KR20110074194A - 쉬땅나무 추출물을 포함하는 피부미백용 화장료 조성물 - Google Patents

쉬땅나무 추출물을 포함하는 피부미백용 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 쉬땅나무(Sorbaria sorbifolia var. stellipila) 추출물을 포함하는 피부미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 의하면 쉬땅나무(Sorbaria sorbifolia var. stellipila) 추출물은 멜라닌 생성억제 활성 및 피부 미백작용을 동시에 가지고 있으므로, 쉬땅나무 추출물은 각종 기능성 화장료로서 유용하다.
쉬땅나무(Sorbaria sorbifolia var. stellipila), 멜라닌 생성억제, 피부 미백

Description

쉬땅나무 추출물을 포함하는 피부미백용 화장료 조성물 {Whitening cosmetics composition containing the sorbaria sorbifolia var. stellipila extract}
본 발명은 쉬땅나무(Sorbaria sorbifolia var. stellipila) 추출물을 포함하는 피부미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.
인체에 있어서 피부는 외부환경으로부터 생체를 보호하는 보호막의 기능을 하는 기관으로서, 인체 내의 생체성분 즉, 물이나 전해질 등의 손실을 방지하는 동시에 외부로부터 유해물질이 인체 내로 침입하지 못하도록 하는 역할을 한다.
인간의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리ㅇ화학적인 변화가 일어나며, 그 원인으로는 크게 내적인 노화(intrinsic aging)와 광노화(photo-aging)로 구분되며 이에 관한 연구가 활발히 이루어져 왔다. 즉, 자외선, 스트레스, 질병상태, 환경인자, 상처, 나이가 들어감에 따른 자유라디칼의 활성화 등으로부터 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. 보다 구체적으로는 피부의 주요 구성물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부노화 현상이 생겨나는 것이다. 특히 단백질의 산화는 피부의 결합조직인 콜라겐, 히아루론산, 엘라스틴, 프로테오글리칸, 피브로넥틴 등이 절단되어 심한 과다 염증반응과 피부의 탄력에 지장을 주게 되고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역기능 저하의 사태에 이르게 된다. 그러므로 신체의 대사 과정 중 발생하는 자유라디칼이나 자외선 조사, 염증반응에 의해 매개되는 자유라디칼을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진대사에 의해 재생화 시켜서 세포를 증식시켜야 피부는 빠르게 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다.
2001년 7월 식품의약품안전청에서는 기능성 화장품 기준 및 시험방법 등을 고시한 바 있는데, 미백에 도움을 주는 물질로는 닥나무 추출물, 유용성 감초추출물을 고시성분으로 등재하였다. [화장품 관련 정책 종합설명회, 식품의약안전청, pp243-250, 2003] 이외에도 녹차, 상백피, 빈랑자, 황금, 산삼 등의 천연물은 화장품의 활성성분으로 사용하고 있다. [김영중, 천연물연구의 최근동향, 대한화장품학회지, 29, pp1-15, 2003; 안덕균, 피부미용의 한의학적 이론, 대한화장품학회지, 29, pp79-87, 2003] 이처럼 최근에 화장품 소재로 많은 천연물들이 연구되고 있으며, 특히 한의학에서 사용되는 한약재들을 응용한 한방화장품이 다양하게 연구 및 생산되고 있다. 한방재로 사용되고 있는 생약, 야채, 과일, 꽃 등의 식물 추출물 가운데 안정성이 뛰어난 화장품원료를 찾고자 하는 노력이 계속 이루 어져 왔다.
본 발명의 발명자들은 쉬땅나무 추출물이 멜라닌 생성억제 활성이 우수하고, 피부 미백효과가 있음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다. 즉, 쉬땅나무 추출물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물은 본 발명을 통해 처음으로 보고된다.
본 발명의 목적은 여러 천연물 중 쉬땅나무 추출물의 천연물로부터 제조된 추출물을 선택하여, 화장료의 원료로서의 효능을 확인하고, 그 사용 방법을 개발하여, 이 원료를 사용함으로써 소정의 기능성을 갖는 화장료를 제조할 수 있는 방법을 제공하는 것이다.
즉, 본 발명의 목적은 피부 화장료에 적용 가능하고 화장료에 함유 시 멜라닌 생성억제 활성 및 피부 미백효과를 나타내는 천연 추출물을 제공하는 것이다.
본 발명의 과제해결을 위하여, 쉬땅나무(Sorbaria sorbifolia var. stellipila) 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 그 특징으로 한다.
쉬땅나무 추출물은 멜라닌 생성억제 활성 및 피부 미백효과가 우수하다.
본 발명의 화장료 조성물은 쉬땅나무 추출물을 함유하고 있으므로, 피부 미백용 화장료 조성물로 유용한 효과를 가지고 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W) 또는 유중수(W/O)형의 에멀전, 연고 등의 다양한 제형으로 제조되어, 피부 미백을 위한 기능성 화장품으로 적용되는 효과를 가지고 있다.
이와 같은 본 발명을 보다 구체적으로 설명하면 하기와 같다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 쉬땅나무 추출물을 주요 활성 성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.
천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 한층 늘어나고 있다. 이에, 본 발명자들은 여러 천연물들에 있어서 화장품으로의 응용 가능성을 연구한 결과, 쉬땅나무를 선정하고 이로부터 추출물을 제조하여, 피부 미백 효과 실험을 통해 확인하여, 화장품 원료로서의 효능을 기대할 수 있다는 것을 발견하게 되었다.
쉬땅나무(Sorbaria sorbifolia var. stellipila)는 장미과에 속하는 낙엽 활엽 소교목으로서 다른 이름으로는 개쉬땅나무, 쉬나무, 밥쉬나무, 진지매 등으로 불리며 한약명으로는 진주매(珍珠梅), 동북진주매(東北珍珠梅) 등으로 불리며 꽃이 삭 모양이 수수이삭 같아서 쉬땅나무라고 불린다. 깊은 산의 산골짜기나 냇가에서 소군락을 이루며 자생하며 이른 봄 가장 빨리 싹을 틔우는 목본류 중의 하나이며 꿀이 많아 밀원식물로도 좋으며 초여름 흰꽃송이가 무리지어 가지 끝에 피는 모습이 아름다워 관상용, 조경용으로 가치가 매우 좋으며 이른 봄 새로 돋아나는 어린 순을 나물로 식용한다. 줄기, 열매이삭, 뿌리, 줄기 껍질을 모두 약으로 쓸 수 있으며 주로 줄기와 경피(莖皮)를 진주매(珍珠梅)라 하여 약용하며 가을이나 겨울에 채취하여 햇볕에 말려서 쓴다. 성분으로는 잎에는 솔비포린(sorbifolin; scutellarein-7-o-xylorhamnoside), 꽃에는 캠프게롤-3-아라보퓨라노사이드(kaempgerol-3-arabofuranoside), 아스트라가린(astragalin), 퀘르세틴-3-글루쿠로나이드(quercetin-3-glucuronide), 이소람네틴-3-글루코사이드(isorhamnetin-3-glucoside), 스쿠텔라레인(scutellarein), 클로로겐산(chlorogenic acid), 아르부틴(arbutin), 스쿠텔라레인-7-o-α-1-람노사이드(scutellarein-7-o-α-l-rhamnoside) 및 플라보노이드(flavonoid) 화합물이 함유되어 있다. 약리작용으로는 활혈(活血), 거어(祛瘀), 소종(消腫), 지통(止痛)의 효능이 있어 골절, 타박상, 염좌상, 풍습성관절염, 골다공증 및 뼈를 튼튼히 하는데 쓰며 울혈을 풀어주는 작용이 있어 동통에 따른 통증 완화 효과 등이 있는 것으로 알려져 있다. 쉬땅나무의 꽃은 풍치, 구충에 약으로 사용되어 왔다.
본 발명에서 화장료 원료로 사용하는 쉬땅나무 추출물은 쉬땅나무 전초로부터 침출, 전출하여 얻은 침출액, 또는 그 침출액을 다시 일부 또는 전부 농축하여 얻은 농축물, 또는 다시 그 농축물을 건조시켜 제조한 추출 엑기스 및 추출액 중에 함유되고 있는 주효과를 발휘하는 화학물질 그 자체를 포함한다.
한편, 본 발명에 따른 쉬땅나무 추출물의 함량은 화장료 조성물 전체에 대하여 동결건조중량 기준 0.001 내지 30.0 중량% 범위가 바람직하다. 상기 추출물의 함량이 0.001 중량% 미만인 경우에는 피부개선 효과가 거의 없으며, 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미하여 경제적이지 못하기 때문이다.
또한, 본 발명에 따른 쉬땅나무 추출물을 화장료 조성성분으로 사용함에 있어서는 동결건조된 분말 형태로는 물론이고, 물 또는 통상의 유기용매에 분산 또는 용해된 액체 형태로도 사용될 수 있다. 액체 형태로 화장료 조성물에 포함되더라도 동결건조중량 기준으로 0.001 내지 30.0 중량% 범위내로 그 사용량을 조절하여 사용할 수 있다.
또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기의 추출물 외에 본 발명이 목적으로 하는 주효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 바람직하게는 주효과에 상승효과를 줄 수 있는 다른 성분 예를 들면, 녹차 추출물, 닥나무 추출물, 감초추출물, 상백피 추출물, 빈랑자 추출물, 황금 추출물, 산삼 추출물 등의 천연물을 함유하는 것도 무방하다.
또한 본 발명에 따른 쉬땅나무 추출물은 건조된 쉬땅나무의 전초를 적절한 추출용매를 사용하여 추출한 것이다. 본 발명에서 사용되는 추출용매는 정제수 및 통상의 유기용매로부터 선택된 단일 용매 또는 2종 이상의 혼합용매를 사용할 수 있다. 구체적으로는 정제수, 탄소수 1 내지 6의 알콜, 글리세린, 탄소수 2 내지 6의 알킬렌글리콜, 탄소수 1 내지 6의 알칸, 탄소수 1 내지 6의 할로겐화탄화수소, 탄소수 2 내지 6의 알킬 알카노에이트 및 그의 혼합물로부터 선택된 추출용매를 사용할 수 있다. 좀 더 구체적으로 예시하면 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸렌글리콜, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 디클로로에탄, 헥산, 에틸아세테이트 및 그의 혼합물로부터 선택된 추출용매를 사용할 수 있다. 쉬땅나무의 전초를 상기 추출용매로 추출한 후에는 냉침 및 여과하고, 그 여액을 50℃ 이하에서 감압농축하고 감압농축물을 동결건조하여 본 발명에 따른 쉬땅나무 추출물을 분말 형태로 얻을 수 있다. 필요하다면, 상기 동결건조한 쉬땅나무 추출물 분말을 물 또는 통상의 유기용매에 분산 또는 용해시켜 액체 형태로 얻을 수도 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 수성, 수성-알콜성 또는 오일성 용액, 수중유 또는 유증수 또는 다중 에멀전, 수성 또는 오일성 겔, 액체, 페이스트성 또는 고체 무수 생성물, 소구체를 사용한 수성상에서의 오일분산물의 형태일 수 있으며 보다 바람직하게는 이온성 및/또는 비이온성 형태의 지질 소포체의 형태일 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 다소 유체일 수 있으며, 백색 또는 유색크림, 연고, 밀크로션, 유액(serum), 에센스, 페이스트 또는 무스의 외관을 가질 수 있다. 이는 선택적으로 에어로졸 형태로 피부에 적용될 수도 있고, 고체 형태 예컨대, 스틱의 형태일 수도 있다. 이는 피부용 케어 제품 및/또는 메이크업 제품으로서 사용될 수도 있다.
공지된 방식으로 본 발명에 따른 조성물은 또한 화장 분야에서 통상적인 보 조제, 예컨대 친수성 또는 친지성 겔화제, 친수성 또는 친지성 활성제, 보존제, 항산화제, 용매, 방향제, 충전제, 차단제, 안료, 흡취제 및 염료를 함유할 수 있다. 이들 다양한 보조제의 양은 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 양이며, 예컨대 화장료 조성물 총중량에 대해 0.01 내지 20 중량% 범위이다. 그 성질에 따라 이러한 보조제는 지방상, 수성상, 지질 소포체 및/또는 나노 입자에 도입될 수 있다. 어떠한 경우라도 보조제 및 그 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 악영향을 미치지 않도록 선택될 것이다.
이하, 실시예를 통해 본 발명을 좀 더 구체적으로 설명한다. 단, 이들 실시예는 본 발명의 예시적인 기재일 뿐이며 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되는 것은 아니다.
[실시예]
제조예 1. 쉬땅나무의 에탄올 수용액 추출물의 제조
세절하여 음건한 쉬땅나무를 95%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하여, 쉬땅나무 추출물 분말(쉬땅나무 6.0 g을 기준으로 한 수득율 2.0%)을 얻었다.
그리고, 상기에서 얻은 쉬땅나무 추출물 분말을 정제수/부틸렌글리콜이 7/3 부피비를 이루고 있는 혼합용액에 3 중량% 농도로 용해시킨 용액을, 하기 실시예에 서 시료용액으로 사용하였다.
제조예 2. 쉬땅나무의 프로필렌글리콜 추출물의 제조
상기 제조예 1과 동일한 방법으로 쉬땅나무 추출물 분말(3.0 g을 기준으로 한 수득율 1.0%)을 제조하되, 추출용매로서 95%(V/V) 에탄올 수용액을 대신하여 프로필렌글리콜을 사용하였다.
제조예 3. 쉬땅나무의 에틸아세테이트 추출물의 제조
상기 제조예 1과 동일한 방법으로 쉬땅나무 추출물 분말(4.5 g을 기준으로 한 수득율 1.5%)을 제조하되, 추출용매로서 95%(V/V) 에탄올 수용액을 대신하여 에틸아세테이트를 사용하였다.
제조예 4. 쉬땅나무의 수 추출물의 제조
상기 제조예 1과 동일한 방법으로 쉬땅나무 추출물 분말(2.1g을 기준으로 한 수득율 0.7%)을 제조하되, 추출용매로서 95%(V/V) 에탄올 수용액을 대신하여 물을 사용하였다.
제조예 5. 쉬땅나무의 디클로로메탄 추출물의 제조
상기 제조예 1과 동일한 방법으로 쉬땅나무 추출물 분말(1.7 g을 기준으로 한 수득율 0.57%)을 제조하되, 추출용매로서 95%(V/V) 에탄올 수용액을 대신하여 디클로로메탄을 사용하였다.
제조예 6. 쉬땅나무의 헥산 추출물의 제조
상기 제조예 1과 동일한 방법으로 쉬땅나무 추출물 분말(4.2 g을 기준으로 한 수득율 1.4%)을 제조하되, 추출용매로서 95%(V/V) 에탄올 수용액을 대신하여 헥산을 사용하였다.
실시예 1. NBT법을 이용한 항산화 효과
상기 제조예 1에서 수득한 쉬땅나무 추출물의 항산화 효과를 측정하기 위해 실험실 조건에서 레티놀과 BHT와 같은 항산화제를 비교샘플로 하여, NBT법에 의해 항산화 활성을 측정하였다. 항산화 효과를 측정하기 위해서 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성산소를 NBT법에 의해 측정하고, 피검물질이 활성산소를 제거하는 효과, 즉 활성산소 소거효과를 평가하였다. 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 활성산소를 생성시키고, 이 활성산소가 니트로 블루 테트라졸리움(Nitro Blue Tetrazolium ; NBT)과 반응하여 생성되는 청색을 파장 560 nm에서 측정하는 것으로 활성산소 소거율을 측정하였다.
NBT법에 의한 항산화 활성 측정방법을 보다 구체적으로 설명하면 하기와 같다.
바이엘병에 0.05 M 탄산나트륨 2.4 mL, 3 mM 크산틴 용액 0.1 mL, 3 mM EDTA 용액 0.1 mL, BSA 용액 0.1 mL, 및 0.72 mM NBT 용액 0.1 mL를 가하고, 560 nm에서 의 흡광도(So)를 측정하였다.
여기에 시료용액으로서 상기 제조예 1에서 수득한 쉬땅나무 추출물, 레티놀 및 BHT를 각각 0.1 mL씩 첨가하고 25℃에서 10분간 방치하였다. 그런 다음, 크산틴 옥시다제 용액 0.1 mL를 가하고 빠른 속도로 교반한 후에 25℃에서 20분간의 배양하였다. 6 mM 염화구리(Ⅱ) 용액 0.1 mL를 가하여 반응을 정지시키고, 560 nm에서의 흡광도(St)를 측정하였다.
공시험용액은 시료용액 대신에 증류수를 사용하였을 뿐이고, 나머지 실험과정은 상기와 동일하게 실시한 후에 560 nm에서의 흡광도(Bt)를 측정하였다.
시료용액의 블랭크(Blank)는 크산틴 옥시다제 용액 대신에 증류수 0.1 mL를 사용하였을 뿐이고, 나머지 실험과정은 상기와 동일하게 실시한 후에 560 nm에서의 흡광도(Bo)를 측정하였다.
상기에서 측정한 흡광도 값을 하기 수학식 1에 대입하여 NBT법에 의한 항산화 활성을 산출하였고, 그 결과는 하기 표 1에 나타내었다.
Figure 112009080320343-PAT00001
상기 수학식 1에서, St는 시료용액을 효소 반응한 후에 측정한 흡광도 값을 나타내고, Bt는 공시험용액을 효소 반응한 후에 측정한 흡광도 값을 나타내고, So는 시료 용액에 효소를 첨가하기 이전에 측정한 흡광도 값을 나타내고, Bo는 공시험용액에 효소를 첨가하기 이전에 측정한 흡광도 값을 나타낸다.
시료명 항산화효과(%)
쉬땅나무 추출물 (제조예 1) 92
레티놀 91
BHT 89
상기 표 1의 결과에 의하면, 시료용액 모두에서 우수한 항산화 효과를 확인할 수 있었고, 특히 쉬땅나무 추출물은 레티놀 및 BHT보다 동등 내지는 다소 향상된 항산화 효과가 있음이 확인되었다.
실시예 2. DPPH법을 이용한 항산화 효과
상기 제조예 1에서 수득한 쉬땅나무 추출물의 항산화 효과를 측정하기 위해 실험실 조건에서 녹차추출물과 비타민 E와 같은 항산화제를 비교 샘플로 하여 DPPH법을 이용, 항산화 활성을 측정하였다. DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl) 자유라디칼 소거활성에 의하여 항산화 활성을 측정하였다. 피검물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560 nm에서 자유라디칼 소거율을 측정하였다. 사용한 시약으로서는 DPPH 자유라디칼 (Aldrich Chem. Co., MW=618.76) 0.1 mM 용액 61.88 mg을 메탄올에 용해하여 100 mL가 되도록 하였다.
DPPH법에 의한 항산화 활성 측정방법을 보다 구체적으로 설명하면 하기와 같다.
96-웰 플레이트에 0.1 mM DPPH 용액 0.15 mL 및 시료용액으로서 상기 제조예 1에서 수득한 쉬땅나무 추출물, 녹차추출물 및 비타민 E를 각각 0.15 mL를 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 10분간의 배양한 후에 560 nm에서의 흡광도(St)를 측정하였다.
공시험용액은 시료용액 대신에 증류수를 사용하였을 뿐이고, 나머지 실험과정은 상기와 동일하게 실시한 후에 560 nm에서의 흡광도(Bt)를 측정하였다.
시료용액의 블랭크(Blank)는 DPPH 용액 대신에 메탄올 0.15 mL를 사용하였을 뿐이고, 나머지 실험과정은 상기와 동일하게 실시한 후에 560 nm에서의 흡광도(Bo)를 측정하였다.
상기에서 측정한 흡광도 값을 하기 수학식 2에 대입하여 DPPH법에 의한 항산화 활성을 산출하였고, 그 결과는 하기 표 2에 나타내었다.
Figure 112009080320343-PAT00002
상기 수학식 2에서, St는 시료용액을 자유라디칼 소거한 후에 측정한 흡광도 값을 나타내고, Bt는 공시험용액을 자유라디칼 소거한 후에 측정한 흡광도 값을 나타내고, So는 시료용액에 자유라디칼을 첨가하기 이전에 측정한 흡광도 값을 나타내고, Bo는 공시험용액에 자유라디칼을 첨가하기 이전에 측정한 흡광도 값을 나타낸다.
시료명 항산화 효과 (%)
쉬땅나무 추출물 (제조예 1) 67
녹차추출물 35
비타민 E 33
상기 표 2의 결과에 의하면, 쉬땅나무 추출물은 녹차추출물과 비타민 E 보다 우수한 항산화 효과가 있음이 확인되었다.
실시예 3. 자외선조사에 의한 세포독성 완화 효과
상기 제조예 1에서 수득한 쉬땅나무 추출물의 자외선 조사에 의한 세포독성의 완화효과를 평가하기 위하여 실시하였다. 섬유아세포(fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 1×105개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500 uL의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선 B(UVB) 램프(Model : F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10 mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 10% FBS가 첨가된 것) 1 mL를 첨가하였다. 여기에 평가하고자 하는 쉬땅나무 추출물을 처리한 후 24시간동안 배양하였다. 24시간이 지나면 배지를 제거하고, 각 웰 당 세포배양 배지 500 uL 배지와 MTT 용액(2.5 ㎎/mL) 60 uL를 넣은 후 2시간동안 37℃ CO2 배양기에서 배양하였다. 배지를 제거하고 이소프로판올-HCl(0.04 N)을 500 uL씩 넣어주었다. 5분간 진탕하여 세포를 용해시키고 상등액 100 uL씩을 96-웰 시험 플레이트에 옮긴 후, 마이크로플레이트 판독기에서 565 nm 흡광도를 측정하였다. 하기 수학식 3에 의해 세포생존율(%)을 측정하였고, 자외선에 의한 세포독성 완화율은 하기 수학식 4에 의하여 계산하였다. 그 결과는 하기 표 3에 나타내었다.
Figure 112009080320343-PAT00003
상기 수학식 3에서, St는 시료를 처리한 웰을 발생 반응한 후에 측정한 웰의 흡광도 값을 나타내고, Bt는 시료를 처리하지 않은 웰을 발색 반응한 후에 측정한 흡광도 값을 나타내고, Bo는 시료를 처리한 웰을 발색 반응한 후에 측정한 흡광도 값을 나타낸다.
Figure 112009080320343-PAT00004
상기 수학식 4에서, St는 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 세포생존율을 나타내고, Bt는 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 세포생존율을 나타내고, Bo는 자외선을 조사하지 않고, 시료를 처리하지 않은 웰의 세포생존율을 나타낸다.
시료명 세포독성 완화율 (%)
쉬땅나무 추출물 (제조예 1) 63
상기 표 3의 결과에 의하면, 쉬땅나무 추출물은 자외선에 의한 세포 독성을 63% 완화하므로 자외선을 효과적으로 방어함을 알 수 있다.
실시예 4. 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제 효과
상기 제조예 1에서 수득한 쉬땅나무 추출물의 항염증 효과를 확인하기 위해 자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제정도를 평가하였다.
사람의 표피조직에서 분리한 섬유아세포(Fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 5×104개씩 넣고 24시간동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500 uL의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선 B(UVB) 램프(Model : F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10 mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 FBS가 첨가되지 않은 배지) 350 uL를 첨가하였다. 여기에 평가하고자 하는 쉬땅나무 추출물을 처리한 후 5시간동안 배양하였다. 배양 상층액을 150 uL 취하여 IL-1α를 정량함으로서 쉬땅나무 추출물의 염증성 사이토카인 발현억제효과를 판단하였다. IL-1α의 양은 효소면역분석법 (Enzyme-linked Immunosorbent Assay;ELISA)을 이용하여 정량화하였으며, IL-1α의 생성율은 하기 수학식 5에 의해 계산하였다. 그 결과는 하기 표 4에 나타내었다.
Figure 112009080320343-PAT00005
상기 수학식 5에서, St는 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 IL-1α 생성량을 나 타내고, Bt는 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1α 생성량을 나타내고, Bo는 자외선을 조사하지 않고, 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1α 생성량을 나타낸다.
시료명 염증 성사이토카인 발현 억제율 (%)
쉬땅나무 추출물 (제조예 1) 74
상기 표 4의 결과에 의하면, 쉬땅나무 추출물은 자외선에 의한 염증성 사이토카인인 IL-1α의 생성을 74% 억제하여, 자외선에 의한 염증 발생을 효과적으로 방어함을 알 수 있다.
실시예 5. B16F1 멜라노싸이트를 이용한 멜라닌 생성 억제 효과
상기 제조예 1 내지 6에서 수득한 쉬땅나무 추출물의 피부 미백효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라노싸이트에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 보고 미백 효과를 판단하였다.
본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포균주이며, 멜라닌이라는 흑색색소를 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공배양 중에 시료용액을 처리하여 멜라닌 흑색색소가 감소하는 정도를 비교 평가하였다. 본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 ATCC (American Type Culture Collection, 기탁번호 : 6323)로부터 분양받아 사용하였다.
B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생합성 억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다. B16F1 멜라노싸이트를 6-웰 플레이트에 각 웰당 2×106 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 트립신-EDTA로 떼어 낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다.
세포내 멜라닌의 정량은 로탄(Lotan : Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액(50 mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2 mM PMSF) 1 mL를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리 (3,000 rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH (10% DMSO)를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405 nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 저해율(%)은 하기 수학식 6에 의하여 계산하였다. IC50 값은 멜라닌 생성을 50% 저해하는 물질의 농도이다. 측정된 IC50 값은 하기 표 5에 나타내었다.
상기 수학식 6에서, A는 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양을 나타내고, B는 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양을 나타낸다.
시료명 멜라닌 생성 억제효과(IC50)
쉬땅나무 에탄올 수용액 추출물 (제조예 1) 0.06%
쉬땅나무 프로필렌글리콜 추출물 (제조예 2) 0.15%
쉬땅나무 에틸아세테이트 추출물 (제조예 3) 0.18%
쉬땅나무 수 추출물 (제조예 4) 0.13%
쉬땅나무 디클로로메탄 추출물 (제조예 5) 0.14%
쉬땅나무 에탄올 헥산 추출물 (제조예 6) 0.19%
하이드로퀴논 0.20%
알부틴 0.15%
상백피 추출물 0.19%
유용성 감초 추출물 0.24%
상기 표 5의 결과에 의하면, 상기 제조예 1 내지 6에서 수득한 쉬땅나무 추출물의 IC50 값은 0.06 내지 0.19% 범위로, 기존의 미백제인 하이드로퀴논, 알부틴, 유용성 감초 추출물, 상백피 추출물 등에 비해 비슷하거나 우수한 효과를 나타내는 것을 알 수 있다.
실시예 6. 보습 효과(크림제)
상기 제조예 1에서 수득한 쉬땅나무 추출물을 함유한 크림 형태의 '본원 화장료1'과, 쉬땅나무 추출물을 포함하지 않는 크림 형태의 '비교 화장료1a, 1b, 1c, 1d'를 각각 제조하여, 사람을 대상으로 피부 보습효과를 비교실험을 행하여 평가하였다. '본원 화장료1'과 '비교 화장료1a, 1b, 1c, 12d'의 조성은 하기 표 6에 나타내었다.
하기 표 6의 조성(나)를 가열하여 70℃에서 보존하였다. 여기에, 조성(가)를 가하여 예비유화한 후에 호모믹서로 균일하게 유화한 다음, 서서히 냉각하여 크림제를 제조하였다.
원료(중량%) 본원 화장료1 비교 화장료
1a 1b 1c 1d
조성
(가)		 스테아릴 알콜 8 8 8 8 8
스테아린산 2 2 2 2 2
스테아린산 콜레스테롤 2 2 2 2 2
스쿠알란 4 4 4 4 4
2-옥틸도데실알콜 6 6 6 6 6
폴리옥시에틸렌(25몰부가)
알콜에스테르		 3 3 3 3 3
글리세릴모노스테아린산
에스테르		 2 2 2 2 2
조성
(나)		 쉬땅나무 추출물 5 - - - -
글리세린 - - 5 - -
Na-히알루론산염 - - - 5 -
1,3-부틸렌글라이콜 - - - - 5
정제수 68 73 68 68 68
계 100 100 100 100 100
실험자 (20세 내지 35세의 여성) 20명을 대상으로 아래 팔뚝부위에'본원 화장료1'과 '비교 화장료1a, 1b, 1c, 1d'를 각각 바르고, 약 90분 후에, 바르기 전과 바른 후의 보습 능력을 Corneometer(CM 820)로 △Hydration을 평가하였다.
△Hydration= 바른 후의 보습력 - 바르기 전의 보습력
구분 본원 화장료1 비교 화장료
1a 1b 1c 1d
보습제 종류 쉬땅나무추출물 - 글리세린 Na-히아루론산염 1,3-부틸렌글라이콜
△Hydration 17 6 11 14 10
상기 표 7의 결과에 의하면, 쉬땅나무 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 아래 팔뚝부위에서 보습효과가 우수함을 알 수 있다.
실시예 7. 피부 미백 효과(화장수)
상기 제조예 1에서 수득한 쉬땅나무 추출물을 함유한 화장수 형태의 '본원 화장료2'와, 쉬땅나무 추출물을 포함하지 않는 화장수 형태의 '비교 화장료2'를 각각 제조하여, 사람을 대상으로 피부 미백효과를 평가하였다. '본원 화장료2'와 '비교 화장료2'의 조성은 하기 표 8에 나타내었다.
하기 표 8의 조성 (가)를 정확히 평량하고, 온도를 45℃까지 가온하였다. 별도 용기에서 조성 (나)를 정확히 평량하고, 가온하여 녹인 후 천천히 조성 (가)와 혼합하고 Disper Mixer를 사용하여 2000 rpm 속도로 2분 정도 교반하여 화장수를 제조하였다.
원료(중량%) 본원 화장료2 비교 화장료2
조성
(가)		 쉬땅나무 추출물 (제조예 1) 1.0 -
글리세린 3.0 3.0
1,3 부틸렌글리콜 4.0 4.0
구연산나트륨 0.2 0.2
구연산 0.1 0.1
정제수 80.25 81.25
조성
(나)		 방부제 0.4 0.4
폴리옥시에칠렌(40)
경화 피마자유		 1.0 1.0
향료 0.05 0.05
에탄올 10.0 10.0
계 100 100
실험자 (20세 내지 35세의 여성) 15명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 '본원 화장료2'를, 얼굴 왼쪽 부위에는 '비교 화장료2'를 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 화장수를 도포하였다. 시험 완료 후 얼굴 좌우 양편의 도포 부위 피부를 화상분석기 및 피부색의 변화를 크로마메타 (Minolta CR300)를 이용하여 색의 밝기 변화(ΔL)를 측정하였다.
ΔL= 시험 후 피부 밝기 - 시험 전 피부 밝기
복수의 숙련자에 의한 객관적 육안 관찰과 피검자에 의한 주관적 육안관찰을 실시하여 하기 등급 분류에 따라 효과를 측정하였다. 이때 미백 효능 정도를 하기 7등급으로 분류하여 평가하였다.
[미백효능 평가 기준]
-3: 매우 악화 -2: 악화
-1: 약간 악화 0: 변화 없음
1: 약간 개선 2: 개선
3: 매우 개선
그 결과는 하기 표 9에 나타내었다.
구 분 피부색의
밝기 변화(ΔL)		 숙련자의 객관적 평가 피검자의 주관적 평가
본원 화장료3 비교 화장료3 본원 화장료3 비교 화장료3
평균값 3.0 2.5 1.5 2.6 1.8
상기 표 9의 결과에 의하면, 쉬땅나무 추출물을 함유한 화장수를 도포한 실험자의 안면 피부에서 미백효과가 우수함을 알 수 있다.
실시예 8. 피부 미백 효과(로션)
상기 제조예 1에서 수득한 쉬땅나무 추출물을 함유한 로션 형태의 '본원 화장료3'과, 쉬땅나무 추출물을 포함하지 않는 로션 형태의 '비교 화장료3'을 각각 제조하여, 사람을 대상으로 피부 미백효과를 평가하였다. '본원 화장료3'과 '비교 화장료3'의 조성은 하기 표 10에 나타내었다.
하기 표 10의 조성 (가)를 정확히 평량하고, 온도를 80℃까지 가온하였다. 별도 용기에 조성 (나)를 정확히 평량하고, 가온하여 녹인 후 천천히 조성 (나)와 혼합하고 교반기를 사용하여 3600 rpm 속도로 일정시간 동안 교반한 후 25℃까지 냉각하여 숙성시켜 로션을 제조하였다.
구분 원료(중량%) 본원 화장료3 비교 화장료3
조성
(가)		 세테아릴알코올 1.7 1.7
폴리글리세릴 2-올레이트 1.5 1.5
세라마이드 0.7 0.7
세테아레스-4 1.2 1.2
선플라워오일 10.0 10.0
조성
(나)		 쉬땅나무추출물 3.0 -
글리세린 5.0 5.0
카보머 0.2 0.2
방부제 0.4 0.4
정제수 76.3 79.3
계 100 100
실험자 (20세 내지 35세의 여성) 15명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 '본원 화장료3'을, 얼굴 왼쪽 부위에는 '비교 화장료3'을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 로션을 도포하였다. 시험 완료 후 얼굴 좌우 양편의 도포 부위 피부를 화상분석기 및 피부색의 변화를 크로마메타 (Minolta CR300)를 이용하여 색의 밝기 변화(ΔL)를 측정하였다.
ΔL= 시험 후 피부 밝기 - 시험 전 피부 밝기
복수의 숙련자에 의한 객관적 육안 관찰과 피검자에 의한 주관적 육안관찰을 실시하여 하기 등급 분류에 따라 효과를 측정하였다. 이때 미백 효능 정도를 하기 7등급으로 분류하여 평가하였다.
[미백효능 평가 기준]
-3: 매우 악화 -2: 악화
-1: 약간 악화 0: 변화 없음
1: 약간 개선 2: 개선
3: 매우 개선
그 결과는 하기 표 11에 나타내었다.
구 분 피부색의
밝기 변화(ΔL)		 숙련자의 객관적 평가 피검자의 주관적 평가
본원 화장료3 비교 화장료3 본원 화장료3 비교 화장료3
평균값 3.3 2.5 1.9 2.7 1.7
상기 표 11의 결과에 의하면, 쉬땅나무 추출물을 함유한 로션을 도포한 실험자의 안면 피부에서 미백효과가 우수함을 알 수 있다.
실시예 9. 피부 미백 효과(크림)
상기 제조예 1에서 수득한 쉬땅나무 추출물을 함유한 크림 형태의 '본원 화장료4'와, 쉬땅나무 추출물을 포함하지 않는 화장수 형태의 '비교 화장료4'를 각각 제조하여, 사람을 대상으로 피부 미백효과를 평가하였다. '본원 화장료4'와 '비교 화장료4'의 조성은 하기 표 12에 나타내었다.
원료(중량%) 본원 화장료4 비교 화장료4
조성
(가)		 스테아릴 알콜 8.0 8.0
스테아린산 2.0 2.0
스테아린산 콜레스테롤 2.0 2.0
스쿠알란 4.0 4.0
2-옥틸도데실알콜 6.0 6.0
폴리옥시에틸렌(25몰부가)알콜에스테르 3.0 3.0
글리세릴모노스테아린산 에스테르 2.0 2.0
유동파라핀 5.0 5.0
조성
(나)		 쉬땅나무 추출물 3.0 -
프로필렌글리콜 5.0 5.0
글리세린 4.0 4.0
정제수 56.0 59.0
계 100 100
실험자 (20세 내지 35세의 여성) 15명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 '본원 화장료4'를, 얼굴 왼쪽 부위에는 '비교 화장료4'를 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. 시험 완료 후 얼굴 좌우 양편의 도포 부위 피부를 화상분석기 및 피부색의 변화를 크로마메타 (Minolta CR300)를 이용하여 색의 밝기 변화(ΔL)를 측정하였다.
ΔL= 시험 후 피부 밝기 - 시험 전 피부 밝기
복수의 숙련자에 의한 객관적 육안 관찰과 피검자에 의한 주관적 육안관찰을 실시하여 하기 등급 분류에 따라 효과를 측정하였다. 이때 미백 효능 정도를 하기 7등급으로 분류하여 평가하였다.
[미백효능 평가 기준]
-3: 매우 악화 -2: 악화
-1: 약간 악화 0: 변화 없음
1: 약간 개선 2: 개선
3: 매우 개선
그 결과는 하기 표 13에 나타내었다.
구 분 피부색의
밝기 변화(ΔL)		 숙련자의 객관적 평가 피검자의 주관적 평가
본원 화장료4 비교 화장료4 본원 화장료4 비교 화장료4
평균값 3.2 2.6 1.8 2.7 1.6
상기 표 13의 결과에 의하면, 쉬땅나무 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 피부에서 미백효과가 우수함을 알 수 있다.

Claims (5)

  1. 쉬땅나무(Sorbaria sorbifolia var. stellipila) 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 쉬땅나무 추출물은 조성물 전체에 대하여 동결건조중량 기준으로 0.001 내지 30.0 중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  3. 청구항 1 또는 2항에 있어서,
    상기 쉬땅나무 추출물은 정제수, 탄소수 1 내지 6의 알콜, 글리세린, 탄소수 2 내지 6의 알킬렌글리콜, 탄소수 1 내지 6의 알칸, 탄소수 1 내지 6의 할로겐화탄화수소, 탄소수 2 내지 6의 알킬 알카노에이트 및 그의 혼합물로부터 선택된 추출용매를 사용하여 추출한 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  4. 청구항 3항에 있어서,
    상기 쉬땅나무 추출물은 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 헥산, 디클로로메탄, 디클로로에탄, 에틸아세테이트 및 이의 혼합물로부터 선택된 추출용매를 사용하여 추출한 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  5. 청구항 1 또는 2항에 있어서,
    화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W) 또는 유중수(W/O)형의 에멀전, 및 연고로 이루어진 제형으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
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