKMQAFRI (SEQ ID NO: 37)을 포함하거나 이들로 구성되지 않고, 및/또는 아미노산 서열 LVAGY (SEQ ID NO: 38)을 포함하거나 이들로 구성되지 않는다.
한 구체예에서, 본 발명에 따르는 펩티드는 분리된 펩티드이다.
한 구체예에서, 본 발명의 펩티드는 비-자연 발생한 펩티드이며, 자연 발생한 단백질 (IL1RA)로부터 유도된다. 그것은 한 구체예에서 합성에 의해 만들어진다.
특정 구체예에서, 본 발명의 펩티드는 100 Da 내지 5000 Da, 예를 들어, 100 Da 내지 250 Da, 예를 들어, 250 Da 내지 500 Da, 예를 들어, 500 Da 내지 750 Da, 예를 들어, 750 Da 내지 1000 Da, 예를 들어, 1000 Da 내지 1500 Da, 예를 들어, 1500 Da 내지 2000 Da, 예를 들어, 2000 Da 내지 3000 Da, 예를 들어, 3000 Da 내지 4000 Da, 예를 들어, 4000 Da 내지 5000 Da의 범위의 분자량을 갖는다.
본 발명의 양태는 약으로 사용되는 본 발명에 따르는 펩티드를 제공하는 것이다.
합성 조제물
펩티드의 합성 생산을 위한 방법은 업계에 잘 알려져 있다. 합성 펩티드를 생산하기 위해 상세한 설명뿐만 아니라 실제적 조언은 Synthetic Peptides: A User's Guide (Advances in Molecular Biology), Grant G. A. ed., Oxford University Press, 2002, 또는 Pharmaceutical Formulation: Development of Peptides and Proteins, Frokjaer and Hovgaard eds., Taylor and Francis, 1999에서 발견될 수도 있다.
본 발명에 따르는 펩티드는 모노머, 다이머 또는 테트라머로서 합성될 수도 있다 (>80% 순도, Schafer-N, Copenhagen, Denmark). 다이머 및 테트라머는 각각 2개 및 4개의 사슬로 구성되며, 한 구체예에서, 리신 백본에 커플링된다.
한 구체예에서, 본 발명의 펩티드 서열은 합성에 의해, 특히, 서열 보조 펩티드 합성 (SAPS) 방법 또는 고체상 펩티드 합성 (SPPS)에 의해 생산된다. 이것은 당업자에게 잘 알려져 있다.
펩티드는 측쇄 기능성에 적합한 N-a-아미노 보호기 및 일반적인 보호기로서 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐 (Fmoc) 또는 3차-부틸옥시카르보닐 (Boc)을 사용하여 완전 자동화된 펩티드 합성기에서 배치 방식으로 합성될 수도 있다.
역상 HPLC에 의한 정제 후, 펩티드는, 예를 들어, 고리형 또는 C- 또는 N-말단 변형된 이소폼를 얻기 위해 추가로 가공될 수도 있다. 고리화 및 말단 변형의 방법은 업계에 잘 알려져 있다.
본 발명의 화합물
본 발명의 양태는 본 발명에 따르는 펩티드를 포함하거나 이로 구성된 화합물을 제공하는 것이다. 한 구체예에서, 상기 펩티드는 모노머 (즉, 펩티드의 1개의 카피를 포함)로서 조제되는 반면에, 또 다른 구체예에서는, 상기 펩티드가 멀티머로서 조제된다.
본 발명의 양태는 약으로 사용되는 본 발명의 화합물을 제공하는 것이다.
멀티머 화합물
본 발명의 펩티드 서열은 화학 결합에 의해 또는 결합자 기를 통해 본 발명의 또 다른 (동일한 또는 동일하지 않은) 펩티드 서열에 연결될 수도 있다. 일부 구체예에서, 본 발명의 펩티드는 모노머의 올리고머 또는 멀티머로서 조제될 수도 있으며, 각각의 모노머는 여기에서 상기 정의된 펩티드 서열과 같다.
따라서, 본 발명에 따라 멀티머 화합물은 본 발명의 둘 이상의 펩티드 서열을 포함하는 폴리머일 수도 있고, 상기 펩티드 서열은 동일하거나 동일하지 않으며, 적어도 둘 이상의 펩티드 서열 중 하나는 본 발명에 따르는 펩티드이다. 바람직하게, 펩티드 서열 둘 다는 본 발명에 따르는 펩티드이다.
한 구체예에서, 멀티머 화합물은 본 발명에 따르는 2개의 펩티드를 포함하는 다이머이고, 상기 2개의 펩티드는 서로 동일하거나 동일하지 않다.
또 다른 구체예에서, 멀티머 화합물은 본 발명에 따르는 셋 또는 네 개의 펩티드를 포함하는, 트리머 또는 테트라머이고, 상기 펩티드는 서로 동일하거나 동일하지 않다.
한 구체예에서, 멀티머 화합물은 덴드리머, 예를 들어, 테트라머 덴드리머이다. 덴드리머는 반복적으로 분지되고, 거의 구형인 큰 분자이며, 전형적으로 코어 주위에서 평행이고, 종종 균형 3차원 형태를 취한다. 본 발명에 따르는 덴드리머는 4개의 펩티드, 8개의 펩티드, 16개의 펩티드, 또는 32개의 펩티드; 바람직하게 4개의 펩티드 (즉, 테트라머 덴드리머)를 포함할 수도 있다.
일부 특정 구체예에서, 멀티머 화합물은 본 발명 (다이머)의 2개의 동일한 아미노산 서열을 포함할 수도 있거나 화합물은 본 발명의 아미노산 서열의 4개의 동일한 카피 (테트라머 덴드리머)를 포함할 수도 있다.
본 발명에 따르는 멀티머는 펩티드 결합 또는 결합자 기를 통해 둘 이상의 펩티드 모노머를 결합시킴으로써 만들어질 수도 있다. 그것들은 리신 백본, 예를 들어, 리신 잔기 (단일 리신 잔기)에 결합되거나, 폴리머 담체, 예를 들어, 단백질 담체에 커플링될 수도 있다. 상기 결합자 기는 한 구체예에서 복수의 리신 잔기, 예를 들어, 복수의 리신 잔기를 가진 코어 모이어티를 포함한다. 하지만, 당업자에게 알려진 펩티드 모노머의 어떤 다른 결합이 구상될 수도 있다.
결합은 한 구체예에서 펩티드 모노머의 N-말단 또는 C-말단 끝에서 발생한다.
방법
본 발명의 양태는 신경 돌기 돌출을 자극하고 및/또는 뉴런의 생존을 촉진하는 방법을 제공하는 것이고, 상기 방법은 본 발명에 따르는 펩티드, 화합물, 또는 조성물의 유효량을 이들이 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함한다.
또한 IL1RI의 IL-1에 결합하는 것을 방해하는 방법이 개시되고, 상기 방법은 본 발명에 따르는 펩티드, 화합물, 또는 조성물의 유효량을 이들이 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함한다.
바람직한 구체예에서, 상기 개체는 사람, 예를 들어, 퇴행성 신경 질환에 걸린 사람이다.
본 발명은 또한 여기에 설명된 펩티드에 대한 결합 파트너를 확인하는 방법과 관련되고, 상기 방법은 폴리펩티드를 추출하고 상기 결합 파트너를 분리하는 단계를 포함한다.
약학적 제형
본 발명의 펩티드 또는 화합물이 원료 화학 물질 (또는 펩티드)로서 투여되는 것이 가능한 한편, 때로는 그것들을 약학적 제형의 형태로 제공하는 것이 바람직하다. 이러한 약학적 제형은 약학적 조성물 또는 약학적으로 허용 가능한 또는 안전한 조성물로서 나타날 수도 있다.
따라서, 본 발명은 추가로 약학적 제형을 제공하며, 이것은 본 발명의 펩티드 또는 화합물, 또는 약학적으로 허용 가능한 염 또는 이들의 에스테르, 및 약학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 희석제를 포함한다. 약학적 제형은, 예를 들어, Remington: The Science and Practice of Pharmacy 2005, Lippincott, Williams & Wilkins에 설명된 통상적인 기술에 의해 제조될 수도 있다.
약학적으로 허용 가능한 담체는 고체 또는 액체일 수 있다. 고체 형태 조제물은 분말, 타블렛, 알약, 캡슐, 카시에 (cachet), 좌약, 및 분산성 과립을 포함한다. 고체 담체는 희석제, 방향제, 가용화제, 윤활제, 현탁화제, 결합제, 보존제, 습윤제, 타블렛 분해제, 또는 캡슐화 물질로도 작용할 수 있는 하나 이상의 첨가제일 수 있다.
고체 담체의 예는 락토스, 테라 알바 (terra alba), 수크로스, 시클로덱스트린, 활석, 젤라틴, 아가, 펙틴, 아카시아, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 또는 셀룰로스의 저급 알킬 에테르이다. 액체 담체의 예는 시럽, 땅콩 오일, 올리브 오일, 인지질, 지방산, 지방산 아민, 폴리옥시에틸렌, 물, 식염수 또는 글루코스 용액이다. 유사하게, 담체 또는 희석제는 업계에 알려진 어떤 지속적인 방출 물질,예를 들어, 단독 또는 왁스와 혼합된, 글리세롤 모노스테아레이트 또는 글리세롤 디스테아레이트를 포함할 수도 있다.
또한 사용 직전에 액체 형태 조제물로 전환되는 고체 형태 조제물이 포함된다. 이러한 액체 형태는 용액, 현탁액, 에멀젼을 포함한다. 이들 조제물은, 활성 성분 외에, 색료, 풍미, 안정화제, 버퍼, 인조 및 천연 감미료, 분산제, 점증제, 가용화제, 등을 함유할 수도 있다.
본 발명의 화합물은 비경구 투여용으로 조제될 수도 있고 선택적으로 추가된 보존제와 함께, 앰플, 미리 채워진 주사기, 소량 투입 또는 다회수 투여 용기의 단위 투여 형태로 제공될 수도 있다. 조성물은 유성 또는 수성 비히클 (vehicle) 중 현탁액, 용액, 또는 에멀젼, 예를 들어, 수성 폴리에틸렌 글리콜 중의 용액과 같은 형태를 취할 수도 있다.
유성 또는 비-수성 담체, 희석제, 용매 또는 비히클의 예는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일 (예를 들어, 올리브 오일), 및 주사 가능한 유기 에스테르 (예를 들어, 에틸 올레에이트)를 포함하고, 보존제, 습윤제, 에멀젼화제 또는 현탁화제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 약제를 함유할 수도 있다. 대안으로, 활성 성분은 무균 고체의 무균성 분리에 의해 또는 적합한 비히클, 예를 들어, 무균 피로겐 없는 물과 함께 사용 전에 구성용 용액으로부터 동결건조에 의해 얻어진, 분말 형태일 수도 있다.
본 발명의 화합물은 또한 국부 전달을 위해 조제될 수도 있다. 국부 투여되는 영역은 피부 표면 및 또한 질, 직장, 코, 입, 목구멍의 점막 조직을 포함한다. 국부 제형은 국부 투여에 맞는 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수도 있다. 따라서 조성물은, 예를 들어, 현탁액, 용액, 연고, 로션, 성윤활제, 크림, 포말, 에어로졸, 스프레이, 좌약, 임플란트 (implant), 흡입제, 타블렛, 캡슐, 분말, 시럽, 밤 (balm) 또는 로젠지 (lozenge)의 형태를 취할 수도 있다.
여기에 설명된 약학적 제형은 경피로 투여될 수 있다. 경피 투여는 전형적으로 약물의 환자의 체순환으로 피부를 통해 통과되는 화합물의 전달을 을 수반한다. 피부 부위는 경피로 약물이 투여되는 해부학적 영역을 포함하고 팔뚝, 배, 가슴, 등, 엉덩이, 유두의 영역, 등을 포함한다.
경피성 전달은 화합물의 공급원을 장시간 동안 환자의 피부에 노출시킴으로써 달성된다. 경피성 패치는 신체에 약학적 약제-화학적 변형자 복합체의 통제된 전달을 제공하는 추가된 이점을 갖는다. 이러한 투약 형태는 약학적 약제-화학적 변형자 복합체를 용해시키거나, 분산시키거나, 그렇지 않으면 적절한 배지, 예를 들어, an 엘라스토머 매트릭스 물질에 통합시킴으로써 만들어질 수 있다. 흡수 인핸서는 또한 피부를 통한 화합물의 유동을 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 이러한 유동의 속도는 속도 조절 막을 제공하거나 폴리머 매트릭스 또는 겔에 화합물을 분산시킴으로써 조절될 수 있다. 예를 들어, 간단한 접착 패치가 흡음제 및 아크릴레이트 접착제로부터 제조될 수 있다.
본 발명에 따르는 로션은 또한 눈에 도포에 적합한 것들을 포함한다. 눈 로션은 선택적으로 살박테리아제를 함유하는 무균 수용액을 포함할 수도 있다.
코, 폐 및/또는 기관지 투여에 사용되는 제형은 에어로졸화된 투여가 실제로 비강, 기관지 관 또는 폐의 점막에 도달하는 것을 확인하기 위해 에어로졸로서 정상적으로 투여된다. 용어 "에어로졸 입자"가 코, 기관지 또는 폐 투여에 적합한 액체 또는 고체 입자를 설명하기 위해 코, 기관지 또는 폐 투여에 적합한 액체 또는 고체 입자를 설명하기 위해 여기에 사용된다.
전형적으로 에어로즈는 폐 및/또는 기관지 전달을 위해 설계된 분무기, 정량흡입기, 및 분말 흡입기를 포함하지만 이에 제한되지 않는 기계적 장치의 사용에 의해 투여된다. 전달 장치의 구성에 관하여, 스프레이 병, 분무화, 원자화 또는 액체 제형의 펌프 에어로졸화, 및 분말 제형의 에어로졸화를 포함하지만, 이에 제한되지않는, 업계에 알려진 에어로졸화의 어떤 형태도 사용될 수 있다.
액체 에어로졸 제형은 일반적으로 약학적으로 허용 가능한 희석제 중에 본 발명의 화합물을 함유한다. 약학적으로 허용 가능한 희석제는 무균 물, 식염수, 완충된 식염수, 덱스트로스 용액, 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
분말 흡입 장치로부터 분산되는 제형은 정상적으로 본 발명의 약학적 조성물 (또는 유도체)를 함유한 미분된 분말을 포함할 것이고 또한 장치로부터 분말의 분산을 가능하게 하는 양으로 증량제, 예를 들어, 락토스, 소르비톨, 수크로스, 또는 만니톨을 포함할 수도 있다. 흡입용 분말 제형은 또한 분말이 채워진 캡슐, 특히 이것의 물질이 합성 플라스틱 중에서 선택되는 캡슐을 사용하여 조제될 수도 있다.
제형은 이용된 장치의 타입으로 조제되고 치료에 유용하고 당업자에게 알려진 보통의 희석제, 보조제 및/또는 담체 이외에, 적절한 추진 물질의 사용을 수반할 수도 있다. 추진제는 업계에 일반적으로 사용되는 어떤 추진제일 수도 있다. 이러한 유용한 추진제의 특정 비-제한 예는 클로로플루오로카본, 히드로플루오로카본, 히드로클로로-플루오로카본, 또는 히드로카본이다.
본 구체예의 제형은 또한 pH 유지, 용액 안정화, 또는 삼투압 조절에 유용한 다른 약제를 포함한다.
본 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염은 또한, 그것들이 제조될 수 있는 경우, 본 발명에 의해 커버되기 위한 것이다. 이들 염은 약학적 사용에 대한 그것들의 적용시 허용 가능한 것일 것이다. 그것에 의해 염은 모체 화합물의 생물학적 활성을 유지할 것이고 질환의 치료에서 그것의 적용 및 사용시 부적당하거나 해로운 효과를 갖지 않는다는 것을 의미한다.
약학적으로 허용 가능한 염은 표준 방식으로 제조된다. 모체 화합물이 염기면, 적합한 용매에 유기 또는 무기산의 초과량이 처리된다. 모체 화합물이 산이면, 적합한 용매에 무기 또는 유기염기가 처리된다.
본 발명의 화합물은 구강, 직장, 또는 비경구 (피하를 포함) 경로에 의해, 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제와 동시에, 동시에, 또는 이와 함께, 이들의 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속의 형태로, 특히 및 바람직하게 유효량의 이들의 약학적 조성물의 형태로 투여될 수도 있다.
본 발명의 약학적 조성물에 사용되는 약학적으로 허용 가능한 산 추가 염의 예는 미네랄 산, 예를 들어, 염산, 브롬화수소산, 인산, 메타인산, 질산 및 황산, 유기산, 예를 들어, 주석산, 아세트산 시트르산, 말레산, 젖산,푸마르산, 벤조산, 글리콜산, 글루코산, 숙신산, p-톨루엔술폰산, 및 아릴술폰산으로부터 유도된 것들을 포함한다.
투약
투약 필요 요건은 이용된 특정 약물 조성물, 투여의 경로 및 치료되는 특정 대상체에 따라 다를 것이다. 화합물의 개개의 투약의 최적의 양 및 간격은 치료되는 질병의 특성 및 정도, 투여의 형태, 경로 및 부위, 및 치료되는 특정 환자에 의해 결정될 것이고, 이러한 최적인 것은 통상적인 기술에 의해 결정될 수 있다는 것이 또한 당업자에 의해 인식될 것이다. 치료의 최적의 과정, 즉, 한정된 수의 날 동안 하루 당 제공된 화합물의 투여의 수가 통상적인 과정의 치료 결정 테스트를 사용하여 확인될 수 있다는 것이 당업자에 의해 인정될 것이다.
매일 비경구 투약 요법은 총 체중의 약 0.1 내지 약 100 mg/kg, 예를 들어, 총 체중의 0.1 내지 1 mg/kg, 1 내지 5 mg/kg, 5 내지 10 mg/kg, 10 내지 15 mg/kg, 15 내지 20 mg/kg, 20 내지 30 mg/kg, 30 내지 40 mg/kg, 40 내지 50 mg/kg, 50 내지 60 mg/kg, 60 내지 70 mg/kg, 70 내지 80 mg/kg, 80 내지 90 mg/kg 및 90 내지 100 mg/kg의 범위일 수도 있다. 투약은 여기에서 실시예 7에 설명된 모델을 사용하여 평가될 수도 있으며, 이것에서 3.3 또는 10 mg/kg의 매일 투약량이 쥐에 사용된다.
투약량은 하루에 한 번, 하루에 한 번보다 더 높거나 낮은 빈도로 투여될 수도 있다. 예를 들어, 투약량은 하루에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10번 투여될 수도 있다. 대안으로, 투약량은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14일의 간격으로 투여될 수도 있다.
여기에 사용된 용어 "단위 투약 형태"는 사람 및 동물 대상체에 대한 단일 투약으로서 적합한 물리적으로 별개의 단위를 나타내며, 각각의 단위는, 단독으로 또는 다른 약제와 조합된, 약학적으로 허용 가능한 희석제, 담체, 또는 비히클과 함께 원하는 효과를 생산하기 위해 충분한 양으로 계산된 화합물의 미리 결정된 양을 함유한다.
본 발명의 단위 투약 형태에 대한 설명은 특정 화합물 또는 이용된 화합물 및 성취되는 효과, 뿐만 아니라 숙주에서 각 화합물과 관련된 약역학에 의존한다. 투여된 투여량은 "유효량" 또는 개개의 환자에서 "효과적인 수준"을 성취하기 위해 필요한 양이어야 한다.
투여에 대한 바람직한 종료점으로서 "효과적인 수준"이 사용될 때, 실제 투여량 및 계획은 약물동력학, 약물 분포, 및 신진대사에서 개체 간 차이에 의존하여 달라질 수 있다. "효과적인 수준"은, 예를 들어, 본 발명에 따르는 화합물의 농도에 해당하는, 환자에서 요구되는 혈액 또는 조직 수준으로서 정의될 수 있다.
투여
화합물을 혈류로 도입하여 원하는 작용의 부위를 궁극적으로 표적화하기 위해 투여의 주요 경로는 구강 및 비경구이다. 구강 투여는 위장관에서 분해로 인해 본 발명의 단백질 화합물에 대하여 덜 바람직하다. 비경구 투여는 화합물이 간에서 첫 번째 통과 분해를 피하는, 구강/장 내 경로가 아닌 어떤 투여 경로도 된다. 따라서, 비경구 투여는 어떤 주사 및 투입, 예를 들어, 볼루스 (bolus) 주사 또는 지속적인 투입, 예를 들어, 정맥 내 투여, 근육 내 투여 및 피하 투여를 포함한다. 게다가, 비경구 투여는 흡입 및 국부적 투여를 포함한다.
펩티드가 섭취되면 분해에 민감하기 때문에, 비경구 투여가 바람직하다. 본 발명의 펩티드는 응집에 대한 가능성을 나타내지 않는 높은 용해도를 가지며, 그것이, 예를 들어, 비강 내 및 피하에 대하여 조제되고 투여되는 것을 허용한다.
동시 투여
한 구체예에서 본 발명은 하나 이상의 다른 생활성제와 함께 본 발명에 따르는 펩티드, 화합물 또는 조성물의 동시 투여와 관련된다.
한 구체예에서 본 발명은 하나 이상의 항-염증제와 함께 본 발명에 따르는 펩티드, 화합물 또는 조성물의 동시 투여와 관련된다.
한 구체예에서 본 발명은 하나 이상의 항-류머티스성 약물과 함께 본 발명에 따르는 펩티드, 화합물 또는 조성물의 동시 투여와 관련된다.
한 구체예에서 본 발명은 하나 이상의 항-퇴행성 신경 질환 약물과 함께 본 발명에 따르는 펩티드, 화합물 또는 조성물의 동시 투여와 관련된다.
그 다음, 동시 투여는 환자의 치료를 최적화하도록 표적화되어야 한다; 즉, 류머티스성 관절염에 걸린 환자에서, 이 특정 목적에 대하여 승인된 약물은 환자에 대한 치료 결과를 최적화하고 개선하기 위해 본 발명에 따르는 펩티드, 화합물 또는 조성물로 보충될 수도 있다. 이것은 특정 목적을 위한 승인된 약물이 예방적, 개선적 또는 치유적인지 여부에 상관없다.
성분의 키트
본 발명은 또한 상기 설명된 펩티드, 화합물 또는 조성물 중 하나 이상, 및 적어도 한 추가 성분을 포함하는 성분의 키트와 관련된다. 상기 추가 성분은 염증성 질병, 진성 당뇨병, 퇴행성 신경 질환 등의 치료를 위한 약물일 수도 있다.
염증성 장애
염증과 관련된 이상은 다양한 사람 질환을 기초로 하는 장애의 큰, 관련 없는 그룹을 포함한다. 면역 시스템은 종종 염증성 장애와 관련되고, 알레르기성 반응 및 일부 근 질환 둘 다에서 입증되며, 많은 면역 시스템 장애는 비정상적인 염증을 발생시킨다. 염증성 공정에 병인학적 기원이 있는 비-면역 질환은 암, 아테롬성 동맥 경화증 (atherosclerosis), 및 허혈성 심장 질환 (ischaemic heart disease)을 포함하는 것으로 생각된다. 매우 다양한 단백질이 염증에 수반되고, 그것들 중 어떤 하나는 그 단백질의 정상적인 기능 및 발현을 손상시키거나 그렇지 않으면 해제된 유전적 돌연변이에 대하여 열려있다.
유기체로 감염의 발생 직후, IL-1α는 면역 시스템 반응 공정의 세트를 활성화한다. 특히, IL-1은 섬유아세포 증식을 자극하고; 프로테아제의 합성, 이후 근육 단백질 가수 분해, 혈액에서 모든 타입의 아미노산의 방출을 유도하고 급성 단계 단백질 합성을 자극하고; 혈액에서 구리를 증가시키고 아연 및 철 농도를 감소시킴으로써 혈장의 금속 이온 함량을 변화시키고; 혈액 호중구 세포를 증가시키고 림프구 림프구 증식을 활성화하고 열을 유발한다.
본 발명의 양태는 염증성 장애, 특히, IL-1이 주요한 역할을 하는 염증성 장애를 치료하는 약의 제조를 위해 본 발명에 따르는 펩티드를 제공하는 것이다.
본 발명의 양태는 또한 염증성 장애, 특히, IL-1이 주요한 역할을 하는 염증성 장애의 치료에 사용되는 본 발명에 따르는 펩티드를 제공하는 것이다.
본 발명의 추가의 양태에서, 본 발명에 따르는 펩티드를 이들이 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 장애, 예를 들어, IL-1이 주요한 역할을 하는 염증성 장애를 치료하는 방법이 제공된다.
본 발명의 한 구체예에서, 여드름 (Acne vulgaris), 천식 (Asthma), 아테롬성 동맥 경화증, 자가 면역 질환 (Autoimmune disease), 베체트 병 (Behcet's disease), 만성 염증, 만성 전립선염 (Chronic prostatitis), 피부염 (Dermatitis), 통풍 (Gout), 사구체 신염 (Glumerulo nephritis), 과민증 (Hypersensitive) [알레르기성 천식, 알레르기성 결막염 (conjunctivitis), 알레르기성 비염 (rhinitis) (건초열 (hay fever)), 과민증 (Anaphylaxis), 혈관부종 (Angioedema), 두드러기 (Urticaria) (두드러기 (hives)), 산호성 백혈구 증가증 (eosinophilia), 및 페니실린 및 세팔로스포린에 대한 반응을 포함하는 타입 1 (즉각성, 또는 아토피성, 또는 과민성); 자가 면역성 용혈성 빈혈 (Autoimmune hemolytic anemia), 구드패스츄어 증후군 (Goodpasture's syndrome), 간염 (Hepatitis), IBS (과민성 대장 질환 (irritable bowel disease)), 소아기 특발성 관절염 (Juvenile idiopathic arthritis; JIA), 수포창 (Pemphigus), 악성 빈혈 (Pernicious anemia) (자가 면역인 경우), 건선, 건선 관절염, 면역성 혈소판 감소증 (Immune thrombocytopenia), 수혈 반응, 하시모토 갑상선염 (Hashimoto's thyroiditis), 간질성 방광염 (Interstitial cystitis), 그레이브스 병 (Graves disease), 근 무력증 (Myastenia gravis), 류머티스성 열 (Rheumatic fever), 신생아 용혈성 질환 (Hemolytic disease of the newborn) 및 급성 이식 거부증을 포함하는 타입 2 (항체-의존적); 류머티스성 관절염, 면역 복합체 사구체 신염, 혈청병 (Serum sickness), 아급성 세균성 심내막염 (Subacute bacterial endocarditis), 말라리아 (malaria)의 증상, 전신 홍반성 루푸스 (Systemic lupus erythematosus; SLE), 아르투스 반응 (Arthus reaction), 파머 폐 및 다발성 결절성 다발 동맥염 (Farmer's lung and Polyarteritis nodosa)을 포함하는 타입 3 (면역 복합체); 접촉 피부염 (Contact dermatitis), 아토피성 피부염 (Atopic dermatitis) (습진 (eczema)), 측두 동맥염 (Temporal arteritis), 유육종증 (Sarcoidosis), 나병 (leprosy)의 증상, 폐결핵 (tuberculosis)의 증상, 전신성 경화증 (Systemic sclerosis), 망투 반응 (Mantoux test), 만성 소화 장애증 (Coeliac disease) 및 만성 이식 거부증을 포함하는 타입 4 (세포 매개 또는 지연 타입 과민증 (delayed-type hypersensitivity; DTH)], 염증성 대장 질환 (Inflammatory bowel diseases) [크론 병 (Crohn's disease), 궤양성 대장염 (Ulcerative colitis), 교원성 대장염 (collagenous colitis), 림프구성 대장염 (Lymphocytic colitis), 허혈성 대장염 (Ischaemic colitis), 전환 대장염 (Diversion colitis), 베체트 증후군 (Behcet's syndrome), 전염성 대장염 (Infective colitis) 및 부정성 대장염 (Indeterminate colitis) 포함], 근 질환 [피부 근염 (dermatomyositis), 다발성 근염 (Polymyositis), 및 봉입체 근염 (inclusion body myositis) 포함], 골반 내 염증 질환 (Pelvic inflammatory disease), 발 통풍 (Podagra), 허혈재관류 손상 (Reperfusion Injury), 류머티스성 관절염, 이식 거부증 (transpland rejection) 및 맥관염 (Vasculitis)으로 구성된 그룹으로부터 선택된 염증성 질환은 본 발명에 따르는 사용 또는 치료를 받을 수도 있다.
본 발명의 한 구체예에서, 아클로리드라 자가 면역성 만성 활동성 간염 (Achlorhydra Autoimmune Active Chronic hepatitis), 급성 산재성 뇌척수염 (Acute disseminated encephalomyelitis; ADEM), 급성 출혈성 백질뇌염 (Acute hemorrhagic leukoencephalitis), 애니슨 병 (Addison's disease), 무감마글로불린혈증 (Agammaglobulinemia), 알레르기 (Allergy), 전신 탈모증 (Alopecia universalis), 근위축성 측색 경화증 (Amyotrophic Lateral Sclerosis), 과민증, 강직성 척추염 (Ankylosing spondylitis), 항인지질 증후군 (Antiphospholipid Syndrome), 무형성 빈혈 (Aplastic anemia), 천식, 모세혈관 확장성 운동실조 (Ataxia-Telangiectasia), 자가 면역 질환, 자가 면역성 용혈성 빈혈 (Autoimmune haemolytic anemia), 자가 면역성 간염, 자가 면역성 난소염 (Autoimmune Oophoritis), 베체트 병, 소아 지방변증 (celiac disease)/만성 소화 장애증, 샤가스 병 (Chagas' disease), 크론 병, 만성 피로 증후군 (Chronic fatigue syndrome), 만성 육아종증 (Chronic Granulomatous Disease), 공유 변수 면역결핍 (Common Variable Immunodeficiency), 진성 당뇨병 타입 1, 디조지 증후군 (DiGeorge Syndrome), 자율신경 이상증 (Dysautonomia), 전자파 과민증 (Electrosensitivity), 자궁 내막증 (Endometriosis), 가족성 지중해열 (Familial Mediterranean Fever), 임신성 유천포창 (Gestational pemphigoid), 구드패스츄어 증후군, 이식편 대 숙주 병 (Graft vs Host Disease), 그레이브스 병, 귈랑-바레 증후군 (Guillain-Barre syndrome; GBS), 하시모토 병 (Hashimoto's disease), 화농성 한선염 (Hidradenitis suppurativa), HIV 감염, 고 IgM 증후군 (Hyper-IgM syndrome), 과민증, IgA 결핍, 특발성 혈소판 감소성 자반증 (Idiopathic thrombocytopenic purpura), IgG 서브클래스 결핍, 면역 복합체 질환 (Immune Complex Disease), 면역 시스템 질환 (Immune System Disease), 면역 결핍 증후군 (Immunologic Deficiency Syndrome), 장 방광염 (Intestinal cystitis), 가와사키 병 (Kawasaki's disease), 램버트-이튼 근무력 증후군 (Lambert-Eaton Myasthenic Syndrome), 라임 병 (Lyme disease), 림프 증식성 질환 (Lymphoproliferative Disorder), 혼합 결합조직 병 (Mixed connective tissue disease), 반상경피증 (Morphea), 화학물질 과민증 (Multiple Chemical Sensitivity), 다발성 경화증 (MS), 중증 근무력증 (Myasthenia gravis), 기면증 (Narcolepsy), 신경근 긴장증 (Neuromyotonia), 안구간대경련-근간대경련 증후군 (Opsoclonus myoclonus syndrome; OMS), 시신경염 (Optic neuritis), 오드 갑상선염 (Ord's thyroiditis), 수포창, 페르네시우스 빈혈 (Pernecious anemia), 다발성 근염, 다관절성 관절염 (polyarticular arthritis), 원발성 담즙성 간경화 (Primary biliary cirrhosis), 건선, 건선성 관절염 (Psoriatic arthritis), 자반병 (Purpura), 류머티스성 관절염 (RA), 라이터 증후군 (Reiter's syndrome), 삼터 증후군 (Samter's Syndrome), 유육종증, 정신분열증, 쇤라인-헤노흐 자반증 (Schoenlein-Henoch), 강피증 (Scleroderma), 선택성 IgA 결핍, 중증 복합형 면역 결핍증 (Severe Combined Immunodeficiency; SCID), 빌딩 질환 증후군 (Sick Building Syndrome), 쇼그렌 증후군 (Sjogren's Syndrome), 전신 홍반성 루푸스 (SLE), 다카야수 동맥염 (Takayasu's arteritis) (거대 세포 동맥염 (giant cell arteritis)), 궤양성 대장염, 포도막염 (Uveitis), 백반증 (Vitiligo), 외음부통 (Vulvodynia), 온난 자가 면역성 용혈성 빈혈, 베게너 육아종증 (Wegener's granulomatosis) 및 비스코트-올드리히 증후군 (Wiskott-Aldrich Syndrome)으로 구성된 그룹으로부터 선택된 면역 질환은 본 발명에 따르는 사용 또는 치료를 받을 수도 있다.
류머티스성 관절염
본 발명의 양태는 류머티스성 관절염의 치료에 사용되는 본 발명에 따르는 펩티드를 제공한다.
본 발명의 양태는 또한 류머티스성 관절염의 치료하는 약의 제조를 위해 본 발명에 따르는 펩티드를 제공한다.
본 발명의 추가의 양태에서, 본 발명에 따르는 펩티드를 이들이 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 류머티스성 관절염을 치료하는 방법이 제공된다.
류머티스성 관절염 (RA)은 많은 조직 및 기관에 영향을 미칠 수도 있지만, 주로 윤활 관절을 공격하는 만성, 전신성 염증성 장애이다. 병리학적 과정은 활액 세포의 과형성, 과도한 관절 낭액, 및 활액막에서 판누스 (pannus) (유관속 조직 또는 육아 조직의 이상층)의 발달에 부차적인 활액막의 염증성 반응 (활액막염 (synovitis))을 생산한다. 질환 과정의 병리학은 종종 관절 연골의 파괴 및 관절의 관절 유착증 (ankylosis) (굳음)으로 이어진다. 류머티스성 관절염은 또한 폐, 심막, 흉막, 및 공막, 및 또한 결절성 병소에서, 가장 일반적으로 피하 조직에서 확산된 염증을 생산할 수 있다. 류머티스성 관절염의 원인이 알려져 있지 않지만, 자가 면역은 그것의 만성 및 진행에서 중심 역할을 하고, RA는 전신성 자가 면역 질환으로 생각된다.
세게 인구의 약 1%가 류머티스성 관절염에 의해 고통받으며, 여자가 남자보다 3배 더 많다. 시작은 40 내지 50의 나이에서 가장 빈번하지만, 어떤 나이의 사람도 영향을 받을 수 있다. 그것은 충분히 처리되지 않으면 기능 및 이동성의 상당한 손실로 이어질 수 있는, 불능화되고 고통스러운 질병일 수 있다. 그것은 증상, 물리적 검사, 방사선 사진 (X-선) 및 연구실에 기초하여 만들어진 임상적 진단이다
요즘 다양한 치료가 이용 가능하다. 비-약학적 치료는 물리 요법, 오르소 (orthos), 작업 요법 및 영양 치료를 포함하지만 관절 파괴의 진행을 멈추지 않는다.
무통증 (Analgesia) 및 스테로이드를 포함하는, 항-염증제가 증상을 억제하기 위해 사용되는 한편, 질환 변형 항 류머티스 약 (DMARD)은 근본적인 면역 과정을 억제하거나 중단하고 장기간 손상을 방지하기 위해 필요하다. 최근에, 생물학의 새로운 그룹들이 치료 옵션을 증가시켰다.
통풍/발 통풍
본 발명의 양태는 통풍 및/또는 발 통풍의 치료에 사용되는 본 발명에 따르는 펩티드를 제공한다.
본 발명의 양태는 또한 통풍 및/또는 발 통풍을 치료하는 약의 제조를 위해 본 발명에 따르는 펩티드를 제공한다.
본 발명의 추가의 양태는 본 발명에 따르는 펩티드를 이들이 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 통풍 및/또는 발 통풍을 치료하는 방법을 제공한다.
통풍 (그것이 엄지발가락을 수반할 때 발 통풍으로도 알려짐)은 보통 급성 염증성 관절염의 재발성 발병을 특징으로 하는 질병 - 빨갛고, 연하고, 뜨겁고, 부은 관절이다. 엄지발가락 아래의 종족골-지골 관절은 가장 일반적으로 영향을 받는다 (경우의 ~50%). 하지만, 그것은 또한 통풍결절 (모노나트륨 요산염 결정의 침착), 신장 결석, 또는 요산염 신장병으로서 존재할 수도 있다. 그것은 결정화되고 관절, 힘줄, 주변 조직에 침착되는 혈액에서 요산의 증가된 수준에 의해 유발된다. 진단은 관절액에서 특유의 결정의 시각화에 의해 임상적으로 확인된다.
서양 인구의 대략 1-2%에 그들의 삶의 어떤 점에서 영향을 미치는 통풍은 수 십년 동안 빈도가 증가하였다. 증가는 인구에서 위험 인자, 예를 들어, 대사 증후군, 더 긴 기대 수명 및 식단의 변화의 증가 때문인 것으로 생각된다.
현재 치료 양상은 증상을 개선하기 위해 비스테로이드 항-염증제 (NSAID), 스테로이드, 또는 콜히친을 포함한다. 급성 발병이 가라앉으면, 요산의 수준은 보통 생활 방식 변화를 통해 더 낮아지고, 빈번하게 발병하는 이들에서 알로퓨리놀 또는 프로베니시드는 장기간 방지를 제공한다.
JIA (소아기 특발성 관절염)
본 발명의 양태는 JIA의 치료에 사용되는 본 발명에 따르는 펩티드를 제공한다.
본 발명의 양태는 또한 JIA를 치료하는 약의 제조를 위해 본 발명에 따르는 펩티드를 제공한다.
본 발명의 추가의 양태는 본 발명에 따르는 펩티드를 이들이 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함하는, JIA를 치료하는 방법을 제공한다.
소아기 특발성 관절염 (JIA)은 아이들의 지속성 관절염의 가장 일반적인 형태이다. 이 맥락에서 소아기는 16살 이전에 발병을 나타내고, 특발성은 정의된 원인이 없는 상태를 나타내고, 관절염은 관절의 활막의 염증이다. JIA는 소아기에 나타난 관절염의 서브세트이며, 이것은 일시적이고 자기 한정성이거나, 만성일 수도 있다. 그것은 일반적으로 어른에서 나타나는 관절염 (골관절염 (osteeoarthritis), 류머티스성 관절염), 및 만성 질병인 소아기에 존재할 수 있는 다른 타입의 관절염 (예를 들어, 건선성 관절염 및 강직성 척추염)과 크게 다르다. JIA는 자가 면역 질환이다.
진성 당뇨병
본 발명의 양태는 진성 당뇨병의 치료에 사용되는 본 발명에 따르는 펩티드를 제공한다.
본 발명의 양태는 또한 진성 당뇨병을 치료하는 약의 제조를 위해 본 발명에 따르는 펩티드를 제공한다.
본 발명의 추가의 양태는 본 발명에 따르는 펩티드를 이들이 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 진성 당뇨병을 치료하는 방법을 제공한다.
한 구체예에서, 상기 진성 당뇨병은 진성 당뇨병 타입 I이다. 또 다른 구체예에서, 진성 당뇨병은 진성 당뇨병 타입 II이다.
진성 당뇨병은 신체가 충분한 인슐린을 생산하지 않기 때문에, 또는 세포가 생산된 인슐린에 반응하지 않기 때문에 사람이 높은 혈당을 갖는 대사 질환의 그룹이다. 이 고혈당은 다뇨증 (polyuria) (빈번한 배뇨), 조갈증 (polydipsia) (증가된 갈증) 및 다식증 (polyphagia) (증가된 허기)의 고전적인 증상을 생산한다.
● 타입 1 당뇨병: 신체의 인슐린 생산의 실패, 및 현재 인슐린을 주사하는 것이 필요한 사람으로부터 발생한다 (단기, 및 소아기 당뇨병에 대하여 인슐린-의존적 진성 당뇨병, IDDM으로도 나타남).
타입 1 진성 당뇨병은 인슐린 결핍으로 이어지는, 췌장의 랑게르한스 섬 (islets of Langerhans)의 인슐린을 생산하는 베타 세포의 손실을 특징으로 한다. 이 타입의 당뇨병은 면역 매개 또는 특발성으로 추가로 분류될 수 있다. 베타 세포 손실이 T-세포 매개 자가 면역성 발병인 경우, 타입 1 당뇨병의 대부분은 면역 매개 성질이다.
● 타입 2 당뇨병: 가끔 완전한 인슐린 결핍과 함께, 인슐린 저항성, 세포가 인슐린을 적절하게 사용하는데 실패한 상태로부터 발생한다 (이전에 단기, 및 성인 발병 당뇨병에 대하여 비-인슐린 의존적 진성 당뇨병, NIDDM으로 나타남).
타입 2 진성 당뇨병은 상대적으로 감소된 인슐린 분비와 결합될 수도 있는 인슐린 저항을 특징으로 한다. 신체 조직의 인슐린에 대한 결함이 있는 반응성은 인슐린 수용체를 수반하는 것으로 생각된다. 타입 2 당뇨병은 주로 생활 방식 요소 및 유전 때문이다.
● 임신성 당뇨병: 이전에 당뇨병에 걸린 적이 없는 임신한 여성이 임신 중에 높은 혈당 수준을 가질 때이다. 그것은 타입 2 DM의 발달에 선행할 수도 있다.
진성 당뇨병의 다른 형태는 선천성 당뇨병을 포함하며, 이것은 인슐린 분비의 유전적 결함, 낭포성 섬유종 (cystic fibrosis)-관련 당뇨병, 글루코코르티코이드의 높은 투여량에 의해 유발된 스테로이드성 당뇨병, 및 여러 형태의 단성 당뇨병 때문이다.
적절한 치료를 하지 않는 당뇨병은 많은 합병증을 유발할 수 있다. 급성 합병증은 저혈당증 (hypoglycemia), 당뇨성 캐토애시도시스 (diabetic ketoacidosis), 또는 비케토시스성 고삼투압 코마 (nonketotic hyperosmolar coma)를 포함한다. 심각한 장기간 합병증은 심혈관 질환 (cardiovascular disease), 만성 신부전 (chronic renal failure) 및 망막 손상 (retinal damage)을 포함한다. 따라서 당뇨병의 충분한 치료, 뿐만 아니라 혈압 조절 및 흡연 중단 및 건강한 체중의 유지와 같은 생활 방식 요소가 중요하다.
2000년에 세계적으로 17억 천 만 명, 또는 인구 중 2.8%이 당뇨병으로부터 고통받고 있다. 타입 2 당뇨병은 지금까지 가장 일반적이며, 미국 당뇨병 인구의 90 내지 95%에 영향을 미친다.
베체트 병
본 발명의 양태는 베체트 병의 치료에 사용되는 본 발명에 따르는 펩티드를 제공한다.
본 발명의 양태는 또한 베체트 병을 치료하는 약의 제조를 위해 본 발명에 따르는 펩티드를 제공한다.
본 발명의 추가의 양태는 본 발명에 따르는 펩티드를 이들이 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 베체트 병을 치료하는 방법을 제공한다.
베체트 병은 종종 점막 궤양 (mucous membrane ulceration), 및 안침범 (ocular involvement)을 제공하는, 희귀한, 전신성, 맥관염 (또는 혈관의 염증)의 형태이다. 안침범은 후방 포도막염, 전방 포도막염, 또는 망막 맥관염 (retinal vasculitis)의 형태일 수 있다. 전신성 질환으로서, 그것은 또한 위장관, 폐, 근골격, 및 신경학적 시스템과 같은 내장 기관을 수반한다. 이 증후군은 치명적일 수 있고; 죽음은 혈관 동맥류 (vascular aneurysm)의 복잡한 파열, 또는 극심한 신경계 합병증에 의해 유발될 수 있고, 그러므로 의학적 치료가 필요하다.
퇴행성 신경 질환
본 발명의 양태는 퇴행성 신경 장애의 치료에 사용되는 본 발명에 따르는 펩티드를 제공한다.
본 발명의 양태는 또한 퇴행성 신경 장애를 치료하는 약의 제조를 위해 본 발명에 따르는 펩티드를 제공한다.
본 발명의 추가의 양태는 본 발명에 따르는 펩티드를 이들이 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 퇴행성 신경 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
특히, 상기 퇴행성 신경 장애는 신경-염증성 성분을 갖고 알츠하이머 병, 파킨슨 병, 헌팅턴 병 및 다발성 경화증으로 구성된 그룹으로부터 선택된다. 특히, 상기 퇴행성 신경 장애는 IL-1이 주요한 역할을 하는 것들일 수도 있다.
뇌는 정상적인 조건 하에서 면역학적으로 특수한 부위이다. 면역 반응의 억제 인자는 신경 전달 물질, 신경 호르몬, 신경 영양 인자, 항-염증성 인자, 및 부착 분자 또는 CD200을 통하는 세포-세포 접촉을 포함한다. 하지만, 단일 인자가 면역 조절을 완벽히 설명할 수 없다. 퇴행성 신경 질환에서 관찰된, 증가된 뇌의 면역 반응은 아마도 억제 신호를 무시하는 자극 신호를 반영한다. 하지만, 면역 반응의 억제는 퇴행성 질병의 뉴런에 대하여 항상 유익한 것은 아니다 (Chang et al., 2009). 따라서, 퇴행성 신경 질환의 치료적 간섭은 CNS에서 면역 세포/소교세포의 적절한 조절을 재확립하는데 도움이 될 것이다.
퇴행성 신경 질환은 고령화 사회에서 장애의 증가하는 원인이다. 알츠하이머 병 (AD)은 가장 일반적인 퇴행성 신경 장애이다. 세계적으로 연간 AD의 발생은 460만 건인 것으로 추정되며, 7초 마다 새로운 건이 발생한다. 2040년까지 세계적으로 8백만 건이 예상된다 (Massoud and Gauthier, 2010). 신경 퇴화; 중추 신경계 (CNS)에서 뉴런의 손실 및 축색 돌기 연결의 손실로 기능 장애의 느린 진행은 AD, 파킨슨 병 (PD) 및 헌팅턴 병 (HD)과 같은 이러한 신경학적 장애의 주요한 병리학적 특징이다 (Heneka et al., 2010). AD에서, 신경 염증의 주요 특징은 Aβ (아밀로이드 베타) 침착 및 다양한 전염증성 시토킨, 예를 들어, IL1β 및 종양 괴사 인자 α (tumor necrosis factor α; TNFα)의 발현과 관련된 영역에서 소교 세포 활성화를 포함한다. 전염증성 IL1β의 항-염증성 IL10에 대한 비율은 AD 환자의 혈청에서 현저하게 증가하였다. AD의 국부적 염증 반응은 활성화된 소교 세포 및 반응성 성상 세포에 의해 지속된다. 소교 세포 활성화는 신경 보호 또는 손상일 수 있다. 급성 신경 염증 반응은 일반적으로 CNS에 유익하며, 추가의 손상을 최소화하고 손상된 조직의 수리에 기여하는 반면에, 만성 염증은 신경계에 해롭고 이를 손상시킨다. AD에서 Aβ의 점진적 침착은 소교 세포에 대하여 화학 주성인 것으로 알려져 있고 그러므로 소교 세포에 대한 만성 자극을 제공한다. 비-스테로이드성 항-염증제, 이부프로펜은 최근에 AD에 보호적인 것으로 나타났다 (Heneka et al., 2010; Krause and M iller, 2010).
신경 퇴화에서 IL1 시스템의 영향은 다음 줄의 증거에 의해 지지된다. 그것의 발현은 급격히 향상되고 신속하게 어떤 타입의 뇌 손상으로도 이어진다. 모든 만성 퇴행성 신경 질환은 IL1 발현의 증가에 의해 동반된다. 게다가, IL1β에 의해 매개된 신경 염증은 뉴런의 퇴화에 대한 민감도를 증가시킨다. 소교 세포는 신경 염증에서 IL1β의 주요 공급원이지만, 그것의 생산은 또한 성상 세포에서 유발된다. 감소한 수준의 ILIRa가 AD 환자에서 발견되었다. 뇌 병변 후 ILIRa의 양을 증가시킴으로써 IL1 신호 전달을 차단하는 것은 신경 퇴화의 많은 실험적 모델에서 개선된 결과를 발생시킨다. ILIRa는 일정하게 신경 보호를 제공한다. IL1Ra는 실험적 치료 농도에서 사람 뇌에 침투하는 것으로 나타났고 뇌졸중 후 치료로서 ILIRa를 도입하는 임상적 시험이 설계되었다 (Cawthorne et al., 2011; Clark et al., 2008; Koprich et al., 2008; Spulber et al., 2009; Tarkowski et al., 2001).
알츠하이머 병
본 발명의 양태는 알츠하이머 병의 치료에 사용되는 본 발명에 따르는 펩티드를 제공한다.
본 발명의 양태는 또한 알츠하이머 병을 치료하는 약의 제조를 위해 본 발명에 따르는 펩티드를 제공한다.
본 발명의 추가의 양태는 본 발명에 따르는 펩티드를 이들이 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 알츠하이머 병을 치료하는 방법을 제공한다.
알츠하이머 병 (AD)은 치매의 가장 일반적인 형태이다. 가장 자주, 그것은 65살 이상의 사람에서 진단되지만, 덜 일반적인 조기 발병 알츠하이머가 훨씬 더 일찍 일어날 수 있다. 2006년에, 세계적으로 2660만의 고통받는 사람이 있었다. 알츠하이머는 2050년까지 세계적으로 85명 중에 1명에게 영향을 미칠 것으로 예측되다.
알츠하이머 병의 과정은 개체들마다 독특하지만, 많은 일반적인 증상이 있다. 가장 먼저 관찰 가능한 증상은 종종 실수로 '나이-관련된' 문제, 또는 스트레스의 징후인 것으로 생각된다. 초기 단계에서, 가장 일반적으로 인식딘 증상은 새로운 기억을 얻지 못하는 것, 예를 들어, 최근에 관찰된 사실의 회상의 어려움이다. 질환이 발달하기 때문에, 증상은 정신 착란 (confusion), 자극 과민성 (irritability) 및 공격성, 조울증 (mood swing), 언어 고장, 장기간 기억 상실, 및 그들의 감각이 감소하기 때문에 고통받는 사람의 일반적인 철회를 포함한다. 서서히, 신체의 기능이 손실되고, 궁극적으로 죽음으로 이어진다. 진단 후 평균 기대 수명은 대략 7년이다.
알츠하이머 병은 대뇌 피질 및 특정 피질 하부 영역의 뉴런 및 시냅스의 손실을 특징으로 한다. 이 손실은 측두엽 및 두정엽, 및 전두 피질 (frontal cortex) 및 대상회 (cingulate gyrus)의 일부의 퇴화를 포함하는, 영향을 받은 영역의 전체의 위축을 일으킨다. 아밀로이드 플라크 (plaque) 및 신경원섬유 엉킴 (neurofibrillary tangle) 둘 다는 분명히 AD에 의해 고통받는 사람들의 뇌에서 현미경으로 볼 수 있다. 플라크는 조밀하고, 주로 아밀로이드-베타 펩티드 및 뉴런 외부 및 주위의 세포 물질의 불용성 침착물이다. 엉킴 (신경원섬유 엉킴)은 과인산화되고 세포 내에 자체가 축적되는, 미세소관-관련 단백질 타우 (tau)의 응집체이다.
파킨슨 병
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파킨슨 병 (PD)는 중추 신경계의 퇴행성 장애이다. 그것은 중뇌의 영역인 흑질 (substantia nigra)의 도파민 함유 세포의 알려지지 않은 원인에 의한 죽음으로부터 발생한다. 질환의 과정의 초기에, 가장 분명한 증상은 흔들기, 경직, 움직임의 느려짐 및 걷기 (walking) 및 보행 (gait)의 어려움을 포함하는, 움직임 관련된 것이다. 이후에, 질환의 발달 단계에서 일반적으로 발생하는 치매와 함께, 인지 및 행동의 문제가 발생할 수도 있다. 다른 증상은 감각, 수면 및 감정 문제를 포함한다. PD는 노인에서 가장 일반적이며 가장 많은 경우는 50살 이후에 발생한다.
질환의 병리학은 뉴런에서, 및 불충분한 형성으로부터 알파-시누클레인으로 불리는 단백질의 루이 소체 (Lewy body)로 불리는 봉입체에 누적 및 중뇌의 일부의 특정 뉴런에서 생산된 도파민의 활성을 특징으로 한다.
현대의 치료는, 주로 레보도파 및 도파민 작용제의 사용을 통해, 질환의 초기 운동 증상의 관리에 효과적이다. 질환이 진행되고 뉴런이 계속해서 손실되기 때문에, 이들 약물이 증상을 치료하는데 효과가 없어지는 시점이 결국 도달하는 한편, 동시에 비틀림 운동에 의해 표시되는, 운동장애 (dyskinesia)로 불리는 합병증을 생산한다. PD의 다른 증상을 치료하는 약이 존재한다. 식이요법 및 일부 형태의 재활은 증상을 완화하는데 일부 효과를 나타냈다. 수술 및 뇌심부 자극 (deep brain stimulation)은 약물이 효과가 없는 심각한 경우에 최후의 수단으로서 운동 증상을 감소시키기 위해 사용되었다.
헌팅턴 병
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헌팅턴 병, 무도병 (chorea), 또는 장애 (HD)는 근육 조정력에 영향을 미치고 인지력 감소 및 치매로 이어지는 신경 퇴행성 유전자 질환이다. 그것은 전형적으로 중년기에 두드러진다. HD는 무도병으로 불리는 비정상적인 무의식적 비틀림 운동의 가장 일반적인 유전적 원인이고 아시아 또는 아프리카의 사람들에서보다 서부 유럽 태생의 사람에서 훨씬 더 일반적이다.
질환은 헌팅틴으로 불리는 유전자의 개체의 2개의 카피 중 하나에서 상염색체 우성 돌연변이에 의해 유발된다. 헌팅턴 병의 육체적 증상은 유아기부터 노년기의 어떤 나이에도 시작할 수 있지만, 보통 35 내지 44살에 시작한다. 약 6%의 경우는 운동불능-근경직 증후군 (akinetic-rigid syndrome)과 함께 21살 전에 시작한다; 그들은 더 빠르게 진행하고 약간 다르다. 변이체는 소아기, 운동불능-근경직 또는 웨스트팔 (Westphal) 변이체 HD로서 분류된다.
헌팅틴 유전자 (HTT)는 단백질 헌팅틴 (Htt)를 암호화한다. 이 유전자의 일부는 트리뉴클레오티드 반복으로 불리는 반복 섹션이며, 이것은 개체들 사이에서 길이가 다양하고 세대 사이에서 길이를 변화시킬 수도 있다. 이 반복 섹션의 길이가 특정 한계점에 도달할 때, 그것은 돌연변이 헌팅틴 단백질 (mHtt)로 불리는, 바뀐 형태의 단백질을 생산한다. 이들 단백질의 다른 기능은 돌연변이된 단백질이 뇌의 특정 지역에 점진적 손상을 일으키기 때문에 차례로 질환 증상을 유발하는 병리학적 변화의 원인이다.
질환의 증상은 개체 및 같은 패밀리의 멤버 사이에서도 다를 수 있지만, 증상은 대부분의 개체에 대하여 예측 가능하게 진행한다. 최초의 증상은 조정력의 일반적인 부족 및 불안정한 보행이다. 질환이 진전될 됨에 따라, 정신적 능력의 감소 및 행동적 및 정신의학적 문제와 함께, 조정되지 않는, 덜컥거리는 신체 움직임은 더 분명해진다. 육체적 능력은 공동 작용하는 움직임이 매우 어려워지고, 정신적 능력은 일반적으로 치매로 감소하기 때문에 점진적으로 지연된다. 폐렴 (pneumonia), 심장 질환, 및 추락으로부터의 육체적 손상과 같은 합병증은 증상이 시작된 후 약 20년으로 기대 수명을 감소시킨다.
HD에 대한 치유법은 없고, 질환의 이후 단계에서는 풀타임 (full time) 관리가 필요하지만, 그것의 증상 중 일부를 완화하기 위한 응급 치료가 있다.
다발성 경화증
본 발명의 양태는 다발성 경화증의 치료에 사용되는 본 발명에 따르는 펩티드를 제공한다.
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다발성 경화증 (MS, 다발성 경화증 (disseminated sclerosis) 또는 뇌척수염 평활근종 (encephalomyelitis disseminata)으로도 불림)은 뇌 및 척수의 축색 돌기 (axon) 주위에서 지방 미엘린 시스가 손상되는 염증성 질환이며, 수초 탈락 (demyelination) 및 흉터뿐만 아니라 징후 및 증상의 광역 스펙트럼으로 이어진다. 질환 발병은 보통 청소년에서 발생하고, 그것은 여성에서 더 일반적이다. 그것은 100,000명 당 2 내지 150명의 범위의 출현율을 갖는다.
MS는 뇌 및 척수의 신경 세포의 서로 의사소통하는 능력에 영향을 미친다. 신경 세포는 활동 전위 (action potential)로 불리는 전기적 신호를 축색 돌기로 불리는 긴 섬유로 보냄으로써 의사소통하며, 이것은 미엘린으로 불리는 절연 물질에 둘러싸인다. MS에서, 신체 자체의 면역 시스템이 미엘린을 공격하고 손상시킨다. 미엘린이 손실될 때, 축색 돌기는 더 이상 효과적으로 신호 전달을 실행할 수 없다. 이름 다발성 경화증은 특히 주로 미엘린으로 구성된, 뇌 및 척수의 백질에서 흉터를 나타낸다 (경화시키다 - 플라크 또는 병변으로 더 잘 알려짐).
거의 어떤 신경학적 증상도 질환으로 나타날 수 있고, 종종 육체 및 인지 장애로 진행한다. MS는 별개의 공격에서 발생하는 새로운 증상 (재발형) 또는 시간이 흐름에 따른 느린 누적 (진행형)의 여러 형태를 취한다. 공격 사이에, 증상은 완벽히 사라질 수도 있지만, 특히 질환 진행과 같은, 영구적인 신경학적 문제가 종종 발생한다.
다발성 경화증에 대하여 알려진 치료법은 없다. 치료는 공격 후 기능을 되돌리는 것을 시도하고, 새로운 공격을 방지하고, 장애를 방지한다. MS 약물은 부작용을 갖거나 잘못 허용될 수 있고, 과학적 연구 지원의 부족에도 불구하고 많은 환자는 대안의 치료를 추구한다. 환자의 기대 수명은 영향을 받지 않은 집단의 그것보다 5 내지 10년 더 낮다.
서열
인터류킨-1 수용체 길항 단백질의 아미노산 서열 (전체 길이; SEQ ID NO: 28)
UniProt 수납 번호: P18510 (IL1RA_HUMAN)
약식 이름: IL-1RN, IL1RN, IL-1ra, IRAP, IL1 F3, IL1RA.
대체 이름(들): ICIL-1RA, IL1 억제제, INN=Anakinra
4개의 이소폼 (1개는 분비됨, 3개는 세포질).
이소폼 1 (식별자: P18510-1), 177개의 아미노산 길이는 '표준' 서열로서 선택되었다:
MEICRGLRSHLITLLLFLFHSETICRPSGRKSSKMQAFRIWDVNQKTFYLRNNQLVAGYLQGPNVNLEEKIDWPIEPHALFLGIHGGKMCLSCVKSGDETRLQLEAVNITDLSENRKQDKRFAFIRSDSGPTTSFESAACPGWFLCTAMEADQPVSLTNMPDEGVMVTKFYFQEDE (SEQ ID NO: 28)
일란타핀-8/일란타핀 (SEQ ID NO: 1)의 서열은 밑줄쳐져 있다.
이소폼 2 (식별자: P18510-2), 159개의 aa 길이 (icIL-1ra로도 알려짐)
이 이소폼의 서열은 다음과 같이 표준 서열과 다르다:
aa 1-21: MEICRGLRSHLITLLLFLFHS → MAL
이소폼 3 (식별자: P18510-3), 180개의 aa 길이 (icIL-1ra 타입 II로도 알려짐)
이 이소폼의 서열은 다음과 같이 표준 서열과 다르다:
aa 1-21: MEICRGLRSHLITLLLFLFHS → MALADLYEEGGGGGGEGEDNADSK
이소폼 4 (식별자: P18510^), 143개의 aa 길이
이 이소폼의 서열은 다음과 같이 표준 서열과 다르다:
aa 1-34: 없음 (삭제됨).
추가의 일란타핀-서열 (IL1RA의 단편)
일란타핀-1: RIWDVNQKT (SEQ ID NO: 29)
일란타핀-2: AGYLQGPNVN (SEQ ID NO: 30) - 물에 녹음, PBS 또는 배지에서 녹지 않음
일란타핀-3: NQLVAGYLQGPNVN (SEQ ID NO: 31) - 물에 녹지 않음
일란타핀-4: VTKFYFQED (SEQ ID NO: 32) - 물에 녹지 않음
일란타핀-5: EGVMVTKFYFQED (SEQ ID NO: 33) - 생산될 때 완벽히 녹지 않음
일란타핀-6: NQKTFYLRNNQL (SEQ ID NO: 34) - 물에 녹음, PBS 또는 배지에서 녹지 않음
일란타핀-7: TAMEADQPVS (SEQ ID NO: 35)
일란타핀-8: Is 일란타핀, SEQ ID NO: 1
일란타핀-9: GPNAKLEEKA (SEQ ID NO: 36)
실시예
실시예 1
사람 IL1Ra 및 사람 IL1RI (도 1)의 복합체의 결정 구조에서 일란타핀 (일란티드) 서열 모티프 (SEQ ID NO: 1)의 위치.
방법: 펩티드의 위치의 매핑을 PyMOL v0.99 (DeLano Scientific LLC, South San Francisco, California, U.S.A)에 기초한 PyMOL™ 소프트웨어를 이용하여 수행하였다. 이것을 사람 ILRa 및 사람 IL1RI, PDB ID: 1IRA의 복합체의 결정 구조에 기초하여 실행하였다 (Schreuder et al., 1997).
실시예 2
일란타핀 펩티드 (SEQ ID NO: 1)는 IL1β의 결합 친화도와 같은 규모의 순서 내에 있는 친화도로 IL1RI의 고정된 엑토도메인과 상호작용하고, IL1RI에 대하여 IL1Ra와 상호작용한다. 게다가 펩티드는 IL1β의 결합에 대하여 수용체와 경쟁한다 (도 3).
방법: 결합 분석을 25 ℃에서 러닝 버퍼로서 10 mM 나트륨 포스페이트 (pH 7.4), 150 mM NaCl을 사용하는 BiaCore 2000 Instrument (BiaCore AB, Uppsala, Sweden)를 사용하여 수행하였다. 유속은 5 μl/분이었다. 데이터를 제조사의 소프트웨어를 사용하여 비선형 커브 피팅 (nonlinear curve fitting)에 의해 분석하였다. IL1RI의 전체 세포 외 성분을 포함하는 재조합 단백질을 정전기 상호 작용의 방법에 의해 CM5 센서 칩의 표면상에 고정하였고, 펩티드 및 IL1β 및 IL1Ra 단백질을 다양한 농도로 주사하였다. 펩티드에 결합 및 블랭크 (blank) 칩 사이의 차이에 해당하는 곡선을 분석에 사용하였다. 도 4에서, IL1β 단백질을 센서 칩상에 고정하였고 다양한 농도의 일란타핀 펩티드 및 0.12 μM 농도의 가용성 수용체 (SIL1RI)를 주사하였다.
실시예 3
일란타핀 펩티드 SEQ ID NO: 1 (모노머 형태에서 덴드리머/테트라머로서 만들어짐)은 대식세포의 활성화를 억제하며, 이것은 IL1β의 처리에 의해 유발된다 (도 5, 도 6 및 도 7). 일란타핀 효과는 일란타핀의 다양한 형태의 스크램블 서열, 및 반전 서열을 가진 일란타핀이 IL1β에 의해 NF-κB의 활성화를 억제하지 않기 때문에, 서열-특이적이다 (도 8). 일란타핀 효과는 펩티드가 IL6에 의해 유발된 신호 전달을 억제하지 않기 때문에, 서열-특이적이다 (도 9).
방법: IL1RI 신호 전달 검정: InvivoGen (Denmark distributor: Sigma-Aldrich Denmark)의 상업적으로 이용 가능한 Blue™ Cytokine Reporter Cell 기술을 사용하였다. 그것은 간단하고, 신속하고, 믿을 수 있는, 주요 시토킨에 의해 유발된 신호 전달 경로의 활성화를 관찰하는 방법을 제공하도록 조작된 세포주의 확장 패밀리에 의해 표현된다. HEK-Blue™ IL1β 세포는 선택적으로 IL1β에 반응하도록 특이적으로 조작되고, 그것들은 NF-κB-유발성 프로모터의 조절 하에 분비된 배아 알칼린 포스파타제 (SEAP) 리포터 유전자를 특징으로 한다. NF-κΒ의 IL1β-유발 (1.2 pM) 활성화시 다양한 농도의 일란타핀 펩티드의 억제 효과를 결정하였고 상업적 IL1Ra 및 IL1RI로 얻은 데이터와 비교하였다. 일란타핀 효과의 표적/수용체-특이성을 HEK-Blue™ IL6 세포를 활용하여 확인하였다.
실시예 4
일란타핀 펩티드 (SEQ ID NO: 1)는, 덴드리머/테트라머 또는 모노머 둘 다로서, 농도 의존적 방식으로, TNF-α 분비에 의해 반영된 바와 같이 대식 세포의 IL1β-유발 활성화를 억제한다 (도 10, 도 11). IL1Ra 및 SIL1RI 단백질은 또한 대식 세포 활성화를 억제한다 (양성 대조군, 도 12).
방법: 일란타핀 펩티드 또는 IL1Ra 또는 IL1RI를 6-웰 멀티 디쉬 (Nunc)에 분주된 대식 세포 (AMJ2-C8)의 배양물 (2.5 x 105개의 세포/웰)에 추가하였다. 37 ℃에서 배양 24시간 후, IL1β (1.2 pM)을 배양물에 추가하여 대식 세포를 활성화한다. L929 세포를 2 x 105개의 세포/mL의 밀도로 96-웰 플레이트에 분주하였다. 세포 배양물 둘 다를 37 ℃에서 24시간 동안 배양하였다. 대식 세포 배양물로부터 조건 배지를 수거하였고 0.6 g/웰 액티노마이신 D (Sigma-Aldrich)와 함께 섬유아세포 배양물에 추가하였다. 최종적으로, 37 ℃에서 배양 24시간 후, 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-5-(3-카르복시메톡시페닐)-2-(4-술포페닐)-2H-테트라-졸리움 (MTS) (Promega, Madison, WI, USA)의 20 μl를 각 웰에 추가하였고 플레이트를 빛으로부터 보호하면서 37 ℃에서 ~45분 동안 배양하였고 시각적 밀도를 Sunrise 흡광도 리더 (Tecan, Mannedorf, Switzerland)에서 490 nm로 측정하였다. 조건 배지에서 TNF-α의 양을 계산하기 위해, TNF-α (R&D systems, Minneapolis, MN, USA)의 다른 농도를 섬유아세포에 처리함으로써 표준 곡선을 얻었다.
실시예 5
일란타핀 펩티드 (SEQ ID NO: 1), IL1Ra 및 SIL1RI 단백질은 농도 의존적 방식으로 1차 소뇌 뉴런에서 신경 돌기 돌출을 유발하는 반면에, IL1β 자체는 신경 형성에 영향을 미치지 않는다. 게다가, IL1β는 일란타핀- 및 IL1Ra-유발 신경 돌기 돌출을 억제한다. 그것은 IL1RI 활성화의 억제가 뉴런의 분화를 촉진한다는 것을 나타낸다 (도 13 및 도 19 (재계산된 같은 데이터), 도 14).
방법: 소뇌 과립 뉴런 (CGN)을 제조하였다.위스타 래트 (Charles River, Sulzfeld, Germany 또는 Taconic, Ejby, Denmark)를 사용하여 출산 후 3 또는 7일로부터 제조하였다. 소뇌를 뇌막 및 혈관을 제거하였고, 쵸핑 (chopping)에 의해 대충 균질화하였고, Sigma-Aldrich (Brandby, Denmark)의 트립신으로 트립신화하였다. 뉴런을 DNAse 1 및 대두 트립신 억제제 (Sigma-Aldrich)의 존재시 세척하였고, 세포의 파편을 플레이팅 전에 원심분리에 의해 펠렛화하였다. CGN을 10,000개의 세포/웰의 밀도로 0.4 부피% BSA로 보충된 Neurobasal-A 배지의 코팅되지 않은 8-웰 Lab-Tek 챔버 슬라이드 (NUNC, Slangerup, Denmark)에 플레이팅하였다. 다양한 농도의 펩티드 또는 단백질을 플레이팅 직후에 배지에 추가하였고, 세포를 37 ℃ 및 5% C02에서 24시간 동안 유지하였다. 배양무을 고정하였고, 차단하였고 래트 GAP-43 (Chemicon, Temecula, CA, USA)에 대한 다클론성 토끼 항체와 함께 배양한 후 이어서 이전에 설명된 바와 같이 2차 Alexa Fluor488 염소 항-토끼 항체 (Molecular Probes, Eugene, OR, USA)와 함께 배양하였다 (Neiiendam et al., 2004). 면역 염색된 배양물을 Nikon Plane 20x 대물렌즈를 장착한 Nikon Diaphot 도립 현미경 (Nikon, Japan)을 사용하는 컴퓨터-지원형 형광 현미경법에 의해 모두 기록하였다. 이미지를 Protein Labrotory (University of Copenhagen, Copenhagen, Denmark)에서 개발된 소프트웨어 패키지 Prima를 사용하는 전하-커플링된 장치 비디오 카메라 (Grundig Electronics, Nurnberg, Germany)로 캡쳐하였다. 세포 당 신경 세포 돌기의 길이를 Protein Labrotory에서 개발된 소프트웨어 패키지 Process Length를 사용하여 추정하였다 (Ronn et al. 2000). 신경 돌기 돌출의 추정을 위해, 적어도 200 ± 20개의 세포를 각각 개개의 실험에서 각 그룹에 대하여 진행하였다.
실시예 6
일란타핀 펩티드 (SEQ ID NO: 1)는 신경 세포 사멸 (아폽토시스)을 감소시키며, 이것은 칼륨 클로라이드의 농도를 낮춤으로써 유발된다. 펩티드 효과는 신경 세포의 생존 인자 IGF-1의 효과와 비슷하다 (도 15 및 도 20).
방법: 생존 검정: CGN의 1차 배양물을 2 부피% B27, 0.5 부피% 글루타맥스, 100 units/mL 페니실린, 100 Ig/mL 스트렙토마이신 및 KCl로 보충된 Neurobasal-A 배지 (Gibco BRL)에서 폴리-L-리신 코팅된 8-웰 permanox 슬라이드 상에 100,000 cells/cm2의 밀도로 플레이팅하였으며, 배지에서 KCl의 최종 농도를 40 mM로 만들었다. 플레이팅 24시간 후, 시토신-b-D-아라비노푸라노시드 (Ara-C; Sigma-Aldrich)를 교세포의 증식을 방지하기 위해 10 μM의 최종 농도로 추가하였며, 이후에 뉴런을 37 ℃에서 추가의 6일 동안 분화하도록 허용하였다. 아폽토시스성 세포 사멸을 두 번 세척하고 배지를 다양한 농도의 펩티드와 함께 1 부피% 글루타민, 100 U/mL 페니실린 및 100 Ig/mL 스트렙토마이신, 3.5 g D-글루코스/L 및 1 부피% 나트륨 피루베이트 (Gibco BRL)로 보충된 Basal Medium Eagle (BME; Gibco BRL)로 교체함으로써 유발하였다. 이로 인해 배양물에서 칼륨의 농도는 5 mM KCl로 감소하였다 (Ditlevsen et al., 2003). 아폽토시스의 유발 2일 후, 세포를 4 부피% 포름알데히드로 고정하였고 해마 뉴런을 이용하는 생존 검정에 대하여 설명된 바와 같이 Hoechst 33258로 염색하였다.
실시예 7
일란타핀 펩티드 (SEQ ID NO: 1)는 래트에서 CIA의 임상적 징후의 증가를 폐지한다 (도 16).
방법: 류머티스성 관절염은 서양 국가의 일반 인구의 약 1%에 영향을 미치는 만성, 염증성, 전신성 자가 면역 질환이다. 래트에서 콜라겐-유발 관절염 (CIA)은 항-염증성 화합물의 스크리닝을 위해 널리 이용된 동물 모델이다. 콜라겐 소, 타입 II (CII, 제품 번호 20021, Lot 090209, Chondrex, USA), 미코박테리움 튜버쿨로시스 (Mycobacterium tuverculosis)의 0.1 %을 함유하는 완전 프로인트 보조제 (Complete Freund's Adjuvant; CFA, 제품 번호 F5581, Lot 049K8700, Sigma-Aldrich), 불완전 프로인트 보조제 (Incomplete Freund's Adjuvant; IFA, 제품 번호 F5506, Lot 058K8702, Sigma). PBS (Panum Institute, Copenhagen University). 이소플루란 (Baxter). 동물들을 제 0일 (CII+CFA) 및 제 10일 (CII+IFA, 촉진제)에 두 번 면역화하였다. 제 15일에 평균 임상 점수는 5.0의 값에 도달하였고 모든 동물을 모든 그룹의 질환의 심각도 (평균 임상 점수)가 거의 같도록 3개의 그룹으로 나누었다. 펩티드 (2회 투여, 3.3 및 10 mg/kg)를 제 15일에 시작하여 매일 피하에 투여하였다. 관절염 심각도의 임상 평가를 다음 등급 시스템을 사용하여 평가하였다: 0 - 발 또는 손바닥에 발적 또는 부기 없음; 1 - 중족 관절 및 발목 관절 발 또는 손바닥에 약한 부기 또는 발적; 2 - 발목에서 중족부까지 또는 손바닥 전체에 진행된 부기/염증 및 발적; 3 - 발가락을 제외한 발 전체의 부기/염증; 4 - 발가락을 포함한 발 전체의 부기 및 염증.
실시예 8
혈장 및 뇌척수액에서 일란타핀 펩티드 (예를 들어, SEQ ID NO: 1)의 검출.
Secher et al. (2006)에 설명된 바와 같이 단일 피하 일란타핀 (SEQ ID NO: 1) 투여 (10mg/kg) 후 15분, 30분, 1, 2, 4, 8 및 24시간에 마취된 200 g 위스타 래트의 안와의 망상 조직 (orbital plexus)으로부터 혈액 샘플을 수거한다. 뇌척수액을 이전에 설명된 바와 같이 2시간에 대뇌조 (cisterna magna)로부터 샘플링한다 (Secher et al., 2006). 혈장 샘플에서 일란타핀 농도를 경쟁적 효소-결합 면역흡착 검정을 사용하여 측정하였다. 96-웰 Amino™ 플레이트 (Nunc)를 100 mM 카르보네이트 버퍼 (pH 9.6)에 희석된 30 mg/ml 비오티닐화된 알부민 (Sigma-Aldrich)으로 코팅한다. 플레이트르 2시간 동안 배양하고 포스페이트 완충된 식염수 중의 0.05 부피% Tween 20 (PBST)으로 3번 세척한다. 하나의 샘플 부피를 PBST에서 1: 5000으로 희석된 퍼옥시다제-표지된 스트렙타비딘의 3배 부피와 혼합하고 30분 동안 배양한다. 혼합물의 100 ml/웰의 양을 비오티닐화된 알부민-코팅된 플레이트에 추가한다. 플레이트를 1시간 동안 배양하고, PBST로 3번 세척하고 TMB 플러스 (Kem-En-Tec, Taastrup, Denmark)로 현상한다. 효소 반응을 0.2 M 황산으로 중단한다. 시각적 밀도를 Sunrise 흡광도 측정기 (Tecan, Mannedorf, Switzerland)를 사용하여 450 nm에서 기록한다. 모든 샘플을 바람직하게 2번 실행한다.
SEQ ID NO: 1이 래트의 혈액-뇌 관문을 침투하는지 조사하기 위해, 비오틴-일란타핀이 피하 투여 후에 혈장 및 CSF에서 검출된다. 펩티드가 혈장 및 CSF 둘 다에 존재하면, 그것은 전신에 투여된 일란타핀이 혈액-뇌 관문을 통과한다는 것을 제안한다.
실시예 9
신경 세포 독성의 반전시 일란타핀, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 효과는 다음 방법에 의해 평가될 수도 있다: "카인산-유발된 세포 독성"
해마 뉴런을 이전에 설명된 바와 같이 폴리-L-리신-코팅된 8-웰 LabTek Permanox 슬라이드 (Nunc)에서 웰 당 5 x 104개의 세포의 밀도로 플레이팅한다 (Soroka et al., 2002). 배양 7일 후, 뉴런에 일란타핀 (0.001 - 3 mM) 또는 전체 길이 IL1RA를 1시간 동안 처리한 후 이어서 300 Mm의 새로 재구성된 카인산 (Sigma, Brondby, Denmark)을 추가한다. 세포를 24시간 동안 추가로 배양한다. 세포를 4 부피% 포름알데히드로 고정하고 5 mg/ml Hoechst 33258 (Invitrogen, Copenhagen, Denmark) 또는 5 mg/ml 프로피듐 이오디드 (Sigma)로 염색한다. 적어도 1000개의 세포/조건이 체계적 일련의 시야 필드로 기록되며, Ronn et al. (2000)에 설명된 바와 같이 첫 번째 필드의 위치를 무작위로 선택한다. 세포 생존을 바이어스를 최소화하기 위해 연구실에서 개발된 소프트웨어를 사용하여 반자동 모드에서 핵 형태에 기초하여 측정한다 (죽은 세포는 응축된 크로마틴 또는 단편화된 핵을 보인다). 결과는 생세포 비율의 평균으로 나타난다 [n 생세포/(n 생세포 + n 죽은 세포) +/- SEM].
실시예 10
발작의 약화, 치사율의 감소 및 신경 퇴화의 감소시 일란타핀, 예를 들어, SEQ ID NO: 1의 효과는 다음 방법에 의해 평가될 수도 있다: "카인산-유발된 발작".
수컷 C57BLJ6J 마우스, 28-32 g에 카인산 처리 전 48, 24 및 2시간 전 일란타핀 (10mg/kg), 전체 길이 IL1RA 또는 비히클을 피하에 주사한다. 예비 농도-조정 실험에 기초하여, 카인산의 2가지의 투여량 (복강 내)을 선택하여 저급 발작 (20 mg/kg 카인산) 또는 상급 발작 및 치사율 (30 mg/kg 카인산)을 유발하기 위해 2 세트의 실험을 수행한다. 측정된 파라미터는 발작 시작의 잠복, 발작 심각도 및 치사율을 포함한다. 발작 활성은 처리에 맹검인 관찰자에 의해 카인산 투여 후 2시간 동안 기록되고 변형된 라신 스케일 (racine scale)에 따라 평가된다 (0 = 고정; 1 = 얼굴 자동성; 2 = 머리 끄덕임; 3 = 앞다리 간헐성 경련; 4 = 리어링 (rearing); 5 = 일반화된 경련; 6 = 사망; Racine, 1972).
발작 등급 1-3은 저급 발작으로 간주되고, 발작 등급 4-5는 상급 발작으로 간주되었다. 고정의 잠복은 카인산 주사 및 고정의 출현 사이의 시간으로서 측정된다. 대조군 그룹의 동물은 비히클 주사를 받았다.
실시예 11
펩티드를 Fmoc (Calbiochem-Novabiochem) 보호된 아미노산을 사용하는 TentaGel 수지 (Rapp Polymere, Tiibingen, Germany)에서 Fmoc 보호 전략을 사용하여 합성하였다. 덴드리머는 리신 백본에 커플링된 4개의 모노머로 구성되었다. 다이머는 리신 잔기에 커플링된 2개의 모노머로 구성되었다. 펩티드는 고성능 액체 크로마토그래피 및 비행 질량 분석법의 매트릭스 보조 레이저 탈착/이온화 시간 (VG TOF Spec E, Fisons Instruments, Beverly, MA)에 의해 평가된 바와 같이 적어도 95% 순수하였다.
실시예 12
펩티드 가용성
합성하는 회사로부터 (분말로) 펩티드를 받을 때, 그것들을 물에, PBS에 또는 배지에 재구성하였다. 따라서 펩티드가 가용성인지 아닌지는 즉시 명백해진다.
실시예 13
펩티드 안정성.
펩티드 안정성을 평가하는 방법은 4 ℃ 및 상온에서 용액 중에 펩티드를 유지할 때 시간의 함수에 따라 (1, 2, 3일 등) 용액 중의 펩티드 양을 분광 광도 측정법으로 또는 MS (질량 분석법; 전하를 띈 입자의 질량 대 전하 비율을 측정)에 의해 측정하는 것이다.
실시예 14
콜라겐-유발 관절염 (CIA)의 래트 모델에서 일란타핀 SEQ ID NO: 1 (SGRKSSKMQA)의 효과.
방법:
래트에서 콜라겐-유발 관절염 (CIA).
CIA의 유발. CIA 연구를 실험의 시작시 150g의 평균 중량을 갖는 총 40마리의 수컷 위스타 래트에서 수행하였다. CIA를 0.05 M 아세트산 (2 mg/ml)에 녹이고, 1.0 mg/ml 열-불활성화된 엠. 튜버쿨로시스를 함유하는 CFA와 1: 1로 에멀젼화된 소 콜라겐 타입 II (CII, Sigma-Aldrich)의 피하 (s.c.) 주사에 의해 유발하였다. 흡입 마취 (이소플루란, 3%) 하에 250 pg의 CII 및 엠. 튜버쿨로시스의 125 pg를 함유하는 250 μl의 에멀젼을 꼬리 끝에 주사하였다 (s.c.) (면역화 후 일, dpi 0).
치료 설계. dpi 8에, 임상적 징후의 시작 전에, 모든 동물들을 무작위로 2개의 그룹, 그룹 당 20마리의 래트로 나누었고, 8일 동안 (dpi 8 -15) 매일 일란타핀 (10.0 mg/kg, s.c.) 또는 비히클 (PBS, 1.0 ml/kg, s.c)을 투여하였다. 임상적 평가를 dpi 7-16에 수행하였고, dpi 29-33의 치료하지 않는 기간에 계속하였다.
임상 점수. 치료 그룹에 맹검인 관찰자는 다음 등급 시스템을 이용하여 관절염의 심각도를 평가하였다: 0 - 발에 발적 또는 부기 없음; 1 - 발에 약한 발적 또는 단일 지절간관절에서 발적 및 부기; 2 - 발목 및 발의 종족골 부분에 중간 부기 및 발적; 3 - 전체 발에 현저한 부기 및 발적, 운동시 발의 제한된 사용; 4 - 전체 발에 현저한 부기 및 발적, 운동 및 리어링 시 발의 사용 불가능. CIA가 전형적으로 뒷다리만을 수반하기 때문에, 래트의 관절염 지수는 2개의 다리 점수의 합계로서 정의되었다. 관절염의 심각도가 점수 7에 도달할 때 동물을 희생시켰다.
통계적 분석을 이원분산분석 및 t-테스트를 이용하여 수행하였다.
결과:
일란타핀은 CIA에 걸린 동물의 발병율을 감소시키며, 도 17 참조. 발병율은 임상 지수 7에 도달하였고 그러므로 테스트 날까지 희생된 동물의 퍼센트로서 나타났다. 일란타핀은 dpi 12에 의해 발병율을 유의하게 감소시켰다. * - P < 0.05 (웰치 보정된 언페어드 t-테스트).
게다가, 일란타핀은 CIA의 심각도 (임상 평가)를 약화시키며, 도 18을 참조. 이원분산분석은 CIA에 걸린 동물의 임상 점수에 대한 치료의 유의한 효과를 나타냈다 [F(1,238)=18.05, PO.0001]. 일란타핀은 dpi 13-15에 CIA의 심각도를 약화시킨다. * - P < 0.05 (웰치 보정된 언페어드 t-테스트).
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Claims (68)

  1. IL-1 수용체 길항 단백질 (IL1RA)로부터 유도된 5 내지 20개의 인접한 아미노산 잔기의 펩티드 서열로 구성된, 분리된 펩티드로서, 상기 펩티드는
    SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 35 또는 SEQ ID NO: 36 중 어느 하나의 아미노산 서열; 또는
    SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 35 또는 SEQ ID NO: 36 중 어느 하나의 5개 이상의 연속적인 아미노산으로 구성된 단편; 또는
    SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 35 또는 SEQ ID NO: 36 중 어느 하나의 변이체로서, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 35 또는 SEQ ID NO: 36 중 어느 하나에 대하여 적어도 50% 동일성을 갖는 5 내지 20개의 아미노산의 아미노산 서열로 구성되는 변이체
    로 구성되며, 상기 펩티드는 IL-1 수용체 타입 1 (IL1RI)에 결합할 수 있고, IL1RI에 IL-1의 결합을 방해할 수 있는, 분리된 펩티드.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 펩티드는 5 내지 14개의 인접한 아미노산 잔기의 펩티드 서열로 구성되며, 상기 펩티드는 SEQ ID NO: 1의 아미노산 서열로 구성되거나; 단편은 SEQ ID NO: 1의 5개 이상의 연속적인 아미노산으로 구성되거나; 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 1에 대하여 적어도 50% 상동성을 갖는 5 내지 14개의 아미노산으로 구성되는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 펩티드는 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열로 구성되거나; 단편은 SEQ ID NO: 29의 5개 이상의 연속적인 아미노산으로 구성되거나; 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 29에 대하여 적어도 50% 상동성을 갖는 5 내지 20개의 아미노산으로 구성되는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 펩티드는 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열로 구성되거나; 단편은 SEQ ID NO: 35의 5개 이상의 연속적인 아미노산으로 구성되거나; 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 35에 대하여 적어도 50% 상동성을 갖는 5 내지 20개의 아미노산으로 구성되는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 펩티드는 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열로 구성되거나; 단편은 SEQ ID NO: 36의 5개 이상의 연속적인 아미노산으로 구성되거나; 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 36에 대하여 적어도 50% 상동성을 갖는 5 내지 20개의 아미노산으로 구성되는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  6. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩티드는 신경 돌기 돌출을 자극하고 및/또는 뉴런의 생존을 촉진할 수 있는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  7. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩티드는 NF-κB 활성화 및 TNF-알파 증가와 같은 IL-1 유발된 생물학적 효과를 억제할 수 있는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  8. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단편은 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 35 또는 SEQ ID NO: 36 중 어느 하나의 6개 이상의 연속적인 아미노산으로 구성되는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  9. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단편은 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 35 또는 SEQ ID NO: 36 중 어느 하나의 5 내지 9개의 연속적인 아미노산으로 구성되는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  10. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단편은 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 35 또는 SEQ ID NO: 36 중 어느 하나의 6 내지 9개의 연속적인 아미노산으로 구성되는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  11. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단편은 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 35 또는 SEQ ID NO: 36 중 어느 하나의 6 내지 8개의 연속적인 아미노산으로 구성되는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  12. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩티드는 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 35 또는 SEQ ID NO: 36 중 어느 하나의 5 내지 15개의 인접한 아미노산 잔기의 펩티드 서열로 구성되는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  13. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩티드는 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 35 또는 SEQ ID NO: 36 중 어느 하나의 최대 14개의 인접한 아미노산 잔기의 펩티드 서열로 구성되는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  14. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩티드는 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 35 또는 SEQ ID NO: 36 중 어느 하나에 대하여 적어도 60% 동일성을 갖는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  15. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩티드는 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 35 또는 SEQ ID NO: 36 중 어느 하나에 대하여 적어도 70% 동일성을 갖는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  16. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 펩티드는 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 35 또는 SEQ ID NO: 36 중 어느 하나에 대하여 적어도 80% 동일성을 갖는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  17. 제 2항에 있어서, 상기 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 1로 구성되는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  18. 제 2항에 있어서, 상기 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26 및 SEQ ID NO: 27로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열로 구성되는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  19. 제 1항에 있어서, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 35 또는 SEQ ID NO: 36 중 어느 하나에 대하여 적어도 50% 동일성을 갖는, 5 내지 20개의 아미노산의 아미노산 서열로 구성되며, 아미노산 서열은 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  20. 제 19항에 있어서, 상기 아미노산 서열은 2개의 아미노산 치환, 예를 들어, 3개의 아미노산 치환, 예를 들어, 4개의 아미노산 치환, 예를 들어, 5개의 아미노산 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  21. 제 19항 또는 제 20항에 있어서, 상기 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환인 것을 특징으로 하는 펩티드.
  22. 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 있어서, C-말단 아미노산은 자유 카르복시산 ("-OH")으로서 존재하는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  23. 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 있어서, C-말단 아미노산은 아미드화된 유도체 ("-NH2")인 것을 특징으로 하는 펩티드.
  24. 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 있어서, N-말단 아미노산은 자유 아미노기 ("H-")를 포함하는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  25. 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 있어서, N-말단 아미노산은 아세틸화된 유도체 ("-아세틸" 또는 "COCH3")를 포함하는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  26. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 펩티드는 아미노산 서열 RPSGRKSSKMQAFRI (SEQ ID NO: 37)를 포함하지 않거나 이로 구성되지 않는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  27. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 펩티드는 아미노산 서열 LVAGY (SEQ ID NO: 38)를 포함하지 않거나 이로 구성되지 않는 것을 특징으로 하는 펩티드.
  28. 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 따르는 적어도 하나의 펩티드를 포함하는 화합물.
  29. 제 28항에 있어서, 상기 펩티드는 단일 카피의 펩티드로 구성된 모노머로서 제형화되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  30. 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 따르는 둘 이상의 펩티드를 포함하는 멀티머 화합물.
  31. 제 30항에 있어서, 둘 이상의 펩티드는 펩티드 결합 또는 결합자 기를 통해 결합되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  32. 제 31항에 있어서, 상기 결합자 기는 하나 이상의 리신 잔기를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물.
  33. 제 30항에 있어서, 상기 화합물은 다이머인 (즉, 2개의 펩티드를 포함하는) 것을 특징으로 하는 화합물.
  34. 제 30항에 있어서, 상기 화합물은 트리머인 (즉, 3개의 펩티드를 포함하는) 것을 특징으로 하는 화합물.
  35. 제 30항에 있어서, 상기 화합물은 테트라머인 (즉, 4개의 펩티드를 포함하는) 것을 특징으로 하는 화합물.
  36. 제 30항에 있어서, 상기 화합물은 덴드리머이고 4, 8, 16 또는 32개의 펩티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물.
  37. 제 30항에 있어서, 상기 화합물은 테트라머 덴드리머인 것을 특징으로 하는 화합물.
  38. 제 30항 내지 제 37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 둘 이상의 펩티드는 서로에 관하여 동일한 것을 특징으로 하는 화합물.
  39. 제 30항 내지 제 37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 둘 이상의 펩티드는 서로에 관하여 동일하지 않은 것을 특징으로 하는 화합물.
  40. 제 33항에 있어서, 상기 2개의 펩티드는 서로 동일하고 각각 SEQ ID NO: 1로 구성되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  41. 제 37항에 있어서, 상기 4개의 펩티드는 서로 동일하고 각각 SEQ ID NO: 1로 구성되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  42. 제 41항에 있어서, SEQ ID NO: 1의 상기 4개의 카피는 복수의 리신 잔기를 갖는 코어 모이어티를 통해 함께 결합되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  43. 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 따르는 펩티드, 또는 제 28항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 따르는 화합물을 포함하는 조성물.
  44. 제 43항에 있어서, 상기 조성물은 약학적으로 허용 가능하고 및/또는 약학적으로 안전한 것을 특징으로 하는 조성물.
  45. 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 따르는 펩티드, 제 28항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 따르는 화합물, 또는 제 43항 또는 제 44항에 따르는 조성물, 및 적어도 하나의 추가적인 성분을 포함하는 성분의 키트.
  46. 약으로 사용되는, 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 따르는 펩티드, 제 28항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 따르는 화합물, 또는 제 43항 또는 제 44항에 따르는 조성물.
  47. 염증성 장애, 예를 들어, IL-1이 중요한 역할을 하는 염증성 장애의 치료에 사용되는, 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 따르는 펩티드, 제 28항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 따르는 화합물, 또는 제 43항 또는 제 44항에 따르는 조성물.
  48. 염증성 장애, 예를 들어, IL-1이 중요한 역할을 하는 염증성 장애를 치료하는 약의 제조를 위한, 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 따르는 펩티드, 제 28항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 따르는 화합물, 또는 제 43항 또는 제 44항에 따르는 조성물의 사용.
  49. 염증성 장애, 예를 들어, IL-1이 중요한 역할을 하는 염증성 장애의 치료 방법으로서, 상기 방법은 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 따르는 펩티드, 제 28항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 따르는 화합물, 또는 제 43항 또는 제 44항에 따르는 조성물의 유효량을 이들이 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  50. 제 47항 또는 제 48항에 따르는 사용, 또는 제 49항에 따르는 방법에 있어서, 상기 염증성 질환은 여드름, 천식, 아테롬성 동맥 경화증, 자가 면역 질환, 베체트 병, 만성 염증, 만성 전립선염, 피부염, 통풍, 사구체 신염, 과민증 (알레르기성 천식, 알레르기성 결막염, 알레르기성 비염 (건초열), 과민증, 혈관부종, 두드러기 (두드러기), 산호성 백혈구 증가증, 및 페니실린 및 세팔로스포린에 대한 반응을 포함하는 타입 1 (즉각성, 또는 아토피성, 또는 과민성); 자가 면역성 용혈성 빈혈, 구드패스츄어 증후군, 간염, IBS (과민성 대장 질환), 소아기 특발성 관절염 (JIA), 수포창, 악성 빈혈 (자가 면역인 경우), 건선, 건선 관절염, 면역성 혈소판 감소증, 수혈 반응, 하시모토 갑상선염, 간질성 방광염, 그레이브스 병, 근 무력증, 류머티스성 열 신생아 용혈성 질환 및 급성 이식 거부증을 포함하는 타입 2 (항체-의존적); 류머티스성 관절염, 면역 복합체 사구체 신염, 혈청병, 아급성 세균성 심내막염, 말라리아의 증상, 전신 홍반성 루푸스 (SLE), 아르투스 반응, 파머 폐 및 다발성 결절성 다발 동맥염을 포함하는 타입 3 (면역 복합체); 접촉 피부염, 아토피성 피부염 (습진), 측두 동맥염, 유육종증, 나병의 증상, 폐결핵의 증상, 전신성 경화증, 망투 반응, 만성 소화 장애증 및 만성 이식 거부증을 포함하는 타입 4 (세포 매개 또는 지연 타입 과민증 (DTH)), 염증성 대장 질환 (크론 병, 궤양성 대장염, 교원성 대장염, 림프구성 대장염, 허혈성 대장염, 전환 대장염, 베체트 증후군, 전염성 대장염 및 부정성 대장염 포함), 근 질환 (피부 근염, 다발성 근염, 및 봉입체 근염 포함), 골반 내 염증 질환, 발 통풍, 허혈재관류 손상, 류머티스성 관절염, 이식 거부증 및 맥관염으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 사용, 또는 방법.
  51. 류머티스성 관절염의 치료에 사용되는, 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 따르는 펩티드, 제 28항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 따르는 화합물, 또는 제 43항 또는 제 44항에 따르는 조성물.
  52. 류머티스성 관절염을 치료하는 약의 제조를 위한, 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 따르는 펩티드, 제 28항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 따르는 화합물, 또는 제 43항 또는 제 44항에 따르는 조성물의 사용.
  53. 류머티스성 관절염의 치료 방법으로서, 상기 방법은 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 따르는 펩티드, 제 28항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 따르는 화합물, 또는 제 43항 또는 제 44항에 따르는 조성물의 유효량을 이들이 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  54. 진성 당뇨병, 예를 들어, 진성 당뇨병 타입 I의 치료에 사용되는, 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 따르는 펩티드, 제 28항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 따르는 화합물, 또는 제 43항 또는 제 44항에 따르는 조성물.
  55. 진성 당뇨병, 예를 들어, 진성 당뇨병 타입 I을 치료하는 약의 제조를 위한, 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 따르는 펩티드, 제 28항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 따르는 화합물, 또는 제 43항 또는 제 44항에 따르는 조성물의 사용.
  56. 진성 당뇨병, 예를 들어, 진성 당뇨병 타입 I의 치료 방법으로서, 상기 방법은 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 따르는 펩티드, 제 28항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 따르는 화합물, 또는 제 43항 또는 제 44항에 따르는 조성물의 유효량을 이들이 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  57. 퇴행성 신경 장애의 치료에 사용되는, 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 따르는 펩티드, 제 28항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 따르는 화합물, 또는 제 43항 또는 제 44항에 따르는 조성물.
  58. 퇴행성 신경 장애를 치료하는 약의 제조를 위한, 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 따르는 펩티드, 제 28항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 따르는 화합물, 또는 제 43항 또는 제 44항에 따르는 조성물의 사용.
  59. 퇴행성 신경 장애의 치료 방법으로서, 상기 방법은 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 따르는 펩티드, 제 28항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 따르는 화합물, 또는 제 43항 또는 제 44항에 따르는 조성물의 유효량을 이들이 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  60. 제 57항 또는 제 58항에 따르는 사용, 또는 제 59항에 따르는 방법으로서, 상기 퇴행성 신경 장애는 신경-염증성 성분을 갖는 사용, 또는 방법.
  61. 제 57항 또는 제 58항에 따르는 사용, 또는 제 59항에 따르는 방법으로서, 상기 퇴행성 신경 장애는 IL-1 신호 전달과 관련된 사용, 또는 방법.
  62. 제 57항 또는 제 58항에 따르는 사용, 또는 제 59항에 따르는 방법으로서, 상기 퇴행성 신경 장애는 알츠하이머 병, 파킨슨 병, 헌팅턴 병 및 다발성 경화증으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 사용, 또는 방법.
  63. 제 57항 또는 제 58항에 따르는 사용, 또는 제 59항에 따르는 방법으로서, 상기 퇴행성 신경 장애는 알츠하이머 병인 사용, 또는 방법.
  64. 신경 돌기 돌출을 자극하고 및/또는 뉴런의 생존을 촉진하는 방법으로서, 상기 방법은 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 따르는 펩티드, 제 28항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 따르는 화합물, 또는 제 43항 또는 제 44항에 따르는 조성물의 유효량을 이들이 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  65. IL1RI의 IL-1에 결합을 방해하는 방법으로서, 상기 방법은 제 1항 내지 제 21항 중 어느 한 항에 따르는 펩티드, 제 28항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 따르는 화합물, 또는 제 43항 또는 제 44항에 따르는 조성물의 유효량을 이들이 필요한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  66. 제 49항, 제 53항, 제 56항, 제 59항, 제 64항 및 제 65항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체는 사람인 것을 특징으로 하는 방법.
  67. 제 64항 또는 제 65항에 있어서, 상기 개체는 신경 퇴행성 질환에 걸린 것을 특징으로 하는 방법.
  68. 제 1항 내지 제 67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료는 예방적, 개선적 또는 치유적인 것을 특징으로 하는 치료.
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