KR102075103B1 - Cosmetic composition containing the fermented extract of okamejei kenojei - Google Patents

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박성민
이정노
김문회
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주식회사 코씨드바이오팜
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Abstract

The present invention provides a cosmetic composition containing a fermented extract of Okamejei kenojei or a nose thereof as an active ingredient. The fermented extract of Okamejei kenojei or a nose thereof is obtained by sterilizing a hydrolyzate obtained by hydrolyzing Okamejei kenojei or a nose of Okamejei kenojei with an enzyme, followed by fermenting with a fermentation strain, and suppress the production of collagen degrading enzyme MMP-1, thereby reducing skin wrinkles, and increase the expression of aquaporin-3 (AQP-3), thereby improving skin moisturization. In addition, the cosmetic composition according to the present invention contains a natural extract as an active ingredient, and thus has fewer side effects and is safer.

Description

홍어 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION CONTAINING THE FERMENTED EXTRACT OF OKAMEJEI KENOJEI}Cosmetic composition containing a skate fermentation extract as an active ingredient {COSMETIC COMPOSITION CONTAINING THE FERMENTED EXTRACT OF OKAMEJEI KENOJEI}

본 발명은 홍어 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition containing the skate fermentation extract as an active ingredient.

피부는 외부 환경으로부터 인체를 보호하고, 내부의 수분 및 유용 성분이 밖으로 유출되는 것을 막아주는 장벽기능, 체온조절, 배설 등 다양한 생리적 기능을 담당하는 중요한 기관이다. 그러나 일반적으로 나이가 들어감에 따라 피부는 내·외적인 환경에 의하여 수분, 탄력성, 색, 윤기 등을 잃고 거칠어지는데, 이러한 과정을 피부 노화라 한다. 피부 노화는 세월이 흘러감에 따른 노화 현상인 내인성 노화(intrinsic aging)와 오랜 햇빛 노출에 따른 노화 현상인 광노화(photo aging)로 나눌 수 있다. 내인성 노화 및 광노화는 모두 유해한 활성 산소에 의해 발생되는 점에서 동일하나, 광노화는 이 활성 산소가 자외선에 의해 생성된다는 점에서 차이가 있다. Skin is an important organ responsible for various physiological functions such as barrier function, temperature control, and excretion that protect the human body from the external environment and prevent internal moisture and useful components from leaking out. In general, however, as the skin ages, the skin loses its moisture, elasticity, color, and gloss due to internal and external environments. This process is called skin aging. Skin aging can be classified into intrinsic aging, which is an aging phenomenon with the passage of time, and photo aging, which is an aging phenomenon due to long exposure to sunlight. Both endogenous aging and photoaging are identical in that they are caused by harmful free radicals, but photoaging is different in that these free radicals are generated by ultraviolet light.

피부 노화는 콜라겐 분해 효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(Matrix Metalloproteinase-1; 이하, MMP-1)에 의해서 촉진될 수 있다. 생체 내에서는 콜라겐과 같은 세포외 기질의 합성과 분해가 적절하게 조절되지만, 노화가 진행되면 콜라겐 합성이 감소하고 콜라겐 분해 효소인 MMP-1의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 생기게 된다. 따라서, 피부 노화 및 주름을 방지하기 위해서는 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP-1의 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 필요가 있다.Skin aging can be promoted by matrix metalloproteinase-1 (hereinafter referred to as MMP-1), a collagen degrading enzyme. In vivo, the synthesis and degradation of extracellular matrix such as collagen is properly regulated, but as aging progresses, collagen synthesis decreases and the expression of collagen degrading enzyme MMP-1 is promoted, resulting in decreased skin elasticity and wrinkles. . Therefore, in order to prevent skin aging and wrinkles, it is necessary to regulate or inhibit the expression of MMP-1 in which activation is induced in cells.

현재까지 알려진 주름 개선을 위한 가장 효과적인 방법은 레티놀과 레티노익산을 이용하는 것이다. 레티놀과 레티노익산의 주름 개선 또는 탄력 개선 효과는 문헌을 통하여 잘 알려져 있지만, 소량만으로도 피부에 자극을 주는 단점을 가지며, 불안정성으로 인하여 공기 중에 노출되면 쉽게 산화 변질되기 때문에 사용하는데 많은 제약이 있다. 이에 레티노이드를 안정화하기 위한 연구는 계속해서 진행되고 있으나, 아직까지 피부에 대한 안전성 문제는 해결되지 않고 있다.The most effective way to improve wrinkles known to date is to use retinol and retinoic acid. Wrinkle improvement or elasticity improvement effect of retinol and retinoic acid is well known in the literature, but has a disadvantage of irritating the skin with only a small amount, there are many restrictions to use because it is easily oxidatively deteriorated when exposed to air due to instability. Research into stabilizing retinoids is ongoing, but the safety issue for the skin has not been solved.

한편, 자외선은 아쿠아포린-3(aquaporin-3; 이하, AQP-3)의 발현을 감소시켜 피부 건조를 유발한다고 알려져 있다. AQPs는 작은 소수성 세포막 내재 단백질(Small hydrophobic integral membrane proteins)로 수분을 특이적으로 수송하는 역할을 담당한다. 인간 각질형성 세포는 세포막에 AQP-3를 발현하고 있고, AQP-3 부족시 피부 보습, 피부 보호막 손상, 상처치유능 저하 등의 피부 문제가 나타난다.On the other hand, ultraviolet light is known to reduce the expression of aquaporin-3 (hereinafter referred to as AQP-3) to cause skin dryness. AQPs are small hydrophobic integral membrane proteins that are responsible for the specific transport of moisture. Human keratinocytes express AQP-3 in their cell membranes, and when AQP-3 deficiency occurs, skin problems such as skin moisturization, skin barrier damage, and wound healing decrease.

한국등록특허 제10-1230650호 (2013.01.31. 등록)Korea Registered Patent No. 10-1230650 (registered on Jan. 31, 2013)

상기와 같은 문제점을 해결하기 위해, 본 발명은 홍어 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.In order to solve the above problems, the present invention provides a cosmetic composition containing the skate fermentation extract as an active ingredient.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물을 유효성분으로 함유할 수 있다.The cosmetic composition according to the present invention may contain a skate oil fermentation extract or a skate oil fermentation extract as an active ingredient.

본 발명에 따른 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 우수한 효과를 가진 기능성 화장료로 사용될 수 있다. 상기 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물은 콜라겐 분해 효소인 MMP-1의 생성을 억제하여, 피부 주름을 개선시킬 수 있고, 아쿠아포린-3(AQP-3)의 발현을 증가시켜, 피부 보습을 개선시킬 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 천연 추출물을 유효성분으로 함유하기 때문에 부작용이 적고 안전하여, 합성 화학 물질을 함유하여 피부에 자극을 주는 여러 화장료에 대한 소비자의 거부감을 해소할 수 있다.The cosmetic composition comprising the skate oil fermentation extract or skate oil fermentation extract according to the present invention as an active ingredient can be used as a functional cosmetics having an excellent effect. The skate oil fermentation extract or skate oil fermentation extract inhibits the production of collagen degrading enzyme MMP-1, can improve skin wrinkles, increase the expression of aquaporin-3 (AQP-3), improve skin moisture You can. In addition, since the cosmetic composition according to the present invention contains a natural extract as an active ingredient, it has little side effects and is safe, and can resolve consumer's rejection of various cosmetic products containing synthetic chemicals that irritate the skin.

도 1은 본 발명에 따른 홍어코 발효 추출물의 분자량을 고성능액체크로마토그래피-겔투과크로마토그래피(HPLC-GPC)를 이용하여 측정한 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 홍어 추출물의 농도에 따른 콜라겐 분해 효소인 MMP-1 생성 억제능을 측정한 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 홍어코 추출물의 농도에 따른 MMP-1 생성 억제능을 측정한 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 홍어 발효 추출물의 농도에 따른 MMP-1 생성 억제능을 측정한 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 홍어코 발효 추출물의 농도에 따른 MMP-1 생성 억제능을 측정한 그래프이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 홍어 추출물의 농도에 따른 아쿠아포린-3(AQP-3) 발현 효과를 측정한 그래프이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 홍어코 추출물의 농도에 따른 AQP-3 발현 효과를 측정한 그래프이다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 따른 홍어 발효 추출물의 농도에 따른 AQP-3 발현 효과를 측정한 그래프이다.
도 9는 본 발명의 일 실시예에 따른 홍어코 발효 추출물의 농도에 따른 AQP-3 발현 효과를 측정한 그래프이다.
Figure 1 is a graph of the molecular weight of the Hong Sikko fermented extract according to the present invention using high performance liquid chromatography-gel permeation chromatography (HPLC-GPC).
Figure 2 is a graph measuring the inhibitory ability of collagen degrading enzyme MMP-1 production according to the concentration of the skates extract according to an embodiment of the present invention.
Figure 3 is a graph measuring the inhibitory ability of MMP-1 production according to the concentration of the skate oil extract according to an embodiment of the present invention.
Figure 4 is a graph measuring the inhibitory ability of MMP-1 production according to the concentration of the skate fermentation extract according to an embodiment of the present invention.
Figure 5 is a graph measuring the inhibitory ability of MMP-1 production according to the concentration of the skate oil fermentation extract according to an embodiment of the present invention.
Figure 6 is a graph measuring the effect of aquaporin-3 (AQP-3) expression according to the concentration of the skates according to an embodiment of the present invention.
Figure 7 is a graph measuring the effect of AQP-3 expression according to the concentration of the skate oil extract according to an embodiment of the present invention.
Figure 8 is a graph measuring the effect of AQP-3 expression according to the concentration of the skate fermentation extract according to an embodiment of the present invention.
Figure 9 is a graph measuring the effect of AQP-3 expression according to the concentration of the skate oil fermentation extract according to an embodiment of the present invention.

이하, 본 발명을 상세하게 설명하기로 한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명자는 천연 추출물을 함유하는 기능성 화장품에 초점을 두고, 여러 원물들에 있어서 피부 주름개선 또는 보습용 화장료 조성물로의 응용 가능성을 연구한 결과, 천연물로 홍어를 선정하여 본 발명을 완성하였다.The present inventors focused on functional cosmetics containing natural extracts, and researched the applicability to skin wrinkle improvement or moisturizing cosmetic compositions in various raw materials, and completed the present invention by selecting skate as a natural product.

본 발명은 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.The present invention provides a cosmetic composition containing a skate oil fermentation extract or skate oil fermentation extract as an active ingredient.

본 발명에서 "홍어(Okamejei kenojei)"는 가오리과에 속하는 연골, 저서성 어류로 우리나라의 남서해, 일본의 중부이남 해역 및 동중국해에 많이 분포하고 있다. 홍어는 우리나라에서 상업적 가치가 높으며, 목표 등지에서는 전통 발효식품으로 애용된다. 홍어는 불포화지방산이 함유되어 있어 혈중 콜레스테롤을 낮춰주는 효과가 있고, 타우린과 베타인이 함유되어 있어 숙취해소 및 간 기능 개선에도 도움이 되며, 관절염 치료에 사용되는 황산콘드로이친(Chondroitin sulfate)이 풍부하게 함유되어 있어 골다공증 예방 등 뼈 건강 개선에도 효과가 있다. 또한, 홍어에는 콜라겐과 더불어 피부에 좋은 여러 영양소가 함유되어 있어, 이를 이용하면 피부에 탄력이 생기고 주름이 줄어드는 효과를 볼 수 있다. 특히, 홍어의 얼굴 제일 앞쪽의 삼각형 모양 부위의 홍어코는 황산콘드로이친, 프로테오글리칸 등이 다량 함유되어 있다.In the present invention, "skate (Okamejei kenojei)" is a cartilage, benthic fish belonging to the stingray family is distributed in the southwest sea of Korea, the south central Japan and the East China Sea. Skates have high commercial value in Korea, and they are used as traditional fermented foods in Korea. Skates contain unsaturated fatty acids to lower blood cholesterol levels, and taurine and betaines help to relieve hangovers and improve liver function, and are rich in Chondroitin sulfate, which is used to treat arthritis. It is also effective in improving bone health, including prevention of osteoporosis. In addition, skates contain a variety of nutrients that are good for the skin, along with collagen, it can be used to create elasticity and reduce wrinkles on the skin. In particular, the skates in the triangle-shaped area in front of the skates contain a large amount of chondroitin sulfate, proteoglycans and the like.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물을 함유할 수 있고, 상기 홍어 발효 추출물은 홍어의 꼬리, 애, 또는 몸통 중에서 선택된 어느 하나 이상으로부터 얻은 발효 추출물일 수 있다.The cosmetic composition according to the present invention may contain a skate oil fermentation extract or a skate oil fermentation extract, and the skate oil fermentation extract may be a fermentation extract obtained from any one or more selected from the tail, tail, or body of skate.

본 발명에 따른 화장료 조성물에서, 상기 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물은 홍어 또는 홍어코를 효소로 가수분해하여 수득한 가수분해물을 멸균시킨 후, 발효 균주로 발효시킨 것 일 수 있다.In the cosmetic composition according to the present invention, the skate oil fermentation extract or skate oil fermentation extract may be a fermentation strain after sterilizing the hydrolyzate obtained by hydrolyzing the skate oil or skate oil with enzyme.

상기 가수분해물은 상기 홍어 또는 홍어코를 알칼라아제(Alcalase)로 제1 차 가수분해하고, 프로테아제(Protease)로 제2 차 가수분해하여 수득한 것을 포함할 수 있다. 상기 효소는 단백질 분해 효소로, 상기 알칼라아제 및 프로테아제 외에도 키모트립신(Chymotrypsin), 펩신(Pepsin) 등을 첨가하여 가수분해할 수 있고, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 효소의 종류에 따라, 온도, pH, 및 반응시간 등을 조절하여 가수분해할 수 있다.The hydrolyzate may include those obtained by primary hydrolysis of the skate or redfish nose with alcalase, and secondary hydrolysis with protease. The enzyme is a proteolytic enzyme, and can be hydrolyzed by addition of chymotrypsin, pepsin, etc. in addition to the alkalase and protease, but is not limited thereto. According to the type of the enzyme, it can be hydrolyzed by adjusting the temperature, pH, and reaction time.

본 발명에 따른 화장료 조성물에서, 상기 가수분해물은 프로테오글리칸을 포함할 수 있다.In the cosmetic composition according to the invention, the hydrolyzate may comprise a proteoglycan.

본 발명에서 "프로테오글리칸(Proteoglycan)"은 중심 단백질(coreprotein)과 글리코사미노글리칸(glycosaminoglycan)이 결합된 것으로, 골, 연골, 피부, 인대 등에 함유되어 있다. 대표적인 글리코사미노글리칸은 헤파린(heparin), 황산헤파란(heparan sulfate), 황산콘드로이틴(chondroitin sulfate), 황산더마탄(dermatan sulfate), 황산케라탄(keratan sulfate) 및 하이알루로난(hyaluronan)이 있으며, 이들 글리코사미노글리칸이 하나 이상 복합적으로 조합되어 매우 복잡한 분자적 다양성을 보인다.In the present invention, "Proteoglycan" is a core protein (glycosaminoglycan) is combined with the core protein (core protein), it is contained in bone, cartilage, skin, ligaments and the like. Representative glycosaminoglycans include heparin, heparan sulfate, chondroitin sulfate, dermatan sulfate, keratan sulfate, and hyaluronan. There are two or more of these glycosaminoglycans combined in combination, showing very complex molecular diversity.

프로테오글리칸 분자 속에는 수산기(-OH)가 많아, 물과 결합력이 뛰어나 높은 수분력을 가진다. 또한, 조직의 섬유 성분과 세포 성분을 보호하고, 조직 표면에 가해지는 압박을 견딜 수 있는 탄성을 갖게 하여 피부 탄력 개선에도 도움을 준다. 그러나 일반적으로 프로테오글리칸은 분자량이 120만Da 정도로 큰 고분자이기 때문에, 피부에 흡수율이 낮은 편이다.The proteoglycan molecule has a lot of hydroxyl groups (-OH), and has excellent water-binding ability because it has excellent binding force with water. In addition, it protects the fiber and cellular components of the tissue, and helps to improve skin elasticity by having elasticity to withstand the pressure applied to the surface of the tissue. However, in general, proteoglycan is a polymer having a molecular weight of about 1.2 million Da, so the absorption rate is low on the skin.

본 발명에 따른 화장료 조성물에서, 상기 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물은 상기 프로테오글리칸을 상기 발효 균주로 발효시킨 것 일 수 있다. 고분자인 상기 프로테오글리칸이 발효를 통해 저분자화되면, 피부에 보다 잘 흡수될 수 있다.In the cosmetic composition according to the present invention, the skate oil fermentation extract or skate oil fermentation extract may be the fermentation of the proteoglycan with the fermentation strain. If the proteoglycan polymer is low molecular weight through fermentation, it can be better absorbed by the skin.

상기 발효 균주는 맥주 효모(Saccharomyces cerevisiae), 누룩균(Aspergillus oryzae), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 갈락토미세스(Galactomyces reessii), 흑효모(Aureobasidium pullulans) 등을 포함할 수 있고, 바람직하게는 락토바실러스 람노서스일 수 있다.The fermentation strain may include brewer's yeast ( Saccharomyces cerevisiae ), yeast ( Aspergillus oryzae ), Lactobacillus rhamnosus , Galactomyces reessii , black yeast ( Aureobasidium pullulans ), etc., preferably Lactobacillus rhamnosus.

본 발명에서 "락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)"는 사람의 소화기관, 여성의 질 내벽, 및 구강 내에서 발견되는 유익균으로, 전반적인 소화력 향상에 도움을 주며 설사, 내장 세포의 사멸을 막아 내장 궤양 등을 치료할 수 있다. 대장균, 포도상구균 등에 대한 항생 효과가 있으며, 알레르기를 완화시키는 역할을 하여 피부염, 습진, 여드름, 아토피 등을 치유할 수 있다. 그뿐 아니라, 배양 과정에서 생성되는 대사물질인 세포외다당체(exopolysaccharide)가 함유되어 있어 피부의 보습력을 높여 피부가 맑아지는 효과를 볼 수 있다. 본 발명에서 락토바실러스 람노서스는 발효 과정에서 다당류인 프로테오글리칸을 분해하여 저분자화할 수 있다. In the present invention, " Lactobacillus rhamnosus " is a beneficial bacterium found in the human digestive system, the lining of the vagina, and the oral cavity of the human body, which helps to improve overall digestion and prevents the death of visceral cells by diarrhea and visceral ulcers. And so on. It has an antibiotic effect against Escherichia coli, Staphylococcus aureus, and can alleviate allergies and heal dermatitis, eczema, acne and atopy. In addition, it contains an extracellular polysaccharide (exopolysaccharide), a metabolite produced during the cultivation process, thereby increasing the skin's moisturizing ability and clearing the skin. In the present invention, Lactobacillus rhamnosus can be low molecular weight by decomposing the polysaccharide proteoglycan during the fermentation process.

본 발명에 따른 화장료 조성물에 있어서, 상기 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물은 상기 발효 후, 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매로 추출하여 제조된 것일 수 있다. 상기 용매 추출 외에 추가적인 방법을 덧붙여 추출, 분리 및 정제하여 제조된 것일 수 있다.In the cosmetic composition according to the present invention, the skate oil fermentation extract or skate oil fermentation extract after the fermentation, water, anhydrous or hydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, propylene glycol, butylene glycol, glycerin, acetone, ethyl acetate, It may be prepared by extraction with a solvent selected from the group consisting of chloroform, butyl acetate, diethyl ether, dichloromethane, hexane and mixtures thereof. In addition to the solvent extraction may be prepared by adding, extracting and purifying additional methods.

상기 용매 추출에 한정되지 않고, 상기 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 다양한 추출 및 분리 방법, 예를 들어, 초고압 추출법에 의한 추출, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리, 및 크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 크로마토그래피에 의한 분리 등의 추가적 방법으로 제조된 것일 수 있다.Not limited to the solvent extraction, the skate oil fermentation extract or skate oil fermentation extract is a variety of extraction and separation methods commonly used in the art, for example, extraction by ultra-high pressure extraction, constant molecular weight cut-off It may be prepared by an additional method such as separation using an ultrafiltration membrane having a value, and separation by chromatography prepared for separation according to size, charge, hydrophobicity or affinity.

상기 초고압 추출법은 홍어 또는 홍어코를 압력 100 내지 3000 MPa, 온도 40 내지 90℃에서 20 내지 30시간, 바람직하게는 압력 500 내지 1000 MPa, 온도 40 내지 60℃에서 23 내지 25시간 처리하여 추출할 수 있다. 또한, 초고압 추출 시 pH는 특정 pH에 한정하는 것은 아니나, 초고압기 내부 물의 pH를 1 내지 6으로 낮춰 처리하는 것이 보다 바람직하다.The ultra-high pressure extraction method can be extracted by treating the skates or skates 20 to 30 hours at a pressure of 100 to 3000 MPa, temperature 40 to 90 ℃, preferably 23 to 25 hours at a pressure of 500 to 1000 MPa, temperature 40 to 60 ℃ have. In addition, the pH at the time of ultra-high pressure extraction is not limited to a specific pH, but it is more preferable to lower the pH of the water inside the ultra-high pressure to 1 to 6.

상기 초고압 처리된 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물을 물, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 헥산 및 그의 혼합물로부터 선택된 용매를 이용하여 환류 추출하고 냉침한 후 여과시킬 수 있다. 상기 여과액은 농축조로 이송하여 50℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조될 수 있다.The ultra-high pressure skated fermented extract or skated fermented extract was refluxed and chilled using a solvent selected from water, methanol, ethanol, glycerin, ethyl acetate, butylene glycol, propylene glycol, dichloromethane, hexane, and mixtures thereof. Can be filtered. The filtrate may be transferred to a concentration tank and concentrated under reduced pressure and freeze-dried at 50 ° C or less.

상기 방법에 따라 수득한 추출물, 감압 농축물 또는 동결 건조물은 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 및 프로필렌글리콜로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 액상으로 제형화될 수 있다. 이에 한정되지 않고, 상기 화장료 조성물은 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있고, 보다 상세하게는 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 파운데이션, 젤, 연고 또는 스프레이의 제형으로 제조될 수 있다.The extract, reduced pressure concentrate or lyophilized product obtained according to the above method may be formulated in a liquid phase with one or more solvents selected from the group consisting of purified water, ethanol, butylene glycol, and propylene glycol. Without being limited thereto, the cosmetic composition may be prepared in any dosage form that is commonly prepared, and more specifically, may be prepared in the form of a lotion, essence, lotion, cream, pack, foundation, gel, ointment or spray. .

본 발명에 따른 화장료 조성물에서, 상기 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물은 화장료 조성물 전체 100 중량에 대하여 0.001 내지 20 중량% 함유될 수 있다. 상기 발효 추출물이 0.001 중량% 미만으로 포함되는 경우에는 본 발명에서 확인한 여러 피부 기능성의 발휘 효과가 미미하고, 20 중량%를 초과하는 경우에는 재료 투입량 대비 효율성이 떨어져 경제적이지 못하다.In the cosmetic composition according to the present invention, the skate oil fermentation extract or skate oil fermentation extract may be contained 0.001 to 20% by weight relative to the total weight of the cosmetic composition. When the fermentation extract is included in less than 0.001% by weight, the effect of exhibiting the various skin functionalities identified in the present invention is insignificant, and when it exceeds 20% by weight, the efficiency of the material input is not economically low.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 화장 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제, 예를 들어 친수성 또는 친유성 겔화제, 친수성 또는 친유성 활성제, 보존제, 항산화제, 용매, 방향제, 충전제, 차단제, 안료, 흡취제, 염료 등을 함유할 수 있다. 이들 다양한 보조제의 양은 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 양으로, 예를 들어, 조성물 전체 100 중량에 대하여 0.001 내지 20중량%가 함유될 수 있다. 또한, 상기 화장료 조성물은 상기 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물 이외에 항산화, 미백, 주름개선 및 항염 효과를 나타내는 다른 유효성분을 하나 이상 포함할 수 있다. 다만, 어떠한 경우라도 상기 보조제, 상기 유효성분 및 그 함유량은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 악영향을 미치지 않도록 선택될 것이다. Cosmetic compositions according to the present invention include auxiliaries commonly used in the cosmetic field, for example, hydrophilic or lipophilic gelling agents, hydrophilic or lipophilic active agents, preservatives, antioxidants, solvents, fragrances, fillers, blockers, pigments, odorants, Dyes and the like. The amount of these various adjuvants is conventionally used in the art and may contain, for example, 0.001 to 20% by weight relative to the total weight of the composition. In addition, the cosmetic composition may include one or more other active ingredients exhibiting antioxidant, whitening, anti-wrinkle and anti-inflammatory effect in addition to the skate oil fermentation extract or skate oil fermentation extract. In any case, the adjuvant, the active ingredient and the content thereof will be selected so as not to adversely affect the desirable properties of the cosmetic composition according to the present invention.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 발효 과정을 통해 프로테오글리칸이 저분자화되어 피부에서의 흡수율이 높아질 수 있다. 또한, 상기 화장료 조성물은 피부 주름개선 또는 피부 보습 개선의 효과를 가질 수 있다. 후술하는 실시예들을 통해, 그 효과를 확인할 수 있다.In the cosmetic composition according to the present invention, the proteoglycan becomes low molecular weight through the fermentation process, thereby increasing the absorption rate in the skin. In addition, the cosmetic composition may have the effect of improving skin wrinkles or skin moisturizing. Through the following examples, the effect can be confirmed.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.Hereinafter, examples will be described in detail to help understand the present invention. However, the following examples are merely to illustrate the content of the present invention is not limited to the scope of the present invention. The embodiments of the present invention are provided to more completely explain the present invention to those skilled in the art.

[실시예 1 : 홍어 또는 홍어코 연골의 효소 처리에 따른 프로테오글리칸의 수율 및 함량(%)][Example 1: Proteoglycan Yield and Content (%) According to Enzyme Treatment of Skate or Skate Nose Cartilage]

본 실시예에서는 홍어 또는 홍어코 연골의 분해 효소별 가수분해 후 프로테오글리칸의 수율을 확인하고자 하였다. 잘게 썰어진 홍어의 연골 부피의 4배에 해당하는 물을 첨가하고, 가수분해하기 위해 5가지 단백질 분해 효소를 사용하여 가수분해를 수행하였다. 가수분해물의 수율과 프로테오글리칸을 측정함으로써 효소 가수분해에 적합한 최적의 효소 농도, pH, 및 반응시간 등을 선정하고자 하였다. In this example, the yield of proteoglycans was determined after hydrolysis of each of the skaters or skateboard cartilage. Water equivalent to four times the cartilage volume of the chopped skates was added and hydrolysis was performed using five proteolytic enzymes for hydrolysis. By measuring the yield and proteoglycan of the hydrolyzate, the optimal enzyme concentration, pH, and reaction time for enzymatic hydrolysis were selected.

홍어로부터 프로테오글리칸의 추출 효율을 높이기 위한 적절한 단백질 분해 효소를 선택하기 위해, 플라보자임(Flavourzyme), 프로타멕스(Protamex) 1.5MG, 뉴트라아제(Neutrase), 알칼라아제(Alcalase), 및 프로테아제(Protease)를 사용하여 가수분해를 수행하였다. 상기 5가지 단백질 분해 효소를 약 2.0%씩 각각 첨가하고, 각 효소의 pH 및 온도는 플라보자임 pH 6.5, 45℃; 프로타멕스 1.5MG, pH 5.5, 40℃; 뉴트라아제, pH 6.5, 40℃; 알칼라아제, pH 7.0, 50℃; 프로테아제, pH 7, 37℃로 조정하여 각각 24 시간 동안 가수분해한 후 각 분해물의 프로테오글리칸 수율 및 함량을 측정하였다.To select the appropriate proteolytic enzymes to increase the extraction efficiency of proteoglycans from skates, Flavorzyme, Protamex 1.5MG, Neutrase, Alcalase, and Protease Hydrolysis was carried out using Protease). Each of the five proteolytic enzymes was added in about 2.0%, and the pH and temperature of each enzyme were flavozyme pH 6.5, 45 ° C .; Protamex 1.5MG, pH 5.5, 40 ° C; Neutrase, pH 6.5, 40 ° C .; Alkalase, pH 7.0, 50 ° C .; Protease, adjusted to pH 7, 37 ° C., was hydrolyzed for 24 hours, respectively, and the proteoglycan yield and content of each digest was measured.

효소enzyme 수율yield 함량content AlcalaseAlcalase 19.619.6 17.117.1 ProteaseProtease 20.520.5 17.817.8 FlavourzymeFlavorzyme 11.211.2 8.88.8 NeutraseNeutrase 13.113.1 6.96.9 Protamex 1.5MGProtamex 1.5MG 15.315.3 9.19.1

표 1은 실시예 1에 따라 단백질 분해 효소에 따른 프로테오글리칸의 수율 및 함량을 나타낸 것이다. 표 1을 참조하면, 상기 단백질 분해 효소 중 알칼라아제와 프로테아제를 사용하여 가수분해를 수행하였을 때, 상기 프로테오글리칸의 수율 및 함량이 가장 높은 것으로 나타났다.Table 1 shows the yield and content of proteoglycans according to proteolytic enzymes according to Example 1. Referring to Table 1, when hydrolysis was performed using alkalase and protease, the yield and content of the proteoglycan were the highest.

[실시예 2 : 발효에 따른 프로테오글리칸의 저분자화]Example 2 Low Molecular Weight of Proteoglycans during Fermentation

본 실시예에서는 홍어 또는 홍어코 연골을 발효 균주별로 발효한 후, 프로테오글리칸의 저분자화를 확인하고자 하였다. 잘게 썰어진 홍어의 연골 부피의 4배에 해당하는 물을 첨가하고 상기 실시예 1에서 프로테오글리칸의 수율과 함량이 높았던 알칼라아제와 프로테아제를 사용하여 가수분해 후, 발효 균주인 맥주 효모, 누룩균, 락토바실러스 람노서스. 갈락토미세스, 흑효모로 발효시켰다. In this embodiment, after the fermentation of the skates or skateboard cartilage for each fermentation strain, the low molecular weight of the proteoglycan was to be confirmed. Four times the volume of cartilage of chopped skates was added, followed by hydrolysis using alkalase and protease, which had high yield and content of proteoglycans in Example 1, followed by fermentation strains of beer yeast, koji, lactose. Bacillus rhamnosus. Galactomyces, fermented with black yeast.

맥주 효모(Saccharomyces cerevisiae YM배지, 30℃; 누룩균(Aspergillus oryzae) PDA배지, 26℃; 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) MRS배지, 37℃; 갈락토미세스(Galactomyces reessii) 4% Malt배지, 21℃; 흑효모(Aureobasidium pullulans) PDA배지, 26℃로 조정하여 각각 24 시간 동안 발효한 후, 각 발효물의 프로테오글리칸 분자량을 측정하였다. Saccharomyces cerevisiae YM medium, 30 ° C .; Aspergillus oryzae PDA medium, 26 ° C., Lactobacillus rhamnosus MRS medium, 37 ° C .; Galactomyces reessii 4% Malt medium, 21 ° C. Black yeast ( Aureobasidium pullulans ) PDA medium, adjusted to 26 ℃ fermented for 24 hours, respectively, the proteoglycan molecular weight of each fermentation was measured.

프로테오글리칸Proteoglycan 맥주 효모Brewer's yeast 누룩균Yeast 락토바실러스 람노서스Lactobacillus rhamnosus 갈락토미세스Galactomyces 흑효모Black yeast 분자량(Da)Molecular Weight (Da) 1,200,0001,200,000 변화없음No change 변화없음No change 5,9005,900 변화없음No change 변화없음No change

표 2는 실시예 2에 따라 각각의 발효 균주를 사용하여 발효시킨 가수분해물의 프로테오글리칸의 분자량을 측정한 것이다. 표 2를 참조하면, 120만Da의 프로테오글리칸이 락토바실러스 람노서스에 의해 발효되었을 때, 처음 분자량의 약 1/200 정도로 저분자화되었다. 그에 비해 나머지 발효 균주에서는 분자량의 변화가 없었다.Table 2 measures the molecular weight of the proteoglycans of hydrolysates fermented using each fermentation strain according to Example 2. Referring to Table 2, when 1.2 million Da of proteoglycans were fermented by Lactobacillus rhamnosus, the molecular weight was about 1/200 of the initial molecular weight. In comparison, there was no change in molecular weight in the remaining fermentation strains.

[실시예 3 : 홍어 추출물의 제조]Example 3: Preparation of Skate Extract

홍어를 구입하여 불순물을 제거하기 위하여 물로 수세하고, 칼을 이용하여 홍어의 몸통, 꼬리로부터 연골을 채취하여 출발 재료로 하였다. 상기 홍어의 연골로부터 핀셋을 사용하여 고형 지방을 제거하고, 멸균 식염수로 세척하였다. 이어서 분쇄기로 잘게 분쇄하여, 잘게 썰어진 홍어의 연골을 얻었다. 상기 연골 부피의 4배에 해당하는 물을 첨가하고 2개의 효소를 순차적으로 첨가하여 가수분해를 수행하였다. Skates were purchased, washed with water to remove impurities, and cartilage was collected from the trunk and tail of the skates using a knife as a starting material. Solid fat was removed from the cartilage of the skate using tweezers and washed with sterile saline. Subsequently, finely pulverized with a grinder to obtain cartilage of chopped skates. Hydrolysis was performed by adding water corresponding to four times the volume of cartilage and sequentially adding two enzymes.

먼저, 50℃ 및 pH7 조건에서 알칼라아제 효소를 첨가하여 1시간 동안 반응시키는 제1 차 가수분해를 수행하였다. 이때, 알칼라아제 대 홍어는 1:100(W/W)의 비율로 혼합하여 반응시켰다. 제1 차 가수분해 수행 후, 37℃ 및 pH7 조건에서 상기 반응물에 다른 효소인 프로테아제를 첨가하여 4시간 동안 반응시키는 제2 차 가수분해를 수행하였다. 이때, 프로테아제 대 홍어는 1:100(W/W)의 비율로 혼합하여 반응시켰다.First, the first hydrolysis was performed by adding an alkalase enzyme at 50 ° C. and pH 7 to react for 1 hour. At this time, alkalase to skate was mixed in a ratio of 1: 100 (W / W). After performing the first hydrolysis, a second hydrolysis was performed in which the protease, another enzyme, was added to the reaction product at 37 ° C. and pH 7 to react for 4 hours. At this time, the protease to skate was reacted by mixing at a ratio of 1: 100 (W / W).

상기 제2 차 가수분해 반응이 완료된 다음, 열수조에서 10분 동안 가열하여 상기 효소를 불활성화시키고, 가수분해물을 분리하였다. 상기 가수분해물을 와트만(whatman) #5 여과지로 여과하여 홍어 추출물을 제조하였다.After the second hydrolysis reaction was completed, the enzyme was inactivated by heating in a hot water bath for 10 minutes, and the hydrolyzate was separated. The hydrolyzate was filtered through whatman # 5 filter paper to prepare a skate extract.

[실시예 4 : 홍어코 추출물의 제조]Example 4 Preparation of Skate Nose Extract

홍어를 구입하여 불순물을 제거하기 위하여 물로 수세하고, 칼을 이용하여 홍어코로부터 연골을 채취하여 출발 재료로 하였다. 상기 홍어코의 연골로부터 핀셋을 사용하여 고형 지방을 제거하고, 멸균 식염수로 세척하였다. 이어서 분쇄기로 잘게 분쇄하여, 잘게 썰어진 홍어코 연골을 얻었다. 상기 연골 부피의 4배에 해당하는 물을 첨가하고 2개의 효소를 순차적으로 첨가하여 가수분해를 수행하였다. Skates were purchased, washed with water to remove impurities, cartilage was collected from skates using a knife as a starting material. Solid fat was removed using tweezers from the cartilage of the skate, and washed with sterile saline. Subsequently, finely pulverized with a grinder to obtain finely sliced red nose nose cartilage. Hydrolysis was performed by adding water corresponding to four times the volume of cartilage and sequentially adding two enzymes.

먼저, 50℃ 및 pH7 조건에서 알칼라아제 효소를 첨가하여 1시간 동안 반응시키는 제1 차 가수분해를 수행하였다. 이때, 알칼라아제 대 홍어코는 1:100(W/W)의 비율로 혼합하여 반응시켰다. 제1 차 가수분해 수행 후, 37℃ 및 pH7 조건에서 상기 반응물에 다른 효소인 프로테아제를 첨가하여 4시간 동안 반응시키는 제2 차 가수분해를 수행하였다. 이때, 프로테아제 대 홍어코는 1:100(W/W)의 비율로 혼합하여 반응시켰다.First, the first hydrolysis was performed by adding an alkalase enzyme at 50 ° C. and pH 7 to react for 1 hour. At this time, alkalase to red nose was mixed and reacted at a ratio of 1: 100 (W / W). After performing the first hydrolysis, a second hydrolysis was performed in which the protease, another enzyme, was added to the reaction product at 37 ° C. and pH 7 to react for 4 hours. At this time, the protease to red nose was mixed and reacted at a ratio of 1: 100 (W / W).

상기 제2 차 가수분해 반응이 완료된 다음, 열수조에서 10분 동안 가열하여 상기 효소를 불활성화시키고, 가수분해물을 분리하였다. 상기 가수분해물을 와트만(whatman) #5 여과지로 여과하여 홍어코 추출물을 제조하였다.After the second hydrolysis reaction was completed, the enzyme was inactivated by heating in a hot water bath for 10 minutes, and the hydrolyzate was separated. The hydrolyzate was filtered through a Whatman # 5 filter paper to prepare a skate oil extract.

[실시예 5 : 홍어 발효 추출물의 제조]Example 5 Preparation of Skate Fermented Extract

실시예 3에 따라 제조된 홍어 추출물을 121℃에서 고압 멸균시키고 락토바실러스 람노서스 균사체를 50,000cfu/L 첨가하여 37℃, pH5 내지 7, 바람직하게는 pH6의 호기적 조건의 발효조에서 약 1일 내지 7일간, 바람직하게는 3일간 배양하여 발효시켰다. 발효 후 상기 발효물을 121℃ 및 1.5atm 조건에서 15분 동안 멸균시켜 균을 사멸한 후, 0.45㎛의 여과막을 이용하여 여과하였다. 여과된 발효물을 50℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하였다. 상기 감압 농축 및 동결 건조물을 하기 실험예에 따라 농도별로 제조하여 사용하였다.The skate extract prepared according to Example 3 was autoclaved at 121 ° C. and 50,000 cfu / L of Lactobacillus rhamnosus mycelium was added at 37 ° C., at pH 5 to 7, preferably at about 1 day in a fermenter at an aerobic condition of pH 6. The cultures were fermented for 7 days, preferably 3 days. After fermentation, the fermented product was sterilized at 121 ° C. and 1.5 atm for 15 minutes to kill bacteria, and then filtered using a 0.45 μm filtration membrane. The filtered fermented product was concentrated under reduced pressure at 50 ° C. or lower and freeze dried. The vacuum concentrated and freeze-dried products were prepared by concentration according to the following experimental example.

[실시예 6 : 홍어코 발효 추출물의 제조]Example 6 Preparation of Safflower Fermented Extract

실시예 4에 따라 제조된 홍어코 추출물을 121℃에서 고압 멸균시키고 락토바실러스 람노서스 균사체를 50,000cfu/L 첨가하여 37℃, pH5 내지 7, 바람직하게는 pH6으로 호기적 조건으로 발효조에서 약 1일 내지 7일간, 바람직하게는 3일간 배양하여 발효시켰다. 발효 후 상기 발효물을 121℃ 및 1.5atm 조건에서 15분 동안 멸균시켜 균을 사멸한 후, 0.45㎛의 여과막을 이용하여 여과하였다. 여과된 발효물을 50℃ 이하에서 감압 농축 및 동결 건조하였다. 상기 감압 농축 및 동결 건조물을 하기 실험예에 따라 농도별로 제조하여 사용하였다.Safflower extract prepared according to Example 4 was autoclaved at 121 ° C. and 50,000 cfu / L of Lactobacillus rhamnosus mycelium was added thereto at 37 ° C., pH 5 to 7, preferably pH 6 for about 1 day in a fermentor. It was fermented by culturing for 7 days, preferably 3 days. After fermentation, the fermented product was sterilized at 121 ° C. and 1.5 atm for 15 minutes to kill bacteria, and then filtered using a 0.45 μm filtration membrane. The filtered fermented product was concentrated under reduced pressure at 50 ° C. or lower and freeze dried. The vacuum concentrated and freeze-dried products were prepared by concentration according to the following experimental example.

최종 분해물의 건조중량(단위:g)Dry Weight of Final Degradation (Unit: g) 홍어 추출물Skate Extract 61.561.5 홍어코 추출물Skate Nose Extract 60.760.7 홍어 발효 추출물Skate Ferment Extract 58.258.2 홍어코 발효 추출물Safflower Ferment Extract 55.355.3

표 3은 실시예 3 내지 6에 따라 제조된 홍어 추출물, 홍어코 추출물, 홍어 발효 추출물, 및 홍어코 발효 추출물의 최종 분해물의 건조 중량이다.Table 3 shows the dry weights of the skates extracts, skates extract, skate fermentation extract, and the final digest of the skates fermentation extract prepared according to Examples 3-6.

또한, 도 1은 본 발명에 따른 홍어코 발효 추출물의 분자량을 고성능액체크로마토그래피-겔투과크로마토그래피(HPLC-GPC)를 이용하여 측정한 그래프이다. 도 1을 참조하면, 상기 실시예 6에 따라 제조된 상기 홍어코 발효 추출물은 분자량이 5,900Da로 측정되어 저분자화되었음을 확인할 수 있다. In addition, Figure 1 is a graph of the molecular weight of the Sikko fermented extract according to the present invention using high performance liquid chromatography-gel permeation chromatography (HPLC-GPC). Referring to Figure 1, the Hakko fermented extract prepared according to Example 6 can be confirmed that the molecular weight is measured to a low molecular weight of 5,900 Da.

[실험예 1 : 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물의 MMP-1 생성 억제능 측정]Experimental Example 1: Determination of MMP-1 Production Inhibition of Skate Fermented Extract or Skate Fermented Extract

본 실험예에서는 상기 실시예 3 내지 6에서 수득한 홍어 추출물, 홍어코 추출물, 홍어 발효 추출물, 및 홍어코 발효 추출물의 콜라겐 분해 효소인 MMP-1의 생성 억제 효과를 확인하고자 하였다.In this experimental example, the inhibitory effect of the production of MMP-1, a collagen degrading enzyme of the skates, skates, skates fermented extracts, and skates fermented extracts obtained in Examples 3 to 6 was confirmed.

인간 피부 섬유아세포를 24-웰 플레이트(well plate)에 2×105 cells/well의 농도로 분주하고, 37℃, 5% CO2 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 생리 식염액(Phosphate buffer saline; 이하, PBS)으로 2회 세척한 뒤, 생리 식염액을 넣은 채로 UV 조사기를 이용하여 6 J/㎝2 만큼의 UV를 조사시켰다. 상기 실시예 3 내지 6의 홍어 추출물, 홍어코 추출물, 홍어 발효 추출물, 및 홍어코 발효 추출물은 2% FBS(fetal bovine serum)를 첨가한 DMEM(Dulbeco's Modified Eagle's Media) 배지와 상기 추출물 및 상기 발효 추출물이 포함되지 않은 대조군으로의 2% DMEM 배지에서 48시간 동안 배양되었다.Human skin fibroblasts were aliquoted in a 24-well plate at a concentration of 2 × 10 5 cells / well and incubated at 37 ° C., 5% CO 2 for 24 hours. After washing twice with physiological saline (Phosphate buffer saline; hereinafter, PBS), UV was irradiated by 6 J / cm 2 using a UV irradiator with physiological saline. The skate extract, skate skate extract, skate skate fermentation extract, and skate skate fermentation extract of Examples 3 to 6, DMEM (Dulbeco's Modified Eagle's Media) medium with 2% FBS (fetal bovine serum) and the extract and the fermentation extract This was incubated for 48 hours in 2% DMEM medium with no control.

배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 키트(R&D system, 미합중국)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, 하기 식 1에 따라 MMP-1 생성 억제율(%)을 계산하였다.After incubation, the supernatant of each well was collected and the amount (ng / ml) of newly synthesized MMP-1 was measured using an MMP-1 assay kit (R & D system, United States of America), and MMP-1 was generated according to Equation 1 below. Inhibition% was calculated.

[식 1][Equation 1]

Figure 112018096124869-pat00001
Figure 112018096124869-pat00001

도 2 내지 도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 홍어 추출물, 홍어코 추출물, 홍어 발효 추출물, 또는 홍어코 발효 추출물의 농도에 따른 콜라겐 분해 효소인 MMP-1 생성 억제능을 측정한 그래프이다.2 to 5 are graphs of MMP-1 production inhibitory ability of collagen degrading enzymes according to the concentration of the skate, extract, skate, fermented extract, or skate, fermented extract according to an embodiment of the present invention.

도 2 및 도 3을 참조하면, 홍어 추출물은 3% 농도에서 약 25% MMP-1 생성 억제 효능을 발휘함을 확인할 수 있고, 홍어코 추출물은 3% 농도에서 약 40% MMP-1 생성을 억제하여, 상기 홍어 추출물보다는 MMP-1의 생성 억제능이 높게 나타났다.Referring to Figures 2 and 3, it can be seen that the skate extract exhibits about 25% MMP-1 production inhibitory effect at 3% concentration, and the skate oil extract inhibits about 40% MMP-1 production at 3% concentration. As a result, the production inhibition of MMP-1 was higher than that of the skate.

도 4 및 도 5를 참조하면, 홍어 발효 추출물과 홍어코 발효 추출물은 3%의 농도에서 약 50%의 MMP-1 생성 억제능을 보여, 아데노신(Adenosine) 100㎍/㎖ 농도와 거의 유사한 효능을 발휘함을 확인할 수 있다. Referring to FIGS. 4 and 5, the skate oil fermentation extract and the skate oil fermentation extract exhibited about 50% MMP-1 production inhibitory activity at a concentration of 3%, showing an effect similar to that of 100 μg / ml of adenosine. Can be confirmed.

즉, 본 발명에 따른 홍어 추출물, 홍어코 추출물, 홍어 발효 추출물 및 홍어코 발효 추출물은 모두 MMP-1 생성 억제능을 가짐을 확인할 수 있었고, 그 중에서도 홍어 발효 추출물 및 홍어코 발효 추출물에서 우수한 MMP-1 생성 억제능을 보여, 추출물보다는 발효 추출물이 더 우수한 피부 노화 및 주름 방지 효과를 가진다고 할 수 있다.That is, all of the skate extract, skate extract, skate fermentation extract and skate extract fermentation extract according to the present invention was found to have the ability to inhibit MMP-1 production, and among them, the excellent MMP-1 in the Shows the ability to inhibit production, it can be said that the fermented extract has better skin aging and anti-wrinkle effect than the extract.

[실험예 2 : 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물의 AQP-3 발현 효과 확인]Experimental Example 2: Confirmation of AQP-3 Expression Effect of Skate Fermented Extract or Skate Fermented Extract

본 실험예에서는 상기 실시예 3 내지 6에서 수득한 홍어 추출물, 홍어코 추출물, 홍어 발효 추출물, 및 홍어코 발효 추출물의 아쿠아포린-3(AQP-3) 발현 효과를 확인하고자 하였다.In the present experimental example, it was intended to confirm the aquaporin-3 (AQP-3) expression effect of the skates, skates extract, skates fermented extract, and skates fermented extract obtained in Examples 3 to 6.

피부 각질세포(HaCaT)를 2x105 cells/ml로 6웰(well)에 2ml씩 분주하고 안정화시킨 후, 시료를 농도별로 처리하여 6시간 동안 반응시켰다. PBS를 이용하여 세포를 얻은 다음, 세포 용해 버퍼를 이용해 얼음상에서 30분간 반응시켜 세포막을 파괴하고 1,200rpm에서 15분간 원심분리를 하였다. 원심분리 후, 상층액만 따로 옮기고 BCA(Bicinchoninic acid) assay를 이용하여 단백질을 정량하였다. The skin keratinocytes (HaCaT) were dispensed and stabilized in 6 wells at 2/10 5 cells / ml, and then stabilized. Cells were obtained using PBS, and then reacted for 30 minutes on ice using a cell lysis buffer to destroy cell membranes and centrifuged at 1,200 rpm for 15 minutes. After centrifugation, only the supernatant was transferred separately and the protein was quantified using BCA (Bicinchoninic acid) assay.

일정량의 단백질을 SDS-겔 로딩 버퍼(SDS gel-loading buffer)와 혼합하여 100℃에서 3분간 가열하여 불활성화 시키고, SDS-폴리아크릴아미드겔(SDS-polyacrylamide gel)을 이용하여 전기영동(SDS-PAGE)을 실시하였다. SDS-폴리아크릴아미드겔을 60mM에서 90분간 폴리플루오린화바이닐리덴(Polyvinylidene fluoride; 이하, PVDF) 멤브레인(membrane)으로 이동시키고 5% 탈지유(skim milk)에서 1시간 블로킹(blocking) 하였다. 상기 블로킹을 마친 PVDF 멤브레인에 1차 항체(Aquaporin-3)를 4℃에서 24 시간 동안 반응시키고 1X TTBS 용액을 10분 간격으로 3번 교환하여 30분간 세척하였다. 5% 탈지유에서 1차 특이적 2차 항체(primary-specific secondary antibody)를 2시간 동안 반응시키고 다시 1X TTBS 용액으로 10분 간격으로 3번 교환하여 30분간 세척하였다. PVDF 멤브레인을 ECL(enhanced chemiluminescence) 용액으로 반응시키고 Chemi DocTM XRS+ 장치를 이용해 밴드(band)를 분석하였다.A certain amount of protein was mixed with SDS gel-loading buffer and heated at 100 ° C. for 3 minutes to inactivate it, followed by electrophoresis using SDS-polyacrylamide gel. PAGE). SDS-polyacrylamide gel was transferred to a polyvinylidene fluoride (PVDF) membrane at 60 mM for 90 minutes and blocked for 1 hour in 5% skim milk. The primary antibody (Aquaporin-3) was reacted with the blocked PVDF membrane at 4 ° C. for 24 hours, and washed with 30 × by replacing 3 × of the 1X TTBS solution at 10 minute intervals. The primary-specific secondary antibody in 5% skim milk was reacted for 2 hours, and washed again for 30 minutes by exchanging 3 times at 10 minute intervals with 1X TTBS solution. PVDF membranes were reacted with enhanced chemiluminescence (ECL) solution and bands were analyzed using a Chemi DocTM XRS + device.

도 6 내지 도 9는 본 발명의 일 실시예에 따른 홍어 추출물, 홍어코 추출물, 홍어 발효 추출물, 또는 홍어코 발효 추출물의 농도에 따른 아쿠아포린-3(AQP-3) 발현 효과를 측정한 그래프이다.6 to 9 are graphs measuring the effect of aquaporin-3 (AQP-3) expression according to the concentration of the skate, extract, skate, fermented, or skate fermentation extract according to an embodiment of the present invention .

도 6 내지 도 9를 참조하면, 홍어 추출물, 홍어코 추출물, 홍어 발효 추출물, 및 홍어코 발효 추출물 모두 농도 의존적으로 AQP-3의 발현을 증가시킴을 확인할 수 있다. 특히, 홍어 추출물과 홍어코 추출물에 비해, 홍어 발효 추출물과 홍어코 발효 추출물에서 AQP-3의 발현이 보다 명확하게 관찰되었고, 홍어 발효 추출물 및 홍어코 발효 추출물은 3% 농도에서 양성 대조군인 덱사메타손(Dexamethason) 1μM과 거의 유사한 효능을 발휘함을 확인할 수 있었다. 6 to 9, it can be seen that the skate, extract, skate, fermented extract, skate, fermented extract, and skate, all of which increase the expression of AQP-3 in a concentration-dependent manner. In particular, the expression of AQP-3 was more clearly observed in the skate and fermented extracts, compared to the skate and the extract of skate, the skate and fermented extracts were the positive control dexamethasone at 3% concentration. Dexamethason) showed almost the same efficacy as 1μM.

즉, 본 실험을 통해, 본 발명에 따른 홍어 추출물, 홍어코 추출물, 홍어 발효 추출물 및 홍어코 발효 추출물 모두 AQP-3의 발현을 증가시킴을 확인할 수 있었고, 그 중에서도 홍어 발효 추출물 및 홍어코 발효 추출물에서 높은 AQP-3의 발현이 관찰되어, 상기 추출물보다 상기 발효 추출물이 보다 우수한 피부 보습 효과를 발휘함을 확인할 수 있다.In other words, through the present experiment, it was confirmed that all of the skate, extract, skate, fermented extract and skate, fermented extract according to the present invention increased the expression of AQP-3, and among them, skate and fermented extract In the expression of high AQP-3 is observed, it can be seen that the fermented extract exhibits a better skin moisturizing effect than the extract.

[제조예: 홍어 발효 추출물 및 홍어코 발효 추출물을 함유하는 화장료의 제조]Preparation Example: Preparation of Cosmetics Containing Skate Fermented Extract and Skate Fermented Extract

상기 실시예 5 및 6에 따른 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물을 3.0 중량% 함유하는 화장료 조성물을 상기 표 4의 조성으로 제조하였고, 제조예 1 및 제조예 2라 하였다. 한편, 효능을 확인하기 위해 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물을 포함하지 않는 화장료 조성물, 즉 홍어 추출물 및 홍어코 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 비교제조예 1 및 비교제조예 2로 하여 상기 표 4에 나타내었다.Cosmetic compositions containing 3.0% by weight of the skate oil fermentation extract or skate oil fermentation extract according to Examples 5 and 6 were prepared in the composition of Table 4, Preparation Example 1 and Preparation Example 2. On the other hand, in order to confirm the efficacy cosmetic composition that does not include the skates fermented extract or skates fermented extract, that is, the cosmetic composition including the skates and skates extract as Comparative Preparation Example 1 and Comparative Preparation Example 2 in Table 4 Indicated.

구분division
성분ingredient 제조예 1Preparation Example 1
함량(중량%)Content (% by weight)
제조예 2Preparation Example 2
함량(중량%)Content (% by weight)
비교제조예 1Comparative Production Example 1
함량(중량%)Content (% by weight)
비교제조예 2Comparative Production Example 2
함량(중량%)Content (% by weight)


AA
실시예 3Example 3 -- -- 3.03.0 --
실시예 4Example 4 -- -- -- 3.03.0 실시예 5Example 5 3.03.0 -- -- -- 실시예 6Example 6 -- 3.03.0 -- -- EDTA-2NaEDTA-2Na 0.020.02 0.020.02 0.020.02 0.020.02 정제수Purified water to 100to 100 to 100to 100 to 100to 100 to 100to 100




BB
세토스테아릴알코올Cetostearyl alcohol 2.02.0 2.02.0 2.02.0 2.02.0
글리세릴스테아레이트Glyceryl Stearate 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 마이크로크리스탈린Microcrystallin 0.70.7 0.70.7 0.70.7 0.70.7 스쿠알란Squalane 5.05.0 5.05.0 5.05.0 5.05.0 유동파라핀Liquid paraffin 3.03.0 3.03.0 3.03.0 3.03.0 트리옥타노인Trioctanoine 5.05.0 5.05.0 5.05.0 5.05.0 폴리솔베이트Polysorbate 1.21.2 1.21.2 1.21.2 1.21.2 솔비탄스테아레이트Sorbitan stearate 0.50.5 0.50.5 0.50.5 0.50.5 토코페릴아세테이트Tocopheryl Acetate 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 사이클로메치콘Cyclomethicone 3.03.0 3.03.0 3.03.0 3.03.0 BHTBHT 0.050.05 0.050.05 0.050.05 0.050.05 CC 향, 방부제Incense, preservative 적량Appropriate 적량Appropriate 적량Appropriate 적량Appropriate

[실험예 3 : 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 피부 주름개선 효과 확인]Experimental Example 3: Confirmation of Skin Wrinkle Improvement Effect of Cosmetic Composition Containing Skate Fermented Extract or Skate Fermented Extract

본 실험예에서는 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 피부 주름개선 효과에 대한 인체적용시험을 실시하였다. In this experimental example, the human body application test was performed on the skin wrinkle improvement effect of the cosmetic composition containing the skate oil fermentation extract or skate oil fermentation extract.

인체적용시험은 실험예 1에서 효능을 나타내었던 실시예 5 또는 6을 함유하고 있는 제조예 1 또는 2와, 홍어 추출물 또는 홍어코 추출물을 포함하는 비교제조예 1 또는 2의 화장료 조성물을 함유하는 화장료의 사용으로 인한 피부 주름개선 효과를 확인 및 비교 평가하였다. 상기 시험은 각 화장료의 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다.The human application test is a cosmetic composition containing the cosmetic composition of Preparation Example 1 or 2 containing Example 5 or 6, which showed the efficacy in Experimental Example 1, and Comparative Preparation Example 1 or 2 comprising a skate or extract The skin wrinkle improvement effect of the use of was confirmed and compared. The test was evaluated through the actual use test of each cosmetic.

실험자(20세 - 35세의 여성) 20명의 여성을 대상으로 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물 제조예 실험군의 대조군인 비교제조예 1 및 2를 얼굴 오른쪽 부위에, 제조예 1 및 2를 각각 얼굴 왼쪽 부위에 도포하여 실험을 진행하였다. 피부 주름개선 효과는 제품 사용 전과 8주간 사용 후의 각 피검자의 주름개선 효과를 숙련된 의사의 육안 관찰 및 기기 측정(cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)을 통하여 평가하였으며, 실험 결과는 하기의 표 5에 나타내었다.Experimental (20-35 year old female) cosmetic composition comprising a skate fermentation extract or skate oil fermentation extract for 20 women, Preparation Examples 1 and 2, the control group of the experimental group to the right side of the face, Preparation Example 1 And 2 were applied to the left side of the face, respectively, to proceed with the experiment. Skin wrinkle improvement was evaluated by visual observation and instrumental measurement (cutometer SEM 575, C + K Electronic Co., Germany) of experienced doctors before and after 8 weeks of use. It is shown in Table 5 below.

주름 개선 효과Wrinkle improvement
개선율(%)% Improvement
우수Great 약간slightly 없음none 제조예 1 (실시예 5)Preparation Example 1 (Example 5) 1212 44 44 70.070.0 제조예 2 (실시예 6)Preparation Example 2 (Example 6) 1515 33 22 82.582.5 비교제조예 1 (실시예 3)Comparative Production Example 1 (Example 3) 00 1111 99 27.527.5 비교제조예 2 (실시예 4)Comparative Production Example 2 (Example 4) 00 1313 77 30.030.0

표 5는 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물의 주름 개선 효과를 육안 평가 및 기기 평가로 나타낸 것이다. 표 5를 참조하면, 본 발명에 따른 홍어 발효 추출물 및 홍어코 발효 추출물을 함유한 제조예 1 및 2의 화장료 조성물은 대조군인 비교제조예 1 및 2에 대비하여 피부 주름개선에 대해 높은 개선율을 보였다. 특히, 제조예 2, 홍어코 발효 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 매우 우수한 피부 주름개선 효과를 보여주었다. 또한, 상기 실험 결과는 홍어 추출물, 홍어코 추출물과 같은 고분자 추출물보다 홍어 발효 추출물, 홍어코 발효 추출물과 같은 저분자의 발효 추출물이 피부에 더 잘 흡수되어, 주름개선에 더 효과적임을 알 수 있다.Table 5 shows the wrinkle-improving effect of the cosmetic composition comprising the skate oil fermentation extract or skate oil fermentation extract by visual evaluation and instrumental evaluation. Referring to Table 5, the cosmetic compositions of Preparation Examples 1 and 2 containing the skate oil fermentation extract and skate oil fermentation extract according to the present invention showed a high improvement rate for skin wrinkle improvement as compared to Comparative Preparation Examples 1 and 2 as a control group. . In particular, the cosmetic composition containing Preparation Example 2, Sikko fermented extract showed a very good skin wrinkle improvement effect. In addition, the experimental results indicate that the low-molecular fermentation extracts, such as the skates fermentation extracts, skates fermentation extracts are better absorbed into the skin than the macromolecular extracts, such as the skates, skates extracts, and more effective in improving wrinkles.

[실험예 4 : 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물 함유하는 화장료 조성물의 피부 보습력 개선 효과 확인][Experimental Example 4: Confirming the skin moisturizing effect of the cosmetic composition containing the skate oil fermentation extract or skate oil fermentation extract]

본 실험예에서는 상기 제조예에서 제조한 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 피부 보습력 개선 효과를 확인하고자 하였다.In the present experimental example, it was intended to confirm the skin moisturizing improvement effect of the cosmetic composition containing the skates fermented extract or skates fermented extract prepared in the preparation example.

피부 질환이 없는 실험자(20~40대) 25명을 대상으로 1조 당 20명씩 2개조로 나누고, 각 조별로 상기 제조예 1 및 2와 비교제조예 1 및 2의 화장료를 얼굴 및 전박부에 도포하게 하였다. 도포 시작 전, 미리 항온, 항습 조건(24℃, 습도 40%)에서 수분측정기(conneometer, CM820 courage Khazaka electronic GmbH, Germany)를 이용하여 피부 전도도를 측정하여 그 증가율을 평가하였다. 그 결과는 하기 표 6에 나타내었다.For 25 experimenters (20 ~ 40s) who do not have skin diseases, divided into 2 sets of 20 persons per set, and the cosmetic preparations of Preparation Examples 1 and 2 and Comparative Preparation Examples 1 and 2 were applied to the face and forearm. Application was made. Before the start of the application, the skin conductivity was measured by using a moisture meter (conneometer, CM820 courage Khazaka electronic GmbH, Germany) at constant temperature and humidity conditions (24 ° C., 40% humidity) in advance to evaluate the increase rate. The results are shown in Table 6 below.

시료명Sample name 1주 후1 week later 2주 후2 weeks later 4주 후4 weeks later 제조예 1Preparation Example 1 4848 5252 5555 제조예 2Preparation Example 2 5050 5555 5757 비교제조예 1Comparative Production Example 1 2626 3030 3535 비교제조예 2Comparative Production Example 2 3030 3434 3939

표 6은 실험예 4에 따른 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물 함유하는 화장료의 피부 보습력 개선효과 실험 결과를 나타낸다. 표 6을 참조하면, 본 발명에 따른 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물을 함유하는 화장료인 제조예 1 및 2는 비교제조예 1 및 2의 홍어 추출물 또는 홍어코 추출물을 함유하는 화장료에 비하여 피부 전도도 증가율이 매우 우수함을 확인할 수 있다. 일반적으로, 피부 전도도는 피부 수분량에 비례하므로, 상기의 결과는 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물을 함유하는 본 발명 화장료 조성물이 피부 수분 함량을 높게 유지하여 우수한 피부 보습 효과를 발휘함을 의미하는 것이다.Table 6 shows the results of the skin moisturizing effect of the cosmetics containing the skates fermented extract or skates fermented extract according to Experimental Example 4. Referring to Table 6, Preparation Examples 1 and 2, which are the cosmetics containing the skates fermented extract or skates fermented extract according to the present invention, skin conductivity compared to the cosmetics containing the skates or skates extract of Comparative Preparation Examples 1 and 2 It can be seen that the increase rate is very excellent. In general, since the skin conductivity is proportional to the skin moisture content, the above results mean that the present invention cosmetic composition containing a skate fermentation extract or skate oil fermentation extract maintains a high skin moisture content to exert an excellent skin moisturizing effect .

이제까지 본 발명에 대한 구체적인 실시예들을 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.So far, specific embodiments of the present invention have been described. Those skilled in the art will appreciate that the present invention can be implemented in a modified form without departing from the essential features of the present invention. Therefore, the disclosed embodiments should be considered in descriptive sense only and not for purposes of limitation. The scope of the present invention is shown in the claims rather than the foregoing description, and all differences within the scope will be construed as being included in the present invention.

Claims (9)

홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물로서,
상기 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물은 상기 홍어 또는 홍어코를 효소로 가수분해하여 수득한 프로테오글리칸을 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)로 발효시킨 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
As a cosmetic composition containing a skate fermentation extract or skate oil fermentation extract as an active ingredient,
The skate fermentation extract or skate oil fermentation extract is a cosmetic composition, characterized in that the proteoglycan obtained by hydrolyzing the skate or skate with an enzyme fermented with Lactobacillus rhamnosus ( Lactobacillus rhamnosus ).
제 1 항에 있어서,
상기 홍어 발효 추출물은,
홍어의 꼬리, 애, 또는 몸통 중에서 선택된 어느 하나 이상으로부터 얻은 발효 추출물인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method of claim 1,
The skates fermented extract,
Cosmetic composition, characterized in that the fermented extract obtained from any one or more selected from the tail, kelp, or body of the skate.
삭제delete 삭제delete 제 1 항에 있어서,
상기 프로테오글리칸은,
상기 홍어 또는 상기 홍어코를 알칼라아제(Alcalase)로 제1 차 가수분해하고, 프로테아제(Protease)로 제2 차 가수분해하여 수득한 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method of claim 1,
The proteoglycan,
Cosmetics, characterized in that obtained by the primary hydrolysis of the skate or the skate nose with alcalase, and secondary hydrolysis with protease (Protease).
제 1 항에 있어서,
상기 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물은,
물, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매로 추출하여 제조된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method of claim 1,
The skate oil fermentation extract or skate oil fermentation extract,
Water, anhydrous or hydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, propylene glycol, butylene glycol, glycerin, acetone, ethyl acetate, chloroform, butyl acetate, diethyl ether, dichloromethane, hexane and mixtures thereof Cosmetic composition, characterized in that prepared by extraction with a solvent.
제 1 항에 있어서,
상기 홍어 발효 추출물 또는 홍어코 발효 추출물은,
화장료 조성물 전체 100 중량에 대하여 0.001 내지 20 중량% 함유되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method of claim 1,
The skate oil fermentation extract or skate oil fermentation extract,
Cosmetic composition, characterized in that contained 0.001 to 20% by weight relative to the total weight of the cosmetic composition.
제 1 항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 주름개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method of claim 1,
The cosmetic composition,
Cosmetic composition, characterized in that for improving skin wrinkles.
제 1 항에 있어서,
상기 화장료 조성물은,
피부 보습용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method of claim 1,
The cosmetic composition,
Cosmetic composition for skin moisturizing.
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