KR20110102189A - 벌꿀과 펩티드의 조합을 포함하는 화장품 또는 피부병치료 조성물 - Google Patents
벌꿀과 펩티드의 조합을 포함하는 화장품 또는 피부병치료 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 화장품 조성물에 대한 것이다.
본 발명에 따르면, 이 조성물은 벌꿀 또는 로얄 젤리, 및 적어도 아미노산 시퀀스 Gly-X1-X2-Pro-Gly를 포함하는 펩티드의 조합을 포함한다.
본 발명은 피부 노화 신호의 발현을 지연하거나 이들의 효과를 늦추는 것을 가능하게 한다.
본 발명에 따르면, 이 조성물은 벌꿀 또는 로얄 젤리, 및 적어도 아미노산 시퀀스 Gly-X1-X2-Pro-Gly를 포함하는 펩티드의 조합을 포함한다.
본 발명은 피부 노화 신호의 발현을 지연하거나 이들의 효과를 늦추는 것을 가능하게 한다.
Description
본 발명의 대상은 벌꿀, 또는 로얄 젤리, 그리고, 적어도 아미노산 시퀀스 Gly-X1-X2-Pro-Gly를 포함하는, 펩티드의 조합을 포함하는 화장품 조성물이다.
잘 알려진 바와 같이, 피부 노화는 유전적인 인자의 결과이지만, 그러나 또한, 예를 들어 햇볕에의 노출과 같은 환경적인 인자의 결과이고, 그리고 그 자체로로는 동시에 표피 및 진피의 준위에서 분자의, 세포질의 조직학적 및 임상학적 변화임이 명백하다.
이들 피부-노화-관련 변화들 중에서, 표피와 진피의 계면에서 보다 낮은 부착력 생성하는 진피-표피의 연결부의 평탄화를 유도하는 표피의 두께에 있어서의 감소와 표피의 융기부의 사이즈에 있어서의 감소가 관찰되어 졌다. 섬유아세포 밀도의 감소 또한 진피에서 관찰되어 졌다.
이러한 피부의 위축은 또한 점진적으로 세포질 외의 매트릭스에 변화로 반영되어 지고, 생성된 콜라겐의 양에서의 감소와 상기 세포질 외의 매트릭스의 구성요소인 프로테오글리칸, 글리코스아미노글리칸 및 피브로넥틴의 준위에 있어서의 쇠락 및 피부에서 엘라스틴 섬유의 준위에서의 기움에 연계되어 진다.
이들 현상은 피부의 연약성을 이끌어, 그의 기계적 그리고 기능적 특성의 손상과 그의 보호적 그리고 배리어 기능의 손상을 초래하고, 그리고 최종적으로 보다 육안으로 잘 보이는 주름의 발현을 일으키는 탄력성의 손실을 초래한다.
이와는 역으로, 치료는 표피와 진피의 수선의 단계를 유발하고, 상처의 표피 재생화 반응을 초래하는 몇몇 가지의 단계를 포함하는 그 자체로서 조직의 수선 과정이다 (비특허문헌 1; Ann. Dermatol. Venereol. 2005, 132 :8549-68). 이 조직 수선의 페이스는 섬유아세포 증식 및 세포질 외의 패트릭스 생합성에 상응한다. 표피생성 반응 페이스는 표피의 세포(케라티노사이트)의 전이와 그런 다음 표피를 재형성하기 위한 이들의 분화를 포함한다. 세포질 외의 매트릭스는 점진적으로 재구성되어 진다.
단독으로 그 자체적으로 치료하고 수선하는 피부의 주요한 결점은 종종 피부의 성형성과 탄력성의 결핍이다. 이것은 또한 노화되어 지거나 햇볕에 노출되어 진 피부(광노화/탄력섬유조직의 변성)에 대해서도 그렇다. 그러나, 이러한 피부 치료의 품질은 생물 역학의 특성 및 피부의 미용에 필수적이다.
비특허문헌 1: Ann. Dermatol. Venereol. 2005, 132 :8549-68
본 발명의 주요한 목적은, 보다 조밀하고 그리고 보다 탄력성 있는 진피를 위해, 내부적-성장 및 매트릭스-재유기적결합 인자로서 작용하는 조직 수선 과정을 초래하기 위해, 실질 피부 재건 촉진자로서 작용하는 섬유아세포를 자극함에 의해 조직의 재생 과정을 촉진할 수 있는, 특히 화장품 조성물의 내용물로 사용되어 질 수 있는 새로운 화장품 제제를 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 다른 주요한 목적은 이러한 화장품 제제를 포함하는 화장품 조성물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 또 다른 주요한 목적은 이러한 화장품 제제의 적용을 포함하는 화장 케어 방법을 제공하기 위한 것이다.
본 발명자 등은 벌꿀, 또는 로얄 젤리, 그리고 특정한 아미노산 시퀀스를 포함하는 펩티드의 조합이 실질 피부 재건 촉진자로서 행동하는 섬유아세포를 자극함에 의해, 조직의 재생 과정을 촉진할 수 있게 한다는 것을 본 발명에서 밝혀내게 되었다.
따라서 상기 언급된 조합은 보다 조밀하고 그리고 보다 탄력성 있는 진피를 위한 내부적-성장 및 매트릭스-재유기적결합 인자로서 작용하는 조직 수선 프로세스를 가능하게 한다.
본 발명의 제일 대상은 따라서 적어도 하나의 화장품학적으로 허용될 수 있는 부형제를 포함하는 화장품 제제 또는 화장품 조성물에 대한 것으로, 이것은 벌꿀 또는 로얄 젤리, 그리고 시퀀스 Gly-X1-X2-Pro-Gly를 포함하는 펩티드 또는 상기 펩티드의 유도체를 포함하는 것을 특징으로 하고, 여기서 X1 및 X2는 천연 또는 합성 아미노산 및 이들의 유도체로부터 선택된 아미노산이다. 따라서, 본 발명은 벌꿀 또는 로얄 젤리, 그리고 시퀀스 Gly-X1-X2-Pro-Gly를 포함하는 펩티드 또는 상기 펩티드의 유도체의 조합 및 상기 조합을 포함하는 화장품 조성물에 대한 것이다.
상기 언급된 펩티드의 조합은, 유익하기로는 천연이나 합성 아미노산으로부터 선택된, 유익하기로는 5 내지 8 아미노산, 또는 이들 아미노산의 유도체들을 포함한다.
X1 및 X2는 바람직하기로는 발린 (Val), 프롤린 (Pro), 알라닌 (Ala), 글리신 (Gly), 라이신 (Lys), 세린 (Ser), 아스파르트 산 (Asp), 아르기닌 (Arg) 및 이소류이신 (Ile), 또는 이들의 염이나 유도체로부터 선택된다.
바람직한 펩티드 중에는, 다음으로부터 선택된 시퀀스를 포함하는 것이나 또는 이들 시퀀스에 의해 형성된 것을 언급할 수 있다:
Val-Gly-Lys-Ser-Pro-Gly
Ile-Gly-Lys-Ser-Pro-Gly
Pro-Gly-Gly-Val-Lys-Pro-Gly
Val-Gly-Val-Val-Pro-Gly
Ile-Gly-Lys-Gly-Pro-Gly-Gly-Val
Val-Gly-Ala-Met-Pro-Gly
Val-Gly-Ala-Ser-Pro-Gly
Val-Gly-Lys-Met-Pro-Gly
Ile-Gly-Ala-Met-Pro-Gly
Ile-Gly-Ala-Ser-Pro-Gly
Ile-Gly-Lys-Met-Pro-Gly
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly
Gly-Asp-Ser-Pro-Gly-Asp-Lys
Pro-Gly-Gly-Val-Leu-Pro-Gly
Val-Gly-Val-Val-Pro-Gly
Ile-Gly-Leu-Gly-Pro-Gly-Gly-Val
Val-Gly-Leu-Ser-Pro-Gly
Ile-Gly-Leu-Ser-Pro-Gly
Ile-Gly-Val-Ala-Pro-Gly
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly
Gly-Ala-Ala-Pro-Gly
Gly-Val-Val-Pro-Gly
Gly-Gly-Gly-Pro-Gly
Gly-Leu-Leu-Pro-Gly
Gly-Ile-Ile-Pro-Gly
Gly-Ser-Ser-Pro-Gly
Gly-Thr-Thr-Pro-Gly
Gly-Cys-Cys-Pro-Gly
Gly-Met-Met-Pro-Gly
Gly-Phe-Phe-Pro-Gly
Gly-Tyr-Tyr-Pro-Gly
Gly-Trp-Trp-Pro-Gly
Gly-Asp-Asp-Pro-Gly
Gly-Asn-Asn-Pro-Gly
Gly-Glu-Glu-Pro-Gly
Gly-Gln-Gln-Pro-Gly
Gly-Arg-Arg-Pro-Gly
Gly-His-His-Pro-Gly
Gly-Lys-Lys-Pro-Gly
Gly-Pro-Pro-Pro-Gly
Gly-(3-하이드록시프롤린)-(3-하이드록시프롤린)-Pro-Gly
Gly-4-하이드록시프롤린-4-하이드록시프롤린-Pro-Gly
Gly-Gly-Gln-Gln-Pro-Gly-Leu
Ala-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly
Ala-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Leu
Val-Gly-Gly-Val-Pro-Gly
Leu-Gly-Thr-Ile-Pro-Gly.
펩티드 조합은 유익하기로는 2 내지 22 탄소 원자를 포함하는 적어도 하나의 선형이나 분지된, 포화 또는 불포화된, 가수분해된 또는 비가수분해된, 황-함유 또는 황-함유하지 않은 지방산으로 에스테르화되어 질 수 있다.
하나의 바람직한 실시형태에 따르면, 펩티드는 유익하기로는 팔미톨, 스테아로일, 엘라이도일, 라우로일, 미리스토일, 스테아로일, 올레오일, 아라키딜 또는 리놀레오일 군일 수 있는, 8 내지 22 사이의 탄소 원자를 포함하는 지방산으로 에스테르화되어 진다.
특별하게 바람직한 펩티드의 조합은 시퀀스 Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly에 의해 형성되거나 이를 포함하는 펩티드, 또는 화장품학적으로 허용될 수 있는 염이고, 여기서 상기 펩티드는 또한 유익하기로는 팔미토일이나 스테아로일 군 또는 화장품학적으로 허용될 수 있는 염으로 에스테르화되어 진다.
바람직한 펩티드는 세데르마(Sederma) 사에 의해 상표명 바이오펩티드 이엘(Biopeptide EL)로 수성-글리콜 용액의 형태로 시판되는 팔미토일-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly 이다.
벌꿀은 유니플로럴이나 폴리플로럴 벌꿀이다.
벌꿀은 바람직하기로는 클로버 (Trifolium repens) 벌꿀, 백리향 (Thymus vulgaris) 벌꿀 또는 대안적으로 마누카 (Leptospernum scoparium) 벌꿀이다.
본 발명에 따른 화장품 제제는 화장품 조성물에 합체되어 질 수 있다.
따라서, 본 발명은 또한 상기에 정의된 것과 같은 것이나 또는 다음의 상세한 설명으로부터 얻어지는 것과 같은 화장품 제제를 포함하는 화장품 조성물에 대한 것이다.
본 발명에 따른 화장품 제제의 두 구성성분 중의 하나로 사용되어 지는 벌꿀이나 로얄 젤리의 농도는 화장품 제제의 중량이나 화장품 제제를 포함하는 화장품 조성물의 중량에 대해 0.001％ 내지 10％ 사이로 될 수 있다. 하나의 유익한 실시형태에 따르면, 이 농도는 상기 제제 또는 상기 화장품 조성물의 0.01 중량％ 내지 5 중량％ 사이일 수 있다.
하나의 특정한 실시형태에 따르면, 상기 언급된 펩티드 또는 펩티드 유도체는 화장품 제제의 중량이나 화장품 제제를 포함하는 화장품 조성물의 중량에 대해 0.001％ 내지 5％ 사이의 농도로 포함되어 질 수 있다. 하나의 유익한 실시형태에 따르면, 이 농도는 상기 제제 또는 상기 화장품 조성물의 0.01 중량％ 내지 5 중량％ 사이일 수 있다.
본 발명의 화장품 조성물은, 상기 언급된 조합에 부가하여, 유익하기로는 다음으로부터 선택되어 질 수 있는 하나 또는 그 이상의 다른 기질을 포함한다:
- 비타민 A, 레티놀 및/또는 그의 에스테르와 같은 세포 재생을 증진하는 분자, 과일 산, 특히는 말릭산, 글리콜산 또는 시트르 산과 같은 알파- 또는 베타-하이드록시산, 살리실산이나 그의 에스테르, 젠티식산이나 그의 에스테르로, 특히는 토코페롤 젠티세이트;
- 콜라겐의 합성을 자극하는 펩티드와 같은 피부의 견고성을 자극하는 제제로, 특히는 콜라겐 타입 I, II, IV 또는 VII, 센텔라 아시아티카(Centella asiatica) 추출물, 마데카식 산, 아시아틱 산, 마데카소사이드, 귀리 추출물, 베르토렐티아 엑셀사(Bertholletia exscelsa) 추출물, 소야 단백질 또는 펩티드류 가수분해산물, 포텐틸라 에렉타(Potentilla erecta) 추출물, 시게스벡키아 오리엔탈리스(Siegesbeckia orientalis) 추출물 또는 진세노사이드류나 노토진세노사이드류로 특히 Rb1, R0, 비그나 아코니티폴리아(Vigna aconitifolia) 씨앗 추출물;
- 마마쿠 바이탈 에센스(Mamaku vital essence) 추출물, 시아테아 메듈라리스(Cyathea medullaris) 잎 추출물, 에리오보트리야 야포니카(Eriobotrya japonica)의 추출물이나 저분자량의 히알루론산 분획 또는 아데늄 오베슘(Adenum obesum) 추출물과 같이 진피 및 표피 수준에서 히알루론산 또는 글리코스아미노글리칸의 합성을 증진하는 분자나 추출물,
- 엑디스테론, 터케스테론, 칼슘 유도체류 또는 비타민 D 전구체류와 같이 표피의 분화를 제어하는 분자나 추출물;
- 아데노신, 카르니틴이나 그의 유도체류, 특히는 아세틸카르니틴, 비타민 A 또는 화장품학적으로 허용될 수 있는 이들의 에스테르, 특히는 비타민 A 프로피오네이트 또는 비타민 A 팔미테이트,
- 쿼세틴, 캠프페롤, 아피게닌, 우고닌, 또는 이들을 포함하는 식물 추출물과 같은 소야 펩티드나 플라보노이드, 루스커스 아큐레투스(Ruscus aculeatus) 추출물과 같은 메탈로프로테이나제(MMP) 저해제로, 특히는 MMP1, MMP2 또는 MMP9 저해제,
- 아스퍼길러스 퓨미가터스(Aspergillus fumigatus), 모모르디카 챠란티아(Momordica charantia) 또는 큐큐르비타 맥시마(Cucurbita maxima) 식물 추출물과 같은 엘라스타제 저해제,
- 호박 추출물과 같이 더마토폰틴의 합성을 자극할 수 있는 기질,
- 위치 하젤(witch hazel) 추출물과 같은 기공을 폐쇄하는 수렴성 식물의 추출물이나 분자,
- 벤조페논, 4-부틸 메톡시디벤조일메탄, 에틸헥실 메톡시시나메이트, 옥토크릴렌, 에틸헥실 살리실레이트, 페닐벤즈이미다졸 술폰산 또는 호모살레이트와 같이 UVA 및 UVB 방사로부터 보호하는 스크린 제제 단독이나 또는 티탄늄 산화물과의 조합,
- 코지산, 블랙베리 또는 리코라이스 근 추출물, 알부틴, 칼슘 판토테인술포네이트, 볼딘, 디아세틸볼딘, 비타민 C 또는 이들의 유도체류로, 글리코사이드류나 백합, 특히는 구경 추출물과 같이 색소침착의 질환에 작용하는 식물 추출물이나 분자,
- 아르테미시아 캐필러리스(Artemisia capillaris) 추출물, 생귀솔바 오피시날리스(Sanguisorba officinalis)의 추출물, 레스버라트롤 및 그 유도체류, 큐르큐마 또는 큐큐민이나 테트라하이드로큐큐민, 포도 씨로부터 추출된 폴리페놀, 비타민 E 및 그 유도체류, 특히는 그의 인산염 유도체류, 에르고티오네인이나 그의 유도체, 이데베논, 레스버트라졸, 피세이드, 스틸벤 또는 하이드록시펜안트렌과 같은 프리-라디칼-소거제 또는 항-염증 분자,
- 예를 들어 오르키드 브라소카틀레야 말셀라(Brassocattleya marcella)의 추출물과 같은 브라소카틀레야에 속하거나 또는, 예를 들어 반다 코에룰레아(Vanda coerulea), 벤다 테레스(Vanda teres) 또는 대안적으로 반다 데니소니아나(Vanda denisoniana)로부터 선택된 오르키드의 추출물과 같은 반다 속에 속하는 오르키드와 같은 오르키드의 추출물,
- 글리세롤이나 천연 폴리올, 천연 또는 합성 세라마이드 또는 온천수나 광천수와 같은 보습 분자.
유익하기로는, 조성물은 또한 안료, 염료, 폴리머, 계면 활성제, 유동화제, 향료, 전해질, pH 조정제, 항산화제 및 보존제, 그리고 이들의 혼합물로부터 선택되어 질 수 있는 적어도 하나의 화장품학적으로 허용되어 질 수 있는 부형제를 포함한다.
본 화장품 조성물은, 예를 들어, 세럼, 로션, 크림이거나 또는 그렇지 않으면 하이드로겔로, 바람직하기로는 마스크일 수 있고, 또는 스틱이나 그렇지 않으면 패치의 형태로 되어 질 수 있다.
본 발명의 추출물 및 조성물은 특별하게는 피부 노화의 신호의 발현을 지연하거나, 이들의 효과를 늦추는데 바람직한 효과를 나타낸다.
하나의 특별한 실시형태의 변형체에 따르면, 상기 부가적인 화장품 기질은 상기 화장품 제제 또는 화장품 조성물의 0.001 중량％ 내지 10 중량％ 사이의 농도, 특별하게는 상기 화장품 제제 또는 화장품 조성물의 0.01 중량％ 내지 5 중량％ 사이의 농도로 포함되어 질 수 있다.
본 발명의 제이의 측면에 따르면, 본 발명은 또한 피부 노화의 신호의 발현을 지연하거나, 또는 이들의 효과를 늦추기 위한 화장품 제제로서 벌꿀 또는 로얄 젤리, 그리고 적어도 하나의 아미노산 시퀀스 Gly-X1-X2-Pro-Gly를 포함하는 펩티드의 조합의 용도에 대한 것으로, 여기서, X1 및 X2는 미리 기술된 것과 같은 또는 다음의 상세한 설명에서와 같은, 특별하게는 위에서 미리 기술된 것과 같은 화장품 조성물의 형태로나 다음의 상세한 설명에서의 형태로의 천연 또는 합성 아미노산으로부터 선택된 아미노산이다.
본 발명의 제삼의 측면에 따르면, 본 발명은 또한 특히는 피부 노화의 신호의 발현을 지연하거나 또는 이들의 효과를 늦추기 위하여, 관련된 부부의 적어도 일부 영역에, 벌꿀 또는 로얄 젤리, 그리고 적어도 하나의 아미노산 시퀀스 Gly-X1-X2-Pro-Gly를 포함하는 펩티드의 조합의 적용을 포함하는 것을 특징으로 하는 화장 케어 방법에 대한 것으로, 여기서, X1 및 X2는 미리 기술된 것과 같은 또는 다음의 상세한 설명에서와 같은, 특별하게는 위에서 미리 기술된 것과 같은 화장품 조성물의 형태로나 다음의 상세한 설명에서의 형태로의 천연 또는 합성 아미노산 및 이들의 유도체로부터 선택된 아미노산이다.
본 발명의 다른 목적, 특징 및 이점은 다음에 따르는 예시적인 실시형태에 의해 보다 명확하게 나타날 것이고, 이는 단지 본 발명에 따른 화장품 활성 제제의 특성을 입증하는 제조 및 시험에 대한 참고로 주어지는 것이며, 이를 사용한 화장품 조성물의 예는 단지 본 발명을 상세하게 설명하기 위한 것으로 발명의 범주를 결코 한정하는 것은 아닌 것이다.
본 실시예에서, 다르게 명시되지 않는다면, 모든 백분율은 중량 기준으로 주어진 것이며, 온도는 섭씨온도이고, 압력은 대기압력이다.
상기와 같이 구성되는 본 발명은 보다 조밀하고 그리고 보다 탄력성 있는 진피를 위해, 내부적-성장 및 매트릭스-재유기적결합 인자로서 작용하는 조직 수선 과정을 초래하기 위해, 실질 피부 재건 촉진자로서 작용하는 섬유아세포를 자극함에 의해 조직의 재생 과정을 촉진할 수 있는 화장품 조성물의 내용물로 사용되어 질 수 있는 신규한 화장품 제제를 제공하는 유용한 발명이다.
도 1a, 1b 및 도 2a 내지 도 2d는 본 발명에 따른 조합의 활성을 입증하기 위해 사용되어 진 방법론을 도시하는 예이다.
도 1a 및 1b는 두 개의 관찰의 예로, 노르말 인간 섬유아세포(NHFs)가 배양되어 진 웰의 인위적으로 "손상된" 영역의 상 대비 현미경으로 얻어진 것이다. 도 1a에서의 이미지는 IBIDI 배양 인서트가 위치되어 진 장소에 상응하는 세포가 없는 영역을 가시화하였다. 도 1b는 NHFs에 의해 부분적으로 재착생 후의 동일한 영역을 가시화하였다.
도 2a 내지 2d는 상기 언급된 배양 인서트의 수단에 의해 인위적으로 손상된 지지체의 영역의 섬유아세포에 의한 착생을 특징적으로 하는 것을 가능하게 하는, 블루 형광 및 레드 형광에서 캡쳐된 이미지 분석의 단계를 나타낸다.
도 3은 각각 비처리된 대조군, NT로 나타냄; 양성 대조군으로 백리향 벌꿀 및 Pal-VGVAPG 펩티드로 각각 단독으로 사용된 것, 그리고 마지막으로 본 발명을 구성하는 상기 조합으로, 클로버 벌꿀과 상기 언급된 펩티드의 조합인, 각각의 시험된 제품으로 얻어진 평방 센티미터 당 재착생된 상흔을 갖는 세포의 수를 Y-축을 따라 막대 그래프의 형태로 나타낸 것이다.
도 1a 및 1b는 두 개의 관찰의 예로, 노르말 인간 섬유아세포(NHFs)가 배양되어 진 웰의 인위적으로 "손상된" 영역의 상 대비 현미경으로 얻어진 것이다. 도 1a에서의 이미지는 IBIDI 배양 인서트가 위치되어 진 장소에 상응하는 세포가 없는 영역을 가시화하였다. 도 1b는 NHFs에 의해 부분적으로 재착생 후의 동일한 영역을 가시화하였다.
도 2a 내지 2d는 상기 언급된 배양 인서트의 수단에 의해 인위적으로 손상된 지지체의 영역의 섬유아세포에 의한 착생을 특징적으로 하는 것을 가능하게 하는, 블루 형광 및 레드 형광에서 캡쳐된 이미지 분석의 단계를 나타낸다.
도 3은 각각 비처리된 대조군, NT로 나타냄; 양성 대조군으로 백리향 벌꿀 및 Pal-VGVAPG 펩티드로 각각 단독으로 사용된 것, 그리고 마지막으로 본 발명을 구성하는 상기 조합으로, 클로버 벌꿀과 상기 언급된 펩티드의 조합인, 각각의 시험된 제품으로 얻어진 평방 센티미터 당 재착생된 상흔을 갖는 세포의 수를 Y-축을 따라 막대 그래프의 형태로 나타낸 것이다.
실시예 1: 펩티드 및/또는 펩티드 유도체와 벌꿀과의 조합의 치료에 대한 활성의 측정
본 실험은 생체 외에서 치료 현상의 정량적이고 그리고 완전하게 재현 가능한 측정을 허용하는 생체적합할 수 있는 세포 배양 인서트의 모델 상에서 기초되어 진다.
1. 세포 배양
본 연구에서 사용된 세포는 노르말 인간 섬유아세포(NHFs)이다.
세포는 10％ 송아지 혈청 및 1.3 mM L-글루타민으로 보충된 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배양 배지 내에서 플라스크 당 1 밀리온(million)의 밀도로 175㎠ 플라스크에 접종되어 진다. 컨플루언스에 도달하면, 세포들은 트립신화되어 지고 그리고 치료 시험을 위해 재-접종되어 진다.
2. 치료 시험
세포의 접종
세포의 접종 전에, 주식회사 IBIDI (독일)에 의해 상표명 "컬쳐-인서트(Culture-Insert) (ref. 80209)"으로 키트의 형태로 시판되는 인서트가 여섯 개의 플레이트의 웰의 바닥에 위치되어 진다. NHFs는 10％의 송아지 혈청을 함유하는 DMEM 배지 내에 20 000 세포/㎠의 비율로 접종되어 지고, 그리고 48시간 동안 배양되어 진다.
세포가 컨플루언스에 도달되었을 때, 배양 배지는 교체되어 지고 그리고 DMEM 단독으로 재위치되어 진다. 배양은 24시간 동안 지속되어 진다.
처리
두 개의 웰이 이 연구에서 처리(시험된 기질) 당 사용되어 졌다.
시험된 기질은 다음과 같다(표시된 농도는 최종 농도임):
클로버 벌꿀 100 ㎍/mL
수성-알코올 용액에서 Pal-VGVAPG 1％
클로버 벌꿀 + Pal-VGVAPG 100 ㎍/mL + 1％
세포 배양은 또한 비처리된 대조군(NT)을 수행하기 위해, 두 개의 웰에서 시험 기질의 부가 없이 DMEM 배지 단독으로 수행되어 졌다.
Pal-VGVAPG 펩티드는 주식회사 Sederma에 의하여 상표명 "바이오펩티드 이엘(Biopeptide EL)로 시판되는 수성-글리콜성 용액의 형태이다.
시험된 활성 제제는 다음의 방법으로 제조되어 졌다:
PBS 내에 100 ㎎/ml의 클로버 벌꿀의 저장 용액이 제조되어 지고 그리고 0.22㎛ 필터를 통한 여과에 의해 멸균되어 졌다. 그런 다음 최종 희석(1/1000배)이 DMEM 단독 내에서 이루어졌다.
상업적인 바이오펩티드 이엘 용액은 배양 배지 내에서 1/100배로 희석되어 졌다.
치료
배양 인서트는 무엇보다 먼저 멸균 트위저로 제거되어 진다. 상 대비 현미경을 사용하여, 어떠한 세포도 없는 "손상된" 영역이 인서트가 위치되어 지는 장소에서 관찰되어 졌다(도 1a).
초기의 배양 배지는 그런 다음 상기에 기술된 조건에 따라 시험된 활성 제제를 포함하는 배양 배지로 각 웰에 재위치되어 진다.
세포는 37℃에서의 인큐베이터 내에서, 그리고 5％ CO2를 포함하는 분위기 하에서 16시간(미리 결정되어 진 최적의 측정 시간) 동안 유지되어 진다. 처리에 따른 반흔 모양의 영역의 재착생의 정도는 이미지 분석 기법의 수단에 의해 관찰되어 졌다(도 1b).
세포 라벨링
PBS로 린스한 후, 세포는 10％ 포르말린 용액으로 10분 동안 고정되어 지고, 그런 다음 PBS로 린스되어 진다. 세포는 그런 다음 10분 동안 0.1％ 트립톤 X100 용액으로 투과되어 진다.
DAPI (4',6'-디아미디노-2-페닐인돌), 세포 핵을 라벨링하기 위해 사용된 형광 분자 및 액틴 세포골격을 라벨링하기 위해 사용된, 팔로이딘 546을 포함하는 용액이 세포 상에 증착되어 지고, 그리고 어둠 하에서 1시간 동안 대기 온도에서 배양되어 졌다.
세포는 그런 다음 PBS로 린스되어 지고, 그리고 점적 수성 마운팅 배지로 도막되어 졌다.
이미지는 손상된 영역에서 웰 당 2 사진의 비율로, 블루 형광(세포 핵) 및 레드 형광(액틴 섬유)으로 니콘 TE2000 비디오 마이크로스코프 상에 즉시적으로 취하여 졌다.
이미지 분석
이미지 분석은 인서트의 제거 후 인위적으로 "손상된" 영역의 섬유아세포에 의해 착생을 가시화하고 그리고 정량화하기 위해 사용되어 졌다. 레이카(Leica) QWIN 소프트웨어가 분석을 위해 사용되었다.
분석은 다음의 네 가지 단계를 포함한다:
1 - NIS 소프트웨어가 장착된 니콘 TE2000 비디오 마이크로스코프를 사용하여, 처리 전(시간 0) 이미지의 캡쳐(도 2a): 이 이미지는 인서트의 제거 후 세포가 없는 벗겨진 영역을 나타낸다;
2 - 컴퓨터 도구의 수단에 의해 측정 영역의 결정 - 황색으로 된 영역(도 2b);
3 - 치료하고 그리고 세포 핵을 라벨링하는 단계 루 새로운 이미지의 캡쳐(도 2c 및 2d): 손상된 영역은 최초로 세포-유리 영역을 재착생하는 섬유아세포를 포함한다;
4 - 단계 2에서 정의된 영역에서 라벨링된 세포 핵의 자동적 선정 및 상기 라벨된 세포 핵의 계수.
단위 영역(㎠) 당 손상된 부위를 재착생한 세포의 수가 계산되어 졌다. 측정은 시험된 활성 제제 당 4 이미지 상에서 재현되어 졌다.
여기에서 도 1a, 1b, 2a 및 2b는 실시예 1의 처리에 따라 얻어진 것이 아니고, 실시예 1의 처리에 따라 얻어진 사진의 종류를 도시하기 위한 것이라고 인지되어 져야만 한다. 따라서, 도 1a, 1b, 2a 및 2b의 것에 유사한 사진이 실시예 1의 처리에 따라 얻어진다.
3. 결과
상처를 입은 곳의 재착생에 대해 시험된 벌꿀의 효과는 도 3에 나타내어 졌다.
클로버 벌꿀 (비처리된 대조군에 대비하여 +190％) 및 Pal-VGVAPG (비처리된 대조군에 대비하여 +150％)는 손상된 영역의 재착생에 대해 유의성 있는 효과를 가진다. 클로버 벌꿀과 Pal-VGVAPG의 조합 (비처리된 대조군에 대비하여 +224％)은 클로버 벌꿀 또는 Pal-VGVAPG 단독으로 처리된 것에서 관찰되어 진 것보다 유의성 있게 큰 효과를 나타내었다. 벌꿀과 Pal-VGVAPG 펩티드의 조합은 이들 두 가지 활성 제제의 각각의 작용을 보다 더 강력하게 할 수 있게 하여서, 기대 외의 결과를 구성한다.
이것은 피부 노화의 신호의 발현을 예방하거나 지연하는 또는 이들의 효과를 늦추는데 특별하게 효과적인 화장품 활성 제제로서 클로버 벌꿀의 선택을 정당하게 한다.
실시예 2: 본 발명에 따른 화장품 제형
아래의 조성물은 본 발명의 실시형태의 예를 나타낸다. 백분율은 최종 조성물의 중량에 대비한 중량으로 표시되어 졌다.
피부의 견고성을 개선하는 항주름 세럼
클로버 벌꿀 추출물 4
로얄 젤리 0.1
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly 펩티드 0.3
센텔라 아시아티카(Centella asiatica) 0.1
비그나 아코니티폴리아(Vigna aconitifolia) 추출물 0.1
파르솔(Parsol) MCX 3
부형제 총량 100
이 세럼은 노화의 신호를 나타내는 얼굴의 영역에 아침에 적용되어 진다.
진정 항-노화 개선 나이트 크림
클로버 벌꿀 글리콜리세이트 3
시아테아 메듈라리스(Cyathea medullaris) 추출물 0.2
망고 버터 2
튜케스테론(Turkesterone ) 0.02
Lys-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly 펩티드 0.1
Asp-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ser 펩티드 0.1
히알루론 산 1
아스코르빌 글리코사이드 0.4
알파-토코페롤 0.2
포타슘 글리시르히지네이트(Potassium glycyrrhizinate) 0.05
방향성 에멀젼 부형제 총량 100
이 크림은 잠잘 때 얼굴에 적용되어 진다.
항 주름 개선 엣센스
팔리토일-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly 펩티드 0.2
로얄 젤리 3
버톨레티아 엑셀사(Bertholletia excelsa) 추출물 0.05
말바 실베스트리스(Malva sylvestris) 추출물 0.02
글리콜 산 0.1
알코올 3
아데노신 0.02
부형제 총량 100
이 제제는 얼굴의 주름 및 미세한 라인에 적용되어 진다.
항-노화 파운데이션
클로버 벌꿀 글리콜리세이트 0.01
로얄 젤리 0.02
팔미토일-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly 펩티드 0.01
UVA 및 UVB 스크리닝 제제 5
채색된 부향제 총량 100
이 제제는 얼굴에 적용되어 진다.
Claims (18)
- 적어도 하나의 약학적으로 허용될 수 있는 부형제를 포함하는 화장품 조성물로, 상기 화장품 조성물은 (i) 벌꿀 또는 로얄 젤리, (ii) 그리고 시퀀스 Gly-X1-X2-Pro-Gly를 포함하는 펩티드 또는 상기 펩티드의 유도체를 포함하고, 여기서 X1 및 X2는 천연 또는 합성 아미노산 및 이들의 유도체로부터 선택된 아미노산인 것을 특징으로 하는 화장품 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 펩티드는 5 내지 8 아미노산, 또는 이들 아미노산의 유도체를 포함함을 특징으로 하는 화장품 조성물.
- 제 1항에 있어서, X1 및 X2는 발린 (Val), 프롤린 (Pro), 알라닌 (Ala), 글리신 (Gly), 라이신 (Lys), 세린 (Ser), 아스파르트 산 (Asp), 아르기닌 (Arg) 및 이소류이신 (Ile), 또는 이들의 염이나 유도체로부터 선택 것임을 특징으로 하는 화장품 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 펩티드는 다음으로부터 선택된 아미노산의 시퀀스를 포함하거나 이에 의해 형성된 것임을 특징으로 하는 화장품 조성물:
Val-Gly-Lys-Ser-Pro-Gly
Ile-Gly-Lys-Ser-Pro-Gly
Pro-Gly-Gly-Val-Lys-Pro-Gly
Val-Gly-Val-Val-Pro-Gly
Ile-Gly-Lys-Gly-Pro-Gly-Gly-Val
Val-Gly-Ala-Met-Pro-Gly
Val-Gly-Ala-Ser-Pro-Gly
Val-Gly-Lys-Met-Pro-Gly
Ile-Gly-Ala-Met-Pro-Gly
Ile-Gly-Ala-Ser-Pro-Gly
Ile-Gly-Lys-Met-Pro-Gly
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly
Gly-Asp-Ser-Pro-Gly-Asp-Lys
Pro-Gly-Gly-Val-Leu-Pro-Gly
Val-Gly-Val-Val-Pro-Gly
Ile-Gly-Leu-Gly-Pro-Gly-Gly-Val
Val-Gly-Leu-Ser-Pro-Gly
Ile-Gly-Leu-Ser-Pro-Gly
Ile-Gly-Val-Ala-Pro-Gly
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly
Gly-Ala-Ala-Pro-Gly
Gly-Val-Val-Pro-Gly
Gly-Gly-Gly-Pro-Gly
Gly-Leu-Leu-Pro-Gly
Gly-Ile-Ile-Pro-Gly
Gly-Ser-Ser-Pro-Gly
Gly-Thr-Thr-Pro-Gly
Gly-Cys-Cys-Pro-Gly
Gly-Met-Met-Pro-Gly
Gly-Phe-Phe-Pro-Gly
Gly-Tyr-Tyr-Pro-Gly
Gly-Trp-Trp-Pro-Gly
Gly-Asp-Asp-Pro-Gly
Gly-Asn-Asn-Pro-Gly
Gly-Glu-Glu-Pro-Gly
Gly-Gln-Gln-Pro-Gly
Gly-Arg-Arg-Pro-Gly
Gly-His-His-Pro-Gly
Gly-Lys-Lys-Pro-Gly
Gly-Pro-Pro-Pro-Gly
Gly-(3-하이드록시프롤린)-(3-하이드록시프롤린)-Pro-Gly
Gly-4-하이드록시프롤린-4-하이드록시프롤린-Pro-Gly
Gly-Gly-Gln-Gln-Pro-Gly-Leu
Ala-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly
Ala-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Leu
Val-Gly-Gly-Val-Pro-Gly
Leu-Gly-Thr-Ile-Pro-Gly. - 제 1항에 있어서, 펩티드는 2 내지 22 탄소 원자를 포함하는 적어도 하나의 선형이나 분지된, 포화 또는 불포화된, 가수분해된 또는 비가수분해된, 황-함유 또는 황-함유하지 않은 지방산으로 에스테르화되어 짐을 특징으로 하는 화장품 조성물.
- 제 1항에 있어서, 펩티드는 팔미톨, 스테아로일, 엘라이도일, 라우로일, 미리스토일, 스테아로일, 올레오일, 아라키딜 또는 리놀레오일 군으로부터 선택된 8 내지 22 사이의 탄소 원자를 포함하는 지방산으로 에스테르화되어 짐을 특징으로 하는 화장품 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 펩티드는 시퀀스 Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly에 의해 형성되거나 또는 이를 포함하는 펩티드, 또는 화장품학적으로 허용될 수 있는 염이고, 여기서 상기 펩티드는 임의적으로 팔미토일이나 스테아로일 군 또는 화장품학적으로 허용될 수 있는 이들의 염으로 에스테르화되어 짐을 특징으로 하는 화장품 조성물.
- 제 1항에 있어서, 펩티드는 선택적으로 수성-글리콜 용액의 형태로 되는 팔미토일-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly임을 특징으로 하는 화장품 조성물.
- 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 있어서, 벌꿀은 유니플로럴이나 폴리플로럴 벌꿀임을 특징으로 하는 화장품 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 벌꿀은 클로버 (Trifolium repens) 벌꿀, 백리향(Thymus vulgaris) 벌꿀 또는 마누카 (Leptospernum scoparium) 벌꿀로 구성된 군에서 선택된 것임을 특징으로 하는 화장품 조성물.
- 제 1항에 있어서, 조성물은 안료, 염료, 폴리머, 계면 활성제, 유동화제, 향료, 전해질, pH 조정제, 항산화제 및 보존제, 그리고 이들의 혼합물로부터 선택되어 진 적어도 하나의 화장품학적으로 허용되어 질 수 있는 부형제를 포함함을 특징으로 하는 화장품 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 세럼, 로션, 크림, 하이드로겔, 마스크, 스틱, 패치의 형태임을 특징으로 하는 화장품 조성물.
- 제 1항에 있어서, 두 성분의 하나로 사용되는 벌꿀이나 로얄 젤리의 농도는 이를 함유하는 화장품 조성물의 0.001 중량％ 내지 10 중량％ 사이의 농도임을 특징으로 하는 화장품 조성물.
- 제 1항에 있어서, 두 성분의 하나로 사용되는 벌꿀이나 로얄 젤리의 농도는 상기 화장품 조성물의 0.01 중량％ 내지 5 중량％ 사이의 농도임을 특징으로 하는 화장품 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 펩티드 또는 펩티드 유도체의 농도는 이를 함유하는 화장품 조성물의 0.001 중량％ 내지 5 중량％ 사이의 농도임을 특징으로 하는 화장품 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 펩티드 또는 펩티드 유도체의 농도는 이를 함유하는 화장품 조성물의 0.01 중량％ 내지 5 중량％ 사이의 농도임을 특징으로 하는 화장품 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 화장 케어를 위한 것임을 특징으로 하는 화장품 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 피부 노화의 신호의 발현을 지연하거나 이들의 효과를 늦추기 위한 것임을 특징으로 하는 화장품 조성물.
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