KR102368446B1 - 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 더 상세하게는 인슐린 저항성 및 혈당강하 활성을 나타내며 부작용 없는 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물은 양파, 녹차, 계피 및 귀뚜라미를 포함하는 천연복합물로부터 추출한 복합추출물을 유효성분으로 함유한다.

Description

당뇨병 예방 또는 치료용 조성물{Composition for preventing or treating diabetes}

본 발명은 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 더 상세하게는 인슐린 저항성 및 혈당강하 활성을 나타내며 부작용 없는 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

당뇨병은 유전적 요인과 더불어 후천적 요인인 비만, 식생활, 운동부족 및 스트레스 등에 의해 영향을 받는 질병으로, 췌장 세포에서 분비되는 인슐린의 분비 장애 및 작용 부족에 의해 유발된 대사장애로 정의된다.

당뇨병은 크게 제1형 당뇨병(type 1 diabetes mellitus, T1DM)과, 제2형 당뇨병(type 2 diabetes mellitus, T2DM)으로 분류할 수 있다. 제1형 당뇨병은 어린 나이에 발병하기 쉬우며 체내에서 인슐린(insulin)이 거의 생산되지 않아서 발병한다. 자가 면역 반응에 의한 베타 세포 손상이 잘 밝혀진 원인이다. 인슐린 부족에 의한 증상이므로 인슐린 주사를 통해 증상 완화가 가능하지만, 음식 섭취량과 인슐린 주사량의 비율을 평생 조절하여야 한다. 제2형 당뇨병은 제1형에 비해 비교적 천천히 진행되며 주로 나이가 들수록, 비만도가 심할수록 발병하기 쉬운 것으로 알려져 있다. 초기 증상은 약하게 드러나는 편이므로 환자 스스로 자각하지 못하는 경우가 많다. 포괄적으로 인슐린의 조절 활성도(regulatory activity)가 망가지게 되는 모든 경우를 제2형 당뇨병으로 분류한다. 인슐린 생산은 정상적으로 이루어지나 인슐린 반응 체계가 망가졌다고 할 수 있다. 이를 인슐린 저항(insulin-resistant)이라 한다.

이러한 당뇨병은 고혈당이 만성으로 지속되면서 당질 대사 뿐 아니라 지질 및 단백질의 대사에도 장애를 일으켜, 망막, 신장, 신경, 심혈관계 등의 합병증을 유발시킴으로써 환자에게 고통과 함께 수명단축의 치명적인 문제를 초래할 수 있다.

당뇨병 치료의 가장 중요한 목표는 혈당치를 가능한 정상 수치에 가깝게 조절하는 것인데, 공복혈당과 함께 식ㆍ후 혈당 조절이 당뇨병 증세의 개선과 합병증의 예방 및 치료에 있어서 중요하며, 치료방법으로 약물요법, 식이요법 및 운동 요법이 있다.

그러나 흔히 사용되는 약물요법은 인슐린 및 화학적 경구혈당강하제 등의 화학물질을 사용하고 있어 약물복용에 따른 부작용과 환자의 내성이 끊임없는 문제가 되고 있어 이 때문에 천연물을 이용한 당뇨치료제의 개발이 필요하다.

(특허 문헌1) : 대한민국 등록특허 제10-0441643호

본 발명의 목적은 인슐린 저항성 및 혈당강하 활성을 나타내며 부작용 없는 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명에 따른 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물은 양파, 녹차, 계피 및 귀뚜라미를 포함하는 천연복합물로부터 추출한 복합추출물을 유효성분으로 함유한다.

본 발명의 일 실시예에 따른 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물에 있어서, 벌등골나물로부터 추출된 분산성추출물을 더 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물에 있어서, 복합추출물 100중량부에 대해 분산성추출물 10 내지 50중량부를 함유할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물에 있어서, 천연복합물은 미분쇄 동결 귀뚜라미 100중량부에 대하여, 양파 50 내지 70중량부, 녹차 10 내지 30중량부, 계피 10 내지 30중량부를 함유할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물에 있어서, 복합추출물은 열수 추출물일 수 있다.

본 발명에 따른 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물을 제조하는 방법은 (S1) 세척, 살균 및 건조되어 동결된 귀뚜라미, 양파분말, 녹차분말, 계피분말이 혼합된 천연복합물을 준비하는 단계; (S2) 천연복합물을 열수 추출하여 복합추출물을 수득하는 단계;를 포함한다.

본 발명의 일 실시예에 따른 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물을 제조하는 방법에 있어서, 열수는 40 내지 70℃의 온도일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물을 제조하는 방법에 있어서, 복합추출물은 칼륨 4중량% 이상을 함유할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물을 제조하는 방법에 있어서, (S1)단계의 귀뚜라미는 미분쇄된 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물을 제조하는 방법에 있어서, (S2)단계 이후, (S3) 벌등골나물을 열수 추출하여 수득한 분산성추출물을 복합추출물에 혼합하는 단계;를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물을 제조하는 방법에 있어서, (S3)단계에서 분산성추출물은 복합추출물에 혼합되기 전, 40 내지 60℃에서 가열 및 농축되는 단계를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 당뇨병 또는 당뇨 합병증의 치료 또는 예방용 조성물은 인슐린 저항성 및 혈당강하 활성을 나타내고, 천연 성분으로서 안전성이 확보되어 당뇨병의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 복합추출물의 포도당 내성 효과를 나타내는 인슐린 내성 검사 결과를 나타내는 그래프,
도 2는 도 1에 도시된 복합추출물의 포도당 내성 효과를 나타내는 복강 내당능 검사 결과를 그래프,
도 3은 도 1에 도시된 복합추출물의 주별 공복혈당강하 효과를 나타내는 그래프,
도 4는 도 1에 도시된 복합추출물의 당화혈색소 강하효과를 나타내는 혈청 중 당화혈색소(HbA1c) 검사 결과를 나타내는 그래프,
도 5는 도 1에 도시된 복합추출물의 C-펩타이드(c-peptide) 분비 개선 효과를 나타내는 그래프,
도 6은 도 1에 도시된 복합추출물의 인슐린 분비 개선 효과를 나타내는 그래프,
도 7은 도 1에 도시된 복합추출물의 간 및 신장 독성 평가를 나타내는 혈청 중 (alanine transferase, ALT)와 아스파르테이트아미노전달효소(aspartate aminotransferase, AST)의 측정 결과를 나타내는 그래프,
도 8은 도 1에 도시된 복합추출물의 간 및 신장 독성 평가를 나타내는 혈청 중 크레아틴(creatinine)의 측정 결과를 나타내는 그래프,
도 9는 도 1에 도시된 복합추출물의 췌장 베타세포 재생 효과를 나타내는 췌장의 헤마톡실린 에오신(Hematoxylin&Eosin, H&E)염색 결과 사진,
도 10은 도 1에 도시된 복합추출의 췌장 베타세포 재생 효과를 나타내는 췌장의 조직면역(immunohistochemistry, IHC) 염색 결과 사진이 도시되어 있다.

본 명세서에서 사용되는 기술 용어 및 과학 용어에 있어서 다른 정의가 없다면, 이 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 통상적으로 이해하고 있는 의미를 가지며, 하기의 설명 및 첨부 도면에서 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있는 공지 기능 및 구성에 대한 설명은 생략한다.

또한, 본 명세서에서 사용되는 단수 형태는 문맥에서 특별한 지시가 없는 한 복수 형태도 포함하는 것으로 의도할 수 있다.

또한, 본 명세서에서 특별한 언급 없이 사용된 단위는 중량을 기준으로 하며, 일 예로 % 또는 비의 단위는 중량% 또는 중량비를 의미하고, 중량%는 달리 정의되지 않는 한 전체 조성물 중 어느 하나의 성분이 조성물 내에서 차지하는 중량%를 의미한다.

또한, 본 명세서에서 사용되는 수치 범위는 하한치와 상한치와 그 범위 내에서의 모든 값, 정의되는 범위의 형태와 폭에서 논리적으로 유도되는 증분, 이중 한정된 모든 값 및 서로 다른 형태로 한정된 수치 범위의 상한 및 하한의 모든 가능한 조합을 포함한다. 본 발명의 명세서에서 특별한 정의가 없는 한 실험 오차 또는 값의 반올림으로 인해 발생할 가능성이 있는 수치범위 외의 값 역시 정의된 수치범위에 포함된다.

본 명세서의 용어, '포함한다'는 '구비한다', '함유한다', '가진다' 또는 '특징으로 한다' 등의 표현과 등가의 의미를 가지는 개방형 기재이며, 추가로 열거되어 있지 않은 요소, 재료 또는 공정을 배제하지 않는다.

또한, 본 명세서의 용어, '실질적으로'는 특정된 요소, 재료 또는 공정과 함께 열거되어 있지 않은 다른 요소, 재료 또는 공정이 발명의 적어도 하나의 기본적이고 신규한 기술적 사상에 허용할 수 없을 만큼의 현저한 영향을 미치지 않는 양 또는 정도로 존재할 수 있는 것을 의미한다.

본 명세서의 용어, “혈당 조절”은 특별한 언급이 없는 한, 혈당강하를 의미한다.

본 명세서의 용어, “당뇨병”은 제1형 당뇨병 또는 제2형 당뇨병일 수 있으다.

본 명세서의 용어, "예방"은 본 발명 조성물의 투여로 당뇨병의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 명세서의 용어, "치료"란 본 발명 조성물의 투여로 당뇨병의 증세를 호전시키거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.

본 명세서의 용어, "식품"이란 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 기능성식품 및 음료를 모두 포함하는 의도이다.

본 명세서의 용어, "기능성식품"이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 생체 조절 기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미하며, 특히 "건강기능식품"을 포함한다.

본 명세서의 용어, "건강보조식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 가공한 식품으로서, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 건강보조의 목적으로 특정성분을 원료로 하거나 식품원료에 들어있는 성분을 추출, 농축, 정제, 혼합 등의 방법으로 제조, 가공한 식품을 말한다.

종래, 당뇨병 치료를 위한 약물요법은 인슐린 및 화학적 경구혈당강하제 등의 화학물질을 사용하고 있다. 그러나 이러한 화학물질을 사용하는 약물용법은 약물복용에 따른 부작용과 환자의 내성이 끊임없는 문제가 되고 있으며, 이러한 이유로 천연물을 이용한 당뇨치료제의 개발이 요구되고 있다.

본 발명은 양파, 녹차, 계피 및 귀뚜라미를 포함하는 천연복합물로부터 추출한 복합추출물을 유효성분으로 함유하는 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물로, 천연 성분을 포함하여 안전성이 확보되고 당뇨병 포유동물의 췌장으로부터 인슐린 분비를 증가시키며, 공복시 혈당을 강화시키며, 내당능(glucose tolerance)을 개선시킨다.

천연복합물에 포함되는 양파(Allium cepa)는 수선화과의 부추아과 부추속에 속한 식물이다. 알리움 케파라는 학명은 부추속에 속한 양파 중에서도 영어로 garden onion, bulb onion, shallot이라고 부르는 것을 말한다. 바람직하게, 양파는 양파의 비늘줄기를 일컫는다. 비늘줄기는 아황산프로필 및 황화알릴 등의 화합물을 함유하고 있으며, 이것은 생리적으로 소화액 분비를 촉진시키고 신진대사를 활발하게 하는 효과가 있다.

녹차(綠茶)는 발효시키지 않은 찻잎으로, 차나무(Camellia sinensis) 로부터 채취한 신선한 찻잎을 고온 가열하여 잎 속의 산화효소의 작용을 억제시킨 후 비비고 말리고 정제하는 등의 가공을 거쳐 만든다. 녹차는 항산화 효과와 혈전 형성을 막아주고 콜레스테롤과 혈당을 낮추는 효능을 가진다.

계피는 계수나무 (Cercidiphyllum japonicum)의 뿌리, 줄기, 가지 등의 껍질을 벗겨서 말리거나, 껍질을 벗기지 않고 건조시킨 가느다란 가지[桂枝]를 말할 수 있다. 계피나무의 껍질은 계피 (桂皮), 옥계 (玉桂), 대계 (大桂) 등으로 부른다.계피나무의 껍질인 계피에는 탄닌과 정유성분의 대부분을 차지하는 신남 알데히드 (cinnamic aldehyde), 신남산 (cinnamic acid) 등이 함유되어 있다. 계피는 한방에서 혈관 및 순화기 치료제로 쓰이고, 발한, 해열, 진토효과로 인해 감기치료제, 진통제 등로 사용되고 있다.

귀뚜라미는(Gryllus)는 메뚜기목의 한 과이다. 예로부터 귀뚜라미를 식용으로 쓴다. 한국과 같은 국가에서는 귀뚜라미를 이뇨제 등의 용도로 약용(藥用)하기도 한다. 귀뚜라미는 본 발명의 목적 달성에 위배되지 않는 선에서 그 종류에 크게 제한되지 않고 식용에 사용될 수 있는 것이라면 무방하며, 구체적인 일 예로, 대한민국 식품의약품안전처에서 식용으로 인정한 쌍별귀뚜라미(Gryllus bimaculatus)를 들 수 있다. 하지만 이는 바람직한 일 예로서 이에 한정되진 않는다.

천연복합물은 상기한 양파, 녹차, 계피 및 귀뚜라미를 포함한다. 천연복합물은 분말상으로 구비될 수 있으나, 바람직하게 천연복합물에 포함되는 귀뚜라미는 미분쇄 동결 귀뚜라미일 수 있다. 미분쇄 동결 귀뚜라미는 냉동시켜 동결된 귀뚜라미를 분쇄하지 않은 것으로, 열수 추출될 시, 동결된 귀뚜라미를 분쇄시킨 귀뚜라미 분말보다 높은 영양성분을 함유할 수 있다. 바람직하게 천연복합물은 미분쇄 동결 귀뚜라미 100중량부에 대하여, 양파 50 내지 70중량부, 녹차 10 내지 30중량부, 계피 10 내지 30중량부를 함유할 수 있다. 더욱 바람직하게는 미분쇄 동결 귀뚜라미 100중량부에 대하여, 양파 55 내지 65중량부, 녹차 15 내지 25중량부, 계피 15 내지 25중량부를 함유할 수 있다. 상기와 같은 범위에서 재료 투입량 대비하여 실질적인 당뇨질환 치료 효과에 중요한 의미를 가지는 다량의 유효성분을 포함하여 경제성을 지닌다.

상세하게, 본 발명의 조성물은 양파, 녹차, 계피 및 귀뚜라미를 포함하는 천연복합물을 추출한 복합추출물일 수 있다. 복합추출물은 천연복합물로부터 분리된 활성성분 즉, 목적하는 활성을 보이는 물질의 혼합물을 의미할 수 있다. 복합추출물은 일 양태에 있어서, 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매의 추출액일 수 있으며 이와 달리 이의 건조 분말 또는 이를 이용하여 제형화된 모든 형태를 포함할 수 있다. 다른 일 양태로, 복합추출물은 추출과정을 거친 추출액을 분획한 것도 포함될 수 있다. 복합추출물은 예를 들면, 초음파 추출법, 환류 냉각 추출법, 열수 추출법 또는 상기 유기용매를 추출용매로 하여 공지의 방법에 의해 추출된 추출물일 수 있다.

바람직하게, 복합추출물은 분말상의 양파, 녹차, 계피와 미분쇄된 동결상태의 귀뚜라미를 포함하는 천연복합물로부터 열수 추출된 열수추출물일 수 있다. 미분쇄된 동결상태의 귀뚜라미를 열수 추출한 귀뚜라미 열수 추출물은 분말상의 귀뚜라미보다 폴리페놀, 마그네슘 및 칼륨 등의 영양성분을 다량 함유한다. 즉, 본 발명의 복합추출물은 미분쇄된 동결상태의 귀뚜라미를 포함하는 천연복합물로부터 열수 추출됨에 따라, 폴리페놀, 마그네슘 및 칼륨을 포함하는 영양성분을 다량 함유할 수 있다. 특히, 혈액 내 포도당이 글리코겐으로 전화되어 저장되거나 단백질이 저장될 때 필요한 칼륨이 다량 함유되어 당뇨예방 및 치료제로 사용 시 더욱 우수한 인슐린 저항성 및 혈당강화가질 수 있다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 복합추출물은 벌등골나물로부터 추출된 분산성추출물을 더 포함할 수 있다.

벌등골나물(Eupatorium fortunei)은 패란이라고도 하며, 우리나라 전역에 자생한다. 벌등골나물은 거담(祛痰), 항염, 위장운동조절, 항종양등의 작용이 있는 것으로 알려져 있으며, 한의학에서 방향화습(芳香化濕), 성비(醒脾), 해서(解暑)의 효능이 있다.

복합추출물은 장시간 동안 보관할 경우, 미세입자들이 뭉쳐 가라앉으며 파우더가 생성됨에 따라 고액분리되어 저장안정성이 저하될 수 있다. 이에, 복합추출물의 분산성을 향상시켜 저장안정성을 증진시킬 수 있는 물질이 요구된다. 본 발명은 천연 유래 물질인 벌등골나물로부터 추출한 분산성추출물이 복합추출물의 분산성을 향상시켜 저장안전성을 증진시킬 수 있음을 확인하였다.

분산성추출물은 일 양태에 있어서, 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매의 추출액일 수 있으며 이와 달리 이의 건조 분말 또는 이를 이용하여 제형화된 모든 형태를 포함할 수 있다. 다른 일 양태로, 분산성추출물은 추출과정을 거친 추출액을 분획한 것도 포함될 수 있다. 분산성추출물은 예를 들면, 초음파 추출법, 환류 냉각 추출법, 열수 추출법 또는 상기 유기용매를 추출용매로 하여 공지의 방법에 의해 추출된 추출물일 수 있다. 바람직하게, 분산성추출물은 분말상의 벌등골나물을 열수 추출한 열수추출물일 수 있다. 열수 추출한 분산성추출물은 열수추출물인 복합추출물에 용이하게 혼합될 수 있다. 본 발명의 조성물은 복합추출물 100중량부에 대해 분산성추출물 10 내지 50중량부, 바람직하게는 20 내지 40중량부를 함유할 수 있으며, 상기한 범위에서 분상성추출물의 투입량대비 우수한 저장안정성을 얻을 수 있다.

이상에서 설명한 본 발명의 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물은 천연 성분으로서 안전성이 확보되며 인슐린 저항성 및 혈당강하 활성을 나타내어 당뇨병의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 복합추출물은 실제 임상투여 시에 경구 및 비경구의 여러가지 제형으로 될 수 있는데 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며 이러한 고형제제는 위의 생약재 추출물에 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 칼슘카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(loctose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스트레이트, 탈크 같은 윤활제들을 더 포함할 수 있으며, 경구를 위한 액상 제제로는 현탁액, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수용성 용제, 현탁용제로는 프로필렌 글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌글리콜, 올리브오일과 같은 식물성기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 따른 조성물은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 공지된 통상의 방법에 따라 정제, 캡슐, 과립제, 환제, 현탁액, 시럽 등의 다양한 제형으로 제형화되어 사용될 수 있다.

본 발명의 양파, 녹차, 계피 및 귀뚜라미를 함유하는 천연복합물로부터 추출한 복합추출물은 우수한 당뇨병 치료 또는 예방 효과를 제공할 뿐만 아니라, 약물에 의한 독성 및 부작용도 없어 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있다.

이에 따라, 복합추출물은 식품의 주, 부원료 및 식품 첨가제로서 사용이 가능하며 본 발명의 조성물은 복합추출물을 포함하는 식품조성물로 제공될 수 있다. 식품 조성물은 건강보조식품, 기능성 식품, 식품첨가제 등에 포함되는 것으로. 상기 건강보조식품, 기능성식품, 식품 첨가제는 당뇨병의 개선 또는 예방용 작용을 가진다. 기능성식품 및 건강보조식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 더욱 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.

복합추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 본 발명에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류 (예, 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실,채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면 스프 등)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.

본 발명에서 기능성 음료란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며 기능성 음료를 포함하는 의도이다. 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로스 등 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일 주스, 과일 쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육을 추가로 함유할 수 있다.

본 발명의 조성물을 구성하는 각 추출물 자체는 자연식품으로서 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있다.

이하, 상기한 본 발명의 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물의 제조방법에 대해 상세히 설명한다.

본 발명의 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물은 (S1) 세척, 살균 및 건조되어 동결된 귀뚜라미, 양파분말, 녹차분말, 계피분말이 혼합된 천연복합물을 준비하는 단계; (S2) 천연복합물을 열수 추출하여 복합추출물을 수득하는 단계;를 포함할 수 있다. 이와 같은 추출방법으로 추출한 복합추출물은 분말상의 귀뚜라미보다 폴리페놀, 마그네슘 및 칼륨 등의 영양성분을 다량 함유한다. 즉, 본 발명의 복합추출물은 미분쇄된 동결상태의 귀뚜라미를 포함하는 천연복합물로부터 열수 추출됨에 따라, 폴리페놀, 마그네슘 및 칼륨을 포함하는 영양성분을 다량 함유할 수 있다. 특히, 혈액 내 포도당이 글리코겐으로 전화되어 저장되거나 단백질이 저장될 때 필요한 칼륨이 4중량% 이상 함유되어 당뇨예방 및 치료제로 사용 시 더욱 우수한 인슐린 저항성 및 혈당강화가질 수 있다.

상세하게, (S1)단계는 천연복합물을 준비하는 단계로, 분말상의 양파, 녹차 및 계피와 세척, 살균 및 건조되어 동결된 귀뚜라미를 준비한다. (S1)단계에서 양파, 녹차 및 계피의 분말은 양파, 녹차 및 계피를 각각 건조 및 분쇄하거나 양파, 녹차, 계피가 혼합된 혼합물을 건조시킨 후 분쇄하여 수득할 수 있다. 이와 달리 양파, 녹차 및 계피 각각의 추출액을 동결건조 시킨 후 분쇄하거나 양파, 녹차 및 계피가 혼합된 혼합물의 추출액을 동결건조 시킨 후 분쇄하여 수득할 수 있다. 바람직하게는 보관성을 향상시키기 위하여 양파, 녹차 및 계피 각각의 추출액을 동결건조시켜 분쇄한 분말을 준비한다.

양파, 녹차 및 계피 각각의 추출액 및 혼합물의 추출액은 다양한 방법으로 추출이 가능하다. 일 예로 열수추출, 냉침 또는 온침 추출 등을 이용할 수 있다. 또한, 환류냉각추출, 초음파 추출방법 등을 이용할 수 있으며, 상술한 추출방법뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 활성 분획도 추출물에 포함될 수 있다.

양파, 녹차 및 계피 각각의 추출액 및 혼합물의 추출액을 동결건조 시키는 공정은 -70 내지 -20℃, 상세하게는 -50 내지 -40℃의 온도에서 수행할 수 있다. 상기 범위의 온도보다 낮을 경우 에너지 투입량이 너무 높아 효율성이 떨어지고, 반대로 높을 경우, 동결된 추출액의 저장성이 좋지 못하다. 동결건조의 압력은 3 내지 80torr, 바람직하게는 40 내지 60torr 일 수 있으며, 시간은 5 내지 48시간, 바람직하게는 20 내지 30시간 일 수 있다. 상기한 범위에서 건조가 원활하게 진행될 수 있다. 상술한 바와 달리, 양파, 녹차 및 계피의 분말은 추출액이 동결건조 및 분쇄되어 시중에서 판매되는 제품을 사용할 수 있다.

양파분말은 양파의 비늘줄기 부분을 이용할 수 있다. 양파분말은 신진대사를 활발하게 하며 제조한 조성물의 당뇨 예방 및 치료 효능을 강화시켜 줄 수 있다. 양파분말은 후술할 미분쇄 동결 귀뚜라미 100중량부에 대해 50 내지 70중량부, 바람직하게는 55 내지 65중량부가 함유될 수 있다. 양파분말의 첨가량이 미분쇄 동결 귀뚜라미 대비 50중량부 미만이면 효능을 기대하기 어려우며, 70중량부를 초과하면 양파의 향이 짙어 불쾌감을 초래할 수 있다.

녹차분말은 차나무의 찻잎을 덖어서 건조시킨 것을 사용할 수 있다. 녹차분말은 콜레스테롤과 혈당을 낮추며 제조한 조성물의 당뇨 예방 및 치료 효능을 강화시켜 줄 수 있다. 녹차분말은 후술할 미분쇄 동결 귀뚜라미 100중량부에 대해 10 내지 30중량부, 바람직하게는 15 내지 25중량부가 함유될 수 있다. 녹차분말의 첨가량이 미분쇄 동결 귀뚜라미 대비 15중량부 미만이면 효능을 기대하기 어려우며, 25중량부를 초과할 경우, 제조한 조성물에 카페인성분이 다량 함유될 수 있다.

계피분말은 계피나무의 껍질을 이용할 수 있다. 계피분말은 혈액순화를 활발하게 하여 제조한 조성물의 당뇨 예방 및 치료 효능을 강화시켜주며 방부제로서 역할을 할 수 있다. 계피분말은 후술할 미분쇄 동결 귀뚜라미 100중량부에 대해 10 내지 30중량부, 바람직하게는 15 내지 25중량부가 함유될 수 있다. 계피분말의 첨가량이 미분쇄 동결 귀뚜라미 대비 15중량부 미만이면 효능을 기대하기 어려우며, 25중량부를 초과할 경우, 제조한 조성물에 계피에 함유된 독 성분이 다량 함유될 수 있다.

귀뚜라미는 세척, 살균 및 건조되어 동결된 귀뚜라미를 준비할 수 있다. 바람직하게는 미분쇄된 귀뚜라미를 사용할 수 있다. 미분쇄된 귀뚜라미는 (S2)단계에서 열수추출 시, 분쇄된 귀뚜라미보다 유익한 성분을 다량 함유할 수 있다. 상세하게, 동결된 귀뚜라미는 종래에 알려진 세척, 살균, 건조 및 동결 단계를 거쳐 준비될 수 있다. 일 예로, 세척 및 살균은 동시에 수행될 수 있다. 상세하게, 선별된 귀뚜라미를 80 내지 120℃에서 1 내지 30초, 더욱 상세하게는 90 내지 110℃의 증류수에 5 내지 20초 동안 담가 세척 및 살균을 할 수 있다. 상기 범위에서 귀뚜라미가 자숙되지 않고 귀뚜라미의 표면이 세척 및 살균된다. 이후, 귀뚜라미는 40 내지 80℃, 상세하게 50 내지 70℃의 건조기에서 1 내지 48시간, 상세하게 10 내지 30시간 동안 건조될 수 있다. 상기 범위에서 귀뚜라미의 탄화가 일어나지 않고 온전히 건조될 수 있다. 그 다음 영하 18℃ 미만의 냉동고에서 냉동시켜 비분쇄 동결 귀뚜라미를 수득할 수 있다.

(S2)단계는 (S1)단계에서 준비한 천연복합물을 열수 추출하여 복합추출물을 수득하는 단계이다. 상세하게, 준비한 천연복합물에 열수(증류수)를 중량비로 2 내지 20배, 바람직하게는 5 내지 15배 첨가한 후, 1 내지 40시간, 바람직하게는 10 내지 30시간 동안 열수 추출한 후 여과하여 복합추출물을 수득할 수 있다. 상기의 범위에서 열수는 천연복합물의 유효성분을 충분하게 추출할 수 있다. 이때, 열수는 40 내지 70℃, 바람직하게는 50 내지 60℃의 온도일 수 있다. 상기 범위보다 열수가 낮은 온도일 경우 천연복합물의 미분쇄 동결 귀뚜라미의 추출이 거의 이루어지지 않으며, 상기 범위보다 열수가 높은 온도일 경우, 미분쇄 동결 귀뚜라미의 분해가 일어나 매우 혼탁한 복합추출물을 수득하게 된다. 이 경우, 여러 번의 여과를 요구하여 공정 시간 및 비용을 증진시킬 수 있다. 여과는 500 내지 1000㎛, 상세하게는 600 내지 900㎛ 크기의 메쉬를 가지는 거름망을 통해 이루어질 수 있다. 상기 보다 큰 크기의 메쉬를 가지는 거름망을 통해 여과할 경우, 미분쇄 동결 귀뚜라미의 잔해와 같이 불필요한 천연복합물의 잔여성분이 복합추출물에 포함될 수 있으며, 이보다 작은 메쉬를 가지는 거름망을 통해 여과할 경우, 복합추출물의 수득이 어려울 수 있다.

본 발명의 일 양태에 있어서, (S2)단계 이후, (S3)벌등골나물을 열수 추출하여 수득한 분산성추출물을 복합추출물에 혼합하는 단계;를 더 포함할 수 있다. (S2)단계를 거쳐 제조한 복합추출물은 장시간 동안 보관할 경우, 미세입자들이 뭉쳐 가라앉아 파우더가 생성되며 고액분리되어 저장안정성이 저하될 수 있다. 이에, 복합추출물의 분산성을 향상시켜 저장안정성을 증진시킬 수 있는 물질이 요구된다. 본 발명은 천연 유래 물질인 벌등골나물분말로부터 추출한 분산성추출물이 복합추출물의 분산성을 향상시켜 저장안전성을 증진시킬 수 있음을 확인하였다.

상세하게, (S3)단계에서 분사성추출물은 벌등골나물의 잎으로부터 추출될 수 있다. 분사성추출물은 바람직하게 열수 추출되어 복합추출물에 용이하게 혼합될 수 있다. 벌등골나물잎에 열수(증류수)를 중량비로 2 내지 20배, 바람직하게는 5 내지 15배 첨가한 후, 1 내지 40시간, 바람직하게는 10 내지 30시간 동안 열수 추출한 후 여과하여 분사성추출물을 수득할 수 있다. 상기의 범위에서 열수는 벌등골나물분말의 유효성분을 충분하게 추출할 수 있다. 이때, 열수는 40 내지 60℃, 바람직하게는 45 내지 55℃의 온도일 수 있다. 상기 범위에서 벌등골나물의 잎이 탄화되지 않고 분산성 추출물이 원활하게 열수 추출된다.

본 발명의 일 양태에 있어서, (S3)단계에서 분산성추출물은 복합추출물에 혼합되기 전, 가열 및 농축되는 단계를 더 포함할 수 있다. 농축된 분산성추출물은 농축 전보다 적은 양으로 복합추출물에 첨가되어 저장안정성을 나타낼 수 있다. 상세하게, 분산성추출물은 40 내지 60℃, 더욱 상세하게는 45 내지 55℃ 온도에서 가열 및 농축될 수 있다. 상기 범위에서 분산성추출물의 기능이 유효하게 유지되며 농축된다. 가열 및 농축은 1 내지 24시간, 바람직하게는 5 내지 10시간동안 이루어질 수 있으나 이에 한정되지 않고 분산성추출물의 양에 따라 시간이 비례하여 증가될 수 있다. 분산성추출물은 2,000 내지 100,000 cp, 바람직하게는 5,000 내지 80,000 cp, 10,000 내지 50,000cp의 점도로 농축될 수 있다. 상기 범위의 점도에서 분산성추출물이 복합추출물에 적은 양으로 빠르게 혼합될 수 있다. 당뇨병 예방 및 치료용 조성물은 복합추출물 100중량부에 대하여 농축된 분산성추출물 10 내지 50, 바람직하게는 20 내지 40중량부가 혼합될 수 있다. 상기한 범위에서 분상성추출물 투입량대비 우수한 저장안정성을 얻을 수 있다.

이하, 실시예 및 비교예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.

쌍별귀뚜라미(Gryllus bimaculatus)를 100℃의 증류수에 10초간 담가 세척 및 살균한 후, 60℃의 건조기에서 24시간동안 건조시켰다. 이후 -20℃의 냉동고에서 24시간동안 보관하여 미분쇄 동결 귀뚜라미를 수득하였다.

이후, 미분쇄 동결 귀뚜라미 50g에 양파분말(양파가루,맑은들) 30g, 녹차분말(녹차가루, 이든타운) 10g, 계피분말(계피가루, HagirnexJSC)를 혼합한 뒤 증류수 2ℓ를 가하여 55℃의 열수에서 6시간동안 추출한 후 850㎛ 크기의 메쉬를 가지는 거름망을 통해 여과하여 액상의 복합추출물을 수득하였다.

수득한 복합추출물은 동물실험 시, 동물의 단위 몸무게 당 투여량, 1.63g/kg, 3.25g/kg, 6.5g/kg로 투여되었다.

세척 및 건조시켜 준비한 벌등골나물의 잎을 잘게 자른 후, 벌등골나물 100g에 증류수를 1ℓ를 가하여 50℃의 열수에서 6시간 동안 추출한 후, 여과하여 액상의 분산성추출물을 수득하였다.

이후, 제조된 분산성추출물을 50℃로 6시간동안 가열 및 농축하여 30,000cp의 점도를 갖는 농축된 분산성추출물을 수득하였다.

이후, 실시예1에서 제조한 복합추출물 100중량부에 대해 농축된 분산성추출물 30중량부를 혼합하였다.

실시예1에서 55℃의 열수 대신 30℃의 열수로 열수추출하여 복합추출물을 수득하였다.

실시예1에서 55℃의 열수 대신 90℃의 열수로 열수추출하여 복합추출물을 수득하였다.

<시험예 1> 성분비교

실시예 1에서 수득한 미분쇄 동결 귀뚜라미에 증류수 2ℓ를 가하여 55℃의 열수에서 6시간동안 추출한 후 850㎛ 크기의 메쉬를 가지는 거름망을 통해 여과하여 수득한 액상의 추출액과, 실시예 1에서 수득한 미분쇄 동결 귀뚜라미를 분쇄한 분말의 영양성분을 비교하여 아래 표 1에 표기하였다.

표 1를 참조하면, 미분쇄 동결 귀뚜라미의 열수 추출물은 칼륨 4중량% 이상을 함유하고 있음을 확인할 수 있었으며, 폴리페놀 및 마그네슘의 함량도 귀뚜라미 분말 보다 다량 함유하고 있음을 확인할 수 있었다.

<시험예 2> 포도당 내성 평가

1. 시험계

(1) 종 및 계 : Sprague Dawley rat(SD rat, Male, 8주령, 체중:300g)

(2) 생산자 및 공급원 : 다물 사이언스(대전)

동물 입수 후 외관을 육안으로 검사하여 7일간 시험을 실시하는 동물실에서 순화시킨 후 일반증상을 관찰하여 건강한 동물만을 시험에 제공하였다.

2. 사육환경

(1) 환경 조건

본 시험은 온도 22±2℃, 상대습도 40 내지 60%, 명암주기 12시간 조도 150 내지 300Lux로 시험기간 중 동물실들의 온습도는 자동온습도측정기에 의하여 매 시간마다 측정되었다.

(2) 사료 및 식수

㉠사료의 급여방법

사료는 실험동물용 고형사료를 멸균하여 자유롭게 섭취시켰다. 또한 당 연구소 실험동물실과 공급회사에서 미생물 및 오염물질 확인시험을 실시한 바, 본 시험에 영향을 미칠만한 요인은 발견되지 않았다.

㉡식수의 급여방법 및 오염물질의 확인

식수는 상수도수를 자외선살균기로 소독시킨 후 자유롭게 섭취시켰다. 식수에 대하여는 급여 전에 미리 일반수질검사를 실시하였으며, 검사 결과 시험에 영향을 미치는 요인은 발견되지 않았다.

3.투여량 및 시험군의 구성

시험군은 아래의 표 2와 같이 구성하였다. 시험군의 시험물질로 상기 실시예 1의 복합추출물을 사용하여 구강투여 하였으며, 구강투여에 대한 동일한 스트레스를 주기 위해 대조군은 생리식염수를 투여하였다. 양성 대조군은 메트포르민(Metformin HCI)를 투여하였다.

상세하게, 시험군은 스트렙토조토신(Streptozotoxin;STZ, Sigma.co.,USA)을 투여하여 당뇨가 유발된 rat에 단위 몸무게 당 투여량을 조절하여, 저농도, 중농도, 고농도 시험군으로 분류하였다. 저동도 시험군은 1.63g/kg, 중농도 시험군은 3.25g/kg, 고농도 시험군은 6.5g/kg의 복합추출물을 투여하였다.

대조군은 생리식염수를 투여하였으며, 스트렙토조토신(Streptozotoxin;STZ, Sigma.co.,USA)을 투여하여 당뇨를 유발한 당뇨 대조군(C)와, 투여하지 않은 정상군(N)으로 분류된다.

양성대조군은 스트렙토조토신(Streptozotoxin;STZ, Sigma.co.,USA)을 투여하여 당뇨가 유발된 rat에 시판되는 당뇨 치료제인 메트포르민(Metformin HCI)를 단위 몸무게 당 0.5g/kg을 투여하였다.

분류		시험물질	처리농도(g/kg)	실험동물수(n)	STZ처리
대조군	Normal	생리식염수	-	10 - citrate buffer
	Control			12	65mg/kg
시험군	저	제1실시예 (복합추출물)	1.63
	중		3.25
	고		6.5
양성 대조군		Metformin HCI	0.5

3.처리

시험계 반입 후, 7일의 순화 과정을 거친 다음, 12시간 절식 후 Normal군을 제외한 모든 군에 0.85% 식염수(Saline)에 용해시킨 스트렙토조토신(Streptozotoxin;STZ, Sigma.co.,USA)을 단회 투여하고 7일 뒤 혈당계로 혈당을 측정(12시간 절식 후 혈당 측정)하여 당뇨를 유발하였다. 유발 확인 뒤(혈당 300mg/dl 이상) 시험물질(제1실시예, 을 4주간 매일 2회씩 경구 투여로 섭취시켰다.

4.평가

시험 기간 동안 매주 같은 시간에 혈당, 식이 섭취량과 음수량, 체중변화량을 특정하였다. 혈당은 자유롭게 물을 섭취토록 하면서 12시간 절식한 후 매주 같은 시간대에 꼬리정맥혈에서 혈액을 채취하여 혈당계로 측정하였다. 포도당 내성 효과는 인슐린 내성검사(insulin tolerance test,ITT)와, 복강 내당능(glucose tolerance test, IPGTT) 검사를 통해 확인하였다. 인슐린 내성검사(insulin tolerance test,ITT)은 시험 종료 마지막 주에 5시간 금식 후 인슐린 용액을 복강 투여 (0.75U/kg)한 후, 0, 15, 30, 45, 50, 90, 120분 후 혈당을 측정하였다. 복강 내당능(glucose tolerance test, IPGTT) 검사는 실험 종료 2일 전에 12시간 금식 시킨 후 포도당 용액을 1g/kg 복강 투여 후 0, 15, 30, 45, 60, 90, 120분 후 혈당 측정하였다.

도 1 내지 도 2는 본 발명의 인슐린내성검사 결과와 복강내당부하검사 결과가 각각 도시되어 있다. 도 1 내지 도 2를 참조하면, 당뇨 대조군(C)에서는 정상군(N)에 비해 높은 혈당을 유지하며 내당능 장애를 보인 반면, 당뇨 대조군(C)에 비해 실시예 1의 복합추출물 투여군에서 내당능 개선 효과를 보였다. 특히 저농도(1.63) 투여군보다 중농도(3.25) 및 고농도 투여군(6.5)에서 큰 차이를 보였다.

<시험예 3>공복혈당 변화 실험

시험예 2에서, 복합추출물투여에 의한 공복혈당의 변화를 확인하기 위해 주마다 공복혈당 측정을 실시하였다. 혈당은 자유롭게 물을 섭취토록 하면서 12시간 절식한 후 매주 같은 시간대에 꼬리정맥혈에서 혈액을 채취하여 혈당계로 측정하였다.

도 3에는 시험예 3에서 측정한 주별 공복혈당 농도 결과가 도시되어 있다. 도 3을 참조하면, 공복 시 혈당 변화량은 당뇨 대조군(C)에서 정상군(N)에 비해 현저하게 증가하는 반면 실험 기간 후반으로 갈수록 당뇨 대조군(C)에 비해 복합추출물 투여군에서 농도의존적으로 혈당이 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 특히 14주에서 저농도(1.63) 투여군보다 중농도(3.25) 및 고농도 투여군(6.5)에서 큰 차이를 보였다. 이 결과 고혈당이 유발된 당뇨 모델에서 본 발명의 복합추출물 투여가 혈당을 강하시킬 수 있음을 알 수 있었다.

<시험예 4>당화혈색소 변화 실험

시험예 2에서 복합추출물투여에 의한 당화혈색소 변화를 확인하기 위해 주마다 HbA1c(ELISA KIT)의 측정을 실시하였다. HbA1c는 실험 종료 마지막 주에 12시간 금식 후 꼬리정맥혈에서 혈액을 채취하여 측정하였다.

도 4에는 시험예 3에서 측정한 당화혈색소 농도 변화 결과가 도시되어 있다. 도 4을 참조하면, 당화혈색소의 농도는 당뇨 대조군(C)에서 정상군(N)에 비해 현저하게 증가하는 반면 당뇨 대조군(C)에 비해 복합추출물 투여군에서 농도의존적으로 당화혈색소의 농도가 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 특히 저농도(1.63) 투여군보다 중농도(3.25) 및 고농도 투여군(6.5)에서 큰 차이를 보였다. 이 결과 고혈당이 유발된 당뇨 모델에서 본 발명의 복합추출물 투여가 당화혈색소를 강하시킬 수 있음을 알 수 있었다.

<시험예 5>C-펩타이드(c-peptide) 및 인슐린 분비개선 실험

시험예 2에서 복합추출물투여에 의한 C-펩타이드(c-peptide) 및 인슐린 분비 변화를 확인하기 위해 C-펩타이드(c-peptide) 및 인슐린농도(ELISA KIT)의 측정을 실시하였다. C-펩타이드(c-peptide) 및 인슐린농도는 실험 종료 마지막 주에 12시간 금식 후 꼬리정맥혈에서 혈액을 채취하여 측정하였다.

도 5 내지 도6 에는 시험예 3에서 측정한 C-펩타이드(c-peptide) 및 인슐린 농도 변화 결과가 각각 도시되어 있다. 도 5 내지 도6을 참조하면, C-펩타이드(c-peptide) 및 인슐린 농도는 당뇨 대조군(C)에서 정상군(N)에 비해 현저하게 감소하는 반면 당뇨 대조군(C)에 비해 복합추출물 투여군에서 농도의존적으로 C-peptide 및 인슐린 농도가 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 특히 저농도(1.63) 투여군보다 중농도(3.25) 및 고농도 투여군(6.5)에서 큰 차이를 보였다.

<시험예 6>간 및 신장독성 평가

시험예 2에서, 복합추출물투여에 의한 간 및 신장 독성 확인을 위해

혈액에서 알라인 전달 효소 (alanine transferase, ALT)와 아스파르테이트아미노전달효소(aspartate aminotransferase, AST)의 양을 측정하여 간 손상 정도를 평가하고 크레아틴(creatinine)의 양을 측정하여 신장 손상 정도를 평가하였다. ALT 와 AST, 그리고 크레아틴은 실험 종료 마지막 주에 12시간 금식 후 꼬리정맥혈에서 혈액을 채취하여 측정하였다.

도 7 알라인 전달 효소 (alanine transferase, ALT)와 아스파르테이트아미노전달효소(aspartate aminotransferase, AST)의 측정결과가 도시되어 있고, 도 8은 크레아틴(creatinine)의 측정결과가 도시되어 있다.

도 7 내지 도 8을 참조하면, 혈청 중 ALT, AST 및 크레아틴의 농도는 당뇨 대조군(C)에서 정상군(N)에 비해 증가하는 반면, 당뇨 대조군(C)에 비해 복합추출물 투여군에서 농도의존적으로 ALT, AST 및 크레아틴의 농도가 감소하는 것을 확인하였다. ALT, AST 및 크레아틴의 농도는 복합추출물 투여군에서 정상군(N)에 비해 유의적인 차이가 없는 것을 확인하였다. 이결과, 본 연구에 사용된 복합추출물의 투여는 간 및 신장에 독성이 없음을 확인하였다.

<시험예 7>췌장 베타세포 기능성 평가

시험예 2의 시험군 및 대조군으로부터 적출한 췌장에서 헤마톡실린 에오신(Hematoxylin&Eosin, H&E)염색으로 췌장 내 섬세포(islet)를 확인하고, 췌장섬세포에서 인슐린을 생산하는 베타세포를 확인하기 위해 인슐린 특이항체를 이용한 조직면역염색법(immunohistochemistry, IHC)을 통하여 인슐린 발현정도를 평가한 후 베타세포의 손상 정도를 파악하였다.

도 9에는 췌장의 H&E염색 결과가 도시되어 있으며, 도 10에는 췌장 IHC염색 결과가 도시되어 있다. 도 9 내지 도 10을 참조하면, 췌장 섬세포의 크기는 당뇨 대조군(C)에서 정상군(N)에 비해 현저하게 축소되는 반면, 당뇨 대조군(C)에 비해 복합추출물 투여군에서 농도 의존적으로 췌장 섬세포의 크기가 확대되는 것을 확인 하였다. 인슐린의 발현 정도는 당뇨 대조군(C)에서 정상군(N)에 비해 현저하게 적어진 반면, 당뇨 대조군(C)에 비해 복합추출물 투여군은 농도 의존적으로 인슐린의 발현 정도가 증가되는 것을 확인하였다. 이 결과, 본 발명의 복합추출물이 베타세포의 재생에 효과를 보임을 알 수 있었다.

<시험예 8>외관 평가

실시예 1 내지 실시예 4에서 제조한 복합추출물의 저장안정성을 비교하기 위하여 제조 후 외관평가를 실시하였다. 저장안정성은 12시간, 1일, 3일, 7일 뒤 복합추출물의 파우더 생성 유무 및 색도를 판단하여 평가하였다. 파우더 생성 유무는 육안으로 관찰 시, 보관 용기 내부에 가라 앉은 분말의 존재 여부로 판단하였다. 복합추출물의 색도는 5점 척도법에 의해 평가하도록 하였으며 외관 평가 결과는 하기의 표 3에 나타내었다. 색도가 진할수록 5점에 가깝다.

질온산물색파우더 생성 유무
21a3day	7day
℃O
℃X
℃X
℃O

상기 표 3의 결과를 살펴보면, 본 발명의 분산성추출물을 함유하는 실시예 2의 경우 시간이 경과됨에도 파우더가 생성되지 않아 우수한 저장안정성을 가짐을 알 수 있었다. 아울러, 55℃의 온도에서 열수추출한 실시예 1 내지 실시예 2의 경우 갈색빛을 띄고 있으나, 저온(30℃)에서 추출한 실시예 3의 경우 거의 투명한 색의 연한 연두빛을 나타내었으며, 고온(90℃)에서 추출한 실시예 4의 경우 탁한 검은색빛을 나타내었다.

<시험예 9>종합평가

실시예 1 내지 실시예 4에서 제조한 복합추출물의 당뇨병 예방 및 치료제로서 효과를 비교하기 위하여, 종합평가를 실시하였다. 시험예 2 내지 시험예 7에서 실시예 1의 복합추출물 대신 실시예 2 내지 4의 복합추출물을 시험군으로 각각 사용하여 시험한 다음, 당뇨병 예방 및 치료제로서의 효능도를 비교하였다. 효능도는 5점 척도법에 의해 평가하도록 하였으며, 시험군은 고농도 투여군(6.5g/kg)을 기준으로 평가하였다. 효능도 결과는 하기의 표 4에 나타내었다. 우수한 효능을 가질수록 5점에 가깝다.

시험물질	열수온도	분산성추출물유무	종합 평가 점수
실시예 1	55℃	X	5
실시예 2	55℃	O	4
실시예 3	30℃	X	2
실시예 4	90℃	X	1
생리식염수	-	-	0
Metformin HCI	-	-	4

상기 표 4의 결과를 살펴보면, 본 발명의 복합추출물을 함유하는 실시예 1 내지 실시예 4는 당뇨병 예방 및 치료제로서 효과를 가짐을 확인할 수 있었다. 특히, 55℃의 열수에서 추출한 실시예1 내지 실시예2의 복합추출물의 경우, 시판되는 당뇨 치료제 보다 우수하거나 비슷한 효능을 가짐을 확인할 수 있었다.

이상과 같이 본 발명에서는 특정된 사항들과 한정된 실시예 및 도면에 의해 설명되었으나 이는 본 발명의 보다 전반적인 이해를 돕기 위해서 제공된 것일 뿐, 본 발명은 상기의 실시예에 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 이러한 기재로부터 다양한 수정 및 변형이 가능하다.

따라서, 본 발명의 사상은 설명된 실시예에 국한되어 정해져서는 아니되며, 후술하는 특허청구범위뿐 아니라 이 특허청구범위와 균등하거나 등가적 변형이 있는 모든 것들은 본 발명 사상의 범주에 속한다고 할 것이다.

Claims (11)

1. 양파, 녹차, 계피 및 미분쇄 동결 귀뚜라미를 포함하는 천연복합물로부터 열수 추출한 복합추출물을 유효성분으로 함유하는 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   벌등골나물로부터 추출된 분산성추출물을 더 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물.
3. 제2항에 있어서,
   상기 복합추출물 100중량부에 대해 분산성추출물 10 내지 50중량부를 함유하는 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물.
4. 제1항에 있어서,
   상기 천연복합물은 미분쇄 동결 귀뚜라미 100중량부에 대하여, 양파 50 내지 70중량부, 녹차 10 내지 30중량부, 계피 10 내지 30중량부를 함유하는 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물.
5. 삭제
6. 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항의 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물을 제조하는 방법에 있어서,
   (S1) 세척, 살균 및 건조되어 동결된 귀뚜라미, 양파분말, 녹차분말, 계피분말이 혼합된 천연복합물을 준비하는 단계; 및
   (S2) 상기 천연복합물을 열수 추출하여 복합추출물을 수득하는 단계; 를 포함하고,
   상기 (S1)단계의 귀뚜라미는 미분쇄된 것인. 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물 제조방법.
7. 제 6항에 있어서,
   상기 열수는 40 내지 70℃의 온도인 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물의 제조방법.
8. 제 6항에 있어서,
   상기 복합추출물은 칼륨 4중량% 이상을 함유하는 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물 제조방법.
9. 삭제
10. 제 6항에 있어서,
    상기 (S2)단계 이후,
    (S3) 벌등골나물을 열수 추출하여 수득한 분산성추출물을 상기 복합추출물에 혼합하는 단계;를 더 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물 제조방법.
11. 제 10항에 있어서,
    상기 (S3)단계에서 상기 분산성추출물은 상기 복합추출물에 혼합되기 전, 40 내지 60℃에서 가열 및 농축되는 단계를 더 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물 제조방법.
    
    

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