KR20040062591A

KR20040062591A - 인돌리논 화합물에 의한 급성 골수성 백혈병의 치료방법

Info

Publication number: KR20040062591A
Application number: KR10-2004-7006222A
Authority: KR
Inventors: 앤-마리 오파렐; 줄리 체링톤
Original assignee: 수젠, 인크.
Priority date: 2001-10-26
Filing date: 2002-10-28
Publication date: 2004-07-07
Also published as: PL370553A1; WO2003035009A3; TWI259081B; TNSN04065A1; EP1446117A4; AU2002360314B2; WO2003035009A2; US20030130280A1; BR0213960A; EP1446117A2; HUP0500422A2; NZ532405A; ZA200403091B; CZ2004619A3; CN101052394A; IS7222A; MXPA04003853A; JP2005511540A; CA2464790A1; HUP0500422A3

Abstract

본 발명은 단백질 키나제의 활성을 조절하여 암과 같은 단백질 키나제와 연관된 세포성 질환의 예방 및 치료에 유용할 것으로 기대되는 피롤 치환된 2-인돌리논 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다.

Description

인돌리논 화합물에 의한 급성 골수성 백혈병의 치료방법{TREATMENT OF ACUTE MYELOID LEUKEMIA WITH INDOLINONE COMPOUNDS}

급성 비림프구 백혈병으로도 지칭되는 급성 골수성 백혈병은, 너무 많은 미성숙 백혈구가 혈액 및 골수내에서 발견되는 암의 한 형태이다. 블라스트(blast)라고도 지칭되는 이들 미성숙 세포는 성숙한 감염-퇴치 세포로 발전되는데 실패하였다.

AML의 치료에서의 진보로 인해 실질적으로 완전 완화율이 개선되었다. 치료는 완전 완화율을 달성하기 위해 적극적인데, 이는 부분적인 완화가 실질적인 생존 이점을 제공하지 못하기 때문이다. AML을 앓는 성인의 약 60 내지 70%에서는 적절한 유도 요법에 따라 완전 완화 상태가 달성되는 것으로 기대될 수 있다. AML을 앓는 성인의 15% 초과(완전 완화를 달성하는 환자의 약 25%)가 3년 이상 생존할 것으로 기대될 수 있으며, 치료될 수도 있다. 성인 AML의 완화율은 연령과 반비례하지만, 60세 미만의 환자에서는 65% 초과의 완화율이 기대된다. 데이터에서는, 일단 달성되면, 완화 기간이 더욱 고령의 환자에게서 더욱 짧아질 수 있음을 제시한다. 유도 기간 동안의 증가된 사망률과 치사율은 연령과 직접적인 관련이 있는 것으로 보여진다. 다른 부정적인 예후 요인으로는 백혈병과의 중추신경계 연루, 진단에서의 전신계 감염, 증가된 백혈구 갯수(㎣당 ＞100,000), 치료-유도된 AML, 및 골수형성이상 증후군(myelodysplastic syndrome)의 히스토리(history)가 포함된다. 조혈 줄기세포 이식을 받지 않은 재발된 환자에게서의 5년 무병 생존률은 5% 미만이다.

cKIT, PDGFRβ 및 FLT-3을 비롯한 수용체 티로신 키나제("RTK")의 돌연변이가 인간 백혈병에서 발견되었다. FLT-3의 돌연변이로는 임의의 FLT-3 유전자 서열-함유 점돌연변이, 결손, 삽입, 내부 일렬 복제, 다형성이 포함된다. FLT-3에서의 공지된 돌연변이의 예로는, 아부-두하이어(Abu-Duhier) 등의 문헌 "Br JHaematol 2001 Jun; 113(4):983-8", "Identification of novel FLT-3 Asp835 mutations in adult acute myeloid leukaemia", "Abu-Duhier FM, Goodeve AC, Wilson GA, Care RS, Peake IR, Reilly JT"에 보고된 바와 같이, 환자의 약 7%에서 확인된 인간 FLT-3에서 아미노산 잔기 835에서의 점돌연변이가 있다. 이 돌연변이는 FLT-3의 활성화 루프내에 존재하며, c-kit과 같은 다른 티로신 키나제 수용체에 대한 상동성을 기초로 하는 구성 활성화를 나타내기 쉽다.

FLT-3 유전자의 곁막(juxtamembrane) 도메인-암호화 서열의 내부 일렬 복제(ITD)는 최고 빈도의 돌연변이중 하나이다(AML 환자의 25 내지 30%). ITD는 곁막 도메인내에서 발견되는 돌연변이이고 크기의 범위가 반복적인 내부 일렬 복제이지만, 복제된 서열은 항상 틀안에 존재하는 것으로 보인다. FLT-3 돌연변이는 급성 골수성 백혈병(AML)을 앓는 몇몇 환자에게서 발견되고 골수형성이상 증후군 경우의 3%에게서 발견되는 반면, 만성 골수성 백혈병 및 림프구 암에서는 더욱 드문 것으로 보인다. FLT-3 유전자 돌연변이의 존재는 많은 말초 백혈구 세포 갯수와 관련된다. FLT-3 유전자의 ITD는 종종 첫 진단에서 MDS의 진행 기간 동안 또는 ITD를 갖지 않았던 AML의 재발에서 출현하였다. 이는 FLT-3 돌연변이가 백혈병 진행을 촉진시킴을 암시한다. 자오(Zhao) 등의 문헌 "Leukemia, vol. 14, pages 374-378(2000)"을 참조한다.

FLT-3(fms-유사 티로신 키나제 3)은 제 III의 수용체 티로신 키나제 군의 구성원이다. 당해 분야의 숙련자는 FLT-3이 또한 과학 문헌에서 "flk2"로 지칭되고 있음을 인지할 것이다. 본원에서, "FLT-3"은 예컨대 어세션(accession) 번호gi｜4758396｜ref｜NP_004110.1｜fms-관련 티로신 키나제 3[호모 사피엔스], 또는 gi｜544320｜sp｜P36888｜FLT-3_HUMAN FL CYTOKINE RECEPTOR PRECURSOR(TYROSINE-PROTEIN KINASE RECEPTOR FLT-3)(STEM CELL TYROSINE KINASE 1)(STK-1)(CD135 ANTIGEN), 또는 gi｜409573｜gb｜AAA18947.1｜(U02687) 세린｜트레오닌 단백질 키나제[호모 사피엔스]에 개시된 서열을 갖는 폴리펩타이드를 지칭한다. 최초 2개의 서열에 상응하는 mRNA 어세션은 gi｜4758395｜ref｜NM_004119.1｜호모 사피엔스 fms-관련 티로신 키나제 3(FLT-3), FLT-3 수용체 티로신 키나제에 대한 mRNA gi｜406322｜emb｜Z26652.1｜HSFLT-3RTK H.사피엔스 FLT-3 mRNA이다. FLT-3의 검토를 위해, 문헌 "Gilliland, Current Opin. Hematol. 9(4)276-281 July 2002"를 참고한다.

자오 등의 문헌 "Leukemia(2000)"에서는 티로신 키나제 억제제를 사용하는 돌연변이 FLT-3 형질변형된 뮤린 백혈병의 생체내 치료방법을 추가로 개시하고 있다. 치료 프로토콜의 개발에 있어서, 자오는 형질변형된 32D 세포(IL-3 의존성 뮤린 세포주)의 생체외 성장 억제를 위한 티로신 키나제 억제제의 사용을 연구하였다.

수용체 티로신 키나제 FLT-3의 내부 일렬 복제(ITD) 돌연변이는 급성 골수성 백혈병을 앓는 환자의 20 내지 30%에서 발견되어 왔다[예컨대, 레비스(Levis) 등의 문헌 "Blood, vol. 98, pages 885-887(2001)"을 참고한다]. 당해 분야의 숙련자는 AML 환자로부터 게놈 DNA의 PCR과 겔 전기영동 시험을 사용하면 FLT-3-ITD 양성 환자를 쉽게 진단한다는 것을 인지할 것이다. 아부-두하이어 등의 문헌 "British J.of Heamotology, Vol. 11, pages 190-195(2000)"을 참고한다. FLT-3 유전자는 조혈 줄기세포의 증식과 분화를 조절하는 티로신 키나제 수용체를 암호화시킨다. 레비스는 이들 돌연변이가 수용체를 구조적으로 활성화시키며 화학요법에 대한 불량한 반응과 관련되어 있는 것으로 보여진다고 개시하고 있다. 이 구조적 활성화가 백혈병유발적인(leukemogenic) 증거가 제시되며, 이 수용체가 특이적 요법을 위한 잠재적 목표가 된다.

ITD 돌연변이 FLT-3을 갖는 환자는 종래 치료 후 비-ITD 돌연변이 환자에 비해 불량한 예후, 높은 재발률 및 감소된 전체 생존률를 갖는 것으로 알려져 있다. AML에 대한 현재의 요법은 불량한 환자 반응률 및 불량한 독성 프로파일을 갖는다. 요법들은 일반적으로 암을 유도하는 메커니즘 또는 병에 걸린 세포에 대해 비특이적이며 독점적으로 표적화되지 않는다. 세포 생존과 증식 신호를 중재하는 FLT-3의 억제는 백혈구 세포를 직접 표적화하고, 백혈구 세포 집단을 제거하는 신호화를 억제한다.

ITD-AML을 앓았던 환자의 개선된 예후의 필요성에 기초하여, 본 발명의 발명자들은 유효량의 하기 화학식 I 또는 II의 티로신 키나제 억제제를 투여함으써 급성 골수성 백혈병을 치료하는 방법을 개발하였다.

발명의 요약

본 발명의 한 실시양태는 유효량의 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염을 급성 골수성 백혈병(AML)의 치료가 필요한 환자에게 투여함으써 급성 골수성 백혈병(AML)을 치료하는 방법에 관한 것이다.

상기 식에서,

R은 독립적으로 H, OH, 알킬, 아릴, 사이클로알킬, 헤테로아릴, 알콕시, 헤테로사이클릭 및 아미노이고,

R₁은 각각 독립적으로 알킬, 할로, 아릴, 알콕시, 할로알킬, 할로알콕시, 사이클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 하이드록시, -C(O)R₈, -NR₉R₁₀, -NR₉C(O)-R₁₂및 -C(O)NR₉R₁₀으로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₂는 각각 독립적으로 알킬, 아릴, 헤테로아릴, -C(O)R₈및 -SO₂R"(여기서, R"는 알킬, 아릴, 헤테로아릴, NR₉R₁₀또는 알콕시이다)로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₅는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 아릴, 할로알킬, 사이클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 하이드록시, -C(O)-R⁸및 (CHR)_rR₁₁로 이루어진 군으로부터 선택되고,

X는 O 또는 S이고,

j는 0 내지 1이고,

p는 0 내지 3이고,

q는 0 내지 2이고,

r는 0 내지 3이고,

R₈는 -OH, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알콕시, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₉및 R₁₀은 독립적으로 H, 알킬, 아릴, 아미노알킬, 헤테로아릴, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 R₉및 R₁₀은 N과 함께 고리를 형성할 수 있으며, 여기서 고리 원자들은 C, N, O 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₁₁은 -OH, 아미노, 일치환된 아미노, 이치환된 아미노, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알콕시, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₁₂는 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알콕시, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되고,

Z는 -OH; -O알킬; -NR₃R₄(여기서, R₃및 R₄는 독립적으로 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 R₃및 R₄는 N과 결합하여 고리를 형성할 수 있으며, 여기서 고리 원자는 CH₂, N, O및 S로 이루어진 군으로부터 선택된다); 또는(여기서, Y는 독립적으로 CH₂, O, N 또는 S이고, Q는 C 또는 N이고, n은 독립적으로 0 내지 4이고, m은 0 내지 3이다)이다.

본 발명의 한 실시양태에서, 치료가 요구되는 환자에게 투여되는 화학식 I 또는 II에서, R₁은 할로(예컨대, F 및 Cl)이고, p는 1이다.

다른 실시양태에서, 화학식 I 또는 II의 Z는 -NR₃R₄(여기서, R₃및 R₄는 모르폴린 고리를 형성한다)이다.

다른 실시양태에서, 화학식 I 또는 II의 Z는(여기서, Y는 각각 CH₂이고, n은 각각 2이고, m은 0이고, R₃및 R₄는 모르폴린 고리를 형성한다)이다.

앞서 인용된 임의의 실시양태에서, R₂는 메틸이고, q는 2이며, 여기서 메틸들은 화학식 I 또는 II의 3- 및 5-위치에서 결합된다.

바람직한 실시양태에서, 환자에게 투여되는 화합물은 하기 화학식 II의 화합물이다.

상기 식에서, 변수들은 앞서 정의된 바와 같다.

본 발명의 특정 실시양태에서, 투여된 화합물은 하기 식들의 화합물로 이루어진 군으로부터 선택된다.

상기 식에서, X는 F, Cl, I 또는 Br, 바람직하게는 F이다.

본 발명의 한 실시양태에서, 환자 집단은 FLT-3-ITD 양성, FLT-3 야생형 양성 또는 기타 FLT-3 돌연변이인 인간 환자를 포함한다.

본 발명의 특정 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 하기 식들의 화합물로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 다른 실시양태는, 억제량의 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염을 치료가 필요한 환자에게 투여함을 포함하는, FLT-3의 인산화를 억제하는 방법에 관한 것이다.

화학식 I

상기 식에서,

X는 O 또는 S이고,

j는 0 내지 1이고,

p는 0 내지 3이고,

q는 0 내지 2이고,

r는 0 내지 3이고,

본 발명의 한 실시양태에서, FLT-3은 돌연변이 FLT-3 또는 야생형 FLT-3이다. 특정의 FLT-3 돌연변이는 FLT-3-ITD이다.

본 출원은 미국 가특허출원 제 60/330,623 호의 우선권을 주장하며, 그 전체를 본원에 참고로 인용한다.

본 발명은 인돌리논 화합물을 투여함으로써 급성 골수성 백혈병을 치료하는 방법에 관한 것이다. 급성 골수성 백혈병(AML)은 혈액 및 골수내에서 종양 세포가 발생하는 질환이다. 치료되지 않은 AML은 평균 생존 기간이 3개월인 치명적인 질환이다. FLT-3-ITD(내부 일렬 복제, internal tandem duplication) 양성인 AML을 앓는 환자는 전형적으로 전통적인 요법에 불량하게 반응하는 것으로 나타난다. 본 발명은 AML 환자, 바람직하게는 화학식 I 또는 II의 인돌리논 화합물을 투여함으로써 FLT-3-ITD(이는 FLT-3-ITD에 국한되지 않음)에 양성인 환자를 치료하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 FLT-3의 인산화를 억제하는 방법에 관한 것이다.

도 1은 카스파제 3-착색된 세포주의 FACS 프로파일이다.

도 2는, FLT-3-ITD 돌연변이 세포가 화합물(1)-유도된 세포사멸에 대해 야생형보다 민감한 것으로 나타나는, PARP 분할에 대한 웨스턴 블로팅(Western blot)을 도시하고 있다.

도 3은, 화합물(1)이 야생형과 돌연변이-ITD FLT-3 모두를 억제하는 것으로 나타나는, FLT-3 면역침전에 따른 포스포티로신의 웨스턴 블로팅을 도시하고 있다.

도 4a는, 화합물(1)이 이종이식 모델에서의 FLT-3-ITD 인산화를 억제하는 것으로 나타나는, FLT-3 면역침전에 따른 포스포티로신의 웨스턴 블로팅을 도시하고 있다.

도 4b는 악물 치료 후 시간에 대한 종양 크기를 나타나는 그래프를 도시하고 있다.

도 5는 화합물(1)의 투여량을 변화시킨 후의 생존률(%)을 도시한다.

화학식 I 및 II의 화합물은 AML을 앓는 환자를 치료하는데 유용하다. 특히, 이들은 FLT-3-ITD 양성인 AML을 앓는 환자를 치료하는데 유용하다. 또한, 병리학적으로 FLT-3-ITD 또는 FLT-3이 암과 연관되는 것으로 나타나는, 육종(sarcoma), 흑색종(melanoma) 및 고형 종양으로 진단받은 환자는, 화학식 I 또는 II의 화합물을 투여함으로써 치료될 수 있다.

본 발명의 한 실시양태는, 유효량의 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염을 급성 골수성 백혈병(AML)의 치료가 필요한 환자에게 투여함을 포함하는, 급성 골수성 백혈병(AML)을 치료하는 방법에 관한 것이다.

화학식 I

상기 식에서,

X는 O 또는 S이고,

j는 0 내지 1이고,

p는 0 내지 3이고,

q는 0 내지 2이고,

r는 0 내지 3이고,

Z는 -OH; -O알킬; -NR₃R₄(여기서, R₃및 R₄는 독립적으로 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 R₃및 R₄는 N과 결합하여 고리를 형성할 수 있으며, 여기서 고리 원자는 CH₂, N, O 및 S로 이루어진 군으로부터 선택된다); 또는(여기서, Y는 독립적으로 CH₂, O, N 또는 S이고, Q는 C 또는 N이고, n은 독립적으로 0 내지 4이고, m은 0 내지 3이다)이다.

본 발명의 다른 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 AML의 치료가 필요한 환자에게 투여하되, 단 상기 화합물은 3-[2,4-디메틸-5-(2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-일]-프로피온산이 아니다.

본 발명의 다른 실시양태에서, 치료방법은 하기 화합물들로 이루어진 군으로부터 선택된 유효량의 화합물을 AML 환자에게 투여함을 포함한다.

5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(2-디에틸아미노-에틸)-아미드(화합물(1)),

5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(2-피롤리딘-1-일-에틸)-아미드(화합물(2)),

5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(2-모르폴린-4-일-에틸)-아미드(화합물(3)),

(S)-5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(2-하이드록시-3-모르폴린-4-일-프로필)-아미드(화합물(4)),

(R)-5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(2-하이드록시-3-모르폴린-4-일-프로필)-아미드(화합물(5)),

5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(2-하이드록시-3-모르폴린-4-일-프로필)-아미드(화합물(6)),

5-(5-클로로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(2-하이드록시-3-모르폴린-4-일-프로필)-아미드(화합물(7)),

5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(2-에틸아미노-에틸)-아미드(화합물(8)),

3-[3,5-디메틸-4-(4-모르폴린-4-일-피페리딘-1-카보닐)-1H-피롤-2-메틸렌]-5-플루오로-1,3-디하이드로-인돌-2-온(화합물(9)), 및

3-[5-메틸-2-(2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-일]-프로피온산(화합물(10)).

본 발명의 방법에 유용한 화학식 I 및 II의 화합물을 분명하게 개시하기 위해, 다음의 정의가 제공된다.

"알킬"은 탄소수 1 내지 20의 직쇄 또는 분지쇄 기를 포함하는 포화 지방족 탄화수소 라디칼을 지칭한다(어떠한 수치 범위, 예컨대 "1-20"과 같은 수치 범위가 사용되는 경우, 이 경우의 기, 예컨대 알킬 기인 경우, 1개의 탄소 원자, 2개의 탄소원자, 3개의 탄소원자 등 20개까지의 탄소 원자를 함유할 수 있음을 의미한다). 1 내지 4개의 탄소원자를 함유하는 알킬 기는 저급 알킬 기로서 지칭된다. 상기 저급 알킬 기가 치환기가 없을 경우, 이들은 비치환된 저급 알킬 기로서 지칭된다. 더욱 바람직하게, 알킬 기는 탄소수 1 내지 10의 중간 크기의 알킬, 예컨대 메틸, 에틸, 프로필, 2-프로필, n-부틸, 이소부틸, tert-부틸, 펜틸 등이다. 가장 바람직하게는, 이는 탄소수 1 내지 4의 저급 알킬, 예컨대 메틸, 에틸, 프로필, 2-프로필, n-부틸, 이소-부틸 또는 tert-부틸 등이다. 알킬은 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환되는 경우, 치환기(들)는 할로; 하이드록시; 비치환된 저급 알콕시; 아릴(이는 선택적으로 각각이 독립적으로 다른 할로, 하이드록시, 비치환된 저급 알킬 또는 비치환된 저급 알콕시 기인 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 기로 치환됨); 아릴옥시(이는 선택적으로 각각이 독립적으로 다른 할로, 하이드록시, 비치환된 저급 알킬 또는 비치환된 저급 알콕시 기인 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 기로 치환됨); 고리내에 1 내지 3개의 질소원자를 갖는 6원 헤테로아릴(여기서, 고리내의 탄소는 선택적으로 각각이 독립적으로 다른 할로, 하이드록시, 비치환된 저급 알킬 또는 비치환된 저급 알콕시 기인 하나 이상, 바람직하게는1, 2 또는 3개의 기로 치환됨); 질소, 산소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로원자 1 내지 3개를 갖는 5원 헤테로아릴(여기서, 상기 군내의 탄소원자 및 질소원자는 선택적으로 각각이 독립적으로 다른 할로, 하이드록시, 비치환된 저급 알킬 또는 비치환된 저급 알콕시 기인 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 기로 치환됨); 질소, 산소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로원자 1 내지 3개를 갖는 5원 또는 6원 헤테로사이클릭 기(여기서, 상기 군내의 탄소원자 및 질소원자(존재한다면)는 선택적으로 각각이 독립적으로 다른 할로, 하이드록시, 비치환된 저급 알킬 또는 비치환된 저급 알콕시 기인 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 기로 치환됨); 머캅토; (비치환된 저급 알킬)티오; 아릴티오(이는 선택적으로 각각이 독립적으로 다른 할로, 하이드록시, 비치환된 저급 알킬 또는 비치환된 저급 알콕시 기인 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 기로 치환됨); 시아노, 아실, 티오아실, O-카바밀, N-카바밀, O-티오카바밀, N-티오카바밀, C-아미도, N-아미도, 니트로, N-설폰아미도, S-설폰아미도, RS(O)-, RS(O)₂-, -C(O)OR, RC(O)O- 및 -NR₁₃R₁₄(여기서, R₁₃및 R₁₄는 독립적으로 수소, 비치환된 저금 알킬, 트리할로메틸, 사이클로알킬, 헤테로사이클릭 및 아릴(이는 선택적으로 각각이 독립적으로 다른 할로, 하이드록시, 비치환된 저급 알킬 또는 비치환된 저급 알콕시 기인 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 기로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택됨)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 바람직하게는 하나 이상, 더욱 바람직하게는 1 내지 3개, 더욱더 바람직하게는 1 또는 2개의 치환기(들)이다.

바람직하게는, 알킬 기는 하이드록시; 질소, 산소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로원자 1 내지 3개를 갖는 5원 또는 6원 헤테로사이클릭 기(여기서, 상기 군내의 탄소원자 및 질소원자(존재한다면)는 선택적으로 각각이 독립적으로 다른 할로, 하이드록시, 비치환된 저급 알킬 또는 비치환된 저급 알콕시 기인 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 기로 치환됨); 질소, 산소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로원자 1 내지 3개를 갖는 5원 헤테로아릴(여기서, 상기 군내의 탄소원자 및 질소원자는 선택적으로 각각이 독립적으로 다른 할로, 하이드록시, 비치환된 저급 알킬 또는 비치환된 저급 알콕시 기인 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 기로 치환됨); 고리내에 1 내지 3개의 질소원자를 갖는 6원 헤테로아릴(여기서, 고리내의 탄소는 선택적으로 각각이 독립적으로 다른 할로, 하이드록시, 비치환된 저급 알킬 또는 비치환된 저급 알콕시 기인 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 기로 치환됨); 또는 -NR₁₃R₁₄(여기서, R₁₃및 R₁₄는 독립적으로 수소 및 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택됨)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 치환된다. 더욱더 바람직하게는, 알킬 기는 각각이 독립적으로 다른 하이드록시, 디메틸아미노, 에틸아미노, 디에틸아미노, 디프로필아미노, 피롤리디노, 피페리디노, 모르폴리노, 피페라지노, 4-저급 알킬피페라지노, 페닐, 이미다졸릴, 피리디닐, 피리다지닐, 피리미디닐, 옥사졸릴, 트리아지닐 등인 1 또는 2개의 치환기로 치환된다.

"사이클로알킬"은 3 내지 8원의 모든-탄소 모노사이클릭 고리, 모든-탄소 5원/6원 또는 6원/6원의 융합된 비사이클릭 고리 또는 멀티사이클릭 융합된 고리("융합된" 고리 시스템은 시스템의 각각의 고리가 시스템내의 서로 다른 고리와 인접한 쌍의 탄소원자를 공유함을 의미한다)를 지칭하며, 여기서 고리중 하나 이상은 하나 이상의 이중 결합을 함유할 수 있지만, 어떤 고리도 완전히 공액된 파이-전자 시스템을 갖지는 않는다.

사이클로알킬 기의 비제한적인 예로는 사이클로프로판, 사이클로부탄, 사이클로펜탄, 사이클로펜텐, 사이클로헥산, 사이클로헥사디엔, 아다만탄, 사이클로헵탄, 사이클로헵타트리엔 등이 있다. 사이클로알킬 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환되는 경우, 치환기(들)는 비치환된 저급 알킬; 트리할로알킬; 할로; 하이드록시; 비치환된 저급 알콕시; 아릴(이는 선택적으로 각각이 독립적으로 다른 할로, 하이드록시, 비치환된 저급 알킬 또는 비치환된 저급 알콕시 기인 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 기로 치환됨); 아릴옥시(이는 선택적으로 각각이 독립적으로 다른 할로, 하이드록시, 비치환된 저급 알킬 또는 비치환된 저급 알콕시 기인 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 기로 치환됨); 고리내에 1 내지 3개의 질소원자를 갖는 6원 헤테로아릴(여기서, 고리내의 탄소는 선택적으로 각각이 독립적으로 다른 할로, 하이드록시, 비치환된 저급 알킬 또는 비치환된 저급 알콕시 기인 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 기로 치환됨); 질소, 산소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로원자 1 내지 3개를 갖는 5원 헤테로아릴(여기서, 상기 군내의 탄소원자 및 질소원자는 선택적으로 각각이 독립적으로 다른 할로, 하이드록시, 비치환된 저급 알킬 또는 비치환된 저급 알콕시 기인 하나이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 기로 치환됨); 질소, 산소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로원자 1 내지 3개를 갖는 5원 또는 6원 헤테로사이클릭 기(여기서, 상기 군내의 탄소원자 및 질소원자(존재한다면)는 선택적으로 각각이 독립적으로 다른 할로, 하이드록시, 비치환된 저급 알킬 또는 비치환된 저급 알콕시 기인 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 기로 치환됨); 머캅토; (비치환된 저급 알킬)티오; 아릴티오(이는 선택적으로 각각이 독립적으로 다른 할로, 하이드록시, 비치환된 저급 알킬 또는 비치환된 저급 알콕시 기인 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 기로 치환됨); 시아노, 아실, 티오아실, O-카바밀, N-카바밀, O-티오카바밀, N-티오카바밀, C-아미도, N-아미도, 니트로, N-설폰아미도, S-설폰아미도, RS(O)-, RS(O)₂-, -C(O)OR, RC(O)O- 및 -NR₁₃R₁₄(여기서, R₁₃및 R₁₄는 상기 정의된 바와 같음)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 바람직하게는 하나 이상, 더욱 바람직하게는 1 내지 3개, 더욱더 바람직하게는 1 또는 2개의 치환기(들)이다.

"알케닐"은 2개 이상의 탄소원자와 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합으로 구성된, 상기 정의된 바와 같은 알킬 기를 지칭한다. 대표적인 예로는 에테닐, 1-프로페닐, 2-프로페닐, 1-, 2-, 또는 3-부테닐 등이 포함되지만 이에 국한되지 않는다.

"알키닐"은 2개 이상의 탄소원자 및 하나 이상의 탄소-탄소 삼중 결합으로 구성된, 상기 정의된 바와 같은 알킬 기를 지칭한다. 대표적인 예로는 에티닐, 1-프로피닐, 2-프로피닐, 1-, 2- 또는 3-부티닐 등이 포함되지만 이에 국한되지 않는다.

"아릴"은 완전히 공액된 파이-전자 시스템을 갖는 1 내지 12개의 탄소 원자를 갖는, 모든-탄소 모노사이클릭 또는 융합-고리 폴리사이클릭 기(즉, 고리가 인접한 쌍의 탄소 원자를 공유한다)를 지칭한다. 아릴 기의 비제한적인 예로는 페닐, 나프탈레닐 및 안트라세닐이 있다. 아릴 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환되는 경우, 치환기(들)는 비치환된 저급 알킬, 트리할로알킬, 할로, 하이드록시, 비치환된 저급 알콕시, 머캅토, (비치환된 저급 알킬)티오, 시아노, 아실, 티오아실, O-카바밀, N-카바밀, O-티오카바밀, N-티오카바밀, C-아미도, N-아미도, 니트로, N-설폰아미도, S-설폰아미도, RS(O)-, RS(O)₂-, -C(O)OR, RC(O)O- 및 -NR₁₃R₁₄(여기서, R₁₃및 R₁₄는 상기 정의된 바와 같음)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 바람직하게는 하나 이상, 더욱 바람직하게는 1, 2 또는 3개, 더욱더 바람직하게는 1 또는 2개이다. 바람직하게는 아릴 기는 할로, 비치환된 저급 알킬, 트리할로알킬, 하이드록시, 머캅토, 시아노, N-아미도, 모노 또는 디알킬아미노, 카복시 또는 N-설폰아미도로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 치환기로 선택적으로 치환된다.

"헤테로아릴"은, N, O 또는 S로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 고리 헤테로원자를 갖고 나머지 고리 원자가 C이고 또한 완전히 공액된 파이-전자 시스템을 갖는, 5 내지 12개의 고리 원자의 모노사이클릭 또는 융합 고리(즉, 인접한 원자 쌍을 공유하는 고리) 기를 지칭한다. 비치환된 헤테로아릴 기의 비제한적인 예로는 피롤, 푸란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 피라졸, 피리딘, 피리미딘, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 푸린 및 카바졸이 있다. 헤테로아릴 기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환되는 경우, 치환기(들)는 비치환된 저급 알킬, 트리할로알킬, 할로, 하이드록시, 비치환된 저급 알콕시, 머캅토, (비치환된 저급 알킬)티오, 시아노, 아실, 티오아실, O-카바밀, N-카바밀, O-티오카바밀, N-티오카바밀, C-아미도, N-아미도, 니트로, N-설폰아미도, S-설폰아미도, RS(O)-, RS(O)₂-, -C(O)OR, RC(O)O- 및 -NR₁₃R₁₄(여기서, R₁₃및 R₁₄는 상기 정의된 바와 같음)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 바람직하게는 하나 이상, 더욱 바람직하게는 1, 2 또는 3개, 더욱더 바람직하게는 1 또는 2개이다. 바람직하게는, 헤테로아릴 기는 할로, 비치환된 저급 알킬, 트리할로알킬, 하이드록시, 머캅토, 시아노, N-아미도, 모노 또는 디알킬아미노, 카복시 또는 N-설폰아미도로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 치환기로 선택적으로 치환된다.

"헤테로사이클릭"은, 1 또는 2개의 고리 원자가 N, O 또는 S(O)_n(여기서, n은 0 내지 2의 정수이다)이고 나머지 고리 원자가 C인 5 내지 9개의 고리 원자의 고리(들)를 갖는 모노사이클릭 또는 융합 고리 기를 지칭한다. 상기 고리는 또한 하나 이상의 이중 결합을 가질 수 있다. 그러나, 고리는 완전히 공액된 파이-전자 시스템을 갖지 않는다. 비치환된 헤테로사이클릭 기의 비제한적인 예로는 피롤리디노, 피페리디노, 피페라지노, 모르폴리노, 티오모르폴리노, 호모피페라지노 등이있다. 헤테로사이클릭 고리는 치환되거나 비치환될 수 있다. 치환되는 경우, 치환된 기(들)는 비치환된 저급 알킬, 트리할로알킬, 할로, 하이드록시, 비치환된 저급 알콕시, 머캅토, (비치환된 저급 알킬)티오, 시아노, 아실, 티오아실, O-카바밀, N-카바밀, O-티오카바밀, N-티오카바밀, C-아미도, N-아미도, 니트로, N-설폰아미도, S-설폰아미도, RS(O)-, RS(O)₂-, -C(O)OR, RC(O)O- 및 -NR₁₃R₁₄(여기서, R₁₃및 R₁₄는 상기 정의된 바와 같음)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 바람직하게는 하나 이상, 더욱 바람직하게는 1, 2 또는 3개, 더욱더 바람직하게는 1 또는 2개이다. 바람직하게는, 헤테로사이클릭 기는 할로, 비치환된 저급 알킬, 트리할로알킬, 하이드록시, 머캅토, 시아노, N-아미도, 모노 또는 디알킬아미노, 카복시 또는 N-설폰아미도로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 치환기로 선택적으로 치환된다.

바람직하게는, 헤테로사이클릭 기는 할로, 비치환된 저급 알킬, 트리할로알킬, 하이드록시, 머캅토, 시아노, N-아미도, 모노 또는 디알킬아미노, 카복시 또는 N-설폰아미도로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 치환기로 선택적으로 치환된다.

"하이드록시"는 -OH 기를 지칭한다.

"알콕시"는 -O-(비치환된 알킬) 및 -O-(비치환된 사이클로알킬) 기를 둘다 지칭한다. 대표적인 비제한적인 예로는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, 사이클로프로필옥시, 사이클로부틸옥시, 사이클로펜틸옥시, 사이클로헥실옥시 등이 포함된다.

"아릴옥시"는 본원에 정의된 바와 같은 -O-아릴 및 -O-헤테로아릴 기를 둘다 지칭한다. 대표적인 비제한적인 예로는 페녹시, 피리디닐옥시, 푸라닐옥시, 티에닐옥시, 피리미디닐옥시, 피라지닐옥시 등 및 이들의 유도체가 포함된다.

"머캅토"는 -SH 기를 지칭한다.

"알킬티오"는 -S-(비치환된 알킬) 및 -S(비치환된 사이클로알킬) 기를 둘다 지칭한다. 대표적인 비제한적인 예로는 메틸티오, 에틸티오, 프로필티오, 부틸티오, 사이클로프로필티오, 사이클로부틸티오, 사이클로펜틸티오, 사이클로헥실티오 등이 포함된다.

"아릴티오"는 본원에 정의된 바와 같은 -S-아릴 및 -S-헤테로아릴기를 둘다 지칭한다. 대표적인 비제한적인 예로는 페닐티오, 피리디닐티오, 푸라닐티오, 티에닐티오, 피리미디닐티오 등 및 이들의 유도체가 포함된다.

"아실"은 -C(O)-R" 기를 지칭하며, 여기서 R"은 수소; 비치환된 저급 알킬; 트리할로메틸; 비치환된 사이클로알킬; 비치환된 저급 알킬, 트리할로메틸, 비치환된 저급 알콕시, 할로 및 -NR₁₃R₁₄기로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 치환기로 선택적으로 치환된 아릴; 비치환된 저급 알킬, 트리할로메틸, 비치환된 저급 알콕시, 할로 및 -NR₁₃R₁₄기로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 치환기로 선택적으로 치환된 헤테로아릴(고리 탄소를 통해 결합됨); 및 비치환된 저급 알킬, 트리할로알킬, 비치환된 저급 알콕시, 할로 및 -NR₁₃R₁₄기로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 치환기로 선택적으로 치환된 헤테로알리사이클릭(고리 탄소를 통해 결합됨)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 대표적인 아실 기로는 아세틸, 트리플루오로아세틸, 벤조일 등이 포함되지만 이에 국한되지 않는다.

"알데하이드"는 R"이 수소인 아실 기를 지칭한다.

"티오아실"은 -C(S)-R" 기(여기서, R"은 상기 정의된 바와 같다)를 지칭한다.

"에스테르"는 -C(O)O-R" 기(여기서, R"은 수소일 수 없는 것을 제외하고는 상기 정의된 바와 같다)를 지칭한다.

"아세틸" 기는 -C(O)CH₃기를 지칭한다.

"할로" 기는 불소, 염소, 브롬 또는 요오드, 바람직하게는 불소 또는 염소를 지칭한다.

"트리할로메틸" 기는 -CX₃기(여기서, X는 상기 정의된 바와 같은 할로 기이다)를 지칭한다.

"메틸렌디옥시"는 2개의 산소원자가 인접한 탄소원자에 결합된 -OCH₂O- 기를 지칭한다.

"에틸렌디옥시"는 2개의 산소원자가 인접한 탄소원자에 결합된 -OCH₂CH₂O- 기를 지칭한다.

"S-설폰아미도"는 -S(O)₂NR₁₃R₁₄기(여기서, R₁₃및 R₁₄는 상기 정의된 바와 같다)를 지칭한다.

"N-설폰아미도"는 -NR₁₃S(O)₂R기(여기서, R₁₃및 R은 상기 정의된 바와 같다)를 지칭한다.

"O-카바밀" 기는 -OC(O)NR₁₃R₁₄기(여기서, R₁₃및 R₁₄는 상기 정의된 바와 같다)를 지칭한다.

"N-카바밀"은 ROC(O)NR₁₄-기(여기서, R 및 R₁₄는 상기 정의된 바와 같다)를 지칭한다.

"O-티오카바밀"은 -OC(S)NR₁₃R₁₄기(여기서, R₁₃및 R₁₄는 상기 정의된 바와 같다)를 지칭한다.

"N-티오카바밀"은 ROC(S)NR₁₄-기(여기서, R 및 R₁₄는 상기 정의된 바와 같다)를 지칭한다.

"아미노"는 -NR₁₃R₁₄기(여기서, R₁₃및 R₁₄는 둘다 수소이다)를 지칭한다.

"C-아미도"는 -C(O)NR₁₃R₁₄기(여기서, R₁₃및 R₁₄는 상기 정의된 바와 같다)를 지칭한다.

"N-아미도"는 RC(O)NR₁₄-기(여기서, R 및 R₁₄는 상기 정의된 바와 같다)를 지칭한다.

"니트로"는 -NO₂기를 지칭한다.

"할로알킬"은 하나 이상의 동일하거나 상이한 할로 원자로 치환된 상기 정의된 바와 같은 알킬, 바람직하게는 저급 알킬, 예를 들어 -CH₂Cl, -CF₃, -CH₂CF₃, -CH₂CCl₃등을 의미한다.

"아르알킬"은 상기 정의된 바와 같은 아릴 기로 치환된 상기 정의된 바와 같은 비치환된 알킬, 바람직하게는 비치환된 저급 알킬, 예를 들어 -CH₂페닐, -(CH₂)₂페닐, -(CH₂)₃페닐, CH₃CH(CH₃)CH₂페닐 등 및 이들의 유도체를 의미한다.

"헤테로아르알킬" 기는 헤테로아릴 기로 치환된 상기 정의된 바와 같은 비치환된 알킬, 바람직하게는 비치환된 저급 알킬, 예컨대 -CH₂피리디닐, -(CH₂)₂피리미디닐, -(CH₂)₃이미다졸릴 등 및 이들의 유도체를 의미한다.

"모노알킬아미노"는 라디칼 -NHR(여기서, R은 상기 정의된 바와 같은 알킬 또는 비치환된 사이클로알킬 기이다), 예컨대 메틸아미노, (1-메틸에틸)아미노, 사이클로헥실아미노 등을 의미한다.

"디알킬아미노"는 라디칼 -NR'R'(여기서, R'는 각각 독립적으로 상기 정의된 바와 같은 비치환된 알킬 또는 비치환된 사이클로알킬기이다), 예컨대 디메틸아미노, 디에틸아미노, (1-메틸에틸)-에틸아미노, 사이클로헥실메틸아미노, 사이클로펜틸메틸아미노 등을 의미한다.

"시아노알킬"은 1 또는 2개의 시아노 기로 치환된 상기 정의된 바와 같은 비치환된 알킬, 바람직하게는 비치환된 저급 알킬을 의미한다.

"선택적인" 또는 "선택적으로"는 후속적으로 기술되는 사건 또는 상황이 일어날 수는 있지만 반드시 일어날 필요는 없으며, 상기 사건 또는 상황이 일어나는 예 및 일어나지 않는 예를 포함함을 의미한다. 예를 들어, "알킬 기로 선택적으로 치환된 헤테로사이클 기"는 알킬 기가 존재할 수 있지만 반드시 존재할 필요는 없음을 의미하고, 헤테로사이클 기가 알킬 기로 치환되는 상태 및 헤테로사이클로 기가 알킬 기로 치환되지 않는 상태를 포함한다.

"약학 조성물"은 본원에 기술되는 하나 이상의 화합물 또는 이의 생리학적으로/약학적으로 허용가능한 염 또는 전구약물, 및 생리학적으로/약학적으로 허용가능한 담체 및 부형제와 같은 기타 화학적 성분과의 혼합물을 지칭한다. 약학 조성물의 목적은 유기체에 대한 화합물의 투여를 용이하게 하는 것이다.

화학식 I 또는 II의 화합물은 전구약물로서 작용할 수도 있다. "전구약물"은 생체내에서 모(parent) 약물로 전환되는 제제를 지칭한다. 전구약물은 종종 일부 상황에서 모 약물보다 투여하기가 용이할 수 있으므로 유용하다. 예를 들어, 전구약물은 경구 투여에 의해 생체이용될 수 있는 반면, 모 약물은 그렇지 못하다. 전구약물은 또한 모 약물에 비해 약학 조성물에서 개선된 용해도를 갖는다. 전구약물의 비제한적인 예로는 수 용해도가 이동성에 불리한 경우 세포막을 가로지르는 전달이 용이하도록 에스테르("전구약물")로서 투여되나 이후 수 용해도가 이로운 경우 세포 내측에서 카복실산, 즉 활성체로 1회 대사적으로 가수분해되는 본 발명의 화합물이 있지만 이에 국한되지 않는다.

전구약물의 추가의 예는 말단 아미노기를 통해 본 발명의 화합물의 카복시기에 결합된 짧은 폴리펩티드, 예를 들어 2 내지 10 아미노산 폴리펩티드일 수 있지만 이에 국한되지 않으며, 여기서 상기 폴리펩티드는 생체내에서 가수분해 또는 대사되어 활성 분자를 방출시킨다. 화학식 I 또는 II의 화합물의 전구약물은 본 발명의 범위내에 속한다.

또한, 화학식 I 또는 II의 화합물은 인간과 같은 유기체의 신체에서 효소에 의해 대사되어 단백질 키나제의 활성을 조절할 수 있는 대사물을 생성한다. 이러한 대사물은 본 발명의 범위내에 속한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "생리학적으로/약학적으로 허용가능한 담체"는 유기체에 상당한 자극을 유발시키지 않고 투여된 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 없애지 않는 담체 또는 희석제를 지칭한다.

"약학적으로 허용가능한 부형제"는 화합물의 투여를 더욱 용이하게 하도록 약학 조성물에 첨가되는 불활성 물질을 지칭한다. 부형제의 비제한적인 예로는 탄산 칼슘, 인산 칼슘, 각종 당 및 전분류, 셀룰로스 유도체, 젤라틴, 식물성 오일 및 폴리에틸렌 글리콜이 포함된다.

본원에 사용되는 바와 같이, "약학적으로 허용가능한 염"이라는 용어는 모 화합물의 생물학적 효과 및 특성을 보유하는 염을 지칭한다. 이러한 염은 하기 내용을 포함한다.

(1) 모 화합물의 유리 염기와 무기산(예: 염산, 브롬화수소산, 질산, 인산, 황산 및 과염소산 등) 또는 유기산(예컨대, 아세트산, 옥살산, (D) 또는 (L) 말릭산, 말레산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 살리실산, 타르타르산, 시트르산, 숙신산 또는 말론산 등), 바람직하게는 염산 또는 (L)-말산의 반응에 의해 수득된 산 부가 염, 예컨대 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(2-디에틸아미노-에틸)-아미드; 또는

(2) 모 화합물에 존재하는 산성 양성자가 금속 이온(예: 알칼리 금속 이온, 알칼리토금속 이온 또는 알루미늄 이온)에 의해 치환되거나, 유기 염기(예: 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 트로메타민, N-메틸글루카민 등)로 배위될 때 형성되는 염.

"방법"은 화학, 약학, 생물학, 생화학 및 의학 분야에 공지되어 있거나, 또는 상기 분야의 숙련자들에 의해 공지된 수단, 방식, 기술 및 과정으로부터 용이하게 개발되는 방식, 수단, 기술 및 과정을 포함하나 이에 국한되지 않는, 주어진 임무를 달성하기 위한 방식, 수단, 기술 및 과정을 지칭한다.

"생체내"는 마우스, 래트 또는 래빗(이에 국한되지 않음)과 같은 살아있는 유기체내에서 수행되는 과정을 지칭한다.

"치료하다", "치료하는" 및 "치료"는, 급성 골수성 백혈병, 다른 백혈병, FLT-3 관련 암 및/또는 그의 부수적인 증상을 경감시키거나 없애는 방법을 지칭한다. 화학식 I 또는 II의 화합물로 치료가능한 백혈병으로는 급성 골수 백혈병(acute myelognous leukemia, AML), 급성 림프구 백혈병(acute lymphocytic leukemia, ALL), 만성 골수성 백혈병(chronic myeloid leukemia, CLL), 만성 골수 백혈병(chronic myelognous leukemia, CML), 골수형성이상 증후군(myelodysplasticsyndrome, MDS), 급성 골수단핵구 모세포성 백혈병(acute myelomonoblastic leukemia, AMMOL) 및 급성 단핵구 모세포성 백혈병(acute monoblastic leukemia, AMOL)이 포함된다. 또한, FLT-3과 관련된 다른 유형의 암으로는 백혈병, 림프종, 암종, 골수종, 신경능선-유도 암, 육종, 신경아교종이 포함되지만 이에 국한되지 않으며, 이는 화학식 I 또는 II의 화합물을 투여함으로써 치료가능하다. "치료하다"라는 용어는 단순히 AML 또는 FLT-3 관련 암으로 영향을 받은 개개인의 평균 수명이 증가되거나, 또는 상기 질환의 하나 이상의 증상이 감소될 것임을 의미한다.

"FLT-3 관련 암"으로는 급성 골수 백혈병(AML), 급성 림프구 백혈병(ALL), 만성 골수성 백혈병(CLL), 만성 골수 백혈병(CML), 골수형성이상 증후군(MDS), 급성 골수단핵구 모세포성 백혈병(AMMOL) 및 급성 단핵구 모세포성 백혈병(AMOL)이 포함지만 이에 국한되지 않는다.

"환자"는 하나 이상의 세포로 이루어진 임의의 살아있는 개체를 지칭한다. 살아있는 유기체는 예컨대 단일 진핵 세포만큼 단순한 것 또는 인간을 포함하는 포유류와 같이 복잡한 것일 수 있다.

"치료 효과량"은 치료될 질환의 하나 이상의 증상을 어느 정도 예방, 경감, 완화 또는 구제할 수 있는 화합물의 투여량을 지칭한다. 암의 치료와 관련하여, 치료 효과량은 하기 (1) 내지 (4)의 효과를 갖는 양을 지칭한다.

(1) 종양의 크기를 감소시키는 효과;

(2) 종양 전이를 억제시키는 효과(즉, 어느 정도 늦추게 하는 효과, 바람직하게는 정지시키는 효과);

(3) 종양 성장을 어느 정도 억제시키는 효과(즉, 어느 정도 늦추게 하는 효과, 바람직하게는 정지시키는 효과);

(4) 아세포 갯수를 감소시키는 효과; 및/또는

(5) 암과 관련된 하나 이상의 증상을 어느 정도 구제하는 효과(또는 바람직하게는 없애는 효과).

투여 및 약학 조성물

본원에 청구된 방법은 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 인간 환자에게 투여함을 포함한다. 다르게는, 화학식 I 또는 II의 화합물은 상기 물질이 적당한 담체 또는 부형제(들)와 혼합된 약학 조성물의 형태로 투여될 수 있다. 약물의 배합 및 투여 기법은 문헌 ["Remington's Pharmacological Sciences," Mack Publishing Co., Easton, PA., latest edition]에서 찾을 수 있다.

본원에서, "투여하다" 또는 "투여"는 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 본 발명의 화학식 I 또는 II의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 함유하는 약학 조성물을 AML의 치료 목적으로 유기체에 전달하는 것을 지칭한다.

투여의 적합한 경로로는 경구, 직장, 경점막 또는 장 투여, 또는 근육내, 피하, 척수내, 경막내, 직접 심실내, 정맥내, 유리체내(intravitreal), 복막내, 비강내 또는 안내 주사가 포함되지만 이에 국한되지 않는다. 투여의 바람직한 경로는 경구 및 비경구 투여이다.

다르게는, 화합물을 전신계 방식보다는 국소적으로, 예컨대 화합물을 종종 데포(depot) 또는 서방형 제형으로 고형 종양에 직접 주사하여 투여할 수 있다.

또한, 목적하는 약물 전달 시스템, 예컨대 종양-특이적 항체로 피복된 리포솜으로 약물을 투여할 수 있다. 리포솜은 종양을 표적으로 하며 종양에 의해 선택적으로 흡수될 것이다.

본 발명의 약학 조성물은 당해 분야에 널리 공지된 방법, 예컨대 통상적인 혼합, 용해, 과립화, 정제 제조, 분말화(levigating), 유화, 캡슐화, 포집(entrapping) 또는 친액성화 방법에 의해 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 용도를 위한 약학 조성물은, 활성 화합물의 약학적으로 사용될 수 있는 제제로의 가공을 용이하게 하는, 부형제 및 보조제를 포함하는 하나 이상의 생리학적으로 허용가능한 담체를 사용하는 통상적인 방식으로 제형화될 수 있다. 적절한 제형은 선택된 투여 경로에 따라 달라진다.

주사의 경우, 본 발명의 화합물을 수용액에, 바람직하게는 행크스(Hanks) 용액, 링거(Ringer) 용액 또는 생리학적 염수 완충액과 같은 생리학적 혼화성 완충액중에서 제형화될 수 있다. 점막투과 투여의 경우, 투과될 장벽에 적합한 침투제를 제형화에 사용된다. 이러한 침투제는 당해 기술 분야에 일반적으로 알려져 있다.

경구 투여의 경우, 본 발명의 활성 화합물은 당해 기술 분야에 널리 알려진 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합함으로써 제형화될 수 있다. 이러한 담체를 사용하면, 본 발명의 화합물을 환자에 의해 경구 복용되는 정제, 환제, 로젠지, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 슬러리제, 현탁제 등으로 제형화될 수 있다.경구용 약학 제제는 고체 부형제를 사용하고, 선택적으로는 생성된 혼합물을 분쇄하고, 필요한 경우 다른 적합한 보조제를 첨가한 후, 과립 혼합물을 가공하여 정제 또는 당의정 코어를 수득함으로써 제조될 수 있다. 유용한 부형제로는 특히 락토스, 수크로스, 만니톨 또는 소르비톨을 비롯한 당, 예컨대 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분 및 감자 전분과 같은 셀룰로스 제조물, 및 젤라틴, 검 트라가칸스, 메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 나트륨 카복시메틸 셀룰로스 및/또는 폴리비닐 피롤리돈(PVP)과 같은 기타 물질이 있다. 필요한 경우, 가교된 폴리비닐 피롤리돈, 아가 또는 알긴산과 같은 붕해제가 첨가될 수 있다. 알긴산 나트륨과 같은 염도 사용될 수 있다.

당의정 코어는 적합하게 피복되어 제공된다. 이를 위해, 아라비아 검, 활석, 폴리비닐 피롤리돈, 카보폴 겔, 폴리에틸렌 글리콜 및/또는 이산화 티탄, 라커 용액, 및 적합한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 선택적으로 포함할 수 있는 농축 당 용액을 사용할 수 있다. 활성 화합물의 투여량의 다양한 조합을 확인하거나 특징화하기 위해 염료 또는 안료를 정제 또는 당의정 피복물에 첨가할 수 있다.

경구로 이용될 수 있는 약학 조성물은, 젤라틴으로 만든 푸쉬-피트(push-fit) 캡슐, 및 가소제(예: 글리세롤 또는 소르비톨) 및 젤라틴으로 만든 연질의 밀봉 캡슐을 포함한다. 푸쉬-피트 캡슐은 충전제(예: 락토스), 결합제(예: 녹말) 및/또는 윤활제(예: 활석 또는 스테아르산 마그네슘), 및 선택적으로 안정화제와 혼합된 활성 성분을 포함할 수 있다. 연질 캡슐의 경우, 활성 성분을 적합한 액체, 예컨대 지방 오일, 액체 파라핀 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜에 용해 또는 현탁시킬 수 있다. 또한, 이들 제형에 안정화제를 첨가할 수 있다.

또한, 사용될 수 있는 약학 조성물로는 경질 젤라틴 캡슐이 포함된다. 비제한적인 예로서, 캡슐 경구용 약물 제품 제형내의 화합물(1)은 50 및 200㎎ 투여량 강도로 할 수 있다. 이들 2개의 투여량 강도는 동일한 과립을 다른 크기의 경질 젤라틴 캡슐, 즉 사이즈 3의 50㎎ 캡슐과 사이즈 0의 200㎎ 캡슐내에 충전함으로써 제조된다.

캡슐은 활성 화합물을 빛으로부터 보호되도록 갈색 유리 또는 플라스틱 병내에 포장될 수 있다. 활성 화합물 캡슐 제형을 함유하는 용기는 제어된 실온(15 내지 30℃)에서 저장되어야 한다.

흡인에 의한 투여의 경우, 본 발명에 따른 용도를 위한 화합물을 가압 팩 또는 분무기(nebulizer), 및 적합한 추진제, 예컨대 비제한적인 예로서 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄 또는 이산화 탄소를 사용한 에어로졸 분무기의 형태로 편리하게 전달된다. 가압 에어로졸의 경우에, 투여량 단위는 계량된 양을 전달하도록 밸브를 구비함으로써 제어될 수 있다. 흡입기 또는 취입기(insufflator)에 사용되는 예컨대 젤라틴의 캡슐 및 카트리지는, 화합물과 적합한 분말 베이스(예: 락토스 또는 전분)의 분말 혼합물을 함유하여 제형화될 수 있다.

또한, 이 화합물은, 예컨대 볼러스(bolus) 주입 또는 연속식 관류(infusion)에 의해 비경구로 투여되도록 제형화될 수 있다. 주사를 위한 제형은 단위 투여 형태, 예컨대 보존제가 첨가된 앰플 또는 다중 투여량 용기로 제공될 수 있다. 이조성물은 유성 또는 수성 비히클중의 현탁액, 용액 또는 유화액 같은 형태를 가질 수 있고, 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제 같은 제형화 물질을 포함할 수 있다.

비경구 투여를 위한 약학 조성물은, 비제한적인 예로서 활성 화합물의 염 같은 수용성 형태의 수용액을 포함한다. 또한, 활성 화합물의 현탁액은 친유성 비히클중에서 제조될 수 있다. 적합한 친유성 비히클로는 지방 오일(예: 참기름), 합성 지방산 에스테르(예: 에틸 올레에이트 및 트리클리세라이드), 또는 리포솜과 같은 물질이 포함된다. 수용성 주사 현탁액은 현탁액의 점도를 증가시키는 물질, 예컨대 나트륨 카복시메틸 셀룰로스, 소르비톨 또는 덱스트린을 포함할 수 있다. 선택적으로, 상기 현탁액은 또는 적합한 안정화제 및/또는 고농도의 용액의 제조를 가능케 하기 위해 화합물의 용해도를 증가시키는 제제를 포함할 수 있다.

다르게는, 활성 성분은, 사용전에 적합한 비히클(예컨대, 발열성 물질이 제거된 멸균수)로 조제되기 위한 분말 형태일 수 있다.

또한, 상기 화합물은 예컨대 좌제 베이스(예: 코코아 버터 또는 다른 글리세라이드)를 사용한 직장 조성물(예: 좌제 또는 체류 관장제)로서 제형화될 수 있다.

전술한 제형 외에, 본 화합물은 또한 데포 제제로서 제형화될 수 있다. 이러한 장기간 작용하는 제형은 이식(예컨대, 피하 또는 근육내)에 의해, 또는 근육내 주사로 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 (예컨대, 약리학적으로 허용가능한 오일을 이용한 유화액중의) 적합한 중합체 또는 소수성 물질을 이용하여, 또는 이온 교환 수지를 이용하여 이러한 투여 경로용으로, 또는, 비제한적 예로서 난용성 염과 같은 난용성 유도체로서 제형화될 수 있다.

본 발명의 소수성 화합물을 위한 약학적 담체의 비제한적 예로는, 벤질 알코올, 비극성 계면활성제, 수혼화성 유기 중합체 및 수성상을 포함하는 공용매 시스템, 예컨대 VPD 공용매 시스템이 있다. VPD는 무수 에탄올중 벤질 알코올 3%w/v, 비극성 계면활성제 폴리소르베이트 80 8%w/v 및 폴리에틸렌 글리콜 300 65%w/v의 용액이다. VPD 공용매 시스템(VPD:D5W)은 수용액중에 5% 덱스트로스와 1:1로 희석된 VPD로 이루어진다. 이 공용매 시스템은 소수성 화합물을 잘 용해시키며, 그 자체는 전신계 투여시 낮은 독성을 갖는다. 당연히, 이러한 공용매 시스템의 비율은 이의 용해도 및 독성 특성을 잃지 않는 한 상당히 변화될 수 있다. 더욱이, 공용매 성분의 본질(identity)이 변화될 수 있다. 예컨대, 폴리소르베이트 80 대신에 다른 저독성 비극성 계면활성제가 사용될 수 있고, 폴리에틸렌 글리콜의 분할 크기가 변화될 수 있고, 다른 생체적합성 중합체, 예컨대 폴리비닐 피롤리돈이 폴리에틸렌 글리콜을 대체할 수 있고, 다른 당 또는 폴리사카라이드가 덱스트로스를 대체할 수 있다.

다르게는, 소수성 약학적 화합물을 위한 다른 전달 시스템을 이용할 수 있다. 리포솜 및 유화액이 소수성 약물을 위한 전달 비히클 또는 담체로서 널리 알려진 예이다. 또한, 흔히 더 독성이 높을지라도 디메틸설폭사이드와 같은 소정의 유기 용매를 사용할 수 있다.

또한, 본 화합물은 치료제를 포함하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스 같은 지효성(sustained release) 시스템을 이용하여 전달될 수 있다. 다양한 지효성 물질이 정립되어 있으며 당해 기술 분야의 숙련자에게 널리 공지되어 있다.지효성 캡슐은, 그의 화학적 성질에 따라, 화합물을 수주로부터 100일 이상까지 방출한다. 치료제의 화학적 성질 및 생물학적 안정성에 따라, 단백질 안정화를 위한 추가의 전략을 이용할 수 있다.

또한, 본 발명에서 약학 조성물은 적합한 고체 또는 겔상 담체 또는 부형제를 포함할 수 있다. 이러한 담체 또는 부형제의 예로는 탄산 칼슘, 인산 칼슘, 다양한 당, 전분, 셀룰로스 유도체, 젤라틴, 및 폴리에틸렌 글리콜 같은 중합체가 있지만 이에 국한되지 않는다.

본 발명에 사용하는 제형의 예는 하기 표 1 내지 3과 같다.

A : 배치(batch)에 요구되는 약물의 양은 캡슐에 대한 표지된 강도의 100%를 갖도록 조정될 것이다. 각각의 강도에 대한 동일한 충전 중량을 유지하도록 만니톨 양을 적절하게 조정될 것이다.

B : 자유 염기 100㎎과 동일한 양

C : 자유 염기 50㎎과 동일한 양

D : 자유 염기 25㎎과 동일한 양

E : 내부과립 1/2 + 외부과립 1/2

이들은, 그 내용 전반이 참고로 인용되고 있는, 2002년 9월 10일자로 출원된 미국 특허출원 제 10/237,966 호에서 찾을 수 있다.

화학식 I 및 II의 많은 화합물은 음(-)으로 또는 양(+)으로 하전된 종을 형성할 수 있는 생리학적으로 허용가능한 염으로서 제공될 수 있다. 양(+)으로 하전된 잔기를 형성하는 염의 예로는, 4급 암모늄 염, 하이드로클로라이드, 설페이트, 카보네이트, 락테이트, 타르트레이트, 말레이트, 말레에이트, 숙시네이트와 같은 염이 포함되지만 이에 국한되지 않으며, 이때 4급 암모늄 기의 질소 원자는 적절한 산과 반응한 본 발명의 선택된 화합물의 질소이다. 본 발명의 화합물이 음(-)으로 하전된 종을 형성하는 염으로는, 본 화합물의 카복실산 기와 적절한 염기(예: 수산화 나트륨(NaOH), 수산화 칼륨(KOH), 수산화 칼슘(CaOH)₂등)의 반응에 의해 형성된 나트륨, 칼륨, 칼슘 및 마그네슘 염이 포함되지만 이에 국한되지 않는다.

본 발명의 용도에 적합한 약학 조성물은, 활성 성분이 의도하는 목적, 예컨대 FLT-3-ITD 양성 환자의 AML의 치료를 달성하기에 충분한 양으로 포함된 조성물을 포함한다.

더욱 특히, "치료 효과량"은 AML의 증상을 예방, 경감 또는 완화시키거나, 또는 치료받는 환자의 생존을 지속하는데 효과적인 화합물의 양을 의미한다.

치료 효과량은 당해 기술 분야의 숙련자의 역량 내에서, 특히 본원에 제공된상세한 개시내용에 비추어 용이하게 결정된다.

본 발명의 방법에 사용되는 임의의 화합물에 있어서, 치료 효과량 또는 투여량은 사전에 세포 배양 검정법으로 평가될 수 있다. 그 다음, 이 투여량을 세포 배양에서 결정된 IC₅₀을 포함하는 순환 농도 범위(즉, FLT-3의 인산화의 최대 억제의 1/2를 달성하는 시험 화합물의 농도)를 달성하도록 동물 모델에서 사용하게 제형화할 수 있다. 그 다음, 이러한 정보는 인간에게 유용한 투여량을 정확하게 결정하는데 이용될 수 있다.

본원에 기재된 화합물의 독성 및 치료적 효능은, 세포 배양 또는 실험 동물에서 표준 약학적 방법에 의해, 예컨대 해당 화합물의 IC₅₀및 LD₅₀(여기서, LD₅₀은 치사량의 최대 억제의 1/2에 도달하는 시험 화합물의 농도이다)을 결정함으로써 결정될 수 있다. 이들 세포 배양 검정법 및 동물 연구에서 얻은 자료를 이용하여 제형시 인간에게 사용하기 위한 투여량 범위를 계산할 수 있다. 투여량은 이용하는 투여 형태 및 투여 경로에 따라 변화될 수 있다. 정확한 제형, 투여 경로 및 투여량은 환자의 상태를 보고서 개별 담당의사에 의해 선택될 수 있다(예컨대, 문헌 [Fingl, et al., 1975, in "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Ch. 1 p.1] 참조).

키나제 조절 효과를 유지하기에 충분한 활성 종의 혈장 수준을 제공하도록 개별적으로 투여량 및 간격을 조정할 수 있다. 이들 혈장 수준은 최소 유효 농도(MEC)로서 지칭된다. MEC는 각각의 화합물마다 다르지만 생체외 자료로부터예측될 수 있다. 예컨대, 키나제의 50 내지 90% 억제를 달성하는데 필요한 농도는 본원에 기술된 검정법을 이용하여 확인될 수 있다. MEC를 달성하는데 필요한 투여량은 개개의 투여 특성 및 경로에 의존한다. HPLC 분석 또는 생검법(bioassay)을 사용하여 혈장 농도를 측정할 수 있다.

또한, 투여 간격은 MEC 값을 이용하여 결정될 수 있다. 10 내지 90%, 바람직하게는 30 내지 90%, 가장 바람직하게는 50 내지 90%의 시간 동안 MEC를 초과하는 혈장 수준을 유지하는 처방법을 이용하여 화합물을 투여하여야 한다.

현재, 화학식 I 또는 II의 화합물의 치료 효과량은 약 25 내지 1500㎎/㎡/일, 바람직하게는 약 3㎎/㎡/일일 수 있다. 더욱 바람직하게는, 50㎎/qm qd 내지 400㎎/qd이다.

국소 투여 또는 선택적 흡수(selective uptake)의 경우, 약물의 효과적인 국소 농도는 혈장 농도와 관련되지 않을 수 있으며, 당해 기술 분야에 공지된 다른 방법을 이용하여 올바른 투여량 및 간격을 결정할 수 있다.

물론, 투여되는 조성물의 양은 치료받을 환자, 고통의 위중도, 투여 방식, 처방 의사의 판단 등에 따라 달라질 것이다.

본 발명의 방법을 방사선 및 골수 이식을 비롯한 기타 암 치료법과 함께 사용될 수 있음이 고려된다.

최종적으로, 본 발명의 방법은, AML에 국한되지 않고서 이를 비롯해 고형 암 또는 백혈병의 치료를 위해, ENDOSTATINⓒ, GLEEVECⓒ, CAMPTOSARⓒ, HERCEPTINⓒ, IMCLONE C225ⓒ, 미톡산트론, 다우노루비신, 시타라빈, 메토트렉세이트, 빈크리스틴, 6-티오구아닌, 6-머캅토푸린 또는 파클리탁셀과 함께 사용될 것이 고려된다. 또한, 본 발명의 방법은 사이클로 억제제, 예컨대 셀레콕십를 포함하지만 이에 국한되지 않는 혈관형성방지제(anti-angiogenic agent)를 사용하는 조합 치료법을 포함할 수 있다.

본원에 기술된 조합 치료법 및 약학 조성물에서, 치료 효과량의 본 발명의 화합물 및 화학치료제, 또는 비정상 세포 성장을 억제하는데 유용한 기타 제제(예컨대, 기타 항증식제, 혈관형성방지제, 신호 형질도입 억제제(signal transduction inhibitor) 또는 면역계 강화제)는, 본원에 기술된 화합물의 효과량, 본 발명의 화합물을 단독 활성화제로서 포함하는 이러한 치료법과 조성물을 위한 투여 경로에 대한 정보, 및 이들과 함께 화학치료법 및 기타 제제에 대한 정보에 기초하여 당해 분야의 숙련자에 의해 결정될 수 있다.

일반적 합성 방법

하기 일반적인 방법은 본 발명의 화합물을 제조하는데 이용될 수 있다.

적절하게 치환된 2-옥스인돌(1당량), 적절하게 치환된 알데하이드(1.2당량) 및 염기(0.1당량)을 용매(1 내지 2㎖/밀리몰 옥스인돌)중에서 혼합한 후, 상기 혼합물을 약 2 내지 약 12시간 동안 가열한다. 냉각시킨 후, 형성된 침전물을 여과시키고, 차가운 에탄올 또는 에테르로 세척하고, 진공 건조시켜 고체 생성물을 수득한다. 침전이 형성되지 않는 경우, 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 디클로로메탄/에테르로 분쇄시키고, 생성된 고체를 여과하여 수거한 후, 건조시킨다. 생성물은 선택적으로 크로마토그래피에 의해 추가 정제될 수 있다.

염기는 유기 또는 무기 염기일 수 있다. 유기 염기가 사용되면, 바람직하게는 질소 염기이다. 유기 질소 염기의 예로는 디이소프로필아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 아닐린, 피리딘, 1,8-디아자비사이클로[5.4.1]운덱-7-엔, 피롤리딘 및 피페리딘이 포함되지만 이에 국한되지 않는다.

무기 염기의 예로는 암모니아, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 수산화물, 인산염, 탄산염, 중탄산염, 중황산염 및 아미드가 있지만 이에 국한되지 않는다. 알칼리 금속으로는 리튬, 나트륨 및 칼륨이 포함되고, 알칼리 토금속으로는 칼슘, 마그네슘 및 바륨이 포함된다.

본 발명의 현재 바람직한 실시양태에서, 용매가 물 또는 알코올 같은 양성자성 용매인 경우, 염기는 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 무기 염기, 바람직하게는 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 수산화물이다.

공지된 유기 합성의 일반적 원칙 및 본원에 개시된 내용에 기초하여, 당해 기술 분야의 숙련자에게는 어떠한 염기가 목적하는 반응에 가장 적절한 것인지가 명백할 것이다.

반응이 수행되는 용매는 양성자성 또는 비양성자성 용매일 수 있고, 바람직하게는 양성자성 용매이다. "양성자성 용매"는 수소 원자(들)를 상당히 산성으로 만듦으로써 수소 결합을 통해 용질과 "공유"될 수 있는, 산소 또는 질소 원자에 공유적으로 결합된 수소 원자를 갖는 용매이다. 양성자성 용매의 예로는 물 및 알코올이 포함되지만 이에 국한되지 않는다.

"비양성자성 용매"는 극성 또는 비극성일 수 있지만, 어느 경우라도 산성 수소를 갖지 않으므로 용질과 수소 결합을 할 수 없다. 비극성 비양성자성 용매의 예로는 펜탄, 헥산, 벤젠, 톨루엔, 염화 메틸렌 및 사염화 탄소가 있지만, 이에 국한되지 않는다. 극성 비양성자성 용매의 예로는 클로로포름, 테트라하이드로푸란, 디메틸설폭사이드 및 디메틸포름아미드가 있다.

본 발명의 현재 바람직한 실시양태에서, 용매는 양성자성 용매, 바람직하게는 물, 또는 에탄올과 같은 알코올이다.

반응은 실온보다 높은 온도에서 수행된다. 일반적으로 온도는 약 30 내지 약 150℃, 바람직하게는 약 80 내지 약 100℃, 가장 바람직하게는 에탄올의 비점 부근인 약 75 내지 약 85℃이다. "약"은 온도 범위가 바람직하게는 표시된 온도의 10℃ 이내, 더욱 바람직하게는 5℃ 이내, 가장 바람직하게는 2℃ 이내임을 의미한다. 그러므로, 예컨대 "약 75℃"는 75±10℃, 바람직하게는 75±5℃, 가장 바람직하게는 75±2℃를 의미한다.

2-옥스인돌 및 알데하이드는 화학 기술 분야에 널리 공지된 기법을 이용하여 용이하게 합성될 수 있다. 본 발명의 화합물을 형성하기 위한 다른 합성 경로를 이용할 수 있고, 하기의 내용은 일례로서 제공되며 이들로 한정되지 않음을 당해 기술 분야의 숙련자들은 인식할 수 있을 것이다.

본 발명의 화합물을 하기 방법 및 예컨대 전반적으로 본원에 참고로 인용되고 있는 미국 특허출원 제 09/783,264 호, WO 01/60814 호, WO 00/08202 호, 미국 가특허출원 제 60/312,353 호(2001년 8월 15일자로 출원됨), 현재의 미국 특허출원 제 10/281,985 호(2002년 8월 13일자로 출원됨), 미국 가특허출원 제 60/411,732호(2002년 9월 18일자로 출원됨), 미국 가특허출원 제 60/328,226 호(2001년 10월 10일자로 출원됨), 현재의 미국 특허출원 제 호(2002년 10월 10일자로 출원됨), 및 미국 특허출원 제 10/076,140 호(2002년 2월 15일자로 출원됨)에 기술된 바와 같이 제조한다.

합성 방법

방법 A: 피롤의 포르밀화

POCl₃(1.1당량)를 -10℃에서 디메틸포름아미드(3당량)에 적가한 후, 디메틸포름아미드에 용해된 적절한 피롤을 첨가한다. 2시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 H₂O로 희석시키고, 10N KOH를 사용하여 pH 11로 염기화시킨다. 형성되는 침전물을 여과에 의해 수거하고, H₂O로 세척하고, 진공 오븐에서 건조시켜 목적하는 알데하이드를 수득한다.

방법 B: 피롤카복실산 에스테르의 비누화

EtOH중의 피롤카복실산 에스테르와 KOH(2 내지 4당량)의 혼합물을 반응 완결이 박막 크로마토그래피(TLC)에 의해 확인될 때까지 환류시킨다. 냉각된 반응 혼합물을 1N HCl로 pH 3으로 산성화시킨다. 형성되는 침전물을 여과에 의해 수거하고, H₂O로 세척하고, 진공 오븐에서 건조시켜 목적하는 피롤카복실산을 수득한다.

방법 C: 아미드화

디메틸포름아미드(0.3M)중에 용해된 피롤카복실산의 교반된 용액에 1-에틸-3-(3-디메틸아미노-프로필)카보디이미드(1.2당량), 1-하이드록시벤조트리아졸(1.2당량) 및 트리에틸아민(2당량)을 첨가한다. 적절한 아민을 첨가하고(1당량), TLC에 의해 완결이 확인될 때까지 반응물을 교반한다. 그 다음, 에틸 아세테이트를 반응 혼합물에 첨가하고, 용매를 포화 NaHCO₃및 염수(여분의 염 사용)로 세척하고, 무수 MgSO₄상에서 건조시키고, 농축시켜 목적하는 아미드를 수득한다.

방법 D: 카복실산 치환기를 함유하는 옥신돌과 알데하이드의 축합

에탄올(0.4M)중의 옥신돌(1당량), 알데하이드 1 당량 및 피페리딘(또는 피롤리딘) 1 내지 3 당량의 혼합물을 TLC에 의해 반응 완결이 확인될 때까지 90 내지 100℃에서 교반한다. 그 다음, 혼합물을 농축시키고, 잔여물을 2N HCl로 산성화시킨다. 형성되는 침전물을 H₂O 및 EtOH로 세척한 후, 진공 오븐에서 건조시켜 생성물을 수득한다.

방법 E: 카복실산 치환기를 함유하지 않는 옥신돌과 알데하이드의 축합

에탄올(0.4M)중의 옥신돌(1당량), 알데하이드 1 당량 및 피페리딘(또는 피롤리딘) 1 내지 3 당량의 혼합물을 TLC에 의해 반응 완결이 확인될 때까지 90 내지 100℃에서 교반한다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 형성되는 고체를 진공 여과에 의해 수거하고, 에탄올로 세척하고, 건조시켜 생성물을 수득한다. 침전물이 반응 혼합물의 냉각시 형성되지 않는다면, 혼합물을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피로 정제한다.

하기 실시예는 본 발명을 예시하도록 제공된다. 그러나, 본 발명이 이들 실시예에 기술된 특정 조건 또는 상세한 내용에 국한되지 않는 것으로 이해되어어야 한다. 명세서 전반에 걸쳐, 공개적으로 입수가능한 모든 임의의 서류가 참고로 본원에 인용되고 있다.

합성 실시예

실시예 1

(3Z)-3-{[3,5-디메틸-4-(모르폴린-4-일)피페리딘-1-일카보닐]-1H-피롤-2-일메틸리덴}-5-플루오로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온(화합물(9))의 합성

단계 1

50℃로 가열된 4-아미노-1-벤질피페리딘(알드리치(Aldrich), 1.53㎖, 7.5밀리몰), K₂CO₃(2.28g, 16.5밀리몰) 및 DMF(15㎖)의 교반된 혼합물에 비스(2-브로모에틸)에테르(알드리치, 테크(tech.) 90%, 0.962㎖, 7.65밀리몰)를 60분에 걸쳐 적가하였다. 80℃에서 6시간 동안 교반한 후, TLC(90:10:1 클로로포름/MeOH/수성 농축 NH₄OH)에서 새로운 스팟이 형성된 것으로 나타났다. 2시간에 걸쳐 질소 스트림으로 불어넣어 용매를 증발시키면서 계속적으로 가열하였다. 조질의 물질이 상대적으로 순수했지만, 비교적 짧은 실리카 겔 칼럼(클로로포름중의 9:1 MeOH/수성 NH₄OH의 1 내지 6%의 구배)에 가했다. 순수한 분획물을 증발시켜 디아민 4-(모르폴린-4-일)-1-벤질피페리딘 약 1.7g을 왁스 고체로서 수득하였다.

단계 2

질소하의 Pd(OH)₂(탄소상 20%(＜50중량%), 390㎎, 25중량%), 메탄올(50㎖) 및 ≤1.7M HCl(3당량, 약 10.6㎖ - 이후 ppt가 나타내는 경우 첨가되는 물을 포함함)의 교반된 혼합물을, 질소의 벌룬(balloon)을 사용하여 오일 버블러(oil bubbler)를 통과시켜 용기내로 (약 20초 동안) 플러슁시켜 1기압 수소 분위기로 교환시켰다. 20분 후, 수소하의 반응 혼합물을 50℃로 가열하고, 메탄올(8㎖)중의 4-(모르폴린-4-일)-1-벤질피페리딘(1.56g, 6.0밀리몰)을 30분에 걸쳐 적가하였다. 10시간 후, tlc에서는 모든 출발 아민이 더욱 극성인 스팟(닌하이드린(ninhydrin) 활성)으로 소모됨을 나타냈다. 그 다음, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과시키고 증발시켜 4-(모르폴린-4-일)피페리딘 디하이드로클로라이드를 회백색 고체로서 수득하였다. 이 물질을, 과량의 염기성 수지(＞16g, Bio-Rad Laboratories, AG 1-X8, 20-50 메쉬, 수산화물 형태, 2회 세척된 메탄올) 및 아민 하이드로클로라이드의 메탄올 혼합물을 사용하여 자유-염기화시켰다. 30분 동안 수지와 함께 교반시킨 후, 메탄올 요액을 폐기시키고 증발시켜 4-(모르폴린-4-일)피페리딘 자유 염기932㎎을 왁스 결정질 고체로서 수득하였다.

단계 3

(3Z)-3-(3,5-디메틸-4-카복시-1H-피롤-2-일메틸리덴)-5-플루오로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온(120㎎, 0.40밀리몰)(이는 PCT 공개공보 제 01/60814 호에 기술된 바와 같이 제조됨) 및 BOP(221㎎, 0.50밀리몰)를 실온에서 잘 교반하면서 DMF(5㎖)중에 현탁시키고, 트리에틸아민(134㎕, 0.96밀리몰)을 첨가하였다. 10 내지 15분 후, 균질한 반응 혼합물에 4-(모르폴린-4-일)피페리딘(85㎎, 0.50밀리몰)을 한번에 모두 첨가하였다. 반응 혼합물을 48시간 동안 교반한 후(이보다 매우 일찍 달성될지도 모름), 클로로포름-이소프로판올(5/1) 및 5% 수성 LiCl을 함유하는 깔대기에 옮겼다. 뿌연 오렌지색 유기상을 분리시키고, 추가의 5% 수성 LiCl(2×), 1M 수성 NaOH(3×), 포화 수성 NaCl(1×)로 세척한 후, 건조시키고(Na₂SO₄), 증발시켜 조생성물을 수득하였다(96.3% 순도;¹HNMR에 의해 HMPA 조사). 그 다음, 이 조생성물을 실리카 겔(DCM중의 MeOH의 5 내지 15% 구배)의 매우 짧은 칼럼(3㎝)을 통과시켜 정제시켰으며, 여기서 소량의 신속하게 이동하는 3E-이성체가 제거되었다. 순수한 분획물을 증발시키고, 밤새도록 포화 EtOAc 용액으로부터 재결정화시켰으며, 이를 Et₂O로 희석시키고(약 3배), 0℃에서 냉각시시켰다. 모액을 폐기시키고완전 진공시켜 목적하는 화합물을 오렌지색 결정으로서 수득하였다(153㎎, 85%).

상기 실시예 1에 기술된 바와 같이 실시하되, (3Z)-3-(3,5-디메틸-4-카복시-1H-피롤-2-일메틸리덴)-5-플루오로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온을 (3Z)-3-(3,5-디메틸-4-카복시-1H-피롤-2-일메틸리덴)-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온으로 치환시켜 (3Z)-3-{[3,5-디메틸-4-(모르폴린-4-일)피페리딘-1-일카보닐]-1H-피롤-2-일메틸리덴}-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온을 수득하였다.

상기 실시예 1에 기술된 바와 같이 실시하되, (3Z)-3-(3,5-디메틸-4-카복시-1H-피롤-2-일메틸리덴)-5-플루오로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온을 (3Z)-3-(3,5-디메틸-4-카복시-1H-피롤-2-일메틸리덴)-5-클로로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온으로 치환시켜 (3Z)-3-{[3,5-디메틸-4-(모르폴린-4-일)피페리딘-1-일카보닐]-1H-피롤-2-일메틸리덴}-5-클로로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온을 수득하였다.

상기 실시예 1에 기술된 바와 같이 실시하되, 4-(모르폴린-4-일)-피페리딘을 시판중인 4-(1-피롤리디닐)-피페리딘으로 치환시켜 (3Z)-3-{[3,5-디메틸-4-[4-(피롤리딘-1-일)피페리딘-1-일카보닐]-1H-피롤-2-일)메틸리덴}-5-플루오로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온을 수득하였다.

¹H NMR (400 MHz, d₆-DMSO) δ E/Z 이성체 혼합물; LCMSm/z437 [M+1]⁺

상기 실시예의 합성은 전반적으로 참고로 인용되고 있는 미국 가특허출원 제 60/328,226 호(2001년 10월 10일자로 출원됨) 및 현재의 미국 특허출원 제 호(2002년 10월 10일자로 출원됨)의 절차에 따라 진행시킬 수 있다.

실시예 2

(3Z)-3-{[3,5-디메틸-4-(모르폴린-4-일)아제티딘-1-일카보닐]-1H-피롤-2-일메틸리덴}-5-플루오로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온의 합성

단계 1

문헌 "Tetrahedron Letters 40(1999) 3761-64"에 기술된 공지의 절차에 따라 2,3-디브로모프로필아민 하이드로브로마이드(58.8밀리몰)로부터 제조된 1-아자비사이클로[1.1.0]부탄의 용액을, 0℃에서 무수 비해리된 에탄올(250㎖)중의 모르폴린(15.7㎖; 180밀리몰)과 황산(96% 용액 3.3g)의 용액에 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 빙욕상에서 교반한 후, 8시간 동안 실온에서 교반하였다. 수산화 칼슘(5.5g) 및 물 100㎖을 첨가하고, 수득된 슬러리를 1시간 동안 교반한 후, 셀라이트 패드를 통해 여과시켰다. 여액을 농축시키고, 감압(20mmHg)하에서증류시켜 물 및 과량의 모르폴린을 제거하였다. 증류 잔류물을 고진공하에서 구겔로(Kugelrohr) 장치를 사용하여 재증류시켜 순수한 33% 수율(2.759g)의 4-(아제티딘-3-일)모르폴린을 무색 오일성 액체로서 수득하였다.

단계 2

(3Z)-3-({3,5-디메틸-4-카복시-1H-피롤-2-일}메틸렌)-5-플루오로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온의 1-(8-아자벤즈트리아졸릴)-에스테르(0.5밀리몰, 210㎎)[DMF(5㎖)중의 후니그(Hunig) 염기(3.0밀리몰, 0.525㎖)의 존재하에 HATU 시약(570㎎, 1.5밀리몰)을 사용하여 (3Z)-3-(3,3-디메틸-4-카복시-1H-피롤-2-일메틸렌)-5-플루오로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온(480㎎; 1.6밀리몰)을 활성화시켜 제조며, 클로로포름(5㎖)을 사용하여 침전시키고 고진공하에 건조시켜 92% 수율(579㎎)로 단리시킴]를 무수 DMA(1.0㎖)중에 현탁시켰다. 무수 DMA(1.0㎖)중의 4-(아제티딘-3-일)모르폴린(142.5㎎, 1밀리몰)의 용액을 적가하고, 수득된 용액을 20분 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 실온에서 오일 펌프를 사용하여 증발시키고, 진한 잔류물을 메탄올과 디에틸 아민의 혼합물(20:1; v/v) 6㎖로 희석시키고, 기계적으로 접종하고, 8시간 동안 냉장고(+3℃)내에 넣었다. 침전물을 (빙냉 메탄올로 간단히 세척하여) 여과시키고, 고진공하에서 건조시켜 목적하는 생성물을 수득하였다. 71.5% 수율(오렌지색 고체 152㎖).

상기 실시예 2에 기술된 바와 같이 실시하되, (3Z)-3-(3,5-디메틸-4-카복시-1H-피롤-2-일메틸리덴)-5-플루오로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온을 (3Z)-3-(3,5-디메틸-4-카복시-1H-피롤-2-일메틸리덴)-5-클로로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온으로 치환시켜 (3Z)-3-{[3,5-디메틸-4-(모르폴린-4-일)아제티딘-1-일카보닐]-1H-피롤-2-일메틸리덴}-5-클로로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온을 오렌지색 고체로서 수득하였다.

상기 실시예 2에 기술된 바와 같이 실시하되, 4-(아제티딘-3-일)모르폴린을 4-(아제티딘-3-일)-시스-3,5-디메틸모르폴린(모르폴린 대신 시스-3,5-디메틸모르폴린을 사용하는 4-(아제티딘-3-일)-모르폴린의 제조방법과 유사한 절차로 제조됨)와 치환시켜 (3Z)-3-{[3,5-디메틸-4-(2,5-디메틸모르폴린-4-일)아제티딘-1-일카보닐]-1H-피롤-2-일메틸리덴}-5-플루오로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온을 오렌지색 고체로서 수득하였다.

상기 실시예 2에 기술된 바와 같이 실시하되, (3Z)-3-(3,5-디메틸-4-카복시-1H-피롤-2-일메틸리덴)-5-플루오로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온을 (3Z)-3-(3,5-디메틸-4-카복시-1H-피롤-2-일메틸리덴)-5-클로로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온으로 치환시키고, 4-(아제티딘-3-일)모르폴린을 4-(아제티딘-3-일)-시스-3,5-디메틸모르폴린으로 치환시켜 (3Z)-3-{[3,5-디메틸-4-(3,5-디메틸모르폴린-4-일)아제티딘-1-일카보닐]-1H-피롤-2-일메틸리덴}-5-클로로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온을 오렌지색 고체로서 수득하였다.

LC/MS: +APCI: M+1=469, 470; -APCI: MI-1=468,469

상기 실시예 1에 기술된 바와 같이 실시하되, 4-(모르폴린-4-일)-피페리딘을 2-(R)-피롤리딘-1-일메틸피롤리딘(아래 기술되는 바와 같이 제조됨)으로 치환시켜 (3Z)-3-{[3,5-디메틸-2R-(피롤리딘-1-일메틸)-피롤리딘-1-일카보닐]-1H-피롤-2-일메틸리덴}-5-플루오로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온을 수득하였다.

2(R)-피롤리딘-1-일메틸피롤리딘의 합성

단계 1

DMF(20㎖)중의 (+)-카보벤질옥시-D-프롤린(1.5g, 6.0밀리몰), EDC(2.3g, 12.0밀리몰) 및 HOBt(800㎎, 12.9밀리몰)의 용액에 트리에틸아민(1.5㎖) 및 피롤리딘(1.0㎖, 12.0밀리몰)을 첨가하였다. 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 포화 NaHCO₃을 첨가하고, 이를 CH₂Cl₂로 추출하였다(3회). 유기 층을 분리시키고, Na₂SO₄상에서 건조시켰다. 용매를 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(EtOAc)에 의해 정제시켜 1-(R)-[N-(벤질옥시카보닐)-피롤릴]피롤리딘을 백색 고체로서 수득하였다(94%).

단계 2

메탄올(15㎖)중의 1-(R)-[N-(벤질옥시카보닐)-피롤릴]피롤리딘(2.7g, 8.9밀리몰)과 5% Pd-C 촉매(270㎎)의 혼합물을 20시간 동안 수소 분위기하에서 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과시키고, 용매를 제거하여 점성 오일로서 2(R)-프롤릴피롤리딘을 수득하였으며(80%), 이는 다음 단계를 위해 추가의 정제 공정없이 사용되었다.

단계 3

2-(R)-프롤릴피롤리딘(1.2g, 7.1밀리몰)을 THF(10㎖)중에 용해시켰다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, THF중 1M BH₃(10㎖, 10밀리몰)을 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 환류시켰다. 3M HCl(4.7㎖)과 2M NaOH 용액을 pH 10가 도달될 때까지 첨가하였다. 생성물을 CH₂Cl₂중의 5% MeOH로 추출시켰다(3회). 유기 층을 Na₂SO₄상에서 건조시키고, 용매를 제거하여 표제 화합물을 연한 황색 액체로서 수득하였으며(73%), 이는 다음 단계를 위해 추가의 정제 공정없이 사용되었다.

상기 실시예 1에 기술된 바와 같이 실시하되, 4-(모르폴린-4-일)-피페리딘을 2-(S)-피롤리딘-1-일메틸피롤리딘(상기 기술된 바와 같이, (+)-카보벤질옥시-D-프롤린을 카보벤질옥시-L-프롤린으로 치환시켜 제조됨)으로 치환시켜 (3Z)-3-{[3,5-디메틸-2S-(피롤리딘-1-일메틸)피롤리딘-1-일카보닐]-1H-피롤-2-일메틸리덴}-5-플루오로-1,3-디하이드로-2H-인돌-2-온을 수득하였다.

실시예 3

5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴-메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산의 합성

단계 1

디메틸포름아미드(25㎖, 3당량)를 빙욕에서 교반하면서 냉각하였다. 여기에 POCl₃(1.1당량, 10.8㎖)을 첨가하였다. 30분 후, DMF(2M, 40㎖)중의 3,5-디메틸-4-에틸에스테르 피롤(17.7g, 105.8밀리몰)의 용액을 반응물에 첨가하고 교반을 계속하였다. 2시간 후, 반응물을 물(250㎖)로 희석하고 1N 수성 NaOH로 pH 11로 염기화하였다. 여과하여 백색 고체를 제거하고, 물과, 이어서 헥산으로 헹구고 건조하여 황갈색 고체로서 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 에틸 에스테르(19.75g, 95%)을 수득하였다.

단계 2

5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 에틸 에스테르(2g, 10밀리몰)를 메탄올(3㎖)에 용해시킨 수산화 칼륨((3g, 53밀리몰)의 용액에 첨가하였다. 이 혼합물을 3시간 동안 환류하고 실온으로 냉각하고 6N 염산으로 pH 3으로 산성화시켰다. 여과하여 고체를 수거하고 물로 세척하고 진공 오븐에서 밤새도록 건조하여 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(1.6g, 93%)을 수득하였다.

단계 3

5-플루오로이사틴(8.2g, 49.7밀리몰)을 하이드라진 수화물 50㎖에 용해시키고 1시간 동안 환류하였다. 그 다음, 반응 혼합물을 얼음물에 부었다. 그 다음, 침전물을 여과하고 물로 세척하고 진공 오븐에서 건조하여 5-플루오로-2-옥스인돌(7.5g)을 수득하였다.

단계 4

에탄올(3㎖)중의 5-플루오로옥신돌(100mg, 0.66밀리몰), 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(133㎎, 0.79밀리몰) 및 피페리딘 10 방울의 반응 혼합물을 60℃에서 밤새도록 교반하고 여과하였다. 고체를 1M의 염산 수용액, 물로 세척하고, 건조하여 황색 고체로서 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(201㎎, 정량적)을 수득하였다. MS m/z(상대적 강도, %) 299 ([M-1]^+., 100).

실시예 4

5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 (3-디에틸아미노-2-하이드록시-프로필)-아미드의 합성

단계 1

30℃에서 물(3.08g, 0.17몰)과 디에틸아민(106.2㎖, 1.03몰)의 혼합물을 2-클로로메틸옥시란(95g, 1.03몰)에 첨가하였다. 그 후, 반응 혼합물을 28 내지 35℃에서 6 시간 동안 교반하고, 20 내지 25℃로 냉각하여 1-클로로-3-디에틸아미노-프로판-2-올을 수득하였다.

단계 2

물 78㎖중의 수산화 나트륨(47.9g, 1.2몰)의 용액에 1-클로로-3-디에틸아미노-프로판-2올을 첨가하였다. 생성물을 20 내지 25℃에서 1시간 동안 교반하고, 물 178㎖로 희석하고, 에테르로 2회 추출하였다. 합쳐진 에테르 용액을 고체 수산화 칼륨으로 건조시키고 증발시켜 조질 생성물 135g을 수득하고, 이를 분별 증류로 정제하여, 오일로서 순수한 글리시딜디에틸아민(98g, 76%)을 수득하였다.

단계 3

10분에 걸쳐 글리시딜디에틸아민(3.2g, 24.8밀리몰)을 25%(w/w)의 수산화 암모늄(25㎖, 159밀리몰)의 빙냉 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 0-5℃에서 1시간 동안 교반 후, 실온에서 14시간 동안 교반하였다. 생성된 반응 혼합물을 증발시키고 증류시켜(500 내지 600mT에서 84 내지 90℃로) 1-아미노-3-디에틸아미노-프로판-2-올(3.3g, 92%)을 수득하였다. MS m/z 147 ([M+1]^+.).

단계 4

1-아미노-3-디에틸아미노-프로판-2-올(93.2㎎, 0.64밀리몰)을 DMF 1.0㎖중의 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(100㎎, 0.43밀리몰), EDC(122.7㎎, 0.64밀리몰) 및 HOBt(86.5㎎, 0.64밀리몰)의 용액에 첨가하였다. 생성된 반응 용액을실온에서 밤새도록 교반하고 증발시켰다. 잔류물을 물 10㎖중에 현탁시키고 여과하였다. 고체를 포화 중탄산 나트륨 및 물로 세척하고, 고진공 오븐에서 밤새도록 건조하여 조질 생성물을 수득하고, 이를 트리에틸아민(2방울/6% 메탄올-디클로로메탄 100㎖)을 함유하는 6%의 메탄올-디클로로메탄으로 용리하는 칼럼 크로마토그래피로 정제시켜, 황색 고체로서 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 (3-디에틸아미노-2-하이드록시-프로필)-아미드(62㎎, 34%)을 수득하였다.

실시예 5

5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴-메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 (2-하이드록시-3-모르폴린-4일-프로필)-아미드 (R), (S) 및 (R/S)(화합물(4), (5) 및 (6))의 합성

단계 1

에탄올(50㎖)중의 모르폴린(2.6㎖, 30밀리몰)과 에피클로로하이드린(2.35㎖, 30밀리몰)의 혼합물을 70℃에서 밤새도록 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 염화 메틸렌(50㎖)으로 희석하였다. 진공 여과에 의해 투명한 고체 침전물을수거하여, 1-클로로-3-모르폴린-4-일-프로판-2-올(2.0g, 37%)을 수득하였다.

단계 2

1-클로로-3-모르폴린-4-일-프로판-2-올(2.0g, 11밀리몰)을 실온에서 메탄올중의 NH₃용액(25중량%, 20㎖)으로 처리하였다. 질소를 반응 혼합물내로 폭기시켜 암모니아를 제거하였다. 용매를 증발시켜, 1-아미노-3-모르폴린-4-일-프로판-2-올의 염화 수소염(2.0g, 91%)을 수득하였다.

단계 3

5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(120㎎, 0.4밀리몰)을 1-아미노-3-모르폴린-4-일-프로판-2-올(74㎎, 0.48밀리몰)과 축합시켜 5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 (2-하이드록시-3-모르폴린-4-일-프로필)-아미드(65㎎, 36%)를 수득하였다. 모액을 증발 건조시키고 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피로 정제시켜, 2N(70㎎, 39%)을 추가 수득하였다.

2-하이드록시-7-옥사-4-아조니아스피로[3.5]노난 클로라이드의 합성

열전쌍, 질소 주입구 및 250㎖ 부가 깔대기가 장착된 1ℓ 용량의 3구 환저 플라스크에 모르폴린(91.5g, 91.5㎖, 1.05몰, 1.0당량) 및 에탄올 100㎖를 충전시켰다. 에피클로로하이드린(100g, 84.5㎖, 1.08몰, 1.03당량)을 부가 깔대기를 통해 약 30분에 걸쳐 첨가하면서, 용액을 빠른 속도로 교반하였다. 온도를 모니터링하면서, 포트 온도가 27℃에 도달했을 때에 반응물을 빙욕으로 냉각시켰다. 투명한 용액을 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 GC로 분석하였다(5방울의 반응 혼합물을 에탄올 1㎖로 희석하고 하기 수행 조건을 갖는 15m DB-5 모세관 GC 칼럼으로 주입하였다: 주입기 250℃, 검출기 250℃, 초기 오븐 온도 28℃, 1분당 10℃씩 가열하여 250℃까지 가열.) 3% 미만의 모르폴린이 남아 있을 때 반응을 완결시켰다. 반응물을 50℃에서 풀 하우스(full house) 진공으로 회전증발시켜, 더 이상의 증류액이 축합될 수 없을 때까지 농축시켰다. 생성된 오일을 실온에서 24 내지 48시간 동안 보관하거나, 또는 상당한 양의 결정이 관찰될 때까지 보관하였다(시딩하는 경우에 공정이 가속될 것이다). 슬러리를 아세톤 250㎖로 희석하고 여과하였다. 진공 오븐에서 고체를 60℃에서 18 내지 24시간 동안 건조시켜, 84g의 결정 생성물을 수득하였다. 모액을 농축하여, 회수를 증가시키기 위해 결정화 공정을 반복하여 회수를 증가시킬 수 있다.

1-아미노-3-(4-모르폴리닐)-2-프로판올(라세미체)의 합성

자기 교반 막대가 있는 3ℓ 용량의 1구 환저 플라스크에 2-하이드록시-7-옥사-4-아조니아스피로[3.5]노난 클로라이드(150g, 835밀리몰)을 첨가한 후, 메탄올(2120㎖)중의 23중량%의 무수 암모니아를 첨가하였다. 플라스크를 마개로 막고 생성된 투명한 용액을 20 내지 23℃에서 18시간 동안 교반하였다. 상기 조건 하의 GC 수행 결과 잔존 출발 물질이 발견되지 않았다. 마개를 제거하고 용액에 암모니아를 30분간 폭기시켰다. 그 후, 플라스크를 이동하여 45℃ 욕 및 풀 하우스 진공을 이용하여 회전증발시키고 농축시켜 백색 고체를 수득하였다.

2-(RS)-1-아미노-3-모르폴린-4-일-프로판-2-올을 하기한 바와 같이 제조된2-(S)-1-아미노-3-모르폴린-4-일-프로판-2-올로 대체한 것을 제외하고는, 상기 실시예 3에 기술된 방법에 따라, 원하는 화합물인 5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 (2-(S)-하이드록시-3-모르폴린-4-일-프로필)-아미드를 수득하였다.

1-아미노-3-(4-모르폴리닐)-2-프로판올(비라세미체)의 합성

기계적 교반기, 열전쌍 및 부가 깔대기가 장착된 1ℓ 용량의 3구 환저 플라스크에 모르폴린(91.5g, 91.5㎖, 1.05몰, 1.0당량) 및 t-부탄올 45㎖를 충전시켰다. R-에피클로로하이드린(100g, 84.5㎖, 1.08몰, 1.03당량)을 부가 깔대기를 통해 약 30분에 걸쳐 첨가하면서, 용액을 빠른 속도로 교반하였다. 온도를 모니터링하면서, 포트 온도가 27℃에 도달했을 때에 반응물을 빙욕으로 냉각시켰다. 투명한 용액을 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 GC로 분석하였다(5방울의 반응 혼합물을 에탄올 1㎖로 희석하고 하기 수행 조건을 갖는 15m DB-5 모세 GC 칼럼으로 주입하였다: 주입기 250℃, 검출기 250℃, 초기 오븐 온도 28℃, 1분당 10℃씩 가열하여 250℃까지 가열.) 3% 미만의 모르폴린이 남아 있을 때 반응을 완결시켰다. 용액을 10℃로 냉각시키고, 15℃ 미만의 온도를 유지하면서 THF중의 칼륨 t-부톡사이드(576g)의 20중량% 용액을 적가하였다. 생성된 백색 슬러리를 10 내지 15℃에서 2시간 교반하고, 상기 조건을 이용하여 GC로 검사하였다. 클로로하이드린이 관찰되지 않았다. 혼합물을 50℃ 욕 및 풀 하우스 진공을 이용하여 회전증발시키고농축시켰다. 생성된 혼합물을 물(500㎖) 및 염화 메틸렌으로 희석하였다. 상들을 분리하고 수성상을 염화 메틸렌(500㎖)으로 세척하였다. 합쳐진 유기층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 농축시켜 투명한, 무색 오일로서, 145g, 97% 수율의 에폭사이드를 수득하였다.

자기 교반 막대가 있는 3ℓ 용량의 1구 환저 플라스크에 상기 조질 에폭사이드를 충전시켰다. 메탄올중의 무수 암모니아(24% w/w 2.5ℓ)를 첨가하고, 플라스크를 마개로 막고 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 상기 조건 하의 GC 수행 결과 잔존 출발 물질이 발견되지 않았다. 마개를 제거하고 용액에 암모니아를 30분간 폭기시켰다. 그 후, 플라스크를 이동하여 45℃ 욕 및 풀 하우스 진공을 이용하여 회전증발시키고 농축시켜 투명한 무색 오일로서 124g의 생성물을 수득하였다.

1-아미노-3-(4-모르폴리닐)-2-(S)-프로판올의 합성

기계적 교반기, 열전쌍 및 부가 깔대기가 장착된 1ℓ 용량의 3구 환저 플라스크에 모르폴린(91.5g, 91.5㎖, 1.05몰, 1.0당량) 및 메탄올 200㎖를 충전시켰다. R-에피클로로하이드린(100g, 84.5㎖, 1.08몰, 1.03당량)을 부가 깔대기를 통해 약30분에 걸쳐 첨가하면서, 용액을 빠른 속도로 교반하였다. 온도를 모니터링하면서, 포트 온도가 27℃에 도달했을 때에 반응물을 빙욕으로 냉각시켰다. 투명한 용액을 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 GC로 분석하였다(5방울의 반응 혼합물을 에탄올 1㎖에 넣어 희석하고 하기 수행 조건을 갖는 15m DB-5 모세 GC 칼럼으로 주입하였다: 주입기 250℃, 검출기 250℃, 초기 오븐 온도 28℃, 1분당 10℃씩 가열하여 250℃까지 가열.) 3% 미만의 모르폴린이 남아 있을 때 반응을 완결시켰다. 용액을 10℃로 냉각시키고, 15℃ 미만의 온도를 유지하면서 메탄올중의 나트륨 메톡사이드의 25중량% 용액(233g, 1.08몰, 247㎖)을 적가하였다. 생성된 백색 슬러리를 10 내지 15℃에서 2시간 교반하고, 상기 조건을 이용하여 GC로 검사하였다. 클로로하이드린이 관찰되지 않았다. 혼합물을 50℃ 욕 및 풀 하우스 진공을 이용하여 회전증발시키고 농축시켰다. 생성된 혼합물을 물(500㎖) 및 염화 메틸렌으로 희석하였다. 상을 분리하고 수성상을 염화 메틸렌(500㎖)으로 세척하였다. 합쳐진 유기층을 황산 나트륨 상에서 건조시키고 농축시켜 투명한, 무색 오일로서, 145g, 97% 수율의 1,2-에폭시-3-모르폴린-4-일프로판을 수득하였다.

자기 교반 막대가 있는 3ℓ 용량의 1구 환저 플라스크에 상기 조질 1,2-에폭시-3-모르폴린-4-일프로판을 충전시켰다. 메탄올중의 무수 암모니아(24% w/w 2.5ℓ)를 첨가하고, 플라스크를 마개로 막고 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 상기 조건 하의 GC 수행 결과 잔존 출발 물질이 발견되지 않았다. 마개를 제거하고 용액에 암모니아를 30분간 폭기시켰다. 그 후, 플라스크를 이동하여 45℃ 욕 및 풀 하우스 진공을 이용하여 회전증발시키고 농축시켜 투명한 무색 오일로서 1-아미노-3-(4-모르폴리닐)-2-(S)-프로판올 124g을 수득하였다.

이미다졸 아미드(7.0g, 32.3밀리몰), 아민(15.0g, 64.6밀리몰), 5-플루오로옥신돌(4.93g, 32.6밀리몰), 트리에틸아민(9.79g, 96.9밀리몰) 및 THF(88㎖)를 혼합하고 60℃로 가열하였다. 갈색 용액이 형성되었다. 60℃에서 24시간 동안 교반 후, 황색 슬러리를 실온으로 냉각시키고 여과하였다. 케이크를 THF 80㎖로 세척하고 50℃에서 밤새도록 하우스 진공하에서 건조시켰다. 갈색 고체(23.2 g)를 수득하였다. 그 고체를 실온에서 5시간 동안 물 350㎖중에서 슬러리화시키고 여과시켰다. 케이크를 물 100㎖로 세척하고 50℃에서 밤새도록 하우스 진공하에서 건조시켰다. 8.31g을 수득하였고, 화학적 수율은 56%이다.

온도계, 축합기, 자기 교반기, 및 질소 주입구가 장착된 0.25ℓ 용량의 플라스크에 5-플루오로옥신돌 4.92g, 이미다졸 아미드 7.0g, (R)-1-아미노-3-(4-모르폴리닐)-2-프로판올 15.5g, 트리에틸아민 9.78g 및 테트라하이드로푸란 88㎖를 충전시켰다. 반응 혼합물을 16.5시간 동안 60℃로 가열하였다. 반응물을 주변 온도로 냉각시키고 여과시켰다. 수득된 고체를 11㎖/g으로 아세토니트릴 중에서 3회 연속으로 슬러리화하고, 진공에서 건조시켜 3.6g(25.25%)을 수득하였다. [HPLC, 하이퍼실 BDS, C-18, 5μ, (6:4), 아세토니트릴: 0.1M 염화 암모늄, PHA-571437 = 4.05 분.]

실시예 6

2,4-디메틸-5-[2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-1H-피롤-3-카복실산 (2-하이드록시-3-모르폴린-4-일-프로필)-아미드의 합성

5-(2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(113㎎, 0.4밀리몰)을 1-아미노-3-모르폴린-4-일-프로판-2-올(74㎎, 0.48밀리몰)과 축합시켜 2,4-디메틸-5-[2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-1H-피롤-3-카복실산 (2-하이드록시-3-모르폴린-4일-프로필)-아미드(77㎎, 45.3%)를 침전시켰다.

실시예 7

5-[5-클로로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴-메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 (2-하이드록시-3-모르폴린-4일-프로필)-아미드(화합물(7))의 합성

5-(5-클로로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(126.6㎎, 0.4밀리몰)을 1-아미노-3-모르폴린-4-일-프로판-2-올(74㎎, 0.48밀리몰)과 축합시켜 5-[5-클로로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 (2-하이드록시-3-모르폴린-4일-프로필)-아미드(107㎎, 58%)를 침전시켰다.

실시예 8

5-[5-브로모-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 (2-하이드록시-3-모르폴린-4-일-프로필)-아미드의 합성

5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(72.2㎎, 0.2밀리몰)을 1-아미노-3-모르폴린-4-일-프로판-2-올(38㎎, 0.24밀리몰)과 축합시켜 5-[5-브로모-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 (2-하이드록시-3-모르폴린-4-일-프로필)-아미드(55㎎, 55%)를 침전시켰다.

실시예 9

2,4-디메틸-5-[2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴-메틸]-1H-피롤-3-카복실산 (2-하이드록시-3-[1,2,3]트리아졸-1-일-프로필)-아미드의 합성

단계 1

에탄올(50㎖)중의 3-[1,2,3]트리아졸(2.0g, 29밀리몰), 에피클로로하이드린(3.4㎖, 43.5밀리몰) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(2.6㎖, 15밀리몰)의 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피(CH₂Cl₂/CH₃OH=100/1-100/2-100/4)로 정제하여 1-클로로-3-(1,2,3)트리아졸-2-일프로판-2-올(2.1g, 45%)을 수득하였다.

단계 2

60℃에서 밤새도록 밀봉된 가압 용기에서 1-클로로-3-(1,2,3)트리아졸-1-일프로판-2-올(2.3g, 13밀리몰)을 메탄올중의 NH₃용액(25중량%, 20㎖)으로 처리하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 질소를 반응 혼합물로 폭기시켜 암모니아를 제거하였다. 용매를 증발시켜 1-아미노-3-(1,2,3)트리아졸-1-일-프로판-2-올(2.57g, 100%)을 수득하였다.

단계 3

5-(2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(113㎎, 0.4밀리몰)을 1-아미노-3-(1,2,3)트리아졸-1-일-프로판-2-올(85㎎, 0.48밀리몰)과 축합시켜 2,4-디메틸-5-[2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-1H-피롤-3-카복실산 (2-하이드록시-3-[1,2,3]트리아졸-1-일-프로필)-아미드(70㎎,41%)를 수득하였다.

실시예 10

5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴-메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 (2-하이드록시-3-[1,2,3]트리아졸-1-일-프로필)-아미드의 합성

5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(120㎎, 0.4밀리몰)을 1-아미노-3-(1,2,3)트리아졸-1-일-프로판-2-올(85㎎, 0.48밀리몰)과 축합시켜 5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 (2-하이드록시-3-[1,2,3]트리아졸-1-일-프로필)-아미드(100㎎, 62%)를 수득하였다.

실시예 11

5-[5-클로로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 (2-하이드록시-3-[1,2,3]트리아졸-1-일-프로필)-아미드의 합성

5-(5-클로로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(126.6㎎, 0.4밀리몰)을 1-아미노-3-(1,2,3)트리아졸-1-일-프로판-2-올(85㎎, 0.48밀리몰)과 축합시켜 5-[5-클로로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 (2-하이드록시-3-[1,2,3]트리아졸-1-일-프로필)-아미드(48㎎, 27%)를 수득하였다.

실시예 12

5-[5-브로모-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 (2-하이드록시-3-[1,2,3]트리아졸-1-일-프로필)-아미드의 합성

5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(144.4㎎, 0.4밀리몰)을 1-아미노-3-(1,2,3)트리아졸-1-일-프로판-2-올(85g, 0.48밀리몰)과 축합시켜 5-[5-브로모-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 (2-하이드록시-3-[1,2,3]트리아졸-1-일-프로필)-아미드(130㎎, 67%)를 수득하였다.

실시예 13

5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(2-디에틸아미노-에틸)-아미드(화합물(1))

5-플루오로-1,3-디하이드로인돌-2-온(0.54g, 3.8밀리몰)을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 (2-디에틸아미노에틸)아미드로 축합시켜 표제 화합물을 0.83G(55%)을 황녹색 고체로서 수득하였다.

5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(2-디에틸아미노-에틸)-아미드의 다른 합성

하이드라진 하이드레이트(55%, 3000㎖) 및 5-플루오로이사틴(300g)을 100℃로 가열하였다. 추가의 5-플루오로-이사틴(500g)을 교반하면서 120분에 걸쳐 적가하였다(100g). 혼합물을 110℃로 가열하고 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 고체를 진공 여과를 통해 수거하여 조질의 (2-아미노-5-플루오로-페닐)-아세트산 하이드라자이드(748g)를 수득하였다. 하이드라자이드를 물(700㎖)중에 현탁시키고, 12N 염산을 사용하여 혼합물의 pH를 3 미만으로 조정하였다. 혼합물을 12시간 동안 실온에서 교반하였다. 고체를 진공 여과에 의해 수거하고, 물로 2회 세척하였다. 생성물을 진공하에 건조시켜 5-플루오로-1,3-디하이드로-인돌-2-온(600g, 73% 수율)을 갈색 분말로서 수득하였다.

¹H NMR (디메틸설폭사이드-d₆) δ 3.46(s, 2H, CH₂), 6.75, 6.95, 7.05(3 x m, 3H, 방향족), 10.35 (s,1H, NH). MS m/z 152[M+1].

3,5-디메틸-1H-피롤-2,4-디카복실산 2-tert-부틸 에스테르 4-에틸 에스테르(2600g) 및 에탄올(7800㎖)을 격렬하게 교반하면서 10N 염산(3650㎖)을 서서히 첨가하였다. 온도는 25℃로부터 35℃까지 증가하고, 기체 방출이 시작되었다. 혼합물을 54℃로 가온시키고, 1시간 동안 추가로 가열하면서 교반하였으며, 이때 온도는 67℃이었다. 혼합물을 5℃로 냉각시키고, 얼음과 물 32ℓ를 교반하면서 서서히 첨가하였다. 고체를 진공 여과에 의해 수거하고, 물로 3회 세척하였다. 고체를 일정한 중량으로 공기 건조시켜 2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 에틸 에스테르(1418g, 87% 수율)를 분홍색 고체로서 수득하였다.

¹H NMR (디메틸설폭사이드-d₆) δ2.10, 2.35 (2xs, 2x3H, 2xCH₃), 4.13(q, 2H, CH₂), 6.37 (s, 1H, CH), 10.85 (s,1H, NH). MS m/z 167[M+1].

디메틸포름아미드(322g) 및 디클로로메탄(3700㎖)을 얼음조내에서 4℃로 냉각시키고, 포스포러스 옥시클로라이드(684g)를 교반하면서 첨가하였다. 고체 2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 에틸 에스테르(670g)를 분취량으로 15분에 걸쳐 서서히 첨가하였다. 도달된 최대 온도는 18℃이었다. 혼합물을 1시간 동안 환류 가열시키고, 얼음조내에서 10℃로 냉각시키고, 빙수 1.6ℓ를 격렬하게 교반하면서 신속하게 첨가하였다. 온도는 15℃로 증가하였다. 10N 염산(1.6ℓ)을 격렬하게 교반하면서 첨가하였다. 혼합물은 22℃로 증가하였다. 혼합물을 30분 동안 정치시키고, 층들을 분리시켰다. 혼합물은 최대 40℃에 도달하였다. 수성 층을 온도가 첨가 기간 동안 55℃에 도달하여 이 온도로 유지하도록 하는 일정 비율로 10N 수산화 칼륨(3.8ℓ)을 사용하여 pH 12 내지 13로 조정하였다. 첨가가 완료된 후, 혼합물을 10℃로 냉각시키고, 1시간 동안 교반하였다. 고체를 진공 여과에 의해 수거하고, 물로 4회 세척하여 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 에틸 에스테르(778g, 100% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다.

¹H NMR (DMSO-d₆) δ1. 25 (t, 3H, CH₃), 2.44, 2.48 (2xs, 2x3H, 2xCH₃), 4.16 (q, 2H, CH₂), 9.59 (s, 1H, CHO), 12.15 (br s,1H, NH). MS m/z 195 [M+1].

5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 에틸 에스테르(806g), 수산화 칼륨(548g), 물(2400㎖) 및 메탄올(300㎖)을 교반하면서 2시간 동안 환류시킨 후, 8℃로 냉각시켰다. 혼합물을 디클로로메탄으로 2회 추출하였다. 온도를 15℃ 이하로 유지하면서, 10N 염산 1000㎖를 사용하여 수서 층을 pH 4로 조정하였다. 물을 첨가하여 교반을 촉진시켰다. 고체를 진공 여과에 의해 수거하고, 물로 3회 세척하고, 50℃에서 진공 건조시켜 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(645g, 93.5% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.

¹H NMR (DMSO-d₆) δ2.40, 2.43 (2xs, 2x3H, 2xCH₃), 9.57 (s,1H, CHO), 12.07 (br s, 2H, NH+COOH). MS m/z 168 [M+1].

5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(1204g) 및 디메틸포름아미드 6020㎖를 실온에서 교반하면서, 1-(3-디메틸-아미노프로필-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(2071g), 하이드록시벤조트리아졸(1460g), 트리에틸아민(2016㎖) 및 디에틸에틸렌디아민(1215㎖)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 3000㎖, 염수 2000㎖ 및 포화 중탄산 나트륨 용액 3000㎖으로 희석시키고, 10N 수산화 나트륨을 사용하여 pH를 10 초과로 조정하였다. 혼합물을 디클로로메탄중의 10% 메탄올 5000㎖로 매번 2회 추출하고, 추출물을 합치고, 무수 황산마그네슘상에서 건조시키고, 회전 증발 건조시켰다. 혼합물을 톨루엔 1950㎖로 희석시키고, 회전 증발 건조시켰다. 잔류물을 3:1 헥산:디에틸 에테르(4000㎖)로 분쇄시켰다. 고체를 진공 여과시켜 수거하고, 에틸 아세테이트 400㎖로 2회 세척하고, 21시간 동안 34℃에서 진공하에 건조시켜 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 (2-디에틸아미노-에틸)-아미드(819g, 43% 수율)를 밝은 갈색 고체로서 수득하였다.

¹H NMR (디메틸설폭사이드-d6) δ0.96 (t, 6H, 2xCH₃), 2.31, 2.38 (2xs, 2 xCH₃), 2.51 (m, 6H 3xCH₂), 3.28 (m, 2H,CH₂), 7.34 (m, 1H, 아미드 NH), 9.56 (s,1H, CHO), 11.86 (s,1H, 피롤 NH). MS m/z 266[M+1].

5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(2-디에틸아미노-에틸)-아미드(809g), 5-플루오로-1,3-디하이드로-인돌-2-온(438g), 에탄올(8000㎖) 및 피롤리딘(13㎖)을 3시간 동안 78℃로 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 고체를 진공 여과시켜 수거하고, 에탄올로 세척하였다. 고체를 30분 동안 72℃에서 에탄올(5900㎖)로 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 고체를 진공 여과시켜 수거하고, 에탄올로 세척하고, 130시간 동안 54℃에서 진공하에 건조시켜 5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 (2-디에틸아미노-에틸)-아미드(1013g, 88% 수율)를 오렌지색 고체로서 수득하였다.

¹H NMR (디메틸설폭사이드-d6) δ 0.98 (t, 6H, 2xCH₃), 2.43, 2.44 (2xs, 6H, 2xCH₃), 2.50 (m, 6H, 3xCH₂), 3.28 (q, 2H, CH₂), 6.84, 6.92, 7.42, 7.71, 7.50(5xm,5H, 방향족, 비닐, CONH), 10.88 (s,1H, CONH), 13.68 (s,1H, 피롤 NH). MS m/z 397 [M-1].

5-[5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산 (2-디에틸아미노-에틸)-아미드의 말릭 염은, 전반적으로 참고로 인용되고 있는, 미국 가특허출원 제 60/312,353 호(2001년 8월 15일자로 출원됨)를 우선권 주장하는 미국 특허출원 제 10/281,985 호(2002년 8월 13일자로 출원됨)의 개시내용에 따라 제조한다.

5-(5-브로모-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산, 5-(5-클로로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산, 5-(2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산의 합성은, 2001년 2월 14일자로 출원된 출원인의 특허출원 제09/783,264 호 "피롤 치환된 2-인돌리논-단백질 키나제 억제제(PYRROLE SUBSTITUTED 2-INDOLINONE-PROTEIN KINASE INHIBITORS)"에 기술되어 있고, 이 문헌의 개시내용은 그 전체가 본원에 인용되어 있다.

실시예 14

5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(2-피롤리딘-1-일-에틸)-아미드(화합물(2))

5-플루오로-1,3-디하이드로-인돌-2-온을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(2-피롤리딘-1-일-에틸)-아미드로 축합시켜 표제 화합물을 수득하였다.

MS + ve APCI 397[M+1]

실시예 15

5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(2-에틸아미노-에틸)-아미드(화합물(8))

5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(2-에틸아미노-에틸)-아미드(99g), 에탄올(400㎖), 5-플루오로-2-옥스인돌(32g) 및 피롤리딘(1.5g)을 교반하면서 3시간 동안 환류시켰다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 고체를 진공 여과에 의해 수거하였다. 고체를 60℃에서 에탄올중에서 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 진공 여과에 의해 수거하였다. 생성물을 진공하에 건조시켜 5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-(3Z)-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(2-에틸아미노-에틸)-아미드(75g, 95% 수율)를 수득하였다.

¹H NMR (디메틸설폭사이드-d6) δ 1.03 (t, 3H, CH₃), 2.42, 2.44 (2xs, 6H, 2xCH₃), 2.56 (q, 2H, CH₂), 2.70, 3.30 (2xt, 4H, 2xCH₂), 6.85, 6.92, 7.58, 7.72, 7.76(5xm, 5H, 방향족, 비닐 및 CONH), 10.90(br s, 1H, CONH), 13.65(br s, 1H, 피롤 NH). MS m/z 369[M-1].

실시예 16

3-[5-메틸-2-(2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-1H-피롤-3-일]-프로피온산(화합물(10))

1,3-디하이드로인돌-2-온을 3-(2-포르밀-5-메틸-1H-피롤-3-일)-프로피온산과 축합시켜 표제 화합물을 수득하였다.

실시예 17

5-(5-플루오로-2-옥소-1,2-디하이드로-인돌-3-일리덴메틸)-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복실산(2-모르폴린-4-일-에틸)-아미드(화합물(3))

5-플루오로-1,3-디하이드로-인돌-2-온을 5-포르밀-2,4-디메틸-1H-피롤-3-프로피온산 (2-모르폴린-1-일-에틸)-아미드와 축합시켜 표제 화합물을 수득하였다.

생물학적 실시예

사용된 제 1 세포주는 FLT-3 티로신 키나제를 발현시키는 것으로 알려진 OC1-AML5 세포주이었다. 이 세포주를 액체 배양액중의 성장이 유지되도록 사이토킨을 함유하는 통상의 배지중에 유지시켰다. 이 세포주는, FLT-3를 억제할 수 있는 FLT-3 리간드와 화합물에 의한 FLT-3 신호화의 활성화와 억제를 평가하는 모델을 제공한다. FLT-3의 생물학적 결과는 이 세포주를 사용하여 평가될 수 있다.

실시예 1 - FLT-3 신호화의 평가

세포를 FLT-3 리간드로 자극하고 용해시켰다. FLT-3를 용해물(lysate)로부터 시판중인 항체로 면역침전시켰다. 단백질을 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기 영동에 의해 분리시키고, 멤브레인으로 옮기고, 포스포티로신 및 후속적인 대조군으로서의 총 FLT-3 단백질을 위해 웨스턴 블로팅에 의해 분석하였다.

FLT-3 야생형을 발현시키는 OC1-AML5 세포주를 수득하였다(파마시아(Pharmacia)). 우선, FLT-3를 통해 매개되는 생물학적 반응을 자극하는 FLT-3 리간드의 능력과 상기 반응을 억제하는 화합물(1)의 능력은, 세포 생존력(트리판 청색 분석(trypan blue assay)) 및 세포 증식(알라마 청색 분석(alamar blue assay))의 분석에 의해 평가하였다. 데이터에서는, FLT-3 리간드가 세포수를 증가시키며, 여기서 화합물(1)에 대해 반응하여 어느 정도의 억제가 분명히 일어남을 암시하며, 이로 인해 화합물(1)이 FLT-3을 억제함을 암시한다.

실시예 2 - 면역침전/웨스턴 분석에 의한 FLT-3 발현과 인산화

(i) OC1-AML5 세포

OC1-AML5 세포를 사용하면, FLT-3 리간드가 FLT-3의 인산화를 자극하는 것으로 관찰되었다. 인산화는 화합물(1)에 의해 감소하며, 이는 화합물(1)이 FLT-3 수용체를 억제하는 것을 확인시키는 것이다.

FLT-3 리간드에 의해 특히 Stat5 및 erk에 대한 다운스트림 경로의 활성화를 조사하였다. Stat5 및 erk는 RTK 신호화의 다운스트림 매개자이며, FLT-3 신호화에 대한 해독(readout)을 제공할 수 있다. Stat5는 세포 생존 및 증식과 관련된 다수의 유전자를 조절하는 전사 인자이다. Erk1/2는 Raf 신호화 경로상의 키나제이다. Stat5의 활성화는 FLT-3 리간드에 대해 3차례의 시도에 의해 관찰된다: IP/웨스턴, 포스포-특이적 항체를 사용하는 직접 웨스턴, 및 겔 이동 분석. Stat5 활성은 화합물(1)에 의해 억제되었다. erk1/2의 인산화는 또한 FLT-3 리간드에 의해 활성화되고 화합물(1)에 의해 억제되는 반면, IL-3-의존적 erk 활성화는 억제되지 않으며, 이는 화합물(1)의 효과가 특이적임을 암시한다.

(ii) 정상 PBMC

정상 혈액 세포에서의 FLT-3 신호화를 조사하기 위해, 말초 혈액 단핵구 세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)를 정상 공여 혈액으로부터 단리시켜 FLT-3 신호화의 분석에 사용하였다. FLT-3 리간드는 PBMC중의 Stat5 인산화를 자극하였으며, 활성화된 FLT-3이 조금 검출되었다.

실시예 3 - 추가 세포주의 사용; 생체외에서 증식에 대한 화합물(1)의 효과를 조사하기 위한 MV411(ITD 돌연변이 FLT-3)과 RS411(야생형 FLT-3)

이 실시예에서는, OC1-AML5 세포주내에서 관찰되었던 화합물(1)에 의한 FLT-3 신호화의 억제가 또한 야생형(RS411) 또는 돌연변이 FLT-3(MV411)에서 관찰되는지를 측정하기 위해 실시하였다.

세포주는 ATCC로부터 수득하였다. 세포 증식의 분석에서는, 화합물(1)이 RS411(야생형 FLT-3) 및 MV411 둘다의 팽창을 억제한 것으로 나타났다. 이는 화합물(1)이 잠재적으로 백혈병에서의 ITD 돌연변이 FLT-3, 및 또한 야생형 FLT-3을 표적으로 삼는 것을 나타내는 것이다.

ITD 돌연변이 세포가 화합물(1)에 대해 증가된 감도를 나타내는 것을 확인하기 위해, 추가의 실험을 실시하였다. PARP 분할의 분석 및 카스파제 3 착색에 의해 세포사멸을 측정하였다. 상기 둘다의 방법에서는, 화합물(1)이 세포사멸을 초래하며, ITD-돌연변이 세포가 야생형 세포보다 민감한 것으로 나타났다. 도 1 및 2를 참조한다.

실시예 4 - MV411(ITD 돌연변이 FLT-3) 및 RS411(야생형 FLT-3)에서의 FLT-3 인산화에 대한 화합물(1)의 효과

FLT-3를 용해물로부터 시판중인 항체로 면역침전시켰다. 단백질을 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기 영동에 의해 분리시키고, 멤브레인으로 옮기고, 포스포티로신 및 후속적인 대조군으로서의 총 FLT-3 단백질을 위해 웨스턴 블로팅에 의해 분석하였다.

IP/W 분석에서는, 화합물(1)이 MV411(ITD 돌연변이 FLT-3) 및 RS411(야생형 FLT-3) 세포주에서의 FLT-3 인산화를 억제하는 것으로 나타났다. WT 및 ITD 돌연변이 FLT-3에 대한 화합물(1)의 예측 IC₅₀는 각각 250nM 및 50nM이며, 이는 ITD 돌연변이가 화합물(1)에 대해 증가된 감도를 가질 가능성을 뒷받침하는 것이다. 도 3을 참조한다. 비교예는 하기 식을 갖는 공지된 단백질 키나제 억제제이다.

비교 화합물은 야생형 FLT-3 또는 돌연변이 FLT-3의 억제를 전혀 나타내지 않았다.

실시예 5 - 생체외에서 화합물(1)의 효과를 조사하기 위해 MV411(ITD 돌연변이 FLT-3) 및 RS411(야생형 FLT-3)을 사용하는 혈액 스파이크 모델의 구축

혈액 스파이크(spike) 모델은 생체외 모델에서의 임상전 관찰을 임상 상황으로 해석하는 것을 돕도록 개발된 생체밖(ex-vivo) 모델이다. 타겟이 혈액 세포상에서 발현되는 백혈병을 앓는 환자에서, 혈액 세포 또는 모든 혈액에 대한 타겟(예컨대, FLT-3) 인산화의 분석에 의해 약물의 효과를 모니터링하는 것이 요구된다. 혈액 스파이크 모델에서, 해당 수용체를 발현하는 세포는 정상 인간 혈액-공여 혈액내로 스파이킹된다(spike)(정상 혈액은 고도의 타겟 단백질을 발현하지 않는다).화합물 및 리간드는 필요에 따라 첨가되며, 세포를 용해시키고, 면역침전 및 웨스턴 블로팅 분석에 의한 단백질 인산화 및 발현을 위해 분석하였다. 이는 임상적 상황을 모방한 것이며, 타겟을 억제하는데 필요한 화합물의 시간- 및 투여-의존성의 예측이 가능하게 된다.

백혈병에서의 FLT-3 인산화를 억제시키려는 화합물(1)의 능력을 예측하기 위해, FLT-3를 발현시키는 세포주를 정상 인간 공여 혈액에 첨가하고, 인산화의 억제의 역학과 투여-의존성을 측정하였다. 이 방법은, 타겟 인산화의 억제에 요구되는 화합물 노출에 있어, 합성 배지에서 실행된 통상의 생화학적 또는 세포학적 분석보다 정교한 측정을 제공한다.

실시예 6 - MV411 및 RS411 세포를 사용하는 생체내 모델의 구축, 및 종양형성에 대한 화합물(1)의 효과

실시된 실시예에서의 종양 세포, MV411을 무흉선 마우스의 뒷옆구리(hindflank)내에 피하 이식하였다. 종양이 특정 크기에 도달할 때, 화합물 또는 비히클로 제어하는 처리를 시작하였다. 효능을 측정하기 위해, 버니어 캘리퍼(vernier caliper)를 사용하여 다양한 연속적인 시간 지점에서 종양 성장을 측정하였다. 인산화의 분석을 위해, 투여에 따라(여기서는 4시간) 종양을 절개하고, 액체 질소내에서 분쇄시키고, 용해 완충액내에서 균질화시켰다. 면역침전 및 웨스턴 블로팅 분석에 의해 FLT-3 및 Stat5 인산화를 측정하였다.

종양 형성을 유도하기 위해, MV411 및 RS411 세포를 무흉선 마우스에 피하 주사하였다. MV411은 신속한 종양 형성을 나타내는 반면, RS411 세포는 종양을 형성하기는 했지만 더욱 느렸다. 화합물(1)을 사용하는 치료는 치료 4일내에 거의 검출불가능한 종양 크기로 급격히 감소시켰다. 또한, 활성화된 FLT-3은 미치료된 종양에서 검출가능하며, 화합물(1)을 사용하는 4시간 치료로 완전히 억제되었다. 도 4a 및 4b를 참조한다. 이 데이터에서는, 화합물이, FLT-3 인산화의 억제와 일관적으로, 생체내에서 FLT-3 유도된 종양에 대한 효능을 갖는 것이 입증되었다.

실시예 7 - VEGF 생성에 대한 생체내 골수 모델

2일 동안 150㎎/㎏/일로 복강내 주사하고, 그 다음 24시간 휴식한 후, 꼬리 정맥을 통해 5 × 10⁶세포의 정맥내(i.v.) 주사함으로써, 사이클로포스파마이드(네오사르, 파마시아(Neosar, Pharmacia), 미시건주 칼라마주 소재)를 사용하여 NOD-SCID 마우스를 예비처리하였다. 실험 끝부분에서, 마우스를 마취시킨 후, 심장내 천자(puncture)를 통해 종말 혈액을 수거하였다. 차가운 멸균 PBS로 마우스 대퇴부를 플러슁시켜(flush) 골수 세포 현탁액을 제조하였다. 화합물(1) 또는 그의 비히클의 투여 범위는 도면과 표의 범례에 나타낸 바와 같이 일일 1회 경구로 투여하였다. 모든 연구에서, 쌍 스튜던츠 t 시험을 사용하여 처리된 군과 대조군 사이의차이점을 평가하였다(P ＜ 0.05이면 의미있는 것으로 간주된다).

상기 데이터에서는, 화합물(1)을 사용하는 치료가 투여량-의존 방식에서 생존력을 연장시키며, 화합물(1)의 20㎎/㎏/일에서 최고의 효능을 발휘하는 것으로 나타났다.

실시예 8 - NOD-SCID 마우스에서 VEGF의 검출

시판중인 키트를 사용하는, VEGF 단백질 수준을 위한 ELISA에 의해, 전술된 NOD-SCID 마우스로부터의 혈장을 분석하였다. FLT-3 활성화(야생형 또는 ITD)가 화합물(1)에 의해 억제되는 VEGF 분비(상기 표에서 나타나는 바와 같음)와 관련되어 있음을 나타내는 생체외 데이터에서와 일관적으로, VEGF는 화합물(1)-치료된 마우스중 질환을 앓는 마우스의 혈장(평균 49pg/㎖)중에서 검출될 수 있는 것으로 측정되었다. 이 데이터는 VEGF가 FLT-3 신호화의 타겟이며 FLT-3 활성의 바이오마커(biomarker)일 수 있음을 제시한다.

실시예 9 - FLT-3의 인산화의 억제에 대한 생체내 인간 연구

AML 환자에게서의 I상 단일 투여 임상 연구를 실시하였다. 제 1 목적은FLT-3 인산화의 조정(억제)을 평가하는 것이었다. 또한, 모든 환자는 상관적인 약물동력학과 FLT-3 유전형 분류를 실시하였다. FLT-3 인산화를 예비투여량(predose)에 대해 화합물(1)의 투여 4, 6, 8, 10, 12, 24, 48시간 후에 분석하였다. 개발 방법에서는, FLT-3 인산화 분석을 가능케하는 최적의 방법은 일단 AML 환자로부터의 모든 혈액을 직접 첨가하여 드라이아이스상에 동결시키기 전에 완충액을 용해시키는 것으로 나타났다. 후속적인 샘플을 해빙시키고, 비이드 공액된 안티-FLT-3 항체를 사용하는 면역억제, 그 다음 혈액 스파이크 모델(실시예 5)에 대해서 포스포-티로신 및 FLT-3을 위한 웨스턴 블로팅에 의해 FLT-3 인산화에 대해 분석하였다. 주요 종점, 3/6pts에서의 FLT-3 인산화의 ＞50% 억제는, 3pts에서 WT와 돌연변이 FLT-3 환자 둘다를 비롯한 ＞200㎎의 각 투여 수준에서 도달되었다. 2명의 환자가 제시된다. 이 연구에서 수득된 데이터는 예비임상의 생체외 및 생체내 종양 모델 데이터와 일관적이었으며, 이는 화합물(1)이 인간내의 FLT-3을 억제하는 것을 입증한다. 모든 말초 혈액 분석을 사용하는 이 신규한 단일 투여 연구에서는, 화합물(1)이 생체내의 AML 블라스트의 생존과 증식을 중재하는 다운스트림 신호화 경로 및 FLT-3을 조정한다는 것이 입증되었다.

수용체 타겟 조정 연구를 위한 혈액 수거의 프로토콜

A. 수젠(Sugen)에 의해 공급된 용해 완충액(동결 분취량 20㎖, 1.5x 원료는 하기 상세하게 설명된 바와 같이 제조됨).

i. 실온에서 용해 완충액(1.5X 원료는 프로테아제/포스파타제 억제제를 함유함)을 해빙시킨다. 각각의 혈액 10㎖에 대해 용해 완충액 20㎖이 필요하다.

ii. 해빙된 용해 완충액을 얼음위에 저장한다.

iii. 혈액을 채취하고, 혈액 10㎖를 용해 완충액 20㎖에 첨가한다.

iv. 수회 반대로 실시하여 혼합하고, 곧바로 드라이아이스상 또는 -70℃에 위치시킨다.

v, -70℃에서 저장하고, 드라이아이스상으로 옮긴다.

(i) 용해 완충액 조성물 - 조성은 1.5x 원료 500㎖를 산출한다.

탈이온수를 첨가하여 500㎖를 만든다. 그 다음, 혼합물을 0.2μM 필터를 통해 여과시킨다. 혼합물을 4℃에 저장하거나, 또는 프로테아제 억제제가 첨가되는 경우 -20℃의 분취물중에 저장한다.

(ii) 프로테아제 억제제의 첨가

하기 조성물을 1.5x 용해 완충액 9㎖에 첨가한다.

혈액내의 FLT-3 인산화의 분석 방법

동결된 샘플을 사용시까지 -70℃에서 저장하였다. 혈액 용해물을 신속하게 37℃에서 해빙시키면서, 용해 완충액(20mM 트리스, pH 7.5, 137mM NaCl, 10% 글리세롤, 1% NP-40, 0.1% SDS, 2mM EDTA, 50mM NaF, 1mM Na₃VO₄, 2mM Pefabloc, 2㎍/㎖ 아프로토닌, 3.5㎍/㎖ 베스타틴, 0.5㎍/㎖ 류펩틴 및 0.7㎍/㎖ 펩스타틴 A) 2x 부피중에 용해시켰다. BCA 단백질 분석(Pierce, Rockford, II)을 사용하여 각각의 용해물중의 단백질의 양을 측정하였다. 각각의 샘플로부터의 용해물 약 35㎎을 FLT-3, c-키트 또는 Stat 5에 대해 면역침전시켰다.

면역침전 및 웨스턴 블로팅(IP/W) 분석

프로테아제 및 포스파타제 억제제(50mM 불화 나트륨, 1mM 나트륨 오르토바나데이트, 2mM Pefabloc, 1.2mM 아프로티닌, 40mM 베스타틴, 5.6mM E-64, 4mM 류펩틴 및 4mM 펩스타틴 A)를 함유하는 용해 완충액(20mM 트리스, pH 7.5, 137mM NaCl, 10% 글리세롤, 1% NP-40, 0.1% SDS, 2mM EDTA)중에 세포를 용해시켰다. SDS-PAGE에 의해 등가량의 단백질을 분리시킨 후, 니트로셀룰로스 멤브레인으로 옮겼다. FLT-3 인산화의 분석을 위해, 각각의 샘플로부터의 등가량의 단백질을 4^*C에서 밤새도록 아가로스-공액된 안티-FLT-3 항체(산타 크루즈 바이오테크놀로지(Santa Cruz Biotechnology), 캘리포니아주 산타 크루즈 소재)로 면역침전시켰다. 면역 착체를 세척하고(150mM NaCl, 1.5mM MgCl₂, 50mM HEPES, pH 7.5, 10% 글리세롤, 0.1% 트리톤 X-100 및 1mM EGTA), SDS-PAGE에 따라, 단백질을 니트로셀룰로스 멤브레인으로 옮겼다. 멤브레인을 안티-포스포티로신 항체(뉴욕주 소재의 업스테이트 레이크 플라시드(Upstate, Lake Placid), 켄터키주 렉싱톤 소재의 트랜스덕션 래보레토리즈(Transduction Laboratories))를 사용하여 탐침한 후, 리스토어 웨스턴 블롯 스트리핑 버퍼(Restore Western Blot Stripping Buffer)(일리노이즈주 록포드 소재의 피어스(Pierce))를 사용하여 스트리핑시켰다(strip). 안티-FLT-3 항체(산타 크루즈 바이오테크놀로지)를 사용하여 멤브레인을 재탐침하였다. 면역침전 및 웨스턴 블로팅 분석을 위한 Stat5 항체는 업스테이트 바이오테크놀로지 및 트랜스턱션 랩으로부터 각각 입수하였다.

당해 분야의 숙련자는 발명의 취지 또는 범위에 벗어나지 않고서 본 발명의 방법과 조성물에 대한 다양한 변형과 변화가 가능할 것임을 이해할 것이다. 따라서, 본 발명이 본 발명의 변형과 변화를 포괄하되, 이들이 첨부된 청구의 범위와 그의 등가 범위내에 속하는 것이다.

Claims

유효량의 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염을 급성 골수성 백혈병(AML)의 치료가 필요한 환자에게 투여함을 포함하는, 급성 골수성 백혈병(AML)의 치료 방법.

화학식 I

상기 식에서,

R은 독립적으로 H, OH, 알킬, 아릴, 사이클로알킬, 헤테로아릴, 알콕시, 헤테로사이클릭 및 아미노이고,

R₁은 각각 독립적으로 알킬, 할로, 아릴, 알콕시, 할로알킬, 할로알콕시, 사이클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 하이드록시, -C(O)R₈, -NR₉R₁₀, -NR₉C(O)-R₁₂및 -C(O)NR₉R₁₀으로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₂는 각각 독립적으로 알킬, 아릴, 헤테로아릴, -C(O)R₈및 -SO₂R"(여기서, R"는 알킬, 아릴, 헤테로아릴, NR₉R₁₀또는 알콕시이다)로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₅는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 아릴, 할로알킬, 사이클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 하이드록시, -C(O)-R⁸및 (CHR)_rR₁₁로 이루어진 군으로부터 선택되고,

X는 O 또는 S이고,

j는 0 내지 1이고,

p는 0 내지 3이고,

q는 0 내지 2이고,

r는 0 내지 3이고,

R₈는 -OH, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알콕시, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₉및 R₁₀은 독립적으로 H, 알킬, 아릴, 아미노알킬, 헤테로아릴, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 R₉및 R₁₀은 N과 함께 고리를 형성할 수 있으며, 여기서 고리 원자들은 C, N, O 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₁₁은 -OH, 아미노, 일치환된 아미노, 이치환된 아미노, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알콕시, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₁₂는 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알콕시, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되고,

Z는 -OH; -O알킬; -NR₃R₄(여기서, R₃및 R₄는 독립적으로 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 R₃및 R₄는 N과 결합하여 고리를 형성할 수 있으며, 여기서 고리 원자는 CH₂, N, O 및 S로 이루어진 군으로부터 선택된다); 또는(여기서, Y는 독립적으로 CH₂, O, N 또는 S이고, Q는 C 또는 N이고, n은 독립적으로 0 내지 4이고, m은 0 내지 3이다)이다.
제 1 항에 있어서,

R₁이 할로이고, p가 1인 방법.
제 2 항에 있어서,

할로가 F 및 Cl로부터 선택되는 방법.
제 2 항에 있어서,

Z가 -NR₃R₄(여기서, R₃및 R₄는 모르폴린 고리를 형성한다)인 방법.
제 1 항에 있어서,

Z가(여기서, Y는 각각 CH₂이고, n은 각각 2이고, m은 0이고, R₃및 R₄는 모르폴린 고리를 형성한다)인 방법.
제 1 항 내지 제 4 항중 어느 한 항에 있어서,

R₂가 메틸이고, q가 2이며, 여기서 메틸들은 3- 및 5-위치에서 결합되는 방법.
제 1 항에 있어서,

투여되는 화합물이 하기 화학식 II의 화합물인 방법.

화학식 II
제 7 항에 있어서,

R₅가 H인 방법.
제 7 항에 있어서,

R₂가 메틸이고, q가 2이며, 여기서 메틸들은 3- 및 5-위치에서 결합되는 방법.
제 1 항에 있어서,

투여되는 화합물이 하기 화합물들로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제 8 항에 있어서,

환자가 FLT-3-ITD 양성인 방법.
제 9 항에 있어서,

환자가 FLT-3 야생형 양성인 방법.
제 1 항에 있어서,

화학식 I의 화합물이 하기 화합물들로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
제 1 항에 있어서,

환자가 인간인 방법.
억제량의 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염을 치료가 필요한 환자에게 투여함을 포함하는, FLT-3의 인산화 억제 및 말초 혈액 용해물(lysate)에서의 인산화의 분석을 검출하는 방법.

화학식 I

상기 식에서,

R은 독립적으로 H, OH, 알킬, 아릴, 사이클로알킬, 헤테로아릴, 알콕시, 헤테로사이클릭 및 아미노이고,

R₁은 각각 독립적으로 알킬, 할로, 아릴, 알콕시, 할로알킬, 할로알콕시, 사이클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 하이드록시, -C(O)R₈, -NR₉R₁₀, -NR₉C(O)-R₁₂및 -C(O)NR₉R₁₀으로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₂는 각각 독립적으로 알킬, 아릴, 헤테로아릴, -C(O)R₈및 -SO₂R"(여기서, R"는 알킬, 아릴, 헤테로아릴, NR₉R₁₀또는 알콕시이다)로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₅는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 아릴, 할로알킬, 사이클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 하이드록시, -C(O)-R⁸및 (CHR)_rR₁₁로 이루어진 군으로부터 선택되고,

X는 O 또는 S이고,

j는 0 내지 1이고,

p는 0 내지 3이고,

q는 0 내지 2이고,

r는 0 내지 3이고,

R₈는 -OH, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알콕시, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₉및 R₁₀은 독립적으로 H, 알킬, 아릴, 아미노알킬, 헤테로아릴, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 R₉및 R₁₀은 N과 함께 고리를 형성할 수 있으며, 여기서 고리 원자들은 C, N, O 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₁₁은 -OH, 아미노, 일치환된 아미노, 이치환된 아미노, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알콕시, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₁₂는 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알콕시, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되고,

Z는 -OH; -O알킬; -NR₃R₄(여기서, R₃및 R₄는 독립적으로 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 R₃및 R₄는 N과 결합하여 고리를 형성할 수 있으며, 여기서 고리 원자는 CH₂, N, O 및 S로 이루어진 군으로부터 선택된다); 또는(여기서, Y는 독립적으로 CH₂, O, N 또는 S이고, Q는 C 또는 N이고, n은 독립적으로 0 내지 4이고, m은 0 내지 3이다)이다.
제 15 항에 있어서,

FLT-3이 돌연변이 FLT-3인 방법.
제 15 항에 있어서,

FLT-3이 야생형 FLT-3인 방법.
제 16 항에 있어서,

FLT-3이 FLT-3-ITD인 방법.
제 1 항에 있어서,

화합물을 투여하기 전 급성 골수성 백혈병이 FLT-3-ITD AML인 방법.
제 15 항에 있어서,

VEGF 단백질의 증가된 발현을 측정하여 FLT-3의 인산화를 검출하는 방법.
억제량의 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염을 치료가 필요한 환자에게 투여함을 포함하는, FLT-3의 인산화를 억제하는 방법.

화학식 I

상기 식에서,

R은 독립적으로 H, OH, 알킬, 아릴, 사이클로알킬, 헤테로아릴, 알콕시, 헤테로사이클릭 및 아미노이고,

R₁은 각각 독립적으로 알킬, 할로, 아릴, 알콕시, 할로알킬, 할로알콕시, 사이클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 하이드록시, -C(O)R₈, -NR₉R₁₀, -NR₉C(O)-R₁₂및-C(O)NR₉R₁₀으로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₂는 각각 독립적으로 알킬, 아릴, 헤테로아릴, -C(O)R₈및 -SO₂R"(여기서, R"는 알킬, 아릴, 헤테로아릴, NR₉R₁₀또는 알콕시이다)로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₅는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 아릴, 할로알킬, 사이클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로사이클릭, 하이드록시, -C(O)-R⁸및 (CHR)_rR₁₁로 이루어진 군으로부터 선택되고,

X는 O 또는 S이고,

j는 0 내지 1이고,

p는 0 내지 3이고,

q는 0 내지 2이고,

r는 0 내지 3이고,

R₈는 -OH, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알콕시, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₉및 R₁₀은 독립적으로 H, 알킬, 아릴, 아미노알킬, 헤테로아릴, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 R₉및 R₁₀은 N과 함께 고리를 형성할 수 있으며, 여기서 고리 원자들은 C, N, O 및 S로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₁₁은 -OH, 아미노, 일치환된 아미노, 이치환된 아미노, 알킬, 아릴, 헤테로아릴,알콕시, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되고,

R₁₂는 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 알콕시, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되고,

Z는 -OH; -O알킬; -NR₃R₄(여기서, R₃및 R₄는 독립적으로 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릭으로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 R₃및 R₄는 N과 결합하여 고리를 형성할 수 있으며, 여기서 고리 원자는 CH₂, N, O 및 S로 이루어진 군으로부터 선택된다); 또는(여기서, Y는 독립적으로 CH₂, O, N 또는 S이고, Q는 C 또는 N이고, n은 독립적으로 0 내지 4이고, m은 0 내지 3이다)이다.
제 21 항에 있어서,

FLT-3이 돌연변이 FLT-3인 방법.
제 21 항에 있어서,

FLT-3이 야생형 FLT-3인 방법.
제 22 항에 있어서,

FLT-3이 FLT-3-ITD인 방법.