KR20110073486A

KR20110073486A - 신장 세포 암종 치료용 3,3',4,4'-테트라하이드록시-2,2'-바이피리딘-ｎ,ｎ'-디옥시드

Info

Publication number: KR20110073486A
Application number: KR1020117007204A
Authority: KR
Inventors: 제니 니스트롬; 리사 부발; 울프 닐슨; 보르제 하랄드손
Original assignee: 제니 니스트롬; 울프 닐슨; 보르제 하랄드손; 리사 부발
Priority date: 2008-10-06
Filing date: 2009-10-06
Publication date: 2011-06-29
Also published as: CN102170881A; HK1161116A1; US8349823B2; CA2736322A1; PT2349268E; US20120077846A1; JP5340393B2; HK1218857A1; PL2349268T3; KR101678702B1; EP2349268B1; CA2736322C; DK2349268T3; ES2401671T3; US8053430B2; EP2349268A1; WO2010040750A1; CN105147683A; JP2012504584A; CN105147683B

Abstract

특정 투여 프로토콜 및 약량 섭생을 이용하여, 3,3',4,4'-테트라하이드록시-2,2'-바이피리딘-N,N'-디옥시드 화합물, 특히, 3,3',4,4'-테트라하이드록시-2,2'-바이피리딘-N,N'-디옥시드 (오렐라닌)를 투여하여 신장 암 치료하는 방법 뿐만 아니라, 치료 방법에 사용하는데 적합한 약학 조성물이 제공된다.

Description

신장 세포 암종 치료용 3,3',4,4'-테트라하이드록시-2,2'-바이피리딘-Ｎ,Ｎ'-디옥시드{3,3',4,4'-tetrahydroxy-2,2'-bipyridine-N,N'-dioxides for the treatment of renal cell carcinoma}

본 발명은 전반적으로 암 치료에 관한 것이다. 좀더 구체적으로, 본 발명은 신장 암의 치료, 특히 신장 기부에 근접한 세관 세포로부터 기인된 신장 세포 암종 치료에 3,3',4,4'-테트라하이드록시-2,2'-바이피리딘-N,N'-디옥시드, 특히 3,3',4,4'-테트라하이드록시-2,2'-바이피리딘-N,N'-디옥시드 (Orellanine)의 사용에 관한 것이다.

암은 거의 모든 신체 부분에 영향을 주는 100가지 이상의 상이한 형태로 나타난다. 살아있는 동안, 신체의 건강한 세포들은 조절된 방식으로 분할하고, 성장하고, 대체된다. 이와 같은 세포 분할을 명령하는 유전자들이 기능을 제대로 하지 못하고, 세포들이 증가되고, 통제불능으로 성장하기 시작한다. 이들 비정상적인 세포 덩어리를 종양이라고 부른다. 모든 종양이 암은 아니다. 사마귀와 같은 양성 종양은 성장을 멈추고, 신체의 다른 부분들로 퍼지지 않는다. 그러나, 암 또는 악성 종양은 계속 성장하고 그리고 건강한 세포들을 압도하고, 신체 기능을 간섭하고, 그리고 신체 조직으로부터 영양분을 빼낸다. 악성 종양들은 전이라고 불리는 프로세스를 통하여 신체의 다른 부분으로 퍼질 수 있다. “어미 종양”으로부터 세포들이 분리되어, 혈액 또는 림프관을 통하여 또는 종양에 따라 가슴부위, 복부 또는 골반내에서 이동하고, 결국 신체의 다른 부위에 새로운 종양을 형성한다.

신장에서 암은 모든 충실성 종양의 약 3%를 구성한다. 신장 종양의 약 85%는 신장 세포 암종 (RCC)으로 분류된다. RCC로 진단된 것중 대략 80%는 신장의 소변-형성 관, 요세관(tubuli)의 인접 부분을 라이닝하는 상피 세포로부터 유래된 것이다. 현미경상에 나타난 이의 외양때문에, 이와 같은 암의 형태는 신장 투명 세포 암종(renal clear cell carcinoma (RCCC, 65%)) 또는 신장 유두 세포 암종(renal papillary cell carcinoma (RPCC, 15%))으로 알려져 있다. RCCC 및 RPCC는 진단된 RCC의 80%로 구성되며, 신장 세포 암종으로 인한 100% 사망에 더 밀접하게 책임이 있다.

예후를 예측하는데 가장 중요한 요인은 단계다. 단계는 암의 크기와 암이 신장을 벗어나 어느 정도 퍼져있는 지를 설명한다. American Joint Committee on Cancer (AJCC)의 단계 체계는 TNM 체계로 알려져 있다. T 다음의 숫자 1부터 3은 종양의 크기와 부근 조직으로의 퍼짐을 나타낸다. T 숫자가 클수록 종양이 더 크거나 또는 신장 부근 조직으로 더 광범위하게 퍼져있다는 것을 나타낸다. N 다음의 0 내지 2의 숫자는 암이 신장 부근 림프절로 퍼졌는지를 나타나며, 만약 그럴 경우, 얼마나 많이 퍼져있는 지를 나타낸다. M 다음의 숫자 0 또는 1은 암이 멀리 있는 기관으로 퍼졌는가를 나타낸다.

단계 I: 종양이 7 cm (약 2와 3/4 인치) 또는 이보다 작고, 신장에 한정된다. 림프절 또는 멀리 있는 기관으로 퍼지지 않는다.

단계 II: 종양이 7.0 cm 보다 크지만 여전히 신장에 국한된다. 림프절 또는 멀리 있는 기관으로 퍼지지 않는다.

단계 III: 신장 주변 지방 조직으로 퍼졌거나 퍼지지 않고, 신장으로부터 심장으로 이어지는 대정맥으로 퍼지거나 퍼지지 않고, 림프절 부근으로 퍼졌지만, 멀리 있는 림프절 또는 다른 기관으로는 퍼지지 않은, 임의 크기의 종양을 포함한다. 단계 III은 또한 신장 주변 지방 조직으로 퍼진 종양 및/또는 신장에서 심장으로 이러지는 대정맥으로 퍼진, 그러나 임의의 림프절 또는 기타 기관으로는 퍼지지 않는 종양도 포함한다.

단계 IV: 이 단계는 지방 조직과 신장을 에워싸는 끈 인대 모양의 조직을 통하여 직접적으로 퍼진 임의의 암을 포함한다. 단계 IV는 또한 신장 주변의 하나 이상의 림프절, 신장 주변이 있지 않는 임의의 림프절, 또는 폐, 뼈, 또는 뇌와 같은 임의의 기타 기관으로 퍼진 임의의 암도 포함한다.

신장 세포 암, T, N, M 범주 및 단계 그룹 나누기의 상세한 정의:

원발성 원발성 종양 (T):

TX: 원발성 종양이 평가되지 않음

TO: 원발성 종양의 증거 없음

T1: 7 cm 또는 미만의 종양, 신장에 국한됨

T2: 7 cm 이상의 종양, 신장에 국한됨

T3: 종양이 주요 정맥/부신 조직/신주위 조직으로 확장; 신근막(Gerota's fascia)을 벗어나지 않음

T3a: 종양은 부신/신주위 지방을 침투함

T3b: 종양은 신장 정맥으로 또는 횡경막 아래 대정맥으로 확장

T3c: 종양은 횡경막 위 대정맥으로 확장

T4: 종양은 신근막을 벗어나 침투함

N - 국소 림프절

NX: 국소 림프절이 평가되지 않음

NO: 국소 림프절 전이 없음

N1: 한 개 국소 림프절에 전이

N2: 한 개이상의 국소 림프절에 전이

M - 원격 전이

MX: 원격 전이가 평가되지 않음

MO: 원격 전이 없음

M1: 원격 전이

경험적으로, 단계 I 또는 II의 암은 병이 든 신장을 외과적으로 제거함으로써 치료되며, 회복에 대한 예후도 양호하다. 대조적으로, 단계 III 또는 IV의 신장 암은 생존률이 매우 낮고, 그리고, 국립 암 센터의 웹사이트에는 “단계 IV의 신장 세포 암을 가진 환자들은 실질적으로 치료될 수 없다”라고 기재되어 있다.

국립 암 센터(National Cancer Institute)는 2009년 미국에서 신장암으로 진단을 받은 경우가 49,096명이며(16/10⁵ 시민), 이중 11,033명은 사망하며 (3.6/10⁵ 시민), EU에서는 (2006년) 65,051명이 진단을 받았고(7.8/10⁵ 시민) 그리고 27,326명이 사망했다(3.3/10⁵ 시민)(European Cancer Observatory: http://eu- cancer.iarc.fr/cancer-19-kidney.html.en). 세계적으로(2006년) 209,000 명이 진단을 받았고(3.2/10⁵ 시민), 102,000 명이 사망했다(1.6/10⁵ 시민) (Gupta et al . Cancer Treat . Rev . 34, 193-205; 2008). 미국에서 발병이 더 높은 것으로 보이는 것은 NCI가 신장 세포 암종과 신장 골반 암(치료가 상대적으로 용이함)을 함께 보고하였기 때문이다. 전체적인 발병률과 사망률이 더 낮은 것은 아마도 부분적으로는 제3세계의 대부분 지역에서 진단을 받지 못하기 때문일 것이다.

통상적인 기술의 주요 문제점은 상기에서 언급한 바와 같이, 신장 암으로 진단을 받은 임의의 한 환자에 대한 결과가 진단 시기에 의해 대개 영향을 받는다는 것이다. 종양이 신장 밖으로 퍼지기 전에 질병을 진단받는다면, 생존 기회는 충분하지만, 그렇지 않으면 대부분의 환자들은 이 질환으로 사망한다. 이와 같은 사실의 주요 원인은 신장 세포 암종이 세포증식억제제 및/또는 세포독성 약물 가령, 시스플라틴, 카르보플라틴, 도쎄탁셀, 파클리탁셀, 플루오르우라실, 카페씨타빈, 겜씨타빈, 이리노테칸, 토포테칸, 에토포시드, 미토마이신, 게피티니브, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 독소루비신, 사이클로포스파미드, 셀레코시브, 로페코시브, 및/또는 발데코시브를 이용한 모든 통상적인 치료에 저항성이 있다는 점이다. 선행기술에서 다양한 해결책을 설명하고 있다. 신장 세포 암종에 대한 통상적인 화학요법은 일반적으로 효과가 적고, 상당한 부작용으로 인하여 일반적으로 금기시된다. 따라서, 대안 치료 방식을 찾아왔으며, 몇 가지 범주로 분류할 수 있다:

1) 항맥관형성(Antiangiogenesis). 이 방법에서, 종양 조직을 공급하는데 필수적인 혈관 형성을 억제함으로써 영양분 및 산소를 종양에게 공급하지 않는다. 이는 몇 가지 방법을 통하여 이루어진다: 1a) VEGF, PDGF, 및 PlGF와 같은 성장 인자들에 대한 항체로 처리함으로써 이들 성장 인자들의 순환을 억제한다; 1b) 표적 세포에 있는 맥관 성장 인자들의 수용체에 대한 항체로 이들 수용체를 차단시킨다; 그리고 1c) 수용체 기능을 간섭하는 더 작은 분자들로 처리하여, 맥관 성장 인자가 이의 수용체에 결합하지 못하도록 함으로써 생리학적 맥관형성 효과를 유도하지 못하도록 한다.

2) 면역조절 처리(Immunomodulatory treatment) 이 방법은 종양 세포를 이물질로 인지하도록 내생 면역계를 자극시켜, 종양과 싸우도록 하는 것이다. 신장 암에 대한 치료로써 면역 자극은 주로 두 가지 경로를 취한다: 2a) 인터루킨 2 (IL-2)으로 처리; 그리고 2b) 인터페론 알파 (IFNα) 요법.

상기에서 언급된 모든 대안 치료법은 진행된 단계의 신장암 환자들의 일부의 수명을 상당히 증가시킨다. 그러나, 그 효과는 불과 몇 계월이며, 치료로 인하여 여러 가지 심각한 부작용이 수반된다. 흔히 종양이 치료에 적응하여 치료가 중단된다. 그 다음 종양 성장 속도가 가속화된다. 신장 암의 치료에 대한 최근 방법은 Garcia et al. ("Recent progress in the management of advanced renal cell carcinoma ." CA Cancer . J. Clin . 57(2): 112-25 (2007)) and by Atkins et al . ("Innovations and challenges in renal cell carcinoma : summary statement from the Second Cambridge Conference ." Clin . Cancer . Res . 13(2 Pt 2): 667s-670s (2007))을 참고한다.

문헌의 리뷰에서 치료 방법들중 많은 것들이 얼마간의 특이적 암 표식의 확인 및 이들 표식들을 침윤 종양 조직에 대응하는 숙주 면역 반응을 유도하는데 이용되는 것에서부터 비롯된다고 지적하였다. 따라서, US2006134708는 진단 목적으로 신장 및 요도암의 몇 가지 분자 표식들 즉, IGFBP-3 (인슐린 유사 성장 인자-결합 단백질 3), ANGPTL4 (앙지오포에틴-유사 4) 그리고 켐로플라스민(cemloplasmin) 뿐만 아니라, 이들 표식에 대한 단클론 항체를 개시하였다. 개시된 표식들에 대한 안티센스 화합물들의 펩티드 및 핵산 수준의 용도가 설명되었다. 또한, 이들 표식들에 대한 단클론 항체, 세포 독성 물질에 콘쥬게이트된 항체들의 용도는 항체에 의해 부여되는 표적화(“마법의 탄환” 개념으로 알려짐)로 인하여 세포독성 물질의 다소 덜 심각한 부작용을 가진 치료 구체예로 간주된다. CN1359941에서는 상이한 종양-연관된 항원들에 기반을 둔 유사한 방법이 채택된다.

US6403373은 결장, 신장 및 위암과 연관된 핵산 분자를 설명하는데, 이의 펩티드 산물이 숙주에서 항체 생산의 근원이 된다. 백신 방법에서 펩티드의 사용도 고려된다. EPO 160250은 신장 암종의 진단을 위하여 단클론 항체를 설명하고, 그리고 다양한 세포독성 물질에 이 항체들을 콘쥬게이트시키는 가능성을 언급한다.

WO2007059082는 항원 TIM-1 (T 세포, 면역글로블린 또는 무친 도메인 1)의 발생을 설명하는데, 이 항원은 난소 및 신장 암에서 세포 증식과 연관있다. 난소 및 신장 암 치료를 위하여 TIM-1에 대해 생성된 항체를 종양 세포의 표적화된 사멸 수단으로 이들 항체에 치료제(톡신, 방사능동위원소 또는 화학요법제)의 콘쥬게이션으로써 이용하는 것을 교시한다. US6440663은 신장 암 세포들에 의해 발현되는 다수의 유전자들을 개시하는데, 이들 유전자의 산물이 숙주에서 항체 생산으로 이어진다. 개시된 유전자를 발현시키는 조직에 대해 숙주에서 면역 반응을 유도 또는 보강시키는 다양한 방법들이 설명되고 있는데, 세포독성 T 세포를 생성하고, 개시된 유전자들 또는 이의 단편들을 숙주 세포에 형질감염시키고, 숙주로 이들 세포를 재도입시키는 것을 포함한다. US 2005261178는 대부분의 신장 암에서 발현되는 항원(탄산 탈수효소 IX)에 대한 단클론 항체(G250)와 사이토킨 인터루킨-2 또는 인터페론-α의 공동 투여에 대해 개시한다. 이때 사이토킨은 사이토킨만을 사용할 경우에 이용되는 투여량보다 적은 약량으로 투여되었다. 진행된 신장암을 앓고 있는 군에서 환자의 약 30%에서 22주 또는 그 이상의 기간 동안 안정화 또는 “목표 반응”이 수득되었다.

다른 방법들은 새로운 치료 섭생에서 공지의 치료 물질을 이용하는 것에 기반을 둔다. 예를 들면, WO2007044015는 신장 암을 치료하기 위하여 새로운 투약 프로토콜에 따라 이미 공지된 디메탄 술포네이트 화합물, 특히 NSC-281612의 이용을 설명한다. 누드 마우스에서 이형이식편상에서 테스트되었을 때, NSC-281612를 투여하면 일부 경우 종양 덩어리가 명백히 제거되었다.

JP2001288110는 순환 반감기를 증가시키고, 치료요법적 유효량을 최저수준으로 감소시키기 위한 시도에서 인터페론-α를 폴리에틸렌 글리콜(PEG)에 콘쥬게이트시키는 것을 설명한다.

RU2188026은 빈크리스틴, 아드리아마이신 및 데포-프로베라와 함께 다중화학요법 섭생을 설명한다. 재발없는 기간을 증가시키고, 전이 형성을 줄일 수 있다고 주장한다.

끝으로, 몇 가지 경우에서 제안된 요법은 새로운 고유 물질들에 기초한다. 따라서, WO2004075887은 신장암을 포함한 많은 유형의 암 치료에 1-(2-클로로에틸)-1-니트로조-3-(2-하이드록시에틸)우레아 (HECNU)의 이용을 설명한다. HECNU의 주요 특징은 이미 공지된 대응 화합물, 비스-(2-클로로에틸)-1-니트로조-우레아 (BCNU)에 비교하여 수용성이 개선된 것이다.

EP1712234는 신장암의 치료에서, 특히 전이성 성장을 억제하기 위하여 VEGF 수용체 억제제로써 4-피리딜메틸-프탈라진 유도체의 이용을 설명한다. 4-피리딜메틸-프탈라진 유도체와 통상의 화학요법제중 하나를 공동-투여하면 종양세포가 비록 해당 화학요법제를 단독으로 사용한 경우 난치성이 있다하더라도 시너지 효과를 가진다는 것이 밝혀졌다. 더욱이, 복합 요법은 부작용이 눈에 띄게 작다는 것이다. Suthpin et al . (" Targeting the Loss of the von Hippel - Lindau Tumor Suppressor Gene in Renal Carcinoma Cells ", Cancer . Res . 67(12), 5896-5905 (2007)) 은 VHL 유전자(이 종양-억제 유전자는 모든 신장 투명세포암의 70%에서 없다 )를 발현시키지 않는 신장 암에서 크로모마이신 A3의 선택적 효과를 연구하였다. 크로모마이신 A3는 VHL 유전자를 발현시키는 정상적인 신장 조직에 영향을 주지 않으면서 이형이식편 누드 마우스에서 종양 성장을 상당히 지연시켰다.

여기에서 본 발명은 오렐라닌(Orellanine) (화학식 I)을 이용하는데, 이것은 코르티나리우스(Cortinarius) 패밀리의 몇 가지 균종에서 상대적으로 많은 양으로 발생되는 선택적 신장 독소다. 코르티나리우스 곰팡이를 식용 버섯으로 혼동하여 오렐라닌에 중독되는 일이 유럽, 러시아 및 북미에서 흔히 발생된다. 오렐라닌 함유 곰팡이를 복용후 수일 내지 최대 3주까지 증상이 없거나 단지 약한 인플루엔자 유사 증상이 있을 뿐이다. 의료적인 도움이 일반적으로 요구되는 그 다음 상태는 급성 신부전으로 인한 요독증의 특징이 있다. 과학 문헌에서 오렐라닌 중독에 대해 많이 설명되어 있지만, 신장 독성만을 언급한 것과는 별도로 오렐라닌의 다른 효과에 대해서 언급된 것은 없다(Danel VC , Saviuc PF , Garon D: Main features of Cortinarius spp . poisoning : a literature review . Toxicon 39, 1053-1060 (2001).). 이와 같은 선택성은 대부분 오렐라닌이 한 가지 세포 형태, 가령, 세관 상피 세포, 특히 근위 세뇨관 표피세포(proximal tubular epithelial cell)에 의해 특이적으로 취입된다는 사실에 있다 (Prast H, Pfaller W: Toxic properties of the mushroom Cortinarius orellanus ( Fries ) II . Impairment of renal function in rats . Arch Toxicol 62, 89-96 (1988).). 오렐라닌의 독소 기전은 밝혀지지 않았으며, 신장이 회복되는지를 보기 위하여 기다리는 동안 투석을 유지하는 것 이외에는 이용할 수 있는 치료가 없다. 최종 결과는 복용한 독소의 양에 결정적으로 영향을 받고, 원칙적으로, 한 가지 곰팡이의 복용은 일시적인 문제를 일으키지만, 두 가지 곰팡이는 신장 기능의 일부를 영구적으로 상실하게 하며, 세 가지 이상의 곰팡이는 신장 기능 전부를 상실하는 결과를 초래하며, 살아있는 동안 투석 또는 신장 교체 요법을 필요로 한다.

출원인은 최근 건강한 쥐에서 오렐라닌의 작용 방식에 대한 첫 번째 연구를 공개하였다(Nilsson UA et al . The fungal nephrotoxin orellanine simultaneously increases oxidative stress and down -regulates cellular defenses . Free Rad . Biol . Med . 44:1562-9 (2008).). 이 연구에서 피질 신장 조직에서 몇 가지 주요 항산화제 유전자의 발현이 급격하게 감소되고, 산화 스트레스가 증가되었다는 것을 보여주었다. 이 작업 동안, 신장 세뇨관 표피세포에 대한 겉으로 보이는 절대적인 특이성은 이론적으로 암 세포로 변형된 후에도 이들 세포를 포함하는 것으로 확장될 수 있다는 것이었다. 이것이 사실이라고 증명된다면, 이와 같은 가설은 오렐라닌이 진행된 단계에서 그리고 다른 조직으로 전이된 단계에서도 표피 기원의 신장암에 대해 치료 능력을 가진 강력한 무기가 될 수 있다는 것을 의미한다.

이 가설에 따라, 오렐라닌은 인간의 신장 암 세포에서 취입되며, 원발성 종양 또는 전이성 종양 조직으로부터 유도되었든 상당히 효과적으로 이들 암 세포를 사멸시킨다는 놀라운 발견을 하였다. 오렐라닌에 일시적인 노출후 여러날 동안 세포 사멸이 진행되었는데, 이것은 독소가 활발히 세포에 의해 취입되고, 세포에 의해 유지된다는 것을 나타낸다.

발명의 요약

본 발명의 1차 목적은 상피 세포에서 유래된 신장 암을 치료하는 방법을 제공하는 것이며, 이 방법은 다음의 식 I에 따른 최소한 한 가지 화합물을 이를 필요로 하는 포유류에게 투여하는 것을 포함한다.

화학식 I

본 발명의 다른 목적은 약물로 이용하기 위하여 식 I의 화합물을 약물을 제공하고, 그리고 신장 세포 암종 치료에 이용하기 위한 용도로 식 I의 화합물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 식 I에 따른 최소한 한 가지 화합물과 항암 활성을 가진 다른 물질을 선택적으로 포함하고, 뿐만 아니라 조성물의 효과를 최적화시키는데 필요한 캐리어 및 임의의 기타 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공하는 것이다.

또 다른 목적은 하나 이상의 별도 격실에 필요한 희석제 및/또는 용매와 함께 상기 조성물을 포함하여, 의사 또는 간호사가 바로 사용하기에 용이하도록 상기 조성물을 포함하는 키트를 제공하는 것이다.

설명 및 실시예를 참고하면, 본 발명의 기타 목적들 및 장점은 본 발명의 기술분야에 통상의 지식을 가진 자들에게 자명해질 것이며, 이들 목적과 장점들도 본 발명의 범위에 속한다.

도 1 : 400 μM 오렐라닌 (100 ㎍/㎖ 배양 배지)에 24시간 노출시킨 후 5가지 상이한 인간의 신장 세포 암종 (원발성 종양 및 전이)으로부터 세포의 생존능력을 관찰. 생존능은 처리된 시료에 있는 살아있는 세포의 수를 기준 시료(n=6)에서 살아있는 세포의 수로 나누어 계산된다. 그래프에서 회색 부분은 오렐라닌으로 항온처리한 기간(24시간)을 나타낸다. 다음날, 세포들을 오렐라닌이 없는 완전 배양 배지에서 배양시켰다. 각 생존능을 측정할 때 배지를 교체하였다.
도 2: 도 1에서 볼 수 있는 동일한 매개변수에 따라 오렐라닌 항온처리후 1주일 시점에 인간 신장 암종 세포(균주 786-0)에 대한 오렐라닌의 독성. 좌측의 현미경 사진은 비이클에 노출된 세포를 나타내고, 우측은 400 μM 오렐라닌에 24시간 동안 노출된 세포를 나타낸다. 두 사진 모두 동일한 확대 배수와, 오렐라닌/비이클로 항온처리후 1주일 시점에서 찍은 것이다.
도 3: 인간 신장 세포 암종 (786-0 및 SKRC7)의 배양 배지에서 상이한 농도의 오렐라닌의 약량/반응 효과. 5 - 200 ㎍/㎖의 농도 간격에서 오렐라닌 약량과 세포 사멸 사이에 명백한 상관관계가 있다.
도 4: 낮은 약량의 오렐라닌 반복 투여 효과. 제1 투약후 24시간 뒤 더 낮은 약량/반응 간격(20 ㎍/㎖)에서 제2 약량의 투약후 살아있는 세포의 수가 매우 격감한 반면, 72시간 시점에 제2 약량을 투약하면 상당히 적은, 그러나 여전히 유의적인 효과를 가진다. 첫 번 경우는 세포에 장기간 노출(48)시키는 것에 상응하며, 두 번째 경우는 두 약량 투여사이에 2일 동안 오렐라닌이 없는 배지에서 세포들이 회복되었다. 첫 번째 오렐라닌 약량 첨가후 96시간 시점에서 생존능이 측정되었다.
도 5: 신장 세포 암종 (786-0 및 SKRC-52) (Western Blot)에서 세포 주기상에 오렐라닌의 효과. 세포 주기 억제제 단백질 p21의 단백질 수준은 점진적으로 상향-조절되어 6시간 항온처리 시점에서 최대가 된다. 24시간 후, 망막아종 단백질 (Rb)의 세포 주기-자극 포스포릴화된 형태가 사라졌다(두 가지 상이한 포스포릴화 부위가 있다). 이들 두 가지 효과가 집중되어 G1/S 점검 시점에서 세포 주기를 중단시킨다. 유사하게, 자극 인자 cdc2의 상실로 G2/M 점검 시점에서 세포 주기를 정지시켜 세포 분열 개시를 막는다.
도 6: 신장 암종 세포(786-0)에서 오렐라닌에 의한 자가-사멸(아팝토시스)의 유도: 단백질 효과. 오렐라닌 노출(OR)후 자가-사멸성 p38 경로는 강력하게 상향 조절되었으며(f-p38), 절단된 카스파제 3 형태에서 자가-사멸이 탐지되었다. 24 h 시간후 ERK1/2의 강력한 상향-조절 (f-ERK1/2)은 오렐라닌의 자가-사멸성 영향을 훼방하는 세포의 시도로 해석된다.
ERK 1/2 및 p38의 경우, 전체 단백질에 대해 포스포릴화된(f) 비율을 비교해야만 한다. 절단된 카스파제 3은 로딩 기준, 베타 악틴과 비교되어야 한다.
도 7: 신장 암종 세포 (SKRC-52)에서 오렐라닌에 의한 자가-사멸 유도: mRNA 효과. 자가-사멸 중개물질 PUMA, Fas 리간드(FasL) 및 종양 괴사 인자 알파 (TNF)의 mRNA 발현의 RT-PCR 분석에서 세 가지 모두의 경우에서 극적인 상향-조절이 나타났다. 수용체 mRNA 발현에서 작은 변화만이 기록되었다. 세포는 오렐라닌 없이 항온처리된 기준 세포와 비교된다.
도 8: 오렐라닌으로 항온처리하는 동안 인간의 투명 세포 암 (SKRC52)에서 자가-사멸. 4시간 항온처리후 자가-사멸, 공포형성(vacuolization) 및 세포 수축(cell shrinkage)의 전형적인 중후가 이미 나타나고, 24시간 후에는 더욱 가중된다.

본 발명은 피리딘-N-옥시드 및 바이피리딘-N,N-디옥시드 화합물을 포함하는 약학 조성물 및 신장 암을 앓거나 앓을 가능성이 있는 환자에게 상기 약학 조성물을 투여함으로써, 신장 암을 치료하는 방법을 제공한다. 여기에서, 본 발명은 신장 암을 앓거나 앓을 가능성이 있는 환자를 치료하기 위한 키트 또한 포함한다.

본 발명은 신장 세포 암종을 앓거나 앓을 가능성이 있는 환자를 치료하는 방법을 제공하는데, 여기서 이 방법은 앞서 정의된 식 I의 화합물, 이의 약리학적으로 허용되는 염 또는 이 화합물을 포함하는 약학 조성물을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.

환자에게 투여되는 식 I의 화합물은 R₁, R₂, R₃ 및/또는 R₄가 실질적으로 오렐라닌(R₁ = R₂ = R₃ = R₄ = 수소)의 세포 독성을 간섭하지 않는 화합물들을 포함한다. 따라서, R₁, R₂, R₃ 및/또는 R₄는 수소, 아미노, 멀캅토, 카르복시, 포스페이트 및 플루오르, 클로로 및 브롬을 포함하는 할로겐, C₁-C₆ 알킬, C₁-C₆ 알케닐, C₁-C₆ 알키닐, C₁-C₆ 알카놀, C₁-C₆ 알케놀, C₁-C₆ 알콕시, C₁-C₆ 알켄옥시를 포함하나 이에 한정되지 않으며, 이들 각각은 아미노, 멀캅토, 카르복시, 포스페이트 그리고 플루오르, 클로로 및 브롬을 포함하는 할로겐을 포함하나 이에 한정되지 않은 군으로 추가 치환될 수 있다. 본 발명의 바람직한 구체예에서, 식 I의 화합물은 R₁ = R₂ = R₃ = R₄ =수소가 되는, 오렐라닌이다.

신장 암을 앓거나 앓을 가능성이 있는 환자를 치료하는 본 발명에 따른 방법의 한 구체예에서, 환자에게 투여되는 식 I의 화합물은 약리학적으로 허용가능한 염, 수화물, 또는 용매화합물이다. 여기에서 설명된 것과 같이, 약리학적으로 허용가능한 염은 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 다른 문제점들 또는 여병(complications) 없이, 인간 또는 동물의 조적과 접촉에 적합한, 당분야에서 일반적으로 고려될 수 있는 산 또는 염기 염이다. 이와 같은 염은 미네랄 및 아민과 같은 염기성 잔기의 유기산 염을 포함한다. 특정 약리학적 염은 염화수소산, 인산, 브롬화수소산, 말산, 글리콜산, 퓨마르산, 황산, 설파민산, 술파닐산, 포름산, 톨루엔술폰산, 메탄술폰산, 벤젠 술폰산, 에탄 디술폰산, 2-하이드록시에틸술폰산, 질산, 벤조산, 2-아세톡시벤조산, 구연산, 타르타르산, 락트산, 스테아르산, 살리실산, 글루타민산, 아스코르브산, 파모산, 숙신산, 푸마르산, 말레산, 프로피온산, 하이드록시말레산, 요오드화수소산, 페닐아세트산, 아세트산, HOOC-(CH₂)n-COOH (이때 n은 0-4임)와 같은 알카논산 및 이와 유사한 것들과 같은 산성 염을 포함하나 이에 한정되지 않는다.

여기에서 제공되는 신장 암을 치료하는 방법에 있어서, 식 I의 화합물은 단일 약량, 매일 연속 약량, 또는 간헐적 약량 포맷(예를 들면, 다중 투약 또는 1 내지 30일간의 간격, 1 내지 약 14일간의 간격 또는 1 내지 약 7일간의 간격으로 투여되는 연속 투약)으로 투여될 수 있다. 특정 방법에서, 투약 프로토콜을 완료한 후, 종양 크기의 최소 50% 감소 또는 더욱 바람직하게는 종양 크기가 적어도 75%, 90%, 또는 95% 감소시키는 투여 프로토콜 및 식 I의 화합물을 선택하며, 다른 방법에서, 투여 프로토콜 및 식 I의 화합물을 선택함으로써 종양 크기가 95% 감소, 종양 크기가 99% 감소 또는 실질적으로 종양이 완전하게 제거되는 결과를 얻는다. 단일 투약 프로토콜로 구성된 이와 같은 치료 방법에서, 식 I의 화합물 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염의 상응하는 몰량이 환자에게 투여되며, 바람직한 단일 투여량은 약 2 mg/kg 내지 약 25 mg/kg이며, 가장 바람직하게는 식 I의 화합물 약 5 mg/kg 내지 약 15 mg/kg 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염의 상응하는 몰량이 환자에게 투여된다.

신장 암을 치료하는 기타 치료 방법에서, 식 I의 화합물, 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 신장 암을 앓거나 앓을 가능성이 있는 환자에게 2회 이상의 약량으로 투여한다. 일반적으로 약량은 매일 또는 간헐적으로 (가령, 연속적인 투약을 분리시키는 최소 하루의 비-투약일을 가짐)으로 투여된다. 식 I의 화합물, 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염이 다중 약량으로 투여되는 특정 방법에서, 각 약량은 화합물의 약 0.5 mg/kg 내지 약 10 mg/kg을 포함하거나, 더욱 바람직하게, 각 약량은 식 I의 화합물 또는 이의 염 약 1 mg/kg 내지 약 5 mg/kg를 포함하거나 또는 가장 바람직하게는 식 I의 화합물 또는 이의 염 약 2 mg/kg을 포함한다.

연속 약량이 간헐적으로 투여되는 특정 방법에서, 연속 투여는 2일 내지 7일간의 간격을 두고 투여되며, 식 I의 화합물 또는 이의 염을 간헐적으로 투여하는 또 다른 방법에서, 화합물은 3회, 4회, 5회 또는 6회 또는 그 이상의 약량으로 환자에게 투여되며, 여기서 각 약량은 3일 내지 5일간의 간격을 두고 투여되며, 다른 방법에서, 3일 내지 4일 간격을 두고 4회, 5회 또는 6회 또는 그 이상의 약량으로 투여되며, 각 약량은 식 I의 화합물 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염 약 1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg을 포함하며, 바람직하게는 2 - 10 mg/kg, 가장 바람직하게는 약 5 mg/kg을 포함한다. 신장 암을 치료하는 특정 기타 치료 방법에서, 환자에게 식 I의 화합물, 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 최소 2일간 매일 투여한다. 일반적으로 매일 환자에게 투여하는 약량은 0.1 내지 10 mg/kg이며, 바람직하게는 1mg/kg 내지 5 mg/kg, 가장 바람직하게는 약 2 mg/kg이다. 치료 프로토콜은 일반적으로 식 I의 화합물, 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 5일 내지 약 30일 동안 또는 바람직하게는 10일 내지 20일 동안, 또는 가장 바람직하게는 약 14일 동안 매일 투여하는 것을 포함한다.

특정 경우에, 다수의 간헐적 투여 프로토콜, 매일 투여 프로토콜 또는 상기에서 설명한 것과 같이 휴식 및/또는 회복기와 함께 이의 조합 프로토콜을 실시하는 것이 바람직할 수 있다. 따라서, 특정 경우에, 여기에서 설명하는 매일 또는 간헐적 투여 방법에 따라 식 I의 화합물, 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 투여하고, 치료에 대한 종양 반응을 측정하고, 그리고 신장 암 종양을 제거하거나 종양의 크기를 더 감소시키는데 필요한 매일 또는 간헐적 투여 요법을 실행하는 것이 바람직할 수 있다. 이와 같은 투여 전략은 종양학 분야에 통상의 지식을 가진 자에게 잘 알려진 것이다.

본 발명의 특정 바람직한 구체예에서, 신장 세포 암종을 앓고 있는 환자에게 본 발명의 식 I에 따른 물질, 약 0.5 - 5mg의 오렐라닌/kg b.w., 가장 바람직하게는 약 2 mg의 오렐라닌/kg b.w.을, 약 7일 - 21 일 연속하여, 가장 바람직하게는 약 14일 연속하여 매일 주사하여 치료한다. 식 1의 화합물을 매일 주사후 1 내지 5시간 후, 바람직하게는 주사 후 약 2시간 후, 환자는 1-5시간, 바람직하게는 약 2시간 동안 혈액투석을 받게 하여, 종양 조직으로 들어가지 않은 식 I의 임의의 화합물을 제거함으로써, 세포외 공간에서 발생할 수도 있는 임의의 바람직하지 못한 부작용을 최소화시킨다.

상기에서 설명한 바람직한 투여량 및 투약 섭생은 약 1㎏의 종양을 가진 신장 세포 암종을 앓고 있는 체중이 70㎏인 인간에 기초한 것이다. 그러나, 암 의학 분야에 통상의 지식을 가진 자에게 잘 알려진 바와 같이, 이와 같은 바람직한 투여량 및 투여 섭생은 환자의 나이, 성별, 체중, 전반적인 상태와 같은 특징 및 개별 환자 종양의 무게 및 처치에 대한 반응에 많이 좌우된다. 항상 그런 것처럼, 적절한 약량 및 치료 전략을 선택함에 있어서 최종 책임은 환자를 담당하는 의사에게 있다.

본 발명은 신장 세포 암종을 앓거나 앓을 가능성이 있는 환자를 치료하는 방법을 제공한다. 특정 방법에서, 치료될 종양은 환자의 신장중 하나 또는 두 개에 위치한다. 특정 기타 방법에서, 신장 세포 암종은 전이되었는데, 예를 들면, 최소한 한 가지 비-신장 조직에 최소한 하나의 신장 세포 암종 종양이 존재한다. 일반적으로 여기에서 제공되는 방법은 신장, 비-신장 조직 또는 이의 조합에 존재하는 신장 세포 암종 종양을 앓거나 앓을 가능성이 있는 환자를 치료하는데 적합하다. 바람직한 구체예에서, 종양은 비-신장 조직 또는 신장 및 비-신장 조직의 조합에 존재한다. 본 발명에 의해 제공되는 치료 방법은 종양 부근에 식 I의 화합물의 치료요법적으로 유효한 약량을 제공할 수 있는 임의의 투여 경로를 고려한다. 여기에서 제공되는 바람직한 치료 방법에서, 식 I의 화합물, 또는 이를 포함하는 약학 조성물은 정맥, 피하 또는 복막으로 투여된다. 일반적으로, 식 I의 화합물, 이를 포함하는 약학 조성물은 정맥으로 투여된다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 식 I에서 R₁, R₂, R₃ 및/또는 R₄가 약물로써 유용한 오렐라닌(R₁ = R₂ = R₃ = R₄ = 수소)의 세포 독성을 실질적으로 간섭하지 않는 화합물들을 제공한다. 본 발명은 식 I에서 R₁, R₂, R₃ 및/또는 R₄가 오렐라닌(R₁ = R₂ = R₃ = R₄=수소)의 세포 독성을 실질적으로 간섭하지 않는 화합물들이 약물로써의 용도를 제공한다. R₁, R₂, R₃ 및/또는 R₄는 수소, 아미노, 멀캅토, 카르복시, 포스페이트 및 플루오르, 클로로 및 브롬을 포함하는 할로겐, C₁-C₆ 알킬, C₁-C₆ 알케닐, C₁-C₆ 알키닐, C₁-C₆ 알카놀, C₁-C₆ 알케놀, C₁-C₆ 알콕시, C₁-C₆ 알켄옥시를 포함하나 이에 한정되지 않으며, 이들 각각은 아미노, 멀캅토, 카르복시, 포스페이트 그리고 플루오르, 클로로 및 브롬을 포함하는 할로겐을 포함하나 이에 한정되지 않은 군으로 추가 치환될 수 있다. 본 발명의 바람직한 구체예에서, 식 I의 화합물은 R₁ = R₂ = R₃ = R₄ = 수소가 되는, 오렐라닌이다. 본 발명의 이러한 측면의 기타 바람직한 구체예들은 상세한 설명으로부터 명백하다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 식 I에서 R₁, R₂, R₃ 및/또는 R₄가 약물로써 유용한 오렐라닌(R₁ = R₂ = R₃ = R₄ = 수소)의 세포 독성을 실질적으로 간섭하지 않는, 신장 세포 암종 치료에 사용되는 식 I의 화합물들을 제공한다. 본 발명은 식 I에서 R₁, R₂, R₃ 및/또는 R₄가 오렐라닌(R₁ = R₂ = R₃ = R₄ = 수소)의 세포 독성을 실질적으로 간섭하지 않는, 식 I의 화합물들이 신장 세포 암종 치료 약물의 제조용 용도를 제공한다. R₁, R₂, R₃ 및/또는 R₄는 수소, 아미노, 멀캅토, 카르복시, 포스페이트 및 플루오르, 클로로 및 브롬을 포함하는 할로겐, C₁-C₆ 알킬, C₁-C₆ 알케닐, C₁-C₆ 알키닐, C₁-C₆ 알카놀, C₁-C₆ 알케놀, C₁-C₆ 알콕시, C₁-C₆ 알켄옥시를 포함하나 이에 한정되지 않으며, 이들 각각은 아미노, 멀캅토, 카르복시, 포스페이트 그리고 플루오르, 클로로 및 브롬을 포함하는 할로겐을 포함하나 이에 한정되지 않은 군으로 추가 치환될 수 있다. 본 발명의 바람직한 구체예에서, 식 I의 화합물은 R₁ = R₂ = R₃ = R₄ = 수소가 되는, 오렐라닌이다. 본 발명의 이러한 측면의 기타 바람직한 구체예들은 상세한 설명으로부터 명백하다.

또 다른 측면에서, 본 발명은 식 I에서 R₁, R₂, R₃ 및/또는 R₄가 오렐라닌(R₁ = R₂ = R₃ = R₄ =수소)의 세포 독성을 실질적으로 간섭하지 않는 화합물과 최소한 한 가지 약리학적으로 수용가능한 캐리어를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 따라서, R₁, R₂, R₃ 및/또는 R₄는 수소, 아미노, 멀캅토, 카르복시, 포스페이트 및 플루오르, 클로로 및 브롬을 포함하는 할로겐, C₁-C₆ 알킬, C₁-C₆ 알케닐, C₁-C₆ 알키닐, C₁-C₆ 알카놀, C₁-C₆ 알케놀, C₁-C₆ 알콕시, C₁-C₆ 알켄옥시를 포함하나 이에 한정되지 않는 것으로 예시화되며, 이들 각각은 아미노, 멀캅토, 카르복시, 포스페이트 그리고 플루오르, 클로로 및 브롬을 포함하는 할로겐을 포함하나 이에 한정되지 않은 군으로 추가 치환될 수 있다. 본 발명의 바람직한 구체예에서, 식 I의 화합물은 R₁ = R₂ = R₃ = R₄ = 수소가 되는, 오렐라닌이다.

특정 기타 약학 조성물에 있어서, 식 I의 화합물은 약리학적으로 허용가능한 염, 수화물, 또는 용매화합물로 조성물에 통합된다. 여기에서 설명된 것과 같이, 약리학적으로 허용가능한 염은 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 다른 문제점들 또는 여병(complications) 없이 인간 또는 동물의 조적과 접촉에 적합한, 당분야에서 일반적으로 고려될 수 있는 산 또는 염기 염이다. 이와 같은 염은 미네랄 및 아민과 같은 염기성 잔기의 유기산 염을 포함한다. 특정 약리학적 염은 염화수소산, 인산, 브롬화수소산, 말산, 글리콜산, 퓨마르산, 황산, 설파민산, 술파닐산, 포름산, 톨루엔술폰산, 메탄술폰산, 벤젠 술폰산, 에탄 디술폰산, 2-하이드록시에틸술폰산, 질산, 벤조산, 2-아세톡시벤조산, 구연산, 타르타르산, 락트산, 스테아르산, 살리실산, 글루타민산, 아스코르브산, 파모산, 숙신산, 푸마르산, 말레산, 프로피온산, 하이드록시말레산, 요오드화수소산, 페닐아세트산, 아세트산, HOOC-(CH₂)n-COOH (이때 n은 0-4임)와 같은 알카논산 및 이와 유사한 것들과 같은 산성 염을 포함하나 이에 한정되지 않는다.

본 발명에 의해 제공되는 약학 조성물은 조성물이 이용되는 치료 방법에 의해 고려되는 임의의 투여 경로에서 이용하는데 적합하다. 본 발명의 방법에서, 본 발명의 식 I의 화합물 또는 이의 약학 조성물은 장관외(정맥, 피하, 근육 및 피내를 포함), 국소(볼, 설하를 포함), 구강, 비장 및 이와 유사한 경로를 포함하는 다양한 경로에 의해 개체로 투여될 수 있다. 여기에서 제공되는 특정한 바람직한 약학 조성물은 정맥, 피하 또는 복막 주사를 통하여 투여될 수 있도록 조제된다. 일반적으로, 약학 조성물은 정맥 주사에 의해 투여될 수 있도록 조제된다.

특정 장관외 투여 경로에서, 약학 조성물은 식 I의 화합물 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 약 0.1 mg/mL 내지 약 25 mg/mL 포함하는 멸균 염 용액이다. 장관외 투여용으로 특정 바람직한 약학 조성물은 염 용액에 약 0.5 mg/mL 내지 약 10 mg/mL의 식 I의 화합물 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 포함하며, 선택적으로 하나 이상의 약리학적으로 허용가능한 첨가제를 포함한다.

특정한 바람직한 약학 조성물에서, 조성물은 약 25 mg 내지 약 5000 mg 또는 약 5 mg 내지 약 2500 mg의 식 I의 화합물 또는 이에 대등한 몰량의 약리학적으로 허용가능한 염을 포함한다. 본 발명의 특정 기타 약학 조성물에서, 조성물은 약 1 mg 내지 약 1500 mg의 식 I의 화합물 또는 이에 대등한 몰량의 약리학적으로 허용가능한 염을 포함한다. 또 다른 약학 조성물은 약 20 mg, 약 30 mg, 약 40 mg, 약 50 mg, 약 60 mg, 약 70 mg, 약 80 mg, 약 90 mg, 또는 약 100 mg의 식 I의 화합물 또는 이에 대등한 몰량의 약리학적으로 허용가능한 염을 포함하도록 조제된다.

암을 앓거나 앓을 가능성이 있는 환자의 특정 치료 방법에서, 암을 앓거나 앓을 가능성이 있는 환자에게 식 I의 화합물을 투여하면, 종양 크기가 최소한 50% 또는 좀 더 바람직하게는 최소한 약 60%, 70%, 80%, 90% 또는 약 95% 감소된다. 암 환자를 치료하는 특정 기타 방법에서, 암 환자에게 식 I의 화합물을 투여하면, 종양 크기가 최소한 90% 감소되거나 또는 감지가능한 종양이 없을 때까지 종양 크기가 된다.

암 환자를 치료하는 특정한 바람직한 방법은 가축, 반려동물(개, 고양이, 말 및 이와 유사한 것들), 영장류 및 인간을 포함하는 포유류 환자에서 암 또는 기타 종양 질환의 치료 또는 예방을 포함한다.

본 발명의 치료 방법은 식 I의 하나 이상의 화합물의 치료요법적 유효량을 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 본 치료 방법에서, 치료요법적 유효량은 환자에게 존재하는 신장 세포 암종 종양의 크기를 감소시키거나 또는 환자에게서 종양을 제거하는데 충분한 양이다. 적합한 환자는 여기에서 명시된 질환을 앓고 있는 환자들을 포함한다. 본 발명에 따른 치료에 전형적인 환자는 포유류, 특히 영장류, 특히 인간을 포함한다. 기타 적합한 개체는 개, 고양이, 말 및 이와 유사한 것과 같은 길들여진 반려동물 또는 소, 돼지, 양 및 이와 유사한 가축을 포함한다.

본 발명의 바람직한 방법은 여기에서 설명된 질환을 앓고 있는 개체, 특히 하나 이상의 암을 앓고 있는 받은 개체(가령, 포유류, 특히 인간)를 확인 및/또는 선별하는 것을 포함한다. 본 발명의 약학 조성물은 여기에서 설명된 것과 같이 암 치료용 지침(가령, 서면 쉬트), 가령 암을 앓고 있는 개체 치료용 지침과 함께 포장될 수 있다.

본 발명의 화합물은 수용성 형태로 개체에게 적절하게 투여되는데, 예를 들면, 유기 또는 무기산의 약리학적으로 허용가능한 염, 가령, 적절한 화학적 변형에 의해 수득되는 염화수소산, 황산염, 헤미설페이트(hemi-sulfate), 인산염, 질산염, 아세트산염, 수산염, 구연산염, 말레이트, 메실레이트 등이 된다. 또한, 산성기가 화합물에 존재하면, 유기 또는 무기 염기의 약리학적으로 허용가능한 염이 이용될 수 있는데, 가령, 암모니움 염 또는 유기 아민 염 또는 알칼리 금속 또는 알칼리토금속 가령, 칼륨, 칼슘 또는 나트륨 염으로 이용될 수 있다. 특별히 적절한 약리학적으로 허용가능한 염은 K 또는 Na와 같은 알칼리 금속 양이온, Mg 또는 Ca와 같은 알칼리 토금속 양이온, Al 또는 Zn와 같은 또 다른 비-독성 금속 양이온 또는 NH4⁺, 피페라지니움 또는 2-하이드록시에틸암모니움과 같은 비-금속 메탈로이드 양이온과 함께 형성된 것들을 포함한다. 본 발명의 방법에 사용하기에 적합한 특정 바람직한 화합물은 약리학적으로 허용가능한 염의 사전-준비없이도 운반될 수 있도록 중성 형태로 충분히 수용성이다.

본 발명의 방법에 이용하기에 적합한 화합물은 임의의 그리고 모든 상이한 단일 순수 이성질체 및 두 개 이상의 이성질체의 혼합물을 포함한다. 이성질체 용어는 부분입체이성질체(diastereoisomers), 거울상체(enantiomers), 위치이성질체(regioisomers), 구조적 이성질체(structural isomers), 회전 이성질체(rotational isomers), 호변체(tautomers) 및 이와 유사한 것들을 포함한다. 하나 이상의 입체중심를 포함하는 화합물 즉, 키랄 화합물의 경우, 본 발명의 방법은 거울상적으로 농축된 화합물, 라셈체 또는 부분입체이성질체 혼합물로 실시될 수 있다. 바람직한 거울상체 농축된 화합물은 50% 이상 과량의 거울상체를 가지며, 더욱 바람직하게는 화합물은 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 또는 그 이상의 과량의 거울상체를 가진다. 본 발명의 방법에 이용되는 식 I의 화합물은 단독으로 또는 하나 이상의 치료제와 병용하여, 통상적인 부형제 가령, 활성화합물과 유해하지 않는 반응을 하고, 수용개체에 유해하지 않는, 원하는 투여 경로에 적합한 약리학적으로 허용가능한 유기 또는 무기 캐리어 물질과 혼합된 약학 조성물로 이용될 수도 있다. 적합한 약리학적으로 허용가능한 캐리어는 물, 염 용액, 알코올, 식물성 오일, 포릴에틸렌 글리콜, 젤라틴, 락토즈, 아밀로즈, 마그네슘 스테아레이트, 활석, 규산, 점성 파라핀, 향수 오일, 지방산, 모노글리세리드 및 디글리세리드, 석유 페트로에테르(petroethral) 지방산 에스테르, 하이드록시메틸-셀룰로오즈, 폴리비닐피롤리돈 등을 포함하나 이에 국한되지 않는다. 약학 준비물은 멸균될 수 있으며, 원하는 경우, 보조제 가령, 윤활제, 보존제, 안정화제, 습윤제, 에멸젼화제, 삼투압에 영향을 주는 염, 완충액, 발색제, 풍미제 및/또는 방향 물질 및 활성 화합물과 유해하게 반응하지 않는 기타 유사한 물질과 혼합될 수 있다.

장관외 사용을 위해, 용액, 적절하게는 오일 또는 수용성 용액 뿐만 아니라 현탁액, 에멸젼 또는 좌약을 포함하는 임플란트가 특별히 적합하다. 앰플은 통상의 단위 약형이다.

장에 사용을 위해, 활석 및/또는 탄수화물 캐리어 결합제 또는 이와 유사한 것을 가지는 태블릿, 당의정 또는 캡슐이 특히 적합하며, 캐리어는 바람직하게는 락토즈 및/또는 옥수수 전분 및/또는 감자 전분이 된다. 시럽, 엘릭시르 또는 이와 유사한 것들이 이용될 수 있는데, 단맛을 가진 비이클이 이용된다. 지연 방출 조성물이 조제될 수 있는데, 이때 활성 성분은 마이크로포집화(microencapsulation), 다중 피복 등에 의해 차등적으로 분리되는 피복에 의해 보호된다. 경구 투여용으로 태블릿, 캡슐 및 시럽 또는 기타 유체가 일반적으로 바람직하다.

상기 명시적으로 언급된 성분들에 추가하여, 본 발명의 제제에는 문제의 제형 타입에 따라 당분야에 통상적인 기타 물질을 포함할 수 있는데, 예를 들면, 경구 투여에 적합한 제형은 풍미제(flavoring agents)를 포함할 수 있다.

특정 구체예에 따르면, 식 I의 화합물은 예를 들면, 화학요법제, 항염증제, 해열제, 방사선감각제, 방사선보호제, 비뇨제, 구토-억제제 및/또는 지사제를 포함한 기타 화합물과 함께 투여될 수 있는데, 예를 들면, 시스플라틴, 카르보플라틴, 도쎄탁셀, 파클리탁셀, 플루오르우라실, 카페씨타빈, 겜씨타빈, 이리노테칸, 토포테칸, 에토포시드, 미토마이신, 게피티니브, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 독소루비신, 사이클로포스파미드, 셀레코시브, 로페코시브, 발데코시브, 이부프로펜, 나프록센, 케토프로펜, 덱사메타손, 프레드니손, 프레드니졸론, 하이드로코르티손, 아세타아미노펜, 미소니다졸, 아미포스틴, 탐술로신, 페나조피리딘, 온단세트론, 그라니세트론, 알로세트론, 팔로노세트론, 프로메타진, 프로클로로페라진, 트리메토벤즈아미드, 아프레피탄트, 아트로핀과 디페녹실레이트 및/또는 로페라미드. 한 가지 바람직한 구체예에서, 식 I의 화합물은 맥관 내피 성장 인자(VEGF) 및 태반 성장 인자(PlGF)에 대한 단클론 항체; 카치주마브, 소라페니브, PTK78, SU11248, AG13736, AEE788, 및 ZD6474를 포함하는 VEGF 및 PlGF 수용체의 억제제를 포함하는 맥관형성 억제제와 복합하여 투여된다. 또 다른 구체예에서, 식 I의 화합물은 인터루킨 2 (IL-2) 및 인터페론 알파(IFNα)를 포함하는 면역조절 약물과 함께 투여된다. 또 다른 구체예에서, 식 I의 화합물은 세포 성장 신호 간섭 약물, 예를 들면, 라파마이신의 포유류 표적(mTOR) 억제제를 포함하는 약물과 함께 투여된다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 식 I의 화합물은 이 화합물이 암 세포를 특이적으로 표적화하도록 표적 선택성을 강화시키는 분자에 화학적으로 결합된다. 이와 같은 분자의 예로는 (A) 정상적인 신장 조직과 비교하여 표적 세포에 특이적으로 발생되는 또는 정상 조직보다 더 많은 수를 가진 표적에 대한 단클론 및 다클론 항체, 그리고 (B) 정상적인 신장 조직과 비교하여 표적 세포에 특이적으로 발생되는 또는 정상 조직보다 더 많은 수를 가진 수용체의 리간드를 포함한다. 이와 같은 유도(guidance) 분자 및 식 I의 화합물에 이들 분자를 콘쥬게이트시키는 기술은 본 기술분야에 공지되어 있으며, 결합 반응은 과도한 실험없이 당업자가 실시할 수 있다.

본 발명의 키트는 최소한 한 가지 약리학적으로 허용가능한 캐리어, 식 I의 화합물 50 내지 3,500 mg 또는 상기에서 논의된 바와 같이, 이의 약리학적으로 허용가능한 염의 균등한 몰량을 포함한다. 키트에서, 식 I의 화합물 또는 이의 허용가능한 염 및 약리학적 허용가능한 캐리어는 별도의 격실에 위치하는 것이 바람직하다. 식 I의 화합물은 고체로 존재하는 것이 바람직하다. 투여를 위하여, 식 I의 화합물 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염은 캐리어와 복합되어, 캐리어내에 이들이 완전하게 또는 실질적으로 용해된다. 키트는 식 I의 화합물 약 100 mg 내지 약 1,500 mg, 그리고 가장 바람직하게는 약 200 mg 내지 약 500 mg, 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염의 대등한 몰량을 포함할 수 있다.

본 발명의 전술한 설명은 단순히 설명을 위한 것이며, 다음의 청구범위에서 제시된 바와 같이 본 발명의 요지 또는 범주를 벗어나지 않고 변화 및 수정이 있을 수 있다는 것을 이해해야 한다. 여기에서 언급된 각 서류는 본 출원에 참고문헌으로 첨부된다.

실시예

실시예 1: 코르티나리우스 ( Cortinarius ) 버섯으로부터 오렐라닌의 추출 및 분리

A. 전극 방법(Polar method): 2 g의 말린 코르티나리우스 버섯을 분말로 만들고, 그 다음 25℃에서 24시간 동안 50% 메탄올로 추출하였다. 혼합물을 원심분리시키고, 상청액을 제거하여 최종 용적이 5 ㎖이 되도록 하였다. 5 vol의 차가운 메탄올을 반복적으로 첨가하여, 맑은 용액이 만들어질 때까지 형성된 침전물은 버렸다. 용매를 기화시켰고, 잔유물은 물에 용해시켰고, 무극 용매는 페트롤리움 에테트로 추출하여 제거하였다. 극(polar) 상은 Sephadex 컬럼에 로드시키고, 50% 에탄올로 용리시켰다. 생성된 분취물은 박층 셀룰로오스 상에서 부탄올: 아세트산: 물(3:1:1)로 용리시켜 크로마토그래피하였다. Rf 0.68에서 형광 밴드로 오렐라닌을 확인하었다.

B. 무극 방법(Apolar method): 4 g의 분말 코르티나리우스 버섯을 디에틸 에테르에서 24시간 동안 재환류시키고, 용매를 버렸다. 잔유물은 메탄올에서 재환류시키고, 용매 추출 후, 20 ㎖의 물(6 h, 4 ℃)로 씻어내었다. 그 다음 50% 수용성 에탄올(pH 7.0)에 용해시켰다. 혼합물을 Sephadex 컬럼에 로드시키고, 50% 에탄올로 용리시켰다. 생성된 분취물은 박층 셀룰로오스 상에서 부탄올: 아세트산: 물(3:1:1)로 용리시켜 크로마토그래피하였다. Rf 0.68에서 형광 밴드로 오렐라닌을 확인하었다.

실시예 2: 오렐라닌의 합성

오렐라닌은 Tiecco M, Tingoli M, Testaferri L, Chianelli D and Wenkert E: Total synthesis of orellanine, the lethal toxin of Cortinarius orellanus Fries Mushroom . Tetrahedron 42, 1475-1485 (1986)에서 설명된 것과 같이, 시판되는 3-하이드록시피리딘으로부터 합성하였다.

실시예 3: 시험관에서 오렐라닌은 인간 신장 세포 암종 세포에 특이적인 독성 효과를 가진다.

배경 및 방법.

모계 종양 및 전이 성장을 나타내는 5가지 상이한 인간의 신장 세포 암종 (SKRC-52, 786-0, SKRC-17, SKRC-7 및 SKRC-21)으로부터 수거한 세포들을 표준 조건하에 배양하였다. 약 70 % 합류시 그리고 신속한 성장에서, 24시간 동안 오렐라닌(400 μM)을 포함하는 배지에 세포를 노출시켰다. 그 다음 배지를 통상의 완전 배지로 교환하였고, 추가 6일간 세포를 관찰하였다.

결과 및 논평

세포를 설명한 오렐라닌으로 처리한 효과를 도 1에서 설명하고 있다. 도면에서 오렐라닌은 테스트한 모든 유형의 세포에 매우 독성이 강하였다는 것이 명백하다.

더욱이, 초기 노출후 배양 배지로부터 오렐라닌을 제거하여도 독성은 영향을 받지 않았다. 이것은 오렐라닌이 세포내에 축적되고, 세포외 오렐라닌이 존재하지 않는 경우에도 남아있다는 것을 말한다. 도 2는 오렐라닌 노출전, 그리고 24시간 노출후 1주일 시점에서 세포의 외양을 보여준다.

실시예 4: 오렐라닌의 약량 -반응 효과

배경 및 방법

모계 종양 및 전이 성장을 나타내는 2가지 상이한 인간의 신장 세포 암종 (SKRC-7, 786-0)으로부터 수거한 세포들을 표준 조건하에 배양하였다. 약 70 % 합류시 그리고 신속한 성장에서, 24시간 동안 상이한 농도의 오렐라닌을 포함하는 배지에 세포를 노출시켰다. 그 다음 배지를 통상의 완전 배지로 교환하였고, 추가 6일간 세포를 관찰하였다.

결과 및 논평

도 3에서 볼 수 있는 것과 같이, 노출 농도와 사멸되는 세포 분취물간에 명백관 상관 관계가 있다. 오렐라닌의 단일 24시간 노출을 위한 약량 반응 간격은 대략 5 ㎍/㎖ 내지 200 ㎍/㎖이다.

실시예 5: 더 적은 약량의 오렐라닌의 반복 투여 효과

배경 및 방법

인간의 신장 세포 암종 786-0으로부터 수거한 세포들을 표준 조건하에 배양하였다. 약 70 % 합류시 그리고 신속한 성장에서, 24시간 동안 낮은 농도의 오렐라닌(20 ㎍/㎖)을 포함하는 배지에 세포를 노출시켰다. 그 다음 24시간 동안 20 ㎍/㎖ 오렐라닌을 포함하는 새로운 배지로 교환하거나(도 4의 중간 막대) 또는 48시간 동안 완전 배지로 교환하였고, 그 다음 24시간 동안 20 ㎍/㎖ 오렐라닌 존재하에 두었다(도 4의 가장 우측 막대).

결과 및 논평

단일 노출 반응 간격의 더 낮은 하한에서의 약량에서 조차도 오렐라닌에 반복적으로 노출되면 신장 암 세포에 추가적인 뚜렷한 독성 효과를 만들었다.

실시예 6: 다른 세포 유형에 오렐라닌의 효과

배경 및 방법

다수의 인간의 조직(신장 조직으로부터 세관 표피, 사구체 조절막(podocyte) 및 혈관사이세포, 섬유아세포, 대식세포, 대동맥 내피세포, 미세혈관 내피세포 및 제대 내피세포, 내장 상피(십이지장, 공장, 회장 및 결장) 그리고 연골세포)으로부터 기인된 세포계 및 원발성 세포들을 표준 조건하에 배양하였다. 약 70 % 합류시 그리고 안정적인 성장에서, 24시간 동안 약량 반응을 얻기 위하여 선택된 농도에서 오렐라닌을 포함하는 배지에 세포를 노출시켰다. 그 다음 배지를 통상의 완전 배지로 교환하였고, 추가 6일간 세포를 관찰하고, 생존능력을 결정하였다. 첨가된 다량의 오렐라닌 용액의 용적으로 인하여 배양 배지의 희석에 의한 임의의 성장 지체 효과를 보정하기 위하여, 모든 세포에 동량의 오렐라닌 완충액을 보충하였다.

결과 및 논평

테스트한 세포유형중 어느 것도 이용가능한 최대 농도인 1,000 ㎍/㎖로 실시예 4에 따른 오렐라닌에 노출되었을 때 생존능에 임의의 효과를 나타내지 않았다.

실시예 7: 오렐라닌은 세포 주기의 중지에 의해 성장-억제를 유도한다.

배경 및 방법

실시예 3에서 설명한 것과 같이 특이적으로 배양된 신장 암 세포를 24시간동안 오렐라닌(lOO㎍/㎖ 배양 배지)로 처리하였다. 이 기간 동안, 0시간, 2시간, 6시간 및 24 시간 노출후 세포를 수거하였다. A) 키나제 억제제 p21, B) 포스포릴화된 망막아종 단백질 (성장 자극 인자), 그리고 C) 세포가 분할되는 세포 주기의 M-상으로 세포가 진행되는 것을 허용하는 cdc2 단백질에 대한 항체로 수거된 물질에서 웨스턴 블랏을 실시하였다.

결과 및 논평

p21, 망막아종 단백질 그리고 cdc2의 단백질 발현에 대한 오렐라닌 노출 효과는 도 5에 나타낸다. 세포 주기 억제제 p21의 세포내 수준은 6시간 시점에 최대로 증가하였지만, 세포 주기 자극 망막아종 단백질의 포스포릴화된 형태는 24시간 시점의 측정에서 절대적으로 부족하다. 유사한 방식으로, 세포를 세포 분할 상으로 들어가도록 허용하는 cdc2 단백질은 24시간 시점에서 급격히 하향-조절된다. 이것은 세포 주기에 오렐라닌이 충분한 저해 효과를 가지며, 이는 적어도 두 개의 주요 저지 점에서 발휘된다는 것을 나타낸다.

실시예 8: 오렐라닌은 몇 가지 자가-사멸 유도 경로의 활성을 증가시켜, 암 세포가 사멸되게 한다.

배경 및 방법

신장 암 세포를 배양시키고, 실시예 7에 따라 오렐라닌에 노출시키고, 최대 24시간 까지 다양한 시점에서 세포를 수거하였다. p38 MAPK 시스템, p53 시스템, Fas 리간드, 종양 괴사 인자 알파 (TNF) 및 절단된 카스파제 3는 세포 사멸로 이끄는 자가-사멸 경로에서 주요 인자들이다. 웨스턴 블랏팅을 이용하여 A) p38, B) 절단된 카스파제 3, 및 C) 증식성 인자 포스포릴화된 ERK 1/2의 세포내 수준을 결정하였다. 정량적 PCR을 이용하여 p53 경로의 모든 자가-사멸 효과를 중개하는 D) 자가-사멸의 p53 상향조절된 중개물질(PUMA), E) Fas 리간드 및 F) TNF의 mRNA 발현을 결정하였다.

결과 및 논평

결과는 도 6 - 8에 요약하였다. 24시간 기간동안 포스포릴화된(활성화된) p38이 안정적으로 증가하였고, 세포에서 자가-사멸 신호 강도가 증가하였다(도 6). (성장 자극인자 포스포릴화된 ERK 1/2의 동시 상향-조절은 오렐라닌의 자가-사멸 영향을 “벗어나기”위한 세포의 시도로 본 발명자들은 해석한다).

mRNA 수준에서, PUMA 및 사멸 수용체 리간드 FasL 및 TNF의 극단적인 상향 조절은 강력한 자가-사멸 자극을 구성한다(도 7). 끝으로, 자가사멸의 주요 효과물질인 절단된 카스파제-3의 양은 오렐라닌에 노출후 24시간 시점에서 급격히 증가되었다(도 6).

도 8에서 제시한 증가된 자가-사멸 세포 이미지와 함께, 상기 결과는 신장 암 세포에서 오렐라닌의 주요 작용 방식이 자가-사멸임을 분명하게 나타낸다.

실시예 9: 오렐라닌은 가슴샘이 없는 쥐에서 인간 신장 세포 암종 성장을 근절시킨다.

배경 및 방법

가슴샘이 없는, T 세포-결핍 쥐(RNU, Charles River Laboratories, FRG)를 인간 신장 세포 암종의 생체내 성장을 위한 시스템으로 이용한다. 이들 동물에서 T-세포계 면역 방어체계의 부재는 이종이식에 대패 내성을 가지도록 한다. 동물 시설에 도착후 1주일뒤, 동물들에게 5 Gy의 X-광선을 제공하여 이들 동물의 B-세포 중개 반응도 억제시켰다.

그 다음날, 모든 동물들에게 복막 투석(PD)용 유치뇨도관을 채웠다. PD 처치는 오렐라닌의 투여시 부작용으로 상실되는 신장 기능을 대체할 것이다.

1일 뒤, 5마리 동물의 어깨 부분 피하로 약 10 × 10⁶ 인간 신장 암종 세포(SKRC-52)를 접종한다. 나머지 5 마리 동물은 정맥 주사를 통하여 동량의 세포를 제공받는다. 피하 군에서 국소화된 종양 1 × 1 × 2 cm은 2-4주 후 피부 아래에서 만져진다. 이때 각 군에서 두 마리 (기준)는 i.p.로 생리염 용액을 제공받고, 나머지 3마리는 10 mg 오렐라닌/kg b.w. i.p.을 제공받는다.

결과 및 논평

염/오렐라닌을 첫 번째 주사한 후 2주뒤, 피하 군의 기준 동물의 종양은 대략 크기가 두배가 되며, 오렐라닌을 주사맞은 동물에서 종양은 주사 시점에 기록한 크기의 25% 미만으로 줄었다. 이때 오렐라닌을 이미 제공받은 피하 군의 3마리 동물의 종양 부위로 추가 5 mg 오렐라닌/kg b.w.이 주사되고, 기준 동물의 종양 부위에 10 mg 오렐라닌/kg b.w.을 주사하였다. 추가 2주후, 오렐라닌을 두차례 주사맞은 동물에서는 종양에 중후가 없었고, 앞에서 기준 동물의 종양 크기는 75%이상 감소된다.

염/오렐라닌을 첫 번째 주사한 후 1주와 2주뒤, 정맥 군의 5마리 동물에게 각각 5 mg/kg 오렐라닌 또는 염을 i.v. 로 주사하였다. 다시 1주일 후, 동물을 죽이고, 종양 성장에 대해 복부 및 흉부강을 스캔한다. 종양 덩어리 측정에서, 오렐라닌-처리된 동물은 기준 동물의 종양 덩어리의 10% 미만을 가진다는 것을 보여준다.

이것은 생체계에서 오렐라닌의 종양-사멸 활성을 분명하게 설명한다.

실시예 10 : 돼지 및 개에서 장기간 처리 동안 i.v. 오렐라닌의 안정성

어린이 및 유아에 적합한 장비를 이용한 혈액투석을 위하여 Gottingen 미니돼지 종족의 5마리 돼지와 잡종인 개 5마리(체중 10-15 kg)를 준비한다. 동물에게 10 mg 오렐라닌/kg b.w.의 초기 약량을 제공한다. 24시간 후에, 약 3시간 동안 동물은 투석을 받게된다. 투석 후, 동물에게 5 mg 오렐라닌/kg b.w.를 주사하였다. 투석/재주사 과정은 8주간 일주일에 3회(월, 수, 금요일) 반복되었다. 일주일에 한번씩 동물의 전반적인 상태에 대해 평가가 있다. 실험 종료시, 모든 동물을 죽이고, 심장, 폐, 신장, 간, 비장, 소장, 대장, 뇌, 근육 및 피부로부터 조직병리학적 평가를 위한 견본을 취한다.

동물의 거동 및 전반적인 상태는 실험 기간 동안 정상이다. 조직병리학적 검사에는 완전한 신부전으로 이어지는 광범위한 세뇨관 손상이 있는 신장을 제외하고 조직 손상은 없다. 결과는 고약량의 오렐라닌으로 치료하면 비-신장 조직에서 무시할 정도의 부작용만 있는, 신장 암 환자의 관점에서 안전하다 것을 보여준다.

실시예 11 : 진행된 신장 세포 암종을 앓고 있는 인간 환자를 오렐라닌으로 치료

신장 암종 치료를 요하는 환자에게 오렐라닌을 10일간 매일 정맥 주사한다. 환자의 초기 종양은 대략 2 kg이다. 이 값에 기초하여, 대략적인 매일 약량은. 280 mg (4 mg/kg b.w. 70 kg)으로 결정된다. 첫 번째 주사전에, 환자는 혈액 투석 또는 복막 투석을 준비하는데, 그 이유는 오렐라닌 치료는 암 세포를 사멸시킴과 동시에 건강한 신장 상피 조직을 불가피하게 파괴시켜 환자에게 신부전을 줄 수 있기 때문이다. 각 주사후 2시간 시점에 혈액 투석을 시작하여 2시간동안 지속한다. 더 적은 양의 오렐라닌의 반복 투여가 있는 이 과정은 종양 조직이 오렐라닌을 활발하게 취하여, 조직에서 오렐라닌이 치사 수준으로 점진적으로 증가되고, 독소의 세포외 농도는 부작용을 일으키게 되는 수준이하로 유지되게 하는 는 유익한 효과를 가진다. 선택적으로, 질병이 한쪽에만 발생되는 일측면적이라면, 아프지 않은 신장은 외과적으로 제거하여 치료하는 동안 보존시키고, 치료 후 재이식하는 시도를 할 수 있다. 환자의 진행과정을 1개월간 관찰하고, 그 다음 신장 암종의 성장을 억제시킬 필요가 있을 때 추가적으로 오렐라닌을 투여한다. 치료 동안, 환자에게서 종양 조직 덩어리는 감소되고, 처리 종료시, 신장암이 완전히 근절되어, 신장 투명 세포 암종에 대한 오렐라닌의 효과를 설명한다.

Claims

신장 세포 암종을 앓거나 앓을 가능성이 있는 환자를 치료하는 방법에 있어서, 이 방법은 다음의 식 I에 따른 최소한 한 가지 화합물 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 이를 필요로 하는 포유류에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
화학식 I

이때, R₁, R₂, R₃ 및/또는 R₄는 수소, 아미노, 멀캅토, 카르복시, 포스페이트 및 플루오르, 클로로 및 브롬을 포함하는 할로겐, C₁-C₆ 알킬, C₁-C₆ 알케닐, C₁-C₆ 알키닐, C₁-C₆ 알카놀, C₁-C₆ 알케놀, C₁-C₆ 알콕시, C₁-C₆ 알켄옥시를 포함하나 이에 한정되지 않으며, 이들 각각은 아미노, 멀캅토, 카르복시, 포스페이트 그리고 플루오르, 클로로 및 브롬을 포함하는 할로겐을 포함하나 이에 한정되지 않은 군으로 추가 치환될 수 있다.
청구항 제 1 항에 있어서, R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 수소가 되는, 방법.
청구항 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 식 I의 화합물은 약리학적으로 허용가능한 염이 되는, 방법.
청구항 제 1-3 항에 있어서, 화합물은 약 1 mg/kg 내지 약 100 mg/kg의 단일 약량으로 투여되는, 방법.
청구항 제 1-3 항중 임의의 한 항에 있어서, 화합물은 2회 이상의 약량으로 투여되며, 각 약량은 화합물 약 1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg을 포함하는, 방법.
청구항 제 5 항에 있어서, 연속 약량은 2 내지 7일 간격을 두고 투여되는, 방법.
청구항 제 4 항 또는 제 5 항에 있어서, 화합물은 매일 투여되는, 방법.
청구항 제 1-7 항중 임의의 한 항에 있어서, 화합물은 정맥, 피하 또는 복막으로 투여되는, 방법.
약물로 사용할 수 있는 다음의 식 I에 따른 최소한 한 가지 화합물 또는 이와 대등한 몰량의 이의 약리학적으로 허용가능한 염
화학식 I

이때, R₁, R₂, R₃ 및/또는 R₄는 수소, 아미노, 멀캅토, 카르복시, 포스페이트 및 플루오르, 클로로 및 브롬을 포함하는 할로겐, C₁-C₆ 알킬, C₁-C₆ 알케닐, C₁-C₆ 알키닐, C₁-C₆ 알카놀, C₁-C₆ 알케놀, C₁-C₆ 알콕시, C₁-C₆ 알켄옥시를 포함하나 이에 한정되지 않으며, 이들 각각은 아미노, 멀캅토, 카르복시, 포스페이트 그리고 플루오르, 클로로 및 브롬을 포함하는 할로겐을 포함하나 이에 한정되지 않은 군으로 추가 치환될 수 있다.
청구항 제 9 항에 있어서, R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 수소가 되는, 화합물.
신장 세포 암종약물로 사용할 수 있는 다음의 식 I에 따른 최소한 한 가지 화합물 또는 이와 대등한 몰량의 이의 약리학적으로 허용가능한 염.
화학식 I

이때, R₁, R₂, R₃ 및/또는 R₄는 수소, 아미노, 멀캅토, 카르복시, 포스페이트 및 플루오르, 클로로 및 브롬을 포함하는 할로겐, C₁-C₆ 알킬, C₁-C₆ 알케닐, C₁-C₆ 알키닐, C₁-C₆ 알카놀, C₁-C₆ 알케놀, C₁-C₆ 알콕시, C₁-C₆ 알켄옥시를 포함하나 이에 한정되지 않으며, 이들 각각은 아미노, 멀캅토, 카르복시, 포스페이트 그리고 플루오르, 클로로 및 브롬을 포함하는 할로겐을 포함하나 이에 한정되지 않은 군으로 추가 치환될 수 있다.
청구항 제 11 항에 있어서, R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 수소가 되는, 화합물.
최소한 한 가지 약리학적으로 수용가능한 캐리어와 다음의 식 I에 따른 최소한 한 가지 화합물 50 mg 내지 약 3,500mg 또는 이와 대등한 몰량의 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 포함하는 신장 세포 암종 치료용 약학 조성물.
화학식 I

이때, R₁, R₂, R₃ 및/또는 R₄는 수소, 아미노, 멀캅토, 카르복시, 포스페이트 및 플루오르, 클로로 및 브롬을 포함하는 할로겐, C₁-C₆ 알킬, C₁-C₆ 알케닐, C₁-C₆ 알키닐, C₁-C₆ 알카놀, C₁-C₆ 알케놀, C₁-C₆ 알콕시, C₁-C₆ 알켄옥시를 포함하나 이에 한정되지 않으며, 이들 각각은 아미노, 멀캅토, 카르복시, 포스페이트 그리고 플루오르, 클로로 및 브롬을 포함하는 할로겐을 포함하나 이에 한정되지 않은 군으로 추가 치환될 수 있다.
청구항 제 13 항에 있어서, R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 수소가 되는, 약학 조성물.
청구항 제 13 항 또는 제 14 항에 있어서, 화합물은 약리학적으로 허용가능한 염이 되는, 약학 조성물.
청구항 제 13-15 항에 있어서, 조성물은 환자의 정맥, 피하 또는 복막 투여를 위해 조제되는, 약학 조성물.
신장 세포 암종을 앓거나 앓을 가능성이 있는 환자를 치료하기 위한 키트에 있어서, 최소한 한 가지 약리학적으로 수용가능한 캐리어와 다음의 식 I에 따른 최소한 한 가지 화합물 50 mg 내지 약 3,500mg 또는 이와 대등한 몰량의 이의 약리학적으로 허용가능한 염을 포함하는 키트.
화학식 I

이때, R₁, R₂, R₃ 및/또는 R₄는 수소, 아미노, 멀캅토, 카르복시, 포스페이트 및 플루오르, 클로로 및 브롬을 포함하는 할로겐, C₁-C₆ 알킬, C₁-C₆ 알케닐, C₁-C₆ 알키닐, C₁-C₆ 알카놀, C₁-C₆ 알케놀, C₁-C₆ 알콕시, C₁-C₆ 알켄옥시를 포함하나 이에 한정되지 않으며, 이들 각각은 아미노, 멀캅토, 카르복시, 포스페이트 그리고 플루오르, 클로로 및 브롬을 포함하는 할로겐을 포함하나 이에 한정되지 않은 군으로 추가 치환될 수 있다.
청구항 제 17 항에 있어서, 투여를 위하여, 식 I의 화합물 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염이 캐리어에 완전하게 또는 실질적으로 용해되도록 식 I의 화합물 또는 이의 약리학적으로 허용가능한 염 및 약리학적으로 허용가능한 캐리어가 복합되는, 키트.