KR101703249B1 - Novel Saccharomyces cerevisiae Y28 yeast strain and preparation method of mixed wine of kiwi and permission fruits using the strain - Google Patents

Novel Saccharomyces cerevisiae Y28 yeast strain and preparation method of mixed wine of kiwi and permission fruits using the strain Download PDF

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본 발명에서는 신규한 사카로마이세스 세레비지에 Y28 (Saccharomyces cerevisiae Y28) 균주 및 이를 이용한 참다래-감 혼합 와인(혼합과실주)의 제조방법에 관한 것으로, 내산성, 내당성 및 내알코올성이 우수하여 산도가 강한 과실을 이용하여 기호성이 증진된 발효주의 생산능이 탁월한 사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주 및 이 균주를 이용하여 신맛은 감소하고 탄닌 함량은 증대되어 기호성이 향상된 참다래-감 혼합 와인의 제조방법이 제공된다. The present invention relates to a novel strain Y28 ( Saccharomyces cerevisiae Y28) strain and a method for producing the same, and a method for producing the same, which is excellent in acid resistance, resistance to alcoholysis and alcohol resistance, Y28 strain of Saccharomyces cerevisiae which is excellent in the ability to produce a fermented liquor with enhanced palatability by using a strong fruit, and a method of producing a saucer-persimmon mixed wine having improved sour taste and tannin content by using this strain, / RTI >

Description

신규 사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주 및 이를 이용한 참다래-감 혼합 와인의 제조방법 {Novel Saccharomyces cerevisiae Y28 yeast strain and preparation method of mixed wine of kiwi and permission fruits using the strain}[0001] The present invention relates to a novel yeast strain Saccharomyces cerevisiae Y28 and a method for producing the same,

본 발명은 신규한 사카로마이세스 세레비지에 Y28 (Saccharomyces cerevisiae Y28) 균주 및 이를 이용한 참다래-감 혼합 와인(혼합과실주)의 제조방법에 관한 것으로, 더 상세하게는 내산성, 내당성 및 내알코올성이 우수하여, 산도가 강한 과실을 발효하여 기호성이 증진된 발효주의 생산능이 탁월한 사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주 및 이 균주를 이용하여 신맛은 감소하고 탄닌 함량은 증대되어 기호성이 향상된 참다래-감 혼합 와인의 제조방법에 관한 것이다.
The present invention relates to a novel strain Y28 ( Saccharomyces cerevisiae Y28) strain and a method for producing the same, and more particularly to a method for producing a yeast-persimmon mixed wine (mixed fruit wine) Y28 strain of Saccharomyces cerevisiae, which is excellent in the ability to produce a fermented liquor having excellent palatability by fermenting a fruit having excellent acidity, has a reduced sour taste and increased tannin content by using this strain, And a method for producing the wine.

국내 와인 시장은 2000년부터 20, 30대의 젊은 소비층의 관심이 높아지면서 지속적으로 증가하고 있으며 2012년 와인의 소비는 2000년보다 2.5배 증가한 3.8×107 L를 소비하였다. 최근에는 알코올 함량이 낮은 주류 선호도가 증가함에 따라 편의점 등에서 손쉽게 구할 수 있는 대중적인 술로써 와인 소비량이 더욱 증가하고 있는 추세이다.The domestic wine market has been steadily growing since 2000, when young consumers in their 20s and 30s have become increasingly interested. In 2012, consumption of wine consumed 3.8 × 10 7 L, 2.5 times more than in 2000. In recent years, wine consumption is increasing as a popular alcoholic beverage, which can be easily obtained at convenience stores, due to an increase in preference for alcohol with low alcohol content.

와인의 품질과 기호도를 결정하는 중요한 요소로는 향기성분, 유기산 및 탄닌의 함량을 들 수 있으며, 따라서 과실을 이용한 와인의 제조방법은 이들 요소가 최적화되도록 개발이 요구되어 왔다. 또한 팩틴질(식이섬유)이 풍부한 과실을 이용하여 와인을 제조할 때, 과실 중의 펙틴질에 의해 수율이 좋지 않거나 혼탁해지는 문제가 발생해 왔던바, 과실의 팩틴질의 함량을 조절하여 과즙의 수율을 높이고 혼탁의 문제를 예방할 수 있는 방법들에 대한 연구도 요구되어 왔다. The important factors that determine the quality and preference of wine are the fragrance component, the organic acid and the tannin content. Therefore, the method of manufacturing the wine using the fruit has been required to be developed in order to optimize these factors. In addition, when a wine is produced using a fruit rich in paclitin (dietary fiber), there is a problem that the yield is poor or becomes turbid due to pectin in the fruit, so that the yield of fruit juice is increased by controlling the content of pacific acid in the fruit Research has also been required on ways to prevent the problem of turbidity.

참다래는 온대성 낙엽과수로 우리나라에서는 주로 남해안 일대와 제주도에서 재배되고 있으며 품종은 헤이워드(Hayward) 품종이 주를 이루고 있으며, 수확 후 후숙하여 먹는 과실이다. 참다래는 헥산알(hexanal)로 대표되는 향을 지니며 자체 당도와 구연산, 사과산 등의 유기산이 풍부해 산도가 높아 신맛이 강하며, 또한 식이섬유(팩틴질)가 풍부하며, 비타민 C, 비타민 E 함량이 높고, 칼슘, 마그네슘, 인 등의 무기질 함량도 풍부하며 그 외에 클로로필, 카로티노이드, 폴리페놀, 플라보노이드와 같은 생리활성 물질을 포함하고 있다. 그러나 호흡상승형 과실이므로 저장 및 유통과정 중에 참다래 조직이 급격히 연화되므로 쉽게 상품성을 잃어버리는 단점이 있어 가공품 개발이 지속적으로 요구되어 오고 있다.It is grown in the southern coast of Korea and Jeju Island. Hayward varieties are the dominant species of the fruit, and fruits that are eaten after harvest. It is rich in organic acids such as sugar, citric acid, and malic acid, and is rich in acidity and strong acidity. It is also rich in dietary fiber (lactic acid) and contains vitamin C, vitamin E It contains a high content of calcium, magnesium, phosphorus and other minerals. It also contains physiologically active substances such as chlorophyll, carotenoid, polyphenol and flavonoid. However, since it is a respiratory ascending fruit, it has a disadvantage that it loses its commerciality easily because it rapidly softens in the storage and distribution process, and the development of the processed product is continuously demanded.

감(Diospyros kari)은 우리나라에서 재배되고 있는 온대성 과실 중 하나로 포도당과 과당을 주로 포함한 당분이 약 14%로 함유되어 있으며 무기질, 비타민 C, 비타민 A 및 비타민 B와 팩틴질 풍부한 영양학적 가치가 높은 알칼리 식품이며, 에피카테킨(epicatechin) 등의 탄닌(tannin) 성분의 기능성 페놀릭스(phenolics)가 다량 함유되어 있다. 또한 감에는 식이섬유도 풍부하다. Diospyros kari ) is one of the mature fruits grown in Korea. It contains about 14% of sugar, mainly glucose and fructose. It is rich in minerals, vitamin C, vitamin A, vitamin B and lactic acid and nutritional value. , Epicatechin, and other functional tannin components (phenolics). Also, dietary fiber is abundant in persimmon.

참다래를 이용하여 와인을 제조한 종래 기술 (특허등록 353479호, 특허등록 873717호, 특허공개 2012-0049965호)은 몇몇 존재한다. 이들 종래 제조방법은 숙성시킨 참다래 과즙에 통상의 알코올 발효 효모균주인 사카로마이세스 속 균주들을 사용하였는데 이들 통상의 균주들은 내산성, 내당성 및 내알코올성이 부족하여 신맛이 강한 참다래를 주재료로 한 발효주의 제조에 적합하지 않았으며 기호성이 우수한 발효주의 제조가 어려웠다. 대안으로서 특허등록 1486222호는 내당성, 내알코올성 및 알코올 생성능이 우수한 피치아 구일리엘몬디아이 SY46 균주의 이용가능성을 제시하고 있으나, 이 균주를 이용한 와인 제조는 아직 식용 여부가 담보되지 않은 문제점이 존재한다. 따라서 사카로마이세스 속에 속하면서 내산성, 내당성 및 내알코올성이 우수하여 참다래를 주재료로 한 와인 발효에 최적화될 수 있는 신규한 발효 효모균주의 발굴이 꾸준히 요구되어 왔다.
There are some conventional technologies (patent registration No. 353479, patent registration No. 873717, patent registration No. 2012-0049965) in which wine is produced using a kiwifruit. In these conventional methods, conventional strains of Saccharomyces cerevisiae, which are the main strains of alcohol fermentation yeast strains, were used for aged cherry juice. These conventional strains were inferior in acidity, resistance to alcohol and alcohol, It has been difficult to produce a fermentation broth which is not suitable for production and has excellent palatability. As an alternative, Patent Registration No. 1486222 suggests the possibility of using Pichia Guyley ELMONDIA SY46 strain having excellent resistance to alcohol, alcohol and alcohol, but there is a problem that the production of wine using this strain is not yet secured . Therefore, there has been a constant demand for finding new fermentation yeast strains which can be optimized for fermentation of wine having chrysanthemum as a main ingredient because of its excellent acid resistance, resistance to sugar and alcohol resistance, belonging to the genus Saccharomyces.

종래 기술에서의 요구에 부응하기 위해 지속적으로 연구한 결과, 본 발명자들은 천연 과실발효액으로부터 내산성, 내당성 및 내알코올성이 우수한 신규 사카로마이세스 세레비지에 균주를 분리동정하여 이 효모균주가 참다래를 주재료로 한 발효주의 제조에 매우 유용함을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다. 또한 본 발명자들은 참다래를 주재료로 한 발효주의 제조시 감을 적절히 첨가하고 라피타제로 전처리할 경우, 수율과 기호성이 우수한 참다래-감 혼합 과실주(와인)를 제조할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.As a result of continuous research in order to meet the demand in the prior art, the present inventors have isolated and identified a strain from a natural fermentation broth into a novel saccharomyces cerevisiae having excellent acid resistance, resistance to sugar and alcohol resistance, Which is very useful for the production of a fermented beverage. The inventors of the present invention have also found that it is possible to produce an azalea-persimmon mixed wine (wine) having excellent yield and palatability when the fermented beverage is prepared by adding the sensation during preparation of the fermented beverage, .

따라서 본 발명의 목적은 참다래를 주재료로 한 와인 제조에 유용한 내산성, 내당성 및 내알코올성이 우수한 신규 사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주를 제공하는 것이다. Accordingly, an object of the present invention is to provide a strain Y28 in a novel saccharomyces cerevisiae which is excellent in acid resistance, resistance to spices and alcohol resistance, which is useful for wine production based on azalea.

또한 본 발명의 목적은 사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주를 이용하여 신맛은 감소되고 탄닌이 증가되어 기호성이 증진된 고품질의 참다래-감 혼합 와인의 제조방법을 제공하는 것이다. It is also an object of the present invention to provide a method for producing high-quality blue-green algae-persimmon wines, wherein the sour taste is reduced and the tannin is increased by using Y28 strain in Saccharomyces cerevisiae.

또한 본 발명의 목적은 사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주와 라피타제를 이용하여 신맛은 감소되고 탄닌이 증가되어 기호성이 증진되며 수율도 향상되는 고품질의 참다래-감 혼합 와인의 제조방법을 제공하는 것이다. It is another object of the present invention to provide a method for producing a high-quality wine with a high quality of safflower-persimmon which has reduced acidity and tannin by using Y28 strain and raffidase in Saccharomyces cerevisiae, will be.

또한 본 발명의 목적은 상기 제조방법에 의해 제조되고, 기호성이 증진된 참다래-감 혼합 와인을 제공하는 것이다.
It is also an object of the present invention to provide a cherry-persimmon mixed wine produced by the above-described method and having improved palatability.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 참다래를 주재료로 하는 와인 제조를 위한 효모 균주로 사용될 수 있는 사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주를 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention provides a strain Y28 of Saccharomyces cerevisiae which can be used as a yeast strain for wine production based on cherry tomatoes.

본 발명자들은 과일발효액으로부터 내당성, 내알코올성, 내당성 및 알코올 발효능이 우수한 사카로마이세스 속 신규한 균주를 확인동정하고, 이 균주를 사카로마이세스 세레비지에 Y28로 명명한 후, 국립농업과학원 농업유전자원센터에 기탁하여 2015년 5월 7일에 수탁번호 KACC93227P를 부여받았다 (실시예 1). The present inventors identified and identified a novel strain of the genus Saccharomyces, which is excellent in resistance to endurance, alcohol resistance, resistance to sugar and alcohol, from a fruit fermentation broth, named this strain Y28 as Saccharomyces cerevisiae, Deposited on May 7, 2015 with the accession number KACC93227P (Example 1).

사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주의 26S rDNA 염기서열 (도 1)을 결정하였고 이를 기초로 하여 BLAST 네트워크 서비스와 DNA 서열 데이터베이스를 제공하는 미국국립생물정보센터(NCBI)에서 얻은 다른 균종의 26S rDNA 염기서열과 정렬하여 사카로마이세스 속에 속함을 알 수 있었다 (도 2).The 26S rDNA sequence (FIG. 1) of the Y28 strain was determined on Saccharomyces cerevisiae, and based on this, the other species of 26S rDNA obtained from the National Center for Biological Information (NCBI), which provides BLAST network service and DNA sequence database And aligned with the base sequence to belong to the genus Saccharomyces (Fig. 2).

사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주는 pH 3에서 OD600nm 6 이상의 생육성, 당농도 30%에서 OD600nm 6 이상의 생육성, 알코올 농도 10%에서 OD600nm 5 이상의 생육성 및 아황산 농도 200 ppm에서 OD600nm 7 이상의 생육성을 나타냈고, 참다래-감(7 : 3 중량비) 과즙에서 10.2%(v/v)의 알코올 발효능을 가졌다 (도 3a ~ 도 3d 및 표 1).The Y28 strain of Saccharomyces cerevisiae was cultivated at a pH of 3 at an OD of 600 nm 6 or higher, breeding at an OD of 600 nm 6 or higher at a sugar concentration of 30%, breeding at an OD of at least 600 nm 5 at an alcohol concentration of 10% And showed 10.2% (v / v) of alcohol efficacy in the case of the kiwifruit (7: 3 weight ratio) juice (Figs. 3A to 3D and Table 1).

본 발명의 또 다른 목적에 따라서, 사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주를 알코올 발효균주로 사용하는 것을 특징으로 하는 신맛 감소와 탄닌이 증가된 참다래-감 혼합 와인의 제조방법이 제공된다.According to yet another object of the present invention, there is provided a method for producing an azalea-persimmon mixed wine with reduced sourness and increased tannin, characterized in that Saccharomyces cerevisiae is mainly used as an alcohol fermenting microorganism.

본 발명에 따른 참다래-감 혼합 와인의 제조방법은 The process for producing a quinceanera-persimmon mixed wine according to the present invention comprises

ⅰ) 참다래와 감의 혼합 과즙을 제공하는 단계;I) providing a mixed juice of cherry and persimmon;

ⅱ) 참다래 및 감 혼합 과즙에 22 ~ 26 브릭스로 보당하는 단계; 및Ii) feeding the cherry and persimmon juices with 22 to 26 Bricks; And

ⅲ) 사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주를 접종하여 발효 및 숙성시키는 단계를 포함한다. Iii) Inoculating the Saccharomyces cerevisiae with the strain Y28 and fermenting and aging the strain.

본 발명의 참다래-감 혼합 와인의 제조방법은, 필요에 따라서, 단계 ⅱ) 전에, 참다래 및 감 혼합 과즙에 라피타제 효소를 처리한 후, 치즈 클로스(Cheese cloth)로 여과하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. The method for producing a quail-persimmon mixed wine of the present invention further comprises, as necessary, a step of treating the raffeta enzyme to the quail and persimmon juice and filtering with cheese cloth before step ii) can do.

또한 본 발명의 제조방법은, 필요에 따라서, 단계 ⅲ)으로부터의 와인을 60 ~ 100℃에서 살균하는 단계 및/또는 여과하여 와인병에 충전하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
Further, the production method of the present invention may further comprise, if necessary, sterilizing the wine from step iii) at 60 to 100 DEG C and / or filling the wine bottle by filtration.

단계 ⅰ): 참다래 및 감 혼합 과즙의 제공Step i): Providing of cherry and persimmon juice

참다래 및 감을 각각 원심분리형 믹서기로 파쇄한 후, 참다래 과즙 60 ~ 70% 중량%와 감 과즙 30 ~ 40 중량%를 혼합하여 참다래와 감 혼합 과즙을 얻는다.The kiwifruit and persimmon are crushed with a centrifugal mixer, respectively, and then mixed with 60 to 70% by weight of the kiwifruit juice and 30 to 40% by weight of the persimmon juice to obtain persimmon and persimmon juice.

참다래는 후숙에 의해 당도가 높아진 것을 사용한다. 구체적으로는 참다래를 흐르는 물에 세척한 후 물기를 제거하고 6 ~ 10℃에서 15 ~ 20일 후숙시켜 사용하는 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다.The stamina of kiwifruit are made with high sugar content. Specifically, it is preferable to wash the kiwifruit in flowing water, remove the water, and use it for 15-20 days at 6 ~ 10 ° C. However, it is not limited thereto.

혼합 과즙에서 참다래의 함량은 60 ~ 70 중량%가 바람직한데, 60 중량% 미만일 경우 참다래 특유의 향 등이 감소하며, 70 중량% 초과일 경우 와인의 신맛이 강해진다. The content of the kiwifruit in the mixed juice is preferably 60 to 70% by weight. When the content is less than 60% by weight, the specific flavor of the kiwifruit is reduced. When the content is more than 70% by weight, the sourness of the wine becomes strong.

감은 수확 초기의 떪은 맛을 내는 감을 사용한다. 떫은 감은 탄닌(Tannin)을 상대적으로 많이 함유하고 있어서 와인에 탄닌 함량을 증진시키고 기호성도 증진시키는 역할을 한다. The senses use a sense of flavor at the beginning of harvest. It has a relatively high content of tannin, which enhances the tannin content of the wine and enhances the taste.

혼합 과즙에서 감의 함량은 30 ~ 40 중량%가 바람직한데, 30 중량% 미만일 경우 와인의 탄닌 함량 증진의 효과가 미흡하고, 40 중량% 초과일 경우는 떫은맛이 강해져서 와인의 기호성이 떨어지게 된다.
The content of persimmon in the mixed juice is preferably 30 to 40% by weight. If the content is less than 30% by weight, the effect of improving the tannin content of the wine is insufficient. If the content is more than 40% by weight,

단계 ⅱ): 보당Step ii)

참다래 및 감 혼합 과즙을 보당한다. And the persimmon and persimmon juices.

보당은 당류를 첨가하여 22 ~ 26 브릭스(brix)가 되도록 조정한다. 보당은 통상적으로 사용되는 당류를 사용하며, 당류는 특별히 제한되지 않는다.Add the saccharide and adjust it to be 22 to 26 brix. The saccharide commonly used is used for the donating, and the saccharide is not particularly limited.

22 브릭스 미만이면 알코올 생성량이 적으며, 26 브릭스 초과시에는 삼투압의 증가로 알코올 생성량이 감소한다.
Less than 22 Bricks produce less alcohol, and over 26 Bricks, the increase in osmotic pressure reduces the amount of alcohol produced.

단계 ⅱ)': 라피타제 효소처리Step ii) ': Raphitase enzyme treatment

단계 ⅱ) 전에, 필요에 따라서, 단계 ⅰ)의 참다래 과즙 및 감 혼합 과즙에 라피타제 효소를 처리하여 치즈 클로스로 여과하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.Step ii) further, optionally, treating the quanta juice and persimmon juice of step i) with a raffidase enzyme and filtering with cheese cloth, if necessary.

라피타제 (rapidase)는 펙틴아제(pectinases)와 아라반아제(arabanases)의 복합효소로 이들의 작용에 의해서 식물세포벽인 펙틴을 가수분해 작용을 하며, 상업적으로 과일 혹은 채소의 가공에 사용되고 있는 것을 이용할 수 있다. Rapidase is a complex enzyme of pectinases and arabanases. It acts to hydrolyze pectin, which is a cell wall of plants, by its action, and it can be used for commercial processing of fruits or vegetables .

참다래 및 감 혼합 과즙 100 중량부에, 필요에 따라서, 매실 엑기스 5 ~ 10 중량부를 첨가한다. 본 발명의 제조방법에서 매실 엑기스는 라피타제 효소의 최적 pH로 조정하여 효소 반응 작용을 원활하게 한다.To 100 parts by weight of the kiwi and persimmon juice, 5-10 parts by weight of the plum extract is added, if necessary. In the manufacturing method of the present invention, Enzyme reaction by adjusting to optimal pH of Raphitase enzyme It works smoothly.

라피타제 효소 처리는 혼합과즙 총량을 기준으로 라피타제를 0.2 ~ 0.4 중량%로 첨가하여 항온수조에서 2 ~ 4시간 반응시키는 것으로 수행한다. 반응을 완료 후 치즈클로스를 사용하여 고형분을 여과한다. 상기 항온수조는 40 ~ 45℃ 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. The Raphitase enzyme treatment is performed by adding 0.2 to 0.4% by weight of raffidase based on the total amount of mixed juice and reacting in a constant temperature water bath for 2 to 4 hours. After completion of the reaction, the solid is filtered using a cheese cloth. The constant temperature water bath may be 40 to 45 캜, but is not limited thereto.

라피타제의 처리는 참다래 및 감 혼합과즙의 수득율을 크게 증대시킨다 (표 3 및 4).
Treatment with rapifotase significantly increases the yield of kiwi and persimmon juices (Tables 3 and 4).

단계 ⅲ): 발효Step iii): Fermentation

혼합과즙에 사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주를 접종하여 발효 및 숙성시킨다. Fermented and aged by inoculating Y28 strain to Saccharomyces cerevisiae in mixed juice.

사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주는 2.5% ~ 5.0%(v/v)로 접종한다. 균 접종량이 2.5% 이하이면 발효 속도가 지연되며, 5.0% 이상일 때는 발효 속도와 상관없어 경제성이 없다.The strain Y28 is inoculated with 2.5% to 5.0% (v / v) of Saccharomyces cerevisiae. If the inoculum amount is less than 2.5%, the fermentation rate is delayed. If the inoculation amount is 5.0% or more, the fermentation rate is not correlated with economic efficiency.

발효 및 숙성 조건은 15 ~ 20℃의 온도에서 10 ~ 120일간 발효, 숙성시킨다. 15℃ 미만에서는 발효 속도가 지연되며, 20℃ 초과에서는 발효 속도는 증가하나, 산패 등이 일어날 수 있다. 10일 미만의 기간이면 알코올 생성력과 풍미가 충분하지 않으며, 120일 초과의 기간이면 산패 등이 일어날 수 있다.
The fermentation and aging conditions are fermented and aged at a temperature of 15 to 20 ° C for 10 to 120 days. Below 15 ° C, the fermentation rate is delayed, while above 20 ° C the fermentation rate increases but rancidity may occur. A period of less than 10 days does not produce enough alcohol and flavor, and a period of more than 120 days may cause rancidity.

단계 ⅳ): 살균Step iv): sterilization

필요에 따라서, 단계 ⅲ)으로부터의 와인을 살균한다. If necessary, sterilize the wine from step iii).

살균은 60 ~ 100℃에서 15 ~ 30분간 열처리 하는 것으로 행할 수 있으며, 60℃, 15분 미만으로 살균 시에는 잡균들의 살균이 미흡할 수 있고, 100℃, 30분 초과의 살균 시에는 당, 단백질 등의 영양성분들이 파괴될 수 있다.
The sterilization can be performed by heat treatment at 60 to 100 ° C for 15 to 30 minutes. When sterilized at 60 ° C for less than 15 minutes, sterilization of germs may be insufficient. When sterilized at 100 ° C for more than 30 minutes, Can be destroyed.

단계 ⅴ): 여과 및 충전Step v) filtration and charging

필요에 따라서, 생산된 와인을 여과하여 와인병에 충전하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. If necessary, the step of filling the wine bottle with the filtered wine may be further included.

여과는 마이크로 필터를 이용하며, 와인병에 충전은 통상의 방법에 의한다.The microfilter is used for filtration, and the filling of the wine bottle is performed by a conventional method.

본 발명의 제조방법은 사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주를 이용하여 신맛은 감소되고 탄닌이 증가되어 기호성이 증진된 고품질의 참다래-감 혼합 와인을 제조케 하며, 또한 라피타제를 사용함에 의해 수율도 향상시킨다. The production method of the present invention uses a strain Y28 in Saccharomyces cerevisiae to produce a high quality olive oil-persimmon mixed wine in which sour taste is reduced and tannin is increased to improve palatability, .

본 발명의 제조방법에 따라 제조된 참다래-감 혼합 와인은 신맛은 감소되고 탄닌이 증가되어 기호성이 증진된 고품질 와인의 특성을 갖는다 (표 10).
The azalea-persimmon mixed wines produced according to the preparation method of the present invention have characteristics of high quality wines having an increased sour taste and an increased tannin taste (Table 10).

본 발명의 사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주는 내산성, 내당성 및 내알코올성을 가져서 신맛이 강한 참다래를 주재료로 한 와인 제조에 매우 유용하며, 고품질의 참다래-감 혼합 와인을 제조케 할 수 있다.The Y28 strain of Saccharomyces cerevisiae according to the present invention has acid resistance, resistance to alcohol and alcohol resistance, and is very useful for the production of wines mainly made of high-acidity azalea and can produce a high-quality azalea-persimmon mixed wine .

본 발명의 제조방법은 사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주를 이용하여 신맛은 감소되며 감 과즙의 첨가에 따른 탄닌의 증가로 기호성이 증진된 고품질의 참다래-감 혼합 와인을 제조케 한다. The production method of the present invention produces a high-quality blueberry-persimmon mixed wine having increased sour taste by the use of Y28 strain in Saccharomyces cerevisiae and an increase in tannin by the addition of persimmon juice.

본 발명의 제조방법은 또한 라피타제 효소처리 단계를 포함함에 따라 참다래와 감의 팩틴질을 감소시켜 과즙 수득율을 증가시켜서 최종적으로 참다래-감 혼합 와인의 수율을 증가시킨다.
The process of the present invention also includes the step of raffitazone enzyme treatment to reduce the lactic acid and lactic acid content of the persimmon and persimmon to increase the yield of juice to ultimately increase the yield of the azalea-persimmon wines.

도 1은 사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주의 26S 라이보좀 DNA 염기서열이다.
도 2는 사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주의 계통발생학적 유연관계도다.
도 3은 사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주와 대조 균주(사카로마이세스 세레비지에 KCCM 12651)의 내산성, 내당성, 내알코올성 및 내아황산성을 나타낸다. 도 3a는 내산성을 나타내고, 도 3b는 내당성을 나타내고, 도 3c는 내알코올성을 나타내고, 도 3d는 내아황산성을 나타낸다.
Fig. 1 is a nucleotide sequence of 26S ribosomal DNA of strain Y28 in Saccharomyces cerevisiae.
Fig. 2 is a phylogenetic relationship of the strain Y28 to Saccharomyces cerevisiae.
Fig. 3 shows the acid resistance, the glucose tolerance, the alcohol resistance and the sulfurous acidity of the Y28 strain in Saccharomyces cerevisiae and the control strain (KCCM 12651 in Saccharomyces cerevisiae). FIG. 3A shows acid resistance, FIG. 3B shows resistance, FIG. 3C shows alcohol resistance, and FIG. 3D shows resistance to sulfurous acid.

다음의 실시예들에 의해 본 발명이 더 상세히 설명된다. 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것이며, 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되어서는 안된다.
The present invention will be explained in more detail by the following examples. These examples are for illustrating the present invention, and the scope of the present invention should not be limited by them.

실시예 1: 균주 분리 및 특성 확인Example 1: Strain isolation and characterization

<균주 분리><Strain isolation>

참다래, 대봉감, 포도, 살구, 자두 등의 과일발효액으로부터 효모 균주를 다음과 같이 분리하였다: 과일을 껍질채 으깨서 발효병에 넣은 후 약 14일간 발효시킨 후 약 10 mL 취하여 90 mL의 멸균증류수로 106 ~ 109으로 희석하고 이를 클로람페니콜(1.5 mg/mL)이 함유된 YPD (Yeast extract 5 g, peptone 5 g, dextrose 20 g) 한천배지에 도말하여 30℃ 에서 48 ~ 72시간 동안 배양하여 전형적인 효모 클로니를 새 YPD 한천배지 순수 분리하여 30℃ 에서 48시간 배양하였다.Yeast strains were isolated from the fruit fermentation broths of cherry, persimmons, grapes, apricots, plums, etc. as follows: Fruits were bred in a fermentation bottle, fermented for about 14 days and then taken in about 10 mL and suspended in 90 mL of sterile distilled water diluted with 6-10 9 and it chloramphenicol (1.5 mg / mL) containing a YPD (yeast extract 5 g, peptone 5 g, dextrose 20 g) typical yeast and to spread on agar medium cultured at 30 ℃ for 48-72 hours The clonies were separated from the fresh YPD agar medium and cultured at 30 ° C for 48 hours.

1차 순수분리된 95 균주에 대해 pH 4, 당 농도 30%와 알코올 농도 10%에서 일차적으로 선발하여 최종적으로 산 내성, 당 내성, 알코올 내성, 아황산 내성, pH, 산도, 알코올 생성능 및 기호성 평가를 시험한 후 이들 모든 특성을 고려하여 분리된 균주들 중에서 Y28로 칭한 균주를 선별하게 되었다.The 95 isolates were firstly selected at pH 4, 30% sugar and 10% alcohol, and finally evaluated for acid tolerance, sugar tolerance, alcohol tolerance, sulfurous acid tolerance, pH, acidity, After the test, all of these characteristics were taken into consideration and the strains named as Y28 were selected from the isolated strains.

<균주 특성 확인> <Identification of strain characteristics>

본 발명의 Y28 균주와 대조균주로서 통상의 와인 제조에 사용되어 오던 사카로마이세스 세레비지에 KCCM 12615를 사용하여 산, 당, 알코올 및 아황산에 대한 내성들을 시험하였다.Resistance to acids, sugars, alcohols and sulfurous acids was tested using KCCM 12615 in Saccharomyces cerevisiae, which has been used in conventional wine manufacture as the strain Y28 of the present invention and as a control strain.

산 내성 측정은 본 발명의 Y28 균주 및 대조균주(사카로마이세스 세레비지에 KCCM 12615)를 각각 PDB (potato dextrose broth, Becton & Dicknson사, USA) 액체배지에서 30℃에서 48시간 배양한 후, 참조(pH. 6.64), pH 5, pH 4, pH 3의 YPD 액체배지에 각각의 균주를 5%(v/v)로 접종한 후 30℃에서 48시간 배양 후 흡광도 (600nm)를 측정하여 균 생육정도를 결정하고 그 결과를 도 3a에 나타냈다.The acid tolerance was determined by culturing the Y28 strain of the present invention and a control strain (KCCM 12615 in Saccharomyces cerevisiae) in a liquid medium of PDB (potato dextrose broth, Becton & Dicknson, USA) for 48 hours at 30 ° C, Each strain was inoculated at 5% (v / v) in a YPD liquid medium (pH 6.64), pH 5, pH 4 and pH 3 and incubated at 30 ° C for 48 hours. The absorbance The degree of growth was determined and the results are shown in Fig. 3a.

당 내성 측정은 PDB 액체배지에 0, 10, 20 및 30% 설탕을 첨가하고 각각의 균주를 5.0%(v/v)로 첨가한 후 37℃에서 48시간 액체배양한 후 흡광도(600nm)를 측정하여 균 생육정도를 결정하였고 그 결과를 도 3b에 나타냈다.The glucose tolerance was determined by adding 0, 10, 20 and 30% sugar to the PDB liquid medium, adding 5.0% (v / v) of each strain, and incubating at 37 ° C for 48 hours. And the degree of growth of the bacteria was determined. The results are shown in FIG. 3B.

알코올 내성 측정은 PDB 액체배지에 0, 5, 10 및 15% 알코올을 첨가하고 각각의 균주를 5.0%(v/v)로 첨가한 후 37℃에서 48시간 액체배양한 후 흡광도(600nm)를 측정하여 균 생육정도를 결정하였고 그 결과를 도 3c에 나타냈다.Alcohol tolerance was determined by adding 0, 5, 10 and 15% alcohol to the PDB liquid medium, adding 5.0% (v / v) of each strain and incubating at 37 ° C for 48 hours. And the degree of growth of the bacteria was determined. The results are shown in FIG. 3c.

아황산 내성 측정은 각각의 균주를 PDB 액체배지에서 30℃에서 48시간 배양한 후, Na2SO3 0, 100, 200, 400 ppm의 YPD 액체배지에 각각 5%(v/v)로 접종한 후 30℃에서 48시간 배양 후 흡광도 (600nm)를 측정하여 균 생육정도를 결정하였고 그 결과를 도 3d에 나타냈다.The sulfurous acid tolerance was determined by incubating each strain in PDB liquid medium at 30 ° C. for 48 hours and then inoculating 5% (v / v) in Na 2 SO 3 0, 100, 200, 400 ppm YPD liquid medium After culturing at 30 DEG C for 48 hours, the absorbance (600 nm) was measured to determine the degree of bacterial growth. The results are shown in Fig.

도 3a ~ 도 3d로부터 본 발명의 Y28 균주는 대조균주에 비하여 내산성, 내당성, 내알코올성, 내아황산성이 우수함을 확인할 수 있다. 구체적으로 본 발명의 균주는 pH 3에서 OD600nm 6 이상의 생육성, 당농도 30%에서 OD600nm 6 이상의 생육성, 알코올 농도 10%에서 OD600nm 5 이상의 생육성 및 아황산 농도 200 ppm에서 OD600nm 7 이상의 생육성을 나타냈다.From FIG. 3A to FIG. 3D, it can be confirmed that the strain Y28 of the present invention is superior in acid resistance, resistance to alcohol, and sulfurous acidity, as compared with the control strain. Specifically, the strain of the present invention in the pH 3 OD 600nm 6 or more viability, concentration of 30% in OD 600nm 6 or more viability, alcohol at a concentration of 10% in OD 600nm 5 or more viability and sulfurous acid concentration 200 ppm OD 600nm more than 7 per Growth.

이화학적 특성, 알코올 생성능 및 기호성 평가는 24 브릭스로 보당한 참다래-감(7 : 3 중량비) 혼합 과즙에 각각의 균주를 5.0%(v/v)로 접종한 후 20℃에서 14일간 발효시킨 와인을 대상으로 평가하였다. 이화학적 특성과 알코올 생성능의 평가 결과는 표 1에 나타내었다. The physicochemical properties, alcohol production ability and palatability were evaluated by inoculating each strain with 5.0% (v / v) in a fermented juice of 14-brix (7: 3 ratio by weight) Were evaluated. The results of evaluation of physicochemical properties and alcohol production ability are shown in Table 1.

분석항목Analysis item 균주Strain 대조균주(KCCM 12651)The control strain (KCCM 12651) 본 발명 균주(Y28)The strain (Y28) pHpH 3.683.68 3.763.76 산도(%, 젖산)Acidity (%, lactic acid) 1.961.96 1.871.87 브릭스(°)Briggs (°) 99 9.29.2 환원당(g/L)Reducing sugar (g / L) 5.795.79 6.276.27 알코올(%)Alcohol(%) 10.210.2 10.210.2

표 1에 보는 바와 같이, 본 발명의 균주의 알코올 생성능은 대조균주와 동일하였으며, 대조균주보다 pH는 높고 산도는 낮았다. As shown in Table 1, the alcohol production ability of the strain of the present invention was the same as that of the control strain, and the pH was higher and the acidity was lower than that of the control strain.

기호성 평가는 영농조합법인 오름주가 직원(연구원)과 경남과학기술대학교 학부생(3,4학년) 및 대학원생 20명 대상으로 5점 척도법으로 평가하여 평균값으로 표기하여 표 2에 나타냈다.The palatability test was evaluated by the 5-point scoring method for the employees of OMM Co., Ltd. (researchers), 20 undergraduates (grades 3 and 4) and graduate students at Kyungnam University of Science and Technology, and the results were shown in Table 2.

균주Strain 관능평가 항목Sensory evaluation item 비고Remarks flavor incense color 전제적인 기호도An overall likelihood 대조균주
(KCCM 12651)
Control strain
(KCCM 12651)
4.024.02 3.993.99 3.423.42 3.673.67 신맛, 단맛 및 떫은맛이 어려져 있으나, 신맛이 약간 강함Sour, sweet and bitter, but slightly sour
본 발명의
균주(Y28)
The
The strain (Y28)
4.374.37 4.124.12 3.623.62 4.154.15 신맛, 단맛 및 떫은맛이 고루 어려져 있음Sour, sweet and bitter

표 2로부터, 관능평가 결과 신맛이 대조균주보다 약해져서 맛, 향 및 전체기호도가 향상되어 본 발명의 균주를 사용하여 제조된 와인이 기호성에서 더 우수한 것을 확인할 수 있다.
From Table 2, it was confirmed that the sensory evaluation showed that the sour taste was weaker than the control strain, and the taste, aroma, and overall acceptability were improved, and the wine prepared using the strain of the present invention was superior in taste.

실시예 2: 균주 동정 및 기탁Example 2: Identification and Deposit of Strain

선별된 Y28 균주를 PDB 5 ml의 액체배지에 2.5%(v/v)로 접종하고 48시간 배양한 후 1.5 ml 원심분리 튜브에 약 1.25 ml 정도 취한 후 원심분리하여 균체를 모집하고 DNAzol kit(Invtrogen사, USA)를 이용하여 균주의 게놈 DNA를 분리했다.The selected Y28 strain was inoculated in a liquid medium of 5 ml of PDB at 2.5% (v / v) and cultured for 48 hours. Approximately 1.25 ml of the Y28 strain was placed in a 1.5 ml centrifuge tube and centrifuged to collect cells. DNAzol kit USA, USA).

분리된 게놈 DNA를 주형으로 하여 94℃ 에서 1분간 변성, 52℃ 에서 30초간 풀림, 72℃ 에서 30초 신장으로 30회 수행하여 26S rDNA (0.6 kb 단편)을 증폭했다. 증폭된 26S rDNA PCR 산물을 1% 아가로스에서 전기영동하고 0.6 kb 단편을 회수 및 정제한 후 pGEM-T Easy (Promega, Madison, USA)를 사용하여 클로닝하고 대장균 (Escherichia coli) DH5에 형질전환 후, 형질전환체를 무작위로 선정하여 순수 분리하고 순수 분리된 형질전환체를 50 g의 앰피실린 함유된 LB (Luria-Bertani broth, Becton & Dicknson사, USA) 액체배지에 접종하여 37℃에서 16시간 배양한 후 균체를 모집하고 플라스미드 정제 Kit (Intron, Suwon, Korea)에 기술된 대로 플라스미드를 분리 정제했다. 분리된 플라스미드를 서열 결정 주형가닥으로 사용하였다. 핵산 염기서열은 PRISM Ready Reaction Dye terminator/primer cycle sequencing kit를 사용한 디데옥시 사슬 종결법을 이용하여 분석하여 그 염기서열 639 bp를 결정하였다 (도 1). 이 26S rDNA 염기서열은 BLAST network service와 DNA sequence database를 제공하는 미국 국립생물정보센터(NCBI)에서 얻은 다른 균들의 것과 상동성을 분석하여 최종 동정했다 (도 2).26S rDNA (0.6 kb fragment) was amplified by performing 30 cycles of denaturation at 94 DEG C for 1 minute, annealing at 52 DEG C for 30 seconds, and extension at 72 DEG C for 30 seconds using the separated genomic DNA as a template. The amplified 26S rDNA PCR product was electrophoresed on 1% agarose and the 0.6 kb fragment was recovered and purified, and then cloned using pGEM-T Easy (Promega, Madison, USA) and transformed into Escherichia coli DH5 , Transformants were randomly selected and purified. The pure transformants were inoculated into a liquid medium containing 50 g of ampicillin-containing LB (Luria-Bertani broth, Becton & Dicknson, USA) After culturing, the cells were collected and the plasmid was separated and purified as described in the plasmid purification kit (Intron, Suwon, Korea). The isolated plasmid was used as a sequencing template strand. The nucleotide sequence was analyzed by the dideoxy chain termination method using the PRISM Ready Reaction Dye terminator / primer cycle sequencing kit to determine the base sequence 639 bp (FIG. 1). This 26S rDNA sequence was finally identified by analysis of homology with other microbes obtained from the National Center for Biotechnology Information (NCBI), which provides BLAST network service and DNA sequence database (Fig. 2).

이와 같이 동정된 균주를 사카로마이세스 세레비지에 (Saccharomyces cerevisiae) Y28로 명명하고, 국립농업과학원 농업유전자원센터에 기탁하여 2015년 5월 7일자로 기탁번호 KACC93227P를 부여받았다.
The thus identified strain was named Saccharomyces cerevisiae Y28, And deposited with the National Institute of Agricultural Science and Technology, Center for Agricultural Genetic Resources and received the deposit number KACC93227P on May 7, 2015.

실시예Example 3:  3: 참다래Cherry 및 감 혼합 과즙의  And persimmon juice 라피타제Lapitizae 효소처리 최적화 Optimization of enzyme treatment

참다래(품종명: 헤이워드)를 흐르는 물에 3회 세척한 후 물기를 제거하고 6 ~ 10℃에서 15 ~ 20일 후숙시킨 후 원심분리형 믹서기로 파쇄하여 참다래 과즙을 10 kg 준비하였다. The juice was washed three times in water flowing through a jellyfish (breed name: Hayward), the water was removed, and the juice was stored at 6 to 10 ° C for 15 to 20 days, and then crushed with a centrifugal blender to prepare 10 kg of kiwifruit juice.

대봉감(떫은맛) 역시 흐르는 물에 3회 세척한 후 물기를 제거하고 원심분리형 믹서기로 파쇄하여 감 과즙을 10 kg 준비하였다. After washing three times with flowing water, the water was removed and 10 kg of persimmon juice was prepared by crushing with a centrifugal blender.

참다래 과즙 1 kg, 감 과즙 1 kg의 각각의 총 중량을 기준으로 매실 엑기스 5 중량%, 라피타제 (Vintessential사, 호주) 0, 0.1, 0.2 및 0.4 중량% 첨가하여 40 ~ 50℃ 항온수조에서 0.5, 1, 2 및 4시간 반응시킨 후, 치즈클로스를 사용하여 고형분을 걸러 혼합과즙을 얻었다.5% by weight of plum extract, 0, 0.1, 0.2 and 0.4% by weight of Raphitase (Vintessential, Australia) based on the total weight of each of 1 kg of kiwi juice and 1 kg of persimmon juice. After 1, 2, and 4 hours of reaction, the mixture was filtered using a cheese cloth to obtain a mixed juice.

<라피타제 최적 첨가량>&Lt; Raphitase >

라피타제 첨가량에 따른 참다래 과즙 및 감 과즙의 수율 및 브릭스 분석을 행하였고, 그 결과를 표 3에 나타냈다. The yield and brix of kiwifruit juice and persimmon juice were analyzed according to the amount of raffitazone added, and the results are shown in Table 3.

수율은 감과즙 착즙 전 kg에 처리 후 착즙 후 kg에 대해서 아래와 같은 계산으로 측정하였다.Yields were determined by the following calculation for the kg after the juice before and after the juice.

수율(%) = [1-(착즙 전 kg ÷ 착즙 후 kg)] × 100Yield (%) = [1- (kg before juice ÷ kg after juice)] × 100

분석항목Analysis item 라피타제 처리량 (중량%) Raphitase throughput (wt%) 00 0.10.1 0.20.2 0.40.4 참다래 과즙Cherry juice 수율 (%) Yield (%) 76.4076.40 82.0082.00 83.6083.60 89.8089.80 대봉감 과즙Bongseong juice 수율 (%) Yield (%) 44.6144.61 70.9070.90 78.5578.55 81.6481.64

표 3에서 확인되는 바와 같이, 라피타제 효소 첨가량이 참다래 및 대봉감 과즙의 수득율은 0.2 ~ 0.4 중량%의 라피타제 처리시 크게 향상되었다. As can be seen in Table 3, the addition of rapamidase enzyme significantly improved the yield of the quinqueradiate and perennial juice from 0.2 to 0.4% by weight of rapitabine.

<라피타제 최적 처리 시간><Optimal processing time of Raphitase>

라피타제 (0.3 중량%) 처리 시간에 따른 참다래 과즙 및 감 과즙의 수율 분석을 행하였고, 그 결과를 표 4에 나타냈다.The yield of kiwifruit juice and persimmon juice was analyzed according to the treatment time of Raphitase (0.3 wt.%), And the results are shown in Table 4.

분석항목Analysis item 라피타아제 처리시간Rapitase treatment time 0.50.5 1One 22 44 참다래 과즙Cherry juice 수율 (%) Yield (%) 73.0073.00 80.6080.60 81.0081.00 81.6081.60 대봉감 과즙Bongseong juice 수율 (%) Yield (%) 61.2561.25 69.0169.01 74.0074.00 77.7177.71

표 4에서 확인되는 바와 같이, 참다래 과즙의 수율은 라피타제 1 ~ 4시간 처리시 수율이 크게 향상되었고, 대봉감 과즙의 수율은 라피타제 1 ~ 4시간 처리 시 많이 증가하였다.
As can be seen in Table 4, the yield of the fruit juice of kiwifruit was greatly improved by 1 to 4 hours of treatment with rapamycin, and the yield of jujube was increased by treatment of rapamycin for 1 to 4 hours.

실시예Example 4:  4: 사카로마이세스Sakaromayses 세레비지에Serebijie Y28Y28 를 이용한 Using 참다래Cherry -감 혼합 - Sensitive mixing 와인의Of wine 제조 Produce

실시예 3에서와 같이 준비된 참다래 과즙과 대봉감 과즙에 각각 라피타제 0.4중량%, 4시간 처리 후 치즈클로스로 여과한 후, 다음과 표와 같은 비율로 참다래 과즙과 대봉감 과즙을 혼합하여 혼합과즙을 만든 후, 백설탕을 첨가하여 24 브릭스로 보당하였다: After 4 hours of treatment with 0.4% by weight of rapamycin in the prepared chopped squid and bongchon juice as in Example 3, the mixture was filtered with cheese cloth, and then mixed with a mixture of cherry juice and bongchon juice as shown in the following table to prepare a mixed juice Afterwards, white sugar was added to give 24 bricks:

비교예 1Comparative Example 1 비교예 2Comparative Example 2 비교예 3Comparative Example 3 시험예 1Test Example 1 시험예 2Test Example 2 비교예 4Comparative Example 4 참다래 과즙Cherry juice 2,0002,000 1,8001,800 1,6001,600 1,4001,400 1,2001,200 1,0001,000 대봉감 과즙Bongseong juice 00 200200 400400 600600 800800 1,0001,000 합계Sum 2,0002,000 2,0002,000 2,0002,000 2,0002,000 2,0002,000 2,0002,000

(단위 ㎖)(Unit ml)

실시예 2에서 선별된 사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주를 YPD 액체배지 100 mL에 2.5%(2.5 mL) 접종하여 30℃에서 48시간 배양했다. The Y28 strain was inoculated 2.5% (2.5 mL) into 100 mL of the YPD liquid medium and cultured at 30 DEG C for 48 hours in Saccharomyces cerevisiae selected in Example 2.

이 배양액을 상기와 같이 보당된 참다래-대봉감 혼합과즙 각각에 5.0%(100 mL)을 접종한 후, 15 ~ 20℃에서 14일간 발효시켜 참다래-감 혼합 와인를 제조하였다. The culture broth was inoculated with 5.0% (100 mL) of each of the thus-prepared chopped-chopped mixed fruit juices and fermented at 15 to 20 ° C for 14 days to prepare a chopped-persimmon-mixed wine.

<분석 시료 준비><Preparation of analytical sample>

하기 분석들을 위한 시료는 상기에서 제조된 6가지 참다래-감 혼합 와인을 0.45 ㎛ 필터 여과하여 준비하였다.
Samples for the following assays were prepared by filtering the six harvested-persimmon wines prepared above with a 0.45 mu m filter.

<참다래-감 혼합 와인의 이화학적 특성> <Physicochemical Properties of Cherry-persimmon Mixed Wines>

상기에서 제조된 6가지 참다래-감 혼합 와인 각각 (시험예 1, 2 및 비교예 1~4)에 대해서 pH, 산도, 브릭스, 환원당 및 알코올의 함량 분석을 행하였다. The contents of pH, acidity, brix, reducing sugar and alcohol were analyzed for each of the six berries-sensory mixed wines (Test Examples 1 and 2 and Comparative Examples 1 to 4) prepared above.

pH는 시료 50 ㎖을 pH 미터기 (model 3510, Jenway, UK)를 사용하여 측정하였고, 산도는 시료 10 ㎖를 0.1N-NaOH 용액으로 pH 8.3±0.1 까지 중화시키데 소요된 0.1N-NaOH의 소비 ㎖ 수를 구한 후 젖산으로 환산하여 구하였고, 브릭스는 시료를 굴절당도계(N-1a, Atago Co., Tokyo, Japan)를 이용하여 측정하였고, 환원당은 DNS법으로 측정하였고, 알코올 함량은 시료 100 ㎖에 동량의 증류수를 가한 후 증류한 다음 주정계를 이용하여 측정하였으며 Gay Luccac Table을 이용하여 15℃로 보정하였고, 측정된 모든 결과를 표 6에 나타냈다. The pH was measured by the use of a pH meter (model 3510, Jenway, UK) in 50 ml of sample, and the acidity was determined by consuming 0.1 N NaOH to neutralize 10 ml of sample with 0.1 N NaOH solution to pH 8.3 ± 0.1 (N-1a, Atago Co., Tokyo, Japan). Reducing sugar was measured by the DNS method. The alcohol content was measured with a sample 100 The same amount of distilled water was added to distilled water, and then distilled. The distilled water was distilled and measured using a laparoscope and corrected using a Gay Luccac Table at 15 ° C. The results are shown in Table 6.

참다래-감 혼합 와인Chestnut-persimmon mixed wines 비교예 1Comparative Example 1 비교예 2Comparative Example 2 비교예 3Comparative Example 3 시험예 1Test Example 1 시험예 2Test Example 2 비교예 4Comparative Example 4 pHpH 3.693.69 3.703.70 3.703.70 3.733.73 3.723.72 3.773.77 산도(%,젖산)Acidity (%, lactic acid) 2.072.07 2.032.03 1.961.96 1.841.84 1.641.64 1.511.51 브릭스(°)Briggs (°) 9.69.6 9.49.4 9.29.2 9.09.0 9.09.0 8.88.8 환원당(g/L)Reducing sugar (g / L) 6.076.07 6.526.52 6.566.56 6.686.68 6.856.85 6.906.90 알코올(%)Alcohol(%) 1212 1212 1111 1111 1111 1111

상기 표 6에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 참다래-혼합 와인 (실시예 1~2)은 알코올 함량 등 다른 우수한 이화학적 특성은 그대로 유지하면서도 종래의 참다래 와인 (비교예 1)에 비하여 산도가 낮아져서 와인의 신맛은 감소됨을 확인할 수 있다.As shown in Table 6, the azalea-mixed wines (Examples 1 and 2) according to the present invention exhibited lower acidity than the conventional quince wine (Comparative Example 1) while retaining other excellent physico-chemical properties such as alcohol content The sour taste of wine is reduced.

<참다래-감 혼합 와인의 유기산 함량><Content of Organic Acid in Cherry-persimmon Mixed Wines>

상기에서 제조된 6가지 참다래-감 혼합 와인 각각 (시험예 1, 2 및 비교예 1~4)에 대해서 유기산 함량 분석을 행하였다. Organic acid content analysis was performed on each of the six harvested-persimmon mixed wines (Test Examples 1 and 2 and Comparative Examples 1 to 4) prepared above.

유기산 분석은 원심분리 후 시료를 초순수(deionized water; D.W)와 1:1로 희석하여 0.45 μm-막 필터(Toyoroshikaisha, Ltd.)를 통과시켜 입자를 제거하였다. 유기산 분석 컬럼(TSKgel ODS-100V, 4.6×250 mm, 5 m, Tosoh Corp., Tokyo, Japan)에 전처리한 시료 20 μL을 주입하고 30℃에서 이동상 용매(0.1% phosphoric acid)를 1.0 mL/min 속도로 이동시키면서 UV 검출기(Agilent 1200 series, Agilent Co.)의 210 nm에서 측정하여, 결과를 표 7에 나타내었다.After centrifugation, samples were diluted 1: 1 with deionized water (D.W) and passed through a 0.45 μm membrane filter (Toyoroshikaisha, Ltd.) to remove the particles. 20 μL of the sample pretreated with an organic acid analysis column (TSKgel ODS-100V, 4.6 × 250 mm, 5 m, Tosoh Corp., Tokyo, Japan) was injected and a mobile phase solvent (0.1% phosphoric acid) (Agilent 1200 series, Agilent Co.) at 210 nm, and the results are shown in Table 7.

유기산 함량 (g/L)Organic acid content (g / L) 참다래-감 혼합 와인Chestnut-persimmon mixed wines 비교예 1Comparative Example 1 비교예 2Comparative Example 2 비교예 3Comparative Example 3 시험예 1Test Example 1 시험예 2Test Example 2 비교예 4Comparative Example 4 옥살(Oxalic)산Oxalic acid 0.160.16 0.160.16 0.170.17 0.220.22 0.210.21 0.210.21 타르타르(Tartaric)산Tartaric acid 3.373.37 2.962.96 2.572.57 2.172.17 1.931.93 1.731.73 말(Malic)산Malic Mountain 1.831.83 1.861.86 1.901.90 1.911.91 1.871.87 1.491.49 아크코르브(Ascorbic)산Ascorbic acid 0.140.14 0.140.14 0.130.13 0.110.11 0.120.12 0.020.02 젖산Lactic acid ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND 스트르(Citric)산Citric acid 7.697.69 6.936.93 6.316.31 5.415.41 4.694.69 3.823.82 숙신산Suche mountain 0.390.39 0.290.29 0.210.21 0.190.19 0.160.16 0.170.17 푸마르(Fumaric)산Fumaric acid 0.040.04 0.040.04 0.040.04 0.040.04 0.040.04 0.040.04 글루타르(Glutaric)산Glutaric acid ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND 총계sum 13.6313.63 12.3712.37 11.3311.33 10.0410.04 9.019.01 7.487.48 ND : 검출되지 않음.ND: Not detected.

표 7에서 확인할 수 있듯이, 대봉감의 비율이 증가할수록 유기산 함량이 낮아졌다. 이 결과로부터 대봉감 첨가시 참다래의 신맛을 감소시킬 수 있는 효과가 있으며, 또한 실시예 1 및 2에서는 신맛이 적절히 감소되어 맛의 조화가 잘 이루어진다는 것을 알 수 있다. As can be seen in Table 7, the organic acid content was lowered as the ratio of starchiness increased. From these results, it was found that the acidity of the azalea could be reduced when the starch was added, and in Examples 1 and 2, the sourness was appropriately reduced and the taste was harmonized well.

<참다래-감 혼합 와인의 탄닌 함량><Tannin content of persimmon-persimmon mixed wines>

상기에서 제조된 6가지 참다래-감 혼합 와인 각각 (시험예 1, 2 및 비교예 1~4)에 대해서 탄닌 함량을 측정하였다. The tannin content of each of the six harvested-persimmon mixed wines prepared above (Test Examples 1 and 2 and Comparative Examples 1 to 4) was measured.

탄닌 함량은 Folin-Denis법로 측정하였다. 원심분리한 후 시료를 0.45 μm-막 필터(Dismic®-25CS, Toyoroshikaisha, Ltd., Tokyo, Japan)로 여과하여 희석한 후 시험관에 시료 0.5 mL과 25% Na2CO3 용액 0.5 mL을 첨가하여 3분간 정치시킨다. 다시 2N Folin-Ciocalteu 페놀 시약 0.25 mL 첨가하여 혼합한 다음 상온에서 1시간 동안 정치시켜 발색시켰다. 발색된 청색을 분광광도계(Spectronic 2D)를 이용하여 750nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 탄닌 함량은 타닌산(tannic acid)을 사용하여 작성한 표준곡선으로부터 함량을 구하였고, 그 결과를 표 8에 나타냈다. Tannin content was measured by the Folin-Denis method. After centrifugation, the sample was filtered through a 0.45 μm membrane filter (Dismic ® -25 CS, Toyoroshikaisha, Tokyo, Japan) and diluted with 0.5 mL of sample and 0.5 mL of 25% Na 2 CO 3 solution Let stand for 3 minutes. After addition of 0.25 mL of 2N Folin-Ciocalteu phenol reagent, the mixture was incubated at room temperature for 1 hour to develop color. The color developed blue was measured for absorbance at 750 nm using a spectrophotometer (Spectronic 2D). The content of tannin was determined from a standard curve prepared using tannic acid, and the results are shown in Table 8.

분석항목Analysis item 참다래-감 혼합 와인Chestnut-persimmon mixed wines 비교예 1Comparative Example 1 비교예 2Comparative Example 2 비교예 3Comparative Example 3 시험예 1Test Example 1 시험예 2Test Example 2 비교예 4Comparative Example 4 탄닌 (g/L)Tannin (g / L) 1.001.00 1.001.00 1.061.06 1.071.07 1.131.13 1.251.25

표 8에서 확인되는 바와 같이, 대봉감의 비율이 증가할수록 탄닌 함량이 높아졌다. 이 결과로부터 대봉감 첨가시 와인의 탄닌 함량을 증가시킬 수 있으며, 또한 실시예 1 및 2에서는 탄닌의 함량이 적절히 증가되어 맛이 조화가 잘 이루어진다는 것을 알 수 있다. As can be seen in Table 8, the tannin content increased as the ratio of the starchiness increased. From these results, it can be seen that the tannin content of the wine can be increased when the preservative is added, and in Examples 1 and 2, the content of tannin is appropriately increased and the taste is harmonized well.

<참다래-감 혼합 와인의 향기성분 분포><Flavor component distribution of cherry-persimmon mixed wines>

상기에서 제조된 6가지 참다래-감 혼합 와인 각각 (시험예 1, 2 및 비교예 1~4)에 대해서 향기성분 분석을 위한 추출 및 포집 방법은 고체상-마이크로 추출 (solid phase-micro extraction; SPME)을 이용한 헤드스페이스 (Autosampler, HS-7697A, Agilent technologies, Santa Clara, CA, USA) 분석 방법을 사용하였다. 시료의 향기성분 분석은 Jo 등(2012)의 방법을 변형하여 분리 및 동정하여, 그 결과를 표 9에 나타냈다. The extracting and collecting methods for analyzing the fragrance components of each of the six harvested-persimmon mixed wines prepared above (Test Examples 1 and 2 and Comparative Examples 1 to 4) were solid phase-micro extraction (SPME) (Autosampler, HS-7697A, Agilent Technologies, Santa Clara, Calif., USA). Analysis of the fragrance components of the samples was performed by modifying the method of Jo et al. (2012), and the results are shown in Table 9.

휘발성 풍미 화합물
(Area%)
Volatile flavor compounds
(Area%)
참다래 : 대봉감 혼합비율 Chutney: Permeation Mix Ratio
10 : 010: 0 9 : 19: 1 8 : 28: 2 7 : 37: 3 6 : 46: 4 5 : 55: 5 Methyl isovalerateMethyl isovalerate 0.340.34 0.580.58 Propene sulfidePropene sulfide 0.140.14 0.120.12 0.740.74 0.390.39 2-Fluoropropene2-Fluoropropene 0.670.67 0.850.85 0.800.80 0.770.77 0.810.81 1.411.41 Ethyl AcetateEthyl Acetate 20.1920.19 15.1315.13 7.357.35 6.116.11 5.175.17 4.444.44 IsobutanolIsobutanol 4.364.36 4.504.50 4.304.30 DimazinDimazin 16.9016.90 8.268.26 4.484.48 3.723.72 3.303.30 5.385.38 Ethyl propanoateEthyl propanoate 0.460.46 0.370.37 0.120.12 0.270.27 0.160.16 0.200.20 1-Pentanol1-Pentanol 56.5556.55 78.5978.59 73.7773.77 81.2381.23 77.9977.99 Isoamyl alcoholIsoamyl alcohol 64.4964.49 Ethyl butyrate Ethyl butyrate 1.751.75 1.721.72 0.930.93 1.991.99 0.720.72 1.261.26 D-ValineD-Valine 0.220.22 1-Butene-3-ethoxy1-Butene-3-ethoxy 0.290.29 2-Buten-1-ol2-Buten-1-ol 0.200.20 0.180.18 Isoamyl acetateIsoamyl acetate 1.921.92 2.082.08 0.950.95 3.403.40 1.741.74 2.442.44 Ethyl hexanoate Ethyl hexanoate 0.230.23 0.440.44 0.230.23 0.350.35 0.290.29 0.460.46 Phenylethyl AlcoholPhenylethyl Alcohol 0.310.31 0.600.60 0.580.58 0.580.58 0.730.73 0.470.47 Ethyl caprylate Ethyl caprylate 0.160.16 0.110.11 0.200.20 0.130.13 0.140.14 Ethyl caprate Ethyl caprate 0.060.06 0.090.09

표 9에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 참다래-감 혼합 와인은 주요 향기성분이 변화되고, 신맛의 주요 성분인 에틸아세테이트(ethyl Acetate) 함량은 감소함을 알 수 있었고, 와인에 장미향을 부여하는 페닐에틸 알코올(phenylethyl alcohol)이 검출되었고, 비교예에 존재하지 않던 향기 성분들도 추가로 존재하게 되어 와인의 전체적 향이 풍부해졌다. As shown in Table 9, it was found that the main aroma component of the cherry-sensilla mixed wine according to the present invention was changed, and the content of ethyl acetate (ethyl acetate), which is a major component of sour taste, was decreased. Phenylethyl alcohol was detected and perfume components which were not present in the comparative example were additionally present, thereby enriching the overall flavor of the wine.

<참다래-감 혼합 와인의 관능평가><Sensory evaluation of sweet potato-persimmon mixed wines>

상기에서 제조된 6가지 참다래-감 혼합 와인에 대해서 관능평가를 실시하였다. The sensory evaluation was performed on the six harvested-persimmon wines prepared above.

관능검사를 실시하기 위하여 영농조합법인 오름주가 직원, 경남과학기술대학교 학부생 및 대학원생에게 관능평가전 전시료, 목적, 평가 시 유의사항 등을 설명하고 1차적으로 맛, 향, 색 및 전체적인 분별력이 뛰어난 지원자중 최종 20명을 패널로 선발하였다. 패널이 맛, 향, 색 및 전체적인 기호도를 1(very bad)에서 5(very good)까지의 점수로 평가하여 평균값으로 계산하여 표 10에 나타냈다. In order to carry out the sensory test, OMM, a member of the Agricultural Cooperative Law, explained to the students and graduate students of Kyungnam University of Science and Technology about the samples before the evaluation of sensory evaluation, the purpose of evaluation, The final 20 panelists were selected as panels. The panel evaluated the taste, aroma, color, and overall preference score from 1 (very bad) to 5 (very good), and the average value was calculated and shown in Table 10.

참다래-감 혼합 와인Chestnut-persimmon mixed wines 관능평가 항목Sensory evaluation item 비고Remarks flavor incense color 전체적인 기호도Overall likelihood 비교예 1Comparative Example 1 3.243.24 3.873.87 3.453.45 3.543.54 상대적으로 신맛이 강하게 나타남Relatively strong sourness 비교예 2Comparative Example 2 3.233.23 3.903.90 3.543.54 3.583.58 비교예 1과 거의 비슷함Almost similar to Comparative Example 1 비교예 3Comparative Example 3 3.893.89 3.923.92 3.553.55 3.873.87 신맛은 약간 상쇄되나 여전히 남아 있음Sour is slightly offset, but still remains 시험예 1Test Example 1 4.334.33 4.024.02 3.643.64 4.204.20 신맛, 단맛 및 떫은맛이 고루 어려져 있음Sour, sweet and bitter 시험예 2Test Example 2 4.284.28 4.124.12 3.633.63 4.134.13 비교예 4Comparative Example 4 3.123.12 3.783.78 3.443.44 3.443.44 상대적으로 신맛보다는 떫은맛이 강함Relatively stronger than sour taste

표 10에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 참다래-감 혼합 와인 (실시예 1, 2)은 모두 비교예 1~4에 비하여 색, 맛 및 향의 모든 항목에서 높은 점수를 받아서 기호성이 증진되었음을 알 수 있다. 특히 맛의 경우는 신맛, 단맛 및 떫은맛이 고루 어우려져 전체적인 기호도가 매우 향상되었음을 확인할 수 있다.
As shown in Table 10, all of the azalea-persimmon mixed wines (Examples 1 and 2) according to the present invention were higher in all items of color, taste and aroma than Comparative Examples 1 to 4, . Especially, in case of the taste, the sourness, the sweetness and the pungent taste are mixed evenly, and it can be confirmed that the overall preference is greatly improved.

국립농업과학원 농업유전자원센터National Institute of Agricultural Science KACC93227PKACC93227P 2015050720150507

Claims (9)

참다래 및 감 혼합 와인의 제조를 위한 효모 균주로 유용한, 수탁번호 KACC93227P로 기탁된 사카로마이세스 세레비지에 (Saccharomyces cerevisiae) Y28 균주로,
상기 균주는 pH 3에서 OD600nm 6 이상의 생육성, 당농도 40%에서 OD600nm 5 이상의 생육성, 알코올 농도 10%에서 OD600nm 5 이상의 생육성 및 아황산 농도 200 ppm에서 OD600nm 7 이상의 생육성을 나타내고, 참다래 및 감 혼합 와인을 제조시 10.0%(v/v) 이상의 알코올 발효능을 갖는 것을 특징으로 하는 균주.
Saccharomyces cerevisiae Y28 strain deposited with Accession No. KACC93227P, which is useful as a yeast strain for the production of quail and persimmon wines,
The strain represents the viability OD 600nm more than 7 in the OD 600nm 6 or more viability, OD 600nm 5 or more viability, OD 600nm 5 or more viability and sulfurous acid concentration 200 ppm in the alcohol concentration of 10% at a concentration of 40% sugar in a pH 3 (V / v) or higher in the production of a sweet potato and a persimmon and sensory mixed wine.
삭제delete 참다래 및 감 혼합 와인의 제조 방법으로,
ⅰ) 참다래 과즙 60 ~ 70 중량%와 감 과즙 30 ~ 40 중량%을 혼합한 참다래 및 감 혼합 과즙을 제공하는 단계;
ⅱ) 참다래 및 감 혼합 과즙에 22 ~ 26 브릭스로 보당하는 단계; 및
ⅲ) 제1항에 따른 사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주를 접종하여 발효 및 숙성시키는 단계를 포함하고,
상기 단계 ⅰ)에서, 참다래 과즙 및 감 혼합 과즙은, 혼합 과즙의 전체 중량을 기준으로 펙틴아제와 아라반아제의 복합효소 0.2 ~ 0.4 중량%를 첨가하여 40 ~ 45℃의 항온수조에서 2 ~ 4시간 반응시킨 것임을 특징으로 하는 방법.
As a method for producing a quince and persimmon mixed wine,
I) providing a kiwifruit and persimmon juice comprising 60 to 70% by weight of a fruit of the kiwi fruit and 30 to 40% by weight of a persimmon fruit juice;
Ii) feeding the cherry and persimmon juices with 22 to 26 Bricks; And
Iii) Inoculating the Y28 strain to Saccharomyces cerevisiae according to claim 1, followed by fermentation and aging,
In the step i), 0.2-4.0% by weight of a complex enzyme of pectinase and arabinase, based on the total weight of the mixed fruit juice, is added to the cherry juice and persimmon juice in a constant temperature water bath at 40 to 45 ° C for 2 to 4 Time-reacted.
삭제delete 제 3항에 있어서, 단계 ⅲ)에서 사카로마이세스 세레비지에 Y28 균주는 2.5% ~ 5.0%(v/v)로 접종하고, 15 ~ 20℃에서 10 ~ 120일간 발효 및 숙성하는 것을 특징으로 하는 방법.
The method according to claim 3, characterized in that the strain Y28 is inoculated with 2.5% to 5.0% (v / v) of Saccharomyces cerevisiae in step iii) and fermented and aged at 15-20 ° C for 10-120 days How to.
제 3항에 있어서, 단계 ⅲ)으로부터의 와인을 60 ~ 100℃에서 살균하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
The method according to claim 3, further comprising the step of sterilizing the wine from step iii) at 60-100 ° C.
삭제delete 제 3항, 제 5항 및 제 6항중 어느 한 항에 따라서 제조되고, 기호성이 증진된 참다래 및 감 혼합 와인.
A cherry and persimmon mixed wine produced according to any one of claims 3, 5 and 6 and having enhanced palatability.
제 8항에 있어서, 상기 기호성의 증진은 신맛의 감소와 탄닌 함량의 강화에 의한 것임을 특징으로 하는 기호성이 증진된 참다래 및 감 혼합 와인.9. The wine of claim 8, wherein the improvement in palatability is due to a decrease in sour taste and an increase in tannin content.
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