KR20070079889A - 셀루릭서를 함유하는 항노화용 조성물 - Google Patents

Abstract

아르간 오일, 카르노신 및 옥수수 추출물로 구성된 군으로부터 선택된 2종 이상의 물질이 사이클로덱스트린에 포집된 포집체의 상태로 존재하는 것을 특징으로 하는 항노화용 조성물로서, 자유 라디컬 소거 효능, 자외선에 의한 LDH의 분비를 억제하는 효능, MMP-1의 분비를 억제하는 효능의 우수한 조합을 통하여 피부 노화를 효과적으로 예방할 수 있을 뿐 아니라 피부 투과성이 우수하고 고용량의 사용시에도 피부 부작용이 없으며 우수한 안정성을 나타내는 효과가 있다.

아르간 오일, 카르노신, 옥수수 추출물, 사이클로덱스트린, 노화

Description

셀루릭서를 함유하는 항노화용 조성물{Anti-aging composition containing Cellulixir}

도 1은 본 발명에 따른 항노화용 조성물에 포함되는 사이클로덱스트린의 구조를 나타낸 것이다.

도 2는 본 발명에 따른 항 노화용 조성물에 포함되는 친지질성화된 β-사이클로덱스트린의 자발적 회합체의 구조를 나타낸 것이다.

도 3은 본 발명에 따른 항 노화용 조성물의 반응성 활성 산화물 생성 억제 효과를 나타내는 그래프이다.

도 4는 본 발명에 따른 조성물의 LDH 분비 억제 효과를 나타내는 그래프이다.

도 5는 본 발명에 따른 조성물의 MMP-1 생성 억제 효과를 나타내는 그래프이다.

도 6은 본 발명에 따른 조성물의 우수한 피부 투과율을 나타내는 그래프이다.

본 발명은 피부 세포의 산화적 손상을 보호하는 물질을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 세포 외부로부터 가해진 자외선, 환경오염물질, 급격한 기온의 변화 등과 같은 세포 손상 자극들은 세포내의 다양한 생화학적 변화를 유도하여 세포 손상 반응을 일으킨다. 이 중 피부의 노화는 부분적으로는 이런 외부적 스트레스들에 의해 유발되는 산화적 손상 반응의 결과 나타나는 피부의 생리학적 기능 변화에 기인하는 것으로 인정되고 있다. 즉, 피부 세포의 세포막이 활성산소나 다른 라디칼에 의해 지속적으로 손상을 입게 되면 단백질이나 지질단백질(lipoprotein)의 가교(cross-linkage)가 증가하거나 또는 분해가 되며, 과산화 지질의 양도 증가하게 된다. 이처럼 세포와 세포막이 손상되면, 세포막의 투과성이 변화하여 세포 내의 이온 균형이 깨지게 되고, 이런 변화는 세포 내의 대사 찌꺼기의 배출을 막고, 이 대사 찌꺼기를 제독하는 세포의 기능을 감퇴시킨다. 그리고, 세포 내의 칼륨 농도의 증가로 콜로이드 밀도가 증가하면, mRNA나 단백질의 합성이 방해를 받게 되는데, 그 결과 세포 손상을 치유할 수 있는 능력은 더욱 떨어지게 된다. 그리고, 진피(dermis)에 국소적인 상흔이 나타나고, 콜라겐 섬유(collagen fiber)나 탄력섬유(elastic fiber)의 감소로 진피 두께가 줄어든다. 콜라겐 섬유끼리의 가교도 증가하며 탄력섬유의 미세한 구조도 손상되어 전체적으로 피부의 탄력 저하가 나타난다. 다시 말해 외부 자극원에 의한 피부 세포의 산화적 손상은 궁극적으로 피부의 노화를 촉진시키게 된다.

이 산화적 세포 손상을 일으키는 물질들로는, 산화적 스트레스에 의해 발생 하는 과산화수소 (H₂O₂), 수퍼옥사이드 음이온(superoxide anion), 수산화라디칼 (hydroxy radical) 등이 있으며, 이런 유해 활성 산소종들의 세포내 독성을 제거하기 위해 라디칼 소거 효과가 탁월한 비타민C, 비타민E, 녹차카테킨 (green tea catechin) 등과 같은 항산화물질을 화장료에 보편적으로 사용하고 있다.

그러나 기존의 방법은 화학적 안정성에 있어서의 문제점이 있기 때문에 제품에 적용했을 경우, 효력이 매우 빠르게 감소하는 등의 문제점이 있고, 투과율이 낮으므로 피부에 직접 도포했을 경우 세포 수준에서의 효능과 달리 제 기능을 발휘하지 못할 수도 있는 문제점이 있었다.

한편, 노화와 관련된 다양한 기전 중 일부만 억제 또는 개선시키는 것으로는 충분한 항노화 효과를 얻을 수가 없는 문제점이 있었다. 따라서, 노화와 관련된 다양한 기전 중 항노화를 위해 필수적으로 억제 또는 개선시켜야 하는 기전들을 선별하고 그 기능을 수행할 수 있는 유효성분들을 적절히 조합함으로써, 항노화 효과를 극대화시켜야 할 필요성이 대두되어 왔다.

이에, 본 발명자들은 화학적으로 안정하면서도 피부 투과율이 높아 실제로 피부에 도포했을 경우 세포 수준에서 기대되는 바대로 효능이 뛰어난 물질을 찾고자 하였다.

신체는 글루타치온(glutathione), superoxide dismutase(SOD)와 같은 다양한 내인성 항산화 시스템을 갖추고 있다. 그러나, 세포 내 대사활동이 지나치게 증가하거나, 신체가 감염, 과도한 운동, 방사선 또는 화합물과 같은 외인성 스트레스에 노출되면 이러한 내인성 항산화 능력을 초과하게 되는 경우가 있으며, 이때 자유라디칼에 의한 세포 손상이 나타나게 된다.

한편, 피부는 섬유아세포, 각질형성세포, 멜라닌형성 세포 등 다양한 세포가 모여 활발히 정보와 물질 교환이 일어나는 조직이므로 몇 가지 다른 생체 방어 시스템이 협력했을 때 손상으로부터 방어하는 능력이 극대화될 것으로 기대된다. 이에 본 발명자들은 피부 세포 자체의 항산화 시스템을 상승시키는 물질과 자체적으로 라디칼 소거능을 가진 물질, 세포의 생존력을 우수하게 개선시키는 세 가지 물질을 발견하였고 더 나아가 이상의 물질을 신규한 방법으로 캡슐화하여 피부 투과력을 증진시킴으로 외용제로서 피부 효능을 향상시킬 수 있음을 발견하였다.

본 발명의 목적은 피부의 세포 손상을 보호하는 물질을 찾아내어 지속적으로 산화적 스트레스에 노출되는 피부의 퇴행성 변화를 신속하고 효과적으로 방지하고자 함이다.

상기한 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에 의한 항노화용 조성물은, 아르간 오일, 카르노신 및 옥수수 추출물로 구성된 군으로부터 선택된 2종 이상의 물질을 유효성분으로서 함유하는 것을 특징으로 한다.

상기한 조성물은 아르간 오일을 함유함으로써 반응성 활성 산화물(reactive oxygen species, ROS)의 발생을 억제하고 ROS를 소거함을 통해 피부 노화를 예방하는 것을 특징으로 한다.

상기 조성물은 카르노신을 함유함으로써 LDH의 분비를 억제함을 통해 피부 노화를 예방하는 것을 특징으로 한다.

상기 조성물은 옥수수 추출물을 함유함으로써 MMP-1의 분비를 억제함을 통해 피부 노화를 예방하는 것을 특징으로 한다.

상기 조성물은 아르간 오일, 카르노신 및 옥수수 추출물로 구성된 군으로부터 선택된 2종 이상의 물질이 사이클로덱스트린에 포집된 포집체의 상태로 존재하는 것이 바람직하다

바람직하게는, 상기 카르노신은 L-카르노신이다.

바람직하게는, 상기 옥수수 추출물은 물과 1,3-부틸렌글리콜을 추출용매로 사용하여 추출된 것이다.

바람직하게는, 상기 사이클로덱스트린은 아실레이티드된 사이클로덱스트린이다.

바람직하게는, 상기 사이클로덱스트린은 친지질성화된 β-사이클로덱스트린의 자발적 회합체이다.

바람직하게는, 상기 포집체는 포집체 전체 중량에 대하여 아르간 오일 0.01 내지 10중량%, L-카르노신 0.01 내지 10중량% 및 옥수수 추출물 0.01 내지 10중량%을 함유하는 것이다.

바람직하게는, 상기 조성물은 상기 포집체를 전체 조성물 중량에 대하여 0.01 내지 10중량% 함유하는 것이다.

이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

본 발명에서는 세포 손상 보호 물질을 찾기 위해 수백여종의 화합물들을 무작위적으로 선정하여 자외선에 의한 손상으로부터 피부 세포를 보호하는 효능을 검색하였다.

실험 결과 아르간 오일의 라디컬 소거 효능을 확인하였으며, 카르노신은 자외선에 의한 LDH의 분비를 억제하는 효능이 우수함을, 옥수수 추출물 성분은 피부 콜라겐을 파괴함으로써 노화를 유발하는 MMP-1의 분비를 억제하는 효과가 있음을 확인하였다.

아르간 오일은 아르간나무(Argania spinosa)에서 열리는 열매로부터 얻어지는 오일이다. 통상의 오일 제조법은, 씨앗을 맷돌에 갈아 반죽한 다음 손으로 기름이 스며 나올때까지 갠후 그 오일을 모아 순수 오일을 추출한다. 오일 1리터를 추출하기 위해서는 평균적으로 나무 한그루의 열매가 전부 필요하며 그 양은 125kg 정도가 필요하다. 아르간 오일은 PUFA(오메가-6), 토코페롤이 풍부하다.

카르노신은 자연적으로 발생하는 디펩티드로서, b-알라닌 및 히스티딘으로 구성되어 있다. 인체 내에서 생성되며 통상 뇌, 신경조직에 존재한다. 현재 생체 외에서 생산되고 있으며 부작용은 없다.

본 발명에 있어서, 옥수수 추출물은, 옥수수(Zea mays L.)의 종자로부터 얻어지는 추출물이라면 특별히 한정되지는 않는다. 또한 추출 용매도 특별히 한정되 지는 않지만, 물, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 에틸 알코올 또는 이소프로필 알코올 등을 단독 또는 2종 이상 혼합하여 추출할 수 있다. 바람직한 추출 용매는 물 또는 1,3-부틸렌글리콜이며, 가장 바람직한 추출 용매는 물과 1,3-부틸렌글리콜의 혼합 용매이다.

상기한 세 가지 성분의 단순 혼합물에 비해 상기 세 가지 성분을 사이클로덱스트린 내로 캡슐 포집한 형태로 사용하는 경우 피부 투과율 및 피부 세포 보호 효능이 상승적으로 증가함을 확인하였다. 따라서, 상기 사이클로덱스트린 캡슐을 함유하는 조성물은 활성 산소류의 생성과 세포 손상을 줄이고, 피부 세포 손상으로 발생할 수 있는 염증이나 노화의 촉진을 차단할 수 있으며 세포의 증식을 촉진시켜 피부 노화를 지연시킬 수 있다.

본 발명의 사이클로덱스트린 캡슐은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001중량%-20중량%를 함유하는 것이 바람직하며, 더 바람직하게는 0.01 내지 10중량%이다. 상기 상기 캡슐이 0.0001중량% 미만이면 항노화 효과가 미미하고 20중량%를 초과하면 제형 안정성에 어려움이 있기 때문이다. 이러한 관점에서 0.01 내지 10중량%가 더 바람직하다.

상기 사이클로덱스트린 캡슐 전체 중량에 대해서, 상기 옥수수 추출물은 0.01~ 10중량%, 아르간 오일은 0.01 ~ 10중량%, 카르노신은 0.01 ~ 10중량%, 사이클로덱스트린은 0.01 ~ 10중량%인 것이 바람직하다. 상기 각 하한치 미만인 경우에는 해당 효과가 미미하며, 상기 각 상한치를 초과하는 경우에는 제형 안정성에 어려움이 있기 때문이다.

사이클로덱스트린은 포도당을 기본단위로 α-1,4-글리코시딕 결합으로 연결된 환상 화합물이다. 사이클로덱스트린의 환 외부는 히드록시기가 존재하기 때문에 친수성을 띠는 반면 내부는 소수성을 나타낸다. 따라서 물보다 비극성이어서 지용성이면서 사이클로덱스트린 내부구조에 적합한 분자구조를 지닌 물질들은 'guest 분자'로서 사이클로덱스트린의 소수성 내부로 포접되어 포접화합물을 형성할 수 있다. 일반적으로 사용되는 사이클로덱스트린은 포도당 단위가 6, 7, 8개인 α-사이클로덱스트린, β-사이클로덱스트린, γ-사이클로덱스트린이고 이 중 β-사이클로덱스트린이 포접능과 경제성 때문에 가장 많이 응용되어 왔다. 사이클로덱스트린과 포접화합물을 형성하는 화합물에 관하여는 문헌 Journal of Parenteral Science & Technology 43, pp 231-240 (1989)와 Pharmaceutical Research 14 , pp 556-567 (1997)에 보고되어 있다.

또한 많은 사이클로덱스트린 유도체, 예를 들면 알킬-사이클로덱스트린, 히드록시알킬-사이클로덱스트린, 카르복시에틸-사이클로덱스트린, 술포알킬에테르-사이클로덱스트린이 사용될 수 있다. 히드록시알킬로서는, 탄소수 1 내지 6의 알킬기를 갖는 것이 바람직하고, 예를 들면, 히드록시메틸기, 히드록시에틸기, 히드록시프로필기, 히드록시부틸기 등을 들 수 있고, 특히 히드록시프로필기가 바람직하다. 여러 사이클로덱스트린 유도체 중에서 2-히드록시프로필-β-사이클로덱스트린은 물에서의 용해도가 크고 무독성이기 때문에 주사제 및 경구제제로 사용하기에 적합하다. 사이클로덱스트린 유도체에 관하여는 문헌 Journal of Pharmaceutical Science85(11), pp 1142-1169 (1996)에 보고되어 있다.

사이클로덱스트린을 이용한 포접 화합물에 관하여는 US 특허 4727064호에 사이클로덱스트린 유도체를 수용성 매질에 용해시키고 지용성 약물을 수용성 매질에 가하여 약물/사이클로덱스트린 복합체를 형성함으로써 낮은 용해도 등의 약제학적 특성을개선시킨 방법에 관한 결과가 공지되어 있다. 또한, US-4596795에 성호르몬/사이클로덱스트린 유도체의 복합체의 설하 및 구강 경로로의 투여 결과가 공지되어 있으며, US-4371673에는 레티노이드/고분자/두가지의 수용성 사이클로덱스트린 복합체와 레티노이드/사이클로덱스트린의 에테르유도체의 복합체에 대한 결과가 공지되어 있다.

본 발명의 조성물에 사용될 수 있는 사이클로덱스트린은 바람직하게는 무수물 또는 수화물형태인 α-, β-또는 γ-사이클로덱스트린이다. 본 발명의 조성물에 사용될 수 있는 사이클로덱스트린 유도체의 예로서는 α-, β-또는 γ-사이클로덱스트린 에테르 또는 혼합된 에테르유도체, 즉 사이클로덱스트린의 하나 이상의 히드록실 그룹이 메틸, 에틸, 히드록시에틸, 히드록시프로필, 히드록시부틸, 카르복시메틸 또는 카르복시에틸로 치환된 에테르류이다.

또한 사이클로덱스트린의 하나 이상의 히드록실 그룹이 말토실, 글루코실, 말토트리오실 등의 당에 의해 치환된 유도체 또는 술포알킬 에테르로 치환된 사이클로덱스트린 유도체를 들 수 있다. 바람직한 사이클로덱스트린 유도체로는 2,6-디메틸-β-사이클로덱스트린, 2-히드록시에틸-β-사이클로덱스트린, 2-히드록시프로필-β-사이클로덱스트린, 2-히드록시에틸-γ-사이클로덱스트린, 2-히드록시프로필-γ-사이클로덱스트린, (2-카르복시메톡시)프로필-β-사이클로덱스트린 및 술포부틸 에테르-7-β-사이클로덱스트린 등을 예시할 수 있다.

본 발명에 사용되는 사이클로덱스트린은 도 1에 나타낸 아실레이티드된 사이클로덱스트린이 바람직하다.

또한 도 2에 나타낸 친지질성화된 β-사이클로덱스트린 회합체인 것이 더 바람직하다. 이러한 회합체는 세포막의 지질 이중층 구조와 유사하다. 상기 회합체는 친지질성화된 β-사이클로덱스트린의 자발적 회합체로서 β-사이클로덱스트린 상에 그래프트된 친지질성 체인은 그 회합체를 양쪽 친매성으로 만들어 세포막과 같은 구조와 상호작용할 수 있도록 한다. 상기와 같은 β-사이클로덱스트린의 자발적 회합체에 의해 형성된 구조는 소수성 중심 강(hydrophobic central cavity)를 형성하고 여기에 활성 성분들이 포집된다.

상기와 같은 회합체는 세포막을 자유로이 통과할 수 있기 때문에 피부 깊숙이 통과될 수 있다. 따라서 상기 회합체는 활성 성분들을 효과적으로 피부 진피층까지 운반할 수 있다. 상기 회합체는 후크 효과(hook effect) 내지는 앵커리지 능력(anchorage ability)을 가져 그것의 친유성 표면이 세포막의 인지질과의 친화성을 증대시킨다.

일반적으로 사이클로덱스트린은 물에 용해되어 수용에서 자발적인 회합체의 형성이 어렵다. 그러나 사이클로덱스트린에 친유성 성질을 지닌 아실기를 도입함으로서 한분자내에 친유성 및 친수성그룹을 동시에 지녀 물에서 자발적인 회합체[auto- assembly]의 형성이 가능하며 그 안에 유용성 및 수용성 물질을 포집할 수 있는 특성을 지닌 나노사이즈 캡슐의 형성이 가능해진다.

본 발명의 조성물은 피부에 적용할 수 있는 통상적인 제형으로 제형화될 수 있으며, 예를 들면 화장수, 크림, 로션, 스킨로션, 팩, 파운데이션 등과 같은 화장품뿐만 아니라 액상비누, 고형비누, 세안 폼(foam)과 같은 인체세정제 등으로 제형화될 수 있다. 이들 각 제형은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 발명자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하다.

본 발명에 따른 약학 조성물은 경구, 비경구, 직장, 국소, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 등으로 투여될 수 있으며 가장 바람직한 투여 경로는 경피 투여이다.

또한, 상기 활성성분의 투여량은 치료 받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.001mg/kg/일 내지 대략 2000mg/kg/일 범위이다. 바람직한 투여량은 0.5mg/kg/일 내지 2.5mg/kg/일 이다. 또는, 1일당 1.0 내지 3.0 ㎖로 이를 1일 1 내지 5회 도포하여 1개월 이상 계속하는 것이 좋다.

한편, 의도된 투여양식에 따라 약학 조성물은 고체, 반고체 또는 액체 투여 형태일 수 있다. 투여 형태의 예는 정제, 알약, 캡슐, 좌약, 작은 봉지, 과립, 분말, 크림, 로션, 연고, 겔, 패취, 분무제, 반창고, 액체 용액, 현탁액, 분산액, 에멀젼, 시럽 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 활성성분은 리포솜, 미세입자 또는 마이크로 캡슐 등에 캡슐화 될 수 있다. 그러나 가장 바람직한 제형은 크림, 로션, 연고, 겔, 패취, 분무제, 액체용액, 현탁액, 분산액 또는 에멀젼 등의 경피 투여용 제형이다.

상기 제형 중 정제, 알약, 과립 등과 같은 고체 조성물은 편의상 코팅될 수 있으며 전형적으로 정맥 내 투여를 위한 조성물은 멸균 등장 수성 완충액 내의 용액이고, 주사 부위의 통증을 완화시키기 위해 국부 마취제를 포함한다.

또한, 원한다면 약제는 습윤제, 유화제, pH 완충제 등과 같은 소량의 무독성 보조 물질을 함유할 수도 있으며, 이러한 보조 물질의 예는 나트륨 아세테이트, 솔비탄 모노라우레이트, 트리에탄올아민 및 트리에탄올아민 올리에이트를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.

또한, 본 발명의 약학 조성물은 안정제, 항산화제, 결합제, 착색제, 향미제, 방부제 및 농후제와 같은 부형제, 담체 및 희석제를 더 포함할 수도 있다.

이하 실시예 및 시험예를 들어 본 발명을 상세히 설명하지만, 본 발명이 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1: 본 발명에 의한 일실시예의 제조>

1. 사이클로덱스트린 캡슐에 유효성분들의 포집

하기 표 1의 조성과 같이 하여 아르간 오일, 카르노신 및 옥수수 추출물이 친지질성화된 β-사이클로덱스트린의 자발적 회합체에 포집된 캡슐을 제조하였다.

성분	INCI 명칭	중량%
탈이온수	물	to 100
옥수수 추출물(Deliner)		3
아르간 오일	Argania Spinosa Kernel Oil	0.5
아실화된 사이클로덱스트린	사이클로덱스트린 라우레이트	0.15
L-카르노신	카르노신	0.15

2. 본 발명의 일실시예인 조성물의 제조

아래 표 2의 조성과 같이 하여 본 발명의 일실시예인 조성물을 제조하였다.

성분	함량(중량%)
	대조군	실시예	비교예
상기 표1에 따른 포집체	-	1.00	-
비타민C	-	-	5.00
밀납	4.00	4.00	4.00
폴리솔베이트	1.50	1.50	1.50
솔비탄세스퀴올레이트	0.70	0.70	0.70
유동파라핀	5.00	5.00	5.00
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.00	5.00	5.00
글리세린	3.00	3.00	3.00
부틸렌글리콜	3.00	3.00	3.00
프로필렌글리콜	3.00	3.00	3.00
카르복시비닐폴리머	0.10	0.10	0.10
트리에탄올아민	0.20	0.20	0.20
방부제	적량	적량	적량
색소	적량	적량	적량
향료	적량	적량	적량
정제수	to 100	to 100	to 100

이하에서는 본 발명의 효과를 입증하기 위한 실험을 수행하였다.

[실험예 1] 반응성 활성 산화물(reactive oxygen species, ROS) 생성 억제 효과

사람의 표피 조직에서 분리한 각질형성세포(keratinocyte)를 24well 형 세포배양 플레이트의 각 well에 5×10⁴개를 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 16시간 후, 각 시험물질을 10ppm으로 처리하였다. 2시간 뒤에 배양액을 제거한 후 각 well에 100마이크로리터의 인산완충염액(PBS)을 넣었다. 이 각질형성세포에 자외선 B (UV B) 램프(Model: F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki社, Japan)를 이용하여 자외선 30 mJ/㎠를 조사한 후, PBS를 덜어내고 각 well에 각질형성세포 배양액 200 마이크로리터를 첨가하였다. 여기에 각 시험 물질을 다시 10ppm으로 처리하고 일정 시간대별로 자외선 자극에 의해 증가한 반응성 활성 산화물(reactive oxygen species, ROS)의 양을 정량하였다. ROS의 양은 ROS에 의해 산화되는 dichlorofluorescin diacetate (DCF-DA)의 형광을 측정하는 Tan의 방법을 참고하여 정량하였으며 (Tan et al., 1998, J. Cell Biol. Vol. 141, pp1423-1432), 그 결과를 도 3에 나타내었다. 본 명세서에서 셀루릭서란 상기 표1에 따라 제조된 포집체를 의미한다. 상기 셀루릭서는 아르간 오일이 10ppm의 농도로 처리될 수 있도록 하는 양으로 사용되었다.

도 3에 나타난 바와 같이, 셀루릭서 성분 중 아르간 오일이 자외선에 의해 피부 세포 손상을 일으키는 것으로 알려진 ROS의 생성을 억제한다는 것을 알 수 있으며 또한 셀루릭서는 아르간 오일, 카르노신, 옥수수 추출물의 단순 혼합물을 처리한 군에서보다 더욱 효과적으로 ROS 생성을 억제함을 알 수 있다. 그러므로, 셀루릭서는 자외선에 의한 유해 인자인 ROS의 생성을 억제해 피부 세포를 보호하는 효과가 있다.

[실험예 2] 자외선에 의한 세포 손상 보호 효과

사람의 표피 조직에서 분리한 각질형성세포(keratinocyte)를 96well 형 세포배양 플레이트의 각 well에 1×10⁴개를 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 18시간 후, 배양액을 제거한 후 각 well에 50 마이크로리터의 인산완충염액(PBS)을 넣었다. 이 각질형성세포에 자외선 B (UV B) 램프(Model: F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki社, Japan)를 이용하여 자외선 30 mJ/㎠를 조사한 후, PBS를 덜어내고 각 well에 각질형성세포 배양액 (keratinocyte growth media, Clonetics, BioWhittacker社, MD, USA) 200 마이크로리터를 첨가하였다. 여기에 셀루릭서와 그 구성성분을 각각 해당 농도 만큼씩 처리한 후, 16~20시간 동안 배양하였다. 셀루릭서의 경우 L-카르노신의 농도가 10ppm이 되도록 하는 양으로 처리하였다. 일정 시간 경과 후, 배양 상층액을 적당량 취하여 16~20시간 동안 세포 손상에 지표 효소인 젖산탈수소화효소(lactate dehydrogenase, LDH)의 양를 정량하였다. 배양 상층액 중의 LDH 양은 프로메가社(Madison, WI, USA)의 Cytotox 96 non-radioactive cytotoxicity assay™키트를 이용하여 측정하였으며, 그 결과를 하기 도 4에 나타내었다.

(수학식 1)

세포보호효능(%) = 100 X (1-(시료처리군의 OD₄₉₀-Sham OD₄₉₀/ UVB irradiated control OD₄₉₀- Sham OD₄₉₀))

도 4에서 보는 바와 같이 L-카르노신은 자외선에 의한 사람의 각질세포 손상에 따른 LDH의 증가를 10ppm의 농도에서는 억제하며 셀루릭서 성분은 아르간 오일, 카르노신, 디라이너를 단순히 혼합 처리한 군에서보다 더욱 효과적으로 LDH의 증가를 억제하는 것을 확인할 수 있었다. 그러므로, 셀루릭서는 자외선과 같은 외부 자극에 대해 피부 세포를 보호하는 효과가 있는 것이다.

[실험예 3] 자외선에 의한 MMP-1 유리 억제 효과

각질형성세포(keratinocyte)를 96well 형 세포배양 플레이트의 각 well에 1×10⁴개를 넣고 24시간 동안 부착시킨 후 다시 FBS가 없는 배지에서 24시간 더 배양하였다. 각 well을 인산 완충 용액(phosphate buffered saline, PBS)으로 2회 세척하고, 각 well에 100 마이크로리터의 인산완충염액(PBS)을 첨가한 상태에서 UVB 30 mJ/cm²를 조사하였다. 인산완충염액(PBS)을 제거한 후, FBS가 없는 새로운 배지에 시험 물질을 처리하였고 다시 6시간 경과한 후 배지를 수거하여 ELISA kit(amersharm pharmacia, cat. #; RPN 2610)을 이용하여 MMP-1 발현 분석(expression assay)을 수행하였다. 각각 측정된 MMP-1의 양은 총 단백질 양으로 보정하여 그 결과를 도 5의 그래프에 나타내었다.

피부세포는 자외선과 같은 외부의 자극에 의해 콜라겐 분해 효소인 MMP-1이 대량으로 발현된다는 사실이 보고된 바 있다 (Wilgus et al., 2000. Prostaglandins & other Lipid Mediators, Vol.62, pp367-384). 그러므로, 도 5에서 보는 바와 같이 옥수수 추출물(디라이너)은 자외선에 의해 유도되는 MMP-1 효소의 양을 감소시킨다는 것을 알 수 있으며 또한 셀루릭서는 아르간 오일, 카르노신, 디라이너를 단순히 혼합하여 처리한 군에서보다 더욱 효과적으로 MMP-1의 유리를 억제함을 알 수 있다. 그러므로, 셀루릭서는 자외선에 의한 콜라겐의 분해를 억제해 피부 노화를 지연시킬 수 있는 것을 확인하였다.

[실험예 4] 피부 투과율 실험

프란츠 셀을 사용한 성분의 피부 투과율 실험을 위해 화이트 기니피그(White Guinea pig)의 등부위를 제모한 후 피부를 절취하여 2 ×2 cm² 정도로 잘라 중앙의 1 ×1 cm²을 사용하였다. 중앙 부분에 시험물질을 피부의 각질층 면에 25 마이크로 리터로 적용 한 후 알루미늄 호일로 피부를 덮어 37℃ 배양기에 넣은 다음 일정 시간 경과 후에 증류수로 세척하고 솜으로 닦아냈다. 다시 Transpore®(3M 社)를 이용하여 처음 1회의 결과물은 버리고 10회 연속 테이프 스트리핑(tape stripping)하여 테이프 스트리핑한 것으부터 투과된 약물의 농도를 정량하였다. 그 결과를 도 6에 나타내었다.

도 6에서 보는 바와 같이 동일 성분을 셀루릭서에 포집했을 경우 자유(free) 상태 또는 리포좀(liposome) 상태에 비해 피부 투과율이 월등히 우수함을 알 수 있다.

[실험예 5] 동물수준에서의 피부 자극 정도 실험

셀루릭서의 피부 자극 정도를 비교하기 위해 토끼를 이용하여 피부 자극 유발 여부를 다음과 같은 방법으로 평가하였다. 물과 고형 사료를 자유롭게 섭취시키고 환경에 적응시킨 토끼(2~2.5㎏ 의 웅성 뉴질랜드 흰 토끼)를 시험에 사용하였다. 등 부위의 털을 깍은 후 약 1.5㎝×1.5㎝ 정도의 크기에 시료 및 대조물질을 도포하였다. 토끼 1마리당 도포할 수 있는 부위는 8~10부위로 하며 시험물질을 동물 투여 부위에 1일 2회, 6시간 간격으로 도포하고, 적용부위를 공기 중에 노출시켰다. 적용부위는 다음 도포 직전에 1일 2회 관찰하였으며, 홍반과 가피 형성, 부종 형성 등의 자극성 유무를 관찰하여, 그 정도를 하기 표 3에 나타낸 판정 기준에 따라 평가하였고, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다. 결과에 나타낸 자극 지수는 일반적으로 많이 이용되는 Draize의 Primary Irritation Index의 산출 방법에 따랐다(Draize, J.H., Appraisal of the safety of chemical in foods, drugs and cosmetics. The staff of the division of pharmacology, Food and Drug Education and Welfare, Pub. 1959). 셀루릭서가 다른 화장료에 비해 자극이 없음을 증명하기 위해 화장료에 많이 사용하는 항산화물질인 비타민C를 비교 물질로 사용하였다.

피부 자극의 정도	평점
1)홍반과 가피형성 홍반이 없음 아주 경도의 홍반(육안으로 겨우 식별할 정도) 명료한 홍반 중등도에서 강한 홍반 심홍색의 강한 홍반과 가피 형성	0 1 2 3 4
2)부종형성 부종 없음 매우 가벼운 부종(육안으로 겨우 식별할 정도) 명료한 부종(주위와 명료한 구분이 됨) 중등도의 부종(1㎜정도 부어 올랐을 경우) 강한 부종(1㎜ 이상 부어오르고 노출 부위 밖에까지 확장된 상태)	0 1 2 3 4
피부 일차 자극 지수(Primary irritation index, P.I.I.) =(홍반 평점과 부종 평점의 합의 평균치)/4

	피부 일차 자극 지수(0~4)
비타민C 20% 수용액	2.5
셀루릭서 20% 수용액	1..0
대조군(Vehicle)	0.6

상기 표 4의 결과에서 보는 바와 같이 셀루릭서를 함유한 화장료는 자외선에 의한 홍반 유발을 억제함을 알 수 있다. 즉 셀루릭서를 함유한 화장료는 자외선에 의한 피부 세포 손상을 억제함으로써 피부 기능의 항상성을 유지하는데 기여함을 알 수 있다.

[실험예 6] 자외선에 의한 피부 홍반 억제 효과

실험 시점에서 한달 이전에 비스테로이드성 항염증제 및 기타 스테로이드 제제를 복용한 경력이 없는 건강한 자원자를 대상으로 셀루릭서의 자외선(UV B)에 의한 홍반 유발 억제 효과를 Kaidbey와 Kurban의 방법에 따라 평가하였다 (Kaidbey & Kurban, 1976, J. Invest. Dermatol., Vol 66 pp153-156). 건강한 12명의 남자를 대상으로 피검자의 윗팔뚝 부위에 직경 1.5㎝의 구멍 6개가 뚫린 불투명 테이프를 부착한 뒤, 각 피검자의 최소 홍반량(Minimal Erythema Dose)의 2배 정도의 자외선(UV B)을 SE lamp(파장 290∼320㎚, Toshiba)로 조사하여 홍반을 유도하였다. 각 실험 제형들은 상기 표2의 비교예 및 실시예의 처방에 따라 제조하여 자외선을 조사하기 1시간 전과 자외선 조사 직후 도포하였다. 그 결과는 표 5에 나타내었다. 표 5의 결과에 나타난 홍반 지수는 상기 표 3에 나타낸 판정 기준에 따라 자외선 조사 후 6시간 및 24시간에 평가하였다.

셀루릭서의 자외선에 의한 피부 홍반 억제 효과
실험군	홍반지수 (2MED)
	6시간	24시간
대조군	1.6	2.3
실시예	1.0	1.7
비교예	1.5	2.5

상기 표 5의 결과에서 보는 바와 같이 셀루릭서를 함유한 화장료는 자외선에 의한 홍반 유발을 억제함을 알 수 있다. 즉 셀루릭서를 함유한 화장료는 자외선에 의한 피부 세포 손상을 억제함으로써 피부 기능의 항상성을 유지하는데 기여함을 알 수 있다.

하기에 상기 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 유연화장수

조성	함량(중량%)
베타인 낫토검 셀룰로오스검 에탄올 폴리옥시에칠렌경화피마자유 초산토코페롤 방부제 색소 실시예 1의 포집체 정제수	3.0 3.0 0.08 5.0 0.5 0.2 5.0 미량 1.0 100 까지

제제예 2. 영양화장수

조성	함량(중량%)
세칠에칠헥사노에이트 세토스테아릴알콜 친유형모노스테아린산 스테아레이트 스쿠알란 폴리솔베이트 60 솔비탄세스퀴올리에이트 글리세린 트리에탄올아민 카르복시비닐폴리머 방부제 색소 향 실시예 1의 포집체 정제수	5.0 1.0 0.8 2.0 1.5 0.5 8.0 0.2 0.2 미량 미량 미량 2.0 100까지

제제예 3. 영양크림

조성	함량(중량%)
밀납 글리세릴스테아레이트 세토스테아레이트 폴리솔베이트 60 솔비탄세스퀴올리에이트 세칠에첼헥사노에이트 스쿠알란 유동파라핀 글리세린 프로필렌글리콜 식물 추출물 방부제 색소 향 실시예 1의 포집체 정제수	1.0 2.0 2.5 1.5 0.5 5.0 5.0 8.0 8.0 4.0 5.0 미량 미량 미량 5.0 100까지

제제예 4. 에센스

조성	함량(중량%)
글리세린 프로필렌글리콜 셀룰로오스검 낫토검 히아루론산추출물 아미노프로판술포닉액시드 카르복시비닐폴리머 에탄올 폴리옥시에칠렌경화피마자유 트리에탄올아민 방부제 향 색소 실시예 1의 포집체 정제수	15.0 5.0 0.05 5.0 5.0 2.0 0.5 5.0 0.5 0.5 미량 미량 미량 8.0 100까지

제제예 5. 로션

조성	함량(중량%)
글리세릴스테아레이트 폴리솔베이트 60 솔비탄세스퀴올리에이트 세칠에칠헥사노에이트 스쿠알란 라놀린 글리세린 카르복시비닐폴리머 가수분해콜라겐 트리에탄올아민 방부제 향료 색소 실시예 1의 포집체 정제수	1.5 1.5 0.5 3.0 3.0 2.0 8.0 0.5 1.0 0.5 미량 미량 미량 2.0 100까지

실험예 6. 연고

조성	함량(중량%)
카프린/카프릴 트리글리세리드 액상 파라핀 솔비탄세스퀴올리에이트 옥틸도데세스-25 세칠에칠헥사노에이트 스쿠알란 살리실산 글리세린 솔비톨 실시예 1의 포집체 정제수	10.0 10.0 6.0 9.0 10.0 1.0 1.0 15.0 10.0 10.0 100까지

이상에서 설명한 바와 같이 본 발명에 따른 조성물은 사람에게 사용했을 때 매우 안전하면서도 자외선과 같은 외부 자극에 의한 피부 세포 손상을 감소시키는 효과가 우수하다. 그러므로, 본 발명에 따른 조성물은 반응성 활성 산화물(ROS)에 의한 피부 세포 손상과 관련된 피부 기능의 퇴행을 늦추고, 반응성 활성 산화물(ROS)에 의한 염증을 방지하는데 유효한 화장료 조성물로 사용될 수 있다. 또한, 비타민 C, 비타민 E, 또는 녹차 추출물들처럼 기존에 고용량으로 사용했을 때 피부 부작용을 일으킬 수 있는 항산화 화장품 원료들의 단점을 극복할 수 있을 분 아니라 장기간 안정한 상태로 효능이 지속될 수 있고 피부 투과율도 우수하다는 점에서 본 발명에 의한 조성물은 피부 세포의 자체 자생력을 높이고 유해물질을 제거함으로 항노화의 용도로 유용하게 사용될 수 있다.

Claims (11)

1. 아르간 오일, 카르노신 및 옥수수 추출물로 구성된 군으로부터 선택된 2종 이상의 물질을 유효성분으로서 함유하는 항노화용 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 아르간 오일을 함유함으로써 반응성 활성 산화물(reactive oxygen species, ROS)의 발생을 억제하고 ROS를 소거함을 통해 피부 노화를 예방하는 것을 특징으로 하는 항노화용 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 카르노신을 함유함으로써 LDH의 분비를 억제함을 통해 피부 노화를 예방하는 것을 특징으로 하는 항노화용 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 옥수수 추출물을 함유함으로써 MMP-1의 분비를 억제함을 통해 피부 노화를 예방하는 것을 특징으로 하는 항노화용 조성물.
5. 제1항에 있어서, 상기 아르간 오일, 카르노신 및 옥수수 추출물로 구성된 군으로부터 선택된 2종 이상의 물질이 사이클로덱스트린에 포집된 포집체의 상태로 존재하는 것을 특징으로 하는 항노화용 조성물.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 카르노신은 L-카르노신인 것을 특징으로 하는 항노화용 조성물.
7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 옥수수 추출물은 물과 1,3-부틸렌글리콜을 추출용매로 사용하여 추출된 것임을 특징으로 하는 항노화용 조성물.
8. 제5항에 있어서, 상기 사이클로덱스트린은 아실레이티드된 사이클로덱스트린인 것을 특징으로 하는 항노화용 조성물.
9. 제8항에 있어서, 상기 사이클로덱스트린은 친지질성화된 β-사이클로덱스트린의 자발적 회합체인 것을 특징으로 하는 항노화용 조성물.
10. 제9항에 있어서, 상기 포집체는 포집체 전체 중량에 대하여 아르간 오일 0.01 내지 10중량%, L-카르노신 0.01 내지 10중량% 및 옥수수 추출물 0.01 내지 10중량%을 함유하는 것을 특징으로 하는 항노화용 조성물.
11. 제10항에 있어서, 상기 조성물은 상기 포집체를 전체 조성물 중량에 대하여 0.01 내지 10중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 항노화용 조성물.

Images