KR101972462B1 - Composition having Enzyme Treated Extract of Clove - Google Patents

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Abstract

본 발명은 클로브 원재료에 대한 추출과 여과 및 농축을 거쳐 효소처리 클로브 추출물을 유효성분으로 포함하도록 생성됨을 특징으로 하며, 세부구성으로서 상기한 효소처리의 클로브 추출물은 물, C1 내지 C2의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것을 특징으로 하고, 또 다른 본 발명의 세부구성으로서 상기한 저급알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것을 특징으로 하며, 상기 과정에서 추출된 조성물은 당분해제, 지질분해제, 팩틴분해제를 선택적으로 첨가하여 효소 활성을 소실시키는 것을 특징으로 한다.
이러한 본 발명에 따르면, DPPH 억제활성, 인간의 피부섬유 모세포(HDF:human dermal fibroblast)에서 Type-1 procollagen 생성촉진, MMP-1 및 MMP-3 의 생성을 억제시키는 효과를 통한 피부노화방지 및 주름개선 효능을 나타냄과 동시에 세포생존율의 변화를 나타내지 아니하여 우수한 안전성(safety)을 확보하는 효과가 있다.
The present invention is characterized in that the clove extract of the above-mentioned enzyme treatment comprises water, a lower alcohol of C1 to C2 or a lower alcohol of C1 to C2, And further characterized in that the lower alcohol is ethanol or methanol. The composition extracted in the above process may be selected from sugar alcohols, lipid loosens, Is selectively added to eliminate enzyme activity.
According to the present invention, the DPPH inhibitory activity, the promotion of the generation of Type-1 procollagen in human dermal fibroblast (HDF), the prevention of skin aging and wrinkles by the effect of inhibiting the production of MMP-1 and MMP- It exhibits an improving effect and does not exhibit a change in cell survival rate, thereby securing an excellent safety.

Description

효소처리 클로브 추출물을 함유하는 조성물{Composition having Enzyme Treated Extract of Clove}[0001] The present invention relates to a composition containing an enzyme-treated clove extract,

본 발명은 화장료 등의 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 효소처리 클로브 추출물을 유효성분으로 함유하여 피부주름 개선 및 피부노화 방지를 도모하는 효소처리 클로브 추출물을 함유하는 조성물에 관한 것이다.More particularly, the present invention relates to a composition containing an enzyme-treated clove extract as an active ingredient, which contains an enzyme-treated clove extract to improve skin wrinkles and prevent skin aging.

사람의 피부는 크게 표피층, 진피층, 피하지방층으로 구성되어 있다. 피부의 가장 기본적인 역할은 우리 몸으로부터 수분이 증발되는 것을 막아주고, 외부로부터 유해성분이 침입하는 것을 막아주는 것이다. 이러한 피부는 항상 외부자극에 노출되어 있기 때문에 다양한 방어능력을 가지고 있다.The human skin consists largely of the epidermis, the dermis, and the subcutaneous fat layer. The most basic role of the skin is to prevent water from evaporating from our body and to prevent harmful substances from invading from the outside. These skin are always exposed to external stimuli, so they have various defenses.

또한, 피부는 아름다움을 나타내는 표상으로써 피부가 건강하고 깨끗함은 곧 사람의 아름다움으로 인식되는 경우가 많다. 최근 들어, 여성뿐만 아니라 남성들도 피부노화 등 여러 가지 피부트러블들에 대한 관심이 많아지면서 이와 관련된 제품들이 많이 개발되고 있다.In addition, skin is a representation of beauty, and skin is healthy and clean is often recognized as human beauty. In recent years, not only women but also men have been interested in various skin troubles such as skin aging, and a lot of related products are being developed.

피부 노화는 크게 두 종류로 나눌 수 있다. 첫 번째는 내인성노화(intrinsic aging)로서, 세월이 흘러감에 따라 피할 수 없는 노화현상을 말한다. 두 번째는 광노화(photoaging)로서, 오랫동안 햇빛에 노출된 얼굴, 손등, 목뒤 등의 피부에서 관찰되는 노화현상을 말하는 것으로 내인성 노화 현상과 자외선에 의한 영향이 합쳐진 결과로 발생한다.Skin aging can be roughly classified into two types. The first is intrinsic aging, a phenomenon of aging that can not be avoided as years go by. The second is photoaging, which refers to the aging phenomenon observed in the skin such as the face, the back of the hand, and the back of the neck exposed to sunlight for a long time, resulting from the combination of the effects of endogenous aging and ultraviolet rays.

이러한 피부노화의 원인은 콜라겐 및 탄력섬유 등의 기질단백질이 손상되어 피부 내 콜라겐의 양이 부족해지고, 탄력섬유가 변성되어 나타난다고 알려져 있다. 또한, 피부노화가 진행되는 과정 중에는 다양한 신호전달경로를 거쳐 콜라겐의 합성이 감소되고, 콜라겐을 비롯한 세포외 기질단백질의 분해효소인 matrix metalloproteinases(MMPs)의 발현이 증가된다고 알려졌다. 이와 같이 콜라겐은 피부노화와 관련된 주요인자로 인식되어 있어 콜라겐의 합성증진 및 분해억제는 피부노화억제 및 피부미용과 관련하여 중요한 지표가 되고 있다.It is known that the cause of skin aging is a collapse of matrix proteins such as collagen and elastic fibers, resulting in deficiency of collagen in the skin and denaturation of elastic fibers. It is also known that during the process of skin aging, the synthesis of collagen is reduced through various signal transduction pathways and the expression of matrix metalloproteinases (MMPs), a degradation enzyme of extracellular matrix proteins including collagen, is increased. As such, collagen is recognized as a major factor related to skin aging, and inhibition of synthesis and inhibition of collagen synthesis is an important indicator for skin aging suppression and skin beauty.

이러한 MMP는 다형핵성호중구(POlymorphonuclear neutrophil), 대식세포(Macrophage), 섬유아세포(Fibroblast) 등과 같은 세포로부터 분비되는 칼슘 및 아연 의존성 엔도펩티다제(Endopeptidase)로 중성 pH에서 작용하며, 기질로서 여러 가지세포의 기질을 이용한다. 주로 피부에서는 MMP-1, MMP-3, MMP-9 이외에 여러 가지 효소들이 작용하는데, 콜라겐 분해와 관련되어 가장 근본적으로 작용하는 효소는 MMP-1이다. These MMPs are calcium and zinc-dependent endopeptidases secreted from cells such as POIMOLMONTONUCLEOUS neutrophil, macrophage, and fibroblast, which act at neutral pH, The substrate of the egg cell is used. MMP-1, MMP-3, and MMP-9 are the most active enzymes in the skin, and MMP-1 is the most fundamental enzyme involved in collagen degradation.

일반적으로 콜라겐 합성을 촉진하는 종래의 물질로는 레티노이드(RE36068), TGF-β(transforming growth factor), 베툴린산(JP8-208424) 등이 있으며, MMP-1의 생성을 억제하는 물질로는 TGF-β(transforming growth factor)가 대표적으로 알려져 있으며, 그 외에도 다양한 천연물들이 MMP-1 생합성을 억제하는 것으로 알려져 있다. 따라서 주름생성을 억제하는 방법은 콜라겐합성을 촉진하거나, 또는 콜라겐 분해효소의 생성 및 활성을 억제하는 방법을 사용할 수 있으며, 보다 효과적이고 용이하며 안전한 주름개선을 위한 화장료의 개발이 절실히 요구되고 있다.In general, there are retinoids (RE36068), TGF-beta (transforming growth factor), betulinic acid (JP8-208424), and the like, which inhibit the production of MMP- β (transforming growth factor), and various other natural products are known to inhibit MMP-1 biosynthesis. Therefore, a method for inhibiting wrinkle formation can be used, which promotes collagen synthesis, or inhibits the production and activity of collagenase, and it is urgently required to develop a cosmetic for more effective, easy and safe wrinkle reduction.

최근 연구에 의하면, 자외선에 의하여 자극된 사이토카인(IL-6 등)의 발현이 MMP-1 및 MMP-3 등의 노화지표에 영향을 미친다는 보고가 있다. (Hwang E, Kim SH, Lee S, Lee CH, Do SG, Kim J, Kim SY. A Comparative Study of Baby Immature and Adult Shoots of Aloe Vera on UVB-Induced Skin Photoaging in vitro. Phytother Res. 2013 Mar 15) 자외선조사에 의하여 Type-1 Procollagen의 발현 또한 억제되는 것으로 보고되고 있다.Recent studies have shown that the expression of ultraviolet-stimulated cytokines (such as IL-6) affects the aging indexes such as MMP-1 and MMP-3. (Hwang E, Kim SH, Lee S, Lee CH, Do SG, Kim J, Kim S. A Comparative Study of Baby Immature and Adult Shoots of Aloe Vera on UVB-Induced Skin Photoaging in vitro. It has been reported that the expression of Type-1 Procollagen is also inhibited by ultraviolet irradiation.

국내에서는 클로브(Syzygiumaromaticum)의 본초학적 연구를 바탕으로 항산화, 항비만, 항 당뇨효과가 보고된 바 있다. 클로브는 정향나무과포도속에 속하는 나무로 원산지는 인도네시아이지만, 현재는 인도, 말레이시아, 스리랑카, 브라질 등의 해안가 지역에서 고루 재배되고 있다. 클로브의 연구와 더불어 추출물을 화장품, 의약품, 식품 등에 활용하려는 노력도 시도되고 있다.In Korea, antioxidant, anti-obesity and antidiabetic effects have been reported based on herbal studies of Syzygiumaromaticum. Cloves are cloves and grapes belonging to the country of origin is Indonesia, but now India, Malaysia, Sri Lanka, Brazil and is being cultivated in the coastal areas of the country. Efforts are being made to utilize extracts in cosmetics, medicines and foods, as well as in the study of cloves.

이와 관련하여 참조할 수 있는 선행기술문헌으로서 한국 등록특허공보 제2015-0115515호(선행문헌 1), 한국 등록특허공보 제1456052호(선행문헌 2) 등이 알려져 있다.Korean Patent Registration No. 2015-0115515 (Prior Art 1) and Korean Patent Registration No. 1456052 (Prior Art 2) are known as prior art documents which can be referred to in this connection.

선행문헌 1은 (a) 정향을 용매로 추출하여 정향 용매추출물을 수득하는 단계; (b) 상기 정향 용매추출물에서 용매를 제거하는 단계; 및 (c) 상기 용매가 제거된 추출물을 가수분해효소로 처리하여, 효소 처리된 정향추출물을 수득하는 단계;를 포함한다.The prior art document 1 discloses a process for producing a clove extract comprising: (a) extracting cloves with a solvent to obtain an clove solvent extract; (b) removing the solvent from the clove solvent extract; And (c) treating the extract from which the solvent has been removed with a hydrolytic enzyme to obtain an enzyme-treated clove extract.

선행문헌 2는 감초, 고본, 곽향, 길경, 녹용, 당귀, 대추, 동충하초, 목향, 백복령, 백지, 사인, 사향초, 석류, 석창포, 송로버섯, 송이, 영지, 오약, 용담, 인삼, 작약, 정향, 조각자, 진피, 창출, 천산설연화, 천화분, 촉초, 행인 및 홍삼으로 이루어지는 군으로부터 1 종 이상 선택되는 약재의 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름개선용 화장료 조성물을 제안한다.This study was conducted to investigate the effect of ginseng on the growth of ginseng, ginseng, peony, ginseng, ginseng, pineapple, ginseng, The present invention provides a cosmetic composition for improving wrinkles comprising as an active ingredient, a fermented extract of a medicinal substance selected from the group consisting of cloves, sculptors, dermis, creams, tansan liquor, silkworm, persimmons, runners and red ginseng.

그러나 선행문헌 1의 경우 항산화능의 발현을 요지로 하므로 주름개선 효능에 대해서는 미지수이고, 선행문헌 2의 경우 정향에 특화되지 않은 범용적 약재를 기반으로 하면서 화장류에 한정되는 한계성을 드러낸다.However, in the case of the prior art document 1, the effect of improving the wrinkle is unknown because the antioxidant ability is expressed, and in the case of the preceding document 2, the limit is limited to cosmetic products based on general purpose medicines not specific to clove.

1. 한국 등록특허공보 제2015-0115515호 “정향의 효소처리 추출물을 함유하는 항산화용 조성물” (공개일자 : 2015.10.14.)1. Korean Patent Registration No. 2015-0115515 entitled " Antioxidant composition containing an enzyme-treated extract of cloves " (published on Oct. 14, 2015). 2. 한국 등록특허공보 제1456052호 “주름개선용 화장료 조성물” (공개일자 : 2008.10.23.)2. Korean Patent Registration No. 1456052 entitled " Composition for improving wrinkles " (published on October 23, 2008).

상기와 같은 종래의 문제점들을 개선하기 위한 본 발명의 목적은, 피부주름, 노화방지 등의 측면에서 우수한 기능을 나타내면서 화장품은 물론, 식품이나 의약품 등에서 안정적인 효능을 발현할 수 있는 효소처리의 클로브 추출물을 함유하는 조성물을 제공하는 데 있다.It is an object of the present invention to overcome the above-mentioned problems of the prior art by providing an extract of clove which is capable of exhibiting a stable effect in foods and medicines as well as cosmetics while exhibiting excellent functions in terms of skin wrinkles and anti- And a method for producing the same.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 클로브 원재료에 대한 추출과 여과 및 농축을 거쳐 효소처리의 클로브 추출물을 유효성분으로 포함하도록 생성된다.In order to achieve the above object, the present invention is produced so as to contain a clove extract of an enzyme treatment as an active ingredient through extraction, filtration and concentration of the raw material of the clove.

본 발명의 세부구성으로서, 상기한 효소처리의 클로브 추출물은 물, 여러 종류의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것을 특징으로 한다.As a detailed constitution of the present invention, the above-mentioned clove extract of the enzyme treatment is characterized by being extracted with water, various kinds of lower alcohols or a mixed solvent thereof.

본 발명의 또 다른 세부구성으로서, 상기 저급알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것을 특징으로 한다.In another specific embodiment of the present invention, the lower alcohol is ethanol or methanol.

본 발명의 세부구성으로서, 상기 과정에서 추출된 조성물은 당분해제, 지질분해제, 팩틴분해제를 선택적으로 첨가하여 효소 활성을 소실시키는 것을 특징으로 한다.As a detailed constitution of the present invention, the composition extracted in the above process is characterized in that the enzyme activity is lost by selectively adding a sugar disintegration, a lipid disintegration, and a pack disintegration.

본 발명의 또 다른 세부구성으로서, 상기 효소는 알파 갈락토시다아제(Alpha-Galactosidase), 펙라이브(Peclyve) LI (pecinase, cellulase), 필터라아제(Filterase) Premium L, Tannase KTFH, 셀룰라아제(cellulase) KN, 크리스탈자임(Crystalzyme PMLX), 셀루이베(Celluyve) AN 3500 (cellulase), 래피다아제(Rapidase) FP super(pectin methyl esterase), Bio Win G (P-L), 서미자임(Sumizyme) AC 인 것을 특징으로 한다.In another embodiment of the present invention, the enzyme is selected from the group consisting of Alpha-Galactosidase, Peclivel LI (pecinase, Cellulase), Filterase Premium L, Tannase KTFH, Cellulase ), KN, Crystalzyme PMLX, Celluyve AN 3500 (cellulase), Rapidase FP super (pectin methyl esterase), Bio Win G (PL) and Sumizyme AC .

본 발명의 세부구성으로서, 상기한 조성물은 화장품의 경우에 완제품 기준으로 총 중량에 대해 1 내지 15 중량%로 첨가하고, 의약품의 경우에는 완제품 기준으로 총 중량에 대해 0.001 내지 50 중량%로 첨가되는 것을 특징으로 한다.As a detailed constitution of the present invention, the above-mentioned composition is added in an amount of 1 to 15% by weight based on the total weight of the finished product in the case of cosmetics and 0.001 to 50% by weight based on the total weight of the finished product in the case of pharmaceuticals .

이러한 본 발명에 의하면, DPPH 억제활성, 인간의 피부섬유 모세포(HDF:human dermal fibroblast)에서 Type-1 procollagen 생성촉진, MMP-1 및 MMP-3 의 생성을 억제시키는 효과를 통한 피부노화방지 및 주름개선 효능을 나타냄과 동시에 세포생존율의 변화를 나타내지 아니하여 우수한 안전성(safety)을 확보하는 효과가 있다.According to the present invention, the DPPH inhibitory activity, the promotion of the generation of Type-1 procollagen in human dermal fibroblast (HDF), the prevention of skin aging and wrinkles through the effect of inhibiting the production of MMP-1 and MMP- It exhibits an improving effect and does not exhibit a change in cell survival rate, thereby securing an excellent safety.

또한, 본 발명의 제조방법에 따라 얻어진 효소처리 클로브 추출물은 화장품은 물론 식품, 의약품 등에 부가되는 조성물로서 유용하게 활용 가능한 작용 효과가 있다.Furthermore, the enzyme-treated clove extract obtained according to the production method of the present invention has an action and effect that can be advantageously utilized as a composition to be added to cosmetics as well as foods, medicines and the like.

도 1은 효소의 미처리 클로브 추출물과 효소처리 클로브 추출물의 HLPC 분석 결과를 나타낸 도면이고,
도 2는 시험예 1에 따라 수행한 효소처리 클로브 추출물의 DPPH radical 억제활성을 나타낸 그림이며,
도 3은 시험예 2에 따라 수행한 효소처리 클로브 추출물에 대한 자외선 조사 후 세포생존율 실험의 결과를 나타내는 그래프이고,
도 4는 시험예 3에 따라 수행한 효소처리 클로브 추출물에 대한 MMP-1의 발현량을 확인한 결과를 나타내는 그림이며,
도 5는 시험예 4에 따라 수행한 효소처리 클로브 추출물에 대한 MMP-3의 발현량을 확인한 결과를 나타내는 그림이고,
도 6은 시험예 4에 따라 수행한 효소처리 클로브 추출물에 대한 IL-6의 발현량을 확인한 결과를 나타내는 그림이다.
FIG. 1 is a graph showing the results of HLPC analysis of an untreated clove extract and an enzyme treated clove extract of an enzyme,
FIG. 2 is a graph showing DPPH radical inhibitory activity of the enzyme-treated clove extract according to Test Example 1,
FIG. 3 is a graph showing the results of an experiment of cell survival rate after irradiation with ultraviolet rays of an enzyme-treated clove extract performed according to Test Example 2,
FIG. 4 is a graph showing the results of confirming the expression level of MMP-1 in the enzyme-treated clove extract according to Test Example 3. FIG.
FIG. 5 is a graph showing the results of confirming the expression level of MMP-3 in the enzyme-treated clove extract according to Test Example 4. FIG.
FIG. 6 is a graph showing the results of confirming the expression level of IL-6 in the enzyme-treated clove extract according to Test Example 4. FIG.

이하, 첨부된 도면에 의거하여 본 발명의 실시예를 상세하게 설명하면 다음과 같다.Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings.

본 발명은 효소처리 클로브 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선화장품, 식품, 의약품의 조성물을 제공한다. 본 출원인은 종래의 피부주름개선용 화장품, 식품, 의약품의 조성물에 관하여 예의 연구하던 중, 효소처리 클로브 추출물을 사용하는 경우에는 우수한 피부노화방지 활성을 나타낸다는 것을 살피게 되어 본 발명을 완성하기에 이르렀다.The present invention provides a cosmetic, a food, and a pharmaceutical composition for improving skin wrinkles containing an enzyme-treated clove extract as an active ingredient. The applicant of the present invention studied the composition of cosmetic products, foods and medicines for improving skin wrinkles in the past, and found out that the enzyme-treated clove extract exhibits excellent anti-aging activity of the skin, and thus completed the present invention .

보다 상세하게는 효소처리 클로브 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 DPPH 억제활성, Type-1 procollagen 생성촉진, MMP-1 및 MMP-3의 생성을 감소시키는 효과를 통한 피부노화방지 및 주름개선 효과를 나타내어 피부주름 개선에 도움을 주는 식품, 의약품, 화장품의 조성물에 관한 것이다.More specifically, it contains DPPH inhibitory activity, promotion of type-1 procollagen production, reduction of MMP-1 and MMP-3 production by containing enzyme-treated clove extract as an active ingredient, And a composition of food, medicine, and cosmetic for improving wrinkles.

본 발명의 조성물에 있어서, 상기한 추출물은 효소처리 클로브를 추출 용매로서 물, C1∼C4 알코올, 또는 C1∼C4 알코올과 물의 혼합용매로 추출하는 것을 포함하는 추출방법에 의해 얻어질 수 있다. 하나의 구현 예에서, 상기 추출용매는 에탄올 수용액이다.In the composition of the present invention, the above-mentioned extract can be obtained by an extraction method comprising extracting an enzyme-treated clove as an extraction solvent with water, a C1-C4 alcohol, or a mixed solvent of C1-C4 alcohol and water. In one embodiment, the extraction solvent is an aqueous solution of ethanol.

상기 효소는 Alpha-Galactosidase, Peclyve LI (pecinase, cellulase), Filterase Premium L, Tannase KTFH, cellulase KN, Crystalzyme PMLX, Celluyve AN 3500 (cellulase), Rapidase FP super (pectin methyl esterase), Bio Win G (P-L), Sumizyme AC인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 추출물에 대해서는 5 g(ml) ~ 20 g(ml)/100 ml로 첨가하는 것이 바람직하고, 10g(ml)/100 ml로 첨가하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 효소는 pH 5.0 ~ 6.5, 40 ~ 50℃ 의 조건에서 반응시키는 것이 바람직하고, pH 5.2 ~ 6.0, 42 ~ 45℃의 조건에서 반응시키는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 반응시간은 1 ~ 3시간인 것이 바람직하고, 1.5시간인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The enzymes include, but are not limited to, Alpha-Galactosidase, Peclone LI, Filterase Premium L, Tannase KTFH, Cellulase KN, Crystalzyme PMLX, Celluyve AN 3500 (cellulase), Rapidase FP super (pectin methyl esterase) , Sumizyme AC, but is not limited thereto. The extract is preferably added in an amount of 5 g (ml) to 20 g (ml) / 100 ml, more preferably 10 g (ml) / 100 ml, but not always limited thereto. The enzyme is preferably reacted at a pH of 5.0 to 6.5 at 40 to 50 ° C, more preferably at a pH of 5.2 to 6.0 and at a temperature of 42 to 45 ° C, but is not limited thereto. The reaction time is preferably 1 to 3 hours, more preferably 1.5 hours, but is not limited thereto.

상기한 효소처리 클로브 추출물은 유기용매를 각각, 또는 물과 혼합한 것을 용매로 하여 추출한 후, 당분해제, 지질분해제 및 팩틴분해제를 첨가하여 효소 활성을 소실시키는 것이 바람직하다.It is preferable that the enzyme-treated clove extract is extracted with a solvent in which each of the organic solvents is mixed with water as a solvent, and then the enzyme activity is lost by adding sugar alcohols, releasing lipids and releasing packed fractions.

상기 효소처리 클로브 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.The enzyme-treated clove extract is preferably, but not necessarily, prepared by a manufacturing method comprising the following steps.

1) 효소처리 클로브에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;1) extracting an enzyme-treated clove by adding an extraction solvent;

2) 단계 1)의 추출물을 식힌 후 여과하는 단계;2) cooling the extract of step 1) and filtering;

3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압 농축하는 단계; 및3) concentrating the filtered extract of step 2) under reduced pressure; And

4) 단계 3)의 농축된 추출물을 건조 분말화하는 단계.4) dry-pulverizing the concentrated extract of step 3).

상기 방법에 있어서, 단계 1)의 효소처리 클로브는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 상기 효소처리 클로브는 잎, 종자, 열매, 뿌리 또는 지상부(aerial part)를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.In the above method, the enzyme-treated clove of step 1) can be used without limitation such as cultivated or commercially available. The enzyme-treated clove is preferably, but not always, a leaf, seed, fruit, root or aerial part.

본 발명에 따른 조성물에 있어서, 상기 추출물은 효소처리 클로브를 추출용매로서 물, C1∼C4 알코올, 또는 C1∼C4 알코올과 물의 혼합용매로 추출하는 것을 포함하는 추출방법에 의해 얻어질 수 있다. 하나의 구현 예에서, 상기 추출용매는 에탄올수용액, 예를 들어 95 중량%의 에탄올 수용액일 수도 있다.In the composition according to the present invention, the extract may be obtained by an extraction method comprising extracting an enzyme-treated clove as an extraction solvent with water, a C1-C4 alcohol, or a mixed solvent of C1-C4 alcohol and water. In one embodiment, the extraction solvent may be an aqueous ethanol solution, for example, an aqueous 95% ethanol solution.

상기한 추출용매의 사용량은 크게 제한되는 것은 아니며, 예를 들어 효소처리 클로브 1kg에 대하여 약 1 내지 10리터 부피, 바람직하게는 약 1 내지 5리터 부피의 비율로 사용될 수 있다. 또한, 상기한 추출과정은 약 30분 내지 48시간, 바람직하게는 약 30분내지 24시간동안, 실온에서의 추출, 열수추출, 초음파추출, 환류냉각추출 등의 추출방법으로 수행될 수 있다. 하나의 구현 예에서, 상기 추출은 약 80℃에서 환류냉각추출 방법으로 수행될 수 있다. 또 상기한 추출과정은 단회 또는 복수회로 수행할 수 있고, 바람직하게는 약 3회 정도 반복 수행할 수 있다. 추출액은 필요에 따라 통상의 방법, 예를 들어 약 30 내지 70℃에서, 감압 농축하거나 감압 건조함으로써, 액상, 반고체 또는 분말 형태로 얻을 수 있다.The amount of the above-mentioned extraction solvent is not particularly limited, and can be used in a ratio of about 1 to 10 liter volume, preferably about 1 to 5 liter volume, per 1 kg of the enzyme-treated clove. In addition, the above-mentioned extraction process can be performed by an extraction method such as extraction at room temperature, hot water extraction, ultrasonic extraction, and reflux cooling extraction for about 30 minutes to 48 hours, preferably about 30 minutes to 24 hours. In one embodiment, the extraction may be carried out by a reflux cooling extraction method at about 80 < 0 > C. Further, the extraction process can be performed in a single or a plurality of circuits, and preferably, about three times. The extract may be obtained in a liquid, semi-solid or powder form, if necessary, by a conventional method, for example, at a temperature of about 30 to 70 캜, by concentration under reduced pressure or drying under reduced pressure.

본 발명은 효소처리 클로브 추출물을 유효성분으로서 함유하는 피부주름의 개선효능이 있는 식품이나 의약품 및 화장품의 조성물을 제공한다. 따라서 피부노화를 억제하고 주름을 개선하는 등의 효능을 나타내기 위해서, DPPH radical 억제활성, Type-1 procollagen 생성촉진, MMP-1, MMP-3의 생성감소를 필요로 한다.The present invention provides a composition of foods, medicines and cosmetics having an effect of improving skin wrinkles containing an enzyme-treated clove extract as an active ingredient. Therefore, DPPH radical inhibitory activity, promotion of the production of type-1 procollagen, and reduction of production of MMP-1 and MMP-3 are required to suppress the aging of skin and improve wrinkles.

효소처리 클로브 추출물은 우수한 항산화 효과 및 MMP-1의 억제활성을 가지고 있어, 세포보호 효과 및 주름억제 효과가 우수하므로, 피부주름 개선에 효과적인 화장료 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다. 또한 본 발명에 의한 효소처리 클로브 추출물을 함유하는 식품이나 의약품 및 화장품의 조성물은 피부노화 억제용, 피부주름 개선용 식품, 의약품 및 화장품으로 제형화될 수 있다.The enzyme-treated clove extract has excellent antioxidative effect and inhibitory activity of MMP-1, and is excellent in cell protection effect and wrinkle suppressing effect, and thus can be effectively used as a cosmetic composition for improving skin wrinkles. The composition of the food, medicines and cosmetics containing the enzyme-treated clove extract according to the present invention can be formulated into a skin aging-inhibiting agent, a skin wrinkle-improving food, a medicine, and a cosmetic.

상기한 화장료조성물은, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다. 또 상기한 화장료 조성물은, 본 발명의 효소처리 클로브 추출물에 추가로 지방물질, 유기용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.The above-mentioned cosmetic composition may be in the form of, for example, a solution, a gel, a solid or a paste anhydrous product, an emulsion obtained by dispersing an oil phase in water, a suspension, a microemulsion, a microcapsule, a microgranule or an ionic (liposome) In the form of a dispersing agent, in the form of a cream, a skin, a lotion, a powder, an ointment, a spray or a conical stick. It can also be prepared in the form of a foam or an aerosol composition further containing a compressed propellant. The above cosmetic composition may further contain, in addition to the enzyme-treated clove extract of the present invention, a lipid, an organic solvent, a solubilizing agent, a thickening agent and a gelling agent, a softening agent, an antioxidant, a suspending agent, a stabilizer, a foaming agent, A surfactant, a water, an ionic or nonionic emulsifier, a filler, a sequestering and chelating agent, a preservative, a vitamin, a barrier, a wetting agent, an essential oil, a dye, a pigment, a hydrophilic or lipophilic active agent, And may contain adjuvants conventionally used in the cosmetics field, such as any other ingredient commonly used.

본 발명의 효소처리 클로브 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 있어서, 통상적으로 함유되는 화장료 조성물에 본 발명의 추출물이 1 내지 15 중량%, 바람직하게는 2 내지 10 중량%의 양으로 첨가될 수 있다.In the cosmetic composition containing the enzyme-treated clove extract of the present invention, the extract of the present invention may be added to the cosmetic composition usually contained in an amount of 1 to 15% by weight, preferably 2 to 10% by weight.

본 발명에 따른 효소처리 클로브 추출물을 피부외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방물질, 유기용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기한 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.When the enzyme-treated clove extract according to the present invention is used as an external preparation for skin, it may further contain at least one selected from the group consisting of fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickeners and gelling agents, softeners, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents, , Surfactants, water, ionic or nonionic emulsifiers, fillers, sequestering and chelating agents, preservatives, vitamins, blocking agents, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, lipophilic or lipophilic active agents, And any other ingredients conventionally used in external preparations. In addition, the above ingredients can be introduced in amounts commonly used in the dermatological field.

본 발명의 조성물은 상기한 효소처리 클로브 추출물 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학조성물 형태일 수 있다. 상기 약학조성물은 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 및 멸균주사용액의 형태로 제제화될 수 있다. 상기 약학적으로 허용 가능한 담체는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘포스페이트, 칼슘실리케이트, 셀룰로즈, 메틸셀룰로즈, 미정질셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘스테아레이트 및 광물유 등을 포함한다. 또한, 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면 활성제 등의 희석제 또는 부형제를 포함한다. 경구용 고형제제는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등을 포함하며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 포함할 수 있으며, 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제 등을 포함할 수 있다. 경구용 액상제제는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등을 포함하며, 물, 리퀴드 파라핀 등의 희석제, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 포함할 수 있다. 비경구용 제제는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제를 포함하며, 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌글리콜, 올리브오일과 같은 식물성기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르류 등을 포함한다.The composition of the present invention may be in the form of a pharmaceutical composition comprising the enzyme-treated clove extract described above and a pharmaceutically acceptable carrier. The pharmaceutical composition may be formulated in the form of powders, granules, tablets, capsules, oral preparations such as suspensions, emulsions, syrups and aerosols, external preparations and sterilized injection solutions according to a conventional method. The pharmaceutically acceptable carrier may be selected from the group consisting of lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methylcellulose, Cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil, and the like. It also includes diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, surfactants, and the like. Solid form preparations for oral use include tablets, pills, powders, granules, capsules and the like, which may contain at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose ), Gelatin and the like, and may include a lubricant such as magnesium stearate, talc, and the like. Oral liquid preparations include suspensions, solutions, emulsions, syrups, and the like, and may contain diluents such as water and liquid paraffin, wetting agents, sweetening agents, fragrances, preservatives and the like. Examples of the non-aqueous solution include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions and freeze-dried preparations. Non-aqueous solvents and suspensions include vegetable oils such as propylene glycol, polyethylene glycol and olive oil, And the like, and the like.

상기 약학조성물에 함유되는 효소처리 클로브 추출물의 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 경우에 따라 적절하게 선택될 수 있다. 예를 들면, 상기한 효소처리의 클로브 추출물은 1일 0.0001 내지 100 mg/kg으로, 바람직하게는 0.01 내지 100 mg/kg의 용량으로 투여 할 수 있으며, 상기 투여는 하루에 한번 또는 수회 나누어 투여할 수도 있다. 또한, 상기의 약학조성물은 조성물 총중량에 대하여 효소처리의 클로브 추출물을 0.001 내지 50 중량%로 포함할 수 있다. 상기한 약학조성물은 인간 등의 포유동물에 있어서 다양한 경로로, 예를 들면, 경구, 정맥, 근육, 또는 피하주사에 의해 투여될 수 있다.The dose of the enzyme-treated clove extract contained in the pharmaceutical composition varies depending on the condition and the weight of the patient, the degree of disease, the drug form, the administration route and the period, but may be suitably selected depending on the case. For example, the above-mentioned clove extract of the enzyme treatment may be administered at a dose of 0.0001 to 100 mg / kg per day, preferably 0.01 to 100 mg / kg per day, It is possible. In addition, the pharmaceutical composition may contain 0.001 to 50% by weight of a clove extract of the enzyme treatment with respect to the total weight of the composition. Such pharmaceutical compositions may be administered to mammals, such as humans, by a variety of routes, for example, by oral, intravenous, intramuscular, or subcutaneous injection.

또한, 본 발명은 효소처리의 클로브 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부주름 개선용 건강식품을 제공한다.The present invention also provides a health food for improving skin wrinkles containing an extract of cloves of an enzyme treatment as an active ingredient.

본 발명에 따른 효소처리의 클로브 추출물은 우수한 항산화효과 및 MMP-1의 억제활성을 가지고 있어, 세포보호효과 및 주름억제효과가 우수하므로 피부주름 개선용 건강식품으로서 유용하게 사용될 수 있다. The Clove extract of the enzyme treatment according to the present invention has excellent antioxidative effect and MMP-1 inhibitory activity, and is excellent in cell protection effect and wrinkle suppressing effect, and thus can be effectively used as a health food for improving skin wrinkles.

본 발명의 건강식품은 효소처리 클로브 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기한 효소처리의 클로브 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.The health food of the present invention can be used as it is or can be used in combination with other food or food ingredients, and can be suitably used according to conventional methods. There is no particular limitation on the kind of the food. Examples of foods to which the above-mentioned clove extract of the enzyme treatment can be added include meat, sausage, bread, chocolate, candy, snack, confectionery, pizza, ramen, other noodles, dairy products including gums, ice cream, , Tea, a drink, an alcoholic beverage, and a vitamin complex, all of which include health foods in a conventional sense.

본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아추출물과 같은 천연감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03g 이다.The health beverage composition of the present invention may contain various flavors or natural carbohydrates as an additional ingredient such as ordinary beverages. Such natural carbohydrates are monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, and polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol. Examples of sweeteners include natural sweeteners such as tau martin and stevia extract, synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame, and the like. The ratio of the natural carbohydrate is generally about 0.01 to 0.04 g, preferably about 0.02 to 0.03 g per 100 ml of the composition of the present invention.

상기 외에 본 발명의 효소처리 클로브 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성콜로이드증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 효소처리 클로브 추출물은 천연과일주스, 과일주스음료 및 야채음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당, 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.In addition to the above, the enzyme-treated clove extract of the present invention may further contain various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloid thickeners, pH adjusting agents, stabilizers, , Alcohols, carbonating agents used in carbonated drinks, and the like. In addition, the enzyme-treated clove extract of the present invention may contain flesh for the production of natural fruit juices, fruit juice drinks and vegetable drinks. These components may be used independently or in combination. The proportion of such additives is not critical, but is generally selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.

이하, 본 발명은 시험예를 통하여 더욱 상세히 설명되고 이해될 수 있다. 그러나 이들 시험예 및 제조예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention can be explained and understood in more detail through a test example. However, these Test Examples and Preparation Examples are for illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not limited thereto.

<효소-처리 <Enzyme-treated 클로브Clove 추출물의 제조 및 분석> Preparation and Analysis of Extracts>

1. 효소처리 클로브 추출물의 제조1. Preparation of Enzyme-Treated Clove Extract

클로브를 20-40메쉬(mesh)로 분쇄하여 플라스크 또는 유리 용기에 담았다. 별도의 과정으로 얻은 효소를 클로브 무게에 대하여 10-20%에 해당하는 중량으로 클로브 무게 대비 10배 부피의 물에 녹여 클로브가 담긴 플라스크에 넣고 잘 혼합하였다. 용기에 담긴 혼합물을 50-60℃에서 24시간 반응시켰다. 반응 후 원심분리를 통하여 상등액과 침전물을 구분하고 침전물에 50% EtOH을 중량 비 10배의 무게로 첨가한 후, 70℃에서 4시간 환류 추출 하였다. 추출 후 여과를 거쳐 농축하여 EtOH을 제거한 후, 초기 반응 후에 얻어진 상등액과 혼합하여 동결건조를 진행하였다.The clove was pulverized into 20-40 mesh and placed in a flask or glass container. The enzymes obtained in a separate process were dissolved in 10 times the volume of the clove by weight, corresponding to 10-20% of the weight of the clove, and placed in a flask containing the clove. The mixture in the vessel was allowed to react at 50-60 DEG C for 24 hours. After the reaction, the supernatant was separated from the precipitate by centrifugation, and 50% EtOH was added to the precipitate at a weight ratio of 10 times, followed by reflux extraction at 70 ° C for 4 hours. After extraction, the mixture was filtered and concentrated to remove EtOH, and then mixed with the supernatant obtained after the initial reaction, followed by lyophilization.

2. 효소처리 클로브 추출물의 분석2. Analysis of Enzyme-Treated Clove Extracts

(1) HPLC를 이용한 성분 변화 분석 (1) Analysis of component change by HPLC

HPLC 분석에는 PDA HPLC system 기기와 Eclipse XDB-C18 column (4.6 X 250 ㎜, ID 5㎛)을 사용하였으며, 이동상은 물(H2O, 100%)와 아세토나이트릴(CH3CN, 100%)를 혼합하여 사용하였다. 기울기 용리(Gradient elution) 비율(물:아세토나이트릴)이 75:25, 68:32, 45:55, 40:60, 0:100, 0:100 및 75:25분일 때, 각각 0-10, 10-15,15-20, 20-25, 25-27, 27-30 및 30-40로 조절하였다. 이동상의 유속은 1.2㎖/min으로 흘려주었으며, UV 탐지기(UV detector)를 이용하여 203㎚에서 성분을 분석하였다 (도 1).The mobile phase was prepared by mixing water (H2O, 100%) and acetonitrile (CH3CN, 100%) using a PDA HPLC system and Eclipse XDB-C18 column (4.6 x 250 mm, Respectively. When the gradient elution ratio (water: acetonitrile) was 75:25, 68:32, 45:55, 40:60, 0: 100, 0: 100 and 75:25, 10-15, 15-20, 20-25, 25-27, 27-30 and 30-40. The flow rate of the mobile phase was allowed to flow at 1.2 ml / min, and components were analyzed at 203 nm using a UV detector (Fig. 1).

실시예 1: 추출물의 제조Example 1: Preparation of extract

효소처리 클로브 500g에 50중량%의 에탄올수용액 10L를 가하고, 80℃에서 30분 동안 환류 추출하였다. 추출액을 여과한 후, 얻어진 여액을 45℃ 이하에서 진공 농축하여 반고체 형태의 추출물 약 60g을 얻었다.To 500 g of the enzyme-treated clove, 10 L of a 50 wt% aqueous ethanol solution was added and the mixture was reflux-extracted at 80 캜 for 30 minutes. The extract was filtered, and the obtained filtrate was concentrated in vacuo at 45 DEG C or lower to obtain about 60 g of a semi-solid extract.

시험예 1: 항산화효과Test Example 1: Antioxidant effect

산화적 스트레스는 피부가 자외선에 노출되었을 때, 세포가 반응하는 신호전달 체계를 작동시키고 과산화수소 등의 활성산소종의 발생을 증가시키며, 항산화효소의 발현을 감소시킨다. 이러한 활성산소종의 증가는 유전자와 단백질의 구조를 변화시켜 세포내외의 항상성이 파괴되어 피부의 손상을 유발하여 피부노화를 촉진 시킨다. 이와 같은 피부노화를 촉진시키는 활성산소종의 하나인 DPPH radical의 억제활성은 항산화효능을 평가하는 중요한 지표가 된다.Oxidative stress activates cellular signaling pathways when skin is exposed to ultraviolet light, increases the production of reactive oxygen species such as hydrogen peroxide, and decreases the expression of antioxidant enzymes. This increase in reactive oxygen species changes the structure of genes and proteins, destroys the intracellular homeostasis, causing skin damage and promoting skin aging. The inhibitory activity of DPPH radical, one of the active oxygen species promoting skin aging, is an important index for evaluating antioxidant efficacy.

DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, Sigma, USA)의 환원력을 이용하는 상등의 문헌(Sang S et al., J.Agric. Food Chem. 50(8), p2459-2463, 2002)에 기재된 방법에 따라, 본 발명에 따른 효모추출물의 항산화 활성을 측정하였다.(Sang S et al., J. Agric. Food Chem. 50 (8), p2459-2463, 2002) using the reducing power of DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, Sigma, USA) The antioxidant activity of the yeast extract according to the present invention was measured according to the method.

메탄올에 녹인 0.2mM DPPH 용액 180ul와 증류수 20ul에 녹인 효소처리 클로브 및 Arbutin(양성재조군) (0.1, 1, 10, 100, 250 ㎍/㎖)를 96-웰마이크로 플레이트에 넣고 37℃에서 30분간 배양한 후, 환원된 DPPH의 양을 분광 광도계(Precision microplate reader; Molecular Devices, VersaMax)를 이용하여 520nm에서 흡광도를 측정하여 시료를 가하지 않는 무첨가 대조군과 활성을 비교하였다. 상기 시험은 3회 반복하였으며, 그 결과는 도 2에 나타내었다.An enzyme-treated clove and Arbutin (0.1, 1, 10, 100, 250 μg / ml) dissolved in methanol (180 μl) of 0.2 mM DPPH solution and 20 μl of distilled water were added to a 96-well microplate and cultured at 37 ° C. for 30 minutes After that, the amount of reduced DPPH was measured at 520 nm using a spectrophotometer (Precision Microplate Reader, Molecular Devices, VersaMax), and the activity was compared with a no-added control sample. The test was repeated three times and the results are shown in FIG.

시험예 2: 세포생존율 측정Test Example 2: Measurement of cell viability

효소처리 클로브 추출물이 사람의 섬유아세포의 세포성장 효과에 미치는 영향을, 사람섬유아세포(human dermal fibroblast,HDF) (MCTT사, 서울, 한국)을 사용하여 평가하였다. 10% FBS (fetal bovine serum, Cambrex)가 포함된 DMEM (Gibco-BRL, Gaithersburg, MD, USA) 배지에 HDF를 40mm 디쉬에 1.2x105 /디쉬로 씨딩한 다음 1일을 배양하고, 배지제거 후 300㎕의 PBS를 넣고 UV를 조사한 다음, 무혈청 DMEM 배지로 희석한 효소처리 클로브를 72시간동안 처리하여 배양하였다.The effect of the enzyme-treated clove extract on cell growth of human fibroblasts was evaluated using human dermal fibroblast (HDF) (MCTT Co., Seoul, Korea). HDF was seeded in a DMEM medium (Gibco-BRL, Gaithersburg, MD, USA) containing 10% FBS (fetal bovine serum, Cambrex) in a 40 mm dish at 1.2 × 10 5 / dish and cultured for 1 day. Mu] l of PBS was added thereto, followed by UV irradiation, followed by incubation for 72 hours with an enzyme-treated clone diluted with serum-free DMEM medium.

이후 1㎖ 배양액은 따로 취하여 원심분리 후 보관하고, 1mg/㎖의 MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) 시약 100㎕를 상기 배양액에 넣고, 37℃, 5% CO2 습윤 조건하에서 4시간동안 배양하였다. 배양 시, 살아있는 세포에는 보라색의 크리스탈이 형성된다. 2시간 배양 후 배지를 제거하고, DMSO 800㎕를 넣어 10분 동안 쉐이킹 인큐베이터(shaking incubator)에서 크리스탈을 녹인 후, 570nm에서 흡광도를 측정하여 세포성장의 정도를 측정하였다. 상기 시험은 3회 반복하였으며, 얻어진 결과는 도 3와 같다. 도 3의 결과로부터, 효소처리 클로브가 세포독성을 갖고 있지 않음을 알 수 있다. 상기 얻어진 결과의 통계처리는 GraphPad Prism 프로그램을 사용하여 실시하였으며, one-way analysis of vatiance(ANOVA)를 이용하여 평균값의 유의성을 5% 미만의 한계로 조사하였다.Thereafter, 1 ml of the culture medium was taken separately and centrifuged and stored. 100 μl of 1 mg / ml of MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazolium bromide) reagent was added to the above- And cultured for 4 hours at 37 占 폚 and 5% CO 2 wetting conditions. In culture, purple crystals form in living cells. After the incubation for 2 hours, the medium was removed, 800 쨉 L of DMSO was added, the crystal was dissolved in a shaking incubator for 10 minutes, and the absorbance was measured at 570 nm to measure the degree of cell growth. The test was repeated three times, and the results obtained are shown in FIG. From the results in Fig. 3, it can be seen that the enzyme-treated clove has no cytotoxicity. Statistical analysis of the results was performed using the GraphPad Prism program and the significance of the mean value was examined using a one-way analysis of vatiance (ANOVA) with a limit of less than 5%.

시험예 3: MMP-1,MMP-3 및 IL-6 억제효과Test Example 3: Inhibitory effect of MMP-1, MMP-3 and IL-6

인간섬유아세포를 40mm 세포배양접시에 2㎖의 배양액을 넣고 약 1.2x105의 농도로 세포를 접종한 후, 37℃, 5% CO2 환경에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 자외선 B를 144mJ/cm2 로 조사한 후, 효소처리 클로브 추출물을 (1, 10, 및 100㎍/㎖)을 포함한 배지로 교체하여 3일간 배양하였다. 이후 배양액을 회수(harvest)하여 4℃, 7500rpm 환경에서 5분간 원심분리(centrifuge)한 뒤, ELISA 방법을 이용하여 MMP-1, MMP-3 및 IL-6 (Human Total MMP-1 kit; Human Total MMP-3 kit; Human Total IL-6 kit, R&D Systems, Inc., Minneapolis, MN, USA)의 발현량을 확인하였다. 그 결과는 도 4, 도5 및 도6에 나타내었다. 도 4, 5, 6의 결과로부터 자외선조사에 의하여 자극된 MMP-1, MMP-3 및 IL-6 생성이 효소처리 클로브 추출물에 의해 억제된 것을 확인하였다. 다음의 결과로부터 쐐기풀의 광노화 억제효과가 있음을 확인하였다.Human fibroblasts were inoculated with cells at a concentration of about 1.2x10 &lt; 5 &gt; in a culture medium of 40 mm cell culture dish, and cultured in a 5% CO 2 environment at 37 ° C for 24 hours. Thereafter, the ultraviolet ray B was irradiated at 144 mJ / cm 2, and then the enzyme-treated clove extract was replaced with a medium containing 1, 10, and 100 μg / ml and cultured for 3 days. The cultures were then harvested and centrifuged at 7500 rpm for 5 minutes at 4 ° C and analyzed by ELISA using MMP-1, MMP-3 and IL-6 (Human Total MMP-1 kit; MMP-3 kit, Human Total IL-6 kit, R & D Systems, Inc., Minneapolis, MN, USA). The results are shown in Figs. 4, 5 and 6. From the results of FIGS. 4, 5 and 6, it was confirmed that MMP-1, MMP-3 and IL-6 production stimulated by ultraviolet irradiation were inhibited by the enzyme-treated clove extract. From the results of the following, it was confirmed that the effect of suppressing photoaging of nettle was observed.

제조예Manufacturing example 1: 효소처리의  1: Enzyme treated 클로브Clove 추출물을 유효성분으로 함유하는  Containing an extract as an active ingredient 화장료의Cosmetic 제조 Produce

<1-1> 유연화장수의 제조<1-1> Production of softening longevity

상기 <실시예 1>의 효소처리 클로브 추출물을 유효성분으로 함유하는 유연화장수는 하기 [표 1]과 같이 제조하였다.The softening longevity containing the enzyme-treated clove extract of Example 1 as an active ingredient was prepared as shown in Table 1 below.

[표 1][Table 1]

Figure 112016037947113-pat00001
Figure 112016037947113-pat00001

<1-2> 영양크림의 제조<1-2> Preparation of nutritional cream

상기 <실시예 1>의 효소처리 클로브 추출물을 유효성분으로 함유한 영양크림은 하기 [표 2]의 조성과 같이 제조하였다.The nutrient cream containing the enzyme-treated clove extract of Example 1 as an active ingredient was prepared according to the composition shown in Table 2 below.

[표 2][Table 2]

Figure 112016037947113-pat00002
Figure 112016037947113-pat00002

제조예Manufacturing example 2: 효소처리의  2: Enzyme-treated 클로브Clove 추출물을 유효성분으로 함유하는 약제의 제조 Preparation of medicines containing extracts as active ingredients

<2-1> 시럽제의 제조&Lt; 2-1 > Preparation of syrup preparation

상기 <실시예 1>의 효소처리 클로브 추출물을 유효성분으로 함유하는 시럽제는 하기 [표 3]의 조성과 같이 제조하였다.Syrup preparations containing the enzyme-treated clove extract of Example 1 as an active ingredient were prepared according to the composition shown in Table 3 below.

[표 3][Table 3]

Figure 112016037947113-pat00003
Figure 112016037947113-pat00003

제조예 2: 효소처리의 클로브 추출물을 유효성분으로 함유하는 약제의 제조Preparation Example 2: Preparation of medicines containing clove extract of enzyme treatment as an active ingredient

<2-1> 시럽제의 제조&Lt; 2-1 > Preparation of syrup preparation

상기 <실시예 1>의 효소처리 클로브 추출물을 유효성분으로 함유하는 시럽제는 하기 [표 3]의 조성과 같이 제조하였다.Syrup preparations containing the enzyme-treated clove extract of Example 1 as an active ingredient were prepared according to the composition shown in Table 3 below.

[표 4][Table 4]

Figure 112016037947113-pat00004
Figure 112016037947113-pat00004

상기 <실시예 1>에 따른 효소처리 클로브 추출물의 250 중량부, 락토오스 175.9 중량부, 감자전분 180 중량부 및 콜로이드성 규산 32 중량부와 혼합하였다. 상기 혼합물에 10% 젤라틴용액을 첨가시킨 후, 분쇄하여 14 매쉬체를 통과시켰다. 이것을 건조하고, 여기에 감자전분 160 중량부, 활석 50 중량부 및 스테아린산 마그네슘 5 중량부를 첨가하여 얻은 혼합물을 정제로 제조하였다.250 parts by weight of the enzyme-treated clove extract according to <Example 1>, 175.9 parts by weight of lactose, 180 parts by weight of potato starch and 32 parts by weight of colloidal silicic acid. 10% gelatin solution was added to the mixture, followed by pulverization and passed through a 14-mesh sieve. This was dried, and a mixture obtained by adding 160 parts by weight of potato powder, 50 parts by weight of talc and 5 parts by weight of magnesium stearate was made into tablets.

제조예Manufacturing example 3: 효소처리의  3: Enzyme-treated 클로브Clove 추출물을 유효성분으로 함유하는 건강식품의 제조 Preparation of health food containing extract as active ingredient

상기 <실시예 1>의 효소처리 클로브 추출물을 유효성분으로 함유하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.Foods containing the enzyme-treated clove extract of Example 1 as an active ingredient were prepared as follows.

<3-1> 밀가루식품의 제조<3-1> Production of flour food

상기 <실시예 1>의 효소처리 클로브 추출물 0.5~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.0.5-5.0 parts by weight of the enzyme-treated clove extract of Example 1 was added to wheat flour, and the mixture was used to prepare bread, cake, cookies, crackers and noodles.

<3-2> 스프 및 육즙(gravies)의 제조<3-2> Manufacture of soups and gravies

상기 <실시예 1>의 효소처리 클로브 추출물 0.1~5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강증진용 육가공제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.0.1 to 5.0 parts by weight of the enzyme-treated clove extract of Example 1 was added to the soup and the juice to prepare health promotion meat product, noodle soup and juice.

<3-3> 그라운드비프(ground beef)의 제조<3-3> Preparation of ground beef

상기 <실시예 1>의 효소처리 클로브 추출물 10 중량부를 그라운드비프에 첨가하여 건강증진용 그라운드비프를 제조하였다.10 parts by weight of the enzyme-treated clove extract of Example 1 was added to ground beef to prepare ground beef for health promotion.

<3-4> 유제품(dairy products)의 제조<3-4> Manufacture of dairy products

상기 <실시예 1>의 효소처리 클로브 추출물 5~10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.5 to 10 parts by weight of the enzyme-treated clove extract of Example 1 was added to milk, and various dairy products such as butter and ice cream were prepared using the milk.

<3-5> 선식의 제조&Lt; 3-5 >

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬(mesh)의 분말로 제조하였다.Brown rice, barley, glutinous rice, and yulmu were dried by a known method and dried, and then the powder was prepared into a powder having a particle size of 60 mesh by a pulverizer.

검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후, 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다.Black soybeans, black sesame seeds, and perilla seeds were steamed and dried by a conventional method, and then powdered with a particle size of 60 mesh using a pulverizer.

상기 <실시예 1>의 효소처리 클로브 추출물을 진공농축기에서 감압 농축하고, 분무 및 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.The enzyme-treated clove extract of Example 1 was concentrated under reduced pressure in a vacuum concentrator, dried with a spray and a hot-air drier, and pulverized to a size of 60 mesh with a pulverizer to obtain a dry powder.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 실시예 <1-3>의 추출물을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.The grains, seeds, and extracts of Example <1-3> prepared above were blended in the following proportions.

곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),(30 parts by weight of brown rice, 15 parts by weight of yulmu, 20 parts by weight of barley)

종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),Seeds (7 parts by weight of perilla, 8 parts by weight of black beans, 7 parts by weight of black sesame seeds)

상기 <실시예 1>의 효소처리 클로브 추출물(3 중량부),3 parts by weight of the enzyme-treated clove extract of Example 1,

영지(0.5 중량부),(0.5 part by weight),

지황(0.5 중량부)(0.5 parts by weight)

제조예Manufacturing example 4: 효소처리의  4: Enzyme treated 클로브Clove 추출물을 유효성분으로 함유하는 음료의 제조 Preparation of beverage containing extract as active ingredient

<4-1> 건강음료의 제조<4-1> Production of health drinks

액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와, 본 발명에 따른 <실시예 1>의 효소처리 클로브 추출물 5g을 균질하게 배합하여 순간살균한 후, 이를 유리병, 패트병 등의 소포장용기에 포장하여 제조하였다.(5%), an oligosaccharide (2%), a sugar (2%), a salt (0.5%) and water (75%) and an enzyme-treated clove extract of Example 1 Were uniformly blended and instant sterilized and packaged in small containers such as glass bottles and PET bottles.

<4-2> 야채주스의 제조<4-2> Production of vegetable juice

상기 <실시예 1>의 효소처리 클로브 추출물 5g을 토마토 또는 당근주스 1,000㎖에 가하여 야채주스를 제조하였다.5 g of the enzyme-treated clove extract of Example 1 was added to 1,000 ml of tomato or carrot juice to prepare vegetable juice.

<4-3> 과일주스의 제조<4-3> Preparation of fruit juice

상기 <실시예 1>의 효소처리 클로브 추출물 1g을 사과 또는 포도주스 1,000㎖에 가하여 과일주스를 제조하였다.1 g of the enzyme-treated clove extract of Example 1 was added to 1,000 ml of apple or grape juice to prepare fruit juice.

이러한 실시예에 따라 나타나고 있는 본 발명의 작용 효과 면을 살피면, DPPH 억제활성, 인간의 피부섬유 모세포(HDF:human dermal fibroblast)에서 Type-1 procollagen 생성촉진, MMP-1 및 MMP-3 의 생성을 억제시키는 효과를 통한 피부노화방지 및 주름개선 효능을 나타냄과 동시에 세포생존율의 변화를 나타내지 아니하여 우수한 안전성(safety)을 확보하는 효과가 있을 뿐만 아니라, 본 발명의 제조방법에 따라 얻어진 효소처리의 클로브 추출물을 화장품과 식품 및 의약품 등지에 부가되는 조성물로서 유용하게 활용 가능한 효과가 있다 할 것이다.In view of the action and effect of the present invention, which has been shown in accordance with this embodiment, DPPH inhibitory activity, promotion of type-1 procollagen production in human dermal fibroblast (HDF), production of MMP-1 and MMP-3 The effect of inhibiting skin aging and wrinkle improvement effect through inhibiting effect and showing no change in cell survival rate and securing excellent safety can be obtained, The extract can be effectively used as a composition added to cosmetics, foods, medicines and the like.

덧붙여 본 발명은 기재된 실시예에 한정되는 것은 아니고, 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 다양하게 수정 및 변형할 수 있음은 이 기술의 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 자명하다. 따라서 그러한 변형예 또는 수정예들은 본 발명의 특허청구범위에 속한다 해야 할 것이다.It will be apparent to those skilled in the art that various modifications and variations can be made in the present invention without departing from the spirit and scope of the invention. It is therefore intended that such variations and modifications fall within the scope of the appended claims.

Claims (6)

알파 갈락토시다아제 또는 셀룰라아제에서 선택되는 하나 이상의 효소와 20-40메쉬(mesh)로 분쇄된 클로브, 및 물을 혼합하여 50 내지 60℃에서 24시간 반응하여 생성된 효소처리 클로브 추출물을 유효성분으로 포함하되,
상기 효소, 클로브, 및 물은 0.1 내지 0.2: 1: 10의 중랑부로 혼합된 것을 특징으로 하는 주름개선용 조성물.
Treated with an enzyme-treated clove extract produced by mixing at least one enzyme selected from alpha-galactosidase or cellulase and clove pulverized with 20-40 mesh and water at 50 to 60 ° C for 24 hours as an active ingredient Including,
Wherein the enzyme, the clove, and the water are mixed in a wince range of 0.1 to 0.2: 1: 10.
삭제delete 제1항의 주름개선용 조성물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.A cosmetic composition comprising the wrinkle-improving composition of claim 1 as an active ingredient. 삭제delete 제1항의 주름개선용 조성물을 유효성분으로 함유하는 건강식품 조성물.A health food composition comprising the wrinkle-improving composition of claim 1 as an active ingredient. 삭제delete
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