KR102702964B1 - 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 및 그 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 및 그 제조방법에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 약재원료의 유효성분을 함유시켜 건강 기능성이 향상된 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 및 그 제조방법에 관한 것이다.

Description

복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 및 그 제조방법{Fermented low molecular collagen of using complex enzyme and its manufacturing method}

본 발명은 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 및 그 제조방법에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 약재원료의 유효성분을 함유시켜 건강 기능성이 향상된 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 및 그 제조방법에 관한 것이다.

콜라겐은 섬유상태의 단백질로서 피부와 뼈, 힘줄을 구성하는 단백질 중 하나이다. 특히 우리 몸속에는 단백질이 약 20% 포함되어 있는데, 이중 콜라겐이 약 30%를 차지하고 있다. 이러한 콜라겐의 분자 구조는 2개의 폴리펩티드 사슬이 감겨 수소 결합으로 서로 결합된 구조를 갖는다. 이러한 구조를 갖는 콜라겐은 인체에서 결합 조직의 주성분으로써 피부, 뼈, 관절, 혈관, 장기의 막 및 머리카락 등에 분포되어 인체를 지탱하고 유지해주며, 세포의 접착, 몸과 장기의 지지, 세포기능 활성화, 세포증식작용, 및 지혈 등의 기능을 가지고 있어 신체를 형성함과 동시에 유기적 기능을 부여하는 신체에 반드시 필요한 단백질이다. 하지만, 나이가 들수록 합성되는 콜라겐보다 파괴, 배출되는 콜라겐이 더 많아지며, 특히 일반 단백질보다 크기가 큰 콜라겐은 체내에서 쉽게 소화, 흡수되지 못하고 90%가량 배출된다고 알려져 있다.

콜라겐은 의약품(캡슐정제, 지혈대, 인공피부 등), 화장품(크림, 연고제 등) 및 식품(결착제, 증량제, 미용음료 등) 분야에 광범위하게 이용되고 있으며, 체내 흡수된 콜라겐은 면역력증강, 피부노화방지, 성장촉진, 골다공증 예방 및 혈압상승억제 등의 기능성을 갖는 것으로 보고 있다. 특히 피부 내 콜라겐의 합성 촉진에 의해 콜라겐 대사가 활발해지면 진피 메트릭스의 성분이 증가되어 주름개선, 탄력증진, 피부강화 및 상처치유의 효과가 있는 것으로 보며, 근래에 들어 피부 노화에 대한 광범위한 연구가 발전되면서 피부에서의 콜라겐의 중요한 기능이 밝혀지고 있다.

콜라겐은 분자량에 따라 고분자 콜라겐과 저분자 콜라겐으로 나눌 수 있는데, 고분자 콜라겐은 대표적인 난용성 단백질로 그 가공방법에 따라 물성 및 소화흡수력이 크게 달라지기 때문에, 체내에서 흡수효율을 높이기 위해서는 다양한 가수분해공정에 의하여 저분자화하는 과정이 반드시 필요하다.

한편, 최근에 화학요법적 약제에 대한 부작용이 보고됨에 따라 화학요법적 약제가 아닌 천연물질에서 획득하는 기능성 치료 물질이 필요한 실정이다.

종래기술로는 대한민국 등록특허공보 제10-1361060호 “닭 부산물 콜라겐의 추출방법”이 기재되어 있다.

따라서 본 발명은 이와 같은 종래의 문제점을 개선하기 위해 제안된 것으로, 약재원료의 유효성분을 함유시켜 건강 기능성이 향상된 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 및 그 제조방법을 제공하는데 목적이 있다.

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명의 실시예에 따른 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 제조방법은 닭발 및 닭벼슬로 구성된 닭 원료를 침지용액에 넣고 침지한 뒤, 세척하는 닭 원료 세척 단계; 상기 세척된 닭 원료, 증류수 및 약재 원료를 넣고 중탕에서 콜라겐을 추출한 후 냉각하여 콜라겐 원료를 제조하는 콜라겐 원료 제조 단계 및 상기 콜라겐 원료를 발효기에 넣고 가열하여 끓이고, 냉각한 뒤 복합효소를 넣고 발효한 다음, 멸균처리하여 저분자 콜라겐을 획득하는 단계를 포함할 수 있다.

또한, 상기 닭 원료 세척 단계는 상기 닭 원료를 닭 원료 중량대비 8 내지 15배의 상기 침지용액에 넣고 20 내지 30시간 동안 침지한 뒤, 세척하는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 콜라겐 원료 제조 단계는 상기 세척된 닭 원료 1,000 중량부에 대하여, 증류수 2,500 내지 5,000 중량부 및 약재 원료 20 내지 40 중량부를 넣고 100 내지 120℃에서 24 내지 30시간 동안 중탕에서 콜라겐을 추출한 후 냉각하는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 저분자 콜라겐을 획득하는 단계는 상기 콜라겐 원료를 발효기에 넣고 100 내지 115℃에서 10 내지 20분동안 100bar 압력하에서 가열하여 끓이는 가열단계; 상기 가열된 콜라겐 원료에 40 내지 50℃의 온도에서 복합효소를 넣고 24 내지 30시간 동안 발효하는 발효단계 및 상기 발효단계를 마친 상기 콜라겐 원료를 100 내지 120℃에서 25 내지 35분 동안 멸균처리하는 멸균처리단계를 포함할 수 있다.

또한, 상기 침지용액은 0.1 내지 1.0N 과산화수소 및 0. 1 내지 1.0N 수산화나트륨 용액으로 이루어지는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 약재 원료는 황기, 당귀, 계지, 두충, 백출, 우슬, 독활, 금은화, 모과, 홍화씨, 포공영 및 위령선 중 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 약재원료는 상기 세척된 닭 원료 1,000 중량부에 대하여, 황기 2 내지 10 중량부, 당귀 1 내지 6 중량부, 계지 1 내지 6 중량부, 두충 1 내지 6 중량부, 백출 1 내지 6 중량부, 우슬 1 내지 6 중량부, 독활 0.5 내지 3 중량부, 금은화 0.5 내지 3 중량부, 모과 0.5 내지 3 중량부, 홍화씨 0.5 내지 3 중량부, 포공영 0.5 내지 3 중량부 및 위령선 0.5 내지 3 중량부를 포함할 수 있다.

또한, 상기 복합효소는 락타아제, 리파아제, 알파 아밀라아제, 셀룰라아제 및 중성 프로테아제 중 하나 이상을 포함할 수 있다.

또한, 상기 발효단계는 기능성 추출액을 추가하고, 상기 기능성 추출액은 사과껍질 추출액, 올리브잎 추출액 및 오레가노 추출액 중 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 한다.

한편, 본 발명의 실시예에 따른 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐은 닭발 및 닭벼슬로 구성된 닭 원료, 증류수 및 약재 원료를 중탕하여 추출한 콜라겐 원료를 복합효소로 발효하여 제조되는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 실시예에 따른 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 및 그 제조방법은 복합효소를 사용함에 따라 효과적으로 저분자 콜라겐을 제조할 수 있다.

또한, 약재 원료를 통해 인체에 유리한 약리작용 효과를 얻을 수 있다.

또한, 기능성 추출액을 사용함에 따라 약재 원료의 약리작용의 효과를 증대시킬 수 있다.

또한, 위에서 언급된 본 발명의 실시예에 따른 효과는 기재된 내용에만 한정되지 않고, 명세서 및 도면으로부터 예측 가능한 모든 효과를 더 포함할 수 있다.

도 1은 본 발명의 실시예에 따른 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 제조방법의 순서를 보여주는 순서도이다.
도 2는 도 1에서 저분자 콜라겐을 획득하는 단계의 순서를 보여주는 순서도이다.
도 3 및 도 4는 본 발명의 실험예 1에 따른 골관절염 개선 효과를 보여주는 그래프이다.

이하, 도면을 참조한 본 발명의 설명은 특정한 실시 형태에 대해 한정되지 않으며, 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있다. 또한, 이하에서 설명하는 내용은 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

이하의 설명에서 제1, 제2 등의 용어는 다양한 구성요소들을 설명하는데 사용되는 용어로서, 그 자체에 의미가 한정되지 아니하며, 하나의 구성요소를 다른 구성요소로부터 구별하는 목적으로만 사용된다.

본 명세서 전체에 걸쳐 사용되는 동일한 참조번호는 동일한 구성요소를 나타낸다.

본 발명에서 사용되는 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 또한, 이하에서 기재되는 "포함하다", "구비하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것으로 해석되어야 하며, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.

이하, 본 발명의 실시예를 첨부한 도 1 내지 도 4를 참조하여 상세히 설명하기로 한다.

도 1은 본 발명의 실시예에 따른 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 제조방법의 순서를 보여주는 순서도이고, 도 2는 도 1에서 저분자 콜라겐을 획득하는 단계의 순서를 보여주는 순서도이다.

도 1을 참조하면, 본 발명의 실시예에 따른 복합효소를 사용한 저분자 콜라겐 제조방법은 닭 원료 세척 단계(S10), 콜라겐 원료 제조 단계(S20) 및 저분자 콜라겐을 획득하는 단계(S30)를 포함할 수 있다.

닭 원료 세척 단계(S10)는 닭 원료를 침지용액에 넣고 침지한 뒤, 세척할 수 있다.

여기서, 닭 원료는 닭발 및 닭벼슬로 구성될 수 있으나, 이에 한정하지 않고 돈피, 우피, 뼈, 내장 등 본 발명의 기술분야에서 통상적으로 사용하는 콜라겐 원재료는 모두 사용 가능하다.

구체적으로, 닭 원료 세척 단계(S10)는 세척한 닭 원료 중량대비 8 내지 15배의 침지용액에 넣고 20 내지 30시간 동안 침지한 뒤, 세척할 수 있다.

여기서, 침지용액은 0.1 내지 1.0N 과산화수소 및 0.1 내지 1.0N 수산화나트륨 용액으로 구성될 수 있다. 침지용액은 닭 원료에서 콜라겐을 효율적으로 추출하기 위해 닭 원료를 평윤한 상태로 만들어주기 위한 것으로, 상기와 같은 침지용액뿐만 아니라 본 발명의 기술분야에서 통상적으로 사용하는 침지용액은 모두 사용 가능하다.

이때, 과산화수소 및 수산화나트륨 농도가 0.1N 미만일 경우, 침지용액 효과가 미미할 수 있고, 1.0N 초과할 경우, 닭 원료의 손상이 일어 날 수 있고, 과산화수소 및 수산화나트륨을 세척해 내기 위한 증류수의 양이 많아져 제조공정상 비효율적일 수 있다. 또한, 과산화수소 및 수산화나트륨은 1:1(v/v)의 비율로 혼합되는 것이 바람직하나, 이에 한정하지는 않는다.

콜라겐 원료 제조 단계(S20)는 세척된 닭 원료, 증류수 및 약재 원료를 넣고 중탕에서 콜라겐을 추출한 후 냉각하여 콜라겐 원료를 제조할 수 있다.

또한, 콜라겐 원료 제조 단계(S20)는 세척된 닭 원료 1,000 중량부에 대하여, 증류수 2,500 내지 5,000 중량부 및 약재 원료 20 내지 40 중량부를 넣고 100 내지 120℃에서 24 내지 30시간 동안 중탕에서 콜라겐을 추출한 후 냉각할 수 있다.

이때, 증류수가 2,500 중량부 미만일 경우, 증류수가 증발하여 닭 원료에서 콜라겐을 추출하기 어려울 수 있고, 5,000 중량부를 초과할 경우, 증류수와 시간의 소모가 많아 비용적으로 비효율적일 수 있다.

또한, 콜라겐 추출 온도가 100℃ 미만이거나 추출시간이 24시간 미만일 경우 약재에서 추출되는 유효성분의 양이 적을 수 있다. 반면, 콜라겐 추출 온도가 120℃ 초과하거나 추출시간이 30시간 초과일 경우 약재 원료의 유효성분이 파괴될 수 있고 쓴맛이 우러날 수 있으며, 제조공정상 경제적으로 비효율적일 수 있다.

약재 원료는 1 내지 5㎝ 이하로 절단하여 각각 물로 세척하고 물기를 제거한 뒤, 50 내지 80℃에서 20 내지 40시간 동안 건조하고 약재망에 담아 약재 원료를 준비할 수 있다. 그러나, 이에 한정하지 않고 시중에 판매중인 세절된 약재 원료를 사용해도 무관하다.

여기서, 약재 원료의 건조온도와 시간은 약재 원료에서 유효성분이 증류수를 통해 추출되도록 하기 위한 것으로, 일반적으로 약재는 보관과정에서 습기를 흡수하려는 성질이 있기 때문에 건조과정이 중요하다.

이때, 약재 원료의 건조온도가 50℃ 미만이거나 건조시간이 20시간 미만일 경우 약재가 가지고 있는 수분을 빼내기 어려울 수 있고, 건조온도가 80℃ 초과이거나 건조시간이 40시간 초과일 경우 약재 원료의 유효성분이 파괴될 수 있고 과량의 수분이 빠져나가 유효성분 추출이 어려울 수 있다.

약재 원료는 황기, 당귀, 계지, 두충, 백출, 우슬, 독활, 금은화, 모과, 홍화씨, 포공영 및 위령선 중 하나 이상을 포함할 수 있다.

약재원료는 세척된 닭 원료 1,000 중량부에 대하여, 황기 2 내지 10 중량부, 당귀 1 내지 6 중량부, 계지 1 내지 6 중량부, 두충 1 내지 6 중량부, 백출 1 내지 6 중량부, 우슬 1 내지 6 중량부, 독활 0.5 내지 3 중량부, 금은화 0.5 내지 3 중량부, 모과 0.5 내지 3 중량부, 홍화씨 0.5 내지 3 중량부, 포공영 0.5 내지 3 중량부 및 위령선 0.5 내지 3 중량부를 포함할 수 있다.

가장 바람직하게는, 황기 4 중량부, 당귀 3 중량부, 계지 3 중량부, 두충 3 중량부, 백출 3 중량부, 우슬 3 중량부, 독활 2 중량부, 금은화 2 중량부, 모과 2 중량부, 홍화씨 2 중량부, 포공영 2 중량부 및 위령선 2 중량부를 포함하는 것이 좋으나, 이에 한정하지는 않는다.

황기는 콩과에 속하는 다년생 초본식물로 산지에서 자라며 높이가 1m에 달하고 전체에 잔털이 있다. 뿌리는 약재로 이용하는데 약효성분으로 폴리산(folic acid), 콜린(choline) 등이 있다. 일반적으로 식품원료로 사용하는 황기는 1년생 황기의 주피를 벗긴 뿌리이다. 황기는 약성이 온화하고 맛이 달며, 섭취했을 경우 쉽게 피로하고 힘이 약하며, 음성이 낮고 맥박이 연약하고 땀을 많이 흘리는 사람에게 현저한 효능을 나타낸다. 그리고 체력을 항진시켜 주고 전신근육의 긴장도를 높여주기도 한다. 황기는 항염증 및 항고혈압, 간장보호, 항산화, 항바이러스, 심장혈관보호, 면역증진활성, 항노화 등의 효능이 있다. 특히, 황기의 이소플라보노이드계 화합물인 칼리코신 배당체는 골관절염을 완화시키는 효과가 있다.

이러한 황기는 2 중량부 미만일 경우, 황기로 인한 효과가 미미할 수 있고, 10 중량부를 초과했을 경우 복통이나 설사, 두통 등이 유발될 수 있다.

당귀는 여러해살이풀로 전체적으로 자줏빛이 돈다. 줄기 윗부분의 잎자루가 부풀어 배가 볼룩한 보트모양이다. 약재로 쓰이는 당귀는 산형과 참당위의 건조시킨 뿌리를 말한다. 당귀는 기운이 따뜻하고 맛이 달면서도 맵다. 당귀의 효능은 피가 부족할 때 피를 생성해 주는 보혈 작용 및 피를 원활히 순환하게 해주는 활혈작용이 뛰어나며, 항암효과 및 혈압강하 작용이 강하다. 약리학적으로 당귀는 관상동맥의 혈류량을 촉진시키고, 적혈구 생성을 왕성하게 한다.

또한, 당귀의 영양성분은 100g 기준 니아신 0.30㎎, 나트륨 76.00㎎, 단백질 0.60g, 당질 12.50g, 비타민 B1 0.16㎎, 비타민 B2 0.15㎎, 비타민 B6 0.03㎎, 비타민 C 11.00㎍, 비타민 E 0.39㎎, 아연 0.16㎍RE, 엽산 5.23㎎, 인 69.00㎎, 지질 1.20g, 철분 3.10㎎, 칼륨 458.00㎎, 칼슘 39.00㎎ 등을 포함하고 있다.

이러한 당귀는 1 중량부 미만일 경우, 당귀로 인한 효과가 미미하고, 6 중량부 초과했을 경우 소화기관이 약한 사람은 설사를 유발할 수 있고 열이 많은 사람은 두통, 피부발적, 가슴통증을 일으킬 수 있다.

계지는 육계나무 또는 기타 동속 근연식물의 어린 가지를 사용해 만든 약재이다. 계지는 특이한 향기가 있고 껍질부분은 더욱 진하며 약성은 맵고 달며 따듯하다. 계지는 초기 감기에 피부의 땀구멍을 열어 땀을 내며, 어깨와 등의 통증, 사지관절의 통증을 완화시켜 주며 기혈의 순환을 촉진 시키고 양기부족을 치료한다. 약리작용은 대장균, 고초간균, 황색포도균, 폐렴쌍구균 등의 발육을 억제하고 유행성감기바이러스를 억제하며 이뇨작용 등이 보고되었다.

이러한 계지는 1 중량부 미만일 경우, 계지로 인한 효과가 미미하고, 6 중량부 초과했을 경우 혈압이 상승되거나 열이 생길 수 있다.

두충은 두충나무의 나무껍질을 말린 약재이다. 이 약의 맛은 달고 매우며, 성질은 따듯하다. 간신 기능 부족으로 인한 요통, 무릎통, 몸이 차서 생기는 양위, 하복냉감, 소변 자주 보는 증, 태동불안, 자궁출혈 등을 치료하며 혈압강하 효과가 있다. 약리작용으로 혈압강하, 항노화, 콜레스테롤강하, 항염, 진정, 진통, 면역 조절, 혈액응고, 자궁수축, 항알레르기, 항균작용 등이 보고되었다.

또한, 두충은 112종의 성분이 확인되는데 주요 활성성분은 리그난(lignin), 이리도이드(iridoid)이다. 영양성분은 100g 기준 나트륨 14.00㎎, 단백질 14.60g, 당질 47.90g, 비타민 A 698.00㎍RE, 비타민 B1 0.50㎎, 비타민 B2 0.80㎎, 비타민 B6 0.01㎎, 비타민 E 63.40㎎, 식이섬유 1.88g, 아연 3.26㎎, 엽산 109.50㎍, 인 166.00㎎, 지질 4.20g, 철분 17.40㎎, 칼륨 1,511.00㎎, 칼슘 894.00㎎ 등을 포함하고 있다.

이러한 두충은 1 중량부 미만일 경우, 두충으로 인한 효과가 미미하고, 6 중량부 초과했을 경우 어지러움, 설사, 복통이 있을 수 있다.

백출은 삽주의 뿌리를 건조시킨 약재이다. 삽주는 국화과에 속하는 여러해살이 식물로 키가 50㎝ 가량 자란다. 약효성분으로는 아트락틸롤(atractylol), 아트락틸론(atractylonen) 등이 함유되어 있는데, 동물실험에서는 소화효소의 분비촉진과 지속적인 이뇨효과 및 진정작용을 나타내었다. 약성은 온화하고 맛은 약간 쓰며 달다. 효능은 건위·소화 작용이 있어서 만성소화불량·장염·설사 등과 식욕증진에도 탁월하다. 특히 병후에 식욕이 없고 전신이 쇠약하며 땀을 많이 흘리는 사람에게 유효하다. 또 이뇨작용도 있어서 신장염으로 부종이 있는 데나 임신부의 부종에도 많이 쓰인다. 미약하지만 혈당을 강하시키는 효과가 있고, 간장의 기능을 활성화시키는 효과도 있다.

이러한 백출은 1 중량부 미만일 경우, 백출로 인한 효과가 미미하고, 6 중량부 초과했을 경우 소화기관에 무리가 갈 수 있고 쓴 맛이 날 수 있다.

우슬은 비름과에 속하는 여러해살이 식물인 쇠무릎의 뿌리이다. 유효성분으로는 사포닌과 다량의 칼슘을 함유하고 있으며, 동물실험에서는 진통작용을 나타내었다. 또 자궁의 수축을 증강시키며 약한 이뇨작용이 있고, 혈관을 확장시켜 일시적인 혈압강하작용을 나타내기도 한다. 약성은 평범하고 맛은 시고 쓰다. 효능은 부인의 생리를 정상으로 유도하고 이뇨와 배변을 용이하게 한다. 형태가 무릎을 닮은 것과 같이 무릎의 질환(관절염·류머티스성관절염·타박으로 인한 염증)을 치료하는 데 현저한 효과가 인정되고 있다. 또 허리와 다리가 무겁고 통증을 느끼며 때로 근육경련이 있을 때에 많이 활용된다. 신장의 결격으로 소변을 잘 못 보면서 통증이 있고 피가 섞인 소변을 볼 때에도 쓴다. 고혈압에 두통·어지러움·안화 등의 증상이 있을 때에 혈압을 하강시키면서 뇌혈관의 경련을 이완시켜 주기도 한다.

이러한 우슬은 1 중량부 미만일 경우, 우슬로 인한 효과가 미미하고, 6 중량부 초과했을 경우 소화기관이 약한 사람에게 설사를 유발시킬 수 있다.

독활은 쌍떡잎식물 산형화목 두릅나무과의 여러해살이풀이며, 땅두릅이라고도 한다. 독활은 뿌리가 약재로 쓰이는데 동물실험에서 진통·진정 작용과 혈관확장작용, 호흡중추를 흥분시키는 작용이 있음이 밝혀졌다. 약성은 온화하고 맛은 쓰고 맵다. 근육통이나 마비에 많이 쓰이는데, 특히 목 주위의 근육이나 허리·척추·무릎의 관절에 통증이 있거나, 하반신에 마비를 일으키는 증상에 적용된다. 그리고 두통이 심하여 머리가 조이는 듯이 아프고 어지러우며, 혀에는 백태가 끼는 감기증상에 효과가 있다.

이러한 독활은 0.5 중량부 미만일 경우, 독활로 인한 효과가 미미하고, 3 중량부를 초과할 경우 피부염을 일으킬 수 있고 복통, 설사가 나타날 수 있고 쓴맛이 우러나 기호성에 영향을 줄 수 있다.

금은화는 인동과의 인동덩굴 또는 그 변종 꽃봉오리를 말한다. 금은화는 특이한 냄새가 있으며 맛은 달고 성질은 차다. 금은화는 열을 내리고 가슴이 답답하고 갈증이 있을 때 사용하며 염증에 좋아 종기, 피부가 헐어 생긴 독, 장기의 염증, 농을 배출하는 데에 효능이 있다. 또한 이질, 열독으로 인한 피부 조직 괴사, 유선염 등에 쓰인다. 대장염, 위궤양, 방광염, 인후염, 편도선염, 기관지염, 결막염 및 부스럼, 유행성 이하선염으로 인한 고열, 화농성 감염증 등에도 응용할 수 있다. 약리작용은 항균작용, 항염증작용, 해열작용, 백혈구 탐식작용 증가, 중추신경 흥분작용, 혈청 콜레스테롤 강하, 궤양 예방효과 등이 보고되었다. 주요성분은 유기산(organic acids), 플라본(Flavones), 이리도이드(Iridoids) 및 사포닌(Saponins) 등이 있다.

이러한 금은화는 0.5 중량부 미만일 경우, 금은화로 인한 효과가 미미하고, 3 중량부를 초과할 경우 금은화의 찬 성질로 몸이 차가워지거나 설사가 잦을 수 있다.

모과는 중국이 원산지이며 장미목 배나무과의 낙엽교목이다. 모과는 약재로 사용할 때 익은 열매를 말려 사용한다. 모과는 폐를 도와 가래를 삭혀 주고 기침을 멎게 하므로 만성 기관지염에 효과가 있고 체력이 약하여 쉽게 피로하여 감기에 잘 걸리는 사람에게 좋다. 또 폐를 튼튼하게 하고 위를 편하게 하여 주는 것으로 알려져 있다. 모과의 신맛을 내는 유기산 성분은 근육을 원활하게 움직이게 하는 효능과 혈액순환을 개선시켜 주는 효능이 있어 근육에 경련이나 쥐가 났을 때 또는 관절통, 신경통이 있을 때 효과를 볼 수 있다. 이밖에 무릎이 시큰거리고 다리가 붓고 아픈 경우에도 좋으며, 허리와 무릎에 힘이 없는 경우, 팔다리가 저린 경우에도 좋다.

또한, 모과는 100g 기준 니아신 0.30㎎, 나트륨 2.00㎎, 단백질 0.70g, 당질 15.40g, 베타카로틴 6.00㎍, 비타민 A 1.00㎍RE, 비타민 B1 0.02㎎, 비타민 B2 0.01㎎, 비타민 B6 0.06㎎, 비타민 C 81.00㎎, 비타민 E 0.89㎎, 식이섬유 9.88g, 아연 0.15㎎, 엽산 6.00㎍, 인 18.00㎎, 지질 0.40g, 철분 0.50㎎, 칼륨 247.00㎎, 칼슘 21.00㎎ 등을 영양성분으로 포함하고 있다.

이러한 모과는 0.5 중량부 미만일 경우, 모과로 인한 효과가 미미하고, 3 중량부를 초과할 경우 변비를 악화시킬 수 있다.

홍화씨는 국화과에 속하는 일년생 풀로 이른 여름 노란 꽃이 빨갛게 변할 때 씨를 즙이나 가루로 만들어 약재로 사용한다. 홍화는 고도불포화지방산(PUFA)인 리놀레산(linoleic acid)가 약 70~80% 정도 함유되어 있다. 리놀레산은 혈중 콜레스테롤의 농도를 떨어뜨리고, 혈관 건강 증진에 뛰어난 효과가 있어 동맥경화와 고혈압 등 혈관 관련 질환 예방에 좋은 작용을 한다고 알려져 있다.

또한 비타민E 성분이 풍부하게 함유되어 있어 세포의 산화를 억제하여 노화를 방지하는데 이로운 작용을 하며 홍화씨 껍질에 있는 칼슘과 마그네슘 등의 미네랄 성분과 함께 유기 백금이라는 성분이 뼈를 튼튼하게 하고 골밀도 향상에 큰 도움을 준다고 한다. 그 때문에 골다공증 같은 뼈 질환을 예방하는 효과가 크다고 알려져 있다.

이러한 홍화씨는 0.5 중량부 미만일 경우, 홍화씨로 인한 효과가 미미하고, 3 중량부를 초과할 경우 위장기능이 약한 사람에게 속 쓰림, 복통을 일으킬 수 있다.

포공영은 국화과의 민들레 또는 동속 식물의 전초를 말린 약재이다. 포공영은 냄새가 거의 없고 맛은 쓰고 달며 성질은 차다. 포공영은 열독을 내리고 종기를 삭히는 약으로 종창, 유방염, 인후염, 옹종(맹장염, 폐농양, 복막염)에 쓰고 안구충혈, 급성간염, 황달, 열로 인해 소변을 보지 못하는 증상에 사용한다. 약리작용으로 억균작용, 면역기능강화, 담즙분비작용, 간기능보호작용, 이뇨작용이 보고되었다.

이러한 포공영은 0.5 중량부 미만일 경우, 포공영으로 인한 효과가 미미하고, 3 중량부를 초과할 경우 위장장애 및 알레르기 반응을 일으킬 수 있다.

위령선은 미나리아재비과의 으아리 또는 기타 동속 근연식물의 뿌리로 만든 약재이다. 위령선은 냄새가 없고, 맛은 맵고 짜며 성질은 따듯하다. 위령선은 풍습을 제거하고 관절굴신불리, 사지마비, 요통, 사지동통, 근육마비, 타박상을 치료한다. 오장의 기능 항진, 경락이 막혀 생기는 통증에 사용한다. 약리작용은 혈압강하, 평활근 흥분, 이뇨작용, 혈당하강작용, 진통, 항균작용이 보고되었다. 주요 성분에는 프로토아네모닌(Proto-anemonin), 아네모닌(Anemonin), 쿠마린(Coumarin), 플라보노이드, 안토시아닌 등이 있다.

이러한 위령선은 0.5 중량부 미만일 경우, 위령선으로 인한 효과가 미미하고, 3 중량부를 초과할 경우 독성이 있어 신체 생리 기능이 저하될 수 있다.

저분자 콜라겐을 획득하는 단계(S30)는 콜라겐 원료를 발효기에 넣고 가열하여 끓이고, 냉각한 뒤 복합효소를 넣고 발효한 다음, 멸균처리할 수 있다.

구체적으로, 저분자 콜라겐을 획득하는 단계(S30)는 가열단계(S31), 발효단계(S32) 및 멸균처리단계(S33)를 포함할 수 있다.

가열단계(S31)는 콜라겐 원료를 가열하여 보관과정 및 운반과정에서 발생할 수 있는 균을 제거할 수 있다. 가열단계(S31)는 콜라겐 원료를 발효기에 넣고 100 내지 115℃에서 10 내지 20분동안 100bar 압력하에서 가열하여 끓일 수 있다.

이때, 가열온도가 100 ℃ 미만일 경우 콜라겐 원료의 균을 모두 사멸할 수 없을 수 있고, 115℃를 초과할 경우 콜라겐 원료가 변형이 일어날 수 있다.

또한, 가열시간이 10분 미만일 경우, 열처리 효과가 미미할 수 있고, 20분 초과할 경우, 시간 대비 공정상 비효율적 일 수 있다.

발효단계(S32)는 가열된 콜라겐 원료에 40 내지 50℃의 온도에서 복합효소를 넣고 24 내지 30시간 동안 발효할 수 있다.

이때, 상기와 같은 가열시간을 지키지 않을 경우, 복합효소가 활성화가 잘 일어나지 못할 수 있어 상기 조건하에서 발효하는 것이 중요하다.

또한, 가열시간이 24시간 미만일 경우, 콜라겐 원료의 발효가 충분히 일어나지 않을 수 있고, 30시간 초과할 경우, 시간 대비 공정상 비효율적 일 수 있다.

여기서, 복합효소는 락타아제, 리파아제, 알파 아밀라아제, 셀룰라아제 및 중성 프로테아제 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 복합효소는 콜라겐 원료 1,000 중량부에 대하여, 복합효소 20 내지 40 중량부를 넣을 수 있다.

이때, 복합효소의 양이 20 중량부 미만일 경우 발효가 충분히 이루어지지 않아 저분자 콜라겐의 추출량이 감소될 수 있고, 40 중량부 초과할 경우 공정상 복합효소의 소모가 많아 비용적으로 비효율적일 수 있다. 가장 바람직하게는 30 중량부가 좋으나, 이에 한정하지는 않는다.

또한, 복합효소는 락타아제, 리파아제, 알파 아밀라아제, 셀룰라아제 및 중성 프로테아제가 1:1:1:1:1 내지 1:3:3:2:2의 중량비로 혼합되어 제조될 수 있다. 이때, 락타아제, 리파아제, 알파 아밀라아제, 셀룰라아제 및 중성 프로테아제의 중량비가 1:1:1:1:1 미만일 경우 효율적인 저분자 콜라겐 추출을 기대하기 어려우며, 1:3:3:2:2 초과하는 경우에는 락타아제, 리파아제, 알파 아밀라아제, 셀룰라아제 및 중성 프로테아제 중 초과되어 들어간 해당 효소의 활성이 강해져 발효가 원활하게 이루어지지 않을 수 있다.

또한, 복합효소는 락타아제 활성이 4,000 내지 6,000 U/g, 리파아제 활성이 1,000 내지 3,000 U/g, 알파 아밀라아제 활성이 24,000 내지 30,000 U/g, 셀룰라아제 활성이 200 내지 400 U/g, 및 중성 프로테아제 활성이 6,000 내지 8,000 U/g일 수 있다.

멸균처리단계(S33)는 발효단계를 마친 콜라겐 원료를 100 내지 120℃에서 25 내지 35분 동안 멸균처리할 수 있다.

이때, 가열온도가 100 ℃ 미만일 경우 멸균처리 효과가 미미할 수 있고, 115℃를 초과할 경우 저분자 콜라겐의 변형이 일어날 수 있다. 한편, 가열시간이 25분 미만일 경우, 멸균효과가 미미할 수 있고, 35분 초과할 경우, 시간 대비 공정상 비효율적 일 수 있다.

또한, 발효단계(S32)는 약재 원료의 유효성분의 효능을 보강해주는 기능성 추출액을 추가할 수 있다. 이는 약재 원료의 유효성분이 신체에서 작용할 때, 다양한 영양소가 함유된 기능성 추출액에 의해 약재 원료의 약리작용의 효과를 증대시킬 수 있다.

발효단계(S32)는 콜라겐 원료 1,000 중량부에 대하여 기능성 추출액 10 내지 20 중량부를 발효기에 넣을 수 있다. 이때, 기능성 추출액이 10 중량부 미만일 경우 기능성 추출액의 효과가 미미할 수 있고, 20 중량부를 초과할 경우 복합효소의 활성에 영향을 줄 수 있다.

구체적으로 기능성 추출액은 사과껍질 추출액, 올리브잎 추출액 및 오레가노 추출액 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 기능성 추출액은 사과껍질 추출액 3 내지 5중량부, 올리브잎 추출액 1 내지 3 중량부, 오레가노 추출액 0.5 내지 0.9중량부 중 하나 이상을 포함 할 수 있다. 바람직하게는 사과껍질 추출액 4중량부, 올리브잎 추출액 2중량부, 오레가노 추출액 0.7중량부를 포함할 수 있다.

먼저, 사과껍질은 안토시아닌, 폴리페놀, 트리터페노이드, 펙틴, 비타민 A, 비타민 C, 케프세틴, 우르솔산을 함유하고 있어, 노화방지, 암예방, 나트륨 배출, 폐기능 강화, 알츠하이머 예방, 근육 증량 등의 효과가 있다. 특히, 케프세틴 성분은 항산화 작용이 뛰어나, 몸의 손상과 노화를 일으키는 산화를 막거나 늦춰준다. 또한, 사과껍질은 사과과육보다 폴리페놀, 플라보노이드, 우르솔산 함량이 높아 사과과육보다 사과껍질이 항산화 효과가 크다.

사과껍질 추출액은 말린 사과껍질 중량대비 3 내지 5배량의 증류수를 넣고 50 내지 80℃의 온도에서 60 내지 80분동안 추출하고 10 내지 20brix로 농축하여 얻을 수 있다.

여기서, brix(브릭스)는 당도를 측정하는 단위로, 수용액 속에 녹아 있는 용질의 양을 나타내는 단위로 사용된다. brix는 당도뿐만 아니라 가용성 고형분인 염, 단백질, 산 등의 양을 나타내므로, 사용자의 선호도에 따라 상술한 brix 농도 이외의 brix 농도로 농축이 가능하다.

이때, 추출 온도가 50℃ 미만인 경우 사과껍질에서 추출되는 유효성분의 양이 적을 수 있고, 80℃ 초과하는 경우 사과껍질의 유효성분이 파괴될 수 있다. 추출시간이 30분 미만인 경우 사과껍질의 유효성분의 양이 적어 저분자 콜라겐에서 효과가 미미할 수 있고, 80분을 초과하는 경우 제조공정상 경제적으로 비효율적일 수 있다.

올리브잎은 올러유러핀, 하이드록시 티로솔 등 항진균성, 항바이러스성 및 항균성 성분을 함유하고 있어 '자연 항생제'라 불렸다. 특히, 올리브잎의 항산화 능력은 녹차나 비타민C 보다 우수하여, 신체의 유해산소를 제거할 수 있다.

올리브잎 추출액은 50 내지 80℃의 정제수에 올리브잎을 30 내지 60분 동안 추출하고 5 내지 10brix로 농축하여 제조할 수 있다.

이때, 추출 온도가 50℃ 미만인 경우 올리브잎에서 추출되는 유효성분의 양이 적을 수 있고, 80℃ 초과하는 경우 올리브잎의 유효성분이 파괴될 수 있다. 추출시간이 30분 미만인 경우 올리브잎의 유효성분의 양이 적어 저분자 콜라겐에서 효과가 미미할 수 있고, 60분을 초과하는 경우 제조공정상 경제적으로 비효율적일 수 있다.

또한, 추출농도는 5bix 미만일 경우 올리브잎의 농도가 매우 낮아 효과가 미미할 수 있고, 10brix를 초과할 경우 떫은 맛이 가미될 수 있다.

상기와 같이 추출된 올리브잎 추출액은 올리브잎 추출액 1 내지 3중량부가 첨가될 수 있으며, 1 중량부 미만일 경우 올리브잎을 첨가하는 효과가 미미할 수 있고, 3 중량부를 초과할 경우 올리브잎 향이 강하여 섭취 시 기호도가 감소할 수 있으므로 2 중량부를 첨가하는 것이 바람직하다.

오레가노는 내한성의 다년생 관목 허브로 항균성 항바이러스성 및 항진균성 성분을 다수 포함하고 있다. 항산화 효과가 있는 페놀 성분인 티몰과 카르바크롤이 풍부하여 독소에 대한 방어막 작용을 하고 다양한 박테리아 감염에도 효과적이다. 또한, 오레가노는 강장·이뇨·건위·식욕증진·진정·살균 작용이 있으며, 배멀미나 신경성 두통, 불면증에도 효과가 크다. 영양성분은 칼슘 1,597㎎, 철 36.80㎎, 마그네슘 270㎎, 인 148㎎, 칼륨 1,260㎎, 베타카로틴 1,007㎍ 등을 함유하고 있다.

오레가노 추출액은 80 내지 100℃의 정제수에 분말형태인 오레가노를 넣고 2 내지 4시간 동안 추출하고 10 내지 20brix로 농축하여 추출할 수 있다.

이때, 추출 온도가 80℃ 미만인 경우 오레가노에서 추출되는 유효성분의 양이 적을 수 있고, 100℃ 초과하는 경우 물이 증발하여 사용할 오레가노 추출액이 부족하게 될 수 있다. 추출시간이 2시간 미만인 경우 오레가노의 유효성분의 양이 적어 효과가 미미할 수 있고, 4시간을 초과하는 경우 오레가노의 쓴맛이 우러나 기호도가 감소할 수 있다.

또한, 추출농도는 10bix 미만일 경우 오레가노의 농도가 매우 낮아 효과가 미미할 수 있고, 20brix를 초과할 경우 쓴맛이 가미되어 기호도를 저하할 수 있다.

상기와 같이 추출된 오레가노 추출액은 0.5 내지 0.9 중량부로 첨가될 수 있으며, 0.5 중량부 미만으로 첨가할 경우 오레가노의 효능을 도출하기 어려우며, 0.9 중량부를 초과하여 첨가할 경우에는 부작용을 동반할 수 있으므로 0.7 중량부를 첨가하는 것이 바람직하다.

한편, 본 발명의 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐은 닭발 및 닭벼슬로 구성된 닭 원료, 증류수 및 약재 원료를 중탕하여 추출한 콜라겐 원료 및 복합효소를 발효하여 제조된 것일 수 있다.

여기서, 콜라겐 원료를 추출하기 위한 닭 원료, 증류수 및 약재 원료 각각의 중량비, 추출조건에 대한 것과, 저분자 콜라겐을 추출하기 위한 콜라겐 원료 및 복합효소 각각의 중량비, 추출조건에 대해서는 상기 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 제조방법에 기재된 내용과 동일하므로 생략하기로 한다.

이하, 본 발명의 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 및 그 제조방법에 대하여 실시예, 비교예, 실험예를 통해 구체적으로 설명한다.

이하, 실시되는 실험 예들은 이해를 돕기 위하여 제시되는 것으로서, 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 하기 실험 예들에 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

[실시예 1]

먼저, 닭 원료(닭발 및 닭벼슬) 1㎏를 침지용액(0.1N 과산화수소 및 0.1N 수산화나트륨 용액) 10L에 25분 동안 침지하고 증류수로 여러 차례 세척하였다.

세척한 닭 원료 1㎏에 증류수 4L, 약재원료 30g(황기 4 중량부, 당귀 3 중량부, 계지 3 중량부, 두충 3 중량부, 백출 3 중량부, 우슬 3 중량부, 독활 2 중량부, 금은화 2 중량부, 모과 2 중량부, 홍화씨 2 중량부, 포공영 2 중량부 및 위령선 2 중량부)를 넣고 110℃에서 24시간 동안 중탕에서 콜라겐 원료를 추출하였다.

콜라겐 원료 1㎏를 발효기에 넣고 110℃에서 15분 동안 가열하여 끓인 뒤, 45℃로 냉각되었을 때, 복합효소 30g(락타아제, 리파아제, 알파 아밀라아제, 셀룰라아제 및 중성 프로테아제가 동일한 중량비로 혼합된 것)을 넣고 24시간 동안 발효하였다.

마지막으로 110℃에서 25분 동안 멸균처치를 하여 저분자 콜라겐을 획득하였다.

[실시예 2]

상기 실시예 1과 동일하게 제조되되, 발효 시 기능성 추출액 15 중량부(사과껍질 추출액 4중량부, 올리브잎 추출액 2중량부, 오레가노 추출액 0.7중량부)을 첨가하였다.

[비교예 1]

본 발명의 기술분야에서 사용되는 일반적인 유산균(lactic:lactobacillus) 이다.

[실험예 1] 골관절염 예방 및 치료 효과

실시예 1 및 실시예2의 골관절염 예방 및 치료효과를 알아보기 위해 MIA(Monosodium iodoacetate)로 유도한 관절염 동물 모델 실험을 하기와 같이 실시하였다.

실험동물로는 MIA로 쉽게 퇴행성 관절염이 유발되는 랫트 수컷(체중 ~ 200g)을 이용하여 매일 1회 같은 시간에 5주간 시험군별로 시험물질을 경구투여 하였다. 마지막 날 랫트를 12시간 절식시킨 후 혈액을 채취하여 혈청검사를 통해 MMP-9(염증매개인자) 및 TIMP-1(관절보호인자)를 측정하였다.

여기서, 시험군은 아래와 같이 분류하였다.

Group	표기명	조건
Group 1	NC (Nomal Control)	정상쥐
Group 2	C (Control)	퇴행성 관절염 유발된 쥐
Group 3	비교예 1	C에 비교예 1을 경구투여한 쥐
Group 4	실시예 1	C에 실시예 1을 경구투여한 쥐
Group 5	실시예 2	C에 실시예 2을 경구투여한 쥐

또한, 랫트는 무릎 주변을 제모하고 MIA를 1㎖ 주사기로 오른쪽 무릎 관절강 내에 3㎎/㎏을 주사하여 퇴행성 관절염을 유발하였다. 그 결과는 도 3 및 도 4에 나타내었다.

하기 도 3에 나타난 바와 같이, 실시예 1 및 실시예 2 시험군 모두 C 시험군 및 비교예 1 시험군보다 MMP-9 생성량이 낮은 것을 확인할 수 있다.

구체적으로, 실시예 1 및 실시예 2 시험군은 퇴행성 관절염이 유발된 C 시험군 및 유산균을 경구투여한 비교예 1 시험군에 비해 MMP-9 생성량이 감소되었으며, 정상쥐인 NC 시험군과 가까운 MMP-9 생성량을 보여 관절염 효능에 우수한 경향을 보였다.

특히, 실시예 2 시험군은 실시예 1 시험군 보다 다소 낮은 MMP-9 생성량을 보여, 기능성 추출액의 항산화 물질들이 긍정적인 영향을 준 것으로 판단된다.

또한, 도 4를 참조하면, 실시예 1 및 실시예 2 시험군 모두 C 시험군 및 비교예 1 시험군보다 TIMP-1 생성량이 높은 것을 확인할 수 있다.

구체적으로, 실시예 1 및 실시예 2 시험군은 퇴행성 관절염이 유발된 C 시험군 및 유산균을 경구투여한 비교예 1 시험군에 비해 TIMP-1 생성량이 증가되었으며, 정상쥐인 NC 시험군과 가까운 TIMP-1 생성량을 보여 관절염 효능에 우수한 경향을 보였다.

특히, 실시예 2 시험군은 실시예 1 시험군 보다 다소 높은 TIMP-1 생성량을 보여, 기능성 추출액의 항산화 물질들이 긍정적인 영향을 준 것으로 판단된다.

따라서, 본 발명의 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐은 골관절염에 대한 우수한 치료 효능을 발휘하고 있음을 알 수 있다.

또한, 상기에 게시된 실험예 외에도 본 발명의 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐은 건강증진, 면역력 증강, 활력증진 등을 위한 기능성 소재로 사용이 가능하다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 자명한 것이다.

이상으로 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예를 설명하였으나, 본 발명의 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고 다른 구체적인 형태로 실시할 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 따라서 이상에서 기술한 실시예는 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것이다.

S10 : 닭 원료 세척 단계
S20 : 콜라겐 원료 제조 단계
S30 : 저분자 콜라겐을 획득하는 단계
S31 : 가열단계
S32 : 발효단계
S33 : 멸균처리단계

Claims (10)

1. 닭발 및 닭벼슬로 구성된 닭 원료를 침지용액에 넣고 침지한 뒤, 세척하는 닭 원료 세척 단계;
   상기 세척된 닭 원료, 증류수 및 약재 원료를 넣고 중탕에서 콜라겐을 추출한 후 냉각하여 콜라겐 원료를 제조하는 콜라겐 원료 제조 단계 및
   상기 콜라겐 원료를 발효기에 넣고 가열하여 끓이고, 냉각한 뒤 복합효소를 넣고 발효한 다음, 멸균처리하여 저분자 콜라겐을 획득하는 단계를 포함하고,
   상기 저분자 콜라겐을 획득하는 단계는,
   상기 콜라겐 원료를 발효기에 넣고 100 내지 115℃에서 10 내지 20분동안 100bar 압력하에서 가열하여 끓이는 가열단계;
   상기 가열된 콜라겐 원료에 40 내지 50℃의 온도에서 복합효소를 넣고 24 내지 30시간 동안 발효하는 발효단계 및
   상기 발효단계를 마친 상기 콜라겐 원료를 100 내지 120℃에서 25 내지 35분 동안 멸균처리하는 멸균처리단계를 포함하고,
   상기 발효단계는 기능성 추출액을 추가하고,
   상기 기능성 추출액은,
   사과껍질 추출액, 올리브잎 추출액 및 오레가노 추출액 중 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 제조방법.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 닭 원료 세척 단계는,
   상기 닭 원료를 닭 원료 중량대비 8 내지 15배의 상기 침지용액에 넣고 20 내지 30시간 동안 침지한 뒤, 세척하는 것을 특징으로 하는 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 제조방법.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 콜라겐 원료 제조 단계는,
   상기 세척된 닭 원료 1,000 중량부에 대하여, 증류수 2,500 내지 5,000 중량부 및 약재 원료 20 내지 40 중량부를 넣고 100 내지 120℃에서 24 내지 30시간 동안 중탕에서 콜라겐을 추출한 후 냉각하는 것을 특징으로 하는 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 제조방법.
   
4. 삭제
5. 제1항에 있어서,
   상기 침지용액은,
   0.1 내지 1.0N 과산화수소 및 0. 1 내지 1.0N 수산화나트륨 용액으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 제조방법.
   
6. 제1항에 있어서,
   상기 약재 원료는,
   황기, 당귀, 계지, 두충, 백출, 우슬, 독활, 금은화, 모과, 홍화씨, 포공영 및 위령선 중 하나 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 제조방법.
   
7. 제6항에 있어서,
   상기 약재원료는,
   상기 세척된 닭 원료 1,000 중량부에 대하여, 황기 2 내지 10 중량부, 당귀 1 내지 6 중량부, 계지 1 내지 6 중량부, 두충 1 내지 6 중량부, 백출 1 내지 6 중량부, 우슬 1 내지 6 중량부, 독활 0.5 내지 3 중량부, 금은화 0.5 내지 3 중량부, 모과 0.5 내지 3 중량부, 홍화씨 0.5 내지 3 중량부, 포공영 0.5 내지 3 중량부 및 위령선 0.5 내지 3 중량부를 포함하는 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 제조방법.
   
8. 제1항에 있어서,
   상기 복합효소는,
   락타아제, 리파아제, 알파 아밀라아제, 셀룰라아제 및 중성 프로테아제 중 하나 이상을 포함하는 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐 제조방법.
   
9. 삭제
10. 제 1 항의 제조방법을 통해 제조되는 것을 특징으로 하는 복합효소를 사용한 발효 저분자 콜라겐.